AS “MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAX ” são destinadas

à publicação de trabalhos realizados no Instituto ou com a sua contribuição^

Os trabalhos são dados à publicidade logo após a entrega c reunidos anualmente

num volume.

Serão fornecidas, a pedido, separatas dos trabalhos publicados nas

" Memórias ”, solicitando-se nesse caso o obséquio de enviar outras separatas,

em permuta, para a Biblioteca do Instituto.

Toda a correspondência editorial deve ser dirigida ao:

Redactor das “ Memórias” do

INSTITUTO BUTANTAX

Caixa Postal 65

S. Paulo, S. P., BRASIL.

PEDE-SE PERMUTA

EXCHANGE DES I RED.

AVISO

Conforme consta do Decreto Mo. 24.401/55, o Governo de São Paulo ,

levando cm conta a grave situação financeira do Estado, resolveu, por medida

de economia, proibir a publicação de revistas e trabalhos por conta da dotação

orçamentária de 1955. Por este motivo, não pôde ser impresso, no exercício

passado, o presente volume das “Memórias”.

ÍNDICE

1. P. SOUZA SANTOS, H. SOUZA SANTOS, G. A. EDWARDS, A. R.

HOGE & P. SAWAYA — Uma contribuição ao conhecimento da estrutura

ultra-fina e das propriedades químicas de fibrilas do tecido conjuntivo animal 1

A contribution to the knowledge of tlie fine strueture and Chemical

properties of animal conncctivc tissuc fibrils . 27

1 WOLFGANG BÜCHERL & NICOLINA PUCCA — Escorpiões e cscor-

pionismo no Brasil. III. Titulação, por meio de camundongos, das peço-

has de Tilyus coslatus (Karseh), Tilyus Iritillatus Kracpelin, 1898 c

fíolhriurus bonariensis (Koch), 1842 . 41

3. JOSÉ M. RUIZ & ERMENGARDA COELHO — Nematóidrs (Oxyuroidea)

parasitos de diplópodos da Ilha da Queimada Grande, São Paulo, Brasil 51

4. A. R. HOGE — Uma nova espécie de Micrurus (Serp. Elap.) do Brasil .... 67

5. W. II. A. SCHOTTI.ER — Observações miscelâneas sóbre peçonhas ofidicas c

antivenenos . 73

Miscrllancous observations on snakc venoms and antivctiins . 85

6. WOLFGANG BÜCHERL — Escorpiões e escorpionismo no Brasil. IV. Con¬

siderações cm torno de substâncias cscorpionicidas c outras medidas de

combate aos escorpiões . 107

7. WOLFGANG BÜCHERL — Escorpiões c escorpionismo no Brasil. V. Obser¬

vações sóbre o aparelho reprodutor masculino c o acasalamento de Tilyus

Irhitlalus e Tilyus bohiensis . 121

Errata . 157

SciELO

11 12 13 14 15

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

Hem. Inst. Butantan,

27 : 1 - 39 . 1955 / 6 .

p. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS, A. R. HOGE A P. SAWAYA

LMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL.

P. SOUZA SANTOS*. H. SOUZA SANTOS**, G. A. EDWARDS***, A. R. HOGE****

& P. SAWAYA***.

INTRODUÇÃO

Colágeno é o principal constituinte proteico dos tecidos conjuntivos compacto

e frouxo. Ocorre seja como uma rêde de fibrilas de aproximadamente um

micro de espessura c de vários micra de comprimento, associado com a maioria

dos tecidos em toda a série animal, seja como feixes grossos formando tendões

(1). É insolúvel em água, em solventes orgânicos e, geralmente, cm soluções

diluídas de álcales e áridos a temperaturas normais. A ação prolongada de

agua quente transforma o colágeno em gelatina, uma reação química de grande

importância, da qual derivou o próprio termo (colágeno significa "gerador de

cola").

Outra propriedade característica do colágeno é seu aumento de volume sob

a ação de áridos c álcales diluidos (3).

A composição em amino-ácidos c mais ou menos igual nos diversos colá-

genos de diferentes animais, mas a ixirccntagcm relativa de sua composição varia

de animal para animal (4). A maioria dos colágenos mostra um alto teór de

glicina, hidroxiprolina e de ácidos aromáticos contendo enxofre (5, 6).

Estudos de fibrilas eolágenas por métodos físicos, tais como difração de

raios X. com angulo alto e baixo, microscopia eletrónica e microscopia de pola¬

rização, evidenciaram a natureza fibrosa do colágeno e mostraram a existência

de um período característico na média de 640 À em colágeno de tóda série

' Secção de Vírus, Instituto Butantan, S. Paulo, Brasil.

!!* Sccç5 ° de Micr °scopia Eletrônica, Universidade de S. Paulo, Brasil.

Depto. de Fisiologia Geral e Animal, Universidade de S. Paulo, Brasil.

Laboratório de Ofiologia, Instituto Butantan. S. Paulo, Brasil.

Recebido, para publicação, em 26.1.1955.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

7 UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

“ ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

animal (7). O periodo de 640 A tem sido observado também em colágeno

de animais fósseis, como, por exemplo, na prêsa desmineralizada de um mamute

de 15.000 anos (4, 7). Por outro lado, a difração de raios X com ângulo

alto, que revela pequenos intersticios na arquitetura molecular, mostra diferen¬

ças nos períodos dos diversos colágenos (8). De todos esses métodos, a mi-

croscopia eletrônica fornece uma aproximação especial à estrutura ultrafina das

fibrilas e a sua ordem nas células e nos tecidos pela visualização direta. Infeliz-

mente, devido ao poder resolvente dos microscópios eletrônicos de apenas 10 A,

detalhes de arquitetura das cadeias de polipéptidos dentro das fibrilas ainda não

podem ser observados.

Presentemente, há três objetivos principais nas pesquisas sôbre fibrilas

colágenas:

1) a consideração da sua estrutura ultrafina, partindo do arranjo espacial

das cadeias de polipéptidos formando as fibrilas, até a organização destas nas

redes dos tecidos e dos tendões. Tais estudos estão sendo feitos intensivamente

no momento, achando-se, porém, longe de completação (9, 10). A partir de

tais estudos, tentativas sérias foram feitas no sentido de reconstruir modelos das

cadeias de polipéptidos nas fibrilas colágenas. Destes os mais prometedores no

momento são os modelos de Bear (4), Randall (11), Pauling (12) e Huggins

(14), visto que o modelo de Astbury provou não ser satisfatório (13).

2) o estudo das propriedades quimicas das fibrilas colágenas, particular-

mente no que diz respeito aos melhoramentos da qualidade de couro (3, 15).

O colágeno é importante não só como matéria prima para a fabricação de gela¬

tina e cola, mas de maior importância ainda na fabricação de couro. A pele,

ou cório, tem como componente principal (35%) uma rêde de fibrilas colágenas

que lhe dá resistência e elasticidade. Afim de manter estas propriedades e para

eliminar a desvantagem da putrefação, as fibrilas colágenas são tornadas inso¬

lúveis por reação com taninos e sais de crómio. Estas reações podem ser con¬

troladas por observações no microscópio eletrônico.

3) do ponto de vista biológico, o colágeno é uma proteína estrutural inti¬

mamente associada com a organização de tecidos e órgãos. Portanto, o conhe¬

cimento da estrutura normal das fibrilas colágenas de diversos tecidos e órgãos,

sob diferentes condições físico-químicas, é o ponto inicial para a compreensão

das alterações que ocorrem em tecidos normais, por exemplo, a histogênese de

tecidos conjuntivos e o processo de envelhecimento, bem como de alterações

patológicas, tais como as produzidas por colagênase na febre reumática ou na

gangrena (16, 26).

SciELO

Mem. Inst. Batastaa,

27 : 1 - 39 . 1955 / 6 .

P. SOUZA SANTOS, H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS. A. R. HOGE A P. SAWAYA

Xo presente estudo é nosso intento apresentar algumas observações sôbre

a microscopia eletrônica de fibrilas colágenas normais de vários tecidos de alguns

animais, principalmente de répteis, e demonstrar a ação de certos fatores qui-

micos e físicos sôbre a estrutura fibrilar. Pareceu-nos mais conveniente apre¬

sentar os métodos, materiais, resultados e a discussão juntamente em cada secção,

do que em capitulos separados.

PERÍODO E ESTRUTURA ULTRA-FINA DAS FIBRILAS

Estudámos fibrilas colágenas associadas com as miofibrilas dos seguintes

músculos: obliquo externo do sapo, Bufo pqraaicmis ; do jacaré, Cayinan lati-

roslris; das serpentes, Liophis miliaris e Constrictor constriclor amarali; do

pombo e do homem.

Da série dos répteis (serpentes, jacaré c lagarto Tupinambis teguixin ) foi

usado também colágeno dos seguintes músculos: hioglosso, rabo, lingua, tem¬

poral e coração. Observações foram feitas também cm fibrilas colágenas de

veias e do canal deferente das serpentes e do lagarto. Em adição, usámos ten¬

dões das patas dianteiras, do dorso e do rabo do rato albino e o tendão da

glândula venenosa de Bothrops altcmala e o seu homólogo na Constrictor cons-

irictor amarali. As fibrilas foram preparadas, para microscopia eletrónica, pela

técnica prèviamente descrita para a preparação de miofibrilas (35). Obser¬

vações foram feitas em ambos os microscópios, no Siemens 100b e r.o micros¬

cópio eletrónico RCA, EMU. Medidas foram obtidas das micrografias eletró¬

nicas ampliadas, feitas no microscópio eletrónico RCA, sendo os aumentos de¬

terminados dentro de 5 % de érro (17).

Em todos os casos, as fibrilas colágenas aparecem como filamentos únicos,

às vêzes uma réde ou em feixes, apresentando uma caracteristica estriação

transversal, formada pela alternação de bandas escuras c claras denominadas

respectivamente bandas A e B por Schmitt (18) e Iwndas D e // por Wolpers

(19). As bandas escuras são regiões de alto poder dispersivo eletrônico,

o que significa que têm maior densidade ou mais átomos por unidade de volume

do que as bandas claras. Xas preparações sombreadas com metal, as bandas

são nitidamente visíveis quando a direção do sombreamento é paralela, ou

quáse paralela, ao eixo longo da fibrila (íig. 1). Em tais preparações, onde

o sombreamento está em ângulos retos ao eixo longo, as bandas não são nitidamente

vistas nas fibrilas, mas os contornos da fibrila são visíveis na sombra. Em

preparações não sombreadas, as bandas podem ser vistas somente quando as

fibrilas estão bem limpas, isto é, quando a camada da substância básica, às vêzes

SciELO

11 12 13 14 15 16

4 UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

grudada às fibrilas, não encobre e obscurece as bandas. Pode ser visto clara-

mente, na fig. 1, que a banda A é mais alta do que a B, dando assim à fibrila

o aspecto de um fio de pérolas. Não obstante, esta aparência é, na verdade,

devido à perda de água da fibrila, sendo que foi demonstTado, por meio de ré¬

plicas de fibrilas colágenas úmidas, que a superfície é uniformemente lisa. Pa¬

rece, portanto, razoável presumir que a banda B possui um teôr mais alto de

água do que a banda A (20). Por coloração seletiva como os chamados co¬

rantes eletrônicos, isto é, ácido ósmico, ácido fosfotúngstico ou acetato de ura-

nil, uma estrutura mais fina pode ser evidenciada em preparaçõe snão som¬

breadas. Quatro linhas escuras aparecem na banda A (a, b, c, d) e uma única

linha na banda B (e). Sob certas condições, as linhas “b” e “e” podem apa¬

recer divididas em duas linhas cada, dando, assim, um total de sete linhas

(23). Em fibrilas sombreadas, nem todas as linhas se tornam visíveis. Con¬

tudo, devido ao fato de que as linhas “b” e “c” são de diâmetro largo, as

mesmas se tornam proeminentes em fibrilas limpas sombreadas paralelamente

ao eixo longo (Figs. 1, 2), dando a aparência de uma estriação transversal

extra na banda A, tendo um período de 270 Â, o assim cliamado intra-periodo

de preparações sombreadas (27). A soma dos comprimentos das bandas A

mais B dá em média 640 A. concordando, assim, com o espaceamento caracte¬

rístico das fibrilas colágenas sêcas, conforme foi revelado por difração de raios

X com ângulo baixo (4). Em todas as nossas experiências usamos espe-

cimes sombreados com metal; portanto, variações das sub-ltnhas não foram

consideradas nêste estudo.

Na maior parte do trabalho prévio em microscopia de colágeno usou-se

fixação com fortnol, visto que êste não altera a refração dupla intrínseca do

colágeno e, por conseguinte, não muda o arranjo das cadeias de polipéptidos

nas fibrilas (28). Visto que nossos estudos incluem uma variedade de colá-

genos, achamos conveniente determinar a influência de diversos fixadores, antes

de iniciar a experiência definitiva. Desta maneira, o período e o diâmetro das

fibrilas foram determinados após o uso de formol, de soluções de Zenker e de

Bouin. bem como de material não fixado. Os resultados obtidos com o tendão

da glândula salivar de Constridor são apresentados na Tabela 1, onde se pode

ver que o período é o mesmo nos materiais fixados e nos não fixados, mas

que a gama dos diâmetros varia com o fixador. O aspecto das fibrilas, após

tal tratamento, é apresentado nas Figuras 1 e 2. À base dêstes resultados, usá¬

mos material não fixado, ou fixámos com formol a 5%, nas experiências defi¬

nitivas.

SciELO

Mm. Injt. ButinUn, P. SOUZA SANTOS, H. SOUZA SANTOS, r

27:1-39. 1955/6. G. A EDWARDS, A. R. HOGE & P. SAYVAYA

As observações finais das fibrilas colágenas normais incluiram medições

do período e do diâmetro de um número de fibrilas tiradas de regiões diferen¬

tes de vários animais, e estudos sobre a forma da fibrila em geral. Na Tabela 2

são apresentadas medições do comprimento do período e do diâmetro de fibri¬

las de diversos órgãos de vários animais. Pode-se notar que, apesar de que

o período varia levemente, entre os órgãos do mesmo animal ou de animal para

animal, permanece uniformemente ao redor de 640 A, confirmando a obser¬

vação de Bear obtida por meio de difração com ângulo baixo (8). Os diâ¬

metros apresentaram maior variabilidade. Nas fibrilas de certos órgãos, por

exemplo, da lingua do lagarto, os diâmetros são uniformes. Em outros, porém,

como por exemplo do rabo do jacaré (Fig. 3), a gama dos diâmetros pode ser

extensiva, nêste caso de 640 a 1400 A. A constância do período, mais a varia¬

ção no diâmetro da fibrila, foi tomada por Bear (4) como base para seu modelo

da fibrila colágena, para sustentar a opinião de que a fibrila é composta de

unidades, as protofibrilas, cujos diâmetros são muitas vêzes menores do que

aquele da fibrila e cuja composição é a de poucas cadeias de péptidos, tudo

alinhado de maneira a dar um período constante.

Acredita-se que a fibrila colágena c composta de uma série de anéis ôcos

(27). e, de fato, micrografias eletrônicas de cortes transversais de tendões (9)

tém sido apresentadas mostrando a sua aparência ôca. Estas observações não

discordam de nenhum modo das observações feitas com o microscópio de pola¬

rização (28), indicando que as fibrilas colágenas possuem a bi-rcfringência

intrínseca e a de forma, visto que as protofibrilas são localizadas somente na

periferia. Randall (9) discorda da idéia de uma fibrila óca, alegando que, se

isto fósse verdade, a fibrila deveria mostrar menor densidade do que de fato

mostra. Como resultado dos presentes estudos, acreditamos que a fibrila é

ôca, e entendemos com “ocosidadc” a ausência de proteína ou outro material

sólido e a presença de uma fase liquida no interior da fibrila. A fase liquida

desaparece durante o processo de secagem na preparação da fibrila para o micros¬

cópio, deixando uma fibrila parcialmente achatada c com aparência de um colar

de pérolas. Em cortes ultra-finos, as fibrilas aparecem ôcas devido à preser¬

vação da estrutura tridimensional e à perda de água durante a fixação. A forma

geral da fibrila colágena é bem ilustrada numa série de fotografias tiradas do

tendão da glândula venenosa posterior de Bothrops (Figs. 5 e 6). O tendão

foi deixado em salina fisiológica a 4-6°C durante 6 semanas para maceração;

em seguida, lavado e triturado em água destilada, dessecado e sombreado com

crômio. Percebe-se que algumas das fibrilas se fendem longitudinalmcnte, mos¬

trando na região da fenda uma série de anéis incompletos (SA, 6A). Em

outros, a orientação do corte da fibrila é de maneira que se pode observar a

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

a uma contribuição ao conhecimento da estrutura

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

extremidade óca e quebrada (5A). E, ainda em outros, as extremidades das

fibrilas são achatadas (5B) ou franjadas (6B), sugerindo que o material interno

foi retirado durante o processo de secagem. Se, como acreditamos à base destas

preparações, a fibrila tem um interior líquido, ou semi-liquido, os comentários

de Randall não são mais válidos. Uma evidência adicional da estrutura anelar

da fibrila é a sua extensibilidade. Sob a ação de tensão ao longo da fibrila

única (o tendão todo não pode ser muito extendido, pois se quebra facilmente)

a fibrila aumenta em comprimento, principalmente por mudança do comprimento

da faixa clara, com pouca ou nenhuma alteração na faixa escura. Se a tensão

for suficiente, os anéis parecem separar-se, quebrando a fibrila em pequenas

unidades comparáveis aos sarcômeros de miofibrilas. Êste processo pode ser

observado de melhor maneira cm fibrilas sob a tensão da película de parlódio

quando esta última arrebenta dentro do microscópio eletrónico (compare Fig. 4

mostrando fibrilas tendinosas do rabo, não fixadas e sendo deformadas por

tensão longitudinal devido à fratura da película), visto que a extensão de uma

fibrila única por outros meios é extremamente difícil. Tais observações têm

papel importante na visualização da disposição dos amino-ácidos nas cadeias poli-

peptídicas, visto que, para o colágeno, o modêlo da cadeia alfa-beta de ceratina

não pode ser aplicado (4, 29).

AÇAO DA AGUA QUENTE SOBRE AS FIBRILAS

É liem conhecido que, sob ação prolongada de água quente, o colágeno se

dissolve e se transforma cm gelatina. Para o tendão existe uma temperatura

camteristica de encolhimento, que depende do meio e do tratamento prévio do

tendão (3). Para o tendão fresco em água, a temperatura é de 60° — 65° C.

O tendão fresco, a esta temperatura, primeiramente sofre um encurtamento

repentino acompanhado por um aumento no diâmetro e uma diminuição no pe¬

ríodo. Continuando o aquecimento, o tendão é lentamente dissolvido e toma

uma estrutura amorfa, conforme foi indicado pela diíração de raios X com

ângulo liaixo (3, 4). Extendemos êstes estudos e observámos as alterações em

fibrilas únicas por meio do microscópio eletrónico, usando tendão de rabo de

rato. As fibrilas únicas, após 2 minutos em água distilada a 00°C, diminuem

no comprimento e no período e aumentam no diâmetro, indicando, assim, que

as alterações macroscópicas acima mencionadas são o resultado de alterações

no nível fibrilar (Fig. 10A). A 40°C, nenhuma alteração na estiutura das fibri¬

las podia ser observada (Fig. 10B). A 60°C, após 2 minutos, as extremidades

das fibrilas começam a perder as suas formas. Após uma exposição mais

demorada, as estrias começam a desaparecer, demonstrando que a perda do espa-

SciELO

M«n. Inst. BaUntan. P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS. 7

27:1-39. 1955/6. C. A. EDWARDS, A. R. HOGE & P. SAWAYA

ceamento longitudinal caraterístico (revelado por difração de raios X com

ângulo baixo) é acompanhada pela perda do período de 640 A, pondo em evi¬

dência, dessa maneira, que os dois realmente são idênticos. Após exposição

adicional, nesta temperatura, as fibrilas se dissolvem completamente. A 100°C,

as alterações ocorrem com grande rapidez. Dentro de 2 minutos, as fibrilas

são transformadas completamente em gelatina.

Xossos resultados obtidos com o tendão do rato concordam com os de Lelli

(30) para o derma humana.

A ação da água quente pode ser interpretada como segue (4). As proto-

íibrilas primeiramente são alteradas do estado ordenado, que nomialmente ocor¬

re na fibrila eolágena intacta, para um estado desordenado. Com a prolongada

exposição, a agua quente altera as proto fibrilas colãgenas para moléculas livres

de gelatina.

AÇAO DA ACIDO ACÉTICO SOBRE O TENDÃO

Há anos, Xageotte (31) mostrou que o tendão do rabo de rato jxxlia ser

dissolvido cm ácido acético diluído (IO - * molar), produzindo uma solução clara

e muito viscosa. Esta observação foi extendida aos colágenos de diversas ori¬

gens animais (compare Bear para referências) (4). O colágeno pode ser re-

prccipitado a partir da solução viscosa alterando-se a concentração salina por

meios de diálise, ou diluindo-se com tampões adequados de pH definido (32,

34). O colágeno reprccipitado apresenta a mesma estrutura que o original,

conforme demonstra a difração de raios X (33), i.e., o espaceamento de 640

A. mas tem uma ordem interna menos regular. A compreensão do mecanismo

da reprecipitação do colágeno a partir do estado solúvel, bem como o da rea¬

ção de soluções colágenas com mucoproteinas (34), polisacáridos, glucoprotei-

nas e derivados do ácido nuclêico (7), que também produzem precipitados for¬

mados de fibrilas com jxrriodos, é de maior importância para a obtenção de in¬

formações sõbre o mecanismo da íibrogênese em tecidos.

Visto que as descrições na literatura das condições exatas para a dissolução

e a reprecipitação do colágeno são incompletas (32), repetimos estas experiên¬

cias com diversos tipos dc colágeno de vários animais, variando a temperatura,

a molaridade do ácido acético, o pH e a concentração iònica. Determinámos,

desta maneira, as condições definidas necessárias para a precipitação de certos

colágenos e descobrimos que alguns não se dissolvem, ou então se dissolvem com

dificuldade, e que a temperatura desemjienha paj»el importante no processa

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

3 UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

A. Tendão do rabo de rato. — Quando o tendão do rabo de rato é colo¬

cado, sob condições estéreis, em qualquer volume de ácido acético molar 1CH,

em frascos tampados, a 4-5°, ou a 3/°C, somente uma pequena fracção do

tendão é dissolvida. Alterações macroscópicas, porém, podem ser observadas,

variando conforme a temperatura. Após esforços repetidos, conseguimos obter

melhor dissolução do que 95%, congelando, primeiramente, o tendão com gêlo

sêco, cortando-o, por meio de um micrótomo, em secções de espessura de 30-40

micra e colocando-o, finalmente, no ácido acético a 37° durante 6 horas,

em condições estéreis. A entrada em solução foi favorecida por agitações pe¬

riódicas, com pérolas de vidro. Repetindo o processo sem fazer os cortes, obti-

vemos igualmente bons resultados. Desta maneira, o congelamento prévio, de

algum modo, permite uma dissolução mais fácil, talvez por ação sôbre a subs¬

tância básica (ground substance) que envolve o colágeno. O tendão congelado

não se dissolveu a 4-5°C. As quantidades relativas do tendão e do ácido acético

não são criticas. Xas e.xperièncias finais usámos uma proporção de uma parte

de tendão úmido a cinco partes de ácido acético a IO- 1 molar, visto que pro¬

porções mais altas produzem soluções demasiadamente viscosas para serem fil¬

tradas no filtro de Seitz. A solução viscosa de colágeno assim produzida foi

filtrada num filtro de Seitz, afim de eliminar qualquer material suspenso ou

quaisquer fibrilas não dissolvidas e examinado o filtrado no microscópio ele¬

trónico. Xenhuma estrutura fibrilar podia ser encontrada na solução final.

O processo de reprecipitação dependeu em grande parte da temperatura.

Os melhores precipitados foram produzidos, usando-se uma parte de solução

de colágeno para cinco partes de tampão de ácido citrico-citrado de sódio a 0.1

M jior volume, a pH 4,9. A 4-5°C, não se pode observar precipitado na mis¬

tura de tampão c colágeno nem após uma semana. Centrifugação a baixa velo¬

cidade (Servall, aOOO rpm, 2 horas) não separou qualquer precipitado fibrilar

observável. Quando, porém, a solução de colágeno c a do tampão, ambos

prèviamente colocados à temperatura do ambiente, são misturados e deixados

em temperatura do ambiente, uma precipitação completa se forma dentro de

duas horas. Êste precipitado branco, gelatinoso, pode ser facilmente separado

do liquido sobrenadante por meio de decantação ou por centrifugação. Para

o exame no microscópio eletrônico, os sais foram retirados por repetidas lava¬

gens com água destilada c recentrifugação. O precipitado final, suspenso em

água distilada, em seguida foi examinado de maneira usual. Achou-se um con¬

teúdo de fibrilas colágenas caraterísticas do mesmo periodo como aquelas nas

fibrilas originais. Em geral, as fibrilas reprecipitadas mostraram contornos ní¬

tidos, mas as extremidades apareceram um tanto franjadas. Em várias prepa¬

rações apareceram diversos tipos de fibrilas, variando de fibrilas curtas, não

estriadas (Fig. 7A), a fibrilas mais compridas, não estriadas (Fig. 7B), fibrilas

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst- Butantan.

27:1-39. 195 5/6.

P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS. A. R. HOGE & P. SAWAYA

mais compridas estriadas (Fig. 8) e, finalmente, fibrilas definitivas (Fig. 9).

É uma tentação sugerir que estas representam fases na formação da fibrila colá-

gena estriada, i.e., que a estriação transversal ocorre somente depois que a

fibrila alcança um certo comprimento e possivelmente uma certa tensão.

Tendão da glândula saliivr. — Tentativas para repetir a experiência

acima, com o tendão posterior das glândulas labiais da Constrictor constrictor,

falharam, quando foram usados tempos de contacto mais prolongados. Esta

diferença no comportamento é inexplicável, uma vez que ambos os tendões, o

do rabo do rato e o da glândula, são tendões livres de outros tecidos. O

tendão da glândula mostrou um certo grau de inchamento após o tratamento

de 24 horas com o ácido acético. Fibrilas fixadas em formol a 5%, trituradas

em água distilada e examinadas de maneira usual no microscópio eletrónico,

mostraram um aumento no periodo de estrias transversais, com diminuição na

nitidez dos seus contornos.

C. Tendões dc zárias fartes do corpo. — As duas experiências prévias

sugeriram fortemente que o poder dissolvente do ácido acético depende do ani¬

mal, da região do corpo de onde o tendão é tirado e do pre-tratamento. Sem

congelamento prévio do tendão, a ação do ácido acético parece estar limitada

ao inchamento, cujo grau e tipo dejiendcm da temperatura.

Para provar esta tese, tendões foram tirados do rabo, do dorso e das patas

de ratos albinos. Pedaços de aproximadamente o mesmo tamanho de cada re¬

gião foram colocados, sem congelamento prévio, em ácido acético a IO -4 molar,

sch condições estéreis, a 4 o c 37° C, c foram assim mantidos durante 24 horas.

-Subseqüentemente foram fixados em formol a 5£>, triturados cm água desti¬

lada e prejiarados para o microscópio eletrónico. Em um grui» óas experiên

cias, o ácido acético foi colocado à temperatura desejada antes de adicionar o

tendão. Numa segunda série, os tendões foram colocados no ácido acético a

temperatura ambiente e cm seguida ajustado às temperaturas desejadas. Os

resultados diferiram consideravelmente, como será demonstrado abaixo.

Xa temperatura mais baixa (4°C), os tendões incham surpreendentemente

e ficam transparentes, tendo a aparência de uma geléia rigida, e os tendões

não perdem a sua forma nem após agitação (Fig. 11). A 37°C, de outro lado,

o tendão incha menos, fica opaco e perde a sua aparência sedosa. As fibrilas

dos tendões levadas gradualmente de 37° a 4 o , apareceram, no microscópio ele¬

trônico, como fibrilas em zig-zag, de periodo curto e irregular (Fig. 12). Êste

fenómeno foi visto principalmente nos tendões do rabo e do dorso. Em algumas

das fibrilas, cm zig-cag, o periodo foi mantido, cm outras desapareceu. Não

foram observadas fibrilas, em cig-zag a 37°C.

O significado da formação do tipo zig-zag irregular de fibrila não fica

'sclarecido por éstes estudos. Parece estar relacionado com o efeito da tem-

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FIXA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

pcratura na mesma, uma vez que os tendões colocados diretamente em ácido

acético prèviamente resfriado a 4°C, não mostram a formação de cig-zag. Assim,

é evidente que é causada pelo decréscimo gradual da temperatura. Xotável

era também o fato de que somente à temperatura baixà perderam-se as estrias

transversais, enquanto à temperatura mais alta as estrias continuaram observá¬

veis, mesmo quando a fibrila aparentemente se estava desintegrando ao longo

do eixo longitudinal. De fato, o aspecto das fibrilas após o tratamento com

ácido acético a 37°C é semelhante àquele após o tratamento com água a 60°C.

AÇAO DE ALCALE DILUÍDO SOBRE O TEXDAO

Outrora se acreditava que álcale diluido não ataca o colágeno. Xão obs¬

tante, Gross (16) mostrou que uma solução de hidróxido de sódio a 0,1 X

causa uma fragmentação das fibrilas colágenas na direção transversal e, evcn-

tualmente, a redução de algumas fibrilas a massa amorfa. Tentativas de repe¬

tir as experiências de Gross, com o tendão das glândulas labiais de C. cons-

trictor, não tiveram sucesso. As fibrilas colágenas foram isoladas, como orè-

viamente descrito, e suspensas em solução de hidróxido de sódio a 10 4 X. Tes¬

temunhos foram feitos por suspender outros tendões em água destilada. Dei¬

xaram-se ambos a 37°C e a 0°C durante 24 horas e em seguida examinaram-se

no microscópio eletrônio. Quanto podia ser determinado pela micrografins,

não houve alterações. Estas experiências mostram, pois, que (1) o álcale não

tem efeito sõbre o tendão, como prèviamente se acreditava, ou (2) que, como

se encontra em outras experiências acima mencionadas, o efeito de um agente

sõbre o colágeno depende em grande parte do animal e da região de onde o

tendão é tirado. Para o esclarecimento dêste ponto, novos trabalhos experi¬

mentais estão em andamento.

RESUMO

Fibrilas colágenas de vários órgãos do sapo, de répteis, do jiombo, do

rato e do homem, foram estudadas, com auxilio do microscópio eletrónico.

Observações foram feitas sõbre a influência de extensão, de fixadores, sais,

ácidos, álcales e de temperatura sõbre a estrutura da fibrila. Igualmente, fo¬

ram estudadas as condições necessárias para a dissolução e reprecipitação de

colágeno.

As fibrilas normais de vários órgãos de diversos animais mostraram um

período idêntico, mas variaram consideravelmente nos diâmetros. A variação

SciELO

Mem. Inst. Batantan,

27:1-39. 1955/6.

I*. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS, A- R. HOGE & P. SAWAYA

era mais acentuada em certos animais e órgãos do que em outros; por exemplo,

as fibrilas da língua do lagarto eram extremamente uniformes, enquanto aquelas

do rabo do jacaré variavam muito.

As fibrilas foram observadas em estado fresco ou fixadas em formol, ou

nos liquidos de Bouin e de Zenker. Em todos os casos, o período permaneceu

uniforme, mas o diâmetro das fibrilas pareceu variar com o fixador. A maior

uniformidade foi obtida com formol a 5%.

Quando sujeita a tensão, a fibrila aumenta no comprimento, principal¬

mente na faixa clara. Com tensão contínua, a fibrila parte-se em unidades

individuais com comprimento de apenas duas faixas.

Tendões expostos a salina fisiológica por longos períodos de tempo, fendem-

se facilmente em direção longitudinal, durante a trituração, c mostram um

achatamento considerável quando secados nas grades. Em muitas fibrilas assim

tratadas podem ser vistos anéis incompletos na periferia da fibrila, ou um inte¬

rior ôco nas extremidades. Acreditamos, porisso, que a fibrila, normalmente,

possui um interior liquido, ou semi-liquido.

A 40°C, as fibrilas não mostram alterações cm água. Dentro de 2 minutos

de exposição à água a 60°C, as fibrilas começam a perder a sua forma. Con¬

tinuando a exposição, as fibrilas ficam mais curtas, aumentam no diâmetro,

com encurtamento consequente do periodo, dissolvem-se lentamentc e se trans¬

formam, finalmcnte, em massa gelatinosa, amorfa. A 100°C, estas altera¬

ções ocorrem dentro de 2 minutos. A água quente parece alterar as proto-

íibrilas coiágenas a moléculas livres de gelatina, passando a fases nas quais as

protofibrilas são alteradas do estado ordenado a um estado desordenado.

A temperatura desempenha papel importante na dissolução e na rcpreci-

pitação das fibrilas. Um congelamento prévio dos tendões era necessário pari

causar sua dissolução no ácido acético. A 4-5°, a dissolução é cxtrcmamcntc

lenta; a 37°C, bem rápida. A 4-5°, a reprccipitação não ocorre dentro de uma

semana, enquanto a 37°C é completa dentro de 2 horas.

Fibrilas dissolvidas em ácido acético e reprccipitadas cm tampão de citrato

mostraram diversas fases de reformação. Acredita-se que a sequência é (1)

fibrilas curtas, não estriadas, (2) fibrilas compridas, não estriadas, (3) fibrilas

compridos, estriadas. Desta maneira, parece que um certo comprimento da

fibrila e uma certa tensão são necessários para a formação das estrias nas

fibrilas reprecipitadas.

Tendões do rabo, do dorso e das patas do rato branco mostraram diferentes

respostas ao mesmo tratamento. Tentativas de dissolver e reprecipitar o tendão

posterior das glândulas labiais de Constrictor constrictor, não foram bem suce¬

didas. Desta maneira, achamos que as condições necessárias para a dissolução

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

,9 IMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRLTLRA

1- ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

e a reprecipitação de fibrilas colágenas variam com o animal e o órgão de

origem.

Tendões não prèviamente congelados, quando adicionados a ácido acético

prèvi amente resfriado a 4°C, incham e ficam transparentes, mas permanecem

lineares em forma. Aqueles colocados em árido acético a 37°C e em seguida

resfriados a 4°C, mostram uma forma de zig-zag. A 37°C, não são formados

zig-sags.

Alcale diluido pareceu não ter efeito sôbre o tendão de Constrictor cons-

trictor, nem a 4 o nem a 37°C.

AGRADECIMENTOS

Agradecemos o auxílio técnico de Sr. Adolpho Brunner, Jr. e Srta. Cecilia

Doneux. O trabalho foi favorecido, em parte, por subsídios da Fundação de

Rockefeller e do Conselho Nacional de Pesquisas.

Tabela I

INFLUÊNCIA DE VÁRIOS FIXADORES SOBRE O TENDÃO DA GLANDULA

DE VENENO DA SERPENTE.

Fixador .

Não-fixa do

Formol 5%

Bouin

Zenker

Período (Â) ....

660

Comprimento (A)

1000-1600

1400-2000

830-2600

1100-1300

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

Mera. Inst. B-jUr.Un,

27:1-39. 1953/6.

P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS, A. R. HOGE A P. SAWAYA

Tabela II

PERÍODOS E DIÂMETROS DE FIBRILAS COLÁGENAS DE VÁRIOS

ANIMAIS (cm À)

Órgão

animal

Serpente

Lagarto

Jacaré

Sapo

Pombo

Ser

Humano

Obliquo externo

d=798

p=630

d=798

p=600

d=793

>=570

Coração

d=1100

p=600

Tempo ralis

d=630

p=590

Hioglosso

d=600

p=600

d=640-900

p=640

Tendão da glân¬

dula de ve¬

neno

d = 1400-2000

p=660

Veia

d=800

p=630

Vas dtfcrcns

d=630

p=600

Rctrator do

hemipenis

d=900

p=600

Cauda

d=640-1400

p=640

Lingua

d=600

p=S90

2 3

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Ifm». Imt. Bntantan. V. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

27:1-39. 195S/6. G. A. EDWARDS. A. R. HOGE & P. SAWAVA

Fic. 1 A, R. Fibrilas colápcnas normais do rctrator do bcniipcnis de Construtor

constnctor amarúli. Fixadas cm íormol.

Fic. 1 A, B. — Xormal collagcn fibrils from rctractor of licniipcnis of Constriclor

constrirtor amarali. Formalin íbccd.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

*****

iUiiüj».*

L t.kU‘ AU

• ** \i > . .>

' *" ' >*±Hn ía xLUk.l

, ^> 111 “^

UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

Fig. 2. — A. Fibrilas colágenas normais de retractor do hemipenis de Constrictor, fixadas

no líquido de Zenker. — B. Fibrilas colágenas normais do retractor do hemipenis de

Constrictor, fixadas no líquido de Bouin.

Fig. 2 — A. Xormal collagen fibrils from Constrictor hemipenis retractor, fixed in

Zenker’s fluid. — B. Xormal collagen fibrils from Constrictor hemipenis retractor, fixed

in Bouin’s fluid.

SciELO

M«n. In«. Butanun. P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

27:1-39. 1955/6. G. A. EDWARDS. A. K. HOT.E A P. SAWAVA

Fro. 3 — Fibrilas colácenas do rabo de jacaré, mostrando variação no diimetro.

: lS - •* — Fibrilas colãgcnas do tendão dorsal do rato.

Xão lixadas.

FlC. j. — Collagen fibrils from tail of caiman,

-C. 4. — Collagen fibrils írom dorsal tendon of

Unfixcd.

mostrando a influência dc extensão.

showing variation in dianKter.

rat, shawing inílucncc of stretcll.

2 3 4 5 6 7

11 12 13 14 15 16 17

,_ p

F ' C 5 A »■ - FWbtJ, 'Zr*' * **»* *m«.

-****«.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17 18

UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

Fic. 7. — A. Fase inicial na formação de fibrilas repreci pitadas ; na maioria fibrilas curtas,

não estriadas. — B. Fase mais adiantada, mostrando fibrilas mais compridas, não estriadas.

Fic. 7 — A. Early stage in formation oi reprecipitated fibrils ; mostly short, non-striated

fibrils. — B. Later stage showing longer, non-striated fibrils.

SciELO

11 12 13 14

Mrm. In*t. Batantan,

27 : 1 - 39 . 1955 6 .

I*. SOrZA SANTOS. H. SOfZA SANTOS.

G. A. EDWARDS, A. R. HOGE \ P. SAWAYA

VíCv; V W í V. f? «

%i > \ "ÍjL'^ iT s 'PI

****** • >Af/ - V ' • • . '■ .1 .»

8 A

8 B

Fic. 8 A e B. — Fases intermediárias da formação de fibrilas reprccipitadas. mostrando

algumas fibrilas compridas, estriadas.

Fic. 8 — A and B. — Intermcdiatc stages of formation of reprecipitatcd fibrils, showing

sevcral, long, striatcd fibrils.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

->■> CM A CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

CI.TKAFINA E DAS PROPRIEDADES QCIMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

Fig. 9 A e li. — Fases finais na formação de fibrilas reprecipitadas; essencialn-.cntc fibrilas

todas compridas, estriadas, possuindo período igual àquele das íibrilas originais antes do

tratamento.

Fig. 9 — A and B — Final stages in formation oí reprecipitated tibrils; cssentially all

long, striated íibrils, liaving period equal to that of the original fibrils beíore treatment.

SciELO

ín5t -

-'-' 1 - 59 . 1955 / 6 .

* U ihx!e '1\,

|B|||

10 A

'Vyi

.* .'-«i

mjmm

'mu

mrtl

F,r 10 , V F '^ rÍ ' a fI ° '■' n,Üo do ra <° «■vpo.ia a ftí) "C I '

B- Fibrila do twdâo do ra.o cx,*„ u a -W-C .TT J n " nU, ° S -

Fir JO __ Fihril , ' C ri,c - «ninuio-i.

n p., . . f ' m ra * ,rrnf l«n cxp< ,sct| to 60 ° C f nP 7

B. Fib„! .ron, rat tcodon cxpo*d ,o 40 » C Z 2

L *°r 2 minutes.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FU!RH.AS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

KWi

"2 jF

r i

'Cf

[ \ifJi

II A

• VSK

,• 1 >■* y. ' • '

-tSVJ

Fig. 11 A e B. — Fibrilas do tendão posterior da glândula labial de Conslrictor após

exposição do ácido acético a 10-4 M prèviamcnte resfriado a 4-5°C durante 24 horas.

Fig. 11 — A and B. — Fibrils from posterior tendon oi labial gland oí Conslrictor aíter

exposure to precoolcd 10-4 molar acetic acid at 4-5.° C for 24 hours.

2 3 4

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

SciELO ' 0

Mem. Injt. Batantan.

27 : 1 - 39 . 1955 6 .

P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. -V EDWARDS. A. R. HOGE & P. SAWAYA

A CONTRIBUTION TO THE KNOWLEDGE OF THE FINE

STRUCTURE AND CHEMICAL PROPERTIES OF ANIMAL

CONNECTIVE TISSUE FIBRILS.

P. SOUZA SANTOS*; H. SOUZA SANTOS**; G. A. EDWARDS***- A. R. HOGE****

AND P. SAWAYA***.

INTRODUCTION.

Collagen is the principal protcin constituent of tlie loose and compact con-

nective tissues. It occurs either as a network of fibrils of approximately one

nncron thickness and of many microns Icngth associated witli almost all tissues

in the whcle animal series; or as thick hundles forming tlie tcndons (1). Col¬

lagen is a fibrous protein, according to the classification of Asthury (2).

It is insoluble in \vater, organic solvents, and dilute Solutions of alkalies

and acids at ordinary temperatures. Tlie prolonged action of hot water

changes collagen into gelatin, a Chemical reaction of great importance and from

which is derived the tcrm itself (collagen means “glue former”). Anothcr cha-

racteristic property of collagen is its swclling by action of dilute acids and

alkalies (3). The amino acid composition is roughly the same in the various

collagens from different animais, but the rclative percentage composition changes

írom animal to animal (4). The majority of the collagens show a higli content

«>i ghcine. hydroxyproline, and of aromatic and sulfur containing acids (5, ó)

Studies of collagen fibrils by physical methods, such as high and low anglc

X-ra> scattering, electron microscopy, and polarization microscopy have put

in evidcnce the fibrous nature of collagen and have shown the existence of a

characteristic period, averaging 640 A in collagen from the entire animal series

(~i. Fhc 640 A period has lieen obscrved also in collagen from fóssil animais,

,nst ance in the demineralized tusk of a 15,000 year old mammoth (4.7). On

Secção de Vinis, Instituto Butantan, S. Paulo, Brasil.

Secção de Microscopia Eletrónica, Universidade de S. Paulo, Brasil.

Dcpto. de Fisiologia Geral e Animal, Universidade de S. Paulo, Brasil.

*** Laboratório de Ofiologia. Instituto Butantan, São Paulo, Brasil.

Received, for puhlication. on 26.1.1955.

SciELO

A COVTRIBUTION TO THE KXOWLEDGE OF THE FIXE

STRUCTURE AND CHEMICAL PROPERTIES OF ANIMAL

CONNECTIVE TISSUE FIBRILS

the other hand, high angle X-ray scattering, which reveals small spacings

in the molecular architecture, shows differences in the spacings of the various

collagens (8). Of all these methods, electron microscopy provides a speciai

approach to the fine structure of the fibrils and to their arrangement in the

cells and tissues by direct visualization. Unfortunately, due to only 10 A

resolving power of electron microscopes, details of the architecture of the polv-

peptide chains within the fibrils cannot yet be observed.

At present there are three major trends of research on collagen fibrils.

The first is the consideration of its fine structure, starting from the spatial

arrangement of the polypeptide chains forming the fibrils to the organization

of the fibrils into the networks of the tissues and tendons. Such studies are

being carried out intensively at the moment, but are far from completion (9,10).

From such studies serious attempts ha ve been made to reconstruct models of

the polypcptide chains in the collagen fibrils. Of these the most promising

at the moment are the models of Bear (4), Randall (11), Pauling (12) and

Huggins (14), inasmuch as the model of Astbury has been proven unsatis-

factory (13). The second trend is the study of the Chemical properties of

collagen fibrils, particularly with a view to improving the quality of leather

(3, 15). Not only is collagen important as the raw material for the manu¬

facture of gelatin and glue, but is extremely important in the manufacture of

leather. The hide, or corium, has as its main component (35%) a network

of collagen fibrils which give it strength and elasticity. To maintain these

properties and to eliminate the disadvantage of putrescence, the collagen fi¬

brils are rendered insoluble by rcaction with tannins and chromium salts. These

reactions can bc controlled by observation with the electron microscope. In

the third place, from the biological point of view, collagen is a structural protein

intimately associatcd with the organization of tissues and organs. Thereforc

knowlcdge of the normal structure of the collagen fibrils from various tissues

and organs, under differing physico-chcmical conditions, is the starting point

for the understanding of the changes which occur in normal tissues, e.g. histo-

genesis of the conncctive tissues and ageing process, as well as pathological

changes such as those produced by collagenase in rheumatic fever or gangrene

(16, 26).

In the present study we aim to present some electron microscope obser-

vations of normal collagen fibrils from various tissues of several animais, prin-

cipally rcptiles; and to show the action of certain Chemical and physical factors

upon the fibril structure. It has seemed more suitable to preser.t the methods,

materiais, results and discussion together under each section, rather than as

separate chapters.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

üem. Imt. Butanun,

37:1-39. 1955/6.

P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS

O. A. EDWARDS, A. R. HOOE & p. SAWAYA

PERIOD AND FINE STRUCTURE OF FIBRILS

We have studied collagen fibrils assodated with the myofibrils of the

followmg skeletal rnuscles: externai obliqúe of the toad, Bufo paracnemis,

of the caiman. Caiman latirostris (Daudin. 1802), of the snakes Constrictor

constrtctor amarali Stull, 1932 and Liophis mUiaris mcrrcmi (Wied, 1821),

oi the pigeon and the human. From the reptilian series (caiman. snakes and

the lizard. Tupinambis teguixin (L„ 1758) ) were used also collagens from the

following rnuscles: hyoglossus, temporalis, retractor caudae, tip of tongue and

heart. Obsen-ations were also made on collagen fibrils from veins and the

eierent canal of the lizard and snakes. In addition we used tedons from

the front feet, dorsuir. and tail of the albino rat. and tendon from the posterior

poison gland of Bothrops altemata D.II. et D., 1854 and its homologue in

ouslricto). The fibrils were prepared for clectron microscopy by the tcchni-

que previously described for preparation of myofibrils (35). Obsen-ations were

ma.Ie , n both the Siemens, 1001), and the RCA, EMU, electron microscopes.

* easurements were obtamed from enlarged electron micrographs taken in the

'' A. electron nncroscope whose magnification was dctermincd within 5%

error (17).

In all cases the collagen fibrils appear as single filaments, at times in a

netuor or m bundles, presenting a characteristic cross striation formed by

ie alternai,on of dark and light lands, which have lieen called respectivelv

W and B bands by Schmitt (18) and D and H bands by Wolpers (19). The

ark bands are regions of high electron scattering power, meaning that thcy

ia\c a greater density or more atoms |>er unit volume than lia\-e the light

tonds In the metal shadowed preparations the bands are clearlv evident when

he direction of shadowing is parallel or nearly parallel to the Iong axis of

n ( '!>nre 1). In those preparations where the shadowing is at right

ang es to the long axis the lrands are not clearly seen in the fibrils but the íibril

contour i> \isible in the shadow. In unsliadowed preparations the bands can

. SCCn ° nly when thc fibri,s are q«'tc clean. i.e. when the ground substance

tóver. somet.mes attached to the fibrils. does not cover and obscure the band«

It may 1« seen clearly in Figure 1 that the A band is higher than the B, thus

pung to the f,br,1 the aspect of a string of In-ads. However. this appearance '

* S ln reaI,tv due to the ,oss of "ater from the fibril, since it has been show.i

v means of replicas of wet collagen fibrils that the surfacc is uniformly smooth

thus seems reasonable to assume that band B has a higher water contem

inn band A (20). By selective staining with the so-called electron stains,

t e. osnuc acul. phosphotugstic acid or uranyl acetate, a finer stnicturc can

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

A COXTRI BUTION TO THE KXOWLEDGE OF THE FIXE

STRLCTLRE AXD CHEMICAL PROPERTIES OF ANIMAL

COXXECTIVE TISSUE FIBRILS

be evidenced in nonshadowed preparations. Four dark lines appear in the A

band (a, b, c, d,) and a single line in the B band (e). Under certain condi-

tions the “b” and “e” lines may appear to be split into two lines each, thus

giving a total of seven lines (23). In shadowed fibrils not all the lines become

visible. However, due to the fact that the “b” and “c” lines are of large

diameter, they become prominent in clean fibrils that are shadowed parallel to

their long axis (Figure 1,2), giving the appearance of an extra cross striation

in the A band, liaving a period of 270 Á, the so-called intraperiod of shadowed

preparations (27). The sum of the lengths of the A plus B bands adds up

to an average of 640 A, which agrees thus with the characteristic spacing of

the dry collagen fibrils as revealed by small angle X-ray scattering (4). In

all of our cxperiments we used metal shadowed specimens, hence variations of

the sub-lines were not considered in this study.

Most of the previous work in the electron microscopy of collagen has in-

volved formalin fixation since formalin does not change the intrinsic double

refraction of collagen, hence does not change the arrangement of the polypep-

tide chains in the fibrils (28). Inasmuch as our studies include a variety of

collagens it was deemed advisable to determine the influence of several fixa-

tives before entering the definitive experiment. Thus the period and diameter

of fibrils was determined after the use of formalin, Zenkers and Bouin’s Solu¬

tions, as well as unfixed material. The results obtained with the tendon frotn

the salivary gland of Conslríclor are presented in Table 1, where it will be

seen that the average period is the same in the unfixed and the íixed materiais,

but that the range of diameters varies with the fixative. The aspects of the

fibrils after such treatment is shown in Figures 1 and 2. On the basis of these

results we used either unfixed material, or fixation with 5% formalin in the

definitive cxperiments.

The final observations on the normal collagen fibrils included measuremenls

of the period and diameter of a number of fibrils taken from diíferent regions

of various animais, and studies on the form of the fibril in general. In Table 2

are presented measurements of the length of period and diameter of fibrils

from various organs and animais. It can be seen that although the period

varies slightly, both from organs of the same animal or from animal to animal,

it remains uniformly around 640 A, confirming Bear‘s observations with low

angle scattering (8). The diameters presented greater variability. In the fi¬

brils from certain organs, e.g. tongue of the lizard, the diameters are uniform.

In others, however, as for example from the tail of the caiman, Figure 3, the

range of diameters may be extensive, in this case from 640 to 1400 A. The

constancy of period plus the variation in diameter of the fibril has been taken

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mem. Inst. ButinUn,

27 : 1-39 1955 / 6 .

P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS. A. R. HOGE & P. SAWAYA

by Bear (4) as the basis of his model of the collagen fibril to support the view

that the fibril is composed of units, the protofibrils, whose diameter is manv

times smaller than that of the fibril and whose composition is that of few poly-

peptide chains, the whole aligned in such manner as to give constant period

It is believed that the collagen fibril is composed of a series of holloiv

rir.gs (27) and indeed electron micrographs of cross sections of tendons (9)

have been presented showing the hollow appearance. These obscrvations in

no way disagree with the obscrvations made with tlx: polarizing microscope

(28) indicating that collagen fibrils have both form and intrinsic birefringence,

inasmuch as the protofibrils are Iocated only in the periphery. Randall (9)

disagrees with the idea of the hollowness of the fibril, claiming that if true

the fibril should show less density tlian in fact is the case. As a result of the

present studies we believe that the fibril is hollow, and understand as “hol

lowness” the absence of protein or other solid material and the presence of

a liquid phase in the core of the fibril. The liquid phase disappears during

the drying proccss in the preparation of the fibril for the microscope, leaving a

partially collapsed fibril of beaded appearance. In ultrathin sections the fihrils

appear hollow due to the preservation of the tridimensional structurc and the

loss of water during fixation. The general form of the collagen fibril is well

ilustrated in a series of photographs of the tendons of th; posterior poison

gland of Bothrops (Figures 5 and 6). The tendon was leit in physiological

salinc at 4-5 degrees C for 6 wecks for maceration, tlicn washed and blended

in distilled water, dried and shadowcd with chromium. It will bc scen that

some of the fibrils split lengthwise showing in the region of the split a series of

incomplete rings(5A, 6A). In others the orientation of the section of the fibril

is such that onc can observe a hollow, broken end (5A). And in still others

the extremities of the fibrils are flattencd out (5B) or fraycd (6B), suggesting

that the inner material lias been drawn off during the drying proccss. If, as

we believe on the basis of these preparations, the fibril has a liquid, or semi-

liquid core, then Randall s comments are no longcr valid. Further evidcnce of

the ring strueture of the fibril is the extensibility. Under the action of tension

along the length of the single fibril (the whole tendon eannot l>e greatly extended

as it breaks too easily) the fibril increases in length, principally by change of

length of the light and with Iittle or no change in the dark band. If the tension

is sufficient the rings appear to separate, breaking the fibril into units compa-

rablc to the sarcomeres of myofibrils. This proccss can bc best observed in

fibrils under tension causcd by breakagc of the supporting grid film in the

electron microscope (as in Figure 4 showing fibrils of unfixed tail tendon being

deformed by longitudinal tension due to film breakage), inasmuch as stretch

of the single fibril by other means is exceedingly difficult. Such obscrvations

SciELO

A COXTRUtCTIOX TO THE KXOWLEDGE OF THE FIXE

STRUCTCRE AXD CHEMICAL. PROPERTIES OF AXIMAL

COXXECTIVE TISSUE FIBRILS

play an important role in the visualization of the disposition of tlie amino acids

in the polypeptide chains inasmuch as in collagen the alpha-beta keratin chain

model cannot be applied (4, 29).

ACTIOX OF HOT WATER OX FIBRILS

It is well known that. iinder the prolonged action ot hot water, collagen

dissolves and turns into gelatin. For tendon therc is a characteristic shrinkage

temperature which depends npon the médium and the previous treatment of the

tendon (3). For fresh tendon in water this temperature is from 60 — 65

degrees C. Fresh tendon. at this temperature, íirst suffers a sudden shortening

accompanicd by increase in diameter and decrease in period. Upon further heating

the tendon is dissolved slowly and is changed into an amorphous structure, as

indicated by low anglc X-ray scattering (3, 4). \Ye have carried these obser¬

vai ions further by noting the changes in single fibrils by means of the electron

microscope, using rat tail tendon. The single fibrils after two minutes in dis-

tilled water at 60 degrees C shorten in Iength, decrease in period and increase

in diameter. thus indicating that the macroscopical changes mentioned above are

the result of changes at the fibrillar levei (Figure 10A). At 40 degrees C

no change in the structure of the fibrils could l>e observed (Figure 10B). At

60 degrees C after two minutes the extremities of the fibrils begin to lose their

shape. After a longer exposure the striations begin to disappear, showing

that the Ioss of the characteristic long spacing (revealed by low angle X-ray

scattering) is accompanied by the loss of the 640 A period, thus indicating that

the two are actually the same. After further exposure at this temperature the

fibrils dissolve completely. At 100°C the changes occur with great rapidity.

Within two minutes the fibrils are changed completely into gelatin.

Our results with the rat tendon thus agree with those of Lelli (30) for

human dermis.

The action of the hot water can be interpreted as íollows (4). The pro-

tofibrils are first changed from the orderly State, normally occuring in the intact

collagen fibril, into a disordered State. With continued exposure the hot water

changes the collagen protofibrils into íree gelatin molecules.

ACTIOX OF DILUTE ACETIC ACID OX TEXDOX

Years ago Xageotte (31) showed that rat tail tendon could be dissolved

in dilute acetic acid (IO -4 molar) producing a clear and verv viscous solution.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mrm. In«l- Butantan,

27 : 1 - 39 . 1955 / 6 .

I*. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS, A. R. HOGE A P. SAWAYA

This observation has been extended to collagens of different animal origins

(cf. Bear for reíerences (4) ). Tlie collagen can be reprecipitated from the

viscous solution by changing the salt concentration by dialysis, or by diluting

with suitable buffers of definite pH (32, 34). The reprecipitated collagen

presents the same structure as the original, as shown by X-ray diffraction (33),

i. e. the MO A spacing, but a less orderly internai arrangeinent. The under-

standing of the reprecipitation of collagen from solution, as well as the reaction

of collagen Solutions with mucoproteins (34), polysacliarides, glucoproteins and

nucleic acid derivatives (7), which also produce precipitates íormed of banded

fibrils, is of the utmost importance for obtaining informático on the meclianism

of íibrogenesis in tissues.

In view of the fact that descriptions in the literature of the exact condi-

tions for dissolution and reprecipitation of collagen are incomplete (32) we

have repeated these experiments with several types of collagen from several

animais, varying the temperature, molarity of acetic acid. pH, and ionic con¬

centration. We have thus determined the definite conditions ncccssary for

predpitation of certain collagens, and have discovered that certain othcrs enter

only with difíiculty, or not at all. into solution, and that temperaturc plays

an important part in the process.

A. — Rat Tail Tendon — If rat tendon is placed, under stcrile conditions,

in any volume of 10~* molar acetic in stoppcred flasks at 4-5°, or at 37°C,

only a very small íraction of the tendon is dissolved. Macroscopical changes,

however, can l>e observed; the changes differing with the temperature.

Aftcr repeated efforts we succeeded in obtaining bettcr than 95% dissolution

by freezing the tendon first with dry ice, cutting with a microtomc into scctions

30-40 microns thick, then placing the acetic acid at 37° for 6 liours under stcrile

conditions. The entrance into solution was aided by jK-riodical shaking with

glass bcads. Repeating the process without the aitting also proved successful.

Thus the prefreezing in some way permits easier dissolution, perhaps by acting

upon the ground substance that surrounds the collagen. Frozen tendon did not

dissolve at 4-5° C. The relativc amounts of tendon and acetic acid are not

criticai. In the final experiments we used a ratio of one part moist tendon

to five parts of 1CH molar acetic acid by weight, inasmuch as higher ratios

produce Solutions too viscous to be filtered through the Seitz filters. The

viscous solution of collagen thus produced was filtered through a Seitz filter

to eliminate any suspended matter or any undissolved fibrils, and the filtrate

examined in the electron microscope. Xo fibrillar structures could be found

in the final solution. The reprecipitation process dependcd greatly upon the

temperature. The l>est predpitates were produced using one part of collagen

SciELO

A COXTRIBUTIOX TO THE KNOWLEDGE OF THE FIXE

STRCCTURE AXD CHEMICAL. PROPERTIES OF ANIMAL

COXXECTIVE TISSUE FIBRILS

solution to five parts of 0.1 molar citric acid-sodium citrate buffer by volume

at pH 4.9. At 4-5° C no visible precipitate in the collagen-buffer mixture

can be observed even after one week. Low speed centriíugation (Servall, 5000

rpm, 2 hours) did not separate out any observable fibrillar precipitate. If,

however, the collagen solution and the buffer, both previously brought to room

temperature, are mixed and let stand at room temperature, a complete preci-

pitation is obtained within two hours. Tliis white, gelatinous precipitate can

be easily separated from the supematant liquid by decantation or by centrifu-

gation. For examination in the electron microscope the salts were washed

out by repeated washings with distilled water and recentrifugation. The final

precipitate, suspended in distilled water, was then examined in the usual way

and found to contain characteristic collagen fibrils of the same period as those

in the original fibrils. In general the reprecipitated fibrils showed sharp con-

tours, although the extremities appeared somewhat frayed. In various prepa-

rations there appeared several types of fibrils, varying from short, non-striated

(Figure 9A), to longer, non-striated (Figure 7B), longer striated (Figure 8)

and finally deíinitive fibrils (Figure 9). It is tempting to suggest that these

represent stages in the formation of the cross striated collagen fibril, i.e. that

the cross striation occurs after the fibril reaches a certain length and probably

a certain tension.

B — Salwary Gland Tendon — Attempts to repeat the experiment above

with the posterior tendon of the labial glands of Constrictor failed, even when

longer contact times were used. This difference in behaviour is puzzling inas-

much as both the rat tail, and the gland tendon are pure tendons without other

tissue involved. Tlie gland tendon showed a certain degree of swelling after

24 hours in the acctic acid. Fibrils fixed in 5% formalin, blended in distilled

water and examined in the usual way in the electron microscope, showed an

increase in period of cross striation with decrease in sharpness of outline of

striations.

C — Tendons From Various Parts of Body — The two previous expe-

riments strongly suggest that the dissolving power of the acetic acid depends

up>on the animal, upon the region of the body from which the tendon is taken,

and upon the preteatment. Without previously freezing the tendon the action

of acetic acid appears to be limited to swelling, the amount and typc of which

depends upon the temperature.

To test this thesis, tendons were taken from the tail, dorsum and paws

of albino rats. Pieces of approximately the same size from each region were

placed, without prefreezing, in 1CH molar acetic acid under sterile conditions

at 4 o and 37°C and thus maintained for 24 hours. Subsequently they were

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mm. In«t. BnUctín,

27:1-39. 1955/4.

P. SOUZA SANTOS, H. SOUZA SANTOS.

G. -V EDWARDS, A. R. HOGE 4 P. SAWAYA

fixed in 5% íormalin, blended in distilled water and prepared for electron

microscopy. In one set of experiments the acetic acid was brought to the de-

sired temperature before adding the tendon. In a second series the tendons

were placed in the acetic acid at room temperature and then brought to the

desired temperatures. The results differed considerably, as will be shown below.

At the lower temperature (4°C) the tendons swell amazingly and become

transparent; having the appearance of a rigid jelly and the tendons do not

lose their shape even after shaking (Figure 11). At 37°C, on the other hand,

the tendon swells less, becomes opaque and loses its silken appearance. The

fibrils írom the tendons brought gradually from 37° to 4°C appeared in the

electron microscope as zig-zag fibrils of short and irregular period (Figure 12).

Tliis phenomenon principally was seen in the tendons from the tail and dorsum.

In some of the zig-zag fibrils the period was maintained, in others it disappeared.

Xo zig-zag fibrils were observed at 37°C.

The meaning of the formation of the irregular, zig-zag type of fibril is

not clear from these studies. It secms to be related to the cífect of tempe¬

rature inthat when the tendons are placed directly in acetic acid previously

cooled to 4°C no zig-zag formation occurs. Tlius it is evident tliat it is caused

by the gradual lowering of the temperature. Noticeable also was the íact

that only at the low temperature was the cross striation lost, while at the highcr

temperature the striations continucd observable even when the fibril was ap-

parently disintegrating along the long axis. In fact, the aspcct of the fibrils

after being treatcd with acetic acid at 37°C is similair to that after treatment

with water at 60°C.

ACTIOX OF DILUTE ALKALI ON TENDON

It lias been held previously that dilute alkali does not attack collagen.

However, Gross (16), has shown that 0.1 normal sodiurn hydroxide causes

fragmentation of the collagen fibrils in the transverse direction and eventually

causes the reduction of some fibrils to an amorphous mass. Attempts to repeat

the experiments of Gross with tendon from the labial glands of Conslriclor

were unsuccessful. The collagen fibrils were isolatcd as describcd previously

and suspended in 10“* normal sodiurn hydroxide. Controls were made by sus-

pending tendons in distilled water. Both were then left for 24 hours at 37°C

and at 0°C and subscquently examined in the electron microscope. As far as

could be determined from the micrographs no clianges occurred. Thus these

experiments show that either (1) dilute alkali does not have an effect upon

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

A COXTRIBUnON TO THE KXOWLEDCE OF THE FINE

STRUCTURE AND CHEMICAL. PROPERTIES OF ANIMAL

CONNECTIVE TISSUE FIBRILS

tendon, as previously believed, but that a stronger concentration could have or

(2) that, as found in other experiments mentioned above, the efíect of an agent

upon eollagen will depend greatly upon the animal and region from which the

tendon is taken. Further experimentation is undenvay to clarify this point.

SUMMARY

Collagen fibrils from various organs of toad, reptiles, pigeon, rat and human

have been studied by means of the electron microscope. Observations have

been made upon the influence of stretch, fixatives, salts, acids, alkalis and tem-

perature upon the stmcture of the fibril. Also studied were the conditions

necessary for dissolution and reprecipitation of collagen.

The normal fibrils from various organs of different animais showed an

identical period, but varied considerably in diameters. The variation was more

marked in certain animais and organs than in others, e.g. fibrils from lizard

tongue were extremely uniform, whereas those from the tail of the caiman

varied considerably.

Fibrils were observed fresh, and fixed in formalin, Bouin’s fluid and

Zenker’s fluid. In all cases the period remained uniform, but the diameter of

the fibrils appeared to vary with the íixative. Greatest uniformity was obtained

with 5% formalin.

When subjected to tension the fibril increases in length, principally in the

light band. With continued tension the fibril breaks into individual units of

the length of the two bands only.

Tendons left in physiological saline for long periods of time easily split

longitudinally during blending and show considerable flattening when dried on

the grids. In many fibrils thus treated may be seen incomplete rings in the

periphery of the fibril. or a hollow core at the extremities. We thus believe

the fibril to normally have a liquid, or semiliquid, core.

At 40°C the fibrils show no change in water. Within two minutes of

exposure to water at 60°C the fibrils begin to lose their shape. On continued

exposure the fibrils shorten, increase in diameter with conseqent shortening of

period, slowly dissolve and íinally become an amorphous gelationous mass. At

ÍOC^C these changes occur within 2 minutes. The hot water appears to change

the collagen protofibrils into free gelatin molecules, by stages in which the

protofibrils are changed from the normal orderly to a disorderly State.

Temperature was found to play an important role in dissolution and repre¬

cipitation of the fibrils. Prefreezing the tendons was necessary to cause their

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mra. Insf. BoUntao, P. SOUZA SANTOS, lí. SOUZA SANTOS. 17

27:1-39. 1955/6. G. A. EDWARDS. A. R. HOGE 4 P. SAWAYA

dissolution in the acetic acid. At 4-5° dissolution is extrcmely slow; at 37°C

quite rapid. Repredpitation at 4-5° does not occur within one week, whereas

it is complete within 2 hours at 37°C.

Fibrils dissolved in acetic add and repredpitated in citrate buffer showed

several stages of reformation. It is believed that the sequence is: (1) short,

non striated fibrils, (2) long, non-striated fibrils, (3) long, striated fibrils.

Thus it appears that a certain length of fibrils and certain tension is necessary

for the formation of the striation in the repredpitated fibrils.

Tendons from the tail, dorsum and paw of the white rat showed different

responses to the same treatment. Attempts to dissolve and repredpitate the

posterior tendon of the labial glands of Constrictor were unsuccessful. Thus

it was found that the conditions necessary for dissolution and repredpitation

of collagen fibrils varies with the animal and organ of origin.

Xon-prefrozen tendons added to acetic acid precoolcd to 4°C swcll and

become transparent but remain linear in form. Those put in acetic acid at

37°C and then lowered do 4°C show a zig-zag form. No zig-zags are fonned

at 37°C.

Dilute alkali appearcd to have no eífect upon Constrictor tendon at eithcr

4 o or 37°C.

ACKNOWLEDGEMENTS

We would like to express our thauks do Mr. Adolpho Brunner, Jr., and

to Miss Cedlia Doncux for thcir technical assistancc. The work was aided

in part by grants from the Rockefellcr Foundation and the Conselho Nacional

de Pesquisas.

BIBLIOGRAPHY

1. Maximov, A. A. and Bloom, W. — Tcxibook of Histology, Saundcrs Pub. Co., Phila-

dclphia, 1943.

2. Astbury, W. T. — Adv. in Enzymology, 3:63, 1943.

3. Kanagy, J. R. — National Bureau of Standards, Circular C 458, 194/.

4. Bear, R. S. — Adv. Protcin Chemistry, 7:69, 1953.

5. Newmann, R. E. — Arch. Biochctn., 24:289, 1949.

6. Trislam, G. R. — Adv. Protcin. Chcniistry, 5: 84, 1994.

7. Randall, J. T., Fraser, R. D. B.. Jackson, S-, Martin, A. V. W. and North, A. C T.

Nature, 169: 1029, 1952.

8. Marks, M. H., Bear, R. S. and Blakc, C. H. — Jour. Exp. Zoo!., 11:55, 1949.

9. Randall, J. T. and Jackson, S. F. — Nature and Stnxturc of Collagen, Buttcrworths

Scientific Publications, London, 1953.

10. Edsall, J. T. — Science, 119 : 302, 1954.

SciELO

50 UMA CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DA ESTRUTURA

ULTRA-FINA E DAS PROPRIEDADES QUÍMICAS DE FIBRILAS

DO TECIDO CONJUNTIVO ANIMAL

11. Randall, J. T., Fraser, R. D. B. and Xorth, A. C. T. — Proc Royal Soc.. B. 141:1, 1953-

12. Pauling. L., and Corey, R. B. — Proc. Nat. Acad. Sciences, 37 : 235, 1951.

13. Astbury, W. T. — Jour. Int. Soc. Leather Chem., 24 :69, 1940.

14. Huggins. M. L. — Jour. Amer. Chem. Soc., 76 : 4045, 1954.

15. Gustavson, K. H. — Adv. Protein Chem., 5:354, 1949.

16. Gross, J. — Ann. Xew York Acad. Sciences, 56:674, 1953.

17. Souza Santos. H. L.. and Souza Santos. P. — Ciência e Cultura, 4:107, 1952.

IS. Schmitt, F. O-, Hall. C. E. and Jakus. M. A. — Jour. Cellular and Comp. Physiol., 20:11,.

1942.

19. Wolpers, C. — Klin. Wochschr., 22:624, 1943.

20. Gross, J. and Schmitt, F. O. — Jour. Exp. Med-, 88:55, 1948.

21. Wolpers. C. — Arch. Path. AnaL Physiol., 312 : 292, 1944.

22. Schmitt. F. O., Hall, C. E.. and Jakus. M. A. — Jour. Appl. Physics, 16:263, 1945.

23. Nutting, G. C and Borasky, R. — Jour. Amer Chem. Ass., 43:96, 1948.

24. Pratt, A. W. and Wyckoff, R. W.G. — Bioch Biophys. Acta, 5:166, 1950.

25. Bear, R. S. — Jour Amer Chem Soc., 64:727, 1942.

26. Bidwell, E., van Heyningen, W. E. and Charlwood, P. A. — Biochem. Jour., 42:140.

1948.

27. Wyckoff, R. W. G. — Electron Microscopy, lntcr Science Publ. Co., 1949.

28. Pieifíer. H. H. — Arch. Exp. Zellforsch. Gewebzucht, 25:92, 1943.

29. Low, B. W. — in Proteins, Acadcmic Press lnc., X. Y., 1 Part A., 1953.

30. Lelli, G. — Jornada Medica, 5:397, 1952.

31. Xageotte, J. and Guyon, L. — Arch. Biologie, 41 :1. 1935.

32. Xoda, H. and Wyckoff, R. W. G. — Biochim. Biophys. Acta, 7:494, 1951.

33. Wyckoff, R. W. G. and Corey, R. B. — Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 34:285, 1936.

34. Highberger. J. H. Hall. C. E. and Schmitt, F. O. — Proc. Xat. Acad. Sei. 37-286

1951.

35. Edwards, G. A.. Souza Santos, H. L., Souza Santos, P. and Sawaya, P. — Ciência c

Cultura, 5:27, 1953.

Table I

INFLUEXCE OF VARIOUS FIXATIVES UPOX TEXDOX OF LABIAL GLAXO

OF SXAKE.

Fixativc .

Xon-fixcd

5% íormalin

Bouin

Zenker

Period (A) .

660

6ó0

Length (A) .

1000-1600

1400-2000

830-2600

1100-1300

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mem. Inst. BuUnUn,

27 : 1 - 39 . 1955 / 6 .

P. SOUZA SANTOS. H. SOUZA SANTOS.

G. A. EDWARDS, A. R. HOGE * P. SAWAYA

Table II

PERIODS AND DIAMETERS OF COLLAGEN FIBRILS FROM SEVERAL

ANIMAIS

(in Angstrom units)

Animal

Snalce

Lizard

Caiman

Toad

Pigcon

Woman

Organ

Externai oblnjuc

d=798

p=630

d=798

p=600

d=798

p=570

Hcart

d=1100

p=600

Temforalis

d=630

p=590

Hyoglossus

d=600

p=600

d=640-900

p=640

Labial gland

tcndon

d=1400-2000

p=660

Vcin

d=800

p=630

Dcícrent canal

d=630

p=600

Re tractor oi

h«nipenis

d=900

p=600

Tail

d=640-1400

p=640

Tongue

d=600

p=590

SciELO

M na. Inst. Batir.Un,

27 : 41 - 50 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL & NICOLINA PUCCA

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL

III. Titulação, por meio de camundongos, das peçonhas de Tityus costatus

(Karsch), Tityus trivittatus Kraepelin, 1898 e Bothriurus bonaricnsis

(Koch), 1842.’

WOLFGAXG BÜCHERL & NICOLINA PUCCA

(Laboratório de Zoologia Médica, Instituto Butantan)

INTRODUÇÃO

Os representantes de Tityus costatus e T. trivittatus possuem aproximada¬

mente as mesmas dimensões das duas espécies perigosas ao homem, Tityus

scrrulatus c T. bahiensis. Sua peçonha sêca é igualmcnte quase tão abundante

quanto a das últimas. Em se tratando, pois, de representantes de um e mesmo

gênero, pareceu-nos interessante investigar a intensidade de ação da peçonha

tias duas primeiras espécies e compará-la com a de T. bahiensis c scrrulatus.

O interesse na elucidação da ação da peçonha de Bothriurus bonariensis

não é menor, pois êste escorpião é muito frequente pelo Brasil afóra, princi-

palmente nos Estados sulinos e na Argentina, no Uruguai e Paraguai.

MORFOLOGIA EXTERNA E HABITAT

O Tityus costatus atinge 75 mm. O colorido do cefalotóracc é castanho

escuro, com "marmorações” mais claras e bordas denegridas. Cauda amarela,

escurecendo para trás; segmento V quase negro; vesícula amarela; estemitos e

pernas amarelados, mancliados de escuro. Mão mancliada nas fêmeas, estreita

c sem lobo’; amarela nos machos, larga e com ‘‘lobo" basilar entre os dedos.

Pentes com 16 dentes nas fêmeas e 17 nos machos.

Habitat: — Serra dos Órgãos e ilha de São Sebastião.

Recebido, para publicação, em 8. III. 1955.

SciELO

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, III

O Tifyus trivittatus, escorpião com 55 a 70 mm de comprimento, apresenta

um cefalotórace amarelado com três faixas longitudinais negras; cauda amarela,

escurecendo para trás; pernas amarelas; pentes com 20 a 22 dentes.

Habitat: — Uruguai, Paraguai, Argentina — Tityus trivittatus confluens

(Borelli, 1899), Brasil-Rio Grande do Sul, Mato Grosso, Goiás — Tityus trivitta¬

tus charreyroni (Vellard, 1932), Minas Gerais e Rio de Janeiro — Tityus

trivittatus dorsoniaculatus (Lutz & Mello, 1922).

O Bothriurus bonaricnsis (Koch), 1842 atinge entre 50 e 55 mm de com¬

primento. É um escorpião preto, brilhante, com fosseta sub-redonda na área

dorsal da vesicula caudal, preta nas fêmeas, amarela ou alaranjada nos machos.

Pentes com 21 a 24 dentes.

Habitat: Uruguai, Paraguai, Bolívia, Argentina, Brasil do Sul e Central

— Bothriurus bonaricnsis araguayac (Vellard, 1934). É o escorpião mais encon-

tradiço no Rio Grande do Sul. Representantes desta espécie foram recebidos

da zona noroeste do Estado de São Paulo e do outro lado da fronteira com

Minas Gerais. O escorpião preto destas últimas regiões foi descrito como

Bothriurus niagalhactisi Mello-Leitão, 1937. Um confronto, porém, de séries

não deixa dúvida de que deve ser incorporado na espécie de B. bonaricnsis.

MÉTODO

A peçonha dos referidos escorpiões era retirada por choque elétrico, sêca e

guardada em vácuo, ao abrigo da luz, à temperatura comum de laboratório.

Um T. trivittatus fornecia, em média, 0,25 mg; um T. costatus, 0,20 mg; e um

Bothriurus bonaricnsis apenas 0,10 mg de peçonha séca. Nas re-extrações, repe¬

tidas de mês em mês, as quantidades diminuiram ainda mais.

No dia da titulação pesavam-se as peçonhas e dissolviam-se três vêzes, por

centrifugação c redissolução do resíduo, em volume determinado de salina com

0,85% de cloreto de sódio.

Para a titulação das glândulas cortavam-se os “telsa” dos respectivos escor¬

piões e armazenavam-se em glicerina neutra, a 3.°C. Os “telsa”, retirados

da glicerina, eram triturados, adicionando-se volume conhecido de salina. Pra¬

ticavam-se, após maceração a frio, 3 centrifugações e redissoluções do resíduo,

sempre em volume certo dc salina.

As soluções-mãis, límpidas com as peçonhas puras, um tanto opalescentes e

turvas com as glândulas totais, como as respectivas diluições, eram rigorosamente

estandartizadas, aquelas em relação ao pêso das peçonhas sécas em determinado

volume de diluição, estas em relação ao número ou fracção de glândula venenífera

por volume certo de veículo.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mem. tn.it Bníintan,

27:4I-50. 1935/6.

WOLFGAXG BCCHERL & MCOLINA PUCCA

Empregavam-se camundongos do mesmo sexo e com pèso de 20 g cada, com

dois gramas de tolerância, oriundos dos biotérios do Butantan, isto é, criados

da mesma estirpe e sob o mesmo ambiente e idêntica alimentação.

As pipetagens e dosagens se executavam com instrumentos rigorosamente

calibrados. O “inoculam” era sempre de 0,5 ml. por animal. As injeções se

daram devagar em uma das veias caudais ou sob a pele da barriga.

O estabelecimento da dose 50letal era executado pelo método de Reed

e Muench, entrando no resultado o cálculo das mortalidades acumuladas e suces¬

sivas de todos os lotes de animais ensaiados.

RESULTADOS

I. Bothriurus bonaricnsis

a) LD 50 da peçonha sêca, por via intravenosa:

Lote

Peçonha <

Camundongos

Acumulação d.

rrsult.

% de

mortalidade

total

VIVO»

mortos

tiro»

mortos

total

o/m

0,050

0.1

16,6

83,2

1.6

100

Fator de diluiçSo: 2

j 76

LO 50 = 0,6 mR ±

b) LD 50 da peçonha sêca, por via subcutânea:

Lote

Peçonha

Camundongos

AcumulaçSo d.

rtsolt.

% de

mortalidade

total

vivos

mortos

vivo»

morto*

total

0.4

Ofi

1.6

100

Fator de diluiçlo: 2

I.D 50 = 2 tr.R ±

SciELO

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO NO BRASIL, IU

c) LD 50 das glândulas totais, por via intravenosa:

Lote

Grándula

Camundongos

Acumulação d. result.

% de mortalidade

veneaiiera

total

vivos

mortos

vivos

morto?

total

1,60

1,40

12£

1,90

57,0

2,70

89,0

3,70

100

Fator de

diluição: 1,39

LD 50 = 1,8 gl ±

d) LD

50 das glândulas totais, por via

subcut

ânea:

Lote

Grándula

Camundongos

Acumulação d. result.

% de mortalidade

v-nenífera

< total

VÍVO*

mortos

vivos

mortos

total

2.7

i 14

3.7

7.2

Fator de diluição : 1,39

LD 50 = 5,85 gl. i

II. Tilyiis coslatus

a) LD 50 da peçonha seca, por via intravenosa:

Lote

Peçonha

Camundongos

Acumulação d.

result.

%de mortalidada

total

vivos

mortos

viros

mortos

total

0,1

0,13

0,17

. 6

14J

0,21

0,28

100

fator de diluição: 1.292

LD 50 = 0.20 mg ±

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

WOLFGAKG BCCHERL i NI COLINA PÜCCA

Mcn. Inst. Butantan,

27:41-50. 1955/6.

b) LD 50 da peçonha sêca, por via subcutânea:

Lote

Peçonha

Camundongos

Acumulação d.

resuh.

•’# de mortalidad *

total

Tiro*

mortos

vivos

mortos

total

0,178

1.000

115

1,120

57,1

1.260

90,0

1,410

100,0

Fator de

dllnlcIo:J,12 !

LD 50= 1, 1 0 m ±

c) LD 50 das glândulas veneniferas, por via intravenosa:

Lote

GUndula

veneniíera

Camundongos

Acumulação d.

resnlt.

% de mortalidade

total

vivos

mortos;

vivos

mortos

total

1,00

1.12

116

1 12

1.41

30,0

1.59

1 10

60,0

1,78

63.1

2.00

93,0

Fator de diluição: 1,12

LD30= 112 gl. ±|

d) LD 50 das glândulas veneniferas, por via subcutânea:

Lote

Glândula

veneniíera

Camundongos

Acumulação d.

rcsult.

% de mortalidade

total

vivos

mortos

vivos

mortos

total

1.00

2.00

4,00

66.6

8.00

100,0

Fator de diluição: 2

LD50 = 3,4gl.±

SciELO

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL. III

III. Tityus trivittatus

a) LR 50 da peçonha sêca, por via intravenosa:

Lote

Peçonha

Camundongos

Acumulação dos results.

rag

total

vivos

mortos

vivos

mortos

total

0.0016

0,0032

0.0064

i4a

0,012

66.6

0,025

100

0.050

100

Fator dc diluição: 2

LI) 50 = 0X14 mg ±

b) LD 50 da peçonha sêca, por via subcutânea:

Lote

Peçonha

Camundongos

Acumulação dos results.

% da mortalidade

total

tívos

mortos

vivos

mortos

total

0.0064

0,0128

0.025

0.050

42.8

.0,10

87,5

0.20

100

0,40

100

Fator de diluiçlo: 2

LD 50 = 0,059 mg ±

COMPORTAMENTO DOS CAMUNDONGOS

A peçonha de Bothriurus bonaricnsis, quer proveniente de extratos glan¬

dulares, quer sob forma pura, parece não ser muito dolorosa. Sua ação sôbre

a sudorese, as glândulas lacrimais e salivares é mínima. A marcha da into¬

xicação é lenta, generalizada, patenteando-se principalmente por aceleração do

ritmo cardiaco, respiração curta, ofegante, intermitente. A morte sobrevém

por asfixia.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Man. Inst. Bnunun, WOLFGAXG BCCHERL 4 NI CO UNA PUCCA 4~

27:41-50. 1955/6.

A eliminação da peçonha parece estar completa depois de 24 horas.

A ação da peçonha de Tilyus coslalus é semelhante à de T. bahiettsis, ainda

que menos intensiva e menos dolorosa. A sudorese, entretanto, é menos acen¬

tuada. O progresso da intoxicação pode ser observado pelo ritmo respiratório

que de normal passa a acelerado, ofegante e intermitente, determinando, nos

casos graves, morte pior asfixia. O restabelecimento dos sobreviventes é completo

entre 16 e 24 horas.

Bem mais enérgica é a ação da peçonha pura de Tityus trizit tatus, igualan¬

do-se à de T. scrrulatus e T. bahiensis. Quando injetada na veia na quantidade

de 0,0008 mg por camundongo, já são nitidos os sintomas de intoxicação, tra¬

duzidos por respiração irregular ou intermitente, com acessos de dispneia, suor

profuso na cabeça toda (menos na nuca, como acontece com as peçonhas de

T. scrrulatus e T. bahiensis), grande excitação e irritabilidade. Os animais,

assentados sôbre as pernas posteriores, com a cabeça muito erguida, esfregam

continuamente, com as pernas anteriores, a região buco-nasal, emitindo gritos

de dõr e reagindo a qualquer distúrbio externo com manifestações exageradas

de pulos e correrias.

Com 0,006 mg êstes sintomas são ainda mais pronunciados; com 0,012 mg

já se verificam mortes por asfixia entre 15 e 48 minutos; cm doses correspon¬

dentes a 0,025 mg os sintomas são ainda mais dramáticos. Primeiro os animais

esfregam desesperadamente o focinho; transpiram no lado inferior do pescoço c

a respiração c ofegante, rápida, irregular, interrompida por ataques dispneicos.

Acessos de furor impelem-nos a correrias e pulos desordenados, seguidos de

prostração. O descontrole nervoso generaliza-se já dentro de 3 minutos. Dai

por diante os animais já não se mantêm sôbre as pernas. Arrastam-se c rolam

do lado, morrendo por asfixia em tômo de 7 minutos após a injeção.

A progessão da intoxicação é um pouco mais lenta, quando a peçonha for

injetada por via subcutânea, embora não difira desta mesma.

Concomitantemente à dõr local parece haver um efeito cxcitatório do sistema

nervoso (central c vegetativo), traduzido por suores, pulos, correrias, respiração

acelerada. Depois sobrevém a fase depressiva (prostração geral, ataques de

dispnéia, cegueira), seguida pela morte por asfixia.

Parece-nos impossível distinguir êstes sintomas dos provocados pela peço¬

nha de T. scrrulatus e T. bahiensis, não somente quanto á intensidade com »

também quanto à progressão.

SciELO

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL. III

COMPARAÇÃO EXTRE A TOXICIDADE DAS PEÇOXHAS ESCORPIOXICAS

DO BRASIL

LD 50 em mg de peçonha sêca por grama de camundongo

Escorpião

intravenosa

subcutàne-

Tityus serrulatus .

0,0003-0,0007

0,0003-0,0012

Tityus bahicnsis .

0,0004-0,004

0,0007-0,009

Tityus trivit tatus .

0,0005

0,0029

Tityus costatus .

0,01

0,05

Bothriurus bonariensis .

0,03

0,1

MÉDIAS, EM MG, DE PEÇOXHAS PURAS, COLHIDAS POR CHOQUE

ELÉTRICO

Escorpião

l.*-3. a extração

6.M5.* extração

Tityus serrulatus .

0,20-0,33

0,055-0,08

Tityus bahicnsis .

0,20-0.23

0,03 -0,098

Tityus trivit tatus .

0,11-0,18

0,07 -0,1

Tityus costatus .

0,08-0,12

0,03 -0,06

Bothriurus bonariensis .

0,02-0,05

0,006-0,01

COXCLUSAO

O escorpião Bothriurus bonariensis não deve ser temido. Sua aguilhoada

nunca será fatal ao homem, nem mesmo poderá determinar intoxicação grave

ou de média gravidade. Ainda que, em picadas repetidas, se esvasiasse o con¬

teúdo total das duas glândulas veneníferas, jamais poderiam resultar acidentes

graves. Xão há, portanto, necessidade de recorrer-se a qualquer tipo de sôro

anti-escorpiônico. Anti-álgicos e sedativos constituem as medicações aconselhá¬

veis, ao lado do esclarecimento de tratar-se de um escorpião dos mais inofensivos.

O Bothriurus tnagalhaensi é por nós considerado como sinônimo de B. bo-

nariensis.

SciELO

11 12 13 14 15

Mffm. Inst. Butantan,

27:41*50. 1955/6.

WOLFGAXG BCCHERL & XICOL1XA PCCCA

O Tilyus coslatus, ao par da raridade, também não é portador de uma

peçonha tão ativa, que sua aguilhoada devesse inspirar cuidados especiais, além

de medicações anti-álgicas.

O Tityus trivittatus, entretanto, parece-nos dotado de uma peçonha de ação

tão enérgica como a de Tilyus bahicnsis e mesmo de T. scrrulalus. Afigura-se-

nos, pois, perfeitamente possível que se verifiquem no homem, especialmente em

crianças de pouco pêso, acidentes tão graves que, por falta de sôro especifico,

clamem pela administração precoce (entre 15 a 30 minutos após o acidente) do

sôro anti-escorpiõnico do Instituto Butantan, feito contra as peçonlias de T. scr-

mlatus e T. bahicnsis. Por pertencerem os representantes das três espécies ao

mesmo género Tilyus é de supôr-se que o mencionado sôro diminua sensivelmente

a gravidade da intoxicação quando administrado para fins curativos.

Felizmente é o T. trhittatus um escorpião raro, ocorrendo apenas em zonas

bem limitadas, geralmente montanhosas, havendo, portanto, bem poucas possi¬

bilidades de um contato direto com o homem.

SUMARIO

As peçonhas sêcas, obtidas por excitação elétrica, e os extratos glandulares

dos escorpiões brasileiros, Bothriurus bonaríensis (B. viagalhacnsi parece-nos

sinônimo dêste), Tityus coslatus c T. trivittatus, foram tituladas cm camundon¬

gos, estabelecendo as quantidades médias mortais (I.D 50^0), tanto por via intra¬

venosa como subcutânea. Apenas a peçonha de T. Irivillalus tem-se revelado

quase tão ativa quanto as de T. scrrulalus e T. bahicnsis; poderá mesmo ofe¬

recer um certo perigo ao homem, diminuído felizmente pela raridade deste

aracnídeo, perigo éste a ser combatido, cm casos graves, além de medicações

anti-álgicas e sedativas, pelo sôro anti-escorpiònico do Instituto Butantan.

Em tabelas comparativas foram fornecidas as médias cm mg de peçonha

sêca, obtida por clioque elétrico bem como as DL 50 para camundongos. Des-

creveu-se também a sintomatologia da intoxicação dos camundongos.

SUMMARY

The dried venoms, obtained from the three Brazilian scorpion spccies,

Bothriurus bonaríensis (B. viagalhacnsi seems to be synonymic), Tityus coslatus

and T. trivittatus, by the "electric shock method”, were tested on mice. The LD

50^ó is established and the results are compared with the T. scrrulalus and

T. bahicnsis venoms.

SciELO

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL. III

Only the venom of the rarer species, Tityus triz-it tatus, seems to be as-

active as the serrulatus or bahiensis venoms, so as to call, in severe cases,

for serum therapy with the anti-scorpionic serum from Butantan.

The amounts of dry venoms from these Brazilian scorpions are given and

the symptomatology of the intoxication of mice is also described.

ZUSAMMENFASSUNG

Die durch elektrische Reizung periodisch erhaltenen und im Vakuum ge-

trockneten Reingifte der drei brasilianischen Skorpionarten, BotJiriurus botta-

riensis (mit dem wir die Art B. magalhaensi ais synonym ansehen), Tityus

costatus und Tityus trivittatis wurden weissen Mãusen intravenõs und subcutan

eingespritzt und die ieweiligen 50— igen tõdlichen Dosen gewichtlich

festgelegt.

Die Ergebnisse wurden mit den von uns schon ermittelten mittleren tõdlichen

Dosen der Reingifte von Tityus serrulatus und T, bahiensis verglichen und

festgestellt, dass eigentlich nur der, zum Glücke, sehr seltene T. trivittatus ein

hochwirksames Gift cnthült. Schwere. durch diese Art, hervorgerufene \*cr-

giftungsfãlle müssen, besoncers bei Kleinkindern, ausser der Behandlung mit

Analgetika und Sedativa, mit dem Anti-Skorpionserum des Institutes Butantan

recht frühzeitig (innerhalb 15-30 Minuten spãtestens) behandelt werden.

Die Mittelwert der Trockengiftmengen pro Extraktion wurden ver-

gleichend dargestelit. wie auch die Wirkungsweise der verschiedenen Gifte auf

die weissen Máuse.

BIBLIOGRAFIA

BücherI, W. — Mem. Inst. Butantan, S. Paulo, 25(1): 53-82; 1953 e 83-108; 1953

Bücherl, W. — Arzneimittel-Forschung, 2 : 68-72; 1955.

SciELO

11 12 13 14

6 17

"Mrm. Inst. Baurtan,

•27:51*66. 1955/6.

JOSÉ M. RUIZ 4 ERMEXGARDA COELHO

NEMATOIDES ( Oxyuroidea ) PARASITOS DE DIPLÓPODOS DA

ILHA DA QUEIMADA GRANDE, SAO PAULO, BRASIL

JOSÉ M. RUIZ & ERMEXGARDA COELHO

(Secção dc Parasitologia, Instituto Butantan)

Os nematóides referidos na presente nota provêm de Neptvnobolus hogci

Schubart, 1949, por nós identificados.

Cerca de 40 exemplares de diplópodos foram examinados, lógo após seu

recebimento, sendo constante a infestação por três espécies de nematóides, con¬

forme passamos a descrever.

O material diplopodológico foi capturado pelo Sr. Alphonse R. Hoge

<m Setembro de 1953. Os nematóides foram estudados vivos c fixados cm

formol-acético.

DESCRIÇÃO

Aorurus agilis insularis var. n.

Fêmeas — Corpo cilíndrico, atenuando-se para a extremidade anterior e

bruscamente truncado ao nível da região anal. Cauda longa c muito delgada.

Cutícula com estrias transversais, largas. Lábios inconspícuos. Vestibulo rudi¬

mentar. Aberturas anfidiais bem visíveis.

Esôfago relativamente curto, diferenciado em 3 porções bem distintas: uma

porção anterior ou corpus, com base dilatada c arredondada, piriforme, uma

porção médÍ3 ou istmo, estreita, ligeiramente arredondada em seu contorno

externo e uma porção posterior representada pelo bulbo esofagiano, globóide,

sub-piriforme, contendo um orgão triturador.

Intestino com base estreita, alargando-se logo a seguir, formando uma dila¬

tação característica ao nível do poro excretor. A partir desse ponto estreita-se

Recebido, para publicação, em 2S.III.1955.

SciELO

XEMATÓIDES ( OXYCROWEA) PARASITOS DE DIPLÓPODOS DA

ILHA DA QUEIMADA GRAXDE, SAO PAULO, BRASIL

progressivamente para a região posterior, terminando no ânus, na região trun¬

cada do corpo, sendo essa região envolta por várias células glandulares.

Anel nervoso situado um pouco à frente da região média do corpus.

Aparelho genital com a disposição semelhante ao tipo anfidelfo, porém, o

ovijetor situa-se posteriormente e a vulva é contigua ao ânus (anfidelfia atípica).

O ovijetor tem em seu conjunto a forma de Y cuja base é representada pela

vagina que se diferencia do conjunto, por ser mais dilatada e de aspecto musculoso.

Este conjunto é ventral ao intestino, assim como a vulva é ventral em relação

ao ânus. O útero contém um número relativamente grande de ovos que não

contêm ainda larvas diferenciadas. Ovos elipsóides, de casca delgada e trans¬

parente.

Machos — não observados.

Observação — Apesar de terem sido examinados cêrca de 40 exemplares de

N. hogei, todos infestados por esta espécie, não foi observada a presença de

machos.

DISCUSSÃO

Os dados dimensionais do nosso material, concordam com os de A. agilis

segundo a descrição de Christie (1931-1938), exceto em dois pontos:

1 — posição do poro excretor

2 — comprimento da vagina

Em A. agilis, o poro excretor está situado ao nível da base do esôfago a

cêrca de 0,22mm. da extremidade anterior. Em nosso material o poro excretor

situa-se à distância média de 0,349mm. (material recentemente morto) e 0,292mm.

(material conservado), da extremidade anterior, ou seja ao nível da dilatação do

intestino. Essa dilatação máxima dá-se num nível mais posterior do que a

observada na descrição e desenho de Christie.

Quanto ao comprimento da vagina, diz Christie: “Tlie vagin extends ante-

riad about one-third the distance from the anus to the head, where it branches

to form the two uteri”. Em nosso material a vagina tem um comprimento

total de cêrca de 0,215 a 0,370mm. (em média 0,271 mm) ou seja cêrca de

1/5,7 do comprimento que vai do anus â extremidade anterior. A porção mus¬

culosa, ao contrário, é relativamente mais longa em nosso material, pois mede

de 0,109 a 0,126mm. (em média 0,114mm), enquanto que Christie dá a me¬

dida de 0,09mm.

Dadas essas diferenças e considerando ainda a distribuição geográfica da

espécie, julgamos estar em face de uma variedade para a qual propomos o

nome de insularis var. n.

7 SCÍEL0) 2.1 12 13 14 15 16

Mm- Inst. Butantan,

27:51-66. 1955/6.

JOSÉ M. RUIZ & ERMENCARDA COELHO

Aorurus agi! is insularis var. n.

MEDIDAS TOMADAS DE EXEMPLARES EXAMINADOS ENTRE LAMINA E

LAMINULA

exemplares receatemeate mortos por

formól — acétieo

exemplares coosenrados

(fêmeas)

médias

média.

Comprimento total

3,15

2,94

346

340

344

3.17

2,49

247

3.70

245

2.47

246

Largura na regiio do

bulbo QJ 26

0,126

0433

0,126

0.140

0,130

0,126

0.140

aiio

0.126

0,132

Largura na regtio

media

«467

CL2S1

0458

0451

0496

0452

0467

0481

0423

0425

0453

0470

^ estibulo

0,009

0,012

0/112

0,012

aoi2

0,011

0.015

0,012

0412

0,009

aon

0,014

Corpos comprimento

0.13S

0.133

0,138

0435

0.119

ai»

0,122

ati9

0.119

0,120

Corpus largura

0,065

0.064

0,084

0,064

0.065

0.076

0478

0.075

0464

0,069

0,072

0,076

Ktmo comprimento

o/ns

0/131

0/J2S

0,031

0,028

0,029

0.025

0,021

0,025

0.021

0421

0,023

istmo largura

0,034

0,031

0.031

aosi

0431

0432

0.02S

0438

0.028

0428

0,028

0.028

Bulbo comprimento

0.103

0,106

0.103

0,104

0457

0.094

aioo

0494

0.097

a094

Bulbo largura

0,097

0.103

0.100

0,094

0,100

0.099

0467

0.067

0,097

0,078

0457

0467

Esófago compr. loul 0,269

0.275

0469

0472

0469

0471

0431

0434

0447

0434

0437

a237

Pagina comprimento

—

0.109

0.12S

0,114

0477

0452

0470

0440

0415

0471

Cauda (ânus à extr. post./ 1,21

1.02

1.18

142

1.19

147

148

143

1.05

1,04

0415

1.02

Distância do poro ex-

cretor á extr. ant. —

0,351

0.308

0457

0453

0.349

0408

0369

0.320

—

0471

0.292

0,064

0/64

0/164

0.053

0.OS7

0453

.09

0.086

0.063

0484

0,053

a094

*,050

ao9i

0.078

o&o

0478

D ros

0487

o.olv;

0.067

oás

0.086

0.056

0.064

0,054

0.061

0,067

<U>54

0491

04&

0,087

0.Ò51

0.0S7

0.056

aosi

ao»

0.084

0.053

0,087

0,0^3

0,084

0.067

0,053

0.084

0,056

aos?

0.Ó56

0457

0,053

0467

0.Í53

aosi

0.050

*' , ° l exemplares examinado* imediatamente apôs a morte pelo formól — acético a vagin^

foi medida só na extensa 3 de soa parte muscular.

SciELO

XEMATÓIDES IOXYUROIDSA > PARASITOS DE DIPLÓPODOS DA

ILHA DA QUEIMADA GRANDE, SAO PAULO, BRASIL

Thelastoma bulhõesi dollfusi var. n.

DESCRIÇÃO

Fêmeas — Corpo cilíndrico, atenuado em ambas as extremidades. Cauda

longa, extremamente afilada. Cutícula estriada transversalmente. Bôca com 3

lábios ligeiramente salientes. Vestíbulo curto.

Esôfago relativamente longo, com cêrca de um terço do comprimento do

corpo (sem a cauda) ; consta de um corpus subcilíndrico, longo, regular, um

istmo curto perfeitamente separado do corpus, porém em continuação com o

bulbo esofagiano, de modo a dar a êste um aspecto piriforme no conjunto e um

bulbo esofagiano. amplo, com uma cavidade larga contendo o orgão mastigador,

<juitinizado.

Intestino muito largo no seu inicio, separado do esôfago por uma válvula

esófago-intestinal, trilobada; tem trajeto quase retilíneo afinando-se progres¬

sivamente à medida que se dirige para a extremidade posterior. Abertura anal

próxima da base da porção afilada da cauda e circundada por células glandulares.

Anel nervoso situado no terço médio do corpus esofagiano.

Poro excretor situado um pouco à frente do istmo esofagiano, do mesmo

lado que o ânus.

Aparelho genital anfidelfo, as fêmeas mais idosas contendo um grande

número de ovos. Ovijetor dirigido para trás. Vulva pouco saliente situada

mais ou menos no meio do comprimento total do corpo (inclusive cauda).

Ovos intra-uterinos não apresentando larva bem desenvolvida; não elipsoides, de

casca delgada e transparente.

Machos — não observados.

Observações — Foram examinados cêrca de 40 exemplares de .V. hogei,

todos infestados por esta espécie, apesar de que jamais foram encontrados os

machos.

DISCUSSÃO

T. bulhõesi — foi descrito originalmente por Magalhães, 1900, de Pe-

riplancla americana Fabricius, do Rio de Janeiro. Chitwood (1953) redes-

creveu a espécie que encontrou no mesmo hospedeiro nos Estados Unidos.

Dollfus identificou a esta espécie um exemplar fêmeo encontrado no intes¬

tino de diplópodo, Gymnostrcptus sf>., procedente de Sta. Adélia, Est. de São

Paulo, Brasil.

As descrições, medidas e figuras de Magalhães e Chitwood estão de acordo,

com pequenas variações compatíveis com a mesma espécie.

As dimensões e figuras apresentadas por Dollfus, ao contrário, não con-

Mcm. Inst. Bntanun, JOSÉ M. RUIZ & ERMENGARDA COELHO ;;

.27:51*66. 1955/6. •

cordam plenamente em certos pontos, como por exemplo, o comprimento do

esôfago e a posição do poro escretor. Segundo este autor o poro excretor

está situado a 0,415mm da extremidade anterior, ao passo que Magalhães e

Chitwood dão esta distância como 0,45 e 0,43mm respectivamente. A diferença

absoluta dessas dimensões não é grande, mas quando comparadas com o compri¬

mento do corpus esoíagiano ou o comprimento total do esófago, vamos ter o

poro excretor numa situação relativa mais alta, o que aliás aparece na figura

do autor. Quanto ao comprimento total do esôfago, Dollíus cometeu um erro

expresso em sua tabela de medidas, onde assinala 0,535mm. Somando-se os

comprimentos do corpus (0,505), do istmo (0,030) e do bullx) (0,110) teremos

0,645mm, o que aliás corresponde ao desenho comparado com a respectiva escala.

Esse comprimento não pode corresponder à espécie de Magalhães.

Há outras diferenças, como pôr exemplo, o menor tamanho dos ovos, que

permite considerar o especimen de Dollíus como uma espécie próxima ou

no mínimo uma variedade de T. bulhõesi.

Tivemos em mãos abudante material de T. bulhões'; de baratas de São

Paulo (Capital) e a nossa observação corresponde exatamente à descrição apre¬

sentada por Magalhães. Ao mesmo tempo trabalhamos com o material de

diplópodos da Ilha da Queimada Grande, objeto do presente trabalho. Tivemos

pois a oportunidade de compará-los em igualdade de condições c verificámos

que são fornias distintas embora muito próximas.

Nossos exemplares procedentes de diplópodos diferem dos de baratas pelos

seguintes caracteres:

1 — média do comprimento do esôfago (0,520 e 0.447mm respectivamente) ;

2 — situação do poro excretor que aparece sempre acima do istmo eso-

fagiano nos primeiros ao passo que, nos outros aparece invariavelmente ao nivel

do bulbo esofagiano, como o representou Magalhães, embora na figura de

Chitwood apareça numa posição intermediária;

3 — número de anéis cuticulares. Magalhães descreve pormenorizadamente

este característico, não mencionado pelos demais, e que está perfeitamente de

acórdo com as nossas observações no material de Periplaneta amnicana. Assim

foram encontrados da extremidade anterior até o poro excretor: 41 a 45 (48 a

52 seg. Magalhães); até a vulva: 142 a 153 (120 seg. Magalhães); e até

o ânus: 189 a 201 (ISO a 190 seg. Magalhães).

Xo material de diplópodo o número de anéis é sensivelmente menor: 42 a 47,

93 a 112 e 117 a 136 respectivamente. Em vista de tais diferenças acrescidas

ainda da diversidade de hospedeiro julgamos acertado considerar as formas

encontradas em A cptunobolus hogei Schubart, como uma variedade de T. bulhõesi

á qual denominamos Thclastcuia bulhõesi dolifusi var n. e que deve corresponder

à forma examinada por Dollíus de Gymnostrcptus sp. de Sta. Adélia, Estado

de São Paulo.

SciELO

■'5

Mera. Inst. BnUiUa,

27:51-66. 1955/6.

JOSÉ M. RUIZ & ERMENGARDA COELHO

TABELA COMPARATIVA DAS DIMENSÕES DE THELASTOMA BULHOESI

DADA PELOS DIVERSOS AUTORES

Dimensões em mm

(fêmeas)

T. Bulhõesi

Majralhles

1900

T. bulhõesi

Chitwood

1933

T. bulhõesi

Dollfas

1962

T. bulhòtsi

P. americana

de S. Paulo

T. bulhõesi

dollfusi

*ar. n.

Comprimento toUl

2.71

(l\KW9)

2,28-264

2.78

231-2,63

134-3,15

Largura

0.30

(0,23 038)

0JSS-O373

0-253

0,197-0381

0,154-0.267

Número de aneis outi-

culares (total)

ISO * 190

—

1S9 a 201

117 a 136

Esôfago — comprimen¬

to total

0.463-0,594

0,645

0,413-0,475

0.413-0,709

Corpus

0,36-0,40

0.3294)380

0505

0302-0357

0396-0,586

Bulbo

—

0.08041.095

0,110

0,092-0,117

O.OSO-0,104

Distância do poro ex-

cretor k extr. ant.

0,43

0.430

0,415

0,431 0,481

0308-0,542

Cauda (ânus â extremi¬

dade posteriori

0.7S-0.81

0,720-0320

0320

0344 0,965

0,605-0,971

Ovos |

0.080-0,085

0.060-0,067

0.070-0,080

0,050-0,072

0.066-0 069

0,052-0,055

0,085-0,097

0,060-0,075

0.0694)390

0,05^0,066

Dudckcnia instdaris sp. n.

DESCRIÇÃO

Corpo cilíndrico, alongado; extremidade anterior larga e arredondada, extre¬

midade posterior atenuada, terminando em pronta aguda.

Cutícula lisa, exceto ao nível da região esofagiana, onde se apresenta

finamente espinhosa ou pilosa. Lábios ligeiramente salientes. Vcstibulo ru¬

dimentar.

Esôfago relativamente curto, diferenciado em duas porções : uma anterior

larga com uma ligeira chanfradura no primeiro terço e outra posterior ou

bulbo, mais dilatada que a região anterior, contendo um aparelho mastigador.

Intestino largo, retilíneo, com a porção terminal diferenciada num reto

sub-piriforme, terminando num anus ventral. Cauda muito curta e afilada em

ambos os sexos.

Aparelho genital feminino tipicamente anfidelfo. Ovijetor a princípio diri¬

gido para a frente e a seguir recurvando-se para trás. Vagina diferenciada,

musculosa. Poro genital, ventral, situado mais ou menos na região equatorial.

Útero contendo número relativamente grande de ovos, sem larva diferenciada.

Ovos elipsóides, de casca transparente e delgada.

Aparelho genital masculino, simples, constando de um testículo, recurvado

cm N, situado na metade posterior do corpo, seguido de uma constrição mus-

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

-- 0 XEMATÓIDES '( OXYUROIDEA ) PARASITOS DE DIPLÓPODOS DA

ILHA DA QUEIMADA GRANDE. SAO PAULO. BRASIL

ciliosa e de uma porção dilatada repleta de espermatozóides (vesícula seminal?),

à qual segue-se o canal deferente, não tendo sido observada diferenciação num

dueto ajaculador. Espiados sub-iguais, relativamente curtos, de extremidades

arredondadas, ligeiramente recurvados. A extremidade posterior do macho apre¬

senta asas caudais pouco desenvolvidas.

Papilas caudais em número de 9 pares, sendo 4 pares preanais, 1 par adanal

e 4 pares postanais. As papilas preanais são ben desenvolvidas, estando o 3.°

e 4.° pares situados liem à frente do nível da base dos espículos. O l.° e 2.°

pares situam-se ao nivel da zona espicular. As papilas postananis se dispõem

em fileiras convergentes, dando ao conjunto c aspecto de um V quando vistas

de face (Fig. 11 e 12).

Dudckalia insiilaris sp. n.

MEDIDAS TOMADAS DE EXEMPLARES CONSERVADOS E EXAMINADOS

ENTRE LAMINA E LAMlNULA

Dimensões em mm

(macho)

mfdias

Comprimento total

media

2.81

3.89

2.94

3.47

3.02

.3,34

4.20

3.42

2.49

3.28

329

Largura na regiSo media 0,168

0,225

0.154

0,197

0225

0.211

0.183

0,197

0.1S7

Corpu* comprimento

0.172

0,123

0.135

0.172

0.154

0.160

0.123

0.172

0.154

Corpus largura

0.0S6

0,092

0,080

0,092

0.104

0,092

0,098

0.092

0298

0.092

Dnlbo comprimento

0.11

0.0S6

0,086

0.11

0.104

0,092

0.092

0,098

0.086

0.104

0,096

Bulbo largura

0.123

0.129

0.117

0,129

0,123

0,129

0,135

0,129

0.117

0.135

0J27

Fsõfago comprimento

total

0.2S3

0,209

0.202

0.2S3

0.277

0246

0252

0.259

0,213

0277

0250

Cauda tánus à extr.

poste noi)

0,113

0.141

0.125

0,141

0.109

0.131

0.128

0.119

0.109

0.122

Fspiculos comprimento

0.191

0,229

0,191

0,226

0,213

0248

0.226

0213

0244

0.194

0217

Distância do anel ner¬

voso ã jxtr. anterior

0.053

0.065

0,043

0.056

0.053

0,065

0.072

0.062

0.056

0.065

0,069

SciELO) ^ 12

15 16

Mem. Inst. Butantan,

27:51-66. 1955/6.

JOSÉ II. RUIZ & ERMEXGARDA COELHO

Dudckcnia iiisularis sp. n.

MEDIDAS TOMADAS DE EXEMPLARES CONSERVADOS E EXAMINADOS

ENTRE LAMINA E LAMINULA

Dimensões em mm

(fêmeas)

medias

Comprimento total

3,70

4,16

4,18

440

546

3.73

4.10

4-60

441

3.15

4,19

Largura na região tia

vulva

0.197

0,239

0.197

0453

0495

0,168

0411

0,168

0,197

0411

0412

Corpus comprimento

0,141

0.14S

0,154

0.178

0.191

0.154

0.135

0.165

0.172

0,161

Corpus largura

0,117

0.111

0.129

0,148

0,135

0.148

0.141

0,129

0.116

0,104

0.127

Bulbo comprimento

0,099

0.111

0.086

0,086

0.111

0.074

0,080

0.104

0,092

0,104

0092

Bulbo largura

0.135

0,160

0,123

0.141

0,141

0,117

0.135

0,154

0,104

0,135

0.134

Esôfago comprimento

total 0,240

0.259

0.240

0465

0402

0428

0434

0.240

0477

0427

0461

Vagina

0,675

02.20

0.675

0480

0,774

0444

0.633

0,704

0,732

0.492

0.643

Distância entre anus

vulva

1.63

1.67

144

243

2.46

1.60

1.97

2,05

241

1,60

1.94

Cauda (Anus a extr.

posterior)

0,163

0.197

0411

0,197

0,163

0.197

0.166

0,168

0425

0.117

: 0.192

Distância do anel ner»

voso ã extr. anterior -

0.062

0.069

0,009

0,075

0,062

0.047

0,075

0,062

0.065

0,094

0,065

0,097

0,072

—

0.061

0.065

0.097

0/175

0.094

0,069

0.C97

0,075

- 1

0.103

o,oVs

0.067

0.072

Ovos

0.097

0,069

0.094

0,069

0.067

o.on

0.067

o,un

0,100

1 .1

0.094

0.078

"x"

0.067

0,072

0,078

0,075

0.094

0,069

0.103

o/n

—

0/164

0.065

0,067

0/í69

0.091

0.069

0.100

0.07*4

—

0.094

0.078

0.094

o.on

-SciELO

Mem. Inst. Buliníir,

J7:5:-€6. 1955/6.

JOSÉ M. RUIZ & ERMXXGARDA COELHO

RESUMO

São descritas Aorurus agilis iiisularis var. n., Thclastoma bulhõcsi dollfusi

A-ar. n. e Dttdekenia insularis sp. n., parasitas intestinais de Xcptunobolus hogei

Schubart ( Diplopoda ) da Ilha da Queimada Grande, São Paulo, Brasil.

SUMMARY

Aorurus agilis insularis var. n., Thclastoma bulhõcsi dollfusi var. n. and

Dudckcnia insularis sp. n., intestinal parasites of Xcptunobolus hogei Schubart

(Diplopoda ), from Ilha da Queimada Grande. São Paulo, Brasil, are described

in this paper.

BIBLIOGRAFIA

Artigas, P. T. — 1926 — Nematoides de invertebrados. Boi. Biológico 26: 97-110.

Artigas, P. T. — 1929 — Systematica dos nematoideos dos arthropodes — Tese de

doutoramento — 113 pp. S. Paulo.

Artigas, P. T. — 1930 — Xcmatoides dos gêneros Rhigoncma Cobb 1898 e Dudckcnia, n. g.

(Xematoda Rhigonemidae n. n.). Mem. Inst. O Cru: 24 (1) 19-30.

Chhwood, B. G. — 1932 — A synopsis of the nematodes parasitic in insccts of thc family

Blathidae Zeit. f. Parasit.S (1): 14-50.

Chitwood, B. G. and Chitwood, M. B. — 1933 — Xcmatodcs parasitic in Philippinc

cockroachcs Phãi p. J. Sei. 52(4): 381-392.

■Christie, J. R. — 1931 — Some netnic parasites (Oxyuridac) of Coleoptcrous larvac.

/. Agric. Res. Ilash. 42(8): 463-482.

‘Christie. J. R. — 1938 — A rcdcscription of Thclastoma robustum Leidy with comments

on othcr specics of the nematode family Thelostomatidae. Proc. Hclm. Soc.

IVash. 5(2) 65-67.

Dollfus, R. Ph. — 1952 — Quclques Oxyuroidac de Myriapodes. Ann. Parasilologic H.

e Amp. 27(1-3) : 143-236.

Magalhães, P. S. — 1900 — Xotes d’hclminthologie brèsilicnnc. 10 Matcriaux pour

servir à 1'histoirc de la flore et de la íaune parasitaire de la Periplancta ameri¬

cana Fabr. Une novelle espéce d’ oxyuris: O. Bulhõcsi. Arch. Paras. Paris.

3(1): 34-69.

Sanchcs, A. S. — 1947 — Xcmatodes parasitos intcstinalcs de los artropodos cm Espana.

Rcv. Ibérica dc Paras. 7(2): 279-332.

Shubart, O. — 1948 — Os Diplopoda de algumas ilhas do litoral Paulista. Me n. Inst.

Butantan. 21: 203-254.

Shwcnck, J. — 1926 — Fauna parasitologica dos blattidcos do Brasil. Scienia Médico.

9 : 491-504.

Travassos, L. — 1929 — Contribuição preliminar à systematica dos nematodeos dos

arthropodos. Mem. Inst. O. Crus Supl. pag. 18-25.

Walton, A. C. — 1927 — A Revision of the Xcmatodes of the Leidy Collections. The

Acad. Xat. Sei. Philadelphic. 79 : 49-161.

■SciELO

0 11 12 13 14 15 16

Man. Inst. Batnntan,

27:51^6. 1V55/6.

JOSÉ M. RUIZ A ERMENGARDA COELHO

Prancha, 1

Figs. 1, 4, 6, — Thclastoma bulhõtsi var. düllfusi (fêmea) 1, pormenor da região

anterior — 4, pormenor da região vulvar — 6, região posterior.

Figs. 2, 3, 5 — Aoriirus atjilis var. insularis (fcmea) 2, região posterior — 3.

total — 5. região anterior. Desenhos em câmara clara.

*'A

XEMATÓIDES ( OXYUROWSA ) PARASITOS DE DIPLÓPODOS DA

ILHA DA QUEIMADA GRANDE, SAO PAULO, BRASIL

Prancha, 2

Figs. 7 a 9. — Dudckcnia insularis sp. n. (fêmea). 7 — total

(2 partes) — 8 pormenor da região anterior — 9, pormenor da região

vulvar. Desenhos em câmara clara.

SciELO, ^

15 16

.Man. I&st. BoUz.tan,

1955/6.

JOSÉ M. RUIZ & ER.MEXGARDA COELHO

Prancha, 3

Figs. 10 a 13, — Dndekcnia insularis sp. n. (macho). 10 — total

— 11, pormenor da região caudal, vista lateral. — 12, pormenor da

região caudal, susta ventral, não repiesentado o último par de pápilas.

— 13, pormenor da região anterior. Desenhos em câmara dara.

XEMATÓIDES (i OXYUROWEA ) PARASITO? DE DIPLÓPODOS D\

ILHA DA QUEIMADA GRAXDE, SAO PAULO. BRASIL

Prancha, 4

Fig. 14, — T. bulhõesi var. insutaris, vista total de fêmea desenvolvida.

Fig. 15, — A. ogilis var. insutaris, visita total da fêmea.

Fig. 16, — T. bulhõesi var. insutaris, vista total da fêmea pouco desenvolvida. Desenhos

em câmara clara

Mtrn. Inst. Batantan,

37:67-72. 1955/6.

A. R. IIOGE

UMA XO VA ESPÉCIE DE MICRURUS (SERP. ELAP.) DO BRASIL

A. R. HOGE

(laboratório de OfioloRia. Instituto Butantan)

Recebemos em diferentes épocas, exemplares de Alicntrus que nos cha¬

maram a atenção pelo seu colorido e desenho diferentes. Depois de examinarmos

os exemplares registrados na coleção do Instituto Butantan como froiilalis.

encontramos no meio déstes, dois especimens com as mesmas características

(Xo. 4802 e 6124). O número de exemplares que dispomos é de nove (9), nú¬

mero êste que achamos suficiente para elaborar uma diagnose.

Micrurus tricolor nov. sp.

Material: Tipo X.° 16290, & procedente de Garandaznl*, remetido por

Odilon Lemos Alves, em 25/2/1955.

Paratipos: X.° 14297, 9, e X.° 14298 4, procedentes de Guia I-ojxts*,

remetidos por João Pedro da Silva, em 25/9/1952.

X.° 14299, 9 . procedentes de Taunay*, remetido jielo Departamento Flo¬

resta!, em 25/9/1952.

X.° 14223, 9, e 14253, & , procedentes de Taunay*, remetidos respectiva¬

mente em 27/7/1952 e 12/9/1952.

X.° 14567, 6, procedente de Taunay*, remetido por Otávio Quirino, em

5/11/1952.

N\° 4802, 9, procedente de Barranco Branco, remetido por Álvaro Garcia,

•em 20/7/1927.

X.° 6124, 9, procedente de Taunay*, remetido por Cândido Pires em

17/7/1931.

Diagnose: uma espécie de Micrurus com aneis pretos dispostos em triadas

(8 a 10) no corpo e 1 + 1/3 na cauda; o primeiro anel da l. a triada é separado

das parietais por 7 a 9 escamas vertebrais; o anel mediano das triadas é separado

dos laterais por aneis brancos; 7 infralabiais. o primeiro par em contacto por

detrás da sinfisial; 7 (3 e 4) supralabiais; ôlho pequeno, cêrca de 1 ,7 menor

* Localidades situadas no Estado de Mato Grosso, Brasil.

Recebido, para publicação, em 4.IV.1955.

■SciELO

0 11 12 13 14 15 16

UMA NOVA ESPÉCIE DE ÜICRCRVS (SERP. ELAP.i DO BRASIL

do que a sua distância até a boca; a cabeça preta até as parietais inclusive;,

ventrais 218 a 231, sendo 224 a 229 nos <S ê e 218 a 231 nas 2 2 ; anal

dividida; subcaudais duplas 25 a 30 nos & & e 21 a 29 nas 2 2 ; dentes pala¬

tinos 7; dentes pterigoides 4.

Descrição do tipo : focinho arredondado, levemente projetado para frente;

rostral mais larga do que alta, visível de cima; intemasais mais curtas do que

largas, muito menores do que as preírontais, que são tão largas quanto longas;

frontal mais longa do que larga, mais curta do que as parietais; parietais mais

longas do que sua distância das intemasais; nasal dividida, a posterior em

contacto com a preocular; 1 preocular; 2 postoculares, sendo a inferior menor;

temporais 1 + 1; ólho pequeno, cêrca de 1,7 vezes menor do que sua distância

da boca; 7 supralabiais (3 e 4), 6. a maior e 7. a bem desenvolvida apenas ligei¬

ramente mais baixa do que a 6 a , (Fig. 2); 7 infralabiais (4. a maior) ; o-

primeiro par de infralabiais em contacto por detrás da sinfisial; as quatro-

primeiras infralabiais em contacto com a mentual anterior, que é mais curta do

que a posterior; 224 ventrais; anal dividida; 29 subcaudais duplas.

Colorido e desenho: côr de fundo vermelha com 10 triadas pretas no corpo-

e 1+1/3 na cauda; o anel mediano de cada triada é maior do que os externos

e separado destes por um anel branco de cada lado. Os aneis brancos das duas

primeiras triadas são imaculados enquanto os outros têm algumas escamas dor¬

sais com uma manchinha preta na ponta; os espaços vermelhos são menores do-

que as triadas e têm as pontas das escamas pretas. O primeiro anel da pri¬

meira triada começa na altura da 9. a + 1/J4 escama vertebral. A cabeça (Fig. 3)

é preta em cima até os parietais inclusive; as suturas das placas cefálics são

marginadas de branco; as 5 primeiras supralabiais são pretas com algumas

margens brancas, a 6. a e a 7. a são vermelhas com algumas manchas pretas; a

sinfisial e algumas infralabiais são manchadas de preto (fig. 6).

Variações: em todos os exemplares o n.° de triadas na cauda é invariavel¬

mente 1+1/3, a única variação no colorido consiste me maior ou menor número

de pontas pretas nas escamas dos anéis brancos. As outras variações estão apre¬

sentadas na tabela I.

Tab. I

K°. d* ColeçSo

14297 9

1429S J

14299 Ç

14233 J

14567 S

14223 Ç

6124 Ç

4S02 9

Tipo

16290

Triadas

• 0 |

9 1

■ 0

. Ventrais

226

228

233

229

224 f |

233

218

220

Subcandais

22 |

n*. de vertebrais

até o 1° anel

9-f 12

Mem. Inst. Batantan.

27:67-72. 1955/6.

A. R. HOGE

(t*

Comparações'. Micrurus tricolor é a mais próxima de Micrurus frontalis

frontalis (D. B. et D.) porém diferente desta e das outras subespécies de

frontalis pela posição do primeiro anel da l. a triada, que é separado das parie¬

tais por 7 a 9 escamas vertebrais enquanto em frontalis se observa somente

l. a a 3 escamas entre as parietais e o primeiro anel preto; pela presença de aneis.

brancos (Fig. 1 e 4) ; além disto o primeiro anel da primeira triada é sempre

mais estreito em frontalis. (fig. 5).

Dentição: Micrurus tricolor tem 7 dentes palatinos e 4 pterigoides ao invés,

de 10 e 3 respectivamente em M. frontalis.*

ABSTRACT

Description of a new species of Micrurus, Micrurus tricolor nov. sp., from.

State Mato Grosso, Brazil.

Diagnosis: a coral snake with 8-10 triads on the body and 1+1/3 on the tail;

the median ring of each triad separated from the outer by white rings; head

black, parietais inclusive; the first triad separated from the parietais by 7-9 1

vertebral scales; 7 lower-labials the first in contact whith his fellow behind

the symphysial; 7 (3-4) upper-labials ; eye minute, his distance from the border

of the mouth 1,7 x his diameter; ventrals 218-230, t> í> 22+229, 9 9 218-231;;

anal divided; subcaudals divided (21-30), S ò 25-30, 9 9 21-29.

The new species is nearest to Micrurus frontalis frontalis (D. B. et D.

1854) but different from this onc and other subspecies of frontalis by the posi-

tion of the first triad (separated from the parietais by 7-9 vertebral scales

instead of 1-3 in frontalis subspecies, by the white ring instead of white, yel-

lowish powdered with dark: Furthermore the first ring of the first triad is.

constantly narrower in frontalis subspecies. Micrurus tricolor has 7 palatine-

and 4 pterigoid teeth instead of 10 and 3 respectively in Micrurus frontalis.

Variations : see table I where triadas = triads; ventrais = ventrals; sub-

caudais = subcaudals and n.° de vertebrais até o primeiro anel = nurnber of ver¬

tebral scales between the parietais and first ring.

BIBLIOGRAFIA

Duméril, Bibron et Duméril — Erpetologie Généralc 7: 1223, 1854.

Em breve publicaremos uma nota preliminar sobre as corais.

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

1 cm

2 — Micrunu tricolor (vista lateral).

3 — Micrvrus 'ricolor (vista dorsal).

SciELO

Man. Inst. Batantan, A. R. HOGE

27:67-72. 1955/6.

Micrunu tricolor, tipo (vista dorsal).

I 3 5 6 7

SciELO

) 11 12 13 14 15 16 17

M rm. Inst. Bataman,

27:*J-105. 1955/6.

W. H. A. SCHOTTLER

OBSERVAÇÕES MISCELÂNEAS SÔBRE PEÇONHAS OFÍDICAS E

ANTI VENENOS

W. H. A. SCHÜTTLER

(laboratório dr Farmocologia. Instituto Bulantan)

No decorrer de extensa investigação sobre as propriedades inninológicas das

principais peçonhas botrópicas do Brasil e dos antivenenos a elas correspon¬

dentes, cujos resultados foram publicados em outra revista (30), fizeram-se

numerosas observações e algumas pesquisas complementares, que não deviam

ser incorporadas áquêle artigo por não se enquadrarem bem no tema aí debatido.

Estes achados e a sua significação são apresentados aqui, não só jielo possível

interesse para outros pesquisadores dêste campo, mas também porque se rela¬

cionam, em parte, com outras investigações sobre venenos atualmente em anda¬

mento neste Instituto. Para os pormenores completos dos dados experimentais,

confronte-se a publicação (30) acima mencionada.

REAÇAO DE CAMUNDONGOS À INOCULAÇÃO PARKNTERAL 1)0 VENENO

Imediatamente após a injeção endovenosa de altas doses de veneno, os ani¬

mais apresentam sinais de grande excitação, saltam e têm convulsões violentas,

durante as quais certo número sucumbe em poucos minutos. Hemoptise abun¬

dante é bastante comum em tais casos. Outros animais entram em estado de

coma profundo, no qual morrem no espaço de alguns minutos até algumas horas.

Ainda outros camundongos se restabelecem do coma e, depois de passarem horas

em aparente bem-estar, morrem mais tarde, ou sobrevivem definitivamente.

Em animais que receberam a peçonha por via subcutânea geralmente não se

observam sintomas imediatos da intoxicação, afora certa inquietação. Então,

conforme a severidade do envenenamento, torna-se manifesto colapso progressivo,

do qual os animais raramente recuperam. Ao mesmo tempo começam a aparecer

Recebido, para publicação, cm 25.V.1955.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

OBSERVAÇÕES MISCELÂNEAS SOBRE PEÇONHAS OriDICAS E

AXTI VENENOS

hemorragias subcutâneas, com gangrena e necrose subseqüentes no local da in¬

jeção. Êste sintoma só, quando não acompanhado de colapso geral, não cons¬

titui medida pela qual se deduza o prognóstico, pois camundongos com lesões

locais muito extensas sobrevivem com bastante freqüência.

O comportamento e os sintomas observados nos animais eram iguais em

seguida à inoculação de ambos os tipos de peçonha, excetuado somente o veneno

de jararacussti L-7 por via subcutânea. Neste caso, cêrca de 10dos animais

que haviam recebido esta peçonha só ou combinada ao sôro antipeçonhento, e que

tinham sobrevivido um dia no mínimo, desenvolveram exoítalmia unilateral, que

atingiu enormes proporções. Em geral esta lesão se tornou perceptível 24 horas

após a injeção do veneno e alcançou o máximo no segundo dia. Uns dias depois,

o globo ocular afetado entrava em necrose (Fig. 1). A dissecção revelou, nos

casos mais avançados, necrose caseosa do globo ocular e dos tecidos anexos.

O exame histológico de um caso severo mostrou uma zona hemorrágica sob o

epitélio da conjuntiva palpebral; um foco hemorrágico extenso na câmara

anterior, seb a cómea e contornando o cristalino, e forte hiperemia do nervo

óptico. Num outro caso havia hemorragia em todas as câmaras, anterior e

posterior, e nos tecidos orbitários peri-oculares, invadindo os tecidos gorduroso

e muscular estriado da órbita; intenso grau de vaso-dilatação em pré-estaser

inicio de leucodiapedese cm alguns vasos. Em casos de menor gravidade foram

encontradas somente congestão e hemorragias peri-capilares. Este fenómeno, não

ligado à morte cu sobrevivência e atualmente sem explicação razoável, não foi

observado quando se empregaram duas outras amostras da mesma peçonha.

A intensidade das reações locais determinadas pela injeção subcutânea dos.

venenos puros ou das misturas peçonha-antiveneno é representada na Tabela I-

Deve ficar entendido que a divisão da escala continua da lesão local em cinco

graus arbitrários c liaseada apenas nas impressões pessoais do autor. Uma vez

que os graus intermediários tinham de ser avaliados para menos ou para mais,

para serem enquadrados neste esquema, somente devem ser consideradas signi¬

ficativas diferenças de 4—|- ou maiores.

A inspeção desta tabela revela que o grau da lesão local provocada pelas

sete amostras de peçonha experimentadas não depende da toxicidade de um

veneno, mas sim da quantidade absoluta de toxina inoculada. Assim, a LD 50 do

veneno o l ter nata (15.80 mg/kg) está situada na zona de reações leves até

médias .enquanto que a da peçonha dc atro .r (80.99 mg/kg) se acha bem dentro

da zona de destruição local mais severa de tecido. O fator hemorrágico dos

venenos é neutralizado até certo grau por antivenenos tanto homólogos quanto

heterólogos (dentro de um mesmo gênero). Não há, porém, congruência entre

a neutralização das atividades locais destas peçonhas e a da sua toxicidade total,

como é demonstrado pelo caso do veneno cotiara e seu anti-sôro especifico.

7 SCÍEL0) 2.1 12 13 14 15 16

itero. Inst. Butantan,

27:73-105. 1955 6.

\V. H. A. SCHÕTTLER

DISCUSSÃO

A semelhança entre o quadro clinico do envenenamento ofidico e os sintomas

que acompanham várias formas de choque já foi comentada por Essex &

Markowitz (5), Moon (16) e outros, e é confirmada pelos achados de Witham

et al. (37). Moon & Kennedy (17) mostraram que tecido muscular triturado

e introduzido na cavidade peritoneal em dose de menos de 0.5 Çó de pêso do corpo

é suficiente para produzir choque fatal em cães. Estas e outras observações

semelhantes de outros pesquisadores sugeriam o estabelecimento de uma ligação

causal entre o extenso dano local provocado por numerosas peçonhas ofidicas

(23-27) e o aparecimento de um colapso da circulação sanguina parecido com

choque. Deste modo, Schaumann (22) distinguiu dois princípios tóxicos em

venenos de ação local, inoculados por via subcutânea, sendo um o fator tóxico

propriamente dito. devido ao qual os animais morrem em 24 horas ou menos, e o

outro o componente hemorrágico, que provoca ‘‘morte tardia”, i. e., depois de

mais de 24 horas, pela lesão severa dos tecidos no lugar da injeção ou, em

outras palavras, por choque traumático. Tal distinção entre os dois mecanismos

é, evidentemente, bastante arbitrária, pois é fato bem sabido que a morte por

trauma local, tal como contusão muscular, queimaduras etc., tanto pode ocorrer

dentro de poucas horas como levar até alguns dias depois da lesão, sendo igual

o prazo de sobrevivência na morte j>elo envenenamento por peçonhas ofidicas

isentas de atividades locais, quer em animais de laboratório (24, 27) quer no

homem (1). As observações desconcertantes de Schõttler (24), observando

que animais com trauma local aparentemente severo frequentemente não pareciam

muito afetados, puseram em dúvida a importância do dano provocado pela peço¬

nha no lugar da injeção. É bem possível que seja superestimada, pelo obser¬

vador, a importância da destruição local de tecido e do edema sanguíneo, que

raramente ultrapassa um terço da superfície do corpo em animais de pequeno

porte. Por outro lado tem sido descrito oom frequência choque fatal resultante

de lesões rclativamente pequenas, o que também evidenciam as pesquisas de

Moon & Kennedy (17).

O mecanismo do choque em geral ainda é assunto muito controvertido, e

o do choque produzido pela inoculação subcutânea de venenos dotados de ação

local, aliás a via mais comum de introdução da peçonha em casos de ofidismo,

é ainda mais complicado pelos efeitos indiretos que a toxina pode provocar por

essas mesmas reações locais. São, portanto, os seguintes os fatores que podem

ser distinguidos no trauma local provocado por tais peçonhas:

a. Produção dc edema hemorrágico local, resultando num decréscimo de

liquido no sistema circulatório. Schwiegk & Schõttler (32) demostraram que

o extravasamento de plasma para os tecidos, causado por trauma local, pode

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

OBSERVAÇÕES MISCELÂNEAS SOBRE PEÇONHAS OFÍDICAS E

ANTI VENENOS

ser suficientemente abundante para constituir por si mesmo a causa mortis.

Todavia não é forçoso admitir a ocorrência de edemas tão grandes no caso de

empeçonhamento, pois perdas muito menores de plasma são capazes de iniciar o

círculo vicioso — Moon (16) e Schwiegk (31) — de colapso secundário induzido

pelo decréscimo do volume de plasma ou sangue no sistema circulatório. Por

outro lado, a intensidade de um trauma local não obriga a um grau correspon¬

dente de reação sistémica. É possível que a ação destrutiva do veneno sôbre o

tecido endotelial seja tão forte que, após um aumento inicial da permeabilidade

capilar e perda consequente de liquido sanguineo, a circulação seja completamente

interrompida na área atingida devido à necrose dos vasos sanguíneos. Esta hi¬

pótese forneceria explicação aceitável à divergência entre a severidade aparente

de reações locais e a mortalidade correspondente. Xão obstante nada ser .

conhecido sôbre o mecanismo da ação local de peçonhas, exceto talvez que está

provavelmente associada à atividade proteolitica, a evidência experimental, espe¬

cialmente a neutralização do fator hemorrágico por antiveneno sem alteração

significativa da dose letal, parece indicar que o trauma local per sc não contribui

muito para a morte por envenamento ofidico, salvo quando o peritônio for per¬

furado e os intestinos ficarem expostos (24).

b. Libertação de substâncias farmacodinâmicamente ativas, normalmente

celulares, c formação de produtos tóxicos consequente à desintegração de material

inofensivo por várias ações ensimicas de venenos {.38). Feldberg & Kellaway

(6, 7), Rocha e Silva et al. (21), Werle et al. (36) e demais pesquisadores têm

demonstrado a libertação, ou formação, de histamina e outras substâncias depres¬

soras por peçonhas. Xada, porém, parece ser conhecido sôbre as proporções

nas quais estas substâncias aparecem e em que quantidades podem lesar o

organismo. Xa presente investigação em camundongos, a possivel influência de

histamina devia ser minima, pois, segundo Dekanski (3), a injeção endovenosa

de doses de histamina dez vezes maiores do que a existente no camundongo

inteiro é tolerada quase sem sintomas por esta espécie animal notadamente resis¬

tente á histamina. O papel insignificante da histamina no oíidismo também

pode ser deduzido da ineficácia terapêutica da medicação antihistaminica em

tais experiências (29). A produção de hemorragia local não está necessária-

mente ligada ao mecanismo que provoca a liliertação, ou formação, de composto-

tóxicos, como fica evidenciado pelo fato de que o mesmo também acontece com

venenos que não causam sintomas macroscopicamente perceptíveis no lugar da

inoculação. Outrossim, tal atividade não fica necessariamente limitada às ime¬

diações do local da injeção do veneno, podendo fazer-se sentir por todo o

organismo, o que acontece, entretanto, com intensidade decrescente de reação.

Ainda não foi verificado se, e até que grau. o princípio fisiológico tratado neste

parágrafo ixxle ser neutralizado por soros antipeçonhentos.

7 SCÍELO) 1X 12 13 14 15 16

ilrtn. T n«t. Bstantan,

-!7:73-105. 1955/',.

W. H. A. SCHOTTLER

É quase certo que as ações locais combinadas de venenos são devidas aos

seus énzimos proteoüticos. Seria por isso interessante investigar a capacidade

proteolítica de doses letais das peçonhas aqui estudadas. In felizmente tais dados

somente existem para o veneno de B. jararaca. Martirani & Azevedo (15)

verificaram que esta peçonha digere gelatina na proporção de 1:83 até 1:1122

em 60 minutos e pH 8.0. O efeito letal da mesma espécie de veneno, relati¬

vamente a material sólido e admitindo que tres quartos do corpo do camundongo

são constituídos por água, tem lugar na proporção de 1:29500 a 1:581400.

Caso a digestibilidade das proteínas corporais fosse igual à da gelatina, isso

significaria que uma dose letal da peçonha devia ser capaz de desintegrar 0.01

até 3.8% da substância do corpo. Lembrado que a destruição de menos de

0.5% pode ser suficiente para provocar a morte, é evidente que não pode ser

contestada a importância da ação proteolítica de peçonhas em certo número de

casos. A hipótese da existência de um fator comum no mecanismo do choque

no envenenamento ofídico de um lado e, de outro lado, em numerosas formas

de trauma mais ou menos localizado, é ainda mais reforçada pela semelhança

dos achados histo-patológicos em ambos os casos. A possibilidade de que alte¬

rações tão disseminadas possam ser devidas ao efeito direto de doses letais tão

insignificantes como as de peçonhas, parece muito remota, não obstante o veneno

pode agir sóbre órgãos de alta susceptibilidade como. jx>r exemplo, o sistema

nervoso.

TEMPO DE SOBREVIDA A IXJEÇÀO DE DOSES LETAIS DE PEÇONHA

O quadro do tempo de sobrevida após envenenamento fatal é apresentado

na Tabela II. em cuja compilação não foram incluídas mortalidades por doses

superiores às certamente letais. Nenhuma diferença estatisticamente significa¬

tiva entre as duas vias da aplicação de veneno pode ser deduzida destes números,

obtidos pelo registro da mortalidade em intervalos de 24 horas. Talvez, um

exame mais detalhado do tempo da morte dentro do primeiro período de 24

horas depois da inoculação da peçonha, impraticável por motivos técnicos, ti¬

vesse revelado que a morte tem lugar mais rapidamente após a injeção endo¬

venosa.

Os prazos de morte dos animais nas experiências com soros antipeçonhentos

acham-se registrados na Tabela III. A comparação destes algarismos com os

obtidos com veneno só (Tabela II) mostra que não há diferença nas provas

endovenosas e que a diferença das médias nas provas subcutâneas, embora não

significativa, tende a indicar que o antiveneno retarda a morte em casos fatais.

Dispostas as observações segundo os vários tipos de soros (Tabela IV), é inte¬

ressante notar que os periodos de sobrevida se tornam mais regulares nas

experiências subcutâneas, como evidencia o desvio padrão (o) consideravelmente

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

ro OBSERVAÇÕES MISCELÂNEAS SOBRE PEÇONHAS OFIDICAS E

° ANTI VENENOS

menor. Além disso, segundo esta disposição o mostra, a morte ocorre sem

dúvida mais ràpidamente por injeção endovenosa do que pela subcutânea de mis¬

turas letais de veneno e antiveneno, como fica patente pelos algarismos corres¬

pondentes aos primeiros dois intervalos de 24 horas de registro.

TITULAÇAO DE ANTI VENENOS MEDIANTE FLOCULAÇAO E ENSAIO

IN VIVO

Após incubação de misturas veneno-antiveneno durante uma hora a 37°C, a

floculação se manifestava somente com o sôro antibotrópico B-114 digerido pela

pepsina, enquanto que os outros antivenenos examinados neste trabalho e subme¬

tidos a outros métodos de purificação, ou talvez não purificados, não provocam

o mínimo traço de turvação. Talvez o tempo de incubação fosse demasiado curto

para a formação de um precipitado entre as peçonhas e estes últimos soros, uma

vez que Hansen (10, 11) e Petermann & Pappenheimer (18) observaram que

a digestão péptica diminúi muito o tempo de floculação de anti-toxinas, o que

explicaria a floculação do sôro B-114.

Em nenhuma das pesquisas aqui mencionadas a neutralização das pro¬

priedades tóxicas das peçonhas coincidiu com a floculação máxima (Tabela V),

o que confirma verificações anteriores sôbre êste assunto (28). Tais achados

não são surpreendentes, pois, à luz das pesquisas de Pope ct al. (19, 20) sôbre

toxina e antitoxina diftéricas purificadas, nem mesmo teoricamente deve ser

esperada relação direta entre ensaios in vivo e in vitro de antígenos tão comple¬

xos como os venenos oíidicos e os anticorpos correspondentes. De fato, Chris-

tensen (2) até observou que precipitados obtidos com proporções ótimas de

veneno-antiveneno em certos casos não continham toxina alguma. Uma expli¬

cação plausível dêste fenómeno seria fornecida pelos toxoides de venenos de

Githens & Butz (8) ou pelo grupo II do "Giftdrüsensekret” de Schõttler (24).

ORDEM DE TOXICIDADE E ÍNDICE SUBCUTANEO-ENDOS ENOSO

A ordem de toxicidade dentro de uma série de venenos é obtida pelo cálculo

da razão entre a dose mortal média de cada peçonha e da amostra mais ativa

do grupo. Os resultados para os venenos usados nesta investigação encontram-se

na Tabela VI. Da análise desta tabela parece deduzir-se que um veneno menos

tóxico quando introduzido por via subcutânea se comporta como mais ativo

quando a via empregada é a endovenosa, exceto o de ncwviedii L-10, que é fraco

em ambos os casos. Esta influência da via de inoculação na inversão da ordem

da toxicidade não ficou todavia estabelecida fora de qualquer dúvida, pois as

zonas dos índices se sobrepõem em quase cada caso. Comparadas, porém, dire-

2 3 4

5 6 7

^ J—l -1—1

11 12 13 14 15 16

M -tn. Inst. Batantan,

-27:73-105. 1955/6.

\V. H. A. SCHOTTLER

tainente as doses letais de espécies diversas de veneno, verifica-se, e. g., que

a de atro .r L-ll é superior à de altcniala L-8 por via endovenosa, mas inferior

por via subcutânea, havendo, como essa, 32 pares de combinações, não consi¬

deradas, naturalmente, as comparações entre diferentes amostras da mesma es¬

pécie de veneno. Esta comparação direta mostra que, em 9 casos, a relação

entre duas peçonhas fica realmente invertida nos dois tipos de ensaio, e que

não há um único caso estatisticamente significativo que forneça prova do

contrário. A maior parte dos casos restantes, embora sendo estatisticamente

duvidosos, depõe a favor da mesma constatação. O mesmo se verifica com

referenda ao índice subcutâneo-endovenoso, representado pelo quociente entre

as doses letais médias subcutânea e endovenosa de uma peçonha. Xão obstante

■os limites muito amplos déste indice, as diferenças entre venenos por éle caracte¬

rizados são estatisticamente significativas no mínimo em 13 casos entre as

32 possibilidades de comparação.

A ordem de grandeza e as diferenças dos índices subcutâneo-endovenosos dos

venenos em combinação com sôro an ti peçonhento (Tabela VII) são menores do

que os desses venenos sós (Tabela VI). Mesmo que as diferenças entre os

índices das misturas veneno-antiveneno não sejam significativas, é interessante

notar que as peçonhas com indice subcutâneo-endovenoso mais alto na prova

de toxicidade — atro .r L-ll e jararacussu L-7 — têm o indice mais alto também

em combinação com sôro, e que, no ensaio endovenoso de anliveneno, é neutra¬

lizado um número considerávelmente maior de doses letais destes dois venenos

■do que dos demais (30). Além disso nota-se que a combinação com o sôro

znü-cotiara resultou em indice mais elevado em cinco das amostras de peçonha

e num segundo e terceiro lugares uma vez cada.

DISCUSSÃO

Uma possivel explicação para êstes achados podia ser fornecida pela obser¬

vação mencionada acima, de que, em conseqüência da inoculação endovenosa

<la peçonha, os camundongos caem freqüentemente em choque imediato, do qual

êles se recuperavam com rapidez para morrerem mais tarde, após horas de apa¬

rente bem-estar. Devido à natureza complexa dos venenos, não seria imprová¬

vel que dois princípios tóxicos estivessem envolvidos no envenenamento endove¬

noso, um com ação direta sóbre os seus orgãos efetores, a cujo contato é levado

pelo sangue, e outro que ou tem de sair da circulação para encontrar os seus

receptores ou que precisa de tempo para liberar, ou formar, substâncias tóxicas

dentro do corpo do animal ou que apresenta ao mesmo tempo as duas exigências.

Xa injeção subcutânea, o primeiro destes fatores estaria separado dos seus

pontos de ataque por massas de tecido, de modo que a sua entrada na circulação

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

OBSERVAÇÕES MISCELÂNEAS SOBRE PEÇONHAS OFIDICAS E

ANT1 VENENOS

é retardada e gradativa, tornando-o relativamente inofensivo. Isto pode ser

deduzido das pesquisas de Schaumann (22) e de \ ellard & Huidobro (34),

que observaram que a queda imediata da pressão sanguínea causada pela in¬

jeção endovenosa de peçonhas dotadas de ação local é menos severa, ou até

ausente, quando da repetição da mesma dose, indicando a dessensibilização dos

órgãos receptores para esta fração do veneno. Assim, um fator de grande

importância no envenenamento endovenoso exerce menos, ou nenhuma, influên¬

cia sôbre o resultado da introdução subcutânea da peçonha. Variações na dis¬

tribuição quantitativa dêste fator nos venenos bem poderão ser responsabilizadas

pela ordem invertida da toxicidade das peçonhas nas duas vias de inoculação.

Outra explicação foi oferecida por Martirani (14), sugerindo que diferenças

na atividade hialuronidásica dos venenos poderiam determinar o grau da toxi¬

cidade subcutânea sem possuírem influência apreciável na inoculação endove¬

nosa. A comparação das quantidades de hialuronidase existentes em doses letais

das amostras de venenos sob investigação, tituladas pelo método de Tolksdorf

ct al. (33), (Tabela VI), mostra unia variação considerável da atividade hialu¬

ronidásica de doses de veneno que provocam a morte por injeção endovenosa,

enquanto que as quantidades dêste énzimo contidas nas doses letais subcutâneas,

bastante divergentes, são notàvelmente coincidentes. Isso justifica um exame

mais aprofundado dêste assunto.

INFLUÊNCIA DA ATIVIDADE HIALURONIDASICA DOS VENENOS SOU RE

A TOXICIDADE SUBCUTÂNEA

O possível pa|K‘l da hialuronidase no envenenamento subcutâneo deveria

tornar-se evidente se o titulo desta fõsse aumentado artificialmente, ou se a

hialuronidase da peçonha fosse consumida pelo seu próprio substrato antes da inje¬

ção do veneno. Nestas pesquisas, um produto comercial de hialuronidase testicular

bovina*, ou ácido hialurónico, foi adicionado para aquêle fim às soluções de

veneno. As misturas foram incubadas a 37°C durante uma hora antes de serem

injetadas em camundongos brancos fêmeos. Controles com as mesmas soluções

de veneno mais salina foram realizados ao mesmo tempo. Os resultados estão

registrados em Tabela VIII. O aumento em hialuronidase nas provas n.° 55.

56. 58 relativo aos controles n.° 34 ou 35, respectivamente, foi de 25. 18

e 72 r i nas doses letais médias. As quantidades de ácido hialurónico adiciona¬

das às soluções de veneno nas provas n.° 57, 59, 60 eram suficientes para

absorver 10720, 580 e 850% da atividade hialuronidásica dos controles relati-

• Fornecido, sob o nome comercial “ Hyalozima'’ da Opoterapica NESPA I.tda..

São Paulo, S. P.. pela gentileza do dr. I. Martirani.

7 SCÍEL0) 2.1 12 13 14 15 16

Mtm. ! n?t. Buíantan.

27:73-105. 1955/6.

\V. H. A. SCHOTTLER

vamente às LD^oS. Os resultados destas pesquisas são bastante desconcertantes.

As provas n.° 55, 56. 57 mostram que a redução da atividade hialuronidásica

por grandes quantidades de ácido hialurónico diminui significativamente a toxi¬

cidade da peçonha em comparação com a de soluções às quais fora adicionada

hialuronídase. Justamente o contrário aconteceu nas pesquisas n.° 58, 59, 60,

onde o ácido hialurónico aumentou a toxicidade relativamente à das soluções da

peçonha enriquecida com hialuronidase, chegando num caso (prova n.° 58/60)

o aumento a ser significativo sob o ponto de vista estatístico. Entrentaitío, o

erro muito elevado dos ensaios de toxicidade nas provas de controle com veneno

deixa transparecer que os resultados contraditórios surgiram provavelmente por

acaso. Deste modo, não é possível obter evidência alguma da influência da

hialuronidase de peçonhas sóbre a toxicidade de venenos à luz dos resultados

desta investigação. Resta a critica de que, segundo Haas (9) e Hechter (12),

outros fatores além dos aqui considerados entram no mecanismo da difusão

in vivo. Assim seria antecipada a conclusão de que a hialuronidase definiti¬

vamente não aumenta a toxicidade do veneno.

DISCUSSÃO

Xa ampla literatura sóbre o fator, ou fatores, de difusão dos venenos,

que é supostamente representado pela hialuronidase ou substância semelhante, foi

geralmente aceito bcna fidc que um mecanismo que facilita a invasão de um

organismo é favorável à ação de uma substância tóxica ou de outra maneira

fisiològicamente importante. Certas verificações confirmam êsse ponto de vista

tais como as observações de Krech (13), que achou que, em provas subcutâneas,

é necessário muito menos antitoxina para neutralizar uma dose de toxina difté-

rica prèviamente injetada, se for adicionada hialuronídase ao soro. Neste caso,

a hialuronídase acelera a difusão da antitoxina através do organismo numa

proporção que, sem o auxilio do ênzimo, sómente doses maiores de sôro podiam

alcançar. O fator tem]», porém, não tem importância alguma no envenenamento

oíidico em circunstâncias naturais, pois é inteiramente indiferente que a ser¬

pente mate a sua prêsa em 5 ou em 30 minutos. Além disso há outro aspecto

do problema da difusão no caso de peçonhas com atividade local pronunciada,

que é o da concentração limiar do veneno necessária para vencer a resistência

natural dos tecidos contra a sua ação. É óbvio que quanto maior a concen¬

tração de hialuronidase em certa quantidade de veneno, tanto mais ràpidamente

êste se difunde e, ]x>r conseqüència, se dilúi na direção do nível critico, abaixo

do qual não há mais dano local. Desta maneira, o efeito final da hialuronídase

do veneno poderá ser exatamente o oposto do que se pensa em geral.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

OBSERVAÇÕES MISCELÂNEAS SOBRE PEÇO.VHAS OFiDICAS E

ANTIVENENOS

Parece iniítil uma discussão destas possibilidades desconcertantes antes de

conhecer mais sôbre os fatores essenciais do mecanismo fisiológico letal das

peçonhas. Apesar da experimentação aqui relatada ter falhado no objetivo de

provar a importância do fator de difusão no evenenamento botrópico, não

deixa de ser verdade que uma investigação mais aprofundada do assunto, utili¬

zando também outros tipos de veneno, poderá dar resultados interessantes que

venham talvez contribuir para a melhor compreensão destas substâncias. Em

benefício da terapêutica do ofidismo, tais pesquisas deviam ser extendidas também

às reações entre antiveneno e hialuronídase. Isso não será tarefa fácil, pois,

devido à natureza protéica dos soros, a sua influência sôbre a hialuronídase

dificilmente pode ser pesquisada turbidimètricamente (33). Por outro lado, a

interpretação de ensaios viscosimétricos (9) será dificultada pelas reações si¬

multâneas entre fatores distintos, que influenciam a viscosidade do sistema

apurador de maneiras diferentes e independentes: viscosidade do ácido hialu-

rónico; viscosidade do sôro antipeçonhento; despolimerização do ácido hialuró-

nico pelo veneno; inibição inespecifica (9) e neutralização especifica (4) da

hialuronídase da peçonha pelo antiveneno; ação proteolítica, e, por isso, redutora

da viscosidade, do veneno sôbre o sôro, e alteração da tensão superficial pela

peçonha (35) se o fator responsável por êste fenômeno for diferente dos já

mencionados.

O autor agradece ao dr. M. de F. Amorim, professor de ana¬

tomia patológica da Escola Paulista de Medicina, pelo diagnóstico

dos cortes histológicos, e ao dr. I. Martirani, do Departamento

de Saúde e Assistência Social do Estado de São Pado, pela

titulação da hialuronídase nos venenos.

RESUMO

Êste artigo apresenta uma série de observações e pesquisas suplementares,

executadas ao mesmo tempo que uma investigação extensa sôbre venenos lx>tró¬

picos e os seus antivenenos, já publicada numa outra revista (30).

É descrita uma lesão ocular unilateral em camundongos, causada pela in¬

jeção subcutânea de certa amostra de veneno de Bothrops jararacussu.

A severidade das reações locais provocadas pela inoculação subcutânea de

peçonhas depende da dose e não da toxicidade geral dos venenos. Elas são

neutralizadas até certo grau por antivenenos especificos com referência à espécie

e ao gênero de ofídio. A neutralização da atividade local e da toxicidade total

ocorre em proporções diferentes. A significação do dano local no ofidismo é

amplamente discutida.

7 SCÍEL0) 2.1 12 13 14 15 16

M -Tn. Inst. Batmtan.

27:73-105. 1955/6.

W. H. A. SCHOTTLER

São determinados os tempos de sobrevivência de camundongos após ino¬

culações endovenosas e subcutâneas de doses letais de veneno sem e com adição

de soros antipeçonhentos.

Não há relação entre a titulação in vivo e por floculação dos antivenenos.

A ordem de toxicidade dos venenos estabelecida pela prova endovenosa em

geral é inversa da obtida pela inoculação subcutânea, o que resulta em índices

subcutâneo-endovenosos diferentes nas várias espécies de peçonhas dentro do

mesmo gênero ofidico. Como explicação dêste fenômeno é discutida a pos-

sibilidde de um mecanismo duplo na morte causada por peçonhas.

Não foi observada influência alguma da hialuronídase sôbre a toxicidade

subcutânea dos venenos.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mim. Inst. Kutaiiian,

2~ :7J-105. 195S/6.

W. H. A. SCHOTTLER

MISCELLAXEOUS OBSERVATIOXS OX SXAKE VEXOMS AXD

AXTIVEXINS

W. H. A. SCHOTTLER

(Department of Pharmacohgy, Instituto Ilutantan)

In the course of an extensive study of the immunological properties of the

principal Bothrops venoms of Brazil and their corresponding antivcnins, the

results of which have been published elsewhere (30), numerous observations and

some supplementary experiments were made, which could not l>e iiKorporated in

that paper because they do not directly pertain to its subject. These findings and

their significance are reported here apart as they may not only l>e of interest to

other workers in this field but, partly, also have a 1>earing on fnrther venom

research now in progress in this Institute. For full details of the experimental

data. on which part of the present study is liased. the reader is referre<l to the

above mentioned publication (30).

REACTION OF MICE TO PARENTERALLY APPLIED VENOM.

Immediately after intravenous injection of higher doses of venom, the ani¬

mais showed signs of great irritation. jumped wildly around and had violent con-

vulsions. during which part of them succumbed within a few minutes. Abundant

hemorrhage from the lungs was rather ccmmon in sttch cases. Other animais

entered in a State of deep coma, in which they died after some minutes to

several hours. Still other mice recovered from the coma and. after hours of

apparent well-being, died later on. or survived ultimately.

Xo immediate symptoms of intoxication, except a certain restlessness, were

generally observed in animais in which the venom had Iteen injected subeuta-

neously. Then. progressive collapse according to the severity of the intoxication

Received for publication on 25. v. 1955.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

MISCEU.ANEOITS OBSERVATIOXS OX SXAKE YEXOMS

AXD axtivexixs

became manifest, from which the animais rarely recovered. At the same time,

development of subcutaneous hemorrhage with subsequent gangrene and necrosis

at the site of injection set on. However, this symptom alone, if not accompa-

nied by general collapse, is no measure by which the fate of the animais can be

predicted, as mice with very extensive local damage survrved rather often.

After both types of venom inoculation, behavior and symptoms of the ani¬

mais were alike independem from the species of venom administered, with the

only exception of the venom sample jararacussu LI 7 on subcutaneous injection.

Here. about l(Kó of the animais, which received this venom alone or in

combination with antivenin and survived at least one day, developed unilateral

exophthalmus, which attained enormous proportions. This lesion was generally

distinguishable 24 hours after venom injection and reached its maximum on

the second day. A few days later, the affected eye-ball necrotized (Fig. 1).

In the most advanced stages, dissection revealed caseous necrosis of the eye-ball

and surrounding tissues. Histological examination of another severe case showed

a hemorrliagic zone under the epithelium of the palpcbral conjunctiva, an exten¬

sive hemorrhagic focus in the anterior chamber, under the córnea and around

the lens, and pronounced hyperemia of the optic nerve. In a further case,

there was present hemorrhage in the entire anterior and posterior chambers and

in the pe ri ocular orbital tissues, extending to the adipose tissue and the striped

muscles of the orbit ; a high degree of vasodilatfon, and beginning diapedesis of

leucocytes in some vessels. In light cases, only congestion and smaller peri-

vascular hemorrhagcs could be distinguished. The phenomenon, which was not

relatcd to death or survival and for which no reasonable explanation can be

offered at present, was not obscrved with two other samples of the same

species of venom.

The intensity of the local reactions elicited by subcutaneous injection of

the vcnoms alone and of the venom-antivenin mixtures is rccorded in Table I.

It must be understood that the division of the continuous scale of local damage

in five arbitrary degrces is based on the personal impressions of the author

only. As intcrmediate subdegrees were liable to be under- or overrated in

order to be placed within the scheme, only diffcrences of -]—|- or more may

be considered significant.

Inspection of this table reveals that the degree of local damage provoked by

the se ven venom samples under investigation does not depend on the toxicity of

a venom but on the absolute amount of toxin administered. Thus, the LD 50

of the altcrnata venom (15.S0mg/kg) is situated in the zone of light to

médium local reactions, whereas that of the atrox venom (80.99 mg/kg) is

deep in the region of severest local tissue destruction. The hemorrhagic factor

of the venoms in neutralized to a certain degree by homologous as well as hetero-

logous (but genus-specific) antivenins. However, there is no congruence-

7 SCÍELO) 2.1 12 13 14 15 16

M.m. !nst. Hut-jtitan.

27 73 - 105 . 1955 6 .

W. H. A. SCHOTTLKR

Tjctween the neutralization of the local activities of these venonis and that

oi their total toxicity, as demonstrated by the case of the cotiara venom and

its specific antiserum.

DISCUSSION

The resemhlance of the clinicai features of snake poisoning to the symptoms

which accompany various fornis of shock has been commented on by Essex &

Markowitz (5), Moon (16) and others and is confimied by the findings of

Witham et al. (37). Crushed muscle tissue in a quantity of less than 0.5% of

the bodyweight and introduced in the peritoneal cavity has been shown by Moon

& Kennedy (17) to be sufficient to produce fatal shock in dogs. These and

similar observations by other authors tnade the establishment of a causal

connection between the extensive local damage wrought by numerous snake

venoms (23 — 27) and the appearance of a shock-like collapse of the blood

circulation very suggestive. Thus, Schaumann (22) distinguished two toxic

principies in locally active venoms inoculated subcutaneously, one being the

propcrly toxic factor, to which the animais succumb in 24 hours or less, and

the other the hemorrhagic component, which causes ‘‘late deaths”, i. e. after more

than 24 hours, by the severe damage of tissues at the site of injection or, in

other words, by traumatic shock. This separation of the two mechanisms is, of

course, rather arbitrary, for it is a wcll-known fact that death from local

trauma, such as muscle contusion, bums, etc., may ensue in from a few hours

to several days, but the survival time before death on intoxication with snake

venoms devoid of local activity falis in the same range in laboratory animais

(24, 27) as well as in man (1). The disconcerting observations of Schõttler

(24), namely that animais with seemingly severe local trauma often did not

appear very much affected, cast some doubt on the importance of the damage

induced by venom at the site of injection. It is well possible that the local

destruction of tissue and the fonnation of sanguineous edema, which may

hardly exceed one third of the body surface of small animais, is greatly

overestimated by the observer. On the other hand, it has been frequently

reported that fatal shock may result from relatively small injuries, as also evident

from the experiments of Moon & Kennedy (17).

The mechanism of shock in general is still a highly disputed matter, and

that of shock by locally active venoms given subcutaneously, by the way the

most frequent route of venom introduction in snake bite aecidents is further

complicated by the indirect effects the toxin may elicit through local reactions.

Thus the iactors which may be involved in the local trauma produced by poi-

soning with such venoms, are:

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

MIÍCELLAXEOUS OBSERVATIONS OS SXAKE VEXOMS

AND ANTIVEMKS

a. Production of local hcmorrhagic edema rcsultiiig i> i a dccrcasc of

flttid iit lhe circulatory system. Schwiegk & Schõttler (32) have demonstrated

that the loss of plasma into the tissues caused by local trauma may be voluminous

enough to constitute by itself the causa mortis. However, it is not necessary to

assume such large edemas in the case of venoms, as much smaller losses of

plasma are capable of starting the circulus vitiosus (Moon (16) and Schwiegk

(31) ) of secondary collapse induced by generalized internai loss of plasma or

blood. On the cther hand, the intensity of a local trauma does not warrant

a corresponding degree of systemic reaction. It is possible tliat the destruetive

action of venom on the endothelial tissues is so strong that, after initial in-

crease of capiüary permeability with consequent leakage of blood fluid, the

circulation is entirely interrupted in the affected area due to necrosis of the

blood vessels. This assumption would supply an acceptable explanation of

the incongruity between the apparent severity of local reactions and the

respective rates of mortality. Though practically nothing is known alxntt the

mechanism of local venom action, except that it is probably associated with the

proteolvtic activity, the experimental evidence, cspecially the neutralization of

the hemorrhagic factor by antivenin without significant alteration of the lethal

dose, tends to indicate that the local trauma per se does not greatly contribute to

death by snake poisoning, unless the peritoneum is perforated and the guts are

exposed (24).

b. Liberation of pharmacodynamically active substanccs, which are normally

cell-bound, and formation of toxic split-produets from inoffcnsive material by the

various cncymic actions of venoms (38). Feldberg & Kellaway (6, 7), Rocha

e Silva et ai (21). Werlc et al. (36) and other workers have shown the release,

or formation respectively, of histamine and other depressor substances by ve¬

noms. Nothing, however, seerns to l>c known of the proportions at which these

substances appear and in which amounts they might affect the organism. In

the present investigation on micc, the possible influence of histamine should be

irrelevant Itecause, according to Dekanski (3), the intravenous injection of

histamine doses ten times larger than exist in the whole mouse is tolerated by

this notably histamine-resistant animal species with scarcely any discomfort.

The insignificant ròle of histamine in snake poisoning is also evident from the

therapeutic ineffectiveness of antihistamine medication in such experiments (29).

The production of local hemorrliagc is not necessarily coupled to the mechanism

which brings about the lil>eration, or formation, of toxic compounds, as evident

from the fact that the latter also occurs with venoms which do not provoke

macroscopically perceptible symptoms at the site of inoculation. Furthennore,

such an activity need not l>e limited to the immediate surroundings of the

venont deposit but may spread throughout the whole !>ody along with the

absorption of the venont, although with decreasing intensity of reaction. If and

7 SCÍELO) 1X 12 13 14 15 16

Alan. Inst. BuUntan,

27:75*105. 1955/6.

H. A. SCHOTTI.ER

ío what degree the physiologic principie treated in this paragraph is neutralized

by antivenin lias not yet lieen assayed.

It is almost certain that the coinbined local actions of venoins are associated

avith their proteohlic enzymes. Therefore it is interesting to investigate the

proteolytic capacity of lethal doses of the venonis iinder consideration. Unfor-

tunately, pertinent data were only available for the venom of R. jararaca. Here.

Martirani «S: Azevedo (15) found that this venom digests gclatin in 60 niimites

at pH 8.0 in a proportion of from 1:83 to 1:1,122. The lethal effect of the

- san,e species of venom, relative to solid material under the assumption that three

fourths of the mouse body are \vater, ocairs at a ratio of from 1:29,500 to

1:581.400. If the digestibility of the body proteins were equal to that of

gelatin, this wotild mean that a lethal dose of venom should l>e capable of splitting

0.01 to 3.8% of the body substance. Recalling that the dissolution of Iess

than 0 .5 (r may suffice to provoke death, it is evident that the importancc of

the proteolytic action of venonis in quite a number of cases cannot bs denied.

The supposition of a conimon factor at least for ]>art of the mechanism con-

tributmg to shock in snake jioisoning on one side and in numerous fornis of

more or less localized trauma on the other is furthcr supported by the similarity

■of the histo-pathologic findings in both conditions. The possibility that sucli

avide-spread alterations may lie due to the direct effect of the extremelv minute

lethal doses of venom appears rather remote. although the latter niight and

probably will directb interfere with selccted organs of higher susceptibility as,

for instance, the nervous System.

SURVIVAL TIME AFTER INJECTIOX OF LETHAL VENOM DOSES

A survey of the survival time after fatal intoxication is given in Table II,

m the compilation of which mortalities at dose leveis alxivc the certainly lethal

one were not included. No statistically significam difference between the two

Toutes of venom application can lie deduced from these figures, which have

lieen obtained by recording the mortaüty rate at 24 hour intervals. A more

detailed investigation of the times of death within the first 24 hour period

after venom inoculation. which was technically impossible, might have revealed

that death ensues more rapidly after intravenous injection.

The death tinies of the animais in the antivenin assays are recorded in

Table III. A comparison of these figures with those obtained with venom

alone ( Table II) shows that there is no difference in the intravenous tests and

that the difference of the means in the subcutaneous experiments, though not

significant. tends to indicate that antivenin retards death in fatal cases. If the

■observations are arranged after the various types of antivenin (Table IV), it

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

MISCELLAXEOUS OBSERVATIOXS OX SXAKE VEXOMS

AXD AXTIVEXIXS

is interesting to note that the periods oí survival become more regular in the

subcutaneous tests as evident from the considerably smaller standard devia-

tion (o). Furthermore, after this arrangement death ensues definitely faster

on intravenous than on subcutaneous injection of lethal venom-antivenin mixtures,

which is obvious from the figures of the first two 24 hour recording intervals.

ANTIVENIN TITRATION BY FLOCCULATION AND BIOASSAY

After incubation of venom-antivenin mixtures for one hour at 37° C,

flocculation occurred only with the pepsin digested antibothropic se rum B-114.

whereas the other antivenins, which were investigated in the present study and

which had been treated by other puriíicatory procedures or, perhaps, had nct

been processed at all, did not show the slightest trace oí turbidity. It is possible

that incubation was too short for the formation of a precipitate of the venoms

and the latter sera, as Hansen (10, 11) and Petermann & Pappenheimer (18)

have observed that peptic digestion greatly decreased the flocculation time oí

antitoxin.

In none of the experiments here reíerred to, maximum flocculation coincided

with the neutralization of the toxic properties of the venoms (Table V), which

confirms previous observations on this subject (28). Such findings are not

surprising as, in the light of the research on purified diphtheria toxin and

antitoxin by Pope et al. (19, 20), congruence between in vivo and in vitro

assays of so highly complex antigens as snake venoms and their corresponding

antibodies cannot even be expected in theory. As a matter of fact, Christensen

(2) even observed that floccules obtained at optimal venom; antivenin ratios

contained no toxin at all in certain cases. A plausible explanation of this phe-

nomenon would be supplied by the venom toxoids of Githens & Butz (8) or

group II of the “Giftdrüsensekret” of Schbttler (24).

ORDER OF TOXICtTY AND SUBCUTANEOUS INTRAVENOUS INDEX

The order of toxicity within a series of venoms is obtained by calcuhting

the ratio between the mean lethal dose of each venom and that of the most

active sample in the series. The respective figures for the venoms used in the

present investigation ar given in Table VI. The inspection of this table demon-

strates that the more active a venom is on intravenous injection the less toxic it

seems to be if administered subcutaneously, with the exception of neuwiedii

L-10. which is weak in either case. This reversed order of toxicity depending

on the route of injection is admittedly not established beyond doubt, as the

7 SCÍELO) 2.1 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Btltantan,

27:73-105. 1955/6.

W. H. A. SCHOTTLER

ranges oí the índices overlap in nearly every instance. However, if the mean

lethal doses are directly compared, e. g. atrox L-ll is superior to altcrnata L-8

on intravenous and inferior on subcutaneous injection, 32 pairs of combination

are possible, leaving out, of course, the comparison between difíerent sainples

of the same species of venom. This direct comparison shows that in 9 cases

the relation between two venoms is definitely reversed in the two types of

assay and that there is not one statistically tenable case to supply evidence of

the contrary. The greater part of the remaining cases, though dubious in a

statistical sense, is iavorable for the indicated observation. The same is true

with regard to the subcutaneous: intravenous index, which is the quotient between

the subcutaneous and the intravenous mean lethal doses of a venom. In spite

of the very wide ranges of this index, the differences between venoms cliarac-

terized by it are statistically significant in at least 13 cases out of the 32

possibilities of comparison.

Magnitude and differences of the subcutaneous: intravenous indices of the

venoms combined with antivenin (Table VII) are smaller than those of the

venoms alone (Table VI). Though the differences between the indices of the

venom-antivenin mixtures are not significant, it is interesting that the venoms

with the highest subcutaneous: intravenous index in the toxicity test — atrox

L-ll and jararaciissu L-7 — have also the highest index in combination with

antivenin and that, in the intravenous antivenin assay, considerably more lethal

doses are neutralized of these two venoms than of the others (30). It is further

noteworthy that the combination with the anti-co/íara serurn resulted in the

highest subcutaneous: intravenous index in five of the venom samplcs and in

second and third highest once each.

DISCUSSION 7

A possible explanation of these findings might be supplied by the aforc-

mentioned observation that on intravenous venom inoculation the mice frequent-

ly enterd in immediate shock, from which they soon rccovered but, after hours

of apparent well-being, died later on. By the complex nature of venoms it

would not be unlikely that two toxic principies are involved in intravenous

poisoning, one which acts directly on its eífector organs, in immediate contact

with which it is brought by the blood stream, and another which either has

to leave the circulation in order to encounter its receptors or/and which needs

time to liberate, or form, toxic substances within the animal body. On subcuta¬

neous injection, the former factor would be barred from its points of attack

by masses of tissue so that its entrance in the circulation is delayed and gradual,

thus rendering it relatively harmless. The latter may be concluded from the

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

MISCELLANEOUS OBSERVATIONS OX SXAKE VEXOMS

AND AXTIVEXIXS

experinients of Schaumann (22) and Vellard & Huidobro (34). who observed

that the imniediate fali of blood pressure caused by intravenous injection of

locally active veiioms is less severe or even absent on replication of the same

dose, which indicates a desensitization of the effector orgatis to this fraction of

the venom. Hence, a íactor of great importance in intravenous poisoning has

less or no faearing on the outcome of subcutaneous venom application, and

variations in the qnantitative distribution of this factor in the venoms might

well acconnt for the reversed order of toxicity of the venom samples in the

two rontes of inoculation.

Another explanation was offered by Martirani (14), who suggested that

differences in the hyaluronidase activity of the venoms might determine the degree

of the latter’s toxicity on subcutaneous injection but might be of negligible

influence in intravenous inoculations. The comparison of the amounts of hya¬

luronidase present in lethal doses of the venom samples under investigation. as

assayed by the method of Tolksdorf et al. (33) (Table VI), shows considerable

variation in the hyaluronidase activity of the venom doses that provoke death

on intravenous injection, whereas the quantities of this enzyme contained in the

rather diverging subcutaneous lethal doses are remarkably similar. Tlierefore a

closer examination of this matter is justified.

INFLUENCE OF HYALURONIDASE ACTIVITY OF VENOMS ON THEIR

SUBCUTANEOUS TONICITY

The possible ròle of hyaluronidase in the subcutaneous intoxication by

venoms should become evident if its titer is artificially raised, or if the hyaluro¬

nidase of the venom is used up by its proper substrate prior to the injection of

the venom. In these experinients, a commercial brand of bovine testiailar

hyaluronidase *, or hyaluronic acid, was added to the venom Solutions, and the

mixtures were incubated at 37°C for one hour before subcutaneous injection in

female white nice. Control tests with the same venom Solutions plus saline were

run at the same time. Results are reported in Table VIII. The hyaluronidase

increase in exjieriments Xo. 55, 56, 58 over the Controls Xo. 34 or 35. respectively.

was 25, 18 and 72% in the mean lethal doses. The amounts of hyaluronic acid

added to the venom Solutions in experinients Xo. 57, 59, 60 were suíficient to

absorb 10,720, 580 and 850$r of the hyaluronidase activity of the Controls

relative to the LD.-, 0 s. The results of these assays are rather coníusing. Exper-

iments Xo. 55, 56, 57 show that the reduction of hyaluronidase activity by

large amounts of hyaluronic acid signiíicantly decreases the toxicity of the venom

* Supplied under the trade-name “ Hyalozima” by Opoterapica NESPA Ltda.. São

Paulo, S. P-, tlirough the courtesey of Dr. I. Martirani.

2 3 4

5 6 7

^ 1 1

11 12 13 14 15 16

Mtsn. In*t- Batantan.

27:75-105. 1955/6.

W. H. A. SCHOTTI.KK

in comparison with that of the Solutions to whieh hyaluronidase had been

added. Just the opposite occurred in experiments Xo. 58, 59, 60, where hyaluronic

acid enhanced the toxicity relative to the hyaluronidase enriched venom solu-

tion, in one case (experirnent Xo. 58/60) even signiíicantly from a statistical

viewpoint. However, the extreinely large error of the toxicity estimations in

the control tests with venom alone inakes it very proliable that the conflicting

results are merely due to cliance. Thus, no evidence of the suggested influence

oí the venom hyaluronidase on the subcutaneous toxicity of venom is conceivable

from the results of these experiments, which, however, are open to the crit-

icism that, according to Haas (9) and Hechter (12), more factors tlian were

controlled here are involved in the mechanism of spreading in vivo. Hence,

the conclusion that hyaluronidase does definitely not enhance the toxicity of

venoms would be premature.

DISCUSSIOX

In the vast literature on the spreading factor, or factors. of venoms,

which is supposed to lie hyaluronidase or a hyaluronidase-like substance, it has

generally been accepted bona fide that a mechanism which promotes invasion of

an organism is favorable for the action of a toxic or otherwise physiologically

important substance. This view holds true for certain conditions such as the

observations of Krech (13). who found that. in sulicutaneous experiments,

markedly less antitoxin is necessary to neutralize a previously injected dose

of diphtheria toxin if hyaluronidase is added to the seruni. In this case, the

hyaluronidase will hasten the distribution of the antitoxin throughout the in-

íected organism at a rate which without the aid of the cnzyme might only

lie attained by higher doses of serurn. The time element, however, is of no

importance in snake poisoning undcr natural circumstances, liecause it is entirely

irrelevant whether a seqient kills its prey in 5 or in 30 minutes. Moreover, in

the case of venoms with pronounced local activity, there is still another aspect

of the problem of spreading. namely that of the threshold concentration of

venom required to overcome the natural resistance of the tissues to its action.

It is obvious that the higher the hyaluronidase content of a given amount of

venom, the faster the latter will spread and, thus. become diluted towards the

criticai levei, below which no local damage occurs. This way, the final effect

of venom hyaluronidase might lie just the opposite of what is generally assumed.

A discussion of these disconcerting possibilities is rather useless before

much more is known about the essential features oí the physiologic mechanism

by which venoms provoke death. In spite of the lack of evidence on the

importance of the spreading factor in Bothrops poisoning supplied by the exper-

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Q4 MISCELLAXEOUS OBSERVATIOXS OX SXAKE VEXOMS

AXD AXTIVEXIXS

iments of this paper, a closer investigation oí this matter also in other types of

venom might yield interesting results, which possibly would be of help for a

better understanding of these substances. For the benefit of snake bite therapy

such research should also be extended to the interactions between antivenin

and hyaluronidase. This will not be an easy task because by the proteic nature

of sera their influence on hyaluronidase can hardly be determined turbidimetri-

cally (33). On the other hand, the interpretation of viscosimetric assays (9)

will be complicated by the concomitant reactions between distinct factors, which

influence the viscosity of the system in different and independent ways: vis-

cosity of hyaluronic acid, viscosity of antivenin, depolymerization of hyaluronic

acid by venom, unspecific inhibition (9) and speciíic neutralization (4) of

venom hyaluronidase by antivenin, proteolytic and thus viscosity reducing action

of venom on senim, alteration of surface tension by venom (35), if the factor

responsible for the latter phenomenon is different from the aíore-mentioned ones.

ACKNOWLEDGEMENTS

The author’s tlianks are due to Dr. M. de F. Amorim, Professor of Patholog-

ical Anatomy, Escola Paulista de Medicina, for diagnosis of the histológica!

sections, and to Dr. I. Martirani, Public Health Service of the State of São

Paulo, who assayed the hyaluronidase of the venom samples.

SUMMARY

This paper presents a collection of supplementary observations and experi-

ments made in connection with an extensive study on Bothrops venoms and their

antivenins published elsewhere (30).

A unilateral eye Iesion provoked by subcutaneous injection of a certain

sample of Bothrops jararacussu venom in mice is described.

The severity of the local reactions elicited by subcutaneous venom adminis-

tration depends on the dose and not on the general toxicity of a venom. They

are neutralized to a certain degree by species- and genus-specific antivenins.

Local activity and total toxicity are neutralized at different rates. The signifi-

cance of local damage in snake poisoning is amply discussed.

Survival times of mice after intravenous and subcutaneous incculations of

lethal venom doses with and without addition of antivenin are reported.

No congruence between in vivo titration and flocculation of antivenin was

observed.

The order of toxicity of the venoms established by intravenous assay is

generallv reversed in subcutaneous determimations, which results in different

2 3 4

5 6 7

^ j_i -i—i

11 12 13 14 15 16

Mt*m. Inst. Butantan.

27 : 73 - 105 . 1955 / 6 .

\V. H. A. SCHOTTLER

subcutaneous : intravenous índices for the various venom species of the same

snake genus. As an explanation of this phenomenon, the possibility of a

dual mechanisra of death by venom is discussed.

Under the conditions of the experiment, no influence of hyaluronidase on

the subcutaneous toxicity of venom was detected.

1 .

5 .

<5.

8 .

* 0 .

11 .

12 .

13 .

14 .

15.

16.

17 .

18.

19.

20 .

REFERENTES

A morim, M. de F., & R. F. de Mello — Nefrose do nefrom intermediário no enve¬

nenamento crotálico humano. Estudo anátomo-patológico. (Mem. Inst Butantan

24: 281; 1952).

Christcnsen, P. A. — Problems of antivenene standardization rcvcled by the íloccula-

tion reaction. (Buli. World Health Org. 9 : 353; 1953).

Dekanski, J. — The cfíect of cutaneous bums on histamine in mice. (J. Physiol.

104: 151; 1945).

Duran-Reynals, F. — A sprcading factor in certain snake vcnoms and its rclation to

their mode of action. (J. Exp. Med. 69 : 69; 1939).

Essex, H. E., & J. Markowitz — The psysiologic action of rattlcsnake venom (crotalin).

— 7. The similarity of crotalin shock and anaphylactic shock. (Amer. J. Physiol.

92: 698; 1930).

Feldberg, W., & T H. Kellaway — Liberation of histamine from the pcrfused lung ■

by snake venoms. (J. Physiol. 90 : 257; 1937).

Feldberg, W., & C H. Kellaway — Liberation of histamine and formation of lyso-

cithinilike substances by cobra venom. (J. Physiol. 94: 187: 1938).

Githcns, T. S., & L. W. Butz — Venoms of North American snakes aml their rela-

tionship. (J. Immunol. 16: 71; 1929).

Haas, E. — On the mcchanism of invasion. (J. Biol. Chcm. 163 : 63, 89, 101: 1946).

Hanscn. A. — L'action de la pepsinc et de 1’acide clvorhydrique sur ]'ai:!itoxinc

diphthérique. (C. r. Soc. Biol. 129: 213; 1938).

Hanscn. A. — Rcinigung und Konzentrierung von Dipbtherieantitoxin durch Adsorption

nach der Autolyse mit Pcpsin. (Biochem. Zschr. 299 : 363: 1938).

Hcchter, O. — Mcchanism of sprcading factor action. (Ann. New York Ac. Sei.

52: 1028; 1950).

Krech, U. — Der Einíluss von Hyaluronidase auí dic thcrapcutische Wirkung des

Diphtherieserums. (Zschr. Immunitãtsf. & cxp. Ther. 109: 427; 1952).

Martirani, I. — Personal communication. (1952).

Martirani, I., & M. P. Azevedo — Acção proteolitica do veneno da Dolhrofs jararaca

(Wied). — II. Acção sobre a gelatina. (Mem. Inst. Butantan 22 : 47; 1950).

Moon, V. H. — Shock. (Philadclphia, 1942).

Moon, V. H., & P. J. Kennedy — The pathology of shock. (Arch. Path. 14 : 360; 1932).

Petermann, M. L-, & A. M. Pappcnheimer, Jr. — The ultracentrifugal analysis of

diphtheria proteins. (J. Physic. Chcm. 45: 1; 1941).

Pope, C. G., & M. F. Stevens — The purification of antitoxin by absorption of

non-antitoxic antibodies. (Brit. J. Exp. Path. 33: 56; 1953).

Pope, C. G., M. F. Stevens. E. A. Caspari & E. L. Fcnton — Some new observations

on diphtheria toxin and antitoxin. (Brit. J. Exp. Path. 32 : 246; 1951).

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

MISCELLANEOCS OBSERVATIONS O.X SXAKE VEXOMS

AND AXTIVEXINS

21. Rocha e Silva. M., \\ . T. Bcraldo & G. Rosenteld — Bradykinin, a hypotensive andl

smooth muscle stimulating factor released from plasma globulin by snake venoms.

and by trypsin. (Amer. J. Physiol. 156: 261; 1949).

22. Schaumann. O. — Pharmakologisclie Versuche mit Schlangengiíten und Schlangensera.

(Bchringwerk-Mitt. 7: 33; 1936).

23. Schottler, W. H. A. — Die Giíte von Vipera Iatasti und V. lebetina. (Zschr. Hyg. Sc

Infcktionskr. 120: 408; 1938).

24. Schottler, W. H. A. — Untersuchungen íiber Toxikologie und Serologie der europã-

ischen Ophiotoxine. (Zschr. Hyg. & Iníektionskr. 124: 141; 1942).

25. Schottler, W. H. A. — Die Grenzcn der Serumtherapie bei Bissen afrikanischer

Giftschlangen. (Dtsch. tropenmed. Zschr. 47: 81; 1943).

26. Schottler, W. H. A. — Bulgarischc Vipemgitte. (Zschr. Hvg. & Iníektionskr. 126-

187; 1944).

27. Schõttler. W. H. A.: — Toxicity of the principal snake venoms of Brazil. (Amer

J. Trop. Meti. 31: 489; 1951).

28. Schõttler. W. H. A. — Problcms of antivenin standardization. (Buli. World Health-

Org. 5: 293; 1952).

2'>. Schõttler, \\. H. A. Antihistamine, ACTH, cortisone, hydrocortisone and anesthctics

in snake bite. (Amer. J. Trop. Med. & Hyg. 3: 1083; 1954).

30. Schõttler, W. H. A. — Serological analysis of venoms and antivenins. (Buli.

World Health Org. 12 : 877; 1955).

31. Schwiegk, H. — Shock i-nd Kollaps. (Klin. Wschr. 21 : 741, 765; 1942).

32. Schwiegk. H.. & W. H. A. Schõttler — Krcislauívcrãnderungen nach Esmarchscher

Blutlcere. (Klin. Wschr. 22 : 477; 1943).

33. Tolksdorf. S.. M. H. McCready, D. R. McCullagh & E. Schwcnk _ The turbidimetric

assay of hyaluronidase. (J. Lab. & Clin. Med. 34 : 74; 1949).

34. Vcllard, J„ & F. Huidobro — Acción comparada de diversos venenos de oíidios

sobre la prcsión arterial. (Rcv. Soc. Argcnt. Biol. 17: 72; 1941).

35. Wada, H. — Pharmacological studies of snake (Agkistrodon bbmhoffi) venonr.

(Japan Med. World 6 : 308; 1926).

36. \\ crie, E., R. Kehl & K. Koebkc — Ubcr Bradykinin, Kallidin und Hypcrtcnsin.

(Biochem. Zschr. 320 : 373; 1950).

37. Witham, A. C. J. W. Remington & E. A. Lomba rd — Cardiovascular responses to-

rattlesnake venom. (Amer. J. Physiol. 173 : 535; 1953).

38. Zeller. E. A. — Enzymes of snake venoms and their biological significance. (,\dv*.

Enzymology 8: 459; 1948).

SciELO, ^

Mito. Inst. Butantan,

27 : 73 - 105 . 1955 / 6 .

W. H. A. SCHÜTTLER

Fic. I

Xccrosis of the eyc-ball provokcd by subcutaneus injection of a

ccrtain samplc of Bolhrops jararacussu Venom.

SciELO

11 12 13 14 15

102

MISCELLAXEOUS OBSERVATIONS OX SXAKE VENOMS

AND ANTIVEXINS

TabX-E IV

PERCENTAGE OF MORTALITY AS A FUNCTION OF SURVIVAL TIME

AFTER INJECTION OF LETHAL DOSES OF VENOM-ANTIVENIN MIXTURES

Type of antivcnin

Days aftcr injcction on which dcath occurrcd

Numbcr of

obscrvations

intravenous injcction

anti-altcrnata .

120

anti-atrox . ...

anti-cotiara .

s<;

303

anti-jararaca.

274

anti.jararacuü«*u .....

145

anti-ncuwicdii .

anti-Bothrops.

131

Wcightcd average

± 1.96 a

91±6

4+4

2+6

0+1

o±i

o±o

0+0

1136

B. »ubcutaneous injcction

anti-altrrnata .

147

anlratrox .

160

anti-cotiara.

162

anti-jararaca.. .

139

anti-jararacunsa.

325

anti-ncuwirdu.

150

Wcigh*cd avcrage

± l-96 ff

77 i 6

5+3

i±i

0±0

1+0

0+0

1083

SciELO

11 12 13 14

104

MtSCELLAXEOt-S OBSERVATIOXS ON SXAKE VEXOMS

AXD AXTIVEXIXS

Table VI

VARIOUS ÍNDICES OF BOTHROPS VENOM ACTIVITIES

Venom sample

Ordcr of toxicity

(range)

Subcutanenus

intravenous

Index

(range)

rog of venom

containing one

unit of hyalo-

Order of hyaluronidase

actiTily in one LD50

(range)

intravenous

subentaneous

ronidase acti-

vity

intravenous

subcutaneous

alternata L-8..

5.3

(1.1-20.5)

1.4

*0.7-2.6)

8.1

(3.1-26.2)

0.073

26.8

(11.5-42.2)

2.1

(1.52.9)

atrox L-ll ....

1.0

(0.4-1.6)

7.0

(2.3-13.3)

221.4

(84.0-755.2)

0.3S0

1.0

(9.4-1.5)

2.1

(1.3-2.9)

cotiara L*6....

5.7

(1.9-20.3)

2.1

(0.9-4.0)

11.5

(4.5-30.6)

0.05S

35.9

(19.1-52.4)

4.0

(2.3-5 7)

jararaca L-5...

4.5

(1.5-15.9)

1.0

(0.7-1.3)

7.1

(3.5-16.8*

0.030

54.3

(29.0-79.7)

3.8

(2.8-4.8)

« L-14..

3.3

(0.4-14.4)

1.4

(0.8-2.4)

13.4

(5.5-83.9*

0.030

24.0

4.843.2)

3.1

(2.53.9)

jararacussu L-7

1.1

(0.3-4. 1)

6.0

*2.7-11.6)

171.4

65.2-493. Sj

0.390

1.0

'0. 5-1.6)

1.7

(1.0-2.5)

. ui

1.3

(0.2-5.5)

3.0

(1.1-6.3)

74.S

(1S.S-596.9)

0.105

4.0

(0.9-7.9)

3.2

(1.5-5.0)

• IV

1.2

(0.2-6.2)

3.4

(1.2-7.2)

76.3

(19.0-609.9)

0.150

3.5

(0.7-6.2)

2.6

(1.2-4.0)

neuwicdii L*10

6.3

(1.1-26.5)

5.7

(2.7-10.8)

Ofl O

(9.9-141.2)

0.640

3.6

(1.0-6.2)

1.0

(0.6-1.4)

TABLE VII

ME AN SUBCÜTANEOUS :INTRAVENOUS ÍNDICES OF THE LD^s OF

VENOM-ANTIVENIN MIXTURES

Antivenins

Venom samplrs

alternata

L-8

atrox L-ll

cotiara L-6

jararaca

L-5

jararaca

L-14

jararacus-

$u L-7

neuwirdii

L-10

anti-alternata.

2.99

11.54

2.43

3.29

3.48

46.38

5.S6

anti-atrox.

3.46

7.26

2.70

2.64

2.31

10.36

5.05

3.58

19.34

5.72

5.49

2.77

18.83

13.72

anti-jararaca..

2.87

9.92

3.63

3.12

3.28

17.05

10.27

anti-jarara< ussu.

3.00

8.14

4.74

1.(2

2.»

6.28

9.89

anti-neuwiedii.

2.81

8.30

2.90

2.39

3.19

10.51

3.28

Average (1.96 a)

3 12 (0.57)

10.75 8.00

3.67*2.31)

3.09*2.35*

2.93 0.82)

18.33*26.44*

8.34 (.6.87)

SciELO

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

M.to. Inst. Buuntan,

27 : 107 - 120 . 1955 / 6 .

WOLFGANG BCCHERL

107

ESCORPIÕES E ESCORPIONISMO NO BRASIL

IV. Considerações em tonio de substâncias escorpionicidas e outras medidas de

combate aos escorpiões.

WOLFGANG BÜCHERL

(Laboratório de Zoologia Médica, Instituto Butantan )

INTRODUÇÃO

Desde 1949 temos realizado experiências para verificar até que ponto

se poderiam empregar substâncias insccticidas e outras medidas quaisquer no

combate às duas espécies de escorpiões mais comuns e perigosas, em nosso

meio, para o homem, o Tityus scrrulatus e o T. bahiensis.

De 1949 para cá foram feitos ensaios isolados.

Octavio de Magalhães (1) experimentou o D. D. T. Etiénne Sergent (2)

demonstrou as qualidades escorpicionicidas da mesma substância em realção a

alguns escorpiões africanos. Lordello (3) usou o Rhodiatox e o B. H. C.

Lopes da Silva (4) obteve resultados promissores no tocante ao D. D. T. e

principalmente o B. H. C, quando da campanha anti-cscorpiônica de Ribeirão

Preto. O Serviço de Profilaxia da Malaria veio confirmar estes resultados na

recente luta profilática de Belo Horizonte.

Não era interessante, evidentemente, repetir simplesmente o que já tinha

sido feito. Uma análise acurada, porém, dos resultados globais, obtidos com

êstes insecticidas na luta contra os escorpiões, deixava entrever certas falhas, a

exigir maior número de experiências, em ambiente de trabalho mais favorável,

com testes de critica mais precisos e, antes de tudo, com maior número de

escorpiões por experiência, fazendo-se acompanhar a cada ensaio com o mesmo

número de testemunhas, mantidos, o mais possível, nas mesmas condições de

ambiente. No cômputo do cálculo final dos sucumbidos pela substância escor-

pionicida, podem, então, ser deduzidos os de morte natural.

Recebido, para publicação, em 23.1.1956.

ISciELO

0 11 12 13 14 15 16

10S

ESCORPIÕES E ESCORPIOXTSMO XO BRASIL. IV

Em quase nenhum dos ensaios, exetuado até certo ponto o de Sergent (2),

considerou-se a natureza do escorpião. As duas espécies brasileiras, acima cita¬

das, têm algo de sombrio e misterioso em seus hábitos de vida. Podem ficar

imobilizadas períeitamente semanas a fio, dia e noite, invisíveis e inexistentes

para o homem e podem também, como que a um comando secreto, abandonar

em massa seus esconderijos, invadindo em célere marcha noturna as habitações

humanas.

Aprendemos, em nossa já longa lida com escorpiões vivos, que uma ausência

não pode ser interpretada com inexistência déstes aracnídeos.

Contudo, é hoje ponto pacifico que, em ensaios “i'w zntro " ou em caixas

fechadas, onde não era possível fugir-se, sucumbem pràcticamente todos os

escorpiões, quer se aplique o D. D. T. ou Gammexane ou ainda o Rhodiatox,

seja após mistura do princípio ativo a um pó inerte ou per pincelagem ou

pulvenização do insecticida pelos recipientes. O tempo de sobrevivência depende

apenas das concentrações empregadas.

Xestas condições, o xilol, o clorofórmio, a naftalina, a gasolina vaporizada

têm-se revelado excelentes escorpionicidas, embora quase ineficazes já em reci¬

pientes arejados e de ação pràcticamente nula em condições naturais (5 ).

Experiências em laboratório, mas adaptadas às condições do habitat natural

dêstes aracnídeos, conduzidas com o D. D. T„ e Gammexane e o Rhodiatox. nem

sempre foram de molde a garantir um êxito 100/f • Yeri ficámos isto em ensaios

próprios, oriundos de suspeitas, quando acompanhamos de perto a desinfecção

de Ribeirão Preto e de Belo Horizonte. Os triunfos cantados em face das várias

centenas e mesmo milhares de aracnídeos mortos ou capturados e trazidos aos

“quarteis-generais" da campanha pela população prestimosa e desafogada, pare¬

ciam -nos algo prematuros, embora a mortalidade escorpiônica tivesse sido real¬

mente impressionante, tendo decaido igualmente a cifra dos acidentados. Mesmo

então não nos parecia o “escorpionismo um problema resolvido”. Realmente,

receberam as nossas suspeitas confirmação alguns anos depois de Ribeirão Preto,

onde o Pronto Socorro Municipal, sob a eficiente direção do I)r. Chiarello, teve

o desprazer de registrar os seguintes algarismos de acidentes humanos por T.

scrrulatus:

1945 .

48 acidentes,

1946 .

65 acidentes.

1947 .

83 acidentes,

194S .

196 acidentes,

1949 .

330 acidentes,

1950 (l.° semestre) _

263 acidentes.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Menn- Inst. Butantan,

27:107-120. 1955/6.

WOLFGAXG BÜCHERL

109

Em 14 de Junho até fins de Julho de 1950 verificou-se a campanha inten¬

siva, escorpionicida, desinfectando-se 798.590m 2 de muros, cercas, prédios, ruas,

quintais, galerias pluviais, etc. e gastando-se 2.129 Kg de B. H. C. a 10% e

200Kg. de D. D. T. a 30% (4). Entretanto, apesar de tudo isto, mantinham-se

os acidentes humanos, socorridos pelo Pronto Socorro, em 1951 e 1952 em tomo

de 200.

Lm facto paralelo parece verificar-se em Belo Horizonte, onde apesar das

campanhas escorpionicidas e apesar da diminuição dos acidentes humanos, foram

coletados e en\iados ao Instituto Butantan, durante o ano de 1955, nada menos

do que 40.000 “telsa” de T. serrulatus.

MATERIAL E MÉTODO

Em cada ensaio vimos empregando S Tityus serrulatus e 8 Tityus bahiensis

adultos, acompanhdos do mesmo número de testemunhas para a verificação da

mortalidade natural. Os testemunhas foram mantidos em condições de ambiente

iguais aos escorpiões sob ensaio, exeto o contacto com a substância a ser ensaiada.

Como “escorpionicidas” empregámos o Dicloro-difenil-tricloro-etano ou

D. D. T„ o tiofosfato de dietil paranitrofenila ou Rhodiatox e o hexacloreto de

benzeno ou B. H. C. (Gammexane), em suspensões aquosas ou em pó, pesando-sc,

antes de cada ensaio, tanto a substância activa como o veículo, ou medindo-se o

' olunie ce água de suspensão. Julgamos esta precaução de grande importância.

De um lado, porque outros nem sempre se tinham dado conta da quantidade

de insecticida realmente empregada, ainda que tivessem declarado a porcentagem

das suspensões ou dos pós. Por outro lado, poderiam surgir normas sôbre as

diluições eficientes dos insecticidas, evitando gastos inúteis com concentrações

maiores.

A ordem dos ensaios foi estabelecida da seguinte maneira:

A. Por contacto direto do insecticida com o escorpião:

a) contacto permanente:

Xo chão do recipiente era espalhado determinado volume de sub¬

stancia a ensaiar, permanecendo os escorpiões no mesmo recipiente,

enquanto viviam ou até que tornassem a alimentar-se, não mais

se ressentindo da toxicidade. Temos omitido propositadamente a

pincelagem do material sôbre o corpo do escorpião ou a submersão

do aracnídeo na suspensão, por ser já garantido o contacto direto

5 6

0 11 12 13 14 15 16

110

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL. IV

(com as pernas e o ventre) e ainda porque julgamos êstes dois

processos artificiais em demasia.

b) contacto temporário :

Os escorpiões permaneciam no recinto, cujo chão estava impregna¬

do com o insecticida apenas durante 10 minutos, 30 minutos, 1

hora e 5 horas: Removia-se depois qualquer vestígio da substância

tóxica por lavagem e submersões dos escorpiões em água. Os lotes

de testemunhas também eram submetidos aos banhos em água.

c) contacto tardio:

Sem nova edição de insecticida eram as caixas expostas ao sol, à

chuva e aos ventos, permanecendo, em média 8 a 15 dias ao relento.

Depois colocaram-se nelas os 16 escorpiões com permanência du¬

rante 24 horas, sendo em seguida removidos para ambiente normal.

Afigurava-se-nos que, se por ventura ainda fosse verificada qual¬

quer “acção residual’*, deveriam os escorpiões ressentir-se dela já

dentro de 24 horas, procurando, então, a salvação na fuga.

B. Em ambiente, o mais possível, natural:

Com alguns tijolos, cacos de telha, pedaços de reboco endurecido, algumas

cascas de árvore, um pouco de terra arenosa, um tufo de grama fazia-se um

“esconderijo” natural de 40 cm de diâmetro, mais ou menos, dentro de uma

caixa de 2 metros de comprimento por 90 cm de largura e 30 cm de altura,

com paredes de vidro e tampas superiores de telas de arejamento. A certa

distância eram instalados mais dois outros esconderijos semelhantes.

Bi: Pulverização (pela superfície externa, frestas e fendas de um dos escon¬

derijos, sob o qual tínhamos alojado os escorpiões momentos antes) de

um volume medido de insecticida.

Permitia-se aos escorpiões, acossados, que abandonassem a zona perigosa,

instalando-se sob os outros “montículos”, livres de tóxicos.

B 2 : Com um regador espalhava-se abundante água sóbre o esconderijo enve¬

nenado, a imitar, p. ex., uma pequena área de horta, tratada com insecticida,

mas submetida a chuvas. 8 dias depois colocavam-se os 16 escorpiões, que

também neste ensaio podiam refugiar-se sob os outros 2 esconderijos na¬

turais, caso se sentissem intoxicados no primeiro.

2 3 4

5 6 7

11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan,

27 : 107 - 120 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

111

Tanto os animais “sub experientia” como os testemunhas ti nham sempre

água potável à disposição. Terminada uma experiência com uma substância ou

uma diluição, lavavam-se os viveiros com abundante água, em operações repetidas.

Depois colocavam-se alguns escorpiões neles com alimento e água, etc., para se

ter a certeza da inocuidade dos recipientes. Somente em seguida empregavam-se

os mesmos para nova experiência.

As manipulações das substâncias tóxicas faziam-se longe do recinto das

experimentações, para evitar que possíveis emanações viessem a alterar os

resultados.

O tempo de observação dos “candidatos” extendia-se até a morte ou até

que os sobreviventes encetassem novamente vida normal, com aceitação de

alimento, etc..

RESULTADOS

I. Com o Rhodiatox: — (em suspensão aquosa)

Tempo de contacto

Gramas de subs¬

tância por 'm*

Animais de experiência

Testemunhas

intoxicados

mortos

permanente .

0.13

5 b. e 3 s.

4 b. e 2 s.

3 b. e 1 s.

(123

10 minutos .

0.25

2 b. e 3 ..

1 b.

i >.

30 minutos .

0.25

3 b. e 2 >.

2 b. e 1 s.

2 b.

1 hora .

0,26

5 b. e 4 s.

5 b. s 4 s.

2 b. e t *.

5 horas .

0,25

7 b. e 6 s.

6 b. e 5 s.

_ _

cont. tardio .

0,13

2 b. e 2 i.

1 b. e 1 s.

2 b. e 1 t.

B 1 .

0,25

4 b. e 3 >.

4 b. e 3 i.

1 b.

B 2 .

0.25

2 b. e 2 i.

2 b. e 1 «.

b. = Tityus bahiensis. s = Tityus serrulatus

O contacto direto de 10 minutos, o contacto tardio e o ensaio 132 revelam a

pouca possibilidade do Rhodiatox, fora de casa.

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

112

ESCORPIÕES E ESCORPIONISMO XO BRASIL, IV

II. Com o D. D. T. em suspensão aquosa:

Gramas de subs-

Animais de experiência

Testemunhas

Tempo de contacto

• 9

táncia por m*

intoxicados

mortos

permanente.

0,5

4 b. e 5 s.

3 b. e 3 s.

— -

permanente.

1,0

5 b. e 4 s.

5 b. e 3 s.

2 b. e 1 s.

permanente.

2,0

8b. e 8 s.

8 h. e 7 s.

—

10 minutos.

2,0

0 b. e 2 s*

0 b. e 0 s.

1 b.

30 minutos.

2,0

6 b. e 5 s.

3 b. e 2 s.

— —

2.0

7 b. e 6 s.

5 b. e 5 s.

1 b.

5 horas . .

2,0

8 b. e 8 s.

7 b. c 6 s.

1 b. e 1 s.

cont. tardio.

2,0

2 b. e 1 o.

1 b. e 1 s.

2 b. r 2 *.

B 1 .

2.0

. e 4 s.

5 b. e 4 s.

1 b. e 1 s.

b 2 .;.

24)

1 b. e 2 s.

2 b. e 2 s.

1 b. e 2 s.

O D. D. T. é superior ao Rhodiatox, quando em concentração perto de 2 g

de substância ativa por metro quadrado. Precisa, entretanto, estar em contacto

direto pelo menos por 30 minutos com o corpo do escorpião. Pelo sol e as

chuvas seu poder escorpionicida se extingue rapidamente.

III. Com o D. D. T. em pó, com 5% do princípio ativo:

Em nossa lida com os escorpiões temos verificado que êles costumam

ajuntar-se invariavelmente sob qualquer esconderijo, que os abrigue da luz. A

fotofobia é mesmo tão pronunciada que êles se escondem sob cartões quadrados,

de bordos dobrados para baixo, apesar de estar presente sob êstes esconderijos

uma substância tóxica.

Apenas 10 gramas do pó de D. D. T. com 5fc de substância ativa foram

espalhados sob 2 cartões (5 gramas sob cada um). Xão sentem os escorpiões

nenhuma repulsa ao insecticida, chegando a refugiar-se da luz sob os cartões

e a deitar-se directamente sôbre o tóxico, resultando disto um contacto directo

permanente, de maneira que pudemos dispensar ensaios do contacto temporário.

Resultados: — Dentro de 3 dias sucumbiram todos os 16 escorpiões. Os

sinais de intoxicação (tremores das pernas e da cauda, movimento convulsivo

das pernas, dos pentes, abaixamento total da cauda, dedos das mãos abertos,

marcha titubeante, com a cauda extendida e quedas por desequilíbrio, finalmente

extensão completa sôbre o dorso ou o ventre) se estabeleciam após mais ou menos

3 horas de contacto. A agonia era longa, perdurando até dois dias.

Sem renovar o insecticida sob os cartões repetia-se a experiência, após 2

semanas e 1 mês, sucumbindo novamente todos os 16 escorpiões. Após a expo-

2 3 4

5 6 7

11 12 13 14 15 16

Mesn. Inst. Butantan,

27 : 107 - 120 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BÜCHERL

113

sição do viveiro ao sol e à chuva e renovação dos cartões, não se via mais

vestígio do pó e dos 16 escorpiões sucumbiram apenas 3 b. e 2 s., dentro de

8 a 27 dias, morrendo neste tempo 3 b. e 2 s. dos testemunhas.

IV. Com o B. H. C. em pó, com 1% de isõmero gamma:

As condições das experiências foram idênticas às do D. D. T. em pó; os

resultados davam sempre, durante 2 mêses (4 ensaios), uma mortalidade de

100/í). Após meia hora os escorpiões abandonavam, já intoxicados, os escon¬

derijos, mas tornavam a voltar a êles. Morriam de costas, com abdômen flácido

e as pernas em flexão. Todos tinham insecticida aderido ao ventre.

O sol e a chuva neutralizavam também os efeitos dêste insecticida.

V. Com o B. C. H., em suspensão aquosa de 0,1 g, 0,5 g e 1,0 g de isomêro

gamma por metro de superfície:

Gramas de subs¬

tância por m~

Animais de experiência

Testemunhas

Tempo de contado

intoxicados

mortos

permanente..

0,1

6 b. c 6 s.

5 b. s 4 s.

2 b. c 2 *.

permanente .

8 b. e 8 s.

— —

permanente .

1.0

8 b. e 8 s.

8 b. e 8 ».

- —

10 minutos .

0.50

8 b. e 8 *.

6 b. e 5 s.

1 b. —

30 minutos .

050

8 b. c 8 s.

7 b. e 7 s.

— —

1 hora.

0.50

Sb.cSi.

8 b. e 8 ».

— —

cont. tardio.

0,50

4 b. e 2 ».

4 b. c 2 *.

2 b. e 2 *.

B 1 .

o/a

Sb.rHi.

7 b. e 5 s.

1 b. e 2 ».

B 2 .

050

4 b. e 3 s.

5 b. e 4 s.

2 b. c 1 s.

Também o B. H. C, sem dúvida o cscorpionicida mais enérgico entre os

ensaiados, tanto em pó como em suspensão aquosa, não mata 100/í> quando

em ambiente natural. Também êle é enfraquecido e mesmo neutralizado sob a

ação das chuvas. Intoxica, entretanto, muito mais rapidamente do que o D. D.

T.; o fato, entretanto, de agir também como repelente, pois faz que os escorpiões

empreendam a fuga, parece—nos uma desvantagem.

DEDUÇÕES DOS RESULTADOS

As experiências demonstram daramente:

a) que deve haver contacto direto entre o insecticida e o corpo do escorpião;

b) que êste contacto deve ser pelo menos de 1 hora com B. H. C., de mais de

5 horas com o D. D. T. e o Rhodiatox;

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

114

ESCORPIÕES E ESCORPIOX1SMO XO BRASIL, IV

c) que nas suspensões aquosas se obtém resultado bom somente com meio

grama de B. H. C., com 2 gramas de D. D. T. e com mais de meio grama

de Rhodiatox por metro quadrado?

d) que os três insecticidas perdem ràpidamcntc sua atividade, quando espalha¬

dos em áreas, sujeitas a chuvas, ventos e sol;

e) que, sob a forma de pó, o D. D. T. com 0,25 g. de dicloro-diíenil-tricloro-

etano em cada 5 g. de pó inerte e o B. H. C. com 0,05 g. de isômero

gannna por 5 g. de pó inerte constituem os escorpionicidas por excelência,

com uma ação residual suficiente por várias semanas, quando ao abrigo

das chuvas e da luz.

As campanhas realizadas em Ribeirão Preto e em Belo Horizonte não

puderam acabar com os escorpiões, porque uma grande percentagem destes

aracnídeos não foi atingida diretamente e ainda porque a ação dos insecticidas

fora neutralizada em breve tempo pela ação das chuvas, do sol e dos ventos.

Xestas circunstâncias não seria lógico pensar-se em dar combate aos escor¬

piões no próprio campo. Após cada queda de chuva deveria repassar-se o

insecticida. Há a considerar ainda que o escorpião, principalmente o T. ba-

hiensis, costuma viver até 2 metros dentro da terra, sob cupins, em buracos

profundos, cavados por outros animais, em fendas e rachaduras do solo, onde

jamais é atingido diretamente por nenhum destes insecticidas. O mesmo ocorre

naturalmente nos quintais, nas hortas e nos jardins das habitações humanas.

Dai êles são transportados pelo homem para junto de sua habitação ou

diretamente para dentro dela com a lenha, os tijolos, as madeiras, as forra¬

gens, etc.. Muitas vêzes éles chegam à habitação humana, porque o próprio

homem constroi sua casa diretamente por cima do "habitat” escorpiônico, como

verificamos repetidas vêzes no Pacaembú, Pacaembíizinho, nas encostas do

Sumaré, Jardim Paulista e Cidade Jardim, todos bairros da Capital de S. Paulo.

Da necessidade do contacto direto do tóxico e de sua neutralização pelas

chuvas, dos hábitos de vida deste aracnideo omnipresente e ausente ao mesmo

tempo, deduz-se que o combate eficiente ao escorpionismo é complexo.

O escorpião é muito ardiloso. Pode esperar escondido dias, semanas e

meses; ]>ode simular uma perfeita ausência, principalmente no inverno e nos

mêses precedentes e seguintes ao inverno. De repente, no verão, ele aparece den¬

tro dos globos de lúz, pendentes do tecto, no banheiro, completamente azulejado e

ladrilhado, em torno do tanque e do W.C. do quintal.

A nossa luta contra ele deve ser também ardilosa e paciente, prolongada por

mêses e anos. Deve ser feita dentro da casa e nos quintais em lugares abrigados

da chuva.

Mtm. I nst. Butar.tan,

27 : 107 - 120 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

115

A melhor maneira, adaptada às tendências do escorpião e de resultados

realmente seguros, tanto em residências ricas como em habitações modestas,

consiste em adquirir um meio kilo de D. D. T. ou Gammexane em pó. Adqui¬

rem-se ainda algumas íollias de papelão preto, do qual se cortam quadrados de

10 x 15 cm. de lado. Dobram-se então três bordos para baixo, na largura de

1 cm. apenas, deixando-se um lado aberto como “entrada”. Ao longo da

parede interna da casa, directamente encostado nela, colocam-se um ou dois dêstes

“esconderijos”, espalhando-se por baixo dêle, directamente no chão, o pó insecti-

cida, em camada muito fina.

Após limpeza geral, renova-se a camada de pó, fazendo-se o mesmo em

cada 2.° mês. Basta uma das armadilhas em cada cômodo, no banheiro, no

porão, alpendre, etc.; e após dias, semanas ou mêses, veremos aparecer escor¬

piões mortos ou agonizantes.

Os ensaios com o pó do D. D. T. e do B. H. C. não deixam dúvida a

respeito. Como não liá luz direta nem chuva, os insecticidas conservam sua

ação durante semanas. O escorpião, por seu turno, tem tanta atração pelo escuro

em suas marchas ao longo das paredes, que se refugia imediata e irresistivelmente

nestes esconderijos. Tendo apenas 1 cm. de altura, obrigam-no a deitar-se, de

maneira que seu ventre e a própria cauda entram em contacto imediato com a

substância tóxica.

Nos citados bairros da Capital de São Paulo houve franco entusiasmo por

êste método barato, pouco trabalhoso e sumamente eficiente.

OUTROS MF.IOS DE COMBATE AOS ESCORPIÕES

Há uma infinidade de recursos e de métodos que podem convergir no

combate aos escorpiões.

Entre os animais ocasionalmente escorpionivoros sobressaem a galinha do¬

méstica e o sapo (Bufo marimts marimts e B. vi. paracnemis).

A galinha, embora durma quando o escorpião é activo, costuma nas hortas

e nos quintais da população suburbana devorar um considerável número de escor¬

piões, escondidos de dia sob folhas, cascas e pequenos pedaços de detrito.

O sapo enfrenta o escorpião, persegue-o mesmo de noite e o devora sem

maiores dificuldades. Temos observado repetidas vêzes que o sapo, antes de

dar o golpe certeiro, examina o escorpião como que a verificar o melhor

“jeito” para engulir o aracnídeo.

Uma das melhores possibilidades de combater os escorpiões reside, a nosso

ver, na construção das casas pouco propícias a êste. Julgamos êste ponto de

grande importância. Acreditamos mesmo ser necessário, em zonas onde há êste

problema, que nas escolas de engenharia se administrem algumas instruções aos

■engenheirandos, para que construam casas somente com muros lisos e comple-

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

116

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, IV

tamente rebocados; não permitam adornos de madeira, muros lisos de simples

tijolos, sem reboco, revestimentos com granito, sem enchimento seguro dos

vãos com argamassa de cal, areia e cimento.

A instrução do povo e das crianças escolares sôbre o modo de proceder

em face do escorpionismo é sumamente importante. Se nos quintais das mora¬

dias da população menos favorecida de Belo Horizonte, de Ouro Preto, Mariana,

Aparecida etc., não houvesse o mais variado depósito de “cacarecos” velhos

(alguns tijolos empilhados, táboas sobrepostas, chapas de folhas empilhadas em

porões abertos, canteiros delimitados por fileiras de pedras ou tijolos soltos, etc.),

fácil seria mantê-los limpos e menos numerosos seriam os esconderijos natu¬

rais dos escorpiões.

A captura dos escorpiões merece lugar de destaque entre as medidas pro¬

filáticas mais eficientes.

Relatam E. Dias e colaboradores (5) que o Instituto Oswaldo Cruz de

Belo Horizonte tem adquirido, em 6 anos, nada menos de 107.533 escorpiões

vivos ou mortos somente da cidade de Belo Horizonte.

O Instituto Butantan, no período de 1950 a 1955, recebeu por compra directa

ou permuta contra sôros 107.542 escorpiões ou sejam 63.218 “telsa” de Tityus

scrralatus, 30.727 “telsa” de T. bahiensis e 3.902 T. serrulatus e 9.695 T. baltien-

sis vivos.

Pela captura de uma fémea adulta pode evitar-se a existência de mais 15

ou 25 filhotes no ano seguinte.

CONCLUSÃO

Nas regiões brasileiras, onde existe o problema do escorpionismo, pode ser

controlado e reduzido a proporções toleráveis, não tanto por campanhas espo¬

rádicas de exterminação, mas principalmenle pela ação persistente e ininterrupta,

de cada habitante e do povo em geral.

De acordo com os hábitos dos escorpiões de refugiar-se da luz diurna sob

qualquer lugar baixo que garanta escuridão, constitui medida econômica e fácil

espalhar-se 1 g. de D. D. T. ou Gammexane em pó diretamente no chão, ao

longo das paredes internas, numa área de 10 a 15 cm. quadrados colocando-se por

cima pequenos papelões quadrados, com lcm. de altura apenas, para que os

escorpiões se possam refugiar sob os mesmos, chegando em contacto direto

com o insecticida.

Recursos outros, como a captura direta, a construção da moradias humanas

pouco habitáveis para os escorpiões, com uma faixa solidamente cimentada em

torno, com muros, paredes e forros sem fendas ou rachaduras, meticulosamente

rebocados e alisados, sem obras de arte de madeira, sem plantas rasteiras ou

trepadeiras pelos muros, a proteção do sapo e da galinha (quando outras

circunstâncias concorram para que êstes dois animais possam ser tolerados ao

Mem. Inst. Butantan,

27:107-120. 19S5/6.

WOLFGANG BCCHERL

117

redor do homem), constituem outros tantos fatores a ajudar o homem na luta

contra os escorpiões.

RESUMO

Estudos experimentais sôbre o Rhodiatox, o D. D. T. e o Gammexane são

apresentados para verificação de seu poder escorpionicida sôbre as duas espécies

brasileiras, o Tityus scrrulatus e o T. bahictisis.

O Rhodiatox em suspensão aquosa, na concentração de 0,25 g. por metro 2

de superfície não chega a matar mais do que 70% dos escorpiões, mesmo

quando em contacto direto de pelo menos 5 horas.

O D. D. T. em suspensão aquosa, com 2 g. de substância atira por metro

quadrado, mata entre 90 a 95%, quando em contacto direto de pelo menos 5 horas.

O Gammexane, em suspensão aquosa, na concentração de 0,5 g. por metro 2

de superfície, mata pràticamente 100% dos escorpiões, quando em contacto di¬

reto de pelo menos 1 hora.

Não se verificando, entretanto, contacto direto, nenhum dos 3 insccticidas,

nas concentrações referidas, pode ser considerado satisfatório. A mesma defi¬

ciência ocorre quando êstas substâncias sofrem os efeitos da chuva, do sol e de

outras condições atmosféricas, inclusive a secagem dentro das casas, parecendo-

nos que as suspensões aquosas além de serem de custo elevado, quando espalhadas

a esmo e por áreas extensas, não venham a constituir método ideal para

combater êstes aracnídeos.

O D. D. T. cm pó, entretanto, com 5% de principio ativo, ou o B. H. C.

cm pó, com apenas 1% de isòmero gama por metro quadrado, espalhados um

ou outro no chão, sob pequenos cartões, na quantidade de 1 g. apenas para

cada cartão, colocados ao longo das paredes internas ou externamente ao abrigo

das chuvas, devem ser considerados escorpionicidas com lOOJo de atividade.

Também aqui o escorpião deve chegar em contacto direto com a substância

tóxica. A permanência destes esconderijos nos cômodos nas habitações hu¬

manas durante mêses e talvez anos c a renovação do insccticida cada segundo

mês, garante, quase com certeza, que algum dia o escorpião, em suas peregri¬

nações noturnas pela casa, se refugie da luz matinal sob um dos cartões, esta¬

belecendo o contacto mortifero.

Esta maneira, de agir constitui um método prático e pouco trabalhoso;

implica diminutos gastos e reduz, com o tempo, ao mínimo o problema do escor-

pionismo.

SUMMARY

Experimental studies on the effect of insecticides on the 2 most common

scorpions, in S. Brazil, Tityus scrrulatus and T. bahiensis, are presented in this

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

11S

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, IV

paper. The íollowing insecticides were investigated : Diethyl-paranitrophenyl-

thiophosphate (Rhodiatox), dichlorodiphenyl-trichloroethane (D. D. T.) and

benzene hexachloride (Gammexane).

Rhodiatox, suspended in water and sprayed in a concentration of 0,25 g

per square meter, kills about 70% of scorpions, after direct contact for more

than 5 hours.

D. D. T., suspended in water and aprayed in a concentration of 2 g. of

active substance per square meter, kills about 90 — 95% of scorpions, after

direct contact of 5 hours.

Gammexane, suspended in water, in a concentration of 0,5 g. per square

meter, kills practically all scorpions, after a direct contact for 1 hour.

If no direct contact exists between the Chemical and the arthropod or ií the

three insecticides are exposed to rain, wind, sun or other climatic conditions,

these concentrations are no more efíective.

D. D. T. powder with 5% of the active principie, and gammexane with

1% of the gaiiima isomer for square meter seem to be the best substances for

killing nearly all scorpions. The following technique for using the insecticides

has been found very effective in our experiments: Little lwxes (10 to 15 cm.

on each side and 1 cm high, one face open) are constructed with black paper

and placed arround the internai walls of each room of the house. The insecticide

is sprayed on the ground, one gram under each box, and renewed every 4 months.

The scorpions, walking from room to room during night, always use the boxes

to protect themselves from the daylight and thus carne into direct contact with

the insecticides spray.

Our experiments show that 100% of these are killed in this simple and

practical way.

Under these conditions it is advisable that. in such localities aíflicted hy

scorpionism as Belo Horizonte, Ouro Preto, Mariana and Passagem, all in

the State of Minas Gerais, Ribeirão Preto, Pontal and Aparecida do Norte in

the State of S. Paulo, the problem can be greatly reduced if those boxes are

permanently placed in all houses, rooms and gardens and protected from direct

rain and daylight.

ZUSAMMEXFASSUNG

In dieser Arbeit werden Yersuche mit einigen der modemen Schàdlingsbekãm-

pfungsmittel gegen die beiden giítigsten brasilianische Skorpione, den Tityus

sernilatus und den T. balticnsis, dargelegt.

Das Diaethyl-Paranitrophaenyl-Thiophosphat oder Rhodiatox, das Dichlor-

Dipliaenyl-Trichloraethan oder D. D. T. und das Benzen-Haxachlorid oder

Gammexan wurden versucht.

Mero- Inst- Bataiitan,

27 : 107 - 120 - 1955 , 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

119

Das in Wasser emulsionierte Rhodiatox, tõtet, bei einer Konzentration von

0,25 g. pro Quadratmeter, nur bis 70% de Skorpione, wenn es mindestens 5

Stunden lang in direktem Kontakt mit diesen gelangt ist.

Das in Wasser aufgelõste D. D. T. und mit einer Konzentration von 2 g. des

wirksamen Prinzipes pro Quadratmeter, kann schon 90 bis 95% der Skorpione

tõten, wenn es eben falis wenigstens 5 Stunden lang in direktem Kontakt mit

diesen gekommen ist.

Das in Wassr suspendierte Gammexan tõtet schon in einer Konzentration

vom 0,5 g. des Gamma Isomers pro Quadratmeter an die 100% aller Skorpione,

wenn es wenigstens 1 Stunde lang in direktem Kontakt mit diesen war.

Kommt es jedoch zu keinem direktem Kontakt oder trocknen diese drei

in \\ asser emulsionierten Substanzen aus oder werden durch Regen, Sonne,

W ind und andere klimatische \'erhâltnisse beeinílusst, kann keine der Dreien

mehr ais bcfricdigend angesehen werden.

An Hand der Tatsache, dass diesse Bekàmpfungsmittel direkt mit dem

Kórper der Skorpione in Berührung kommen müssen und dass sie andererseits,

liauptsãchlich durch Regen und Sonne baldigst unschãdlich gemacht werden,

liat. Verfasser geine Methode ausgearbeitet, die diesen beiden Postulaten weitest

gerecht wird und die, wie experimentell durch Versuchsreihen gezeigt werden

konnte, auch tatsáchlich die Skorpionplage auf ein zulãssiges Minimus herabdrü-

cken kann.

Aus schwarzem Pappkarton werden 10 bis 15 cm. lange und breite Vierccke

herausgeschnitten. An drei Seiten wird 1 cm breiter Rand nach unten gebogen,

wãhrend die vierte Seite offcn gelassen wird. Man streut dann etwa ein

Gramn D. D. T., mit 5% der aktiven Substanz oder 1 Gramm Gammexan mit

1% Gamma Isomer, in Pulvcrfonn direkt aui den Boden, und zwar den inneren

Hauswãnden cntlang und setzt iiber dieses Pulver die angeíertigten \ r erstecke.

In sehr verseuchten stãdtischen Bezirken, wie in Belo Horizonte, Ouro

Preto, Mariana, Passagem, etc., iin Staate von Minas Gerais oder in Ribeirão

Preto, Pontal. Aparecida do Norte, etc., im Staate von São Paulo, empfiehlt cs

sich, mõglichst viele solcher Unterschliipfe in jedem Raume des Inneren der

Wohnliãuser und auch im Garten (geschützt vor Regen und Sonne) aiuubringen.

Alie zwei Monate ist die wirksame Substanz zu erneuern und die Verstecke

sollen monate oder jahrelang aufgestellt werden.

Es ist eine allen Fachleuten bekannte Tatsache, dass die Skorpione nur des

Xachts die Hauser und Gãarten durchstreifen, sei es auf der Suche nach Bcute

oder, um einen anderen, mehr zusagenden Wohnsitz zu finden. Vom Tageslicht

überrascht, suchen sir sich immer ein dunkles Versteck. Dabei laufen sie

regelmãassig den Wãnden entlang. Da aufgestellte Unterschlüpfe werden auch

sofort benützt und der Skorpion pflegt selbst dann darin zu bleiben, wenn auch

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

120

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL. IV

D. D. T. order Gammexan in Pulveríorm darin ausgestreut wurd. Durch die

geringe Hõhe der Kartons, pflegen sich die Tiere' hinzulegen und kommen so

mit diesen Substanzen in unmittelbaren Kontakt nnd werden auch tatsãchlicli

100%-ig getõtet.

Die ãusserst einiache Methode kann von jedermann ausgeführt werden

und dürfte die billigste und wirksamste Form darstellen, um der Skorpionplage

in den genannten Stãdten allmãhlich Herr zu werden.

BIBLIOGRAFIA

1. Magalhães, O. de — Combate ao escorpionismo. Mem. Inst. O. Cruz +1(3) : 425-439,

1946.

2. Sérgent, E. _ De 1’utilisation du D. D. T. contre les Scorpions. Arch. InsL Pasteur

d’Algèrie 26(4): 397-401; 1948.

3. Lordello, L. G. E. — Notícia premilinar sôbre a ação do B. H. C e do Rhodiatox

nos escorpiões T. bahicnsis e T. serrulalus. Rev. Agricult. Piracicaba 25(11-12) :

367-380, 1950.

4. Silva Lopes, T. — Escorpionismo em Ribeirão Preto. Arq. Hig. Saúde Pública,

S. Paulo, 15:79-90, 1950.

5. Dias, E., Libano, S. e Lisboa, M. — Lucta contra os escorpiões. Mem. Inst. O. Cruz

17:17-44, 1924.

6. Bücherl, W. — Manutenção de escorpiões em viveiros e extração de veneno. Me.

Inst. Butantan 25(1) : 53-82, 1953.

_ Atividade das peçonhas de Tilyus serrulalus e T. baJiiensis sôbre camundongos. Mem.

Inst Butantan 25(1) : 83-108, 1953.

— Studicn über einige brasilianische Skorpione und ihre Trocken giíte. Arzneim.

— Forsch. 5:68-72, 1955.

M rm. Inst. Batartan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGAKG BÜCHERL

121

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL

V. Observações sôbre o aparelho reprodutor masculino e o acasalamento de

Tityus trivittatus e Tityus bahicnsis.

WOLFGAXG BÜCHERL

{Laboratório de Zoologia Médica, Instituto Butantan)

INTRODUÇÃO

Foram relativamente poucos os pesquisadores a preocupar-se com o estudo

da morfologia e anatomia do aparelho genital dos escorpiões em geral e do

comportamento dos mesmos no acasalamento.

Não houve maior dificuldade na descrição morfológica dos testículos, como

dois tubos esbranquiçados, com ramificações transversais e uma longitudinal,

anastomosadas. Surgiram, entretanto, pontos de vista divergentes no tocante

aos condutos eíerentes dos testículos.

Pawlowsky (1), Wemer (2) e Vachon (3) designaram estas partes com

o nome costumeiro de “vasos deferentes”. Piza (4), entretanto, tem constatado

que, pelo menos o trecho próximo aos testículos podia exercer função gameto-

gênica (7) e que esta atividade só cessaria temporariamente, quando o excesso

de produção de espermatozóides obrigaria êste trecho a servir de depósito aos

mesmos, funcionando então como “vesícula seminal suplementar” (5; 6).

As opiniões foram ainda mais desencontradas no tocante aos dois órgãos

genitais, localizados na parte anterior do pre-abdomen, um de cada lado. Dufour

(8) e Blanchard (9) designaram os dois orgãos com os nomes de “canais do

penis” (furreaux des verges), atribuindo-lhes função precipua no acasalamento.

Pawlowsky (1), entretanto, num exaustivo estudo comparativo sôbre o

aparelho genital dos machos de Scorpio maurus, Bathus cupcus, Hetcrovictrus

cyancus, Isomctrus maculatus, Lychas mucronatus, Tityus cambridgei, Centrurus

margaritatus, Uroplcctes triangulifer, Urodacus inanicatus, Calchas Aordmanm,

Recebido, para publicação, em 27.III.1956.

■'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

122

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL. V

Hcmiscorpio lepturus, Opisthacaiitlius clatus, Brotcas granimanus, Vejovis

spinigerus, Bolhriurus vittatus e de muitas outras espécies, afirmou positiva¬

mente que os dois orgãos nada tinham que ver com o acasalamento. As “lâmi¬

nas” estreitas, longas e de côr marron, que transparecem através da membrana

envolvente e interpretadas por Blanchard e Dufour como orgãos copuladores,

quitinizados, serviriam na realidade apenas como “armações” internas, para

manter o conjunto de órgãos em sua posição normal.

Chamou ao conjunto de “órgãos paraxiais” (Paraxialorgane).

Os verdadeiros órgãos copuladores residiriam no fim do conduto ejaculador,

por entre os dois opérculos genitais e seriam visíveis, quando êstes forem desta¬

cados. Apresentam-se sob a forma de dois delicados apêndices, não articulados.

Êstes mesmos apêndices já tinham sido descritos, aliás, muito antes de

Pawlowsky, por Xarayanan (10) numa espécie de Hctcroiiictrus. Pesquizando

a região genital externa, descreveu êste autor os “músculos depressores operculi”,

de percurso dorso-ventral e que recolocariam os opérculos e os dois apêndices

em sua posição normal, ao passo que um outro feixe, o “adductor”, com percurso

transversal, manteria fechada a entrada genital, ficando os dois apêndices cober¬

tos pelos opérculos.

O prestígio de Pawlowsky foi suficientemente grande, para que sua opinião

fosse abraçada, sem maior discussão, tanto por Birula (11) como por Werner

(2), que apresentou em sua obra, à página 157, as figuras X. 126 e 127, com

os dois apêndices, designados por ele de “Kopulationszangen”. Xão pôde

deduzir, entretanto, como poderiam funcionar no acasalamento, já que, macros¬

copicamente. em preparações totais e em cortes, não se podia ver nenhum canal

eferente ou outra i>erfuração, a possibilitar uma eventual transmissão do esperma.

Xos últimos anos resurgiram opiniões em favor da velha hipótese de

Blanchard c Dufour. Vachon (3) interpretou as formações de côr escura, que

podem ser vistas nos machos, quando se suspendem os dois opérculos, como

sendo as porções apicais, quitinosas, dos órgãos copuladores, que repousam

naturalmente em bainhas. Pela ação muscular e pressão sanguinea poderiam

as duas “lames peniales” vir a aflorar facilmente pela câmara genital e a cons¬

tituir, após juxtaposiçâo, uma única peça, o pênis. O esperma fluiria por êste

orgão óco.

Piza, influenciado possivelmente por Werner, não deixou de aludir aos

apêndices copuladores externos de Tilyus bahiensis (5), mas insurgiu-se no

mesmo trabalho contra a terminologia de Pawlowsky. Os “orgãos paraxiais”

são um mero "nomen nudum”. Existe realmente um órgão copulador, que

repousa numa membrana e que deve chamar-se de pênis (5).

Em um segundo trabalho (6) veio a descobrir que são dois órgãos copu¬

ladores, um de cada lado do pre-abdomen. e que os mesmos poderiam ser extraídos-

Mem. Inst. Butaiituk,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOI-FGAXG BCCHER1.

123

com pinça ou por meio de eletro-choque de escorpiões vivos. O órgão que

vinha, então, à tona era na realidade constituído pela fusão intima dos dois

órgãos internos. A verdadeira terminologia seria, portanto, de “pênis” para

o órgão definitivo e de “hemipenes” para os dois órgãos parciais, sediados em

suas re c pectivas bainhas. Xo momento da emissão estabelecer-se-ia a fusão dos

dois, vindo a constituir um tubo óco, transmissor do esperma. A união seria

tão completa que, “não fosse a constatação prévia, jamais se poderia suspeitar

de sua duplicidade”.

Piza e Yachon, trabalhando um com o Tityus bahiciisis do Brasil e o outro

com escorpiões peçonhentos da África do Xórte, vieram, pois, em completa

independência um do outro, a reconfirmar a opinião de Blanchard e Dufour

contra Pawlowsky, Birula, Werner e outros.

Piza (7), entretanto, viu-se em frente a uma nova dificuldade: — Como

se daria, após o acasalamento, a separação dêste tubo em suas metades originárias ?

Embora tivesse examinado machos, destituídos totalmente de hemipenes e apesar

de ter visto que os mesmos “poderiam abandonar êste órgão pelo chão”, insistiu

o autor na separação do pênis, após o acasalamento e no recolhimento das

duas metades em seus depósitos naturais (7).

Xo tocante ao acasalamento houve meras conjeturas de lado a lado, pois

ninguém o tinha observado até hoje. Todos que escreveram sóbre o assunto,

insinuavam que haveria duas fases:

a) a do “prelúdio” nupcial;

b) a do acasalamento propriamente dito.

O primeiro encontrara a pena magistral do naturalista Fabre (12) que

viu o ponto culminante do prelúdio no que ele chamou de “promènade à deux’*

de “arbre droit”. A cauda dos dois parceiros se elevaria verticalmente, pas¬

sando o macho a agarrar a companheira com as pinças e passeando o casal em

marcha compassada para a frente e para trás. Terminado o prelúdio, refugiar-

se-iam os dois num abrigo impenetrável ao olhar humano, vindo a surgir, mêses

depois, somente a fêmea, já com numerosos filhotes nas costas.

Werner (2) escreveu o seguinte: “Cber die Art und Weise der Kopu-

lation ist l>ei der nãchtlichen und verborgenen Lebensweisc dieser Tiere nichts

bekannt geworden. Jedenfalls kann sie nur so vor sich gehen, dass sich die

beiden Tiere mit der Vcntralflàchc bcriihrcn, vobei das Weibchen vom Mánn-

chen mit Hilfe der beiden Kopulationszangen festgehalten vi rd. Ais cigentliche

Kopulationsorgane kann man diese nicht bezeichnen, da sie in Ermangelung

einer Rinne oder eines Kanals zur Leitung eines flüssigen Spermasekretes nicht

geeignet sind. Andererseits wissen vir durch Pawlowsky, dass das Spenna in

Forni einer Spcnnatophorc übertragen wird. Es ist mõglich, dass sich die

JSciELO

124

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, V

Tiere wãhrend der Paarung aneinander vertikal aufrichten ; ebenso ist es aber

auch mõglich, dass sie dabei aufeinander liegen.”

Yachon (3) admitiu: “On ne connait que peu de chose sur les moeurs

nuptiales des scorpions malgré les observations de nombreux chercheurs et il

n’est poiut prouvé que le peu que l’on sache chez Buthus occüanus corresponde

à ce qui se passe chez les autres espèees. Toutes recherches dans ce domaine

seraient donc les bienvenues. Chez les scorpions, après un prélude, un véri-

table accouplement a lieu, à la faveur duquel le mâle introduit directement le

sperme à 1’intérieur des voies génitales femelles.”

Para Piza (7) seria plausível a seguinte hipótese: “Xo acasalamento deve o

pênis penetrar diretamente na câmara genital feminina. A união entre os dois

sexos deve ser tão íntima que não possa haver contacto do esperma com o ar.

Pois êste contacto, ainda que por um momento só, solidificaria o liquido seminal

e faria com que os dois hemipenes ficassem definitivamente fundidos numa só

e inseparável peça, a impossibilitar, após a cópula, sua separação e retração para

as respectivas bainhas.”

Xada de concreto, entretanto, foi observado. Para Vachon “le mystère

reste entier.” Fabre (12) vira uma única vêz que o macho ficava por baixo

de uma fêmea. Maccary (13) julgara ter visto um macho "cavalgar” uma

fêmea. Yachon opinou que o pênis se quebraria total — ou parcialmente, per¬

manecendo um pedaço na vulva.

Existe realmente na vulva da maioria das fêmeas fecundadas uma pecinha

quitinizada, com a forma de um “Y” invertido, penetrando as hastes pelos dois

ovidutos. Esta peça já era conhecida pelos antigos autores e foi designada com

o termo de "spcrmatoclcutrum”. Até hoje, entretanto, não pôde ser explicado

se o mesmo era de procedência masculina ou formado pelos próprios órgãos

genitais da fêmea. Segundo Pawlowsky, a peça serviria de tampão, a impedir

o refluxo do esperma. Vachon aventou a hipótese de que, na cópula, o macho

transmitiria primeiro o esperma, incluso ou não num espermatóforo, e depois

o spermatocleutrum, como fecho da vulva, a tomar impossível mecanicamente

novo acasalamento.

MATERIAL E MÉTODO

O aparelho reprodutor masculino foi estudado comparativamente em 47

Tityus trivittalus e em 228 Tityus bahiensis. Todos estes escorpiões e muitas

centenas mais se encontravam ou se encontram ainda hoje vivos nos laboratórios

do Instituto Butantan.

Iniciando-se a incisão na zona lateral do última placa ventral do pre-

abdomen do animal recém-morto e prosseguindo-se o corte pelos lados, ao

Hera. Inst. Batantan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

125

longo das coxas das pernas, em direcção ao esternito, pode destacar-se facil¬

mente toda a chapa ventral. Para que não haja ruptura dos condutos genitais,

na altura dos opérculos, pratica-se ainda uma incisão circular em tôrno destes.

Submergindo-se, então, o escorpião em solução de Ringer ou num líquido fixa¬

dor (preferimos o Dubosq-Brasil), podem desprender-se os “lobos hepáticos”

envolventes e libertar totalmente o aparelho genital com os órgãos anexos.

Os órgãos isolados e fixados foram cuidadosamente seccionados e mon¬

tados, após desidratação, em bálsamo do Canadá ou incluidos em parafina, cor¬

tados ao micrótomo, corados pela hematoxilina-eosina ou ainda segundo os mé¬

todos de Mallory e de van Gieson e montados igualmente em bálsamo do Canadá.

Para melhor interpretação preferimos cortar separadamente glândula por glân¬

dula e peça por peça, obtendo desta maneira cortes seriados dos testículos, das

bainhas com os hemipenes, de um trecho da glândula cilíndrica, da ampóla do

vas deferais, da vesicula seminal e dos dois pares de glândulas, o oval e o

anterior, acessório.

Também foram feitas preparações totais destes mesmos órgãos, coradas ou

não com carmim borácico.

Xa mesma orientação de trabalhos foram necropsiados até agora nada menos

de 425 exemplares de Tityus scrrulatus, sem que tivéssemos podido encontrar

um único macho sequer!

Para facilitar a observação do prelúdio nupcial e do acasalmcnto foram

improvisados viveiros com fundo de vidro. Com lente de aumento módico po¬

díamos verificar, então, o que realmente se passa nesta fase da vida do escorpião.

NOVAS PESQUISAS

Os machos das duas espécies são reconhecíveis pelas grandes mãos, ama¬

relas em Tityus trivittatus c pela base dos dedos separados por uma exeavação

oval em Tityus bahiensis.

Suspendendo-se os dois opérculos genitais (Fig. 1), observam-se na entrada

da fenda genital, nas duas espécies, os dois pequenos apêndices cilíndricos,

designados por Wemer de “Kopulationszangen”, por Pawlowsky de “orgãos

copuladores”, Yachon de “crochet du copulation”. Para evitar maior confusão

terminológica, propomos o nome definitivo de "styli gcnitales externi”. São

revestidos por uma delicada camada cuticular, pouco quitinizada. Xão são

articulados e atingem as dimensões de 1 mm de comprimento por 0,2 mm de

espessura. Os músculos "adduetores” c "depressores" dos opérculos coman¬

dam igualmente a ereção ou retração dos styli gcnitales extenii. Além da

estrutura costumeira do tegumento escorpiônico não encontrámos nenhum ele-

ISciELO

0 11 12 13 14 15 16

126

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, V

mento novo nos dois apêndices. A epidermis consiste em uma só camada de

células cilíndricas, com os núcleos distribuídos na parte basal. A membrana

basal é simples. Há muitas glândulas cutâneas. Devido ao mesmo colorido do

ambiente, não se podem distinguir facilmente os dois apêndices. Quando a

câmara genital estiver fechada, são invisíveis externamente (Fig. 2; a).

Tityus trivittatus: opérculos genitais em posição normal Tityus trhnttatus: Opérculos genitais

entreabertos : a) Fenda genital ; b) sty-

li gcnitalcs externi (25 x).

(25 x).

Os testículos de Tityus trivittatus constituem um tubo esbranquiçado em

forma de “U”, com um ramo longitudinal mediano e mais três a quatro ramos

transversais, anastomosados (Fig. 3;k). Em exemplares jovens existem so¬

mente dois tubos anteriores que, aos poucos, se extendem cada vêz mais para

trás, até que estabeleçam a união na área do último segmento preabdominal.

No ponto, onde os dois testículos se encontram e se soldam, persiste um septo

divisório. O calibre testicular é quase sempre o mesmo. As anastomoses trans¬

versais surgem mais tarde e parecem partir do ramo mediano, seguindo cm

direção ao tubo lateral. Primeiro se estabelece a anastomose posterior, depois

a segunda, seguida pela terceira, podendo, em exemplares com grande ativi¬

dade gametogênica, vir a formar-se ainda uma quarta anastomose total ou

parcial, anterior. A desembocadura desta última dá-se na secção testicular, que

corresponde topograficamente aos vasos deferentes.

Em Tityus bahiensis temos observado o mesmo. Verifica-se, pois, nas

duas espécies estudadas um facto curioso: — Um trecho do vaso deferente se

transforma em tubo testicular com atividade gametogênica e anatomicamente

igual ao restante testículo. Êste mesmo trecho, entretanto, continua a exercer

o papel de vas deferens, pois conduz os espermatozóides à vesicula seminal.

Mcm. Inst. Batantan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

127

A contextura anatómica dos testículos é muito parecida com a das aranhas

caranguejeiras. Há inúmeros folículos, separados uns dos outros por um peri-

tôneo”. Em cada foliado ha novamente uma série de repartições, dispostos

radialmente em tomo do lumen central. Lm septo conjuntivo separa as repar¬

tições, podendo ver-se, em umas, espermatogônias; em outras, esjiennatócitos

de la. ou de 2a. ordem; em outras, espermátidas. Em outras tantas repartições,

finalmente, vêem-se espermatozóides imaturos, quase maduros e, por último, os

espermatozóides maduros, com longos filamentos caudais e em disposição uni-

polar, isto é, com as cabeças dirigidas para a parede distai da repartição e os

flagelos em direcção ao lume central.

Os dois vasos deferentes (Fig. 3;g) conduzem o produto dos tubos testiai-

lares às bolsas seminiíeras. Formam tubos largos nas porções basais. (Segue-

se um trecho intermediário com menor calibre). Descrevem, então, uma volta

em torno da glândula cilíndrica e das bainhas. Alargam-se novamente e desem¬

bocam nas vesículas seminais por meio de um alargamento, denominado de

"ampóla”. Apenas a parte intermediária, mais estreita, não exerce função

gametogênica. As porções posterior e anterior e a ampola apresentam a mesma

anatomia dos folículos testiculares, com ativa produção de espermatozóides.

Em alguns exemplares de Tityus bahiensis temos visto mais outro apêndice

ôco, ao lado da ampola e que serve igualmente à armazenagem dos esperma¬

tozóides, merecendo, por isso, a designação de "vesícula seminal acessória”

(Fig. 6;m).

Pelo estudo comparativo dos vasos deferentes cm diversos exemplares, com

idades diferentes ou em estação anual diversa, chega-se à conclusão de que as

dimensões, a formação da ampóla ou da vesiaila seminal secundária c ainda a

existência de trechos com função gametogênica, variam muito de indivíduo

para indivíduo e dependem também do ciclo vital e da época do ano. Ao

conjunto dêstes fatores estão condicionados um maior desenvolvimento ou a

involução temporária. Em volta da ampóla e da vesícula secundária ha um

envólucro, constituído por fibras musailares circulares, mais espessas no local

da desembocadura do vas deferens e formando uma espécie de constrictura ou

esfíncter.

A vesícula seminal (Figs. 3 e 5;e) é de forma oblonga. No meio ha

geralmente um estrangulamento. Uma camada de feixes musculares rodeiam-na.

O peritôneo é relativamente espesso e as células epiteliais, com os núcleos em

posição basal, apresentam-se como cilindros muito estreitos e longos, com o

citoplasma finamente fibrilar. O canal eferente é curto e dcscmlxjca na glân-

gula cilíndrica.

A glândula cilíndrica (Figs. 3 e 5; i Fig. 6) é muito maior do que a vesicula

seminal. Constitúi uma formação alongada, sinuosa, adaptada dorsalmente «i

ISciELO

0 11 12 13 14 15 16

128

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, V

Tilyus Irrvitlatusi Esquema do aparelho genital masculino : a) fenda genital; c) glândulas

acessórias anteriores; d) glândula oval; e) vesícula seminal; f) glândula cilíndrica;

g) vas deferais; h) bainha do órgão hemipenial; i) parta distai da glândula cilíndrica;

j) parte distai do órgão hemipenial; k) testticulos (20 x).

SciELO

11 12 13 14 15 16

Mem. Insí. Butantan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGANG BÜCHERL

129

silhueta da bainha do hemipênis, em cuja reentrância é encaixada e mantida

por meio de feixes musculares de ligação. Sua parte posterior é quáse triangular.

No meio, à altura da vesícula seminal, é entumecida (Fig. 5;f) e, em frente,

é afinada. Na porção triangular vê-se macroscopicamente uma espécie de lumen

transparente que contém quase sempre um filamento de colorido quase negro

e cuja significação não pudemos averiguar. A ponta distai é unida à zona

flagelar da baína do hemipênis por meio de robustos feixes musculares. A

glândula cilíndrica tem um longo canal eferente, que conduz, além das elimina¬

ções da própria glândula, o conteúdo da bolsa seminífera ao conduto ejaculador,

em que desemboca. Também esta glândula é rodeada por feixes musculares,

mais robustos na porção distai e em tomo do canal eferente. Seu epitélio

consise tme células cilíndricas com o citoplasma finamente fibrilar e os grandes

núcleos em posição basal.

Em frente à vesícula seminal, encostada à parte anterior da glândula cilín¬

drica, localiza-se a glândula oval (Figs. 3 e 5; d. Fig. 6;n), cuja forma externa

faz jús ao nome. Rodeada por delicados feixes musculares circulares, com o

cpitelio cilíndrico disposto radialmente em tomo do lume central, relativamentc

Tityus trívittatus: Corte através do conduto ejaculador, com as glândulas anteriores-

1) porção anterior do hemipênis; h) bainha hcmipenial (40 x).

volumoso, parece eliminar um produto importante para o prolongamento da

vida dos espermatozóides. Seu canal eferente é muito longo e fino e acompanha

de perto o percurso do mesmo da glândula cilíndrica, desembocando os dois,

um ao lado do outro, na parte inferior, lateral, do conduto ejaculador, exatamente

na região da cabeça dos hemipênes.

Do lado externo da glândula cilíndrica encontra-se o órgão transmissor do

esperma à fêmea, um de cada lado. Dufour, Blanchard, Piza e Vachon desig¬

naram a êstes dois órgãos com os nomes de pênes, órgãos copuladores, hemipênes.

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, V

Tityus Irivtltalus : Parle dos órgãos genitais masculinos (40

como na fig. 3).

x); (designações das partes

rilyiis trii-iltalus: Hemipênis (retirado da bainha) : 1) parte

quitinizada; j) flagelo (36 x). i

Mem. Inst. Batantan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

Tityus bahiensis: Trecho da glândula cilín¬

drica : g) ampola do tur defcrcns: m) ve¬

sícula seminal acessória: n) glândula oval

(30 x).

132

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO NO BRASIL, V

Para não criar maior confusão terminológica e por simples conveniência

continuamos a denomina-los de hemipenes. Cada um está envolto por uma

membrana, denominada de “bainha” (Figs. 4 e 5;h) e que é a simples con¬

tinuação bifurcada do conduto ejaculador. Tanto as duas bainhas como os dois

hemipenes chegam a atingir quase 1 cm de comprimento por 0,3 cm de largura.

As bainhas estreitam-se abruptamente na parte distai, vindo a. formar uma

espécie de tubo enovelado (Fig. 8). No canal interno, com aspecto de meia

lua em corte transversal, repousa o hemipênis.

Êste apresenta-se como uma metade de tubo. Sua parte anterior é

larga e quitinizada (Fig. 7; 1), enquanto que no fim termina num flagelo

dedicado e elástico (Fig. 7; j). A “cabeça” apresenta uma camada de quitina

muito fina, com um reforço quitinizado na borda externa. A zona intermediá¬

ria apresenta rebordos laterais ligeiralmente revirados. No terço posterior há

noramente um reforço quitinizado, saliente e bifurcado, dirigindo-se um ramo

para trás, enquanto que o lateral, sob a forma de um acúleo pontudo o recurvo,

chega a perfurar com a ponta a própria bainha. A cauda ou “flagelo” é

fino, sem quitina, muito elástico, repousado igualmente dentro da porção mais

adelgaçada da bainha (Fig. 8).

A própria situação topográfica elucida a origem dos órgãos copuladores.

As duas bainhas são o resultado de uma profunda invaginação do tegumento

externo. Os hemipenes, como porção interna da formação invaginada, corres¬

pondem em sua estrutura anatómica, quitinizada, exatamente à epi-e exo-cuticula.

A membrana, que delimita o lume do conduto ejaculador c de sua continuação,

formada justamente pelas duas bainhas, contém os elementos da endo-cutícula.

O epitclio destas bainhas vem a corresponder exatamente à epiderme do tegu¬

mento. A delicada membrana externa das bainhas e do conduto ejaculador

pode ser identificada como a “membrana basalis”.

A estrutura anatômica da parte mais larga dos hemipenes, de facto, revela

sua natureza essencialmente cuticular. Toda vez que estas 2 peças são defi¬

nitivamente perdidas no acasalamento, incumbem-se os epitélios das bainhas a

segregar substâncias, que vêm a formar novamente estas peças, tal como a

epiderme segrega os elementos da nova cutícula em cada éedise.

A figura 4 apresenta esquematicamente a fenda genital, com os 2 “styli

gcnitalcs externi”, a parte do conduto ejaculador aberta e as porções anteriores

das 2 bainhas (h), que formam a continuação direta dêste. Em seu lume aberto

vêem-se as porções anteriores dos 2 hemipenes (1). A disposição dêstes é tal,

que, ao afluírem ao conduto ejaculador, unem-se, encaixando-se uma metade

perfeitamente na outra (Fig. 7), vindo a formar o verdadeiro órgão copulador,

o pênis (Figs. 9; 10; 11). Na figura 9 podem observar-se ainda as duas sutu¬

ras dos primitivos hemipenes (9; p), bem como o par de acúleos laterais (q).

2 3 4

5 6 7

11 12 13 14 15 16

Mem. Inst.

27 : 121 - 155 .

Batantan,

1955 / 6 .

WOLFGANG BCCHERL

Tilyus triviltatuj : Flagelo hcmipcnial,

parcialmente envolto ainda pela bainha

(65 x).

Tityus Irivillalus : Órgão copulador, resultante da fusão

dos dois hemipenes: o) sutura inferior; p) sutura supe¬

rior; q) acúleos laterais; f) flagelo (36 x).

134

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISSIO XO BRASIL, V

yj- yjQ’ Tityns trnittatus: Órgão copulador

J’ com o flagelo caudal distendido (7 x).

Tilyus trivitlatus : Órgão copulador,

aspecto superior (36 x).

SciELO

11 12 13 14 15 16

M(*m. Inst Butantan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

135

O corpo do pênis vem a formar um tubo ôco, aberto na face dorsal anterior.

Quanto ao resto está o pênis completamente fechado.

As duas bainhas estão rodeadas por feixes musculares circulares. Êstes

músculos formam camadas ainda mais espessas na área do conduto ejaculador,

onde, além disso, há um poderoso músculo, de percurso vertical, que recobre

o fundo do conduto ejaculador. A contração dêste feixe repercute vivamente

no próprio conduto ejaculador que expulsa violentamente o seu conteúdo.

Xa porção anterior do “ductus ejaculatorius” desembocam os dois canais

das duas glândulas acessórias anteriores (Figs. 3 e 4;c), de colorido amarelado.

Seu epitélio é de natureza glandular e o produto, eliminado por êste epitélio.

é depositado justamente na parte anterior dos dois hemipenes, no momento de

sua emissão e serve de “cola”, para determinar a firme adesão das duas metades

e ainda para fixar o pênis projetado sõbre o solo.

A julgar pela localização topográfica do conjunto de canais, que desem¬

bocam no conduto ejaculador, devem afluir a esta câmara as seguintes excreções:

a) um liquido gomoso, que se solidifica em contato com o ar e que promove

a fusão dos 2 hemipenes e a fixação do pênis sõbre o solo. É elimi¬

nado pelas 2 glândulas anteriores.

b) um líquido (que serve para manter vivos os espermatozóides) das

glândulas ovais.

c) o próprio liquido seminal com os espermatozóides, das vesiculas se¬

minais.

d) uma excreção, provinda das glândulas cilíndricas.

O conteúdo de todos estas glândulas é esvaziado concomitantemente, veri¬

ficando-se logo em seguida a penetração dos 2 hemipenes na mesma zona. No

momento da juxtaposição das 2 lâminas, enche-se seu espaço interno com os

produtos glandulares, de maneira que o órgão copulador definitivo, ao ser pro¬

jetado para fóra da fenda genital, já se acha “carregado” com os líquidos seminais.

b) Acasalamento:

A iniciativa no acasalamento nas duas espécies estudadas aqui cabe ao macho,

geralmente mais robusto do que a fêmea. Verificamos que o processo pode

ser resumido em três fases:

a) a da escolha da companheira;

b) a do prelúdio nupcial;

c) a do acasalamento propriamente dito.

iSciELO

0 11 12 13 14 15 16

136

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, V

Na escolha da companheira devem influir “certos fatores de cio”, pois o

macho passa muitas vêzes rente a uma fêmea, sem importar-se com a mesma,

ao passo que, chegando perto de uma outra, manifesta incontinente interesse

sexual. O “cio" está ligado, entre outros momentos, ao fator “tempo”, res¬

trito nas duas espécies aos meses da primavera e começo de verão (outubro

a dezembro). Fóra deste tempo convivem os machos com as fêmeas, sem mani¬

festação sexual alguma. Mas mesmo na época do cio há fêmeas, geralmente

em começo de prenhez, que não são absolutamente importunadas. Às vezes

um, dois ou mesmo três machos escolhem a mesma fêmea. O primeiro a chegar

apodera-se das mãos da parceira e coloca-se em posição normal de acasalamento.

Os outros agarram qualquer parte proeminente da mesma, uma das pernas ou

a cauda. Iniciando-se, então, a “promènade à deux”, neste caso “à quatre”,

toma o macho da posição normal a iniciativa, seguindo o restante da tribu mais

ou menos de arrastão. A fêmea não ensaia resistência alguma, sendo puxada

para a frente ou empurrada para trás. O macho “dianteiro” está empenhado

em fazer desistir os companheiros, e toda a vez, que se lhe oferece ocasião,

desfere vigorosos golpes contra os mesmos, empregando o ferrão. Consegue

finalmente seu intento e os outros desistem, cabendo a fêmea exclusivamente

a êle, como trofeu de seu vigor.

A luta pela fêmea não constitui, entretanto, a regra, pois o número destas

parece exceder, nas duas espécies, o dos machos. Mas mesmo assim nunca

temos observado que as fêmeas tomassem a iniciativa ou brigassem por causa

de um macho. O aparente desequilíbrio entre os dois sexos tem sua razão de

ser. A fêmea, uma vez fecundada, pode guardar em seus receptáculos seminais

os espermatozóides por mais de um ano ou, provavelmente, por mais tempo ainda,

de maneira que, sem novo acasalamento, pode parir filhotes durante um, dois

ou mais anos. Em várias dezenas de necropsias de fêmeas das 2 espécies temos

constatado nos ovários embriões quase que completamcnte desenvolvidos e pres¬

tes de virem a nascer, enquanto que em outros trechos ovarianos havia fases

embrionárias ainda em começo ou apenas ovos nas primeiras divisões celulares.

Não poucas vezes viam-se apenas um ou dois embriões grandes e todo o resto

dos ovários era tomado por ovos recém-fecundados. Esta fecundação é feita

pela própria fêmea, ao que parece e não haverá mais novo acasalamento, enquanto

durar o estoque dos espermatozóides, armazenados provavelmente nas porções

anteriores dos ovidutos.

O macho, entretanto, entra em cio anualmente, podendo, portanto, acasalar-

se cada ano com outra fêmea. Portanto, mesmo um número três vêzes menor

de machos, como parece ser, mais ou menos, em Tityus bahicnsis e T. trivit-

tatus, garante o equilíbrio entre os sexos e a supervivência da espécie.

Mctn. Inst. Rutantan.

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

Situações anómalas, que um macho agarre outro macho menor e inicie com

éle a permabulação, também foram vistas, mas em pouco tempo é descoberto o

engano e os dois se largam.

Escolhida a companheira inicia-se o prelúdio nupcial. Macho e fêmea estão

colocados frente a frente, testa contra testa (Foto 1), segurando o macho com

os dedos as mãos da eleita. Pode ser que no primeiro golpe da escolha seja

apreendida a cauda ou uma perna. Então, o macho passa para a frente, segu-

WOLFGAXG BÜCHERL

137

Foto 1 — Tityus bahiensis: Pausa, durante a " romènadv à deux" (o macho dando

alimento à fcniea).

rando successivamente com as mãos ora uma perna ora outra, até que fique em

posição dianteira. A fêmea não ensaia nenhum gesto de resistência.

O prelúdio nupcial é um passeio a dois, em marchas longas, para a frente

e para trás ou para os lados, ora aos empurrões, ora puxando a companheira

que se deixa dirigir, presa pelas mãos entre os dedos do macho. Colocando-se

pequenos obstáculos no caminho dos dois. por exemplo, pedrinhas ou um pouco

d'agua (êles não gostam de entrar diretamente na agua), verifica-se que a fêmea,

mesmo em marcha a ré. está atenta ao caminho, apalpando o mesmo com as

pernas ou desviando-se hYbilmente da i>oça dagua ou da pedrinha. Embora

passiva, está, contudo, alerta e acompanha o passeio forçado, enpregando as

próprias pernas na locomoção. A marcha ora é mais rápida, com pausas brus¬

cas intercaladas, ora é lenta e comedida. Nos intervalos o macho procura

ISciELO

0 11 12 13 14 15 16

138

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, V

agradar á fêmea, dando-lhe uma papa alimentícia, regurgitada pelo esófago. De

vêz em quando dá umas “cabeçadas” contra a fronte da fêmea.

Xesta fase formam os dois uma figura bastante simétrica, com as mãos

quáse paralelas ao eixo do coqx), os fêmures horizontais, as pernas de um

formando a figura de espelho do companheiro, as caudas parcialmente enroladas

ou ligeiramente elevadas ou ainda deitadas ao lado (Foto 2).

Foto 2 — Tityus bahiensis: “ Promèmde à deux”.

O corpo do macho é periodicamente sacudido por violentos tremores; seus

pentes se encontram em contínuos movimentos giratórios; suas pernas anteriores,

quáse não empregadas na locomoção, executam movimentos vibratórios sob os

opérculos genitais da fêmea, provocando nela, aos poucos, um excitamento.

Colocados os dois sobre uma placa de vidro, a dificultar a sua marcha,

mantêm a fêmea as pernas imóveis, deixando-se empurrar ou arrastar pelo

companheiro.

Por esta caminhada “a dois” procura o macho encontrar um local propício

ao acasalamento. Contràriamente do que faziam supor as publicações a res¬

peito, não se refugiam os dois num esconderijo, impenetrável ao olho humano.

Xenhuma vez houve acasalamento sob os esconderijos, que se encontram em

profusão nos viveiros dos escorpiões; pelo contrário, os que repousavam ai,

vinham para fóra. em procura de uma companheira, acasalando-se a descoberto.

SciELO

11 12 13 14 15 16

Man. Inst. Bmantan.

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

139

As caminhadas podem perdurar até uns 10 ou 15 minutos e o casal dá

a volta diversas vezes a um viveiro de 4-6 metros de circunferência, interca¬

lando frequentes pausas, em que o excitamento do macho se toma cada vez

mais vivo e mais rápidos ficam os movimentos vibráteis de sens pentes e pernas

anteriores. Com o progresso do excitamento dos dois, entumece a região dos

opérculos genitais, chegando mesmo a aparecer a fenda genital, avidamente fri-

cionada pelas pernas do macho.

Enquanto se escolheu um local apropriado e a vulva da fêmea está disten¬

dida e apta a receber o liquido fecundante, chega o excitamento do macho ao

auge. Os movimentos vibratórios já se estendem também ao 2.° par de pernas;

a cauda é periodicamente sacudida convulsivamente. O passeio consiste agora

apenas em uns 10 passos para a frente e os mesmos para trás, de maneira

que, nos intervalos, repousam os dois no logar escolhido para o acasalmento.

Nesta fase eleva-se a cauda do macho verticalmente (Foto 3). Os últimos

segmentos do pre-abdomen acompanham os movimento convulsivos. A cauda

da fêmea, entretanto, não acompanha esta elevação. Em meio de um grande

Ferro 3 — Tilyus bahiensis: Fase do “arbre droit”, cm <|tie o macho projeta o órgão

copulador.

esforço, com a cauda na posição de "arhre droit” (segundo Fabre), verificam-

se no macho veementes ondas convulsivas, a percorrer a cauda desde o ferrão

e descendo gradativamente por todos os artículos em posição vertical.

ISciELO

0 11 12 13 14 15 16

140

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISXIO XO BRASIL, V

É justamente êste o momento do descarregamento simultâneo, sob a in¬

fluência da pressão aumentada nos órgãos, de todas as glândulas sexuais e dos

próprios hemipenes. Êstes se unem, ao passarem pelo conduto ejaculador, no

órgão copulador definitivo, que conduz em seu canal, como já foi dito, o líquido

seminifero.

Pelo concurso do sistema muscular que recobre as bainhas, o conduto

ejacular e a região dos opérculos genitais, com a ajuda ainda da pressão

sanguínea aumentada ao máximo, é o pênis arrojado para íóra da fenda genital

do macho; descreve uma trajetória de 4-6 cm de extensão e atinge finalmente

o solo diretamente sob a vulva da fêmea. Por meio da “cola”, provinda das

glândulas anteriores, fixa-se definitivamente no solo. Seu flagelo caudal, entre¬

tanto. continua mesmo agora, ainda a manter contacto com as bainhas de ori¬

gem. Êste flagelo é muito elástico, podendo ser esticado até 40 vezes seu com¬

primento natural, sem romper-se. (Fig. 10).

Após a emissão do órgão copulador verifica-se uma pausa, em que a cauda

do macho volta â posição normal. Em seguida é reiniciado o “pasesio a dois”,

esta vez com passos comedidos e certos, sempre por cima do órgão copulador

e de tal maneira que, em cada passagem, a massa dos espermatozóides chegue

em contacto direto com a vulva da fêmea. A “promènade” abrange apenas uns 4

cm para a frente e para trás. Em cada retrocesso do macho é esticado o flagelo

(pois o pênis está preso ao solo )e a fêmea chega em contacto com o esperma

com sua vulva entreaberta : avançando o macho, volta o flagelo a condição nor¬

mal. penetrando o pênis parcialmente pela fenda genital masculina, até onde o

permitam os dois acúleos on freios laterais, que se engancham nos slyli genitales

cxtemi.

Sob pressão muscular apertam os slyli a parte basal do órgão copulador,

à maneira de uma bomba de pressão, jorrando, então, um novo jacto de líquido

fecundante para a parte anterior do pênis.

O sentido pois, do vai-vem rítmico é o de “bombear" o liquido seminifero

para a parte anterior do pênis (no avanço do macho) e o de fazer com que

êste liquido penetre pela vulva da fêmea (no recuo do macho).

Que êste passeio a dois esteja absolutamente ritmado e como que com os

avanços e recuos calculados exatamente, depende dos limites de elasticidade do

flagelo caudal do pênis.

O passeio sòbre o órgão copulador dura. mais ou menos, 1 minuto apenas,

com 5 a 10 contactos da fêmea com o mesmo. Em seguida parece esta desper¬

tar de sua letargia e tornar-se repentinamente ativa. Com repuxos vigorosos li¬

berta as suas mãos do amplexo masculino e com os dedos passa a desferir alguns

golpes enérgicos no companheiro, como a demonstrar-lhe que não mais está

interessada na continuação do passeio.

Mm. Inst. BuUntan, WOLFGAXG BÜCHERL 141

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

Êste desiste prontamente e, no ato de virar-se, para seguir seu caminho,

estica o flagelo caudal do pênis, preso sõbre o solo, até ao máximo, provocando

minalmente sua ruptura.

Centenas destes órgãos copuladores foram vistos e examinados por nós e

dezenas de vezes pudemos presenciar o acasalmento do Tityus trhnttatus e T.

bahicnsis.

Necropsias realizadas nos machos logo depois da cópula, revelaram que

as bainhas estava vazias, sem os hemipenes. Entretanto, já depois de 6 a 8

semanas, são formados de novo pelo epitélio das bainhas.

APRECIAÇAO DOS RESULTADOS

Não admira que até agora ninguém tivesse podido observar o acasalamento

<los escorpiões e a emisssão e perda do pénis. Muito poucos têm realmente tido

ocasião em observar, anos a fio, maior número de escorpiões vivos, para a des¬

coberta da “estação do cio”. O pênis é relativamente pequeno e passa facil¬

mente despercebido, pois fica geralmente encoberto pelo corpo ou do macho

ou da fêmea. Descobrir êste pequeno órgão sõbre terreno arenoso, p. ex.,

afigura-se-nos quáse impossível.

Entretanto, está fóra de dúvida que, o que pôde ser observado em Tityus

trhnttatus e Tityus bahicnsis, deva valer também no tocante às espécies euro¬

peias, africanas, asiáticas, estudadas por Pawlowsky e referidas parcialmente na

introdução dêste estudo. As peças, minuciosamente descritas e designadas por

êste autor de “órgãos paraxiais”, se assemelham por demais com os órgãos

copuladores de Tityus bahicnsis e T. trix-it tatus, para que se pudesse pôr em

dúvida sua natureza e função.

Aliás Vachon, Dufour e Blanchard, no tocante às espécies do Velho Mundo,

e Piza, no tocante ao Tityus bahicnsis, estão unânimes na rejeição do termo

“órgão paraxial” (Pawlowsky, Birula, Wemer, etc.), interpretando êstes órgãos

como responsáveis pela transmissão do esperma.

A questão, se os espermatozóides seriam transmitidos à fêmea, inclusos em

“espermatóforos” ou diretamente em “estado livre”, não nos parece tão fácil

de ser resolvida. Julgamos, pelo que temos visto até agora, que as duas moda¬

lidades podem existir e que será necessário pesquisar espécie por espécie.

Pawlowsky, Wemer e Vachon não se manifestaram de uma maneira muito

positiva, afirmando ora que existiriam sempre espermatóforos e, em outro logar

dos respectivos trabalhos, que seriam espermatozóides “livres”.

Correlato a esta questão surge um novo problema: — o da fecundação dos

óvulos. Será que no ato do acasalamento os espemiatozoides migram através

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

142

ESCORPIÕES E ESCORPIO.NISMO XO BRASIL. V

dos ovidutos até a sede dos óvulos, fecundando a todos ou apenas a alguns?

Ou será que eles ficam depositados nas 2 porções anteriores, mais largas, dos

mesmos, mêses e talvez anos a fio, aguardando a sua vez de serem libertados

e poderem ir de encontro a um trecho do ovário, coberto de óvulos?

Esta interessante questão aguarda ainda solução. Temos constatado real¬

mente nas 2 espécies estudadas, que a fêmea não é fecundada todo o ano, embora

parisse todo o ano uma média de 16 a 22 filhotes. Embora as necropsias tivessem

revelado que, nesta fase, seu pre-abdomen esteja praticamente repleto com o

volume dos embriões a nascer, ha, comtudo, trechos ovarianos, ao longo dos

quais estão enfileirados, como contas de um rosário, inúmeros óvulos. Estariam

estes também já fecundados, esperando a sua vez para o início do desenvolvi¬

mento embrionário? A nós nos parece mais lógico, admitir-se no aparelho

genital das fêmeas a existência de “receptacula seminalia”, que seriam abertos

toda vez que fosse necessário “fecundar” um outro número de óvulos.

Restaria a ser resolvido ainda o problema da “pasagem” dos embriões a

nascer. São êles de grandes dimensões. Em sua passagem pelos ovidutos,.

distendem a êstes ao máximo, havendo o perigo de arrastarem consigo possíveis

espermató foros, que estivessem no caminho.

Quanto à interpretação dos " st y li gcnitalcs cxterni” como apêndices orien¬

tadores da trajetória do pênis e auxiliarem para bombear o líquido seminífero

para a frente, não pode haver dúvida. Gostaríamos que fosse conservada esta

nossa terminologia, em logar de “Kopulationszangen” (Wemer), “crochot du

copulation” (Vachon), “apêndices copuladores” (Piza), para evitar a reinci¬

dência na interpretação errônea dêstes apêndices, descrita por Pawlowsky e outros.

A significação dos dois “acúlcos” do pênis, descritos já por Blanchard, sem

que êste autor tivesse podido explicar seu sentido, também está esclarecida.

Servem de “freio”, pois engancham-se nos 2 “styli gcnitales”, e impedem que

o pênis torne a entrar pelo aparelho genital do macho nos avanços do acasa¬

lamento.

A suposição antiga e repetida sempre de novo, de que no acasalamento a

fêmea teria a iniciativa e que esta arrastaria o macho para um esconderijo,

impenetrável ao olhar humano, e que aí, após a cópula, ela devoraria impla¬

cavelmente o companheiro, aparecendo, mêses depois, sozinha com os filhotes

nas costas, não corresponde à verdade. Em nossos viveiros há muitos escon¬

derijos, sob os quais os escorpiões se refugiam sempre e sem excepção durante

o ano todo. Aproximando-se, porém, a estação do "cio”, apodera-se da maioria

deles uma inquietação, que faz, com que abandonassem os esconderijos, apesar

de normalmente evitarem a lúz diurna, realizando-se o prelúdio nupcial e o aca-

salmento fóra dos "refúgios”.

2 3 4

5 6 7

11 12 13 14 15 16

Mcm. Inst. Bmantaa,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGAXG BCCHERL

143

As hipóteses de Vachon (de que, durante a cópula, uma parte do pênis

se quebraria, permanecendo os pedaços na vulva da fêmea) e de Piza (de que

o macho introduziria diretamente o pênis na vulva da companheira e que, feita

a transmissão do liquido fecundante, o órgão se desfaria novamente nos 2 hemi-

penes, alojados de novo em seus logares primitivos) não puderam ser confir¬

madas. O pênis é perdido em cada acasalamento. Esta perda não significa

lesão alguma para os machos. As bainhas refazem, aos poucos, os 2 órgãos

quitinizados, tal qual a epiderme refaz cada vez a nora cutícula nas écdises

periódicas. Pelas necropsias temos visto que, 4 a 6 semanas após o acasa¬

lamento, já estão refeitos os 2 hemipenes.

Poder-se-ia discutir a terminologia dêstes órgãos. Será apropriado chamar

de “pênis” a uma peça, que resulte da fusão de 2 outras e que é perdida

definitivamente em cada acasalamento? Não implica o termo “pênis” num órgão

fixo e definitivo? Preferimos continuar a usar o termo, porque Dufour, Blan-

chard, Vachon, Piza o empregaram (embora adiando que se trate de órgãos

definitivos, i.é., que não se percam no acasalamento) e porque não encontramos

outra designação no reino animal, já que não é cabível, pelas razões expostas,

apelida-lo de “espermatóforo”.

Quando dividimos o asalamento em três fases (escolha, prelúdio e cópula),

o fizemos para poder expor o assunto com maior clareza. Na realidade, em¬

bora fosse sempre esta a ordem cronológica, as três fases são uma operação

só. Escolhida a companheira, seguem-se manejos de excitamento mútuo (o

macho dá alimento à companheira; os dois se dão “cabeçadas”; os órgãos geni¬

tais são apalpados, etc..) e de busca de um local apropriado, chegando, então,

ao auge, o espasmo convulsivo do “orgasmo”, com a emissão do pênis e a trans¬

missão do líquido fecundante à vulva.

Um observador menos avisado veria apenas, durante todos êstes aconteci¬

mentos, primeiro um passeio a dois mais longo; depois restrito a um logar rcla-

tivamente pequeno, com repetidas marchas em rai-vem ; finalmente a erecção

vertical da cauda e da parte posterior do pre-abdomen do macho ; novas marchas

dos dois, para a frente e para trás, agora ritmadas e de distância certa e, final-

fente, a separação pacífica.

As observações amadureceram também uma interpretação satisfactória da

significação do " spcrmatodeutrum” . Consiste êste numa substância escura,

como que uma “espécie de cola preta, endurecida” e que obstroi firme c

totalmente a vulva das fêmeas fecundadas. Em fêmeas jovens, cm não fecun¬

dadas ou nas que “entram em cio”, não está presente. Quando nascem os filho¬

tes, é esta massa amolecida por um líquido, eliminado pelo aparelho genital femi¬

nino, ficando removido para dar passagem aos filhotes. Em seguida, porém, for¬

ma-se noramente, tamponando a vulva.

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

144

ESCORPIÕES E ESCORPIONISMO XO BRASIL, V

A presença do spcrmatocleutrum impede realmente um novo acasalamento.

Temos separado um lote daquelas fêmeas que, na época do cio, foram “des¬

prezadas” pelos machos. Em todas elas havia o spermatocleutrum. Entretanto,

mais ou menos 6 semanas depois, elas pariram, surgindo depois do parto um

novo spennatocleutrum.

Êste é, portanto, de origem feminina, dirimindo-se com estas observações

muitas hipóteses, aventadas por diversos autores. É ao mesmo tempo um indí¬

cio de que a portadora dispõe ainda em seu corpo de esperma fecundante, não

necessitando de um novo acasalamento.

Não pudemos averiguar ainda, si se verifica somente um único acasala¬

mento durante toda a vida da fêmea. A relação numérica entre machos e

fêmeas das 2 espécies estudadas e que é, mais ou menos, de 1 para 3, e o

facto óbvio de que justamente esta relação garante harmoniosamente o equili-

brio biológico, com a garantia da sobrevivência da espécie, parece insinuar, salvo

melhor juizo de mais competentes, que haja apenas um ou, no máximo, dois

acasalamentos durante a vida da fêmea, a não ser que esta tenha vida muito

longa, o que também ainda não está estudado em nenhuma espécie escorpiônica.

Significativo nos parece o caso de Tityus serridatus, que é um escorpião nume¬

rosíssimo em certas regiões do Brasil (Belo Horizonte, Ribeirão Preto, etc..),

observado já há várias dezenas de anos e do qual ainda hoje não se conhece o

macho. Entretanto, as fêmeas dos nossos viveiros parem anualmente. Uma só

fecundação pelo macho, no começo da fase sexual da fêmea, tornaria plausivel

a ausência dêste ou sua enorme raridade.

CONCLUSÃO

Em Tityus trlvittatus e Tityus bahiensis realiza-se o acasalamento pela

transmissão do esperma, do macho à fêmea, por meio de um órgão copulador,

o pênis, que é o resultado da união dos dois hemipenes, localizado cada um em

sua respectiva bainha.

Durante a cópula é o pênis fixado sòbre o solo, levando em sua parte

interna o liquido fecundante. Pelo vai-vem dos passos para a frente e para

trás do casal, preso pelas mãos, e dirigidos por cima do órgão copulador, é o

"scmen” bombeado, aos poucos, para a parte anterior, aberta, do pênis, chegando

em contato direto com a abertura genital de fêmea, quando esta roça com a

vulva esta parte do órgão.

Finalizado o acasalamento, é o pênis abandonado sôbre o solo, cabendo aos

«pitélios das bainhas a neo-formação das lâminas peniais.

2 3 4

5 6 7

11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Kutantan,

- 27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGANG BCCHERL

145

As dimensões, o aspecto externo e as estruturas histológicas dos testículos,

dos vasos deferentes, da vesícula seminal e das glândulas anexas, são sujeitos

a variações individuais, segundo maior ou menor atividade sexual do indivíduo.

O “vas deferens” das 2 espécies não corresponde ao que se entende geral¬

mente sob esta designação, pois os dois tubos, além de conduzirem o líquido

espermático às ampólas seminíferas (verdadeiras ou secundárias), exercem igual-

mente atividade gametogênica, tanto na porção anterior como na posterior, reve¬

lando sua estrutura anatômica que também a parte intermediária pode desen¬

volver esta atividade.

Os espermatozóides obedecem, dentro dos foliculos testiculares, a uma dis¬

posição unipolar, ao passo que, uma vez descarregados para o lumen central,

testicular ou para dentro da vesícula, parecem estar distribuídos em feixes, com

as cabeças e caudas orientadas a esmo.

A união dos sexos abrange um conjunto de manobras, cuja iniciativa cabe

-exclusivamente ao macho e que se desenrola na seguinte sequência: a) escollia

da fêmea, exteriorizada por sua apreensão com as mãos do macho; b) prelúdio

nupcial, com a escolha de um local propício à cópula, distribuição de alimento

à companheira, excitação mútua por diversos “manejos pre-nupciais; c) acasa¬

lamento propriamente dito, com a emissão do pênis pelo macho e a fixação

sòbre o solo ; a transmissão do liquido fecundande da parte anterior do pênis

à vulva da fêmea, pelo vai-vem da perambulação ; d) separação pacífica dos

dois, permanecendo o pênis abandonado no solo.

RESUMO

Estudos comparativos sòbre o aparelho genital masculino de Tityus trivit-

■tatus e Tityus bahiensis e sòbre o seu comportamento no acasalamento são

apresentados.

A velha teoria de Dufour e Blanchard, de que os verdadeiros órgãos copu-

ladores residiriam dentro de bainhas, ao lado dos testículos, é plenamente con¬

firmada, sendo invalidadas as interpretações dêstes mesmos órgãos como simples

""orgãos paraxiais”, feitas por Pawlowsky, Birula, Werner e outros.

A verdadeira significação e função dos apêndices genitais externos dos

machos é elucidada e, para evitar de futuro, maiores complicações terminoló¬

gicas, é proposta para os mesmos a designação de "styli genitales externi", ao

passo que se conserva a designação de “pênis” para o órgão copulador.

Foi assinalado, nas 2 espécies, que o “vas dcfcrcns ” exerce dupla atividade,

a gametogênica e a de transportar os espermatozóides às vesículas.

Foi verificado que, no acasalamento, abandonam os 2 hemipenes seus loga-

res nas bainhas e, ao passarem pela fenda genital, se unem solidamente em um

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

146

ESCORPIÕES E ESCORFION ISMO XO BRASIL, V

único tubo, o pénis, que carrega em seu interior o liquido fecundante. £ste órgão

é, após sua projeção, fixado sôbre o solo, diretamente por baixo da vulva da

fêmea.

A “promènade à deux” é realizada por cima dêste órgão, de maneira que,

no vai-vem da marcha, a vulva receba, ao roçar sôbre a parte anterior do pênis,

os espermatozóides. Após a cópula, é o órgão masculino abandonado sôbre o

solo, refazendo as bainhas novos hemipenes.

O processo do acasalamento é minuciosamente descrito e a significação dos

“styli genitales” nos opérculos genitais, dos acúleos no pênis, do spermatocleu-

truin nas fêmeas é explanada.

SUMMARY

Comparative studies on the male genital apparatus oí Tityus trivittatus and

T. baJiicnsis, two South-American scorpion species, and their pairing habits are

presented in this paper. The following facts were observed:

1. The lestes are situated in the pre-abdomen. They are two white tubes,

nearly parallel to the length of the body. In the adults, they are linked together,

near the posterior part of the pre-abdomen and from this point a further central

tube, parallel to the other, extends to the front. These three are linked by

three or four horizontal tubes.

2. The two vasa dcfcrentia have the samc structure like the testes and

the gametogenic activity is still exercised by the posterior and the anterior,

vesicle-Iike, part. In T. bahicnsis sometimes another ampoule is still present

in the «ame region and may be designated as “secondary seminal vesicle”.

3. The “vasa deferentia” lead to the two " seminal vesicles” and these

open in the “cylindrical” glands.

4. Three pairs of accessory glands exist, to wit:

Two “accessory anterior glands ” with very long ducts, situated one on each

side on the inner face of the genital opercules. They discharge their products

in the anterior part of the dnctus cjacnlatorius;

two “oval, pyriform glands”, situated near the seminal vesicles. Their

ducts open in the inferior face of the ejaculatory duct, one on each side, vera¬

near the opening from the cylindrical glands;

two xlyndlrícal glands”, long in size and with wider openings. Their

body is elongated, with three ampoule-like parts. The last part is almost trian¬

gular.

The anatomical structure of these glands is nearly the same: a thin, externai,

circular muscle layer; a circular peritoneum; an epithellium with extremely long

Mem. Itist. ButanUn,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGANG BÜCHERL

147

cylindric cells and a “membrana basalis”. All have a central “lumen”, for

discharging their products.

5. There are two copulating organs in T. trivittatus and T. bahiensis, as

described already bv EHifour and Blanchard in some .\frican species and named

by these authors as “íourreaux des verges” or “lames peniales” (Vachon).

These organs, which are real “hemipenes” (Piza) and not “paraxial organs”

(Pawlowsky, Birula, Wemer and others), have a complex structure. They

are surrounded by a thin, transparent layer, the “membrane”. Both, hemipenis

and membrane look like a tube, cut in half along the length. When recently

formed, as after each mating, the hemipenes are flexible; but later become less

elastic and more chitinous. Their anterior part is larger and not so densely

chitinized. Their posterior portion has a sharp, extern, chitinized point, Corning

out sometimes through the membrana of the surrounding layer. The terminal

portion is continued by a long, elastic, not chitinous “flagellum”, also surrounded

by the membrane.

This membrane constitutes the natural continuation of the ductus ejacula-

toriiis.

6. The ejaculatory duct forms the “cantara gcnitalis”, in which open

all the ducts of the accessory glands, the seminal vesicles and the two canais

of the hemipenes.

7. Between the two “opercula gcnitalia” the ejaculatory duct opens. Two

appendages exist on the inner, inferior side, designated as “styli gcnitalcs

extemi”. Pawlowsky, Birula, Wemer and others thougt that these were the

true copulating organs, responsible for the transfer of spcrmatic liquid to the

female. But they serve to the union of the hemipenes and to hindcr the

reentrance of the penis in the ejaculating duct.

8. The following facts summarize our obscrvations on the mating-habits

of Tityus trivittatus and T. bahiensis:

The mating may be divided into three periods:

First the male takes firmly the liands or the fingers of the female with

his two broader pincers and begins to walk forwards or backwards, selecting

a proper place for mating. Periods of rest interrapt this walk. Their pedi-

palps are carried horizontally in front and the caudae are bent upwards from

their backs or dragged behind or sidcwards.

Second, the two hemipenes and all the sexual and accessory glands are

discharged into the ejaculatory duct. The hemipenes are united firmly into

a single copulating organ, the penis. In his internai canal are the products

of the seminal vesicles and of the other sexual glands.

iSciELO

0 11 12 13 14 15 16

148

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL. V

The penis is projected and fixed on the soil. directly under the open vulva

of the female. At the moment of ejaculation the male bents the cauda verti-

cally. simulating a figure, designated by Fabre as “arbre droit”.

In the final period of mating the seminal íluid is transferred from the

penis to the vulva of the female, coming aut of the anterior, open part of the

copulaitng organ (fixed over the soil). The “promènade à deux” is very ca-

reful.

9. The considerable degree of uniformity in the morphologic and anatomic

structure of male sexual apparatus in the two studied species and the European,

Aírican and Mexican species, described by Pawlowsky, strongly suggests that

all these species. even from different families, which have hemipenes (“paraxial-

organs”-Pawlowsky), have also the same mating-habits as T. triznttatus and

T. bahictisis.

10. The ‘‘nuptial prelude”, described by Fabre, really includes the mating.

ZUSA M MEN FASSUNG

\’erglcichende Studien über die mànnlichen Geschlechtssorgane der beiden

Skorpionarten Südamerikas, dem Tityus trhntiatus und T. bahiensis werden

dargelegt und die Begattungsweise der beiden Arten wird ausführlich beschrieben.

Es wird hiennit iiberhaupt die Kopulation der Skorpione erstmalig beschrieben,

da bisher nur Vermutungen und Hypothesen verzeichnet werden konnten. Fol-

gende Tatsachen konnten beobachter werden:

1. Die Hodcn liegen bei Jungtieren ais zwei kurze vordere Lãngstrãnge

an den Innenseiten des Prae-Abdomens, teilweise zwischen Lel>erfollikeIn ein-

gebettet. Allmãhlich wachsen sie weiter nach hinten und vereinigen sich

schliesslich and der hintersten Grenze des Prae-Abdomens zu einem einzigen,

gleichmássigen, weisslichen Hodenschlauche. Xahe der Verinigungsstelle wãchst,

mit zunehmender Geschlechtsreife, ein mittlerer Hodenschlauch nach vome und

entsendet jeweils nach links und rechts eine Seitenanastomose, die die ãusseren

Rohre erreichen. Die vollstándig entwickelten Hoden beider Skospione bilden

schliesslich eine Hufeisenfigur, die nach vome offen ist, mit einem mittleren

Lãngsstrang und drei vier Queranastomosen.

In den Hodenfollikeln befinden sich. fãcherartig um ein Zentrallumen an-

geordnet, die Follikelfãcher. In jedem Fach kann man eine liestimmte Menge

vou Keimzellen in einer bestimmten Entwicklungsphase sehen, angefangen von

den Urspermatogonienden Spermatogonien. den Spermatocyten 1. und 2. Ord-

nung, den Prae-Spermiden bis zu den unreifen, íast reifen und vollstándig

Metn. Inst. Butantan,

27:121-1SS. 1955/6.

WOLFGAXG BCCHERI.

149

ausgebildeten Spermatozoen. Letztere sind unipolar angeordnet, verlieren aber

diese Anordnung, wenn sie in die Samenblasen befõrdert werden.

2. Die Vasa deferentia sind im hinteren Abschnitt von den Hodenschlãu-

chen nicht zu unterscheiden. Weiter nach worne werden sie allniãhlich dünner;

wenden sich nach aussen, winden sich dorsal um die Kopulationsorgane und die

Anhangsdrüsen herum; richten sich wieder nach innen, wobei sie wieder an

Dicke zunehmen und münden schliesslich, vermittels einer “Ampulle” in die

Samenblasen. Bei Tityus bahicnsis kommt neben der Ampulle nicht selten noch

weiterer Blindsack vor, eine Art von “vesícula seminalis accessoria” (Fig. 6; m).

Die Vasa deferentia haben funktionell zwei Aufgaben: die der Samenleitung

und, im Vorderteil und der Ampullenregion, die der Samenbereitung. In diesen

beiden Abschnitten sind sie anatomisch kaum von den eigentlichen Hodeníol-

likeln zu unterscheiden. Selbst der mittlere, schmãlere, Teil hat Urspermato-

gonienzellen und kann jederzeit, je nach Bedarf, zo Hoden umgewandelt werden.

Diese Bauart der Ausführwege der eigentlichen Hoden scheint uns sehr

aufschlussreich sowohl in onto-wie auch in phyllogenetischer Hinscht und diirfte

wohl ein Ausdruck der relativen Primitivitãt der recenten Skorpione darstellen.

3. Die beiden Samenblasen (Fig. 3 und 5;e) sind stets vorhanden und

hilden ein lãngliches, ovales Sãckchen, oft mit einer leichten, mittleren Einschnü-

rung und einem etwas spitz zulaufenden Hinterende. Der relativ kurze Aus-

führkanal mündet in den Vorderteil der zylidrischen Drüse.

4. Die Zylidrische Drüse ist langgestreckt und gewunden (Fig. 3 und

5;f und i). Sie ist mit dem Riicken in eine rinnenfõrmige Lãngsfalte der

Kopulationsorganscheiden eingekerbt und wird durch verschiedene Muskelbãnder

in dieser Lage gelialten. Der Hinterabschnitt der Drüse ist fast dreieckig und

gewunden. Man kann sie von den Kopulationsorganscheiden sehr leicht lõsen.

Ihr langer Ausführgang mündet in den duetus ejaculatorius ein.

5. Die “envie Drüse'' (Fig. 6;d) liegt etwas vor der Ampulle des vas

deferens (Fig. 5;g und gl) und ihr langer, dünner Ausführgang führt parallel

nebem dem der zylindrischen Drüse in den duetus ejaculatorius.

6. Vorne, links und rechts vom duetus ejaculatorius, liegt je eine “vordere

Anhangsdrüsc (Fig. 3 und 4;c), durch ihre gelbliche Fãrbung sehr leicht aus

der Umgebung zu erkennen. Ihr Inhalt wird in den Vorderteil des duetus

ejaculatorius geleitet.

Die Samenblase, der Endteil der vasa deferentia und die drei Paare von

Anhangsdrüsen sind aussen mit einer zirkulãr verlaufenden Muskelschicht

ausgestattet. Ihre Kontraktion gestattet eine ruckartige Entleerung ihres

Inhaltes.

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

150

ESCORPIÕES E ESCORPIOXISMO XO BRASIL, V

7. Der ductus ejaculatorius bildet einen relativ weiten Genitalraum, in

dem die Ausführgànge aller Drüsen zusammenlaufen. Mãchtige Lángs-und

Quermuskeln ermõglichen eine Dehnung oder Raumverschiebung. Besonders an

seiner Hinterseite verlàuft ein starker vertikaler Druckmuskel, dessen Zusam-

menziehung eine Auspresswirkung in Richtung der Genitalõffnung bewirkt.

Der ductus ejaculatorius geht nach aussen in die unpaare Genitalõffnung

über, die im Ruhezustande von den Genitalklappen verdeckt wird. An den

Hinterseiten dieser Õffnung liegen die beiden "Kopulationszangen” (Fig. 2;b),

von denen Pawlowsky und nach diesem Birula, Werner und andere behauptet

hatten, sie wãren die eigentlichen Kopulationsorgane, also für die Spermaüber-

tragung vom Mãnnchen zimi Weibchen verantwortlich (Mit Recht hegte Werner

den Y erdacht, dass sie zu eigentlichen Kopulationsorganen nicht braunchbar

wãren). Lm für immer eine irreführende Bezeichnung zu beseitigen, haben

wir m dieser Arbeit die Bezeichnung “Styli gcnitales externi” vorgeschlagen.

Es handelt sich um zwei winzige, unartikulierte Stiftchen, die, selbst bei geõffne-

ten Genitalklappen, nur sehr schwer zu unterscheiden sind und deren Bedeutung

spãter dargelegt werden soll.

Der ductus ejaculatorius teilt sich hinten in zwei Seitenãste (Fig. 4;h),

deren schematischer Verlauf durch die Figur 5 (h und j) etwas klarer wird.

Diese Seitenãste enthalten die eigentlichen Kopulationsorgane, deren Anfangs-

teile in Figur 4 (1) gekennzeichnet sind.

Wir mõchten diese, im Querschnitt halbmondfõrmigen, Organe ais "Kopu-

lationsorganscheiden" bezeichen und das darinliegende, eben falis halbmondfõr-

mige, aus Chitin bestehende Organ, ais Kopulationsorgan oder "Hemipcnis

Pawlowskys Bezeichnung dieser Bestandteilc ais “Paraxialorgane”, der auch

Werner beigepflichtet hat, besteht zu Unrecht. Die alte Meinung von Dufour

und Blanchard. und neuerdings von Piza und Vachon ist die richtige. Hier

handelt es sich unzweifelhaft um die richtigen Kopulationsorgane.

Diese Organe, je eines in einer Scheide, also zwei im Ganzen, haben die

Po™ die in Figur 7 wiedergegeben ist. Ein breiter, stark chitinisierter Vor-

derkõrper mit einem scharfen Seitenzacken (Fig. 9; q) setzt sich hinten in eine

diinne Schwanzgeissel fort (Fig. 7; j), die ebenfalls von der Membrana umfasst

wird (Fig. 8).

Durch Muskel-und erhõhtem Turgordruck werden auf dem Hõhepunkte der

Kopulation sowohl die beiden Samenblasen wie auch alie Anhangsdrüsen ruck-

artig in den ductus ejaculatorius entleert. Hierauf, ebenfalls durch Druckwir-

kung der Muskeln und des Blutes. rücken die beiden "hemipenialcn Stiicke”.

von jeder Seite her eines, ebenfalls in den Geschlechskammerraum und fassen

in ihren Hohlrãumen die Geschlechtsdrüsenflüssigkeiten auf. Da sich nun die

beiden Stiicke. bei weiterem Vorrücken. vorne berühren (vergleiche Figur 4;I)

SciELO

11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGANG BCCHERL

151

und, bei ihrem Durchgang durch die relativ enge Geschlechtsõffnung, ganz innig

aneinandergepresst werden, vereinigen sie sich zum definituven Kopulationsorgane,

dem Penis.

Um diese Vereinigung zu bewerkstelligen, sind die Seitenrãnder der Hemi-

penes falzig umgeschlagen, so dass die eine Hãlfte genau in den Falz der anderen

hineinpasst. Bei der Passage durch die Geschlechtsõffnung, werden die Falze

durch den Drüsenkitt der vorderen Anhangsdrüsen befeuchtet. Diese Substanz

erhãrtet, bei Luftzutritt.

Beim Vergleichen der Figuren 7 (ein Hemipenis), 9 und 11 (vollstãndiges

Kopulationsorgan ) , kann man die definitiva Verwachsung der bpeiden Hálften

verfolgen. Figur 9 (o ; p) zeigt noch die verbundenen Falzrãnder der ursprim-

glichen Hálften. Das definitive Kopulationsorgan bildet ein geschlossenes Rohr,

in dessem Innerem sich die augeschiedenen Geschlechtsprodukte befinden. Das

Rohr is nur vorne, an der kopfartigen Enveiterung, offen. (Figur 9).

8. Die Kopulation von Tityus triznttatus und T. bahiensis konnte oftmals

beobachtet werden und spielt sich folgendermassen ab:

a) Auszuahl der Parlncrin :

Zur Brunstzeit, also im brasilianischen Spãtfrühling (Monate Oktober bis

Dezemberanfang), pflegen die Skorpione ihrc Verstecke zu verlassen. Die

grõsseren und krãftiger gebauten Mãnnchen suchen ihre Partnerinnen aus. An

manchen gehen sie achtlos vorbei, wâhrend sich oft gleich zwei bis drei auf

dasselbe \\ f eibchen stürzen, bis dann schliesslich das gewandterc Mãnnchen die

Nebenhuhler durch kràftige Hiebe vertreiben kann. Bei der Partincrinwahl

müssen gewisse “Brunststoffc” eine ausschlaggebende Rolle spielen und diese

Stoffe müssen durch die weibliche Geschlechtsõffnung ausgeschieden werden;

denn wir konnten immer beobachten, dass die Weibchen, deren Vulva durch den

Spcrmatoclcutrumpfropf verschlossen war, niemals von den Mãnnchen aus-

gewãhlt wurden.

Mãnnchen und Weibchen stellen sich Kopf gegen Kopf, das Mãnnchen

etwas hõher und umfasst mit den Fingem der krãftigen Hãnde, von aussen

her, die Hãnde der Partncrin.

b) Das Vorspiel und der Skorpiontanz:

Kaum liegen die Hãnde des Weibchens fest zwischen denen des Mãnnchens,

setzt auch schon der õfters beschriebene Skorpiontanz ein. Dieser besteht darin,

dass das Mãnnchen anfangs die Partnerin einfach mit sich sehleppt, bald im

Vorwãrts-bald im Rückwãrtsschritt, wobei an die 10 bis 20 Meter zurückgelegt

werden kõnnen, um einen ftir die Kopulation geeigneten Platz ausfindig zu

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

152

ESCORPIÕES E ESCORPIONISMO XO BRASIL, V

machen. Dieser liegt nicht etwa tief in der Erde, in einem für das menschliche

Auge verborgenen Verstecke, wie so oft vermutet wurde, sondem besteht einfach

aus einem Stück glatten Bodens, irgendwo im Schatten. Niemals haben die

Hunderte von Skorpionen von beiden Arten, die wir lebendig halten, zur Ko-

pulation ihre Verstecke benutzt, obwohl sie, zu normalen Zeiten, regelmãssig

darunter hausen. Zur Brunstzeit verlassen sie gerade die Verstecke, kommen

ans Tageslicht und vollziehen da die Begattung, um spãter wieder in ihre

Verstecke zuriickzukehren.

Ist der zweckmãssige Platz erkoren, beginnt das “ Liebcsspicl”, das in einem

mehr geregeltem Hin-und Herschreiten besteht, immer über der augsgewãhlten

Stelle. Man mõchte annehmen, dass damit ein Glatten und Austreten des Bodens

erreicht werden soll. Am Ende angelangt, wird eine kurze Pause eingelegt.

Das Mãnnchen stõsst mit der Stime gegen die des Weibchens. Seine Mandibeln

werden stãndig vor und riickwãrts bewegt und zwischen ihnen erscheint ein

weisslicher Spcisebrei, der der Partnerin zwischen die Mandibeln und auf die

Stirnrãnder gelegt wird. Das Weibchen verhàlt sich sonst passiv; begleitet

wohl alie Schritte des Mãnnchens aktiv; ergreift aber von sich aus niemals die

Initiative. Bringt man beide Tiere auf eine Glasscheibe, so lãsst sicli das

Weibchen einfach vom Partner hin-und herschieben, ohne die Beine zu erheben.

Die “Promènade à deux” kann einige Minuten bis zu einer halben Stunde

andauern; wird oft durch Ruhepausen unterbrochen und dient hauptsãchlich

dazu, die sexualle Errtgung beider allmáhlich auf einen Gipfelpunkt zu treiben.

Anfangs benutzte das Mãnnchen noch die 4 Beinpaare zum Vor-und Rück-

schreiten ; nun werden nur mehr die drei hinteren Paare dazu eingesetzt, wahrend

das vorderste Paar heroben ist, dem Weichen unter das Prae-Abdomen greift

und heítig seine Genitaloperkeln betrommelt. Dabei spielen die Kãmme beider

durch krãftiges Ein-und Auswãrtsschwenken, durch Auf-und Xiederbewegungen

eine wichtige Rolle. Der mãnnliche Kõrper wird wellenartig erschüttert. Mit

zunehmender Erregung klappen allmáhlich lieider Genitaloperkeln auf und die

Geschlechtsòffnungen werden sichtbar.

Photo 1 zeigt eine Ruhepause beider Tiere und Photo 2 eine Phase des

ntãnnlichen Rückwártsschreiten.

c) Samenübcrtragung und Skorpiontanz :

Ist die Erregung beider, besonders des immer aktiven Mãnnchens, auf den

Hõhepunkte angelangt, hãlt dieses plótzlich im Schreiten inne; erhebt das Post-

Abdomen (Cauda) lotrecht (Photo 3), wàhrend das Weichen nur die drei

letzten Scbwanzglieder etwas hochstellt. Es entsteht so die von Fabre besch-

riebene Figur des “arbre droit”. In dieser Stellung sammelt sich sowohl das

Mem. Inst. BuUntan,

27 : 121 - 155 . 1955 / 6 .

WOLFGANG BÜCHERL

153

Blut wie auch der Darminlialt im Prae- Abdômen, was eine bedeutende Druck-

erhõhung zur Folge haben muss und unter diesem aufs Hõchste gespanntem

Drucke werden ruckartig die Geschlechtsdrüsen entleert und die beiden hemi-

penialen Stücke nach aussen gepresst, wo, wie schon envãhnt, erstmalig ihre

vorderen Teile zum Kopulationsorgane verschmelzen. Durch einen letzten Druck

der starken Muskelbündel an der Hinterseite des ductus ejaculatorius, wird dann

der, beim Herausgleiten verschmelzende, Penis ausgeschleudert. Der Penis

dringt nicht in die weibliche Vulva ein, sondem gleitet auf den Boden und

klebt da mit seiner verderen Unterseite fest (durch den anliaftenden Stoff, der

von den vorderen Anhangsdrüsen geliefert wurde) (Fig. 11). Die Schwanz-

geissel des Kopulationsorganes bleibt jedoch auch jetzt noch mit den mãnnlichen

Geschlechtsorganen in Verbindung. Sie ist selir dehnbar und kann, ohne zu

reissen, um das 10 bis 30-fache ihrer natürlichen Lãnge, gedehnt werden.

Sofort nach dem Ausschleudem des Kopulationsorganes beginnt von neuem das

Hin-und Herschreiten; nun jedoch sehr achtsam und regelmássig, so dass der

Beobachter den Eindruck bekomnit, es ltandle sich um einen Tanz. Beim

Rückschreiten des Mãnnchens kommt die Vulva des Weibchens genau iiber den

offenen, vorderen Teil des auf dem Boden festhaftendem Kopulationsorganes,

und kann die Spennamasse in sich aufnehmen; beim Vorwãrtsschreiten des

Mãnnchens dringt das Hinterende dieses Gliedes naturgemãss wieder in seine

Geschlechtsõfínung ein (da sich ja die elastischc Schwanzgeissel wieder zusam-

menzieht) (Figur 9;r). Dabei hacken sich die beiden Seitendomen (Fig. 9 ; q)

an den “Styli gcnitales” (Fig. 2;b) fest. Durch Zug der Geissel und Druck

der schon von Xarayanan beschriebencn Gcnitaldeckelmuskeln auf den Hinterteil

des Kopulationsgliedes wird so ein wciterer Schub von Samenflüssigkeit an die

vordere. offene Stelle gepumpt, um wieder, beim Rückwãrtsschreiten. in die

weibliche Vulva eingefõhrt zu werden.

Diese Pump-und Einführprozedur wird an die 10 bis 15 mal wiederholt,

bis schliesslich das Weibchen aus seiner Apathic erwacht; sich mit krãftigem

Rucke aus den mãnnlichen Fingem befreit und diesem einige energische “Püf-

íe” versetzt. Damit ist die Samenübertragung abgeschlossen. Friedlich sucht

jedes Tier seinen Weg. Das Mãnnchen wcndet sich ab, wobei nun der bis

ans Ausserste gespannte Geisselfaden zerreisst. Das Kopulationsglied bleibt

unbeachtet an der Stelle kleben. Schon nach 5 his 8 Wochen hilden die

mãimlichen Hemipenisscheiden netie Organe aus, die aber erst wieder l>ei der

nãchsten Bmnstzeit lienützt werden.

Dass diese Beschreibung die erste Beobachtung der Paamng unter den

Skorpionen überhaupt darstellt, ist nicht zu verwundem. Obwohl schon manche

den Hochzeitstanz beschrieben hatten und auch schon photographieren konnten,

hat doch niemand das kleine, brãunliche, unter den Partnern liegende Organ

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

154

ESCORPIÕES E ESCORPIOXÍSMO XO BRASIL. V

aufgefunden, weil es sich farblich mit der Umgebung vermischt. Ausserdem

mag es wohl bisher noch keinem Forscher gelungen sein, über ein so zahlreiches,

lebendes, Skorpionmaterial zu verfügen, wie es uns gegõnnt ist.

9. Wir hegen keinen Zweifel, dass das an Tityus trizit tatus und T.

bahicnsis erstmalig beobachtete Gebaren bein der Begattung auch all den von

Pawlowsky beschriebenen Skorpionarten, die ein sogenanntes “Paraxialorgan”

besitzen, zukommt.

10. Die Ausführungen Wemers, Birulas und anderer, die grõsstenteils

auf den Behauptungen Pawlowskys beruhen, müssen also wieder, im Sinne

Blanchards, gedeutet werden.

11. Wenn wir die Ausdrücke “Hemipenis” und “Penis” für die halben

und für das definitive Kopulationsorgan benutzten, so taten wir das um der

Klarheit willen und um die Terminologie nicht noch mehr zu verwirren. Wir

sind uns klar, dass ein Organ, das zur Samenübertragung auf das andere Ge-

schlecht benutzt wird, aber dabei definitiv verloren geht und durch ein neues

ersetzt wird, nicht ohne Weiteres ais “Penis” bezeichnet werden sollte. Ande-

rerseith handelt es sich aber auch um keine Gebilde, die man sonst ais “Sper-

matophoren” benennt.

12. Aus den Ausführungen dieser Arbeit wird auch die Tatsache ersicht-

lich, dass, obwohl bei den meisten Skorpionarten das Verhãaltnis der Mãnnchen

zu den Weibchen wie 1:3 oder 1:5 liegt, dennoch das biologische Gleichgewicht

mit der Garantie des Überlebens der Art besteht. Bei vielen Arten mag eine

einzige Samenübertragung für das ganze Leben des Weibchens ausreichen, da

diese die Spermatozoen in ihrem Kõrper jahrelang lebendig erhalten kõnnen und

alljãhrlich 15 bis 20 Junge zur Welt bringen kõnnen.

AGRADECIMENTOS

Agradecemos aos técnicos, auxiliares e serventes do Laboratório de Zoologia

Médica, cuja dedicação e espírito de colaboração nos possibilitou êste trabalho.

BIBLIOGRAFIA

1. Pawlowsky, E. N. — On the morphology on the male genital apparatus in scorpions.

Trans. Soc. Nat. Lcningrad 53: 18-86, 1924.

2. Wemer, F. — Scorpiones, Pedipalpi. Bronn’s Klassen und Ordn. d. Tierreiches 5. IV

(8): 155-165, 1935.

3. Vachon, M. — Études sur les scorpions. InsL Pasteur d’A!gérie, Algcr, 1952.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

Mem. Inst. Butantan,

27:121-155. 1955/6.

WOLFGA.VG BCCHERL

155

4. Piza, Jr. de Toledo, S. — Observações sobre o aparelho reprodutor e a reprodução

de T. bahiensis. Jorn. de Agronomia, Piracicaba, Brasil, 2 (1) : 49-59, 1939.

5. — Sobre os orgãos copuladores dos escorpiões. Ibidem 2 (4) : 285-291, 1939.

6. — Estudos antomicos em escorpiões brasileiros. Rev. de Agricultura, Piracicaba,

São Paulo, Brasil, 15 (5-6): 215-228, 1940.

7. — Meiose no macho do escorpião brasileiro. Ibidem 18 (7-8) : 228-248, 1943.

8. Dufour, L. — Histoire anatomique et physiologique des scorpions. Inst. Franc., Sa-

vants étrangers 14 : 561-565, 1856.

9. Blanchard, E. — L’organisation du règne animal. Paris, 30 fase. : 1-232, 1851-1864.

10. Narayanan, M. — Notes on the anatomy of scorpions. Externai sexual characters.

Quart J. Micr. Sei. 30: 121-124, 1889.

11. Birula, A. — Uber Scorpio tnaurvs L. und seine Unterarten. Horae Soc. ent. Rossicae

1: 115-192, 1910.

12. Fabre, J., H. — Souvenirs entomologiques ; neuvième serie. Delagrave, êd. Paris :

1-374, 1907.

13. Maccary, A. — Mémoires sue le scorpion que se trouve sur la montagne de Cette,

Cabon éd. Paris: 1-48, 1910.

JSciELO

ERRATA

Dos numerosos erros tipográficos existentes no trabalho de W. H. A.

Schottler “Lista suplementar de bibliografia sôbre venenos animais publicada

nos anos de 1863 até 1946” (Mem. Inst. Butantan 26: 7-73; 1954), devem ser

desde logo rectificados aqueles que tornam difícil, ou mesmo impossível, o

encontro da literatura citada, a saber:

pag.

15.

lin.

34:

17,

25:

18,

f»

14:

22,

18:

20:

38:

36:

39:

pag.

25.

31.

lin.

32,

13:

34.

10:

11:

pag.

35,

44,

16:

48,

49,

27:

50,

12:

51.

12:

53,

35:

54,

34:

61,

22:

66,

69,

16:

20:

Pag.

71,

22:

73,

26:

Bdyth = Blyth

193 = 1903

inserir "5:” entre “Cirurg.” e “297”

628 = 683

1927 = 1937

644 = 646

Coohdgc = Coolidge

122 = 1922

Cand. = Cana d.

Ccntralol. = Centralbl.

substituir lin. 30 c 31 por “ Fcldhauscn, M. — übcr dic Einwirkung des

Daboiagiítes auf die Nieren. (The-’’

1863 = 1893

Gleny = Glcnny

2 = ?

1864 = 1867

a na cm ia = haemorrhage

38 = 365

Zoll. = Zool.

128 = 28

inserir 27; 1907).” depois “nat”

1925 = 1935

194 = 1924

Rept. = Dept.

inserir “ (Boll. mens. Accad. Gioenia Sei. nat Catania?: 2; 1891).”

depois “ L.”

9 = ?

inserir “Xac.” entre “Esc.” e “ Cienc.”

1045 = 1405

Adelaire = Adelaide

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16