M E M O RIA S

INSTITUTO

BUTANTAN

1973

VOLUME 37

SECRETARIA DE ESTADO DA SAUDE

CO 0 R DANADO RI fl DOS SERVIÇOS IÍCNIC0S ESPECIALIZADOS

INSTITUTO BUTANTAN

SÃO PAULO — BRASIL

SciELO

10 11 12 13 14 15

INSTITUTO BUTANTAN

SECRETARIA DE ESTADO DA SAÚDE

Secretário — Dr. Getulio Lima Junior

COORDENADORIA DE SERVIÇOS TÉCNICOS ESPECIALIZADOS

Coordenador — Prof. Dr. Otto Guilherme Bier

INSTITUTO BUTANTAN - DIRETORIA GERAL

Diretora — Dra. Jandyra Planet do Amaral

I - DIVISÃO DE M1CROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA

Diretor — Dr. Bruno Soerensen Cardozo

a) Serviço de lmunologia

Diretor — Dr. Raymundo Rolim Rosa

c) Serviço de Virologia

Diretor — Dr. René Corrêa

II - DIVISÃO DE BIOLOGIA

Diretor — Dr. Alphonse Richard Hoge

a) Serviço de Animais Peçonhentos

Diretor — Dr. Hélio Emerson Belluomini

b) Serviço de Genética

Diretor — Dr. Willy Beçak

III - DIVISÃO DE CIÊNCIAS FISIOLÓGICAS E QUÍMICA

Diretor — Dra. Alba Apparecida de Campos Lavras

a) Serviço de Bioquímica

Diretor — Dra. Fajga Ruchla Mandelbaum

b) Serviço de Farmacologia

Diretor — Dra. Mina Fichman

c) Serviço de Fisiologia

Diretor — Dr. Saul Schenberg

d) Serviço de Química Organica

Diretor — Dr. Raymond Zelnik

III

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SciELO

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cm

MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN

INSTRUÇÕES AOS AUTORES

1 - FINALIDADE

As MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN são publicadas sob a

orientação da Comissão Editorial, sendo que os conceitos emitidos são de

inteira responsabilidade dos autores. Tem por finalidade a apresentação de

trabalhos originais que contribuam para o progresso nos campos da Biologia

e da Medicina, elaborados por especialistas nacionais ou estrangeiros que se

enquadrem no REGULAMENTO DOS TRABALHOS.

2 - REGULAMENTO DOS TRABALHOS

2.1 - NORMAS GERAIS

2.1.1. Os trabalhos devem ser inéditos e destinar-se exclusivamente à

revista “MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN”. Os artigos serão pu¬

blicados a convite da Comissão Editorial.

2.1.2 ESTRUTURA DO TRABALHO

2.1.2.1 Elementos preliminares

a) cabeçalho — título do trabalho e nome do autor (es);

b) filiação científica e endereço para correspondência.

2.1.2.2 Texto

Sempre que possível deve obedecer à forma convencional do

artigo científico:

a) Introdução — Estabelecer com clareza o objetivo do tra¬

balho, relacionando-o com outros do mesmo campo e apre¬

sentando de forma sucinta a situação que se encontra o

problema investigado. Extensas revisões de literatura de¬

vem ser substituídas por referências aos trabalhos mais re¬

centes, onde tais revisões tenham sido apresentadas.

b) Material c métodos — A descrição dos métodos usados

deve limitar-se ao suficiente para possibilitar ao leitor a

perfeita compreensão e repetição dos métodos; as técnicas

já descritas em outros trabalhos devem ser referidas so¬

mente por citação, a menos que tenham sido considera¬

velmente modificadas.

c) Resultados — Devem ser apresentados com clareza e,

sempre que necessário, acompanhados de tabelas e material

ilustrativo adequado.

v

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

d) Discussão — Deve restringir-se à apresentação dos dados

obtidos e dos resultados alcançados, relacionando-se novas

contribuições aos conhecimentos anteriores. Evitar hipó¬

teses ou generalizações não baseadas nos resultados do tra¬

balho.

e) Conclusões — devem ser fundamentadas no texto.

Dependendo do assunto do artigo, as divisões acima poderão ser modifica¬

das de acordo com o esquema de trabalho, porém, o artigo deve conter obriga¬

toriamente:

a) Introdução;

b) Desenvolvimento do tema (com as divisões a critério do

autor);

c) Conclusão.

Agradecimentos — devem ser mencionados antes das Referências Biblio¬

gráficas.

2.1.2.3 Material de Referencia

Todo trabalho deve vir obrigatoriamente acompanhado de:

a) RESUMO — um no mesmo idioma do texto, outro em

inglês, redigidos pelo(s) próprio(s) autor(s), devem

expressar o conteúdo do artigo, salientando os elementos

novos e indicando sua importância. O resumo na língua

em que esta redigido o trabalho deve ser colocado antes

do texto; e o em inglês no final. Só excepcionalmente ex¬

cederá a 200 palavras. Os títulos dos trabalhos devem ser

traduzidos para o inglês e vice-versa.

b) UNITERMOS — Correspondendo a palavras ou expres¬

sões que identifiquem o conteúdo, devem ser em número

necessário para a completa descrição do assunto e assina¬

lados com asteristicos os 3 unitermos principais. Para a

escolha dos unitermos usar o vocabulário protótipo do

campo especializado. 0

c) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS - Devem ser in¬

cluídas apenas as referências mencionadas no texto e arran¬

jadas em ordem alfabética do sobrenome do autor, nume¬

radas consecutivamente.

Periódico:

AMORIM, M. de F, MELLO, R. F. e SALIBA, F. -

Envenenamento botrópico e crotálico. Contribuição

para o estudo experimental comparado das lesões,

Mem. Inst. Butantan, 23: 63, 1950-51.

* Para as ciências da saíide usar o “Medicai Subiect Headings”. com tradução em português

realizada pelo Grupo de Bibliotecários Biomédicos da A.P.B.

VI

1, | SciELO

Livros

BIER, O. — Bacteriologia e imunologia, 1, 13. ed. Melho¬

ramentos, São Paulo, 1966.

As citações no texto devem ser em números índices, correspondendo às

respectivas referências bibliográficas.

Examplos:

As investigações sobre a fauna flebotomínica no Estado de São Paulo,

foram feitas em várias ocasiões 3 - 4 .

... método derivado de simplificação de armadilha de Disney 2 (1968).

Referencias Bibliográficas (correspondentes aos números índices)

1. BARRETO, M. P. — Observações sobre a biologia em condições naturais

dos flebótomos do Estado de São Paulo (Diptera Psychodidae); São

Paulo. 1943. (Tese — Faculdade de Medicina da Universidade de São

Paulo).

2. DISNEY. R. PI. L. — Observations on a zoonosis: leishmaniosis in British

Honduras. ]. appl. Ecol., 5:19, 1968.

3. FORATTINI, O. P. — Algumas observações sobre Biologia dos flebótomos

(Diptera, Psychodidae) em região da bacia do Rio Paraná (Brasil).

Arq. Fac. Hig. S. Paulo, 8.T5-136, 1954.

3. FORATTINI. O. P. — Novas observações sobre Biologia de flebótomos

em condições naturais (Diptera, Psychodidae). Arq. Fac. Hig. S.

Paulo. 25:209-15, 1960.

3 - NORMAS PARA APRESENTAÇÃO DOS ORIGINAIS

3.1 — Datilografia — Os originais devem ser datilografados, em 3

(tres) vias, com espaço duplo, em uma só face, mantendo as

margens laterais com 3 cm aproximadamente. Todas as pá¬

ginas devem ser numeradas consecutivamente, com algaris¬

mos arábicos, no canto superior direito.

3.2 — Tabelas — Devem ser numeradas consecutivamente com al¬

garismos arábicos e encabeçadas pelo seu título. Os dados

apresentados em tabela não elevem ser, em geral, repetidos no

texto. As notas de rodapé das tabelas devem ser restritas ao

mínimo possível e referidas por asteriscos.

3.3 — Ilustrações — (fotografias, desenhos, gráficos, etc) — As

ilustrações devem ser numeradas consecutivamente com al¬

garismos arábicos e citadas como Figuras. Todas as figuras

serão identificadas fora da área de reprodução com: número,

nome do autor, título abreviado do trabalho, indicação da

página de texto onde deverão constar. As legendas devem ser

apresentadas em folhas à parte. As ilustrações devem permitir

perfeita reprodução em clichês até a redução mínima de 6,3

cm. Os desenhos devem ser feitos em papel vegetal e tinta

nanquim preta e as letras com normógrafo, nunca datilo-

gradas.

O

VII

], | SciELO

SciELCVo

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3

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6

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cm

MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN

CONTEÚDO

Artigos originais / Original Articles

1 Ofionimia Ameríndia na Ofiologia Brasíliense .

Amerindian Ophionymy in Brazilian Ophiology

Afrânio do AMARAL

2 Contribuição para o estudo do Ácido Bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Contribution on the Study of Boric Acid as an Antiseptic for

Stored Blood.

Bruno SOERENSEN

3 A area de Educação do Instituto Butantan.

The Area of Education at the Instituto Butantan

Rosa Pavone PIMONT

4 Estudo eletroforético em “Cellogel” de venenos do gênero Bothrops

Electrophoretic Study in “Cellogel” of Venoms of the Genus

Bothrops.

Medardo SILES VILLARROEL, Raymundo ROL1M ROSA, Rey-

naldo S. FURLANETTO & Flavio ZELANTE

5 Localização do fator coagulante no espectro eletroforético do veneno

de Bothrops moojeni .

Localization of the Coagulating Faetor in the Electrophoretic Spec-

trum of the Bothrops moojeni Snake Venom.

Medardo SILES VILLARROEL, Reynaldo S. FURLANETTO, Fla¬

vio ZELANTE & Raymundo ROLIM ROSA

6 Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botró-

picos inoculados por via venosa em camundongos Mus musculus

Linnaeus 1758.1 Fenômenos que ocorrem na tentativa de determi¬

nação da DL50 .

Contribution to the Study of Determination of the LD50 of Bothro-

pic Venoms Intravenousíy Inoculated in Mice Mus musculus Lin¬

naeus 1758.1 Fenomenous that Occur on Trials of the LD50 deter¬

mination.

Reynaldo S. FURLANETTO, Eavmundo ROLLIM ROSA, Medardo

SILES VILLARROEL & Yara Q. SIRACUSA

1

17

43

83

91

99

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

7 Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botró-

picos inoculados por via venosa em camundongos Mus masculus

Linnaeus 1758.11 — Possibilidade de determinação da DL50 através

da inoculação previa de doses infra-letais do próprio veneno .

Contribution to the Study of Determination of the LD50 of Bothro-

pic Venoms Intravenously inoculated in Mice Mus musculus Lin¬

naeus 1758.11 — Possibility of Determining the LD50 through

Previous Inoculation of Sublethal Doses of the Same Venom.

Reynaldo S. FURLANETTO, Raymundo ROLIM ROSA, Medardo

SILES VILLARROEL & Flavio ZELANTE

109

8 Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos

botrópicos inoculados por via venosa em camundongos Mus mtts-

culus Linnaeus 1758.11 — Possibilidade de determinação da DL50,

através da proteção cruzada conferida por doses infra-letais de

outros venenos de serpentes do mesmo gênero . 123

Contribution to the Study of Determination of the LD50 of Bo-

thropic Venoms Intravenously Inoculated in Mice Mus musculus

Linnaeus — 1758.III — Possibility of Determining the LD50 by

Cross Protection through Sublethal Doses of Venoms from Snakes

of the Same Genus but of Different Species.

Reynaldo S. FURLANETTO, Raymundo ROLIM ROSA, Medardo

SILES VILLARROEL & José NAVAS

9 Contribuição ao estudo da determinação da DL50 do veneno de

Crotalus durisstis terrificus (Laurenti, 1768) em Mus musculus Lin¬

naeus 1758 . 131

Contribution to the Study of Determination of the LD50 of Crotalus

clurissus terrificus (Laurenti, 1768) Venom in Mus musculus

Linnaeus 1758.

Raymundo ROLIM ROSA, Sirdeia M. P. FURLANETTO, Medardo

SILES VILLARROEL & Flavio ZELANTE

10 Estudos sobre a fixação eletiva e quantitativa do veneno de Cro¬

talus durisstis terrificus nos tecidos nervoso, renal, hepático e

muscular de Mus musculus Linnaeus 1758 . 139

Studies on Elective and Quantitativo Fixation of Crotalus durisstis

terrificus Venom in Nervous, Renal, Hepatic and Muscular Tissues

of Mus musculus Linnaues 1758.

Walter BANCHER, Raymundo ROLIM ROSA & Revnaldo S. FUR¬

LANETTO

11 Lesões da medula espinhal no megacólon

Lesions of the Spinal Cord in Megacolon

Ruy PIAZZA

149

12

Ocorrência de neoplasia mesenquimal fuso-celular em peixe da

espécie Moenkhausia dichroura (Kner, 1858) . 233

Occurence of Fusocellular Mesenchymal Neoplasia in Fisli of the

Species Moenkhausia dichroura (Kner, 1858)

Jesus Carlos MACHADO, Isao Konda & Lilian Suzan LIMA

X

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

13 Anomalias congênitas em nma ninhada de cascavéis . 239

Congenital Anomalies in a Rattlesnake Hatch

Francisco Garcia de LANGLADA

14 Determinação da época de fecundidade em fêmeas do gênero Cro-

talus . 253

Determination of the Feeundity Period in Females of the Genus

Crotalus

Francisco Garcia de LANGLADA, Marinei F. GONÇALVES & Edna

T. RODRIGUES

15 Contribuição ao conhecimento das serpentes do Estado de Pernam¬

buco . 261

Contribution to the Knowledge on Snakes of the State of Pernambuco.

Carmen Lucia dos Santos CORDEIRO & Alphonse Richard HOGE

16 Considerações taxonômicas sobre cistos escpiizogônicos e sobre ga-

metócitos de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas

de serpentes brasileiras . 291

Taxonomic Considerations on Schizogonic Cysts and on Gameto-

cytes of Some Species of Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregari¬

nidae) Parasites of Brazilian Snakes

Samuel B. PESSÔA & Pérsio de BIASI

17 Nota taxonômica sobre cistos esporogônicos de algumas espécies

de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasPas de ser¬

pentes brasileiras .. 299

Taxonomic Note on Sporogonic Cysts of Some Species of Hepa¬

tozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasites of Brasilian Snakes.

Samuel B. PESSÒA & Pérsio de BIASI

18 Plasmódio de uma lagartixa Urostrophus vautieri D. & B. (Sauria,

Iguanidae) . 309

Plasmodium of a Lizard, Urostrophus vautieri D. & B. (Sauria,

Iguanidae)

Samuel B. PESSOA & Pérsio de BIASI

19 Ação larvi e molusquecida do “Tego 51”: . 317

Larvi and Molluscicidal Action of “Tego 51”

Lauro P. TRAVASSOS F.°, Bruno SOERENSEN & Terezinha H.

FONTENELLE

20 Hemoglobin in Mitochondrion-like Organelles of Immature Ghick

Embryo Erythrocytes . 327

Hemoglobina em organelos semelhantes a mitocôndrio de eritró-

citos de pinto.

} R. R. COIRO, A. BRUNNER JR., M. L. SCHWANTES & A. R.

SCHWANTES

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mein. Tnst. Butantan

37: 1-15, 1973

OFIONIMIA AMERÍNDIA NA OFIOLOGIA BRASILIENSE

AFRÁNIO do AMARAI,

UNITERMOS: Nomes indígenas. UNITERMS: Indigenous names.

Oíiologia do Brasil. Brazilian Ophiology.

INTRODUÇÃO

O presente tentame de interpretação da pronúncia e possível forma de

inúmeras e estranhas vozes e vocábulos ameríndios aplicados à diferenciação

de nossos ofídios procura associar o conhecimento biológico haurido do con¬

tacto direto de cerca de 70 anos com a ófio-fauna americana aos ensinamentos

colhidos da consulta da extensa e dispersa bibliografia relativa às línguas in¬

dígenas, sobretudo o Guarani (G) e o Tupi (T) antigos, além de dialetos

deste como o Nhêengatu (Nh) e o Brasiliano (Bh) de fase menos recuada de

nossa História, a par da Língua Geral (LG) e do Botocudo (Botoc.).

Essa consulta devia necessariamente abranger as obras de numerosos au¬

tores que, pela ordem alfabética sobrenominal, podem ser assim lembrados:

C. Abbeville, pe. J. de Anchieta, fr. Arronches, P. Ayrosa, pe. L. Barbosa, M.

Bertoni, B. Caetano, F. Cardim, A. de Casal, C. Drumond, Saint-Hilaire, A.

v. Humboldt, J. Laet, J. Léry, C. Magalhães, G. Marcgrave, F. Martins, C.

Monteiro, A. Montoya, fr. Onofre, W. Piso, P. Bestivo, B. Rodrigues, T.

Sampaio, G. Soares, v. d. Stein, S. Stradelli, G. Tastevin, C. Teschauer, A.

Thévet, K. Varnhagen e M. Wied.

As dificuldades inerentes à percepção do justo sentido das vozes íncolas,

ouvidas de pequenos grupos humanos disseminados pela imensidão de nosso

território — agravadas pela falta de linguagem escrita e de continuidade lin-

güística e populacional e, ainda, interpretada diversamente de acordo com a

origem de cada interlocutor, fosse ele simples viajante, devotado historiógrafo,

piedoso catequista, ou meticuloso pesquisador — essas dificuldades (que já

haviam sido postas de manifesto desde a obra pioneira de Anchieta em sua

memorável Gramática, tendo-se agravado com a progressiva extinção das

tribos de autóctones) continuam a impedir a confecção de trabalhos que

sejam bem aceitos pelos leitores mais exigentes.

Insatisfeito com os resultados colhidos nos primeiros anos de nosso in¬

teresse por esse assunto — quando em nossa infância demos de anotar as

inflexões da linguagem Nhêengatu (cuja ofionimia, como a do Tupi em geral,

é bastante objectiva e de carácter descritivo) — tratamos, desde os idos

de 1910, quando éramos mero docente de grego e latim ginasiais, de estabele¬

cer contacto pessoal com luminares da Tupinologia, quais, entre os brasileiros,

Theodoro Sampaio, Plínio Ayrosa, Lemos Barbosa e, por último, Carlos Dru-

Kndereço para correspondência:

R Paulo, SP. Brasil

K. 0n Bela Sintra, 75a

1

í, | SciELO

AMARAL/, A. do — Ofionimia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense.

Mem. Inst. Butantan, 37: 1-15, 11)73.

mond, Egon Schaden, Herbert Baldus, Aryon Rodrigues e Frederico Edelweiss

e, entre os estrangeiros, os nossos amigos paraguaios, prof. Diaz Bordenave e

eng°, Daumas Ladouce. A todos eles somos agradecido pela orientação e

esclarecimentos de cuja falta tanto nos ressentíamos. E que nos levaram a

aproveitar tão feliz ensejo para pôr-nos em dia com o progresso que, desde o

nosso primeiro ensaio realizado em 1925 (m Boi. Mus. Nac., Rio, 2 (2):

1-13, 1926), se registou no conhecimento de novas sutilezas do Tupi-Guarani

em nosso meio.

Ao culminar nesta monografia a nossa desvaliosa obra no domínio da

Herpetologia resolvemos nela deixar consignadas — sem embargo das muitas

limitações que ainda mais se patenteiam neste longo inverno de nossa exis¬

tência — deixar consignadas as impressões que resultaram de nossos contactos

com a ofionimia dos indígenas brasileiros, na esperança de que elas possam

por ventura interessar as novas e futuras gerações.

VOCABULÁRIO

VOCABULARY

Nomes indígenas aportuguesados

Portuguese forms of Brazilindian

de serpentes

names of snakes

Tentame interpretativo

Interpretative attempt at

da conotação

their connotation

Leg.: T = Tupi +

LG — Língua Geral Nh = Nheengatu

-}- (Br = Brasiliano)

G = Guarani

Acutimbóia, Nh akuti (cutia)-mbóia

(serpente), 22*: serpente de cotia.

agouti snake

Chironius carinatus (L)

Arabóia ou Ararambóia, T ará(r) (ara-

ra)-bói (serente )-a; Nh arara (arara)-

-‘mbói (serente)-a, 20: serente de arara.

macaw snake

Boa canina L.

BoiaçUj Boiuçu, T ou Boiguaçu, 1 LG —

= (‘m)bó i (serpente)-icflSM ou djusú

(grande), 4,6.7,8,64: grande serpente 2 .

big snake + ; ‘boa’

Constrictor c. constrictor (L.)

Constrictor c. amarali Stull

Boichumbeguaçu (Boichimbèguaçu ou

Boitimbeguaçn), LG (‘m)bói (serpen-

to )-chin ou ti (nariz) bê, pé ou peba

(chato) wasú ou djuasú (grande), 75,76,

77: grande serpente (de) nariz (foci¬

nho) chato.

flatsnouted big snake

Micrurus lemniscatus (L.)

Micrurus spixii Wagler

Boicininga, T ou Boicinim. G bói

ou ‘mbói (serpente)-sinign sinl (tininto,

que tine): 96: serpente tininte.

clinking snake

Crotalus durissus cascavella (Wagler)

Crotalus durissus terrificus (Laur.)

Crotalus durissus collilineatus (Ama¬

ral)

1. Estes nos. indicam as páginas do original de nossa I.C.S.B.

2. O erudito prof. Aryon Rodrigues (dir. Sec. Ling. Mus. Nac., Rio) assim se

manifestou <in cons.) a propósito deste nome: “Esta variante da antecedente provém:

ou de um dialeto da Língua Geral que tivesse estendido o uso de — wasú para depois

de consoantes (em lugar dc usú, como em T) e que teria assim mbóywasú; ou de uma

substtiuição em portuguuês, por analogia com palavras como sagulguasú, etc.”.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAIj, A. do — Ofionimia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense.

liem. Inst. Butantan, 3 7 : 1-15, 1973.

VOCABULÁRIO

V OCABULARY

BoiciPó, T (‘m)bói (serente)-isipó (ci¬

pó, liana), 22: serpente cipó.

liana snake

Chironius carinatus (L.)

Eudryas boddaerti (Sentzen)

Dentrophidium dendrophis (chlegel)

Philodryas nattereri (Steindnacher)

Pliilodryas psammophideus (Günther)

Boicorá ( Bacork ), G ‘mboi (serpente)

—•+ korá (do Fort. coral), 55 56,66: ser¬

pente (côr de) coral.

coral snake

Philodryas trigeminus (D., B. & D.)

Erythrolamprus aesculapii (L.)

Boicoatiara T ou Boicotiara, G Cm)bíi

(serpente)-kwatiara (desenhada), 83:

serpente desenhada (pintada).

painted snake

Bothrops alternata (D., B. & D.)

Bothrops cofiara (Gomes)

Boiguaçu — Vide Boiaçu.

Boiobi ou Boiobu, T/G (‘m)bói (serpen-

te)-o!n (verde), 9,62,65: serpente verde.

green snake

Philodryas aestivus (D., B. & D.)

Philodryas olfersii (Lichtens.)

Philodryas viridissimus (L.)

Boipeba ou Boipeva, Boipé T/G

Boipèvaçu, T (‘mibór ( serpente)-peba

(chata)-rasM (grande), 50: serpente cha¬

ta/grande serpente chata.

flat/big flat/snake

Xenodon merremii (Wagler)

Leiosophis gigas (D., B. & D.)

Boipininia, T (‘m)boi (serpente)-pmima

(pintada, com pintas), 74: serpente-pin-

tada.

speckled snake

Micrurus frontalis (D., B. & D.)

Boipiranga, T (‘ m)bói (serpente) -piran¬

ga (côr vermelha), 69: serpente côr ver¬

melha.

red snake

Elapomorphns tricolor (D., B. & D.)

Boiquira (Boiquirá), T Cm)boi (ser-

pent e)-kira (kirá, gorda), 96: serpente

grossa.

thick snake

Crotalus durisSus cascavella (Wagler)

Crotalus durissus collilineatus (Ama¬

ral)

Crotalus durissus terrificus (Laur.)

Boiuru ou Boiru, G Cm)bó t (senpente)

-urú (atacar, que ataca para comer),

54: serpente comedora (das outras?)-

ofiófaga).

eater (ophiophagous?) snake

Pseudoboa cloelia (Daudin)

Bòitiapó (nec Boitiabóia), T (‘m)boi-ti

(isi)pó (cipó), 22,66: serpente-cipó.

liana snake

Chironius carinatus (L.)

Oxybelis aeneus aeneus (Wagler)

Boitiaporana ou Boitiporana, Nh (‘m)~

boy (serpente)- ti(ísi)pó (cipó)-rana ;

64: falsa (parecida com) serpente-cipó.

liana-like snake

Philodryas schottii (Schlegel)

Boiuna T (‘m)bói (serpente)- (y) una

(preta),, 4,54: serpente preta.

black snake

Eunectes murinus (L.)

Cainana (Acaninana), T (a)ka (cabe-

qa)-rtl (pequena)-ítajid (irritada), ou

Canihana ( Canina) G (cf Bordenave),

I8b, 0: pequena cabeoa irritada.

angry, small-headed (snake)

Spilotfís pullatus pullatus (L.)

Spilotes pullatus maculatus (Amaral)

3

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

1 AMARAL, A. do — Ofionimla Ameríndia na

1 Mcm. Inst. Butantan , 37: 1-15, 1973.

Ofiologia Brasiliense.

■ VOCABULÁRIO

VOCABULARY

I Caissaca ou Caiçaca, T kai(a) (arder)-

I (s )aka (colmilho) 80: (de) vcolmilho

1 (presa) que arde, ou faz arder.

burning-fanged (snake)

Bothrops atrox (L.)

1 Coatiara, T ou Cofiara, G kwatiara (a

I desenhada), 80,83: a (serpente) desc-

I nhada.

painted (snake)

Bothrops ulternata (D., B. & D.)

Bothrops cotiara (Gomes)

| Curidjn, G - — Vide Sucuri, ( Su)curiju.

I Cururubóia, Nh kururú (sapo)-(‘m)bói

(serpente)-a, 47,48: serpente de (que

come) sapo.

toad snake

Xcnoilon severus (L.)

1 Ibiboboca, T ou Ibiboca, G ibi (terra,

| solo)bobolca (cavar muito) ou boka (ca¬

var), 72,75: (a que) cava muito (fura¬

dora) a terra.

earth perforator

Micrurus corallinus corallinus (Wied)

Micrjirus lemniscatus (L.)

Atractus elaps (Günther)

Jabotibóia, Nh jabuti (cágado, jabo-

ti)-(,‘vi)bói (serpente-)a, 28: serpente

jaboti.

turtle-like snake

Lcimadophis retjinae (L.)

Jaçanarana, T *jasanã (piassoca, jaça-

n &)-rana (parecido com, falso), 48: pa¬

recida com jaçanã.

jaçanã-liúe snake (or jara(ka)ca-likc

snake)

Xenodon severus (L.)

Jararaca, T ou jarará, G yarâ-ra (que

agarra muito) ( r)aka (colmilho, presa),

87: (a de) presa que agarra muito.

much holding fanged (snake)

Bothrops jararaca (Wied)

Jaracaçu ou jararacuçu, T yararak-tja.-

raraca)-asií/MStí (grande), 88: jararaca

grande (maior).

big jararaca

Bothrops jararacussu (Lacerda)

Jararacambeva T, jaracabeva, G yara-

ráka(m) (jararaca)-p/bebrt (chata), 47:

jararaca chata.

flat “jararaca”

Xenodon merremii (Wagler) j

Jauücanga, Tya(g)uá(r) (onça)-(a) cágre

(cabeça), 7: cabeça de onça (jaguar).

puma.headed (snake) |

Constrictor c. constrictor (L.) 1

Jeriqud, T (Br) jírí/jurú (boca)-quú

profunda), 47: (de) boca profunda.

íhaving) deep mouth (snake) H

Xenodon merremii (Wagler) j

Jibóia, 7,8,46: Nota: em trabalhos ante¬

riores, havíamos (desde 1928) relegado

os étimos invocados por T. Sampaio,

C. Teschauer e outros especialistas, por

nos parecerem indefensáveis dos pon¬

tos-de-vista semântico e biológico; e, no

impasse a que chegou a matéria, recor-

rainbow snake * 1

Constrictor c. constrictor (L.) 1

Epicrates ccnchria cenchria (L.) 1

Epicrates cenchria crassus (Cope) 1

4 1

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do — Ofionimia Ameríndia na Ofiologia Brasiüense.

Mrm. Inst. Butantan, .i7 : 1-15, 1973.

VOCABULÁRIO

VOCABULARY

remos às luzes do nosso perquirente

confrade prof. Frederico Edelweiss.

Dessa nossa iniciativa, resultou o inte¬

ressante parecer com que o reputado

tupinólogo nos brindou (ire litt.) e de

cujo texto trasladamos para aqui os se¬

guintes tópicos: Serpente de arco-íris:

“Arco-íris em tupi é iyyba, literalmen¬

te cabo de cunha, que em composição

com (m)boía, se apocopou obrigato¬

riamente em i ?/;(/, formando inicial¬

mente iyyboia que, como vemos, pela

lei do menor esforço, se contraiu em

iyboia, o nosso jiboia Vide texto in

pp. 10-11 da presente e modesta contri¬

buição ( + ).

Maracàbóia, Nh maraká (chocalho)-

-Cmjbóia (serpente), 96: serpente cho¬

calheira.

Moçurana, T. mosú (enguia )-rána (fal¬

sa, parecida com), 54: parecida com

muçu(m) ou enguia.

Nhuaçu/Nhuguaçüquara, T/G nhú

(campo )-açú/wasú (vasto)-(q )oara (mo¬

rador), 24: que vive no campo Vasto.

Pepeua, Pepeva (Pupeba), Nh pepeba

(muito chata), 50: a muito chata.

Quiriripitá, G kwiri-ri (muito silencio-

sa.)-pitá (pousar), 48: a que pousa si¬

lenciosa (dorminhoca).

Sacaibóia, Nh sakai (ramo seco)-(‘ro)

bóia (serpente), 23: serpente-ramo seco.

Suaçu/Suguaçubóia, LG/G suasú (vea¬

do, cf Edelweiss)-(‘m)boi (serpente)a,

9: serpente-veado (veadeira)- ( Gua-

cubríi).

Epicrates cenchria hygrophilus (Ama¬

ral)

Epicrates cenchria polylepis (Amaral)

Epicrates cenchria xerophilus (Amaral)

Xenodon colubrinus (Bünther)

rattle-snake

Crotalus durissus cascavella (Wagler)

Crotalus d. collilineatus (Amaral)

Crotalus d. terrificus (Laurenti)

eel-like

Pseudoboa cloelia (Daudin)

wide field dweller

Thalerophis richardi Uocercus (Wied)

very flat (snake)

Xenodon merremii (Wagler)

silent (sleepy)-lyer

Dipsas albifrons (Sauvage)

Dipsas indica (Laurenti)

Síbynomorphus sp., sp.

dried-branch snake

Chironius sex-carinatus (Wagler)

deer-snake

Eunectes rnurinus (L.)

Constrictor c. constrictor (L.)

Constrictor c. amarali Stull

Boa hortulana L.

Epicrates cenchria cenchria (L.)

Epicrates c. crassus (Cope)

Epicrates c. hygrophilus (Amaral)

Epicrates c. polylepis (Amaral)

Epicrates c. xerophilus (Amaral)

2. Quanto ao antecedente deste termo, o douto confrade, prof. F. Edehveiss (Fac.

Filos. Univ. Baia, in Rev. Inst. Est. Brasil. 1969, 7:45, nota 56) esclarece: “A trans¬

formação do w em u é relativamente comum no próprio tupi clássico. No brasiliano

(LB do Norte), suasú se fixou definitivamente e assim se incorporou ao português.

No guarani, o vocábulo ficou reduzido, por aférese, a guasú. O desenvolvimento dia¬

letal do velho têrmo sygúasú > súgúasu > suasú mostra claramente que nada tem

que ver ctimologicamente com sod-asií-caça grande”.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

AMARAL, A. do — Ofionimia Ameríndia na

Mem. Iyist. Butantan, 3 7: 1-15, 1973.

Ofiologia Brasiliense.

VOCABULÁRIO

VOCABULARY

Sucuri , Sucuri ju ou (Su)curidju, G/T

/Sucuríjuba ou Sucuruiuba, Nh soo ou

suú (morder,, que morde)-kori (rápi¬

do )-ji{ G, juba (ou iuba) Nh (amarelo)

(de barriga) amarela: a de barriga

amarela, que morde rápido.

quick-biting and yellow (belly)

river (water)-snake

‘anaconda’/‘ampallagua’

Eunectes murinus (L.)

Eunectes notacus (Cope)

Surucucu, T/G soo, suú/su(.r)ú (mor

der), (que morde)-(fc)K(/c)w (muito, '18:

a que morde muito.

Lachesis muta (L.)

Surucuciirana, T surukukú (surucucu)-

-rána (parecida com, falsa), 12: seme¬

lhante (colorido e folidose dorsal) à Su¬

rucucu.

surucucu-ípersistent biter)-like (snake)

Helicops angulata (L.)

Surucü(cu)tinga, T surukukú (suru-

cucu)-fí|ja. (branco), 78: Surucucu

branco (claro).

white surucucu (persistent biter)

Lachesis muta (L.)

Tiapòrana/(Boí)tiapòrana, T (‘m)bói

(serpente)-fi(isi)pd (cipó, liana) )-rana

(falsa), 64: falsa serpente-cipó.

liana-Iike snake

Philodryas schottii (Schlegel)

Trairabóia, Nh t(a)reira (contorcedo-

ra )-(‘m)bói (serpente)-a; 36: serpente-

traira.

traira-(brook fish)-\vriggling snake

Liophis miliaris miliaris (L.)

Ubiraquá/Ibiràquára, G/T ibirá (árvo-

r e)-(q)oara (morador), 60: a que vivo

(mora) na árvore.

tree-dweller

Dryophylax pallidus strigilis (Thun-

berg)

Urâpiaguara, T ivirá (guirá, pássaro)-

-(u) pi (ovo)-awara (comedor) 23: o

que come ovos de pássaros.

bird-egg eater

Chironius fuscus (L.)

Urutu, G, u(r)ú (atacar, picar)-itíií

(arremesso), 80: a que pica de arre¬

messo. Urutu dourado et al.

thrusting biter

Bothrops alternata (D., B. & D.)

Bofhrops jararacussu (Lacerda)

NOTAS

Segundo mostramos alhures (in Boi. Mus. Nacional, Rio, 1928, 2, 2:6; ei

Biologia e Lingüística, Ed. Edigraf. S. Paulo, 1945: 17,49), ao nome “Jibóia”,

que a final se confinou à espécie terrestre Ccnstrictor constricior (L.), foram,

ainda no começo deste século, atribuídos os sentidos de “cobra d’água” (Tb.

Sampaio in O Tupi na Geografia Nacional, Ed. E. A. A., Bahia, 1918:203:

Tupi “gihi-boy”) e de “cobra das rãs” (C. Teschauer in N. Diccion. Nacional,

Ed. Livr. Globo, P. Alegre, 1928:449: — Tupi “gyi-boy”) embora tais sentidos

antes lembrassem a espécie aquática Eunectes murimis.

cm

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AMARAL, A. do — Ofionlmia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 1-15, 1973.

É certo que G. Soares de Souza, em sua famosa obra Notícia do Brasil

(escrita no fim do século XVI, mas só descoberta e publicada por ]. M.

Conceição Velloso no começo do século XIX), se referiu, no c. CIX, à “giboia”

como sendo serpente que atinge 10 a 12 m de comprimento e vive em rios e

lagoas, o que a identificaria como E. mininus; todavia, no c. CX, registou novo

ofídio com símiles caracteres, ao qual atribuiu outro nome tópico, i. e.,

“sucuriu” (inconfundível com “jiboia”).

Mais despistantes ainda são as alusões feitas às duas volumosas bôidas

sob os nomes de “boiguaçu”, “jiboia” ou “cobra de veado” e “boi guaçu” ou

“cobra veadeira”, respectivamente, por W. Piso e G. Marcgravius in Historia

Naturalis Brasiliae, Ed. F. Hackium, Leida & L. Elzevirium, Amsterdão, 1648,

c. III et c. XIII, fig...

A este respeito cumpre-nos lembrar os seguintes fatos:

1. A espécie terrestre nutre-se, preferentemente, de roedores (musara¬

nhos, ratos e outros), preás, mocós, lebres, pacas e cutias, além de pequenos

veados, alimento que lhe é compatível com o tamanho e particular ecologia;

assim, ela poucas vezes recorre à constrição exceto quando apanha, p. ex.

na orla da caatinga, onde costuma caçar, algum veado “Suaçu-berá” (M.

simplicornis) — donde o nome de “oobra-de-veado”, repetido por Marcgrave

e M. Wied ou, no campo circunjacente a lugares habitados, uma ou outra

cabra ou cabrito.

2. A espécie aquática (anfíbia) é onicarnívora, comendo, irrestritamente,

quando jovem: peixes e rãs; e, mais tarde, aves, porcos, veados e outros

animais, de acordo com o tamanho de seu corpo e aparelho digestivo e com

as facilidades de seu duplo habitat; porisso, ela geralmente recorre à cons¬

trição.

3. Linnaeus foi talvez induzido a aplicar, em seu Syst. Naturae (1758) o

nome murirta à espécie aquática, pelo carácter de caçador de ratos (“murium

insidiator”) que Seba atribuiu a este ofídio na obra B. Natur. Thesauri (1735),

táb. 29, cuja fig. 1 chegou a mostrar um rato ao lado (embora em plano

inferior) da serpente.

4. Visivelmente impressionado com os erros cometidos, em conhecidas

obras clássicas no gênero, por vários autores (sobretudo Linnaeus in Syst.

Naturae, 1758; Laurentius, in Synops. Reptilium, 1768; Lacépède in Hist.

Naturelle, 1789; Latreille in H. Nat. Reptiles, 1801; Schneider in Hist.

Amphibiorum, 1801; Daudin in Hist. Nat. Généralc, 1803; e Merrem in

Tent. Syst. Amphibiorum, 1820), Schlegel in Essai, 1837, tentou seriamente

sistematizar a questão e estabelecer — à luz de dados menos incorretos sobre

o habitat de várias e importantes bôidas — melhor base para a distinção de

tais serpentes, cujas definições se basearam sobretudo em velhos exemplares

mal conservados em coleções de museus. E, por coincidêircia, ao tratar de

murina, ele chegou a dizer que Lineu “a donné à cette espèce un nom assez

vague que les auteurs cependant ont eonservé”.

5. Quanto à distinção entre essas duas conspícuas espécies, Wied, sendo,

ao lado de W. V. Eschwege (in J. v. Brasilien, Weimar, 1818, 2:276), dos pou-

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AMARAL, A. do — Ofionimia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense.

Man. Inst. Butantan, 37 : 1-15, 1973.

cos cientistas-viajantes que travaram conhecimento direto com tais serpentes

in vivo e no habitat natural, conseguiu indicar reais diferenças morfo-bioló-

gicas entre murina (sob a designação de aquatica) e constrictor. Todavia

no ulterior preparo do texto de suas notáveis monografias (Reise d. Brasilien,

1820; Beitr. zur Naturgeschichte v. Brasilien, 1825; Abbildung, 1831), Wied

incluiu, na descrição de constrictor, particularidades da “cobra de veada”

(sic). Quanto a esta expressão lusitana, que primeiro surgiu na citada obra

de Piso e Macgravius (1648), nossas pesquisas herpetológicas e lingüísticas

conduzem-nos a admitir que esses autores, ao versarem nossas “bôidas , foram

induzidos a êrro por duas expressões regionais de origem tópica, a saber:

a) “Boiaçu” T, cujo sentido de “grande serpente”, aplicável à constrictor

(ou serpente grande, cujo comprimento alcança quase 5 m), corresponde em

Botocudo a “kuong-kuong (onomatopêico) — gipakiu” (cujo 2.° termo sig¬

nifica “grande”). E, segundo sabemos, C. constrictor, em seu habitat sub-xero-

fítico a xerofítico é uma das “serpentes de veado” (serpentes veadeiras). pois

chega a comer até M. simplicicornis: guaçu-berá ( 0 ) A par desta forma,

própria da zona do dialeto brasiliano (típico, mais recente e usado no

Norte), existe — desde NO (Rondônia) ate S de Mato Grosso a forma

“mbôiguaçu G.”

b) “Mbôiguaçu' G, conforme mostrou o confrade prof. F. Edelweiss

(in Rev. Inst. Estudos Brasileiros 1969, 7: 40, 45), realmente significa “cobra-

-veado” (=veadeira) e não “cobra grande”; isto, porque tal guaçu teria

vindo de “syguasu > sngúasu” (em G, por aferese, surgiu “güasú” > “suasú”).

Ora, o estudo biológico (eco-trofo-lógico) indica que a espécie aquática

(ou anfíbia) E. murinus é higrófila, vive no meio da mata e perto dos rios,

nutrindo-se de mamíferos (e até de anfíbios, peixes e aves), alguns de certo

porte, quais os veados conhecidos como “suaçu-êtê ou pitã” 1 (M. americana )

e “suaçu-pororoca (M. rufina). Assim, esta espécie seria também uma das

“serpentes de veado”.

— A esta luz, a sp. terrestre C. constrictor, sendo Jibóia”, é também

“boiaçu” e uma das “mboiguasu” ou “boi-suasu” (conforme a região).

Nota — Em face destes dados, pode-se compreender a perplexidade em

que se teria achado — na execução da árdua tarefa de comentador de parte

da obra de G. Marcgrave (in Hist. Nat. do Brasil. Trad. port. Ed. Mus.

Paulista, S. Paulo, 1942: LXXX1V, n.° 711) — o nosso distinto e estudioso co¬

lega e confrade, prof. P. Sawaya (Dep. Fisiol. Zool. USP), ao omitir ou disso¬

ciar o aspecto biológico (ambiência e alimentação) e lingüístico (forma e

sentido dos nomes) na destrinça das referidas bôidas, referindo-se apenas:

l.°) aos esporões (unhas para-anais, encontradiças cm todas as nossas espécies

desta família: remanescentes dos membros pélvicos) que Marcgrave registou

(* *) No NE chamam ‘guazu-berá (ba) ’ a este cervo, cie pelo reluzente

(*) Na monografia “Serpentes gigantes” (in Boi. Mus. Goelcli, 1948, 8:211-) mostrámos

que 'murinus — cujo comprimento chega a atingir 12 (ou 14) m — recebe, em sua

extensa área ecológica, os nomes vulgares do Sucuri, Sucuriu, Sucuriju, Sucurijuha,

Boiuna, Viborão e outros.

(1) No NE chamam ‘guazu-pita (ga) ’ a este cervo, de ventre ferrugíneo.

cm

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AMARAL, A. do — Oflonimia Ameríndia na Ofiologia Brasiüense.

üfem. Inst. Butantan , 37 : 1-15, 1073.

cm sua “Boi guacu” (sic), isto é, a sp. C. constrictor; 2.°) ao jogo de manchas

dorsais escuras e arredondadas, que é próprio da sp. E. murinus, a qual os

Botocudos chamam “ketomen-iop”, sendo “iop” = água.

Com relação ao sentido histórico que a evolução lingüística emprestou

a estas duas espécies conviria talvez lembrar que J. de Laet em sua obra con¬

siderou a “Jiboia” (555) “omnium serpentum quos haec regio fert maximus”

(a maior nesta região) e a “Sucuri” (576) “omnium anguium longissima et

pulcherrima”.

c) A par destas espécies de bôidas outras ba que também recebem o

nome de (cobra) ou “serpente de veado”, a saber: l. a — na região amazônica

— onde nascemos e, na infância nos habituamos a coletar ofídios para o

Museu Goeldi — ouvimos chamarem “Suaçubóia” (serpente veadeira) à sp.

Boa hortulana , conhecida algures como “Mirambóia” (Nh. “ambirá = pau,

árvore — ( m)hoi — serpente), forma dendrícola e onicarnívora (compr. até

2m); 2. a — na bacia do Paraguai denominam “guasuboí” = serpente veadeira

à conhecida Salamanta (Epicrates cenchria), a qual chega a ter de compr.

1,8 m, possuindo mais ou menos os hábitos ecológicos e alimentares que a C.

constrictor, inclusivamente caçando até pequenos veados “Suaçu-berá” (A/.

simplicicornis).

— Síntese — Fixadas estas noções quanto aos aspectos herpetológicos,

biológicos e geográficos a par dos lingüísticos de tão complexa questão, pode¬

ríamos dizer que, em nosso fraco entender, cumpre considerar:

1. °) Que têm caráter restrito ou especial os nomes vulgares: Jibóia ou

Boiaçu T — aplicados à espécie Constrictor constrictor (reservando-se Mboi-

gúasu antes à subsp. C. constrictor amarali, do S. e S.O. do Brasil até o vale

do Paraguai) e Sucuri (e compostos) ou Boiiina, aplicados à espécie Eunectes

murinus, reservado o nome (Su)curidjú G para a sua congenérica E. notaeus

ou Ampallagua do Paraguai; Mira(m)boia — aplicado à espécie dendrícola

Boa hortulana para a mais conhecida “Cobra-de-veado”; e “Salamanta” ou

“Jiboia-furtacôr” para a campesina Epicrates cenchria.

2. °) Que tem carácter mais amplo ou geral as designações ‘Boi-suasxi T

ou "Mboi-guasü G, bem como ' Guacu-boia’ ou 'Sugüaçu-mboi’ e formas va¬

riantes, que ocorram em vasta área de dispersão zoo-geográfica, com o sentido,

proposto pelo prof. F. Edelweiss, de (serpente ou) 'Cobra-veadol

Aditamento — Seja-nos lícito agora divulgar nossa opinião, baseada em

longos anos de experiência com estes intrincados problemas, sobre a maneira

de harmonizar os dados históricos com os biológicos, constantes do seguinte

tópico do Vocabulário na Língua Brasílica (Ms fg. 3444 Bibl. Nac. Lisboa,

rev. pelo prof. C. Drumond, T 952/3, 1:76): “Giboya grandíssima da terra,

dagoa maior que todas, Çucuriiú,engole antas e veados e toda a mais caça”.

Mediante simples pontuação adequada aos imperativos herpetológicos, te-lo-

-íamos tornado compreensível e aceitável, assim: “Gibova, grandíssima da terra;

dagoa maior que todas Çucurijú: engole antas, veados e toda a mais caça”.

Esclarecimentos — Corroborando a notável argumentação constante do

parecer do professor da Universidade Federal da Bahia, lembraríamos, data

venia, os seguintes pormenores hérpeto-lingüísticos:

9

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

AMARAL, A. do — Ofionimia Ameríndia na Ofiologia Rrasilien.se.

Mem. Inst. Jlntantan. 37: 1-15, 1973.

a) qual seja a incidência dos raios solares sobre a pele (sobretudo quando

recém-exuviada) de certas bôidas e serpentes afins, a irridescência que nela

se nota é de causar até admiração, e dos povos não tem passado despercebida;

b) a própria observação popular, baseada nesse aspecto da pele, chegou

ao ponto de aplicar o nome de ‘Giboia íurta-cor à espécie Epicrates cenchria

e âs diversas raças por nós assinaladas ou descritas (in Mem. Inst. Butantan

1954, 26:227-247) a saber: crassas (C. e S. do Brasil), xerophilus (N. E. do

Brasil), hygrophilus (Vale Bio Doce, E. Santo) e polijlepis (N. O. Minas

Gerais e S. E. Goiás), além da raça típica cenchria (Guianas e Vale do

Amazonas, Brasil) e quatro outras registadas alhures, devendo notar-se que

o próprio VVied (in Beitr.) já mostrara que o nome ‘Jiboya’ se aplica à sp.

E. cenchria na costa oriental do Brasil, o que reforça o argumento de que é

a iridescência cia pele que nestas serpentes levou os indígenas a chamarem-n’as

jiboia;

c) no S.E. dos E.U.A. chamam “Rain-bow snake” (serpente arco-iris)

a espécie de Celúbrida primitiva Abastor enjthrogrammus;

d) na fomaso monografia ilustrada que o prestimoso prof. R. Ditmars

publicou no Bronx Park de Nova York a respeito de “Snakes of the World”, a

gravura relativa a E. cenchria traz na legenda a seguinte explicação: “Gliding

into the sun the reptile is transformed. As the light catches the upper surface

at eertain slants, patcches of iridescence glow in green and blue, like the

wings of the morpho butterfly...”.

A esse dedicado colaborador, que chefiou a Divisão Neárctica do Antivenin

Institute of America que fundamos na Pennsylvania e dirigimos através de

3 Estações, 4 Serpentários e 7 Laboratórios para servir os Estados Unidos e a

América Central, bem como ao nosso saudoso e estimado amigo, prof. Tliomas

Barbour (diretor do Departamento de Biologia e Museu da Univ. de Harvard)

que chefiou, na fase mais brilhante de sua vida, a Divisão Neotrópica do

A.I.A., e a todos os outros cientistas, civis e militares, que colaboraram como

membros do nosso grupo de pesquisa, a todos aqui deixamos consignados o

nosso reconhecimento e apreço pelos serviços que dc todo o cração prestaram

em benefício da Ciência c da Humanidade. (*)

(*) Além do Dr. R. Ditmars (então chefe do Ropt. 0 Herpetológieo e Serpentário do J.

Zoológico de Nova York) e do Prof. Dr. Th. Barbour (também chefe da Secção Biológica

do Harvard Institute for Tropical Biology and Medicine), os outros membros proemi¬

nentes desse grupo de cientistas eram os seguintes *.

a) Pesquisa, e Divulgação: Cel. M. Ti. Crimmins, Dr. R. E. Scott e Maj. Dr. "W. C. Cox

(Corpo Médico do Exército dos EUA) no Texas até Rio Grande: Eng.° L. M. Klauber,

hérpeto-ecologista (J. Zoológico o Serpentário de San Diego) na Costa do Pacífico;

Dr. C. T. Vorhies (Dept.° Biológico da Universidade do Arizona), nas Montanhas

Rochosas: Dr. N. Thigerger (dirigente do J. Zoológico e Serpentário de Nova Orleans),

na zona do Golfo do México; Sr. G. P. Vierheller (dirigente do J. Zoológico e Serpen¬

tário de S. Luis, Mo.), no Vale do Mississippi; Dr. T. S. Githens, imuno-farmacologista

(diretor-assistente: Labs. Centrais de Produção e Controle), na Pensilvânia e Mts.

Allegheny: Sr. R. E. Stadelman (chefe da Estação e Serpentário de Tela), Honduras,

América Central.

b) Conselho Consultivo: Prof. Dr. TTans Zinsser (Escolas de Medicina o de Saúde Pública,

Universidade de Harvard, em Boston : Prof. Dr. TlOward Kelly (Universidades de Johns

Hopkins e de Michigan), em Baltimore; Dr. William Deeks (chefe do Dept. 0 Médico

e Hospitalar, United Fruit Co.), em Nova York e América Central : Cel. Dr. Joseph

Siler CCorpo Médico do Dept. 0 de Saúde Militar), em Washington: Dr. Herbert Clark

(diretor do Gorgas Memorial Institute for Tropical and Preventive Medicine, em

Ancón), no Panamá.

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AMARAL, A. do — Ofionirnia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense.

Me»i. Inst. Butantaiij, 37: 1-15, 1973.

Parecer — Por fim, aproveitamos o ensejo para reproduzir na íntegra os

trechos do parecer que, a pedido nosso, formulou o prof. F. Edelweiss a

propósito do ofiônimo ‘Jibóia’:

“Tanto as lendas quanto os vocabulários de considerável número de tri¬

bos sul-americanas confirmaram a presença da cobra em funções lendárias;

ela aparece aí principalmente identificada com o arco-íris. Logo no guaraio,

um dialeto tupiguarani muito puro da Bolívia, mais chegado ao tupi antigo do

que o guarani de Montoya, mboi — cobra é sinônimo de arco-íris.

Nas Gúianas e no Amazonas a (e)kéime — cobra grande designa o arco-

iris. No Chaco e no Paraguai, entre os bororos do Mato Grosso como entre

certos índios dos Andes o arco-iris ainda é uma cobra por vêzes indeterminada,

por vêzes identificada com a sucuri. Mesmo entre os botocudos o arco-íris

continuou sendo provocado por uma cobra.

Essa verificação constitui a chave para a solução da etimologia da pa¬

lavra jiboia.

Arco-íris em tupi é iyyba, literalmente cabo de cunha , que em composição

com (m)boia se apocopa obrigatoriamente em iijy, formando inicialmente

iyyboia , que, como vemos, pela lei do menor esforço, se contraiu em íyboía ,

o nosso jiboia.

O termo deve ser relativamente novo, porque não o encontrei em nenhum

dialeto guarani. Talvez tenha surgido por influência de vizinhos, o que é muito

comum.

A via-láctea p. ex. chama-se em tupi tapií-rapé (caminho de tapir).

Tradução idêntica tem o têrmo para via-láctea em dialetos de outras famílias

lingüístieas, naturalmente por efeito de identidade de ambiente e raciocínio.”

NOTES

lntroãuction

As we have shown elsewhere ( in Boi. Mus. Nacional, Rio 1928, 2, 2:6;

et Biologia e Lingüística, Ed. Edigraf., S. Paulo, 1945:17,49), the name ‘Jibóia’

as finally confined to the terrestrial boid Constrictor constrictor (L.) was

considered, early in this century, by some authors as meaning ‘water snake’

or ‘frog snake (Th. Sampaio in O Tupi na Geografia Nacional, Ed. E.A.A.,

Bahia, 1918:203: — Tupi ‘gihi-boy’; C. Teschauer in N. Diccion. Nacional, Ed.

Livr. Globo, P. Alegre, 1928:449: — Tupi ‘gyí-boy’) in spite of such a meaning

rather fitting the aquatic species Eunectes murinus. lt is true that. G. Soares

de Sousa in his famous monograph Notícia do Brasil (as written late in the

XVI century but only discovered and published by J. M. Conceição Velloso

early in the XIX century) referred to ‘gibóia’ as a snake reaching 10 to 12 m

in lenght and living in rivers and lakes, thus identifiable with E. murinus, in c.

CIX; but lie registered in c. XX another snake with similar characters under a

different Tupi name, e. g., “sucuriú (unconfusable with ‘jibóia’). Still more

li

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AMARAL, A. do — Ofionimia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense,

Man. Tnst. Butantan, 37: 1-15, 1973.

been misled, in their identification of our “giant boids”, by two regional names

of Tupi or Nhenngatu origin, to wit:

a) ‘Boiaçu T whose meaning ‘big snake’ applies to C. constrictor (as a

big snake it reaches nearly 5 m in length) corresponding in Botocudo dialect

to kuong-kuong (onomatopaic hissing)- gipakiu’, apparently meaning ‘big

hisser. As we know. in its sub-xerophytic to xerophytic habita C. constrictor is

really one of the deer-eating snakes since it can swallow even a ‘guaçu-berá’

(M aza ma simpliciccrnis). Besides th is vulgar ophionym, prevailing in the

section of the brasiliano’ dialect (more recent Tupy as used in N. Brazil),

another form ‘mbôiguaçu’ is found iram NW to S.Mato Grosso (Rondonia

southwardly).

b) Mbôiguaçu’ G, in Prof. F. Edelweiss, authoritative interpretation

(in R. Inst. Estudos Brasileiros, 1969, 7:40,45), really means ‘deer-snake’, not

‘big-snake’, since this ‘guaçu’ seems to have come from ‘syguasú > suguasú

> suasú, (through apheresis, the form ‘guasú’ is used in Guarany).

As a matter of fact, biologically (ecologically and trophologically), E.

murinus 1 is hygrophilic, living in the forest near rivers and feeding on mam-

mals (even on amphibians and birds) eventually on large size animais such

as the deer known as ‘suaçuêtê or- pitã’ (A/. americana ) and ‘suaçu-pororoca’

(Aí. rufina). Therefore, murinus is also one of the ‘deer-snakes’.

In this ligth, the ground specias C. constrictor, besides being the ‘jibóia’,

is also one of the ‘mbôi-guaçu’ or ‘boí-suasú’ snakes.

Note — All these data lead us to think of the perplexity in which our

nost distinguished colleague and confrère, prof. P. Sawaya appears to have

found himself while undertaking the arducus task of commenting on one of the

chapters of G. Marcgraves work (in Hist. Nat. do Brasil — Port. edition, Mus.

Paulista, S. Paulo, 1942, LXXXIV, N.° 711): besides omitting or dissociating

the environmental and feeding aspects from the linguistic feature (fornis and

meanings) of such names of our rnost oonspicuous boids, lie preferred to

mention but a) the para-anal spurs, common to all of the local species of

Boidae and considered as reliquat of their pelvic limbs, which, by the way,

were regisctered by Marcgrave in his ‘Boiguacu’ (sic) with the acception of

C. constrictor; b) the distribution of the dark, roundish dorsal markings so

characteristic of E. murinus, that the Botocudos call ‘ketomen-iop’ (‘iop’ mea¬

ning ‘water’) as distinct from their ‘kong-kong gipakiu’.

In connexion with the historie connotation wherewith the linguistic evo-

lution has associated both of these species, it might be pertinent to remem-

ber that J. de Laet in his work already considered (555) the ‘jibóia’ as

“omnium serpentum cpios liaec regio fert maximus” whilst lie called (576) the

‘sucuri’ “omnium anguium longissima et pulcherrima”.

c) Besides both of these species, other boids are listed under the name

of ‘deer snakes’ to wit: 1 — in the Amazon region — where we were bom

(1) In our monograph ‘Serpentes gigantes’ (Giant snaks: in Boi. Mus. Goelcli, 1948,

8:211) we showed E. murinus (whose total length may reach 12, perhaps 14 m) to

reeeive in its wide eeologic range the common names Sucuri, Sucuriu, Sucurijuba,

Boiuna, Viborâo and others.

13

í, | SciELO

AMARAL, A. do — Olionimia Ameríndia na Ofiologia IJraslliense.

Mcw. ínst. Butantan, 37: 1-15, lí'73.

and, still as a student in a Belém prímary school, were used to collecting

ophidians for Goeldi Museum — we heard people to call ‘suaçubóia’ (deer-

snake) also Boa hortulana, elsewhere known as ‘mirambóia’ (Nh ‘(a)mbira’

= wood, tree-mbói’ = snake) and so a dendricolous and omnicamivorous

species somctimes reaching 2 m in length; 2 — in the Paraguay valley natives

call ‘guaçuboi’ = deer-snake the well known Epicrates cenchría (‘salamanta’

of the Portuguese colonists), reaching 1,8 m in length and having the same

eoologic and tropologic habits as C. constrictor, including catching small

‘suaçu-berá’ deer (M. simplicicomis) . Therefore, these snakes compete with

each other in environment and feeding, besides in the iridescence of their

skin, as we shall see later on.

Synthesis — Based on these notions regarding the herpetologic, biologic

(eco- and tropho-logic), geographic and — linguistic aspects of such a com-

plex question, we should say that, in our modest opinion, the following

points deserve considera tion:

lst) That the character is restrict or special of the vulgar names ‘jibóia’

and ‘boiaçu’ T as applied to the species Constrictor conscrictor (‘mboígüasu’

bcing rather reserved for the subsp. C. constrictor amarali, from S and

SW Brazil to Paraguay valley); ‘sucuri’ (and derived compounds) and ‘boiuna’

as applied to the species Eunectes murinus, ‘(su)curidju’ being reserved c or

its congeneric sp. E. notaeus, called ‘ampallagua’ in Paraguay; ‘mirambóia’

as applied to the dendricolou Boa hortulana, that is, the most generally know

as ‘deer-snake’; and ‘salamanta’ or ‘color jibóia’ as applied to the field-dweller

Epicrates cenchria.

2nd) That the character is wide and general of the vulgar names ‘boí-

suaçu’ T or ‘mboí-guaçu’ G as well as ‘guaçu-boia’ or ‘sugüasú-mboí’ and allied

forms occurring in a wide area of geographic dispersion and bearing the

name ‘deer-snake’ as proposed by prof. F. Edelweiss.

Complement — May we now give our opinion, on the basis of our trying

experience with such intricate problems, about the manner of harmonizing the

historie and the biologic data as found in tbe following paragraph of the

“Vocabulário na Lingua Brasílica” (Ms. fg. 3444 Bibl. Nac. Lisboa, rev. by

prof. C. Drumond, T 952/3, I, 76): “Giboya grandíssima da terra, dagoa maior

qeu todas, Çucurijú, engole antas e veados e toda a mais caça”. Simply, by

adpting the punctuation to the herpetologic facts, that paragraph might be

rendered both comprehensible and acceptable, thus: “Giboya, grandíssima

da terra; dagoa maior que todas, Çucurijú: engole antas, veados e toda a

mais caça”.

Enlightenment — In confirmation of the arguments brought forth in prof.

F. Edelweiss’ brilliant report we should remind, data vénia, the following

herpeto-linguistic facts:

a) depending upon the angle of incidence of the sun rays on the newly

shedded skin of certains boids and allied primitive forms, the iridescence thus

produced is so wonderful that it has not passed unnoticed even to the lay

people;

14

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. cio — Ofionimia Ameríndia na Ofioiogia Brasiliense.

Man. Inst. Butantan J 37: 1-15, 1973.

b) the popular observation itself as centered on sucli skin aspect caused

the name raimbow boa’, to be given to Epicrates cenchria and the various

subspecies we have described ( in Mem. Inst. Butantan 1954, 26:227-247) to

wit: crassus (C. and S. Brazil), — xerophilus (NE Brazil), hygrophilus (Bio

Doce valley, E. Santo) and polylepis (NW Minas Gerais and SE Goiás),

besides the typical race cenchria (Guyanas and Amazon Valley, Bjazil) and

the other four races registered elsewhere, it being timely to register Wied’s

information (in Beitr.) concerning the application of the name ‘jibóia’ to E.

cenchria along the E. coast of Brazil: all these facts reinforce the argument

whereby the skin iridescence led the natives to give these snakes the name

‘jibóia’;

c) in SE North Amrica the primitive colubrid Ahastor enjthrogrammus

is known as the ‘rain-bow snake’;

d) in the famous and illustrated monograph the popular herpetologist

dr. R. Ditmars (of Bronx Park, N.Y. City) pubiished on the “Snakes of the

World” the figure of Epicrates cenchria is thus explained: “Gliding into the

sun the reptile is transformed. As the light catches the upper surface at certain

slants, patches of iridescence glow in green and blue, like the wings of the

morpho butterfly. .

To that devoted confrère and collaborator as chief of the Nearetic Di-

vision of the Antivenin Institute of America which we have founded in Penn-

sylvania, and directed throungh 3 Stations, 4 “Serpentaria” and 7 Laboratories

and organized to serve the USA and C. America) as well as to our esteemed

friend, the prominent prof. Thomas Barbour — who led in a part of his

life the A.I.A. Neotropic Division — and all the other co-workers and mem-

bers of our staff, we wish here to present the tribute of our “saudade’ and

thankful appreciation of the invaluable Service they so heartfully rendered in

benefit of Science and Manldnd. ( 0 )

Finally, we are using this opportunity to quote the paragraps of the report

prof. F. Edelweiss presented as regards the ophionym ‘jiboia’ (Vide Original

Text in Portuguese: pp. 10 and 11).

(*) Resides Dr. R. Ditmars (then chief, Herpetological Dept. and Serpentarium of the

N. Y. Zoological Garden) and Prof. Dr. Th. Barbour (also chief, Biological Section

of Harvard Institute for Tropical Biology and Medicine), the other outstandinj members

of that group of scientists were the following:

a) Research and Divulgation: Col. M. L. Crimmins, Dr. R. E. Scott and Maj. Dr. W. C.

Cox (US Army Medicai Corps), in Texas to Rio Grande, México; Engr. L. M. Klauber,

herpeto-ecologist (San Diego Zoological Garden and Serpentarium), Pacific Const; Dr.

C. T. Vorhies (University of Arizona Biological Dept.), Rockie Mts.; Dr. N. Thiberger

(Director, New Orleans Zoological Garden and Serpentarium), Gulf of México; Mr.

G. P. Vierheller t chief, St. Louis Zoological Garden and Serpentarium), Mississippi

Valley; Dr. T. S. Githens, immuno-pharmacologist (assistant-director, Production and

Control Central Laboratories), Pennsylvania to Allegheny Mts. ; Mr. R. E. Stadelman

(chief, Station and Serpentarium at Tela). Honduras. Central America.

b) Advisorv Board: Prof. Dr. Hans Zinsser (Harvard University Schools of Medicine and

Public Health), in Boston; Prof. Dr. Howard Kelly (Universities of Johns Hopkins

and Michigan). in Baltimore ; Dr. William Deeks (director. Medioal Deut. and Hospitais,

United Fruit Co.), in New York City and Central America; Col. Dr. Josenh Siler (US

Army Medicai Corps and Surgeon GeneraPs Office), in Washington; Dr. Herbert Clark

(director, Gordas Memorial Institute for Tropical and Preventive Medicine), in Ancón,

Canal Zone, Panama.

Recebido para publicação em 31/VIT/73.

Aceito para publicação em Ol/YIIT/73.

j, | SciELO

15

Mem. In.st. Butantan

37 : 17-42, 1973

CONTRIBUIÇÃO PARA O ESTUDO DO ÁCIDO BÓRICO COMO

ANTISSÉPTICO DE SANGUE CONSERVADO

BRUNO SOERENSEN

RESUMO — Estuda-se as possibilida¬

des do uso do ácido bórico como antis¬

séptico de sangue conservado. Determi¬

nou-se a atividade antibacteriana em

plasma e sangue humano mantido a

4-6°C e contaminados propositadamen¬

te; a influência das diferentes concen¬

trações na preservação de hemacias

conservadas a 4-6°C e finalmente a ati¬

vidade tóxica de amostras de sangue

contaminado contendo ácido bórico

como antisséptico. Foram utilizadas nas

provas cepas bacterianas psicrófilas

isoladas de sangue contaminado, sen¬

do 12 do gênero Pseudomonas, S do

gênero Enterobacter e 6 do gênero

Bacillus.

to normal, principalmente no que se

refere a colocação. A concentração de.

0,lg% do antisséptico adicionado a so¬

lução ACD (Ácido Citrico, Citrato de

Sódio, Dextrose) foi capaz de reduzir a

zero a elevada letalidade observada nos

grupos de camundongos inoculados com

sangues contaminados sem antisséptico.

Finalmente concluiu-se sobre as possi¬

bilidades do uso do ácido bórico adicio¬

nado a solução ACD na concentração

final de 0,1 g% como antisséptico de

sangue conservado. Conforme dados

compulsados na literatura referente a

intoxicação do homem pelo ácido bóri¬

co, verificou-se que as concentrações

‘que poderiam ser adicionadas como

antisséptico no sangue são possivelmen¬

te inferiores a dose tóxica, entretanto,

recomenda-se que a aplicação do mé¬

todo seja precedida de estudos comple¬

mentares.

A atividade bacteriostática do ácido

bórico no plasma corresponde às con¬

centrações de 0,12 a 0,25 g%, no sangue

0,10 a 0,20% g e a atividade bactericida

a partir de concentrações superiores a

0 3 g%. Nas concentrações inferiores a

0,06 g% o antisséptico pode ser consi¬

derado inactivo. Nas concentrações de

0,10 e 0,20g% não houve ação hemolíti-

ca, conservando o sangue o seu aspcc-

UNITERMOS — Contaminação bacte-

riana em Banco de Sangue. Ácido bó¬

rico como antisséptico de sangue con¬

servado.

INTRODUÇÃO

Os acidentes transfusionais graves decorrentes do uso de sangue conta¬

minado, registrados em todo o mundo, levaram a pesquisar a ação de antis¬

sépticos que, adicionados ao sangue ou ao plasma, possam atuar como bacte-

riostáticos sem alterar-lhe as suas características físicas, químicas e bioló¬

gicas e sem provocar manifestações de intolerância no receptor de transfusão.

Tese apresentada à Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de

São Paulo, para obtenção do grau de doutor.

Bndereço para correspondência:

C.P. Cã, São Paulo, Brasil

17

cm

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L

5 6

11 12 13 14 15

SOERRXSRiV, B.

sangue conservado

Mcrn. Inst. Butantan, .>7 : 17-4

Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

li)?:}.

O aspecto bacteriológico da contaminação em Banco de Sangue foi motivo

de exaustivos estudos. Rivera Bandres (1967) no capítulo da etiologia dos

acidentes por contaminação, estabeleceu a freqüência destas contaminações em

3 a 5%. Discombe e Meyer (1854) a encontraram em 3 a 5% dos casos; Braude

e col. (1952), 2,24%; Stevens e col. (1953), 1 a 3%; Vonkilch (1967), 15%;

Spooner (1967), 5%; Bagdasarov (1967), 3,9%, no Instituto de Leningrado, 1,1%

no Serviço de Botkin e 2,8% nos pequenos serviços militares de transfusão, du¬

rante a guerra; Whitby (1967) estimou em aproximadamente 5% nos Bancos

de Sangue ingleses, durante os anos de 1939 e 1945; durante o mesmo período,

Heath e Province (1942) encontraram 8,5% de contaminação bacteriana em

6151 plasmas colhidos na cidade de Nova Yorque.

Entre nós, Faria (1960), em 3000 frascos de plasmas examinados pela

bacterioscopia direta pré-transfusional, encontrou 3,3% de frascos suspeitos;

Soerensen (1965), em 2194 sangues examinados, encontrou 1% de contami¬

nados.

Acidentes transfusionais mortais e reações pirogênicas foram relatadas em

nosso meio por Faria (1957, 1958, 1960), Santos Freire (1965) e Soerensen e

col. (1965). Fora do Brasil, entre outros: Leiva Cofré (1944), Borden e Hall

(1951), Stevens e col. (1953), Braude e col. (1953), Mc Entegrat (1956),

André e col. (1959), Germain e col. (1959), Massé e col. (1959) e Sanchez

Mendal e col. (1961).

A mortalidade decorrente da transfusão de sangue contaminado é de

aproximdamente 60%, Schier (1968), ou ainda de 50 a 90%, Miecznikowski

e Kus (1966).

Os estudos realizados por Pittman (1963) demonstram que os germes que

proliferam em sangue refrigerado devem apresentar as características seguin¬

tes: utilização de nutrientes do sangue, resistência à ação letal e capacidade

de multiplicação imediata a baixa temperatura. Através deste trabalho, po¬

demos ter idéia do perigo de contaminação ante a ausência de atividade bac-

teriostática do sangue sobre numerosos germes. Efetivamente, conforme estu¬

dos referidos por Blatrix e col. (1963), a conservação do sangue a +4° inibe

a fagocitose e diminui o poder bactericida do sangue, reduzindo a autoesteri-

lização; paralelamente, Grimberg e col. (1936) demonstraram a inibição da

ação bactericida do sangue exercida pelo citrato de sódio, quando usado em

concentrações elevadas sobre cepas de Coliformes e bacilos tííicos.

Diversos germes foram isolados de sangue e produtos derivados: Acliro-

mobacter, Bordem e Hall (1951); Paracolobactrum aerogenoides, Bordem e

Hall (1951), Faria (1960); Aerobacler aerogenes, Braude e col. (1952);

Paracolobactrum interrncãium, Pittman (1953); Escherichia freuclii, Pittman

(1953); Coliformc, Braude e col. (1955); Pseudomonas sp, Braude e col.

(1955), Soerensen e col. (1965); Alcaligenes faecalis, Faria (1957); FUwobactc-

riuin, Boy e col. (1958), M. pyogenes, var. albus, Faria (1960); Klebsiella,

Faria (1960); S. salivarias, Faria (1960); levedura, Faria (1960); B. sub-

tilis, isolado de um partida de solução A.C.D. contaminada, Faria (1960);

Aerobacter liquefaciens, Sanchez Mendal e col. (1961); S taphylococcus coa¬

is

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEX, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mcm. Inst. Uiilantun, ,>7 : 17-42, 1073.

gulase negativa, Soerensen e col. (1965); bacilos Gram positivos, Soerensen e

col. (1965).

Os germes contaminantes de sangue são, na sua maioria, psicrofílos, Faria

(1967), Soerensen e col. (1965).

Estas contaminações podem ter a sua origem nas bacteremias não pa¬

tológicas do doador de sangue, como a processada no período pós-prandial, na

esterilização deficiente dos frascos de solução conservadora de sangue, nas do

aparelho de colheita, a assepsia deficiente da pele do braço do doador e qual¬

quer falha do sistema fechado, tanto de extração como nas referentes às

manipulações posteriores do frasco de sangue.

Os centros de colheita de sangue, que não apresentam condições que

asseguerem a esterilidade do material e a assepsia necessária na manipulação

do sangue, fazem aumentar consideravelmente a incidência de contaminação.

A falta de refrigeração apropriada do sangue para a conservação e o transporte,

acelera a multiplicação bacteriana, transformando os frascos de sangue em ver¬

dadeiros caldos de cultura de germes, Soerensen e Sampaio Corrêa (1965).

Nos Bancos de Sangue, mesmo aqueles considerados de bom padrão, existe

um risco de contaminação bacteriana acidental.

Paralelamente, foi relatado por Munzer e col. (1963) que a contaminação

do tubo piloto de sangue pode dar eventualmente reações de Coombs falso-

positivos.

O aspecto clínico do choque transfusional também foi objeto de estudos.

As manifestações clínicas observadas pela introdução de grande número de

bactérias através do sangue ou do plasma, decorrem da ação de endotoxinas,

Geller e col. (1954), e consistem em: tremores, febre (geralmente dentro de

uma hora após o início da transfusão), náuseas, rápida queda de pressão

sangüínea com colapso vascular periférico, hemorragia, anúria e, de modo

geral, morte num período de 30 horas. Soerensen e col. (1965). Diante deste

quadro clínico, o diagnóstico laboratorial deve ser feito através de exame bac¬

teriológico imediato do resíduo de sangue contido no frasco usado na trans¬

fusão.

É possível que as reações pirogênicas observadas freqüentemente, sejam

devidas, cm grande parte, à veiculação de pequeno número de bactérias; sa¬

be-se que apenas os sangues altamente contaminados são mortais, daí a

freqüência relativamente baixa dos casos fatais.

Quanto aos métodos usados para evitar a transfusão de sangue contamina¬

do, pode-se dizer que, indubitavelmente, devem-se prevenir as contaminações

pelo controle rigoroso da esterilização dos frascos e aparelhos de coleta, pela

assepsia rigorosa no momento da coleta e ulterior fracionamento do sangue,

e, finalmente, pela conservação dos frascos de sangue a baixa temperatura em

geladeira (a temperatura ótima de crescimento da grande maioria dos germes

que interessam a Bancos de Sangue é aproximadamente 25°), Soerensen e

Sampaio Corrêa (1965). Ainda no capítulo de métodos profiláticos, Rivera

Bandres (1956) recomenda boa esterilização cutânea, a fim de proceder a pun¬

ção venosa e evitar a colheita em doadores que ingeriram alimentos durante as

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cm

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SOEREM SEN, B. — Contribuição para

sangue conservado.

Man. Inst. Butantan, J7 : 17-42, 107o.

estudo do ácido bórico como antisséptico de

últimas 3 horas. Complementarmente, recomenda aos doadores habituais que

evitem escovar os dentes instantes antes da doação, e, finalmente, evitar a

colheita de sangue diante da menor suspeita de processo bacteriano, como pe¬

quenos furúnculos, piodermites ligeiras, focos dentários, etc.

Acreditamos que as técnicas modernas de colheita e conservação do san¬

gue e plasma em saco plástico tenham contribuído para a diminuição da con¬

taminação.

Conforme observações de James e Síokes (1957), a simples conservação

do sangue a 37° pelo período de duas horas imediatamente após a colheita,

diminui a contaminação bacteriana.

O método da bacterioscopia pré-transfusional é o mais adequado para

evitar o uso de sangue ou de plasma contaminados. A bacterioscopia pré-trans¬

fusional em microscopia de fase foi aconselhada na Alemanha por Discombe e

Meyer (1954) e entre nós por Faria (1960). Petselt (1963), na Alemanha,

recomenda que a bacterioscopia pré-transfusional seja feita em lâmina corada

pelo azul de metileno ou pelo méiodo de Gram. Entre nós, ainda, Soerensen

(1965) preconizou nova técnica para a execução da bacterioscopia pré-transfu¬

sional em lâmina corada pelo azul de. metileno, demonstrando as várias vanta¬

gens que a técnica oferece.

Recentemente, Soerensen e col. (1972) preconizaram novo método para a

determinação da contaminação bacteriana através da dosagem de glicose com

tira reagente. Este método é aconselhado quando não existe a possibilidade de

exame microscópico.

Conforme nossas observações, é imprescindível que os sangues sejam

submetidos a bacterioscopia pré-transfusional, pois a observação macroscópica

do sangue contaminado não apresenta, de maneira geral, nenhuma alteração

que indique o perigo dc sua aplicação.

Independentemente dos aspectos que foram estudados, merece atenção

especial o uso de antissépticos em sangue e plasma estocados; numerosos au¬

tores estudaram a solução do problema das contaminações através do uso de

bacteriostáticos adicionados ao plasma ou ao sangue integral.

A ação bacteriostática da acridina e do trifenilmetano foi originalmente

estudada no plasma por Churchman (1939) e a ação do Mertiolato ®, por

Jamienson e Powell (1939). Estes resultados, entretanto, conforme Novak

(1939b), não foram satisfatórios.

Novak, em 1939 (a), introduziu o uso da sulfanilamida na preservação do

sangue. No mesmo ano. Harrington e Miles (1939) também o recomendam

na Inglaterra. Estes resultados são confirmados por Hunwicke. em 1940; ainda

no mesmo ano, Bécart e Philippe (1940) estudam as sulfamidas na preservação

do plasma. Em 1942, Novak aborda novamente o assunto, analisando os re¬

sultados obtidos durante 2 anos de uso das sulfamidas, recomendando, muito

especialmente, a adição do sulfatiazol para a preservação do plasma.

Em 1942, Ileath e Province, numa análise crítica sobre o uso de antissép¬

ticos no plasma, referindo-se às sulfamidas, chama a atenção para o efeito

apenas bacteriostático sobre alguns germes, sendo praticamente ineficaz sobre

a Fseudomonas aeruginosa, germe este freqüente como contaminante de sangue.

20

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERBNSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inat. Butantan, J7 : 17-42, 1973.

Paralelamente aos trabalhos realizados com sulfamidas na preservação do

sangue, loram usados diversos antissépticos, como o azul de metueno, em 1940,

Spívak e Pelishenko. Em 1941, Macky estuda o efeito bacteriostático de an¬

tissépticos no soro humano e plasma citratado, constatando que Mertiolaio ©,

Metaphen ® nitrato de fenumercúrio e proflavina mostram ação inibitória

por espaço relativamente curto sobre Stapliylococcus aureus, tí. subtilis , Aí.

tctragcnes , Enterococcus. Ü referido autor ressalta, ainda, que nenhum dos

antissépticos usados apresentou ação inibitória sobre a Pseudomonas pyocianea,

e a impossibilidade do uso em concentrações maiores, devido a sua toxidez;

ressalta ainda, que os testes realizados com timol e p-cloro-m-cresol foram

ineficientes como bacteriostáticos e quanto ao fenilmercúrio, o inconveniente

da precipitação das proteínas do soro.

Em 1943, Milzer, referindo-se ao assunto, afirma que infelizmente não

se conhece um antisséptico adequado, que assegure a esterilidade do plasma.

Efetivamente, os estudos de Smith e col., realizados já em 1936, demonstraram

que proteínas do soro neutralizam rapidamente o efeito bactericida do Mer-

tiolato ® e de outros preservativos mercuriais.

Em 1959, Mathes, após revisão do assunto, refere que até o momento

foram usados, como antissépticos do plasma ou do sangue, entre outros, Neo-

salvarsan ®, Urotropina sulfanilamida, azul de metileno, Prontosil ®, Ni-

pagin ®, sulfapiridina, fenol, Rivanol ® associado a tripaflavina, sulfatiazol,

Albucid sódico ®, timol, penicilina associada a sulfonamida, sulfapiridina as¬

sociada a Rivanol ® e cloranfenicol.

Este mesmo autor analisa os resultados, conclue que os correspondentes a

sulfonamidas e antissépticos foram pouco satisfatórios, destacando-se úteis,

somente alguns antibióticos, como o cloranfenicol e a tetraciclina, merecendo

destaque o primeiro. Os sinonimos e fórmula química das substâncias citadas

encontram-se no Anexo I.

Na Rússia, onde é usado o sangue de cadáver para transfusão, Shamov

(1937), Yudin (1937), pode-se observar que são muito empregadas as sul¬

fonamidas, a penicilina e outros antibióticos. Mesmo assim, os hemoterapeutas

russos acham que a adição de antissépticos é complctamente secundária, sendo

muito mais importante a aplicação de normas técnicas de extração e conserva¬

ção. Quando for usado sangue de placenta para transfusão, como descrito por

Page e col. (1939), igualmente as possibilidades de contaminação são maiores,

devido a manipulação. Nos casos necessários, Bagdasarov (1967) recomenda

sulfatiazol.

Até o presente momento não foi encontrado um antisséptico que reuna

todas as condições indispensáveis para a sua aplicação. Todos os autores preo-

cuparam-se em testar os diferentes antissépticos de maneira geral, apenas dian¬

te de germes patogênicos, esquecendo que estes, geralmente, não possuem a

capacidade de multiplicação a baixa temperatura, fato confirmado pelo iso¬

lamento de numerosas bactérias saprófitas de sangue contaminado.

As normas estipuladas pelo U.S. Department of Health Education and

Welfare não permitem o uso de antisséptico no plasma, recomendando a mani¬

pulação asséptica e sua esterilização através de radiação ultravioleta.

21

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

SOEKENSEN, 13. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan 3 87: 17-42, 11)73.

O uso de antibióticos, a nosso ver, não seria recomendável, uma vez que

exige sejam adicionados posteriormente à colheita do sangue, a fim de evitar

a perda de atividade na esterilização pelo calor ou ainda durante a estocagem

dos frascos de solução conservadora.

Evidentemente, se for necessário o uso de antisséptico, este deverá estar

contido na solução conservadora e deverá apresentar, ainda, a característica

da impossibilidade de alteração através do tempo, em condições diversas de

estocagem. Paralelamente, são requisitos fundamentais: 1) que possua ação

bacteriostática sobre a maioria dos germes contaminantes de sangue; 2) que

não altere as características dos diferentes componentes do sangue e 3) que nas

doses usadas não exerça ação tóxica sobre o organismo do receptor, inclusive

sendo praticada transfusão de grandes volumes de sangue.

Desde 1965 nos interessamos pelo assunto e sentimos de perto os problemas

que são enfrentados para impedir a contaminação do sangue, evitar a trans¬

fusão de sangue contaminado ou ainda a mortalidade elevada decorrente da

transfusão de sangue e plasma contaminados.

Diante do insucesso no uso de todos os antissépticos e antibióticos ensaia¬

dos até a presente data, nos propuzemos estudar o ácido bórico corno antis¬

séptico de sangue conservado.

O ácido bórico foi escolhido devido a sua reconhecida ação antibacteriana.

Após exaustiva pesquisa na literatura não encontramos relato sobre o uso de

ácido bórico como antisséptico de sangue conservado.

É objetivo do presente Trabalho demonstrar que em concentrações inócuas

conserva a sua ação antibacteriana.

MATERIAL E MÉTODOS

As cepas usadas no presente trabalho foram isoladas por nós no período

compreendido entre os anos de 1965 e 1966, em 26 frascos de sangue maciça¬

mente contaminados, dos quais 3 responsáveis por acidentes transfusionais

mortais. As cepas, todas psicrófilas, são 12 do gênero Pseuclomonas, 8 do gênero

Enterobucter e 6 do gênero Bacillus, sendo conservadas em ampolas liofilizadas.

A identificação das 24 cepas foi feita pelos Drs. Margaret Pittman e

Charles 11. Manclark, do National Institutes of Health, Bethesda, Maryland,

U.S.A., e as cepas correspondentes aos números 1919 e 3192 foram identifi¬

cadas por Soerensen e col. (1965). Os números correspondem a identificação

do sangue doador.

Não incluímos deliberadamente, no presente trabalho, um Staplii/lococcus

albiis com prova dc coagulase negativa, por não possuir a capacidade de

multiplicação em geladeira 4-6° (Soerensen e col., 1965).

Na Tabela I (p. 13) encontra-se a identificação das cepas usadas.

Inicialmente, ocupamo-nos em investigar a ação antibacteriana do ácido

bórico sobre as cepas acima mencionadas.

22

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B. -—- Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan, S7 : 17-42, 1973.

TABELA I

Identificação das 2C cepas psícrófilas isoladas de sangue conservado.

Identificação

da cepa

Gênero

Espécie

1919

1

3192

Não identificada.

Não correspondendo às características de

0010

P. aeruginosa; P. fluorescens; P. putiãa;

4436

P. multivorans; P. maltophilia e P. pseu -

6504

Si

domallei.

o

6679

*

6785

o

7076

fcj

Similar, mas não idêntica a P. stutzeri.

7583

E|

33960

a,

1910

multivorans.

3863

fluorescens.

1323

1530

E|

1533

Eh

Uquefaciens.

6892

7860

CO

o

05

4011

El

4979

aerogenes.

7582

El

1044

GQ

9223

Sj

9437

O

33992

O

Não identificada.

BSH

3454

1. Atividade antibacteriana do ácido bórico em plasma humano conser¬

vado a 4-6° e contaminado propositalmente.

Para a determinação da ação antibacteriana do ácido bórico foi obedecida

a técnica usada por McKay (1941) em estudos de atividade antibacteriana de

diversos antissépticos em plasma sanguíneo.

O teste foi realizado com plasma humano separado assepticamente por

centrifugação de sangue colhido em solução A.C.D. (Ácido cítrico, citrato de

sódio, dextrose).

Foi distribuído em 26 séries de 7 tubos fechados com rolhas de borracha,

contendo os primeiros tubos 9 ml e os demais 5 ml.

23

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

SOEHBNSEN, B. — Contribuição para

uangue conservado.

Mem. Jnst. Butantauj J7 : 17-42, 11)72.

estudo uo ácido borico como antisséptico üe

Aos primeiros tubos de cada série foi adicionado 0,1 g de ácido bórico

contido em I ml de solução aquosa.

A partir destes tubos, foram leitas diluições ao dobro, em tubos contendo

5 ml de plasma, obtendo-se as seguintes diluições: 1/100, 1/200, 1/400, 1/òGü,

1/1600 e 1/3200, que correspondem respectivamente às seguintes concentra¬

ções: 1,00; 0,50; ü,2ó; 0,12; 0,u6 e 0,03 g%. O sétimo tubo de cada série perma¬

neceu como controle (sem ácido bórico). A cada série de tubos destinados a

uma determinada cepa foi adicionado, com pipeta, 0,2 ml de uma suspensão,

contendo 100 a 1000 microrganismos. A concentração bacteriana loi determi¬

nada previamente por opacidade e através de tentativas foi estabelecida a

concentração em número de germes por contagem em placa.

Os tubos foram conservados em geladeira a 4-6° pelo período de 20 dias,

período este recomendado como máximo para o uso de sangue integral para

transfusão. Completado este período foi retirado de cada tubo, após ligeira

agitação, uma amostra de plasma a fim de submeter a cultura em placas de

agar simples.

As culturas foram realizadas depositando 1 ml do conteúdo de cada tubo

(20 a 200 bactérias) em 3 placas de Petri de 13 cm de diâmetro, esterilizadas,

colocando-se a seguir em cada placa 10 ml de agar simples fundido (45°)

misturada por delicada agitação circular e logo após solidificação, incubados

pelo período de 72 horas a 25°, determinando-se a média aritmética das

colonias encontradas.

2. Influência das diferentes concentrações de ácido bórico na preservação

de hemácias humanas conservadas a 4-6°

Uma vez conhecida, diante das condições de nosso teste, a menor concen¬

tração de ácido bórico que exerce ação bacteriostática, investigamos o grau

de hemólise de diversas concentrações do antisséptico. Por motivo de ordem

prática, iniciamos pela concentração dc 0,lg% e incluímos concentrações supe¬

riores 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 e 0,6g% a fim de sentirmos melhor a influência que

poderia exercer.

Trabalhamos com 3 amostras de sangue provenientes de 3 doadores.

Estes sangues foram colhidos em solução A.C.D. e a seguir pipetados assep-

ticamente no volume de 10 ml em 14 tubos esterilizados de 18x180 mm com

tampa de borracha contendo diferentes concentrações de ácido bórico em 0,5

ml de solução aquosa.

Dois tubos para cada amostra foram destinados a cada concentração de

ácido bórico, incluindo 2 tubos controle sem ácido bórico. Os mesmos foram

mantidos pelo período de 20 dias em geladeira (4-6°) e a intervalos de 5 dias

eram observados, sendo que um dos sangues correspondente a cada concen¬

tração do antisséptico permanecia em repouso e o outro submetido a ligeira

agitação circular.

Após 20 dias de observação todos os sangues foram centrifugados a 2000

r.p.m. durante 10 minutos a fim de avaliar o grau de hemólise através da

dosagem de hemoglobina. Para esta dosagem foi usado o método de Karr-

24

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B. — Contribuição para c estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan, «'17 : 17-42, 1973.

Chornock modificado e recomendado para esse fim pelo National Institutes

of Health, Bethesda, Maryland (1952). Conforme normas estipuladas por essa

Instituição o plasma não deverá conter mais que 25 mg de hemoglobina por

lOOml, portanto admitimos esta cifra como máxima a ser tolerada.

3. Atividade antibacteriana do ácido bórico em sangue humano con¬

servado a 4-6 0 e contaminado propositalmente.

Após verificação da ausência de ação hemolítica do ácido bórico nas con¬

centrações de 0,1 g %, concentração esta praticamente correspondente a ação

bacteriostática sobre as cepas por nós estudadas, pesquisamos a atividade bac-

teriostática em sangue estocado a 4-6°.

O experimento foi conduzido da seguinte maneira: a colheita do sangue foi

feita em separado, em frascos contendo solução A.C.D. e ácido bórico nas

concentrações de 0,1; 0,2; 0,3: 0,4; 0,5 e 0,6g%. Estes frascos foram esteriliza¬

dos por autoclavação a 110° durante 30 minutos. Foi incluída para cada cepa

contaminante uma amostra de sangue controle, sem antisséptico.

Visando o posterior estudo da atividade tóxica do sangue contaminado,

usamos 12 ml de sangue por tubo correspondente a cada cepa assim como a

cada concentração de ácido bórico; isto nos obrigou a colheita de sangue de

vários doadores.

No dia da colheita procedemos a contaminação proposital dos sangues

contendo diversas concentrações do antisséptico, incluindo-se sempre para cada

cepa uma amostra de sangue controle sem ácido bórico, desta maneira cada

uma das 26 cepas serviu para contaminar uma série de tubos contendo dife¬

rentes concentrações do antisséptico e ainda um tubo controle, sem antissép¬

tico.

A contaminação dos tubos de sangue foi procedida de maneira idêntica

àquela da determinação da atividade antibacteriana do ácido bórico em plasma

citratado; o período de observação foi também de 20 dias em geladeira (4-6°).

Independentemente da contagem de germes em placa procedemos a bac-

terioscopia pelo método de Gram, de cada amostra de sangue.

4. Atividade tóxica de amostras de sangue contaminado contendo como

antisséptico ácido bórico.

Após a verificação da atividade bacteriostática do ácido bórico na con¬

centração de 0,lg% em sangue total, nos interessamos em pesquisar a atividade

tóxica destas amostras de sangue contaminado, através de inoculação em ca¬

mundongo.

Com esse objetivo, utilizamos o método descrito por Geller e col. (1954).

Este método consiste na inoculação de 0,5 ml de sangue por via intraperiíoneal

em camundongo de 12 a 18g.

25

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

SOEKENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ãcido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan, 37: 17-42, 1D73.

Foram usadas nas inoculações as amostras de sangue contaminado cor¬

respondentes a concentração de 0,lg% de antisséptico assim como as corres¬

pondentes a sangue contaminado sem antisséptico. Estas amostras foram as

mesmas que serviram na determinação da atividade bacteriostática do ácido

bórico cm sangue.

Nos testes foram usados 848 camundongos svviss, machos de 12 a 18 g.

divididos da seguinte maneira: 416 animais em 26 grupos de 16 camundongos

para cada amostra de sangue contaminado contendo ácido bórico na concen¬

tração de 0,lg%. Número igual de animais foi utilizado com as amostras de

sangue contaminado sem antisséptico.

Um grupo de 16 camundongos foi inoculado com sangue não contaminado.

Todos os animais receberam o mesmo tratamento e após 48 horas foi

determinada a letalidade para cada sangue contaminado contendo antisséptico

assim como para os grupos correspondentes de animais inoculados com san¬

gue sem antisséptico.

RESULTADOS

1. Atividade antibacteriana do ácido bórico em. plasma humano conser¬

vado a 4-6 0 e contaminado propositahnente.

Através da análise da Tabela II (p. 27), pode-se observar que:

1.1. O ácido bórico exerceu atividade possivelmente bactericida a par¬

tir das concentrações superiores a 0,500 g% sobre todas as cepas

submetidas ao teste.

1.2. Nas concentrações de 0,12 a 0,25 g% exerceu ação bacteriostática.

1.3. Nas concentrações inferiores a 0,06 g% pode ser considerado inativo.

2. Influência das diferentes concentrações de ácido bórico na preserva¬

ção do hemácias humanas conservadas a 4-6°.

Pode-se observar através do exame da Tabela III (p. 28), que:

2.1. O ácido bórico nas concentrações de 0,1; 0,2 e 0,3 g% não exerceu

ação hemolítica sobre nenhuma das amostras de sangue empregadas

quando as mesmas foram mantidas em repouso. Entretanto, quan¬

do submetidas a agitação periódica, na última concentração, a

dosagem de hemoglobina ultrapassou 25 mg%. Independentemente,

foi possível seguir com intervalos de 5 dias a progressão da he-

mólise nos tubos de sangue contendo antisséptico e sangue controle

Fig. 1, 2, 3 e 4 (p. 29).

2.2. O ácido bórico nas diferentes concentrações não modificou o as¬

pecto normal do sangue, principalmente no referente a coloração

Fig. 5 (p. 29).

26

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SciELO ^

2

3

5

6

11

12

13

14

15

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cm

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SOERENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inato Butantan, :)7: 17-42, 1073.

*

r

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO Dl FERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4-6.°C):5 DIAS.

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Fig. 1

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SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4-6,®C): 10 DIAS.

Fig. 2

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SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4-6.°C): 15 DIAS.

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SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6 o Cl: 20 DIAS.

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Fig. 4

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6°C): 20 DIAS

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Fig.

29

2 3

SciELO

10 11 12 13 14 15

cm

SOERENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan. â7: 17-42, 1973.

3. Atividade antibactcriana do ácido bórico cm sangue humano conser¬

vado a 4-6 0 e contaminado propositalmente.

3.1. A bacterioscopia direta das amostras de sangue contendo ácido bó¬

rico nas concentrações de 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 e 0,6 g% resultaram

negativas, entretanto as realizadas com amostras sem antisséptico

(controle) resultaram positivas, confirmando as características mor¬

fológicas e tintoriais correspondentes a cepa contaminante.

3.2. As concentrações de 0,1 e 0,2 g % de ácido bórico exerceram ativi¬

dade bacteriostática — Tabela IV (p. 33).

3.3. A partir da concentração de 0,2 g% exercem possivelmente atividade

bactericida.

3.4. As amostras de sangue correspondentes às concentrações de 0,1 e

0,2 g% de antisséptico apresentaram-se com as características físicas

de sangue normal. Isto não aconteceu com as das amostras controles

(sem antisséptico) onde dependendo das c; racterísticas da çepa

contaminante, eram nítidas as alterações de cor para vermelho-es¬

cura, violácea ou ainda a verificação de evidente grau de hemólise

ou presença de fibrina. Figs. 6 a 18 (pp. 30 a 32).

4

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA 14 - 6 o C): 20 DIAS.

u:

BilUB

CEPA CONTAMINANTE: 1910

áM85f°

■ UMU

P. multivorans

Fig. G

CEPA CONTAMINANTE: 19Í9

Pseiulomonas Sp.

■J ‘

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO

. PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA 14 - 6 o Cl: 20 DIAS.

r

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CEPA CONTAMINANTE: 4979

llllll

E. aerófjcncs

Fig. 7

CEPA CONTAMINANTE: 3192

Pseudornonas Sp.

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

ERIODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6 o Cl: 20 DIAS

P

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CEPA CONTAMINANTE: 7860

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E. Uquefaciens

Pig. 8

CEPA CONTAMINANTE: 0010

Pseudomonas Sp.

30

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

*

SOERENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 17-42, 1973.

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA 14 - 6° Cl: 20 DIAS.

■ . y 9 li ■

CEPA CONTAM IN ANTE: 6504

IwÉidiiWi"

bbbbbi*

CEPA CONTAM IN ANTE: 7583

Pseudomonas Sp.

Fig. 9

Pseudomonas Sp.

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA 14 - 6° C): 20 DIAS.

I W

CEPA CONTAMINANTE: 4436

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Pseudomonas Sp.

Fig. 10

CEPA CONTAM IN ANTE: 33960

Pseudomonas Si>.

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CEPA CONTAMINANTE: 6785

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CEPA CONTAMINANTE: 6679

Pseudomonas Sp.

Fig. 11

Pseudomonas Sp.

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SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6 o Cl: 20 DIAS.

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CEPA CONTAMINANTE: 7076

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CEPA CONTAMINANTE: 3454

Pseudomonas Sp.

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Fig. 12

Bacillus Sp.

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

I PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA 14 -6 o ): 20 DIAS.

P

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CEPA CONTAMINANTE: 3863

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CEPA CONTAMINANTE: 1533

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Fig. 13

E. liquefaciens

31

2 3 4

6 SciELO 10 11 12 13 14 15

cm

SOERENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Man. Inst. Butantan, 37: 17-42. 1073.

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6.° Cl: 20 DIAS.

pmmms

E. liquefaciens

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÃCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6 o 0:20 DIAS.

E. liquefaciens

Fig. 15

E. aerogenes

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÃCIDO BÓRICO.

Bacillus Sp.

Fig. 1G

E. aerogenes

SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÃCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6 o Cl: 20 DIAS.

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CEPA CONTAM IN ANTE: BSH

Jíacillus Sp.

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Bacillus Sp.

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SANGUE COLHIDO EM SOLUÇÃO A.C.D. CONTENDO DlFERENTES CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDO BÓRICO.

PERÍODO DE CONSERVAÇÃO EM GELADEIRA (4 - 6 o 0:20 DIAS.

CEPA CONTAMINANTE: 33992

- I

Bacillus Sp.

Fig. 18

Bacillus Sp.

SciELO

cm

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan, ST: 17-42, 1973.

34

TABELA V

Atividade tóxica de amostras dc sangue propositalmente contaminadas.

Cepa con-

Letalidade %

taminante

do sangue

Sangue colhido

com antisséptico

Sangue colhido

sem antisséptico

1919

0,0

93,7

3192

0,0

93,7

0010 (1)

0,0

100,0

4436 (1)

0,0

100,0

GQ

6504 (1)

0,0

100,0

te;

o

S

6679 (2)

0,0

75,0

6785 (2)

0,0

56,2

O

Q

7076 (2)

0,0

93,7

&

K)

CG

7583 (2)

0,0

100,0

33960 (2;

0,0

100,0

(X,

1910 (3)

0,0

68,7

3863 (4)

0,0

93,7

1323 (5)

0,0

93,7

K|

h

1530 (5)

0,0

100,0

O

rrj

1533 (5)

0,0

100,0

cq

6892 (5)

0,0

100,0

7860 (5)

0,0

100,0

4011 (6)

0,0

87,5

te;

fiq

4979 (6)

0,0

100,0

7582 (6)

0,0

81,2

K2

Cd

1044

0,0

31,2

9223

0,0

12,5

9437

0,0

43 7

B

33992

0,0

81.2

cq

BSH

0,0

31,2

3454

0,0

50,0

Um

grupo de 16

camundongos foi inoculado

com sangue não

contaminado não tendo sido observada nenhuma morte num período

de 48 horas.

(1) Pseudomonas Sp. não correspondendo às características de P. ae-

ruginosa; P. fluorescens; P. putida; P. stutzeri; P. multivorans;

P. maltophilia; P. pseudomallei.

(2) Pseudomonas Sp. similar, mas não idêntica a P. stntzeri.

(3) Pseudomonas multivorans.

(4) Pseudomonas fluorescens.

(5) Enterobacter liquefaciens.

(6) Enterobacter aerogenes.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan, 37: 17-42, 1973.

4. Atividade tóxica de amostras de sangue contaminado; contendo ácido

bórico como antisséptico.

Através da análise da Tabela V (p. 34) podemos chegar aos seguintes

resultados:

4.1. No grupo de animais que recebeu sangue colhido com antisséptico

e posteriormente contaminado não foi verificada nenhuma morte.

4.2. No grupo de animais que recebeu sangue colhido sem antisséptico e

posíeriormente contaminado, foi verificada uma elevada letalidade,

com especial destaque aos correspondentes às cepas Pseudomonas

e Enterobacter.

4.3. No grupo de 16 animais que recebeu apenas sangue normal (não

contaminado) não foi verificada nenhuma morte.

DISCUSSÃO

Os antissépticos adicionados a produtos biológicos devem exercer ativi¬

dade bacteriostática; no presente caso a menor concentração de ácido bórico

que exerceu ação bacteriostática no plasma sobre as 26 cepas estudadas foi a

correspondente à concentração de 0,12 g %.

Evidentemente, 0,12 g% de ácido bórico não poderá ser considerada como

sendo a menor quantidade de antisséptico que exerce ação bacteriostática,

uma vez que o intervalo nas diluições de 1/800 (0,12 g %) e 1/1600 (0,06 g%)

é demasiadamente grande.

É possível que a concentração de ácido bórico que exerça atividade bac¬

teriostática no sangue seja inferior a 0,100 g%, isto considerando os resultados

da atividade antibacteriana do ácido bórico no plasma sanguíneo.

Por ocasião da determinação do número de colónias em placa, o inóculo

representado pelo plasma ou pelo sangue continha ácido bórico em concentra¬

ções elevadas. É possível, portanto, que a presença do antisséptico na placa

lenha dificultado a proliferação de colônias. Este fato impede afirmar a ati¬

vidade bactericida do ácido bórico.

As concentrações de 0,1 e 0,2 g% de ácido bórico, não exerceram ativi¬

dade hemolítica nas condições estudadas; isto nos indica que o antisséptico

usado apresenta grande tolerância quanto à capacidade de determinar hemólise.

Estas concentrações correspondem à faixa de ação bacteriostática do antis¬

séptico.

A concentração de 0,1 g% do antisséptico adicionado a solução ACD foi

capaz de reduzir a zero a elevada letalidade observada nos grupos de camun¬

dongos inoculados com sangues contaminados sem ácido bórico, especialmente

no que se refere às cepas do gênero Pseudomonas e Enterobacter. A letali¬

dade foi menor nos grupos de animais correspondentes aos sangues contami¬

nados por bactérias do gênero Bacillus; esta observação coincide com a

afirmação de Pittman (1953), de que as reações transfusionais de pequena

gravidade correspondem às contaminações por germes Gram positivos.

35

cm

2 3

L

5 6

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SOERENSEN, B. — Contribuição para

sangue conservado.

Moa. Iiist . Butantan, ST: 17-12, 11)73.

estudo do ácido bórico como antisséptico de I

Indubitavelmente, diante da complexidade da hemoterapia, um antissép¬

tico adicionado ao sangue deverá reunir condições muito mais amplas; assim,

no que se refere à ação sobre os elementos globulares, não podemos nos res¬

tringir apenas a um simples teste de hemólise, mas sim, à fisiologia celular e

neste particular não somente às hemácias, mas também aos demais componentes

celulares do sangue.

Referimo-nos da mesma maneira quanto ao plasma; o simples fato de

ter conservado o seu aspecto normal não indica, evidentemente, que não possa

ter sofrido alterações quanto aos seus componentes. Neste particular, fazemos

especial menção aos fatores de coagulação, aos componentes protéicos e en-

zimátioos.

Outra condição fundamental é de que o antisséptico não exerça ação tóxica

sobre o organismo, nesse sentido temos informações sobre os efeitos nocivos

verificados na terapêutica com doses elevadas de ácido bórico ou, ainda,

quanto à administração acidental do mesmo.

Peyton e Green (1941) fazem menção à recuperação de um paciente ino¬

culado com uma única dose de 28 g de ácido bórico por via subcutânea.

Mclntyre e Burke (1937) relatam a recuperação de um paciente que re¬

cebeu 15 g de ácido bórico por via intravenosa.

Brovv e col. (1936) citam um caso de administração acidental por via

intravenosa de 1000 ml de solução de ácido bórico a 2 % (total 20 g) sem efeitos

tóxicos sérios.

Através do estudo de Pfeiffer e col. (1945) sobre o ácido bórico, pode-se

verificar que somente doses elevadas levam a intoxicações graves.

Evidentemente neste sentido há necessidade de estudo meticuloso.

Conforme os nossos resultados, o ácido bórico exerce ação bacteriostática

na concentração de 0,1 g%, portanto, um paciente que recebe 500 ml de sangue

estaria recebendo 0,5 g do antisséptico.

Nos casos de cirurgias extensas ou de exanguino-transfusão um paciente

adulto poderá receber volumes de sangue de aproximadamente 7000 ml, neste

caso o paciente estará recebendo 7 g de ácido bórico.

Devem ser consideradas ainda as transfusões de pequenos volumes de

sangue durante longos períodos.

Cope (1943) demonstra que pacientes com função renal normal tratados

localmente com ácido bórico, podem excretar pela urina 2 g no período de 24

horas. Este mesmo autor refere que quando o tratamento é feito através de

irrigações de cavidades internas a excressão na urina pode elevar-se a 2,5 g

em 24 horas.

A vantagem fundamental do uso do ácido bórico como antisséptico adi¬

cionado ao sangue seria de ordem prática podendo o mesmo integrar a solução

ACD, ser submetido a esterilização e armazenagem por longos períodos, sem

alteração. O plasma retirado do sangue colhido com ácido bórico continua

conservando as suas características bacteriostáticas.

36

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SciELO

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SOERENSRX, li. — Gontribuiçfio para o estudo elo ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. InsL Butantan, 37: 17-42, 1073.

As condições habitualmente apresentadas na prática de colheita de sangue

nos levam a acreditar num risco de contaminação obrigatório.

Assim como são adicionados antissépticos em elevado número de pro¬

dutos biológicos, acreditamos que no caso do sangue e do plasma também se

impõe essa necessidade. Evidentemente, se forem obedecidas nos Serviços de

transfusão e Bancos de Sangue normas de assepsia já aconselhadas há muitos

anos, inclusive entre nós por Faria (1957), os índices de contaminação teriam

diminuído consideravelmente.

O reaproveitamento de frascos de sangue e aparelhos de colheita, feito

habitualmente em Bancos de Sangue, aumenta a possibilidade de contaminação

devido a esterilização inadequada.

Acreditamos que o uso atuai de jsacos plásticos em diversos Bancos de

Sangue, devido as condições técnicas que apresentam, poderiam diminuir

o risco de contaminação.

Paralelamente, de acordo com Pittman (1953), a assepsia não deveria ser

apenas cirúrgica, mas sim uma assepsia bacteriológica, pois os germes impli¬

cados são na sua maioria saprófitas. Estas bactérias constituem um grupo de

microorganismos psicrófilos já mais ou menos definido, porém de difícil classi¬

ficação.

A punção veno:a do doador deverá ser precedida do uso de soluções ger-

micidas, uma vez que os antissépticos destruiriam somente os germes pato¬

gênicos. Outra condição que se impõe é que a solução germicida a ser usada

tenha a característica de uma ação rápida sobre os microorganismos, pois o

tempo transcorrido desde o momento do início da antissepsia do braço do

doador até a punção não ultrapassa de maneira geral 1 minuto. Isto, portanto,

se soma aos inconvenientes já mencionados para a obtenção de uma amostra

de sangue absolutamente estéril.

Diante destas considerações, destacamos os excelentes remltados que obti¬

vemos com o ácido bórico adicionado como antisséptico de sangue. O ácido

bórico complementa a solução preservativa ACD na proporção de 0,1 g por 199

ml de sangue, permitindo que os frascos sejam autoclavados e armazenados por

longos períodos. O sangue colhido com antisséptico impediu o desenvolvimento

bactcriano de 26 cepas utilizadas nos testes, não modificou o aspecto normal

do sangue e quando inoculado em camundongos evitou uma elevada letalidade.

Acreditamos, portanto, que estes fatos justifiquem estudos complementa¬

res que possam trazer ao método a necessária segurança.

CONCLUSÕES

Diante de nossos resultados, nos parece lícito concluir o seguinte:

1. O ácido bórico, nas condições do teste, no plasma mantido a 4-6° du¬

rante 20 dias, exerceu ação possivelmente bactericida a partir das con¬

centrações superiores a 0,50 g% sobre bactérias psicrófilas isoladas de

sangue maciçamente contaminados, sendo 12 do gênero Vseudomonas,

8 do gênero Entcrcbacter e 6 do gênero Bacillus. No sangue total

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L

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SOERENSEN, B. — Contribuiçflo para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan, 37 : 17 - 42 , 1973 .

a atividade possivelmente bactericida foi observada a partir das con¬

centrações superiores a 0,3 g%.

2. A atividade bacteriostática do ácido bórico no plasma correspondeu

as concentrações de 0,12 a 0,25 g% e no sangue nas de 0,10 a 0,20 g%.

3. Nas concentrações inferiores a 0,06 g% o antisséptico pode ser con¬

siderado inativo.

4. O ácido bórico nas concentrações de 0,10 e 0,20 g% de sangue não

teve ação hemolítica, tendo o sangue conservado seu aspecto normal,

principalmente no que se refere a coloração.

5. A concentração de 0,1 g% do antisséptico adicionado a solução ACD,

foi capaz de reduzir a zero a elevada letalidade observada nos grupos

de camundongos inoculados com sangues contaminados sem antis¬

séptico.

6. Conforme dados compulsados na literatura referente a intoxicação do

homem pelo ácido bórico, foi possível verificar que as concentrações

que poderiam ser adicionadas como antisséptico no sangue são pos¬

sivelmente inferiores a dose tóxica.

7. Finalmente, existem possibilidades do uso do ácido bórico na concen¬

tração de 0,1 g%, como antisséptico do sangue conservado. Entretanto,

deverá ser precedido de estudos complementares que possam dar ac

método a necessária segurança.

RUMMARY — The possibility was stu-

died of using boric acid as an antisep-

tic agent in stored blood. Antibacterial

activity in experimentally contamina-

ted human plasma and blood maintai-

ned at 4-6"C, the influence of diffe-

rent concentrations on stored red blood

cells maintaincd at 4-6°, as well as the

toxic effect of eontaminated blood sam-

ples containing boric acid, havu

been determined. Psychrophile bacte-

rial strains isolated from contamined

blood were used for the tests: 12

strains of the genus Pseudomonas, 8

of the genus Enterobacter, and 6 of

the genus Bacilhis.

The bacteriostatic activity of boric acid

corresponds to concentrations of 0.12-

0,25 g% in plasma, 0.10-0.20 g% in

blood; the bactericidal activity corres-

donds to concentrations higher than

0.3 g%. In concentrations lower than

0.66 g%, boric acid is considered inac-

tive. In 0.10 and 0.20 g% concentra¬

tions, no hemolytic effect has been ob-

served, and the blood retained its nor¬

mal aspect mainly in respect to color.

A 0.1 g% concentration of boric acid

added to a ACD (Citric Acid, Sodium

Citrato, Dextrose) solution reduced to

zero the high lethality observed in

groups of mice inoculated with conta-

minated blood void of the antiseptic.

Final conclusions are given as to the

possible use of boric acid in addition

to a ACD solution in a final concen¬

tration of 0.1 g% as an antiseptic for

stored blood. According to the data in

literature referring to boric acid into-

xication in men, it has been verified

that the boric acid amounts added as

an antiseptic to stered blood are far

less than a toxic dosis; nevcrtheless,

complemcntary studies are recom-

mended before the method is applied.

UNITERMS — Baeterial contamina-

tion in a Blood Bank.

Boric acid as an antiseptic agent in

stored blood.

cm

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SOERENSEN, B. — Contribuição para o estudo do ácido bórico como antisséptico de

sangue conservado.

Mem. Inst. Butantan, 37: 17-42, 1973.

Ao Prof. Dr. Otto Guilherme Bier

À Dra. Jandyra Planet do Amaral

Ao Dr. Gastão Rosenfeld

Ao Dr. Henrique Sampaio Corrêa

Ao Dr. Luiz Augusto Ribeiro do Valle

a gratidão pela contribuição à nossa

formação científica.

Dedicatória:

â Cecilia, Roberto, Marcelo e Maurício.

Agradecimento:

MEUS SINCEROS AGRADECIMENTOS:

Ao Orientador deste trabalho: Prof. Dr. Euclydes Onofre Martins.

Ao Prof. Dr. Domingos Delascio.

Ao Prof. Dr. Donald Wildson.

A Dra. Jandyra Planet do Amaral.

Ao Dr. Oswaldo Melone.

Ã Dra. Margaret Pittman.

Ao Dr. Charles R. Manclark.

Ao Dr. Luiz Rachid Trabulsi.

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YUDIN, S. S. — Transfusión of stored cadaver blood. Practical considerations:

The first thousand cases. Lancei, 2: 361-366, 1937.

54.

55.

56.

58.

59.

ANEXO I

Relação das substâncias citadas no texto. Seus nomes comerciais, sinônimos

e fórmula química.

Albucid sódico ® . (N-acetil-sulfanilamida sódica)

Mertiolato © . Timerosal (etilmercúrio-tiosalicilato de sódio)

Metaphen ® . Nitromersol (4-nitro-3-hidroxi-mercuri-o-cresol)

Neosalvarsan ® . Neoarsphenamina (3-diamino-4-dihidroxo-arscnoben-

zeno-metanal sulfoxilato de sódio)

Nioagin ® . (metil-p-hidroxibenzoato)

Proflavina . (3,6-diaminoacridínio cloreto)

Prontosil ® . Sulfamidocrisoidina (4-Sulfamil-2,4-diaminoazoben-

zeno)

ivanol ® . Ethacridina (2 5-diamino-7-etoxiacridina)

Sulfidin © . Sulfapiridina (2-sulfanilamido-piridina)

Tripaflavina © . Acriflavina (mistura de 2,8-diamino-10-metil acridí-

niocloreto e 2,8-diamino acridina)

Urotropina © . Metenamina (Hexametileno-tetramina)

Recebido para publicação em 23.VII.73.

Aceito para publicação em 01.VIII. 73.

42

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. In^t. Butantan

1*7 : 43-82, 4 973

A ÁREA DE EDUCACÃO DO INSTITUTO BUTANTAN *

ROSA PAVONE PIMONT**

Seção de Cursos do Instituto Butantan

RESUMO — Baseada na legislação

estadual, a autora realizou estudo do

desenvolvimento do Instituto Butan¬

tan desde sua fundação até a presente

estruturação, com ênfase na evolução

das atividades didáticas da Instituição.

Sendo as referidas atividades rela¬

cionadas com Saúde Pública, Ciências

Biológicas e Médicas, foi proposto um

projeto de ordenação e ampliação da

área de educação, fundamentando-sc

nas possibilidades do Instituto Butan¬

tan e na Nova Lei de Diretrizes e

Bases do Ensino no Brasil. O projeto

refere-se, de forma mais ampla possí¬

vel à contribuição da Instituição à

Educação e ao Ensino, principalmente

a Educação em Saúde e a formação

na área das Ciências Biomédicas nos

diferentes gráus de escolaridade.

O fluxcgrama apresentado sugere li¬

nhas de trabalho a institutos de pes¬

quisa similares.

UNITERMOS — Instituto de Pesqui¬

sas; Educação em Saúde; Formação

profissional em Ciências Biomédicas.

1. INSTITUTO BUTANTAN: ÁREAS DE ATUAÇÃO

O Instituto Butantan, atualmente órgão cia Coordenadoria de Serviços

Técnicos Especializados da Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo, teve

suas origens no Instituto Serumtherápico, fundado na Fazenda Butantan, pelo

cientista brasileiro Dr. Vital Brazil em 1899. Nesta época este pesquisador de¬

senvolvia trabalho pioneiro relacionado com a produção de soros hiperimunes.

Em 1925 foram anexados ao Instituto Serumtherápico o Instituto Vacinogê-

nico e o Instituto Bacteriológico. A fusão destes três institutos recebeu o nome

de Instituto Butantan e, os objetivos da instituição que eram preparar medi¬

camentos, estudar e extrair princípios tóxicos medicamentosos de vegetais e

animais, foram ampliados, incluindo a educação sanitária do povo.

No desenvolvimento da estrutura de serviços do Estado, o Instituto

Butantan subordinou-se em 1931 ao Departamento de Saúde Pública, tendo

sido organizado como Centro de Medicina Experimental com finalidade de

realizar trabalhos científicos sobre animais venenosos, sobre patologia humana,

principalmente fenômenos de imunidade, preparação de produtos biológicos

e organização de cursos práticos de especialização científica.

Com a criação, em 1934, da Universidade de São Paulo passou a constituir

órgão complementar da mesma.

Em 1938, foi criado o Departamento de Saúde do Estado e o Serviço de

Laboratórios dc Saúde Pública desse Departamento incluía o Instituto Butantan.

* Parte da tese de doutoramento aprovada pela Faculdade de Educação da Universidade

de São Paulo, em 1973.

** Chefe da Seção de Cursos — Instituto Butantan.

Endert ço para correspondência :

C.P, G5, São Paulo, Brasil.

43

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

P1MONT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan»

Mcm. Inst, Butantan, .?? : 43-82, 1973.

Nas subsequentes reformas administrativas o Instituto Butantan, em 1942,

subordinou-se à Secretaria da Educação e Saúde Pública e, em 1944, foi trans¬

ferido para a recém-criada Secretaria de Estado dos Negócios da Saúde

Pública e da Assistência Social.

Em 1959, com a cr.ação do Conselho das Instituições de Pesquisa do

Estado de São Paulo, foi incluído no mesmo, entre outros institutos.

Com a aceleração do desenvolvimento científico, sócio-económico e cul¬

tural do Estado de São Paulo, o Instituto Butantan expandiu-se e tornou-se

necessária uma re-organização que agrupasse suas atividades em divisões téc¬

nicas, seções e setores para um funcionamento harmônico de suas atividades.

Com esse objetivo, em 1962, foi reorganizado, sendo redefinidas suas finali¬

dades. Após várias tentativas, foi aprovada a reestruturação atual em 1968.

Atualmente o Instituto Butantan desenvolve pesquisas científicas de âm¬

bito internacional, abrangendo os campos da Microbiologia, Biologia, Bioquí¬

mica, Farmacologia, Genética, Patologia e Fisiologia.

Além das pesquisas, o Instituto é encarregado de suprir o Estado de São

Paulo de vacinas para a varíola, tétano, tuberculose, coqueluche, raiva, tifo e

febre maculosa, entre outras. Em ocasiões de surtos epidêmicos, colabora nos

programas de imunização da comunidade, promovidos pelo governo, forne¬

cendo as vacinas ao Estado e, em caso de necessidade, ao País.

O Instituto também fabrica soros específicos para tratamento de: picados

por animais peçonhentos, raiva, tétano, difteria, botulismo e gangrena. Sendo

padrão em tecnologia de produtos imunoterápicos, assessora indústrias far¬

macêuticas governamentais e particulares.

No conjunto de prédios, onde funciona o Instituto Butantan, existe um

hospital para socorros do urgência a picados por animais venenosos e que,

através de médicos e enfermeiras especializados, atende dia e noite a todas as

pessoas acidentadas que o procuram.

Somadas às atividades de pesquisa e produção, a In tituição desenvolve

atividades de extensão cultural; possui um museu especializado que é conli-

nuamente visitado por cientistas, estudantes, populares e turistas de vários

lugares do mundo; organiza cursos, aulas, estágios e treinamentos para estu¬

dantes dos diferentes graus, fornecendo material didático e bolsas de estudo;

possui uma biblioteca com acervo de 7.850 livros, 28.250 periódicos e 22.261

teses e separatas no campo da Biologia e da Medicina; publica anualmente os

trabalhos realizados pelos seus cientistas em Memórias do Instituto Butantan.

Todas as atividades citadas desenvolvem-se conjuntamente, lideradas por

oitenta e três técnicos de nível superior e organizadas numa estrutura composta

de seis grandes Divisões:

Divisão de Biologia

Divisão de Microbiologia e

Divisão de Patologia

Divisão de Ciências Fisiológicas e Química

Divisão de Extensão Cu tuial

Divisão de Administração.

Imunologia

44

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PIMONT, R. I’. — A área de educação do Instituto Butantan.

Man. Inat. Butantan, 37: 13-82, 11)73.

Destas seis divisões, quatro desenvolvem atividades técnicas de pesquisa

o produção: Biologia; Ciências Fisiológicas e Química; Mcrobiologia e lir.u-

nologia; Patologia.

Divisão de Biologia: é composta de dois serviços e uma seção que desen¬

volvem trabalhos de pesquisa em três setores da Biologia: Anima ; s Peçonhentos

Genética e Parasitologia.

O Serviço de Genética, dessa divisão, realiza pesquisas em genética animal a

respeito de vertebrados inferiores. Existe também uma Seção de Genética

Humana. São inúmeros os trabalhos internacionais publicados por este serviço,

além de teses desenvolvidas nos seus laboratórios.

A Seção de Parasitologia possui preciosa coleção de ácaros e desenvolve

pesquisas em sua área específica.

O Serviço de Animais Peçonhentos conta com duas seções, que são in¬

cumbidas da extração sistemática de veneno de serpentes, aranhas e escor¬

piões, venenos estes que são utilizados para produção dos soros específicos

antipeçonhentos e em trabalhos de pesquisa.

Nesta divisão são desenvolvidos trabalhos de pesquisa a respeito de ser¬

pentes e a mesma conta com uma coleção de aproximadamente 40.000 exem¬

plares de serpentes conservadas, já estudadas e classificadas.

Em algumas regiões do Estado de São Paulo e do Brasil, acidentes por

serpentes e artrópodos peçonhentos constituem problema de Saúde Pública,

razão pela qual assume grande importância a fabricação desses soros pelo

Instituto Butantan.

Esta Divisão é encarregada da recepção e cadastramento de serpentes,

aranhas e escorpiões que chegam ao Instituto, vindos de todo o Brasil e de

outros lugares do mundo.

Como os venenos animais são preciosos para os estudos e a produção do

Instituto, são fornecidas caixas, laços especiais e instruções sobre apreensão

desses animais produtores de venenos; o transporte por via férrea é gratuito

de lodo e qualquer recanto do país.

A Divisão mantém um sistema de permuta de soro por animais peçonhen¬

tos recebidos.

Divisão de Microbiologia c Imunologia comporta os serviços de Bacterio¬

logia, Imunologia, Virologia e Controle e Técnicas Auxiliares, serv.ços respon¬

sáveis pela área de produção de imunoterápicos. As vacinas originárias de

bactérias e vírus são aí produzidas, dentro do mais alto padrão ds tecnologia

de produtos biológicos. Além das vacinas são produzidos soros hiperimunes

específicos para tratamento de diversas doenças já citadas.

Os imunoterápicos são fabricados em escala industrial, uma vez que são

destinados à comunidade do Estado de São Paulo, através da Secretaria de

Estado da Saúde.

Essa Divisão abrange o Serviço de Técnicas Auxiliares e de Controle, que

realiza o controle químico e o controle biológico de aproximadamente 50

produtos diferentes, preparados em todo o Instituto Butantan.

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

PIMONT, R. P. — A área de- educação do

J/em. Inst. Butcintun, 37: 13-82, 1973.

Instituto Rutantan.

Existem ainda os Setores de Distribuição, Acondicionamento e Expedição

dos produtos.

Divisão cie Patologia — subordina-se à esta Divisão o Hospital Vital

Brasil para socorros de urgência a picados por animais peçonhentos. O trata¬

mento é inteiramente gratuito e a internação se prolonga até o completo res¬

tabelecimento do doente. Este hospital possui registro de atendimento e

tratamento de acidentes desde sua função, em 1945, num total de aproxima¬

damente 33.000 casos.

Os casos estudados fornecem importantes dados para pescpiisa dos efeitos

dos envenenamentos animais em patologia humana. Desenvolvem-se, nesta

divisão, trabalhos de pesquisa ligados à Hematologia, Fisiopatologia e Ana¬

tomia Patológica.

Divisão de Ciências Fisiológicas e Química — eminentemente uma Divisão

de pesquisa pura de âmbito internacional, constitui-se de quatro Serviços:

Bioquímica, Farmacologia, Fisiologia e Química Orgânica. É a divisão mais

solicitada por estudantes universitários interessados na aprendizagem da

metodologia da pesquisa científica.

Desenvolve trabalhos sobre propriedades de venenos animais e sobre

Química de produtos naturais e Química Medicinal. É também encarregada

da produção de quimioterápicos para tratamento da hanseníase.

Como serviços de apoio à essas divisões técnicas, o Instituto possui:

a) uma Seção de Microscopia Eletrônica epie, além de atender a todas

as linhas cie pesquisa que a solicitam, desenvolve trabalhos específicos

em microscopia eletrônica em colaboração com universidades e outros

laboratórios especializados;

b) a Fazenda São Joaquim, onde estão os cavalos, vitelas e carneiros

para produção dos soros e vacinas, sendo que os animais cie pequeno

porte são criados na própria Instituição;

c) o Biotério, subordinado ao Serviço cie Veterinária, é encarregado

da criação de animais de laboratório. Camundongos, ratos, cobaias e

coelhos são aí criados dentro de preceitos científicos a fim de alcança¬

rem a homogeneidade necessária e o padrão exigido para testes de

laboratórios;

cl) Laboratórios especiais, que estão sendo organizados na medida do

desenvolvimento de determinadas linhas de pesquisa;

e) Oficinas de mecânica de precisão e vidraria especializada, cpie rea¬

lizam os serviços de manutenção dos laboratórios.

Estas Divisões atestam o desenvolvimento técnico científico cpie o Ins¬

tituto Butantan atingiu em seus 70 anos de existência.

Divisão de Extensão Cultural — constituída de três seções: Museu, Cursos

e Biblioteca e Divulgação tem por objeto informar a comunidade sobre as

realizações do Instituto.

46

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PíMONT, 1\. P. — A área de educaçáo do Instituto Butantan.

Mem. Inst. Butantan t 37: 43-82, 1973.

O Museu, além cias atividades já mencionadas anteriormente, através de

um setor de Taxidermia fornece a estudantes e escolas material fixado (ser¬

pentes, aranhas, escorpiões) para fazerem parte de Museus escolares ou frei¬

ras de ciências. Atende a turistas realizando demonstrações de extração de

venenos de serpentes vivas, o que sempre causa grande admiração aos visi¬

tantes.

São promovidos, pela Seção de Cursos, treinamentos de médicos, enfer¬

meiras, farmacêuticos, militares, estudantes, nas especialidades desenvolvidas

na Instituição. São organizados cursos e aulas sobre vacinas, soros, saúde pú¬

blica e é feita a tradução dos objetivos da Instituição a alunos de diferentes

Visitas aos laboratórios, acompanhadas por técnicos especializados, são

organizadas para grupos de estudantes ou profissionais da área das ciências

biomédicas. Estágios orientados fazem parte da contribuição cpie o Instituto,

através de sua Seção de Cursos, dá ás universidades nacionais e estrangeiras.

Orientação para trabalhos escolares e elaboração de material audiovisual

também são atividades desta seção.

O Instituto Butantan, sendo instituição complementar da Universidade de

São Paulo, mantém contatos culturais e didáticos com a mesma.

A Biblioteca faz parte do grupo de bibliotecas biomédicas do Estado de

São Paulo e, além de suas atividades específicas, colabora na organização de

palavras proferidas por cientistas convidados ou do próprio Instituto. Super¬

visiona o setor de Gráfica e Encadernação, que colabora na difusão cultural

imprimindo bulas e trabalhos científicos.

Divisão de Administração — abrange todos os serviços de infraestrutura

tais como: finanças, pessoal, material, compras, zeladoria e comunicações.

Esta Divisão segue os moldes da administração pública, tentando adequar

á mesma as tão diversas e complexas atividades do Instituto.

Os objetivos atuais do Instituto Butantan podem ser resumidos em:

a) Instituição de Saúde Pública — através da produção de imunoterá-

picos e do Hospital Vital Brasil que, funcionando 24 horas ininter¬

ruptamente, atende à população.

b) Instituição de Pesquisa Bipmédica — através do desenvolvimento de

trabalhos científicos de cunho internacional. As pesquisas iniciais,

baseadas nos temas básicos de Venenos Animais e Animais Peçonhen¬

tos, desenvolveram-se a tal ponto que, atualmente, existem inúmeros

laboratórios ligados a Genética. Farmacologia, Fisiologia, Patologia,

Biologia, Bacteriologia e Imunologia;

c) Instituição complementar da Universidade de São Paulo através de

organização de cursos que constituem matérias optativas ou créditos

para mestrado e doutorado. Além disso é instituição ligada à Educa¬

ção para a Saúde e à formação de especialistas em diferentes níveis

nos ramos da Ciência cultivados no Instituto.

d) Instituição de assessoria tecnológica a indústrias privadas — na fa¬

bricação de imunoterápicos.

47

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

F1MONT, R. P. — A área de eclucaçào cio Instituto líutantan.

}Icm. Inst. Butantan, J7: 43-82, 1973.

2. EVOLUÇÃO DAS ATIVIDADES DIDÁTICAS DO

INSTITUTO BUTANTAN

Na intenção de situarmos os objetivos do Instituto ligados à educação,

realizamos um levantamento de sua legislação — desde 1801 até 1971 — pro¬

curando detectar os objetivos educacionais e através deles depreender a evo¬

lução didática da instituição.

Após o estudo e análise de 26 decretos e leis concluímos que sempre

houve uma preocupação de extensão à comunidade dos seus trabalhos teó¬

ricos e práticos, através de atividades educativas.

No iníc'o, notamos que a preocupação era de informação e divulgação,

estruturando-se mais tarde até culminar com trabalho educativo e de forma¬

ção especializada.

Descreveremos, a seguir, a organização legal do Instituto e a evolução de

sua atividade didática, selecionando, entre os 26 decretos, decretos-leis e leis,

os que se referem especificamente às atividades didáticas.

Decreto n.° 878-A de 23/2/1901 — dá organização ao Instituto Serumthe-

rápico de Butantan.

Decreto n.° 3876 de 11/7/1925 — reorganiza c Serviço Sanitário e repar¬

tições dependentes.

Capítulo X — do Instituto Butantan.

Artigo 59 — “Caberão a essa seção as atribuições dos institutos cuja fusão

resulta... na obra de educação sanitária do povo no tocante à instalação de

museus”.

Neste decreto a instituição aparece pela primeira vez com o nome de

Butantan, resultando da fusão de 3 Institutos: o Serumtherápico, o Vacino-

gênico e o Bacteriológico.

A partir desta época, surgiu a preocupação, por parte dc um Instituto

de pesquisa altamente especializado, com a educação.

Mais tarde o Decreto 4941 de 21/3/1931 reorganiza o Instituto Butantan c

redefine seus objetivos. No Capítulo I — da organização e fins do Instituto

Artigo l.° — O Instituto Butantan, reorganizado como um centro de Medicina

Experimental, subordinado à Secretaria da Educação e da Saúde Pública, tem

por fim:

Letra h — “organizar e manter cursos práticos de especialização e de divul¬

gação científica dentro de suas finalidades”.

Finalidades na época — trabalhos científicos sobre animais venenosos, pato¬

logia humana, principalmente fenômenos de imunidade, preparação de pro¬

dutos biológicos, etc....

Notamos que entre os dois decretos citados houve uma mudança. De

mera informação através de museus, objetiva-se no segundo a organização de

cursos estruturados nas diversas áreas desenvolvidas na Instituição.

48

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

P1MONT, II. I’. — A área cie educação cio Instituto Butantan.

il/ewi. Inst. Butantan, -i7: 43-82, 1973.

Decreto n.° 6283 de 25/1/1934 — cria a Universidade de São Paulo e dá

outras providências.

Título 11

Artigo 4.° — além das Escolas, Faculdades e Institutos referidos no artigo

anterior, concorrem para ampliar o ensino e a ação da Universidade.

Letra C — O Instituto Butantan

Inicia-se a vinculação à Universidade não só no campo da pesquisa mas

no campo da formação especializada. A aproximação entre o Instituto Butantan

e a Universidade de São Paulo tornar-se-ia, infelizmente, mais formal do que

efetiva.

Decreto n.° 9393 de 5/8/1938 — organiza o Serviço de Laboratórios de

Saúde Pública do Departamento de Saúde e dá outras providências.

Artigo 1°

Parágrafo 2 P — integram a Divisão de Produção os atuais Institutos Butan¬

tan, .

Artigo 2.” — ao serviço de laboratórios de saúde pública compete.

Letra C — “Organizar e manter cursos práticos de especialização científica e

de Saúde Pública”.

Letra D — colaborar com a Universidade de São Paulo, dentro das finalidades

dos laboratórios de Saúde Pública.

Decreto n.° 9437 de 22/8/1938

Artigo l.° — Ao serviço de laboratório de Saúde Pública, dependência do

Departamento de Saúde do Estado, com sede no Instituto Butantan, compete —

Letra C — colaborar com a Universidade de São Paulo...

Nesta época de grande valorização do sanitarismo o Instituto, sendo órgão

dc saúde pública, foi considerado competente para a ministração de cursos

regulares.

Decreto Lei n.° 15094 de 11/10/1945 — reorganiza o Instituto Butan¬

tan, .

Artigo 2.° — ao Instituto Butantan compete...

Letra E — organizar cursos de aperfeiçoamento e colaborar com a Univer¬

sidade de São Paulo, como instituição complementar desta, sem prejuízo de

sua autonomia ou de suas finalidades.

Os artigos citados situam o relacionamento do Instituto com a Universi¬

dade de São Paulo, demonstrando sempre uma intenção e um interesse na área

ue educação c ensino. A relacionamento administrativo não existia, apenas o

cultural.

49

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

FIjVIOXT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

]\[em. Inst. Butantan, 37: 43-82, 11)73.

Decreto n.° 26979 de 11/12/1956

Instituto Butantan.

cr

iação do Fundo de Pesquisas do

Artigo 2°

Item Vil — “contribui para a realização de cursos do Instituto”.

A esta altura já havia cursos regulares, que serão demonstrados no capí¬

tulo de atividades de Educação realizadas. A contribuição do Fundo de

Pesquisas do Instituto Butantan era o fornecimento de bolsas para os me¬

lhores alunos de cada curso de especialização e o pagamento dos professores.

Nesta fase analítica, nosso interesse maior é demonstrar a evolução da

área já existente mas não definida estruturalmente.

Decreto n.° 40996 de 6/11/1962 — dispõe sobre a organização do Instituto

Butantan da Secretaria da Saúde Pública e da Assistência Social e dá outras

providências.

Artigo l.° — O Instituto Butantan...

... compreende a seguinte organização.

Item XVI — Seção de Cursos Técnicos e Especializados.

O Dr. Flávio da Fonseca, então Diretor Técnico da Instituição, compreen¬

dendo a importância da formação de técnicos nas áreas especializadas culti¬

vadas no Instituto Butantan e com fins de recrutamento de pessoal técnico

superior na área biomedica, inclui de forma estruturada a área de Ensino

no Instituto.

Neste momento da evolução didatica da Instituição, a preocupação era

mais de formação profissional, através de cursos ao nível de pós-graduação.

Na ocasião ainda não havia a definição de pos-graduaçao no sentido que

existe hoje e os cursos receberam o nome de cursos de especialização ao nível

de pós-graduação.

Decreto n.° 50404 de 23/9/1968 dispõe sobre a organização do Instituto

Butantan.

Artiao 8.° — Cria de Extensão Cultural.

O

Letra C — Seção de Cursos.

Nesta oportunidade abriu-se um campo maior para a educação no Ins¬

tituto. Não apenas cursos regulares mas várias atividades educativas começa¬

ram a desenvolver-se: organização de estágios, promoção de treinamentos,

orientação para trabalhos escolares, elaboração de material audiovisual. Essas

atividades começaram a ser desenvolvidas e coordenadas pela Seção de Cursos.

Todas essas atividades desenvolveram-se sob temas ligados à Saúde Pú¬

blica e Ciências Biomédicas partindo de solicitações da Universidade de

São Paulo, de outras Universidades, escolas de vários locais, alunos de dife-

50

cm

.SciELO

3 10 11 12 13 14

PIMONT, R. P. — A área cie educação do Instituto Butantan.

■Alem. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

rentes níveis, grupos de militares, firmas comerciais, enfim, diferentes grupos

da comunidade.

No caso da Universidade foram oferecidas matérias optativas para gra¬

duação, disciplinas constituintes de créditos para a pós-graduação, além de

estágios nos laboratórios especializados.

No caso das escolas de nível médio, aulas, estágios, orientação para tra¬

balhos, treinamento, além de bolsas para alunos de nível médio com objetivo

de iniciação científica. Nos demais casos, segundo as solicitações dos grupos,

várias modalidades educativas.

Nesta ocasião abriu-se concurso para as chefias técnicas e, para a seçao

de cursos foi selecionado um educador com especialidade na área biomédica.

Decreto n.° 52182 de 16/7/1969 - dispõe sobre a organização da Se¬

cretaria de Estado da Saúde.

Capitulo IX — “A Coordenadoria de Serviços Técnicos Especializados com¬

preende:

item IV — Instituto Butantan

Artigo 1G8 — À Coordenadoria compete:

Item V — Educação Sanitária

Item VI — formação e adestramento de pessoal em nível central nas suas

areas especializadas.

Decreto n.° 52214 de 24/7/1969 - dispõe sobre a regulamentação do

Decreto n.° 50404, de 23 de setembro de 1968, que organizou o Instituto

Butantan e dá outras providências.

Tendo a Secretaria de Estado da Saúde de São Paulo, sido reestruturada

posteriormente ao Instituto Butantan, seus objetivos entraram em concordân¬

cia com os já estipulados. A nosso ver, os itens V e VI referem-se também ao

Instituto Butantan, uma vez que esta Coordenadoria abrange outros Depar¬

tamentos e Institutos.

Nesta unidade tivemos a intenção de apresentar a evolução da atividade

didática do Instituto através da legislação.

Julgamos que a citação cronológica da referida legislação por si so fa¬

culta uma visão panorâmica da evolução das atividades didaticas da Institui-

Çáo, que seguiu um processo de desenvolvimento histórico sofrendo as in¬

fluencias de todo um contexto social e cultural em desenvolvimento.

É fora de dúvida, que em todas as reformas, nas quais a instituição ora

subordinaya-se à Secretaria da Saúde ora à da Educação, inclusive a Secretaria

de Educação e Saúde , suas atividades educacionais embrionárias ligadas a

Saude Pública e ciências biomédicas desenvolveram-se a ponto de constituir

Urna área dentro da Instituição.

51

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIMOXT, R. P. — A área de educaçiio do Instituto P.utantan.

Mem. Inst. Butantan t ;J7 : 43-82, 1973.

3. ATIVIDADES DE EDUCACÀC) E ENSINO REALIZADAS

No item anterior foi exposto, em ordem cronológica, o desenvolvimento da

atividade didática da Instituição.

Propomo-nos, a esta altura um relato das atividades já realizadas, se¬

gundo as diferentes modalidades das mesmas.

3.1. Atividades de divulgação e informação

Para as atividades de divulgação e informação, desde seus primórdios o

Instituto possui um museu de animais peçonhentos que até hoje serve de

recurso didático para a área de educação. Além de um atendimento à população

através de stands e animais peçonhentos conservados ou vivos, a Instituição

sempre se preocupou com a educação da população num sentido de prevenção

de acidentes por animais peçonhentos.

O Instituto Butantan ficou sendo conhecido por ser a Instituição que pela

primeira vez no mundo preparou o soro antiofídico. Baseadas nessa especia¬

lidade, criaram-se atividades de informação e educação da população no

sentido da prevenção e do tratamento de acidentes provocados por cobras,

aranhas e escorpiões.

Sendo o problema dos acidentes por animais peçonhentos um problema

de saúde pública, as atividades de informação e divulgação visaram em

última análise a saúde da comunidade e, portanto, tratava-se de educação

para a saúde.

Na medida da demanda, a população era atendida através de demonstra¬

ções realizadas no Museu e nos serpentários do Instituto, sendo epie para os

casos de acidentes existia ainda, um Hospital de primeiros socorros, que tam¬

bém colaborava no sentido de instruir a população.

3.2. Cursos de especialização

Com o desenvolvimento da instituição, que estudava os temas: Venenos

animais e Animais peçonhentos sob vários enfoques (bioquímico, patológico,

zoológico, genético, etc.), surgiu a grande necessidade da formação de téc¬

nicos especializados que desenvolvessem a pesquisa biomédica nessa área.

A universidade poderia dar a formação básica, mas a formação especia¬

lizada para um trabalho efetivo nos laboratórios de pesquisa teria que partir

da própria Instituição.

Dentro deste critério, em 1942 foi organizado pelo Instituto Butantan, um

curso de aperfeiçoamento denominado “Patologia Experimental”, que deveria

ser aprovado pela Universidade de São Paulo, uma vez que a Instituição se

constituía um órgão complementar da mesma.

As atividades didáticas epie até então eram difusas, descontínuas, assis-

tematicas e que se constituíam em atendimentos a grupos esporádicos, inte¬

ressados principalmente em ofidismo, começaram a ser sistematizadas, com o

objetivo de uma regulamentação das mesmas.

52

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

PIMONT, R. P. — A área cie educação do Instituto Putantan.

Mem. h\st. Butantan, 27: 43-82, 1973.

Em março cie 1942 o Instituto Butantan propôs ao Conselho Universitário

cia Universidade de São Paulo a aprovação do curso de aperfeiçoamento para

técnicos superiores do Instituto Butantan, através do Diretor Geral do Depar¬

tamento de Saúde, curso este aprovado no mesmo ano.

O curriculum era constituído das seguintes disciplinas:

Imunologia

Bacteriologia

Parasitologia

Viras filtráveis

Animais venenosos.

Somente em 1953 foi realizado o primeiro curso de Patologia experimental,

sendo, nesse intervalo, continuadas as atividades esporádicas e assistemáticas de

atendimento ao público e a grupos de alunos.

Em dezembro de 1953 foi reorganizado o curso cie Patologia Experimental

que constou de 1 ano letivo de Curso Básico Experimental com as disciplinas:

Estatística

Bioquímica

Fisiologia

Farmacodinâmica

c mais um ano letivo de um curso de especialização, a escolher:

Anatomia Patológica

Bioquímica

Hematologia

Imunologia e Bacteriologia

Ofiologia e Zoologia médica

Parasitologia

Virulogia

Sendo uma das condições para a admissão ao curso o diploma universi¬

tário ou curriculum científico, o aluno aprovado recebia o título de especia¬

lista, pois o curso era considerado de pós-graduação universitária.

Na época não haviam sido definidos, como o são atualmente, os cursos

de pós-graduação.

Os professores dos cursos de especialização eram os cientistas do Instituto

Butantan ou professores convidados e as exigências desses cursos variavam

de acordo com cada especialista responsável pelo mesmo, incluindo estágios,

participação nos programas de pesquisa e publicação de trabalhos científicos.

Em 1955, foi convencionado entre a Universidade de São Paulo e o Ins¬

tituto Butantan que os cursos de especialização teriam aprovação de programa

e docentes a cada triénio.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIMONT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Man. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

Esses cursos visavam, além da formação especializada de técnicos de ní

vel superior nas áreas cultivadas especialmente no Instituto Butantan, a for¬

mação de especialistas para futuro recrutamento da própria Instituição.

Em 1962 foi pela primeira vez estruturada a área educação como seção

de cursos técnicos e especializados, encarregada de organizar e coordenar cursos

no Instituto Butantan.

Na medida do interesse de universitários recém-formados em biociências e

ciências biomédicas e no desenvolvimento das várias seções do Instituto,

foram organizados pelo Instituto Butantan e aprovados pelo Conselho da

Universidade de São Paulo, além dos 7 cursos já aprovados e em funciona¬

mento, mais 4 cursos de especialização: em 1958 o de Artropodologia, em 1962

o de Bioestatística e o de Genética, em 1965 o de Microscopia Eletrônica, num

total de 11 cursos de formação especializada.

Sendo assim, foram ministrados, no período de 1952 a 1965, 39 cursos de

especialização ao nível de pós-graduação e na área das ciências biomédicas

(Tabela I).

No período de 1962 a 1963 o Fundo de Pesquisas do Instituto Butantan

reservou 4 bolsas anuais aos alunos dos cursos de especialização, uma vez

que estes cursos objetivavam a formação de pesquisadores.

3.3. Cursos de atualização e divulgação sobre animais peçonhentos

Paralelamente a esses cursos de especialização foram organizados e rea¬

lizados cursos de divulgação e atualização sobre animais peçonhentos. Estes

cursos constituiram-se numa sistematização do atendimento didático a grupos

de estudantes universitários, médicos, enfermeiras, militares ligados ao trabalho

de campo, como os oficiais do Serviço de Busca e Salvamento da Força Aérea

Brasileira — FAB; grupos de funcionários de firmas onde os acidentes por

animais peçonhentos eram freqüentes, etc...

Os cursos, em número de 37, no período de 1957-1966 foram ministrados

no Estado, no Brasil e no Exterior (Tabela 2).

Basicamente eram constituídos de 4 aulas, dentro dos seguintes temas:

— Reconhecimento e captura de ofídios peçonhentos.

— Reconhecimento e captura de artrópodos peçonhentos.

— Preparação de soro específico para acidentados por animais peçonhentos.

— Primeiros socorros e tratamento de urgência a picados por animais

peçonhentos.

As aulas variavam em nível e número, a depender do grupo solicitante.

Os cursos, tanto os de especialização como os de divulgação, foram minis¬

trados por técnicos superiores do Instituto, especialistas nas diferentes áreas,

uma vez que nos mesmos se incluíam Biologia, Patologia e Tecnologia.

Atualmente esses cursos constituem a maioria das solicitações, pois apenas

o Instituto Butantan possue os recursos materiais, técnicos e humanos para

ministrá-los. Este tipo de curso se adapta ao grupo solicitante.

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

I-’lMONT, li. P. — A area cie educação do Instituto Butantan.

Mem. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

TABELA

Cursos de especialização realizados no

1

Instituto

Butantan (1952-1965)

*

Número de alunos

inscritos

Especiali¬

dade

Ano

Patol.

Exper.

Bacter. e

Imunol.

Artropo-

logia

Bioesta-

tistica

Bioquí¬

mica

Genética

Hemato¬

logia

Ofiologia

Parasito-

logia

Virologia

Total de

alunos

Total de

cursos

1952-1953

19

—

19

i

1954

2

—

3

—

3

5

—

13

4

1955

—

1

—

O

—

4

2

3

—

13

5

1957

—

15

—

11

—

12

7

3

51

6

1958

—

1

5

—

1

—

3

1

—

1

12

6

1959

—

3

—

5

—

3

2

—

13

4

1961

—

1

1963

—

11

28

2

14

—

55

4

1964

—

4

—

3

15

3

—

25

4

1965

—

3

13

—

2

3

—

21

4

Totais

21

20

23

41

25

17

42

23

6

5

223

39

Fonte: Seção de Cursos do Instituto Butantan.

TABELA 2

Cursos de divulgação e atualização sobre animais

peçonhentos (1957-1966)

Ano

N.°

de cursos

N.° de aulas

1957

3

11

1958

5

14

1959

2

8

1960

4

6

1961

2

3

1962

5

16

1963

6

40

1964

7

26

1965

2

8

1966

1

4

Totais

37

126

Fonte:

Seção de

Cursos do

Instituto Butantan.

1, | SciELO

P.IMONT, lt. P. — A i'irea de educaçAo do Instituto Butantan.

31 em. Inst. Butantan, 37: 43-82. 1973.

Em 1967, devido ao grande crescimento da Instituição e da carência de

recursos humanos especializados (uma vez que a maioria dos alunos de espe¬

cialização tinha maiores chances de salários e stcitus nas universidades), a

Instituição passou por uma crise enquanto lutava para se transformar em

Fundação. Nos anos 1967/196S as atividades educativas tornaram-se quase

nulas no Instituto, a espera de uma reforma básica baseada na redefinição dos

objetivos da instituição.

O Decreto n.° 50404 de 23/9/1968 finalmente reestruturou o Instituto

Butantan em seus objetivos.

Segundo o Decreto n.° 52214, de 24/7/1969, que regulamentou o Ins¬

tituto Butantan, na Divisão de Extensão Cultural, ao lado da Seção de Biblio¬

teca e Divulgação e da Seção de Museu, foi colocada a Seção de Cursos, com

as seguintes atribuições:

a) Regulamentação dos cursos programados pelo Conselho Superior;

b) Trabalhos práticos referentes a processos de recrutamento e seleção

de candidatos aos vários cursos;

c) Execução de qualquer trabalho para a divulgação e realização dos

cursos;

d) Execução de trabalhos de documentação referentes aos cursos do Ins¬

tituto Butantan”.

Essas atribuições, limitantes, para uma Seção de Educação, constituem en¬

tretanto, apenas lembretes das atividades a serem desenvolvidas. Na fase de

implantação da nova reforma várias atividades didáticas foram organizadas e

desenvolvidas pela Seção de Cursos, baseadas não somente nas atribuições da

Seção mas também e principalmente, nos objetivos do Instituto Butantan.

4. ATIVIDADES ATUAIS DA SECÃO DE CURSOS

A partir de 1969 continuaram a ser desenvolvidas atividades educacionais

na área da Saúde Pública e na das biociências e ciênc : as biomédicas.

Dentro das condições existentes foram organizadas as seguintes atividades:

a) Trabalhos de pesquisa educacional (anexo no final)

b) Curso sobre:

“Fabricação de produtos imunoterápicos”, destinado a técnicos su¬

periores. Esse curso complementou créditos para curso de pós-gra¬

duação da Faculdade de Farmácia e Bioquímica da Universidade de

São Paulo, em 1970.

c) Curso de Ofiologia e curso de Aracnologia epie constituiram matérias

optativas para os cursos de graduação universitária do Instituto de

Biociências da Universidade de São Paulo, em 1971.

56

cm

2 3

L

5 6

11 12 13 14 15

PIMONT» R. P. — A área do educação do Instituto Butantan.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

d) Curso de Bioquímica de Enzimas Proteolíticas, que constituiu parte

da disciplina Bioquímica do curso de Ciências Biomédicas da Escola

Paulista de Medicina, em 1971.

e) Conjunto de aulas organizado segundo solicitação, interesse e nível

grupos de alunos: médicos, enfermeiros, agrônomos, militares. Ex.:

Animais Peçonhentos; Saúde Pública; Soros e Vacinas.

f) Atendimento didático através de aulas a alunos de nível médio.

g) Orientação para trabalhos escolares a respeito de vacinas, soros, ani¬

mais peçonhentos, etc., para alunos de todos os níveis.

h) Orientação para organização de material didático: stands para feiras

de ciências, álbum seriado, roteiro para coleções de diapositivos, etc.

i) Organização e coordenação de estágios nos diferentes laborórios do

Instituto.

j) Organização e coordenação de treinamento para diferentes grupos

de pessoas — escolares ou não.

Todos os dados apresentados estão documentados na Seção de Cursos do

Instituto Butantan, mas é fora de dúvida que, outras atividades que podemos

chamar de didáticas foram realizadas embora não estejam oficialmente regis¬

tradas. Limitamo-nos a fornecer os dados passíveis de comprovação.

Após análise desta unidade concluímos que:

a) a partir de atividades didáticas assistemáticas, o desenvolvimento da

Instituição levou a uma organização e estruturação dessas atividades

culminando na atual Seção de Cursos;

b) que o Instituto Butantan como órgão complementar da Universidade

de São Paulo está em contínuo relacionamento cultural com a

mesma;

c) que a atual estrutura do Instituto abre perspectivas para um desen¬

volvimento maior na área de Educação para a Saúde na colaboração

e formação dc profissionais na área das Ciências Biológicas e Biomé¬

dicas, ampliando as possibilidades de recrutamento pela própria Ins¬

tituições similares.

Nos seus 71 anos de existência, o Instituto Butantan que, administrativa¬

mente, é de âmbito estadual e, culturalmente, de âmbito internacional, trans¬

formou-se num patrimônio de incalculável valor para a educação e o ensino.

— Seus laboratórios especializados;

— seus técnicos superiores que, após uma formação universitária, prati¬

camente “criaram” as suas especialidades.

— o desenvolvimento de pesquisas originais em áreas originais;

57

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIMONT, R. P. — A área cie educação cio Instituto Butantan.

Man. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

— a luta pela sobrevivência cia pesquisa cientifica na área das ciências

biológicas e de algumas ciências médicas básicas;

— a procura de um rendimento maior na área de produção, através do

desenvolvimento e padronização de tecnologia avançada;

— a luta contra os entraves burocráticos e a falta de pessoal categorizado;

— as tentativas de aproximação com outras entidades culturais;

— a elaboração de teses de doutoramento pelos seus técnicos superiores;

— a promoção de estágios e treinamentos para alunos de nível médio e

universitário;

— o funcionamento do Hospital Vital Brazil;

— a existência de um Museu especializado em animais peçonhentos,

são fatores determinantes que caracterizam a Instituição, tornando-a recurso

inestimável a ser utilizado pela escola c pela comunidade.

Não só os recursos materiais e humanos altamente especializados, mas o

espírito de luta em favor da ciência e do desenvolvimento, tornam a Instituição

um manancial que transfere para grupos da comunidade nacional e internacional

conhecimentos e um determinado tipo de dinâmica de trabalho.

Sendo uma instituição única na área das ciências biomédicas, apresenta

aspectos únicos, abordagens únicas que são colocadas a serviço do conhe¬

cimento.

Através do desenvolvimento histórico-científico da Instituição, percebemos

que as atividades didáticas que eram, no início, esparsas, difusas e assistemá-

ticas, foram se transformando até culminarem numa Divisão de Extensão Cul¬

tural, que reune 3 seções; Cursos, Museu e Biblioteca, com funções de educa¬

ção e ensino definidas.

Baseado nas necessidades:

1. da comunidade — que necessita esclarecimentos sobre Saúde Públi

ca

3.

e algumas áreas da biologia e medicina;

das escolas de todos os graus — que não possuem elementos formados

nas áreas tão especializadas do Instituto, para fornecerem orientação

aos seus alunos;

da própria Instituição — no que se refero ao recrutamento de pessoal

técnico superior e técnico de nível médio para o desenvolvimento de

suas próprias atividades,

vem o Instituto, dentro das condições existentes, tentando organizar

uma série de atividades didáticas de forma sistemática e estruturada,

dependentes das solicitações que recebe dos diferentes grupos.

A recente Divisão de Extensão Cultural encontra-se apenas delineada em

suas linhas mais gerais.

59

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIMONT, It. P. — A área elo educação do Instituto Butantan.

Meni. Inst. Butantan, ”7: 43-82, 1973.

Sendo a Seção de Cursos encarregada do atendimento de alunos de todos

os graus, da organização e coordenação de todas as atividades didáticas, do

atendimento a visitas de especialistas, e sob nossa percepção profissional de

pedagoga, orientadora educacional, educadora de saúde pública e especialista

em Bacteriologia e Imunologia, a Instituição se nos apresenta como um cabedal

riquíssimo que, mediante um planejamento educativo adequado junto à Di¬

reção Geral, poderia dar uma contribuição efetiva e inestimável à Secretaria

de Negócios da Educação, à Universidade de São Paulo e demais instituições

educacionais no sentido do aproveitamento desses recursos.

A tomada de consciência dos recursos existentes acrescida ao levantamento

e análise dos mesmos, serviram de subsídio para a elaboração de um projeto

que objetiva a definição, ordenação e desenvolvimento de uma área de edu¬

cação no Instituto Butantan.

Esperamos que a reflexão e o projeto estimulem instituições similares a

colocarem a serviço da comunidade diretamente, ou através da escola, seus

recursos didáticos.

Não esquecendo que a educação e o ensino devem ser integrados e inte¬

gradores, o projeto refere-se especialmente às de Saúde, uma vez que a

Instituição desenvolve seus trabalhos nessas áreas.

5. IMPORTÂNCIA DO APROVEITAMENTO DOS RECURSOS

EDUCACIONAIS DO INSTITUTO BUTANTAN

PELA COMUNIDADE

No caso do Instituto Butantan, os recursos a serem aproveitados pela

comunidade seriam, além do Hospital e da produção de imunoterápicos, a

Educação para Saúde e a formação profissional ou complementar em algumas

ciências biológicas e médicas.

Sendo uma instituição com funções diversificadas, o Instituto realiza ati¬

vidades de Saúde Pública e de pesquisa. As atividades de Saúde Pública são

realizadas através do atendimento à população feito pelo Hospital Vital Brasil

e na produção de imunoterápicos. As pesquisas realizadas constituem forma

de atendimento mediato à Saúde Pública.

Através de suas atividades, o Butantan oferece condições para implantar,

organizar, coordenar ou colaborar com outras instituições em programas de

Educação para a Saúde e em formação ou complcmentação nas ciências bio¬

lógicas e médicas.

Ao nível de informação e divulgação para todos os grupos da comunidade,

já conta com um Museu especializado em animais peçonhentos que recebe a

visita diária de brasileiros e estrangeiros, constituindo verdadeira atração tu¬

rística. Faz parte de todos os programas das companhias de turismo de São

Paulo uma visita ao Instituto Butantan. O Museu contém informações a res¬

peito da biologia de serpentes, aranhas e escorpiões, além de instruções

sobre a captura desses animais e tratamento em casos de acidente. Conta ainda

com a demonstração, ao vivo, de extração de veneno de serpentes.

60

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2 3

z

5 6

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PIMONT, R. P. — A área do educação do Instituto Butantan.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

Se os visitantes não se educam no sentido exato da palavra, são, pelo

menos, despertados para os perigos que esses animais representam para o

indivíduo ou para a população e são informados a respeito dos primeiros so¬

corros a picados por animais peçonhentos.

Conta, ainda, dentro da Divisão de Extensão Cultural, com o atendi¬

mento didático e com a biblioteca biomédica.

Os temas mais solicitados para aulas são sobre suas especialidades: va¬

cinas e soros, animais peçonhentos, preparação de soros antipeçonhentos.

O Hospital Vital Brazil também fornece elementos para a Educação em

Saúde, uma vez que seus médicos e enfermeiras são especializados no aten¬

dimento a acidentados por animais venenosos.

Logo, o Instituto Butantan tem condições para colaborar na área edu¬

cativa tanto na formação geral como na profissional.

Como os recursos educativos do Instituto Butantan poderiam ser apro¬

veitados pela população escolar do l.° e 2° graus?

Se a Educação em Saúde para o 1° grau objetiva a formação de atitudes

em relação à saúde e a formação de hábitos sadios; o conhecimento de condi¬

ções sanitariais do lar, da escola; o reconhecimento do valor da ação pre¬

ventiva das vacinas; a prevenção de acidentes e os socorros de urgência, o

Instituto Butantan poderia colocar à disposição de alunos, professores e técnicos

ligados à educação os seguintes recursos:

1. tradução dos objetivos da instituição como patrimônio científico-cul¬

tural da comunidade;

2. aulas sobre:

— vacinas, sua importância e programas de vacinação;

— prevenção de acidentes sobre animais peçonhentos;

— conhecimentos sobre a biologia de serpentes, aranhas e escorpiões;

— reconhecimento dos animais venenosos;

— primeiros socorros a acidentados por animais venenosos;

3. material didático ilustrativo dos temas citados;

4. visitas ao museu e serpentários acompanhadas por guias especiali¬

zados;

5. orientação para trabalhos escolares a respeito dos programas de saúde

e sobre animais peçonhentos.

Sendo o 2.° grau profissionalizante, além da formação de atitude e adoção

de comportamentos relativos à saúde, as atividades que o Instituto Butantan

poderia desenvolver para grupos de alunos, professores e técnicos desse grau

seriam:

1. tradução dos objetivos da instituição em termos de patrimônio cien¬

tífico da comunidade e das possibilidades de estágio e treinamento

nas áreas aqui desenvolvidas, bem como mercado de trabalho para

profissionais formados na área de ciências biológicas e biomédicas;

61

I, | SciELO

PIMONT, H. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Mevi. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

2. aulas sobre saúde pública, programa de imunização em massa, etc.;

3. aulas sobre as áreas da Biologia e Medicina desenvolvidas nas ins¬

tituição;

Por ex.: Bacteriologia e Imunologia

Genética Animal e Humana

Animais Peçonhentos

Microscopia Eletrônica

Farmacologia c Bioquímica;

4. treinamentos para reconhecimento de aptidões e interesses nas áreas

da instituição;

5. estágios para o conhecimento do método de pesquisa no trabalho e

para abertura de opção profissional;

6. orientação para trabalhos escolares: pesquisas nas áreas de saúde

e ciências biológicas e biomédicas, feiras de ciências;

7. montagem de aulas e material audiovisual.

Na reforma atual do ensino onde o aluno escolhe entre as áreas de artes,

letras, ciências exatas, ciências humanas, educação ou ciências biológicas, o

instituto Butantan conta com recursos educacionais para fornecer, através de

planejamento e de entrosamento com a rede escolar estadual e municipal e

das escolas particulares, atividades didáticas complementares na área de

ciências biológicas. A Lei n.° 5692/71, prevê no seu artigo 3.° do Capítulo I,

o entrosamento e a “intercomplementaridade dos estabelecimentos de ensino

entre si ou com outras instituições sociais..bem como . .a organização de

centros interescolares...”.

O maior aproveitamento dos recursos didáticos da Instituição pelos alunos

do 2.° grau se justifica principalmente pelo seu objeto profissionalizante.

A área das ciências biomédicas é, talvez, a que oferece um espectro maior

de disciplinas e conseqüentemente será a que formará maior número de novas

profissões.

Neste grau, além da contribuição para a formação de comportamentos em

relação à Saúde, a integração do aluno no seu meio social através do conheci¬

mento das instituições de sua comunidade, o Instituto Butantan, poderia atra¬

vés de seu atendimento didático, fornecer importantes dados para uma aber¬

tura profissional na área das ciências biomédicas.

Não caberia à Instituição realizar a orientação profissional desses alunos

mas, por meio de convênios com escolas de nível médio, forneceria aos alunos

subsídios para a orientação vocacional. O aluno teria a oportunidade de co¬

nhecer para ter condições de optar conscientemente. É evidente que essas con¬

siderações se estendem a instituições de outras áreas. No caso do Instituto, se

referem à Saúde e às ciências biológicas e médicas.

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cm

2 3

L

5 6

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P1MONT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Mem. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

Por meio de estágios na Instituição, além dos subsídios para uma decisão

profissional os alunos se iniciariam no aprendizado do método de pesquisa

científica.

Ao nível universitário, a educação para a Saúde poderia e deveria cons¬

tituir-se uma disciplina autônoma.

Supondo-se que comportamentos em relação à saúde já tenham sido ado¬

tados, o aluno neste nível deverá ser desperto para a conservação e promoção

da sua saúde e principalmente da saúde da comunidade a qual ele pertence.

Na Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo já há

cursos de graduação para graduados em Saúde Pública, que tendem a ser

aprovados como cursos de especialização.

Na graduação não há disciplinas ligadas diretamente à Saúde Pública.

Talvez diante das Reformas do l.° e 2.° gráu, mais a Reforma Universitária

tome consciência da importância do desenvolvimento para a Saúde como ensino

sistemático ao nível da graduação universitária.

O Projeto Rondon (1972), que visa a integração do estudante universitá¬

rio nos problemas brasileiros, desenvolve a área de saúde, mas no elenco de

disciplinas das faculdades e institutos universitários não se insere a saúde

como estudo sistemático.

O Instituto Butantan procura colaborar em projetos desse tipo, embora

seja de nossa opinião que os alunos deveriam receber uma carga horária cons¬

tante do currículo de graduação sobre Saúde e Saúde Pública.

Em relação à formação profissional na área das ciências biológicas e mé¬

dicas, consideramos que o Instituto Butantan oferece grandes possibilidades de

colaborar através de uma sistematização de suas atividades didáticas.

Por um lado, sendo um instituto de pesquisa, suas atividades didáticas são,

por assim dizer, “viezadas” pelo espírito de pesquisa, pois os professores que

ministram aulas e orientam treinamentos, que promovem estágios e atendem

visitas organizadas pela seção de cursos, são todos cientistas e pesquisadores

e no momento em que estão realizando suas atividades didáticas, filtram aos

grupos de alunos o espírito, a mentalidade de pesquisador.

Quando um grupo de estudantes universitários recebe qualquer tipo de

atividade didática recebe ao mesmo tempo um enfoque diferente sobre os co¬

nhecimentos ministrados.

O desenvolvimento do espírito de pesquisa científica leva indiretamente

ao desenvolvimento da criatividade dos indivíduos. Consideramos de máxima

importância esta reflexão, pois lazer pesquisa se aprende pesquisando. Não nos

parece factível a realização de cursos para formação de pesquisadores, se

esses não trabalharem efetivamente em ambiente de pesquisa.

Se a formação do pós-graduado pretende levar à formação do pesquisador,

já na graduação o aluno deverá ter elementos para julgar a constituição do

trabalho de pesquisa científica.

1, | SciELO

63

PIMONT, IV P. — A área de educação do Instituto Butantan.

MeiH. Inst. Butantan, 37 : 43-82, 1973.

Outro aspecto é o da possibilidade que a Instituição tem de fornecer

matérias optativas para a Universidade de São Paulo ou outras universidades

ou escolas superiores dentro da área de sua especialização.

Na Universidade de São Paulo, existem dois Institutos, o de Biociências e o

de Biomédicas, erras programações já analisamos anteriormente e que se bene¬

ficiariam, através de convênios, com a ministração de matérias optativas por

instituições como o Instituto Butantan. Aliás, em 1970 já foram realizados no

Instituto Butantan dois cursos que constituiram matérias optativas para o Ins¬

tituto de Biociências da Universidade de São Paulo.

Foram ministradas duas disciplinas optativas, Herpetologia e Artropodos

Peçonhentos aos alunos do l.° ano do curso de Ciências Biológicas. Foi também

realizado em 1971, curso de Bioquímica de Enzimas Proteolíticos para alunos do

curso de Ciências Biomédicas da Escola Paulista de Medicina.

No caso de atendimento didático a alunos de nível universitário, os recur¬

sos do Instituto Butantan poderiam ser realizados através de:

1. Matérias optativas derivadas das seguintes grandes áreas:

A) Microbiologia e Imunologia

Bacteriologia e Virologia básica e aplicada em Tecnologia de

produtos biológicos.

B) Biologia

Zoologia: ofídios e artropodos

Parasitologia

Genética.

C) Farmacologia e Bioquímica (básica e aplicada em métodos de

pesquisa científica em venenos animaisl

D) Microscopia Eletrônica

Básica

Desenvolvimentos de processos.

E) Química

Tecnologia de produtos

Controle de produtos.

F) Patologia

De venenos animais.

Dessas grandes áreas poderiam ser inferidas disciplinas mais especiali¬

zadas.

Existem aspectos dessas grandes áreas que são desenvolvidas principal¬

mente no Instituto Butantan.

Por exemplo no caso do Instituto de Ciências Biomédicas há em seus

programas duas disciplinas: Artropodologia e Zoologia Médica de Vertebrados

venenosos, as quais seriam altamente beneficiadas pelos recursos do Instituto

Butantan.

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cm

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L

5 6

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PIMOXT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

2. Cursos do férias para universitários a respeito das especialidades da

Instituição.

Esses cursos, sendo de extensão ou complementação universitária, visam a

informação especializada em determinadas áreas.

3. Estágios nos laboratórios especializados, com compromisso de parti¬

cipação, tanto em trabalhos de rotina, como nos de pesquisa, exigindo-

se relatórios para obtenção de certificado.

4. Treinamento nas áreas de prevenção a acidentes por animais peço¬

nhentos em casos de excursões de Biologia, Geologia, etc.

5. Aulas sobre tradução dos objetivos e mercado de trabalho que a

Instituição oferece.

O mercado de trabalho oferecido pode ser deduzido a partir de seu quadro

de profissionais técnicos superiores.

Num total de 83 técnicos, até outubro de 1972, o Instituto Butantan possui:

Médicos . 19

Biólogos . 21

Farmacêuticos-bioquímicos ou Farmacêuticos. 24

Veterinários . 8

Químicos . 7

Advogados . 2

Bibliotecários . 1

Educadores . 1

Engenheiro Químico . 1

6. Visitas aos laboratórios especializados.

Em se tratando do nível de pós-graduação, tema ainda tão discutido e

discutível em nossa universidade, lembramos os objetivos básicos da mesma,

colocados pelos membros do Conselho Federal de Educação no parecer

n.° 977/65 C.E.S.U., aprovado em 3/12/1965:

“O seu objeiivo imediato é, sem dúvida, proporcionar ao estudante apro¬

fundamento do saber que lhe permita alcançar elevado padrão de competência

científica ou técnico-profissional impossível de adquirir no âmbito da gra¬

duação”.

... a pos-graduação tem por fim oferecer. .. o ambiente e os recursos

adequados para que se realize a livre investigação científica e onde possa

afirmar-se a gratuidade criadora...”.

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L.

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PIMONT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Mem. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

Ainda no parecer 977/65 (1965) o Aviso Ministerial aponta, "... em

síntese os três motivos fundamentais que exigem, de imediato, a instauração

do sistema de cursos pós-graduados:

1. formar professorado competente que possa atender à expansão quan¬

titativa de nosso ensino superior, garantindo, ao mesmo tempo, a ele¬

vação dos atuais níveis de qualidade;

2. estimular o desenvolvimento da pesquisa científica por meio da pre¬

paração adequada de pesquisadores;

3. assegurar o treinamento eficaz de técnicos e trabalhadores intelectuais

do mais alto padrão para fazer face às necessidades de desenvolvi¬

mento nacional em todos os setores.”

No Instituto Butantan estão sendo organizados os cursos de pós-graduação.

Se o trabalho de pesquisa for sistematizado através de cursos de pós-gra¬

duação e de modo a levar o indivíduo a realizar um trabalho efetivo e defi¬

nido que futuramente poderia constituir-se numa tese de mestrado ou douto¬

ramento, haveria as seguintes vantagens:

a) colaboração para a comunidade na formação de pesquisadores na

área de ciências biológicas e biomédicas;

b) recrutamento de pessoal especializado para a própria Instituição ou

instituições similares;

c) a relevância no sentido do trabalho científico para os elementos da

própria Instituição que, não tendo perspectivas altas quanto ao sa¬

lário, teriam perspectivas definidas em relação ao auto desenvolvi¬

mento e à realização de uma carreira científica. A própria Instituição

comporta uma geração nova carente de formação sistemática e estru¬

turada ao nível de pós-graduação;

d) o benefício decorrente (embora a longo prazo) para o desenvolvi¬

mento científico da Instituição e da área. Não só desenvolvimento

como aceleração da pesquisa.

Outro aspecto é o de ministrar cursos que sirvam de créditos a cursos de

pós-graduação da área.

A reversão de benefício para a própria Instituição ou similares é de valor

indiscutível.

Quanto ao âmbito da comunidade, podemos distinguir três aspectos:

I — o trabalho educativo direto com a população.

II — o trabalho educativo através das empresas governamentais ou par¬

ticulares, isto é, Serviços da Comunidade.

III — o trabalho educativo através da Escola.

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P1MONT, R. P. — A área de edu cagão do Instituto Butantan.

il lem. Inst. Butantan } 37: -13-82, 1973.

I — Quanto ao trabalho educativo realizado diretamente com a população,

o Instituto não pode prever grande expansão.

Este trabalho realiza-se, como já relatamos, através do museu, que está

em fase de remodelação, e do Hospital Vital Brazil.

Qualquer elemento da comunidade visitando o Museu ou sendo atendido

pelo Hospital recebe uma série de informações sobre Saúde, Biologia e Me¬

dicina.

Não podemos considerar essas atividades como um fator de desenvolvi¬

mento comunitário, uma vez que elas são atualmente organizadas sem uma

participação consciente da comunidade.

Numa revisão geral sobre comunicação, informação e educação, distin¬

guindo-se métodos de comunicação, a informação como fase da educaço, esses

recursos poderíam ser grandemente reformulados para um efetivo rendimento

no processo educativo. Na medida em que se conscientizar, na Instituição, que

o Museu pode ser um recurso didático para a educação e não apenas uma

fonte de informação e divulgação, o rendimento em termos de formação de

atitudes e comportamentos deverá ser grandemente alterado.

II — A participação da Instituição em programas educativos da Secretaria

de Estado da Saúde e da Secretaria dos Negócios da Educação e de outras

entidades governamentais ou particulares levaria a um rendimento maior das

atividades didáticas existentes.

O atendimento é feito para determinados grupos, indo ao encontro das

necessidades daquele grupo. Em termos de aprendizagem qualitativa é válido

mas em termos de rendimento quantitativo haveria uma mudança considerável,

caso fôsse sistematizado.

A sistematização das atividades do Instituto Butantan e a colocação de um

programa à disposição dessas instituições resultariam em real aproveitamento

de seus recursos por parte da comunidade.

III — Distinguimos a escola como uma terceira possibilidade, pois o aten¬

dimento tem sido feito através de solicitações de unidades escolares públicas

ou particulares de todos os níveis.

Considerando-se que os estudantes de todos os níveis são duplicadores de

conhecimentos para a Comunidade, a escola se torna elemento para o desen¬

volvimento comunitário.

Quanto ao Desenvolvimento Comunitário propriamente dito, o Instituto

é dotado de recursos inestimáveis para a área de Saúde Pública.

Em nossa opinião o desenvolvimento comunitário como processo diri¬

gido encontra-se ainda cm fase embrionária. Há algumas experiências isoladas

realizadas por determinados grupos. Este fato não invalida a colocação das

possibilidades da colaboração do Instituto Butantan no trabalho comunitário

na área de Saúde.

Sendo Instituição ligada à Saúde e órgão complementar da Universidade

de São Paulo, o Instituto Butantan poderá exercer atividades comunitárias em

associação com a própria Universidade na área de saúde pública.

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PIMONT,

Meni. Ins

R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

. Butantan, 37: 43-82, 1973.

6.

PROJETO DE DESENVOLVIMENTO E AMPLIAÇÃO DAS

ATIVIDADES DIDÁTICAS DO INSTITUTO BUTANTAN

Justificativa

Considerando:

1.

a necessidade de atendimento à população em geral, e especialmente

a escolar, no cpic concerne às especialidades do Instituto, quais sejam:

Prevenção em relação a animais peçonhentos

Imunização

Atendimento hospitalar

o.

a necessidade de formação de novos técnicos ou da melhoria dos

existentes para atuarem no setor saúde, de forma imediata — tecno¬

logia de produtos, ou de forma mediata, pesquisa biológica e médica,

através de treinamentos e cursos de vários níveis;

3.

a grande especialização e a diversificação de áreas do Instituto;

4.

a necessidade da existência de um material didático catalogado rela¬

tivo às atividades nas diversas áreas;

5.

a necessidade da formação de pessoal adequado para atendimento ao

público nacional e internacional;

6.

a necessidade de supervisão de toda atividade educacional realizada

no Instituto;

7.

a necessidade de uma avaliação constante de mélodos e técnicas em¬

pregadas na área educativa;

8.

ampliação e reestruturação da rede escolar do ensino médio e o

conseqüente aumento da procura por parte de estudantes do l.° e

2.° graus;

9.

a reestruturação da Universidade de São Paulo e o afluxo de estu¬

dantes para estágios e cursos correspondentes a matérias optativas;

10.

a constante solicitação por parte de grupos de militares, enfermeiros

e médicos que buscam informações especializadas a respeito de Pri¬

meiros Socorros a picados por animais peçonhentos e produção de

imunoterápicos;

11.

a necessidade de integração com instituições similares e complemen¬

tares para evitar redundância e obter maior rendimento.

Nosso principal interesse é a realização de um levantamento das possi¬

bilidades do Instituto Butantan na área da educação.

68

PIMONT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Mcm. Inst. Butantan, 43 - 82 , 1973 .

Justificamos este projeto lembrando que não se pretende transformar o

Instituto Butantan em uma escola, mas aproveitar os recursos existentes através

de uma sistematização dos mesmos.

Objetivo geral

Desenvolver e ampliar atividades de educação e ensino no Instituto Bu¬

tantan utilizando os recursos de suas áreas de atuação.

Objetivos específicos ou parciais

1. sistematização das atividades educativas da Instituição;

2. assessoria em Educação;

3. desenvolvimento de pesquisas no campo de educação, de acordo

com as necessidades sugeridas no decorrer das atividades da Seção

de Cursos;

4. integração com instituições similares ou complementares;

5. atualização constante através de contatos permanentes com institui¬

ções ligadas à educação e ao ensino;

6. participação em congressos ligados à Ciência e à Educação;

7. organização, implantação e coordenação de cursos regulares de di¬

ferentes níveis ligados aos seguintes temas básicos:

■— saúde pública

— biociências e ciências biomédicos desenvolv.das no Instituto

Butantan

— venenos animais

— animais peçonhentos

— tecnologia de produtos biológicos;

8. coordenação de treinamento cm serviço para os funcionários do Ins¬

tituto, nos vários níveis e nas diferentes carreiras a fim de homoge¬

neizar e elevar o padrão dos mesmos;

9. treinamento especializado em animais peçonhentos para trabalho

de campo de diferentes profissionais: militares, guardas florestais,

geólogos, enfermeiros, médicos, (escoteiros), etc;

10. organização e coordenação de cursos intensivos de férias para estu¬

dantes universitários;

11. treinamento de guias para o Museu do Instituto Butantan, para o

atendimento de visitas nacionais e internacionais;

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PIMONT, R. P. — A área cie educação do Instituto Butantan.

Man. Inst. Butantan, 27: 43-82, 1973.

12. coordenação de estágios a serem realizados nos diferentes Labora¬

tórios do Instituto para professores e estudantes de nível universi¬

tário e pós-graduado;

13. orientação para trabalhos escolares de alunos e professores dos di¬

ferentes níveis;

14. organização dc material didático para uso da Seção de Cursos e em¬

préstimo aos técnicos superiores no atendimento didático;

15. organização da divulgação sistemática a respeito do atendimento

didático do Instituto.

Período previsto : Plano quadrienal para a programação dos objetivos.

Recursos humanos e materiais

Os recursos humanos disponíveis são os próprios especialistas do Instituto

que ministram aidas, orientam estágios e treinamentos e funcionários da Divisão

de Extensão Cultural. Os recursos materiais e a ampliação dos recursos hu¬

manos deverão ser previstos no decorrer da execução do projeto.

Identificação dos comportamentos de entrada

Válidos para todos os objetivos específicos ou parciais propostos.

I — Caracterização da população a ser atendida

a) Direção Geral do Instituto Butantan

b) Conselho Superior do Instituto Butantan

c) especialistas do Instituto Butantan

d) funcionários dos níveis e carreiras existentes no Instituto Bu¬

tantan

e) professores e coordenadores de cursos de pós-graduação

f) professores universitários

g) professores de l.° e 2.° graus

h) técnicos com atividades ligadas à educação

i) alunos dos diferentes níveis

j) público em geral.

II — Caracterização dos recursos da Instituição

a) pesquisadores especializados nas áreas de Saúde, Biociência e

Ciências Biomédicas

b) laboratórios especializados para aulas, treinamentos e estágios

c) museu especializado

d) biblioteca biomédica

e) hospital especializado

f) Seção de Cursos.

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PIMONT, R. P. A área de educação do Instituto Butantan.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 43-82, 1973.

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Mem. Inst. Butantan , 37 : 13 - 82 , 1973 .

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UI -Ü

I, | SciELO

PIMONT, R. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Mem. Inst. Butantan, .17: 43-82, 1073.

7. CONCLUSÕES

1 — Os institutos de pesquisas da cidade de São Paulo desenvolvem,

em maior ou menor escala, atividades didáticas.

II — O Instituto Butantan possui recursos didáticos especializados, no

se refere às áreas de Saúde, Biologia e Medicina, que pode

colocar a serviço da educação.

III — Mediante uma sistematização dos recursos didáticos do Instituto

Butantan, a comunidade, através da escolha, poderá usufruir me¬

lhor desses recursos.

IV — O aproveitamento dos recursos do Instituto Butantan por Ser¬

viços de Educação levaria os escolares à maior integração no meio

ambiente e no seu próprio processo educativo.

V — Os estágios oferecidos pela instituição e a orientação sistemática

para estudantes de nível médio seriam úteis na escolha profissio¬

nal desses alunos.

VI — A formação especializada que o Instituto Butantan poderá for¬

necer será um meio de recrutamento de mão de obra especializada

para a própria Instituição e Instituições similares.

VII — A formação complementar, que a Instituição pode vir a fornecer,

refletir-se-á na especialização de recursos humanos, para pos¬

terior influência no desenvolvimento da pesquisa científica na

área das biociências e das ciências biomédicas.

VIII — O aproveitamento dos recursos pela comunidade seria uma re¬

versão dos gastos que essa comunidade tem com a Instituição.

IX — O projeto apresentado poderá sugerir linhas de trabalho para

outros institutos de pesquisa.

SUMMARY — Eased on thc State Lc-

gislation, thc author studied the de-

volopment of the Instituto Butantan

from its foundation to the present

strueturation. giving emphasis to the

didactic activities of the Institution.

Since these activities are ciosely re-

lated to the Public Health Service,

Biological and Medicai Sciences, a pro-

ject has bcen proposcd aiming at thc

diffcrent schooling leveis, wellfounded

on the Instituto Butantan’s possibili-

ties and on the new basical and di-

rective law of educatiion.

The presented chart suggcsts linos

of work for similar rcsearch institutes.

UNITERMS — Research Instituto.

Health Education. 1'rofessional train-

ing in Biomcdical Sciences.

80

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIMONT, H. P. — A área de educação do Instituto Eutantan.

Mciii. Insí. ButClHtan, .,'7 : 13-82, 1973.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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ginúlia, São Paulo, 35: 1114-1125, agosto 1971.

BRASIL. Ministério da Educação e Cultura. Conselho Federal de Educação. Parecer

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ta, Rio do Janeiro 14: 67-88, 1065.

BRASIL. Ministério de Educação e Cultura. Escola Paulista de Medicina. Anuário:

Curso de Graduação em Ciências Biomédicas. São Paulo, 1971.

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Estrutura; FunRondon; Atiiação. Brasília, Gráfica do Senado, 1972.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n.° 878-A de 23/2/1901. Dá organização ao

Instituto Serumtherápico em Butantan — a cargo da Diretoria do Serviço Sani¬

tário. Coleção das Leis c Decretos do Estado de São Paulo, 51: 29, fev. 1901.

SÂO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n.° 3.876 de 11/7/1925. Reorganiza o Ser¬

viço Sanitário e repartições dependentes. Coleção das Leis e Decretos do Estado

de São Paulo, 35: 470, jul. 1925.

SÂO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n.° 4.917 de 3/3/1931. Transforma a Se¬

cretaria dc Estado dos Negócios do Interior em Secretaria Pública e dá outras

providências. Coleção das Leis e Decretos do Estado de São Paulo, 41: 332, mar. 1931.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n.° 4.941 de 21/3/1931. Reorganiza o Ins¬

tituto Butantan. Coleção das Leis e Decvetos do Estado de São Paulo, 41, 264,

mar. 1931.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n 9 4.998 de 2/4/1931. Regulamenta o De¬

creto n.° 4.941, do 21/3/1931, que reorganiza o Instituto Butantan. Coleção das

Leis e Decretos do Estado de São Paulo, 41: 439, abr. 1931.

CÃO PAULO. Leio, decretos, etc. Decreto n 9 6.283, de £5/1/1934. Cria a Universidade

de São Paulo e dá outras providências. Coleção das Leis e Decretos do Estado de

Sãa Paulo, 44: 25, jan. 1934.

CÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n. 9 9.247, de 17/6/1938. Cria o Departa¬

mento do Saúde do Estado, que fica subordinado diretamente à Secretaria de

Estado dos Negócios da Educação e Saúde e extingue o Serviço Sanitário. Coleção

das Leis e Decretos do Estado de São Paulo, 48: 112, jan. 1938.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n. 9 9.393, de 5/8/1938. Organiza o Serviço

de Laboratórios de Saúde Pública do Departamento de Saúde do Estado o dá

outras providências. Coleção das Leis e Decretos do Estado de São Paulo, 58: 171,

ago. 1938.

SÀO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n. 9 3.437, de 22/8/1938. Dá competência

aos serviços de laboratórios do saúde pública, dependência do Departamento dc

Saúdo do Estado, com sede no Instituto Butantan, 48: 255, ago. 1938.

CÃO PAULO. Leis, decretes, etc. Decreto n 9 12.787, de 30/0/1942. Subordina o

Instituto Butantan diretamente à Secretaria de Educação e Saúde Pública. Coleção

das Leis e Decretos do Estado de São Paulo, 52: 193, jun. 1942.

SÃO PAULO. Leis, decretes etc. Decreto n 9 17.351, de 1/7/1947. Tranferc para a

Secretaria do Estado dos Negócios da Saúde Pública e da Assistência Social, os

cerviços que menciona. Coleção des Leis c Decretos do Estado de São Paulo, 58.

30. ául. 1847.

SÃO PAULO. Leis, decretos, ctc. Decreto n.° 26.979, de 11/12/1956. Dispõe sobre a

criação do Fundo de Pesquisas do Instituto Butantan. Coleção das Leis e Decretos

do Estado de São Paulo, 66: 638, dez. 1956.

81

cm

2 3

L.

5 6

10 11 12 13 14 15

PIMONT, n. P. — A área de educação do Instituto Butantan.

Mem, Inst. Butantan, 37 : 13-82, 11)73.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto rU 40.996, de 6/11/1962. Dispõe sobre a

organização do Instituto Butantan da Secretaria de Estado dos Negócios da

Saúde Pública e da Assistência Social e dá outras providências. Coleção das Leis

e Decretos do Estado de São Paulo, 72: 734, nov. 1962.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n.° 50.404, de 23/9/1968. Dispõe sobre a

organização do Instituto Butantan. LEX- Legislação do Estado de São Paulo e

da Prefeitura da Capital 22: 709. set. 1968.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n.° 52182, de 16/7/1969. Dispõe sobre a

organização da Secretaria de Estado da Saúde. LEX — Legislação do Estado de

São Paulo e da Prefeitura da Capital, 23: 371, jul. 1969.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Decreto n.° 52214, de 24/7/1969. Regulamenta o

Instituto Butantan e define legalmente as atribuições da Seção de Cursos. LEX

— Legislação do Estado de São Paulo e da Prefeitura da Capital, 23: 44, ául. 1969.

SÃO PAULO. Leis. decretos, etc. Decreto n.° 15.094, de 11/10/7945. Reorganiza o

Instituto Butantan como centro de pesquisa aplicada à medicina experimental e

à fisiopatologia humana, diretamente subordinado à Secretaria de Educação e

Saúde Pública. Coleção das Leis e Decretos do Estado de São Paulo, 55: 201. out.

1945.

SÃO PAULO. Leis, decretos, etc. Lei n.° 5.151, de 7/1/1S59. Cria o Conselho das

Instituições de Pesquisa do Estado de São Paulo. Coleção das Leis e Decretos

do Estado de São Paulo, 19: 18, jan. 1959.

ANEXO

INSTITUTO BUTANTAN

SEÇÃO DE CURSOS

Trabalhos de pesquisa educacional realizados no eríodo compreendido

entre: 196J/-1972

1964 — Contribuição do Instituto Butantan para a formação de especialistas no

campo da Biologia.

1965 — Cursos de divulgação do Instituto Butantan.

1966 — Metodologia dos cursos de formação de pesquisadores do Instituto Butantan.

1969 — Cursos de pós-graduação. Análise e tentativa de definição.

1970 — Evolução da atividade didática do Instituto Butantan.

1971 — Instituto Butantan: informação e educação sanitária.

1971 — Atividades do educador de saúde pública num instituto de pesquisa.

1971 —■ Delimitação da área de ação da Seção de Cursos do Instituto Butantan.

1971 — Projeto piloto de treinamento em serviço para pessoal de saúde pública.

1971 — Aspectos educacionais de um programa de desenvolvimento no setor Saúdo

pública para a cidade de Cunha (em colaboração).

1971 — Carta sanitária da cidade de Vinhedo (cm colaboração).

1972 — Comunidade e Saúde Pública.

Recebido para publicação em 23.VII.73.

Aceito para publicação em 01.VIII.73.

82

], | SciELO

Mem. Inst. Butantan

37: 83-ÜO, 1073

ESTUDO ELETROFORÉTICO EM “CELLOGEL” DE VENENOS

DO GÊNERO BOTHROPS

MEDARDO SIL.ES VILLARROEL *

RAYMUNDO ROLIM ROSA **

REYNALDO SCHVVINDT FURLANETTO ***

FLÁVIO ZELANTE »

de exposição do que as técnicas ante¬

riormente utilizadas.

RESUMO — Os autores, realizando a

eletroforese de seis venenos de serpen¬

tes do gênero Bothrops Wagler, 1824,

sobre membrana de “Cellogel” verifica¬

ram que a metodologia aplicada propi¬

cia uma melhor separação dos compo¬

nentes desses venenos em menor tempo

UNITERMOS ■ — Eletroforese de vene¬

nos ofídicos sobre “cellogel”; eletrofo¬

rese de venenos botrópicos.

INTRODUÇÃO

O estudo do ofidismo, entre nós, a partir dos trabalhos pioneiros de

Brazil & Pestana (1909) vem merecendo, gradativamente, maiores atenções.

Dentre as serpentes venenosas do Brasil, o gênero Bothrops é aquele respon¬

sável pelo maior número de acidentes. Rosenfeld (1969), atribui-lhe a respon¬

sabilidade de 90,8% do total dos acidentes ofídicos.

Tais observações contribuiram para despertar os nossos interesses para o

estudo dos venenos botrópicos, principalmente em seus aspectos imunoquí-

micos. Tentativas a este respeito já têm sido realizadas, quer com a utilização

de processos químicos, quer com a utilização de processos eletroforéticos.

Kõenig (1937) demonstrara a possibilidade da separação eletroforética

do veneno de B. jararaca. Seguiram-se os trabalhos de Polson et al (1946),

Gonçalves & Polson (1947), Gonçalves (1948), Gonçalves & Vieira (1950).

Esses autores utilizaram-se de papel de filtro, como suporte para a corrida

eletroforética. Gonçalves S. Vieira (1950) loc. cit. obtiveram através desta

técnica nove frações no veneno de B. jararacussu, quatro frações no veneno

de B. jararaca e sete frações no veneno de B. atrox.

A partir dessa época, melhores técnicas de eletroforese foram introduzidas

tais como a eletroforese em “Acetato da Celulose” (Afonso, 1961; Bartlett, 1963;

Ritts, Jr. & Ondrick 1964) e, mais recentemente as técnicas que utilizam, como

* Professor Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Institulo

de Ciências Biomédicas da U.S.P.

** Diretor do Serviço de Tmunologia do Instituto Butantan e Professor Assistente Doutor

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.P.

*** Professor Catedrático do Departamento de Microbiologia .e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomédicas da U.S.P.

Endereço para correspondência:

C.P. 43G5, São Paulo, Brasil.

83

cm

2 3

Z

5 6

11 12 13 14 15

SciELO ^

2

3

5

6

11

12

13

14

15

Z

cm

SILiES VILLARROEL, M., ROLIM ROSA, R., FURLANETTO, R. S. & ZELA N TE', F.

Estudo eletroforético em “cellogel” de venenos do gênero Bothrops.

Alem. Inst. Butantan, 37: 83-90, 1973.

g) solução descorante a base de metanol e ácido acético;

h) desidratante metanol puro;

i) solução de transparentização a base de metanol, ácido acético e gli¬

cerina.

Modelo e x p e r i m enta l:

Realizamos numerosas provas preliminares a fim de determinar as melho¬

res condições de contração das soluções dos venenos e de tempo de exposição,

com a finalidade de obter uma melhor separação das várias frações constituin¬

tes dos venenos botrópicos. Conseguimos assim estabelecer as seguintes condi¬

ções que oferecem melhores resultados:

a) 4% de concentração das soluções de veneno;

b) corrida eletroforética por 90 minutos e a 200 volts.

Após a eletroforese de cada veneno, nas condições expostas, procedíamos

a coloração das tiras e em seguida, a decomposição das frações em Registrador

de Extinção tipo II Zeiss, obtendo-se os respectivos eletroferogramas.

RESULTADOS

Com a utilização das condições de experimentação por nós padronizadas,

obtivemos os resultados que são representados pelo número de frações eletro-

foréticas de cada veneno. A tabela I, apresenta os dados obtidos.

Tabela I

Comportamento eletroforético sobre “Cellogel”

dos seis venenos do gênero Bothrops, em solução

Cl Iftfc

Espécie de veneno

Número de frações

B.

jararaca

15

B.

alternatus

11

B.

insularis

13

B.

jararacusSu

9

B.

moojeni

9

B.

cotiara

10

As tiras de cellogel, submetidas ao Registrador de Extinção possibilitaram

os eletroferogramas que ilustram as figuras de 1 a 6.

85

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

Fig. 1 — Comportamento eletroforético sobre “cellogel” do veneno de

B. jararaca, em solução a 4%.

Fig. 2 — Comportamento eletroforético sobre “cellogel” do veneno de

B. alternatus, em solução a 4%.

Fig. 3 — Comportamento eletroforético sobre “cellogel” do veneno de

B. insularis, em solução a 4%.

Fig. 4

Comportamento eletroforético sobre “cellogel” do veneno de

B. jararacussu, em solução a 4%.

Fig. 5

Comportamento eletroforético sobre “cellogel” do veneno de

B. moojenij em solução a 4%.

Fig. 6 — Comportamento eletroforético sobre “cellogel ” do veneno dc

B. cotiara , em solução a 4%.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

SILES VILLARROT3L, Z\F.. ROLIM ROSA, R., FFRLAXETTO. R. S. & ZELAX TE', F.

Estudo elctroforético em “ceHogel” de venenos do gênero Jiothrojts.

Mern. Inst. Butantan, : 83-90, 1973.

DISCUSSÃO

A bibliografia por nós consultada demonstra que, muito embora alguns

trabalhos tenham sido realizados objetivando o estudo do comportamento ele-

troforético dos venenos de serpentes, somente Gonçalves & Vieira (1950),

estudaram alguns aspectos de tres venenos botrópicos procedentes do Brasil;

todavia, estes autores utilizando-se de papel de filtro como suporte para a

eletroforese, obtiveram para o veneno de B. jararaca, apenas quatro frações;

para o veneno de B. atrox, sete frações e para o veneno de B. jararacussu, nove

frações. Os nossos resultados, foram concordes somente no que se refere

ao veneno de B. jararacussu, pois também determinamos a existência de

nove frações; para os outros dois venenos, determinamos a presença de maior

número de componentes pois que B. jararaca apresentou 15 frações e B. moo-

jeni nove frações. Este aumento do número de frações por nós encontrado

parece ser consequente da tecnologia aplicada e talvez consequente também

a origem dos venenos utilizados pelos autores citados, visto não terem escla¬

recido a técnica adotada para a extração. Além destas considerações, os venenos

utilizados por Gonçalves Vieira, loc. cit., foram fornecidos pelo “Instituto

Ezequiel Dias”, localizado no Estado de Minas Gerais, portanto obtidos de

serpentes provenientes de áreas geográficas distintas daquelas que forneceram

o material por nós utilizados, o que possibilitaria segundo Schenberg (1958-

1963), uma variabilidade na composição da peçonha. A rúetodologia por nós

aplicada com a utilização de tiras de “Cellogel”, permitiu uma melhor carac¬

terização das frações constituintes dos venenos em um tempo de exposição

eletroforética bem menor (90 minutos).

Os resultados obtidos pela eletroforese em “Cellogel” dos venenos das

espécies B. alternatus, B. insularis e B. cotiara, são inéditos pois não consta

na literatura qualquer trabalho relacionado com a eletroforese desses venenos.

O veneno da espécie B. jararaca, quando comparado com as outras 5

espécies analizadas, sugere ser, dentre as peçouhas por nós estudadas, aquela

que possui um maior número de frações eletroforéticas.

CONCLUSÕES

1. A separação eletroforética dos venenos de B. jararaca, B. jararacussu e

B. moojeni em tiras de “Cellogel”, quando comparada com a eletroforese em

papel, revela que além de ser um método muito mais rápido, permitiu melhor

separação e, consequentemente, obtém-se a revelação de maior número de

frações.

2. A separação eletroforética em “Cellogel” do veneno de B. jararaca.

revelou 15 frações eletroforéticas sendo pois a espécie que apresentou maior

número de frações dentre as peçonhas das espécies de Bothrops estudadas;

88

cm

2 3

z

5 6

10 11 12 13 14 15

STLKS VIL.LARROEL, M., ROLIM ROSA, R., FURLANETTO, R. S. & ZELANTE', F. _

Estudo eletroforêtieo em “cellogel” de venenos do gênero Bothrops.

,1/OH. Insl. Butantan, 37: 83-90, 1973.

3. A separação eletroforética cios venenos cie B. alteriiatus, B. insularis

e B. cotiara, em tiras cie “Cellogel”, foi realizada pela primeira vez, apresentan-

clc-se estes venenos, com 11, 13 e 10 frações, respectivamente.

SUMMARY — Electrophoretic analysis

of six samplcs of snake venom of the

genus Bothrops Waglcr, 1824, on “Cello¬

gel” mombrane, clemonstrated a better

separation of the venom components in

lcsstime of exposition, when compareci

with other techniques.

UNITERMS — Electrophoretic stucly

of snake venoms on “Cellogel”; electro¬

phoretic stucly on Bothrops venoms.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1.

2 .

3.

4.

6 .

7.

AFONSO, E. — On the electrophoresis of proteins on ccllulose acetatc mem-

branes. Clin. Chim. Acta., 6: 883-885, 1961.

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Clinicai Chemistry, 9 : 317-324,, 1963.

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namento ophidico. Rev. mécl. São Paulo, 12: 415-425, 1909.

COLFS, B. & VERHEYDEN, J. —- Electrophoresis and sudan black staining

of lipoproteins on gelatiniscd cellulose acetate. Clin. chim. Acta., 18: 325-334,

1967.

FURLANETTO, R. S. —- Emprego de camundongos tratados com dose prepa¬

ratória de venenos bothrópicos para a avaliação de DL50 dêsses venenos. São

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Paulo.

GONÇALVES, J. M. — Análise eletroforética de serpentes brasileiras. In: Con-

greso Sudamericano de Química, 4", Santiago do Chile, 1648.

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8. GONÇALVES. J. M. & VIEIRA, L. G. — Estudes sobre venenos de serpentes

brasileiras. I.. Análise eletroforética. An. Acad. bras. Cicnc. 22: 141-150, 1950.

9. KOENIG, P. — Applicação da electrophorése nos trabalhos chimicos com quan¬

tidades pequenas. In: Congresso Sul-Americano de Chimica, 3. w , Rio do Janeiro

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10. PAGET, M. & COUSTENOBLE, P. — Microelectrophorèse des próteines du

sérum sur acetate de cellulose gélatineux. Ann. Biol. clin., 23: 1209-1219, 1965.

11. PAGET, M. & COUSTENOBLE, P. — Microelectrophorèse des glycoprotéides

sériques sur acétato de cellulose gélatineux et sur polyacétate de cellulose.

Ann. Biol. clin., 24: 81-185, 1966.

12. POLSON, A.; JOUBERT, F. G. & HAIG, D. A. — Electrophoretic examínation

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13. RITTS, Jr. R. E. & ONDRICK, F. W. — Electrophoresis of serum proteins on

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1964.

14. ROSENFELD, G. — Acidentes por animais peçonhentos. In: VERONESI, R.,

ed. Doenças Infecciosas e parasitárias. 4a. ed. Rio de Janeiro, Guanabara

Koogan, 1969, p. 979-992.

89

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

SIX.ES VIT.LARROEL,, M., ROLIM ROSA, R„ PURLANETTO, IX. S. & ZELANTE, F. —

Estudo eletroforético em “cellogel” do venenos do gênero Bothropa.

Mem. Inst. Butantan, 37 : 83-90, 1973.

15. SCHENBERG, S. — Estudo comparativo da composição do veneno de Bo-

throps neuwiedi em placas de Ouchterlony. Ciência e Cultura. 10: 163-164, 1958.

16. SCHENBERG, S. — Immunological (Ouchterlony method) Identification of in-

trasubspecies qualitativo differences in snake venom composition. Toxicon,

1: 67-75, 1963.

17. SILES VILLARROEL, M. — Contribuição ao estudo de venenos de serpentes

do gênero BothroPs ( B. jararaca, B. alternatus, B. insularis, B. jararacus.su

B. atrox e M. cotiara). São Paulo, 1972. ITese — Instituto de Ciências Biomé-

dicas da Universidade de São Paulo|

Recebido para publicação em 1C.VI.73.

Aceito para publicação em 12'.X.73.

90

cm

2 3

L

5 6

10 11 12 13 14 15

Mem. Inst. ButarUan

.17: 91-97, 1973.

LOCALIZAÇÃO DO FATOll COAGULANTE NO ESPECTRO

ELETROFORÉTICO DO VENENO DE Bothrops Moojeni

MEDARDO SILES VILLARROEL *

REYNALDO SCHW1NDT FURLANETTO **

FLAVIO ZELANTE *

RAYMUNDO ROLIM ROSA***

RESUMO — Os autores, através de

eletroforese sobre membrana de “Cello-

gel” procuraram isolar o fator coagu-

lante do veneno de B. moojeni. Verifi¬

cando ser possível a recuperação deste

fator após a corrida eletroforética, obti¬

veram a recuperação de 33,3% quando

comparado com o veneno “in natura” e

de 80% quando comparada com o ve¬

neno eluido de tiras de “Cellogel”, sem

a corrida eletroforética. Demonstraram

haver fortes indicações de que o fator

coagulante é constituído por duas fra¬

ções.

UNITERM OS — Eletroforese em “Cel¬

logel” do veneno de B. moojeni; isola¬

mento dos fatores coagulantes.

INTRODUÇÃO

Trabalhos anteriores (Siles Villarroel, 1972; Siles Villarroel et al, 1973)

demonstram as vantagens da utilização de membranas de “Cellogel”, para a

corrida eletroforética dos venenos ofídicos. Os autores obtiveram uma melhor

separação e visualização das diversas frações constituintes dos venenos es¬

tudados.

Como os venenos botrópicos possuem, fundamentalmente, duas ações dis¬

tintas, proteolítica e coagulante (Rosenfeld et al 1959), cada fração visualizada

na membrana de “cellogel” representaria pois um ou mais constituintes daque¬

las propriedades farmacológicas. Como a ação coagulante dos venenos botró¬

picos é, indiscutivelmente, o componente responsável pelas mortes rápidas

conseqüentes do acidente ofídico (Furlanetto 1965) procuramos tentar visua¬

lizar esse componente no espectro eletroforético, onde poderia estar repre¬

sentado por uma ou mais frações. Haveria ainda a possibilidade de ser isolada

esta fração ou frações e, conseqüentemente de se obter praticamente em estado

de pureza, ou componente ou componentes responsáveis pela coagulação do

plasma.

Tentativas anteriores foram feitas objetivando este isolamento, tanto dos

venenos botrópicos, quanto dos de outras serpentes cujas peçonhas apresentam

a mesma propriedade farmacológica. Foram utilizados os processos físico-quí¬

micos e de eletroforese em papel , (Holtz & Raudonat, 1956; Banerjee et al,

* Professor Assistente Doutor rln Departamento de Microbiologla e Imunologia do Instituto

de Ciências Biomêdicas da U.S.P.

** Professor Catedrático do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomêdicas da U.S.P.

*** Diretor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan e Professor Assistente Doutor

do Departamento de Microbioloffia e Tmunologia do Instituto de Ciências Biomêdicas

da U.S.P.

Kndereço par.i correspondência:

C.P. 43G5, São Paulo. Brasil.

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SILES VILLARROEL, M., FURLANETTO, R. S., ZEDANTE, F. & ROLIM ROSA, R. —

Localização cio fytor coagulante no espectro eletroforótico cio veneno cie Bothrops moogeni.

Mem. Inst. Butantan, 37: 91-97, 1973.

1960; Klobusitzky & Kõenig, 1935-36; Kõenig, 1937; Grasset & Schwartz, 1955).

Parece no entanto serem os trabalhos cie Henriques et al, 1959 e 1960;

Fichman & Henriques, 1962 aqueles que conseguiram obter melhor purificação

do fator coagulante.

Nahas et al (1964), reconheceram pela primeira vez a existência de, pelo

menos, dois fatores responsáveis pela atividade coagulante dos venenos bo-

trópicos e sugeriram a necessidade de investigações mais profundas.

Baseados nestes aspectos, e considerando cpie, dentre os venenos bo-

trópicos o da espécie B. moojeni é cpie apresenta maior atividade coagulante,

(Rosenfeld et al, 1959; Furíanetto, 1965) nos propuzemos a partir de seu

espectro eletroforético, determinar a exata localização do fator ou dos fatores

responsáveis pela referida atividade e, em seguida, tentar separa-los do com¬

plexo apresentado pelo veneno “in natura”.

MATERIAIS E MÉTODOS

Veneno O f í dic o

O veneno da espécie B. moojeni Hoge, 1965“ utilizado em nosso experi¬

mento, procedente do Instituto Butantan, foi obtido por extração manual de

várias serpentes adultas, cristalizado por secagem a vácuo e mantido a tempe¬

ratura de geladeira (0-4°C). Utilizamos a solução do veneno a 4% em solução

fisiológica (0,85% de NaCl) mantido em frascos hermeticamente fechados e a

temperatura de -25°C (Furíanetto, 1965; Siles Villarroel, 19T2).

Eletroforese em “Ccllogcl”

Aplicamos os mesmos materiais e as mesmas técnicas já descritas em

trabalhos anteriores (Siles Villarroel, 1972; Siles Villarroel et al, 1973).

Determinação da Dose Mínima Coagulante {D..M.C.) ou Unidade Coagulante

( U.C .)

O esquema técnico foi tomado de Furíanetto (1965). A Dose Mínima

Coagulante (D.M.C.) ou Unidade Coagulante (U.C.) é, segundo o autor a

dose de produto coagulante ou de veneno, dissolvido depois de seco, que no

volume de 0,2 ml é capaz de promover a coagulação, entre 8 e 10 minutos e

a 37°C, de 1,0 ml de plasma normal de cavalo, adicionado de 0,2% de oxalato

de potássio (o plasma deve ser colhido no dia do ensaio).

O ensaio para essa determinação foi conduzido em tubos de 14 x 140 mm

imersos em banho-maria a 37°C. Considerava-se o plasma coagulado, quando

se formava bloco de fibrina capaz de escorregar pela parede do tubo, quando

este era inclinado.

Como na eletroforese, trabalhávamos com a concentração de veneno a 4%,

determinávamos a D.M.C. sempre a partir dessa solução.

* A Bothrops moojeni Hoge, 19G5, era, até e sa data, classificada como Bothrops atrox

(Linnaens, 1758).

I, | SciELO

92

Localização tio fator coagulante no espectro eletroforético tio veneno tle Bothrops moocjeni.

Mem. Inst. Butantan t 37: 91-97, 1973.

RESULTADOS

Determinamos, preliminarmente, que 1,0 ml da solução a 4% do veneno

de B. moojeni por nós utilizado, continha 100.000 U.C., portanto, uma U.C.

correspondia a 0,4 pg do veneno seco-. Tais valores mostram que o volume de

0,003 ml a ser aplicado na tira de “cellogel” equivale a 120 pg de veneno seco,

ou seja, a 300 U.C.

Como pretendíamos fazer a eletroforese do veneno em “cellogel” e de¬

pois eluir as várias frações, nos preocupamos em saber quanto era possível

recuperar, em termos de D.M.C., da quantidade de veneno inicialmente co¬

locada nas tiras de “cellogel”, sem corrida eletroforética. Para isso, aplicamos o

volume de 0,003 ml num ponto da tira de “cellogel” e aí deixamos, sem sub¬

meter à corrida eletroforética, por 90 minutos. Após esse tempo eluímos em

0,5 ml de solução fisiológica durante 1 hora em geladeira a 4°C. Foi possível

recuperar 50 pg, equivalente a 125 U. C. de veneno seco.

Após as determinações preliminares acima expostas, realizamos a corrida

eletroforética do veneno em duas tiras de “cellogel”. Uma delas sofreu o pro¬

cesso de coloração e descoloração enquanto a outra foi mantida intacta. A

tira corada tinha por finalidade servir como padrão, a fim de se poder esta¬

belecer a localização das várias frações na tira não corada. Em seguida, com o

auxílio de uma régua, determinamos a área ocupada na tira pelas várias fra¬

ções. Transportamos as mesmas medidas para a tira não corada e numeramos

de 1 a 7 as várias áreas delimitadas, que foram, posteriormente, cortadas iso¬

ladamente. Os fragmentos 1 e 5 eram, cada um, integrados por duas frações —

frações 1 e 2 e 6 e 7, respectivamente — que se apresentaram bastante próximas,

o que tornava difícil separá-las. As frações analizadas, constam da figura 1.

12 } ^ 5 6 7 fragmentos

TS í II f —*—\ i i

12} 4 5 } 7 Ç 9 frações

Fig. 1 — Delimitação das áreas separando os nove componentes do

veneno de 11. moojeni.

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Localização cio fator coagulante no espectro eletroforético cio veneno de Bothrops moogeni.

Mem. Inst. Butantan, 37: 91-97, 1973.

Cada fragmento da tira de “cellogel” foi eluído em 0,5 ml de solução

fisiológica, durante 1 hora. A seguir, de cada eluato, retiramos um volume

de 0,2 ml e adicionamos sobre 1,0 ml de plasma normal oxalatado de cavalo,

conforme descrito em “Materiais e Métodos”. A tabela I apresenta os resul¬

tados obtidos.

TABELA X

Determinação do poder coagulante dos vários fragmentos obtidos por eluição apôs

a eletroforese em “Cellogel” (veneno de B. moojeni )

Fragmento

eluído

Volume de plasma

oxalatado (ml)

Volume de material

eluído (ml)

Resultado

1

1,0

0,2

Não coagulou

2

1,0

02

Não coagulou

3

1,0

02

Não coagulou

4

1,0

02

Início de coagulação

5

1,0

02

Coagulação imediata

6

1,0

02

Início de coagulação

7

1,0

02

Não coagulou

Verifica-se pela tabela I que o fragmento cinco, integrado pelas frações

6 e 7, é o que contem maior concentração do fator coagulante.

Como nosso trabalho objetivava também determinar a quantidade do fator

coagulante que poderia ser recuperada, realizamos diluições seriadas do ma¬

terial eluído do fragmento 5. Dessa forma foram realizadas várias diluições

do eluído desse fragmento. A tabela II apresenta os resultados obtidos.

TABELA II

Determinação da dose mínima coagulante do fragmento n. 5

Diluição do eluato do

fragmento n. 5

Volume de plasma

oxalatado (ml)

Volume dos

eluato (ml)

Tempo de coagu¬

lação

1/5

1,0

0,2

1 minuto

1/10

1,0

0J2

1 minuto

1/20

1,0

0,2

2 minutos

1/40

1,0

0,2

10 minutos

1/80

1,0

0,2

Não coagulou

Verifica-se que a atividade coagulante representada em

lantes (U.C.) é demonstrável até na diluição 1/40.

unidades coagu-

uiuuise uas uioeias i e ii mosrra que a rraça-o coaguiame esia locanza-

da quase que totalmente no eluído do fragmento n.° 5 da tira de “cellogel”,

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SciELO

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Localização do fator coagulante no espectro eletroforético do veneno de Bothrops moogcni.

Mem. Inst. Butantan, 37: 91-97 1973.

que por sua vez era uma mistura das frações 6 e 7 do espectro eletroforético.

Como foram usados na corrida eletroforética, 0,003 ml da solução de veneno

a 4 %, podemos concluir que recuperamos 80% do fator coagulante, quando com¬

parado com a recuperação obtida da eluição da tira de “cellogel” não submetida

à eletroforese.

DISCUSSÃO

Com a utilização da eletroforese sobre tiras de “cellogel” pudemos loca¬

lizar, no espectro eletroforético do veneno de B. moojeni, as frações responsá¬

veis pela coagulação do plasma oxalatado. Estas seriam as frações seis e sete,

localizadas no fragmento cinco da tira de “cellogel”.

A observação da tabela I demonstra que, a ação de 0,2 ml do eluato cor¬

respondente ao fragmento cinco, agindo sobre 1,0 ml de plasma oxalatado,

promovia a sua coagulação imediata, ao passo que, os eluatos referentes aos

fragmentos quatro e seis, induziram apenas uma coagulação incipiente do

plasma, em 10 minutos. Os demais eluatos não promoveram a coagulação do

plasma. A ocorrência da coagulação incipiente, foi por nós considerada como

sendo conseqüente de uma possível contaminação dos fragmentos quatro e

seis, por uma pequena parte do espectro dos fatores localizados no fragmento

cinco que, indiscutivelmente, representam o fator coagulante do veneno em

questão. Baseados nestes resultados propusemo-nos determinar a atividade coa¬

gulante contida no fragmento cinco o que, em última análise, significa a de¬

terminação do número de unidades coagulantes (U.C.), ou Dose Mínima Coa¬

gulante (D.M.C.), presentes nessa fração.

Como através dos nossos testes preliminares, pudemos determinar que, das

300 U.C. iniciais colocadas nas tiras de “cellogel”, são recuperáveis, por eluição

simples sem corrida eletroforética. 125 U.C., nos foi possível estabelecer uma

relação com os resultados obtidos após a eletroforese. Os dados da tabela II nos

levaram a calcular que a eluição do fragmento cinco, resulta em 100 U.C. Como

este resultado equivale a uma redução de 20% sobre o total que seria recu¬

perável sem eletroforese, podemos interpretar tal aspecto, como sendo, possi¬

velmente, conseqüente das perdas representadas pela contaminação das áreas

quatro e seis, pelos espectros dos fatores coagulante, contidos na área cinco.

Acreditamos também na hipótese de que, a eletroforese possa ter desnaturado

parte do fator coagulante. Parece-nos ser esta, a primeira vez que se demons¬

tra a localização, no espectro eletroforético do veneno de B. moojeni, das fra¬

ções coagulantes. Tal fração contém duas ondulações, conforme demonstra o

eletroferograma (fig. 1). Talvez essas duas frações, que não conseguimos

separai - , no presente trabalho, representem as frações descritas por Nahas et

al (1964). Esse aspecto, no entanto, demanda outras investigações.

CONCLUSÕES

1. O fator coagulante do veneno da espécie Bothrops moojeni é prova¬

velmente constituído por duas frações, correspondentes às de números seis e

sete do espectro eletroforético.

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SILES VILLiARROEL, M., FURLANETTO, R. S., ZKLANTF, F. & ItOLIM ROSA, R. —

Localização do fator coagulante no espectro eletroforético do veneno de Bothrops mooyeni.

Mem. Inst. Butantan, ■»’7: 91-97 1973.

2. Após a corrida eletroforética cm “cellogel” de uma quantidade de

veneno de B. moojeni, equivalente a 300 U.C., foi possível recuperar ICO U.C.

que representam 33,3% de sua capacidade coagulante inicial e a 80% de recu-

peração quando comparada com a capacidade coagulante do eluato da tira de

‘'cellogel” não submetida à corrida eletroforética.

SUMMARY — “Cellogel” membrane

electrophoresis was used for isolation

of the coagulation factor of the B.

■moojeni snake venom. The coagulation

factor. after electrophoresis, was reeo-

vered in 33,3% when compared with the

venom “in natura“, and in 80% when

compared with the venom from the

“Cellogel” strips. It seems íhat the coa"

gulating factor consists of two frac-

tions.

UNITERMS — Electrophoretic study

on "Cellogel” of B. moojeni venom; iso¬

lation of coagulation factors.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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localização do fator coagulante no espectro eletroíorético do veneno de Bothrops moogeni.

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B. atrox p. B. cotiara). São Paulo, 1972, Tese — Instituto de Ciências Biomé-

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15. SILES VILLARROEL, M.; ROLIM ROSA, R.; FURLANETTO ,R. S. & ZE-

LANTE, F. — Eletroforese sobre “Cellogel” dos venenos de B. jararaca, .5.

alternatus, B. insularis, B. jararacussu, M. moojeni e B. cotiara. Mem. Inst.

Butantan, 37, 1973.

Recebido para publicação em 1G.VI.72

Aceito para publicação em 12.X.73

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Mem. Inst. Butantan

37: 99-107, 1973

CONTRIBUIÇÃO AO ESTUDO DA DETERMINAÇÃO DA DL50 DE

VENENOS BOTRÓPICOS INOCULADOS POR VIA VENOSA EM

CAMUNDONGOS — Mus musculus Linnaeus, 1758

I. FENÔMENOS QUE OCORREM NA TENTATIVA DE DETERMI¬

NAÇÃO DA DL50.

REYNALDO SCHWINDT FURLANETTO *

RAYMUNDO ROLJM ROSA**

MED ARDO SILES VILLARROEL ***

YARA QUEIROGA. SIRACUSA****

brevivem a morte imediata com doses

mais altas de veneno, poderão ou não

morrer tardiamente. Acreditam, pois,

que as mortes imediatas sejam de¬

correntes da coagulação intravascular

que pode ocorrer ao acaso devido ao

fator coagulante de tais venenos e que

as mortes tardias revelam o verdadeiro

poder tóxico.

RESUMO — Os autores demonstraram brevivem a

pela inoculação intravenosa de doses mais altas de veneno, poderão ou não

crescentes de veneno botrópico, em ca- morrer tardiamente. Acreditam, pois,

mundongos, que mortes conseqiientes que as mortes imediatas sejam de-

não ocorrem em proporção com a pro- correntes da coagulação intravascular

gressão da dose, tendo a tendência de que pode ocorrer ao acaso devido ao

aparecerem dentro dos 10 primeiros mi- fator coagulante de tais venenos e que

nutos após a inoculação (mortes ime- as mortes tardias revelam o verdadeiro

diatas), sendo impossível a reproduti- poder tóxico.

bilidade da DL50. Os animais que

sobrevivem a morte imediata com doses UNITERMOS — Venenos botrópicos —

relativamente baixas de veneno não so- Fator coagulante de venenos botrópicos

frem morte tardia. Os animais que so- — DL50 de venenos botrópicos.

INTRODUÇÃO

Desde 1907, fundamentado nos trabalhos de Vital Brazil, vem o Instituto

Butantan aferindo a potência dos soros antipeçonhentos através de misturas

“in vitro” de dose fixa de soro (1 ml) com quantidades variáveis do veneno

seco, misturas essas inoculadas, após tempo apropriado de contato, em pombos,

por via venosa. Na aferição desses soros deve-se utilizar veneno seco “padroni¬

zado” conforme preceitua a Farmacopeia Brasileira (1959), isto é, veneno cuja

Dose Mínima Mortal (D.M.M.) para pombo de 280 a 320 g seja no máximo

de 1,5 |tg para veneno de serpentes do gênero Crotalus Linnaeus , 1758 e

de 40 |ig no máximo, para veneno de serpentes do gênero Bothrops Wagler,

1824.

* Ex-chefe da Secção de Imunoterapia do Instituto Butantan. Atual Professor Catedrático

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.F.

* Diretor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan. Professor Assistente Doutor

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.P.

*** Ex-Assistente do Setor de Soros Anti-peçonhentos do Instituto Butantan. Professor

Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomédicas da ÜSP.

**** Chefe da Secção de Soros do Instituto Butantan.

Endereço para correspondência:

C.P. 4365, São Paulo, Brasil.

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Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa cm camundongos — Mus mu&culus Linnaeus, 1758. 1 — Fenômenos que ocorrem na

tentativa de determinação da DL50.

Mcm. Inst. Ilutunlan, .n : UU-107, 1!)7.1.

A padronização cm pombo, por esse processo, tem sofrido graves críticas,

baseadas fundamentalmente na não reprodutibilidade dos resultados alcan¬

çados. O próprio Vital Brazil, em colaboração com Rangel Pestana (1909), já

antevia argumentos contrários a tal tipo de padronização.

Tal processo, embora ainda utilizado oficialmente, contraria frontalmente

os ditames da técnica moderna, epie busca a padronização de produtos bioló¬

gicos através de provas populacionais, do tipo da DL50, isto é, a prova que

determina a dose de um produto que seria capaz de matar 50% de um grupo

de animais inoculados.

Esse procedimento é obviamente superior àquele, que emprega freqüen-

temente um ou dois animais por prova, deixando, assim, de levar em conta

as variações individuais.

Nesse sentido, outras objeções podem ser alinhadas contra o uso do

pombo como animal de prova, a maior delas sendo quiçá a raridade com que

ele é citado para tal fim, na literatura. Realmente, trata-se de animal de

criação onerosa, de nutrição pouco estudada, não sendo usual sua criação em

linhagens geneticamente homogêneas. Sobre sua patologia, o exame perfun-

ctório de obras como a de Reis e Nóbrega (1936) é suficiente para de¬

monstrar sua complexidade.

O camundongo, em contraposição, tem sido usado internacionalmente

(Grasset, 1949, África do Sul; Tanaka, 1941, Japão; National Inst. of Health,

1953, U.S.A.; Schlossberger et al, 1936, Alemanha; Hazra et ai, 1945/46, índia;

Lin, 1962, China) na padronização de venenos e antivenenos respectivos. O

camundongo oferece, de fato, vantagens para tal fim: cria-se fácil e economica¬

mente no laboratório e, sendo muito prolífero, dele podem ser obtidas rapida¬

mente linhagens geneticamente homogenizadas por seleção através de acasa¬

lamentos consangüíneos; além disso, tanto sua patologia como suas exigências

nutricionais estão muito melhor estudadas que as do pombo.

Entre nós Slotta e Syszka (1937) fizeram tentativa de adoção do camun¬

dongo e Schõttler (1951b) já advogou suas vantagens, tendo contribuição ex¬

perimental a respeito.

Neste trabalho retomamos, pois, o estudo do camundongo para padroni¬

zação de venenos ofídicos, escolhendo de início, intencionalmente, os botró¬

picos, por serem os que têm oferecido maior soma de problemas.

Ao abordar a metodologia para padronização de produtos dessa natureza

vem logo à mente a via de inoculação e, naturalmente, a contribuição de

Schõttler (1951a-1951b-1951c-1952-1954-1955-1955/56 e 1958). Esse autor, es¬

tudando venenos botrópicos, explorou as vias venosa e subcutânea, en¬

contrando em ambas grandes dificuldades, oriundas da irregularidade dos

resultados alcançados. Schõttler atribuiu tais irregularidades a grande número

de fatores que agiriam sobre a resistência individual dos camundongos: sexo,

peso, pureza de linhagem, idade dos animais e mesmo a de seus progenitores

no ato do acasalamento, além de várias condições externas, tais como — tem¬

peratura, método de contenção, estação do ano, espaço disponível, volume in¬

jetado o muitas outras. Esse autor tentou em vão o controle desses fatores.

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FUHLiANETTO, R. S. ; ROL1M HCSA, K. ; SILKS VILEAIUIOEI-., M. & SIRACUSA, Y. Q. —

Contribuição ao estudo da determlnaçAo da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musculus Linnaeus, 1758. I — Fenômenos que ocorrem na

tentativa de determinação da DL50.

Mera. Inst. Butantan, 31: 99-307. 1973.

em particular no caso da via venosa. Apelou finalmente para delineamentos

estatísticos cpie estimou fossem capazes cie lançar no erro residual do método

aquelas variações individuais, dando ênfase especial aos delineamentos basea¬

dos em grandes números de animais por lote.

Desencorajado pelos resultados colhidos, mormente com os obtidos com a

via venosa, deu preferência à via sub-cutânea, apesar das variações dos resul¬

tados permanecerem oscilando entre valores extremos muito distantes.

Analisando a contribuição de Schõttler, colhemos a impressão de que

algum aspecto fundamental teria passado despercebido uma vez cpie frustraram

todas as tentativas desse autor de controlar causas de variação de resistência,

intrínsecas ao animal ou adstritas ao meio. Ocorreu-nos, então, o estudo de

causas dependentes do próprio veneno botrópico. Para essa concepção contri¬

buiu fortemente o conhecimento de que, para outros venenos, ensaios dessa

natureza levam a resultados satisfatoriamente regulares.

MATERIAL E MÉTODOS

Venenos utilizados:

Trabalhamos com venenos de serpentes do gênero Bothrops das seguintes

espécies: B. jararaca (Wied, 1824), B. moojeni (Hoge, 1965), B. pradoi

(Hoge, 1947), B. insidaris (Amaral, 1921), B. neuwiedi Wagler in Spix, 1824,

B. jonsecai Hoge et Belluomini, 1959 e B. jararacussu Lacerda, 1884.

Todos os venenos foram colhidos no serviço de rotina do Instituto

Butantan. As serpentes provenientes, em geral, do Estado de São Paulo ou de

Estados próximos são identificadas e mantidas em gaiolas isoladas e sofriam

uma extração de venenos cada 15 dias. O produto obtido era resultante de

uma mistura de venenos de várias serpentes de idade e procedência diferen¬

tes, porém sempre de animais da mesma espécie; depois de centrifugado era

dessecado a vácuo à temperatura ambiente; após a cristalização, era

pesado, colocado em frascos hermeticamente fechados e estocado em geladeira

+ 4 o C. Segundo Slotta e Syszka (1937) o veneno dessecado nessas condições

mantém sua atividade por longo tempo, o que é também confirmado por

Schõttler (1951c-1952 e 1955).

Quantidades de veneno seco da ordem de 100 a 400 |Jtg/ml eram dissol¬

vidas em solução fisiológica e mantidas como soluções básicas, em “flaco-

netes” hermeticamente fechados, cm congelador a -25° C (Furlanetto, 1965).

Para cada ensaio era descongelado um frasco a fim de preparar as doses a

serem utilizadas, desprezando-se os eventuais excedentes. O cálculo da razão

entre as doses era feito segundo a fórmula R y x onde “n” indica o

número de doses a serem utilizadas e “x” a razão entre as doses inicial e final.

Quando necessário, a DL50 era calculada pelo método de Reed & Miiench

(1938).

101

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

FURLANETTO, 11. S. ; ROLIM ROSA, 71.; SILES VILLARROEL, M. & SIRACUSA, Y. Q. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrõpicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus muscnlus Linnaeus, 1758. I — Fenômenos que ocorrem na

tentativa de determinação da DL50.

Mem. Inst. BUtantan, 37; 99-107, 1973.

Animais :

Foram utilizados camundongos de 18 a 22 g, sem distinção de sexo,

todos provenientes do Biotério Geral do Instituto Butantan; as inoculações

eram feitas por via venosa.

RESULTADOS

TABELA I

Ensaios preliminares para tentativa de determinação de DLSO de venenos de B. moo-

jeni *, de coleta recente. Foram feitos quatro ensaios em dias diferentes com o mesmo

veneno em solução fisiológica de forma a conter em 0,5 ml a dose desejada.

Determinação feita por via venosa em camundongos de 18 a 22 g.

1" Ensaio

2 9 Ensaio

Dose de

neno em

ve-

Tempo de

lOmin.

observação

24h

48h

Tempo de

lOmin.

observação

24h

48h

4,9

1/6

0/6

1/6

5,5

3/6

0/6

6,2

4/6

2/6

6,9

3/6

7,7

4/6

2/6

8,7

4/6

5/6

9,8

3/6

1/6

3 9

Ensaio

4 9 Ensaio

Dose de

ve-

Tempo

de observação

Dose de

ve- Tempo

de observação

neno em

JX&

lOmin.

24h

48h

neno em

jtg lOmin,

24h

48h

5,5

2/6

5,0

1/6

6,9

3/6

6,5

2/6

8,6

2/6

8,5

2/6

10,8

5/6

10,5

3/6

3/ 6

13,2

3/6

14,0

6/6

—

16,2

4/6

5/6

18,0

3/6

23,0

3/6

30,0

3/6

5/6

38,5

6/6

—

50,0

6/6

—

Legenda:

O denominador expressa o número total de animais inoculados e o numerador o

número de animais mortos naquela dose.

Observação válida para as demais tabelas.

• A Bothrops nioojeni Hoge, 1965, era anteriormente classificada como Bothrops atrox

(Linnaeus, 1758).

102

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

FURLANETTO, lí. S. ; ROLIM ROSA, R.; SILES VILLARROEL, M. & SIRACUSA, Y. Q. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrôpicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musculus Linnaeus, 1758. I — Fenômenos que ocorrem na

tentativa de determinação da DL50.

Mem. List. Butantan, .37: 99-107, 1973.

TABELA II

Ensaio preliminar

para tentativa de determinação

de

DL50 cie veneno de B. jararaca de coleta recente.

Foi

realizado somente

um ensaio.

O veneno foi diluido

em

solução fisiológica de forma

a conter

■ em 0,5 ml a

dose desejada. Determinação

feita por

via venosa

em

camundongos de

18 a 22

a-

Doso de ve-

Tempo de observação

neno em jtg'

lOmin.

60min.

24h

48h

19,0

1/6

21,3

0/6

1/6

23,9

3/6

4/6

26,8

1/6

2/6

6/6

—

30,0

0/6

3/6

4/6

33,8

1/6

3/6

38,0

1/6

2/6

5/6

TABELA

III

Ensaio preliminar

1 para tentativa de determinação

de

DL50 de veneno

de B. pradoi de coleta recente.

Foi

realizado somente

t um ensaio.

O veneno

foi diluido

em

solução fisiológica de forma

a conter em 0,5 ml a

dose desejada. Determinação

feita por

via venosa

em

camundongos de

18 a 22

a-

Dose de ve-

Tempo de observação

neno em ng

lOmin.

60min.

24h

48h

50,0

3/6

56,0

5/6

63,0

2/6

3/6

4/6

70,5

6/6

—

79,0

4/6

5/6

6/6

89,0

4/6

5/6

100,0

3/6

5/6

6/6

—

DISCUSSÃO

As três experiências foram escolhidas entre várias constantes de nossos

registros experimentais, por retratarem a fenomenologia típica observada

quando se aplicam protocolos dessa natureza para deteminações de DL50

de venenos botrópicos em camundongos, por via vènosa.

Na realidade, trabalhamos também, com técnica semelhante, com venenos

de B. insularis, B. jararacussu, B. fonsecai e B. neuwiedi, todas elas apresen¬

tando resultados do mesmo tipo.

103

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus niuacillus Linnaeus, 1758. I — Fenômenos «iue ocorrem na

tentativa de determinação da DL50.

Me vi. Inat. Butcmtarij 37: 99-107, 19 73.

Como não nos propuzemos a um trabalho de casuística, e sim investigar

a essência dos resultados contraditórios obtidos, cremos não ter grande in¬

teresse apresentar os demais protocolos com as quatro outras espécies de

Bothrops mencionadas. Tais protocolos mostram sempre as mesmas caracte¬

rísticas, que podem ser assim resumidas: a inoculação endovenosa, em ca¬

mundongo, de doses crescentes de venenos de ofídios do gênero Bothrops, na

tentativa de se determinar a DL50, não dá resultados homogêneos segundo os

quais os números de animais mortos estejam em razoável progressão com o

aumento da dose inoculada.

Realmente, ocorrem mortes imediatas, geralmente dentro de 10 minutos,

podendo vitimar até a totalidade dos animais com uma dose dada, mas sem

guardar correlação evidente com as doses visinhas. Nas menores doses de

veneno, os animais que escapam a morte imediata não apresentam intoxicação

tardia, isto é, o número de mortes apresentado nos primeiros minutos não

sofre alteração quando se prolonga a observação para 24-48 horas. Os animais

não vitimados por morte imediata com as doses maiores de veneno, podem

sobreviver cu não 24 horas, o que sugere a possibilidade de morte por intoxi¬

cação tardia. O valor absoluto de doses menores ou maiores capazes de causar

aqueles efeitos varia com a espécie de serpente produtora do veneno.

Os resultados apresentados nas Tabelas I, II e III mostram a dificuldade

de se avaliar com precisão a toxicidade dos venenos botrópicos; poder-se-ia

imaginar que, abandonando-se o sistema prático e econômico por nós tentado,

onde se utilizam poucos animais em cada dose, poder-se-ia obter resultado

mais satisfatório, isto é, que aumentando-se substancialmente o número de

animais em prova a resposta poderia conduzir a melhores resultados, pois a

variação desta, poderia ser imputada a variações individuais de sensibilidade;

devemos, no entanto, esclarecer que a imprecisão na determinação da DL50

não constitue assunto novo, tendo sido observada anteriormente por Schüttler

(1951a - 1951b - 1951c - 1952 - 1954 - 1955 - 1955/56 e 1958) que tentou

contorná-la aumentando o número de animais em experimentação, sem que esse

recurso, no entanto, fornecesse a precisão desejada. Esse autor fez investigações

amplas sobre toxicidade de venenos de serpentes que ocorrem no Brasil.

Utilizou a via sub-cutânea em camundongos e determinou a dose letal média

por grama de peso, através de avaliação planimétrica, mediante curva construi-

da com números acumulados de mortos e sobreviventes. Por ter preferido a via

sub-cutânea, obteve valores de toxicidade muito baixos (grandes doses de

veneno por grama de peso animal); além disso, obteve variação muito ampla

dos valores encontrados, o que atribuiu exclusivamente a oscilações dc resis¬

tência individual; seus achados experimentais levaram-no a afirmar (1951a)

que, com certos venenos, um animal pode tolerar, por grama de peso corporal,

até 9,5 vezes mais veneno que outro animal da mesma espécie.

Em 1954, o mesmo autor publicou, sobre o assunto, trabalho que carac¬

teriza bem as dificuldades encontradas; procurou resolvê-las cercando-se dos

maiores cuidados e controlando numerosos fatores que poderiam quiçá ex-

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

FUKLANETTO, II. S. ; ROLIM HOSA, U.; SIDES VIEÊAUHOEE, M. & SIUACUSA, Y. Q. —

Contribuição ao estudo da determinação da BE5o de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus m-usculus Linnaeus, 1758. I — Fenômenos que ocorrem na

tentativa de determinação da DE50.

J/em. Inst. Butantun, SI: 99-107, 1973.

plicar as variações de sensibilidade animal, fator ao qual atribuía valor ex¬

clusivo na gênese dos resultados que obtinha.

Parece, pois, comprovado que mesmo que se eleve o número de animais

em cada dose, o que será pouco prático para os trabalhos usuais, a avaliação

da toxicidade dos venenos botrópicos por via venosa no camundongo continua

ainda problema complexo; as anomalias desconcertantes que se obtêm entoe

dose e resposta tem sido até agora atribuídas exclusivamente a variações de

resistência individual por numerosos fatores, alguns quase imponderáveis.

No entanto, analisando os resultados das Tabelas I, II e III, que nada

mais são do que uma demonstração numérica de fenômeno já anteriormente

descrito por outros autores, chamou-nos a atenção um fato ainda não descrito;

quando se trabalha com doses não muito elevadas de um dado veneno botró-

pico, por via venosa no camundongo, o número de animais mortos em 10

minutos a 60 minutos não varia mais com o prolongamento do tempo de ob¬

servação; não se pode aparentemente detectar intoxicação tardia com essas

doses do veneno; por outro lado, parece que os animais escapos à morte

imediata com doses relativamente maiores de veneno, podem vir a morrer

ou não, mais tardiamente. Doses maiores ainda, provocam a morte imediata de

todos os animais. Tal observação nos leva a formular a seguinte hipótese: é

de conhecimento geral que os venenos botrópicos possuem enérgico fator (ou

fatores) coagulante; tal princípio encontra-se em dose variável segundo as

diferentes espécies de ofídios produtores de veneno além de variar também

em relação a amostras diferentes coletadas de indivíduos da mesma espécie.

Aquele fator, sabe-se hoje, atua diretamente sobre o fibrinogênio transfor-

mando-o em fibrina. Ora, na inoculação endovenosa do veneno, poderia haver a

formação de coágulos intravasculares; segundo o tamanho do coágulo for¬

mado (intensidade da ação coagulante) e, sobretudo, segundo a localização

dos coágulos que necessariamente não precisariam ser de grande volume,

poderia haver ou não morte do animal sem que a variação da resistência

individual assumisse papel preponderante nesse fato. Se assim fosse, as doses

menores de veneno poderiam provocar as mortes imediatas segundo distri¬

buição ao acaso, e os animais sobreviventes, não tendo chegado a receber

dose tóxica, não iriam alterar o número de mortes com o prolongamento da

observação. Por outro lado, os animais que, também por obra do acaso,

sobrevivessem às doses relativamente maiores de veneno, poderiam agora, em

função da dose e da resistência individual, vir a morrer ou não, através de

intoxicação real de manifestação mais tardia. Quando a dose de veneno fosse

mais elevada ainda, a ação coagulante seria mais intensa e, provocando coagu¬

lação intravascular maciça, provocaria sistematicamente a morte de todos os

animais inoculados, em tempo bastante curto, em geral dentro dos primeiros

dez minutos. Cada amostra de veneno poderia conter quantidade maior ou

menor desse fator coagulante; por essa razão, os níveis capazes de provocar

mortes imediatas, deveriam variar em cada veneno ensaiado.

105

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

FURLANETTO, R. S. ; ROLIM ROSA, R. ; SILES V1LLARROEL, M. & SIRACUSA, Y. Q. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrôpicos inoculados por via

venosa eml camundongos — Mus musculus Linnaeus, 1758. 1 — Fenômenos que ocorrem na

tentativa de determinação da DL/50.

JJ Tem. Inst. Butantan, 37: 90-107, 1973.

CONCLUSÕES

1. Quando vários grupos de camundongos são inoculados por via venosa

com doses crescentes de veneno botrópico, as mortes consequentes não guar¬

dam proporcionalidade com a progressão das doses.

2. As mortes observadas tendem a ocorrer dentro dos dez primeiros

minutos após a inoculação (mortes imediatas).

3. Os animais que sobrevivem a morte imediata com doses relativa¬

mente baixas de veneno não mais vêm a sofrer morte tardia.

4. Os animais que sobrevivem a morte imediata com doses médias de

veneno poderão ou não vir a morrer tardiámente.

5. A ação coagulante dos venenos botrópicos poderá ser a responsável

pela ocorrência das mortes imediatas após a inoculação endovenosa, impedindo

uma seqüência coerente dc resultados que impossibilita o cálculo da DL50.

SUMMARY — The authors demonstra-

ted, by intravenous inoculation of in-

crea.sing doses of Bothrops venom in

mice, that the consequent deaths are

not proportional to the progression of

the doses, and tend to occur in the

first 10 minutes after inoculation

(immcdiate deaths), preventing the re-

producibility of the LD50. The animais

that survive immcdiate death With high

doses of venom may die later or not.

The authors consider the immcdiate

deaths to be a consequence of the in¬

travascular coagulation, which can

occur at random due to the coagulant

factor of such venoms, and that the

late deaths reveal the real toxic power.

UNITERMS — Bothrops venoms —

Coagulation factor of Bothrops venoms

— LD50 of Bothrops venoms.

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106

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

FURLANETTO. n. S. ; ROL1M ROSA, R.; SILES VILLARROEL, M. & SIRACUSA, Y. Q, —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus muscvhis Linnaeus, 1758. I — Fenômenos que ocorrem na

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Recebido para publicação em 15.VI. 73.

Aceito para publicação cm 15.VIII.73

107

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SciELO

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15

Mem. Inst. Butantan

57: 109-122, 1973

CONTRIBUIÇÃO AO ESTUDO DA DETERMINAÇÃO DA DL50 DE

VENENOS BOTRÓPICOS INOCULADOS POR VIA VENOSA

EM CAMUNDONGOS — Mus musculus — Linnaeus, 175S

II. POSSIBILIDADE DE DETERMINAÇÃO DA DL50 ATRAVÉS DA

INOCULAÇÃO PRÉVIA DE DOSES INFRA-LETAIS DO PRÓPRIO

VENENO. "

REYNALDO SCHWINDT FURLANETTO *

RAYMUNDO ROLIM ROSA**

MEDARDO SILES VILLARROEL ***

FLÃVIO ZELANTE****

RESUMO — Os autores demonstraram

que a inoculação de determinadas doses

infra-letais (D.P.) de veneno botrópico

por via venosa em camundongos leva

a uma incoagulabilidadc sangüinea cujo

ápice é atingido duas horas após. Os

animais assim tratados suportam ele¬

vadas doses do mesmo veneno sem que

ocorram fenômenos de mortes imedia¬

tas, atribuíveis a coagulação intravas¬

cular, permitindo a avaliação da DL50

do veneno, com satisfatória reproduti-

bilidade. A mesma tecnicologia permitiu

caracterizar outros dois mecanismos de

morte pela ação de elevadas doses do

veneno: “choque proteotóxico” ou ana-

filactóide e, intoxicação tardia indepen¬

dentemente dos dois primeiros meca¬

nismos.

UNITERMOS ■ — Veneno botrópico; de¬

terminação da DL50 do veneno botró¬

pico; incoagulabilidadc sangüinea pelo

veneno botrc-pico; mecanismos de mor¬

te pelo envenenamento botrópico.

INTRODUÇÃO

Em trabalho anterior (Furlanetto et al, 1973), confirmaram a impossibilida¬

de da utilização dc camundongos para a determinação da DL50 de venenos

botrópicos e formularam a hipótese de que as dificuldades inerentes encon¬

tradas estivessem ligadas a fatores inherentes ao próprio veneno e não fossem

devidas a diferenças de resistência individual do animal conforme acredita

Schottler (1951, 1954 e 1955). Comentando seus resultados destacaram com

* Kx-Chefo da Secç.io de Imunoterapia do Instituto Butantan. Atual Professor Catedrático

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.P.

** I*irotor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan. Professor Assistente Doutor

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.P.

*** FiX-Assistente do Setor de Soros Antipeç mhentos do Instituto Butantan. Professor

Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomédicas da U.S.P.

**** Professor Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do

Instituto de Ciências Biomédicas da U.S.P.

Kndereço para correspondência:

C.P. 4305, São Paulo, Brasil

109

cm

2 3

Z

5 6

11 12 13 14 15

FUUT.AXKTTO, R. S., ROÍAM ROSA, U., SILKS VIIM.ARROKL, M. & ZRLANTR, F. —

Contribuição ao estudo da determlnaçião da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musrulus Linnaeus, 1758. II — Possibilidade de determinação

da Di.il 0 através da inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Man. Inst. Butantan, .17: 100-122, 1973.

grande ênfase um fenômeno que passara até então praticamente desapercebido

chamando a atenção para a ocorrência de mortes imediatas, geralmente dentro

de 10 minutos, quando o veneno c injetado por via venosa, podendo vitimar

até a totalidade dos animais com uma dada dose mas sem guardar evidente

correlação com as doses visinhas. Tal observação levou-os a formular a hipó¬

tese de que tais mortes imediatas fossem devidas ao poder coagulante dos

venenos botrópicos e conseqüentes a formação de coágulos intravasculares; se¬

gundo o tamanho do coágulo formado, e, sobretudo a localização desses

coágulos que necessariamente não precisariam ser de grande volume, poderia

haver ou não a morte do animal, sem que a variação da resistência individual

assumisse papel preponderante nesse fato.

Fontana (1781) parece ter sido o primeiro autor a classificar o efeito de

vários venenos sobre a coagulação sangüínea, tendo distinguido sob esse as¬

pecto dois grupos, um, de venenos coagulantes e outro, de venenos anticoagu-

lanles, conforme os gêneros ou espécies de serpentes de que provinham.

Após esses trabalhos uma série muito grande de observações contraditórias

apaiecem e Noc (1904), propos-se a esclarecer porque alguns autores clas¬

sificavam certos venenos como coagulantes, ao passo que outros classificavam

os mesmos venenos como anticoagulantes.

No Brasil, os primeiros pesquisadores que se ocuparam com o assunto

(Lacerda Filho 1877; Brazil e Pestana 1909), ou então, autores estrangeiros

trabalhando com os venenos de serpentes brasileiras, como Samartino (1917),

consideraram os venenos de Bothrops (na época-classificadas como Lacliesis)

como anticoagulantes “in vivo”.

Sem dúvida, foram os trabalhos de Houssay & Sordelli (1917/18) e de

Houssay, Sordelli & Negrete (1917/1918) que vieram lançar alguma luz sobre

o mecanismo da coagulação sangüínea “in vivo” e “in vitro” com venenos botró¬

picos. Tendo esses autores estudado a ação do veneno de numerosas espécies,

“in vitro”, sobre plasma oxalatado, classificaram os venenos em coagulantes e

incoagulantes segundo aquele teste; chamam ainda a atenção para que,

quando se falar em ação coagulante ou incoagulante de um veneno, deve-se

sempre declarar bem distintamente se a experiência é feita “in vivo” ou “in

vitro”, pois que, neste último caso, “atuariam os venenos por sua ação própria

sobre o sangue”, ao passo que no primeiro caso, “deve-se acrescentar sobre

essa ação, os processos reacionais do organismo vivo”. Referem ainda que:

Os venenos que são coagulantes “in vitro” produzem “in vivo” efeitos diferen¬

tes segundo a dose e a via de administração. Se a dose é alta e a absorção é

rápida (por exemplo: injeção venosa) produz-se a coagulação intravascular do

sangue em massa ou pardahnente, isto é, a mesma ação que “in vitro”. Porém

quando a dose não é tão alta, ou que é mais importante, a absorção mais lenta

(injeção sub-cutãnea), observa-se que após 2 1/2 a 10 minutos, o sangue se

torna incoagulável e permanece definitivamente líquido.

Houssay & Sordelli, loc. cit. demonstraram ainda que a capacidade coa¬

gulante “in vitro” dos venenos botrópicos, não atua por intermédio de uma

ativação da trombina, sobre a qual são inativos, mas sim por uma ação direta

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

FURLANETTO, lí. S., ROLIM ROSA, R., SILES VILRARROEL, M. & ZEEANTE, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da DE50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus mnsrulus Linnaeus, 1758. II — Possibilidade de determinação

da DL.50 através da inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 109-122 1973.

sobre o fibrinogênio; demonstraram ainda que “in vitro”, atuando sobre o

fibrinogênio, os venenos botrópicos têm uma ação variável segundo a dose,

isto é, transformando-o em fibrina nas doses coagulantes, e destruindo-o pela

capacidade proteolítica em doses altas, exatamente aquelas que apresentam

atividade incoagulante “in vitro”.

Ainda Houssay & Sordelli (1920) trouxeram valioso subsídio ao esclareci¬

mento da atividade da fração coagulante dos venenos botrópicos “in vivo”, ao

estabelecerem com maior precisão, a seqüência de efeitos que se pode‘obter

no animal, na dependência da dose e da via de administração.

Arthus (1912) havia já mostrado que coelhos inoculados com venenos

botrópicos, por via sub-cutânea, suportavam horas depois, a inoculação endo¬

venosa de dose que provocariam a trombose maciça em animais normais.

Para Houssay & Sordelli loc. cit. a absorção lenta do veneno inoculado por via

sub-cutânea, provocaria a diminuição ou o desaparecimento do fibrinogênio

sangüíneo.

Vellard (1938), trabalhando com o veneno de Bothrops atrox da Vene¬

zuela, confirma os achados de Houssay et al (locs. cits.); chama a atenção

para o fato de que para o cão e o coelho o veneno por via venosa produz fase

extremamente curta de elevação da coagulabilidade sangüínea exatamente no

instante da injeção; logo após, o sangue torna-se incoagulável pelo desapare¬

cimento do fibrinogênio (no cão pudemos pelo estudo dos dados do autor cal¬

cular em cerca de 0,18 mg/Kg a dose produtora de tal efeito).

Rosenfeld et al (1958) titularam o fibrinogênio no envenenamento botró-

pico experimental em cães e também, pela primeira vez na literatura, em casos

humanos de picadas acidentais; em todos os casos, no cão e no homem, havia

uma incoagulabilidade sangüínea e, simultaneamente, grande decréscimo dos

valores do fibrinogênio. Na fase experimental, em cães, 0,2 mg/Kg de veneno

de Bothrops jararaca constituiu a dose encontrada para se obter a “eliminação

experimental do fibrinogênio”.

O conhecimento do fato de se obter a incoagulabilidade sangüínea “in

vivo” com pequenas doses de venenos coagulantes é de suma importância para

o nosso trabalho atual, pois que poderíamos determinar as condições em que

o fenômeno pudesse ser obtido no camundongo e nos utilizaríamos dele como

artifício para a determinação da DL50 a fim .de confirmar a nossa hipóteses,

preliminar (Furlanetto et al, 1973).

Tais considerações levaram-nos, pois, à suposição de cpie deveria ser pos¬

sível o encontro de dose de veneno botrópieo capaz de, quando injetado por

ui a venosa em todos os camundongos de um lote a ser ensaiado, produzir efeito

protetor contra as mortes imediatas por doses mais elevadas de veneno, inje¬

tadas numa segunda fase.

A dose prévia procurada, segundo essa concepção, deveria não apenas

ser capaz de suprimir a coagulabilidade sangüínea, supostamente a principal

causa de morte imediata, como também, obviamente, ser razoavelmente tole¬

rada pelo camundongo.

Para abordar esse problema deveríamos determinar, inicialmente, o tem¬

po normal de coagulação sangüínea na linhagem de camundongos mantida pelo

ui

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópic.os inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musculus Linnaeus, 1 758. II — Possibilidade de determinação

da DL50 através da inoculação prévia de doses infra-letals do próprio veneno.

Mon. Inst. Butantan, J 7: 109-122 1973.

Instituto Butantan. Isto feito, poderíamos injetar doses variáveis de um veneno

altamente coagulante, a fim de procurar aquela epie, não causando morte, tor¬

nasse o sangue incoagulável.

Encontrada essa dose preparatória, o problema seguinte seria o de veri¬

ficar sua aplicabilidade ao problema da determinação da DL50 a fim de reve¬

lar outros fatores tóxicos do veneno. Siles Villarroel et al (1973) mostraram a

ocorrência de 9 a 15 componentes eletroforéticos nos venenos de várias

espécies de Bothrops.

MATERIAL E MÉTODOS

Venenos utilizados:

Os venenos com os quais trabalhamos bem como seu método de con¬

servação e utilização foram aqueles descritos em trabalho anterior (Furlanetto

et al, 1973).

Veneno de Bothrops moojeni: B. moojeni (F)

No desenvolvimento deste trabalho suigiu a conveniência de se eleger

pela potência coagulante um veneno botrópico, para ser utilizado em repetidos

ensaios. A seleção recaiu em determinada amostra de veneno de B. moojeni

cuja Dose Mínima Coagulante (D.M.C.) era de 0,4 pg. Com esse veneno foi

então preparada uma solução contendo 400 pg/ml que depois de distribuída

em “flaconetes” que foram hermeticamente fechados, foi conservada no con¬

gelador a -25°C. Esse material passou a ser designado como veneno de

B. moojeni (F). No momento do uso era descongelado um “flaconete” sob

água corrente e então preparadas as diluições necessárias em solução fisioló¬

gica (0,85% de NaCl); os eventuais excedentes eram desprezados.

A n i m a i s

Foram utilizados camundongos de 18 a 22g, sem distinção de sexo, todos

provenientes do Biotério Geral do Instituto Butantan; as inoculações eram

feitas por via venosa.

Determinação da Dose Mínima Coagulante (D. M. C.) ou Unidade Coagulante

(17. C.)

A Dose Mínima Coagulante é uma unidade r.rbiirária por nós introduzida

para ponto de referência de atividade coagulante. quer de venenos, quer de

produtos coagulantes deles derivados. O esquema técnico foi tomado de Hous-

say et al (1917/1918); essa unidade pode ser assim conceituada: chamamos

D.M.C. ou U.C. a quantidade de veneno d : ssolvido depois de seco que, no

volume de 0,2 ml é capaz de promover a coagulação, entre 8 a 10 minutos e a

112

cm

2 3

L.

5 6

11 12 13 14 15

Contribuição ao estudo ela determinação ela DL50 ele venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mns miiscnlus binnaeus, 1758. IT — Possibilidade de determinação

ela DL50 através da inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Ifewi, Inst. Butantan , 37: 109-122 1973.

37°C, de 1,0 ml de plasma normal de cavalo, adicionado de 2%o de oxalato de

potássio (o plasma deve ser colhido no dia do ensaio).

O teste para essa determinação era conduzido em tubos de ensaio de

14 mm X 14 cm, imersos em banho-maria a 37°C e considerava-se o plasma

coagulado quando se formava bloco de fibrlna capaz de escorregar pela pa¬

rede do tubo quando este era inclinado.

Determinação cia Dose Mínima Mortal (D.M.M.)

A expressão D.M.M. convenciona-se como dose “certamente” letal para o

pombo de 280 a 320 g, por inoculação endovenosa segundo o método de

Vital Brazil (1907).

Determinação cio tempo cie coagulação cio sangue dc camundongos

Com tesoura bem afiada, cortava-se de golpe, cerca de 1,5 a 2,0 cm da

extremidade da cauda; sem espremer, colhia-se a gota de sangue que fluía

normalmente, sobre lâmina quimicamente limpa e iniciava-se a contagem do

tempo pondo-se a funcionar um cronômetro. Decorrido o tempo de 1,0, 1,5 e 2,0

minutos e, a seguir, cada 15 segundos, praticava-se o teste de coagulação da

gota de sangue. Tal teste era feito com o biséu de agulha hipodérmica bem

fina: procurava-se levantar cuidadosamente parte da gota; quando aparecesse

um nítido fio de fibrina ligando a gota ao bisél da agulha, considerava-se o

sangue coagulado e marcava-se o tempo.

Outras determinações

Sempre epie trabalhávamos com outro material, as técnicas utilizadas fo¬

ram rigorosamente aquelas citadas pelos autores respectivos e cuja referência

se encontra no texto.

Em dadas experimentações onde eram introduzidas pequenas alterações

técnicas, estas constam de anotações em separado.

RESULTADOS

Para a seqüéncia experimental havia a necessidade da determinação prévia

do tempo de coagulação do sangue de camundongos normais e também da¬

queles que recebessem uma dose sub-letal do veneno em questão. Para isso

tomaram-se 190 camundongos normais de 18 a 22 g de peso, os quais foram

separados ao acaso em 19 lotes.

Um desses lotes constituiu o testemunho, isto é, serviu para determinação

do tempo médio normal de coagulação »angüínea.

Os 18 lotes restantes foram submetidos a inoculações endovenosas com o

veneno de B. moojeni (F), cujas especificações se encontram no capítulo

113

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

FURLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., SILES VILLARROEL, M. & ZELANTE, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musoulns Linnaeus, 1758. II — Possibilidade de determinação

cia DL50 através da inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Meni. Inst. Butantan, 37: 109-122 1973.

Material e Métodos. Esses lotes foram assim destinados: seis deles, para ino¬

culação com 1 pg de veneno; outros seis lotes com 2 pg e os restantes, com

4 Hg.

Para dada uma dessas doses de veneno havia, portanto, seis lotes de 10

animais, permitindo a determinação do tempo de coagulação em seis tempos

diferentes, a contar do momento da inoculação. Na Tabela I estão sumariados

os resultados, que representam valores médios do tempo de coagulação em

cada um dos lotes.

TABELA I

Determinação do tempo de coagulação do sangue de camundongos normais e procura

da dose de veneno que inoculada por via venosa determinasse a incoagulabilidade.

Cada dose estaca contida em 0.5 ml e era inoculada por via venosa em animais de

18 a 22 g. Veneno de B. moojeni (F).

Dose de

veneno

em |ig

Tempo, em minu¬

tos, decorrido

após aplicação

do veneno

Média * do tempo

de coagulação cm

minutos

Observações

0

150

Lote testemunha

5

1,40

15

1,30

30

2,20

1,0

60

2,15

120

2,20

240

1,50

5

1,30

15

3,30

30

3,15

60

5,15

Dois animais com sangue

não coagulável **

2,0

120

4,10

Oito animais com sangue

não coagulável **

240

2,25

5

Tempo de coagulação não

15

determinado neste lote, vis-

30

to terem ocorrido 20% de

4,0

60

mortes imediatas.

120

240

* Media computada apenas entre os animais em que o sangue permanecia coagu-

lável.

** O tempo de observação se extendia até o início de dessecação do material, o quo

ocorria geralmente ao redor de 10 minutos.

114

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

FUKLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., SILES VILLARROEL, M. & ZELANTE, F. —

Contribuição ao estudo cia determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via,

venosa em camundongos — Mus musciilus Linnaeus, 1758. II — Possibilidade de determinação

da DL50 através da inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Mem. Iiist. Butantan, 37: 109-122 1973.

O exame da Tabela I demonstra que a dose de 4pg é excessiva, uma vez

que produziu cerca de 20% dc mortes imediatas.

No que diz respeito à dose de 2 [tg, já a partir de 15 minutos após a

inoculação, observa-se elevação do tempo de coagulação, que atingiu valor

máximo no lote testado duas horas após a inoculação do veneno, quando oito

dos dez animais inoculados permaneceram mais de 10 minutos com sangue

incoagulável; quatro horas após a inoculação observou-se nítida tendência de

volta ao tempo normal de coagulação. É de se notar ainda a não ocorrência de

mortes com esta dose.

Finalmente, em relação a dose de 1 jig observou-se ligeiro aumento do

tempo de coagulação desde meia até duas horas após a inoculação; não se

registraram mortes.

Os dados apresentados (Tabela I) indicam, pois, que a dose procurada

encontra-se entre 2 e 4 |ig, uma vez que esta última dose levou alguns animais

à morte e que com a primeira, nas observações feitas uma e duas horas após a

inoculação, muitas amostras de sangue secavam sem coagular.

O fato de que determinada dose do veneno B. moojeni (F), produzia a

incoagulabilidade do sangue de camundongos e não tivesse provocado mortes

imediatas ou tardias levou-nos a ensaiá-la experimentalmente como dose prepa¬

ratória (D. P.), isto é, dose que, causando fase de incoagulabilidade sangüínea

temporária, pudesse eventualmente proteger camundongos de mortes imediatas,

frente a elevadas doses do mesmo veneno. Por essa razão, 2 pg de veneno

B. moojeni (F), foi ensaiada por via venosa na experiência constante da Ta¬

bela II, e duas horas após, tempo no qual o lote de camundongos assim trata¬

dos deveria estar em fase de incoagulabilidade sangüínea, foram aplicadas

doses de veneno capazes de provocar a morte imediata de animais não

tratados.

TABELA II

Determinação da zona de toxicidade do veneno de B. moojeni em animais tratados

com a dose preparatória prévia (D.P.) duas horas antes da inoculação das doses

tóxicas. Cada dose estava contida em 0.5 ml e era inoculada por via venosa em

camundongos de 18 a 22 g. Como D. P. foram usados 2\\.g do próprio veneno de

B. moojeni (F).

Animais

normais

— sem

D.P

Animais tratados

— com D.P.

Dose de ve¬

neno em «i£?

Tempo de observação

lOmin.

60min.

241i

48h

lOmin.

60min.

24h

48h

5

3/10

6/10

0/10

10

8/10

0/10

20

8/10

10/10

—

0/10

40

9/10

10/10

—

0/10

80

10/10

—

0/10

160

10/10

—

--

7/10

8/10

10/10

—

115

SciELO

10 11 12 13 14 15

cm

FURL.ANETTO, R. S., ROJAM ROSA, U., SILES VILLARRCEL, M. & ZELANTE, P. —

Contribuição ao esturlo da determinação da DL50 de venenos botrõpicDS inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musculus Linnaeus, 1 758. II — Possibilidade de determinação

da DL50 através da. inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Alem. Inst. BuUintan, 87 ' 100-1 22 1073.

TABELA III

Determinação da DL5fí pelos limites de doses fornecidos pelo experimento constante

da Tabela II com D.P. do mesmo veneno de B. moojoni aplicado 2 hroas antes da

inoculação das doses tóxicas.

Animas normais — sem D.P.

Animais

tratados

— com

D.P.

Dose de ve¬

neno em jig

Tempo de observação

lOmin. GOmin. 24h 48h

lOmin.

60min.

24h

48h

80,0

10/10

0/10

1/10

89,6

10/10

0/10

1/10

3/10

100,8

10/10

0/10

2/10

4/10

112,8

n.i. *

0/10

1/10

7/10

126,4

n.i.

0/10

4/10

7/10

142,4

n.i.

2/10

5/10

10/10

—

160,0

n.i.

4/10

9/10

10/10

—

* n.i. — não inoculado por ser consi- DL50 = 104 iig em 24 horas (calculada

derado desnecessário. pelo método de Reed & Müench, 1938).

TABELA IV

Determinação da DL50 do veneno de B. moojeni pelos limi¬

tes das doses fornecidos pelos experimentos constantes

da Tabela II com D.P. do mesmo veneno de B. moojeni

aplicado >t horas antes da inoculação das doses tóxicas.

Dose de ve-

Tempo de

observação

neno em jxg

lOmin.

60min.

24h

48h

80,0

1/10

4/10

89,6

2/10

4/10

100,8

1/10

5/10

6/10

112,8

2/10

7/10

8/10

9/10

126„4

1/10

4/10

8/10

142,4

2/10

8/10

160,0

5/10

9/10

10/10

—

DL50 em 24 horas = 97u.g.

Todo método de avaliação de atividade deve, como condição fundamental,

fornecer resultados coerentes em ensaios repetidos. Por essa razão, resolvemos

repetir o ensaio da Tabela III em dias diferentes; tivemos o cuidado de partir

sempre da mesma solução de veneno de B. moojeni (F) (400 pg/ml) guardada

no congelador em vários “flaconetes”, sendo sempre descongelado um, no dia

do ensaio.

116

], | SciELO

FURLANETTO, R. S., ROLEM ROSA, R„ SILES VILLARROEL, M. & ZELANTE, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus muscnlut> Linnaeus, 1758. II — Possibilidade de determinação

da DL50 através da inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Mcm. Tnst. Butantan, 37: 109-122 1973.

TABELA V

Repetição da determinação da DL50 pelos limites de doses

fornecidos pelo experimento constante da Tabela II com

D. P. do próprio veneno de B. moojeni (2 ng) aplicado

duas horas antes da inoculação das doses tóxicas. Ensaio

repetido cerca de um mês após.

Dose de ve-

Tempo de

observação

neno em jig

lOmin.

60min.

24h

48h

80,0

0/10

1/10

89,6

0/10

1/10

2/10

100,8

0/10

2/10

6/10

112,8

0/10

3/10

9/10

126,4

0/10

1/10

7/10

142,4

1/10

3/10

9/10

10/10

160,0

3/10

5/10

10/10

—

DL50 1 =

100,8 jig em 24

horas.

TABELA VI

Repetição da

veneno de B.

determinação da DL50 com D. P. do próprio

moojeni (2 \ig) aplicado duas horas antes da

inoculação das doses tóxicas. Ensaio realizado cerca de 60

dias após a realização do ensaio constante da Tabela III.

Dose de

veneno

Tempo de

observação

em |tg

lOmin.

60min.

24 h

48h

80,0

0/7

1/7

2/7

89,6

0/7

1/7

2/7

100,8

0/7

1/7

2/7

112,8

0/7

2/7

126,4

1/7

3/7

7/7

—

142,4

0/7

3/7

7/7

—

160,0

4/7

5/7

7/7

—

DL50

= 107,05

[lg em 24 horas

DISCUSSÃO

Os ensaios constantes das Tabelas II, III, V e VI mostram flagrante des¬

locamento dos níveis letais para Valores muito mais altos nos animais tratados

com D.P. Poderiamos estimar a DL50 nos animais normais como sendo pró¬

xima de 5 |ig, enquanto que nos animais tratados oscilou entre os valores de

104, 100 e 107 |.tg, Tendo-se em mente que os tres ensaios foram feitos em

datas diferentes, é evidente a coerência entre elas.

117

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

FURRANETTO, R. S., RO RIM ROSA, R., SIRES VIRRARROER, M. & ZERANTE, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da DR50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus rmisculus Rinnaeus, 1758. II — Possibilidade de determinação

da DR50 através da inoculação prévia de doses iníra-letaia do próprio veneno.

Mcm. Inst. Butantan, 37 : 109-122 1973.

As mortes imediatas, consistentemente observadas nos lotes sem D.P., com

todas as doses de veneno, desapareceram nos animais com D.P., para reapa¬

recerem somente com doses de veneno muito elevadas e muito acima da DL50

calculada. Ademais, pela análise das Tabelas III, V e VI verifica-se nítida

elevação do número de mortes, em função do prolongamento do tempo de

observação, nos animais tratados com D. P.

A Tabela IV sugere que o efeito da D.P. tenha diminuído após quatro

horas, coerentemente com os dados constantes da Tabela I, pois reapareceram

as mortes imediatas.

Não há dúvida, pois, que uma única dose adequada de veneno, aplicada

duas horas antes, pode proteger contra morte imediata por doses de veneno

capazes de matar todos os animais não tratados, e, possibilita o cálculo da

DL50 com consistente reprodutibilidade.

Se admitirmos que as mortes dos animais normais, observáveis nos 10

minutos seguintes à inoculação de pequenas doses de veneno, ocorrerem por

conta da formação de microcoágulos, parece evidente que este mecanismo de

morte é prevenido pela D.P.

Quando o intervalo entre a D.P. e a aplicação das doses tóxicas foi de

quatro horas (Tabela IV) a D.P. já não forneceu a mesma proteção o que

pode ser interpretado como conseqüência da tendência do tempo de coagu¬

lação voltar a se normalizar conforme demonstra os dados constantes da

Tabela I.

Particular menção deve ser feita às mortes imediatas em 10 minutos que

podem ocorrer nos animais tratados com D.P. após a inoculação de doses

muito elevadas de veneno, maiores que 142 |ig (Tabelas III, V e VI). Especial

atenção merece também o registro do fato que, a partir de doses não tão

elevadas de veneno (89,6 |tg), aparecem mortes em 60 minutos. Ora, as mortes

com elevadas doses de veneno quer em 10 minutos quer em 60 minutos, não

mais parecem ser atribuíveis à coagulação intravascular. Realmente, como de¬

monstrou Rosenfeld et al (1958) o sangue, tornado incoagulável por inoculação

de veneno botrópico por via venosa, leva mais de quatro horas para recuperar a

coagulabilidade. Tal resultado parece ser confirmado pelos dados constantes

da Tabela I. Parece, pois, que a D.P. permite evidenciar, nesta altura, dois

mecanismos de morte do animal:

1. °) animais não tratados que morrem provavelmente por coagulação in¬

travascular que seria evitável pela D.P.;

2. °) animais que receberam a D.P. e ficaram, portanto, pela íncoa-

gulabilidade sangüínea protegidos contra aquele primeiro mecanis¬

mo de morte, mas não ficaram protegidos contra o segundo me¬

canismo de morte rápida que se verifica com altas doses de veneno

e somente evidenciável de modo nítido por intermédio da D.P.

Tal concepção encontra apoio nos trabalhos de Arthus (1913) que, tendo

imunizado coelhos contra o fator coagulante de alguns venenos, verificou que

118

cm

2 3

z

5 6

10 11 12 13 14 15

FURRANETTO. R. S., ROLiIM ROSA, R., S1LES VILLARROEL, M. & ZELANTE, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — .1 Ins muatfulua Rinnaeus, 175S. II - — Possibilidade de determinação

da DL50 através da inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno.

Mem. inst. Butantan, 37 : 109-122, 1973.

animais assim tratados, quando inoculados por via venosa com altas doses de

veneno, não sofriam coagulação intravascular maciça mas sim um choque,

denominado pelo autor de ‘‘choque proteotóxico”; este se caracterizava, es¬

sencialmente, pela queda abrupta da pressão arterial, taquipnéia e morte; tal

fenomenologia foi atribuída a uma substância incoagulante que seria liberada

pela ação do veneno sobre o fígado.

A evidência de que os animais que recebem veneno botrópico por via

venosa podem sofrer choque tipo anatilaetóide, por liberação de várias subs¬

tâncias farmacologicamente ativas, tem sido mencionada insistentemente na li¬

teratura. Assim, Houssay et al (1922), trabalhando com os venenos botrópicos

por via venosa em cães e utilizando doses incapazes de produzir morte imedia¬

ta, observaram forte abaixamento da pressão arterial, acompanhada de taquip¬

néia, que chamaram também de “choque proteotóxico”. Vellard et al (1941)

reestudaram o assunto e, no coelho, obtiveram com doses apropriadas de

veneno de Botkrops atrox (hoje classificada como B. moojeni ) um choque

caracterizado por queda brusca da pressão arterial, taquipnéia, coma e con¬

gestão pulmonar e intestinal; tais fenômenos poderiam provocar a morte do

animal ou então desaparecer rápida e completamente.

Schottler (1955/1956) descreveu também um choque no camundongo com

“altas doses” de veneno botrópico; esse choque poderia provocar a morte

em “poucos minutos” ou produzir um “coma profundo” que também poderia

levar à morte, ou então permitir a recuperação total dos animais.

Tais choques anafilactóides são normalmente interpretados pela liberação

de substâncias farmacologicamente ativas pelos enzimas do veneno (Feldberg

& Kcllaway, 1937 e 1938; Zeller, 1948; Rocha e Silva, Beraldo & Rosenfeld,

1949; Essex & Markowitz, 1930; Werle, Kehl e Koebke, 1950).

Os resultados por nós obtidos, relacionados aos dados da literatura men¬

cionados, levaram-nos a admitir que a D.P. protege contra a morte imediata

por coagulação intravascular, mas não protege contra a morte pelo “choque

proteotóxico”, de Arthus, de Houssay e outros. Com altas doses de veneno,

pode-se mesmo obter o segundo mecanismo de morte “choque anafilactóide”

ou “proteotóxico” com maior evidência, evitando-se o primeiro mecanismo

através da D.P. Os animais que não sucumbem ao choque anafilactóide po¬

derão apresentar intoxicação tardia (24 horas), como terceiro mecanismo de

morte.

Para o objetivo precípuo deste trabalho, isto é, o encontro de um método

prático para avaliar a DL50 de venenos botrópicos, o segundo mecanismo de

morte não influencia substancialmente os resultados, pois ocorre de modo mais

frequente somente com doses de veneno mais elevadas do que a DL50 cal¬

culada (Tabelas III, V e VI).

CONCLUSÕES

1. A inoculação de doses relativamente pequenas de veneno de B.

moojeni, por vía venosa em camundongos, provocam mortes dentro de 10

minutos (mortes imediatas), sendo impossível avaliar sua DL50.

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FLTIILANÊTTO, n. S„ HOMXr ROSA, n„ SII.ICS VILLAUROEL, M. & ZELANTÊ, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da JJL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mtts mnscrlus Linnaeus, 17."»S. II — Possibilidade de determinação

da DL50 atravós da inoculação prOvia de doses infra-letais do próprio veneno.

Mem. Inst. Ilulantan, 37: 109-122 1973.

2. A inoculação por via venosa em camundongos de determinadas doses

infra-letais (D.P.) de veneno de B. moojeni, leva a uma incoagulabilidade

sangüínea que atinge o seu máximo efeito duas horas após. A partir desse tempo,

parece haver uma tendência à normalização do tempo de coagulação.

3. Camundongos tratados com a D.P. do próprio veneno suportam duas

horas após, elevadas doses do mesmo veneno sem que ocorram fenômenos

de “mortes imediatas”, o que sugere que estas mortes imediatas ocorram por

coagulação intravascular.

4. Doses preparatórias de veneno (D.P.) capazes de proteger os camun¬

dongos contra as mortes imediatas (dentro de dez minutos) conseqüentes a

inoculação endovenosa de outras doses maiores, tem esse poder correlacionado

com o aumento do tempo de coagulação ou com a fase de incoagulabilidade

sangüínea por elas provocadas.

5. Camundongos tratados com D.P. inoculados com doses maciças do

mesmo veneno, acima dos valores da DL50, podem sucumbir em 10 minutos o

que leva a pressupor que neste caso, tais mortes ocorram por um mecanismo

diferente da coagulação intravascular, tratando-se possivelmente de um “cho¬

que proteotóxico” ou “anafilactóide”.

6. Os animais escapos da morte imediata através da proteção conferida

pela D.P. e que sobrevivam também ao “choque proteotóxico”, ao receberem

elevadas doses de veneno, poderão apresentar intoxicação tardia (24 horas)

como terceiro mecanismo de morte pelo veneno botrópico.

7. Doses escalonadas de veneno de B. moojeni, inoculadas em camun¬

dongos previamente tratados com D.P. do mesmo veneno, permitem avaliar

com reprodutibilidade altamente satisfatória sua DL50.

SUMMARY — The authors demonstrat-

ed that tho inoculation of determinate

sublcthal doses (P.D ) of Bothrops ve-

nom by intravenous route in mice

brings tho blood to a non-coagulation

whosc apex is reached two hours latcr.

Animais troatod in this way tolerate

high doses of the sanie venom without

the occurrcnce of immediate death

attributable to intravascular coagula-

t.ion. This permits the estimation of

the LD50 of the venom, in condition of

satisfactory reproduebility. The same

technology has allowed the characteri-

zation of two other death mechanisms

due to the action of high doses of ve¬

nom: “proteotoxic shock” or anaphy-

lactoid, and delayed intoxication, indo-

pendently of the two first mechanisms.

VNITERMS — Bothrops venom; LD50

determination of Bothrops venom;

blood non-coagulation by Bothrops ve¬

nom; death mechanisms duo to the ac¬

tion of Bothrops venom.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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L.

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Recebido para publicação em 15.VI.73.

Aceito para publicação em 15. VIII. 73.

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1, | SciELO

Mem. Irist. Butantar

S7: 123-123, 1973

CONTRIBUIÇÃO AO ESTUDO DA DETERMINAÇÃO DA DL50 DE

VENENOS BOTRÓPICOS INOCULADOS POR VIA VENOSA EM

CAMUNDONGOS — Mus mmculus Linnaeus, 1758.

III. POSSIBILIDADE DE DETERMINAÇÃO DA DL50, ATRAVÉS DA

PROTEÇÃO CRUZADA CONFERIDA POR DOSES INFRA-LETAIS

DE OUTROS VENENOS DE SERPENTES DO MESMO GÊNERO.

REYNALDO SCHWINDT FURLANETTO *

RAYMUNDO ROLIM ROSA **

MEDARDO SILES VILLARROEL,»**

JOSÉ NAVAS****

RESUMO — Os autores demonstraram traram duas possibilidades: a) eleger-se

que doses infra-letais de um veneno bo- um veneno altamente coagulante como

trópico pode prevenir a ocorrência de padrão para obter o efeito de dose pre-

mortes imediatas dos animais, quando paratória (D. P.); b) para os venenos

da inoculação duas horas após, de do- das espécies de Bothrops mencionadas

ses maciças de veneno de serpentes do pode obtcr-se o mesmo efeito com 2 |ig

mesmo gênero, porém, de espécies dife- do próprio veneno.

rentes ( B. moojeni, B. jararaca e B.

neuwiedi ), possibilitando a determina- UNITERMOS — Veneno botrópico;

ção da DL50 de um deles mediante dose DL50 de venenos botrópicos; proteção

preparatória (D.P.) de outro. Demons- cruzada com venenos botrópicos.

INTRODUÇÃO

A inoculação intravenosa de doses infra-letais de veneno botrópico em

camundongos, torna estes animais extraordinariamente resistentes à inoculação,

duas horas após, de elevadas doses do próprio veneno sem ocorrer as “mortes

imediatas” (em 10 min.). As doses prévias (D. P.), acima referidas, levam a

uma incoagulabilidade sangüínea que atinge o seu máximo efeito cerca de

duas horas após a inoculação (Furlanetto et al 1973b). Nesse trabalho foi de¬

monstrado que 2 (jtg de veneno de B. moojeni aplicado duas horas antes de

elevadas doses escalonadas do mesmo veneno, permite avaliar com reproduti-

* Ex-Chefe da Secção de Imunoterapia do Instituto Butantan. Atual Professor Catedrático

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.P.

*■* Diretor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan. Professor Assistente Doutor

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.P.

*** Ex-Assistente do Setor de Soros Antipeçonhentos do Instituto Butantan. Professor

Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomédicas da U.S.P.

**** Encarregado do Setor de Imunização do Instituto Butantan.

Endereço para correspondência:

C.P. 4365, São Paulo, Brasil:

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FURLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., SUJES VILLARROEL, M. & NAVAS, J. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrôpicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musculus Rinnaeus, 3 75 8. III — Possibilidade de determinação

da DL*50, através da proteção cruzada conferida por doses intra-letals de outros venenos de

serpentes do mesmo gênero.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 123-129, 1973.

bilidade satisfatória sua DL50. As doses infra-letais provocariam a destruição

do fibrinogênio devido ao próprio “fator ou fatores coagulantes” do veneno em

questão (Furlanetto 1965 e Furlanetto et al 1973b).

Se partíssimos agora da hipótese segundo a qual a fração coagulante dos

diferentes venenos botrôpicos teria natureza idêntica ou semelhante, variando

mais quantitativa do que qualitativamente entre as espécies, o ensaio cruzado

de D.P. de veneno de uma espécie de Bothrops poderia ser utilizada para o

cálculo da DL50 de outro veneno do mesmo gênero.

MATERIAL E MÉTODOS

V eneno s

Os venenos com os quais trabalhamos, bem como seu método de conser¬

vação e utilização foram aqueles descritos por Furlanetto et al (1973a).

A n i m a i s

Trabalhamos com camundongos de 18 a 22g, sem distinção de sexo, todos

provenientes do Biotério Geral do Instituto Butantan; as inoculações eram

sempre feitas por via venosa.

Outras especificações

Sempre que trabalhávamos com outro material, as técnicas utilizadas fo¬

ram rigorosamente aquelas citadas pelos autores respectivos e cuja referência

se encontra no texto. O veneno aqui citado como de B. moojeni (F) é o

mesmo referido em trabalho anterior (Furlanetto et al 1973b).

RESULTADOS

Usando D.P. do veneno B. moojeni (F) e D.P. de um veneno de Bothrops

jararaca ensaiamos a determinação da DL,50 deste último. As características

experimentais encontram-se sumariadas na Tabela I.

Empregamos veneno de Bothrops jararaca com D.M.M. = 30 |ig (Método

de Vital Brazil, 1909). Foi feita uma solução contendo 400 [ig/ml distribuída

em “flaconetes” e mantida no congelador a -25°C. No momento do uso era des¬

congelado sob água corrente um “flaconete” e o material excedente não era

aproveitado, tudo como para o veneno B. moojeni (F).

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FURLANETTO, R. S., KOLIM ROSA, li., SILES VILLAKROEL, M. & NAVAS, J. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus musculus Linnaeus, 1758. III — Possibilidade de determinação

da DL50, através da proteção cruzada conferida por doses intra-letais de outros venenos de

serpentes do mesmo gênero.

Mem. Inst. Butantan, 37: 123-129, 1973.

A análise dos valores expressos pela Tabela I demonstra qne a D.P. com

veneno de Bothrops moojeni, atuou de modo semelhante à D.P. do próprio

veneno do Bothrops jararaca. Em ambos os protocolos b e c desapareceram as

mortes imediatas que ocorrem indiscriminadamente nos animais sem D.P. já

anteriormente assinaladas por Furlanetto et al (1973a). Aparecem nitidamente

as mortes tardias em 24 horas com as maiores doses de veneno, e o resultado

com 48 horas praticamente não se altera; a DL50 nos dois protocolos, é muito

semelhante.

Embora se saiba que o veneno de B. jararaca é de menor potência coa-

gulante que o de B. moojeni (Rosenfeld et al 1959), utilizamos arbitraria¬

mente para aquele o mesmo valor de D.P., determinado experimentalmente

para este (Furlanetto et al, 1973b), com resultados práticos idênticos.

A seguir decidimos verificar a possibilidade de proteção cruzada entre o

veneno de outras espécies diferentes. Usando D.P. do veneno B. moojeni (F),

D.P. do de Bothrops jararaca e D.P. do de Bothrops neuwiedi, ensaiamos

a determinação da DL50 deste último veneno. As características experimentais

foram semelhantes aos da Tabela I e os resultados encontram-se sumariados

na Tabela II.

DISCUSSÃO

A análise dos resultados evidencia a possibilidade de emprego de D.P.

de um veneno botrópico altamente coagulante (B. moojeni) para o cálculo da

DL50 de outros venenos de serpentes do mesmo gênero.

É bem de ver-se, na realidade, que se houvesse necessidade de procurar

um efeito de D.P. de cada veneno, com os ensaios necessários relativos aos

tempos de coagulação, conforme feito em trabalho anterior (Furlanetto et al,

1973b), a aplicação do método seria laboriosa e conseqüentemente este teria

menor generalização.

Nesse sentido, caso a D.P. de um veneno permitisse o cálculo da DL50

do outro, poder-se-ia eleger um veneno padrão, decorrendo daí facilitação tec¬

nológica altamente desejável.

Se fosse possível simplificar mais ainda a metodologia, o âmbito de in¬

fluência do método seria grandemente ampliado. Esse raciocínio levou-nos a

ensaiar, comparativamente, como D.P. para determinação da DL50 de um

dado veneno, o próprio veneno em estudo, na quantidade idêntica àquela en¬

contrada para o B. moojeni (F). Tal forma de procedimento emergia, também,

do raciocínio dado pelos resultados do trabalho supra citado, pois talvez não

fosse necessário obter-se uma fase de completa incoagulabilidade para se obter

proteção, sendo suficiente, quiçá, conseguir-se uma dilatação de tempo de

coagulação. Nessa ordem de idéias, o princípio coagulante do mesmo veneno

a ser ensaiado poderia talvez promover dilatação suficiente do tempo de

coagulação capaz de evitar as mortes imediatas por coagulação intravascular.

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F U R ti A NTCTTO, R. S., ROL TM ROSA, R., SILES YILTvARROKL, M. & NAVAS, J. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados por via

venosa em camundongos — Mus miiscuhts Linnaeus, 1758. III. — Possibilidade de determinação

da DL*50, através da proteção cruzada conferida por doses íntra-letais de outros venenos de

serpentes do mesmo gênero.

Mem. Inst. Butantan, 37: 123-129, 1973.

Com essas questões em mente foram conduzidas as experiências constan¬

tes do presente trabalho, cujos resultados nos permitem postular que realmente,

determinada D.P. de um veneno pode prevenir morte imediatas capazes de

resultar da inoculação de determinadas doses de outros venenos do mesmo gêne¬

ro. Com efeito, o veneno B. moojeni (F) atuou como D.P. para venenos de

B. jararaca e B. neuwiedi, permitindo homogeneidade das respostas e cálculo

das DL50 respectivas. Tal resultado autoriza-nos a supor que o veneno B. moo¬

jeni (F) possa ter o mesmo eleito para os demais venenos do gênero Bothrops

e, portanto, possa ele, ou outro que se demonstre superior, servir como padrão,

caso assim seja considerado necessário. A comprovação, em maior escala, des¬

ta suposição alicerçada em nossa experiência, constituo trabalho de casuística

em aberto.

Por outro lado, os resultados constantes das Tabelas I e II, evidenciam

que a dose do 2 jig, tomada à semelhança do veneno B. moojeni (F), pode

ter efeito de D.P., protegendo contra doses do próprio veneno capazes de

provocar a coagulação intravascular maciça imediata. Esse fato auspicioso para

a metodologia, demonstrado com venenos de B. jararaca, B. moojeni e B.

neuwiedi, parece indicar talvez, que a dose que funcione como D.P. pode

ser facilmente encontrada através de simples ensaios preliminares, sem ne¬

cessidade de se repetirem as experiências até aqui realizadas: bastaria, talvez,

ensaiar-se uma dose do próprio veneno, incapaz de promover mortes imediatas,

para se obtei o efeito de D.P. Por fim, aqueles resultados levaram ainda ao

conceito de que as proteções obtidas de modo cruzado com venenos diversos,

pudessem ser devidas, pelo menos em parte, a identidade do fator coagulanto

nos vários venenos ensaiados. Tal conceito encontra apôio nos trabalhos de

Rosenfeld et al (1962) que demonstrou haver neutralização cruzada do poder

coagulanto por antisoros obtidos pela imunização com venenos do mesmo

gênero, porém, de espécies diferentes.

CONCLUSÕ E S

1. A inoculação intravenosa de doses infra-letais (D.P.), de um deter¬

minado veneno botrópico previne a ocorrência de mortes imediatas dos animais

quando da inoculação duas horas após, de doses maciças de outro veneno de

serpentes do mesmo gênero.

2. Para os venenos botrópicos ensaiados ( B. moojeni, B. jararaca, B.

neuwiedi), a dose preparatória (D.P.) tendo efeito cruzado, permite deter¬

minar a DL50 de um, mediante dose preparatória de outro.

3. Pode-se eleger um veneno altamente coagulanto como padrão para

a D.P. para fins de cálculo da DL50 de outros venenos botrópicos.

4. Pode-se também usar o próprio veneno na dose de 2 |ig para os fins

colimados na conclusão anterior no caso dos venenos de B. moojeni, B. jararaca

e B. neuwiedi.

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furlanêtto, r. s.. roltm rosa.

Contribuição ao estudo tia determinação

da 1 > 050, através da proteção cruzada c

venosa em camundongos — Mus musrulns

serpentes do mesmo gênero.

. ROLTlt ROSA. R., SILES VILLARROEL, M. & NAVAS, J. —

O da determinação da DL50 de venenos botrôpicos inoculados por via

proteção cruzada conferida por doses intra-Ietais de outros venenos de

Mus milsr.ulus Linnaeus, 1758. III—Possibilidade de determinação

.l/em. 7 nst. liutuntan. .17: 123-129, 1973

SUMMARY — The authors demonstrat-

cd that subletha! doses of a Bothrops

venom can prevcnt the occurrcnce of

immediate death of lhe animais if two

hours later these animais will receive

massive venom doses of snakes that be-

long to the same genus, but to differ-

ent species (B. moojeni , B. jararaca,

and B. neuvnedi).

a) To sclcct a standard venom with

high coagulant power in order

to obtain the preparatory dosa

effect (P. D.).

b) For the venoms of the mention-

ed Botlrrops species it is possi-

ble to obtain the same effect

with 2,0' |tg of the very venom.

It is possible to determine the LD50

of ono of these vcnt ms by means of a

preparatory dose (Pi).) of another.

UNITERMS — Bothrops venom; LD50

of Bothrops venoms; cross protection

with Bothrops venoms.

The authors demonstrated two possi-

bilities:

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3. FURLANETTO. R. S.; ROLIM ROSA, R.; SILES VILLARROEL, M. & ZELAN-

TE, F. —■ Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botró-

picos inoculados por via venosa em camundongos Mus musculus Linnaeus,

1758. II. Possibilidade da determinação da DL50 através da inoculação prévia

de doses infra-letais do próprio veneno. (Mem. Inst. Butantan), no prelo, 1973b.

4. REED, L. J. & MUENCH, H. — A simplc method of estimating fifty per cent

end points. Amer. J. Hyg., Baltimore, 27: 493-497, 1938.

5. ROSENFELD, G.; HAMPLE. O. G. & KELEN, E. M. A. — Coagulant and fibri-

nolytic activity of animais venoms; determination of coagulant and fibrinoly-

tic index of different species. Mem. Inst. Butantan, 29: 143-163, 1959.

6. ROSENFELD, G.; KELEN, E. M. A. & NUDEL, F. — Neutralização cruzada do

poder coagulantc de venenos ofídicos com soros antivenenos. Ciên. Cult., São

Paulo, 14: 254-255, 1962.

Recebido para publicação em 15.VI. 73.

Aceito para publicação em 15. VIII .73

129

cm

2 3

z

5 6

10 11 12 13 14 15

liem. Tn.“t. Butanlan

37: 131-137, 1973

CONTRIBUIÇÃO AO ESTUDO DA DETERMINAÇÃO DA DL50 DO

VENENO DE Crotalus durissus terrificus (Laurenti, 1768),

EM Mus musculus Linnaeus, 1758.

RAYMUNDO ROLIM ROSA *

SIRDÉIA MAURA PERRONE FURLANETTO *•

MED ARDO SILES VILLARROEL* * *

FLÃVIO ZELANTE** ***

RESUMO — O emprego de camundon¬

gos — Mus musculus — permite o cál¬

culo da DL50 do veneno de Crotalus du¬

rissus terrificus (crotamino-positivo)

através de inoculação por via intrave¬

nosa. A aplicação de doses sub-letais,

duas horas antes, não dessensibiliza o

animal, conforme demonstrado pelo va¬

lor da DL50. A inoculação prévia de um

veneno altamente coagulante (B. moo-

jeni) em doses que levam à incoagula-

bilidade sangüínea (2 jig), não interfere

no valor da DL50 do veneno crotálico.

UNITERMOS — Veneno crotálico;

DL50 de veneno crotálico.

INTRODUÇÃO

Em trabalhos anteriores, em colaboração com Furlanetto et al (1973b,

1973c), foi demonstrado que era possível determinar a DL50 dos venenos

botrópicos altamente coagulantes, mediante a aplicação prévia de pequena

dose do veneno em estudo, ou de outros produzidos por espécies diferentes,

porém, do mesmo gênero. A essa dose denominamos dose preparatória ou

simplesmente D.P., demonstrando que a mesma provocava, em camundongos

de 18 a 22g, inoculados por via intravenosa, uma incoagulabilidade sangüínea

que atingia o máximo em uma a duas horas após sua aplicação, o que possi¬

bilitava a determinação da DL 50 desses venenos.

Propuzémo-nos, preliminarmente, a estudar, com a mesma metodologia

adotada nos trabalhos anteriores, a determinação da DL50 do veneno de

Crotalus durissus terrificus (Laurenti, 1768). Trabalhamos com o veneno

crotamino-positivo, de uma subespécie do gênero Crotalus Linnaeus, 1758,

face à demonstração de Rocha e Silva (1951) da possibilidade de dessensibi¬

lização da musculatura lisa provocada por adições sucessivas, a curtos inter¬

valos, de venenos de serpentes dos gêneros Bothrops, Crotalus, Denisonia e

Naja os quais apresentariam inúmeras atividades farmacológicas comuns;

* Diretor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan. Professor Assistente Doutor

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da U.S.P. z

** Professor Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto

de Ciências Biomédicas da U.S.P.

*** Kx-Assistente do Setor de Soros Antipeçonhentos do Instituto Butantan. Professor

Assistente Doutor do Departamoento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomédicas cia U.S.P.

Endereço para correspondência:

C.P. 65, Sâo Paulo. Brasil.

131

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

nOLIM ROSA, R., FURLANETTO, S. M. P., SILES VILLARROEL, M. & ZELANTE, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 do veneno de Crotalua durissus ternficus

(Laurenti, 17(58) em Mus musculus Linnaeus, 1758.

Man. lnst. Butantan , 37: 101-137, 1 973.

Cheymol et al (1966) e Cheymol (1969), trabalhando com crotamina e com

venenos crotálicos — crotamino-positivo e não crotamínico — constataram que

a crotamina dessensibilizava, “in situ”, a musculatura estriada, enervada ou

nevrectomisada, e a musculatura lisa de órgãos isolados de ratos, à posterior

aplicação do veneno de C. d. teirificus crotamino-positivo, e vice-versa;

Rosenfeld et al (1970) demonstraram que nos acidentes muito graves provoca¬

dos por envenenamentos crotálicos, ocorre, dentre outras manifestações, in-

coagulabilidade sangüínea.

Em seguida a determinação da DL50, propuzémo-nos a estudar os efeitos

sobre os valores obtidos de uma pequena dose prévia, usando o mesmo veneno

c um veneno botrópico de alto poder coagulante, tomando por base os índices

coagulantes encontrados por ltosenfeld et al (1959).

MATERIAL E MÉTODOS

Venenos

Foram utilizadas amostras de venenos cristalizados a vácuo e mantidos a

0-4°C, obtidos de extrações recentes efetuadas pela Secção de Venenos do

Instituto Butantan, em dezenas de exemplares de C. d. terrificus (Laurenti,

1768) e de fíothrops moofeni Hoge, 1965° procedentes do interior do Estado

de São Paulo e dos Estados visinhos.

Soluções de veneno

A solução do veneno botrópico era preparada em solução de NaCl a 0,85%,

contendo 400 ug/ml, enquanto que a crotálica, conforme técnica preconizada

por Vital Brazil (1911), era preparada em solução de NaCl a 1,5%, contendo

200 |-ig/ml. Tais soluções eram distribuídas em “flaconentes” os quais, uma

vez hermeticamente fechados, eram conservados em congelador a -25°C (Fur-

lanetto, R. S. 1965). No momento do uso, cada frasco era descongelado e as

diluições necessárias eram providenciadas, desprezando-se as eventuais sobras.

Partindo das soluções de veneno descritas e de conformidade com as doses

pretendidas, eram feitas as diluições em solução de NaCl a 0,85%, em volumes

sempre um pouco além do estritamente necessário. A dose de veneno inoculada

em cada animal estava sempre contida em 0,5 ml.

As doses de veneno que deveriam ser aplicadas com o intuito de se obter

resultados com os quais fosse possvel determinar-se a DL50 do veneno crotá-

lico, eram norteadas por uma prova preliminar efetuada mediante a ino¬

culação de quantidades variáveis do mesmo, segundo uma razão constante

igual a 2. Uma vez conhecidas as doses limites, isto é, a maior dose que não

causava a morte de nenhum dos animais e a menor dose que matava todos,

eram calculadas as doses intermediárias, sempre’ através do emprego da se¬

guinte fórmula: R = Vx, em que n representa o número de doses e x a

razão entre as doses final e inicial.

* Classificada até 1965 como JBothrops utrox (Linnaeus, 1758).

132

I, | SciELO

ROLIM ROSA, R., FURLANETTO, S. M. P., SILES VILLARROEL, M. & ZELANTE, F. —

■Contribuição ao estudo da determinação da DLõn do veneno de Crotalus durissus tcrrificus

(Laurenti, 17G8) em Mus muttcuhw Linnaeus, 1758.

Mcni. Inst. Butanlan, 3 7: 131-137, H)73.

Dose Preparatória ou simplesmente D.P.

Segundo Furlanetto, loc. cit., D.P. é uma dose de veneno botrópico que,

contida em 0,5 ml e aplicada em camundongos de IS a 22g, por via intravenosa,

provoca uma incoagulabilidade sanguínea que atinge o máximo efeito uma

a duas horas após sua administração. Para o caso da D.P. do veneno de

B. moojeni, essa dose corresponde a 2 ug dc u’a amostra cuja D.M.C. (dose

mínima coagulante) seja igual a 0,4 ug.

Por D.M.C. ou U.C. (unidade coagulante), acima referida em relação ao

veneno botrópico, entende-se uma unidade arbitrária por nós utilizada como

referência de atividade coagulante, quer de venenos, quer de produtos eoa-

gulantes deles derivados. O esquema técnico foi tomado de Houssay et al

(1918); essa unidade pode ser assim conceituada: chamamos D.M.C. ou U.C.,

a quantidade de produto coagulante ou de veneno, dissolvido depois de seco

que, no volume de 0,2 ml é capaz de promover a coagulação, entre 8 a 10

minutos e a 37°C, de 1,0 ml de plasma normal de cavalo, adicionado de 2 % a

de oxalato de potássio (o plasma deve ser colhido no dia do ensaio). O teste

para essa determinação deve ser conduzido em tubos de ensaio de 14 mm

X 14 cm, imersos em banho-maria a 37°C e considera-se coagulado o plasma

quando se forma um bloco de fibrina capaz de escorregar pela parede do

tubo, quando este é inclinado.

A n i m ais utilizados

Todos os ensaios foram realizados cm camundongos — Mus musculus

Linnaeus, 1758 — sem distinção de sexo, pesando de 18 a 22 g, fornecidos pelo

Biotério Geral do Instituto Butantan.

Via de inoculação

A via intravenosa foi utilizada em todas as provas.

Tempo de observação : 1/2, 1, 2, 24 e 48 horas.

Convenção adota d a

Todos os ensaios expressam resultados através de uma relação numérica

onde sempre o numerador representa o número de animais mortos e o denomi¬

nador o total de animais inoculados em cada dose.

Cálculo da D L50

Todos os ensaios apresentam DL50 que foram calculadas com os resul¬

tados apresentados após 24 c 48 horas, das inoculações, pelo método de lleed

& Müench (1938).

Prova para a Detecção da Cwtamina

Foi empregada a técnica adotada por Schenberg (1959) que consiste em

inocular, por via sub-cutânea, 0,5 mg de veneno crotálico contido em 1,0 ml

133

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

cm

TIO LI M ROSA, R., FURLANKTTO, S. M. P., SILES VILLARROEL», M. & ZRLANTE, F. —

Contribuiçflo ao estudo da determimuOo da 1>L',o do veneno de Crotalus durissus terrificus

(Laurenti, 1708) em Mus musculus Linnaeus, 1758.

Mcvi. lnst. Butantan, 37: 131-137, 1973.

de solução de NaCl a 0,85% em cada um de dois camundongos de peso entre

28 a 25 g. A presença de crotamina será denunciada pelo aparecimento, nos

dois animais, de uma paralisia dos membros posteriores, dentro do prazo de

30 minutos.

RESULTADOS

TABELA I

Determinação da DL50 do veneno de C. cl. terrificus, crotamino-positivo, de coloração

branca. Cada dose estava contida em 0,5 ml e era inoculada, por via intravenosa, em

camundongos de 18 a 22 g.

Tempo de

Doses em microgramas

DL50

observação

2,00

2,40

2,88

3,46

4,15

5,00

6,00

1/2 hora

0/6

1 hora

0/6

2 horas

0/6

1/6

3/6

24 horas

0/6

2/6

4/6

5/6

6/6

2,70 ixg

48 horas

0/6

2/6

4/6

5/6

—

2,70 n>i

Como se pode verificar, a determinação da DL50 do veneno de C. cl. terri¬

ficus pode ser conseguida mediante a aplicação direta do mesmo, em camun¬

dongos, isto é, prescindindo de qualquer tratamento prévio, visto não ocor¬

rerem mortes imediatas e, principalmente, não haver incoerências entre a pro¬

gressão das doses e o número de mortes, como sóe acontecer com venenos

botrópicos. Não obstante, decidimos estudar a influência que uma dose pre¬

liminar, infra-letal, do próprio veneno exerceria sobre a DL50, à semelhança

da D.P. anteriormente feita com venenos botrópicos (Furlanetto et al, 1973a e

1973b).

Provas preliminares demonstraram que 1.0 |i,g do mesmo veneno utilizado

na Tabela I, era a dose máxima tolerada pelos animais utilizados, sem mani¬

festações aparentes de intoxicação.

TABELA II

Determinação da DL50 do veneno de c. d. terrificus. crotamino-positivo, de coloração

branca, em camundongos de 18 a 22 g. tratados, duas horas antes com 1,0 do próprio

veneno. Foi usado o mesmo veneno do ensaio anterior. Cada dose estava sempre

contida em 05 ml e era inoculada por ria intravenosa.

Tempo de

Doses em microgramas

DL50

observação

2,00

2,40

2,88

3,46

4,15

5,00

6,00

1/2 hora

0/6

1/0

1 hora

0/6

1/6

2/6

3/6

2 horas

0/6

2/6

5/6

6/6

24 horas

4/6

5/6

6/6

2,15 ( ig

48 horas

4/6

6/6

—

2,00 iig

134

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

ROLIM ROSA, R., FURRANETTO, S. M. P., SILRS VILLARROETj, M. & ZELANTE, F. —

Contribuição ao estudo da determinação da DL.50 do veneno de Crotalus durissus terrificus

(Laurenti, 1768) em Mus vnusculus Linnaeus, 1758.

Mem. Inst. Butantan, 37 : 131-137, 1973.

Comparando-se a DL50 da Tabela I (2, 70 |ig) com a Tabela II, nota-se

que houve um nítido agravamento do quadro tóxico, pois o valor da DL50

baixou a 2,0 |ig em 48 horas de observação. Não houve, pois, a dessen¬

sibilização induzida pela dose prévia de veneno e sim, ao contrário, pode¬

ríamos pensar numa somatória de efeitos.

Face aos resultados obtidos, decidimos verificar se a iucoagulabilidade san-

giiínea conseguida por D.P. de um veneno botrópico altamente coagulante,

alteraria a DL50 do veneno crotálico, visto Roseníeld et al (1970) referirem

que nos acidentes muito graves provocados por envenenamentos crotálicos

ocorre, dentre outras manifestações, iucoagulabilidade sangüínea. Ademais,

Furlanetto et al (1973b) demonstraram haver proteção cruzada entre os

venenos dos crotalideos do gênero Bothrops.

TABELA III

Determinação da DL50 do veneno de C. d. terrificus, crotamino-positivo, de coloração

branca, em camundongos de 18 a 22 g } tratados, duas horas antes, com 2 m g de

veneno de B. moojeni. Cada dose estava sempre contida em 0,5 ml e era inoculada

por via intravenosa.

Tempo de

Doses em microgramas

DL50

observação

2,00

2,40

2,88

3,46

4,15

5,00

6,00

1/2 hora

0/6

D/6

1 hora

0/6

2 horas

0/6

1/6

2/6

24 horas

1/6

2/6

4/6

5/6

6/6

2,64 |ig

48 horas

1/6

2/6

4/6

5/6

—

2,64 jtg

Os resultados da Tabela 111, confrontados com os da Tabela I, levam-nos

a acreditar que a D.P. do veneno de B. moojeni não interfere, em qualquer

sentido, na determinação da DL50 do veneno de C.d.terrificus.

DISCUSSÃO

A análise dos dados contidos na Tabela I, demonstra a possibilidade do

cálculo da DL50 de venenos crotálicos, crotamino-positivos, através do em¬

prego de camundongos, visto que, a inoculação por via intravenosa de doses

escalonadas do veneno, apresenta resultados qúe guardam íntima relação entre

a progressão das mesmas c seus efeitos.

Tais resultados foram por nós repetidamente confirmados, embora dei¬

xemos de apresentar os respectivos protocolos, por acreditarmos serem os mes¬

mos dispensáveis.

A inoculação prévia de 1,0 |tg do próprio veneno crotálico, por via in¬

travenosa (Tabela II), surpreendentemente não exerceu qualquer dessensibi-

135

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

TIOTjIM ROSA, R., FURLANETTO, S. M. P., STLRS VILRARROKL, M. & ZTORANTE, V. —

Contribuição ao estudo cia determinação da DLõo do veneno de Crotalus durissus tcrrijicus

(Laurenti, 17G8) cm Mus uiusculus Linnaeus, 1758.

Mem. Inst. liutuntun, .17: 131-137, 1973.

lização às doses maiores, conforme poderia ser esperado diante dos resultados

encontrados por Rocha e Silva (1951) que, trabalhando “in vitro”, mostrou

a possibilidade de dessensibilização da musculatura lisa provocada pelo pró¬

prio veneno. Contraria, também, o que poderia ser esperado pelos resultados

de Cheymol et al (1966) e Cheymol (1969) que, trabalhando “in situ”

constataram que a crotamina dessensibilizava a musculatura estriada, enervada

ou nevrectomisada, do rato.

Os nossos resultados mostram que não houve dessensibilização “in vivo”,

pela inoculação prévia de dose infra-letal do mesmo veneno, mas, ao contrário,

parece haver, realmente, um efeito somatório entre a dose prévia de 1,0 |tg e

as doses necessárias para a determinação da DL50 do veneno crotálico, crota-

mino-positivo, por nós utilizado.

Por outro lado, a injeção de doses infra-letais (D.P.) de veneno de B.

moojeni que, segundo Furlanetto et al (1973a e 1973b) leva a uma proteção

cruzada marcante à inoculação de doses elevadas de venenos das serpentes

do mesmo gênero, não interfere, em qualquer sentido, no valor da DL50 do

veneno crotálico, apezar da incoagulabilidade sangüínea provocada pela ci¬

tada D. P.

CONCLUSÕES

1. A DL50 do veneno de Crotcdus durissus terrificus (Laurenti, 1768),

de coloração branca, crotamino-positivo, pode ser determinada através de ino¬

culações, por via intravenosa, em camundongos Mus muscidus Linnaeus, 175S

— de 18 a 22 g, sem distinção de sexo.

2. A inoculação de 1,0 |ig de veneno crotálico, crotamino-positivo, em

camundongos, por via intravenosa, duas horas antes das doses escalonadas

do mesmo veneno, suficientes para a determinação de sua DL50, induz a uma

baixa do valor desta. Trata-se, ao que parece, de uma somatória de efeitos

entre a dose prévia e as doses finais.

3. Camundongos tratados com “dose preparatória” (D.P.), do veneno

de liothrops moojeni Hoje, 1965, não apresentam sensibilidade maior ou menor

ao veneno de C. d. terrificus, de coloração branca, crotamino-positivo, inocu¬

lados com doses escalonadas suficientes para propiciar o cálculo de sua DL50.

SUMMARY — The utilization of mice

— Mus musculus -— permits the ealcula-

tion of the LD50 of Crotalus duris¬

sus tcrrijicus venom (with crotamin) by

intravenous route.

The inoculation of sublethal doses,

two hours before, does not desensitize

the animal, as demonstrated by the

LD50 value.

The previous inoculation of a highly

coagulant venom (Bothrops moojeni) in

such doses that are enough to impede

the blood coagulation (2,0 pg), does not

interfere with the LD50 value of Cro¬

talus durissus terrificus.

VNITERMS — Crotalus venom; LDSO

of Crotalus venom.

136

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

Contribuiçilo ao estudo da determinação da DL50 do veneno de Crotalus durissus terrificus

( Laurenti, 171Í8) em Mus musculus Linnaeus, 1758.

Mem. Inst. Butantan, 37: 131-137, 1373.

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1959.

Recebido para publicação em 15.VI.73.

Aceito para publicação em 15.VIII.73.

137

cm

2 3

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10 11 12 13 14 15

Meni. Tnst. Butantan

37 : 139-148, 1973

ESTUDOS SOBRE A FIXAÇÃO ELETIVA E QUANTITATIVA DO

VENENO DE CROTALUS DURISSUS TERRIF1CUS NOS TECIDOS

NERVOSO, RENAL, HEPÁTICO E MUSCULAR DE

MUS-MUSCULUS Linnaeus, 1758.

WALTER BANCHER *

RAYMUNDO ROLIM ROSA**

REYNALDO SCHWINDT FURLANETTO ***

RESUMO ■ — Os autores demonstraram

uma fixação quantitativa do veneno de

Grotalus durissns terrificus sobre dife¬

rentes tecidos de Mus-musculus, em ter¬

mos de DL50 fixadas por grama de

tecido. Fixações quantitativas sobre os

tecidos nervoso, hepático, renal e mus¬

cular em ordem decrescente foram ob¬

servadas mostrando que provavelmente

este veneno exerça complexa ação nes¬

tas várias estruturas, durante o enve¬

nenamento experimental.

UNITERMOS — Fixação de veneno

crotálico sobre tecidos animais. Veneno

crotálico. Veneno de Crotalus durissns

terrificus.

INTRODUÇÃO

O veneno de Crotalus durissns terrificus tem sido descrito como possuidor

de uma intensa ação hemolítica, neurotóxica e nefrotóxica. São numerosos os

trabalhos demonstrando comprometimentos na indução do estímulo nervoso

provocados pelo envenenamento experimental, Houssay et al (1922) Houssay

& Hug (1928), Brazil (1954), Brazil et al (1966) Cheymol (1969 e 1971);

comprometimentos renais também têm sido descritos no decurso do envenena¬

mento crotálico tanto experimental como em acidentes humanos. Amorim e

Mello (1854) Amorim et al (1951-1960 e 1969) Rodrigues Lima (1963), Ha-

dler & Brazil (1966); alterações da pressão arterial, Vellard & Huidobro (1941)

e Brazil (1954) entre outros. Entretanto não encontramos dados na literatura

sobre a ação deste veneno no tecido hepático, bem como nada encontramos

* Professor Regente da disciplina de Microbiologia e Imunologia da Faculdade de Ciências

Médicas de Santos e Professor Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia

e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da USP.

** Diretor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan e Professor Assistente Doutor

dc Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da USP.

*** Ex-chefe da Secção de Imunoterapia do Instituto Butantan e atual Professor Catedrático

do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas

da USP.

Endereço para correspondência:

C.r. 43G5, S. Paulo, Brasil.

139

cm

2 3

Z

5 6

11 12 13 14 15

BANCHER, W., HOLIM ROSA, R., FURLAXETTO, R. S. — Estirlos sobre a fixaçiio eletiva

e quantitativa do veneno de Crotalus durissm trrrificvs nos tecidos nervoso, renal, hepático

e muscular de Mus musculus BInnaeus, 1758.

Jlfent. Inst. llutantan, 37: 139-M8, 1973.

que pudesse demonstrar de forma quantitativa a ação eletiva deste veneno

sobre os tccides nervoso, renal, hepático e muscular de camundongos. Tendo

em vista que as lesões e ações até aqui descritas na literatura, nada informam

de quantitativo sobre a fixação eletiva nos vários tecidos como parte de um

complexo da intoxicação experimental pelo envenenamento crotálico, deci¬

dimos, baseado nos moldes do trabalho clássico de Wassermann & Takaki

(1898) determinar em vários tecidos isolados qual a quantidade absoluta de

veneno fixado. Relações de fixações qualitativas entre a toxina botulínica e o

tecido cerebral foi demonstrada por Kempner & Schepilewski (1898) enquanto

que Myers (1899) demonstrava uma relação entre o veneno de Cobra e o

tecido supra-renal. Nos nossos trabalhos resolvemos estudar se realmente tam¬

bém o veneno de Crotalus durissus terrificus se fixava de forma diferente nos

vários tecidos estudados; em se confirmando a nossa suspeita, outros trabalhos

seguiriam procurando demonstrar por técnicas anátomopatológicas, associada

às técnicas de imunofluorescência, quais os diferentes sítios de fixação deste

veneno nos diferentes tecidos.

MATERIAL E MÉTODOS

Doze camundongos pesando entre 18 e 22 gramas eram mortos com

éter sulfúrico e imediatamente após eram removidos o encéfalo, o rim, o

fígado e os músculos esqueléticos da região das patas posteriores; cada tecido

coletado era colocado em placa de Petri estéril e a seguir rigorosamente pesado.

Uma quantidade próxima de 5,0 gramas de cada tecido era em seguida tritu¬

rada até ficar reduzida a um estado pastoso. Após esse processo era adicio¬

nado ao triturado obtido, uma quantidade variável de veneno crotálico, crota-

mina positivo, equivalente a um determinado número de DL50 conforme a

experiência em causa. A DL 50 do veneno de Crotalus durissus terrificus*

era calculada pelo método de Reed Muench (1938) de acordo ecm Rolim Rosa

et al (1973). No presente trabalho a DL50 do veneno era de 3,64 |tg.

O veneno era cuidadosamente misturado com o triturado de tecido e

levado à estufa a 37°C por 60 minutos com homogeinização do preparado a

cada 10 minutos. A seguir o material era centrifugado a 10.01)0 rpm durante

2 horas a 4°C para a separação do sobrenadante. Este era convenientemente di¬

luído a fim de se determinar o número de DL50 de veneno crotálico livre,

isto é, não fixadas ao tecido.

Experiências-piloto mostraram-nos que trabalhando-se com tecido nervoso

em velocidades inferiores de centrifugação, não ocorria o depósito total das

]logre (1965) (1971) demonstra que as cascavais encontradas no Brasil pertencem às

seguintes subespécies: Crotalus durissus terrificus (L»aurcnti — 17(18) — C. d. collilincatus

(Amaral — 1926) — C. d. cascavella (Wagler — 1824) — C. d. marajoensis (Hoge —

1965) e C. d. ruruivia (Hoge — 1965).

Segundo estas observações inferimos que, na realidade, os trabalhos nos quais consta

o nome Crotalus terrificus terrificus deveriam referir-se a outras subespécies ou mais

provavelmente, à mistura dos venenos de C. d. terrificus e C, d. collilincatus (Belluomini,

1972).

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SciELO

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BANCHER, W., ROL1M ROSA, II., FURLANETTO, R. S. — Estudos sobre a fixação eletiva

e quantitativa do veneno de Crotalus durissus tcrrificus nos tecidos nervoso, renal, hepático

e muscular de Mus musculus Lihnaeus, 1758.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 139-148, 1973.

células do tecido, e, assim sendo a inoculação do sobrenadante puro sem diluir,

por via venosa acarretava sempre a morte imediata do animal, seguramente

não pela ação do veneno, comprovada pela ausência total de sintomas de

envenenamento crotálico. Tendo-se em vista o pouco volume com que tra¬

balhávamos e a impossibilidade de filtração em membranas Millipore, resol¬

vemos, no caso de se utilizar tecido nervoso, inocular o sobrenadante puro por

via intraperitoneal. Nos demais casos, a inoculação era sempre feita por via

venosa.

RESULTADOS

Ensaios relativos a fixação quantitativa do veneno sobre o tecido encefálico.

TABELA I

Ao tecido encefálico recém obtido de camundongos de 18 a 22 g foram

adicionadas HO DL50 de veneno por grama de tecido e a seguir o prepa¬

rado foi incubado por 60 minutos a 37°C. Centrifugado a 10.000 rpm, o

sobrenadante obtido foi convenientemente diluido. tentando-se detectar a

quantidade de veneno livre inoculando-se em camundongos.

dil. sb.

v. inc

DL50

Observações

presun.

12h

24h

48'n

1:1

ip

5,0

0/6

1:25

V

2,0

0/6

1:5

V

1.0

0/6

1:10

V

0,5

0/6

Observações:

dil. sb. = diluição

do sobrenadante

feita

em solução

dc

NaCl 0,85%.

v. inc. = via de inoculação: IP = intraperitoneal.

V = via venosa.

DL50 presum. =

doses letais 50% presumivelmente pre¬

sentes no sobrenadante inoculado, se

não houvesse fixação do veneno pelo te¬

cido. O numerador indica o número de

animais mortos e o denominador o nú¬

mero do animais inoculados. O volume

inoculado foi sempre de 0,5 ml.

Estas observações são válidas para as demais tabelas.

Visto ter havido absorção total de 20 DL50 por grama de tecido, decidimos

trabalhar nas mesmas condições descritas na Tabela I, com quantidades maio¬

res de veneno por grama de tecido encefálico recém obtido. As tabelas de nú¬

meros II, III e IV mostram os resultados obtidos.

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cm

SciELO

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BANCHKR, W., ROLIM ROSA, líFURLANETTO, R. S. -— Estudos sobre a fixação eletiva

e quantitativa do veneno de Crotalns tliirissus terrificus nos tecidos nervoso, renal, hepático

e muscular de J/ií» musculus Linnaeus, 1758.

Mcni. Inst. Butantan, .17: 185-118, 1873.

TABELA II

Ao tecido encefálico triturado foram adicionadas 75 DL50 de veneno por

grania de tecido , tudo no mais conforme a Tabela I.

dil. sb.

v. inc.

DL50

Observações

presum.

12h

24h

48h

1:1

ip

12 5

0/6

1:1,25

ip

10,0

0/6

1:2,5

V

5,0

0/6

d/6

1:5

V

2,5

0/6

TABELA III

Ao tecido eyicefálico recém obtido e triturado foram adicionadas 270 DL^O

de veneno por <jrama de

tecido, tudo no mais conforme a Tabela I.

DL50

Observações

dil. sb.

v. inc.

presum.

12h

24h

4Sh

1:1

ip

45,0

3/6

6/6

—

1:2

V

22 5

0/6

1:3

• V

15,0

0/6

1:4

V

11,25

0/6

TABELA IV

Ao tecido encefálico recém obtido foram adicionadas 3G0

DL50 de •

veneno

por grama de tecido

, tudo no mais conforme a

Tabela I.

DL50

Observações

dil. sb.

v. inc.

presum.

12h

24h

48h

1:1

ip

60,0

4/6

6/6

—

1:1,25

ip

48,0

3/6

6/6

—

1:2,5

V

24,0

0/6

2/6

1:5

Y

12,0

0/6

Pelos resultados expostos nas Tabelas I, II, III e IV pode-se verificar que

nas nossas condições experimentais o encéfalo do camundongo é capaz de

fixar cerca de 24 DL50 de veneno de Crotalns durissus terrificus por grama de

tecido.

Ensaios sobre a fixação quantitativa do veneno sobre o tecido renal.

Conforme visto nos ensaios realizados com o encéfalo, foram também

necessárias várias tentativas com números variáveis de DL50 adicionadas a

142

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SciELO

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BAXCHKR, W., ROLIM ROSA, II., FURLANETTO, R. S. — Estuilos sobre a fixação eletiva

e quantitativa do veneno de Crotalus durissus terrificus nos tecidos nervoso, renal, hepático

e muscular de Mus musculus Rinnaeus, 1758.

Mem. Inst. Butantan, 37: 139-148, 1973.

cada grama de tecido renal a fim de se poder avaliar a sua capacidade de

fixação do veneno. Acreditando que seria fastidioso repetir todos os protocolos

preliminares, somente apresentaremos aqui a Tabela que nos forneceu o resul¬

tado desejado, isto é, aquela que permitiu a avaliação procurada.

TABELA V

A 50 g de tecido rena1 recém obtidos de camundongos de 18 a 22 g

foram adicionadas 360 DL50 de veneno por grama de tecido e tudo no

ma:s conforme a Tabela I.

dil. sb.

v. inc.

DL50

Observações

presum.

12h

24h

48h

1:2,5

V

24,0

4/6

6/6

'-

1:5

V

12,0

4/6

5/6

1:10

V

6,0

0/6

3/6

1:20

V

3,0

0/6

1/6

1:30

V

2,0

0/6

Pelos resultados expostos na Tabela V pode-se verificar que nas nossas

condições experimentais o rim do camundongo é capaz de fixar cerca de 6 DL50

de veneno de Crotalus chirissus terrificus, por grama 'de tecido.

Ensaios sobre a fixação quantitativa do veneno sobre o tecido muscular.

Pelas mesmas razões expostas no ensaio anterior, apresentamos aqui so¬

mente a tabela experimental que permitiu avaliar a fixação do veneno pelo te¬

cido muscular.

TABELA VI

A 5,0 g de tecido muscular recém obtido de camundongos de 18 a 22 g

foram adicionadas 360 DL50 de veneno por grama de tecido e tudo no

mais conforme a Tabela I.

DL50

Observações

presum.

12h

24h

48h

1:2,5

V

24,0

6/6

_

1:5

V

12,0

6/6

—

1:10

V

6 0

5/6

6/6

—

1,20

V

3,0

4/6

5/6

1:30

V

2,0

0/6

3/6

3/0

Pelos resultados expostos na Tabela VI pode-se verificar que, nas nossas

condições experimentais, o tecido muscular de camundongo é capaz de fix.ir

ao redor de 2 DL50 de veneno de Crotalus durissus terrificus, por grama de

tecido.

1-43

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

BANCHER, W., ROLIM IlOSA, R., FURLANETTO, R. S. — Estudos sobre a fixação eletiva

e quantitativa do veneno de Crotahis durissus terrificus nos tecidos nervoso, renal, hepático

e muscular de Mus niusculus Linnaeus, 1758.

Mem. Inst. Butantan, 37: 130-148, 1973.

Ensaios sobre a fixação quantitativa do veneno sobre o tecido hepático.

Pelas mesmas razões expostas no ensaio sobre a fixação quantitativa do

veneno sobro o tecido renal apresentamos aqui somente a tabela experimental

que permitiu avaliar a fixação do veneno pelo tecido hepático.

TABELA VII

A 5,0 g de tecido hepático recém obtido de camundongos de 18 a 22 g

foram adicionadas 270 DL50 de veneno por grama de tecido e tudo no

mais conforme a Tabela I.

dil. sb.

v. inc.

DL50

Observações

presum.

12h

24h

48h

1:1

V

45.0

6/6

—

_

1:2

V

22,5

5/6

6/6

—

1:3

V

15,0

1/6

4/6

1:4

V

11,25

0/6

Verifica-Se aqui que nas nossas condições experimentais, o tecido hepático

de camundongo é capaz de fixar ao redor de 15 DL50 de veneno de Crotahis

clarissas terríficas, por grama de tecido.

Entendemos ser conveniente apresentar a Tabela VIII reunindo os resul¬

tados dos vários ensaios relativos à fixação eletiva quantitativa do veneno de

Crotahis clarissas terríficas sobre os diferentes tecidos por nós experimentados.

TABELA VIII

Comparação entre a fixação quantitativa do veneno sobre os tecidos

nervoso, renal, hepático e muscular de camundongos.

Tecido

Número de DL50 fixadas

grama do

aproximadamente por

tecido

nervoso

24

renal

6

hepático

15

muscular

.2

DISCUSSÃO

Parece ser esta a primeira vez que se demonstra quantitativamente haver

fixação do veneno crotálico em vários tecidos do camundongo. Em toda a li¬

teratura consultada são descritas lesões anatomopatológicas sobretudo no te¬

cido renal; não conhecemos ainda descrições anatomopatológicas de lesões do

tecido nervoso que evidentemente devem existir face a sintomatologia do en-

144

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

e quantitativa do veneno de Crotalns dtirissus tcrrificua nos tecidos nervoso, renal, hepático

o muscular de Mus viusculus lânnaeus, 1758.

Mem. Inst. Butantan, 57: 139-148, 1973.

venenamento (Rosenfeld 1969 e 1971) e face a observação da Tabela VIII.

Esta tabela mostra uma maior afinidade do veneno para o tecido nervoso do

que pelo tecido renal; tal resultado não se contrapõe aos trabalhos de Amorim

& Mello (1954) e Amorim et al. (1951-1960 e 1969) visto que estes autores

encontraram em casos humanos e experimentais, lesões renais, atribuindo a

ocorrência da morte como uma conseqüência de síndrome do nefron inter¬

mediário. Face aos nossos resultados, podemos nesta altura dos nossos conheci¬

mentos, pressupor que as lesões do encétalo devam contribuir também de

modo preponderante no evento mortal.

Segundo Cheymol et al. (1969), a ação do veneno contendo crotamina

sobre a fibra muscular, produzindo sua contração, seria devida a uma despo¬

larização direta. Este efeito é taquifilático. O veneno sem crotamina produ-

durisstis terrificus, por via venosa, em camundongos ( Mus-muscuhis) de 18

ziria um bloqueio neuromuscular induzindo lentamente a uma ação irreversí¬

vel. Este efeito seria devido principalmente à ação direta a fibra muscular

e também, quando são usadas grandes doses de veneno, a um bloqueio dos

receptores específicos da membrana post-sináptica.

Cheymol et al. (1971), trabalhando com camundongos, galinhas e ratos,

verificaram que o veneno “in natura” é mais tóxico que a crotamina pro¬

duzindo contrações típicas e uma paralisia no camundongo e, somente paralisia

em galinhas. A crotamina induz a contrações no camundongo mas não produz

efeitos em galinhas. Em preparações neuro musculares em galinhas “in situ” o

veneno “in natura” leva lentamente a uma paralisia irreversível. A crotamina,

nas mesmas condições, não leva nem à paralisia nem à contração. Nos ratos,

em preparações neuromusculares “in situ”, o veneno “in natura” e a crotamina

mostraram efeitos semelhantes. Contrações eram conseguidas com altas doses,

geralmente seguidas por uma paralisia reversível da fibra muscular. No rato, a

ação da crotamina situar-se-ia ao nível da membrana da fibra muscular. Uma

mudança na permeabilidade dos íons Ca ou Na provocariam contrações. Estas

contrações induziriam a um efluxo do íon K responsável pela segunda fase da

ação crotamínica.

Nossos resultados obtidos com tecido muscular não nos permitem afirmar,

pela pequena fixação eletiva encontrada nesse tecido, se tal fixação se deve

realmente ao tecido muscular ou a sua inervação, que não foi por nós removida.

Não encontramos dados na literatura sobre a ação do veneno crotálico no

tecido hepático. Os resultados das Tabelas VII e VIII nos permite supor que

deva haver grande comprometimento hepático no envenenamento crotálico,

talvez até mesmo maior do que aqueles observados no parênquima renal.

Trabalho de Bancher (1972) mostra ser possível, detectar por técnicas de

imunofluorescência zonas de fixação eletiva do veneno crotálico no encéfalo

e no parênquima renal.

Resultados ainda não publicados e obtidos por Bancher, Rohm Rosa e

Furlanetto (1972), após inoculações de doses elevadas de veneno de Crotalus

a 22 g, que provocam a morte do animal em menos de quatro horas, com sin¬

tomatologia do envenenamento, revelaram, através de técnicas de imunofluo-

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11 12 13 14 15

BANCHER, W„ HOLIM ROSA, lí., FURLAXETTO, H. S. — Mstulos .sobre a fixarão eletiva

e quantitativa do veneno fie Crotalus tlurlssus tcnificus nos tecidos nervoso, renal, hepático

•e muscular de Mus inusculus Llnnaeus, 1758.

Mem. Inst. lSutantan, 37: 139-148, 1973.

rescência, zonas cie fixação cio veneno em diferentes áreas cio encéfalo e au¬

sência cie zonas de fluorescência no parênquima renal. Este fato experimental

sugere a hipótese de que o veneno, na dependência da dose inoculada, exerça

uma ação neurotóxica muito intensa e cpie, por si só, seria capaz de levar o

animal à morte, independentemente de qualquer lesão renal.

Atualmente prosseguimos na mesma linha de pesquisa procurando evi¬

denciar pelas técnicas anátomopatológicas e de imunofluorescência quais os

diferentes sítios de fixação do veneno nos vários tecidos aqui estudados.

CONCLUSÕES

Considerando-se os resultados obtidos nas condições de nosso trabalho,

acreditamos ser lícito concluir que:

1. O tecido nervoso do camundongo ( Mus-musculus ) tem elevada ca¬

pacidade de fixar o veneno de Crotalus ãttrissus terrificus, crotamino

positivo, ao redor de 24 DL50 por grama de tecido.

2. A fixação daquele veneno pelo tecido renal é em termos de DL

50 cerca de quatro vezes menor daquela apresentada pelo tecido

nervoso.

3.. O tecido hepático revelou-se capaz de fixar mais veneno do que o

tecido renal, isto é, cerca de 15 DL50 por grama de tecido.

4. Parece que o tecido muscular pode fixar relativamente pequenas quan¬

tidades de veneno.

SUMMARY — The authors showecl a

quantitativo fixation of Crotalus duris-

sus terrificus venom on different tissues

of Mus-musculus by establishing the

quantity of LD50 fixed by each gram of

tissue.

Quantitativo fixations were observecl

on nervous, hepatic, renal, and mus¬

cular tissues in decreasing order show-

ing a probable complex action of

this venom on these various struetures

during the experimental poisoning.

UNITERMS — Fixation of Crotalus ve¬

nom on animais’ tissues. Crotalus ve-

nonm. Crotalus durissus terrif icus venom.

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Recebido para publicação em 1S.VI.73.

Aceito para publicação em 15.VIII.73.

148

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10 11 12 13 14 15

Mem. Inst. Butantan

.;7 : 140-232. 1073

LESÕES DA MEDULA ESPINHAL NO MEGACÓLON

RUY PIAZZA

Soção dc Anatomia Patológica

Instituto Butantan

RESUMO — O A. estudou as medulas

de 21 casos de megacólon, mediante

cortes semi-seriados, e verificou lesões

disgenéticas em 18 casos, lesões adqui¬

ridas degenerativas em 2 e lesões com¬

binadas em um.

Nos dois casos com lesões adquiri¬

das, foram encontradas atrofias dos

núcleos motores simpáticos (lesões se¬

cundárias); em 15 dos 19 casos de le¬

sões medulares disgenéticas (incluindo

o de lesões combinadas) foram verifi¬

cadas aplasia, hipoplasia ou displasia

dos núcleos motores simpáticos (lesões

primárias); nos demais casos, as alte¬

rações de desenvolvimento não permi¬

tiram a identificação desses mesmos

núcleos.

O A. considera tais achados de im¬

portância no mecanismo patogênico do

megacólon, uma vez que a ligação entro

medula e intestino é estabelecida pelos

dois neurônios motores simpáticos peri¬

féricos e pelo neurônio sensitivo sim¬

pático, também periférico.

Tecendo considerações de ordem ana¬

tômica, o A. conclui que o estudo da

medula é insuficiente para se avaliar

a participação de todos os centros e

núcleos motores simpáticos nesse meca¬

nismo, e considera imprescindível o es¬

tudo sistemático também do tronco ce¬

rebral, particularmente do bulbo, onde

se localiza o núcleo cárdio-pneumo-en-

térico.

No decorrer do trabalho, tece criticas

aos trabalhos de Koeberle e cols., que

atribuem à doença de Chagas a etiolo¬

gia das enteromegalias.

UNITERMOS — Megacólon; alterações

de desenvolvimento medulares; disge-

nesias medulares; Sistema Nervoso Au¬

tônomo do setor abdominal.

INTRODUÇÃO

As enteromegalias — megaesôfago, megaestômago, megacólon e outras

— constituem manifestações morfológicas dc importante capítulo cia patologia

do aparelho digestivo, cpie se acompanham de não menos conspícuas mani¬

festações funcionais, conhecidas por acalásia dos esfíncteres ou aperistalse.

Considerável número de pesquisadores estrangeiros e nacionais, desde

quando surgiram as primeiras descrições da doença enteromegálica, ao que

parece no século XVII, tentaram estabelecer sua causa e esclarecer seu meca¬

nismo. Entre nós, Marcos Arruda, Bitençourt Rodrigues, Sérgio Meira, Ignacio

de Rezende, Pedro de Rezende, Carlos Chagas, Pereira Barreto, Enjolras Vam-

pré, Arthur Neiva, Gaspar Vianna, Rafael Parisi, Eduardo Etzel, Almeida

Prado, Moacyr Amorim, Alipio Corrêa Nettc, Edmundo Vasconcelos e Pedreira

de Freitas, foram alguns dos autores que estudaram e pesquisaram o assunto,

desde 1895 até hoje.

LCndereço para correspondência :

Av. Paulista, 25 S4 / apto. 102

01310 São Paulo, Brasil.

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PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inat. Butantan, 37 : 140-232, 1973.

Das numerosas explicações patogênicas aventadas, que variaram desde as

de natureza mecanicista até às cpie classificaram a doença entre as psicosso¬

máticas, a hipótese do obstáculo funcional (acalásia do esfíncter) foi o

que prevaleceu até que alguns trabalhos se fixaram no estudo dos plexos intra-

murais (sob influência do trabalho de I1IRSC1ISPRUNG 8 sobre o megacólon

congênito), assinalando neles lesões degenerativas, diminuição do número de

células ganglionares e, finalmente, lesões inflamatórias. As opiniões divergiram

sobre a lesão inicial, se degenerativa ou inflamatória, e se a localização era

exclusivamente esfincteriana (produzindo a acalásia) ou se se extendia a todo

o plexo intramural (produzindo a aperistalse, nome proposto por BRASIL 3 ).

Entre nós, até 1955, o trabalho de maior reprecussão nesse campo foi o dc

AMORIM e CORRÊA NETTO 1 , que concluíram que todo o plexo mioentérico

de Auerbach estava afetado, apesar da enteromegalia ser apenas de localização

esofageana e retal, no caso por eles estudado.

Mas, em 1955, vem à luz o trabalho de KOEBERLE e NADOR 9 em que

encararam “o megaesôfago endêmico no Brasil como possuindo uma etiologia

própria, dentro do conjunto geral do megaesôfago ou da dilatação esofágica

idiopática”, e concluíram que o megaesôfago brasileiro representa manifestação

da doença de Chagas, idéia que fôra preliminarmente aventada por CHAGAS 5

em 1916 e por MINEIRO 20 , em 1948, no 2.° Congresso Médico do Triângulo

Mineiro e l.° do Brasil Central (trabalho publicado 10 anos depois).

Inda que a espíritos mais lúcidos, como JA1RO RAMOS- 2 , esta hipótese

não convenceu por inteiro, pois “se de um lado existem indicações que nos

orientam para admitir que a doença de Chagas é responsável pelos síndromes

cardíaco e digestivo, ou melhor, responsável pela miocardite e pelos distúrbios

dos órgãos ôcos musculares que se caracterizam pelo prefixo mega; de outro

lado há argumentos que contrariam este ponto de vista e que parecem indi¬

car concomitância de duas doenças com etiologia diferente”, de um modo

geral a etiologia chagásica das enteromegalias prevaleceu na opinião de muitos,

e numerosas foram as publicações nacionais e estrangeiras em seu apôio.

A obra de KOEBERLE 9 10 ’ n > 12 13 > desenvolveu-se em duas frentes: 1.

explicação patogênica; 2. comparação com o megaesôfago europeu.

1. Explicação patogênica

Para explicar a patogênese do megaesôfago, isto é, o mecanismo que des¬

de a infecção chagásica leva à enteromegalia, criou um “novo conceito pato-

genético” sobre a moléstia de Chagas, pelo qual devemos distinguir duas en¬

tidades mórbidas bem distintas entre si:

1. Moléstia de Chagas propriamente dita.

2. Seqüelas ou “patias” chagásicas.

KOEBERLE 12 atribui as “patias” chagásicas à “destruição das células gan¬

glionares do sistema nervoso central e/ou periférico” e diz que esse constitui

“o elo perdido” na patogenia da moléstia de Chagas (referindo-se à conclusão

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PIAZZAp K. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Man. Inat. Butantan, J7 : 149-232, 1973.

a quc PRADO 21 chegara, no l.° Congresso Internacional Sobre a Doença de

Chagas, realizado em julho de 1959, no Rio de janeiro, quando abordou os

diversos mecanismos patogênicos da doença).

Apresenta como justificativa para incluir o S.N. Central na sua assertiva,

apenas: a) uma frase de Gaspar Vianna em que este assevera que observou

nele “em torno dos pseudocistos rotos (de leishmanias °) reação grande, na

qual não raro perecem células nervosas”; b) uma afirmativa própria de que

“esta neuroniólise é observada após a desintegração das leishmanias, o que

indica libertação de uma substância neurotóxica ou neurolítica dos parasitas”,

que ilustra por uma figura de um corte de cerebelo em pequeno aumento em

que aparecem, no seu dizer, “pseudo-cistos rotos, propagação das leishmanias

para a camada das células de Purkinje. Notando-se na área de propagação das

leishmanias, degeneração e desaparecimento das células ganglionares de Pur¬

kinje”. Finaliza, porém, explicando que “Como existem apenas dois trabalhos

quantitativos sobre a diminuição numérica dos neurônios do S. N. Central em

camondongos e ratos deixaremos de entrar em pormenores sobre as neuropa-

tias centrais do homem”.

De modo que o próprio A. se incumbe de subtrair de sua explicação inicial

(quando atribui as “patias” chagásicas à destruição das células ganglionares

do S. N. Central e/ou Periférico) a parte referente ao S. N. Central.

Em outro artigo anterior 10 , já houvera afirmado: “É inútil procurar lesões

à distância, quando o comprometimento nervoso periférico local mostra desa¬

parecimento”.

Com efeito, todo o trabalho de KOEBERLE gira em torno da inervação

vegetativa da parede do tubo digestório e é através desse estudo que esta¬

belece o mecanismo patogênico das chamadas “enteromegalias chagásicas” que

atribui à “denervação uniforme em toda a extensão do órgão que ultrapassa

de 90baseado no estudo de 30 casos de megaesôfago “brasileiros” e em 15

baseado no estudo de 30 casos de megaesôfago

« Mm

europeus u .

Sua conclusão sobre o mecanismo patogênico é que “essa redução (neu-

ronal da parede) ° constitui o substrato anatômico da aperistalsis do esôfago,

que pode resultar em dilatação e hipertrofia do órgão”.

Essa “desnervação” seria uma “patia” chagásica, uma seqüela e não neces¬

sariamente uma forma de doença de Chagas ativa, aguda ou crônica. Apenas

conseqüência das lesões neuronais produzidas na fase aguda pelas “toxinas”

das leishmanias.

Da desnervação da parede, ao mega, os passos sucessivos seriam: a) lú-

perexcitabilidade vagai explicada pela desnervação (para o que invoca a lei

de Cannon); b) aperistalse; c) dilatação do órgão por estase do bolo alimen¬

tar; d) hipertrofia secundária da musculatura por hiperdistensão da mesma.

2. Comparação com o megaesôfago europeu

A comparação com o megaesôfago europeu, que se impunha desde que,

em colaboração com NADOR 9 publicara o primeiro trabalho sobre o me^aesô-

fago “brasileiro”, fez-se apenas no plano patogênico.

O parêntese ê meu.

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PTAZZA, U. — Lesões da medula espinhal no mcgacólon.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 14i» -232 , 11)73.

No estudo dos 30 casos de xnegaesôfagos “brasileiros” e em 15 de europeus

encontrou desnervação de igual magnitude (9G%), conforme já referi, “em

toda a extensão do órgão” e essa redução o leva a concluir que a mesma pa-

togênese explica o megaesôfago brasileiro e o europeu, mas, se por um lado

considera, naquele, a desnervação causada pela doença de Chagas, neste, a

considera de causa desconhecida. A respeito, já escrevera anteriormente 10 :

“Torna-se claro, portanto, que a doença de Chagas não é a única afecção que

tem possibilidade de produzir um “mega”. Qualquer outra doença que com¬

prometa a periferia neurovegetativa, seja sistematizada ou localizada, pode

levar à mesma conseqüência, isto é, produzir dilatação dos órgãos musculares

ocos, através de lesões dos plexos intramurais”.

Apesar desta judiciosa consideração de 1956, se generalizou entre nós a

opinião que toda enteromegalia era de natureza chagásica e as expressões me¬

gaesôfago chagásico, megacólon chagásico etc. se tornaram lugares comuns da

terminologia médica, para o que contribuiu o próprio autor, que no trabalho

de 1963 12 acentua: “o megaesôfago endêmico constitui uma síndrome de etiolo¬

gia e patogenia definida no Brasil”.

Aos poucos, o conceito estendeu-se aos países vizinhos e não faltaram

contribuições estrangeiras que vieram em seu apôio. Por exemplo, ATIAS,

MACKAY, CAMPERO, PARROCCHIA, JARPA, PIZARRO e SILVA 2 afirmam

peremptoriamente: “las comunicaciones brasileiras sobre este tema se han mul¬

tiplicado en los últimos anos, no dejando eludas de la relacion entre megaforma-

ciones y enfermedad de Chagas”.

Também na Inglaterra. SMITH- 5 em seu livro “The Neuropathology of the

Alimentary Tract” escreve: “A condition clinically identical with achalasia of the

cardia, occurs in Chaga’s disease associatecl with destruction of the myenteric

plexus by Trypanosoma cruzi” (note-se que nunca foi demonstrada a “destruc¬

tion of the myenteric plexus by Trypanosoma cruzi”).

Crítica ao conceito de enteromegalia chagásica

Uma análise cuidadosa do problema e das provas apresentadas, não sa¬

tisfaz o espírito de quem a ela se abalançar:

Vimos que as provas apresentadas de que a doença de Chagas produz

destruição das células ganglionares do S. N. Central são irrelevantes e o pró¬

prio KOEBERLE as deixa de lado, preferindo não entrar em “pormenores

sobre as neuropatias centrais do homem”, achando mesmo que “é inútil pro¬

curar lesões à distância, quando o comprometimento nervoso periférico local

mostra desaparecimento”.

A explicação baseia-se no estudo das paredes dos órgãos tubulares, pelo

qual chega à conclusão que as mesmas estão “desnervadas” — diminuição do

número de neurônios intra-murais que, comparado ao dos órgãos normais, seria

da ordem de 90%.

Para chegar a essa conclusão KOEBERLE 12 fez a contagem neuronal em:

33 esôfagos normais do Instituto Patológico de Viena; 30 esôfagos sem hiper-

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trofia ou dilatações aparentes que chama “chagásicos” porque de portadores

da doença de Chagas; 30 megaesôfagos que chama “chagásicos” por igual

motivo; 15 megaesôfagos que chama “europeus” porque de europeus (e que

pressupõe não serem “chagásicos”).

Êsse estudo merece algumas críticas:

1. desprezou as células do plexo sub-mucoso de Meissner;

não refere o tempo de fixação do material, o que interfere no grau dc

retração do tecido;

3. de um anel de 5-6mm de altura, retirado ao nível da ampola esofá¬

gica, em cada caso fez 140 cortes transversais de 7 micra de espessura, montou

e corou cada 7.° corte e nestes é que fez a contagem neuronal do plexo mio-

entérico; portanto, 20 cortes de cada órgão e apenas na ampola esofágica,

perfazendo um total de apenas 140 micra de altura em cada caso, no espaço

de lmm, em um órgão que, normalmente, tem cerca de 25 cm de comprimento

e que, em caso de megaesôfago, poderá ter muito mais do que isso;

4. não refere nos casos de megaesôfago o volume dos órgãos estudados

ou a área total da parede e, assim, não refere os números obtidos a uma

unidade que permita comparar os resultados (é evidente que conforme a dila¬

tação do órgão o mesmo número normal de neurônios distribue-se por super¬

fícies diferentes);

5. a inclusão foi feita em parafina, método desaconselhável para ava¬

liação quantitativa de qualquer componente tecidual, sobretudo tecido ner¬

voso, dadas as variações da retração dos tecidos em cada caso, por ser um

método “a quente”.

Em outro estudo, fez, pela mesma técnica (merecedora de reparos) a

contagem neuronal do “esôfago terminal” (1/3 inferior) em sete níveis dife¬

rentes de 10 casos de megaesôfagos “chagásicos” e 2 “europeus”.

Finalmente, tentou estabelecer um padrão numérico estudando tres esô¬

fagos normais de 24 cm. de comprimento, cortados em 39 aneis com um inter¬

valo de 5 mm entre eles. De cada anel estudou 20 cortes de 7 micra, na altura

de 1 mm; também aqui não estabeleceu um padrão volumétrico ou de super¬

fície que permitisse comparar os números obtidos com os dos casos de mega¬

esôfago (a isso se destinava evidentemente o estudo).

6. explica a suposta destruição desses neurônios dos plexos intra-murais

do tubo digestório por uma toxina que as leishmanias liberariam ao serem des¬

truídas, mas não traz nenhuma prova da existência dessa toxina.

Chama “desnervação vagai” ao processo e, então, invoca a “lei da desner-

vação de Cannon” para explicar a hiperexeitabilidade das megaformações di-

gestórias aos agentes colinérgicos (VIEIRA e GODOY- 7 ). Essa desnervação

vagai encontrou aceitação entre autores como REZENDE, LAUAR e OLIVEI¬

RA- 4 para quem “As experiências de KRAMEll e 1NGELFINGER e de

BRASIL tornaram patente que o esôfago na síndrome conhecida por acalásia

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FIAZZA, li. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Meni. Iust. Butantan, 37: 149-232, 1973.

do cárdia, cardiospasmo ou megaesôfago, acha-se bloqueado em relação à

inervação vagai”.

Vejamos se essa “lei” pode ser invocada, no caso:

A “lei de Cannon” 4 diz que: “Quando de uma série de neurônios aferen¬

tes, uma unidade é destruída, desenvolve-se acentuação da irritabilidade aos

agentes químicos na estrutura ou estruturas isoladas, sendo máximo o efeito

na parte diretamente desnervada”. A respeito da sensibilização das células

nervosas diz: “Os neurônios finais do sistema simpático, com células gangliona¬

res nos gânglios do sistema, recebem impulsos das fibras pré-ganglionares.

Nesta junção neuro-neuronal a acetilcolina serve de mediadora da transmissão,

assim como o faz ao nível mio-neural nos músculos esqueléticos. Com efeito,

os eventos que ocorrem nessas duas sinapses são sob muitos aspectos acentua-

damente parecidos (cf. Rosenblueth e Cannon). É razoável, portanto, consi¬

derar os últimos neurônios simpáticos como sendo inervados pelos penúltimos.

Surgiu, como decorrência, a questão: se as fibras pré-ganglionares são corta¬

das, os neurônios finais (pós-ganglionares) ficam sensibilizados aos estímulos

químicos?” Após longa dissertação, conclui que os neurônios pós-ganglionares,

carentes de fibras pré-ganglionares por secção ou degeneração, tornam-se sen¬

sibilizados igualmente ao agente estimulador natural, a acetilcolina (por falta

de acetilcolinesterase). Portanto, a lei da desnervação de Cannon, pode ser

invocada tanto na desnervação do plexo intramural como dos gânglios da

cadeia para e pré-vertebral. O efeito final, sobre a musculatura do intestino é

o mesmo.

Mas os experimentos de Cannon não foram feitos pela destruição dos

plexos intramurais, se não que de fibras identificadas, ortossimpáticas ou

parassimpáticas, que chegam aos gânglios simpáticos, e nunca de ambas con¬

comitantemente, que é no que implica a lesão plexular.

Com efeito, ainda hoje se discute se as células ganglionares desses plexos

são ou não exclusivamente parassimpáticas 6 ’ H > 15 * 16 > 23> 25> 2S , mas o que não

se discute é que as fibras ortossimpáticas, provenientes das porções gástricas

e mesentéricas do plexo celíaco, passam pelos plexos de Auerbach (e de Meiss-

ner) e contribuem para a formação da rede plexular. Até hoje pouco se sabe

acerca das relações sinápticas que se estabelecem nos gânglios destes plexos.

Os conhecimentos atuais pouco acrescentaram em relação aos conceitos de

LANGLEY 15 ’ 16 do começo do século, para quem as fibras pós-ganglionares dos

gânglios celíacos passam por esse plexo sem interrupção e terminam nas ca¬

madas musculares e glândulas do tracto gastro-intestinal e as fibras pré-gan¬

glionares do vago é que provavelmente terminam em relações sinápticas com

células destes pequenos gânglios, cujos axônins representariam fibras pós-gan¬

glionares vagais que chegam à musculatura lisa e às glândulas.

Mas, mesmo que se admita que os neurônios desses plexos sejam vagais,

a destruição dos gânglios plexulares não pode ser considerada de efeitos ele¬

tivos para o vago. No dizer de KOEBERLE, a inflamação chagásica destrói

o plexo e, portanto, seus neurônios vagais. Mas, e as fibras ortossimpáticas

que por eles passam (mesmo que aí não façam sinapse)?

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PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

É evidente que, com a destruição dos gânglios dos plexos mioentéricos,

haverá sempre destruição de componentes orto e parassimpáticos, o que torna

aleatória qualquer argumentação que visa a provar o predomínio de um ou

de outro cios dois setores simpáticos. Para isto, é necessário que se argumente

com lesões de células ou de fibras pré-plexulares especificamente orto ou pa-

rassimpáticas.

É verdade caie KOEBEULE afirmou, conforme referi, que “qualquer

doença que comprometa a periferia neurovegetativa, seja sistematizada ou

localizada pode... produzir dilatação dos órgãos musculares ocos” e, por

periferia neurovegetativa, entende-se a eadeia neurônio medulo-ganglionar

(pré-ganglionar), gânglio-visceral (pós-ganglionar) e plexos intra-murais. Mas,

quando procura provar a hipótese, faz menção única e exclusivamente aos

neurônios dos gânglios plexulares e quando afirma cpie “Ê inútil procurar

lesões à distância quando o comprometimento nervoso periférico local mostra

desaparecimento, se refere aos mesmos plexos.

Apesar de KOEBEULE ter estabelecido a comparação entre o megaesô-

fago brasileiro e o europeu apenas no plano patogenético, não resta dúvida

que era sua obrigação, uma vez que. ao megaesôfago “brasileiro” vinculou a

doença de Chagas, comparar ambos no plano etiológico. Limitou-se, entre¬

tanto, a considerar a forma alienígena “de causa desconhecida”.

Esse modo de encarar o problema aberra dos princípios da Patologia, pois:

ou o Trypanosoma cruzi é o agente etiológico determinante das megafor-

rnações e nesse caso não há como distinguir um megaesofago brasileiro de um

europeu;

ou o Trypanosoma cruzi é apenas agente etiológico coadjuvante das me-

gaformações e não há porque distinguir um megaesôfago brasileiro de um eu¬

ropeu, desde que o agente etiológico determinante poderá ser o mesmo.

Não julgo, portanto, a teoria de KOEBEULE e NADOU satisfatória para

explicar a etiologia ou a patogenia dos megas .

Outro autor nacional que estudou o problema das enteromegalias foi

MAFFEI que, em algumas publicações e em numerosas aulas, palestras e

conferências, divulgou a sua concepção, de que as megaformações torácicas,

abdominais e pélvicas dos órgãos ocos musculares são manifestações de al¬

terações de desenvolvimento medulares, que se manifestam radiológicamente

por “spina bifida” oculta.

Eín 1951 17 simplesmente diz que entre outros sintomas da “spina bifida”

oculta está o megacólon e o megaureter.

Em 1954 18 conclui um seu trabalho dizendo: “Os megas” não constituem

simples acidente local do esôfago, do colon ou do ureter etc., mas um processo

mais geral do organismo consistindo ern uma alteração do desenvolvimento

embrionário, não só do órgão mas também da medula espinhal ou de suas

raízes e, portanto, um capítulo da Patologia Constitucional”.

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riAZZA, lí. — I^esõea da medula espinhal no megacólon.

Mcm. List. Sutantan, ú’7 : 140-232, 1973.

Para explicar o mecanismo patogênico refere que “a fisiologia nos ensina

que a progressão do conteúdo do tubo digestivo se faz por meio de ondas

peristálticas constituídas pela sucessão de contrações da túnica muscular em

um segmento e relaxamento do segmento imediato. Esse mecanismo se rea¬

liza automaticamente pela ação do sistema nervoso: as contrações são deter¬

minadas pelo sistema nervoso autônomo representado não só pelos plexos

existentes na parede do próprio tubo digestivo como também pelos gânglios

do sistema simpático que, por sua vez, estão em conexão com o eixo cérebro-

espinhal. O relaxamento dos diferentes segmentos é determinado pelo sistema

nervoso central cujos centros estão escalonados desde o bulbo até a medula

sagrada. Desse modo, enquanto um segmento recebe o estímulo simpático e

se contrai, o segmento imediato recebe o estímulo do sistema nervoso central,

relaxando-se e assim por diante, resultando a progressão do conteúdo. Por

conseguinte, se nos megas o segmento abaixo da dilatação permanece fechado

é porque lhe falta o mecanismo de abertura, dependente do sistema nervoso

central”.

Em 1967' 9 escreve: “Já vimos que estas anomalias (os megas) estão rela¬

cionados à spina bifida oculta, fato este compreensível sabendo-se que no

desenvolvimento embrionário a extremidade caudal da medula se continua

com o intestino primitivo, constituindo o canal neuro-entérico..

Apesar da carência de base na Anatomia do Sistema Nervoso Autônomo

e na Embriologia do Sistema Neural de cada uma das hipóteses patogênicas

aventadas por MAFFEI, apesar do A. nunca ter apresentado dados estatísticos

para dizer em quantas observações se baseava seu conceito; apesar de publicar

apenas algumas raras fotografias de cortes de medulas mal-formadas, o que evi¬

denciava não ter êle submetido sua hipótese aos rigores de um estudo sistemá¬

tico, resolvi pesquisar essa teoria não aventada por outros autores, uma vez que

os centros nervosos neuro-vegetativos (orto e parassimpáticos) se localizam

no eixo cérebro-espinhal (v. fig. 69), desde o hipotálamo à medula sagrada,

constituídos pela substância acinzenta peri-ependimária que reveste o 3.° ven¬

trículo, o aquedueto de Sylvius, o 4.° ventírculo e todo o canal do epêndina,

e que a sua parte periférica motora se inicia por núcleos do tronco cerebral

e da medula. Era, pois, possível que alterações de desenvolvimento medulares

pudessem estar implicadas em um mecanismo patogênico do qual evidente¬

mente participa o S. N. Autônomo, que levasse ao aparecimento das megafor-

mações dos órgãos tubulares digestivos, desde que as tentativas feitas pelo

estudo dos componentes intramurais desse mesmo Sistema não havia, a meu

ver, esclarecido o assunto.

Assim, estudei de maneira sistemática as medulas dos portadores

de megacólon por mim autopsiados no Hospital Psiquiátrico Juqueri.

Inicialmente, o estudo destinou-se a verificar genericamente a existência

de alterações de desenvolvimento. No decorrer dele observei flagrantes lesões

disgenéticas e adquiridas dos centros simpáticos medulares e, ao final,

revi todo o material para me deter no estudo de tais centros. Os resultados

dessa revisão constituíram-se em contribuição original ao esclarecimento da

etiologia e da patogenia da doença.

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PIAZZA, II. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mcm. Inst. Butantan , 37: 149-232, 1973.

MATERIAL E MÉTODO

1. O material constou das medulas espinhais de 21 casos de megacólon.

2. As medulas, após fixação de 60 dias em formalina a 10%, foram cli¬

vadas em segmentos de aproximadamente 1 cm cada. Em média, cada medula

deu 40 segmentos, que foram numerados no sentido caudal-cefálico (exceto o

caso 17 que o foi no sentido inverso), incluídos em celoidina e microtomízados

com 30 micra de espessura.

Exceto no caso 21, todas as medulas eram completas, da transição com

o bulbo ao cone terminal.

De cada bloco foram montados pelo menos 4 cortes, dois corados pelo

método de Nissl para o pirenóforo e dois, pela variante de Erhardt do método

Pal-Weigert para fibras mielínicas.

Ao todo, o material estudado se constitui de aproximadamente 4.000 pre¬

parações histológicas.

3. Excetuados os casos de diastematomielia, completa ou incompleta,

as demais alterações arquitetônicas encontradas não permitiram classificação

pois eram na maioria das vezes bizarras, em conseqüência das mais variadas

perturbações da migração e diferenciação dos neuroblastos. Isso obrigou-me

a classificá-las arbitrariamente em: 1) arquitetura profundamente alterada; 2)

alterada; 3) discretamente alterada e 4) quase normal.

4. Nas medulas com lesões somente disgenéticas, ainda que tenha exa¬

minado todas as lâminas, descrevi as coradas pelo método de Nissl apenas nos

casos ou nos segmentos em que as disgenesias, não sendo grosseiras, permi¬

tiram o estudo cito-arquitetônico.

Nas medulas com lesões somente adquiridas, essa descrição foi sistemática.

5. Para caracterizar u’a medula como disgenética foi necessário excluir

possíveis artifícios de técnica, particularmente dois: inclinação do plano de

corte e trações. Para bem entender os efeitos da inclinação do plano de corte

sobre a configuração da secção medular, fiz moldes de madeira (subst. branca)

e gesso (subst. cinzenta) das principais alturas (cervical, torácica, lombar e

sagrada), que foram serrados segundo os diferentes planos inclinados (fig. 70

a 80). Ficou evidenciado que tal inclinação não produz figuras assimétricas,

como as das figs. 36, 39, 43, 53 e 66, a não ser que a inclinação seja tal que o

plano atinja a superfície superior ou inferior do bloco, caso em que necessaria¬

mente o corte apresenta o seu contorno elíptico ou circular interrompido por

uma linha reta (arco de corda, figs. 77, 78, 79 e 80).

Quanto às trações, o método que se mostrou mais seguro foi o do estudo

da morfologia dos corpos celulares dos neurônios, pois, quando o tecido

nervoso é fracionado, tais corpos se apresentam todos alongados em uma só

157

cm

2 3

L.

5 6

11 12 13 14 15

PlAZZA, K. — L*esões da medula espinhal no megacôlon.

Mem. lust. Butantan, 37: 149-232, 1973.

direção. Por exemplo, na fig. 40, os pirenóforos são os dos neurônios do corno

anterior da medula da fig. 39-B e não apresentam essa ou outra deformidade.

Isso permite excluir que a configuração alongada em direção transversal desse

corno anterior se deve a uma tração em sentido lateral.

Mesmo convencido da natureza disgenética de uma determinada alteração

arquitetônica, somente a descrevi como tal quando tinha elementos que pudes¬

sem disso convencer qualquer espírito, mesmo o mais céptico. Preferi consi¬

derar como normais figuras que por minha longa prática do exame de me¬

dulas me davam a impressão de alteração arquitetônica disgenética, mas que

podiam ser contestadas por alguém não afeito a tais aspectos. Quando a con¬

vicção subjetiva foi muito forte e as objeções não podiam merecer esclareci¬

mento cabal, preferi deixar uma interrogação.

6. As lâminas foram estudadas e descritas uma a uma. A conclusão sôbre

cada uma foi baseada no seu exame isolado, para que os achados em outras

lâminas não influíssem na apreciação do corte em observação. A não ser assim,

a descrição das lâminas 14 e 36 a 38 do caso 8 (figs. 32 a 35) não traria uma

interrogação, pois as lâminas 5, 6, 7. 8 e 9 do mesmo (figs. 27 a 31) poderiam

coonestar a opção por uma alteração arquitetônica do desenvolvimento naque¬

les cortes.

7. Não foi feita a identificação (a partir das raízes) da altura de cada

segmento medular por ocasião da clivagem do material, mas a sua numeração

foi seguida, de modo que, na maioria das vezes, foi possível identificar não

só a altura (cauda, sagrada, lombar, torácica ou cervical) do segmento como

sua localização mais cefálica ou mais caudal em relação aos demais da

mesma altura. Quer dizer, as lâminas e segmentos 17 e 19 por exemplo, são

respectivamente mais caudal e mais cefálica do que a do segmento 18. É

óbvio que os números seguidos correspondem a segmentos vizinhos. Houve

casos, porém, em que o corte apresentava arquitetura tão alterada que não

permitia identificar a altura e as lâminas imediatamente precedente e proce¬

dente eram do alturas diferentes; assim, fiquei sem poder identificar a altura

do segmento observado. Nas tabelas da casuística, tais casos aparecem com

interrogação na coluna das alturas medulares.

8. Os principais elementos de que me vali para avaliar a existência de

uma alteração do desenvolvimento embrionário foram:

1. forma, em seu conjunto;

2. presença de células nervosas nas estruturas apensas (figs. 2, 3, 15, 17),

protrusas (fig. 1) e acoladas (figs. 25, 26, 43 e 44) à formação me¬

dular principal;

3. forma dos pirenóforos nos casos sugestivos de tração (figs. 39-B e 40);

4. direção das fibras nervosas (fig. 47);

15S

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

5 .

R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

í. Butantan, 37: 149-232, 1973.

população neuronal dos núcleos medulares; como não existem padrões

estabelecidos na raça humana, me guiei pela comparação com medulas

normais e entre os dois lados da medula em estudo; os resultados fo¬

ram expressos em “rarefacção celular” e “ausência” de um determi¬

nado núcleo; este estudo, corno se percebe facilmente na Casuística,

foi dirigido para as estruturas cinzentas simpáticas, por motivos que

explicarei na Discussão.

Adotei a seguinte nomenclatura:

9.1 — Arquitetura normal — ausência de lesões disgenéticas.

9.2 — Aquitetura alterada (profundamente, simplesmente ou discre¬

tamente) e quase normal — presença de lesões disgenéticas.

9.3 — Segmento — segmento resultante da clivagem (bloco).

9.4 — Altura (Ca, S, L, T e C) - um dos grandes segmentos meta-

méricos da medula: cauda, sagrada, torácica ou dorsal e cer¬

vical.

9.5 — Centros simpáticos — centros neuro-vegetativos ou autônomos

(orto e parassimpáticos).

9.6 — N — coloração pelo método de Nissl para o corpo ce¬

lular do neurônio; E — coloração pelo método de Erhardt (va¬

riante do Weigert-Pal) para fibras mielínicas; LAM (lâmina)

— número do segmento da medula, resultante da clivagem;

COL — método de coloração; ALT — altura (v. 9.4),

5 .

159

cm

2 3

L

5 6

11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no mesacólon.

Mevi. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASUÍSTICA

CASO 1

L

C

A

O

E

M

L,

T

2

E

S

Duas porções: de um lado, S-5 com raízes ao redor; do ou¬

tro, somente feixe de raízes.

o

O

E

O

Formação única, com profunda alteração da forma e da

disposição das substâncias branca e cinzenta.

4

E

9

Medula dupla (diastematomielia): ambas as porções de for¬

ma muito alterada.

5

E

9

Formação única, com acentuada alteração da forma, ape¬

sar da qual aparece o H de substância cinzenta.

6

E

9

Diastematomielia: uma das porções tem morfologia de

medula; a outra é apenas rudimentar.

7

E

9

Formação única com morfologia de medula, que, entre¬

tanto, tem dois fascículos conspícuos no funículo posterior

8/9

E

o

Diastematomielia: uma das porções tem morfologia do

medula; a outra é apenas rudimentar.

10/15

E

rp

Formação única, praticamente normal, apenas de volume

aumentado a expensas da substância branca.

16/28

E

T

Formação única, de volume aumentado a expensas da

substância branca, com alterações das colunas intermédio-

laterais, traduzidas por aplasia ou hipoplasia de uma ou

de ambas as espículas laterais.

29

E

C

Aplasia de uma das espículas laterais (deve ser altura

C-8).

30

E

C

Mal-formação ou defeito dc técnica?

160

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, It. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, .37: 1 19-232, 1973.

Fier. 1. Caso 1. Iam. 3. Aum. 10 x

L6l

cm

2 3 4 5 6 SClELO 1Q n 12 13 14 15

PIAZZA, It. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 2

L

C

A

O

I.

M

L

T

1/2

E

S

3/8

E

9

E

T

11

E

T

12/17

E

T

18

E

T

19

E

T

20

E

T

21/22

E

T

23

E

T

24

E

T

25/26

E

m

J.

27

E

T

28/30

E

7

31/32

E

C

Arquitetura normal.

alterada.

profundamente alterada.

Ausência de uma espícula lateral.

Espículas laterais apenas esboçadas.

Arquitetura praticamente normal.

Ausência de uma espícula lateral.

Espículas laterais praticamente ausentes.

Ausência de uma espícula lateral.

Arquitetura alterada: massa de tecido nervoso (em que

foram vistas células nervosas) em forma de crescente,

apoiada lateralmente.

Arquitetura profundamente alterada (impossível confusão

com artifício de técnica).

Arquitetura profundamente alterada (impossível confusão

com artifício de técnica).

Observação — Há em todas as alturas desmielinização do feixe piramidal cruzado

de um dos lados.

163

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

Fie. S. Caso 2, lam. 32. Aum. Sx.

SciELO

cm 123456

PIAZZA, lí. — Tensões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 3

L

C

A

O

ij

M

L,

T

1

E

S

2

E

s

3/4

E

L

5/12

E

T

13

E

T

14/15

E

T

16/22

E

T

23

E

T

24/26

E

T

27/30

E

C

31/32

E

C

Arquitetura profundamente alterada ou artifício de téc¬

nica?

Arquitetura profundamente alterada.

- ” --— quase normal.

- ” - discretamente alterada (espículas laterais

apenas esboçadas de um ou de ambos os Jados).

Arquitetura alterada.

- ” - normal.

- ” - discretamente alterada (como em 5/12).

Arquitetura alterada.

Arquitetura praticamente normal.

profundamente alterada.

166

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA. R. — Lesões (la medula espinhal no megacôlon.

Mcm. Inst. Jlntuntan, .í7 : 149-232, 1973.

167

SciELO

cm

Fig. 10. Caso 3, lâm. 31. Aum. llx.

Fig. 9. Caso 3, lâm. 2.

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no mesacôlon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

L

C

A

O

T,

M

L

T

1/4

E

Ca

5/7

E

S

8/9

E

U

10

E

I,

11

E

L.

12/13

E

Tj

14

E

L

15

E

T

16

E

T

17

E

T

17

N

T

18

E

T

19

E

T

20/21

E

T

20/21

N

T

22

E

T

22

N

T

23

E

T

24

E

T

25

E

T

25

N

T

26

E

T

27/28

E

T

27/28

N

T

29/30

E

T

29/30

N

T

31/32

E

T

31/32

N

T

33/35

E

C

36/38

E

C

39/41

E

C

42/44

E

c

CASO 4

Nada digno de nota.

Arquitetura normal.

-quase normal.

--alterada.

- profundamente alterada.

— ”-(tipo diastemato-

mielia).

Arquitetura profundamente alterada (há um crescente re¬

cobrindo a face posterior da medula, destacado dela, cons¬

tituído por tecido nervoso — presença de células nervosas

nos cortes corados pelo método de NISSLb

Arquitetura alterada.

Ausência das espículas laterais.

Presença dos núcleos intermédio-laterais (estando o de um

lado no corno posterior).

Arquitetura diseretamente alterada: de um lado, corno an¬

terior muito menor (que do outro) e ausência da espícula

lateral.

Arquitetura alterada.

Espículas laterais apenas esboçadas.

Núcleos intermédio-laterais rarefeitos.

Uma espícula lateral apenas esboçada e outra ausente.

Dc um lado, núcleo intermédio-lateral muito rarefeito; do

outro, no corno posterior.

Arquitetura profundamente alterada (tipo diastematomie-

lia).

Arquitetura profundamente alterada.

Espículas laterais apenas esboçadas e nos cornes poste¬

riores.

Núcleos intermédio-lateris rarefeitos, mais o de um dos

lados.

Arquitetura normal.

Espículas laterais nos cornos posteriores e uma delas ape¬

nas esboçada.

Núcleos intermédio-laterais rarefeitos.

Espículas laterais nos cornos posteriores.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Espículas laterais nos cornos posteriores.

Núcleos intermédio-laterais normais.

Arquitetura alterada.

- ” - normal.

— profundamento alterada.

- ”-normal.

168

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, lí. — Lesões da medula espinhal no megaeolon.

ü/eni. Inst. Butantan, St: 149-232, 1973.

Fisj. 11. Caso 4, lãm. 11. Aura. 7,5x.

Fig. 12. Caso 4, lãm. 12. Aura. 7,5x.

169

SciELO

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Bntantan, .17: 149-232, 1973.

Fig. 15. Caso 4, lâm. 15. Aum. 7x.

Fig. 1G. Caso 4, lâm. 19. Aum. 10x.

171

SciELO

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, S7 : 149-232, 1973.

173

2 3 4 5 6 SClELO 1Q 2.1 12 13 14 15

PIAZZA, lí. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mnn. lust. Ilutantan, .17 : 146-232, 1373.

171

CASO D

Arquitetura normal.

19

E

Uma espícula lateral apenas esboçada.

Espiculas laterais apenas esboçadas.

Núcleos intermédio-laterais rarefeitos.

Arquitetura discretamente alterada.

Espiculas laterais apenas esboçadas.

Arquitetura normal.

- ” —- alterada.

Ausência de uma espícula lateral.

Uma espícula lateral no corno posterior.

Uma espícula lateral no corno posterior, outra apenas es¬

boçada.

Uma espícula lateral no corno posterior; ambas apenas

esboçadas.

Uma espícula lateral apenas esboçada.

Arquitetura normal.

discretamente alterada,

alterada.

profundamente alterada (tipo diastemato-

mielia).

-

•. V.AV

em

tí 7/

r

Wr

■>7

$2

:' ■’ ■

m

Fiu

21. Caso 5, lâin. 26. Aum. 8x

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacôlon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 6

L

C

A

O

Tj

M

L

T

1/7

E

Ca

8/10

E

S

11/15

E

L

16/23

E

T

24/30‘

E

T

31

E

T

32/44

E

T

45/47

E

C

48/50

E

C

51/52

E

C

Nada digno de nota.

Arquitetura normal.

Ausência de uma espícula lateral.

Arquitetura quase normal.

-”-normal.

-” - profundamente alterada.

- ”-alterada.

- ” - normal.

Fig. 22. Caso G, ' f! ni. 45. Aum. 9,5.\.

175

2 3 4 5 6 SClELO 10 n 12 i3 14 15

cm

PIAZZA, TI. — Lesões da medula espinhal no megacôlon.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

Fig. 23. Caso G, lâm. 4G. Aum, 10x.

176

2 3 4 5 6 SClELO 1Q 1X 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 7

L

C

A

O

Li

M

L

TL

1/9

E

Ca

10/12

E

S

13/15

E

L

16/29

E

T

30/31

E

C

32

E

C

33

E

c

34/35

E

c

36

E

c

37

E

c

38

E

c

Nada digno de nota.

Arquitetura normal.

quase normal,

discretamente alterada,

profundamente alterada,

alterada.

discretamente alterada,

profundamente alterada.

177

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, Tl. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Iust. Bntantaii, .17 : 1 49-232, 1973.

178

Fig. 25. Caso 7, lâm. 35. Aum. 8,5x.

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões cia medula espinhal no inegacólon.

Mem. List. Butantan, 37: 149-232, 1 973.

CASO 8

L

C

A

O

L,

M

L

T

1

E

Ca

Nada digno de nota.

2/4

E

n

Arquitetura normal.

5/9

E

T

- ” - profundamente alterada (tipo diastemato-

mielia).

10/12

E

T

Arquitetura normal.

13

E

T

Uma espícula lateral no corno posterior.

14

E

T

Arquitetura alterada ou artificio de técnica?

15

E

T

- ” - normal.

16/17

E

T

Uma espícula lateral no corno posterior.

18/19

E

T

Espículas laterais nos cornos posteriores.

20/21

E

T

Espículas laterais nos cornos posteriores, sendo uma menor

do que a outra.

22/25

E

T

Espículas laterais nos cornos posteriores.

26

E

T

Uma espícula lateral no corno posterior e menor do que n

outra.

27

E

T

Arquitetura alterada.

28

E

T

Espículas laterais nos cornos posteriores.

29

E

T

Arquitetura praticamente normal.

30/34

E

c

- ” - normal.

35

E

C

Não pode ser avaliada.

36/38

E

C

Arquitetura profundamente alterada ou artifício de íéc-

nica?

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 119-232, 1973.

Fig. 28. Caso 8, lâm. G. Aum. 7,5x.

Fig\ 29. Caso 8, lâm. 7. Aum. 10x.

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. ■—• Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, ST: 149-232, 1973.

CASO

L

C

A

O

L

M

L

T

1

E

Ca

o

E

S

3/6

E

S

7/10

E

L

11/32

E

T

33/39

E

C

Nada digno de nota.

Arquitetura alterada: assimetria que simula artifício de

técnica.

Arquitetura normal.

184

M

Fiff. 36. Caso 9, lâm. 2. Aum. 7,5x.

2 3

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, ü. ■ — Lesões da medula espinhal no megaeólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232. 1973.

CASO 10

L

C

A

O

L

M

L

T

1/4

E

Ca

5/7

E

S

8/12

E

b

13/15

E

T

16

E

T

16

N

T

17

E

T

17

N

T

18

E

T

18

N

T

19

E

T

19

N

T

20

E

T

20

N

T

21

E

T

21

N

T

22

E

T

22

N

T

23

E

T

23

N

m

X

24

E

T

24

N

T

25

E

T

25

N

T

26

E

T

26

N

T

27

E

T

27

N

T

28

N

T

29

E

T

29

N

T

30

E

T

30

N

T

31

E

T

31

N

T

32

E

T

32

N

T

33

E

T

33

N

T

34

E

C

34

N

C

35/37

E

C

38

E

C

38

N

C

39

E

C

40

E

C

41

E

C

Nada digno de nota.

Arquitetura normal.

- ” - alterada (ausência de uma espícula late¬

ral).

Ausência de um dos núcleos intermédio-laterais.

Arquitetura alterada (espículas laterais praticamente au¬

sentes).

Ausência dos núcleos intermédio-laterais.

Arquitetura alterada (ausência de espícula lateral).

Ausência de um dos núcleos intermédio-laterais.

Arquitetura alterada (ausência de espículas laterais).

Ausência de núcleos intermédio-laterais.

Arquitetura alterada (ausência de espículas laterais).

Ausência de núcleos intermédio-laterais.

Arquitetura alterada (ausência de uma espícula lateral).

Ausência de núcleos intermédio-laterais.

Arquitetura discretamento alterada.

Núcleos intermédio-laterais presentes.

Estrutura quase normal.

Núcleos intermédio-laterais presentes.

Ausência de uma espícula lateral.

Núcleos intermédio-laterais nos cornos posteriores.

Arquitetura quase normal.

Núcleos intermédio-laterais presentes.

Arquitetura quase normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Arquitetura quase normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Núcleos intermédio-laterais presentes.

Arquitetura normal.

Núcleos intermédio-laterais presentes.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Arquitetura normal.

Lâminas descoradas.

Arquitetura normal.

Núcleos intermédio-laterais presentes.

Arquitetura normal.

Nada digno do nota.

Arquitetura normal.

-” - alterada: um corno anterior bem maior, do

que o outro e de forma anômala (espécie de excrescência

lateral).

Células do corno anterior do lado anômalo n.o mostram

sinais dc estiramento.

Arquitetura profundamente alterada.

- ” - normal.

- ” —-- alterada.

185

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões da medula, espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 87: 149-232, 1973.

— B —

Fig. 39. Caso 10, lâm. 38. Aum. 15x.

187

Fig. 40, Caso 10, lâm. 38. Aum. 40x.

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacôlon.

Mcm. List. Butantan, 37: 149-232, 1973.

L

A

M

1/3

4/9

10/14

15/37

38/41

42/43

44/46

47

CASO 11

Nada digno de nota.

Arquitetura normal.

alterada

normal.

alterada

SciELO

188

PIAZZA, It. — Lesões da medula espinhal no megaeólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 12

L

C

A

O

Ij

M

L

T

1/5

E

Ca

Arquitetura

normal.

6/9

E

S

t>

ti

10/14

E

L

tt

”

15/35

E

T

tt

ti

36/39

E

C

1)

it

40

E

C

>>

— alterada.

41

E

■n

tf

— quase normal.

42

E

c

tt

— alterada

43

E

c

ti

— quase normal.

Fig. 42. Caso 12, Iam. 40. Aura. 8,5x.

189

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, 37 : 149-232, 1973.

CASO 13

10

20

E

Nada digno

Arquitetura

lia).

Arquitetura

lia).

Arquitetura

lia).

Arquitetura

lia).

Arquitetura

de nota.

profundamente alterada (tipo diastematomie-

profundamente alterada (dois canais centrais),

profundamente alterada (tipo diastematomie-

profundamente alterada (dois canais centrais),

alterada.

profundamente alterada (tipo diastematomie-

normal.

- ” - discretamente alterada (uma espícula me¬

nor do que a outra).

Arquitetura discretamente alterada (uma espícula bem me¬

nor do que a outra).

Rarefação de um núcleo intermédio-lateral.

Arquitetura discretamente alterada (igual a 19).

Rarefação de um núcleo intermédio-lateral.

Arquitetura discretamente alterada.

Arquitetura discretamente alterada (igual a 20).

Arquitetura quase normal.

Arquitetura discretamente alterada (igual a 20).

Um núcleo intermédio lateral rarefeito.

Arquitetura quase normal.

Um núcleo intermédio-lateral rarefeito.

Ambos os núcleos intermédio-laterais muito rarefeitos.

Arquitetura quase normal.

Arquitetura normal.

Arquitetura alterada (disposição radiada das fibras da

substância branca).

Arquitetura normal.

- alterada (igual a 33).

- nomal.

- discretamente alterada.

■-alterada (igual a 33).

- normal.

- alterada (igual a 33).

- normal.

-—-- alterada (igual a 33).

190

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Le sões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, 3 7: 119-232, 1973.

191

cm

PIAZZA, n. — Lesões cia medula espinhal no megacúlon.

31 cm. Inst. Butantan, ST. 149-232, 1973.

Fig. 45. Caso 13, lâm. 21. Aum. 10x

Fig. 10. Caso 13. lâm. 10. Aum. 10x

192

2 3 4 5 6 SciELO 10 1X 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões cia medula espinhal no megacólon.

71/em. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, H. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, SI: 149-232, 1973.

CASO 14

L

C

A

O

L

M

T

1

E

Ca

Nada digno de nota.

2/4

E

S

Arquitetura normal.

5/8

E

L

»» >»

9/12

E

T

13

E

T

alterada (ausência de espículas laterais) discre¬

tamente.

13

N

T

Núcleos intermédio-laterais nos cornos posteriores.

14/21

E

T

Arquitetura profundamente alterada (pode simular artifício

de técnica).

22/24

E

T

Arquitetura alterada (pode simular artifício de técnica).

25/26

E

T

Arquitetura profundamente alterada (não pode simular arti¬

fício de técnica).

27/28

E

T-C

Arquitetura quase normal.

29/30

E

C

” normal.

31/32

E

c

alterada (pode simular artifício de técnica)

Grande aumento de tamanho.

33

E

c

Arquitetura quase normal.

34

E

c

” normal.

cm

2 3 4 5 6 SClELO 10 n 12 13 14 15

PIa 3?A, ít. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1073.

Fig. 49. Caso 14, lâm. 14. Aum. 10x.

Fig. 50. Caso 14, lâm. 23. Aum. 10x.

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, lí. — Lesões da medula espinhal no megacôlon.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

Fig\ 51. Caso 14, iam. 26. Aum. 10x.

Fiff. 52. Caso 14, lâm. 33. Aum. 9x.

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, n. — Lesões da medula espinhal no megncõlon.

Mr.n. Inst. Butantan, i7 : 140-232, 1973.

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 15

L

C

A

O

L

M

L

T

1/3

E

Ca

Nada digno de nota.

4/6

E

S

Arquitetura normal.

7/11

E

L

- ”-” -

12/33

E

T

- ” - ” -

34/36

E

C

- ” - ” -

37/43

E

c

-” - profundamente alterada.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

RIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 16

L

C

A

O

L

M

L

T

2/5

E

Ca

6/8

E

S

9/12

E

L

14/16

N

T

17/23

E

T

24/25

E

T

26

E

T

27/34

E

T

35/43

E

C

Nada digno de nota.

Arquitetura normal.

Uma espícula lat. no corno post.; outra de tamanho reduzido.

Arquitetura profundamente alterada.

- ” - alterada.

- ” - profundamente alterada.

- ” - normal.

- ” - —— normal.

Observação: em todas as alturas há denegeração do feixe

piramidal cruzado de um lado.

cm

2 3 4 5 6 SClELO 10 2.1 12 13 14 15

PIAZZA, H. —- Lesões ela medula espinhal no megacôlon.

Mem. Itist. Butantan, 37: 349-232, 1 973.

CASO 17

L

C

A

O

L

M

L

T

32/33

E

S

30/31

E

L

28/29

E

L

26

E

T

25

E

T

24

E

T

21/23

E

T

17/20

E

T

14/15

E

T

11/12

E

T

8/10

E

T

1/7

E

C

Arquitetura ncrmal.

- proíundamente alterada.

- discretamente alterada.

- praticamente normal.

- alterada (núcleo anômalo na zona interme¬

diária dos cornos de um lado).

Arquitetura praticamente normal.

- discretamente alterada.

praticamente normal,

normal.

202

SciELO

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

-l/em. Inst. Butantan, St: 149-232, 1973.

CASO 18

L

C

A

O

L

M

L

T

1/6

E

Ca

Nada digno de nota.

7/9

E

S

Arquitetura praticamente normal: apenas discreta assime¬

tria (que não pode ser artifício de técnica) a que corres-

ponde maior população neuronal de um dos lados.

10/14

E

L

Arquitetura normal.

15/16

E

T

-” -- ” - -

17/28

E

T

Espículas laterais apenas esboçadas.

17/28

N

T

Rarefação celular dos núcleos intermédio-laterais.

29/32

E

T

Arquitetura normal.

33

E

rj

Arquitetura normal.

34

E

c

-”-praticamente normal.

35/36

E

c

•- ” -alterada.

37

E

c

” - profundamente alterada.

38/40

E

c

- ”-praticamente normal.

203

1, | SciELO

PIAZZA, R. •— Pesõcs da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

Fig. 61. Caso 18, lâm. 9. Aum. 10x.

Fig. 60. Caso 18, lâm. 8. Aum. 18x.

204

SciELO

PIAZZA. R. — Rcsões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

Fig. 63. Caso 18, lâm. 37. Aum. 7,5x.

205

SciELO

10 11 12 13 14 15

I’lAZZA, Jí. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Hem. Inst. Butantan, ,17 : 149-232, 1973.

CASO 19

L

C

A

O

L

M

L

T

1/3

E

Ca

4/7

E

S

8/12

E

h

13/16

E

T

17

E

T

17

N

T

18

E

T

18

N

T

19

E

T

19

N

T

20

E

T

20

N

T

21

E

T

21

N

T

22

E

T

22

N

T

23

E

m

X

23

N

T

24

E

T

24

N

T

25

E

T

25

N

T

26

E

T

26

N

T

27

E

T

27

N

T

28

E

T

28

N

r

29

E

T

29

N

T

30

E

T

30

N

T

31

E

T

31

N

T

32/38

E

C

Nada digno de nota.

Arquitetura normal.

Uma espícula lateral menor que a outra.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Igual a 17.

Espículas laterais apenas esboçadas.

Rarefação dos núcleos intermédio-laterais.

Igual a 17.

Cito-arquitetura aparentemente normal.

Igual a 17.

Igual a 17. Uma arteriola csclerosada ocupa grande parte

de uma espícula lateral.

Igual a 17. Uma arteriola esclerosada ocupa grande parte

de um núcleo intermédio-lateral que está muito rarefeito.

Arquitetura normal. Arteríolas esclerosadas.

Igual a 17.

Arquitetura normal.

Igual a 17.

Arquitetura praticamente normal. Tròs arteríolas csclerosa-

das ocupam a comissura cinzenta.

Ambos os núcleos intermédio-laterais presentes e aparen¬

temente normais.

Arquitetura normal.

Ausência de células de um corno lateral, ocupado por uma

arteriola arciformc esclerosada.

Arquitetura normal.

Ambos os núcleos intermédio-laterais presentes.

Arquitetura normal.

Ambos os núcleos intermédio-laterais rarefeitos, um. mais

acentuadamente.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Arquitetura normal.

Núcleos intermédio-laterais aparentemente normais.

Arquitetura normal.

Observação', há arteriolosclcrose em todas as alturas.

206

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

P JAZZ A, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

Fig. G4. Caso 19, lâm. 26. Aum. 25x.

Fig. 65. Caso 19, lâm. 27. Aum. 20x.

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. —- Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

CASO 20

L

C

A

O

L

M

L

T

1/3

E

S

4/8

E

L

9/12

E

T

13

E

T

14

E

T

15

E

T

16

E

T

17/18

E

T

19

E

T

20

E

T

22

E

T

23

E

T

24

E

T

25

E

T

26

E

T

27/28

E

T

29

E

T-C

30

E

O

31/32

E

C

33/35

E

C

36

E

C

Arquitetura alterada: uma hemi-medula menor do que a

outra; do lado menor, há considerável redução da subst.

cinzenta dos cornos anterior e posterior.

Arquitetura normal.

- quase normal (uma espicula lateral quase

desaparecida).

Arquitetura normal. Uma espicula lateral ocupada por duas

arteríolas esclerosadas.

Arquitetura normal. Uma espicula lateral ocupada por duas

arteríolas esclerosadas.

Arquitetura alterada (ausência de uma espicula lateral)

discretamente.

Arquitetura normal.

Arquitetura quase normal (uma espicula lateral apenas

esboçada). Arteríola que se dirige para ela esclerosada.

Arquitetura normal.

Arquitetura quase normal (uma espicula lateral bem menor

do que a outra. A arteríola que se dirige para ela, escle¬

rosada).

Arquitetura normal.

Arquitetura alterada discretamente (ausência de espicula

lateral). Fibras de substância branca de direção horizontal.

Arquitetura alterada discretamente (ausência de uma cs-

pícula lateral). Fibras de substância branca irradiam-se

horizontalmente do corno anterior dêsse mesmo lado.

Arquitetura normal. Uma espicula lateral ocupada por ar¬

teríolas esclerosadas.

Arquitetura normal.

- ” ————- ” - Esclerosada a arteríola que se

dirige para uma espicula lateral, ocupada por arteríolas

com o mesmo processo degenerativo.

Arquitetura normal.

- ” - alterada.

-”-normal.

- ” - alterada.

208

Observação: há arteriosclerose em todas as alturas.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PiAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, S?: 149-232, 1973.

Fig. CG. Caso 20, lâm. 2. Aura. 12x.

2 3 4 5 6 SciELO 10 2.1 12 13 14 15

PJAZZA. R. — Lesões ela medula espinhal no megacólon.

Mtm. Inst. Butantan, .17 : 149-232, 1973.

CASO 21

L

C

A

O

L,

M

L

T

1

E

S

1

N

S

2

E

S

2

N

s

3

E

s

4/5

E

L

6

E

L-T

7/8

E

m

L

7/8

N

T

9

E

T

9

N

T

10

E

T

10

N

T

11

E

T

11

N

T

12

E

T

12

N

T

13/14

E

T

13/14

N

T

15

E

T

15

N

T

16

E

T

16

N

T

17

E

T

17

N

m

A

Arquitetura normal.

Rarefação celular dos núcleos em franja.

Arquitetura normal. Arteriolosclerose.

Rarefação celular dos núcleos em franja. Em cada um deles

aparece uma arterícla esclerosada.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais ausentes é ocupado por

uma arteríola esclerosada.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Arquitetura normal.

Núcleos intermédio-laterais normais.

Arquitetura normal.

Núcleos intermédio-laterais (igualmente) pouco densos.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito (praticamente

ausente).

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais ausente.

Arquitetura normal.

Um dos núcleos intermédio-laterais rarefeito.

Arquitetura normal.

Núcleos intermédio-laterais igualmcntc densos (normais).

01>servação — Há arteriolosclerose em todas as alturas, sempre mais intensa

na comissura cinzenta, onde chega a formar-se estado lacunar.

210

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

RESUMO DA CASUÍSTICA

Para efeito deste resumo, foram estabelecidos alguns conceitos: a) cata¬

loguei na tabela 1 como disgenéticas as alturas medulares que classificara

como de “arquitetura alterada” ou de “arquitetura profundamente alterada”,

apenas, a fim de dar à argumentação baseada na mesma u’a margem de segu¬

rança bastante ampla; a altura torácica do caso 10 aí aparece, apesar de ter

alterações arquitetônicas classificadas em cada segmento por “arquitetura

discretamente alterada”, porque os cortes corados pelo método de Nissl reve¬

laram ausência dos núcleos intermédio-laterais em tres segmentos sucessivos;

b) no caso 1 não foi possível a definição exata da altura da medula nos seg¬

mentos 3 a 9, pela morfologia; mas, pela seriação dos cortes, as alterações de

desenvolvimento são muito provavelmente sagradas e lombares, e, como tais,

foram tabeladas;

c) não considerei a degeneração do feixe pi¬

ramidal cruzado como lesão medular adquirida

porque nos casos estudados não era lesão primá¬

ria do órgão (como o seria se se tratasse de mie-

lose funicular, por exemplo) e porque esse feixe

não tem relação com as estruturas que interessa¬

vam (isso não seria admissível se cuidasse da ci-

to-arquitetura dos cornos anteriores, p. ex.); con¬

vém consignar, também, que essa lesão não causa

deformidades na medula que se possam confundir

com alterações de desenvolvimento.

1. Dos 21 casos estudados, 18 apresentavam

lesões disgenéticas; dois, lesões adquiridas; um, le¬

sões de ambos os tipos.

2. Os dois casos somente com lesões adquiri¬

das apresentavam lesões dos centros neuro-vegeta-

tivos (substância cinzenta peri-ependimária) e dos

seus núcleos motores ortossimpáticos (núcleos in¬

termédio-laterais) e parassimpáticos (“em franja”).

Em ambos encontrei arteriolosclerose, à qual atrn

bui as lesões referidas, que no caso 19 atingiam

toda a altura torácica e no caso 21, as alturas sa¬

grada e torácica (não sei da cervical porque foi

neste caso que faltou essa altura no material es¬

tudado ).

4. As alterações de desenvolvimento atingiam (v. tabela 1):

a) em 8 casos, uma só altura (casos 6,7,9,11,12,15,16,18), cervical

em 6 casos (6,7,11,12,15,18), torácica em um (16) e sagrada em

um (9);

A

ALTURA

S

O

s

L T

c

1

X

2

X

3

X

X X

X

4

X X

X

5

X

6

X

7

X

8

X X

9

X

10

X

11

X

12

X

13

X

X X

X

14

X

15

X

16

X

17

X X

18

X

20

X

TABELA 1

Alturas

das disgenesias

medulares.

212

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

Man. Inst. liutanta i. 31: 119 - 231 ’. 1973 .

b) em 7 casos, duas alturas seguidas (casos 1,2.5,8,1014,17), sendo

S-L em um caso (1), L-T em dois (8,17) e T-C em quatro (2

•5,10,14);

c) em 1 caso, tres alturas seguidas (caso 4), que eram L-T-C;

d) em 2 casos, todas as alturas (3,13);

e) em 1 caso, duas alturas separadas (20).

5. Nas 19 medulas disgenélicas, as mal-formações apareceram:

a) 14 vezes na altura cervical;

b) 10 vezes na altura torácica;

e) 6 vezes na altura lombar;

d) 5 vezes na altura sagrada.

DISCUSSÃO

1. Das 21 medulas espinhais de casos de megacólon que foram objeto de

estudo, 18 apresentavam lesões disgenéticas, 2 apresentavam lesões adquiridas

c uma, lesões mistas.

Tendo examinado apenas quatro dos aproximadamente 300 cortes possí¬

veis em cada segmento clivado, tais resultados não são absolutamente seguros.

Não deixam, entretanto, de ser muito provavelmente certos, pois, ainda que o

número de lâminas examinadas represente apenas pequena tração das que se

poderiam obter em cortes seriados, constituem a meu ver, número significativo

(em média 160 de cada medula), mesmo porque as 4 lâminas examinadas não

eram necessariamente as 4 primeiras de cada bloco, mas colhidas ao acaso de

um número de cortes nunca inferior a 40. Algumas discrepâncias entre arqui¬

tetura e população neuronal, como se observam no caso 19, explicam-se por

este motivo.

Apresenta-se, assim, uma nrimeira verificação: as medidas são disgenéticas

na grande maioria dos casos dc megacólon , mas muito provavelmente não na

sua totalidade.

A medula é órgão extremamente complexo e o dizer-se simplesmente

que é mal-formada constitui-se em afirmação auase aleatória, pois nada escla¬

rece quanto ao mecanismo patogênico de nenhuma doença, o megacólon in¬

clusive.

Entretanto, do exame dos meus casos, me parece possível chegar-se à

estrutura medular que é a peça desse mecanismo. Primeiramente vejamos os

casos apenas com lesões adquiridas:

ü caso 19 apresentava acentuada arterioloesclerose localizada predomi¬

nantemente nas bases dos cornos anteriores e posteriores e na substância cin¬

zenta peri-ependimária (fig. 64), zonas que constituem os centros neuro-ve-

getativos medulares; às vezes, a relação entre lesão vascular e rarefação celular

era muito evidente (fig. 65); além disso, neste caso, as lesões ocupavam ape-

nasmente a altura torácica, delas estando livres as alturas sagrada, lombar, e

213

cm

2 3

Z

5 6

11 12 13 14 15

PIAZZA, R. — Lesões cia medula espinhal no megacôlon.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 140-232, 1073.

cervical, e atingiam a coluna intermédio-lateral, portanto, havia especifica¬

mente comprometimento das colunas motoras ortossimpáticas, com rarefação,

ora de uma, ora de outra, ora de ambas.

O caso 21 apresentava arteriolosclerose generalizada, rarefação celular dos

núcleos em franja (parassimpático caudal) e rarefação de um ou de ambos os

núcleos intermédio-laterais (ortossimpático) em todos os segmentos que nor¬

malmente ocupam, portanto, lesão dos dois setores neuro-vegetativos.

Tais lesões, na falia de alterações congênitas, revelam atrofia dos núcleos

motores simpáticos (lesões secundárias).

Acho que elas permitem supor que as estruturas medulares comprometidas

no mecanismo do megacôlon adquirido são as neuro-vegetativas, o que parece

lógico, óbvio mesmo, uma vez (pie o liame entre medula e intestinos é repre¬

sentado pelos neurônios periféricos simpáticos.

Se isto é válido para as lesões adquiridas, o deve de ser para as disgenéticas

e, então, podemos concluir que, nas medulas mal-formadas, com muita pro¬

babilidade, são as alterações de desenvolvimento das estruturas neuro-vege¬

tativas que provocam as enteromegalias. Vejamos o que constatei:

2.1 Nos casos como os de números 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 13, 14, 16, 17 e 18,

com lesões disgenéticas imponentes era muito difícil de avaliar o estado do

simpático medular ao exame microscópico das alturas afetadas por esse tipo

de lesões; mas, fora delas, em segmentos em que havia apenas discretas alte¬

rações arquitetônicas (rotuladas como “arquitetura discretamente alterada” ou

“arquitetura quase normal”) foi possível fazer um estudo cuidadoso:

No caso 1, nos segmentos 16 a 28 (T) e 25 (C) as espículas laterais

(colunas celulares intermédio-laterais) faltavam ou estavam pouco desenvol¬

vidas de um ou de ambos os lados.

No caso 2, nos segmentos torácicos 18 a 20 e 23 a 26, as espículas laterais

eram apenas esboçadas ou faltavam de um lado ou praticamente faltavam dc

ambos.

No caso 3, nos segmentos torácicos 5 a 12 e 16 a 22, uma espícula lateral

estava apenas esboçada.

No caso 4, do segmento 17 ao 32, todos torácicos, havia inúmeras altera¬

ções do setor simpático medular, tais como ausência ou tamanho reduzido de

uma espícula lateral, ambas apenas esboçadas, ambas em situação anômala nos

cornos posteriores; sempre que as espículas eram menores ou apenas esboçadas,

a população neuronal, avaliada pelo método de Nissl, estava rarefeita.

No caso 5, lesões semelhantes apareceram nos segmentos torácicos de

7 a 20 (rarefação celular, localização anômala etc).

No caso 6, havia ausência dc uma espícula lateral na metade cefálica da

medula torácica (segmentos 24 e 30).

No caso 8, lesões dos núcleos intermédio-laterais foram constatadas nos

segmentos torácicos 13, 16 a 26 e 28.

No caso 13, as lesões disgenéticas, que nas alturas sagrada e lombar eram

muito complexas, na altura torácica, entre os segmentos 19 e 27, eram dc molde

214

cm

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11 12 13 14 15

VIAZZA, 11. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mrui. Inst. Butantan t 37: 149-232, 1973.

a permitir o estudo da coluna celular ortossimpática, a qual apresentava essas

mesmas alterações arquitetônicas das espículas laterais com correspondente

rarefação ou praticamente ausência dos núcleos intermédio-laterais.

No caso 14, havia alterações de igual natureza da mesma coluna no seg¬

mento 13.

No caso 16, nas alturas torácicas de 14 a 16, uma espícula lateral estava no

corno posterior e a outra era de tamanho reduzido.

No caso 17, havia um núcleo anômalo na zona intermediária (base) dos

cornos de um lado, portanto, em plena zona simpática, no segmento torá¬

cico 24.

No caso 18, as espículas laterais eram pouco desenvolvidas nos segmentos

torácicos de 17 a 28, ao que correspondia rarefação celular dos núcleos inter¬

médio-laterais.

Na ausência de lesões adquiridas, essas lesões descritas revelam aplasia,

hipoplasia ou displasia (revelada por localização anômala) dos núcleos moto¬

res simpáticos (lesões primárias).

2.2 Em casos com disgenesias arquiteturais discretas, como os de nú¬

meros 9, 10 e 20, encontrei lesões igualmente significativas, pois atingiam, no

primeiro' o setor parassimpático caudal; no segundo, especificamente a coluna

ortossimpática, havendo em diversos segmentos até ausência das espículas la¬

terais (e dos núcleos intermédio-laterais), e no terceiro, ambos os setores.

Portanto, quando as lesões disgenéticas medulares permitiram o estudo

dos centros neuro-vegetativos, constatei que eles estavam afetados, confir¬

mando a suposição baseada no estudo das medulas com lesões somente adqui¬

ridas (este foi o caminho seguido na pesquisa).

Perante essa constatação, àcho válido concluir que, se nas alturas atingidas

por disgenesias discretas há lesões dos centros neurovegetativos medulares, nas

alturas que apresentam disgenesias mais acentuadas (“arquitetura alterada” e

“arquitetura profundamente alterada”) as lesões de tais centros devem de ser

mais graves.

3. Concluindo-se que os centros neuro-vegetativos medulares podem estar

implicados no mecanismo patogênico das enteromegalias, se conclui também

que o estudo da medula é insuficiente para se avaliar a participação de todos

os centros nervosos autônomos nesse mecanismo.

Com efeito, conforme sc vê no esquema da fig. 69, o sistema nervoso autô¬

nomo tem centros orto e parassimpáticos no eixo cérebro-espinhal. Os pri¬

meiros estão principalmente na medula torácica, pois vão de C s a L., e os se¬

gundos, no tronco cerebral e na medula sagrada.

Um estudo de tais centros tanto quanto possível completo, exige o do

tronco cerebral (onde se localizam: o núcleo eárdio-pneumo-entérico ou motor

dorsal do vago — X par; o núcleo salivatório inferior — IX par; o núcleo sa-

livatório superior — VII par; o núcleo lácrimo-muco-nasal — VII par; o núcleo

ambíguo, faríngeo ou motor ventral do vago — IX e X pares; o núcleo do feixe

solitário ou gustativo — VII bis, IX e X pares; todos do tubo digestivo), em

particular, para o que nos interessa, o do bulbo, onde se localiza o núcleo

215

cm

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PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Metn. List. Butantan, ST: 149-232, 1973.

Fig. 39. — Diagramme des centres végétatifs méduüaires.

En traits pleins 1'ortho-sympathique, en traits pointillés le parasympathique.

Fig. 09. Diagrama dos centros vegetativos medulares (reproduzido de DELMAS,

Votes et centres nervenx, Masson & Cie. Paris, 9.“ ed., 1970).

A. —

216

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PIAZJ5A, li. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mcm. Inst. Butantan, 87: 149-232, 1972.

cardio-pneumo-entérico, que inerva de fibras parassimpáticas o intestino, até

o 1/3 superior do colon descendente.

O meu material sugere algo a respeito.

Considerando que disgenesias isoladas apareceram seis vezes na medula

cervical; que nas outras alturas, apenas uma vez na sagrada e uma na torácica;

que a disgenesia cervical não pode ser invocada na patologia dos neurônios mo¬

tores periféricos simpáticos (apenas C 8 contém algumas células em continuação

com as espículas laterais torácicas); que as disgenesias de mais de uma al¬

tura eram sempre vizinhas, exceto em um caso; que nesses seis casos não

havia disgenesia (arquitetura alterada ou profundamente alterada) na al¬

tura vizinha mais caudal; tudo sugere a probabilidade da altura mais cefálica,

isto é, o bulbo, apresentar alterações de desenvolvimento neles.

Convém assinalar a esta altura que HIGGS e cols 7 provocaram em gatos,

por meio da lesão eletrolítica do núcleo motor dorsal (bulbar) do vago, acalá-

sia do cárdia.

4. O esquema da fig. 69 mostra que os centros simpáticos motores me¬

dulares são divididos em centros cílio-espinhal, bronco-pulmonar, esplâncnico-

abdominais e csplancnico-pélvioos (todos ortossimpáticos) e centros pelvi-

perineais (parassimpáticos), conforme o seu território de distribuição visceral.

Conquanto que o riquíssimo sistema de anastomoses das fibras simpáticas

tornem tal divisão funcionalmente quase aleatória, interessante teria sido uma

comparação entre altura medular lesada e segmento intestinal alterado.

Isso não me foi possível fazer porque não assinalei nas autópsias esse

segmento, como não assinalei, na clivagem da medula, a altura exata dos blocos,

o que teria sido possível a partir da identificação das raízes.

A não ser assim, provavelmente dados interessantes poderia ter colhido.

Por exemplo, no caso n.° 9, em que a lesão atingia apenas a altura sagrada

teria sido interessante verificar se a enteromegalia atingia o segmento intes¬

tinal entre 1/3 superior do cólon descendente e extremidade caudal do reto.

5. Nos 21 casos estudados, verifiquei lesões dos núcleos motores sim¬

páticos em 15 (casos 1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20 e 21).

Se tais núcleos estão lesados, é lógico que os dois neurônios periféricos o

estejam e, possivelmente, provoquem rarefação dos neuronios dos gânglios dos

plexos de Meissner e de Auerbach.

A ser exata a constatação dos autores que estudaram o plexo mioentérico

de Auerbach nas enteromegalias (AMOR1M e C011REA NETTO 1 , KOEBER-

LE 12 ) de que há neles rarefação celular, as lesões descritas podem jutificá-la.

6. Em vista dos achados, se impõe uma questão: à lesão de qual dos

dois setores (orto ou parassimpáticos) do Sistema Nervoso Autônomo pode

estar patogenicamente vinculado o megacólon?

Quando se raciocina com a fisionomia do Sistema Nervoso Autônomo, se

admite, em geral, que a estimulação dos nervos ortossimpáticos produz no

217

I, j SciELO

PIAZZA, 11. — Le&ões da medula espinhal no megacólon.

Mcrn. Inst. Butantan 9 3 7: 149-232, 1973.

tubo digestivo, perda do tonus, cessação das contrações rítmicas e constrição

dos esfíncteres, enquanto que a estimulação dos nervos parassimpáticos, pro¬

duz a contração da parede e dilatação dos esfíncteres.

Se assim fosse, uma síndrome parassimpaticopriva produziria dilatação do

intestino (por atonia intestinal, acalásia do esfincter a jusante e acúmulo de

bolo fecal) e uma síndrome ortossimpáticopriva produziria efito semelhante,

por contração espasmódica de um segmento intestinal, dilatação do segmento

a montante e acúmulo de bolo fecal). As síndromes ortossimpáticoprivas, pro¬

vavelmente explicariam os “megas” de segmentos intestinais que, a jusante,

não têm esfincter. Uma síndrome ortoparassimpáticopriva produziria a ape-

ristalse.

Entretanto, a patologia experimental mostra que a fisiologia do Sistema

Nervoso Autônomo é muito complexa e os dados colhidos freqüentemente con-

flitam entre si, além dos efeitos obtidos serem muitas vezes passageiros e alea¬

tórios.

Tais experimentos encontram inúmeros obstáculos, entre os quais sobres¬

saem: a) a inervação vagossimpática não é igual em todos os mamíferos (por

exemplo, o esôfago do gato é controlado pelo núcleo motor dorsal do vago,

enquanto que o do cachorro o é pelo núcleo ambíguo)'; b) as relações dos

plexos intramurais com os nervos simpáticos é ainda hoje assunto muito discu¬

tido, por mais que se acumulassem trabalhos para resolvê-lo, usando das téc¬

nicas mais sofisticadas, cirúrgicas e histoquímicas; conforme disse na Intro¬

dução, estamos praticamente no ponto em que Langley nos deixou no início

do século; c) o mediador químico é a acetilcolina ao nível da sinapse axo-

neuronal do primeiro para o segundo neurônios periféricos, tanto ortossim-

páticos como parassimpáticos, pois somente ao nível da sinapse neuro-muscular

é que a noradrenalina aparece como mediador ortossimpático; d) tanto as

fibras parassimpáticas atravessam, sem fazer sinapse, os gânglios ortossim-

páticos da cadeia paravertebral, como as fibras ortossimpáticas podem atraves¬

sar os gânglios parassimpáticos da cadeia pré-vertebral; e) não se sabe

até hoje o papel que as “células intersticiais” dos plexos mioentéricos represen¬

tam, pois desde Koelliker (1S96) até hoje há autores que as consideram

apenas células de sustentação, enquanto que outros, desde Cajal (1909), de¬

fendem sua natureza neuronal 25

Tudo isso, e muito mais, não permitem nenhum raciocínio seguro em

matéria de patologia humana que necessite de basear-se na fisiopatoíogia do

S. N. Autônomo, muito menos argumentar dentro do esquema teórico dessa

oposição orto-parassimpática. Por isso, qualquer argumento que desejasse u.ar

para explicar a patogênese das enteromegalias seria necessariamente simplista,

à luz dos conhecimentos atuais, como o são a maioria das explicações tentadas

até hoje.

Prefiro apenas assinalar que encontrei lesões medulares de ambos os

setores, orto e parassimpático, tanto disgcnéticas como adquiridas, cm 21 casos

de megacólon.

7. Cabe agora perguntar: a) existe megacólon adquirido puro ou sempre

há uma lesão disgenética do eixo cérebro espinhal?

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IMAXZA, li. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mem. Inst. fíntantan, .! 7: 1 19-232, 1973.

Pelo material aqui estudado, parece muito provável que haja megacólon

adquirido, isto é, sem disgenesia medular ou troncular. Com efeito, nos casos

19 e 21, as lesões vasculares assestavam-se principalmente nos centros simpá-

tivos medulares e nos seus núcleos motores, o que torna bastante plausível que

tais lesões fossem ligadas à doença enteromegálica. Não é preciso como no

ue haja megacólon

m efeito, nos casos

nos centros simpá-

como no

caso das medulas malformadas só na altura cervical, invocar a possibilidade

de outras lesões para correlacionar o megacólon ao simpático encéfalo-espinhal.

Entretanto, não podemos esquecer que o estudo do S. N. Autónomo no

S. N. Central torna obrigatório o estudo do tronco cerebral e que, sem este,

não podemos afirmar que alguma disgenesia não esteja implicada no processo.

Não posso, pois, responder de maneira cabal à pergunta.

Por enquanto, existe tanto a possibilidade de haver megacólon puro ad¬

quirido como a de todos os casos apresentarem obrigatoriamente disgenesias

do eixo cérebro-espinhal (não necessariamente medulares).

À vista dos meus achados, em ambas as eventualidades as lesões se loca¬

lizariam nos centros do S. N. Autónomo, mesmo porque o único liame entre

eixo cérebro-espinhal e intestinos são os componentes periféricos desse Sistema

(os dois neurônios motores e o neurônio interoceptivo).

b) não havendo megacólon puro adquirido, isto é, no caso do estudo do

trcnco cerebral e da medula revelar sempre a presença de disgenesia, qual o

papel que essa disgenesia representaria na doença enteromegálica?

As mal-formações congênitas constituem apenas o fator endógeno das

doenças congênitas. É claro que, por vezes, tal fator é tão intenso que, por si,

pode até constituir-se em condição incompatível com a vida. Mas, em regra,

não é isso cpie acontece: a disgenesia é apenas o fator predisponente e- para

que se manifeste como doença é preciso cpie incida sobre ela um fator exógeno,

que pode ser da mais variada natureza, física, química ou biológica.

As alterações de desenvolvimento que descrevi nas medulas dos casos de

megacólon e as que provavelmente existem no tronco cerebral, representam

apenas o substrato constitucional sobre o qual irá incidir um fator exógeno

que alterará o equilíbrio adaptativo entre o organismo e disgenesia, provocan¬

do o aparecimento da enteromegalia.

Esse fator exogeno, mesmo entre nós, não é necessariamente a doença

de Chagas, inda que esta, devido à sua gravidade possa se constituir em tal

fator (nos meus casos não havia indícios de sua participação). No caso 20, nessa

ordem de raciocínio, sobre u’a medula mal-formada, se instalou um processo

adquirido (arteriolosclerose) que representa o fator exógeno.

8. Quanto à etiologia, no caso de haver megacólon adquirido puro, a

noxa poderia ser a mais variada possível, desde que capaz de produzir lesões

atróficas, degenerativas ou necróticas nos centros simpáticos medulares e tron-

culares já descritos. Em tais casos, as enteromegalias seriam síndromes.

No caso de haver sempre uma disgenesia medular ou troncular, a etio¬

logia permaneceria desconhecida na maioria dos casos, pois até hoje muito

219

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Z

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PIAZZA, R. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Mcrn. Inst. Butantan, 37: 149-232, 1973.

pouco se sabe a respeito. Nestes casos, as enteromegalias seriam doenças con¬

gênitas, mesmo se manifestadas a partir da idade adulta.

9. Para dirimir as dúvidas sugeridas por esta pesquisa, compete:

a) estudar de maneira sistemática o tronco-cerebral e a medula dos

casos de megacólon;

b) o tronco cerebral deve ser estudado em cortes seriados do bulbo (sede

do núcleo cárdio-pneumo-entérico ou dorsal do vago) e a medula em cortes

semi-seriados de segmentos identificados quanto ao metâmero, a partir das

raízes nervosas;

c) determinar qual o segmento intestinal dilatado e verificar, a jusante,

se o segmento estreitado coincide com um dos esfíncteres conhecidos da

Anatomia, ou não. É evidente que esta verificação pode ser aleatória, dados os

fenômenos pós-mortais.

CONCLUSÕES

1. A medula espinhal nos casos de megacólon apresenta lesões que atin¬

gem os centros e os núcleos motores simpáticos.

2. As lesões medulares são, com grande probabilidade:

a) apenas disgenéticas, na grande maioria dos casos; b) de natureza ape¬

nas degenerativa, em algumas vezes; c) em outras, de natureza combinada

3. Para saber-se com certeza se existe megacólon adquirido puro ou se

produzido exclusivamente por lesões adquiridas dos centros e núcleos sim-

todo megacólon tem um componente congênito, isto é, se existe megacólon

páticos do neuro-eixo ou se em todo megacólon existem alterações de desen¬

volvimento desses mesmos centros e núcleos, se impõe o estudo sistemático do

tronco cerebral (mais particularmente do bulbo, onde se localiza o núcleo

cárdio-pneumo-entérico), além do estudo também sistemático da medula es¬

pinhal.

220

cm

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Fig. 70

221

SciELO

MODELOS EM MADEIRA DAS DIFERENTES

ALTURAS DA MEDULA PARA ESTUDO DOS

EFEITOS DOS DIFERENTES PLANOS

DE CORTE SORRE A MORFOLOGIA

DA SUPERFÍCIE DE CORTE

Legenda:

a — superfície de corte transversal

(normal para a altura)

b — plano de secção inclinado: a ima¬

gem refletida no espelho permite

identificar a direção do plano

c — superfície de corte do plano de

secção inclinado

FLANO DE CORTE DE CIMA PARA BAIXO E DA FRENTE PARA TRÁS OU

ESQUERDA OU VICE-VERSA

PIAZZA, II. — Lesões cia medula espinhal no n-.esacólon.

Mem. Inst. Butantan, .17: 149-232, 1973.

PLANO DE CORTE DE CIMA PARA BAIXO E DA DIREITA PARA A

ESQUERDA OU VICE-VERSA (cont.)

222

SciELO

FIAZZA, K. — Lesões da medula espinhal no tnegacclon.

Mem. List. Butantan. .17: 149-232. 1973.

FLANO DE CORTE DE CIMA PARA BAIXO E DA FRENTE PARA TRAS OU

VICE VERSA

Fig. 74

224

2 3 4 5 6 SClELO 1Q 2.1 12 13 14 15

PIAZZA, lí. — Lesões da medula espinhal no megacólon.

Man. Inst. Butantan, .'?? : 149-232, 1973.

PLANO DE CORTE DE CIMA PARA BAIXO E DA DIREITA PARA A

ESQUERDA OU VICE-VERSA, QUE ENTALHA AS SUPERFÍCIES DE

CORTE HORIZONTAIS

' v 4 ^'

1

2 »

Flg. 77

227

SciELO

10 11 12 13 14 15

P GG

PIAZZA, 11. — Lesões da medula espinhal no megacõlon.

Mem. Inst. Butantan, St: 149-232, 1973.

SUMMABY — The A. studied the spi-

nal cord of 21 cases of megacolon, by

means of semi-serial microscopic sec-

tions, and confirmed dysgenetic lesions

in 18 of them, while acquired degene¬

rativo lesions were found in two and

combined lesions in one.

But, considering the anatomy of the

Autonomous Neural System, the A. con-

siders the study of the spinal cord in-

sufficient to evaluate the participation

of all the sympathetic centers and nu-

ciei in that mechanism, and concludes

that systematic research in the brain

stem is necessary, in particular of the

medulla oblongata, where the cardio-

pneumoenteric (dorsal) nucleus of the

X pair is localized.

two motor and by the sensitive Periphe¬

rie sympathetic neurones.

In the two cases with acquired le¬

sions, atrophy of sympathetic motor

nuclei were found (secondary lesions);

in 15 of the 19 cases with dysgenetic

cordal lesions (including that with com¬

bined lesions), aplasia, hypoplasia and

dysplasia of sympathetic motor nuclei

(primary) were found; on the remnant

cases, the developmental changes did

not allow to identify the same nuclei.

The A. considers such data of outstan-

ding significance to explain the patho-

genetic mechanism of megacolon, sinco

the linkage between the spinal cord

and the intestine is established by the

UNITERMS — Megacolon; spinal cord

developmental changes; spinal cord

dysgenesias; abdominal Autonomic Ner-

vous System.

In his work the A. shows the incon-

sistency of the theory of Koeberle et

al., that attributes the etiology of me¬

gacolon to the Chagas’ disease.

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Recebido para publicação em 17.IX.73.

Aceito para publicação em 06.XI.73.

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Mem. Inst. Butantan

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OCORRÊNCIA DE NEOPLASIA MESENQUIMAL FUSO-CELULAR EM

PEIXE DA ESPÉCIE MoenkJmusia dichroura (Kner, 1858)

JESUS CARLOS MACHADO *

ISAO KONDA* *

LILIANI SUSAN LIMA***

Laboratório de Anatomia Patológica do I. Butantan

Disciplina de Patologia da Fac. Medicina de Catanduva

RESUMO —■ Descrevem os autores a

presença de um Sarcoma fibroblástico

de baixo grau histológico de malignida¬

de na pele de um peixe da espécie

Moenkhausia Aicliroura (Kner, 1948),

encontrado no município de Borborema,

Estado de S. Paulo, no porto de Laran¬

ja Azeda. Assinalam a importância do

relato dessas neoplasias em peixes,

principalmente tendo em vista o descar¬

te de .poluições ambientais.

UNITERMOS — Neoplasias. Neoplasias

em Peixes.

INTRODUÇÃO

A ocorrência cie neoplasias espontâneas em peixes, até 1966, veio sendo

publicada de forma fragmentária, não coordenada, e constituída por relatos

isolados como por exemplo os de Lucké (1942), Gordon e Smith (1938) e

Ilalver e Mitchel (1967).

A partir de 1966, o esforço conjunto do “National Câncer Institute” e

do “Smithsonian Institute”, permitiu a criação do “Registro de tumores em ani-

fnais inferiores”. Este registro vem sistematicamente catalogando a incidência

de neoplasias em invertebrados e animais poiquilotermos.

Em 1969, a Universidade de South Dakota em Vermillion, estimulou um

Simpósio organizado por O.W. Neuhaus e J. E. Ilalver cuja temática específica

foi: “O Peixe na pesquisa”. Nesse Simpósio foi dedicado um capítulo especial

sobre neoplasias espontâneas e experimentais em peixes. Nele, podemos, desde

logo, depreender as excelentes informações que são obtidas de relatos de neo¬

plasias espontâneas nesses animais, relatos esses que permitem desde logo,

não só valiosos dados estatísticos sobre a ocorrência e localização das Neopla¬

sias nesses animais, como também tirar ilações sobre a ação de carcinogênicos

em animais aquáticos relacionando-a também com possíveis poluições am¬

bientais. Daí julgarmos oportuno a publicação do encontro de uma neoplasia

* Diretor cia Divisão de Patologia cio I. Butantan e Professor titular da Disciplina de

Patologia da Fac. de Med. de Catanduva.

** Monitor da Disciplina de Patolocia da FAMECA.

Apresentado em setembro de 1972 na Seoãn de Anatomia Patológica da Associação

Paulista de Medicina presidida pelo Prof. W. E. Maffei.

*** Bolsista do FEDIB do I. Butantan. Trabalho realizado com auxílio do FEDIB.

Endereço para correspondência :

C -P- G5, São Paulo, Brasil.

233

cm

SciELO

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MACHADO, J. C., KONDA, T. & LIMA, L. S. — Ocorrência de neoplasia Mesenqulmal

fuso-celular em peixe da espécie Moenkhausia ilichroura (Kner, 1858).

Mem. Inst. Butantan, 17: 233-238, 1973.

fuso-celular espontânea em exemplar de Moenkhausia dichroura (Kner, 1858)

em rio do Estado de São Paulo, Brasil.

MATERIAL E MÉTODOS

Um dos autores do presente relato (1. Konda), apanhou no Rio Tietê- no

Município de Borborema, a 1.000 metros aproximadamente do porto de Laranja

Azeda (desenho 5) um exemplar de peixe, catalogado pelo Museu de Zoolo¬

gia da Universidade de São Paulo (Seção de Plerpetologia), como pertencente

a espécie Moenkhausia dichroura (Kner, 1858).

O exemplar medindo cerca de 15 cms. apresentava (fotos 1 e 2), no seu

terço posterior, lado esquerdo, formação tumoral, ovalar, saliente, medindo

3,8 cms. de comprimento por 2,4 cms. de largura e 1,2 cms. de altura. A

pigmentação da pele nesse local era mais escura. Ao corte observou-se que a

neoplasia era de cor brancacenta, fasciculada, apresentando-se no derma, sem

comprometer ou ulcerar a epiderme. Seus limites eram precisos, não havendo

macroscopicamente comprometimento de estruturas profundas. A pigmenta¬

ção era restrita a epiderme e não à neoplasia.

Foram efetuados numerosos cortes do tumor que, após inclusão em para¬

fina, foram corados pela Hematoxilina e Eosina e Tri-crômico de Masson.

Observou-se que a neoplasia era composta por feixes de células fusiformes que

se entrecruzavam. Os núcleos alongados na maoiria, ovalares mais raramente

(Microfotografias 3 e 4), mostraram cromatina regularmente bem distribuída.

Alguns núcleos mostraram discreta intranquilidade. Raros feixes tumorais com¬

prometiam a musculatura subjacente. A nossa conclusão foi a de que se trata¬

va de um sarcoma fibroblástico de baixo grau histológico de malignidade,

desde que a coloração pelo Tri-crômico de Masson mostrou serem as células

fibroblastos, pois, se bem que discreta, havia produção de fibras de colágeno.

O estroma tumoral mostrava evidente edema intersticial.

DISCUSSÃO

Na literatura oncológica tem sido relatada a presença de neoplasias em

peixes. Gordon e Smith (1938) publicaram o achado de melanomas malignos

nos peixes Plalypoecillus niacidatus e Xiphophorus hellcri, Gorbman e Gordon

(1951) demonstraram a ocorrência de elevada incidência de neoplasias espon¬

tâneas da tireoide em peixes mantidos em laboratórios da espécie Xiphophorus

montezumae. Em outras duas espécies de Xiphophorus e quatro de Platij-

poecillus, mantidas em condições semelhantes esses tumores foram mais raros.

Alguns tumores como os hepatomas, bem estudados por Halver e Mitchell

(1967), mostraram ocorrência epidêmica em peixes das espécies Salmo gaird-

neri. S. darki e 8’. trutta em várias localidades dos Estados Unidos e Europa.

Sobre neoplasias fuso-celulares temos a descrição de Lueké em 1942 que

relacionou-as com Schwanomas humanos. R. Walker (1948 e 1961) relatou a

presença de tumores múltiplos na pele de Stizostedion vitreum, possivelmente

234

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5 6

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MACHADO, J. C., KONDA, I. & LIMA, L. S. — Ocorrência de neoplasia Mesenquimal

fuso-celular em peixe cia espécie Moenkhausia dichroura (Kner, 1858).

Mem. Inst. Butantan, 37: 233-238, 1973.

fibromas ou fibrosarcomas. Nesses tumores foram descritas a presença de par¬

tículas semelhantes a virus de cerca de 1.000 Á de diâmetro.

O nosso caso mostrou ser uma neoplasia fuso-celular, dispostas em feixes

entrecruzados e que pela coloração pelo Tri-crômico de Masson mostrou pro¬

dução de fibrilas colágenas. Portanto a neoplasia se cataloga entre os tumores

fibroblásticos e não entre os Schwanomas. Apesar do tumor ser bem diferen¬

ciado, encontramos uma certa intranqüilidade nuclear que apesar de discre¬

ta (microfotos 3 e 4) cremos poder nos permitir dar o diagnóstico de sarco¬

ma fibroblástico de baixo grau histológico de malignidade. Apesar do cuidado

com que os patologistas referem-se a essas neoplasias nos peixes, a insinuação

dos feixes tumorais por entre as fibras musculares no nosso caso, reforça o

diagnóstico.

SUMMARY —• The AA. describe a fi-

bloblast sacoma, with a low histolo-

gieal degree of malignancy, on the skin

of the fish species Moenkhausia di¬

chroura, found in the municipality of

Borborema, State of São Paulo, at La¬

ranja Azeda harbor.

The importance of reporting these

neoplasias in fish is emphasized mainly

with regard to the discharge of envi-

ronmental pollution.

UNITERMS — Neoplasias. Neoplasias

in fish.

BIBLIOGRAFIA

1. GORBMAN, A. & GORDON, M. — Spontaneous thyroidal tumors in swordtail

Xiphophorus montezumae. Câncer Res., 11: 181-187, 1951.

2. GORDON, M. & SMITH, G. M. — The production of a melanotic neoplastic dis-

ease by selective matings: IV Genetics of Geographical species hybrids. Am.

J. Câncer, 34: 543-546, 1938.

3. HALVER, J. E. & MITCHELL, in NEUHAUS, O. W. & HALVER, JE. — Fish in

Research. Academic Press, London, 1869.

4. LUCKE, B. — Tumors of the nerve sheats in fishes of the snapper family (Lu-

tianidas). Arch. Path 34: 133-150, 1942.

5. NEUHAUS, O. W. & HALVER, J. E. — “Fish in Research”. Academic Press,

London, 1969.

6. WALKER, R. — Lymphocystic warts and skin tumors of walleyed pike Rensse-

laer Polytech, 14, Troy, 1948.

7. WALKER, R. — Amer. Zool., 1: 395-397, 1961.

Recebido para publicação cm 20 . VII. 73.

Aceito para publicação em 20.VIII.73.

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MACHADO, J. C., KONDA, I. & LIMA, L. S. — Ocorrência de neoplasia fuso-celular em

peixe da espécie Moenkhausia dichroura (Kner, 1858).

Mem. Inst. Butantan, 37: 233-238, 1973.

(Kner, 1858),

mostrando a

Foto 1 : Fotografia lateral do exemplar de Moenkhausia dichroura.

mostrando o tumor no seu terço posterior.

Moenkhausia dichroura (Kner, 1858),

tumoral no terço posterior do exemplar.

Foto 2 : Fotografia de

saliência

SciELO

MACHADO, .1. C., RONDA, I. & LIMA, L. S. — Ocorrência de neoplasia fuso-celular etn

Peixe da espécie Moenl.hausia tUchronra (Kncr, 1858).

-1/ein. Tnst. Butantan, .17: 233-238, 1073.

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Foto 3 : Microfotografia do tumor mostrando ser composto por feixes de células

fusiformes com moderada produção de fibrilas observáveis no estroma que está

edemaciado.

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Voto 4: Microfotografia evidenciando moderado polimorfismo e diferenças

tintoriais nos núcleos dos elementos neoplásicos.

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MACHADO, J. C., KONDA, I. & LIMA, L. S. — Ocorrência de neoplasia fuso-celular em

peixe da espécie Moenkhausia dichroura (Kner, 1858).

Mem. Inst. Butantan, 3 7 : 233-238, 1973.

^rem. Inst. Butantan

37: 239-251, 1973

ANOMALIAS CONGÊNITAS EM UMA NINHADA DE “CASCAVÉIS” *

FRANCISCO GARCIA DE LANGLADA **

Laboratório de Biopatologia de Serpentes

Seção Anatomia Patológica — I. Butantan

RESUMO — Foram encontrados em 20

exemplares de filhotes de Crotalus du-

nssus terrificus nascidos em cativeiro,

agenesias de pupila, intestino grosso,

cloaca e órgãos genitais.

Anomalia das presas, esôfago, estô-

m ago, intestino delgado, fígado, rins,

ureteres e orifício cloacal ocorreram

também nos mesmos filhotes observa¬

dos.

Desvio de coportamento, hábitos e

reações também foram constatados nos

mesmos exemplares, por comparação

com indivíduos normais.

UNITERMOS

cascavéis.

Ninhada anômala de

INTRODUÇÃO

No desenvolvimento dos trabalhos que nosso laboratório realiza sobre

reprodução artificial e adaptação a cativeiro de serpentes venenosas, encon¬

tramos uma ninhada de cascavéis, cujas anomalias nos pareceu útil descrever

J a que não encontramos semelhantes na literatura.

Procedente da Fazenda São Joaquim, do Instituto Butantan, situada em

São Roque (SP), chegou ao nosso laboratório um exemplar de Crotalus duris-

sus terrificus fêmea, adulta, em bom estado de saúde, sem sinais externos de

trauma ou ferimentos, com 120 cm de comprimento e 1,280 quilos de peso

com oito aneis no guizo e com evidentes sinais de prenhez.

Foi posta em observação em local em que existia possibilidade de loco¬

moção, com água corrente e temperatura controlada, que oscilava entre 26° e

2S°C. Alimentou-se espontaneamente duas vezes, com camundongo branco de

laboratório, com intervalo de dez dias. Bebia água, evacuava fezes normais

que depositava a maioria das vezes na água corrente.

Permanecia por longos períodos de tempo com a porção caudal introdu¬

zida na água. Tinha agressividade normal que se acentuou à medida que o

parto se aproximava. Locomovia-se pouco. Ignoramos a paternidade e a data

da cópula.

Comunicado na XIV Reunião Anual da Sociedade Brasileira para o Progresso da Ciência

Bio de Janeiro, GB — 12.Julho. 1967.

** Assistente do Instituto Butantan.

* Trabalho realizado com auxílio do CNPq.

Trabalho realizado com auxílio do FKDIB.

Endereço para correspondência:

^•B. 65, São Paulo, Brasil.

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LAKGLADA, F. G. DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis”.

Mim. Inst. Butontaiij J7 : 239-251, 1973.

Após 49 dias de laboratório a serpente pariu espontaneamente 20 filhotes,

sendo os 17 primeiros vivos e os 3 últimos mortos. Durante todo o trabalho

de parto a fêmea não se deslocou do local. Os períodos de expulsão eram

curtos de 30 a 60 segundos, com intervalos de 10 a 20 minutos entre uma expul¬

são e outra.

Permaneceu em repouso a maior parte do tempo durante 44 dias em que

sobreviveu ao parto. Não mais se alimentou, bebeu pouco e não procurou

mais a água para suas evacuações ou para submergir a porção caudal. Veio a

falecer no 44° dia após o parto.

Na autopsia encontramos ampla necrose com perfuração extensa do ovi-

duto direito que exteriorizava 3 filhotes em avançado estado de putrefação.

Peritonite com abudante exsudato de aspecto mucopurulento na cavidade ab¬

dominal. Demos como “causa mortis”: Toxemia.

MATERIAL E MÉTODOS

Usamos como mrterial de estudo os próprios filhotes da ninhada nascida

cm nosso laboratório, objeto deste trabalho.

Como método essencial de trabalho usamos a comparação dos dados fí¬

sicos e de comportamento da ninhada referida, com os mesmos dados por nós

registrados na observação de ninhadas de outras serpentes do mesmo gênero,

também nascidas em nosso laboratório, e que já vinhamos observando de longa

data com o fim de estabelecer um critério padrão de vida, crescimento, com¬

portamento, etc... do filhote de Crotcilus (Estas observações serão motivo cie

próxima publicação).

Logo após a parto, separamos a ninhada para exame físico, pesagem, me¬

dida e outras observações.

Um dos filhotes morreu dentro das primeiras 24 horas. Na necropsia en¬

contramos várias agenesias e anomalias.

Passadas as primeiras 24 horas os 16 filhotes vivos foram isolados em uma

caixa de madeira de 9 m 2 de superfície e cujo fundo foi recoberto em porções

iguais de terra seca, terra úmida, areia seca, areia úmida, pedregulhos, paus

secos, capim seco e uma porção livre do próprio chão epie é de cimento. Isto

tudo para conhecer as preferências individuais ou de grupo pelo tipo de solo.

Sobre cada amostra de solo foi colocada uma pequena abóbada de pape¬

lão que permita a idéia de “toca”.

No centro da caixa existia uma goteira de 2,50 metros com areia, terra

e pedras pela qual era mantida água corrente. A temperatura ambiente foi

controlada entre 25° e 28°C. Não nos foi possível determinar a umidade rela¬

tiva nem a pressão atmosférica.

Das observações da ninhada, pudemos anotar as seguintes alterações de

comportamento em relação aos recém-nascidos normais, cuja conduta foi pa¬

dronizada pela observação de cerca de 1000 exemplares nascidos em nosso

laboratório.

Desde que nosso estudo é comparativo, exporemos sempre juntos, os

resultados dos normais e dos observados como segue.

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TjAXGIíADA, F. G. DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis”.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 239-251, 1973.

A) Peso e Medida individuais:

Os filhotes da ninhada em estudo, apresentavam-se em bom estado de

saúde.

Peso e medida estavam dentro dos limites que admitimos como normais:

peso médio 27,5 g e 23,5 cm de comprimento.

B) Presas

No filhote que consideramos como normal, as presas são em número de

duas, recobertas por mucosa e de tamanho capaz a permitir facilmente sua

exteriorização.

Nos filhotes em estudo, encontramos em 6 deles, presas duplas em ambos

os lados, de diâmetro normal mas de comprimento tão exagerado a ponto de

não poderem ser exteriorizadas pela abertura da cavidade bucal.

Uma outra anomalia constatada na cavidade bucal foi a ausência das

fileiras de pequenos dentes paralelos à fissura palatina.

C) Troca de Pele

Nas observações de filhotes normais, anotamos a primeira troca de pele

entre as 24 e 48 horas após o nascimento. Na ninhada observada, somente al¬

guns exemplares trocaram de pele, fazendo-o apenas após o 4.° dia de vida.

D) Olhos

Nos filhotes da ninhada em estudo, constatamos a ausência de pupila em

todos os exemplares. Apresentavam olhos cor azul celeste, límpidos e brilhantes,

semelhantes aos das serpentes albinas, independendo esta cor das mudanças

de pele, o que nos assegurou não ser o desprendimento desta, a causa aparente

da ausência de pupila.

E) Agressividade

O filhote normal é extremamente agressivo à aproximação de qualquer

objeto estranho, que desencadeia nele um movimento rápido para armar o

bote, um movimento vibratório de agitação de cauda, e uma agressão em

forma de picada, com golpes rápidos e certeiros bem dirigidos ao objeto de

que se quer defender.

Os filhotes observados armam o bote como os normais mas não agitam a

cauda e agridem indistintamente em qualquer direção não reagindo rapida¬

mente à presença de objetos estranhos próximos, e não coordenando a dire¬

ção do bote para o objeto; pelo contrário, agrediam em picadas dirigidas a

todos os lados, sem método ou controle, dando-nos a impressão de perce¬

berem o objeto estranho sendo, no entanto, incapazes de situá-lo.

F) Pesquisa do ambiente

Os normais o fazem com a língua em movimentação rápida no sentido

vertical e antero-posterior; os da ninhada observada exteriorizavam lentamente

a língua, sem fazer movimentos com ela.

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LANGLADA, F. G. DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis”.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 238-251, lí)73.

G) Percepção

As serpentes adultas, quando em cativeiro, apresentam uma espécie de

“curiosidade” pelos objetos estranhos levados junto a elas e os “estudam” e

“pesquisam” com a língua (C. B. Perkins, 1942); observamos esta mesma con¬

duta nos filhotes normais. Os filhotes anormais por nós observados, permane¬

ciam entretanto, completamente indiferentes diante de quaisquer objetos.

Noble, 1934 e Noble e Schmidt, 1937, descrevem uma percepção do calor

até com variações de 2°C da temperatura ambiente e que é acusada pelas

serpentes pela movimentação de sua cabeça em direção ao foco de maior

calor. Para nosso teste usamos um ferro aquecido a 100°C mais ou menos, que

passávamos lentamente a várias distâncias das serpentes e pudemos verificar

que as normais o “percebiam” desde a distância de 50 cm até a distância má¬

xima de 10 metros. As observadas nunca o “percebiam” ou melhor, nunca deram

demonstração alguma de que o percebessem, em nenhuma distância.

H) Luz artificial dirigida:

Quando em plena escuridão fazemos incidir um feixe de luz diretamente

sobre um filhote de cascavel, verificamos que após curto espaço de tempo o

animal se locomove, procurando novamente a sombra, enquanto que as por

nós observadas permaneciam imóveis.

I) Movimentação

Consideramos como comportamento normal, o dos filhotes repousarem

enrolados, isolada ou agrupadamente durante o dia, dando preferência a áreas

secas e utilizando-se, quase sempre, das “tocas” artificiais de papelão.

Estes filhotes, à noite, percorrem a área de cativeiro indistintamente em

todas as direções.

Na ninhada observada, os filhotes se locomoviam durante o dia e, cu¬

riosamente, todos sempre na mesma direção, seguindo o sentido dos pon¬

teiros do relógio. Mesmo quando interceptada, por nós, sua marcha, tornavam

a caminhar no sentido dos ponteiros do relógio. Descansavam à noite, isolados,

sem se enrolarem e sem procurarem o abrigo das “tocas” e, preferentemente,

sobre terra úmida.

J) Reptação em plano inclinado

Usamos para esta prova uma prancha de papelão colocada no chão da

caixa onde vivem os filhotes.

Quando um deles se aproxima de uma das extremidades da prancha, ele¬

vamos a outra até obtermos um plano inclinado dc 45° aproximadamente. Os

filhotes normais, quando sobem pela prancha, fazem um percurso de 1 m com

duas ou tres paradas no caminho. As observadas, quando tentavam subir na

prancha, desistiam a poucos centímetros do início, deixando-se cair para os

lados.

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LANGLADA, F. G. DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis”.

Mcrn. Inst. Butantan f 31: 239-251, 1973.

K) Agrupamento

Os normais descansam enrolados sobre si mesmos e geralmente procuram

agrupar-se, enquanto que os da ninhada em estudo permaneciam estirados e

não se agrupavam.

L) Alimentação

Usamos para alimentação camundongos recem-nascidos. Os normais agri¬

dem, matam e ingerem a presa, os da ninhada em estudo agrediam, mata¬

vam, mas não ingeriam a presa.

M) Água

Os normais procuram ao longo do “rio” um lugar adequado em profun¬

didade e correnteza para beber, com escolha nítida do local, mantendo sem¬

pre o corpo fora da água, quando bebem, enquanto que na ninhada observa¬

da, os filhotes vão para a beira da água, sem escolha do local, introduzindo,

por vezes, o corpo inteiro na água, para beber.

Das necropsias

À medida que os filhotes iam morrendo eram realizadas necropsias que

nos permitiram constatar uma série de agenesias e anomalias internas.

Estas necropsias, que foram feitas dentro do possível, pelo mesmo mé¬

todo que as autopsias humanas, mostraram os resultados que serão a seguir

relatados.

Omitiremos a citação das vísceras que não apresentavam alterações ma¬

croscópicas.

Em 12 especímens encontramos fígado mole e rosado, que nada lembra

o comumente achado de cor marrom vinhosa.

A vesícula biliar, nos exemplares que tiveram maior sobrevivência, apre¬

sentava engurgitamento. Grande infiltração biliar foi encontrada tanto no in¬

testino delgado quanto no grosso.

O intestino delgado apresentava-se na quase totalidade dos casos com

ausência de alças, como um tubo reto, de paredes espessas com consistência

muito aumentada e pouca flexibilidade (aspecto de papelão).

O intestino grosso, em todos os casos, apresentava-se imperfurado ter¬

minando em fundo de saco e continha fezes amarelas em maior ou menor

quantidade.

Em 12 casos, encontramos união do fundo de saco do intestino grosso à

parede abdominal, na altura do úraco. Este foi encontrado nos mesmos 12

filhotes, recoberto'por panículo adiposo com aspecto de gomo de tangerina.

Em 2 casos, encontramos vestígios de cloaca, sem conteúdo fecal, apenas

com escassa urina.

Em 3 casos- os rins se apresentavam divididos em segmentos separados

entre si, ligados apenas pelo pedículo vascular; em 10 exemplares, havia au¬

sência de ureteres e em 1 dos exemplares, os mesmos terminavam no antro

cloacal.

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LANGLADA, F. G DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis”.

Mem. Inst. Jiutantan, S7: 239-251, 1973.

Em 16 casos, os rins eram fortemente bocelados, com aspecto e consis¬

tência de rim adulto de serpente.

Foi notada ausência de órgãos sexuais em todos os casos.

Damos, a seguir, uma tabela que resume todos os dados das anomalias

encontradas e sua freqüência e as fotografias que mostram algumas destas

anomalias.

SUMMARY — In 20 young specimens

of Crotalus terrificus born in captivity,

agenesias of the pupil, large intestine,

cloaca, and thc genital organs were

found.

Anomalies of the fangs, esophagus,

stcmach, small intestino, liver, kidneys,

ureters and cloaca were also found ln

the same newly hatched snakes.

The same specimens showed further-

more deviations of behavior, habits and

reactions, as compared to normal in¬

dividuais.

UNITERMS

rattlesnakes.

Anomalous hatch of

Recebido para publicação em 10.VIII.73

Aceito para publicação em 18.IX.73

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215

cm

2 3 4 5 6 SciELO 10 2.1 12 13 14 15

AMARAL, A. do — Ofionlmia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense.

Meni. Inst. Butantan, 37: 1-15, 1973.

puzzling are the references made to these ‘giant’ serpents under the names of

‘boiguaçu’, ‘jibóya’, or ‘cobra de veado’, and ‘boi guaçu’ or ‘cobra de veado’,

respectively, by W. Piso and G. Marcgravius in Historia Naturalis Brasiliae,

Ed. F. Hackium, Leyden & L. Elzevirium, Amsterdam, 1648, ch. III & ch.

XIII, fig. ..

In this connexion the following facts must be reminded:

1. The terrestrial species preferably feeds on rodents (mice.rats, cavies,

rock-cavies, hares, pacas and agoutis) such preys being compatible with its

size and particular ecology; and so it seldom needs to resort to constriction,

excepting when it catches some ‘suaçu-berá’ ( Mazama simplicicornis) at the

caatinga edge, where it uses to hunt; thence comes its name ‘deer-snake’ as

repeated by Marcgrave and by M. Wied.

2. The aquatic (amphibious) species is omnicarnivorous, irrestrictly feed-

ing, first, on fish and frogs; later, on birds, peccaries, deer, etc., in accord

with its body size and stomach capacity as well as with the facilities found in its

double habitat; therefore, it resorts to constriction as a rule.

3. Linné was apparently induced to apply in his Syst. Naturae (1758)

the name murina to the water boa in view of the rat-hunting tendency

(“murium insidiator”) that Seba assigned to this snake in R. Natur. Thesauri

(1735), in table 29 of which a rat was figured (fig. 1) aside (although at a

lower levei) the snake.

4. Certainly impressed by the errors his predecessors made in this field

in most ancient publications (especially Linné in Syst. Naturae, 1758; Lau-

rentius in Syn. Reptilium, 1768; Lacépède in Hist. Nat. Reptiles, 1801;

Schneider in Hist. Amphibiorum, 1801; Daudin in Hist. Nat. Générale, 1803;

and Merrem in Tent. Syst. Amphibiorum, 1820), Schlegel in Essai, 1837, se-

riously attempted at systemat.zing the question and establishing, in the light

of more correct data on the range of several and important boids, a bettcr

basis for their distinction since their definitions were mostly founded ou oid,

poorly preserved specimens in museum collections. And, on having a chance

to deal with the water boa, he aptly remarked that Linné gave “à cctte espéce

un nom assez vague que les auteurs sependant ont conservé”.

5. As to the real distinction between both of these conspicuous snakes,

Wied, being — besides W. v. Eschwege (in J. v. Brasilien, Weimar, 1818, 2:276)

— one of the few traveller-scientists ever to make direct acquaitance with

such ophidians in vivo and in their natural habitat, was able to point out

real morpho-biologic differences between murina and constrictor. Howevcr,

in finally preparing the text of his remarkable monographs (Reise d. Brasilien,

1820; Beitr. zur Naturgeschichte v. Brasilien, 1825; and Abbildung, 1831),

Wied still kept some confusion over tliem, in including, in the description of

constrictor, particulars of “cobra de veado”. As regards this Lusitan expression,

which first appeared in Piso and Maregravius’ (1648) quoted monograph, our

herpetologic and linguistic researches induce us to admit those authors having

12

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

DANGDADA, P. G. DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis”.

Mem. Inst. Butantan, 37: 239-251, 1973.

Fig. 1 — Fotografia que mostra a cavidade bucal de um filhote da ninhada

anômala em estudo; nota-se o desproporcional tamanho das presas que ultra¬

passam, quando retraídas, as comissuras labiais. Nota-se também a não

existência de dentes nas bordas das fissuras palatinas.* Ponta terminal da Direita.

otografia que mostra a diferença entre um olho de filhote de serpente

normal, “A” e o de um filhote da ninhada em estudo “Lí”.

Note-se a ausência de pupila em ”15”

SciELO

LANGLADA, P. G. DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de

Mcm. Inst. Butantan, 37: 239-251, 1973.

cascavéis

Fig. 3 — Fotografia de um filhote de cascavel com 1G dias de vida, normal com exposição

das vísceras da cavidade ventral, em que vemos:

A) adiposidade mesentérica

B) intestino delgado em que se notam as circunvoluções das alças

C) intestino grosso

D) cloaca repleta de fezes e urina

E) rim esquerdo pouco bocelado, como é normal no filhote de serpente

P) feixo que corre paralelamente ao rim, formado por: vasos normais, ureteres e dueto

espermâtico

G) testículos

H) fígado

I) estômago

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

I.ANGLADA, F. G. DF — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis’'.

Mcm. lnst. Butantan, 37: 239-251, 1 ’•>73.

Fig. 1 — Fotografia de um dos filhotes anômalos descritos com 8 dias de vida, mostrando

as vísceras da cavidade ventral.

Observamos como anomalias:

11) intestino delgado sem circunvoluções das alças, e de consistência rija.

C) pequena porção do intestino grcsso, que se apresentava imperfurado, terminando em

forma de fundo de saco. em sua porção distai.

E) rins fortemente bocelados

K) antro da cloaca, imperfurado

Notar a ausência de cloaca, genitália e 2/3 do intestino grosso.

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

JjANGTjADA, F. G. DF — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis".

Mnn. Jnst . Butaiitail, ■!7: 230-251, 1973.

Fig. 5 — Fotografia de um des filhotes anômalos descritos com 12 dias de vida t mostrando

as vísceras da cavidade ventral.

Observamos como anomalias:

F.) intestino delgado extremamente reduzido em seu comprimento, sem circunvoluções, sem

alças, que foi por nós separado de C.

C) pequena porção de intestino grosso imperfurada e aderida em sua porção terminal à

parede costa'.

H) fígado que se apresentava de cor rosado pálido.

I) estômago

K) antro da cloaca, genitália e 5/8 do intestino grosso.

249

cm

SciELO

LANGLADA, F. G. DE — Anomalias congênitas cm uma ninhada de “cascavéis”.

Mem. Inst. Bntantan, 37: 239-251, 1973.

Fig. 6 — Fotografia de um dos filhotes anômalos, com 9 dias de vida, mostrando as vísceras

da cavidade ventral.

Observamos como anomalias:

13) intestino delgado, sem circunvoluções nem alças fortemente estenosado desde 3,5 cm

acima de sua junção com o intestino grosso.

C) intestino grosso reduzido a 3/8, aproximadamente, de seu tamanho normal, imperfurado

e fixo à parede costal em sua porção terminal.

E) rins fortemente bocelados

K) antro da cloaca que apresentava um septo transverso, imperfurado e unido à mus¬

culatura dorsal interna.

250

SciELO

cm

10 11 12 13 14 15

LANGLADA, P. G. DE — Anomalias congênitas em uma ninhada de “cascavéis”.

Mem. Inst. Butantan, 37: 239-251, 1973.

Fig. 7 — O mesmo filhote mostrado na Fig. 9, mostrando o pedículo (*) due unia C 5.

parede ventral na altura do úraco (**).

BIBLIOGRAFIA

1. NOBLE, G. K. — The structure of the facial pit of the Pit Vipers and its proba-

ble function. Anat. Rec., 58, supp. pp. 4, 1934.

2. NOBLE, G. K. & SCHMIDT, A. — The structure and function of the facial and

labial pits of snakes. Proc. Am. Philos. Soc., 77, n.° 3, 263-288, 1937.

3. PERKINS, C. B. — Something about Rattlesnakes. Zoonooz 15, n.° 11, pp. 4-5,

1942.

4. PERKINS, C. B. — More about Rattlesnakes. Zoonooz., 15, n.° 12, pp. 5-6, 1942.

251

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mem. Inst. Butantan

87: 253-260, 1973

DETERMINAÇÃO DA ÉPOCA DE FECUNDIDADE EM FÊMEAS DO

GÊNERO CROTALUS *

FRANCISCO GARCIA DE LANGLADA **

MARINEI FERREIRA GONÇALVES ***

EDNA TALARICO RODRIGUES ***

Laboratório cie Biopatologia de Serpentes

Seção Anatomia Patológica — I. Butantan

RESUMO •— Os autores tecem um es¬

tudo sobre a época de fecundidade em

serpentes do gênero Crotalus do Estado

de São Paulo.

Para tanto, pesquisam a presença de

espermatozóides no trânsito genital de

1.522 fêmeas adultas, logo após a captu¬

ra e por espaço de 4 anos, correlacio¬

nando a presença desses espermatozói¬

des, com a época de fecundidade.

Ao mesmo tempo, analisam a sobre-

vida de espermatozóides inoculados ar¬

tificialmente em 50 fêmeas, procurando

determinar a sobrevida dos mesmos no

aparelho genital feminino.

Realizam também, pesquisas anatô¬

micas no sentido de encontrar esper-

mateca ou lugar análogo no percurso

genital da fêmea de Crotalus.

Concluem o trabalho, apresentando o

tempo médio de sobrevida dos esper¬

matozóides, não tendo encontrado con¬

dições anatômicas para estocagem de

espermatozóides e dando a época pró¬

pria para fecundação entre os meses de

maio e outubro.

UKITERMOS — Epoca de fecundidade

e sobrevida de espermatozóides no trân¬

sito genital feminino em serpentes bra¬

sileiras do gênero Crotalus.

INTRODUÇÃO

Para poder levar a cabo os trabalhos de inseminação artificial que esta¬

mos realizando, já de longo tempo no laboratório, precisamos estudar, com

exatidão, a época do ano em que as serpentes do gênero Crotalus ( C. d.

terríficas e C. d. collelineatus ), do Estado de São Paulo, estão aptas a serem

fecundadas.

Através da literatura pertinente consultada, que citamos na discussão, fi¬

camos alertados da possibilidade de serpentes se reproduzirem em cativeiro,

sucessivas vezes, sem presença de macho. Isto nos fez supor numa estocagem

de espermatozóides de cópula anterior ou numa faculdade de retardar, quer

a fecundação, quer o desenvolvimento embrionário.

* Comunicado III Congresso Bras. de Zoologia.

Tlio de Janeiro — 20.Jul.1968.

** Assistente do Instituto Butantan.

*** Bolsista do P.E.D.I.B.

* Trabalho realizado com auxílio do CNPcj.

* Trabalho realizado com auxilie do FED1B.

1, | SciELO

253

LANGLADA, P. G. I >10. FERREIRA GONÇALVES, AI. & RODRIGUES, E. T. — Determi¬

nação da época de fecundidade em fémeas do género Crotalus.

Mom. Inst. Butantan, 31 : 253-260, 1973.

Essa mesma literatura dava-nos as idéias mais díspares sobre épocas de

reprodução, dependendo, claro está, das espécies estudadas e das condições

ecológicas das mesmas.

Além disso, quase todos estes trabalhos eram feitos por estudos histoló¬

gicos do aparelho genital quer do macho, quer da fêmea, e, na maioria dos

casos, com número extremamente pequeno de exemplares.

Sabíamos também pela literatura, das possibilidades do ciclo 9 ser

bienal, trienal e até mesmo com espaços maiores.

Sendo assim, parecia-nos que um estudo específico de nossa cascavél, de¬

talhado e preciso, deveria ser feito, em grande número de exemplares, e por

longo tempo, para podermos ter uma base firme em nossa inseminação ar¬

tificial.

Este estudo foi planejado de forma a obter o maior número possível de

respostas concretas a nossas interrogações, respostas estas que tentamos reu¬

nir, parte no presente trabalho, parte no já publicado “Ciclo Sexual Bienal de

Serpentes Crotalus do Brasil” Comprovação. Memórias do Instituto Butantan,

36 : 67-72, 1972, e ainda parte no “Estudo da cadeia hormonal de serpentes do

gênero Crotalus” a ser publicado brevemente.

Para o desenvolvimento do presente trabalho, dividimos nossa pesquisa

em dois campos:

1. ° “Possibilidades de fecundação a longo prazo sem presença de macho”,

isto é, possibilidades de estocagem de espermatozóides, sobrevida dos mes¬

mos no aparelho genital da fêmea ou possibilidades de retardo, quer da

fecundação, quer do desenvolvimento do embrião (também na fêmea), após

a cópula e,

2. ° Época de fecundidade das mesmas.

Para tanto procedemos da seguinte maneira:

MATERIAL E MÉTODOS

Como apenas o estudo histológico não nos fornecia dados suficientes a

uma conclusão certa, já que não seria possível obter biopsias periódicas de

um mesmo exemplar durante 2 ou 3 anos e que por outra parte, mesmo que as

obtivéssemos, não poderíamos precisar quais as influências no ciclo das suces¬

sivas retiradas cirúrgicas de fragmentos do aparelho genital, optamos por dar

maior atenção à presença de espermatozóides no trânsito genital da fêmea.

Assim estabelecemos verificar, durante 4 anos, em duas fêmeas diferentes

por vez, em dias alternados, a presença de espermatozóides no trato genital

das mesmas, e a relação dessa presença com a transformação macroscópica do

óvulo e sua localização, certos de que iríamos encontrar uma época do ano em

que o número de serpentes com espermatozóides no trânsito genital nos desse

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

LANGLADA, F. G. DE, FERREIRA GONÇADVES, M. & RODRIGUES, E. T. — Determi¬

nação da época de fecundidade em fêmeas do gênero Crotalus.

Mcm. lnst. Butantan, 37: 253-2G0, 1973.

apoio para afirmar ter havido cópula espontânea, sendo portanto óbvio que

deveria corresponder, essa época, com a do período de fecundidade da fémea.

Usamos para este estudo fêmeas vivas provenientes de captura, recebidas

no Instituto Butantan e outras por nós capturas nas proximidades de São Paulo.

Como método para exame retiramos por laparotomia mediana, ovários, úte¬

ros (oviduetos) e vaginas, que eram abertos, com tesoura estéril, longitudinal¬

mente.

Recolhíamos, por contato direto de lâmina para microscopia, o conteúdo

de todo o interior da vagina e útero, indo pesquisar a presença de espermato¬

zóides e o estado dos mesmos.

Ao mesmo tempo, exame do ovário era feito, tanto no sentido de pro¬

curar células sexuais femininas, quanto masculinas.

Para podermos ter uma idéia mais exata da possível sobrevida dos esper¬

matozóides no trânsito genital feminino após cópula, coletamos esperma de

machos vivos, por retirada cirúrgica de ambos os canais deferentes e expressão

dos mesmos sôbre placa de plexiglas. Introduzimos este esperma sem diluição

ou outro qualquer tratamento nas vaginas de fêmeas vivas, usando seringa e

agulha equipada com um tubo de polietileno P — 90, de mais ou menos 5 cms

de comprimento, com o fim de colocar o esperma certamente nos fundos de

saco vaginais. Recolhemos diariamente por cateterismo com bastão de vidro

adequado, a secreção vaginal e uterina de cada fêmea inseminada, para a pes¬

quisa de espermatozóides vivos, controlando sua motilidade e duração da

vitalidade.

Estudamos por este método 50 serpentes fêmeas, colocando em ambas as

vaginas de cada uma o total de esperma retirado dos conductos espermáticos

de cada um dos 50 machos vivos utilizados.

Depositados os espermatozóides, recolhíamos diariamente, parte do con¬

teúdo das vaginas e úteros de cada fêmea em estudo, com auxílio de um bas¬

tão especial de vidro, para pesquisa do estado dos espermatozóides.

Ainda tínhamos a saber das possibilidades de existência na fêmea de

Crotalus de receptáculo análogo ou não à espermateca de alguns insetos, que

permitisse armazenar espermatozóides por períodos de tempo mais ou menos

prolongados, sem alterações para os mesmos nas possíveis prenhezes periódicas

desse animal.

Para tanto, examinamos o trânsito genital completo de 100 fêmeas adultas,

com auxílio de microscópio estereoscópico, já que seriados histológicos seriam

proibitivos, dado o tamanho de cada aparelho genital feminino (25 cm apro¬

ximadamente de comprimento de vagina a ovário e ainda em número de 2 em

cada fêmea).

As técnicas utilizadas para estes procedimentos são objeto de trabalho em

próxima publicação.

O material usado para este trabalho foi: Serpentes do gênero Crotalus (C.

d. terrificus e C. d. collelineatus) adultos com peso médio de 400 gramas

(máximo de 700 e mínimo de 350 gramas), todas procedentes do Estado de

São Paulo,

255

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

LANGLADA, F. G. DE, FERREIRA GONÇALVES, Aí. & RODRIGUES, E. T. — Determi¬

nação da época de fecundidade em fémeas do género Crotalus.

Mcm. Inst. Butantan, ./ 7: 253-260, 11)73.

O período de estudo foi de janeiro de 1967 a Dezembro de 1970. Usamos

um total de 1522 fêmeas e 50 machos.

RESULTADOS

Introduzido o esperma, por injeção, no trânsito genital de 50 serpentes,

usando 1 cada 3 dias, por espaço de pouco mais de um ano, verificamos na

colheita diária de conteúdo de vaginas e úteros, a presença de espermatozói¬

des vivos e com motilidade desde um mínimo de 5 dias após o depósito do

esperma até um máximo de 59 dias, dando-se esta presença da seguinte forma:

De 1 a 10 dias: abundantes espermatozóides com motilidade normal,

todos vivos.

De 11 a 20 dias: grande número de espermatozóides com motilidade

normal, outros com motilidade diminuída, mas todos

vivos.

De 21 a 30 dias: boa motilidade de 50% dos espermatozóides vistos por

campo e o restante totalmente imóvel, mas íntegro.

De 31 a 50 dias: queda acentuada do número de espermatozóides, da

sua vitalidade e motilidade, encontrando-se muitos res¬

tos de espermatozóides em fase de desintegração. Ape¬

nas uma serpente apresentou espermatozóides vivos

após 60 dias, se bem que em número muito pequeno e

motilidade quase nula.

Examinados detalhadamente, com auxílio de microscópio estereoscópico,

100 úteros e 100 vaginas correspondentes a 50 serpentes adultas, durante um

espaço de 12 meses consecutivos, não encontramos receptáculos, prega ou lugar

que, a nosso ver, permitisse a estocagem de espermatozóides. A presença dos

mesmos, quando achados, quer em serpentes por nós inseminadas, quer nas

vindas de liberdade por captura, eram encontrados sempre disseminados atra¬

vés do útero, em toda a extensão deste, podendo ter agrupamento de maior

população, tanto na raiz da vagina, quanto em qualquer ponto dos 25 cms

aproximados de comprimento de cada útero.

Estes achados nas fêmeas, vindas por captura, eram sempre bilaterais, isto

é, davam-se todas as vezes nos 2 úteros e em intensidade semelhante.

A existência de espermatozóides no trato genital feminino foi comprovada,

a partir de maio aumentando em junho, julho e agosto, diminuindo em setem¬

bro, outubro, e. desaparecendo totalmente na primeira quinzena de novembro.

Simultaneamente encontramos a partir de julho, migração do óvulo do

ovário para o útero. Não raro encontramos serpentes prenhes ainda com es¬

permatozóides vivos na vagina.

Verificamos que, durante os quatro anos consecutivos que pesquisamos a

presença de espermatozóides, os resultados de cada ano praticamente se su¬

perpunham.

256

cm

2 3

L

5 6

10 11 12 13 14 15

uacjuo «la época ile fecundidade em fêmeas do gênero Crotalus.

Mevi. Inst. Butantan, .17 : 2511-260, 1972.

Apresentamos a seguir uma tabela do resultado médio geral, durante os

4 anos.

Nesta tabela, constam além das épocas de presença dos espermatozóides

no aparelho genital da fêmea, os meses do ano em epie encontramos serpentes

prenhes.

DISCUSSÃO

Na farta literatura pertinente, encontramos as mais diversas e contradi¬

tórias opiniões, quer no que se refere às possibilidades de estocagem de es¬

permatozóides, quer nas possíveis épocas de reprodução, nas diferentes es¬

pécies.

Wood, 1933 menciona acasalamento de fêmeas prenhes, durante o verão.

Saint-Girons (1952, 1957, 1966); Dottrens (1963); Duguy (1964) referem

haver sempre um acasalamento na primavera e outro no outono, sendo férteis

apenas os da primavera.

Belluomini e cols., (1966), num estudo citológico e ponderai do testículo

de C. d. tenificiis, realizado no período de um ano, afirmam haver maturidade

sexual do macho dessa espécie no período de janeiro e maio, sendo de junho

a setembro o período de repouso sexual.

Berry, e Lim, (1967) relata que, durante um ano de observação de exem¬

plares de Homolapsis bucccita de clima equatorial, não encontrou uma época

lixa e definida de reprodução.

Osgood, 1969 refere-se sobre as influências climáticas no acasalamento

de serpentes.

De um modo geral, todos esses autores relatam, de um modo lato, as

épocas de acasalamento, sem definí-las exatamente, dando, muitas vezes, a en¬

tender que haveria grande influência das condições climáticas e ecológicas na

época da reprodução.

Wcodward, (1933); Haines, (1940); Kopstein, (1938); Rahn, (1940), e

Blanchard e Blanchard, (1940), afirmam ser possível encontrar espermatozóides

com motilidade e capacidade de fecundação normais, dentro do aparelho ge¬

nital da fêmea, por longo período, após a cópula.

Sosnowsky, (1940) admite a possibilidade de atraso de fertilização, re¬

latando um caso de fêmea de Elaphe dione , coletada em agosto cie 1936

e que veio a colocar ovos férteis em maio de 1937.

Trapido, (1940) cita haver encontrado espermatozóides com motilidade

normal no trânsito genital feminino, desde o outono, até a primavera seguinte.

Haines, (op. cit.) encontra estocagem de espermatozóides em Leptodeim

mmulata por espaço superior a 6 anos, pela observação da presença de ovos

férteis nesse espaço de tempo.

Rahn aventa a possibilidade de a cascavel da pradaria manter espermato¬

zóides vivos no trânsito genital feminino, que sobreviveriam durante todo o

inverno.

cm

2 3

z

5 6

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LANGLADA, F. G. DE, FERREIRA GONÇALVES, M. & RODRIGUES, ET. — Determi-

naQ&o da época de fecundidade em fêmeas do gênero Crotalus.

Mem. Inst. Butantan, 87: 253-200, 1973.

O mesmo autor, (1942), relata ter encontrado espermatozóides confinados

somente na porção posterior do útero, em fêmeas, após longo espaço da cópula.

Ralin (1942) também parece encontrar uma correlação entre a presença

de espermatozóides no trânsito genital feminino e a fase do ciclo ovariano do

mesmo.

Carson (1945) observou a postura de ovos fecundados, após 4 anos e 4

meses de cativeiro, sem presença de macho, de um exemplar fêmea de Dry-

marchon corais.

Darevsky (1971) admite também, a possibilidade de estocagem de es¬

permatozóides no trânsito genital feminino, por observação de um exemplar

fêmea de Xenodon merremii que durante 2 anos e 10 meses, em cativeiro, sem

contacto com macho, depositou ovos fecundados.

Klauber (1956) dedica' em seu livro Rattlesnakes, um capítulo a comen¬

tários sobre a reprodução da cascavel norte-americana.

Todos esses autores relatam fatos por eles observados, sendo concordantes

no fato da possibilidade de existência de armazenamento de espermatozóides

no trânsito genital feminino de serpentes ovíparas que permitiria posturas su¬

cessivas de ovos fecundados, e que, nas serpentes vivíparas, haveria possibili¬

dade de sobrevida longa desses espermatozóides.

Com relação à época de maturidade sexual dos machos do gênero Crotalus,

referida no trabalho de Belluomini e cols., op. cit, que é baseada no peso pon¬

derai do testículo, notamos anteceder essa época ao período de fecundidade das

fêmeas, por nós encontrado. Essa antecipação poderia ser explicada como um

preparo sexual prévio do macho que, carecendo de vesícula seminal, reteria o

esperma no dueto espermático e possivelmente no próprio testículo.

Com a entrada da fêmea na época propícia à cópula, os duetos espermá-

ticos seriam esvaziados, por coito, dando vazão ao conteúdo testicular, com con-

qüente diminuição de seu peso, coincidindo esses achados com o início do

cio das fêmeas.

CONCLUSÃO

Baseados em nossos achados, podemos afirmar não haver aparente possi¬

bilidade anatômica de estocagem de espermatozóides por pei iodos superiores

a 60 dias, no aparelho genital da fêmea de Crotalus do Estado de São Paulo,

se bem que os mesmos tenham sobrevivido até 59 dias, com motilidade normal,

quando introduzidos artificialmente nas mesmas.

Por outro lado, parece-nos poder fixar a época de fertilidade das fêmeas

de Crotalus do Estado de São Paulo, corno sendo entre os meses de maio

a agosto.

A presença de espermatozóides até o mes de outubro, apresentada em

nossas tabelas, é explicada apenas como sendo a sobrevida desses no trato

genital feminino, após a cópula.

cm

2 3

z

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10 11 12 13 14 15

LANGLADA, F. G. DF, FERREIRA GONÇALVES, M. & RODRIGUES, E. T.

nação cia época cie fecundidade em fêmeas do gênero Crotalus.

Mem. Inst. Butantan, 37: 253-260, 1973.

Determi-

* £

259

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

NUMERO DE EXEMPLARES PESQUISADOS

SUMMARY — The AA. study the fe-

cundity period in snakes of the .'jenus

Crotalus in the State of São Paulo.

ca or some similar place in the genital

tract of the Crotalus female.

To this purpose they investigated

the presence of spermatozoa in the

genital tract of 1522 females, soon after

capture and during a period of 4 years,

correlating the presence of these sper¬

matozoa with the fecundity period.

The average survival time of the

spermatozoa was establishcd, no anato-

mic conditions for storage of the samc

having been found. The period fa-

vorable for fecundation is given as

between the months of May and Octo-

ber.

Simultaneously the survival time of

spermatozoa artificially inoculated in

50 females was analyzed.

UNITERMS — Fecundity period and

survival of spermatozoa in the genital

tract of female Brazilian snakes of the

genus Crotalus.

Anatomic examinations were also made

with a view to finding a spermathe-

BIBLIOGRAFIA

1. BELLUOMINI, H. E; FRANCO DE MELLO, R ; PENHA, A. M. & SCHREI-

BER, G. — Estudo citológico e ponderai do testículo de Crotalus durissus terri-

ficus durante o ciclo reprodutivo anual. Meui. Inst. Butantan, Simp. Internac.

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Recebido para publicação em 10.VIII.73.

Aceito para publicação em 18.IX.711.

260

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Mem. Inst. Butantan

37: 261-290, 1973

CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO DAS SERPENTES DO

ESTADO DE PERNAMBUCO

CARMEM L. CORDEIRO **

A. R. HOGE *

Seção de Herpetologia, Instituto Butantan

RESUMO ■— No presente trabalho

foram registradas 28 espécies de ser¬

pentes não venenosas: 3 Boidae e 25

Colubridae: 5 espécies de serpentes

venenosas marcando um total de 250

espécies.

UNITERMOS — Serpentes do Nordes¬

te brasileiro.

Considerando que ainda liá muitas lacunas no conhecimento da fauna

ofiológica do Nordeste brasileiro, julgamos útil a publicação da presente lista,

constando de tabelas.

MATERIAL:

Foram estudadas as seguintes coleções:

DEH = Depto. de Ecologia do Instituto de Biociências da Universi¬

dade Federal de Pernambuco.

IBM = Coleção dc Ofídios da Seção de Herpetologia do Instituto

Butantan.

MZUSP = Museu de Zoologia da Universidade de São Paulo.

DISCUSSÃO

O número relativamente elevado de especimens examinado, permite uma

melhor avaliação da distribuição geográfica, pois a maioria dos especimens

provém de localidades onde a sua ocorrência das espécies não tinham sido

constatada.

Ampliou-se também a distribuição geográfica conhecida para a espécie

mossoroensis recentemente descrita.

Para um estudo mais pormenorizado da distribuição de acordo com as

regiões fitogeográficas, ainda se necessitam de muito mais especimens.

« e ** Trabalho realizado com auxílio do CNPq e TJ.F.PE.

Endereço para correspondência :

C.P. 05, São Paulo, Brasil.

261

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CORDEIRO, C. L. & HOGE, A. R. — Contribuição ao conhecimento cias serpentes do Estado

de Pernambuco.

Mem. I7ist. Butantan, 37: 2G1-290, 1973.

LISTA DAS ESPÉCIES

Boa constrictor constrictor . 263

Corallus em/dris enydris . 263

Epicrates cenchria assisi . 264

Apostolepis cearensis . 264

Clelia occipitolulea . 264

Chironius carinatus . 365

Chironius flavolineatus . 366

Dipsas neivai . 266

Dnjmarchon corais corais . 267

Helicops angulatus . 267

Helicops leopardhms . 268

Dromicus alinadensis . 269

Dromicus poecilogyrus xerophilus . 270

Dromicus veridis . 272

Leptotyplops brasiliensis . 272

Liophis cobella . 273

Liophis mossoroensis . 273

Mastigoãryas bifossatm triseriatus . 274

Oxybelis aeneus . 274

Oxyrhopus rhombifcr rhombifer . 275

Oxyrhopus trigeminus . 275

Pseudoboa nigra . 277

Plnlodryas nattereri . 278

Philodryas olfersii . 279

Tantilla melanocephala melanocephala . 283

Thamnodynastes pallidus . 283

Thamnodynaslcs strigilis . 284

Waglerophis mcrremii . 284

Micrurus frontalis altirostris . 28o

Micrurus ibiboboca . 285

Bothrops erythromelas . 286

Crotalus [Crotalus] durissus cascavella . 286

Lachesis muta noctívaga . 287

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Mem. Inst. Butantan, 37: 2G1-290, 1973.

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ele Pernambuco.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 201-290, 1073.

ABSTRACT — In thc present paper are

registered 28 species of non-poisonous

snakes: 3 Boiclac and 25 Colubridae; 5

species of poisonous snakes making a

total of 250 spccimens.

UNITERMS • — Northeastern Brazilian

snakes.

ACKNOWLEDGEMENTS

We are indebted to the Conselho Nacional de Pesquisas for the grant, and

to the Departamento de Ecologia da Universidade Federal de Pernambuco.

AGRADECIMENTOS

Nós agradecemos ao Conselhos Nacional de Pesquisas pela bolsa e ao

Departamento de Ecologia da Universidade Federal de Pernambuco.

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Recebido para publicação em 30.VI.72.

Aceito para publicação em 28.VIII.73.

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37: 291-298, 1973

CONSIDERAÇÕES TAXONÒMICAS SOBRE CISTOS ESQUIZOGÔNICOS

E SOBRE GAMETÓCITOS DE HEPATOZOON (SPOROZOA,

IIAEMOGREGARINIDAE) PARASITAS DE SERPENTES BRASILEIRAS. * **

SAMUEL B. PESSÔA "

PÉRSIO DE BIASI * *

Seção de Venenos

Instituto Butantan

RESUMO — Os autores mostrara a di¬

ficuldade existente na caracterização

das espécies de Hepatozoon parasitas

de serpentes, pela morfologia dos cistos

esquizogônicos ou dos gametocitos, de¬

vido à semelhança daqueles em muitas

espécies, bem como a variabilidade des¬

tas últimas formas. Dão vários exem¬

plos com microfotografias de Hepato¬

zoon parasitas de serpentes para ilustrar

esta asserção.

UNITERMOS — Hepatozoon, Haemo-

gregarina, cistos esquizogônicos, game-

tócitos, taxonomia.

INTRODUÇÃO

As serpentes podem ser parasitadas por várias espécies de Hepatozoon,

sendo que o critério taxonômico para separá-las, reside ainda hoje, principal-

mente, na aparência morfológica de gametocitos no sangue periférico do animal

e, mais raramente, também na dos cistos esquizogônicos encontrados nos órgãos

internos dos hospedeiros. Após termos examinado, no Instituto Butantan, várias

espécies de serpentes venenosas e não venenosas, notamos cistos e game-

tócitos muito semelhante entre si, de hepatozoons parasitas de diferentes espécies

de serpentes.

Em ambos os casos, caracteres toxonômioos baseados na morfologia de

cistos ou de gametocitos podem ser falhos e levar a se confundir hepatozoons

de espécies provavelmente diferentes, apesar de não se saber definitivamente

ainda, se diferentes espécies de serpentes albergam ou não, diferentes espécies

de hepatozoons.

MATERIAL E MÉTODOS

Os exames de sangue foram feitos sempre de serpentes vivas, pelo seu

esfregado em lâminas e coradas pelo Giemsa e às vezes pelo May-Grunwald-

* Trabalho do Instituto Butantan.

** Bolsista do FE'DIB.

»*« Chefe da Seção de Venenos do Instituto Butantan.

ICndereço para correspondência:

C.P. G5, São Paulo, P.rasil.

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PESSOA. S. B. & BIASl, P. — Considerações taxonômicas sobre cistos esquizogônicos e

sobre gametócitos de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregrarinidae) parasitas cie serpentes

brasileiras.

Mem. Inst. Butantan, 87 • 291-298, 1973.

Giemsa. Exames histológicos cios órgãos internos eram feitos somente em caso

de ser o animal positivo para hepatozoon, sendo os tecidos fixados pelo formol

102 ou pelo Bouin e os cortes corados pela hematoxilina-eosina; também foram

feitas impressões destes órgãos que eram fixadas pelo álcool metílico e coradas

pelo Giemsa.

De uma serpente altamente parasitada por hepatozoon e com grande nú¬

mero de formas anômalas dos gaxnetócitos, foi extraído o sangue pelo Dr. Oscar

de Sauza Lopes (Instituto Adolfo Lutz) e tentado o isolamento de vírus, com

resultado negativo.

RESULTADOS OBTIDOS

A) Cistos esquizogônicos — estes cistos do Hepatozoon são encontrados

em vários órgãos internos das serpentes, sendo vistos mais comumente no

fígado e no pulmão, mas podem ocorrer no baço, miocárdio, submucosa intes¬

tinal, etc. Como se sabe, os esquizontes do Hepatozoon podem formar duas

categorias de cistos: os “macrocistos”, contendo numerosos pequenos merozoi-

tas — “os micromerozoitas” —, e os “microcistos” que contém poucos “macro-

merozoitas” com morfologia e tamanho semelhante ao dos gametócitos circulan¬

tes nos eritrócitos das serpentes. MacKerras (1961) denomina aos primeiros de

esquizontes X e aos segundos de esquizontes Y; mas tanto a origem como o

destino de ambos são ainda obscuros.

Baseados na morfologia de tais cistos, a separação específica em muitos

casos pode ser falha. Assim, nas figuras 1 a 4 temos microfotografias de cistos

do Hepatozoon morfologicamente idênticos, encontrados em 4 diferentes es¬

pécies de serpentes:

Philodrtjas aestious, serpente n.° 233, procedente de Jundiaí, SP, em

1/2/1966, corte de cisto no miocárdio (fig. 1);

Spillotes pullatus frullatus, serpente n.° 317, procedente de Três Lagoas,

MT, em 28/3/1967, corte de pulmão (Fig. 2);

Crotalns duríssus terríficas, serpente n.° 352, de Santa Rita do Passa

Quatro, SP, em 27/3/1967, corte de cisto no fígado (fig. 3);

Helicops modestas, sem procedência, corte de fígado (fig. 4).

Pelo exame destas microfotografias, vê-se que os cistos esquizogônicos,

morfologicamente idênticos, impossibilitam a separação específica somente ba¬

seada em sua morfologia.

Exemplos de “microcistos” com dois ou três maeroesquizontes, que tam¬

bém se mostram morfologicamente idênticos, temos nas serpentes:

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10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B. & BIASI, P. — Considerações taxonômlcas sobre cistos esquizogõnicos o

sobre gametócitos de Jlcpatozoon (Sporozoa, Haemogregrarinklae) parasitas de serpentes

brasileiras.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 201-298, 1073.

a) com somente dois esquizontes:

Mastigodnjas bifossatus bifossatus, serpente s/n.°, corte de fígado (fig. 5);

Liophis miliaris, serpente n.° 310, corte de fígado (fig. 6);

Bothrops jararaca, serpente n.° 312, procedente de Araguaia, corte de

fígado (fig. 7);

b) com três esquizontes:

Chironius flavolineatus, cobra n.° 62, procedente de Ponta Grossa, PR, em

25/11/1966, corte de fígado (fig. 8);

Pliilodrtjas patagoniensis, serpente n.° 74, procedente de São José dos

Pinhais, em 29/4/1966, esfregaço de fígado (fig. 9).

Também se verifica a impossibilidade da separação específica por meio

destes cistos.

Achamos desnecessário citar outros exemplos, entretanto, queremos fazer

notar’ que de fato, há cistos que diferem muito uns dos outros nas diferentes

espécies, mas há cistos semelhantes encontrados em espécies de serpentes ta-

xonomicamente distantes.

B) Gamctócitos — temos freqüentemente encontrado ao lado das formas

normais, outras formas de gametócitos no sangue de várias espécies de ser¬

pentes.

Na Hydrodijnastes gigas, Liophis miliaris e Hclicops carinicaudus (figs.

10, 11 e 12) ocorrem gametócitos que se caracterisam pelo grande desenvol¬

vimento do citoplasma com aspecto esponjoso, os quais ocasionam grande

alongamento do eritócito parasitado e deslocamento de seu núcleo para um

d.s pólos da célula. O eritrócito não parece entretanto apresentar alterações,

como as que se encontram, por exemplo, nos núcleos dos eritrócitos parasitados

por espécies pertencentes ao gênero Karyolysus Labbé, 1894.

O parasita chega a alcançar até 30 microns de comprimento e a célula 35

microns. A serpente que apresenta mais freqüentemente estas formas é a

Liophis miliaris.

Além das espécies acima citadas, encontramos esta forma ocorrendo tam¬

bém no Chironius bicarinatus (cobra-cipó).

Os gametócitos do hepatozoon da Liophis miliaris podem apresentar ainda

outras formas, que nos parecem anormais (figs. 13, 14 e 15) vemos que são

arredondadas ou ovaladas, deslocando fortemente o nkcleo e hipertrofiando o

glóbulo vermelho. Tais formas se aproximam dos gametócitos que encontramos

na Hydrodynastes gigas (fig. 16).

Finalmente, na Philodnjas patagoniensis (fig. 17), há uma forma por

nós encontrada, em que o hepatozoon apresenta uma parte delgada, em forma

de cauda, extremamente exagerada. O núcleo do eritrócito fica deslocado e

achatado, talvez devido à compressão mecânica.

293

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Z

5 6

11 12 13 14 15

- a,. *. Considerações taxonômicas sobre cistos esquizogOnicos o

sobre gametócitos de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregrarinidae) parasitas de serpentes

brasileiras.

Mem. Jnst. líutantan, 37 : 291-298, 1973.

COMENTÁRIOS

Pensamos que este nosso estudo está de acordo com o ponto de vista de

Hull e Camin (1980), quando mostram a impossibilidade da separação espe¬

cífica de hepatozoons somente pelas diferenças morfológicas das formas in-

traeritrocitárias. Aqui vamos mais longe, pois também encontramos tal im¬

possibilidade se quisermos nos basear nas formas esquizogônicas que se mul¬

tiplicam nas células do sistema retículo-endotelial. Para Acholonu (1964) a

evolução dos hepatozoons em varias categorias de invertebrados, por exemplo,

mosquitos, sanguessugas, carrapatos, etc. seria elemento indiscutível para sua

separação. Porém, como Pessoa e cols. (1970) mostraram, o hepatozoon da

llydrotlynasles gigas pode evoluir em sanguessuga e em mosquito, o que

levou aqueles autores a concluírem ser a serpente em apreço parasitada por

duas espécies diferentes de Hepatozoon. Para Hull e Camin (1956), so¬

mente a transmissão experimental dos parasitas entre espécies diferentes de

serpentes poderá resolver a questão. Seria, como lembrou Brumpt (1946) a

utilização do xenodiagnóstico para a identificação das espécies de Hepatozoon

Segundo Krasilnikov (1969), a evolução do hepatozoon se processa por

aumento de tamanho do gametócito; inicialmente a capsula e o gametócito no

seu interior permanecem ovais; após, o gametócito dobra-se formando uma

concavidade (forma em “jack-kniíe”) e posteriormente aparecem as formas

com longos processos caudais. Segundo o autor em apreço tais formas de

hepatozoon ocorrem unicamente no Cáucaso. Entre nós também ocorrem estas

formas, em espécies diversas de hepatozoons das serpentes, e damos uma

figura do Hepatozoon da Philodryas patagoniensis (fig. 17) para ilustrar esta

asserção, porém as temos encontrado em outras espécies.

Terminando estes comentários, não podemos ainda afirmar que existe uma

só espécie de hepatozoon parasita de serpentes, porém pensamos que, é ne¬

cessário intensificar as experiências que já vem sendo feitas em pequena

escala, relativamente à transmissão experimental entre serpentes criadas cm

laboratório e livres de qualquer contato com possíveis agentes transmissores,

para podermos resolver a importante questão das espécies válidas do gênero

Hepatozoon.

SUMARY — The authors show that the

characterization of hepatozoon species

parasiting snakes, based on the mor-

phology of the schizogonic cysts and on

the gametocytes in the peripheric blood,

is difficult due to the similarity of tho

former in a great number of spccies,

and to the variability of the latter.

UNITERMS — Hepatozoon. Haemogre-

garina, schizogonic cysts, gametocytes,

taxonomv.

BIBLIOGRAFIA

ACHELONU, A. — 1969 — Haemogregarina (Sporozoa) in Ophidians from Louisia-

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294

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

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sobro gametõcitos de Hegatozoon (Sporozoa, Haemogregrarinidae) parasitas de serpentes

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Recebido para publicação em 18 .VI.73.

Aceito para publicação em 1:7.IX.73.

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PESSOA, S. B, & BIAST, P. — Considerações taxonômicas sobre cistos esquizogônicos e

sobre gametõcltos de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregrarinidae) parasitas de serpentes

brasileiras.

Mem. Inst. Butantan, 57: 201-208, 1073.

f *

; n

12

Fig. 7. Cisto esquizogônico (microcisto com 2 esporozoitas) : Bothrops

jararaca.

Figs. S e 0. Idem (idem com 3 esporozoitas) : 8. Chironius flavolineatus; 9.

Philodryas patayoniensis.

Fies. 10 a 12. Oametócitos alongados: 10. ITydrodynastes yiyas; n. Liophis

minaria; 12. Helicops carinicaudiis.

(Aumentos: figs. 7 a 9, x 1.500 ; figs. 10 a 12, x 1.800)

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SciELO

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Mem. Inst. Butantan

■S7: 299-307, 1973

NOTA TAXONÔMICA SOBRE CISTOS ESPOROGÒNICOS DE ALGUMAS

ESPÉCIES DE HEPATOZOON (SPOROZOA , HAEMOGREGARINIDAE)

PARASITAS DE SERPENTES BRASILEIRAS 0

SAMUEL B PESSÔA * *

PÉRSIO DE BIASI ***

Seção de Venenos — Instituto Butantan

RESUMO — Os autores estudam a mor- serem elas muito uniformes, não se

fologia das formas esporogônicas, prin- prestando, diferenças morfológicas aca-

cipalmente dos cistos e esporocistos de so encontradas, para a caracterização

espécies de Hepatozoon parasitas de taxonômica das espécies do gênero He-

serpentes, Após fazerem uma revisão do patozoon parasitas de serpentes.

assunto e terem analisado estas diver¬

sas formas em hospedeiros interme- UNITERMOS — Hepatozoon, Haemc-

diários, como sanguessuga, carrapato gregarina, cistos esporogônicos, íaxo-

e mosquito, chegam à conclusão de nomia.

INTRODUÇÃO

Em nota anterior os autores (1973) 1 , fizeram alguns comentários iaxo-

nômicos sobre gametócitos e cistos esquizogônicos de Hepatozoon parasitas

de algumas espécies de serpentes brasileiras. Esta nota pode ser considerada a

segunda parte daquela, pois agora abordamos em nossos comentários os cistos

esporogônicos das serpentes referidas na nota anterior.

Também aqui queremos mostrar as dificuldades em se caracterizar as

espécies de Hepatozoon parasitas de serpentes, empregando-se critérios morfo¬

lógicos das formas evolutivas.

Damos no Quadro I a relação dos Hepatozoon parasitas das serpentes

estudadas e dos hospedeiros intermediários em que evoluem.

MÉTODOS EMPREGADOS

Os métodos usados para a infecção dos hospedeiros intermediários, iá

foram dados em artigos anteriores e citados na bibliografia deste trabalho.

Quanto ao carrapato achado, que ainda não tínhamos publicado, trata-se

do encontro de esporocistos isolados (provavelmente devido à ruptura de

* Trabalho feito com auxilio do Fundo Especial do Despesas do Instituto Butantan.

** Bolsista do FEDIB.

*** Chefe da Seção de Venenos do Instituto Butantan.

Endereço para correspondência :

C.P. 05, São Paulo, Brasil.

299

cm

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Z.

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PESSOA, S. 13. & BIASr, I*. — Nota taxonômica sobre cistos esporogônlcos cie algumas

espécies cie Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas cie serpentes brasileiras.

Mem. Inst. Butantan , 37: 299-307, 1973.

um oocisto) em um Ambhjomma agamum Aragão, 1912, que parasitava a

serpente Pseustes sulphureus, parasitada por sua vez, por uma espécie de He-

patozoon, ainda não descrita. Quando à espécie de sanguessuga usada, tem sido

a Haementeria lutzi, criada em laboratório c capturada em Goiânia, Estado de

Goiás.

QUADRO I

N.° de

registro

Nome da

serpente

Data da

publicação

Hospedeiros

intermediários

Observações

794

1072

Liohis miliaris

Liophis miliaris

1969 (2)

Haementeria lutzi

Sanguessuga

897

Helicops carinicaudus

1969 (3)

Haementeria lutzi

Sanguessuga

56

Hydrodynastes pigas

1970 (4)

Haementeria lutzi

Culex fatigans

Sanguessuga

Mosquito

1111

Hydrodynastcs pigas

1971*

Haementeria lutzi

Culex fatigans

Mosquito

NS.719

Leptophis ahaetula

1973*

Culex fatigans

Mosquito

NS.276

Corallus caninus

1970 (5)

Culex fatigans

Mosquito

NS.282

Thamnodynastes stri-

gatus

1970 (6)

Culex dolosus

Mosquito

H- 41

H-401

Bothrops moojeni

1971 (7)

Culex dolosus

Mosquito

H-131

Bothrops alternatus

1972 (8)

Culex dolosus

Mosquito

888

Pseustes sulphureus

1969*

Amblyomma agamum

Carrapato

* Publicado

pela primeira vez neste

trabalho.

Em relação aos mosquitos, usamos, mais freqüentemente o Culex dolosus,

pois, parece-nos que pica com maior facilidade animais de sangue frio, do que

o Culex fatigam. Todas as espécies usadas foram criadas em laboratório.

A temperatura em que se desenvolveram os cistos, foi gcralmente de 26

a 2S"G e a umidade entre 75 a 807. A dissecção dos hospedeiros intermediários

foi feita em tempo variável, desde 2 a 3 dias, até 30 dias após a sucção do

sangue da serpente. A análise da morfologia dos cistos só foi feita nas bases

dos cistos maduros, pois quanto aos jovens, ao que parece, apresentam mor¬

fologia muito semelhante para todas as espécies consideradas.

RESULTADOS

Oocistos — Nos oocistos que se desenvolvem na cavidade geral dos mos¬

quitos pode-se perceber uma membrana externa delgada e transparente. O

esporoblasto e posteriormente também o esporocisto, são envolvidos por outra

300

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PKSSOA, S. 13. & BIASI, P. — Xota taxonômica sobre cistos esporogônicos de algumas

espécies de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas de serpentes brasileiras.

Mcm. Inst. Biitantan, 37: 299-307, 1973.

delgada membrana anista e entre as duas fica um espaço contendo um líquido

incolor (Fig. 1).

Já nos oocistos que se desenvolvem em sanguessugas, não pudemos per¬

ceber a membrana externa, mas neste caso o esporoblasto e, posteriormente, os

esporocistos, são envolvidos por uma única e delgada membrana anista (Fig. 2).

A existência de dupla membrana nas espécies encontradas na cavidade

geral de mosquitos nem sempre ocorre, pois pode-se encontrar oocistos despro¬

vidos de membrana externa, como nos mostra a microfotografia de oocisto de

Corallm caninus na cavidade geral do Culex (Fig. 3).

Quanto ao número de oocistos, varia muito para uma mesma espécie, pois

podemos encontrar um único no mosquito (Fig. 4) até algumas dezenas

(Fig. 5). Também os que se desenvolvem na sanguessuga são em grande nú¬

mero e parecem forrar o tecido mole subcuticular do hirudíneo (Figs. 6 e 7

oocistos do Hepatozoon da Liophis miliaris). Nos primeiros dias após a picada

os oocistos parecem se mostrar na mesma fase de desenvolvimento, sendo todos

de tamanho quase idênticos (Fig. 8 — oocistos de Hepatozoon da Bothrops moo-

jeni). Nos dias que se seguem, alguns oocistos se desenvolvem mais rapida¬

mente que seus irmãos, como se pode ver pela microfotografia (Fig. 9), que

mostra dois oocistos do Hepatozoon de CoraUns caninus no Culex fatigans, em

que um deles se desenvolveu mais rapidamente que o outro, alcançando diâ¬

metro maior, com maior número de esporocistos, ainda que pareçam ser da

mesma idade. É o que encontramos freqüentemente nos Culex dissecados em

datas diferentes, porém que picaram as serpentes no mesmo dia. Encontram-se

todas as fases de evolução dos oocistos, desde os muito jovens até os comple¬

tamente maduros, quando o mosquito é dissecado de 12 a 15 dias após o en-

gurgitamento. Pensamos que, na evolução do Hepatozoon no mosquito inter¬

venham outros fatores, além da temperatura e umidade, sendo que um deles

deve ser o de maior ou menor grau de susceptibilidade individual do díptero

O tamanho é também variável, pois podemos encontrar oocistos muito

grandes de modo a parecerem prejudicar a vida do inseto. Ver a Fig. 10, que

nos mostra um corte de um Culex fatigans com oocistos de Hepatozoon da

Comllus caninus (serpente n.° 226).

Esporocistos — No interior do oocisto, o esporoblasto pode se dividir

previamente em 2, 3 e mais massas (Fig. 11 — esporoblastos do hepatozoon

de B. moojeni), que após darão os esporocistos, ou então permanecem indivi¬

sos e dão diretamente os numerosos esporocistos. O número dos esporocistos no

oocisto varia, porém em geral são muito numerosos. Na fig. 12, temos um oocis¬

to com 9 esporocistos do hepatozoon da Liophis miliaris, na sanguessuga, e na

Fig. 13 um oocisto com uma centena de esporocistos do hepatozoon da B.

moojeni.

Às vezes, provavelmente devido à alteração da temperatura ou da umi¬

dade, o oocisto e o esporoblasto se degeneram e este último se transforma em

uma massa amorfa (Fig. 14), ou então as paredes dos esporocistos, bem como a

membrana do oocisto se espessam, desaparece a estrutura dos esporozoítas que

se transformam em uma massa amorfa (Fig. 15).

301

cm

2 3

Z.

5 6

11 12 13 14 15

PEJSSOA, S. H. & BIASI, P. — Nota taxonômica sobre cistos esporogônicos de algumas

espécies de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas de serpentes brasileiras.

Man. Inst. Butantnn , 37: 299-307, 1973.

Esporozoítas — O número dos esporozoítas nos esporocistos também é

variável em uma mesma espécie. Damos na Fig. 16 um exemplo de três espo¬

rocistos do Hepatozoon da C. caninus, em que se pode notar perfeitamente

este fenômeno. Os esporozoítas que se desenvolvem na sanguessuga (Fig. 17

Hepatozoon da Hydrodynastes g/g as, serpente n.° 1.111), não parecem dife¬

rir morfologicamente daqueles que se desenvolvem em mosquitos (Fig. 18),

bem como no carrapato (Fig. 19 — esporocisto com esporozoítas encontrado no

carrapato A. agarnum parasitando a serpente n.° S16, por sua vez parasitada por

Hepatozoon sp.)

Em alguns casos os esporozoítas ( Hepatozoon da B. moojeni, B. jararaca,

etc.), ao que parece, se originam de uma zona central do esporoblasto, que

permanece indivisa, como se pode ver pela microfotografia Fig. 20. Tal apa¬

rência nunca tivemos ocasião de ver em esporozoítas que se desenvolvem em

sanguessugas.

CONCLUSÃO

Do que ficou relatado concluímos sobre a grande uniformidade morfológica

dos cistos e esporocistos de espécies de hepatozoon parasitas de serpentes' mes¬

mo quando estas se acham colocadas bem distantes na escala toxonômica.

O mesmo se verifica ao compararmos estes parasitas encontrados em san¬

guessuga e em mosquitos, evoluindo o hemosporídio de maneira bastante uni¬

forme em ambos os hospedeiros, apresentando, é claro, diferenciação morfoló¬

gica ligada à sua adaptação cm hirundíneos e artrópodes. Chegamos a obter

evolução de hemogregarina de uma serpente ( Hydrodynastes gigas) em mos¬

quito e em sanguessuga, que, provisoriamente consideramos como espécies

distintas. Mas esta conclusão não está demonstrada, sendo possível conside¬

rá-la uma única espécie evoluindo em dois hospedeiros diversos. Só conseguimos

ver esporocistos e esporozoítas uma única vez em carrapato, sendo o aspecto

destes organismos idênticos aos encontrados em sanguessugas e em mosquitos.

Ao nosso ver, torna-se processo dificilmente utilizável na prática da siste¬

mática do gênero Hepatozoon tentar a classificação das suas diversas espécies

baseando-se na morfologia das formas esporogônicas do organismo. Aliás seria

também processo excessivamente trabalhoso, principalmente (piando se trata

de espécies de Hepatozoon parasitando serpentes muito raramente encontradas

na natureza.

SUMARY — The authors make com-

ments on the sporogonic cysts of somo

species of Hepatozoon parasites of Bra-

zilian snakes.

The study of these cysts and sporo-

cysts in mosquitoes, leeches and ticks

shows that they arc very similar to

each other and do not evidence ade-

quate characteristics for their separa-

tion.

UNITERMS — Hepatozoon, Haemo-

gregarina, sporogonic cysts, taxonomy.

302

SciELO

10 11 12 13 14 15

cm

PESSOA, S. 13. & BI A ST, P. — Nota taxonômica sobre cistos esporogônlcos de algumas

espécies de ITepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas de serpentes brasileiras.

Mem. Jnst. Butantan, 37: 209-307, 1973.

— Oocisto do Hepatozoon da IiolJirops vioojeni no Culex fatigam.

— Oocisto maduro de Hepatozoon da Helicops caHnicaudus na

sanguessuga.

— Oocisto do Hepatozoon da Corallus caninus no mosquito.

— Um único oocisto na cavidade geral do Culex.

— Numerosos oocistos na cavidade geral do Culex (Hepato.zoou

da Corallus caninus).

— Oocistos com esporocistos na sanguessuga (Hepatozoon da

lAophis miliaris), visto por compressão do corpo do Hirudíneo.

(Aumentos: figs. 1, 2, 3 — x 320; figs. 4, 5, G — x 40)

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PKíSSOA, S. P. & J3IASI, P. — Nota taxonômica sobre cistos esporogônicos <le algumas

espécies de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas de serpentes brasileiras.

31 cm. Inst. Butantan, 37: 299-307, 1973.

Fig. 7 — Oocistos com esporocistos na sanguessuga ( Hepatozoon da Liophis

miliaris), vistos por corte da parede da sanguessuga.

Fig. S — Oocistos jovens do Hepatozoon da Bothrops moojeni no mosquito.

Fig. 9 — Oocistos maduros no Cv.lex (Hepatozoon da Corallus caninus).

Fig. 10 — Corte de Ciilex para mostrar oocistos de grande tamanho (oocistos do

Hepatozoon da Corallns caninus).

Fig. 11 — Ksporoblasto em divisão em um oocisto de Hepatozoon da Bothrops

moojeni no Culcx dolosus.

Fig. 12 — Oocisto com nove esporocistos maduros (Hepatozoon da Liophis miliaris

na sanguessuga).

(Aumentos: Figs. 7, 9, 11 e 12 — x 320; fig. 8 — x 80; fig. 10 — x 40)

304

2 3 4

5

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B. & BlASI, P. — Nota taxonômica sobre cistos esporogônicos de algumas

espfcies do Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas de serpentes brasileiras.

Mera. Inst. Eutantnn, .37: 203-307, 3973.

Fig. 13 — Oocisto com numerosos esporocistos (Hepatozoon da IS. moojeni no Culex).

Fig. 14 — Oocisto degenerado, o esporoblasto se transforma em uma massa amorfa.

Fig. 15 — Oocisto degenerado; os esporocistos apresentam as paredes muito degeneradas.

Fig. 16 —• Esporocistos do Hepatozoon da C. canlnus, em mosquito Culex.

(Aumentos: figs. 13, 14 e 15 — x 370 ; fig. 16 x x 1.400)

2 3 4

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B. & BIASI, P. — Nota taxonômica sobre cistos esporogônicos cie algumas

espécies de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas de serpentes brasileiras.

Mem. Jnat. Butantan, "7: 200-307, 1073.

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Fig. 17

Fig. 18

Fig. 20

20

Esporozoitas do Hepatozoon da Hydrodynaates gigas na sanguessuga.

Esporozoítas do Hepatozoon da Coralina caninus no mosquito.

Esporocisto com esporozoítas do Hepatozoon da li. moojeni, na cavidade geral do

Culex dolosus.

(Aumento de todas figs.; 1.550 x)

306

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B. & BIASI, P. — Xota taxonômica sobre cistos esporogônicos de algumas

espécies de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae) parasitas de serpentes brasileiras.

.Vem. Inst. Butantan. 3 7: 299-307, 1973.

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Recebido para publicação em 18.VI.73.

Aceito para publicação em 15. IX. 73.

307

cm

SciELO

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Mem. Inst. Butantan

37: 309-31G, 1973

PLASMÓDIO DE UMA LAGARTIXA, UROSTROPHUS VAUT1ERI D. & B.

(S AU RIA, 1GUANIDAE )•

SAMUEL E, PESSÔA**

PÉRSIO DE BIASI***

Seção cie Venenos — Instituto Butantan

RESUMO — Os autores descrevem

uma nova espéce de plasmódio ■ Pias -

modium vacutieri n. sp., parasita do

uma lagartixa do Estado de São

Paulo, Urostrophus vautieri, Iguanidae.

Esta espécie pertence ao subgênero

Sauramoeba pois possui esquizontes

grandes. Os gametccitos são pequenos

e arredondados.

UNITERMOS — Plasmódio de lagar¬

tixa, Nova espécie, Haemosporidia,

Urostrophus vautieri.

INTRODUÇÃO

Há mais de dois anos (abril/71), recebemos uma pequena lagartixa, cuja

procedência exata não foi possível ser determinada, tendo-se como único dado

disponível a citação de localidade, o Estado de São Paulo.

Apesar das precárias condições de vida em que se encontrava o sáurio,

foram feitos, em lâminas, alguns esfregaços do seu sangue, fixados pelo me¬

tanol e corados pelo Giemsa (as lâminas assim obtidas foram arquivadas na

coleção do Instituto Butantan).

Só agora tivemos ocasião de examinar as lâminas da largatixa em apreço,

que foi classificada pelo ilustre Zoólogo, Dr. Paulo E. Vanzzolini, Diretor do

Museu de Zoologia da Universidade de São Paulo, como sendo um exemplar de

Urostrophus vautieri (D. & B.). A área de distribuição desta espécie alcança,

segundo Peters e Donoso-Barros (1966), o Sul do Brasil e o Norte da Argentina,

além do Oeste da Bolívia. Damos adiante a descrição sumária da espécie do

plasmódio encontrado no sangue da lagartixa.

Plasmodio da Urostrophus vautieri

Garnham (1966) divide os parasitas dos Sáurios do gênero Plasmodium

em dois subgêneros: espécies com grandes esquizontes (subgênero Sauramoeba)

e espécies com esquizontes pequenos (subgênero Carinamoeba). A espécie

* Trabalho do Instituto Butantan.

** Bolsista do FEDIB.

»»« chefe da Seção de Venenos do Instituto Butantan.

Endereço para correspondência:

C.F. Cõ, São Paulo, Brasil.

309

21 - Memórias

2 3 4 5 6 SClELO 1Q 1X 12 13 14 15

cm

PESSOA, S. B. & BIASI, P. — Plasmôclio cie uma lagartixa, Urostrophus rautieri (D. & B.)

( Hauria — Iyuaniclae ).

Mem. Inst. Hutantan, 37: 309-316, 1973.

sui esquizontes grandes. Neste subgênero distinguem-se séries com gametócitos

alongados e com gametócitos arredondados; o plasmódio que descrevemos pos¬

sui gametócitos arredondados.

Não conseguimos identificar o plasmódio deste réptil a nenhuma das outras

espécies até hoje descritas em sáurios da Região Neotropical e, por conseguinte,

consideramos corno nova espécie que denominamos Plasmodiuin ( Sauramoeba)

vautieri n. sp.

Esquizontes — A menor formação por nós encontrada mostra-se como um

corpúsculo ovóide, com um grânulo cromático bem visível e medindo cerca de

2 microns (Fig. 1). () csquizonte posteriormente assume uma forma arredon¬

dada, sem haver ainda divisão nuclear, com cromatina periférica e vacúolo

bem visível (Figs. 2 e 4, glóbulo da esquerda). Em seguida, o núcleo se

divide produzindo 3, 5 e 6 fragmentos nucleares; não há modificação da for¬

ma do eritrócito, bem como seu núcleo conserva-se normal, em forma, tamanho

e posição na célula (Figs. 3, 4 — glóbulo da direita, e 5). Agora já se per¬

cebem grânulos de pigmentos parasitários escuros, que são encontrados no

interior da área nuclear.

O esquizonte em divisão ou maduro pode ser arredondado (Figs. 7, 8, 9

— glóbulo superior, e 11 — idem), em forma de leque (Figs. 10 e 12, globulo

da direita) e apresenta-se ainda alongado, como se vê pelas microfotografias

6 , 9 (glóbulo inferior), 13, 14, 15 e 16. Os grânulos escuros do pigmento se

acumulam no centro ou em uma das bordas do esquizonte. Os esquizontes ma¬

duros que medem de 7 a 10 microns de comprimento, produzem de 10 a 20

merozoítas, que se situam, geralmente, nos polos dos eritrócitos que parasitam;

quando a célula é parasitada por dois esquizontes, em geral um se coloca em

um dos polos e o outro no polo oposto (Fig. 15, glóbulo inferior).

Neste particular, esta espécie se aproxima de P. tropiduri, porém se di¬

ferencia por muitos outros aspectos como, tamanho do esquizonte e muito

maior número de merozoítas.

Não verificamos distorções da célula hóspede, nem perturbações nucleares,

devidas à presença do parasita.

Gametócitos — São raramente encontrados nas poucas lâminas de sangue

que tivemos ocasião de examinar. Os gametócitos jovens tem a forma arredon¬

dada, medem 4 a 5 microns; o citoplasma condensado nas bordas, determina

uma superfície um pouco irregular, sendo que o citoplasma central tomando

mal o corante de Giemsa o organismo mostra-se esbranquiçado (Figs. 17 e 18).

Os gametócitos masculinos medem de 6 a 8 microns, são arredondados (Figs.

19 e 20) ou ligeiramente ovóides (Fig. 21); seu citoplasma toma mal o corante

e os pigmentos formam pequenos grânulos na sua superfície. Quanto aos ma-

crogametócitos ou gametócitos femininos, são maiores, arredondados ou ovói¬

des, medem 9 a 10 microns,, tomam melhor o corante de Giemsa; aparecem

assim com o citoplasma azulado e a cromatina visível mostra-se ligeiramente

avermelhada e dispersa no citoplasma (Fig. 22) ou mais concentrada (Fig. 23).

310

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PJ2SS0A, S. B. &. P.IASI, r. — Plasmóclio de uma lagartixa, Urostrophus vautieri (D. & b.)

(Sonria — InuanUlae ).

Mcí n. Inst. ISutantan t 37: 309-316, 11173.

O pigmento é fino e se espalha na superfície do citoplasma do parasita. Os

gametócitos femininos e masculinos se colocam geralmente nos polos dos eri-

trócitos e o núcleo da célula que parasitam não é deslocado, bem como a célula

não se apresenta hipertrofiada ou destorida.

Formas exoeritrocíticas — Encontramos um esquizonte exoeritrocítico em

um monócito, com duas cromatinas e sem pigmento (Fig. 24); também damos

microfotografias de esquizontes exoeritrocíticos fora dos glóbulos vermelhos,

no sangue periférico da lagartixa (Figs. 25 e 26) e um outro esquizonte no

interoir do citoplasma de um monócito (Fig. 27).

COMENTÁRIOS

Consideramos o parasita que acabamos de descrever como nova espécie

do gênero Plasmodium, que foi colocado no subgênero Sauramoeba, sendo pois

denominado Plasmodium ( Sauramoeba ) vautieri n. s. p. Isto porque, verifica-se

que esta é a primeira espécie de plasmódio descrita em Iguanidae do gênero

Urostrophus , encontrado na região Sul do Brasil e no nosso caso, no Estado

de São Paulo. Do subgênero Sauramoeba foram descritas as seguintes espécies

de plasmódio com gametócitos arredondados que nos interessam: V. tropiduri,

P. meximanum e P. floridense. O P. tropiduri afasta-se da nova espécie que

descrevemos por possuir esquizontes menores cpie esta; foi descrito em Minas

Gerais e posteriormente no Paramá, por Lainson e Shaw (1969), na Mabui/a

mabuya. O maior número de merozoítas no P. tropiduri parece não passar de

12, sendo porém a média 8. Quanto às duas espécies, verifica-se que o P. vautieri

n. sp., diferencia-se do P. floridense, pois esta espécie apresenta largos vacúolos

em todas as formas evolutivas, quer esquizontes ou gametócitos, bem como pelo

seu tamanho menor do que a espécie que ora descrevemos. Em relação ao

P. mexicanum, sabe-se que o gametócito desta espécie determina a distorção

dos eritrócitos parasitados e perturbações de seu núcleo.

Quanto a outros, como o P. diploglossi e P. cnemidophorus separam-se

facilmente, pois estes possuem gametócitos alongados e produzem mais de uma

centena de merozoítas.

Quanto aos P. torrealbai, P. basilisci, P. pifanoi e P. balli, também pos¬

suem gametócitos alongados. O P. rhadinurum que possui gametócitos arredon¬

dados como a espécie que descrevemos, emite prolongamentos citoplásmicos

muito típicos.

Várias outras espécies descritas mais recentemente na Zona Tropical, como

o P. gonatodi, o P. moruium (Telford, 1969 e 1970), se diferenciam do P.

vautieri n. sp., na aparnêcia e nas dimensões.

SUMMARY — The AA. describe a new

species of plasmodium of a lizard, Uros-

tophus vautieri (Iguanidae), subgenus

Sauramoeba. The lizard is from the

State of São Paulo, and the plasmo-

dium has a large schizont with round

gametocytes.

UNITERMS — Lizard’s malaria. New

species. Haemosporidia. UrostoPhus

vautieri.

311

SciELO

10 11 12 13 14 15

cm

PESSOA, S. I!. & P.XASI, P. — Plasmódio de uma lagartixa. Urostrophus vautieri (D. & XJ.)

(Sauria — IyuanUluc).

Mem. Itist. Butantan, .17: 300-316, 1073.

BIBLIOGRAFIA

A bibliografia sobre Plasmódio dos Sáurios é encontrada na monumental mono¬

grafia de P. C. C. Garnham 1966): “Malaria parasites and other hemosporidia",

1 Volume, 1.114 páginas, Blackwell Scientific Publication, Oxford.

Aqui citamos os trabalhos mais recentes e que mais nos interessam:

AY ALA, S. C. — 1970 — Lizard Malaria in Califórnia; description of a strain of

Plasmodium mexicanum and biogeography of lizard malaria in western North

America, J. Protozool. 56: 417-425.

HERBAN, N. Z. & COATNEY, S. R. — 1969 — Plasmodium basilici from El Sal¬

vador — Honduras. J. Parasitol. 55: 225-226.

JORDAN, H. B. — 1970 — The ocurrcnce and developmcnt of Plasmodium mexica¬

num, in the western fancc lizard Sceloporus occidentalis. J. Protozool. 17: 86-89.

LAINSON, R. & SHAW, J. J. — 1969 — New host records for Plasmodium diploglossi,

P. tropiduri Aragão e Neiva, 1909, and P. cnemidophori Carini, 1941. Parasitology

59: 163-170.

PETERS, J. A. & DONOSO-BARROS, R. — 1970 — Catalogue of the Neotropical

Squamata. Part. II — Lizards and Amphisbaenians. Smithsonian Institution, Uni¬

ted States National Museum, Washington, D. C.

TELFORD, S. R. Jr. — 1969 — A new saurian malaria parasite, Plasmodium balli

from Panama. J. Protozool. 16: 431-437.

TELFORD, S. R. Jr. — 1970 — Saurian malarial parasites in eastern Panama. J. Pro¬

tozool. 17: 566-574.

1ELFORD, S. Jr. 1971 — Plasmodium aurulentum sp. nov. from the neotro¬

pical forest gecko, Tecadactylus rapicaudus, in Panama. J. Protozool. 17: 308-311.

TELFORD, S. R. Jr. — 1972 — Malarial parasites of “Jesu Cristo” lizard Basiliscus

basiliscus (Iguanidae) in Panama. J. Protozool. 19: 77-81.

WALLIKER, D. — 1966 — Malaria parasites of somo brazilian lizards. Parasitology 56:

39-44.

Recebido para publicação em 18.VI. 73.

Aceito para publicação em 15.IX.73.

312

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L

5 6

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PESSOA, S. B. & BIASI, P. — Plasmódio cie uma lagartixa. Urostrophus vautieri (D. & B.)

(Sauria — Içjuanídae).

Meia. Inst. Butantan, 37 : 309-310, 1973.

Figs. 1 e 2 — Esquizontes jovens.

jrjg. 3 — Esquizonte com G merozoltas.

pig. 4 — Eritrócito â esquerda (esquizonte com cromatina perifé¬

rica e vacúolo) ; à direita (esquizonte com 3 merozoltas).

Fig. 5 — Esquizonte com 5 merozoltas.

pj £ r Q — Esquizonte alongado com vários merozoltas.

Figs. 7 e S — Esquizontes arredondados com 10 a 12 merozoltas.

(Aumentos figs. 1 a 1, G a 8 : x 2.000 ; fig. 5: x 3.000)

313

cm

SciELO

PESSOA, S. B. & BIAST, P. — Plasmódio de uma lagartixa. Urostrophus vautieri (D. & B.)|

(Sauria — Iguanidoe).

Mem. Inst. Butantan, 37: 309-316, 1973.

Fig. 9 — Eritrócito superior (esquizonte arredondado com 10 mero-

zoítas) ; inferior (esquizonte alongado com diversos mero-

zoítas).

Fig. 10 — Esquizonte em leque com mais de 15 merozoítas.

Fig. 11 — Idem (eritrócito inferior) ; esquizonte em divisão (eritrócito

superior).

Fig. 12 — Esquizontes: em leque ccm 15 merozoítas e jovem com 7

merozoítas.

Fig. 13 — Esquizonte alongado, em leque, com diversos merozoítas.

(Aumentos: x 2.000)

314

cm

SciELO

PESSOA, S. B. & BIAST, P. — Plasmódio de uma lagartixa. UrostropJius vautieri (D. & B.)

(Sauria — I (juanidae) .

Mem. Inst. Butantan, 37: 309-316, 1973.

15

14

a

jê

wmpg 1 .

17

■ i

19

pijr. 14 _ Esquizonte alongado, com poucos merozoftas.

Fig. 15 _ Eritrócito superior (esquizonte alongado com poucos merozoftas) ;

inferior (com dois esquizontes, sendo um em cada pólo da célula).

F ig-. 16 — Esquizonte alongado com 12 merozoftas.

Figs. 17 e IS — Gametócitos jovens.

Figs. 19, 20 e 21 — Gametócitos masculinos (microgametócitos).

(Aumentos: x 2.000)

315

SciELO

10 11 12 13 14 15

cm

PESSOA, S. 13. & PIA SI, P. — Plasmódio de uma lagartixa. Urostrophus vautieri (D. & T

(Sauria — Iguanidae).

Alem. Inst. Butantan, 37: 309-316, 1973.

(Aumentos: figs. 20 a 26 x 2.000 — fig. 27: x 3.000)

Figs. 22 e 23

Fig. 24

Figs. 25 e 26

Fig. 27

— Gametócitos femininos (macrogametócitos).

— Esquizonte exoeritrocítico (em monócito).

— Merozoítas exoeritrocíticos, no sangue circulante da lagartixa.

— Esquizonte exoeritrocítico em monócito.

316

SciELO

cm

Mem. Inst. Butantan

37 : 317-325, 1973

AÇÃO LARVI E MOLUSQUECIDA DO “TEGO-51” 0

LAURO P. TRAVASSOS FILHO

BRUNO SOERENSEN

THEREZINHA J. H.-FONTENELLE

Seções de Parasitologia e Controle. Instituto Butantan

RESUMO — Observações iniciais, íei- fatigans Wied., 1828, além de pertur-

tas com concentrações de 2,5/1000 a bar a eclosão dos adultos desse mos-

1/16.000 de: “Tego-51”, portanto bem quito. Todas as concentrações, entre-

inferiores às que causariam efeitos tó- tanto, mostram-se letais para os pe-

xicos em camundongos, demonstraram quenos peixes Lebistes reticulatus.

ação letal sobre Biomphalaria tenago-

phila (Orbigny, 1835) e até 1/8.000 so- UNITERMOS — Detergente “Tego-51”,

bre larvas e pupas de Gulex pipiens Ação larvi e molusquecida.

INTRODUÇÃO

Desenvolvendo métodos para combater vectores e invertebrados aquáticos

de interesse à Saúde Pública, iniciamos com este trabalho, pesquisas experimen¬

tais com substâncias capazes de combater o vector da esquistossomose sem

prejudicar as qualidades potáveis das coleções líquidas em que vivem os

moluscos planorbídeos.

Tentativas nesse sentido já haviam sido feitas em 1954 por Vallejo-Freire,

Ribeiro & Ribeiro 4 , empregando compostos amoniacais e experimentando em

peixes e moluscos planorbídeos.

Os planorbídeos, como moluscos pulmonados, são obrigados a respirar

na superfície do meio líquido em que vivem, aí abrindo o pneumostomo, muito

embora essa respiração nem sempre obedeça a frequência rápida, na dependên¬

cia do teor de oxigenação do líquido. Consideramos então que emprego de

substâncias tensoativas, como os detergentes, em concentrações adequadas

traria uma modificação de tensão superficial capaz de, ao envez de permitir a

entrada do ar no pneumostomo, facilitasse a entrada da água, afogando o mo¬

lusco.

Considerando também que, pelo mesmo mecanismo, esse processo serviria

ao combate de larvas de culicídeos, com maior e mais imediato interesse no

extermínio das larvas de espécies do gênero Cluex, por se desenvolverem em

* Trabalho (n. 109, p. Sl) apresentado no XVIII Congresso Brasileiro cie Higiene, São Paulo,

outubro do 1970.

Endereço para correspondência :

C.P. 65, São Paulo, Brasil.

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TRAVASSOS F.°, L,. P., SOEUENSEX, li. & FONTENELLE, T. H. — Açio larvl e molus-

queckla do “TEGO-51”.

Mem. Inst. Butantan, 3 7: 317-325, 1373.

qualquer coleção cie água cios ambientes domésticos ou cie áreas poluídas, re¬

solvemos também observar sc, modificada a tensão superficial, larvas e pupas

de moscpiitos conseguiriam o ar cpie veem buscar na superfície dos meios lí¬

quidos em cpie vivem.

As pesquisas foram iniciadas com o “Dodecyl-di (amino-etil) glicina’, cpie

é um amino ácido de grande cadeia molecular, anfotensidio conhecido pelo

nome de “TEGO-51”, com apreciável atividade germicida e baixo nível de to-

xidez para mamíferos, propriedades bem determinadas por Soerensen, Corrêa

e Zezza Neto, em 1969 1

Na Argentina as propriedades bactericidas foram experimentadas na pre¬

servação do leite para consumo público, por Mazza, Landolfi e Montes, em

1970-, mas seu emprego foi abandonado por produzir muita espuma pela agi¬

tação no transporte.

As nossas observações foram feitas buscando-se o limite mínimo de to-

xiclez para planorbídeos, larvas e pupas de culicídeos e também para peixes,

uma vez que o combate aos planorbídeos deve ser feito inclusive em reserva¬

tórios onde, eventualmente, também são criados peixes de interesse econômico.

As experiências iniciais, feitas com concentrações as maiores sem efeitos

tóxicos para camundongos, demonstraram logo a ação esperada, ainda mais,

relativamente aos culicídeos, também pareceram os adultos saidos de pupas

colocadas já maduras nas soluções testes, isso porque, não conseguindo os mos¬

quitos apoio na superfície da água, dada a baixa da tensão superficial pelo de¬

tergente, naufragavam espetacularmente.

Contudo a ação tensoativa mostrou-se muito tóxica para peixes, provavel¬

mente interferindo no sistema de trocas metabólicas ao nível das branquías, e

os peixinhos Lebistes, mesmo nas concentrações mínimas empregadas logo se

mostravam inquietos, perecendo em prazos curtos.

Damos em seguida os resultados obtidos nas diversas concentrações dc

“TEGO-51” relativos ao molusco planorbídeo Biomphalaria tenagophila (Or-

bigny, 1853), vector da esquistossomose, à larvas, pupas e adultos do mosquito

comum Ctilex pipiem fatigam Wied., 1828 e também de pequenos peixes

Lebistes reticulatus.

MATERIAL

Com vistas aos vectores da esquistossomose, foram empregados exemplares

com cerca de 10 mm de diâmetro do planorbídeo Biomphalaria tenagophila.

Vizando o combate aos culicídeos, empregamos larvas e pupas do mosquito

comum, Culex pipiens fatigam; as larvas foram selecionadas entre as mais de¬

senvolvidas do último estádio, condição importante por termos verificado que,

quanto menores mais sensíveis e poderiam mascarar os resultados.

As experiências com as pupas desse Culex foram feitas tanto com as re-

cém-pupadas, de colorido claro, como as de evolução mais adeantada, até as

pré-adultas, de colorido preto, mostrando todas elas o mesmo comportamento.

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TRAVASSOS F.'\ L. P., SOERENSEN, B. & FOKTENELLE, T. H. — Ação larvi e molus-

«íueolda <lo "TEGO-51”.

Mcm. Inst. Uutantan, ST 317-325, 1973.

Nas observações com peixes foram empregados $ adultos de Lcbistes

reticulatus, eom cerca de 25 mm de comprimento e com bastante tempo de

vida nos tanques de criação.

Esses peixinhos foram testados separadamente porque, sendo predadores

eficientes de larvas de mosquitos, antes de sentirem os efeitos do detergente

atacavam e devoravam as larvas dos culicídeos.

MÉTODOS

Foram empregados frascos cilíndricos de vidro neutro, com cerca de 10,5

cm de diâmetro, nos quais o volume de 1000 ml correspondente a uma coluna

líquida de 12 cm.

Foi empregada para as soluções água de grande tanque, onde habitual¬

mente são criados moluscos pulmonados e peixes Lcbistes, dando-se aos ani¬

mais de prova o mesmo meio ambiente.

Utilizamos 8 frascos para as provas, sendo o primeiro deixado com as tes¬

temunhas, e os seguintes com a concentrações decrescentes de “TEGO-15”:

2,5/1.000 - 1/1.000 - 1/2.000 - 1/4.000 - 1/8.000 - 1/16.000 - 1/20.000.

A primeira concentração, 2,5/1.000 (=0,25%), foi empregada como teste

de concentração excessivamente alta, porém ainda sem efeitos tóxicos para ca¬

mundongos, como controle de tempo de morte dos animais observados.

Numa primeira tentativa de observação simultânea, foram dispostos 8

frascos com 500 ml de água em cada um, a metade do volume pretendido; nesse

volume foram colocados os animais de provas a saber, larvas e pupas de Culcx

e os planorbídeos.

Após vinte minutos de espera, para uma boa adaptação ao novo ambiente,

eram acrescentados os restantes 500 ml de água em cada frasco, com o dobro da

concentração de “TEGO-J51 , pois com isso completávamos o volume de 1.000

ml e a concentração desejada para cada experiência.

Essa segunda parte do líquido era acrescentada lentamente por meio de

fino tubo plástico no fundo do frasco de prova, sendo evitada qualquer agita¬

ção, para que a difusão se fizesse lentamente.

Todavia esse processo, além de trabalhoso e lento, apresentou o inconve¬

niente dos animais de prova nadarem na parte de concentração dupla antes da

mistura se tornar homogenea, levando a resultados pouco significativos. Por

isso a técnica foi modificada para muito mais prática, tanto no preparo dos

líquidos, como possibilitando a observação imediata dos resultados em todas as

concentrações e com os mesmos fatores de ambiente.

Nessa segunda fase as soluções com as diversas percentagens de “TEGO-51”

foram preparadas diretamente nos frascos de prova, bem agitadas para perfeita

mistura e deixadas em repouso por 24 horas, possibilitando a mesma tempera¬

tura em todos os recipientes, o que era controlado nos termômetros de cada um.

Verificada a uniformidade de temperatura nos recipentes, eram então

colocados em cada frasco os animais testes, simultaneamente, pois esses animais

319

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TRAVASSOS F.°, E. P., SOERENSEN, li. &. FONTENELLE, T. IT. — Ação larvi e molus-

quecida do “TEGO-51”.

Mem. Inst. Bntcintan, 37: 317-325, 1973.

também já haviam sido previamente separados em frascos correspondentes a

cada prova, apenas em volume mínimo de água, que completou o volume total

quando juntada. Isso permitiu se observar e comparar de imediato o que

acontecia nas diversas concentrações e feitos os respectivos registros.

Houve necessidade de serem observações simultâneas para que as leituras

fossem feitas na mesma temperatura; as variações de ação do “TEGO-51” em

relação a temperatura do meio líquido serão objeto de pesquisas futuras.

Durante as observações com pupas maduras de Culcx, verificamos que os

adultos ao eclodirem não conseguindo sobre o filme dc água da superfície a

estabilidade necessária para o desenvolvimento e endurecimento de suas estru¬

turas, apoio que faltava devido a ação tensoativa do “TEGO-51”, naufragavam

de maneira expetacular. Para estas observações foram então usados cristaliza-

dores de maior diâmetro para maior superfície às pupas, mas os resultados

foram os mesmos que os primeiros observados nos frascos das demais provas.

Devido a excassez de animais para testes, as verificações de durabilidade

de ação tóxica do “TEGO-51” tiveram que ser deixadas para outra oportuni¬

dade; podemos entretanto adiantar que as mesmas soluções usadas nas pro¬

vas iniciais, ainda apresentavam ação larvi, molusco e ictiocidas cerca de vinte

dias após o primeiro uso. Esse efeito residual, dc grande importância no com¬

bate, inclusive sob o ponto de vista econômico, será objeto de pesquisas futu¬

ras, na dependência de melhores instalações, em andamento.

PESULTADOS

(Tabela única)

Biomphalaria teimgophila (Orbigny, 1835),

Golocados os exemplos deste planorbídeo na solução de ‘TEGO-51” a

2,5/1.000, a morte é imediata. O molusco retrai-se na concha definitivamente,

expelindo líquido amarelo por algum tempo.

Nas soluções a 1/1.000 e 1/2.000 o comportamento é quase semelhante;

ha uma imediata retração para dentro da concha, e apenas podem ser vistos,

a lupa, lentos movimentos dos tentáculos, que cessam completamente após 80 e

120 minutos, respectivamente.

Na solução a 1/4.000, o molusco demonstra de início, forte reação ao de¬

tergente, retraindo-se na concha; posteriormente tenta, sem êxito, locomover-se

pelo fragmento de folha de alface, sua alimentação predileta, colocado como

estímulo ou então tenta deslocar-se pelas paredes do frasco tentando chegar a

superfície do líquido.

Ao fim de 3 a 4 horas fica semiretraido na concha, com movimentos lentos

dos tentáculos, que cessam ao fim de 18 horas, quando foram considerados

mortos.

Idêntico procedimento foi registrado nas concentrações de 1/8.OCO cl/

/16.000, variando apenas o período de vida, o qual foi de 20 e 24 horas respec-

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TRAVASSOS F.°, O. 1*.. SOEREXSEX, Tí. & FOXTEXELEE, T.

quecicla do “TEGO-51”.

Mcm. Inst. Butantan, 37: 317-325, 1073.

H. — Ação larvi e molus-

tivamente. É interessante assinalar que, embora a concentração cie "TEGO-51

fosse o dobro, 1/8.000 e 1/16.000, a diferença de prazo até a morte foi mínima,

apenas de 4 horas.

A última observação foi feita com concentração de 1/20.000; após 27 horas

de permanência nessa solução, os moluscos se achavam no fundo do frasco,

semi-retraídos nas conchas e apresentando movimentos perceptíveis apenas à

lupa estereoscópica.

Larvas de Culex pipiem fatigans Wied., 1828

Nas soluções mais fortes, 2,5/1.000 e 1/1.000, as larvas desse mosquito

mostram logo sinais de intoxicação; na mais concentrada morreram dentro de

160 minutos e, na solução seguinte morreram em 48 horas.

As larvas maduras mostraram-se bem resistentes ao “TEGO-51”, só mor¬

rendo, afora as duas primeiras soluções citadas, nas de 1/2.000, 1/4.000 e

1/8.000, ao fim, respectivamente de 3, 5 e 7 dias. Há porém uma nítida intoxi¬

cação pois, não só deixam de se alimentar, como interromperam o desenvol¬

vimento, nenhuma atingindo a fase de pupa na concentração de 1/2.000, e as

poucas que se transformaram em pupas morreram nessa fase nas concentrações

seguintes (1/4.000 e l/S.OOO).

Larvas maduras de C. p. fatigam colocadas em soluções de “TEGO-51”

a 1/16.000 e 1/20.000 evoluíram normalmente, passando a pupas e estas a

adultos, que voaram.

Pupas de Culex pipiem fatigam Wied., 1828

As pupas desses mosquitos mostraram reações inesperadas no “TEGO-51”,

sendo muito mais sensíveis ao detergente que as larvas; isso pode ser explicado

pelo metabolismo mais intenso que ocorre na fase pupal, em que praticamente

só ficam na superfície, com as duas tubas respiratórias em contacto com o ar,

o que é dificultado pela ação tensoativa do detergente, levando-as a afoga¬

mento mais rápido que as larvas. As observações foram feitas sempre com pupas

claras, para permitir maior tempo de observação antes de passarem a adultos.

Nas soluções a 2,5/1.000, e 1/1.000, a morte das pupas verificaram-se em 90

e 150 minutos respectivamente; tão logo eram colocadas nas soluções, ficavam

irriquietas, perdendo a motilidade pouco a pouco até ficarem mortas no fundo

do frasco. Nas soluções a 1/2.000 e 1/4.000 morreram todas em cerca de 48 e

55 horas, respectiva mente.

Nas concentrações de 1/8.000 e 1/16.000, os resultados foram semelhantes,

com diferença de horas, morrendo as pupas respectivamente em 60 e 72 horas.

Na concentração de 1/8.000, de algumas pupas eclodiram adultos os

quais, face a ação do detergente, não conseguiram voar. Na concentração de

1/16.000 alguns adultos dos eclodidos conseguiram voar outros não.

321

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

TRAVASSOS F.°, L. P., SOEUEXSEX, R & FOXTENELLE, T. II.

queckla do “TEGO-51”.

Mem. Inst. Butantan, 37: 317-325, 1973.

— Ação larvi e molus

A concentração de “TEGO-51” a 1/20.000 não se mostrou tóxica para

pupas desse culicideo, todas evoluíram até adultos, que voaram.

Adultos de Culex pipiens fatigans Wied., 1828

Pupas já bem evoluídas, com a cor preta característica, quando colocadas

em soluções de “TEGO-51” até a concentração de 1/8.000, na maioria morrem

como já foi comentado.

Entretanto, como os mosquitos para bem eclodir dos puparios necessitam

de apoio na superfície líquida, os que eclodiram na solução a 1/8.000 naufra¬

garam justamente por lhes faltar o apoio habitual da tensão superficial, modi¬

ficada pelo detergente, muitos naufragando ainda presos ao próprio pupário.

Na solução a 1/16.000 muitos adultos naufragaram, poucos conseguiram

voar.

A fotografia 1 mostra a superfície da solução de “TEGO-51” a 1/8.000,

vendo-se os mosquitos naufragados, alguns ainda presos aos respectivos pu-

pários.

A fotografia 2, em outro frasco com mais exemplares, além de muitos mos¬

quitos naufragados, larvas e pupas ainda respirando na superfície e, ao fundo,

como sombras por estarem abaixo do plano focal da superfície, pupas mortas,

em posição típica que assumem, como que esticadas para trás, posição oposta

a de “vírgula” que apresentam quando vivas.

Peixes Lehistes reticulatus

Morrem rapidamente na concentração de 2,5/1.000; nas concentrações de

1/8.000 e 1/16.000 resistem apenas 38 minutos. Não foi observado na con¬

centração de 1/20.000.

Voltaremos, em pesquisas futuras, a observar o comportamento de peixes

em soluções ainda mais diluídas de “TEGO-51” quando, inclusive, estudare¬

mos a ação do detergente em peixes maiores que Lebistes.

SUMMARY — Initial observations

made with coneentrations of 2,5/1.00 to

1/16.000 of “Tego-51”, hence much low-

-er-than such as would cause toxic

effects in mice, showed lethal action on

Biombhalaria tenagaphilia (Orbigny,

1835); coneentrations of 1/8.000 had

the same effect on larvi and pupae of

Culex pipiens fatigans Wied, 1828, bc-

sides disturbing the eclosion of adults

of this mosquito. All coneentrations,

however, were lethal to the small fish

Lebistes reticulatus.

UNITERMS — Larvicidals.

cidals. “Tego-51”.

Molusci-

322

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

TRAVASSOS F.°, L. P., SOERENSEN, D. & FOXTEXEI/EE, T. II. — Ação larvl e molus-

queeida do “TEGO-51”.

Meni. Inst. fíutantan, 37: 317-325, 1973.

Foto 1 — Mosquitos Ciilex p. fatigans afogados após a eclosão em solução de

“TEGO-51” a 1/8.000.

Feto 2 — Cvlex p. fntigana: larvas c pupas vivas respirando na superfície da

solução cie “TEGO-51” a 1/8.000. No fundo, jã mortas, pupas na posição típica

ele afogamento. Na superfície adultos de ambos os sexos (ver as antenas) mortos

ao eclodirem, alguns naufragando ainda presos aos respectivos pup&rics.

SciELO

cm

TRAVASSOS F.°, L. P., SOERENSEN, B. & FONTENELLE, T. H. — Ação larvi e molus-

quecida do “TEGO-51”.

Mem. Inst. Butantan, 87: 317-325, 1973.

AGRADECIMENTOS

Agradecemos ao então Serviço de Erradicação da Malária, da Secretaria

da Saúde Pública, em S. Paulo, o fornecimento semanal de centenas de larvas

e pupas identificadas de Ciilex pipiens fatigans, o que nos permitiu experiências

sucessivas com farto material.

As reações dos animais de provas, para controle do tempo exato da colo¬

cação deles na solução até a morte, principalmente nos planorbídeos que fi¬

cavam logo quase imóveis, movendo apenas lentamente os tentáculos, foram

acompanhados sob lupa estereoscópica Zeiss IV, adquirida com auxílio do

Conselho Nacional de Pesquisas, GB, concedido a um dos autores.

As fotografias apresentadas foram feitas com aparelhagem fotográfica adap¬

tada àquela lupa, gentilmente emprestada pela Firma C. Zeiss, SP, a quem

agradecemos a colaboração.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Recebido para publicação em 24.X. 1973.

Aceito para publicação em OG.XI.1973.

325

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

HEMOGLOBIN IN MITOCHONDRION-LIKE ORGANELLES OF

IMMATURE CHICK EMBRYO ERYTHROCYTES

J. R. R. COIRO

A. BRUNNER JR.

M. L. SCHWANTES

A. R. SCHWANTES

Laboratório de Microscopia Eletrônica, Instituto Butantan,

SUMMARY — Thin sections of chick

proerythrocytes show in their interior

the presence of mitochondrion-like or-

ganclles (MLO) containing a consider-

able number of dense granules iden-

tical to the particles within the hemo-

globinized eytoplasm, suggesting that

the content of these organelles are he-

moglobin molecules.

Electrophoresis of the supernatant

from the lysed MLO fraction in po-

lyacrilamide gel confirmed the presen¬

ce of hemoglobin, however with a high-

er migration rate than that of the

eytoplasm from proerythrocytes. The

authors propose the term “hemosome”

for these organelles.

UNITERMS — Hemoglobin in mito¬

chondrion-like organelles.

INTRODUCTION

Hemoglobin biosynthesis in immature chick erythrocytes is not related to

the nucleus but to the basophilic sytoplasmic reticulum (9). Furthermore he¬

moglobin biosynthesis was found to be proportional to the amount of the baso¬

philic reticulm or “Substantia granulo-filamentosa” (7). Through thin sec¬

tions and in hemolysed smears of supravitally stained mammalian reticulocy-

tes, it was shown that the filamentous mitochondria are one of the constituents

of the “Substantia granulo-filamentosa” (1). Besides mitochondria, however

reticulocytes contain other organelles. Since neither DNA nor aspects

suggesting division liave been detected yet, the term mitochondrion-like or¬

ganelles (MLO) was proposed on account of their structural similarity to

mitochondria. Recently, the term hemosome was suggested for these organel¬

les because verv probably the final hemoglobin biosynthesis takes place in

the MLO (3). '

This report is meant to show that immature chick erythrocytes, or proery¬

throcytes, contain the same MLO as found in mammalian immature ery¬

throcytes.

This researeh has been supported by the Conselho Nacional de Pesquisas, Fundação cie

Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo and Fundo Especial de Depesas do Instituto

Butantan.

Address: C.P. 65, São Paulo, Brasil.

327

í, | SciELO

OOIKO, J. R. R., BRUNNER JR., A., SCHWANTIOS, M. Jj. & SCHWANTES, A. R. —

Hemoglobin in Mitochondrion-like Organelles of Immature Chick Embryo Erythrocytes.

71/cm. Inst, Butantan, 37: 327-333, 1973.

MATERIALS AND METHODS

Blood was obtained from 16-day-old chick embryos by cardiac puncture.

Supravital staining with brilliant cresyl blue sbovvcd that the peripheral blood

contains mostly erythroblasts and proerythrobasts. For electron microscopic

examination, blood was fixed according to the following procedures: a.) di-

rectly in 1.0% osmium tetroxide in phosphate buffer, pH 7.3' during 30 mm;

b.) directly in 1.5% glutaraldehyde in phosphate buffer, pH 7.3, during 1 h,

followed by osmium tetroxide fixation (15 min), after three washings in the

buffer, uranyl acetate staining (30 min), dehydration, and embedding, in Poly-

lite 8001 (4,5). Thin sections were obtained in a Porter-Blum MT-1 microtome,

stained by lead citrato (10), and photographed in an Elmiskop I electron

microscope at 60 and 80 Kv with magnifications from X 8,000 to X 40,000.

The presence of hemoglobin within the MLO lias been demonstraíed by

electrophoresis. Blood cells from 30 16-day-old chick embryos as well as from

6 newborn chicks were submitted to fractionation, the MLO isolated and lysed

according to the following procedure: 1. Blood is poured on 18 ml of a

0.153M NaCl, 0.005M KC1, 0.005M MgCL, 0.006M NalIC0 3 , 0.0014M EDTA

and 0.05M phosphate buffer (pH 7.2). 2. Centrifugation of the cell suspen-

sion for 10 min at 200Xg, discarding of the supernatant, and resuspension of

the sedimented cells (1.0 — 1.3 ml) in ten-fold their volume of a 0.32M

sucrose and 0.04M phosphate buffer. 3. Homogeneization in a Potter-Elveh-

jem tube at 1,000 rpm for 4 min at 4°C. 4. Centrifugation of the homogenate

at l,350Xg for 10 min. 5. Centrifugation of the l,350Xg supernatant at

26,360Xg for 10 min aí 4°C. 6. Resuspension of the nuclei-free MLO sedi-

ment in 0.32M buffered sucrose and five washings of the fraction by suces-

sive resuspensions and centrifugations at 26,306Xg for 10 min. The sediment was

lysed by resuspension in 3.0 ml distilled water. 7. The suspension was cen-

trifuged at 30,OOOXg, for 20 min., after the lysis was completed, and the su¬

pernatant was used for electrophoresis.

Supernatants of the lysed MLO and of the last washing médium were

concentrated about 10-foíd in a vacuum chamber, and then submitted to

electrophoresis. Diluted hemoglobin obtained from the supernatant of the

26,360Xg centrifugation (step 5) was used for comparison through this

method.

Samples were run on disc electrophoresis in polyacrylamide gel, accor¬

ding to Dietz and Lubrano (6). A 2.5mA currcnt per tube was applied for 40

min at 5°C, and the hemoglobin band was identified by benzidine or orto-

dianizidino reagents.

RESULTS AND DISCUSSION

The general aspect of chik proerythrocyte cytoplasm, with regard to its

high electron density due to hemoglobin molecules, is similar to that of mamma-

328

cm

2 3

z

5 6

11 12 13 14 15

COIRO, J. n. R., BRUNNER .TR., A., SCHWANTES, M. Jj. & SCHWANTES, A. R.

Hemoglobin in Mitochomlrion-like Organelles of Immature Chick Embryo Erythroeytes.

Mem. Inst. Butantan, 37: 327-333, 1973.

Iian reticulocytes. Polyribosomes, responsible for globin synthesis, are present

from the monomer to the heptamer forms, as found in mammalian reticulocy¬

tes (11). The MLO, constituted by lamellae in transversal, obliqúe or longitu¬

dinal disposition, are highly electron dense, generally more than the hemoglgo-

binized eytoplasm. These three types of lamellae disposition may de found in

one and the same organelle (Fig. la).

At higher magnifications, MLO show dense particles dispersed within the

interlamellar space, presenting 90 to 100 A in diameter. These particles are

identical to the particles in the eytoplasm; íhey are, houwever, more agglomer-

ated in the MLO, thus conferring to the organelles a higher electron density

at some regions (Figs. lb).

Through disc electrophoresis on polyacrylamide gel of the supernatant

from the lysed MLO fraction, at least two hemoglobin bands were obtained,

resembling those fiom the supernatant of the 26.360Xg centrifugaiion, which

contain the cytoplasmic hemoglobin of proerythrocytes. The former showed,

hovvever, a higher migration rate than the latter (Fig. 2). The second MLO

hemoglobin band has a migration rate corresponding to tliat of the first cyto¬

plasmic hemoglobin band. One of the three hemoglobin types thus found is

common to the eytoplasm and the MLO.The last washing supernatant showed

no visiblc band at all, indicating that no contamination of the MLO by the cy¬

toplasmic hemoglobin occurred.

These results suggest that the final hemoglobin biosynthesis, or combina-

tion of globin vvith heme, occurs within the MLO, in the same way as it might

happen within the MLO of mammalian reticulocytes (3). Iron-containing ma¬

terial is incorporated by the immature erythroeytes through pinocytosis, or in

erythroblasts by rhopheocytosis (8), and is then enveloped by membranes re-

sembling the smooth endoplasmic reticulum problably with the presence of

globin while the ferruginous material is transformed for heme synthesis (Fig.

3a); this whole gives rise to a pro-MLO which originates the MLO (2) (Fig.

3b). Since the MLO of chick proerythorcytes seem io play a role in hemoglo¬

bin biosynthesis, they may be termed hemosome, as suggested for the MLO of

mammalian immature erythrorocytes (3).

RESUMO — Cortes finos de proeritró-

citos de ave mostram a presença de

organelos semelhantes a mitocôndrios

(OSM) contendo um considerável nú¬

mero de grânulos densos, idênticos às

partículas encontradas no citoplasma

hemoglobinizado, sugerindo serem as

partículas no interior dos organelos,

moléculas de hemoglobina.

A eletroforese do sobrenadante do

Usado da fração OSM, em gel de polia-

crilamida, confirmou a presença de

hemoglobina, porém, com velocidade de

migração superior a da hemoglobina ci-

toplasmática dos proeritrecitos. Os au¬

tores propõem o termo hemossomo pa¬

ra os OSM.

UNITERMOS — Hemoglobina em or¬

ganelos semelhantes a mitocôndrios.

ACKNOWLEDGEMENTS

The authors wish to thank Mrs. Vera Mondin Weisz, Mr. Alipio Silva

Gonzales and Mr. Heitor Costa for their excellent technical assistance. And

Mrs. Sibylle Iieller for her editorial aid and translation.

329

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

como, j. h. n., brunnkh jr., a., schwantes, m. o. & schwantes, a. r.

Hemoglobin in Mitochonclrion-like Órganelles of Immature Chick Embryo Erythrocytes.

Mcm. Inst. Butantan, .17: 327-333, 1373.

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Recebido para publicação em 2(1.X. 1974

Aceito para publicação em 26.XI. 1974

330

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

COIRO, J. II. R., BRUNNE'11 Jli., A., SCHWANTES, M. L. & SCHWANTES, A. R. —

Hemoglobin in Mitochondrion-like Organelles of Imraature Chick Embryo Erythrocytes.

Man. Inst. llutuntan. í7: 327-333, 7973.

i _ Thin sections of chiek-embryo proerythrocytes. The nuclei (N) are retracted due

to the fixation.

a) With a mitoehomlrion-Iike organelle (m) constitutcd by lamellae in obliqúe or

longitudinal dispositions.

I>) Containing an eleetron-dense mitochondrion-like organelle (m) completely filled

with particles identical to the ones of the hemoglobinized cytoplasm; the trans-

verse or obliciue lamellae are hardly vlsible. V — vesicle.

331

2 3 4

5

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

como, J. R. R., BRUNNER JR., A., SCHWANTES, M. E. & SCHWANTES, A. R.

Hemoglobin in Mitochondrion-like Organelles of Immature Chick Embryo Erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 97: 327-333, 1973.

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

COIRO, J. I). R., BRUNNBR JI!., A., SCHWANTES, M. Iv. & SCHWANTES, A. R, —

Hemoglobin in Mitoehondrion-Iike Organeiles of Immature Chick Embryo Erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, ST: 327-333, 1973.

Fig. 3 —- Thin sections of proerythroeytes.

a) An electron-dense material is enveloped by tlie smooth endoplasmic reticulum

( arroto ). Remnants of the Golgi complex (G) and a vesicle (V’) are seen. N —

nueleus.

b) Organeiles identical to pro-hemosome ( ph ), and hemosome in development (70,

of mammalian reticulocytes are observed. V — empty vesicle,

cm

10 11 12 13 14 15

Mem. Inst. Butantan

37: 335-314, 1973

HEMOSOME AND HEMOGLOBIN BIOSYNTHESIS IN EMBRYOS AND

IN REGRESSIVE ANEMIAS

A. BRUNNER JR.

J. R. R. COIRO

M. L. SCHWANTES

A. R. SCHWANTES

Laboratório de Microscopia Eletrônica, Instituto Butantan,

reticulocytes contain mostly mitochon-

dria.

SUMMARY — Hemosomes are orga-

nelles. Which increase in number at the

reticulocytary stage in the peripheral

blood of embryo-rabbits, and of adult

humans and guinea-pigs in hemolytic

regressive anemias. Through fractiona-

tion of immature erythrocytes, isolation

and lysis of hemosomes, and electropho-

resis of the lysate supernatants, heino-

globin bands were obtained. This does

not occur in bleeding anemia, in which

These facts suggest that the final

hemoglobin biosynthesis may occur in

the hemosomes. A hypothesis of an

association between mitochondrion and

pre-hemosomal structures is discussed.

UNITERMS — Homosome and hemo¬

globin biosynthesis.

INTRODUCTION

As was stated in the peripheral blood of rabbit-embryos, organelles in¬

crease in number at the reticulocytary stage (l).They were termed mitochon-

drion-like organelles (MLO) on account of their structural similarity to mito-

chondria, and because neither DNA nor aspects suggesting any division have

been detected up to the present. This increase is due to the newly formed

MLO which arise from the interrelation of smooth membranes with

ferruginous micelles (2), incorporated by immature erythrocytes through pi-

nocytosis (9). This results in the appearance of a pro-MLO followed by a

definitive MLO, generally constituted by longitudinal lamellae (2). Size mea-

surements of particles within the interlamellar space of the organelles and of

particles dispersed in the hemoglobinized cytoplasm of immature embryo ery-

trocytes, as well as electrophoresis of lhe supernatant of the lysed fraction,

showed that hemoglobin molecules are present within these organelles, for

which the term hemosome lias been proposed (3).

This paper shows that hemoglobin biosynthesis in reticulocytes of adult

humans and of guinea-pigs, both with hemolytic regressive anemia, depends on

This research lias been supported by the Conselho Nacional de Pesquisas, Fundação

de Amparo ã Pesquisa do Estado de São Paulo and Fundo Especial de Despesas do

Instituto Butantan.

Address: C.P. 65./05604, São Paulo, Brasil.

335

cm

2 3

Z

5 6

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BRUNNER JR., A., COIRO, J. R. R. f SQHWANTES, M. L. & SCHWANTES, A. R. —

Hemosome and Hemoglobin Biosynthesis in Ernbryos and in Regressive Anemias.

Mem. Inst. Butantan, 37: 335-344, 1973.

the hemosomes, the same as occurs in immature erythrocytes of newborn and

embryonic rabbits. The behavior of hemosomes during the maturation of reti¬

culocytes, as well as a possible association between pre-hemosomal structures

and mitochondrion, are discussed.

MATERIALS AND METIIODS

1. Bloocl frorn newborn and embryo-rabbits.

Blood samples with about 20% reticulocytes were obtained from newborn-

rabbits by cardiac puncture. Other samples were collected, sectioning the um¬

bilical cord of 18-day-old rabbit-embryos, and were found to contain, besides

definitive erytroroblasts and reticulocytes, a few primitive erythroblasts and

erythrocytes.

2. Bleeding anemias in guinea-pigs.

Five to 6 ml of blood were withdrawn by daily cardiac puncture from 4

animais weighing 400 g, during 5 days; 2-3 days after the last bleeding, the

blood samples contained 10-15% reticulocytes.

3. Saponin-induced hemohjtic anemia in guinea-pigs.

Four animls, weighing 350 g, received daily subcutaneous 0.1 ml injee-

tions of 1% saponin in an isotonic sodium chloride solution, for 3 days; 4-5

days after the last injection, the blood samples contained 15 to 20% reticu¬

locytes.

4. Human blood.

Two samples of venous blood from a patient with acquired hemolytic ane¬

mia presented a reticulocytosis of about 30%, and less than 1% erythroblasts.

Blood samples obtained by cardiac puncture were collected in a 2.5% v/v

of an 1.0% EDTA and 1.0% sodium bicarbonate Solutions, in equal volumes.

All samples were supravitally stained with 0.1% brilliant cresyl blue in isotonic

sodium chloride, in order to determine the reticulocyte percentage. To increase

this concentration, the blood samples were submitted to centrifugation at 60Xg

for 5 min; the supernatant contained about twice the inicial percentage of

reticulocytes.

Hemolysis of blood smears.

Thin blood smears were prepared on collodion-ooated histological slides

and allowed to dry at room temperature for 18-20 h; hemolysis was performed

in a 0,8% sodium chloride solution containing 2.5% formalin. The smears were

then stained for 7 min. in an 1% aqueous phosphotungstic acid solution, washed

in distilled water and dried at room temperature. The films were transferred

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Hemosome and Hemoglobln Biosynthesis in Embryos and in Regressive Anemias.

Mctn. Inst. Butantan, 37 : 335-344, 1973.

to copper grids and submitted to the shadow-casting process with palla-

dium (4).

Fixation and embedding for thin sectioning.

1. All blood samples were fixed in 2% glutaraldehyde in Millonig’s phos-

phate buffer (pH 7.3) (11) for 1 h, followed by fixation in 1% osmium tetro-

xide in the same buffer. After staining in an 1% aqueous uranyl acetate so-

lution for 30 min., the blood was dehydrated and embeddel.

2. Other blood samples obtained from rabbit-embryos were fixed for

18-20 h in 10% formalin in 0.50% sodium chloride solution. After washing in

0.50% saline solution, staining was done in an 1% aqueous phosphotungstic acid

solution for 1 h. Dehydration was initiated in 70% alcohol, containing 1% phos¬

photungstic acid, for about 10 min. at 4°C; then the staining continued for

2-3 h at room temperature in the same alcohol; dehydration finished in the

alcohol series without staining.

Araldite (10) and Polylite (5) were used as embedding media. Sections

were obtained in a Porter-Blum MT-1 microtome and stained with lead ci¬

trato (12).

All preparations were examined in UM 100b and Elmiskop I electron mi-

croscopes with magnifications of X 1,300 to X 40,000, at 60 and 80 Kv.

Demonstration of hemoglobin within the organelles.

Immature red blood cells were fractionated, the organelles isolated and

lysed according to the following procedure: 1. Blood is poured on 8-12 ml of

a 0.153M NaCl, 0.005M KC1, 0.005M MgCl,,, 1 x 10- 4 M EDTA and 0.04M

phosphate buffer (pH 7.2). 2. Centrifugation of the cell suspension for

10 min at 200Xg, discarding of the supernatant, and resuspension of the sedi-

mented cells (cell volumes: 0.6 — 2.0 ml) in 10-fold their volume of a

0.32M sucrose and 0.03 phosphate buffer. 3. Homogeneization in a Potter-

Elvehjem tube at 1,000 rpm for 3 min at 4°C. Centrifugation of the homoge-

nate at l,350Xg, for 10 min. (sometimes steps 3 and 4 were repeated, resuspen-

ding the l,350Xg sediment). 5. Centrifugation of the l,350Xg supernatants,

at 4°C, for 10 min. at 10,000Xg. 6. Resuspension of the organelle sediments

in 0.32M buffered sucrose, and 5-foId washing of the fraction by sucessive

resuspension and centrifugation at 10,000Xg for 10 min. The sediments were

lysed by resuspension in 3-4 ml distilled water. 7. After the lysis was copleted,

the suspensions were centrifuged at 19,OOOXg for 20 min. The supernatants

were used for electrophoresis, and the sediments were fixed and embedded for

electron microscopic examination.

The supernatants of the lysed organelles and of the last washing médium

were liophylized in a vacuum chamber, and later hydrated for electrophoresis.

Diluted hemoglobins, obtained from the supernatants of 10,000Xg centrifu¬

gation (step 5), were used for comparisons. All samples were run on disc elec¬

trophoresis in polyacrylamide gel as described by Dietz and Lubrano (7). A

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BRUNNER JR., A., COIRO, J. R. Ií., SCHWANTES, M. U & SCHWANTES, A. R.

Hemosome and Hemoglobin Biosynthesis in Embryos and in Regressive Anemias,

.l/em. Inst. Butantan, .17: 335-344, 1 ÍI73.

current of 2.5mA appliecl per tube for 40 min. at 5°C, and the hemoglobin

bands were identified by benzidine reagent.

RESULTS

Morphological ohservaiions. Hemosomes are largely found in less mature

reticulocytes and generally present two or three longitudinal lamellae. Their

interlamellas space is filled vvith agglomerated hemoglobin molecules, whieh

confers to the organelles a higher density than that of the hemoglobinized

cytoplasm. They present diameters varying from 0.12 to 0.15[i (Figs. la and

lb) which increase to 0.20|i or more when lhe hemosomes present a higher

number of hemoglobin molecules. The presence of these hemosomes is then

only recognized by remains of the interlamellar space, as seen in Fig. lc. The

dense honeycomb-like body, or prohemosome, is continuous to a mitochondrion,

as can be observed in Fig. 2a. In other instances, the region of continuity is

slightly enlarged, and at the opposite extremity of the pro-hemosome a typical

hemosome arises (Fig. 2b). Often hemoglobin molecules are also observed in

the organelle extremity constituted by obliqúe or transverse lamellae (Fig. 2c).

In figures 2a and 2b the organelles are highly electron dense due to phospho-

tungstic acid staining. These immature embryo erythrocytes, when examined in

hemolysed smears, present filaments of different lenghts, whose diameters

range from 0.11 to 0.21p; erythroblast contain a lower number of filaments

than reticulocytes (Figs. 3a and 3b).

Thin sections of reticulocytes of guinea-pigs vvith bleeding anemia show

a high number of characteristic mitochondria measuring 0.25 to 0.30p in dia-

meter (Fig. 4a); pro-hemosome or hemosomes are rarely found. In hemo¬

lysed smears, filaments with 0.24 to 0.30[i in diameter or more were observed

(Fig. 4b). Reticulocytes of saponin-induced hemolytic anemia in guinea-pigs,

as well as reticulocytes, and a few erythroblasts, of the peripheral blood of a

human with acquired hemolytic anemia, contain besides mitochondria, typical

hemosomes (Fig. lb) such as the ones found in immature embryo erythrocytes

(Fig. la). Hemolvsed blood smears show reticulocytes containing filaments

whose diameters range from 0.13 to 0.33jt.

Organelle isolation and h/sis. Electrophoreiis. The pellets of lO.OOOXg cen-

trifugations, isolated from reticulocytes of newborn rabbits, embryo-rabbits,

guinea-pigs with saponin-induced hemolytic anemia and a human with acquired

hemolytic anemia, presented a rose-pink to reddish colour. The final pellets,

after five washings with sucrose solution (Fig. 5a), turned to a brownish co¬

lour. After the osmotic lysis with distilled water (Fig. 5b) the sediments were

clearly visible, although sprayed on the wall of the centrifuge tubes. The cell

volumes obtained by centrifugation of the blood at 200Xg, after the coneentra-

tion of reticulocytes, ranged from 0.60 to 0.85 ml. The pellets of the lO.OOOXg

centrifugation, isolated from reticulocytes of guinea-pigs with bleeding anemia’

presented a palc-yellow colour, even starting from a cell volume of 2.0 ml.

After the osmotic lysis, the fine sprayed sediment was hardly visible.

338

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BRUNNER JR. f A., COIRO, J. R. R., SCHWANTES, M. L. & SCHWANTES, A. R. _

Hemosome and Hemoglobin Biosynthesis in Embryos and in Regressive Anemias.

Mem. Inst. Butantan, 37: 335-344, 1973.

Disc electrophoresis in polyacrilamide gel of the concentrated last washing

supernatants of all hemosomal fractions showed no visible band. No visible

hemoglobin band was obtaincd from the supernatant of the mitochondrial frac-

tion lysate of reticulocytes from bled guinea-pings. The supernatant of the

hemosome lysate, corresponding to reticulocyte organelles from saponin-indu-

ced hemolytic anemia, showed two distinct hemoglobin bands, and the super¬

natant of hemosome lysates corresponding to newborn-rabbits, rabbit- embryos

and human immature erythrocytes, presented only one sharp hemoglobin band

(Figs. 6a and 6b).

DISCUSSION

The increase of filaments in reticulocytes, after extrusion of the nucleus

by the orthochromatic erythroblast (1), as observed in hemolysed smears,

(Figs. 3a and 3b) is due to “the rising of benzidine positive organelles

(2), later termed hemosomes (3), and not a result from organelles division, as

is the case of mitochondria. This increase may be correlated with the increase

of the hemoglobin synthesis rate observed in anucleated immature erythrocytes

(8, 13) and can be found also in the human peripheral blood.

Initially, pinocytotic vesicles, carrying ferruginous material, fuse among

themselves and ferritin granules appear as simple clusters, later surrounded by

a double membrane; the ferruginous clusters turn into dense bodies

by the gradual disappearence of the ferritin granules. The dense bodies

transform themselves in honeycomb-like bodies, or pro-hemosomes, giving rise

to the definitive hemosomes (2). They contam hemoglobin molecules within

the generally longitudinal interlamellar space, as was demonstrated through

fractionation of reticulocytes, organelle isolation (Fig. 5a), lysis (Fig. 5b), and

electrophoresis of the lysate supernatant (Fig. 6a). When hemosomes are

filled to a high degree with hemoglobin molecules, or are “mature”, the hemo¬

globin spreads out to the cytoplasm in consequence of the disruption of in¬

ternai and externai membranes of the organelle (Fig. lc). The extremely va-

riable disposition of hemosomes, found in hemolysed erythroblasts and reti-

culocytes, are possible due to their dislocation in the cytoplasm of the living

cells, thus explaining the uniformity of hemoglobin distribution. Comparable

results were achieved from erythroblasts and pro-erythrocytes of 16-day-old

chick-embryos blood, conceming the presence of hemosomes, and obtainment

of hemoglobin bands througs electrophoresis of the supernatant of their ly¬

sate (6).

It is difficult to explain the way by which the hemosomes grow, since

neither DNA nor RN A haye yet been detected in these organelles, and how

the energy for final hemoglobin synthesis is supplied. Hypothetically, an as-

sociation between mitochondria and pro-hemosomes might provide tíie neces-

sary conditions for hemosome growfh and their possible biosynthesis íunc-

tion, as suggest Figs. 2a and 2b. Subsequently, mitochondria may behave as

hemosomes (Fig. 2c).

339

cm

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BRUNNER JR. f A., COIRO, J. R. R., SCIIWANTES, M. L. & SCHWANTES, A. R.

Hemosome and Hemoglobin Biosynthesis in Embryos and in Regressive Anemias.

Mcm. Inst. Butantan, 87: 335-344, 1973.

First, to verify if in reticulocytes of adult animais with regressive anemia

hemoglobin biosynthesis is conditioned by the presence of hemosomes, guinea-

pigs were submitted to successive bleedings. But, reticulocytes present only

typical mitochondria, and rare hemosomes (Fig. 4a); no visible hemoglobin

band was obtained through electrophoresis of the supernatant of the lysed

mitochondrial fraction. Anemia induced under these oonditions, causes insuf-

ficiency of iron, protein as well as other factors, and in consequence, recupera-

tion proceeds slowly, Through hemolysis of partially dried smears (4) a marked

difference in diameters is evident between hemosomal (Fgs. 3a and 3b) and

mitochondrial (Fig. 4b) filaments of reticulocytes from rabbit-embryos and

guinea-pigs with bleeding anemia, respectively. The former vary from 0.11 to

0.21|i; mitochondria diameters vary from 0.24 to 0.30|i. Correspondingly, tliis

marked difference is also observed in sections (Figs. la and 4a).

In hemolytic anemias, as the one induced in guinea-pigs by daily injections

of a saponin solution, no iron, protein and other material necessary for the bio¬

synthesis of hemoglobin are withdrawn. Sections of reticulocytes show typical

hemosomes, besides mitochondria, and hemolysed reticulocytes contain fila¬

ments ranging from 0.15 to 0.37[t in diameter. Electrophoresis from the super¬

natant of the lysed hemosomal fraction showed two distinct hemoglobin bands.

Similar results were obtained with the blood from the patient with acquired

hemolytic anemia, whose reticulocytes show also typical hemosomes (Fig. lb);

filaments with 0.11 to 0.33ir in diameter were found in hemolysed reticulocy¬

tes, and one sharp hemoglobin band was obtained by electrophoresis of the su¬

pernatant of the lysed hemosomal fraction (Fig. 6b).

The above results suggest that the final hemoglobin biosynthesis may take

place within the hemosomes. Positive benzidine reaction (2) demonstrated the

presence of heine in the course of their formation. Globin, synthesized in poly-

somes (14, 15), could be already present during the growth of hemosomes,

combining to heme within the organelle (2). This does not oocur when ele-

ments necessary for hemoglobin biosynthesis are insufficient. Consequently,

reticulocytes contain only mitochondria, and there scarcely ever occurs hemo¬

some genesis, ,as happens in bleeding anemia. In reticulocytes of adults with

hemolytic regressive anemias the cytological modifications observed during

maturation are the same as in immature embryo erythrocytes.

RESUMO — Hemossomos são organo-

los que aumentam em número na fase

reticulocitária no sangue periférico de

embriões de coelho, e do homem e

cobaios adultos nas anemias hemolí-

ticas regressivas. Através do fraciona¬

mento de eritrócitos imaturos, isola¬

mento e lise dos hemossomos, eletrofo¬

rese dos sobrenadantes dos lisados da

fração, foram obtidas bandas de hemo¬

globina. Na anemia provocada por

sangrias, em que os reticulócitos não

contêm praticamenle hemossomos, mas

apenas mitocôndrios, nem mesmo tra¬

ços do bandas de hemoglobina são

obtidos.

Estes fatos sugerem que a biossín-

tese final da hemoglobina pode ocorrer

nos hemossomos. Uma hipótese sobre

a possível associação entre estruturas

pre-hemossômicas e o mitocôndrio é

discutida.

UNITERMOS — Hemossomo e biossín-

tese de hemoglobina.

340

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

nnuNNEii m, a., como, .r. n. r., scjhwantes, m. l. & schw antes, a. r. _

Hcraosomc and Hemoglobin Biosynthesis in Embryos and in Kegressive Anemias.

Mem. Inst. llntantan, 37 : 335-344, 1973.

ACKNOWLEDGEMENTS

The authors wish to thank Mrs. Vera Monclin Weisz, Mr. Alipio Silva

Gonzales and Mr. Heitor Costa for their excellent technical assistance. And

Mrs. Sibylle Heller for her editorial aid and translation.

Tho human blood samples were obtained through courtesy of Dr. Gastão

Rosenfeld, Director of the Laboratório de Hematologia Clínica, São Paulo,

Brasil.

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in protein synthesis. Prof. Nat. Acacl. Spi., 49: 122-129 (1963).

Hecebido para publicação em 26.X. 1974

Aceito para publicação em 26.XI. 1974

341

cm

2 3

L

5 6

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BRUNNER JR., A., COIRO, J. R. R., SCHWANTES, M. L». SCHWANTES, A. R.

Hemosorne and Hemoglobin Biosynthesis in Embryos and in Regressive Anemias.

Mem. Inst. Butantan, 37: 335-344, 1973.

Thin section.s of adult human (Fig. lb) and rabbit-embryo reticulocytes (Figs. la, c, 2a, b

and c). Glutaraldehyde/OsOé fixation : Figs. la, b, c and 2c; formalin fixation and phos-

photungstic acid staining: Figs. 2a and b.

Fig. la — Several hemosomes (h) slightly more electrondense than the cytoplasm are

seen. Tvvo of them are longitudinally sectioned. Polyribosomes (arrows) are diffusely

distributed.

Fig. lb — A typical hemosorne (h), constituted by longitudinally disposed double lamellae

and limited by an externai membrane.

Fig. lc — Three “mature” hemosomes completely filled witli hemoglobin molecules, which

confounds them with the hemoglobinlzed cytoplasm. From one hemosorne, hemoglobin

molecules spread out to the cytoplasm (arrow).

Fig. 2a — A honeycomb-like organelle or pro-hemosome (ph) is continuous to a mito-

chondrion (m), suggesting a possible association between these organelles.

Fig. 2b — Continuous with the extremities of a long pro-hemosome (ph), a hemosorne (h)

and a mitochondrion (m) are seen. The region of connection between ph and m is slightly

enlarged (arrow).

Fig. 2c — The long hemosorne (h) is continuous to a hemosorne constituted by transverse

and obliqúe lamellae (h*) which could have been a mitochondrion. A dilatation between

h and li’ can be observed (arrow).

342

cm

SciELO

BRUNNER JH„ A., COIRO, J. R. R., SCHWANTBS, M. L. & SCHWANTES, A. Ií. _

Hemosome and Hemoglobin Biosyntbesis in Embryos and in Hegressive Anemias.

Mem. Inst. Butantan, 3~ : 335-344, 1973.

Reticulocytes of guinea-pigs with bleecling anemia.

Fig. 4a — Thin section showing mitochcndria (m) of liigher diameters tban liemosomes,

and polyribosomes (arrows). rro-hemosomes (pb) and liemosomes are rarely found,

Fig. 4b — Hemolysed reticulocyte presenting filamentous and rod-shaped mitochondria (mf

of higher diameters than filamentous liemosomes of Figs. 3a and 3b.

343

Figs. 3a and 3b — Hemolysed orthoehromatic rabbit — embryo erythroblast, extrudtng

its nueleus (N) and reticulocyte, respectively. Filamentous and rod-shaped liemosomes (h)7

and polyribosomes (arroiv) are observed.

cm

BRUNNER JR., A., COIRO, J. R. R., SCHWANTES, M. L. & SCHWANTES, A. R. —

Hemosome and Hemoglobin Biosynthesis in Embryos and in Regressive Anemias.

Mem. Inst. Butantan, 37: 335-344, 1973.

O

m Hb

m

1

li i

ii

d

6a —

-6 b

Sections of hemosomes obtained from reticulocyte fractionation.

Fig. 5 — After five washings; lamellae were not preserved.

Fig. 5b — After osmotic lysis for electrophoresis of the supernatant.

Electrophoresis patterns of the hemoglobin from the supernatants of 10,000Xg centrifugation

(I) and from hemosome content (II); o — origin; Hb — hemoglobin; d

Fig. 6a — From rabbit-embryo reticulocytes.

Fig. 6b — From reticulocytes of humans with acquireà hemolytic anemia.

dye.

344

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

ÍNDICE DE AUTORES

AMARAL, A. do

BANCHER, W., Rolim Rosa, R.

Furlanetto, R. S.

BRUNNER JR., A., Coiro, J. R. R., Schwantes, M. L.

& Schwantes, A. R,

COIRO, J. R. R., Brunner Jr„ A., Schwantes, M. L. & Schwantes, A. R.

CORDEIRO, C. L. S. & Hoge, A. R.

FURLANETTO, R. S., Rolim Rosa, R„ Siles Viilarroel, M.

& Siracusa, Y. Q.

FURLANETTO, R. S.,

& Zelante, F.

Rolim Rosa, R., Siles Viilarroel M.

FURLANETTO, R. S., Rolim Rosa, R., Siles Viilarroel M.

& Navas, J.

LANGLADA, F. G. de

LANGLADA, F. G., Gonçalves, M, F. & Rodrigues, E. T.

MACHADO, J. C., Konda, I. & Lima, L. S.

PESSÔA, S. B. & Biasi, P.

PESSÕA, S. B. & Biasi, P.

PESSÔA, S. B. & Biasi, P.

PIAZZA, R.

PIMONT, R. P.

ROLIM ROSA, R., Furlanetto, R. S., Siles Viilarroel, M.

& Zelante, F.

SILES VILLARROEL, M., Rolim Rosa, R., Furlanetto, R, S.

& Zelante, F.

SILES VILLARROEL, M., Furlanetto, R. S., Zelante, F.

& Rolim Rosa, R.

SOERENSEN, B.

TRAVASSOS F.°, L. P., Soerensen, B. & Fonteneile, T. H.

37

: 1- 16

37:

: 139-148

37:

335-344

37:

327-333

37:

261-290

37:

99-107

37:

109-122

37:

123-129

37:

239-251

37:

253-260

37:

233-238

37:

291-298

37:

299-307

37:

309-316

37:

149-232

37:

43- 82

37:

131-137

37:

83- 90

91- 97

37:

17- 42

37:

317-325

345

cm

SciELO

10 11 12 13 14 15

ÍNDICE DE ASSUNTOS

Ação larvi e molusquecida

Detergente “Tego 51”

37: 317-325

Acido bórico

antisséptico de sangue conservado

37: 17- 42

Alterações de desenvolvimento medulares

37: 149-232

Biossíntese de hemoglobina

Hemossomo

37: 335-344

Contaminação bacteriana

banco de sangue

37: 17- 42

Crotalus

época de fecundidade

sobrevida de espermatozóide

37: 253-260

DL50

do veneno botrópico

determinação

37: 109-122

de venenos botrópicos

37: 99-107

com veneno crotalico

37: 131-137

Detergente “Tego 51”

Ação larvi e molusquecida

37: 317-325

Disgenias medulares

37: 149-232

Eletroforese

de venenos ofídicos sobre “Cellogel”

de venenos botrópicos

37: 83- 90

em “Cellogel” do veneno de B. moojeni

isolamento dos fatores coagulantes

37: 91- 97

Fator coagulante.

venenos botrópicos

37: 99-107

Fixação do veneno crotálico

sobre tecidos animais

37: 139-148

Formação profissional

Ciências Biomédicas

Educação em Saúde

37: 43- 82

Gametócitos

37: 239-251

Hemoglobina

em organelos semelhantes a mitocôndrios

37: 327-333

Hemossomo

Biossíntese de hemoglobina

37: 335-344

347

cm

10 11 12 13 14 15