INSTITUTO BUTANTAN

SECRETARIA DE ESTADO DA SAÚDE

Secretário — Dr. Getulio Lima Junior

COORDENADORIA DE SERVIÇOS TÉCNICOS ESPECIALIZADOS

Coordenador — Prof. Dr. Otto Guilherme Bier

INSTITUTO BUTANTAN — DIRETORIA GERAL

Diretora — Dra. Jandyra Planet do Amaral

I — DIVISÃO DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA

Diretor — Dr. Bruno Soerensen Cardozo

a) Serviço de Imunologia

Diretor — Dr. Raymundo Rolim Rosa

b) Serviço de Virologia

Diretor — Dr. René Corrêa

II — DIVISÃO DE BIOLOGIA

Diretor — Dr. Alphonse Richard Hoge

a) Serviço de Animais Peçonhentos

Diretor — Dr. Hélio Emerson Belluomini

b) Serviço de Genética

Diretor — Dr. Willy Beçak

III — DIVISÃO DE CIÊNCIAS FISIOLÓGICAS E QUÍMICA

Diretor — Dra. Alba Apparecida de Campos Lavras

a) Serviço de Bioquímica

Diretor — Dra. Fajga Ruchla Mandelbaum

b) Serviço de Farmacologia

Diretor — Dra. Mina Fichman

c) Serviço de Fisiologia

Diretor — Dr. Saul Schenberg

d) Serviço de Química Orgânica

Diretor — Dr. Raymond Zelnik

III

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

IV _ DIVISÃO DE PATOLOGIA

Diretor — Dr. Jesus Carlos Machado

a) Serviço de Fisiopatologia

Diretor — Dra. Linda Nahas

Serviços Diretamente Ligados à Diretoria Geral

a) Serviço Agrícola

Diretor — Dr. Feres Saliba

LABORATÓRIOS ESPECIAIS:

Laboratório Especial de Imuno-Biologia

Diretor — Dr. Wilmar Dias da Silva

Centro OMS/OPS de Pesquisa e Formação em Imunologia

Diretor — Dr. Ivan Motta

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN

INSTRUÇÕES AOS AUTORES

1 _ FINALIDADE

As MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN são publicadas sob

a orientação da Comissão Editorial, sendo que os conceitos emitidos são

de inteira responsabilidade dos autores. Tem por finalidade a apresen¬

tação de trabalhos originais que contribuam para o progresso nos cam¬

pos da Biologia e da Medicina, elaborados por especialistas nacionais

ou estrangeiros que se enquadrem no REGULAMENTO DOS TRABA¬

LHOS.

2 — REGULAMENTO DOS TRABALHOS

2.1

NORMAS GERAIS

2.1.1 Os trabalhos devem ser inéditos e destinar-se exclusivamente

à revista “MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN”. Os artigos serão

publicados a convite da Comissão Editorial.

2.1.2 ESTRUTURA DO TRABALHO

2.1.2.1 Elementos preliminares

a) cabeçalho — título do trabalho e nome do autor (es) ;

b) filiação científica e endereço para correspondência.

2.1.2.2 Texto

Sempre que possível deve obedecer à forma convencional

do artigo científico:

a) Introdução — Estabelecer com clareza o objetivo do

trabalho, relacionando-o com outros do mesmo campo

e apresentando de forma sucinta a situação que se

encontra o problema investigado. Extensas revisões

de literatura devem ser substituídas por referências

aos trabalhos mais recentes, onde tais revisões tenham

sido apresentadas.

b) Material e métodos — A descrição dos métodos usados

deve limitar-se ao suficiente para possibilitar ao leitor

a perfeita compreensão e repetição dos métodos; as

técnicas já descritas em outros trabalhos devem ser

referidas somente por citação, a menos que tenham

sido consideravelmente modificadas.

c) Resultados — Devem ser apresentados com clareza e,

sempre que necessário, acompanhados de tabelas e

material ilustrativo adequado.

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

d) Discussão — Deve restringir-se à apresentação dos

dados obtidos e dos resultados alcançados, relacio-

nando-se novas contribuições aos conhecimentos an¬

teriores. Evitar hipóteses ou generalizações não ba¬

seadas nos resultados do trabalho.

e) Conclusões — devem ser fundamentadas no texto.

Dependendo do assunto do artigo, as divisões acima poderão ser mo¬

dificadas de acordo com o esquema de trabalho, porém, o artigo deve

conter obrigatoriamente:

a) Introdução;

b) Desenvolvimento do tema (com as divisões a critério

do autor);

c) Conclusão.

Agradecimentos — devem ser mencionados antes das Referências

Bibliográficas.

2.1.2.3 Material de Referência

Todo trabalho deve vir obrigatoriamente acompanhado de:

a) RESUMO — um no mesmo idioma do texto, outro em

inglês, redigidos pelo(s) próprio (s) autor (es), devem

expressar o conteúdo do artigo, salientando os elemen¬

tos novos e indicando sua importância. O resumo na

língua em que está redigido o trabalho deve ser colo¬

cado antes do texto; e o em inglês no final. Só excep¬

cionalmente excederá a 200 palavras. Os títulos dos

trabalhos devem ser traduzidos para o inglês e vice-

-versa.

b) UNITERMOS — Correspondendo a palavras ou ex¬

pressões que identifiquem o conteúdo, devem ser em

número necessário para a completa descrição do as¬

sunto e assinalados com asterísticos os 3 unitermos

principais. Para escolha dos unitermos usar o voca¬

bulário protótipo do campo especializado. (*)

c) REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS — Devem ser

incluídas apenas as referências mencionadas no texto

e arranjadas em ordem alfabética do sobrenome do

autor, numeradas consecutivamente.

Periódico:

AMORIM, M. de F., MELLO, R. F. e SALIBA, F. —

Envenenamento botrópico e crotálico. Contribui¬

ção para o estudo experimental comparado das

lesões. Mem. Inst. Butantan, 23: 63, 1950-51.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Livros

BIER, 0. — Bacteriologia e imunologia, 1, 13, ed.

Melhoramentos, São Paulo, 1966.

As citações no texto devem ser em números índices, correspondendo

às. respectivas referências bibliográficas.

Exemplos:

As investigações sobre a fauna flebotomínica no Estado de São Paulo,

foram feitas em várias ocasiões b 3. 4,.

. . . método derivado de simplificação de armadilha de Disney 2

(1968).

Referências Bibliográficas (correspondentes aos números índices)

1. BARRETO, M. P. — Observações sobre a biologia em condições na¬

turais dos flebótomos do Estado de São Paulo (Diptera Psycho-

didae) ; São Paulo, 1943. (Tese — Faculdade de Medicina da

Universidade de São Paulo).

2. DISNEY, R. H. L. — Observations on a zoonosis: leishmaniosis in

British Honduras. J. appl. Ecol., 5:19, 1968.

3. FORATTINI, 0. P. — Algumas observações sobre Biologia dos fle¬

bótomos (Diptera, Psychodidae) em região da bacia do Rio Pa¬

raná (Brasil). Arq. Fac. Hig. S. Paulo, 5:15-136, 1954.

3. FORATTINI, 0. P. — Novas observações sobre Biologia de flebó¬

tomos em condições naturais (Diptera, Psychodidae). Arq. Fac.

Hig. S. Paulo, 25:209-15, 1960.

3 _ NORMAS PARA APRESENTAÇÃO DOS ORIGINAIS

3.1 — Datilografia — Os originais devem ser datilografados,

em 3 (três) vias, com espaço duplo, em uma só face,

mantendo as margens laterais com 3 cm aproximada¬

mente. Todas as páginas devem ser numeradas conse¬

cutivamente, com algarismos arábicos, no canto supe¬

rior direito.

3.2 — Tabelas — devem ser numeradas consecutivamente com

algarismos arábicos e encabeçadas pelo seu título. Os

dados apresentados em tabela não devem ser, em geral,

repetidos no texto. As notas de rodapé das tabelas de¬

vem ser restritas ao mínimo possível e referidas por

asteriscos.

3.3 — Ilustrações — (fotografias, desenhos, gráficos, etc.) —

As ilustrações devem ser numeradas consecutivamente

com algarismos arábicos e citadas como Figuras. Todas

as figuras serão identificadas fora da área de repro¬

dução com: número, nome do autor, título abreviado

do trabalho, indicação da página de texto onde deverão

constar. As legendas devem ser apresentadas em folhas

à parte. As ilustraÇões devem permitir perfeita repro-

VII

SciELO

0 11 12 13

dução em clichês até a redução mínima de 6,3 cm. Os

desenhos devem ser feitos em papel vegetal e tinta nan¬

quim preta e as letras com normógrafo, nunca datilo¬

grafadas.

A Revista admite clichês (branco e preto) até 6 no texto, para

cada trabalho, devendo os demais ser pagos pelo autor. Para clichês

coloridos deverá haver prévia combinação entre a Comissão Editorial e

o autor.

De cada trabalho serão tiradas 100 (cem) separatas, devendo o autor

pagar as separatas que excedam a esse número, quando solicitar uma

quantidade maior. As separatas em excesso devem ser solicitadas quando

o manuscrito for encaminhado à Comissão Editorial.

Os trabalhos poderão ser redigidos, além da língua portuguesa, em:

inglês, francês e espanhol. Outras línguas ficarão a critério da comissão

Editorial.

A reprodução total ou parcial dos trabalhos em outros periódicos —

com menção obrigatória da fonte — dependerá de autorização prévia da

Comissão Editorial.

Para fins comerciais, será proibida a tradução e reprodução dos tra¬

balhos publicados pela revista.

VIII

1, | SciELO

MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN

CONTEÚDO

Artigos originais / Original Articles

1 Virulência y multirresistencia a drogas de cepas epidêmicas de

S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica.

I) — Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas

y no epidêmicas de S. typhimurium .

Virulência e multi-resistência a drogas de cepas epidêmicas de

S. typhimurium isoladas em hospitais infantis da América do

Sul.

Ciro A. PELUFFO, Kinue IRINO & Sylvia MELLO

2 Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos.

I — Análise comparativa dos componentes antigênicos de seis

espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos, atra¬

vés das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel

de ágar .

Contribution to the immuno-chemical study of bothropic venoms.

I — Comparative analysis of the antigenic components of 6

venom types against their respective antivenoms by the double

diffusion techniques, and immunoelectrophoresis in agar-gel.

Medardo SILES VILLARROEL, Flávio ZELANTE, Reynaldo

S. FURLANETTO, & Raymundo ROLIM ROSA.

3 Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos.

II — Análise comparativa dos componentes antigênicos comuns

de seis espécies de venenos botrópicos .

Contribution to the immuno-chemical study of bothropic venoms.

II — Comparative analysis of the antigenic components common

to 6 types of bothropic venoms.

Medardo SILES VILLARROEL, Reynaldo S. FURLANETTO,

Raymundo ROLIM ROSA, Flávio ZELANTE & José NAVAS.

4 Estudo morfológico e histoquímico da Glândula de Harder de

alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Morphological and histochemical study of the Harderian gland

of brasilian reptilians. I — Ophidea.

Ruberval A. LOPES, Cleide de OLIVEIRA, Geraldo M. CAM¬

POS & Jaime M. de BARROS

5 Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic

species ..

Ultraestrutura de eritrócitos maturos de cinco espécies bo-

trópicas.

2 3 4

5 6

pág.

15 16

Pág.

Hercules MENEZES, C. Y. MITSUTANI, José Rafael R.

COIRO, Maria A. CARVALHO DOS SANTOS & A. BRUN-

NER JR.

Nota / Notes

6 Presença de Cysticercus pisiformes (Bloch 1780) em coelho

e lebres importados . 63

Presence of Cysticercus pisiformes (Bloch 1780) in imported

rabbits and hares

Bruno SOERENSEN, Luiz ZEZZA NETO, Mário Demar PE-

REZ, Gilda Meire BULKA & Antonia Elenice Gimenes ONO

7 Nota sobre a freqüência de hemoparasitas em serpentes do

Brasil. 69

Note on the hemoparasite frequency in the snakes of Brazil

Samuel B. PESSÔA, Pérsio De BIASI, & Giuseppe PUORTO

8 Evolução do Hepatozoon sp. parasita do Leptophis ahaetulla

(Lineu) (Serpentes — Colubridae) no Culex fatigans . 119

Evolution of Hepatozoon sp., parasite of Leptophis ahaetulla

(Lineu) (Serpentes — Colubridae) in Cxdex fatigans.

Samuel B. PESSÔA, Pérsio De BIASI & Lia SACCHETTA

9 Notas sobre o Hepatozoon tupinambis (Laveran e Salibeni

1909) ( Prctozoa , Àpicomp 1 exa), parasita do Teju ( Tupinam¬

bis teguixin Lineu, 1758) (Sauria, Teiidae) . 123

Notes on Hepatozoon tupinambis (Laveran and Salibeni, 1909)

( Protozoa , Apicomplexa) parasite of the Teju ( Tupinambis

teguixin Lineu, 1758) (Sauria, Teiidae)

Samuel B. PESSÔA, Pérsio De BIASI & Lia SACCHETTA

10 Some complementary notes on the biology of Exetasis

eickstedtae Schlinger 1972, a fly- parasiting Mygalomorph

spiders . 131

Algumas notas complementares sobre a biologia de Exetasis

eickstedtae Schlinger 1972, mosca parasita de .aranha

caranguejeira

Vera Regina Dessimoni von EICKSTEDT

Notes on Xenopholis Peters and Paroxyrhopus Schenkel (Ser¬

pentes Colubridae) . 137

Notas sobre Xenopholis Peters e Paroxyrhopus Schenkel (Ser¬

pentes Colubridae)

Alphonse Richard HOGE & Pedro A. FEDERSONI JR.

Notes on Trimeresurus brongersmai Hoge 1969 .

(Serpentes, Viperidae, Crotalinae)

Notas sobre Trimeresurus brongersmai Hoge 1969

(Serpentes, Viperidae, Crotalinae)

Alphonse Richard HOGE, & S. Alma De Lemos ROMANO

145

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Pág.

Notas Prévias / Previous Notes

13 Obtenção experimental do quadro anatomopatológico da pan¬

creatite hemorrágica aguda no cão pela inoculação de veneno

de Tityus serrulatus

159

Experimental achievement of the anatomo-pathological picture

of the acute hemorrhagic pancreatitis in dogs by the inoculation

of Tityus serndatus venom.

Jesus Carlos MACHADO & José Franco da SILVEIRA F.°

14 Obtenção de culturas de linfomas humanos — Tumor de

Burkitt.... .. 163

Attainment of human lymphangioma cultures — Burkitt Tumor

Jesus Carlos MACHADO & Leonor DENARO

15 Lista das espécies de serpentes coletadas na região da usina

hidroelétrica de Ilha Solteira — Brasil . 167

List of the snakes collected in the region of the hydro-

electric power at Ilha Solteira — Brazil

Alphonse Richard HOGE, S. Alma ROMANO, Pedro A. FE-

DERSONI JR. & Carmen L. Santos CORDEIRO

Resumos Bibliográficos / Review

índice de autores do volume 38 . 179

índice de assuntos do volume 38 . 181

2 3

5 6

11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

38: 1-12, 1974

VIRULÊNCIA Y MULTIRRESISTENCIA A DROGAS DE CEPAS

EPIDÊMICAS DE S. TYPHIMURIUM AISLADAS EN HOSPITALES

INFANTILES DE SUDAMERICA.

I) VIRULÊNCIA COMPARATIVA PARA EL RATON DE CEPAS

EPIDÊMICAS Y NO EPIDÊMICAS DE S. typhimurium. —

C. A. PELUFFO, KINUE IRINO Y SYLVIA MELLO

RESUMEN — Se estudia la virulência

para el ratón de una muestra de 26 cepas

de S. typhimurium multirresistentes a dro¬

gas procedentes de brotes epidêmicos ocur-

ridos en 9 ciudades de 5 países sudameri-

canos (Argentina, Brasil, Chile, Paraguay

y Uruguay), comparativamente con 16

cepas no epidêmicas, sensibles.

prevención específica que se realizan usan¬

do al ratón como modelo experimental.

Se discute los factores que condicionan

esta marcada diferencia de virulência de

las cepas epidêmicas en el nino y el ratón

así como el mecanismo responsable dei cam¬

bio, senalando la importância de ampliar

nuestros conocimientos intensificando las

investigaciones sistemáticas en ese campo.

La media aritmética de la DL 50 de las

cepas epidêmicas estudiadas fue de 8,92 X

106 y la de las sensibles de 2,84 X 105

(P — <0,01, ^>0, 005). Se destaca lo

UNITERMINOS — Virulência comparativa

para el ratón. S. typhimurium: Cepas

epidêmicas, multirresistentes a drogas. Ce¬

pas no epidêmicas, sensibles.

inesperado de este hallazgo así como su

trascendencia para los estúdios sobre pa¬

togenia de la infección salmonelósica y su

A partir de 1970 han comenzado a producirse en Latinoamérica bro¬

tes de salmonelosis en hospitales infantiles causados por cepas multirre-

sistentes de S. typhimurium. — Las características de las cepas respon-

sables así como los aspectos clínicos y epidemiológicos tienen similitud con

los senalados por Mata y colaboradores en los brotes causados por Shi-

gella dysenteriae 1 en Centro América (20) así como con el brote de

tifoidea de México (11).

La trasmisión interhumana de salmonelas y la posibilidad de que

se produzcan brotes de salmonelosis en hospitales de ninos fueron men¬

cionados por Hormaeche y colaboradores (13, 15) desde el comienzo dei

estúdio de la participación de estos agentes en patologia infantil, consti-

tuyendo uno de los pilares en que se basó la “Doctrina de Montevideo”. —•

Los brotes eran sin embargo limitados, involucrando un corto

número de ninos en estrecho contacto entre sí y fácilmente controlables

por la aplicación de normas elementaes de higiene hospitalaria (14).

La aparición de las cepas epidêmicas multirresistentes tiene como

consecuencia un cambio radical en el panorama epidemiológico, de morbi-

lidad, de mortalidad y de algunos aspectos clínicos de las infecciones in¬

fantiles por enterobacterias.

A las infecciones esporádicas, con la característica distribución esta¬

cionai, suceden brotes hospitalarios-aún en pleno invierno- afectando si-

Endereço para correspondência

C.P. 65 — 05504 — São Paulo — Brasil

2 3

5 6

11 12 13 14 15 16

PELUFFO, (’. A., IRINO, K. & MELLO, S. Virulência y multirresistcneia a drogas de

copas epidêmicas de typhimurium aisladas en hospitales infantilcs de Sudamcrica. I —

Virulência comparativa para el raton do copas opidemicas.

Mcm. Inat. Hutantan, .18:

-12, 1974.

multáneamente a un alto número de ninos internados y extendiéndose

rápidamente a todas las salas de un mismo hospital. — Los reingresos de

lactantes infectados llevan al agente a otros hospitales donde el proceso

se repite y luego a la comunidad donde se sefialan casos por el mismo

agente en ninos sin contacto hospitalario.

Como consecuencia, la frecuencia relativa de los agentes de enteritis

se modifica profundamente. — Las salmonelas pasan de una frecuencia

de 3% a 5% en estadísticas previas (1,9) al 20-30%, (3,6,10,16,23,25)

desplazando dei primer lugar a E. coli enteropatógeno, sin que se modifi¬

que la frecuencia absoluta de éste.

La letalidad que había descendido por debajo dei 5%. luego de la

creación de centros especializados de rehidratación con facilidades ade-

cuadas de laboratorio y atención de enfermería, sube en forma vertical.

— Al comienzo de los brotes, cuando aún no eran conocidas las peculia¬

res características de las cepas involucradas la letalidad llega al 50%

para mantenerse luego por encima dei 20% (3,10). — Son frecuentes

además los procesos generalizados, particularmente septicemias y menin-

gitis (3,25).

Todos los indicadores indirectos de la excepcional virulência de estas

cepas para el nino están pues presentes; alta trasmisibilidad — lo que

indica baja dosis infectante — elevada letalidad y frecuencia de la gene-

ralización dei agente.

Los brotes epidêmicos por salmonelas multirresistentes afectan a los

hospitales infantiles de la mayoría de los países latinoamericanos y cons-

tituyen un importante problema de Salud Pública. — Siendo producidos

por un tipo serológico único es posible intentar su control mediante el

empleo de vacunas, particularmente si éstas pueden administrarse por

via oral.

Con la finalidad de obtener una vacuna eficaz es necesario disponer

de mayor información sobre las características de las cepas productoras

de brotes en diferentes regiones dei Continente, que expliquen su com-

portamiento clinico y epidemiológico.

En esta primera etapa de ese estúdio damos los resultados de la deter-

minación de la virulência para el ratón de esas cepas epidêmicas, compa¬

rativamente con la de cepas sensibles a los antibióticos, aisladas contem¬

poraneamente de animales o de ninos, previamente a la producción de

brotes asi como cepas estandar procedentes de colecciones. — Los resul¬

tados obtenidos justificam esta publicación ya que difieren sustancial-

mente de los anticipados.

Materiales y métodos.

Cepas de S. typhimurium. — Hemos obtenido una nuestra consti¬

tuída por 84 cepas multirresistentes aisladas de brotes producidos en 9

ciudades de 5 países de Sud América y 28 cepas, no epidêmicas, sensibles

a los antibióticos, procedentes de sólo dos países.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PELUFFO, C. A., IRINO, K. & MELLO, S. — Virulência y multirresistcncra a drogas de

cepas epidêmicas dc »S. typhitnuriutn aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. I

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Mem. Jnst. Butantan, SH\ 1-12, 1974.

No fué posible obtener una muestra de cepas sensibles más represen¬

tativa y comparable con la anterior ya que en la actualidad todas las cepas

aisladas de ninos son resistentes y no se han conservado en colecciones

cepas obtenidas en períodos anteriores. — Con fines de comparación se

han estudiado cepas clásicas de colección de comportamiento conocido.

En el Cuadro 1 se resume el origen de las 26 cepas epidêmicas y

16 sensibles de esa muestra, que han sido empleadas en esta etapa de

estúdio.

Estúdio de tas cepas. — Previamente a su empleo se realizo el estúdio

bioquímico y serológico de las cepas comprobando si poseían los caracteres

de S. typhimurium. — Se aislaron además en placas de agar simple, se

eligieron colonias morfologicamente lisas y se seleccionó, por la agluti-

nación con sueros somáticos y la reacción de Pampana, una colonia con

todos los caracteres de las cepas “S”. — No se utilizo ninguna cepa que

diera aglutinación positiva con tripaflavina.

Ratones — Se utilizo una cepa de ratones blancos procedentes dei

criadero dei Instituto Pasteur dc San Pablo en los que se demostro, luego

de una exaustiva investigación, que estaban libres de infección crónica por

salmonelas. — Experiências previas con ratones procedentes de otros

cuatro criaderos demostraron que estaban infectados por S. typhimurium

y/o S. enteritidis y que para excluir la infección no es suficiente realizar

cultivos repetidos de matérias fecales y/o bazo de animales de control.

De preferencia se utilizaron ratones machos de 18 a 22 grs. de peso;

debido a la insuficiência dei suministro fué necesario utilizar h«mbras en

algunas determinaciones después de demostrar en experiencias paralelas,

que no existían diferencias significativas entre ambos (X-=0,17; P=0,7).

Preparación de inóculos — Del cultivo en agar simple de 15 horas

se preparan suspensiones de solución fisiológica tope pH 7,4 (S.T.) ; cen-

trifugacjón a 1.000 X g., resuspensión en S.T y nueva centrifugación a

200 x g. durante 80 segundos, para eliminar acúmulos bacterianos.

Esta suspensión es ajustada a 5 X 10 h en fotocolorímetro Leitz a

535 mu y a partir de esa suspensión madre se realiza en S.T la dilución

apropiada para inocular.

Recuento de viables — Se utilizo una modificación de la técnica de

Miles, Misra e Irwing (23) realizando diluciones en S.T a partir de la

suspensión a 5 X 10 M , el día prévio a la inoculación. Diluciones con una

concentración aproximada de respectivamente 50 y 100 bactérias en 0,1 ml

se gotean por triplicado en tres cajas de Petri con agar simple. Luego de

incubación a 37°C, 24 horas, se realiza el recuento de colonias y se estima

el número de viables de la suspensión madre calculándose el promedio

de la lectura de las seis cajas. Periodicamente y como control se hizo un

segundo recuento, practicando diluciones similares a partir de la dosis

menor inoculada en los ratones.

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

PELUFFO, C. A., IRINO, K. & MELLO, S. — Virulência y multirresistencia a drogas de

cepas epidêmicas de «S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. I —

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Mem. Inst. Butantan, 88: 1-12, 1974.

En 19 de estas determinaciones paralelas llevadas a cabo en suspen-

siones conservadas 24 horas a 5°C se comprobó una disminución prome-

dial dei 7 % en el número de viables.

Inoculación — A partir de la suspensión madre, conservada 24 horas

en heladera, se realizan diluciones apropiadas en S.T., de acuerdo con

el resultado dei recuento de viables. Se utilizo diez ratones para cada

dosis, inoculando 0,2 ml de dilución por via intra-peritoneal. Para cada

determinación se utilizo como mínimo cuatro diluciones seriadas comen-

zando por diluciones factor 5, para la determinación previa dei nivel de

virulência, pero ajustando luego la DL 50, — en todos los casos — con

diluciones de factor 2.

Los ratones de cada dosis se colocan en cajas separadas donde se

mantienen 14 dias.

Determinación de la DL 50 — De acuerdo con la mortalidad obser¬

vada en 14 dias se calcula la DL 50 utilizando el método de Reed y

Muench (28). — Con fines de comparación se utilizo el método de Miller

y Tainter (22) en papel log. — probit sin apreciar diferencias que modi-

fiquen los resultados.

Determinación de la resistência a drogas — Para la determinación

preliminar de la sensibilidad de las cepas empleadas se utilizo el método

de difusión en placas de agar con discos impregnados con drogas proce¬

dentes de la casa Difco. — Para la determinación de los niveles de resis¬

tência se empleó el método dei tubo dilución en medio líquido aconsejado

por el grupo cooperativo de estúdio de la OMS (8).

Resultados — En el Cuadro 2 se expresa, junto con el espectro de

resistência a drogas de las cepas epidêmicas, el resultado de la determi¬

nación de la DL 50 para el ratón comparativamente con la de las cepas

no epidêmicas.

Los resultados obtenidos son muy llamativos pues 84,6% de las cepas,

procedentes de brotes epidêmicos ocurridos en 7 regiones de Latinoamé-

rica, muestran DL 50 para el ratón superiores a 10° y 9 de ellas por encima

de 10 7 .

La excepción la constituyen las cepas aisladas en Paraguay y Chile,

con DL 50 inferior a 10°; estas cepas tienen una característica común

que las distingue de la mayoría de las otras, y es su sensibilidad al ácido

nalidíxico.

La mayoría de las cepas estudiadas fueron aisladas de casos de ente-

ritis, por cultivo de heces, pero 4 de ellas lo fueron. de procesos extra-

entéricos: M 1/72 y P 227/71 aisladas por hemocultivo; M 4/72 de pus

de supuración mastoidea y BA 706 de líquido céfak) raquídeo. — Las

cepas aisladas de sangre y L.C.R. tienen una DL 50 ligeramente inferior

a la de las aisladas de heces de la misma región, pero — excluída P 227/71

— todas muestran una DL 50 para el ratón netamente superior a la

encontrada en cepas no epidêmicas, sensibles a drogas. — Esta diferencia

SciELO

0 11 12 13

O 00

^ ©í

* °

« II a

00 ■

.5 N

çj C(J

•5 ^

£ o .

£ S*

♦-* -*j

tn P a,

W c/3 H

I I I

w wh

bfl

O W

I I I

•< o W

.SciELO

) 11 12 13 14 15 16 17

PKLUFFO, C. A., IRINO, K. & MKLLO, S. - Virulência y multirresistencia a drogas de

cepas epidêmicas de S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. I —

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Mcm. /iLHt. Butantan , .IX: 1-12, 1974.

es particularmente llamativa en la cepa M 4/72, aislada de un proceso

supurado, con una DL 50 de 4,7 x 10 7 .

Debe senalarse las grandes variaciones en la magnitud de la DL 50

de las cepas epidêmicas, no sólo cuando se comparan las de cepas aisladas

en diferentes regiones, como las de Chile y Paraguay, sino tambien entre

las aisladas de un mismo brote. Debido a la limitación en el suministro

de ratones no fué posible estudiar una muestra más amplia de cepas de

cada región lo que hubiera permitido asegurarse de que los resultados

obtenidos reflejan exactamente Ia realidad.

Las cepas estudiadas constituyen un material heterogéneo y no com-

parable estrictamente con la totalidad de las epidêmicas cronologica¬

mente, por su origen geográfico o fuente de aislamiento. — Sin embargo,

si admitimos-con las reservas que esas diferencias implican — que pueden

asimilarse a una muestra de las cepas normales en la naturaleza y la

comparamos con la muestra constituída por las cepas epidêmicas, surge

entre ambas claras diferencias de virulência. — La media aritmética

de las DL 50 de ambos grupos de cepas es respectivamente de 2,8 x 10 r *

y 8,9 x 10 ,! es decir más de 30 veces superior en el caso de las cepas

epidêmicas.

Si tomamos en cuenta exclusivamente el material que puede consi-

derarse más homogéneo para fines de comparación, es decir las cepas

aisladas de lactantes en Montevideo antes y después de la producción de

brotes epidêmicos, siendo las primeras sensibles a los antibióticos y las

segundas multirresistentes, encontramos que las diferencias son de mag-

nitud aún mayor. — La media aritmética de la DL 50 de las primeras

es de 2,1 x 10 5 y la de las segundas de 1,2 x 10 7 , es decir que ésta es

aproximadamente 57 veces mayor.

El análisis estadístico de los resultados se ve dificultado por los

factores ya mencionados: la falta de cepas sensibles de igual región y

origen y la gran dispersión en los resultados lo que significa una alta

desviación estandar. — Sin embargo, si determinamos la significancia

c r ADRO 3

DISTRIBUCION DE 2G CEPAS EPIDÊMICAS Y lfi NO EPIDÊMICAS DE

SAI.MONKU.A TYPHIMUItIVM EN KUNCION DE LA DL PARA EL RATON

CEPAS

TOTAL

< IO-'.

> ,ÜB

> 100

>10

<1(1''

<><> 7

epidêmicas

2(1

NO EPIDÊMICAS

Para n — 3

X* - 29,31

0,001

de la diferencia de las medias aritméticas de ambos grupos, siendo “n”

= 40, obtenemos un valor de “t” de 2,81 y P < 0,01 y > 0,005, es

decir que Ia diferencia es significativa.

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

PELUFFO, C. A., IRINO, K. & MELLO, S. — Virulência y multirresistencia a drogas de

cepas epidêmicas de S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. I _

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Mem. Inst. Butantan, 38: 1-12, 1974.

De igual manera si distribuímos ambas muestras en grupos de DL 50

creciente, como se muestra en el Cuadro 3, y determinamos X 2 , encon¬

tramos un resultado que es altamente significativo (X 2 = 29,31-

P < 0,001).

DISCUSION

Es un axioma microbiológico que la virulência es un carácter relativo,

relacionado siempre con la especie animal en que se estudie. Sin embargo

es habitual el empleo dei ratón en experimentación salmonelósica, exis-

tiendo en los últimos diez anos una amplísima literatura donde se aborda

diferentes aspectos de la interrelación salmonela-hospedero, y en parti¬

cular los métodos de protección contra la infección salmonelósica; en

muchas de esas investigaciones — explícita o implícitamente-se extrapola

al hombre los resultados obtenidos en el ratón.

Creemos que nuestros hallazgos hacen dudar de la validez de las

conclusiones a que se llega con ese modelo experimental.

Por razones obvias no es posible determinar directamente cual es

la virulência para el lactante de las cepas aisladas de brotes epidêmicos,

pero todos los marcadores indirectos como la fácil trasmisibilidad, alta

letalidad y presencia de generalización indican que debe ser elevada. En

contraste, la virulência experimentalmente determinada en el ratón es

estremadamente baja, especialmente en nueve de las cepas en las cuales

la DL 50 es superior a 10 7 , lo que significa que estas tienen promedial-

mente una virulência 55 veces inferior a la de cepas mantenidas en

colección por mas de 40 anos.

Discrepâncias de tan alto nivel en la sensibilidad de ambos hospe-

deros para determinadas cepas de salmonelas, indica que estas deben de

poseer caracteres fisiológicos, antigénicos u otros que condicionen esa

diferente virulência y que aún desconocemos. Es pues imprescindible

aclarar esta interrogante antes que podamos progresar en nuestros cono-

cimientos sobre la infección salmonelósica dei lactante y en particular

sobre los métodos de prevención.

Es indudable la influencia de los antigenos somáticos principales

sobre la virulência experimental (19) siendo adernas necesaria la pre¬

sencia de un polisacárido completo con largas cadenas laterales para ase-

gurarla (25,27) ; los factores “O” accesorios 1,5 y 12 2 — no parecen

sin embargo influir sobre la virulência de S. typhimuriun como lo ha de¬

mostrado Valtonen y Mákelã (31) en variantes obtenidas por conversión

lisogénica, mutación o recombinación genética.

Muy escasa es sin embargo nuestra información en cuanto al factor

o factores que condicionan marcadas diferencias de virulência entre

cepas “S” que poseen idêntica composición antigénica. Jenkin (17, 18)

ha postulado que puede ser debida a la similitud antigénica de compo¬

nentes de la célula bacteriana virulenta y de la especie animal en que

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PELUFFO, C. A., IRINO, K. & MELLO, S. — Virulência y multirresistencia a drogas de

cepas epidêmicas de S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. I —

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Mem. Inst. Dutantan, 38: 1-12, 1974.

se ensaya; siendo este antígeno propio de la especie animal, no genera

anticuerpos específicos u opsoninas dirigidos contra el parásito. Hob

son (12), estudiando comparativamente una cepa virulenta de S. typhi-

murium y una mutante de un solo paso resistente a estreptomicina y

de virulência disminuida, concluye que la diferencia esencial en ese caso

reside en la velocidad de multiplicación y en la capacidad para alcanzar

una población final crítica capaz de causar la muerte.

Las cepas que hemos estudiado son perfectamente “S” por todos los

métodos ensayados e idênticas en composición antigénica, excepto en lo

que se refiere al factor somático 5 que se encuentra con mayor frecuencia

y mejor desarrollado en las cepas no epidêmicas que en las epidêmicas.

Investigaciones iniciadas y que serán objeto de una publicación posterior,

tienden a dilucidar el papel de este y otros factores antigénicos en la

virulência de ambas muestras.

Otro aspecto a aclarar, planteado pór nuestros resultados, es el me¬

canismo dei cambio de virulência comprobado. Podría sostenerse que

ha intervenido el mecanismo biológico reconocido de exaltación de la

virulência por pasaje seriado en una especie, con pérdida de virulência

para otra. Si bien esta hipótesis no puede excluirse en forma absoluta

hay argumentos para descartaria. En primer término la información

epidemiológica es clara en cuanto a que las cepas epidêmicas aparecieron

bruscamente y que también abruptamente se modificaron los parâmetros

clínicos y epidemiológicos de la infección en el nino; no fué pues un

proceso gradual, como debía de esperarse si el aumento de virulência

fuera debido al pasaje repetido en el hombre.

Por otra parte, en los cuarenta anos en que hemos estudiado las

salmonelosis dei nino existieron oportunidades — y repetidamente se

produjo — la trasmisión interhumana de la infección sin que nunca se

observara modificación de la virulência apreciable clínica o epidemioló-

gicamente. Igualmente lo confirma el hecho de que las cepas prove¬

nientes de diferentes especies animales y las dei nino — previamente

a la eclosión de los brotes epidêmicos — muestran similar virulência

para el ratón, independientemente dei orígen.

El carácter objetivo que distingue a ambos grupos de cepas es su

sensibilidad a los antibióticos, lo que sugiere su vinculación con las mo-

dificaciones de virulência.

La resistência por si sola no parece poder explicar la aparición de

brotes epidêmicos. Si bien es cierto que en el ambiente hospitalario,

donde las drogas antibacterianas son usadas con profusión, las cepas

resistentes tienen mas posibilidades de subsistir y para trasmitirse por

lo tanto de un enfermo a otro ésto no explica ni lo explosivo de su

aparición ni las características dei cuadro clínico. Varias décadas de

uso de antibióticos en hospitales y la aparición de cepas resistentes a

las sulfas primero y luego a estreptomicina, tetraciclinas, etc. no tuvieron

consecuencias como las actuales.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PELUFFO, ('. A., IRINO, K. & MELLO, S. Virulência y multirresistencia a drogas de

cepas epidêmicas de S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. I —

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Mem. Inat. Dutantan, SX: 1-12, 1974.

Poclría tal vez atribuirse a otro de los caracteres de las cepas actua-

les o sea a que poseen multirresistencia infecciosa trásmisible por heren-

cia extracromosómica.

Anderson (2) ha senalado la posibilidad de que los plasmidios invo-

lucrados en la trasmisión de resistência, podrían trasmitir igualmente

determinantes capaces de modificar otras propiedades de las bactérias,

incluyendo su virulência. Por otra parte se ha demostrado que son va¬

riados los caracteres bacterianos trasmitidos por este mecanismo como

capacidad para producir hemolisina (29), producción de enteroto-

xina (30), colicinas (4), penicilinasa (5), ataque de hidratos de car¬

bono 7), etc. aisladamente o asociados con la trasmisión de determinantes

de resistência a drogas (21).

Con esta hipótesis de trabajo hemos realizado experiencias de con-

jugación de salmonelas epidêmicas con sensibles y los resultados preli¬

minares parecen confirmaria ya que se ha obtenido clones de la cepa

sensible, que han recibido parte de los determinantes de resistência y

muestran una DL 50 promedial 25 veces superior a la de la cepa ori¬

ginal.

La virulência bacteriana depende de un delicado ajuste entre las

características biológicas dei agente y las dei hospedero; cualquier modi-

ficación de ese equilíbrio, derivada de la perdida o adquisición de carac¬

teres citológicos o fisiológicos, puede modificaria profundamente para

algunas especies animales y no para otras.

Es pues ilusorio adelantar hipótesis sobre cual es la naturaleza dei

cambio que sufre la célula bacteriana cuando recibe el factor “R” y

que es responsable de las modificaciones de virulência encontradas. Sólo

la investigación sistemática, planeada con ese objetivo, puede dar res-

puesta a las interrogantes planteadas.

Consideramos que es imprescindible la ampliación de nuestros cono-

cimientos en este campo para desarrollar, con fundamentos sólidos, la

profilaxia específica de la salmonelosis. Puede igualmente dar respuesta

a otros interrogantes vinculados con la patogenia de la infección así como

explicar las diferencias de comportamiento epidemiológico de diferentes

tipos de salmonela con idêntica constitución antigénica.

SUMM ARY — The virulence of a sample

of 20 strains of multirresistant S. typhi¬

murium isolated from epidemic outbreaks

in nine cities of five south american coun-

tries (Argentina, Brazil, Chile Paraguay

and Uruguay), has been studied in mice

toge th er with 16 non epidemic, sensitive,

strains.

The arithmetic mean of the LD r of epi¬

demic strains is 8,92 x 10< s comparing with

2,84 x 10 r » for the sensitives ones (P =

<0,01, ^>0,005). These unexpected results

are stressed because of its bearing on stu-

dies employing mice as an experimental

model, mainly those concerning pathoge-

nesis of salmonella infections and their

specific prevention.

Factors responsible for the low viru¬

lence for mice of strains highly virulent

for mau, as the underlying mechanism

of the change are discusscd, pointing the

need for systematic research on this field.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PELUFFO, C. A., IHINO, K. & MELLO, S. Virulência y multirresistencia a drogas de

cepas epidêmicas de S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. I

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Alem. Inut. Butantun, 55: 1-12, 1974.

UN1TERMS Comparative virulence for

mice. S. typhimurium: Epidemic, multir-

resistant strains.

strains.

Non epidemic, sensitive

AGRADECI MIENTOS: Agradecemos a

los Drs. Teresa Eiguer, Gil Pessoa, Ingen-

borg Prenzel, Amilcar Canesse y Hernan

Miranda por el suministro de las cepas uti¬

lizadas en este trabajo. Al Dr. Murillo

Paca Azevedo, Director dei Instituto Pas-

teur de San Pablo, por havemos facilitado

los ratones de su criadero.

BIBLIOGRAFIA

1. ALVAREZ, F. et al.

Consideraciones clínico-bacteriológicas sobre diarreas agudas de lactantes hospitali¬

zados. Arch. I‘cd. Uruguay, (en Prensa).

2. ANDERSON, D. S.

Drug resistance of »S. typhimurium and its implications. Br. Med. ./. 5:333-39, 1968.

3. BUZZO, N. et al.

Estúdio epidemiológico de infecciones por salmonelas en el Hospital de Ninos de

Buenos Aires. En: V Congreso L. A. de Microb., Resúmenes de Trabajos, pp. 51.

P. dei Este, 1971.

4. CLOWES, R. ('.

Transfert génétique des facteurs colicinogènes. Anu. Inut. Pasteur 107 (n.° 5, suppl.l:

74-92, 1964.

5. DATTA, N. St P. KONTOMIGUALOU.

Penicillinase synthesis controlled by infectious R factors in Rnterobacteriaceae. Nature

2115:239-241, 1965.

6. IVEMPAIRE, MATILDE Si EIGUER, T.

Aislamiento de S. typhimurium en coprocultivo. Su relación eon otros enteropatógenos.

En: V Congreso L. A. de Microb., Resúmenes de Trabajos, pp. 47-48. P. dei Este, 1971.

7. ECHOLS, H.

Properties of F’ strains of Escherichia coli superinfeeted with F-lactose and F-galac-

tose episomes. J. Bacteriol. 5.5:262-268, 1963.

8. ERICSSON, 11. M. St SHERRIS, J. C.

Antibiotic sensivity testing. Report, of an international collaborative study. Actu Path.

Mirrobiol. Scand., Sect. B, suppl. n.° 217, 90 pp. 1971.

9 FALCÃO, DEISE PASSETTO

Estudo bacteriológico de infecções entéricas em crianças até 2 anos, no município de

Araraquara, SP. Rev. Microb. (Brnxil ), 5:127-138, 1972.

10. GALIANA, J. et al.

Epidcmiologia de salmonelosis en raeién naeidos y lactantes en el Hospital P Rossell

Arch Bed. Uruguay, <5:3-14, 1972.

11. GONZALE CORTEZ, A. et al.

Typhoid fever. -México 1972 and 1973. Morbid. and Mortal. Wkly. Rep. 22:350-55

1973.

12. HOBSON, I).

The behaviour of a Mutant strain of Salmonella typhimurium in Experimental Mouse

Typhoid. .1. Hygiene. .5.5:322-33, 1957.

13. ' HORMAECHE, E. St PELUFFO, C. A.

Salmonellosis in infancy and its diagnosis. Puerto Rico .1. Pub. Health & Trop. Med.

I 7:99-123, 1941.

14. HORMAECHE, B.; PELUFFO, C. A. y ALEPPO, P. L.

S. cerro, nuevo tipo de salmonela. Estúdio bacteriológico y clinico. Arch Ped. Uruguay,

15:368-375, 1942.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PELUFFO, C. A., IRINO, K. & MELLO, S. — Virulência y multirresistencia a drogas de

cepas epidêmicas de S. typhimurium aisladas en hospitales infantiles de Sudamerica. X —

Virulência comparativa para el raton de cepas epidêmicas.

Mem. Inst. Butantan, 88: 1-12, 1974.

15. HORMAECHE, E.; SURRACO, N. L.; PELUFFO, C. A. y Aleppo, P.L.

Causes of infantile human diarrhea. Am. J. Dia. Children, 65:539-551, 1943.

16. HORMAECHE, C. E.; DEMARCO, R.; ALIA, C.; SCHELOTTO, F. & RIVAS, C.

Salmonelosis intrahospitalaria en el Hospital P. Visca. Arch. Ped. Uruguay 1,3: 15-24,

1972.

1,7. JENKIN, C. R.

An antigenic basis for virulence of strains of S. typhimurium. J. Exp. Med. 115: 731,

1962.

18. JENKIN, C. R. & ROWLEY, D.

Partial purification of the “protective” antigen of Salmonella typhimurium and its

distribution amongst various strains of bactéria. Aust. J. Exp. Biol. Med. Sei. 1,3: 65-78,

1965.

19. MÃKELÂ, HELENA; V. V. VALTONEN, and M. VALTONEN.

Role of O-antigen (Lipopolysaccharide) Factors in the Virulence of Salmonella.

J. Inf. Dis. 128: 581-85, 1973.

20. MATA, L. J. et al.

Epidemic Shiga Bacillus dysentery in Central America. I. Etiologic investigations in

Guatemala, 1969. J. Infect. Dis. 122: 170-180, 1970.

21. MEYNELL, E.; MEYNELL, G. G. & DATTA, N.

Phylogenetic relationships of drug-resistance factors and other transmissible bacterial

plasmids. Bact. Rev. 62:55-83, 1968.

22. MILLER, L. C. & TAINTER, M. L.

Estimation of the ED ro and its error by means of logarithmic probigraph paper.

Pro. Soc. Exp. Biol. Med. 57:261-64, 1944.

23. MILES, A.; MISRA, S. S. & IRWING, J. O.

The estimation of the bactericidal power of the blood. J. Hyg. (Camb.) 55:732, 1938.

24. MOLTENI, O.; NOTÁRIO, R. & BORDA, N.

Incidência de S. typhimurium en niiios con sindrome diarreico en la Ciudad de Rosário.

En: V. Congresso L. A. de Microb., Resúmenes de Trabajos, pp. 49-50., P. dei Este,

1971.

25. NAKANO, M. & SAITO, K.

Chemical components in the cell wall of Salmonella typhimurium affecting its viru¬

lence and immunogenicity in mice. Nature. London, 222: 1085-6, 1969.

26. PRENZEL, INGEBORG. Comunication personal.

27. ROANTREE, R. J.

Salmonella O antigens and virulence. Ann. Rev. Microb. 21: 433-466, 1967.

28. REED, L. J. & MUENCH, H.

A simple method of estimating fifty per cent endpoints. Am. J. Hyg. 27: 493-497, 1938.

29. SMITH, H. W. & S. HALLS.

The transmissible nature of the genetic factor in Escne, ichia coli that Controls haemo-

lysin produetion. J. Gen. Microbiol. 47:153-161, 1967.

30. SMITH, T. W. & S. HALLS.

The transmissible nature of the genetic factor in Escherichia coli that Controls ente-

rotoxin produetion. J. Gen. Microbiol. 52:319-334, 1968.

31. VALTONEN, V. V. & MÃKELÂ, P. H.

The effect of lipopolysaccharides modifications — antigenic factors 1,5,12,,, and 27 —

on the virulence of salmonella strains for mice. J. Gen. Microb. 69: 107-115,” 1971.

Recebido para publicação em 30-IV-1974 e aceito em 9-X-1974.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

38: 13-30, 1974

CONTRIBUIÇÃO AO ESTUDO IMUNOQUÍMICO DE VENENOS

BOTRÓPICOS

I. Análise comparativa dos componentes antigênicos de seis espécies de

venenos frente a seios respectivos antivenenos, através das técnicas

de dupla difusão e imunoeletroforese en gel de ágar.

MEDARDO SILES VILLARROEL*

FLÁVIO ZELANTE**

REYNALDO SCHWINDT FURLANETTO***

RAYMUNDO ROLIM ROSA***

RESUMO — Os autores analisaram com¬

parativamente os componentes antigênicos

de seis espécies de venenos botrópicos fren¬

te a seus respectivos antivenenos, “in na-

tura” e “purificados” através de micromé-

todos de Ouchterlony e de Grabar &

Williams.

Concluem, que a metodologia aplicada,

permitiu a obtenção de resultados satisfa¬

tórios quando da separação dos componen¬

tes antigênicos, principalmente pela imuno¬

eletroforese. Os antivenenos purificados

permitem caracterizar melhor os compo¬

nentes antigênicos quando seus resultados

são comparados com os obtidos com anti¬

venenos “in natura”.

UNITERMOS — Venenos botrópicos; du¬

pla difusão em gel de ágar de venenos bo¬

trópicos; imunoeletroforese de venenos

botrópicos.

INTRODUÇÃO

Em trabalhos anteriores, utilizando-se de membranas de “Cellogel”

verificamos electroforeticamente, o número de frações que compõem os

venenos de algumas espécies de serpentes do gênero Bothrops, sendo que

para a espécie B. jararaca, pudemos distinguir 15 frações (Siles Villar-

roel, 1972; Siles Villarroel e col., 1973).

Uma análise dos trabalhos publicados a esse respeito evidencia que

poucos autores se preocuparam com o estudo da composição antigênica

dos venenos ofídicos e, em particular com a dos venenos do gênero

Bothrops; aqueles que estudaram o assunto sob este aspecto limitaram-se

a verificar a existência de componentes comuns aos vários venenos,

através da reação de neutralização “in vivo” ou, então, muito mais rara¬

mente, “in vitro”. Neste aspecto, podemos destacar o trabalho de Rosen-

feld e col. (1962).

Ex-assistente da Seção de Imunologia do Instituto Butantan e Professor Assistente Doutor do

Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da U.S.P.

** Professor Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomédicas da U.S.P.

*** Atual Diretor do Instituto de Ciências Biomédicas da U.S.P. e Professor Catedrático do Depar¬

tamento de Microbiologia do mesmo Instituto.

**** Diretor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan e Professor Assistente Doutor do Depar¬

tamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da U.S.P.

Endereço para correspondência:

C.P. 4365 — S. Paulo — Brasil.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. hi8t. Dutantan, 3X: 13-30, 1974.

Não encontramos na literatura consultada trabalhos que estabeleçam

uma análise comparativa entre os resultados observados com os venenos

botrópicos, quando da aplicação das técnicas de dupla difusão e de imu-

noeletroforese em gel de ágar. Os autores se limitaram em analisar

isoladamente, utilizando de uma das duas técnicas. Quer nos parecer que,

entre nós, somente Gonçalves (1961) realizou este estudo comparativo,

porém com veneno crotálico.

Schenberg (1958, 1961 e 1963), aplicando a técnica de Ouchterlony,

realizou observações com os venenos das espécies B. jararaca e B.

neuwiedi, introduzindo algumas modificações na metodologia original.

Este autor conclui da possibilidade de existir um grande número de

componentes antigênicos nesses venenos, tendo ainda verificado que, em

seis sub-espécies de B. neuwiedi, os venenos também diferem, entre si,

imunologicamente.

Outros autores, utilizando venenos de serpentes de vários gêneros,

inclusive o botrópico, e aplicando a técnica de dupla difusão em gel de

ágar, apresentaram resultados que assim podem ser sintetizados:

1 — é possível a utilização desse método no estudo da composição

antigênica dos venenos ofídicos (Grasset e col. 1956a e 1956b) ;

2 — é possível determinar a existência de identidades antigênicas

entre venenos de serpentes do mesmo gênero (Scavini & Ferra-

resi, 1962) e mesmo em gênero bastante distantes (Boquet e

col., 1969).

A imunoeletroforese também foi aplicada por alguns autores para

verificar a composição antigênica de venenos ofídicos, inclusive de espé¬

cies do gênero Bothrops.

Parece-nos que foi Gonçalves (1961), quem primeiramente se uti¬

lizou desta metodologia no estudo dos venenos ofídicos, aplicando-a na

verificação da composição do veneno crotálico.

Rascovsky & Scavini (1964), utilizaram da mesma técnica para veri¬

ficar a presença de anticorpos contra os venenos B. altematus, B.

neuwiedi e C. terrificus, nas frações globulínicas (3, e (3 2 de antivenenos

específicos.

Ferri (1967), entre nós, verificou através da imunoeletroforese, o

comportamento do veneno B. atrox tendo, todavia realizado a separação

eletroforética prévia do antiveneno, para em seguida realizar a difusão

do veneno. Tal modelo experimental, demonstrou as linhas de precipi¬

tação, somente na região y globulínica, o que aliás, era o único objetivo

do autor.

Uriel e col. (1968), pela aplicação da imunoeletroforese caracteri¬

zaram a natureza antigênica de duas enzimas constitutivas do veneno

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. X — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

da espécie B. jararaca, previamente isoladas através de processos quí¬

micos, demonstrando que uma delas é bastante heterogênica e, a outra,

representada por uma única fração.

Jouannet (1968), realizando a imunoeletroforense de vários venenos

de serpentes provenientes da Etiópia, obteve uma nítida e satisfatória

separação dos componentes antigênicos dessas peçonhas.

Boquet e col. (1969), aplicando esta metodologia, verificaram que,

a a toxina do veneno N. nigricollis, é comum a outros venenos de espécies

de serpentes diferentes.

Face ao exposto, nos propusemos a estudar comparativamente, con¬

tando com o aprimoramento das técnicas imunoquímicas originais de

Ouchterlony e de Grabar & Williams, a composição antigênica de seis

espécies de venenos de serpentes do gênero Bothrops. Os resultados

obtidos, eventualmente poderão fornecer subsídios a serem utilizados em

outros campos, como da filogenia e da sistemática das serpentes bo-

trópicas.

MATERIAL E MÉTODOS

Venenos ofídicos

Os venenos ofídicos utilizados, fornecidos pelo Instituto Butantan,

foram obtidos por extração manual de numerosas serpentes adultas,

cristalizados a vácuo e mantidos na geladeira a 0-4°C. Utilizamo-nos das

peçonhas das seguintes espécies: Bothrops jararaca (Wied, 1824).

Bothrops alternatus Duméril, Bibron et Duméril, 1854, Bothrops insulares

(Amaral, 1921), Bothrops jararacussu Lacerda 1844, Bothrops moojeni

Hoge, 1965* e Bothrops cotiara (Gomes, 1913).

Foram preparadas soluções a 0,5%, l%,2%e4%a partir do veneno

cristalizado, em solução fisiológica (NaCl a 0,85%) distribuídas em

frascos contendo 2 ml de cada solução, hermeticamente fechados e man¬

tidos à temperatura de -25°C, (Furlanetto, 1965). No momento do uso,

as soluções eram descongeladas e os excedentes desprezados.

Soros Hiperimunes

Utilizamo-nos de antivenenos específicos, obtidos por hiperimu-

nização de seis cavalos (um para cada espécie de veneno) ; os animais

escolhidos apresentavam-se em condições normais de saúde e nunca ha¬

viam sido antes utilizados para outras imunizações. As hiperimunizações

obedeceram ao esquema adotado pelo Serviço de Imunização do Instituto

Butantan.

A Bothrops moojeni Hoge, 1966. era até então, claasi içada como Bothrops atrox.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 88: 13-30, 1974.

Ao término das hiperimunizações, cerca de sete dias após a última

inoculação, foram realizadas as sangrias finais em duas etapas:

a) inicialmente retiravam-se 500 ml de sangue; este era deixado

coagular e o soro era decantado e centrifugado a 3.000 rpm

por 20 minutos. Em seguida, era o soro distribuído em volumes

de 10 ml e guardado em frascos hermeticamente fechados e

conservados a -25°C até sua utilização. Este material constitui

o que chamamos de antiveneno “in natura”.

b) o restante de cada sangria individual era feita em recipiente

contendo citrato de sódio a 1,7 g por 100 ml de sangue; o plasma

era decantado após 24 horas de sedimentação dos elementos fi¬

gurados e encaminhado à purificação e concentração pelo método

de Pope (1938-1939) modificado por Furlanetto (1961), técnica

usualmente adotada nos laboratórios do Instituto Butantan. O

material assim tratado constitui o que chamamos de “antiveneno

purificado”.

Titulação dos antivenenos

A titulação dos antivenenos foi realizada pelo método de Vital

Brazil, segundo a Farmacopéia dos Estados Unidos do Brasil (1959). A

atividade neutralizante dos antivenenos está expressa na tabela I.

TABELA I

TÍTULOS APRESENTADOS PELO DOSEAMENTO “IN VIVO”, SEGUNDO O

MÉTODO DE VITAL BRAZIL, DOS ANTIVENENOS OBTIDOS

Veneno

Título do antiveneno

“in natura" (mg/ml)

Título do antiveneno

purificado (mg/ml)

B. jararaca

2,0

5,0

B. alternatus

3,0

6,0

B. insularia

4,0

15,0

B. jararacussu

2,0

5,5

B. moojeni

2,0

4,0

B. cotiara

>2,0<3,0

9,0

Dupla difusão em gel de ágar

Para a realização desta prova, baseamo-nos nos trabalhos originais

de Ouchterlony (1948, 1949). A perfuração do ágar obedeceu aos mode¬

los adotados por Ferri (1968) e sumariamente consta dos seguinte pro¬

cedimentos :

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M„ ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímieo de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de' venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. lnst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

Preparo prévio da lâmina

Foram utilizadas lâminas de microscopia de 7,5 x 2,5 cm e de 1 mm

de espessura, numeradas em uma de suas extremidades.

As lâminas, sulfocromicamente limpas, eram revestidas com 1,0 ml

de ágar (Bacto Ágar Difco) a 1% em água destilada. Em seguida,

eram levadas à estufa a 37°C até a completa secagem do ágar. Assim

preparada, as lâminas conservavam-se até o momento de sua utilização.

No momento do uso, as lâminas recebiam um segundo revestimento,

constituído por 3,0 ml de ágar (Bacto Ágar Difco), a 1% em solução

fisiológica, adicionado de mertiolato a 1:10.000. Deixava-se solidificar

por 10 minutos à temperatura do laboratório.

Após o tratamento acima descrito, com o auxílio de perfuradora de

diâmetro de 5 mm, eram abertos os orifícios. Padronizamos a utilização

de três perfurações, com uma disposição triangular, com 8 mm de dis¬

tância entre cada orifício. A retirada dos fragmentos de ágar era reali¬

zada com o auxílio de uma agulha de grosso calibre, adaptada a uma

trompa de vácuo.

Execução da dupla difusão em gel de ágar

Em todas as reações, padronizamos, a colocação do antiveneno na

perfuração do vértice superior ou inferior e a colocação das soluções

de venenos, nas outras duas perfurações conforme o modelo experimental

adotado.

Também padronizamos, para todas as reações realizadas, o volume

de 0,02 ml, quer das soluções de venenos, quer de antivenenos. As lâminas

eram colocadas imediatamente em câmaras umedecidas com uma solução

de sulfato de cobre a 1%, onde permaneciam por 48 horas. Em seguida,

as lâminas eram lavadas por três dias, imersas em cubas com solução

fisiológica (NaCl a 0,85%) que era rertovada duas vezes ao dia. Após

este período, eram envolvidas em papel filtro umedecido em água des¬

tilada e colocadas na estufa a 60°C, até completar a secagem do papel.

Esta operação era repetida mais uma vez. Em seguida, eram lavadas

em água corrente e novamente submetidas a 60°C na estufa até a seca¬

gem do ágar. Após o resfriamento, eram coradas pelo Amido Schwarz

10 B a 4% em ácido acético, durante 10 minutos. Seguia-se a descolo¬

ração pelo ácido acético a 5% e subseqüente lavagem em água corrente

e secagem à temperatura ambiente. Para melhor visualização das linhas

de precipitação, realizamos a leitura das lâminas com o auxílio de Imu-

nocópio de Projeção Zeiss *.

Montado nos Laboratórios de Cari Zeiss — Companhia ótica e Mecânica, segundo recomendações

técnicas do Pro'. R. G. Fcrri.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

tomponentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, S8: 13-30, 1974.

Imunoeletroforese

Seguimos as técnicas de Grabar & Williams (1953 e 1955), com as

modificações propostas por Ferri & Cossermelli (1964), relativas à apa¬

relhagem e técnicas necessárias à realização do micrométodo por nós

utilizado e que sumariamente consiste no seguinte:

Aparelhagem para Imunoeletroforese

a) retificador de corrente, munido de miliamperímetro e voltímetro,

regulável de zero a 100 mA e de zero a 500 yolts;

b) cuba de “plexiglás”, de procedência nacional, confeccionada se¬

gundo o modelo preconizado por Ferri e Cossermelli (1964) ;

c) lâminas de microscopia de 7,5 x 2,5 cm e de 1 mm de espessura,

numeradas em uma de suas extremidades.

Preparo de lâminas

As lâminas quimicamente limpas pelo tratamento sulfocrômico eram

revestidas com 1,0 ml de ágar (Bacto Ágar Difco) a 1% em água desti¬

lada. Em seguida, eram levadas à estufa a 37°C, até a completa secagem

do ágar. Assim preparadas, conservam-se até o momento de sua uti¬

lização.

No momento do uso as lâminas recebiam um segundo revestimento

com 3,0 ml de ágar a 1% (Bacto Ágar Difco), em solução tampão de

veronal acetato com pH 8,6 e força iônica de 0,05, adicionado de mer-

tiolato a 1:10.000. Deixava-se solidificar por 10 minutos e em seguida,

o ágar era recortado. A abertura das fendas e do orifício central, era

realizada através de um aparelho recortador, equipado com lâminas

laterais e tubo central oco. As fendas apresentavam um comprimento de

6,5 cm por 1 mm de largura; o orifício central tinha um diâmetro de

2 mm. As distâncias entre o orifício e as fendas eram de 5 mm. A

rçtirada dos fragmentos de ágar era realizada com o auxílio de uma

agulha de grosso calibre, adaptada a uma trompa de vácuo.

Execução da imunoeletroforese

A solução de veneno era depositada no orifício central, com o auxílio

de tubo capilar de vidro, observando-se os cuidados necessários para que

não transbordasse. Era depositado um volume de, aproximadamente,

0,015 ml de solução. Em seguida, a lâmina era colocada na cuba que

continha uma solução tampão de veronal acetato com pH 8,6 e força

iônica 0,1, com a sua numeração voltada para o polo negativo; era então,

acionada a fonte elétrica, regulada em 15 mA por lâmina, pelo período

de uma hora.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARRCEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, S8 : 13-30, 1974.

Após a corrida eletroforética de veneno, as lâminas eram retiradas

da cuba e tinham as suas fendas laterais preenchidas pelo antiveneno,

com o auxílio de seringa hipodérmica de 1,0 ml de capacidade, equipada

com agulha de pequeno calibre. Era depositado um volume de 0,1 ml.

Em seguida, as lâminas eram colocadas em câmaras umedecidas com

solução de sulfato de cobre a 1%, pelo período de 48 horas, e a seguir

lavadas por três dias, imersas em cubas com solução fisiológica que era

renovada duas vezes ao dia. Após este período, eram envolvidas em

papel de filtro umedecido em água destilada e colocadas na estufa a 60°C,

até completar a secagem do papel. Esta operação era repetida mais uma

vez. Eram então lavadas em água corrente e novamente submetidas a

60°C na estufa, até a secagem do ágar. Após o resfriamento, eram

coradas pelo Amido Schwarz 10 B a 4% em ácido acétido durante 10

minutos. Seguia-se a descoloração pelo ácido acético a 5% e subseqüente

lavagem em água corrente e secagem à temperatura ambiente.

Também neste caso, a leitura das lâminas foi realizada com o auxílio

do Imunoscópio de Projeção Zeiss, da mesma forma como procedido para

as lâminas de dupla difusão em gel de ágar.

RESULTADOS

Análise comparativa entre o número de linhas de precipitação obtidas

na dupla difusão em gel de ágar e o número de linhas obtidas na

imunoeletroforese, entre os venenos e os respectivos antivenenos especí¬

ficos “in natura”.

Como os antivenenos obtidos “in natura” apresentaram títulos de

anticorpos diferentes (tabela I) decidimos nivelar a concentração de

título de anticorpos para cada antiveneno específico. Assim sendo, di¬

luímos, quando necessário o antiveneno para 2 mg/ml (1,0 ml de anti¬

veneno neutralizando 2 mg de veneno). Com estes antivenenos realizamos

vários ensaios preliminares, colocando-os frente à concentrações variáveis

de veneno (0,5%, 1%, 2% e 4%), tanto para a dupla difusão em gel

de ágar como para a imunoeletroforese. Quanto ao primeiro método

pudemos verificar que a concentração a 0,5% dos venenos, não permitia

exteriorizar com nitidez algumas das linhas de precipitação por falta

da intensidade na coloração. As concentrações superiores a 1% não

mostravam vantagem alguma quanto ao número de linhas obtidas e, pelo

contrário, dificultavam a leitura visto que coravam muito intensamente

tendo o corante se difundido entre uma linha e outra. A mencionada

concentração de 1% dos venenos, além de evidenciar maior número de

linhas de precipitação, facilitava a leitura, sendo por essa razão escolhida

para a metodologia em questão. Quanto a imunoeletroforese, fenômenos

semelhantes foram observados; a concentração de 0,5% não permitia

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

evidenciar com nitidez todas as linhas de precipitação, resultando na

obtenção de um número menor de linhas que nas concentrações maiores.

As lâminas correspondentes às concentrações de veneno de 2% e 4%,

após sua coloração, ficaram coradas em excesso e com difusão do corante

entre as linhas, apesar da lavagem prolongada. Além disso, essas con¬

centrações fizeram com que a migração do veneno, nas nossas condições

de trabalho, fosse mais lenta, resultando em acúmulo de linhas em deter¬

minada zona da lâmina, o que dificultava em muito a leitura. Adotamos

a concentração de 1%, pois, foi aquela que permitiu uma nítida separação

das linhas e conseqüentemente uma visualização mais completa do seu

número.

A tabela II decalcada das figuras 1 a 12 apresenta o número de

linhas de precipitação obtidas com cada veneno e seu respectivo anti-

veneno “in natura” através das duas técnicas por nós utilizadas.

TABELA II

COMPARAÇÃO DO NÚMERO DE LINHAS DE PRECIPITAÇÃO OBTIDAS NAS

REAÇÕES DE DUPLA DIFUSÃO E IMUNOELETROFORESE EM GEL DE ÁGAR

(SOLUÇÕES DE VENENOS A 1% E ANTIVENENOS ESPECÍFICOS

“IN NATURA” NEUTRALIZANDO 2 MG/ML)

Solução de Veneno

N.° de linhas obtidas

na dupla difusão em

gel de ágar

N.° de linhas obtidas

na imunoeletroforese

B. jararaca

B. alternatus

B. insula ris

B. jararacussu

B. moojeni

B. cotiara

As figuras 1 a 12 ilustram os resultados consubstanciados pela

tabela II.

Fig. 1 — LAMINA N.° C-28. Dupla difusão em gel de ágar, entre

a solução de veneno de B. jararaca a 1% e o antiveneno específico

“in natura”.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

Fig. 2 — LÂMINA N.° C-86. Dupla difusão em gel de ágar, entre

a solução de veneno de B. alternatus a 1% e o antiveneno específico

“in natura”.

Fig. 3 — LAMINA N.° C-59. Dupla difusão em gel de ágar, entre

a solução de veneno de B. insularis a 1% e o antiveneno específico

“in natura”.

<w>

Fig. 4 — LÂMINA N.° C-92. Dupla difusão em gel de ágar, entre

a solução de veneno B. jararacussu a 1% e o antiveneno específico

“in natura”.

c\J

Fig. 5 — LÂMINA N.° C-22. Dupla difusão em gel de ágar, entre

a solução de veneno de B. moojeni a 1% e o antiveneno específico

“in natura”.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M„ ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

Fig. 6 — LÂMINA N.° C-21. Dupla difusão em gel de ágar, entre

a solução de veneno de B. cotiara a 1% e o antiveneno específico

“in natura”.

Fig. 7 — LÂMINA N.° C-65. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. jararaca a 1% e o antiveneno específico “in natura”.

Fig. 8 — LÂMINA N.° C-62. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. alternatua a 1% e o antiveneno específico “in

natura”.

Fig. 9 — LÂMINA N.° C-80. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. insularia a 1% e o antiveneno específico “in natura”.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

Fig. 10 — LÂMINA N.° C-70. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. jararacussu a 1% e o antiveneno específico “in

natura”.

Fig. 11 — LÂMINA N.° A-13. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. moojeni a 1% e o antiveneno específico '‘in natura”.

Fig. 12 — LÂMINA N.° A-48. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. cotiara a 1% e o antiveneno específco “in natura”.

Do exposto parece não haver dúvidas de que, submetendo-se o veneno

à corrida eletroforética e, em seguida, realizando a imunodifusão com o

antiveneno “in natura”, obtém-se sempre um número maior de linhas de

precipitação, quando se comparam esses resultados com o número de

linhas obtidas na reação de dupla difusão em gel de ágar.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 88: 13-30, 1974.

ANÁLISE COMPARATIVA ENTRE O NÚMERO DE LINHAS DE

PRECIPITAÇÃO OBTIDAS NA DUPLA DIFUSÃO EM GEL DE ÁGAR

E O NÚMERO DE LINHAS OBTIDAS NA IMUNOELETROFORESE,

ENTRE OS VENENOS E OS RESPECTIVOS ANTIVENENOS

ESPECÍFICOS PURIFICADOS

Como os antivenenos purificados apresentaram, em geral, elevado

título de anticorpos (tabela I), decidimos trabalhar reduzindo as con¬

centrações a um mesmo título, limitado pelo menor obtido, isto é, 4 mg/ml

(1,0 ml de antiveneno neutralizando 4 mg de veneno). Para essa con¬

centração de anticorpos testamos várias concentrações do veneno, con¬

forme o especificado na primeira parte deste capítulo. As experiências

prévias vieram demonstrar que nestas condições de trabalho, era prefe¬

rível usarmos concentração de veneno a 2%, tanto para a reação de

dupla difusão em gel de ágar, como para a reação de imunoeletroforese.

A tabela III decalcada das figuras 13 a 24, apresenta o número de

linhas de precipitação obtidas em cada veneno e seu respectivo antiveneno,

através das duas técnicas por nós utilizadas.

TABELA III

Comparação do nmero de linhas de precipitação obtidas nas reações de dupla difusão e

imunoeletroforese em gel de ágar (solução de veneno a 2% e antivenenos específicos purificados,

neutralizando cada um U mg/ml).

Solução de veneno

N.° de linhas obtidas

na dupla difusão em

gel de ágar

N.° de linhas obtidas

na imunoeletroforese

B. jararaca

B. alternatus

B. insularÍ8

B. jararacussu

B. moojeni

B. co tiara

As figuras 13 a 24 ilustram os resultados consubstanciados pela

tabela III.

Fig. 13 — LÂMINA N.° D-72. Dupla difusão em gel de ágar,

entre a solução de veneno de B. jararaca a 2% e o antiveneno

específico purificado.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. In.8t. Butantan, 88: 13-30, 1974.

Fig. 14 — LÂMINA N.° C-l. Dupla difusão em gel de ágar,

entre a solução de veneno de B. altematus a 2% e o antiveneno

específico purificado.

Fig. 15 — LÂMINA N.° C-3. Dupla difusão em gel de ágar,

entre a solução de veneno de B. insularia a 2% e o antiveneno

específico purificado.

m ■

Fig. 16 — LÂMINA N.° C-20. Dupla difusão em gel de ágar,

entre a solução dé veneno de B. jamracussu a 2% e o antiveneno

específico purificado.

Fig. 17 — LÂMINA N.° C-52. Dupla difusão em gel de ágar,

entre a solução de veneno de B. moojeni a 2% e o antiveneno

específico purificado.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M„ ZELANTE, F„ FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

Fig. 18 — LÂMINA N.° C-37. Dupla difuão em gel de ágar,

entre a solução de veneno de B. cotiara a 2% e o antiveneno

específico purificado.

Fig. 19 — LÂMINA N.° C-66. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. jararaca a 2% e o antiveneno específico purificado.

Fig. 20 — LÂMINA N.° C-76. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. alternatus a 2% e o antiveneno específico purificado.

Fig. 21 — LÂMINA N.° C-69. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. insularia a 2% e o antiveneno específico purificado.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLAEROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

Fig. 22 — LÂMINA N.° C-73. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. jararacussu a 2% e o antiveneno específico purificado.

Fig. 23 — 1 LAMINA N.° C-85. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. moojeni a 2% e o antiveneno específico purificado.

Fig. 24 — LÂMINA N.° F-19. Imunoeletroforese entre a solução de

veneno de B. cotiara a 2% e o antiveneno específico purificado.

Os resultados expostos demonstram mais uma vez que submetendo-se

o veneno à corrida eletroforética e em seguida realizando a ímunodifusão

com o antiveneno purificado, obtém-se sempre um número maior de

linhas de precipitação, quando se comparam esses resultados com o

número de linhas obtidas na reação de dupla difusão em gel de ágar.

Por outro lado, comparando os resultados das tabelas II e III veri¬

fica-se que os antivenenos purificados, provavelmente por estarem mais

concentrados, exteriorizam de um modo geral, através das duas técnicas

empregadas, sempre um aumento do número de linhas de precipitação.

í, i SciELO

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. In8t. Butantan, 38: 13-30, 1974.

DISCUSSÃO

Análise comparativa entre o número de linhas de precipitação obtidas

na dupla difusão em gel de ágar e o número de linhas obtidas na

imunoeletroforese, entre os venenos e os respectivos antivenenos especí¬

ficos “in natura” e também com os antivenenos purificados.

A execução dos modelos experimentais para as reações de dupla

difusão e imunoeletroforese em gel de ágar, foram precedidas pelo do¬

seamento “in vivo” através do método de Vital Brazil, cujos títulos estão

apresentados na tabela I, no capítulo “Material e Métodos”. A análise

da tabela II nos demonstra que as reações entre o veneno e o respectivo

antiveneno específico, apresentam sempre um número maior de linhas de

precipitação na imunoeletroforese, do que na dupla difusão em gel de

ágar; assim por exemplo, a reação entre o veneno e o respectivo anti¬

veneno de B. jararaca, resulta em nove linhas de precipitação pela reação

de dupla difusão em gel de ágar e de 16 linhas de precipitação na de

imunoeletroforese. Esta melhor caracterização e melhor separação das

linhas, observadas através da imunoeletroforese, se confirma para as

demais reações por nós realizadas. De uma forma constante, a imuno¬

eletroforese sempre condicionou a uma melhor separação dos componen¬

tes antigênicos e a uma melhor visualização das linhas de precipitação.

Os antivenenos purificados, também foram submetidos às reações de

dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar. A análise da tabela

III mostra os resultados obtidos. Mais uma vez se verifica que a imu¬

noeletroforese é uma técnica que revela sempre maior número de linhaç

de precipitação, do que a dupla difusão em gel de ágar. Por outro lado,

a comparação dos resultados constantes das tabelas II e III, referentes

ao comportamento dos antivenenos “in natura” e antivenenos purificados,

demonstra de uma forma uniforme, que as reações com os antivenenos

purificados, apresentam um aumento do número de linhas de precipitação,

quer na reação de dupla difusão em gel, quer na imunoeletroforese. Evi¬

dentemente os soros purificados, sendo mais concentrados em anticorpos,

permitem revelar maior número de linhas de precipitação do que os

soros “in natura”, onde alguns anticorpos não atingem uma concentração

suficiente para exteriorizar o fenômeno de precipitação, quando frente

ao antígeno.

A comparação dos resultados das provas realizadas com antivenenos

“in natura” e purificados, foi feito com o objetivo de verificar se estes

não teriam perdido alguns anticorpos, visto que a purificação e concen¬

tração pelo método de Pope, controlados pela eletroforese, apresentam

somente uma banda, correspondente à fração gama globulínica. Os resul¬

tados obtidos nesta comparação, nos permitem crer que os anticorpos

antivenenos estão concentrados totalmente na zona eletroforética que

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F., FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. In8t. Butantan, 38: 13-30, 1974.

engloba as várias globulinas localizadas na região gama da eletroforese,

visto que, sistematicamente foi obtido maior número de linhas de preci¬

pitação com os soros purificados.

CONCLUSÕES

1 .

2 .

A aplicação de micrométodos nas técnicas de dupla difusão e

imunoeletroforese em gel de ágar, permitiram separar satisfa¬

toriamente os componentes antigênicos das seis espécies de vene¬

nos estudados;

a utilização da técnica de imunoeletroforese em gel de ágar para

a análise dos componentes antigênicos de venenos ofídicos, pro¬

porcionou a evidenciação de maior número de frações, do que

quando feita através da dupla difusão em gel de ágar;

os antivenenos purificados pelo método de Pope, modificado

por Furlanetto (1961), quando submetidos às duas técnicas

aplicadas (dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar),

evidenciaram um maior número de componentes antigênicos do

que os antivenenos “in natura”.

SUMMARY — The authors analysed com-

paratively the antigenic components of 6

types of bothropic venoms, crude and pu-

rified, by the micromethods of Ouchter-

lony, and of Grabar and Williams.

They came to the conclusion that the

applied methodology, mainly immunoelec-

trophoresis, allowed the achievement of

satisfactory results as for the antigenic

component separation. Purified antivenoms

granted better results for antigenic com¬

ponent characterization than crude anti-

venòms.

UNITERMS — Bothrops venoms; double

diffusion in agar-gel of Bothrops venom;

immunoelectrophoresis of Bothrops venom.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

BOUQUET, P.; DETRAIT, J. & FARZAPAY, R. — Recherches biochimiques e immuno-

logiques sur le venin des serpents. Ann. Inst. Pasteur, 116 (4): 521-542, 1969.

FARMACOPEIA DOS ESTADOS UNIDOS DO BRASIL. 2. a ed. Rio de Janeiro, Minis¬

tério da Saúde, 1959, p. 471.

FERRI, R. G. — Natureza dos anticorpos nas diversas fases de imunização e proprie¬

dades dos fragmentos mono e bivalentes. São Paulo, 1967. p. 43-45 (Tese Faculdade

de Medicina da Universidade de São Paulo).

FERRI, R. G. — Curso de eletroforese, imunoeletroforese e Imunodifusão. São Paulo

Departamento de Microbiologia e Imunologia da Faculdade de Medicina da Universi¬

dade de São Paulo, 1968. (Apostila),

FERRI, R. G. & COSSERMELLI, W. — Analyse immuno-eletrophorétique. Micro et

macro méthodes. Rev. franç. Êtud. clin. biol., 9: 134-138, 1964.

FURLANETTO, R. S. — Estudo sobre a preparação do soro antiloxoscélico. São Paulo,

1961. p. 64-65 (Tese — Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo).

FURLANETTO, R. S. Emprego de camundongos tratados com dose preparatória de

venenos bothrópicos para a avaliação de DL50 desses venenos. São Paulo, 1965. p. 8-9.

(Tese — Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., ZELANTE, F„ FURLANETTO, R. S. & ROHM ROSA, R. —

Contribuição ao estudo imunoquimico de venenos botrópicos. I — Análise comparativa dos

componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos antivenenos,

através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em gel de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

8 .

10 .

11 .

12 .

13.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

20 .

21 .

22.

23.

24.

26.

27.

GONÇALVES, J. M. — Estudos sobre crotamina — Ribeirão Preto, 1961. p. 7-9. (Tese

— Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo).

GRASSET, E.; BRECHBUHLER, T.; SCHWARTZ, D. E. & PONGRATZ, E. — Compa-

rative analysis and electrophoretic fractionations of snake venoms with special refe-

rence to Vipera russelli and Vipera aspis venoms. In: BUCKLEY, E. E. & PORGES,

N., eds. Venoms. Washington, 1956a. p. 153-169. (American Association for the Ad-

vancement of Science. Publication n.° 44).

GRASSET, E.; PONGRATZ, E. & BRECHBUHLER, T. — Analyse immunochimique des

constituants des venins de serpents par la méthode de précipitation en milieu gélifié.

Ann. Inst. Pasteur, 91: 162-186, 1956b.

GRABAR, P. & WILLIAMS, C. A., JR. — Méthode permettant 1'étude conjugée des pro-

priétes électrophorétiques et ímmunochimiques d'un mélange de protéines. Application

au sérum sanguin. Biochim, biophys. Acta (Amst), 10: 193-194, 1953.

GRABAR, P. & WILLIAMS, C. A., JR. — Méthode immunoélectrophorétique d'analyse

de mélanges de substances antigéniques. Biochim. biophys. Acta (Amst), 17: 67-74,

1956.

JOUANNET, M. — L’analyse immunoélectrophorétique appliquée aux venin de serpents.

Toxicon 5: 191-199, 1968.

OUCHTERLONY, O. — In vitro method for testing the toxin producing capacity of

diphtheria bactéria. Acta path. microbiol. scand., 25: 186-189, 1948.

OUCHTERLONY, O. — Antigen-antibody reactions in gels. Acta path. microbiol. scand.,

26: 607-515, 1949.

POPE, C. G. — Disagregation of protcins by enzimes. Brit. J. exp. Path., 19: 245-261,

1938.

POPE, C. G. — The action of proteolytic enzymes of the antitoxins and proteins in

immune sera. II. Heat Denaturation after partial enzyme action. Brit. J. exp. Path.,

20: 201-212, 1939.

RASCOVSKY, S. & SCAVINI, L. M. — Estúdio de la antigenicidad de los venenos ofí-

dicos. An Soc. cient. argent. 178 : 51-58, 1964.

ROSENFELD, G.; KELEN, E. M. A. & NUDEL, F. — - Neutralização cruzada do poder

coagulante de venenos ofídicos com soros antivenenos. Ciência e cultura, U: 264-255,

1962.

SCAVINI, L. M. & FERRARESI, R. W. — Capacidad de protección y coincidências anti-

génicas de sueros antiofídicos. An. Soc. cient. argent., 17i: 87-99, 1962.

SCHENBERG, S. — Estudo comparativo da composição do veneno de Bothrops neuwiedii

em placas de Cuchterlony. Ciência e Cultura, 10: 163-164, 1958.

SCHENBERG, S. Análise imunológica (micro-difusão em gel) de venenos individuais

de Bothrops jararaca. Ciência e Cultura, 13: 225-230, 1961.

SCHENBERG, S. — Immunological (Ouchterlony method) Identification of intrasubs-

pecies qualitative differences in snake venom composition. Toxicon, 1: 67-75, 1963.

SILES VILLARROEL, M. — Contribuição ao estudo de venenos de serpentes do Gênero

Bothrops ( B. jararaca, B. alternatus, B. insularia, B. jararacussu, B. atrox e B. co-

tiara). São Paulo, 1972 (Tese — Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade

de São Paulo).

SILES VILLARROEL, M.; ROLIM ROSA, R.; FURLANETTO, R. S. & ZELANTE, F.

Estudo eletrofético em “Cellogel" de venenos do gênero Bothrops. Mem. Inst. Butan¬

tan, 37: 83-90, 1973.

SIMON, J.; BRISBOIS, L. & GILLO, L. — Fractionation of cobra venom by electro-

focusing. J. Chromatog., 44: 209-211, 1969.

URIEL, J.; SANTINA, D. M. & RIZZO, E. — Caracterisation d’enzimes dans le venin de

Bothrops jararaca para les méthodes d’immunodiffusion. Buli. Soc. Chim. biol. (Paris)

50: 938-940, 1968.

Recebido para publicação em 15-V-1974 e aceito em 15-X-1974.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

38: 31-40, 1974

CONTRIBUIÇÃO AO ESTUDO IMUNOQUÍMICO DE VENENOS

BOTRÓPICOS

II. Análise comparativa dos componentes antigênicos comuns de seis

espécies de venenos botrópicos.

MEDARDO SILES VILLARROEL*

REYNALDO SCHWINDT FURLANETTO**

RAYMUNDO ROLIM ROSA***

FLÁVIO ZELANTE**** •••••

JOSÉ NAVAS»**»*

RESUMO — Através de reações cruzadas,

com o emprego de antivenenos específicos

purificados e de técnicas de imunoeletro-

forese e de dupla difusão em gel de ágar,

os autores verificaram a existência de

componentes antigênicos comuns em venenos

de seis espécies de serpentes do gênero

Bothrop8. Concluem, baseados nos resul¬

tados obtidos com a aplicação das duas

técnicas, ser o veneno da espécie B. alter -

natus aquele que mais se aproxima anti-

genicamente ao veneno de B. jararaca; por

outro lado, o veneno de B. jararacussu é

aquele que mais se distancia.

UN1TERMOS — Venenos botrópicos; imu-

noeletroforese e dupla difusão em gel de

ágar de venenos botrópicos; componentes

antigênicos comuns em venenos botrópicos.

INTRODUÇÃO

Em trabalho anterior (Siles Villarroel e col. 1974), com a utili¬

zação de duas técnicas imunoquímicas, verificaram os componentes anti¬

gênicos de seis venenos botrópicos, utilizando antivenenos específicos, “in

natura” e purificados, estabelecendo ainda, uma comparação entre os

resultados obtidos com a aplicação das duas metodologias.

Uma revisão dos trabalhos publicados revela que poucos pesquisa¬

dores se preocuparam com o estudo de componentes antigênicos de vene¬

nos ofídicos, principalmente dos venenos de serpentes do gênero

Bothrops. Mesmo dentre aqueles que estudaram esses venenos, a maioria

se preocupou em verificar a existência de componentes comuns, através

de reações de neutralização “in vivo” ou então, mais raramente, “in

vitro”. Rosenfeld e col. (1962), verificaram que o antiveneno de B. cotiara

teria a capacidade de neutralizar “in vitro” a atividade coagulante dos

venenos das demais serpentes do gênero Bothrops, sem necessariamente

neutralizar outras atividades tóxicas. Inexistem na literatura pertinente,

* Ex-assistente da Seção de Imunologia do Instituto Butantan e Pro essor Assistente Doutor do

Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da U.S.P.

Atual Diretor do Instituto de Ciências Biomédicas da U.S.P. e ProTessor Catedrático do Depar¬

tamento de Microbiologia e Imunologia do mesmo Instituto.

Diretor do Serviço de Imunologia do Instituto Butantan e Professor Assistente Doutor do

Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da U.S.P.

Professor Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de

Ciências Biomédicas da U.S.P.

••••• Chefe do Setor de Imunização do Instituto Butantan.

Endereço para correspondência:

C.P. 4365 — São Paulo, Brasil.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., FURLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., ZELANTE, F. & NAVAS,

J. — Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. II — Análise comparativa

dos componentes antigênicos comuns de seis espécies de venenos.

Mew. Inst. Bntantan, 38: 31-40, 1974

trabalhos que revelem a existência de componentes antigênicos comuns,

em venenos de serpentes, através da aplicação das técnicas imunoquí-

micas, isto é, a imunoeletroforese e a dupla difusão em gel de ágar.

Bouquet e col. (1969) quer nos parecer serem os únicos que aplicaram

as duas metodologias no estudo do veneno de N. nigricollis. Verificaram

que o componente a toxina está presente em outros venenos de serpentes

do mesmo gênero e, mais raramente, nos venenos de outros gêneros mais

distantes.

Baseados nestes aspectos, nos propusemos agora, utilizando da

mesma metodologia aplicada em trabalho anterior (Siles Villarroel e

col., 1974), verificar a presença de componentes antigênicos comuns em

seis venenos de serpentes do gênero Bothrops, através do emprego de

antivenenos purificados pelo método de Pope modificado por Furlanetto

(1961) visto que tal tratamento do soro hiperimune mostrou-se superior

para os fins colimados.

MATERIAL E MÉTODOS

Para o desenvolvimento do presente trabalho, utilizamo-nos do mesmo

material e dos mesmos métodos já descritos anteriormente (Siles Villar¬

roel e col., 1974). Acreditamos útil destacar que:

1. foram utilizadas soluções a 2% dos seguintes venenos: B. jara¬

raca, B. alternatus, B. insularis, B. jararacussu, B. moojeni e

B. cotiara;

2. foram utilizados os respectivos antivenenos específicos purifi¬

cados, em que 1,0 ml neutralizava 4 mg de veneno;

3. quando da utilização da imunoeletroforese, padronizamos a colo¬

cação da solução de veneno no orifício central num volume de,

aproximadamente, 0,015 ml, o antiveneno específico na fenda

superior e, o antiveneno não específico, na fenda inferior, ambos

num volume de 0,1 ml;

4. quando da utilização da dupla difusão em gel de ágar, padro¬

nizamos em todas as reações, a colocação do antiveneno na per¬

furação inferior; no orifício superior esquerdo colocamos a

solução do veneno específico e no orifício superior direito a

solução do veneno não especifico. As soluções de veneno e os

antivenenos, foram depositadas num volume de 0,02 ml.

RESULTADOS

Análise imunoeletroforética dos componentes antigênicos comuns ao

veneno de B. jararaca e aos demais venenos botrópicos reveláveis através

seus respectivos antivenenos purificados.

Com o intuito de analisarmos os componentes antigênicos comuns

aos vários venenos botrópicos tomamos por base o veneno de B. jararaca,

1, | SciELO

SILES VILLARROEL, M., FURLANETTO, R. S„ ROLIM ROSA, R., ZELANTE, F. & NAVAS,

J. — Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. II — Análise comparativa

dos componentes antigênicos comuns de seis espécies de venenos.

Mem. lnst. Butantan, 38: 31-40, 1974.

visto ser esta espécie a mais estudada e a mais freqüente entre nós.

Decidimos então realizar a corrida eletroforética do veneno de B. jara¬

raca, e em seguida submetê-lo à dupla difusão, aplicando à fenda supe¬

rior, o antiveneno específico purificado e na fenda inferior outro anti-

veneno purificado, porém não específico da espécie. Tal modelo expe¬

rimental foi escolhido em face da possibilidade de que as linhas de pre¬

cipitação formadas, pudessem nos levar à uma análise de identidades

antigênicas. Isso seria talvez possível, se os arcos formados, por sua

curvatura, localização e extensão, pudessem caracterizar identidades

totais, ou então pudessem indicar possíveis identidades parciais.

A tabela I resume os resultados encontrados e foi delineada das

figuras 1 a 5.

TABELA I

Resultados das reações de imunoeletroforese em gel de ágar, entre a solução de veneno de

B. jararaca a 2% frente ao antiveneno específico na fenda superior e outros antivenenos

inespecíficos à espécie, na fenda inferior (antivenenos purificados neutralizando sempre

4 mg/ml).

Lâminas

demonstrativas

N.° de linhas

obtidas frente

ao antiveneno

específico

N.° de linhas obtidas

frente aos antivene¬

nos de:

Identidades

possível

identidade

total

antigênicas

possível

identidade

parcial

D-76

B. alternatus

D-45

D. insularia

D-52

B. jararacussu

D-6

B. moojeni

D-83

B. cotiara

As figuras 1 a 5 ilustram os resultados consubstanciados pela tabela I.

Fig. 1 — LÂMINA N.° D-76. Imunoeletroforese entre a solução

de veneno de B. jararaca a 2% e o antiveneno específico purificado

na fenda superior e o antiveneno purificado de B. alternatus na

fenda inferior.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

S1LES VILLAREOEL, M., FURLANETTO, R. S„ ROLIM ROSA, R., ZELANTE, P. & NAVAS,

J. ■— Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. II — Análise comparativa

dos componentes antigênicos comuns de seis espécies de venenos.

Mem. Inst. Butantan, 38: 31-40, 1974.

- 1

Fig. 5 — LÂMINA N.° D-83. Imunoeletroforese entre a solução

de veneno de B. jararaca a 2% e o antiveneno específico purificado

na fenda superior e o antiveneno purificado de B. cotiara na

fenda inferior.

É bom relembrar que o objetivo do emprego deste modelo experi¬

mental, foi o de estudar os componentes antigênicos comuns com identi¬

dade total ou parcial. Realmente a tabela I mostra que foi possível

com certa segurança analisar as identidades pretendidas. Quando os

arcos tinham uma evidente tendência a se fecharem (em alguns casos

foi obtido o fechamento completo), ou ainda, por sua localização e

extensão, nestes casos considerávamos identidade total. Quando as linhas

de precipitação não apresentavam exatamente estas características con¬

siderávamos como possível identidade parcial. Tal critério de avaliação

é que permitiu a confecção da mencionada tabela I.

Análise dos componentes antigênicos comuns entre o antiveneno de

B. jararaca e os vários venenos botrópicos em estudo, através da dupla

difusão em gel de ágar

Tal metodologia permitiu comparar através do antiveneno de B.

jararaca, os componentes antigênicos comuns dos demais venenos.

A tabela II resume os resultados encontrados e foi delineada das

figuras 6 a 10.

TABELA II

Resultados das reações de dupla difusão em gel de ágar, entre o antiveneno de B. jararaca

purificado neutralizando 4 mg/ml e os vários venenos de Bothrops a 2%.

Lâminas

demons¬

trativas

Venenos compa¬

rados frente ao

antiveneno de

B. jararaca

N.° de linhas

obtidas na

reação espe¬

cífica contra

o veneno de

B. jararaca

N.° de linhas

obtidas

frente ao

outro

veneno

Identidades

antigênicas

Identidade

total

Identidade

parcial

C-57

B. alternatu8

D-4

B. Í7i8ularÍ8

D-54

B. jararacussu

C-75

B. moojeni

C-77

B. cotiara

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SILES VILLARROEL, M., FURLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., ZELANTE, F. & NAVAS,

J. — Contribuição ao estudo imuniquímico de venenos botrópicos. II — Análise comparativa

dos componentes antigênicos comuns de seis espécies de venenos.

Mem. Inst. Butantan, 38: 31-40, 1974.

lr>

Fig. 6 — LÂMINA N.° C-57. Dupla difusão em gel de ágar entre o

antiveneno de B. jararaca purificado, frente aos venenos de B. jara¬

raca e B. alternatus em solução a 2%.

Fig. 7 — LÂMINA N.° D-4. Dupla difusão em gel de ágar entre o

antiveneno de B. jararaca purificado, frente aos venenos de B.

jararaca e B. insularia em solução a 2%.

Fig. 8 — LÂMINA N.° D-54. Dupla difusão em gel de ágar entre

o antiveneno de B. jararaca purificado, frente aos venenos de

B. jararaca e B. jaracussu em solução a 2%.

Fig. 9 — LÂMINA N.° C-75. Dupla difusão em gel de ágar entre

o antiveneno de B. jararaca purificado, frente aos venenos de B.

jararaca e B. moojeni em solução a 2%.

SILES VILLARROEL, M., FURLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., ZELANTE, F. & NAVAS,

J. — Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. II — Análise comparativa

dos componentes antigênicos comuns de seis espécies de venenos.

Mem. Inst. Butantan, 38: 31-40, 1974.

Fig. 10 — LÂMINA N.° C-77. Dupla difusão em gel de ágar entre

o antiveneno de B. jararaca purificado, frente aos venenos de

B. jararaca e B. cotiara em solução a 2%.

Os resultados resumidos nas tabelas I e II mostram que a técnica

de Ouchterlony, revela sempre menor número de linhas de precipitação

do que a técnica de imunoeletroforese do veneno, confirmando as nossas

observações anteriores (Siles Villarroel e col., 1974). Obviamente o nú¬

mero de linhas com identidade é também menor.

DISCUSSÃO

A análise da tabela I corresponde ao estudo comparativo dos resul¬

tados das reações de imunoeletroforese em gel de ágar entre o veneno de

B. jararaca e os antivenenos, específico e não específico. A técnica por

nós utilizada permite caracterizar um maior número de componentes

antigênicos dos venenos. Tal fato deveria também mostrar um número

maior de componentes antigênicos comuns aos outros venenos, detectá-

veis através dos respectivos antivenenos. Assim sendo, poderíamos

também analisar as possíveis identidades totais e parciais.

Ainda, os dados constantes na tabela I já referida, demonstram que

os venenos de B. alternatus, B. insularis, B. cotiara e B. moojeni, repre¬

sentados por seus antivenenos, são os que apresentam maior número de

componentes antigênicos em comum, com o veneno de B. jararaca. Nessa

ordem de idéias, o veneno de B. jararacussu, seria aquele que possui um

menor número de componentes antigênicos em comum com o veneno de

B. jararaca.

Acreditamos, baseados nos dados da literatura, ter sido esta, a pri¬

meira vez que foi utilizado tal modelo experimental no estudo dos vene¬

nos ofídios, principalmente em espécies do gênero Bothrops.

A técnica de dupla difusão em gel de ágar, foi desenvolvida com a

finalidade de compararmos os seus resultados, com aqueles obtidos pela

imunoeletroforese. A técnica de Ouchterlony já realizada nos trabalhos

anteriores (Siles Villarroel, 1972 e Siles Villarroel e col., 1974), demons¬

traram que se obtém sempre um número menor de linhas de precipita¬

ção, quando estas são comparadas com o número de linhas obtidas pela

técnica de imunoeletroforese. No entanto, a dupla difusão em gel de

I, | SciELO

SILES VILLARROEL, M., FURLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., ZELANTE, F. & NAVAS,

J. — Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. II — Análise comparativa

dos componentes antigênicos comuns de seis espécies de venenos.

Mem. In8t. Butantan, 38: 31-40, 1974.

ágar, tem sido o método clássico utilizado para o estudo dos componentes

antigênicos comuns, assim como para o estudo das identidades antigê-

nicas dos componentes, quer seja total, parcial ou de falta de identidade.

Acreditamos pois, ser imperativa, a análise comparativa destes resul¬

tados, com os da imunoeletroforese.

A tabela II, que corresponde aos resultados das reações de dupla difu¬

são em gel de ágar, entre o antiveneno de B. jararaca e o veneno específi¬

co, comparativamente com os outros venenos estudados, demonstra que os

venenos de B. alternatus, B. moojeni, B. insulares e B. cotiara, são os

que apresentam maior número de componentes antigênicos em comum

com o veneno de B. jararaca, ao passo que, o veneno de B. jararacussu

é o que possui menor número de componentes antigênicos em comum

com o veneno de B. jararaca.

A análise comparativa dos resultados constantes nas tabelas I e II,

demonstra que realmente os quatro venenos já assinalados anterior¬

mente, são aqueles que mais se aproximam antigenicamente do veneno

de B. jararaca, e que o veneno de B. jararacussu, é aquele que mais se

distancia.

O fato do veneno de B. moojeni aparecer na imunodifusão como

próximo ao de B. jararaca, o que não é confirmado pela imunoeletro¬

forese, pode ser interpretado através do fato de que o primeiro método

revela sempre menor número de linhas de precipitação, o que faz pressu¬

por que na técnica de Ouchterlony, haja sobreposição de algumas linhas

de precipitação o que dificultaria a diferenciação. Este fato provavel¬

mente ocorre com menor freqüência na técnica de Grabar & Williams,

em virtude da prévia corrida eletroforética do veneno, o que permite

melhor separação de seus componentes antigênicos.

CONCLUSÕES

Tomando-se por base os resultados da análise comparativa entre os

componentes antigênicos comuns das seis espécies de venenos botrópicos

estudados, permite concluir que:

1. A utilização da técnica de imunoeletroforese para a análise dos

componentes antigênicos comuns de venenos ofídicos, propor¬

ciona a evidenciação de maior número de frações comparáveis,

do que quando feita através da dupla difusão em gel de ágar.

2. A imunoeletroforese aplicada nas condições deste trabalho per¬

mitiu constatar ser o veneno de B. alternatus, aquele que mais

se aproxima do de B. jararaca, pois apresenta 15 componentes

antigênicos relacionados; por outro lado, o veneno de B. jara¬

racussu, com 12 componentes relacionados, é o que mais se

distancia de B. jararaca.

í, | SciELO

SILES VILLARROEL, M., FURLANETTO, R. S., ROLIM ROSA, R., ZELANTE, F. & NAVAS,

,T. — Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. II — Análise comparativa

dos componentes antigênicos comuns de seis espécies de venenos.

Mem. Inst. Butantan, 38: 31-40, 1974.

3. A dupla difusão em gel de ágar, embora evidenciando menor

número de componentes antigênicos, confirmou também ser o

veneno de B. alternatus, aquele que mais se aproxima do de

B. jararaca, apresentando por esta técnica somente nove com¬

ponentes relacionados; também por este método, o veneno de

B. jararacussu com sete componentes relacionados é o que mais

se distancia de B. jararaca.

SUMMARY — Through cross reactions

between 6 types of bothropic venoms and

their respective specific purified antive-

noms, the authors, with the aid of immu-

noelectrophoretic techniques, and double

agar-gel diffusion, verified the existence of

common antigenic components. Based on

the results obtained through both techni-

ques they conclude that the venom of the

species B. alternatus is antigenically the

closest to that of B. jararaca, whereas the

venom of B. jararacussu is the most

different.

VN1TERMS — Bothrops venoms; immu-

noelectrophoresis and double agar-gel diffu¬

sion of Bothrops venoms; common antige¬

nic components in Bothrops venoms.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1 BOUQUET, P.; DÉTRAIT, J. & FARZANPAY, R. — Recherches biochimiques et immuno-

lo^i(]ii 65 sur le venin des serpents. Ann . Inst . Pasteur, 116 (4). 521-542, 1969.

2. FURLANETTO, R. S. — Estudo sobre a preparação do soro antiloxoscélico. São Paulo,

1961. p. 64-65. [Tese-Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo].

3. ROSENFELD, G.; KELEN, E. M. A. & NUDEL, F. — Neutralização cruzada do poder

coagulante de venenos ofídicos com soros antivenenos. Ciência e Cultura, H: 254-255,

1962.

4. SILES VILLARROEL, M. — Contribuição ao estudo de venenos de serpentes do gênero

Bothrops ( B. jararaca, B. alternatus, B. insularás, B. jararacussu, B. atrox e B. cotiara).

São Paulo, 1972. [Tese — Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São

Paulo].

5. SILES VILLARROEL, M.; ZELANTE, F.; FURLANETTO, R. S. & ROLIM ROSA, R.

— Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos. I. Análise comparativa

dos componentes antigênicos de seis espécies de venenos frente a seus respectivos

antivenenos, através das técnicas de dupla difusão e imunoeletroforese em ge[ de ágar.

Mem. Inst. Butantan, 38: 13-30, 1974.

Recebido para publicação em 15-4-1974 e aceito para publicação em 16-X-1974.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

38: 41-60, 1974

ESTUDO MORFOLÓGICO E HISTOQUÍMICO DA GLANDULA DE

HARDER DE ALGUNS REPTÉIS BRASILEIROS. I. OPHIDEA.

RUBERVAL A. LOPES, CLEIDE DE OLIVEIRA, GERALDO M. CAMPOS

E JAIME M. DE BARROS

Departamento de Ciências Morfológicas e Patologia da Faculdade

de Farmácia e Odontologia de Ribeirão Preto

RESUMO — Os autores estudaram morfo¬

logicamente a glândula de Harder de al¬

gumas espécies de serpentes brasileiras e

histoquimicamente as mucossubstâncias e

algumas proteínas nessa glândula. Basea¬

dos nos resultados os autores concluiram

que a glândula de Harder de todas as es¬

pécies estudadas é formada de células mu-

cosserosas e que o produto de secreção des¬

sas células é constituído de um complexo

carboidrato-proteína e ácido siálico. Foi

constatada a presença de ácido hialurônico

nessas células.

UNITERMOS — Glândula de Harder de

serpentes. Histoquímica de mucossubstân¬

cias e proteínas. Determinação do tipo

celular.

INTRODUÇÃO

Meckel (1826) e Duvernoy (1832) descreveram, pela primeira vez,

a glândula de Harder em ofídios sob a denominação de glândula lacrimal.

Em 1873, Leydig descreveu-a como sendo a glândula da membrana nic-

tante; outra descrição da glândula foi a de Phisalix, em 1922; Smith e

Bellairs (1947) descreveram a glândula histologicamente, chamando a

atenção para o fato de somente parte da glândula localizar-se dentro da

cavidade orbitária (todos cit. em 13).

Bellairs e Boyd (2), num trabalho exaustivo em oito famílias de ser¬

pentes, descreveram detalhadamente as relações da glândula de Harder

e duetos com a membrana nictitante.

Estudos morfológicos e histoquímicos na glândula de Harder de

ofídios foram realizados por Barros et al. (1) em Eunectes murinus e

por Lopes et al. (7-8) em Micrurus coralinus e Bothrops jararaca.

O objetivo do presente trabalho é estudar a glândula de Harder de

alguns ofídios das famílias Boidae, Colubridae, Elapidae e Viperidae, iden¬

tificando o tipo celular aí existente, bem como detectar histoquimicamente,

por meio de técnicas adequadas, o produto de secreção dessa glândula.

Endereço para correspondência:

Ruberval A. Lopes

Departamento de Ciências Morfológicas e Patologia

Faculdade de Farmácia e Odontologia de Ribeirão Preto

14.100 - Ribeirão Preto - SP.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

LOPES, R. A., OLIVEIRA, C., M. CAMPOS, G. & BARROS, J. M. — Estudo morfológico o

histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Mem. Inat. Butantan. S8\ 41-50, 1974

MATERIAL E MÉTODOS

Utilizaram-se para este estudo, os seguintes ofídios adultos, machos e

fêmeas:

Família

Espécie

Boidae:

Constrictor constrictor

Eunectes murinus

Epicrates cenchria crassus

Colubridae:

Xenodon merremii

Elapidae:

Micrurus corallinus

Micrurus frontalis

Viperidae:

Bothrops jararaca

Bothrops altematus

Crotalus durÍ88Ímu8 terrificus.

Os animais foram sacrificados por decapitação, sendo logo dissecadas as

glândulas de Harder e imediatamente imersas em Alfac, durante 24 horas.

Após a fixação, as peças foram incluídas em parafina.

Para a observação morfológica da glândula de Harder dos ofídios,

foram utilizados os métodos da hematoxilina-eosina e tricrômico de

Masson.

Para a pesquisa histoquímica das mucossubstâncias e proteínas, usa¬

ram-se as recomendações técnicas de Pearse (10), a menos que citada

recomendação especial. Os métodos foram os seguintes: PAS (ácido

periódico-Schiff), azul de alcian aos pH = 2,5 e 0,5, azul de alcian -f PAS,

metacromasia aos pH = 3,4 — 2,2 — 1,7, segundo Lison (6). Como

controle, utilizaram-se os seguintes métodos: amilase salivar, acetilação,

metilação, metilação seguida de saponificação, ação da hialuronidase tes-

ticular e o teste de Quintarelli et al. (11). Para grupamento amino uti¬

lizou-se a técnica da aloxana-Schiff e, para aminoácidos, o método de

Chèvremont et al. (3).

Para a caracterização da célula secretora adotou-se o critério de

Gabe e St. Girons (4). Por esse método, classificaram-se quatro tipos

celulares: mucoso, mucosseroso, seromucoso e seroso. Os critérios para

essa classificação são fornecidos pela alcianofilia, positividade ao PAS e

presença de proteína histoquimicamente detectável.

RESULTADOS

Resultados morfológicos

Família Boidae — A glândula de Harder da cobra Constrictor cons-

trictor é relativamente grande, apresentando parte de sua estrutura fora

da cavidade orbitária. É uma glândula do tipo túbulo-acinosa composta

e está envolvida externamente por uma cápsula fina de tecido conjuntivo,

1, | SciELO

LOPES, R. A., OLIVEIRA, C., M. CAMPOS, G. & BARROS, J. M. — Estudo morfológico e

histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Alem. Inst. Butantan. 38: 41-50, 1974

a qual emite fibras colágenas delicadas que envolvem os ácinos. Os ácinos

são pequenos e constituídos por células prismáticas altas, com citoplasma

repleto de grânulos pequenos e acidófilos, e núcleo ovóide, de cromatina

densa, localizado na porção basal da célula (Fig. 1).

Essas células acinares lançam seu produto de secreção em duetos

pequenos, revestidos por epitélio simples, prismático, com citoplasma celu¬

lar ligeiramente basófilo; esses duetos vão se reunindo para formar duetos

maiores que, por sua vez, desembocam num dueto central grande, revestido

de células epiteliais altas e acidófilas.

A glândula de Harder da cobra Epicrates cenchria crassus é muito

semelhante à da Constrictor, apresentando, também, uma porção glandular

extra-orbitária. Os ácinos são bastante semelhantes, porém suas células

apresentam o núcleo com cromatina frouxa. O produto de secreção é

lançado em duetos pequenos, revestidos por epitélio simples, cubóide, que

vão se reunindo em duetos maiores, de células epiteliais prismáticas, e

finalmente esse produto vai ter ao dueto excretor maior, revestido por

epitélio plano estratificado (Fig. 2).

A glândula de Harder de Eunectes murinus é bem desenvolvida, sendo

que sua porção maior localiza-se fora da cavidade orbitária. Seu padrão

histológico é semelhante ao descrito para as duas espécies anteriores

(Fig. 3 e 4).

Família Colubridae — A glândula de Harder da cobra Xenodon

merremii divide-se em dois lobos distintos, unidos por uma fina ponte

glandular. O lobo extra-orbitário é recoberto por uma cápsula espessa

de tecido conjuntivo denso, ricamente vascularizado. Dessa cápsula par¬

tem fibras colágenas delicadas que irão envolver os ácinos glandulares.

O quadro histológico é bem semelhante ao das serpentes da família Boidae,

sendo essa glândula também túbulo-acinosa composta. Os ácinos são

pequenos e constituídos por células altas, de citoplasma contendo numerosos

grânulos acidófilos, com núcleo ovóide e de cromatina densa, localizado

na região basal.

O produto de secreção é lançado em duetos, de um modo semelhante

ao das serpentes da família Boidae.

O lobo intra-orbitário é idêntico ao extra-orbitário.

Família Elapidae — A glândula de Harder de Micrurus corallinus é

pouco desenvolvida, tendo também uma porção extra-orbitária. A cápsula

que delimita a glândula é delgada e constituida por tecido conjuntivo

denso, o qual emite fibras colágenas que delimitam os ácinos. Esses

ácinos são pouco volumosos e suas células são prismáticas, apresentando

núcleos esféricos na região basa', ricos em cromatina, e citoplasma gra¬

nuloso e acidófilo. Os duetos são constituídos por células prismáticas,

que vão se reunindo até formar um único dueto excretor (Fig. 5).

A glândula de Harder da serpente Micrurus frontalis é em tudo

semelhante à anterior.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

LOPES, R. A., OLIVEIRA, C., M. CAMPOS, G. & BARROS, J. M. — Estudo morfológico e

histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Mem. In8t. Butantan. 38: 41-50, 1974

Família Viperidae — As glândulas de Harder das cobras Bothrops

jararaca, B. alternatus e Crotalus d. terríficas são muito semelhantes

constituídas por uma cápsula de tecido conjuntivo denso, a qual emite

fibras colágenas que envolvem os ácinos. Os ácinos são grandes e consti¬

tuídos por células prismáticas altas, de citoplasma fortemente acidófilo,

com núcleos arredondados e localizados na região basal. Os duetos me¬

nores reúnem-se num único dueto excretor maior, de células epiteliais

altas e citoplasma pouco acidófilo (Fig. 6).

DISCUSSÃO

Nas serpentes a glândula de Harder geralmente é bem desenvolvida

e, em algumas espécies, relativamente muito grande, mostrando-se muitas

vezes maior que o bulbo ocular. Seus duetos excretores geralmente se

reúnem na região anterior da órbita e descarrega o produto de secreção

no dueto lacrimal que, nas serpentes, desemboca no espaço existente

abaixo da membrana transparente. A glândula de Harder geralmente

se localiza na parte mediana e posterior do bulbo ocular, usualmente abra¬

çando o nervo óptico (2).

A glândula de Harder, nos ofídios, é predominante, e a glândula la¬

crimal, quando presente, é pobremente desenvolvida. Sua função ainda

é motivo de controvérsias em algumas espécies. Entretanto para as ser¬

pentes, sua função parece ser bem específicas, podendo bem ser denomi¬

nada “glândula nictitans” (12). A relação íntima da glândula de Harder

com a membrana nictitante foi descrita por Loewenthal (1935, cit. em 2),

tendo sugerido esse autor que a membrana nictitante jamais ocorreria na

ausência da glândula de Harder. Walls (1942, cit. em 2) comentou que

era a glândula de Harder que lubrificava o olho e não a lacrimal, em espé¬

cies cuja membrana nictitante estivesse ausente, substituída pela mem¬

brana transparente, como é o caso das serpentes.

Em algumas cobras primitivas (Boidae), a glândula de Harder tanto

pode lançar seu produto de secreção diretamente no espaço localizado logo

abaixo da membrana transparente como também pode fazê-lo no dueto

lacrimal. As demais espécies de ofídios lançam o produto de secreção,

através de um só dueto excretor, na porção superior do dueto lacrimal,

não possuindo comunicação direta com o espaço existente sob a membrana

transparente (2).

Analisando os resultados histoquímicos constantes na tabela 1, e

tendo-se em vista o critério de Gabe e St. Girons (4), verificou-se que o

tipo de célula secretora da glândula de Harder de todos os ofídios estu¬

dados compõe-se de um complexo carboidrato-proteína e ácido siálico, os

quais são responsáveis pela reação positiva ao PAS e proteína histoquimi-

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

LOPES, R. A., OLIVEIRA, C., M. CAMPOS, G. & BARROS, J. M. — Estudo morfológico e

histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Mem. Inst. Butantan. 38: 41-50, 1974

camente detectável (6-9), pela diminuição na coloração pelo azul de alcian

a pH = 2,5 após hidrólise ácida (11), respectivamente. Devido à dimi¬

nuição da alcianofilia após prévio tratamento com hialuronidase testi-

cular e posterior coloração pelo azul de alcian a ph = 2,5, pode-se cons¬

tatar a presença de ácido hialurônico nessas células (5). Estes resul¬

tados concordam com os de Lopes et al. (7-8) em Micrurus corallinus e

Bothrops jararaca e Barros et al. (1) em Eunectes murinus.

SUMMARY — Morphological and histo-

chemical study of the Harderian gland of

brazilian reptilians. I. Ophidea.

The authors studied morphologically the

Harderian gland of some species of brazi¬

lian snakes, and histochemically the muco-

substances and some proteins in this gland.

Based on the results, the authors concluded:

the Harderian gland of all species is

formed by mucous-serous cells; the mucous-

serous cells shows a carbohydrate-protein

complex and sialic acid; those cells also

produce hyaluronic acid.

UNITERMS — Snake’s Harderian gland.

Histochemical study of mucosubstances and

proteins. Determination of the celular type.

BIBLIOGRAFIA

1. BARROS, J. M.; LOPES, R. A.; CAMPOS, G. M. e DARUGE, A. D. — Estudo morfo¬

lógico e histoquímico de polissacarídeos em glândulas cefálicas de Eunectes murinus

(Ophidea, Boidae). Ciência e Cultura, 25: 151-156, 1973.

2. BELLAIRS, D. D’A., and BOYD, J. D. — The lachrymal apparatus in lizards and

snakes. I. The brille, the orbital glands, lachrymal canaliculi and origin of the

lachrymal duct. Proc. Zool. Soc. Lond., 117:81-108, 1947.

3. CHÈVREMONT, M., et FREDERIC, J. — Une nouvelle méthode histochimique de mise

en évidence des substances à fonction sulphydrile. Application à 1’epiderme, au poil

et a la lecure. Arch. Biol., 54: 589-605, 1943.

GABE, M. et SAINT-GIRONS, H. — Donnés histologiques sur les glandes salivaires

des Lépidosauriens. Mém. Mus. nat. Hist. nat. Paris, sér. A. Zool., 55:1-112, 1969.

LEPPI, T. J. and STOWARD, P. J. —- On the use of testicular hyaluronidase for iden-

tifying acid mucins in tissue sections. J. Histochem. Cytochem., 13: 406-407, 1965.

6 . LISON, L. — Histochimie et cytochimie animales. 3, a éd. Gauthier-Villars, Paris. 1960.

7. LOPES, R. A.; OLIVEIRA, C.; CAMPOS, M. N. M.; CAMPOS, S. and BIRMAN, E. G.

— Morphological and histochemical study of cephalic glands of Bothrops jararaca

(Ophidia, Viperidae). Acta Zool., 55:17-24, 1974.

8 . LOPES, R. A.; VALERI, V.; CAMPOS, G. M.; LOPES, O. V. P. et FARIA, R. M. —

Étude histochimique des mucopolysaccharides des glandes céphaliques de Micrurus c.

corallinus (Ophidea, Elapidae). Ann. d'Histochimie, 18: 129-137, 1973.

9. McMANUS, J. F. A. and CASON, J. E. — Carbohydrate histochemistry studied by

aeetylation techniques. I. Periodic acid methods. J. Exp. Med., 91: 651-654, 1950.

10. PEARSE, A. G. E. — Histochemistry: theoretical and applied. 3th ed. Churchill, Lon-

don. 1968.

11. QUINTARELLI, G.; TSUIKI, S.; HASHIMOTO, Y. and. PIGMAN, W. Studies of

sialic acid-containing mucins in bovine submaxillary and rat sublingual glands. J.

Histochem. Cytochem., 9: 176-183, 1961.

12. SHINODA, S. — Harder’s glands in some mammals. Biol. Abstracts, 36: ref. 1170,

1961.

13. TAUB, A. M. — Ophidian cephalic glands. J. Morph., 118: 529-542, 1966.

Recebido para publicação em 15-III-1974 e aceito eir» 15-VI-1974.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

LOPES, R. A., OLIVEIRA, C., M. CAMPOS, G. & BARROS, J. M. — Estudo morfológico e

histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Mem. Inst. Butantan. S8 : 41-50, 1974

Fig. 1 — Glândula de Harder de Constrictor constrictor mostrando ácinos pequenos constituídos

de células prismáticas altas com citoplasma repleto de grânulos pequenos e acidófilos e núcleo

ovóide, de cromatina densa, localizado na porção basal da célula, após coloração pelo HE

(400 X).

Fig. 2 — Glândula de Harder de Epicrates cenchria crassus mostrando ácinos pequenos

constituídos de células com citoplasma repleto de grânulos acidófilos, após coloração pelo

HE (400 X)

LOPES, R. À., OLIVEIRA, C., M. CAMPOS, G. & BARROS, J. M. — Estudo morfológico e

histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Mem. Inst. Butantan. S8: 41-50, 1974

Fig. 3 — Glândula de Harder de Eunectes murinus mostrando ácinos constituídos de células

com citoplasma rico em grânulos acidófilos, após coloração pelo HE C400 XV

Fig. 4 — Glândula de Harder de Eunectes murinus mostrando ácinos com células repletas

de grânulos acidófilos e duetos mais claros de aspecto basófilo, após coloração pelo HE

(940 X).

SciELO

LOPES, R. A., OLIVEIKA, C., M. CAMPOS, G. & BARROS, J. M. — Estudo morfológico e

histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis brasileiros. I — Ophidea.

Mem. Inst. Butantan. 38: 41-50, 1974

Fig. 5 — Glândula de Harder de Micrurus coralhnus mostrando ácmos com células contendo

grânulos acidófilos, após coloração pelo HE (940 X).

Fig. 6 — Glândula de Harder de Bothrops jararaca mostrando acmos constituídos de células

altas coni citoplasma repleto de grânulos acidófilos, após coloração pelo HE (500 X).

SciELO

Mem. Inst. Butantan

S8: 51-62, 1974

ULTRASTRUCTURE OF MATURE ERYTHROCYTES FROM FIVE

BOTHROPIC SPECIES*

H. MENEZES, C. Y. MITSUTANI, J. R. R. COIRO, M. A. S. CARVALHO DOS SANTOS, and

A. BRUNNER JR.

Laboratory of Electron Microscopy — Instituto Butantan

SUMMARY — Mature erythrocytes of five

bothropic species were studied at the

ultrastructural levei. Vesicles of mitochon-

drial origin, carrying nuclear material, and

smooth endoplasmic reticulum distributed

through the cytoplasm or confined to a

restricted region, as well as Golgi comple-

xes containing electron-dense material,

were found; while the Golgi complex of

li. jararaca erythrocytes is highly develo-

ped, that of other species erythrocytes

rather small. All results of acid phospha-

tase reaction for cytolysome identification

were negative.

UNITERM — Erythrocyte ultrastructure

in Bothrops.

INTRODUCTION

There are only a few specific reports on the ultrastructure of mature

and immature avian and amphibian erythrocytes. No studies regarding

this matter have been done on reptiles. BEAMS and ANDERSON (1)

reported investigations on a supposed “segregation apparatus” in Nec-

turus maculosus erythrocytes. D AVIES (2) descri bed some aspects of

mature erythrocytes in Gallus domesticus and Rana pipiens giving em-

phasis to the hemoglobin penetration into and protusions rising from the

nucleus. In amphibians TOOZE and DAVIES (3) obtained positive

results for acid phosphatase reaction in morphologically characteristic

lysosomal bodies and autophagic vacuoles of erythrocytes. VANKIN et al.

(4) compared in Rana catesbeiana the ultrastructure of mature tadpole

red blood cells with the adult hemoglobin synthesizing microcytic cells (5),

the latter presenting the common ultrastructural characteristics of imma¬

ture mammalian erythrocytes.

Even at optical levei, little is known on the reptile erythrocyte cyto-

logy. Cytoplasmic granules, mitochondria, as well as Golgi complex were

described already in erythrocytes of birds, tortoise and some snake species

(6, 7, 8). This paper reports ultrastructural aspects of mature erythro¬

cytes from five bothropic species, mainly on the formation of vesicles

of mitochondrial origin, carrying nuclear material, the presence of more

or less developed Golgi complexes, and other structures.

MATERIAL AND METHODS

Five adult bothropic species ( B. jararaca, B. jararacussu, B. pradoi,

B. alternatus, B. neuwiedi), apparently without any traumatism, used in

This research has been supported by the Conselho Nacional de Pesquisas (Proc. 10112/71) and

Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan.

Adress: C.P. 65 — 05504 — São Paulo — Brazil

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MENEZES, H„ MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inst. Butantan, 38: 51-62, 1974.

this study, were kindly supplied by the Serviço de Animais Peçonhentos

— Instituto Butantan. Blood samples, obtained by cutting off the tail,

were harvested into a 2% EDTA solution adjusted to pH 7.3-7.4 by the

addition of a 4% NaHC0 3 solution.

ROSENFELD staining: Staining according to ROSENFELD (9) was

done routinately for the detection of hemoparasites commonly found in

this material, as well as for the evaluation of the several hematological

aspects of the samples.

Supr a-vital staining: To evaluate the percentage of immature erythrocy¬

tes (cells presenting a basophilic reticulum) one drop of blood was added

to 10 drops of a 0.75% NaCl solution, containing 0.1% brilliant cresyl

blue, followed by the examination through immersion microscopy.

FEULGEN reaction: Blood smears were submitted to the FEULGEN

reaction according to LISON (10), in order to detect DNA within the

erythrocyte vesicles. Smears pretreated by phosphate buffer containing

DNase, as well as by plain buffer were used as Controls.

Electron-microscopy: Thin blood smears were hemolysed in a 0.80%

NaCl solution containing 2.5% v/v concentrated formalin (11), or a 2.5%

v/v aqueous 25% glutaraldehyde solution (12), followed by phosphotungs-

tic acid staining, and several washings in distilled water (11). Some

smears were then submitted to the shadow casting process with

palladium.

For thin sectioning, the fixation of untreated blood was done as

follows: a) direct fixation in 0.23M Millonig’s buffer containing 1% glu¬

taraldehyde for 1-2 h. b) To 15 drops of blood, 15 drops of 2% glutaral¬

dehyde in 0.23M Millonig’s were added drop by drop, each followed by

slow agitation. After 30 min, the suspension was diluted with 2-3 volumes

of buffer containing 1% glutaraldehyde and fixed for 2 h (12). After

both fixation procedures, the erythrocytes were extensively washed for

three times in the buffer, and fixed for 20 min in 1% osmium tetroxide

in the same buffer.

Acid phosphatase reaction was done according to KENT et al. (13) ;

the red blood cells were then fixed in 1 % osmium tetroxide in cacodylate

buffer. Ribonuclease digestion was done in 0.14M acetate buffer (pH 6.8)

containing 0.10% RNase (General Biochemical Inc.) ; the material was

incubated for 1 h at 37°C. (RNase solution was previously heasted at

80°C for 15 min, to eliminate a possible contamination by DNase).

As Controls, erythrocytes were incubated without RNase under the

same conditions. Fixation was done in 1% osmium tetroxide in

0.14M veronal-acetate buffer (pH 7.4).

Erythrocytes, submitted to acid phosphatase reaction, RNase diges¬

tion, or no treatment at all were stained, after fixation, in an 1% aqueous

uranyl acetate solution (60 min), dehydrated in the alcohol series, and

embedded in Polylite 8001-P (14). Thin sections were obtained in Por-

ter-Blum MT-1 and MT-2 microtomes, stained by lead citrate (15), and

examined in the ÜM 100b and Elmiskop I electron microscopes, at 60 Kv.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MENEZES, H„ MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inxt. Bntantan, 38: 51-62, 1974.

RESULTS

Through the ROSENFELD staining technique, besides of endoery-

throcytic parasites, basophilic, polychromatofilic and orthochromatic

erythrocytes were found in the smears.

Erythrocytes supravitally stained by brilliant cresyl blue show varia-

ble amounts of a basophilic reticulum or “Substantia granulo-filamen-

tosa”. Blood of intensely parasitized specimens presents immature ery¬

throcytes in a proportion of about 40%, e.g. in Bothrops jararaca. Ma¬

ture cells, void of basophilic reticulum, contain one to six cytoplasmic

basophilic corpuscles. Smears submitted to the FEULGEN reaction,

contain erythrocytes presenting one to three spherical corpuscles per

cell positively evidenced by the reaction. The percentage of cells with

“Substantia granulo-filamentosa” is approximately the same as that of

cells without positive FEULGEN reaction in the cytoplasm.

Hemolysed smears show elliptical ghosts of mature erythrocytes, ge-

nerally presenting a re’atively wide peripheral fold (Fig. 1). From the

central ellyptical nucleus, rods or short fi’aments, measuring 0.31 |x in dia-

meter, seem to protrude to the cytoplasm; juxtaposed or distant from the

nucleus, corpuscles of 0.55 to 0.85 in diameter were also found.

As ascertained through thin sections, mature erythrocytes may pre-

sent remnants of the marginal band (Fig. 2). The red blood cells of all

bothropic species here studied present commonly, two or three mitochon-

dria near the nucleus or juxtaposed to the nuclear membrane; in all

instances their disposition occurs in regions, less or more distant from the

nuclear membrane pores, where chromatinic material is localized. Figure

3 ( B. pradoi) show penetration of dense chromatinic masses into the

mitochondria. In these cases the masses are more electron-dense than the

nuclear material, and at this stage of the phenomenon mitochondria show

only traces of their inner structure. In B. alternatus samples, condensation

of still intranuclear chromatin occurs, as seen in the erythrocyte of Fig. 4.

The erythrocyte of Fig. 5 presents a nucleus containing condensed

chromatin, and a less electron-dense formation corresponding to the nu-

cleolus, centrally disposed, magnified in Fig. 6. It is predominantly consti-

tuted by finely granulated material, and by higher electron-dense and lar-

ger granules at a region of its periphery. The effect of ribonuclease diges-

tion can be observed in Fig. 7. The cytoplasm presents only simple diffu-

sely distributed ribosomes; besides mitochondria and smooth endoplasmic

reticulum, two vesicles distant from the nucleus, with dense lamellated and

partially amorphous material, are observed. Erythrocytes of all species

present a smooth endoplasmic reticulum distributed throughout the cyto¬

plasm, but several red blood cells show a reticulum confined to a restricted

region. (Fig. 8). Highly developed Golgi complexes were frequently found

in mature B. jararaca erythrocytes, as in Fig. 9; the dictyosome is consti-

tuted by numerous narrow and arched saccules surrounded by smaller and

larger vesicles of low electron-density. Figure 10 shows two large vesicles,

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MENEZES, H„ MITSUTANI, C. Y„ COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inst. Butantan, 88; 51-G2, 1974.

one of them containing an amorphous and partially lamellated dense ma¬

terial, near to the Golgi complex; in other instances, these large vesicles

contain finely granulated or vesiculated material as in Fig. 11. The dic-

tyosome of this erythrocyte is electron-dense.

Erythrocytes of B. pradoi present a rather less developed Golgi

complex as shown in Fig. 12. A large vesicle, whose remarkable dense

content contacts the dense dictyosome of this complex, is evident. Some

Golgi complexes are constituted by a dictyosome which contain an accen-

tuated dense material (Fig. 13). In this figure a smooth endoplasmic

reticulum seems to be continuous between the dictyosome and the obli-

quely sectioned plasmic membrane. In various assays, reactions for acid

phosphatase detection in B. jararaca erythrocytes, were never positive as

compared to the positiveness of the Controls.

The general aspect above described for mature erythrocytes of B.

jararaca, B. jararacussu, B. pradoi and B. álternatus, are depicted in

Fig. 14. Compact chromatin distribute itself more at the whole periphery

of the nucleus, except at the nuclear membrane pores; through the pore,

hemoglobinized cytoplasm enter the karyoplasm, enhancing their electron

density. However, in B. neuwiedi (Fig. 15) the chromatin of mature

erythrocytes is not compact and is distributed through practically the

whole karyoplasm. The cytoplasmic aspects are the same as those des¬

cribed for the erythrocytes of other species.

DISCUSSION

All bothropic specimens examined presented immature erythrocytes

in the peripheral blood, identified through the ROSENFELD staining, as

well as the brilliant cresyl blue supravital staining. This finding denotes

anemia, probably of hemolytical nature, ascribable to parasitism.

Mature erythrocytes show at least one, usually two or three dense

corpuscles of about 0.70 pi in diameter, rods, and short filaments, besides

the elements of the marginal band or their remnants, which in hemolyzed

smears of erythrocytes may be taken for wide foMs of the cell membrane

(Fig. 1). According to FAWCETT and WITEBSKY (16), the marginal

band found in avian (12), amphibian (17), and also, as expected, in

reptile erythrocytes* (Fig. 2) could be responsible for the cell shape. Com-

paring hemolyzed with sectioned erythrocytes, a correspondence between

mitochondria, and rods and short filaments, can be ascertained based on

the evidence obtained in the course of studies on mammalian immature

erythrocytes (18,19). Several corpuscles observed in hemolyzed ery¬

throcytes (Fig. 1) are the FEULGEN positive vesic’es, never found in

immature erythrocytes. Their mitochondrial origin (Figs. 3 and 4) has

been also stated in mature chick (12), frog (17), and fish (20) ery¬

throcytes; in experimental induced anemia, mature frog erythrocytes

shcwed besides a defined FEULGEN reaction, labelled vesicles through

3 H-thymidine incorporation. (21). A correlation can be considered

between this phenomenon, i.e. the expulsion of chromatinic material

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inst. Butantan, 38: 51-62, 1974.

fragments from mature erythrocyte nuclei, and the extrusion of nuclei

in mammalian orthochromatic erythroblasts, as already suggested du-

ring the course of studies on mature chick (12), frog (17) and fish (20)

erythrocytes. Those erythrocytes are considered mature, which do not

present any polysomes, but still may contain simple ribosomes, because

globin synthesis had already ceased.

In mature B. jararaca, B. jararacussu, B. pradoi and B. alternatus

erythrocytes (Fig. 5) were found the same general aspects as in am-

phibian and fish red blood cells, except that in several instances the

smooth endoplasmic reticulum seems to be concentrated in certain re-

gions of the erythrocytes (Fig. 8). This aspect might suggest the for-

mation or disorganization of a Golgi complex. In one way or other

there is still no evidence to support either interpretation.

Compared with erythrocytes of other bothropic species, as B. pradoi

(Fig. 12), the Golgi complex of B. jararaca is markedly more developed,

suggesting a higher activity in the latter (Fig. 9) ; the nature of this

activity is still unknown, but it seems not to be correlated with the

cytolysomes, since the results for acid phosphatase reaction, obtained

according to KENT et al. (13), were negative; however, this fact does

not excluded a possible existence of cytolysomes without acid phosphatase.

TOOZE and DAVIES (3), in performing this reaction in amphibian

erythrocytes, found positiveness at the optical microscope. However, an

extrapolation fro mthe optical to the ultrastructural levei is difficult,

considering that at the latter several types of vesicles can be found

Figs. 9, 10, 11). The dictyosome of trythrocytes of all species examined,

generally, shows a dense material (Figs. 11, 13), possibly correlated with

the dense material observed within the vesicle closely connected to the

dictyosome, as shown in Fig. 12. Such dense material was also found

within a dictyosome of mature carp erythrocytes (20).

An accentuated difference was stated between the nuclei of the ma¬

ture erythrocytes of B. neuwiedi (Fig. 15), and those of other four

species (Figs. 5, 14). The former show the chromatinic material dis-

tributed through the karyoplasm, whereas the chromatin of mature B.

jararaca, B. jararacussu, B. pradoi and B. alternatus is predominantly

dispersed at the nuclear periphery. Their nuclei contain a less electron-

-dense, fine, and roughly granulated material (Fig. 5, 6, 14), which

can be identified as a nucleolus since a marked effect was obtained

through ribonuclease digestion (Fig. 7).

RESUMO — Eritrócitos maturos de 5 es¬

pécies botrópicas foram estudados ao nível

ultraestrutural. Vesículas de origem mito-

condrial, contendo material nuclear foram

constatadas. O retículo endoplasmático

liso pode estar distribuído pelo citoplasma

ou confinado a uma região restrita. Com¬

plexos de Golgi, contendo material eletro-

de so, são freqüentemente observados. En¬

quanto o complexo de Golgi de eritrócitos

de B. jararaca é altamente desenvolvido,

aqueles de outras espécies apresentam-se

com dimensões comumente observadas. Os

resultados para detecção de fosfatase ácida

em citolissomos foram negativos.

UNITERMO — Ultraestrutura de eritró¬

citos de Bothrops.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

,' .

• ' - ■ - :

r '. Vm...;. v ;..^ '

íhj i p} G?”'.; ’ iSS-i.s ‘a';• 1 ■

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastrueture of mature erythrocytes from five bothropie species,

Mem. lnst. Butantan, 38: 51-62, 1974.

A cknowledgements.

The authors wishes to thanks Mrs. Vera Mondin Weisz for her

excellent technical assistence, and Mrs. Sibylle Heller for her editorial

aid and translation.

FIGURE LEGENDS

Fig. 1 — Mature B. jararaca erythrocyte from a hemolized smear. N. — nucleus; m —

mitochondria; v — probable vesicle; arroio — wide membrane fold.

Fig. 2 — Thin sections of mature Bothrops erythrocytes. B. jararacuesu erythrocyte pre-

senting traces of microtubules (arrows) of the marginal band; pm — plasmic

membrane. Figs. 3 and 4 — B. pradoi and B. alternatus erytrocytes respectively;

N. — nuclei; m — mitochondria receiving condensed chromatinic material. In the

latter case chromatinic condensation has already occured in the nucleus.

SciELO

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inst. Butantan, S8 : 51-62, 1974.

Thin sections of mature B. jararaca erythrocytes. Fig. 5 — Nucleus N. containing a nucleolus

n; m — mitochondrion; v — vesicles; er — endoplasmic reticulum. The cytoplasm presents

simple ribosomes. Fig. 6 — Magnification of the nucleolus n of Fig. 5 showing fine and roughly

granulated material. Fig. 7 — Effect of ribonuclease treatment on a nucleolus.

SciELO

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inst. Butantan, S8: 51-62, 1974.

Thin sections of mature Bothrops erythrocytes. Fig. 8 — B. pradoi erythrocyte presenting

a smooth endoplasmic retriculum er confined to a limited region. N. — nucleus Fig. 9 —

B. jararaca erythrocyte containing a remarkable developed GCgi complex; d — dictyosome,

v — vesicles. Fig. 10 — B. jararaca erythrocyte. G. — Golgi complex; v — vesicle

containing a dense amorphous and partially lamellated material; v’ — vesicle without dense

material; v” — large vesicle surrounded by smaller ones; m — mitochondrion.

SciELO

Thin sections of mature Bothrops erythrocytes. Fig. 11 — B. jararacusau erythrocyte whose

Golgi complex present a dictyesome d containing dense material. Nine vesicles v, sectioned

at different leveis, carrying granulated and membranous material, are seen. Fig. 12 —

B. pradoi erythrocyte. N. nucleus; G Dense Golgi complex closely connected to a vesicle v

containing dense material. Fig. 13 — B. neuwiedi erythrocyte. The Golgi complex G presents

a highly dense material, and is continuous to a smooth endoplasmic reticulum er, which, in

its turn, is continuous to the plasmic membrane.

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inst. Butantan, 38: 61-62, 1974.

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. lnat. Butantan, 38: 51-62, 1974.

Thin sections of mature Bathrops erythrocytes. Fig. H — B. jararaca erythrocyte showing a

nucleus N containing dense chromatin distributed mostly at their periphery, and a less electron-

dense nucleolus n. In the cytoplasm two mitochondria m and a smooth endoplasmic reticulum er

are seen. Fig. 15 — B. neuwiedi erythrocyte whose nucleous N presents a loose and conse-

quently less derse chromatin distributed throught the karyoplasm. The aspect of cytoplasm

is the same as that of other botropic species erythrocytes.

SciELO

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., COIRO, J. R. R., CARVALHO DOS SANTOS, M. A. &

BRUNNER JR., A. — Ultrastructure of mature erythrocytes from five bothropic species.

Mem. Inst. Butantan, 38: 51-62, 1974.

REFERENCES

2 .

1. BEAMS, H. W. and ANDERSON, E. -- Fine structure of the so called segregation appa-

ratus in erythrocytes of Necturus. Exper. Cell Res., 20: 604-687, 1960.

DAVIES, H. G. — Structure in nucleated erythrocytes. J. Biophysic. and Biochem.

Cytol., 9: 671-687, 1961.

TOOZE, J. and DAVIES, H. G. — Cytolysomes in amphibian erythrocytes. J. Cell Biol.,

21: 146-150, 1965.

VANKIN, G. L., BRANDT, E. M. and DE WITT, W. -—• Ultrastructural studies of red

blood cells from thyroxin-treat Rana catesbeiana tadpoles. J. Cell Biol., 17: 767-772,

1970.

MOSS, B. and IGRAM, V. M. — The repression and induction by thyroxin of hemoglobin

synthesis during amphibian metamorphosis. Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A., 51: 967-974,

1965.

BHATTACHARYA, D. R. and ROGERS BRAMBELL, F. W. — The Golgi body in the

erythrocytes of the Sauropsida. Quart. Journ. Micr. Sei., 69: 357-359, 1925.

HIRSCHLER, J. — Studien über die Plasmakomponenten (Golgi Apparatus) an vital

gefarbten mannlichen Geschlechtszellen einiger Tierarten. Z. Zellforsch., 7: 62-82, 1928.

RYERSON, D. L. -— A preliminary survey of reptilian blood. J. Ent. Zoll. 11: 49, 1949.

ROSENFELD, G. — Corante pancromico para hematologia e citologia clínica. Nova

combinação dos componentes do May-Grunwald e do Giemsa em um só corante de

emprego rápido. Mem. Inst. Butantan, 20: 329-334, 1947.

LISON, L. — Histochimie e Cytochimie Animales. Príncipes et methodes. Vol. 1 Gau-

thier-Villars, pg. 475-480, 1953.

BRUNNER JR., A. and VALLEJO-FREIRE, A. — Electron microscopic observations

on granules filaments (Reticulosomes) of reticulocytes. Exp. Cell Res., 10: 55-62,

1956.

COIRO, J. R. R. — Estudo comparativo da ultra-estrutura de elementos da série eri-

trocitária de aves e mamíferos. Correlação com a biossíntese de hemoglobina. Docto-

rate Thesis — Univer. São Paulo, 1974.

KENT, G., MINICK, O. T., VOLINI, F. L. and ORFEI, E. — Autophagic vacuoles in

human red cells. Amer. J. of Pathol., 18: 831-858, 1966.

COIRO, J. R. R. and BRUNNER JR., A. — Behaviour of Polylite 8001 with plasticizing

additives. In: III Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Microscopia Eletrônica,

Rio de Janeiro, 1973.

15. REYNOLDS, E. S. — The use of lead citrate of high pH as an electron opaque stain

in electron microscopy. J. Cell Biol., 17: 209, 1963.

16. FAWCETT, D. W. and WITEBSKY, F. — Observations on the ultrastructure of

nucleated erythrocytes and thrombocytes, with particular reference to the structural

basis of their discoidal shape. Z. Zellforsch., 62: 782-806, 1964.

17. CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S. — Unpublished observations, 1973.

18. BRUNNER JR., A., VALLEJO-FREIRE, A. and SOUZA SANTOS, P. — Electron

microscopy of thin sections of reticulocytes. Experientia, 12: 255, 1965.

VALLEJO-FREIRE, A. and BRUNNER JR., A. — Eritrócitos na Reticulocitose do sa-

turnismo experimental. Mem. Inst. Butantan, 28: 245-266, 1957/58.

BRUNNER JR., A., MENEZES, H„ COIRO, J. R. R., MITSUTANI, C. Y. and CAR¬

VALHO DOS SANTOS, M. A. S. — Vesicles carrying nuclear material in mature

Cyprinus carpio erythrocytes. (Submitted to appreciation, 1974).

MENEZES, H., MITSUTANI, C. Y., and BRUNNER JR., A. — Preliminary results,

1974.

10 .

11 .

12 .

13.

20 .

21.

Recebido para publicavao em 30-V-1974 e aceito em 16-IX-1974.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

38: 63-68, 1974

PRESENÇA DE CYSTICERCUS PISIFORMIS (BLOCH 1780)

EM COELHO E LEBRE IMPORTADOS

BRUNO SOERENSEN *

LUIZ ZEZZA NETO *♦

MARIO DEMAR PEREZ ***

GILDA MEIRE BULKA ****

ANTONIA ELENICE GIMENES ONO ****

RESUMO — É relatada a ocorrência de

Cysticercus pisiformis em dois leporinos im¬

portados da França.

Os autores alertam as autoridades sani¬

tárias no sentido de que a Taenia pisifor¬

mis não venha a se disseminar no Brasil.

UNITERMOS — Taenia pisiformis. —

Taenia serrata. — Cysticercus pisiformis.

— Cysticercus pisiformis em coelho e lebre.

INTRODUÇÃO

A Taenia pisiformis, segundo literatura consultada, foi assinalada

no Brasil, conforme lista helmintológica de Freitas (3). A raridade

de seu encontro justifica o presente relato.

Na fase adulta esse cestóide tem por habitat o intestino do cão,

do gato e de carnívoros silvestres; sua larva o Cysticercus pisiformis,

se desenvolve no fígado, epiploon e mesentério da lebre e do coelho.

O adulto mede de 0,5 cm a 2 m de comprimento, apresentando escólex

pequeno dotado de coroa de ganchos; o estróbilo, dentado, possue pro-

glotes quadrados na parte média da cadeia e retangulares na porção

distai.

Os ovos são ovais com 36 a 40 x 31 a 36 micra.

O hospedeiro definitivo se infesta ingerindo vísceras contendo o cis-

ticerco (1, 2, 4, 5, 7, 8, 9) sendo que dois meses após a infestação começa

a eliminar anéis maduros; a lebre e o coelho se infestam ingerindo ali¬

mentos contaminados com fezes do cão (1).

No estômago do hospedeiro intermediário o embrião hexacanto se

liberta e por via hemática atinge o fígado, o epiploon e o mesentério. Os

embriões retidos no fígado determinan lesões caracterizadas por fibrose,

sendo que após 15 dias da infestação já se observa densa infiltração

* Professor da Disciplina le Laboratório Clínico Veterinário da Faculdade de Ciências Médicas e

Biológicas de Botucatu e Diretor da Divisão de Microbiologia e Imunologia do Instituto Butantan.

** Profesoor Titular da Disciplina de Patologia Especial Animal da Faculdade de Ciências Médicas e

Biológicas de Botucatu.

*** Professor Adjunto do Departamento de Parasitologia do Instituto de Ciências Biomédicas da

Universidade de São Paulo.

**♦* Médicos Veterinários.

Endereço para correspondência:

C.P. G5 — 05604 — S. Paulo — Brasil.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B., ZEZZA NETO, L., PEREZ, M. D., BULKA, G. M. & ONO, A. E. G.

Presença de Cysticercus pisiformes (Bloch 1780) em coelho e lebre importados.

Mem. Inst. Butantan, 38: 63-68, 1974.

de leucócitos e linfócitos, chamando atenção a presença de eosinófilos;

posteriormente essas larvas se calcificam não sendo observadas células

gigantes.

As secções do epiploon e do mesentério, nas quais são encontrados

cisticercos, apresentam tecido hipertrofiado e intenso infiltrado celular.

A parasitose na lebre e no coelho é carente de sintomas, notando-se

apenas aumento de volume do abdômen, sendo o diagnóstico feito pelo

encontro do parasito nas necroscopias (8).

MATERIAL E MÉTODOS

Recebemos para necroscopia no mês de fevereiro de 1972 uma lebre

— Lepus europeus — e um coelho — Oryctolagus cuniculus — impor¬

tados da França há aproximadamente 15 dias.

As necroscopias foram realizadas obedecendo a técnica de Zencker

Borst, adaptada para a Medicina Veterinária por Martins (6).

Após a identificação dos cisticercos, fragmentos de diversos órgãos

foram fixados em formol a 10% ; os cortes histológicos posteriormente

obtidos foram corados pelo método da Hematoxilina Eosina.

RESULTADOS

O exame necroscópico dos animais revelou o abdômen quase todo

preenchido por formações císticas em forma de cacho de uva aderidas

ao epiploon (fig. 1 e 2) que foram identificadas como Cysticercus pisi-

formis; essas larvas císticas medem, em média, 0,5 cm de maior diâmetro,

são moles, de cor branco- amarelada, contendo escólex invaginado (fig.

3 e 4) e líquido fluido, limpido e transparente.

O exame macroscópico das demais vísceras nada revelou que fosse

digno de nota.

O exame microscópico do fígado mostrou no seio da massa hepática

área bastante circunscrita por tecido conjuntivo denso, contendo restos

do parasito, focos de calcificação, alguns eosinófilos e raros neutrófilos.

(fig. 5).

Ao exame microscópico o epiploon revelou-se bastante espessado e

com grande infiltrado eosinofílico; entre o tecido conjuntivo e a massa

eosinifílica verificam-se cortes do parasito em diferentes sentidos. São

vistos alguns neutrófilos e linfócitos além de vasos bastante dilatados,

cheios de sangue, e discreto foco de calcificação, (fig. 6).

CONCLUSÃO

Pelo exposto, recomenda-se, às autoridades sanitárias e criadores,

estarem alertas para que tal parasitose não seja disseminada em nosso

meio.

Recomenda-se ainda que as importações somente possam ser efetuadas

por criadores que comprovadamente possuam condições de higiene que

impossibilitem a progressão do ciclo do parasito.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B., ZEZZA NETO, L., PEREZ, M. D., BULKA, G. M. & ONO, A. E. G. —

Presença de Cysticercus pisiformes (Bloch 1780) em coelho e lebre importados.

Mem. Inst. Butantan, 38: 63-68, 1974.

SUMMARY — The ocurrence of Cysticercus

pisiformis in two leporines imported from

France is described.

The authors call the attention of the

sanitary authorities to avoid that Taenia

pisiformis might disseminate itself ln

Brazil.

UNITERMS — Taenia pisiformis. — Tac-

nia serrata. — Cysticercus pisiformis. —

Cysticercus pisiformis in rabbits and hares.

BIBLIOGRAFIA

1 — DALLING T. — Ufaw handbook the care and management of laboratory animais. —

Bailliére, Tindall and Cox — London 1949.

2 — EVANS, W. M. R. — Observation upon some common cestode parasites of the rabbit.

Oryetolagus cuniculus. — Parasitology, 82 (1): 78-90, 1940.

3 — FREITAS, M. G. — Lista de helmintos parasitos dos animais domésticos de Minas

Gerais. — Arq. Esc. Sup. Vet. Belo Horizonte, 10:373-381, 1957.

4 — GELORMINI, N. — Enfermedades parasitarias en veterinária.

Editorial — Buenos Aires — 1967.

Libreria “El Ateneo”

5 — HUTYRA, F. V.; MAREK, J. Y.; MANNINGER, R. — Patologia y Terapêutica Espe-

ciales de los Animales Domésticos. — Tomo segundo. Octava edicion refundida y

aumentada. Editorial Labor, S. A. — Barcelona — 1953.

6 — MARTINS, O. E. — Técnica de necroscopia para os animais domésticos — Comunicação

Pessoal.

7 — MILLER, H. M. and KERR, K. B. — Attempts to immunize rabbits against a larval

cestode, Cysticercus psisiformis. — Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 29: 670-671, 1932.

8 — SABATIER, H. — Le lapin et son élevage professionnel. — Dunod — Paris

1971

9 — SOLOMON, S. G. — Some points in the early development of Cystercus pisiformis. —

J. Helminth, 12:197-204, 1934.

Recebido para publicação em 15-III-1974 e aceito para publicação em 10-X-1974.

2 3 4 5 6

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B., ZEZZA NETO, L., PEREZ, M. D., BULKA, G. M. & ONO, A. E. G. —

Presença de Cyaticercua piaiformea (Bloch 1780) em coelho e lebre importados.

Jl/em- Inat. Butantan, 88: 63-68, 1974.

Fig. 1 — Cyaticercua piaiformia — Formações císticas, que tomam

todo o epiploon.

Cyaticercua piaiformia — Formação típica em cacho de uva, notando-se bem a

transparência dos cistos.

Fig. 2

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B., ZEZZA NETO, L., PEREZ, M. D., BULKA, G. M. & ONO, A. E. G. —

Presença de Cysticercus pisiformea (Bloch 1780) em coelho e lebre importados.

Mem. Inst. Butantan, S8\ 63-68, 1974.

Fig. 5 — Corte histológico do fígado mostrando áreas íntegras e áreas comprometidas pelo

parasito. Coloração H. E. (X 100).

Fig. 6 — Corte histológico do epiploon contendo segmento do parasito com reação fibrosa.

Coloração H. E. (X 100).

SciELO

NOTA SOBRE FREQÜÊNCIA DE HEMOPARASITAS

EM SERPENTES DO BRASIL

ÍNDICE DAS ESPÉCIES

Pág. j

Boa constrictor .

.... 85 1

Bothrops alternatus .

Bothrops cotiara .

.... 75

Bothrops insularis .

.... 75

Bothrops jararaca .

Bothrops jararacussu .

.... 77

Bothrops moojeni .

.... 78

Bothrops neuwiedi .

.... 81

Bothrops pradoi .

.... 82

Chironius bicarinatus .

.... 92

Chironius flavolineatus .

.... 94

Chironius foveatus .

.... 96

I Chironius laevicollis .

.... 96

Corallus caninus .

.... 87

Corallus hortulanus .

.... 88

1 Crotalus durissus .;.

.... 83

1 Cyclagras gigas .

.... 97

I Epicrates cenchria crassus .

.... 90

[ Erythrolamprus aesculapii .

.... 99

I Eunectes murinus .

.... 91

I Helicops carinicaudus .

.... 100

| Helicops modestus .

.... 101

K Leimadophis poecilogyrus .

. 102

1 Leimadophis typhlus .

.... 103

K Liophis müiaris .

. 103

1 Liophis undulatus .

. 104

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SciELCVo

Mem. Inst. Butantan

tS: 69-118, 1974

NOTA SOBRE A FREQÜÊNCIA DE HEMOPARASITAS

EM SERPENTES DO BRASIL*

SAMUEL B. PESSÔA****

PÉRSIO DE BIASI**

e GIUSEPPE PUORTO***

RESUMO — Os autores relatam os resul¬

tados de pesquisa de hemoparasitas no san¬

gue de mais de 2.000 serpentes pertencen¬

tes a 24 gêneros e 45 espécies, peçonhentas

ou não, capturadas principalmente na re¬

gião centro-sul do Brasil. Verificaram que

os seguintes gêneros de hemoparasitas

foram encontrados nas serpentes brasilei¬

ras: Hepatozoon, Haemogregarina (s. s.),

Plã8modium, Trypanosoma e Toddia. A

maioria dos hemoparasitas encontrados

pertencem aos gêneros Hepatozoon, parasi¬

tando até mais de 70% de uma mesma

espécie, como por exemplo Cyclagras gigas;

menos freqüente é Haemogregarina pallida,

a única espécie do gênero Haemogregarina

(s. s.), encontrada no sangue de um único

exemplar de Thamnodynastes pallidus

nattereri.

Em algumas espécies de serpentes os

autores não encontraram hemoparasitas

(gênero Micrurus e Bothrops insularia).

Espécies de Trypanosoma são muito fre-

qüentes em algumas serpentes, como por

exemplo Rachidelus brazili (28% de 21

exemplares examinados). Poucas serpentes

são parasitadas por Plasmodium, todavia,

8% dos 164 exemplares de Bothrops

moojeni estavam infectados por este hemo-

parasita.

Finalmente, algumas espécies de serpen¬

tes, como Bothrops pradoi e Philodryas

olfersii são parasitadas (10%) pelo gênero

Toddia (provavelmente um “virus").

Nenhuma microfilária foi encontrada no

sangue das serpentes.

UN1TERMOS — Freqüência de hemopara¬

sitas; Serpentes; Sangue; Plasmodium;

Hepatozoon; Trypanosoma; Haemogrega¬

rina (s. s.); Toddia; Microfilária.

INTRODUÇÃO

Como há vários anos (1967-1974) vimos estudando os hemoparasi¬

tas das serpentes do Brasil, resolvemos nesta nota fazer uma súmula

estatística sobre a freqüência com que estes protozoários são encontrados

parasitando as várias espécies de nossos ofídios.

Este trabalho compreende o resultado dos exames de aproximada¬

mente 2.100 exemplares de serpentes, pertencentes a 24 gêneros e 45

espécies, peçonhentas ou não, capturadas principalmente na região

Centro-Sul do país, feitos nas Seções de Herpetologia e de Venenos do

Instituto Butantan.

* Trabalho executado com auxilio do Fundo de Pesquisas do Instituto Butantan.

** Do Instituto Butantan.

*** Bolsista do Instituto Butantan.

Endereço para correspondência:

C.P. 65 — 05504 — São Paulo

Brasil.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inat. Butantan, 69-118, 1974.

Das serpentes mais comuns foi examinado um número substancial

de animais, sendo que, em relação às mais raras tivemos de nos contentar,

às vezes, com poucos exemplares ou mesmo, um só.

Também pudemos fazer observações mais pormenorizadas sobre o

hemoparasitismo de serpentes peçonhentas dos gêneros Crotalus e

Bothrops, respectivamente “cascavel” e “jararacas”, pelo fato de chega¬

rem em maior número na Seção de Venenos do Instituto Butantan.

Outro motivo que nos levou a publicar esta nota foi o fato de, até

hoje, não terem sido divulgados dados estatísticos sobre a prevalência

dos .diversos hemoparasitas nas nossas serpentes.

Aliás, também não nos parecem ser muito numerosos os estudos

nesse sentido em outros países; sem nos aprofundarmos na bibliografia

podemos citar os trabalhos de Ewers (1968), que estudou os hemato-

zoários dos répteis da Nova Guiné, tendo encontrado somente hemogre-

garinas (s. 1.) em 17 de 23 serpentes examinadas ou seja 74% infetadas.

Não registrou o encontro de Trypanosoma, Toddia ou Pirhemocyton e

Plasmodium. Hull e Camin (1960), nos EE.UU. registraram o en¬

contro de 154 serpentes infetadas por Hepatozoon, em 600 examinadas,

ou seja, a percentagem de 30,5%. Não relatam o encontro de outros

hemoparasitas. Anteriormente, estes autores (1956) tinham feito um

inquérito nas serpentes do Parque Zoológico de Chicago e encontraram

a taxa de 42,4% parasitados por Hepatozoon; um ano mais tarde a taxa

de infecção caiu para 23,1% nesta mesma população cativa. Também

estes autores assinalaram a presença de microfilarias em dois exempla¬

res, porém, nós em mais de 2.000 ofídios examinados nunca tivemos

ocasião de assinalar microfilárias no sangue destes animais.

MATERIAL E MÉTODOS

Nas serpentes foram feitos exames de sangue, a fresco e esfregaços

fixados com metanol e corados pelo Giemsa ou, às vezes, May Grünwald-

-Giemsa.

As serpentes examinadas foram numeradas compreendendo diversas

séries. A primeira série recebeu número, sem prefixo de letras; a se¬

gunda série recebeu o prefixo N.S. — (o que nos levou a iniciar esta

Nova Série foi o fato de não precisarmos trabalhar com números ele¬

vados) ; posteriormente, designamos uma série H — para as serpentes

examinadas na Seção de Venenos; outra F — para os filhotes; e a série

G — para as serpentes prenhes.

As lâminas que julgamos importantes para arquivo receberam uma

sequência numérica constituindo uma única série não precedida por letra

e se acham todas na Coleção do Instituto Butantan.

1956 — HULL, R. W. — Jour. Parasitol. i2 ( suppl .): 36.

1960 — HULL, R. W., e CAMIN, J. H. — Jour. Parasitol. 46:515-523.

1968 — EWERS, W. H. — Jour. Parasitol. 54 (1): 172-174.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIÀSI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

As microfotografias foram feitas com aumentos que variaram entre

1.000 e 2.000 diâmetros; os casos de aumento maior são indicados no

texto. Representam elas formas sangüíneas consideradas em geral como

gametócitos e formas tissulares, que são formas esquizogônicas, as quais

muitos autores separam em macrocisto com numerosos esquizontes pe¬

quenos e microcistos, em geral com 2 a 6 esquizontes maiores.

Quanto às citações bibliográficas, nos restringimos às que se refe¬

rem às descrições originais da espécie e algumas às descrições das formas

evolutivas até agora conhecidas ou outra particularidade importante.

Os nomes específicos das serpentes aqui citadas estão baseados no

Catálogo de Peters e Orejas-Miranda (1970).

Família Viperidae:

1 — Bothrops alternatus (“urutu, cruzeira”), figs. 1-5.

Examinados . 23

Parasitados por: Hepatozoon . 4 ... 17%

Toddia . 1

O Hepatozoon desta espécie foi descrito por Phisalix e Laveran em

1913 com o nome de Haemogregarina roulei (= Hepatozoon roulei).

Sua evolução foi feita no Culex dolosus por Pessoa e cols. 1972.

BIBLIOGRAFIA

1913 — PHISALIX, MME. — C. R. Soc. Biol. pp. 110-111.

1913 — PHISALIX, MM., LAVERAN, A. — Buli. Soc. Path. Exot. S: 330-333.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Bras. Biol. 27(2): 159-164.

1972 .— PESSÔA, S. B., BIASI, P. e SOUZA, D. M. — Mem. Instituto Butantan 36:

241-245.

1970 — PETERS, J. A. e OREJAS-MIRANDA, B. — Catalogue of the Neotropical Squamata

Part I. Snakes, Smithsonian Institution Press, Washington.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inat. Butantan, 38: 69-118, 1974.

Figs. 1-5

2*5

aSÉtWM

—

Hepatozoon da Bothrops altematus

Figs. 1-3, formas sangüíneas

Figs. 4 e 5, formas tissulares (cistos esquizogônicos).

2 3 4 5 6

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

2 — Bothrops cotiara (“cotiara”)

Examinados . 8

3 — Bothrops insularis (“jararaca ilhoa”)

Examinados . 6

Nestas espécies não foram encontrados hemoparasitas.

4 — Bothrops jararaca (“jararaca”), figs. 6-11.

Examinados . 131

Parasitados por: Hepatozoon . 31 ... 24%

Toddia . 3 ... 2%

O Hepatozoon desta espécie foi por nós identificado à Haemogre-

garina plimmeri Sambon, 1909 e redescrita por Phisalix e Laveran em

1913.

BIBLIOGRAFIA

1909 — SAMBON, W. — J. Trop. Med. Hyg. 12: 48-55.

1913 — PHISALIX, MM. e LAVERAN, A. — Buli. Soc. Path. Exot. 5:330-332.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Bras. Biol. 27(2): 159-164.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

FIGURAS 6-11

Ucpatozoon da Bothrops jararaca

Figs. 6-8 — Formas sangüíncas.

Figs. 9-11 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos; fig. 11, aumento x 2500).

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

Hepatozoon da Bothrops moojeni

Figs. 14 e 16 — Formas sangüíneas.

Figs. 16-18 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos; figs. 16 e 17, aumento X 2500).

FIGURAS 14-18

PESSÔA, S. B., BTASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

7 — Bothrops neuwiedi (“jararaca-pintada”), figs. 20-22.

Examinados . 62

Parasitados por: Hepatozoon . 24 ... 39%

Não foram aqui consideradas as diversas subespécies de B. neuwiedi,

de modo que a freqüência dos parasitas foi analisada como ocorrendo

na espécie.

O Hepatozoon desta serpente foi assinalado em 1916 por Migone, no

Paraguai, sem lhe dar nome específico. Não encontramos nenhum outro

hemoparasita além do hepatozoon. A transmissão congênita do Hepa¬

tozoon nesta espécie foi verificada por Biasi e cols. (1971).

BIBLIOGRAFIA

1916 — MIGONE, L. E. — Buli. Soc. Path. Exot. 9: 359-364.

1968 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 28(1): 71-76.

1971 _ BIASI, P., PESSÔA, S. B. e BELLUOMINI, H. E. -

Janeiro 15(1): 27, 28.

Atas Soc. Biol. do Rio de

FIGURAS 20-22

20 m 2i r

Hepatozoon da Bothrops neuwiedi

Figs. 20 e 21 — Formas sangüíneas (fig. 21, aumento X 2500).

Fig. 22 — Forma sanguínea na membrana cório-alantóide do embrião.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

8 — Bothrops pradoi — figs. 23-25.

Examinados . 100

Parasitados por: Hepatozoon . 46 ... 46%

Toddia . 10 ... 10%

Esta espécie foi uma das mais altamente parasitadas que encon¬

tramos, tanto pelo Hepatozoon como por Toddia. O Hepatozoon não foi

assinalado anteriormente por nenhum pesquisador; a Toddia foi estudada

por M.A. de Souza e Cols. (1973).

BIBLIOGRAFIA

1973 — SOUZA, M. A., BIASI, P. e PESSOA, S. B. — Mem. Instit. Oswaldo Cruz 71(1,):

443-480.

FIGURAS 23-25

Hepatozoon da Bothrops pradoi

Fig. 23 — Forma sangüínea.

Figs. 24 e 25 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

9 — Crotalus ( Crotalus ) duríssus. (“cascavel”) — figs. 26-32.

Examinados . 300

Parasitados por: Hepatozoon . 34 ... 11%

Trypanosoma . 5 ... 1,5%

Como se sabe foram descritas várias subespécies de Crotalus ( C .)

durissus de Lineu. Os parasitas desta espécie com suas diversas sub¬

espécies são aqui considerados em bloco como parasitando uma única

espécie, esclarecendo-se que a quase totalidade de exemplares examina¬

dos corresponde à C. d. terrificus e C. d. collilineatus. Nestas serpentes

encontramos no sangue espécie de Hepatozoon e Trypanosoma.

O primeiro autor a assinalar o Hepatozoon na cascavel foi Lutz em

1901, que considerando todas as espécies parasitas de serpentes como

uma única, a denominou Hemogregarina serpentium (= Hepatozoon

serpentium). Laveran em 1902 descreveu a Haemogregarina crotali no

C. confluens (= C. atrox) ; Luhe descreveu nesta espécie o Karyolysus

crotali e Phisalix em 1931 duas outras espécies: Haemogragarina romani

e H. capsulata. O tripanosoma da cascavel foi descrito por Pessoa e

Biasi em 1972, com o nome de Trypanosoma cascavelli, parasitando o

C. d. terrificus.

BIBLIOGRAFIA

1901 — LUTZ, A. — Zentrlb. f. Bak. 1 Abd. Orig. 29: 290-397.

1902 — LAVERAN, A. — C. Rend. Sean. Acad. Sc. Paris 135 : 1036-1040.

1931 — PHISALIX, M. — Buli. Soc. Path. Exot. 2A: 190-194.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27(A ) : 381-384.

1972 — PESSOA, S. B. e BIASI, P. — Ata3 Soc. Biol. Rio de Janeiro 15(2): 67-70.

1, | SciELO

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

FIGURAS 26-32

Hemoparasitas da Crotalus duríssus

Figs. 26-28 — Formas sanguíneas do Hepatozoon.

Figs. 29-31 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos), do Hepatozoon.

Fig. 32 — Trypano8oma cascavelli (aumento X 2500).

2 3 4

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 88: 69-118, 1974.

Familia Boidae

10 — Boa constrictor (“jibóia”), figs. 33-37.

Examinados . 29

Parasitados por: Hepatozoon . 18 ... 62%

Trypanosoma . 4 ... 14%

Lutz, 1901, assinalou a presença de hepatozoon nesta serpente;

Sambon a descreveu sob o nome de Haemogregarina terzii em 1909.

Plimmer também a assinalou em 1914 e Carini, 1917, a descreveu com

o nome de Haemogregarina (Karyolysus ) juxtanuclearis. O tripanosoma

encontrado na jibóia foi descrito por Pessoa e Fleury com o nome de

Trypanosoma constrictor em 1969. Neste mesmo ano Bali e cols. descre¬

veram uma nova espécie parasita desta serpente, o Hepatozoon fusiflex.

BIBLIOGRAFIA

1901 — LUTZ, A. — Zentrlb. f. Bak. 1 Abd. Orig. 29: 390-397..

1909 — SAMBON. W. — J. Trop. Med. Hyg. 12: 48-55.

1914 — PLIMMER, H. — Proc. Zool. Soc. London pp. 181-190.

1947 — CARINI, A. — Arq. Biol. 31(279): 61-63.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Bras. Biol. 27(1): 49-56.

1969 — PESSÔA, S. B. e FLEURY, G. C. — Rev. Bras. Biol. 29(1): 81-86.

1969 — BALL, G.H., CHAO, J. e TELFORD JR„ S.R. — Jour. Parsit. 55(4): 800-813.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

FIGURAS 33-37

Hemoparasitas da Boa constrictor

Figs. 33 e 34 — Formas sanguíneas, do Hepatozoon.

Figs. 35 e 36 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos), do Hepatozoon.

Fig. 37 — Trypanosoma constrictor.

1, | SciELO

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. In8t. Butantan, 88: 69-118, 1974.

11 — Corallus caninus (“cobra-papagaio”), figs. 38-40.

A Haemogregarina da Corallus caninus foi descrita por Brimont

(1909) em cobra da Guiana Francesa que lhe não deu nome específico.

Pessoa e cols. admitiram tratar-se de H. luhei e conseguiram o desenvol¬

vimento desta espécie, proveniente do Amapá, no mosquito Culex fatigans

(1970/. Examinamos somente dois exemplares da Corallus caninus,

sendo que somente um estava com Hepatozoon.

BIBLIOGRAFIA

1909 — BRIMONT, E. C. — R. Soc. Biol., Paris, 67: 169-171.

1970 — PESSÔA, S. B., CAVALHEIRO, J. e SOUZA, D. M. — Arq. Instituto Biológico, São

Paulo 37(3): 205-211.

FIGURAS 38-40

SL V

;■ *

nfl-

ate, IN®

l|p

28 Jfckfí&a. *38^

Hepatozoon da Corallus caninus

Figs. 38-40 — Formas sanguíneas (fig. 40, está livre no sangue).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SciELCVo

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, S8: 69-118, 1974.

FIGURAS 41-47

Hemoparasitas da Coralina hortula.nus

Fig. 41 — Forma sanguínea do Hepatozoon.

Fig. 42 — Forma sangüínea do Hepatozoon e esquizonte do Plasmodium, em glóbulos

diferentes.

Fig. 43 — Forma sangüínea livre, do Hepatozoon.

Figs. 44-47 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos), do Hepatozoon. (fig. 47, aumento

X 2500).

SciELO

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G.

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: C9-118, 1974.

Nota sobre a frequência de hemoparasitas

13 — Epicrates cenchria crassus (“salamanta”), figs. 48-49.

Examinados . 37

Parasitados por: Hepatozoon . 6 ... 16%

Trypanosoma . 1

As cobras do gênero Epicrates que se assemelham à jibóia, são de¬

nominadas salamantas; a única espécie deste gênero por nós estudada

foi a Epicrates cenchria crassus. Darling (1912), no Panamá, assinalou

hemogregarina em serpentes do gênero Epicrates; a hemogregarina do

E. cenchria foi descrita em 1931 na Venezuela por Phisalix. O seu tri-

panosoma foi descrito por Pessoa e Fleury, que o denominaram Trypa¬

nosoma salamantae (1969).

BIBLIOGRAFIA

1912 — DARLING, S. T. — Buli. Soc. Path. Exot. 5: 71-73.

1931 — PHISALIX, Mme. — Buli. Soc. Path. Exot. 21,: 187-190.

1969 — PESSÔA, S. B. e FLEURY, G. C. — Rev. Bras. Biol. 29(1): 81-86.

1969 — PESSÔA, S. B. e CAVALHEIRO, J. — Rev. Bras. 29(3): 351-354.

FIGURAS 48 e 49

m 49

Hemoparasitas da Epicrates cenchria crassus

Fig. 48 — Forma sangüínea do Hepatozoon.

Fig. 49 — Trypanosoma salamantae.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S, B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Dutantan, 38: G9-118, 1974.

14 — Eunectes murinus (“sucuri”) — figs. 50 — 52

Examinados . 19

Parasitados por: Hepatozoon . 10

. 53%

Desta espécie, vulgarmente denominada “sucuri”, o Hepatozoon foi

assinalado em 1901 por Lutz e em 1909 por Brimont. Em 1910 foi des¬

crito por Hartmann e Chagas que o denominaram Haemogregarina

lutzi. Posteriormente foi assinalada por Plimmer (1914-1916) ; Migone

(1916) ; Carini (1947).

BIBLIOGRAFIA

1909 — BRIMONT, E. — C. R. Soc. Biol. 67: 169-171.

1910 — HARTMANN, M. e CHAGAS, C. — Arch. fur Protistenk. 20(3): 35-36.

1912 — PLIMMER, H. — Proc. Zool. Soc. 1912: 406-419.

1914 — PLIMMER, H. — Proc. Zool. Soc. 1914: 181-190.

1915 — PLIMMER, H. — Proc. Zool. Soc. 1915: 123-130.

1947 — CARINI, A. — Arq. Biol. 31(279): 61-63.

1916 — MIGONI, L. E. — Buli. Soc. Path. Exot. 9: 359-364.

FIGURAS 50-52

«*.

Hepatozoon da Eunectes murinus

Figs. 50-52 — Formas sangüíneas (fig. 52, livre no sangue).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38'. 69-118, 1974.

FIGURAS 53-58

Hepatozoon da Chironius bicarinatus

Figs. 53 e 54 — Formas sangüíneas (na fig. 54, um Hepatozoon saindo do eritrócito).

Figs. 65 - 68 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

SciELO

SciELCVo

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118. 1974.

FIGURAS 59-66

59 60

Hemoparasitas da Chironius flavohneatus

Fig. 59 — Toddia.

Figs. 60 e 61 — Hepatozoon, formas sangüíneas (fig. 61, livre no sangue).

Figs. 62 - 66 — Hepatozoon, formas tissulares (cistos esquizogônôicos).

SciELO

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. In8t. Butantan, 88: 69-118, 1974.

19 — Chironius foveatus

Examinados . 18

Parasitados por: Hepatozoon . 2

20 — Chironius laevicollis (“cobra-cipó”), figs. 67 — 69.

Examinados . 2

Parasitados por: Hepatozoon . 1

Toddia . 1

11 %

Um único exemplar desta espécie encontrava-se parasitado por

Hepatozoon, que foi descrito por Pessoa (1967), como Haemogregarina

laevicollis. Outro encontrava-se parasitado por Toddia, que Pessoa

(1966) denominou Pyrhemocyton brazili.

BIBLIOGRAFIA

1966 _ PESSÔA, S. B. e CAMPOS, E. P. — Rev. Bras. Biol. 26(i): 417-423.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27(1): 41.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27(2): 159-164.

FIGURAS 67-69

* 1

Hemoparasitas da Chironius laevicollis

Fig. 67 — Toddia.

Fig. 68 — Forma sangüínea do Hepatozoon.

Fig. 69 — Forma tissular (cisto esquizogônico).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S. B., BIASX, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inat. Butantan, 38: 69-118, 1974.

21 — Cyclagras gigas (“surucucu do pantanal”), figs. 70 — 72.

Examinados . 7

Parasitados por: Hepatozoon . 5 ... 71%

Schouten (1934) e Arantes (1934) denominaram, respectivamente,

a hemogregarina de H. migonei e H. cyclagrasi. Segundo Pessoa e cols.

(1970) provavelmente esta cobra é parasitada por duas espécies de Hepa¬

tozoon, uma que é transmitida por sanguessugas Hepatozoon migonei

(Schouten, 1934) e outra por mosquito Culex fatigans, que é o Hepa¬

tozoon cyclagrasi (Arantes, 1934). Nesta espécie Fonseca (1935) des¬

creveu o Trypanosoma mattogrossensi, que não encontramos nos sete

especimens que examinamos.

BIBLIOGRAFIA

1934 — ARANTES, J. V. — Rev. Biol. Hyg. S. Paulo 5: 9.

1934 — SCHOUTEN, C. B. — Rev. Soc. Cient. Paraguay, 3 : 145-147.

1935 — FONSECA, F. da — Mem. Instituto Butantan 9: 189-191.

1970 — PESSOA, S. B., SACCHETTA, L. e CAVALHEIRO, J. — Rev. Lat-Amer. Microbiol.

12 : 197-200.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Alem. In8t. Butantan, 38: 69-118, 1974.

FIGURAS 70-72

Hepatozoon da Oyclagras gigas

Figs. 70 e 71 — Formas sangüineas.

Fig. 72 — Forma tissular (cisto esquizogônico) .

SciELO

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

era serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38 : 69-118, 1974.

22 — Erythrolamprus aesculapii (“falsa-coral”), figs. 73 e 74.

Examinados . 34

Parasitados por: Hepatozoon . 13 ... 38%

O Hepatozoon desta serpente foi descrito por Bõrner em 1901 (in

Simond, 1901) que o denominou Haemogregarina colúbri. Wenyon

(1909) redescreveu-o e descreveu um tripanosoma, o T. erythrolamprii.

Este flagelado não foi por nós encontrado nas serpentes desta espécie,

que examinamos.

BIBLIOGRAFIA

1901 — SIMOND, P. L. — Ann. Instit. Pasteur 15: 319-361.

1908 — WENYON, C. M. — Parasitology 1 : 314-317.

1967 — PESSOA, S.B. — Rev. Brasil. Biol. 27(2 ): 159-161.

FIGURAS 73 e 74

Hepatozoon da Erythrolamprus aesculapii

Fig. 73 — Forma sangüínea.

Fig. 74 — Forma tissular (cisto esquizogônico).

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inat. Butantan, 38: 69-118, 1974.

23 — Helicops carinicaudus (“cobra-d’água”), figs. 75 e 76.

Desta cobra examinamos somente 6 exemplares com dois positivos

para Hepatozoon. Pessoa e Cavalheiro (1969) realizaram a evolução deste

Hepatozoon que denominaram Hepatozoon carinicauda, na sanguessuga

Haementeria lutzi.

BIBLIOGRAFIA

1969 — Rev. Goiana Med. 15: 161-168.

FIGURAS 76 e 76

100

Hepatozoon da Helicops carinicaudus

Fig. 76 — Forma sangüínea livre.

Fig. 76 — Forma tissular (cisto esquirogônico).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

24 — Helicops modestus (“cobra-d’água”), figs. 77 e 78.

Examinados . 54

Parasitados por: Hepatozoon . 1

Dos exemplares examinados, desta espécie, mais comum que a pre¬

cedente, só encontramos um parasitado por Hepatozoon, que foi denomi¬

nado Haemogregarina modesta. Brumpt (1914) descreveu um tripano-

soma nesta espécie, o T. brazili. Porém, no material que examinamos não

tivemos ocasião de encontrar nenhum parasitado pelo tripanosoma des¬

crito por Brumpt.

BIBLIOGRAFIA

1914 — BRUMPT, E. — Buli. Soc. Path. Exot. 7: 706-710.

1928 — BRUMPT, E. — Précis de Parasitologie, 5. tt ed.

1942/1943 — LAVIER, G. — Ann. Parasit. Human et Comp. 19: 168-169.

1969 — PESSÔA, S. B. e CAVALHEIRO, J. — Rev. Brasil. Biol. 29(3): 351-354.

1969 — PESSÔA, S. B. e CAVALHEIRO, J. — Rev. Goiana Med. 15: 155-159.

FIGURAS 77 e 78

rJj

Hepatozoon da Helicops modestus

Figs. 77 e 78 — Formas sangüíneas.

101

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. In8t. Butantan, 38: 69-118, 1974.

25 — Leimadophis poecilogyrus (“cobra-capim”), figs. 79 — 82.

Examinados . 55

Parasitados por: Hepatozoon . 6 _ 11%

Hepatozoon descrito por Pessoa (1967) sob o nome de Haemogre-

garina leimadophisi. Pessoa e Biasi (1974) obtiveram formas evolutivas

jovens na Haementeria gracilis.

BIBLIOGRAFIA

1967 — PESSOA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27(1): 33-46.

1974 — PESSOA S. B. e BIASI, P. — Rev. Pat. Trop. (J): 2, 221-224.

FIGURA 79-82

102

T Q2

i’

^ -'n

Hepatozoon da Leimadophis poecylogirua

Fig. 79 — Forma sangüínea (aumento X 2500).

Figs. 80-82 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

2 3

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUCRTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

era serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 88: 1-12, 1974.

26 — Leimadophis typhlus

Examinados . 9

Todos os exemplares examinados foram negativos para hemo¬

parasitas.

27 — Liophis miliaris (“cobra-d’água”), figs. 88 — 85.

Examinados . 121

Parasitados por: Hepatozoon . 13 ... 11%

Toddia . 1

Este Hepatozoon foi descrito em 1968 por Pessoa que o denominou

Haemogregarina miliaris. Em 1969, Pessoa e Cavalheiro realizaram a

evolução desta espécie em sanguessuga Haementeria lutzi.

BIBLIOGRAFIA

1968 — PESSÔA, S. B. — Rev. Bras. Biol. 28(1): 71-76.

1969 _ PESSÔA, S. B. e CAVALHEIRO, J. — Rev. Bras. Biol. 29(1,): 451-458.

FIGURAS 83-85

83 84 ISLiÉ 85

Hepatozoon da lAophis miliaris

Fifrs. 83 e 84 — Formas sarfjüíneas.

Fig. 85 — Forma tissular, (cisto esquizoRÔnico).

103

2 3 4

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUCRTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Dutantan, 38: 69-118, 1974.

28 — Liophis undulatus

Examinados . 7

Todos exemplares negativos para hemoparasitas.

29 — Mastigodryas bifossatus bifossatus (“jararacussu do brejo”), figs.

86 — 90.

Examinados . 42

Parasitados por: Hepatozoon . 10 ... 24%

O Hepatozoon desta serpente visto em 1901 por Lutz, foi descrito

em 1912, numa cobra do Brasil, com o nome de Haemogregarina drymobii

Marullaz, 1912.

BIBLIOGRAFIA

1912 — MARULLAZ, M. — C. R. Soc. Biol., Paris, 73: 518-520.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27 ( 1 ): 33-46.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27 (3): 333-335.

. FIGURAS 86-90

Hepatozoon da Mastigodryas bifossatus bifossatus

Fírs. 86 e 87 — Formas sanRÜineas.

Fies. 88 -90 Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

104

SciELO

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. lnst . Butantan, 38: 69-118, 1974.

30 — Oxyrhopus trigeminus (“falsa-coral ou boicorá”).

Examinados . 38

Nos exemplares desta espécie que examinamos não encontramos

hemoparasitas.

31 — Philodryas aestivus (“cobra-ver de”), figs. 91 e 92.

Examinados . 20

Parasitados por: Hepatozoon . 2 ... 10%

O Hepatozoon desta espécie foi descrito por Pessoa em 1928, com o

nome de Haemogregarina butantanensis Pessoa, 1928.

BIBLIOGRAFIA

1928 — PESSÔA, S. B. — Rev. Biol. Hyg. 35: 56-61.

FIGURAS 91 e 92

9i mp

' v

* * *

At.

Hepatozoon da Philodryas aestivus

91 — Forma sanguínea.

92 — Forma tissular (cisto esquizogônico).

106

2 3 4

6 SciELO 10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a íreqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

32 — Philodryas nattereri

Examinado . 1

O único exemplar examinado desta espécie encontrava-se positivo

para Hepatozoon. Pessoa (1967) descreveu as formas tissulares (esqui-

zogônicas) do Hepatozoon que Carini considerou como sendo Haemogre-

garina philodryasi. Pessoa (1928) descreveu nesta espécie um Trypano-

soma, que denominou T. philodriasi.

BIBLIOGRAFIA

1928— PESSOA, S, B. — Boi. Biológico, 13: 81-82.

1967 — PESSOA, S. B. — Rev. Bras. Biol. 27(1): 49-56.

FIGURAS 93 e 94

Hepatozoon da Philodryas nattereri

Fig. 93 — Forma sangüínea.

Fig. 94 — Forma tissular (cisto esquizogônico).

106

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inat. Butantan, S8: 69-118, 1974.

33 — Phüodryas olfersii (“boiubú”), figs. 95

Examinados .

Parasitados por: Hepatozoon .

Toddia .

. 32%

. 10 %

O Hepatozoon desta espécie foi assinalado por Lutz (1901) e por

Migone, no Paraguai (1916). A Toddia foi descrita em 1966, por Pessoa,

que a denominou Pyrhemocyton brazili.

BIBLIOGRAFIA

1916 — MIGONE, L. E. — Buli. Soc. Path. Exot. 9: 359-364.

19 66 — PESSOA, S. B. e CAMPOS, E. P. — Rev. Brasil. Biol. M(U)\ 417-423.

FIGURAS 95-97

Hemoparasitas da Philodryas olfersii

Figs. 95 e 96 — Formas sangüíneas do Hepatozoon.

Fig. 97 — Toddia.

107

2 3

6 SClELO 1Q ii 12 13 14 15

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

cm serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

34 — Phüodr7jas patagoniensis (“parelheira”), figs. 98-100.

Examinados . 66

Parasitados por: Hepatozoon . 10 ... 15%

BIBLIOGRAFIA

1901 — LUTZ, A. — Zentrlb. f. Bak. 1 Abd. 29: 390-397.

1928 — PESSÔA, S. B. — Boi. Inst. Hyg. 35: 56-61.

FIGURAS 98-100

108

Hepatozoon da Philodryas patagoniensis

Fig. 98 — Forma sangüínea.

Figs. 99 e 100 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

2 3 4

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B. f BTAST, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 88: 69-118, 1974.

35 — Pseudoboa nigra, figs. 101-105.

Examinado . 1

Somente tivemos oportunidade de examinar um exemplar desta es¬

pécie, que se apresentava positivo para Hepatozoon. Pessoa (1967) des¬

creve como Haemogregarina pseudoboae.

BIBLIOGRAFIA

1907 — PESSÔA, s. B. — Rev. Bras. Biol. 27(1): 49-56.

FIGURAS 101-105

101

102

wEÊím

106

Hepatozoon da Pseudoboa nigra

Fig. 101 — Forma sangüínea.

Figs. 102-105 —- Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

109

2 3 4

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

36 — Rachidelus brazili (“falsa-muçurana”), fig. 106

Examinados . 21

Parasitados por Trypanosoma . 6

28%

Esta cobra também conhecida por falsa-muçurana, é interessante

pelo fato de somente ter sido encontrada parasitada por uma espécie de

Trypanosoma, que Pessoa (1968) descreveu sob o nome de Trypanosoma

hogei.

BIBLIOGRAFIA

1968 — PESSOA, S. B. — 0 Hospital 73(i): 265-270.

FIGURA 106

Tripanosoma da Rachidelus brazili

Fig. 106 — Trypanosoma hogei.

110

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

37 — Sibynomorphus turgidus (“dorme-dorme ou dormideira”)

Desta espécie foram examinados quatro exemplares, todos negativos

para hemoparasitas.

38 — Simophis rhinostoma

Examinados . 17

Parasitado por: Hepatozoon . 1

39 — Spilotes pullatus (“caninana”), figs. 107-109.

Examinados . 2

Parasitado por: Hepatozoon . 1

Lutz descreveu em 1901 como H. serpentium o hepatozoon desta es¬

pécie. Designação essa dada para todas as haemogregarinas das ser¬

pentes.

Pessoa (1968), descreve as formas sanguíneas e tissulares do Hepa¬

tozoon desta serpente, denominando o hemoparasita de Haemogregarina

pullatus.

BIBLIOGRAFIA

1901 — LUTZ, A. — Ztbl. Bakt. Orig. 29: 390-397.

1968 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 28(1): 71-76.

FIGURAS 107-109

107

^° 8 ™

109

•• •- i

VijL I

Hepatozoon da Spilotes pullatus

Fig. 107 — Forma sangüínea.

Figs. 108 e 109 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

111

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

40 — Thamnodynastes pallidus nattereri, figs. 110 — 112.

Examinados . 30

Parasitados por: Hepatozoon . 8 ... 27%

Haemogregarina pal-

lida . 1

Nesta serpente encontramos a única espécie de hemoparasita do gê¬

nero Haemogregarina (sensu strictu) descrita em serpentes. Esta espécie

foi descrita por Pessoa, Sacchetta e Cavalheiro (1971), nesta serpente do

gênero Thamnodynastes, proveniente de Juiz de Fora MG, que denomina¬

ram o hemoparasita Haemogregarina pallida.

Garnham (1965) descreveu em Thamnodynastes pallidus, proveniente

do Brasil, uma espécie de Plasmodium, que denominou P. wenyoni. Não

encontramos nos 36 exemplares de T. pallidus nattereri por nós exami¬

nados espécies do gênero Plasmodium.

BIBLIOGRAFIA

1965 — GARNHAM, P. C. C. — Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 59(3): 277-279

1971 _ PESSOA, S. A., SACCHETTA, L. & CAVALHEIRO, J. Rev. lat.-amer. Microbiol.

13: 29-32.

FIGURAS 110-112

Haemogregarina e Hepatozoon da T. pallidus nattereri

Fig. 110 — Forma sangüínea do Hepatozoon.

Figs. 111 e 112 — Formas sangüíneas da Haemogregarina (s.s.)

112

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. lnst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

41 — Thamnodynastes strigatus (“cobra-espada”), figs. 113 — 116.

Examinados . 192

Parasitados por: Hepatozoon . 43 ... 22%

Plasmodium e Hepa¬

tozoon . 2

Plasmodium . 1

Toddia . 1

Pessoa (1967) descreveu a Haemogregarina strigatus, hepatozoon pa¬

rasita desta serpente; o mesmo autor e cols. (1970) realizaram sua evo¬

lução no Culex dolosus e C. fatigans.

BIBLIOGRAFIA

1967 — PESSOA, S. B. — Rev. Bras. Biol. 27(1): 49-56.

1970 — PESSOA, S. B., CAVALHEIRO, J. e SOUZA, D. M. — Arq. Instit. Biológico, S. Paulo,

37(3): 213-217.

FIGURAS 113-116

■

11 $

Hemoparasitas da Thamnodynastes strigatus

Figs. 113 e 114 — Formas sangüíneas do Hepatozoon.

Fig. 115 — Forma tissular (cisto esquizogônico) do Hepatozoon.

Fig. 116 — Esquizonte em divisão, do Plasmodium.

113

2 3

6 SciELO 10 11 12 13 14 15

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüência de hemoparasita»

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

42 — Tomodon dorsatus (“cobra espada”), figs. 117-119.

Examinados . 179

Parasitados por: Hepatozoon . 7 ... 4%

Plasmodium . 2 ... 1%

Toddia . 7 ... 4%

O Plasmódium da T. dorsatus foi descrito por Pessoa e Fleury (1968)

sob o nome de Plasmodium tomodoni. A Toddia foi descrita por Pessoa

em 1967, como T. tomodoni.

BIBLIOGRAFIA

1967 — PESSOA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27(A): 391-394.

1968 — PESSOA, S. B. e FLEURY. G. C. — Rev. Brasil. Biol. 28(i): 625-530.

FIGURAS 117-119

Hemoparasitas da Tomodon dorsatus

Figs. 117 e 118 — Esquizontes em divisão do Plasmodium tomodoni.

Fig. 119 — Toddia.

114

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a frequência de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

43 — Xenodon guentheri

Examinados . 10

Todos os exemplares desta espécie encontravam-se negativos para

hemoparasitas.

44 — Xenodon merremii (“boipeva”), figs. 120-123.

Examinados . 146

Parasitados por: Hepatozoon . 8 ... 5 %

T rypanosoma . 1

O Hepatozoon desta espécie foi descrito sob o nome de Haemogrega-

rina butantanensi por Arantes em 1931; como o nome estivesse preocupado

(H. butantanensi Pessoa, 1928, da Philodryas aestivus), Pessoa propôs

denominá-la H. arantesi. Os tripanosomas parasitas desta espécie foram

descritos por Arantes e Fonseca em 1931, com o nome de Trypanosoma

butantanensis e T. merremii.

BIBLIOGRAFIA

1931 — ARANTES, J. B. — Mem. Instit. Butantan 6: 237-239.

1931 _ ARANTES, J. B. e FONSECA, F. — Mem. Instit. Butantan 6: 215-222.

1931 — ARANTES, J. B. e FONSECA, F. — Mem. Instit. Butantan 6: 227-229.

1967 — PESSÔA, S. B. — Rev. Brasil. Biol. 27(1): 36.

FIGURAS 120-123

HgmHB 121 |

* ■*«—■

Hepatozoon da Xenodon merremii

Fig. 120 — Forma sangüínea.

Figs. 121-123 — Formas tissulares (cistos esquizogônicos).

116

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B., BIASI, P. & PUORTO, G. — Nota sobre a freqüêneia de hemoparasitas

em serpentes do Brasil.

Mem. Inst. Butantan, S8: 69-118, 1974.

45 — Xenodon neuwiedii (“quiriripitá”).

Examinados . 30

Parasitados por: Hepatozoon . 3

Trypanosoma . 1

. 10 %

O Hepatozoon desta espécie foi descrito por Lutz em 1901.

Consideramos o Trypanosoma desta espécie idêntico a T. butantanen-

sis Arantes e Fonseca, 1931.

BIBLIOGRAFIA

1901 — LUTZ, A. — Zentrlb. f. Bak. 1 Abd. 29: 390-397.

1931 — ARANTES, J. B. — Mem. Instit. Butantan 6: 237-239.

1931 — ARANTES, J. B. e FONSECA, F. — Mem. Instit. Butantan 6: 215-229.

RESUMO E CONCLUSÕES

Considerando-se os dados estatísticos publicados neste trabalho, sobre

os hemoparasitas dos ofídios brasileiros, pode-se ver, em primeiro lugar,

que eles são parasitados pelos protozoários dos seguintes gêneros: Hepa¬

tozoon, Haemogregarina (s.s.), Plasmodium, Trypanosoma, e Toddia.

Devemos assinalar entretanto a provável natureza virótica do último

gênero.

Em segundo lugar verifica-se que os mais freqüentes destes hemopa¬

rasitas são os do gênero Hepatozoon e o menos freqüente pertence ao gê¬

nero Haemogregarina (sensu strictu). Com efeito, enquanto os primeiros

parasitam até 70% dos exemplares de certas espécies de serpentes (por

exemplo 71% das Cyclagras gigas), a Haemogregarina (s.s.) pallida foi

encontrada em um único exemplar da Thamnodynastes pallidus nattereri.

Em certas espécies não encontramos hemoparasitas, como por exemplo,

nas espécies de serpentes do gênero Micrurus ( M. corallinus e M. lemnis-

catus), do qual examinamos, é verdade, poucos exemplares. Também não

encontramos hemoparasitas na Bothrops insularis, espécie restrita à Ilha

da Queimada Grande, SP. Em relação aos outros gêneros de hemopara¬

sitas, assinalamos a freqüêneia relativamente grande com que encontramos

a Bothrops moojeni parasitada por espécies do gênero Plasmodium, que

alcançou 8% de 164 exemplares examinados. As espécies do gênero Trypa¬

nosoma- foram encontradas também em certas cobras, com muita freqüên-

cia, como na Rachidelus brazili (28% de 21 exemplares examinados) e

14% das Boa constrictor.

Finalmente, o gênero Toddia (que é provavelmente vírus), encontra¬

mos espécies de alguns gêneros de serpentes fortemente parasitadas, como

a Bothrops pradoi e a Philodryas olfersii, ambas com 10% de exemplares

positivos; as demais espécies eram negativas ou com baixo parasitismo,

116

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PKSSÔA, S. li., li IAS I. I». & PUORTO, (L

orn serpentes do Brasil.

Mim. Tnst. Ilntantan, 09-118, 11)74.

Nota sobre a freqüoncia de hernoparasitas

de 1 a 2%. Não pudemos ainda chegar a qualquer conclusão sobre o

mecanismo de transmissão destes parasitas sangüíneos.

Em relação aos Hepatozoon sabemos que são transmitidos por mos¬

quitos, flebótomos, carrapatos e sanguessugas. Também conseguimos a

infecção de mosquitos pela Hacmoprvfjarina pallidu, mas em relação aos gé¬

neros Tnjpanosoma e Plasmodium ainda não foi conseguida a elucidação

do mecanismo completo de sua transmissão. Ayala, em vários trabalhos

conseguiu demonstrar a infecção de Pldebotomiis por espécies destes gêne¬

ros, parasitas de lagartixa; nós não tivemos a oportunidade de experimen¬

tar a transmissão do Plasmodium por intermédio de Phlebotomux, porém

experiências com mosquitos foram sempre negativas; conseguimos entre¬

tanto a evolução de espécie de Trypanoaoma de serpentes aquáticas em

sanguessugas, fato aliás demonstrado há muito tempo por Brumpt. Quanto

aos Tripanosomas nas espécies terrestres ou arboricolas das serpentes a

transmissão parece processar-se por meio de mosquitos.

De qualquer forma, devemos levar em consideração também a trans¬

missão congênita destes parasitas, como já demonstramos a sua possibi¬

lidade no que se refere aos hepatozoons (Biasi e cols.). Tais estudos

porém, são difíceis de serem feitos, pois, dependem da criação de ser¬

pentes e do encontro de serpentes prenhes e parasitadas.

Finalmente devemos notar que não encontramos aparentemente dife¬

renças no parasitismo de serpentes vivíparas e ovíparas.

SUM M AliV — The* a u th o rs roport tlu* ro-

sults of a rosoarch on homoparasitos fbuml

i n tho blood of moro than 2,000 snakos

pertaining to 24 gcncra and 15 spocios, vo-

i.omous or not, captured mainly in lho

center-south rogion of Brazil. It has boon

vorifiod thal th o following venera of blood

protozoans parasitizo lho hrazilian snakos:

// c/ui to.zooii , Haemopret/arina (s. s.), I*las-

modium, T rypa nosoma and Todditt. Tho

majority of those homoparasitos bolong to

tho genus Hepatozoon, parasitizing up to

HW/t of cortai n spocios as for instanco

(' pela t/ ras f/if/u»; loss f roquent is Haetno-

{/ repa ri na /m Ilida , lho only spocios of tho

jronus Haeniopret/arina (s. s.), found only

onoo in tho blood of ono single spooimon

of Thamnodynasles pallidus nattereri.

No homoparasitos at all woro found in

certain spocios (in snakos of tho genus

Miernrns, and llothrops insula ris ). Spocios

of tho genus Trypunosoma wo.ro found

with great froquonoy in sovoral snako

spocios, as for instanco Rachidelns brnzili

(in 28 f /t of tho 21 spocimons oxaminod).

As regards tho tfonus Plasmodium , fow

snakos aro parasitizod, howovor, about 8 </<

of somo spocios, as llot h rops moojeni, woro

found to bo infoctod atnong tho KM spo¬

cimons oxaminod. Finally, thoro aro somo

snako spocios, as Hat U rops pradoi and l*hi-

lodryas olfersii markodly parasitizod ( 1 K,y )

by tho genus Toddin (probably a “virus”).

No microfilaria woro found in tho blood

of snakos.

UMT HUM S — Momoparasito froquoncy;

Sorpontos; Blood; 1'lasmodinin; Hepato¬

zoon; Typanosoma; Haemoyreya ri na (s.s.);

Toddin; Microfilaria.

Recebido para publicação em 110-V-11>74 e aceito em 10-X-1D74.

1000 — BRUMPT, K. — (\ R. Soc. Biol. fítl: 1(52.

1970 — AYALA, S. ('. — Jour. Parasitol. 56*: .'187-288.

1971 — AYALA, S. ('. —Jour. Parasitol. .77: 598-002.

1972 — BIASI, I\, PKSSÔA, S. B. o BK LLUOM1NI, II. F.

Janoiro HHtn 27. 28.

Atas Soc. Biologia do Rio do

117

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mtin. List. Hntaatan

3H: 1 lí)-122, 11)74

EVOLUÇÃO DO UEPATOZÜON SP. PARASITA DO LEPTOPHIS

AHAETULLA (LINEU) (SERPENTES, COLUBRIDAE) NO

CULEX FATIfíANS *

SAMUEL Li. PESSÒA**

PKRSIO DB BIASI**

LIA SA('('HETTA***

JiKS UM O — Mosquitos Culex futij/ana

picaram uma serpente não peçonhenta —

Leptophis ahaetulla, parasitada por espé¬

cies dos gêneros Plattmodiu ui e Heputo-

zoon. 0 Hepatozoon s/t. desenvolveu-se re¬

gularmente nos mosquitos, formando espo-

rozoítas no fim de 15 dias; não houve ne¬

nhum desenvolvimento do Planatodia m sp.

ihis ahuet a lia , parasitada por espe¬

tos gêneros Plattmodiu in e Heputo-

O Hcpatozoon s/t. desenvolveu-se re-

1'XITKIlMOS — He/>at.ozoon ; Hemopara-

sitas de serpentes; Hirudinea; Evolução do

ilepatozoon.

INTRODUÇÃO

Em setembro de 1973, examinamos uma serpente não peçonhenta,

Leptophi .s ahaetulla (Lineu) capturada em Promissão, SP e verificamos

estar o ofídio parasitado por plasmódio e por hepatozoon (figs. 1 a 3).

Há muito tempo vimos tentando conseguir a evolução de plasmódios

de serpentes em mosquitos. Já tivemos a oportunidade de experimentar

várias espécies de mosquitos, não só dos gêneros Culex e Aedes, como do

gênero Anopheles (p. ex. o A. darlingi), sempre com resultados negativos.

Como raramente temos encontrado serpentes parasitadas simultanea¬

mente por espécie do gênero Plasmodium e do gênero H epatozoon, apro¬

veitamos a oportunidade para tentar a evolução dos parasitas destes dois

gêneros em mosquito, havendo a possibilidade de se ficar conhecendo as

formas evolutivas de ambos os hemoparasitas (plasmódio e hepatozoon)

ou de apenas um deles, que parasitavam a Leptophis ahaetulla, ainda

não descritos. Realmenle, ocorreu a segunda possibilidade, pois obtivemos

unicamente as formas evolutivas do Hepatozoon sp., parasita daquela

serpente.

MATERIAL E MÉTODOS

O mosquito usado foi o Culex fatigam, criado em laboratório. A

serpente foi colocada na gaiola que continha cerca de 50 fêmeas do Cidex

fatigava, nas noites de 26/27 e 27/28 de novembro. As técnicas usadas

em tais experiências foram descritas em outros trabalhos nossos (1 >,

assim como a manutenção dos mosquitos em gaiolas até a maturação

dos oocistos e formação dos esporozoítas.

* Trabalho feito com o auxílio do Fundo de Pesquisas do Instituto Butantan.

♦* Do Instituto Butantan.

Do Instituto Adolfo Lutz,

Endereço para correspondência:

C.P. G5 — 05504 — S. Paulo — Brasil.

119

2 3

5 6

10 11 12 13 14 15

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Evolução do Hepatozoon sp. parasita

do Leptophis ahaetulla (Lineu) (Serpentes — Colubridae) no Culex fatigans.

Mem. In8t. Dutantan, 39: 119-122, 1974.

Quanto aos parasitas, Plasmodium sp. e Hepatozoon sp. como já

dissemos, não foram ainda descritos. O Plasmodium sp. apresenta rosá¬

ceas com 25-31 células filhas que têm a tendência de se colocar nos pólos

dos glóbulos vermelhos (fig. 1). Não nos alongamos nas considerações

deste parasita, pois estamos preparando um estudo mais amplo sobre os

plasmódios das serpentes brasileiras. O Hepatozoon sp. apresenta game-

tócitos alongados e em alguns exemplares o núcleo também se mostrava

muito alongado (figs. 2 e 3). O parasita não altera nem desloca o núcleo

do glóbulo. Mede cerca de 20 microns de comprimento por 2 a 2,5

microns de largura.

RESULTADOS OBTIDOS

Dez dias após picarem a serpente, dois mosquitos foram dissecados,

com resultados negativos (7/12/73). Cinco dias depois (12/12/73) e

por conseguinte 15 dias após a picada e sucção do sangue da serpente,

dissecando outros exemplares encontramos vários parasitados pelo hepa¬

tozoon, mas todos negativos para plasmódio. Alguns dos mosquitos apre¬

sentavam várias dezenas de cistos de hepatozoon, mas sempre negativos

para o plasmódio. Na figura 4 damos uma microfoto de alguns destes

cistos com aumento pequeno.- Na figura 5, com aumento maior (500x)

pode-se ver os cistos abarrotados de esporocistos; na figura 6 (com

imersão), já se podem ver os cistos cheios de esporocistos com os esporo-

zoítas completamente formados.

Os oocistos jovens medem 100 a 150 microns; os maduros de 150 a

200 microns e os esporocistos de 30 a 45 microns, e no seu interior um

número de esporozoítas muito variável, de 25, 30 até 45 organismos para

cada esporocisto.

Durante os 15 dias da evolução experimental do Hepatozoon parasita

da Leptophis ahaetulla a temperatura oscilou entre 25°C a 30°C e a

umidade relativa entre 78 a 82%.

Alguns mosquitos infectados foram triturados em solução fisiológica

e administrados por sonda gástrica a dois filhotes de Bothrops pradoi

(“jararaca”), que permaneceram negativos.

AGRADECIMENTOS

Agradecemos ao Sr. Joaquim Cavalheiro, do Instituto Butantan, que

capturou a Leptophis ahaetulla e fez a manutenção do exemplar em cati¬

veiro; ao Sr. Francisco C. Vieira, do Instituto Adolfo Lutz que cuidou da

criação dos mosquitos.

SUMMARY — Mosquitoes Culex fatigans

were induced to bite a non poisonous snake,

Leptophis ahaetulla infested with parasites

of both genera Plasmodium and Hepato¬

zoon.

Hepatozoon sp. developed normally in

the mosquitoes, forming sporozoites at the

120

end of 15 days, however, no development

of any Plasmodium sp. could be detected.

UNITERMS — Hepatozoon; Hemoparasi-

tes of serpentes; Hirudinea; Hepatozoon

evolution.

PESSOA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Evolução do Hepatozoon sp. parasita

do Leptophis ahaetulla (Lineu) (Serpentes — Colubridae) no Culex fatigans.

Mem. Inst. Butantan, 39: 119-122, 1974.

BIBLIOGRAFIA

PESSOA, S. B. BELLUOMINI, H. E„ BIASI, P. e SOUZA M. (1971). Notas sobre hemo-

gregarinas de serpentes brasileiras XIV — Esporogonia da hemogregarina de Bothrops

moojeni Hoge, 1963 no Culex dolusus (L. Arribalzaga, 1891).

Arquivos Inat. Biológico, S. Paulo, 38(4): 253-268.

Recebido para publicação em 30-V-1974 e aceito em 10-X-1974.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Fig. 1 — Plasmodium sp. parasitando a Leptophis ahaetulla.

(Aumento 2000 X)

Fig 2 — Hepatozoon sp. e Plasmodium sp. no sangue da L. ahaetulla.

Focalizados no mesmo campo microscópico. (Aumento 2000 X)

F ig. 3 — Hepatozoon sp. parasitando a L. ahaetulla. (Aumento 2000 X)

Fig. 4 — Oocistos jovens de Hepatozoon sp. (da L. ahaetulla)

na cavidade geral do Culex fatigans. (Aumento 100 X)

Fig. 5 — Oocisto, com grande número de esporocistos na cavidade

geral do Culex fatigans que sugou a serpente L. ahaetulla.

(Aumento 500 X)

Fig. 6 — Esporocistos de Hepatozoon sp. de L. ahaetulla cheios

de esporozoítas ainda no interior do oocisto. (Aumento 1000 X)

121

10 11 12 13 14 15

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Evolução do Hepatozoon sp. parasita

do Leptophis ahaetulla (Lineu) (Serpentes — Colubridae) no Culex fatigans.

Mem. Inst. Butantan, 39: 119-122, 1974.

122

Alem. Inst. Butantan

38: 1283-130, 1974

NOTA SOBRE O HEPATOZOON TUPINAMBIS (LAVERAN E

SALIBENI, 1909) ( PROTOZOA, APICOMPLEXA), PARASITA

DO TEJÚ ( TUPINAMBIS TEGUIXIN LINEIJ, 1758) (S AU RI A,

TEIIDAE) *

SAMUEL B. PESSOA**

PÉRSIO DE BIASI**

LIA SACCHETTA***

RESUMO — Os autores examinaram 40

tejús (Tupinambis teguixin) de várias loca¬

lidades brasileiras, tendo encontrado 9 deles

parasitados por Hepatozoon spp. Em 3

tejús do Ceará e em 3 de São Paulo o

parasita foi identificado como sendo o

Hepatozoon tupinambis (Laveran e Sali-

beni, 1909;, não sendo identificados os

parasitas dos outros 3 lagartos, 2 de Santa

Catarina e 1 do Rio de Janeiro. Descre¬

vem as formas esquizogônicas e a evolução

do hepatozoon em mosquitos (Culex fati-

gans). Somente conseguiram a evolução do

H. tupinambis parasita dos lagartos de

São Paulo (Ilha Solteira); não consegui¬

ram a evolução daqueles que parasitam o

T. teguixin do Ceará. Pretendem estudar

futuramente a causa desta diferença.

UNITERMOS — Hemoparasita de Sauria;

Hepatozoon tupinambis; Evolução do He¬

patozoon.

INTRODUÇÃO

Laveran e Salibeni, apresentaram em 18 de janeiro de 1909 à Aca¬

demia de Ciências da França (6) , a descrição de uma espécie nova de

hemogregarina parasita do Tupinambis teguixin, (I) da Ilha do Gover¬

nador (Guanabara, Brasil), vulgarmente denominada “tejú” ou “teiú”.

Denominaram este parasita Haemogregarina tupinambis. Dez dias

depois, Carini (2) , na Sociedade Científica de São Paulo, leu a descrição

de duas novas espécies de hemogregarinas, parasitas do Tupinambis

teguixin, capturado nos arredores de São Paulo, e as denominou H. tupi-

nambisi e H. missoni. Laveran <4) após examinar os preparados de Carini

concluiu que a II. tupinambis Laveran e Salibeni era diferente da H.

tupinambisi Carini e propôs que esta última espécie fosse denominada

de H. caranii Laveran, 1909. Quanto à segunda espécie de Carini, Laveran

sugeriu tratar-se de forma jovem da H. carinii (= H. tupinambisi).

Em 1914 Ducceschi (3) descreveu uma nova espécie de hemogregarina,

parasita do T. teguixin, que denominou II. iguanae. Também Plimmer

em 1912 (10) e Migone <7) em 1916 assinalaram a presença de hemogre¬

garinas no tejú.

Talice, em 1929 (12) foi o primeiro autor a descrever um esporozoário

parasita de um Triatomíneo, pois encontrou grandes cistos de um espo-

• Trabalho do Instituto Butantan, São Paulo, feito com o auxílio do Fundo de Pesquisas deste

Instituto.

** Do Instituto Butantan, São Paulo.

•** Do Instituto Adolfo Lutz, São Paulo.

(I) A designação genérica do lagarto é a do “Catalogue of Neotropical Squamata; Part II. Lizards

and Amphisbaenians” — James A. Peters e Roberto Donoso — Barros; Smithsonian Institution

United States National Museum, Washington, 1970.

Endereço para correspondência:

C.p. 65 — 05504 — São Paulo — Brasil.

123

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Notas sobre o Hepatozoon tupinambis

(Laveran e Salibeni, 1909) (Protozoa, Apicomplexa), parasita do Teju ( Tupinambis teguixin

Lineu, 1768) (Sauria, Teiidae).

Mem. Inst. Butantan, 38: 123-130, 1974.

rozoário e esporozoítas livres na parede intestinal do Triatoma rubro-

varia. Considerou estes cistos como formas evolutivas de uma hemogre-

garina que, possivelmente, teria um lagarto como hospedeiro vertebrado.

Posteriormente Osimani (8) descreveu outro esporozoário parasita do

Tupinambis teguixin, que considerou, provavelmente, transmitido pelo

Triatoma rubrovaria. Denominou-o Haemogregarina triatomae, que foi

colocado no gênero Hepatozoon por Reichenow (u> em 1953.

Bice (1) em 1965 encontrou um Hepatozoon em 9 exemplares de 451

Triatoma rúbida uhleri do Arizona (E.U.A.). Este autor, após discutir

a possibilidade deste parasita ser idêntico ao Hepatozoon triatomae

(Osimani, 1942) Reichenow, 1953, emitiu a hipótese de ser uma lagartixa

o Sceloporus magister, o hospedeiro vertebrado do esporozoário.

Finalmente, não podemos deixar de referir que, em 1917, Leger e

Mauzels (6) descreveram, no Tupinambis nigropunctatus, a Haemogrega¬

rina weinbergi que, segundo os seus descobridores, parasita unicamente

os glóbulos brancos do lagarto. Não vimos mais referências, na literatura

por nós consultada, sobre esta espécie, e nós mesmos não a encontramos

no único exemplar de Tupinambis nigropunctatus por nós examinado e

proveniente da lha Solteira (São Paulo).

II — MATERIAL E MÉTODOS

Examinamos esfregaços de sangue fixados pelo metanol e corados

pelo Giemsa. Foram feitos, também, exames histológicos de cortes de

tecidos de dois tejús parasitados, bem como esfregaços dos tecidos cora¬

dos pelo Giemsa. Os cortes eram corados pela hematoxilina-eosina. Tive¬

mos oportunidade de examinar 40 exemplares de Tupinambis teguixin,

de várias procedências; estes lagartos foram coletados desde 1967 até

1973, conforme demonstramos no quadro I.

As técnicas para tentativas de infecção experimental por meio de

mosquitos já foram dadas em outros trabalhos dos autores (9> . As técnicas

para tentativa de infecção de “barbeiros” (triatomíneos), também já

foram ali descritas.

QUADRO i

Número de Tupinambis teguixin examinados, com a procedência,

e resultados obtidos

Procedência

Examinados

Positivos para

hepatozoon

São Paulo — Ilha Solteira .

Paraná ..

Rio de Janeiro .

Santa Catarina .

Ceará .

Mato Grosso .

Outras localidades .-.

Procedência desconhecida .

TOTAL .

124

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Notas sobre o Hepatozoon tupinambia

(Laveran e Salibeni, 1909) (Protonoa, Apicomplexa), parasita do Teju (Tupinambia teguixin

Lineu, 1758) (Sauria, Teiidae).

Mem. Inat. Butantan, 38: 123-130, 1974.

III — RESULTADOS OBTIDOS

O quadro I registra os Estados donde foram recebidos os lagartos,

o número de positivos e de negativos para Hepatozoon em geral. Como

vemos por ele, tivemos a oportunidade de examinar 40 exemplares de

T. teguixin de 6 Estados, tendo encontrado 9 lagartos parasitados por

espécies do gênero Hepatozoon.

Os parasitas — Como vimos foram descritas cinco espécies de Hepa¬

tozoon parasitas do Tupinambis teguixin:

H. tupinambis (Laveran e Salibeni, 1909)

H. missoni (Carini, 1909)

H. carinii (Laveran, 1909)

H.iguanae (Ducceschi, 1914)

H. triatomae (Osimani, 1932)

Nós somente conseguimos identificar uma única espécie de Hepa¬

tozoon, nos lagartos por nós examinados, o Hepatozoon tupinambis

(Laveran e Salibeni, 1909), que parasitava tejús provenientes de São

Paulo (Ilha Solteira) e do Ceará (Fortaleza).

Além destes 6 lagartos parasitados pelo H. tupinambis encontramos

três outros, um do Estado do Rio de Janeiro e dois do Estado de Santa

Catarina, parasitados por espécies de hepatozoons que não conseguimos

determinar (Figs. 1 e 2), e que nos parece, são, provavelmente, parasitas

de lagartixas que invadiram os tejús, como lembrou Bice, para o caso

do H. triatomae.

HEPATOZOON TUPINAMBIS (LAVERAN E SALIBENI, 1909)

(Figs. 3-6)

sin : Haemogregarina tupinambis Laveran e Salibeni, 1909

” : Haemogregarina carinii Laveran, 1909

” : Haemogregarina tupinambisi Carini, 1909

Distribuição geográfica — Estado da Guanabara (Laveran e Sali¬

beni, 1909) ; São Paulo, Capital (Carini, 1909). Nós encontramos esta

espécie parasitando tejús de S. Paulo (Ilha Solteira) e do Estado do

Ceará, que nos foram enviados pelo Prof. Livino V. Pinheiro da Facul¬

dade de Medicina da Universidade Federal do Ceará.

Descrição — A descrição desta espécie foi excelentemente feita por

Laveran e Salibeni e por Carini, em 1909 e posteriormente, no mesmo

ano, novamente por Laveran. Pensamos não ser necessário repisar o que

já foi tão bem registrado. Laveran e Salibeni, no ano citado, também

deram boas figuras do parasita.

Faremos aqui somente anotações sobre certos pontos que nos pa¬

recem mais interessantes. Assim o parasita determina alterações pro-

125

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSOA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Notas sobre o Hepatozoon tupinambia

(Laveran e Salibeni, 1909) (Protozoa, Apicomplexa), parasita do Teju (Tupinambia teguixin

Lineu, 17B8) (Sauria, Teiidae).

Mem. Inet. Butantan, 38: 123-130, 1974.

fundas sobre o glóbulo vermelho parasitado; o núcleo do glóbulo pode

ser deslocado, torna-se delgado e alongado (Fig. 4) e muitas vezes é

dividido em duas porções, que se colocam nos dois polos celulares (Fig. 5).

Muitas vezes determina o Hepatozoon grande hipertrofia do glóbulo

(Fig. 6) que chega a alcançar 36 a 37 micras de comprimento por 12

a 13 micras de largura; a sua coloração torna-se muito pálida. Nas

várias microfotografias que apresentamos pode-se ver uma cápsula que

envolve o parasita.

Formas esquizogônicas tissulares — Não tinham sido até hoje des¬

critas as formas esquizogônicas tissulares do H. tupinambis. Nós as en¬

contramos no fígado e pulmão, mais freqüentemente, porém, no primeiro

daqueles órgãos. Examinamos também a medula óssea e a mucosa intes¬

tinal, sem conseguir assinalá-los.

Na Fig. 7 damos a microfotografia de um corte de pulmão, com cisto

esquizogônico do Hepatozoon tupinambis, do tejú de Fortaleza (Ceará).

(Tejú, n.° H-554). Nota-se que não difere dos cistos esquizogônicos por

nós descritos em infecções de serpentes por espécies de hepatozoon.

Na Fig. 8 vê-se um corte de fígado de T. teguixin de Fortaleza, com

um cisto esquizogônico de H. tupinambis. Trata-se de um macrocisto em

que se podem ver cerca de 36 pequenas células esquizogônicas situadas

na periferia do macrocisto, que ao se romper porá em liberdade os mi-

cromerozoítas.

Na Fig. 9 temos um corte de pulmão de T. teguixin de Fortaleza

com cisto esquizogônico do H. tupinambis, com dois macromerozoítas.

Esporogonia — Tentamos a evolução do parasita em carrapatos,

sanguessugas e mosquitos. Desde logo queremos assinalar que, nas nossas

experiências, somente conseguimos a evolução esporogônica do H. tupi¬

nambis em mosquitos, no caso, o Culex fatigans. Tentativas para con¬

seguir sua evolução empregando sanguessugas — Haementeria gracilis

(Weyenbergh), carrapatos — Amblyomma agammum (Aragão) ou bar¬

beiros — Rhodnius prc^ixus Stal e Panstrongylus megistus (Burmeister)

foram negativas.

Esporogonia no Culex fatigans — A técnica para a evolução em

condições experimentais de hemogregarinas de animais de sangue frio,

foi por nós descrita em outro trabalho (9) , não sendo necessário aqui

repetir. Os resultados positivos foram obtidos com Culex fatigans, cria¬

dos'em laboratório, que picaram tejus capturados na Ilha Solteira e

parasitados pelo H. tupinambis.

Nas duas experiências em que obtivemos a evolução completa do

hepatozoon, a temperatura mínima foi de 24.°C e a máxima de 31.°C;

a umidade variou entre 76 a 82%. Também queremos assinalar que não

conseguimos obter a evolução do hepatozoon parasita do teju do Ceará

mas somente nos da Ilha Solteira; foram feitas duas tentativas com os

lagartos do Ceará, e em uma delas os tejus do Ceará e da Ilha Solteira

foram colocados em idênticas condições, porém somente evoluíram os

hepatozoons dos tejus da Ilha Solteira. As experiências foram em pe-

126

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Notas sobre o Hepatozoon tupinambis

(Laveran e Salibeni, 1909) (Protozoa, Apicomplexa), parasita do Teju (Tupinambis teguixin

Lineu, 17B8) (Sauria, Teiidae).

Mem. Inst. Butantan, 38: 123-130, 1974.

queno número para chegarmos a qualquer conclusão; pretendemos pos¬

teriormente estudar melhor o assunto.

Os cistos esporogônicos jovens (Fig. 10) são semelhantes aos dos

outros hepatozoons que evoluem em mosquitos já descritos pelos autores (0) .

Quinze dias após a picada encontramos mosquitos com 50 e mais cistos

na cavidade geral, com numerosos esporocistos (Fig. 11). Vinte e dois

dias após a picada já encontramos cistos maduros, isto é, com esporo-

zoítas (Fig. 12). O número de esporozoítas varia bastante desde 7 até

30 por esporocisto. Já com 23 dias encontramos os esporozoítas formados,

praticamente em todos os cistos (Fig. 12). Finalmente nas Figs. 13 e 14

vemos os esporozoítas livres na cavidade geral do Culex; os núcleos são

grandes, situados no meio do corpo do organismo ou em uma das extre¬

midades. Os esporozoítas vivos apresentam movimentos lembrando as

larvas do Strongyloides stercoralis; o núcleo parecia deslocar-se.

SUMMARY — The authors examined 40

“tejua” (Tupinambis teguixin) from seve-

ral brazilian localities, and found 9 of them

paraaitized by Hepatozoon spp. In 3 “tejua”

from Ceará, and 3 from São Paulo, the

paraaite haa been identified aa Hepatozoon

tupinambis (Laveran & Salibeni, 1909);

the paraaitea of the other 3 lizards,

2 from Sante Catarina and 1 from Rio de

Janeiro, have not been identified. The

authora describe the schizogonic forma of

H. tupinambis in anake8, and their evo-

lution in moaquitoea (Culex fatigans). Suc-

cessful experimental evolution haa been

attained only of the H. tupinambis, para¬

sites of the São Paulo -(Ilha Solteira)

lizards.

UNITERMS — Hemoparasitea of Sauria;

Hepatozoon tupinambis; Hepatozoon evolu¬

tion.

AGRADECIMENTOS

Ao Prof. Dr. Livino V. Pinheiro, da Faculdade de Medicina da Uni¬

versidade Federal do Ceará e ao Sr. Rodrigo A. Monteiro, por nos terem

enviado tejus do Ceará e de Mato Grosso, respectivamente, à Dra. Maria

A. de Souza (do Instituto Oswaldo Cruz) e à Dra. Eva M. Kellen (do

Instituto Butantan) por nos terem fornecido, respectivamente, os tria-

tomíneos e as sanguessugas que usamos em nossas experiências; aos

universitários Giuseppe Puorto e Wilson Fernandes, pelo auxílio técnico.

BIBLIOGRAFIA

l BICE, D. E. — 1965 — A sporozoon Parasite of Triatoma rúbida uhleri Rev. Biol.

Trop. 13 (2):293-296.

2. CARINI, A. — 1909 — Duas hemogregarinas do Tupinambis teguixin. Rev. Soc. Cient.

de S. Paulo 1*1 :75-78.

3. DUCCESCHI V. — 1914 — Note di Parassitologia comparata dei sangue. Ann. Jg.

Sperim. 24:269-273.

4 LAVERAN, A. — 1909 — Au suget des Hémogregarines de Tupinambis teguixin L. C. R.

Soc. Biologie 2: 9-10.

5. LAVERAN, A. e SALIBENI — 1909 — Sur une hémogregarine de Tupinambis teguixin

L. C. R. Acad. Science Paris, 1tf#:132-134.

6. LEGER, H. c MAUZELS, E. — 1917 — Hemogregarine intraleucocytaire d’un Saurien,

Tupinambis teguixin. Buli Soc. Path. Exot. 10: 283-284.

127

SciELO

10 11 12 13 14 15

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Notas sobre o Hepatozoon tupinambi *

(Laveran e Salibeni, 1909) (Protozoa, Apicomplexa), parasita do Teju (Tupinambis teguixin

Lineu, 1758) (Sauria, Teiidae).

Alem. Inst. Butantan, 38: 123-130, 1974.

7. MIGONE, L. E. — 191G — Parasitologie de certains animaux du Paraguay. Buli. Soc.

Path. Exot. 9:359-364.

8. OSIMANI, J. G. — 1942 — Haemogregarina triatornae n. sp. from a South American

Lizard Tupinambis teguixin, transmited by the reduviid Triutoma rubrovaria. Jl.

Parasitology 28:147-154.

9. PESSÔA, S. B. BIASI, P. DE e SOUZA, D. M. — 1972 — Esporulação do Hepatozoon

caimani (Carini, 1909), parasita do jaearé-de-papo-amarelo ( Caiman latirostris Daud.)

no Culex dolosus (L. Arribalzaga). Alem. Inst. Osw. Cruz 70:379-383.

10. PLIMMER, II. G. — 1912 —- On the blood-parasites found in animais in the Zoological

Gardens, during the four years, 1908-1912. Proc. Zool. Soc. 406-419.

11. REICHENOW, E. — 1953 — Donflein-Reichenow’s Lehbuch der Protozoenkunde. 6. a Ed.

Gustav. Fisher, 1213 p. p.

12. TALICE, R. R. — 1929 — Parasitisme de Triatoma rubrovaria par un sporozoáire. Ann.

Parasit. Hum. Comp. 7: 257-261.

Recebido para publicação em 30-V-1974 e aceito em 10-X-1974.

EXPLICAÇÃO DAS FIGURAS

Fig. 1 — Hepatozoon sp. do T. teguixin do Estado do Rio de

Janeiro. X 1000.

Fig. 2 — Hepatozoon sp. do T. teguixin do Estado do Espírito

Santo. X 1000.

Figs. de 3 a 14 — microfotografias do Hepatozoon tupinambis.

Fig. 3 — O parasita apresenta 2 pigmentos; o núcleo do eritrócito

está deformado e empurrado para um dos lados do glóbulo, que

não mostra seu contorno. X 2000.

Fig. 4 — O parasita apresenta um núcleo frouxo e em forma de

rede que se estende por quase toda a extensão do seu corpo.

Cápsula parasitária bem visível. X 2500.

Fig. 5 — O parasita alterou e rompeu o núcleo do glóbulo em

duas porções que se colocaram nos pólos celulares. X 1800.

Fig. 6 — Nota-se grande hipertrofia do glóbulo vermelho parasi¬

tado que alcança 37 micras de comprimento por 12,5 micras de

largura; a coloração é muito pálida e o núcleo celular deslocado,

é muito delgado e alongado. X 1800.

Fig. 7 — Corte de pulmão do tejú com um cisto esquizogônico,

mostrando três merozoítas (macromerozoítas). X 1800.

Fig. 8 — Corte de fígado do tejú, para mostrar um cisto esquizo¬

gônico (macrocisto) com cerca de 30 pequenos merozoítas (micro-

merozoítas). X 1000.

Fig. 9 — Corte de pulmão do tejú para mostrar um cisto esquizo¬

gônico com dois macromerozoítas. X 1800.

Fig. 10 — Oocisto jovem na cavidade geral do mosquito com 10

dias após a picada do Culex fatigans no tejú. X 300.

Fig. 11 — Oocisto, 15 dias após a picada. X 400.

Fig. 12 — Oocisto maduro do Hepatozoon do tejú da Ilha Solteira

(São Paulo); grande número de esporocistos com esporozoítas,

23 dias após a picada. X 1800.

Fig. 13 — Esporozoítas livres na cavidade geral do Culex fatigans.

X 1000.

Fig. 14 — O mesmo. X 1800.

128

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Notas sobre o Hepatozoon tupinambia

(Laveran e Salibeni, 1909) (Protozoa, Apicomplexa), parasita do Teju (Tupinambia teguixin

Lineu, 1758) (Sauria, Teiidae).

Mem. Inat. Butantan, 38: 123-130, 1974.

129

SciELO

PESSÔA, S. B., BIASI, P. & SACCHETTA, L. — Notas sobre o Hepatozoon tupinambis

(Laveran e Salibeni, 1909) (Protozoa, Apicomplexa), parasita do Teju (Tupinambis teguixin

Lineu, 1758) (Sauria, Teiidae).

Mem. Inst. Butantan, 38: 123-130, 1974.

SciELO

Mcm. In8t. Butantan

38: 131-136, 1974

SOME COMPLEMENTARY NOTES ON THE BIOLOGY OF

EXETASIS EICKSTEDTAE SCHLINGER 1972, A FLY

PARASITING MYGALOMORPH SPIDERS

VERA REGINA DESSIMONI VON EICKSTEDT

(Secção de Artrópodos Peçonhentos, Instituto Butantan).

ABSTRACT — Biological information on

parasitism in the mygalomorph spider

Lasiodora klugi (C. L. Koch) by Exetasis

eickstedtae (DIPTERA; ACROCERIDAE)

was published in a previous paper (3). In

this article some additional notes are given,

with photograpbs of the several stages of

the fly. For the first time, six ACROCE-

RIDAE larvae were recorded to emerge

from one host spider.

UNITERMS — Internai parasitism by

Acrocerid fiies; Acrocerid spider parasites;

Lasiodora klugi (ARANEAE; MYGALO-

MORPHAE) as host of Exetasis eicksted¬

tae (DIPTERA; ACROCERIDAE).

INTRODUCTION

In a previous paper (3) the author related three cases of double para¬

sitism in the mygalomorph spider Lasiodora klugi (C. L. Koch), 1842

by dipterous larvae of the gentis Exetasis (DIPTERA; ACROCERIDAE)

which were subsequently described by E. Schlinger as Exetasis

eickstedtae {6) .

On May, 1973 during a routine inspection of the tarantulas kept alive

in the “Secção de Artrópodos Peçonhentos” of the Instituto Butantan I

noticed a new case involving the same host and parasite. In this time,

however, six larvae had emerged from the spider. Instances of multiple

parasitism were earlier reported by Jenks (4) who mentioned that “twins

and triplets and very rarely “quadrupleis” are found in an occasional

spider, and in these cases the adult flies are dwarfed”, and by Baerg U)

who illustrated his work with a photograph where four larvae are seen

leaving one single tarantula. This is the first report of six ACROCERI-

DAE larvae emerging from one host spider.

MATERIAL AND METHODS

At arrival in the laboratory the spider was placed in a separate

wooden cage and checked regularly. It was fed with a live baby mouse

every month until its death. Then it was preserved in 75° alcohol and

is now in the Arachnological Collection of the Instituto Butantan (N°

4118 IB) identified by the author as Lasiodora klugi (C. L. Koch)

(MYGALOMORPHAE; THERAPHOSIDAE).

The cage with the parasitic larvae was isolated from the others and

checked every day. The several phases of the metamorphosis process

were photographed and annotated on a eard.

The immature larval stages and one imago (a male) were sent to

Prof. E. Schlinger (University of Califórnia, Berkeley, U.S.A.) who

ADUESS — C.P. 65 — 05504 — São Paulo — llrusil.

131

SciELO

10 11 12 13 14 15

EICKSTEDT, V. R. D. von — Some complementary notes on the biology of Exetasis

eickstedtae Schlinger 1972, a fly parasiting Mygalomorph spiders.

Mem. Inst. Butantan, 88: 131-13G, 1974.

identified them as Exetasis eickstedtae Schlinger 1972 (DIPTERA;

ACROCERIDAE). These specimens were included in the ACROCERI-

DAE collection of Prof. Schlinger.

BIOLOGICAL DATA

On Noveraber 17, 1971 the Instituto Butantan received a specimen

of Lasiodora klugi sent by the company Moinho Santista S.A. The spider

had been captured from a hole in a log of rosewood from Itanhem,

Bahia (Brazil). It was sent to the Instituto Butantan for information

about its medicai importance.

On November 16, 1972 the spider moulted in the laboratory and on

May 11, 1973, it was found dead in its cage. A tangle of silken threads

occupied a great part of the space of the cage and hanging from these

threads there were five large yellow-white larvae, and on the ground

there was one more (PHOTOGRAPH 1). Tiny newborn insect larvae

(planidia) had penetrated into the spider body and parasitized it until

reaching the third larval stage. After consuming the major part of the

spider’s content they emerged from the dying host and crawled to the

web spun by the spider a short time before the emergence of the parasites.

In this way they guarantee their food supply and may complete the

last stage of their metamorphosis on the outside.

From the above data it can be concluded that the larvae need at

least a period of 540 days to mature whitin the hosfs body. I had

already observed in 1971 (3) a similar case of parasitism where the larval

period of Exetasis eickstedtae was at least 577 days. Since the spiders

are already infested at arrival, the exact duration of this period is not

known.

On May 16, 1973 four larvae had pupated. Three of them were

hanging from the web, and one was lying on the floor of the cage. Two

others died before pupation, and were preserved in 75° alcohol on May

23 and 30, 1973 respectively (PHOTOGRAPH 2).

On June 16, 1973 the specimen on the floor freed itself from the

* pupal skin and began to walk slowly (PHOTOGRAPH 3). It had an

orange to yellowish body itàth black head and legs.

DISCUSSION

In all four successful cases of parasitism by Exetasis eickstedtae

observed at our laboratory, the host has been a Lasiodora klugi, a com-

mon spider in the distribution area of these flies. The larvae has always

emerged from an immature or juvenile female suggesting that it is

profitable that the larval phase of Exetasis eickstedtae matures whitin

a growing up host.

As mentioned by Schilinger <6 > “in E. eickstedtae successful “super-

parasitism” may be the rule rather than the exception”. It may well

132

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V. R. D. von — Some complementary notes on the biology of Exetasis

eickstedtae Schlinger 1972, a fly parasiting Mygalomorph spiders.

A/em. Inst. Butantan, 88: 131-136, 1974.

be that several larvae penetrate each host, and that the number of larvae

emerging from it depends on the conditions offered by the same.

From the six emerged larvae only one reached adulthood, probably

the only that stored sufficient amount of energy (in form of food reserve)

to further its subsequent phases of development (pupa — imago).

RESUMO — Em trabalho anterior (3),

relatamos algumas observações sobre três

casos de parasitismo interno entre a aranha

caranguejeira Lasiodora klugi (MYGALO-

MORPHAE; THERAPHOSIDAE), e um

díptero parasita da família ACROCERI-

DAE, posteriormente identificado pelo Prof.

E. Schlinger (Universidade da Califórnia,

Berkeley, E. U. A.) como espécie nova do

gênero Exetasis, que ele descreveu como

Exetasis eickstedtae (6). Neste artigo são

descritas algumas notas complementares

sobre este assunto, ilustradas com fotogra¬

fias da metamorfose do inseto parasita.

Pela primeira vez é mencionado o fato de

seis larvas de ACROCERIDAE terem emer¬

gido de um único hospedeiro.

UNITERMS: — Moscas de parasitas de

UNITERMS: — Moscas parasitas de

aranhas caranguejeiras; Lasiodora klugi

(ARANEAE; MYGALOMORPHAE) hospe¬

deira de Exetasis eickstedtae (DIPTERA;

ACKNOWLEDGEMENTS : I am indebted

to Prof. E. Schlinger who kindly identified

the ACROCERIDAE specimens, to Dr. N.

Papavero (Museu de Zoologia, Universidade

de S. Paulo) for reviewing the manuscript

and to Ms. Heller for translating it.

REFERENCES

1. BAERG, W. J. — The tarantula. Lawrence, Kansas vii -j- 1-88,19 illustr., 1958.

2. EASON, F. R., W. B. PECK and W. H. WHITCOMB — Notes on spider parasites,

including a reference list, J. Kansas Ent. Soe., 40(3) :422-434, 1967.

3. Von EICKSTEDT, V. R. D. — Three cases of parasitism in the Mygalomorph spider

Lasiodora klugi (C. L. Koch) by a fly of the genus Exetasis (DIPTERA; ACROCE-

RIDAE) in Brazil, A/em. Inst. Butantan, *5:139-146, 1971.

4. JENKS, G. E. — Marvels of metamorphosis. Nat. Geogr. Mag., 74(6) :807-828, 1938.

6. MONTGOMERY, T. H. — Studies on the habits of spiders, particularly those of the

mating period. Proc. Acad. Nat. Sei. Philad., 55:51-149, 1903.

6. SCHLINGER, E. — A new Brazilian panopine species, Exetasis eickstedtae, reared from

the Theraphosid spider, Lasiodora klugi (C. L. Koch), with a description of its immature

larval stages (DIPTERA; ACROCERIDAE), Papéis Avulsos Zool, S. Paulo, 26(1):

73-82, 1972.

Recebido parn publicação em 14-V-1974 e aceito em 16-IX-1974.

133

SciELO

10 11 12 13 14 15

EICKSTEDT, V. R. D. von — Some complementary notes on the biology of Exetasis

eickstedtae Schlinger 1972, a fly parasiting Mygalomorph spiders.

Mem. Inst. Butantan, 38: 131-136, 1974.

PHOTOGRAPH 1 — Eive Exetasis eickstedtae larvae hanging from

the web spun by Lasiodora klugi and another larva on the floor

of the cage. At right, a Container with the spider’s skin.

PHOTOGRAPH 2 — In the foreground, two dead Exetasis eick

stedtae larvae preserved in 75.° alcohol, and in the background,

four pupae.

1, | SciELO

134

EICKSTEDT, V. R. D. von — Some complementary notes on the biology of Exetasis

eickstedtae Schlinger 1972, a fly’ parasiting Mygalomorph spiders.

.1/em. Inst. Butantan, 88: 131-136, 1974.

PHOTOGRAPH 3 — Imago of Exetasis eickstedtae freed from the

puparium.

135

SciELO

Mem. irist. Butantan

SH : 137-146, 1974

NOTES ON Xenopholis PETERS AND Paroxyrhopus SCHENKEL*

(Serpentes: Colubridae)

by A. R. HOGE and P. A. FEDERSONI JR.**

Seção de Herpetologia, Instituto Butantan - São Paulo - Brasil

ABSTRACT — The penus Paroxyrhopus

Schenkel is considered as a synonym of

Xenopholis Peters.

The species rcticulatus is considered as

a synonym of undulatus.

UNITERM S — Paroxyrhopus Schenkel,

1902. Paroxyrhopus rcticulatus Schenkel,

1902. Xeyiopholis Peters, 18G9. enopholis

scalaris (Wucherer) 1861. Xenopholis un¬

dulatus (Jensen) 1900.

Recently the collection of additional specimens of Paroxyrhopus

undulatus (auct.), gave us the opportunity to give additional informa-

tions on the systematic position of the genus and the species.

In 1900, Jensen (: 106), described Oxyrhopus undulatus, based on

a specimen from Lagoa Santa, Minas Gerais, Brazil.

In 1902, Schenkel (: 168), described a new species and genus Paro¬

xyrhopus rcticulatus, based on a specimen collected at Bemalcue, Para-

guay. Schenkel called attention to the fact that Paroxyrhopus may be

a synonym of Xenopholis Peters: “Since both have a peculiar form of

the neural spine of the vertebrae, expanded laterally above, forming

a shield which is quite rough and divided by a median groove; the num-

ber of maxillary teeth and other characters”. He only decided to des-

cribe the new genus, because of the separated prefrontals; two nasais

and presence of hypapophyses on posterior vertebrae.

In 1913, Werner (:30) described Oxyrhopus latifrontalis, based on

a specimen from eastern part of the state of Minas Gerais, Brazil.

In 1923, Amaral (:90) described Paroxyrhopus atropurpureus,

based on a specimen from Nova Baden, Minas Gerais, Brazil, and other

two specimens, also from Minas Gerais, Brazil. Amaral distinguished

his species from P. rcticulatus by: “Paroxyrhopus atropurpureus can be

distinguished from P. rcticulatus, by its physiognomy and general color,

and by having an entire nasal, two postoculars and supraocular not tur-

ned downwards behind the orbit”.

In 1926, Amaral (:18) redescribed and published drawing of Paro¬

xyrhopus a tro p urpureus.

In 1929, Amaral (:208), put his P. atropurpureus in the synonymy

of Paroxyrhopus latifrontalis, maintaining Paroxyrhopus reticulatus

Schenkel as a valid species.

Supported by (Irant o Conselho Nacional de Pesquisas — CNPq.

Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan — FEDIB.

ADRESS C.P. f>5 — 05504 — São Paulo

Brasil.

137

SciELO

10 11 12 13 14 15

ÍIOCÍE, A. R. & FEDHRSONI JR., P. A.

Schenkel (Serpentes Colubridae).

A/cm. /vxt. liutanlan, XX: 137-14G, 1974.

Notes on Xenopholis Peters and Paroxyrhopus

In 1970, Bailey, in Peters & Orejas-Miranda (:238) has pointed

out, Oxyrhopus undulatus as a prior name for Paroxyrhopus latifron-

talis (auct.)

Peters & Orejas-Miranda l.c. maintain P. reticulatus and P. undu-

latus as distinct species, although Bailey thinks that the two species are

not distinguishable.

Peters & Orejas-Miranda prive the following key:

“1 — Two postoculars; supraocular not turned down

behind orbit; unicolor dorsally, sides variegated

with small spots or reddish color . undulatus

One postocular; supraocular has downward pro-

jecting extension behind orbit; dorsum with large

brownish-black spots . reticulatus”

Recently we had opportunity to collect more five specimens of

Paroxyrhopus from Mato Grosso and São Paulo; together with the

specimens already in the collection of IB, we have now 20 specimens;

one of the specimens: IB — 10.276, a female from Pedra do Sino,

Minas Gerais, presents: 1 postocular; the supraocular with downward

projection extension behind the orbit, wich is tipical of Paroxyrhopus

reticulatus Schenkel (see fig. 12 through 14) the coloration and pattern

is identical of the one given for Paroxyrhopus 'undulatus Jensen.

We see no reason to maintain the two species as distinct. There

is no doubt that Paroxyrhopus and Xenopholis, are closely related as

suspected by Schenkel: both have a peculiar form of the neural spine

of the vertebrae, expanded laterally above, forming a shield which is

quite rugose and divided by a median groove (see fig. 5 through 8),

and it’s interesting to note that in some specimens of Paroxyrhopus (from

Xenopholis, we had only the opportunity to examine two specimens),

there is a hole in the quadrate (see fig. 10). Similar dorsal pattern

(see fig. 15 and 16).

Xenopholis Peters

1869

1874

Xenopholis Peters, Monats. Akad. Wiss. Berlin — 1869:440

Gerrhosteus Cope, Proc. Acad. Nat. Sei. Philadelphia — 1774:71

Type species — Gerrhosteus prosopis Cope.

Paroxyrhopus Schenkel, Verh. Naturforsch. Ges. Basel, 75:168

Type species — Paroxyrhopus reticulatus Schenkel.

Sympcltophis Werner, Sitzb. Nath. — Naturwiss. Kl.

Akad. Wiss. Wien abt. 1, 134:52, fig. 1

Type species — Sympeltophis ungalioides Werner

Type species — Xenopholis Braconnieri Peters

Range: Amazonian, Bolívia, Ecuador, Peru and Brazil — Sou¬

thern Brazil (Minas Gerais, Mato Grosso) and Paraguay.

138

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE. A. R. & FEDERSONI JR., P. A. — Notes on Xenopholis Peters and Paroxyrhopus

Schenkel (Serpentes Colubridae).

Mem. Inst. Butantan, 38: 137-146, 1974.

Xenopholis undulatus (Jensen)

1900 — Oxyrhopus undulatus Jensen, Vidensk. Medd. Naturhist.

Foren. Kjõbenhavn 1899 (1900:106, fig. 2)

1902 — Paroxyrhopus reticulatus Schenkel, Verh. Naturforsh.

Ges. Basel 13:169, fig. 5-5e.

Type locality — Bemalcue, Paraguay

1913 — Oxyrhopus latifrontalis Werner, Mitt. Naturhist. Mus. Ham-

burg — 30:30

Type locality — Eastern part of Estado de Minas Gerais, Brazil.

1923 — Paroxyrhopus atropurpureus Amaral, Proc. New England Zool.

Club, 8:90

Type locality — Nova Baden — Brazil

1926 — Paroxyrhopus atropurpureus Amaral, Arch. Mus. Nac. Rio de

Janeiro — 26:112, fig. 1-3 — est. III

1929 (1930) — Paroxyrhopus latifrontalis; Amaral, Mem. Inst. Butan¬

tan — 4:208

1970 — Paroxyrhopus undulatus; Bailey in Peters & Orejas — Miranda

— Cat. Neotrop. Squamata — I — Snakes:238

1970 — Paroxyrhopus reticulatus; Peters & Orejas — Miranda — Cat.

Neotrop. Squamata I — Snakes:238

Type locality: Lagoa Santa, Minas Gerais, Brazil.

Range: Paraguay (type specimen of P. reticulatus) ; Brazil, states

of Goiaz, Minas Gerais, Mato Grosso, São Paulo and Paraná.

The occurrence of Xenopholis undulatus from Amazonian Colombia,

is based in a misidentified specimen.

Rostral slightly broader than deep; slightly visible from above;

internavais slightly longer than broad; prefrontals longer than broad;

frontal as long as broad, as long as its distance from the tip of.the

snout, much shorter than the parietais; supraocular, small, sometimes

projecting downward the orbit, by a fusion with the upper postocular;

nasal entire; loreal twice as long as deep; one preocular, largep than

the supraocular, in contact with the frontal; postocular, two (fig. 12),

rarely one, by fusion of the upper one, with supraocular, the upper one

largest (fig. 13), temporais, 1+2; eight upperlabials, 4 lh and 5 th entering

the orbit, sometimes, the 3 rd searcely entering; 8-9 lowerlabials, 4 in

contact with the anterior chin shields, which are generally as long as

the posterior ones; dorsais in 19/19/17 rows; ventrals: 166-181-)-l/2;

there is no sexual dimorphism in number of ventrals (males 169-178

and females 166-181+1/2) ; anal entire; subcaudals d+ided, 35-45, no

sexual dimorphism (males 35-45 and females 36-44).

Blackish brown above, with lateral projections, sides variegated with

small redish spots (in life) (fig. 15) ; belly yellowish invading dorso-

-lateral pattern (fig. 15). Head (fig. 14) blackish brown, upper and

lower labiais, yellowish.

139

SciELO

10 11 12 13 14 15

HOGE, A. R. & FEDERSONI JR., P. A. — Notes on Xenopholia Peters and Paroxyrhopus

Schenke] (Serpentes Colubridae).

Mem. Inst. Butantan, S8\ 137-146, 1974.

SPECIMENS EXAMINED:

IB. colection

number

Locality

3.003* —

Nova Baden — MG

9.649 —

Pedregulho — SP

10.275 —

Franca — SP

10.276 —

Pedra do Sino — MG

10.325 —

Rio Verde — GO

10.992 —

Barretos — SP

15.508 —

Ouro Fino — MG

17.526 —

Franca — SP

18.936 —

Três Lagoas — MT

21.661 —

Três Lagoas — MT

21.906 —

Três Lagoas — MT

22.216 —

Três Lagoas — MT

23.689 —

Jardinópolis — SP

34.302 —

Araucária — PR

34.574 —

17 Km above the dam

Ilha

Solteira-Paraná

River —

34.575 —

70 Km above the dam

Ilha

Solteira-Paraná

River —

35.296 —

Without locality

35.782 —

20 Km above the dam

Ilha

Solteira-Paraná

River —

35.981 —

14 Km above the dam

Ilha

Solteira-Paraná

River —

36.755 —

1 Km above the dam

Ilha

Solteira-Paraná

River —

* Type of Paroxyrhopus atropurpureus (Amaral)

TABLE I

Paroxyrhopus undulatus

IB. col. n.°

Sex

Ventrals

Sub-caudals

Head

Length in mm

Body

Tail

10.325

male

169

39/39

13,0

298

15.508

male

174

35/35

14,1

352

17.526

male

174

18 + n — CM

9,4

206

17-fn

34.302

male

174

44/44

11,5

223

34.574

male

176

44/44

11,5

262

34.575

male

172

45/45

11,5

254

35.782

male

178

40/40

10,0

199

35.981

male

175

30 -f n — CM

14,4

372

9.649

female

175

38/38

13,0

335

10.275

female

175

38/38

14,3

359

10.992

female

173

40/40

12,3

336

23.689

female

176

36/36

12,5

320

10.276

female

176

44/44

12,2

318

18.936

female

174

40/40

13,8

364

21.661

female

173

38/38

12,6

325

21.906

female

166

41/41

9,2

173

22.216

female

172

36/36

1? n

343

36.755

female

175

36/36

13,6

329

35.294

female

180

44/44

11,1

255

3.003*

male

181 + 1/2

40/40

13,9

364

* Type of Paroxyrhopus atropurpureus (Amaral)

SciELO

140

HOGE, A. R. & FEDERSONI JR., P. A. — Notes on Xenopholis Peters and Paroxyrhopus

Schenkel (Serpentes Colubridae).

Mem. Inst. Butantan, 38: 137-146, 1974.

y.\x :

IV-'.-

tfv/íSí/ívs

'.•MiiSs

2.mm

msm

msmm

2 mm

2.m m

J.X>.Cdv«LHeiRo

Fig. 1 — Xsnopholis .undulatus — IB. 18.936 — vertebrae — lateral view-posterior third

of the body

Fig. 2 — Xenopholis undulatus — IB. 18.936 — vertebrae — lateral view-mid-body

Fig. 3 — Xenopholis scalaris — IB. 21.129 — vertebrae lateral view-posterior third of the

body

Fig. 4 — Xenopholis scalaris — IB. 21.129 — vertebrae — lateral view-mid-body

141

2 3

6 SciELO 10 11 12 13 14 15

HOGE, A. R. & FEDERSONI JR., P. A. — Notes on Xenopholis Peters and Paroxyrhopus

Schenkel (Serpentes Colubridae).

Alem. Inst. Butantan, 38: 137-146, 1974.

■■'•tf?

■;

2 mm

2. mm

. - ’ V

2 mm

2 m m

JCc,

Fig. 5 — Xenopholis undulatus — IB. 18.936 — vertebrae — frontal view-mid-body

Fig. 6 — Xenopholis undulatus — IB. 18.936 — vertebrae — dorsal view-mid-body

Fig. 7 — Xenopholis scalaris — IB. 21.129 — vertebrae — frontal view-mid-body

Fig. 8 — Xenopholis scalaris — IB. 21.129 — vertebrae — dorsal view-mid-body

142

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R. & FEDERSONI JR., P. A. — Notes on Xe nopholis Peters and Paroxyrhopus

Schenkel (Serpentes Colubridae).

Mem. Inst. Butantan, 88: 137-146, 1974.

2. mm

2.mm,

J.D Cavéí LHÇ t RO

Fig. 9 — Xenopholis undulatus — IB. 21.661 — quadrate

Fig. 10 — Xenopholis undulatus — IB. 18.936 — quadrate

Fig. 11 — Xenopholis scalaris — IB. 21.129 — quadrate

143

2 3

SciELO

10 11 12 13 14 15

HOGE, A. R. & FEDERSONI JR., P. A.

Schenkel (Serpentes Colubridae).

Mem. Inst. Butantan, S8: 137-146, 1974.

— Notes on XenopholU Peters and Paroxyrhopus

3 m

au.

0,5 Cm.

Fig. 12 — XenopholU undulatus — IB. 34.574 — two postoculars and the supraocular not

turned down behind orbit.

Fig. 13 — XenopholU undulatus — IB. 10.276 — One postocular and supraocular has down-

ward projecting extension behing orbit.

Fig. 14 — XenopholU undulatus — IB. 34.574 — dorsal view of the head

Fig. 15 — XenopholU undulatus — IB. 34.674 — Dorso-lateral pattern

Fig. 16 — XenopholU scalarU — IB. 21.129 — Dorso-lateral pattern

144

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R. & FEDERSONI JR., P. A.

Schenkel (Serpentes Colubridae).

— Notes on Xenopholis Peters and Paroxyrhopus

Mem. Inst. Butantan, S8: 137-146, 1974.

RESUMO — O gênero Paroxyrhopus

Schenkel é considerado sinônimo de Xeno¬

pholis Peters. A espécie reticulatus é con¬

siderada sinônimo de undulatus.

UNITERMOS — Paroxyrhopus Schenkel,

1902; Paroxyrhopus reticulatus Schenkel,

1902; Xenopholis Peters, 1869; Xenopholis

scalaris (Wucherer) 1861; Xenopholis un¬

dulatus (Jensen) 1900.

ACKNOWLEDGEMENTS

We are indebted to Mr. João Domingues Cavalheiro for the drawings

and preparation of skulls.

Recebido para publicação em 04-VI-1974 e aceito para publicação em 10-X-1974.

145

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mem. lnsl. Butantan

3tt: 147-158, 1947

NOTES ON TRIMERESURUS BRONGERSMAI HOGE 1969

(SERPENTES, VIPERIDAE, CROTALINAE) *

by A. R. HOGE and S. A. DE LEMOS ROMANO

Seção de Herpatologia, Instituto Butantan, São Paulo, Brasil

ABSTRACT — Redescription of Trimere¬

surus brongersmai Hoge 19G9, and rela-

tionship with: T. puniceus (Boie) 1827; T.

cornutu8 Smith 1930; T. kanburiensis

Smith 1943 and T. borneensis Peters 1872

wich is cor.sidered a valid species.

UNITERMS — ■ Trimeresurus brongers-

mai Hoge 1969; T. puniceus (Boie) 1827;

T. cornutus Smith 1930; T. kanburiensis

Smith 1943 and T. borneensis (Peters i

1872.

This paper deals with a full description of Trimeresurus brongers-

mai Hoge 1969, first described in an abstract of the annual meeting of

the “Sociedade Brasileira para o Progresso da Ciência” in “Ciência e

Cultura” 21(2), 1969, and notes on related species.

Abbreviations used in reference to specimens:

British Museum (Natural History) London (BMNH) ; Rijks Museum

v. Natuurlijke Historie Leiden (RMNH) ; United States National Mu¬

seum, Washington D.C. (USNM) ; Museum National d’Histoire Natu-

relle, Paris (MNHNP) ; Instituto Butantan, São Paulo (IB) ; Natur-

historiska Riksmuseum Stockholm (NHRS).

KEY TO THE SPECIES OF THE PUNICEUS GROUP

Ventrals more than 190; caudais more than 71;

supraoculars broken up in 3-4 scales; strongly erec-

ted and convergent forming a horn-like appendage

(Fig. 4) ; Dorsal pattern (see Fig. 6) ; Dorsais

21-21-17 .

cornutus

II —

Ventrals fewer than 177; caudais fewer than 58;

A — 8 scales between the supraoculars which are

large and divided on their inner margins;

dorsais in 19-19-15 rows .. kanburiensis

B — 10-14 scales between the supraoculars

1 — Snout strongly projected, and squarish

(Fig. 2) ; ventrals 136-150; supraoculars

divided and divergent (Fig. 2) ; single

elongate dorsal blotches, fused, opposite

* Supportcd by Grant NIH, National Library of Medicine LM 00418-01, and Conselho Nacional de

Pesquisas of Brazil 1966-1967.

ADRESS — C.P. 65 — 05504 — São Paulo — Brasil.

147

SciELO

10 11 12 13 14 15

II.OGE, A. R. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimeresurus brongersmai Hoge 1969.

Mem. Iu8t. Butantan , 38: 147-158, 1974.

or alternated; 2 nd upper labial forming

the anterior border of the loreal pit

(Fig. 1) dorsal pattern (see Fig. 3 and

11). Dorsais (21-20) -19-15 . brongersmai

2 — Snout not strongly projected

a — 2 nd upper labial usually not for¬

ming the anterior border of the

loreal pit (Fig. 7) ; dorsais in 21-

-23 rows; 12-15 series of scales

between the supraoculars which

are narrow or broken up in

erected scales; snout rounded (Fig.

8) Dorsal pattern see fig. 9 and 12 puniceus

b — 2 nd upper labial forming the ante¬

rior border of the loreal pit (Fig.

13) ; dorsais in 19 — (exceptio-

nally 21) rows; 10-11 series of

scales between the supraoculars

which are generally divided and

knoblike (Fig. 13) ; snout promi-

nent, raised above the nostrils

(Fig. 13) ; Dorsal pattern (Fig. 10

and 14) ... borneensis

Trimeresurus brongersmai Hoge Fig. 1, 2, 3 and 11.

1969 — Trimeresurus brongersmai Hoge, Ciência e. Cultura, 21 (2) :459.

Type locality: Lugu, Simalur, west coast of Sumatra.

Holotype, RMNH Nr. 5654 A; from Lugu, Simalur, Sumatra;

4-1913; E. Jacobson col.

Diagnosis. A Trimeresurus (fig. 1, 2 and 3) with the second upper

labial forming the anterior border of loreal pit; supraoculars broken

up in non convergent, strongly erected and pointed scales; snout strongly

projected and laterally expanded; anterior part of nasais well visible

from front and forming, together with the rostral the tip of the snout;

supraoculars separated by 11-12 scales; ventrals 136-150; caudais 41-48;

dorsais in [20-21] — 19-15 longitudinal smooth rows. Dorsal pattern

of elongated markings, confluent or alternate, and below streaks of same

length; the lateral streaks gradually fusing, with the dorsal ones, on the

back of the body.

Description of holotype — Rostral slightly wider than high,

nearly twice as broad at base as at tip; internasals large, separated

by two scales, strongly projected laterally and forewards; two (left side,

by fusion of l st and 2 nd ) scales between internasals and upper preocular,

three on the rigth side; nasal entire, anterior part projected and well

visible from front, separated from the first upper labial; second upper

148

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimeresurus brongersmai Hoge 1969.

Mem. Inst. Butantan, 38: 147-158, 1974.

labial íorming the anterior border of the loreal pit; a small scale between

nasal and upper part of 2 nd upper labial; third upper labial largest,

separated from the elongate suboeular by 1+2 scales; supraocular broken

up in 4-5 strongly erected and divergent spinelike scales; scales on upper

head smooth and imbricated; temporais strongly keeled or knobbed on

tip; 11 scales on a line between the erected supraoculars; 1-2 postoculars

and an elongate suboeular; horizontal diameter of eye less than the dis-

tance between eye and mouthcleft; 10 upper and 10-11 lower labiais;

first pair of lower labiais not in contact behind the symphysial; a single

pair of chin shields longer than wide, each one separated from the sym¬

physial by a scale resulting from the transverse division of first lower

labial. Color grey with elongated rectangular dark grey dorsal markings,

fused, opposite or alternated with the ones of the other side; the dorsal

blotches resulting from the fusion of right and left marking have r

lighter center. The dorsal blotches are formed by single dorsolatera.

marking, not by two vertical ones, separate or fused, as in T. puniceus

(Boie) 1827. Just below the dorsal markings there are, on the 4-5 th row,

longitudinal dark streaks, fused with the dorsal ones on the posterior part

of the body. Belly whitish grey, heavyly powdered with dark; the outer

side of ventrals more densely powdered and spotted with dark. The dark

color of outerside of ventrals invades the paraventral row in a manner

not unlike a saw; 29 dorsal blotches, 11 on ta.il ; lower part of tail dark

grey; a whitish postocular streak. Dorsais in 21-19-15 longitudinal rows

of smooth scales (some scales in the vertebral region of neck are slightly

knobbed on the tip). Ventrals 150; anal 1; caudais 47/48 rows. Hemipe-

nis spinous from bifurcation at tip; bifurcation at 4 th caudal; hemipenis

extending to 8-9 subcaudal. Head 26,1 mm; body + head 340 mm,

tail 66 mm.

Paratypes — RMNH 5654 B now IB 29925; male; same locality

and col. as holotype; Dorsais 20-19-15; Ventrals 148; anal 1; Caudais

48/48; 9 upper labiais; 11 scales between supraoculars. RMNH 5649,

male, Sibogo; Simalur, Sumatra, same col, as holotype, Dorsais 20-19-15;

Ventrals 150; anal 1; Caudais 48/48; 10 upper labiais; 11 scales between

supraoculars. RMNH 5181, female, Sinabang, Simalur, Sumatra, same

col. Dorsais 20-19-15; Ventrals 136; anal 1; Caudais 41/42. USNM 30758,

Simalur (Fig. 1 and 2).

RELATIONSHIP. Trimeresurus brongersmai is closest to Trime¬

resurus borneensis Peters 1872 from which it differs by: lower number

of ventrals, 136-150 against 152-168; dorsal rows in 19 against 21;

supraoculars long and strongly erected, against small and more knoblike

ones in borneensis fig. 2 and 13; the greyer color, and different dorsal

pattern (Fig. 11), specially the small sawlike intrusions of dark ventral

color in dorsais. Easily distinguished from T. cornutus Smith (Fig. 4, 5

and 6), the only species besides T. brongersmai with strongly erected

supraoculars, by the shape of the snout; and by the divergent instead of

convergent supraocular spines (Fig. 1 and 2) and the lower number of

ventrals 135-150 against 193-197; from T. kanburiensis Smith 1930 by

the number of scales between supraoculars 11-12 against 8; the erected

149

SciELO

10 11 12 13 14 15

HOGE, A. R. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimeresurua brongersmai Hoge 1969.

Mcm. lnat. Butantan, 38: 147-158, 1974.

spinelike supraoculars against large undivided and not erected in T.

kanburiensis; possibly the higher ventral counts in kanburiensis (known

only from type, V. 159) and dif. shape of snout. From T. puniceus, T.

brongersmai can be distinguished by; Dorsais in 19 against 21-23 rows;

second upper labial forming anterior border of pit; the very long erected

supraoculars; the completely different shape of snout (Fig. 1, 2, 4.);

different dorsal pattern as explained in Holotype description (and fig.

11) ; and its smaller size 516 mm.

Material: All specimens examined are from the island Simalur

(Simeuloeé) on the West coast of Sumatra, Indonésia. RMNH 5654 A

(Holotype) from Lugu; IB 29925 (former RMNH 5654 B) from Lugu;

RMNH 5649 from Sibogo; RMNH 5181 from Sinabang; USNM 30758

from Simalur.

Range: known only from Simalur.

Trimeresurus borneensis (Peters) Fig. 10, 13 and 14

1872 — Atropophis borneensis Peters, Ann. Mus. Civ. Stor. Nat. Gênova,

5:41.

1893 — Bothrops sandakanensis van Lidth de Jeude, Notes Leyden Mus.

15 :256 + fig.

1896 — Lachesis borneensis; Boulenger, Cat. Sn. Brit. Mus. (Nat. Hist.)

5:561.

1969 — T. [ rimeresurus\ borneensis; Hoge, Ciência e Cultura, 21 (2) :

459.

Type locality: Sarawak, Borneo

Type: Mus. Gênova

Related to puniceus from which it differs in having a more promi-

nent and truncated snout; strongly raised abo ve the nostrils (Fig. 13) ;

10-11 scales between the supraoculars instead of 12-14; 2 nd upper labial

forming the anterior border of loreal pit (Fig. 13) ; supraoculars

generally entire or knoblike (Fig. 13). From T. brongersmai it is dis¬

tinguished by the higher number of ventrals 152-168 against 136-150;

dorsal scales in 21 rows; supraoculars small and knoblike.

Range: Known only from Borneo (see notes under T. puniceus 1. c.).

Specimens examined: All specimens are from Borneo. RMNH 8405

(F 101) and 8405 (F 44) from Kenepai pass; RMNH 8407 from Nanga

Raoen, RMNH 8253 from above Mahakkam; RMNH 8406 from Siniai

river; RMNH 4338 (without labei) from Sandakan bay; RMNH 4338

(713) same locality as 4338 (Types of B. sandakanensis (van Lidth de

Jeude 1893); BMNH 91-8-29-38 from Mt Dulit Sarawak; BMNH

1900-7-18-6 from Gunong Merch Perak, 3000 ft; BMNH 94-6-30-67 from

Paitan North Borneo; BMNH 1911-1-30-29.30 (two specimens) from

Kidi district, Sarawak; BMNH 92-10-7-16 and 94-8-37 from Baram

Sarawak; BMNH 92-6-3-10 M l Dulit; BMNH 151 1 a juvenile mentioned

as puniceus from Java, but which is really a borneensis (see notes under

T. puniceus).

150

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimeresurus brongersmai Hoge 1969.

Mem. Inst. Butantan, 38: 147-168, 1974.

Trimeresurus cornutus Smith

1930 — Trimeresurus cornutus Smith, Ann. Mag. Nat. Hist. 5(10) :682.

Type locality: Fan-si-pan M 18 , Tong King.

Type: BMNH 1930-11-16-2- London.

Range: Known only by type specimen and a specimen in

MNHNP from Tong-King without further information.

Different from related forms by the strongly erected and conver-

gent supraoculars (Fig. 4 and 5) and high number of ventrals 193-197.

Specimens examined: BMNH 1930-11-16-2 from Fan-si-pan M t8 ,

Tong-King; MNHNP 1935-35- from Tong-King.

Trimeresurus kanburiensis Smith

1943 — Trimeresurus kanburiensis Smith, Fauna Brit. índia 3 (Serp.) :

519.

Type locality: Near Kanburi, Thailand.

Type: In BMNH London.

Range: Known only from type locality.

Trimeresurus puniceus (Boie) Fig. 7, 8, 9 and 12.

1827 — Cophias punicea Boie, Isis v. Oken 20:561.

1837 — Trigonocephalus puniceus; Schlegel Phys. Serp. 2:545-pl. XIX,

fig. 10 and 11.

1854 — Atropos puniceus; Duméril, Bibron et Duméril, Erpet. Gén.

7:1519.

1872 — Atropohis puniceus; Peters, Ann. Mus. Civ. Stor. Nat. Gênova

5(2) :41.

1892 — Trimeresurus puniceus; Boettger, Ber. Offenb. Ver. Naturk:

136.

1896 — Lachesis puniceus; Boulenger, Cat. Sn. Brit. Mus. 5:560.

1968 — Trimeresurus puniceus; [partim] Leviton, Ven. An. & Their

Venoms 1:570.

Type locality: Java.

Type: In RMNH Leyden.

Range: Sumatra, Java and Natuna Islands.

Specimens examined: Two specimens in the BMNH 44-2-22-6 a male

and a female from Borneo colected by Sir Low, are the same mentioned

by Boulenger in his catalogue (3:561 specimens e and f), and are true

T. puniceus. They are the only known specimens of puniceus from

Borneo. On an old labei on the Container of these specimens can be

read Java! There is also a labei in the jar with Gray’s writing “Atropos

151

SciELO

10 11 12 13 14 15

HOGE, A. R. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimeresurus brongersmai Hoge 1969.

Mem. Inst. Butantan, 38: 147-168, 1974.

acontiu”. Originally Gray (Zool. Miscel.: 49) had only a single specimen.

Another jar labeled as puniceus, Java contain a single specimen who is

obviously a T. borneensis, also the only specimen of T. borneensis known

outside of Borneo.

It is highly probable that an exchange of specimens has occured

before Boulenger’s time.

BMNH 85.12.3.32-33 (three specimens) from Willis M ta , Kediri Java,

5000 ft; BMNH 1915-12-2-43 from Sungai Kumbang, Sumatra 4700 ft;

RMNH 8986, 8988 and 8907 from Nong Kodjajar Genger M ts ± 1200 m

Eastern Java; RMNH 11408 Botanical garden, Buitenzorg, Java; RMNH

14250 A and 14250 B from Poentjakpass, Western Java ± 1000 m; RMNH

8991 from Poentjakpass, Western Java ± 1400m; RMNH 8990 near Ban-

doeng, Western Java; RMNH 14251 (A through J) from Apoeran, Wono-

sobo, above 600 m, Java; RMNH 6981 from near Soekaboemi, Java;

RMNH 8613 from near Modjotengrak ± 1100 m Wonosobo; RMNH 14253,

through 14258, 14259, 14259 A, 14259 B, 15259 C and 11260 from Tjikad-

jang, Western Java 900 m; RMNH 14262 Poentjakpass ±: 1400 m, Wes¬

tern Java; RMNH 14263 through 14265 Poentjakpass 1500 m, Western

Java; RMNH 14261 from Sapoeran, Wonosoba ± 600 m; RMNH 1557

Java (labeled as “cotype”) ; RMNH 1558 (two specimens, a large female

and a juvenile also labeled as cotypes) ; RMNH 8504 Wonosoba, Java ±

1000 m; RMNH 7259 A, 7259 B and 7259 C from Kali Baroe Bandjoe-

wang, Java; RMNH 14266 A and 14266 B from Wonosoba, Java ± 600 m;

RMNH 8416 A, 8416 B, 8416 C and 8416 D, from top of Megamindoeng,

Java; RMNH 14267 from below Ardjoena, South of Goenoeng Papadjan,

east Priangan, Western Java ± lOOOrn; RMNH 14269 through 14274 from

Tjikadjang, Western Java; NHRS 3174 (21); 3174 (56); 3174 (44);

3174 (58) ; 3174 (52) ; 3174 (59) ; 3174 (1) ; 3174 (3) ; 3174 (57);

3174 (55) and 3174 (50) from Pagilaroe, Java; NHRS 2926 from Siti

Ardao, Java; RMNH 14275 (1118), 14276 (925), 14277 (812) and 14278

(552) from Tjikadjang 900 m, Western Java; RMNH 14279 and 14280

from Soemba Doerer near Malang; RMNH 14281 Padang; 14282 from

Poespo; RMNH 14283, 14284, 14285 and 14286 from Poentjak Gedeh M ts ,

Western Java; RMNH 14287 through 14299 (embr.) from Garoet,

Western Java ± 1500 m; RMNH 14300 and 14301 from Garoet. Western

Java ± 1500 m; NHRS 2926 from Siti Ardao Java.

RESUMO — Redescrição de Trimeresurus

brongersmai Hoge 1969 e comparação com:

T. puniceus (Boie) 1827; T. cornutus

Smith 1930; T. kanburiensis Smith 1943 e

T. borneensis (Peters) 1872 que é consi¬

derado como uma espécie válida.

UNITERMOS — Trimeresurus brongers¬

mai Hoge 1969; T. puniceus (Boie) 1827;

T. cornutus Smith 1930; T. kanburiensis

Smith 1943 e T. borneensis (Peters) 1872.

ACKNOWLEDGMENTS

I would like to extend my most sincere thanks to the following per-

sons who permitted me access to the specimens in their care: Alice Gran-

dison, British Museum (Natural History), London; L. D. Brongersma,

152

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. E. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimereaurua brongeramai Hoge 1969.

Mem. Inst. Butantan, 38: 147-158, 1974.

Rijksmuseum v. Natuurlijke Historie, Leiden; the late Doris M. Cochran

and James A. Peters, United States National Museum, Washington DC. ;

Jean Guibé, Museum d’Histoire Naturelle, Paris; Hjalmar Rendahl and

Greta Vestergren, Naturhistoriska Riksmuseum Stockholm: Ralph Grant-

san for fig. 1, 2, 3, 7, 8 and 9.

LITTERATURE

BOETTGER, O. — Listen von Kriechtieren und Lürchen aus dem tropischen. Asien u. aus

Papuasien. Ber. u. Thât Offenbacher Ver. für Naturk.: 65-155.1892

BOIE, F. — Bemerkungen ü. Merrem’s Versuch eines Systems der Amphibien. in leia v. Oken

20 : 508-566.1827

BOULENGER, G. A. — Catalogue of Snakes in the British Museum (Natural History)

London 3: XIV -f- 727, 37 text fig, 25 pl. 1896

DUMÉRIL, A. M. C., BIBRON G. et DUMÉRIL A. — Erpétologie Générale ou Histoire

Naturelle complete des Reptiles 7(2) XII -j- : 781-1535.1854

HOGE, A. R. — Um novo Trimereaurua de Simalur [Serpentes Viperidae]. Ciência e Cultura

21 (2):459-460, 1969

LEVITON, A. E. — The venomous Terrestrial Snakes of Eeast Asia, índia, Malaya and

Indonésia: 529-576 in Venomous Animais an their Venoms 1 Venomous Vertebrates XVIII

+ : 707. 1968

PETERS, W. — Übersicht der von den Herren M s . G. Doria und Dr. O. Beccari in Sarawak

auf Borneo von 1865 bis 1868 Gesammelten Amphibien. Ann. dei Mus Civico di Stor. Natur.

di Gênova J:27-45. 1872.

SCHLEGEL, H. — Essai sur la physionomie des Serpens 2:1-606 -f- Atlas 1837 La Haye

SMITH, M. A. — Two new Snakes from Tonkin Indo-China, Ann. Mag. Nat. Hiet. (10)6:

681-3 text fig., 1930

SMITH, M. A. — The Fauna of British índia, Ceylon and Burma, including the whole of

the Indo-Chinese Sub. region 3 Serpents. London 1943

(Reprinted by the Survey of índia Press Dehra Dun 1961)

VAN LIDTH DE JEUDE, Th. W. — Note XXXIV on Reptiles from North Borneo. Notea

Leyden Mua. 15: 250-257. 1893

153

SciELO

10 11 12 13 14 15

HOGE, A. E. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimeresurus brongersmai Hoge 1969.

Mem. Inst. Butantan, 38: 147-158, 1974.

HOGE, A. R. & ROMANO, S. A. L. — Notes on Trimeresurus brongeramai Hoge 1969.

Mem. Inst. Butantan, 38: 147-158, 1974.

• - "

L'.* # í;■ • "• .**!!**. v ;

lv.-i-v -v- %!+.• • : }.'•}

■.■çBmamnãr: ' * *•’.

V»*. •**.%*. * *. **•*•’.* .*••*•*• .**•*.*•**.*•*•* •* •* * *• . ’ • **,*•' *■

•— •• v •« • •»■••• •Vr.i.ü

Schematic pattern of:

Fig. 10 — T. borneen8Í8

Fig. 11 — T. brongersmai

Fig. 12 — T. puniceus

157

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mcm. Inst. Butantan

38: 159-162, 1974

NOTA PRÉVIA

OBTENÇÃO EXPERIMENTAL DO QUADRO ANÁTOMO-

-PATOLÓGICO DA PANCREATITE HEMORRÁGICA

AGUDA NO CÃO PELA INOCULAÇÃO DE VENENO

DE TITYUS SERRULATUS

JESUS CARLOS MACHADO *

JOSÉ FRANCO DA SILVEIRA FILHO **

Seção de Anatomia Patológica do Instituto Butantan

UNITERMOS — Pancreatite hemorrágica

aguda; veneno escorpiônico.

Waterman, 1938, relatou a ocorrência de numerosos casos de Pan¬

creatite Hemorrágica Aguda em acidentes humanos provocados pelo

escorpião T. trinitatis. Bartholomew, 1970, em outra série de relatos de

acidentes humanos pelo mesmo escorpião, confirma a grande freqüência

desta pancreatite aguda, comprovadas por análises clínicas, laboratoriais

e laparotomias.

A partir dessa observação clínica dos acidentes humanos, procura¬

mos reproduzir experimentalmente em nosso laboratório este processo,

a partir desse veneno.

Verificamos em nossos trabalhos iniciais que o veneno escorpiônico

de T. serrulatus induz alterações patológicas no pâncreas do cão que vão

desde degenerações microvacuolares das células acinares até àquelas

características do quadro anátomo-patológico da pancreatite aguda. Jul¬

gamos oportuno publicar, desde logo, em nota prévia, esses primeiros

achados que reputamos interessar te, no sentido de se obter este modelo

biológico da patologia pancreática, a partir do veneno escorpiônico. A

tabela I mostra os resultados iniciais obtidos em cães inoculados intra¬

venosamente com o veneno total (conseguido por extração elétrica) de

T. serrulatus.

A potencialidade de veneno usado era de 500 gamas, dose mínima

mortal para cobaias de 500 gramas.

Os 8 animais inoculados com doses de 0,5-1,0 mg de veneno por kg

peso corpóreo morreram em menos de 4 horas após a inoculação. Estes

animais apresentaram fortes sinais de intoxicação 10 minutos após a

inoculação do veneno: salivação, respiração difícil, evacuação, sudorese,

vômitos, tremores contínuos, lacrimação, ficando o animal totalmente

prostrado.

* Diretor da Divisão de Patologia do Instituto Butantan.

*« Bolsista do F.E.D.I.B. (Bolsa Aperfeiçoamento I).

Endereço para correspondência:

q p eg — 06604 — São Paulo — Brasil.

159

SciELO

10 11 12 13 14 15

MACHADO, J. C. & SILVEIRA F.°, J. F. — Obtenção experimental do quadro anátomo-

-patológico da pancreatite hemorrágica aguda no cão pela inoculação de venenos de Tityus

8errulatus.

Mem. Inst. Butantan, 38 : 159-162, 1974.

A análise histopatológica do pâncreas destes animais mostra dege¬

nerações vacuolares das células acinares e pequenas hemorragias nos

septos interlobulares.

Doses menores (0,05 — 0,09 mg de veneno/kg. peso) também cau¬

sam sinais de intoxicação logo após a sua inoculação, embora, em menor

intensidade do que no caso das doses maciças (0,5 — 1,0 mg). Vinte

quatro horas após a inoculação do veneno os sinais de intoxicação são

pouco acentuados. Os animais eram sacrificados 24 horàs após a inocula¬

ção do veneno.

A análise histopatológica do pâncreas destes animais mostra alte¬

rações mais acentuadas do que no caso anterior. Provavelmente, neste

último caso o veneno teve mais tempo para agir.

Em um animal tratado com 3 doses intercaladas (24 horas em 24

horas) de veneno de 0,08 mg/kg peso apresentou além de degenerações

nas células acinares, fortes hemorragias nos septos inter e intralobu-

lares.

Um animal inoculado com uma única dose de veneno de 0,05 mg

de veneno / kg peso, apresentou quadro típico da pancreatite hemorrá¬

gica aguda, constituída por alterações de necrose do tecido adiposo, e de

áreas parenquimatosas, ao lado de hemorragias interlobulares e lobulares.

TABELA I

N.° de cães, doses de veneno escorpiônico de T. serrulatus inoculado intravenosamente em

cães. (Veneno total obtido por extração elétrica) e aspectos anatomopatológicos.

N.°

CÃES

VENENO

Mg/Kg de peso corpóreo

HISTOPATOLOGIA

— Degenerações microvacuolares das células aci¬

nares pancreáticas

1,00

— Pequenas hemorragias nos septos interlobulares

— Âcinos pancreáticos normais carregados de

grânulos de zimogênio

0,90

Idem

0,50

Idem

0,09

Idem

0,08

Idem

' 1

0,05

Pancreatite hemorrágica aguda

OBS.: Não constam da tabela I, 2 animais que receberam 3 doses intercaladas (24 horas em

24 horas) de veneno escorpiônico de 0,08 mg por Kg de peso corpóreo. Em um dos

animais além das degenerações microvacuolares encontramos fortes hemorragias nos

septos intra e interlobulares.

160

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MACHADO, J. C. & SILVEIRA F.°, J. F. — Obtenção experimental do quadro anátomo-

-patológico da pancreatite hemorrágica aguda no cão pela inoculação de venenos de Tityus

serrulatus.

Mem. Inst. Butantan, 38: 159-162, 1974.

Completa o quadro exsudato redondo celular rico em polimorfonucleares

e fenômeno de trombose vascular.

Por suas propriedades farmacológicas e bioquímicas o veneno escor-

piônico parece constituir-se em uma preciosa ferramenta para o estudo

da etiopatogenia da pancreatite aguda.

Objetivamos, à partir desses achados iniciais, padronizar um método

de indução de pancreatite aguda no cão, usando o veneno de T. serrulatus

inoculando uma série maior de animais com a dose ideal acima referida.

Concomitantemente, pretendemos achar a eventual participação da ace-

tilcolina e/ou adrenalina na fisiopatologia da pancreatite hemorrágica

aguda.

VNITERMS — Acute hemorrhagic pan-

creatitis; Scorpionic venom.

BIBLIOGRAFIA

1. BARTHOLOMEW, C. — “Acute scorpion Pancreatitis in Trinidad”, British Medicai Jour¬

nal, 1: 666-668, 1970.

2. WATERMAN, J. A. — “Some notes on scorpion poisoning- in “Trinidad”, Transactions

of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 31 (6):607-624, 1938.

Recebido para publicação em 17-V-1974 e aceito em 10-X-1974.

161

SciELO

MACHADO, J. C. & SILVEIRA F.°, J. F. — Obtenção experimental do quadro anátomo-

-patológico da pancreatite hemorrágica aguda no cão pela inoculação de venenos de Tityus

8errulatu8.

Mem. Inst. Butantan, 38: 159-162, 1974.

f •

AWfSfc » . ! »' ■ ? C; .‘,1 .*>_*«*'a. ^ • . . ,i

.x»'*. , . • , v v' j.*vi líí > ‘** *v/ • • —

‘ Àlt*. t /,t *,V ^ / ••

^ ^ > «* **•.■+*— .

-jÉfrVjK.*# .w-

h'*jr% ’

kFjSfgm.- .

jKAt • **.^V

rir -. i**" ,#, * _

Y>gr

-í^ *3*®*T**JE' h*%

UBF

- 4

* '^ÍÍÁvA».r*«.

A#l ***--.> i, .' >a « i

V ff%v. vr%í'CS '* *7?••-' «r-

áil . ■---J*WÉF a - tm X f • * . , ’ .V, '

~ Üf * 'í 6.40’^:' viv.

Fig. 1 — Pâncreas: H.E. Necrose vascular com trombose e intenso edema e exsudato redondo

celular inflamatório com focos hemorrágicos.

.■■■’.':/ . . 'V y: *.'■'?•■

• • . • .»/.•• .r- •r . ; • ,» *

• •» * • . * ► . . • • • d» ‘ -: \

i'V- W .. •; • • * •• •

•• •• -V-

'• f

_Y' • •

. * -

*■ 1 * •

■f * *.

i:.

l/y <r-.

. “ - , ■.. *

r-J

Fig. 2 — Pâncreas: H.E. Forte hemorragia do estroma fibroso com lesões degenerativas do

tecido adiposo e parenquimatoso.

2 3

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

38; 163-166, 1974

NOTA PRÉVIA

OBTENÇÃO DE CULTURA DE LINFOMAS HUMANOS

— TUMOR DE BURKITT*** **•*

JESUS CARLOS MACHADO *

LEONOR DENARO **

UNITERMOS — Tumor de Burkitt: Cultura.

Os autores vêm realizando o estudo de tumores do tecido linfore-

ticular, no que se refere às peculiaridades do seu cultivo “in vitro”, às

características ultra-estruturais de suas células e aos efeitos por eles

causados em tecidos normais.

Iniciamos nossos estudos através do linfoma de Burkitt, um neo-

plasma maligno do sistema linforeticular, mais especificamente denomi¬

nado LINFOMA MALIGNO INDIFERENCIADO, tipo Burkitt (Berard

et al., 1969).

A singularidade desse linfoma é a sua provável correlação etioló-

gica com um agente virai, correlação essa já levantada por 0’Connor

em 1961, tendo o autor verificado a peculiar distribuição geográfica e

climática do tumor.

As células predominantes e características da massa tumoral são

células linforeticulares linfoblastóides indiferenciadas.

Sob as condições mais favoráveis de cultivo, células normais da série

linfocítica não conseguem ser mantidas “in vitro” senão por alguns dias

(Bichei, 1952 e Trowell, 1958).

Epstein e Barr, 1965, referindo-se à habilidade de crescimento das

células do linfoma de Burkitt, em culturas permanentes, levantam a

hipótese de que esse potencial, que parece ser um atributo específico dos

linfoblastos do tumor de Burkitt, diferindo-os de outros linfoblastos hu¬

manos, esteja conectado com a presença de um vírus em suas células.

Na presente nota, apresentamos alguns aspectos do referido tumor,

em cultura mantida em nosso laboratório (CP-7), por um período supe¬

rior a 4 meses.

Fig. 1 — Aspecto do rosto de uma criança, de 5 anos de idade,

L A.P.F. 0 ., portador de um tumor, na mandíbula direita.

* Diretor da Divisão de Patologia do Instituto Butantan.

** Assistente Responsável pelo Laboratório de Citopatologia da Divisão de Patologia do Instituto

Butantan.

*** Este trabalho foi comunicado na Reunião Regional da Seção Sul da Sociedade Brasileira de

Patologistas — 1973.

**•* Este trabalho está sendo realizado com o auxílio do CNPq e FEDIB.

Endereço para correspondência:

C.P. 66 — 06504 — São Paulo — Brasil.

163

SciELO

10 11 12 13 14 15

MACHADO, J. C. & DENARO, L. — Obtenção de culturas de linfomas humanos — Tumor

de Burkitt.

Mem. Inst. Butantan, 38: 163-166, 1974.

Fig. 2 — Aspecto da massa tumoral, na cavidade oral, tomando

toda a bochecha direita e assoalho da boca.

Fig. 3 — Aspecto histológico do tumor, caracterizado pela presença

monótona de linfoblastos neoplásicos, monotonia esta quebrada pela pre¬

sença de macrófagos normais, dando ao quadro o aspecto típico denomi¬

nado de “céu estrelado”. Coloração Hematoxilina Eosina. ± 1000X.

Fig. 4 — Aspecto do tecido tumoral, esmagado entre lâmina e lamí-

nula. Note-se a marcante vascularização do tecido, sendo os capilares

neoformados muitas vezes ramificados, contendo hemácias no seu inte¬

rior. Coloração Giemsa. ± 1000X.

Fig. 5 — Célula epitelial. Preparação obtida por esmagamento do

tecido tumoral entre lâmina e lamínula. Coloração Giemsa. ± 1000X.

Figs. 6 e 7 — Células linfoblastóides, em cultura. Núcleo ocupando

grande parte do volume celular, com forma ovoide ou em “pera”. Cito¬

plasma limitando-se a uma pequena faixa periférica. Note-se a presença

de característicos vacúolos intra-eitoplasmáticos, possivelmente devidos

à inclusão de material lipídico. Colorações Mallory e Hematoxilina-

-Eosina. ± 1000X.

Fig. 8 — Célula mostrando a presença de 2 núcleos, parecendo indi¬

car a ocorrência de mitose parcial anômala. Coloração Giemsa. ± 1000X.

É importante notar que essas células, em cultura, crescem em sus¬

pensão, sem aderirem às paredes do frasco.

Esses aspectos, tanto do comportamento “in vitro”, quanto da mor¬

fologia das células fixadas, correspondem realmente àqueles descritos

por outros autores, com relação ao cultivo de células do tumor de Burkitt

(Epstein e Barr, 1964; Pulvertaft, 1964; Epstein e Barr, 1965; Stewart

et al., 1965).

UNITERMS — Burkitt Tumor: culturc.

BIBLIOGRAFIA

1. BERARD, C.; 0’CONNOR, G. T.; TIIOMAS, L. B. and TORLONI H. — Histopatholo-

gical definition of Burkitfs tumour. Biilletin of lhe World Health Organization 1,0,

4: 601-607, 1969.

2. BICIIEL, J. — Cultivation of leukemic cells in tissue culture. Acta Path. Microbiol. Scand.

31 :410-419, 1952.

3. EPSTEIN, M. A. and BARR, Y. M. — Cultivation “in vitro" of Human lymphoblasts

from Burkitfs mulignant lymphoma. Lancet 1:252-253, 1964.

4. EPSTEIN, M. A. and BARR, Y M. — Characteristies and mode of growth of a tissue

culture strain (EB1) of Human lymphoblasts from Burkitfs lymphoma. J. N. Câncer

Inst. 31,, 2:231-240, 1965.

5. PULVERTAFT, R. J. V. — Vytology of Burkitfs tumor (African Lymphoma). Lancet,

1: 238-240, 1964

6. STEWART, S. E.; LOVELACE, E.j WIIANG, J. J. and NGU, V. A. — Burkitt tumor:

Tissue culture, cytogenctic and virus studies. Jour. Natl. Câncer Inst. J4:319-327, 1965.

7. TROWELL, O. A. — The lymphocyte. lnt. Rev. Cytol. 7:257, 1958.

Recebido para publicação em 30-V-1974 e aceito em 10-X-1974.

164

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MACHADO, J. C. & DENARO, L. — Obtenção de culturas de linfomas humanos — Tumor

de Burkitt.

Alem. Ivst. Butantan, 38: 1G3-166, 1974.

Figura 2

165

SciELO

Figura 4

Figura 3

MACHADO, J. C. & DENARO, L. — Obtenção de culturas de linfomas humanos

de Burkitt.

Mem. Inst. Butantan, 38: 163-166, 1974.

Figura 5

Figura 8

166

1, | SciELO

Tumor

14 15

Mem. Inst. Butantan

SS: 167-178, 1974

NOTA PRÉVIA

LISTA DAS ESPÉCIES DE SERPENTES COLETADAS NA

REGIÃO DA USINA HIDROELÉTRICA DE

ILHA SOLTEIRA — BRASIL

ALPHONSE RICHARD HOGE *

S. ALMA R. W. DE L. ROMANO *

PEDRO ANTONIO FEDERSONI JUNIOR **

CARMEM LÚCIA DOS SANTOS CORDEIRO **

(Secção de Herpetologia do Instituto Butantan — São Paulo — Brasil)

RESUMO — Nota prévia sobre as espécies

de serpentes coletadas na região da repre¬

sa da Usina Hidroelétrica de Ilha Solteira,

São Paulo, Brasil. 30 espécies identificadas

até o momento.

UNITERMOS — Nota prévia sobre as es¬

pécies de serpentes coletadas na região da

represa da Usina Hidroelétrica de Ilha Sol¬

teira, São Paulo, Brasil.

Aproveitando a elevação gradual das águas do Rio Paraná, motivada

pelo fechamento das comportas da Barragem da Usina Hidroelétrica de

Ilha Solteira, a Secção de Herpetologia do Instituto Butantan, em cola¬

boração com a C.E.S.P. (Centrais Elétricas de São Paulo), coletou grande

número de espécimes, durante o período de 14 de abril de 1973 a 5 de

setembro de 1973.

A região, ao montante da barragem, afetada pelas águas naquela

oportunidade, compreendia, inclusive ilhas fluviais, que com a formação

do “lago” artificial, desapareceram completamente.

A área total, se apresenta nas imediações das coordenadas 51°W e

20°S.

Os exemplares foram coletados nas margens do Rio Paraná, em suas

antigas ilhas, nas margens de seus afluentes e principalmente em árvores

semi-submersas de suas margens (tais árvores constituíram uma média

de 95% dos locais de coleta).

Considerando que o estudo do material coletado (vários milhares de

exemplares), levará um tempo considerável, achamos útil a publicação

preliminar de uma nota, com uma simples lista provisória das espécies

coletadas na região.

Foram encontradas as seguintes espécies:

FAMÍLIA Boidae

SUBFAMÍLIA Boinae

* Bolsa cio Conselho Nacional de Pesquisas .— CNPq.

** Bolsa do Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan — F.E.D.I.B.

Endereço para correspondência:

ç.p. 65 — 05504 — São Paulo — Brasil.

167

SciELO

10 11 12 13 14 15

HOGE, A. R„ ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inst. Butantan, 38: 167-178, 1974.

Boa constrictor amarali (Stull)

1932 Constrictor constrictor amarali Stull, Occ. Pap. Boston Soc. Nat.

Hist., 5:27.

1951 Boa constrictor amarali; Forcart, Herpetologica, 7:199.

Localidade tipo: — São Paulo, Brasil.

Distribuição : — Brasil: sul e sudoeste. Bolívia: sudeste.

Epicrates cenchria crassus (Cope)

1862 Epicrates crassus Cope, Proc. Acad. Nat. Sei. Phila., 1552:349

1929 Epicrates cenchria crassus; Amaral, Mem. Inst. Butantan, 4:140

Localidade tipo: — Cadosa, Rio Paraná, Paraguai.

Distribuição : — Região sul do Brasil. Paraguai e norte da Ar¬

gentina.

Eunectes murinus murinus (Linnaeus)

1758 Boa murina Linnaeus, Systema Naturae, Ed. 10:215.

1936 [Eunectes murinus ] murinus; Dunn e Connant, Proc. Acad. Nat.

Sei. Phila., 55:503.

Localidade tipo: — “América”.

Distribuição: — Desde a Bacia Amazônica, em direção ao sul, até

o Rio Paraná e afluentes.

FAMÍLIA Colubridae

SUBFAMÍLIA Colubrinae

Apostolepis assimilis (Reinhardt)

1861 Elapomorphus assimilis Reinhardt, Vid. Meddel. Naturch. For.

Kjobenhavn, 1550:235, pl.-4, figs. 1-5.

1896 Apostolepis assimilis; Boulenger, Cat. Sn. Brit. Mus., 5:234

Localidade tipo: — Minas Gerais, Brasil.

Distribuição: — Brasil: regiões central e sul. Chaco Argentino.

Chironius bicarinatus (Wied)

1820 Coluber bicarinatus Wied, Reise nach Brasilien, 1:181.

1955 Chironius bicarinatus; Bailey, Occ. Pap. Mus. Zool. Univ. Mich.,

571 :8.

Localidade tipo: — Lago próximo ao Rio Jucu, cinco léguas ao sul

da Cidade de Espírito Santo, Estado de Espírito Santo, Brasil.

Distribuição: — Brasil: Espírito Santo, leste de Minas Gerais, no¬

roeste de São Paulo e sul de Mato Grosso. Argentina: sudo¬

este de Missiones e Rio Uruguai, Províncias de Chaco, Cor-

rientes, Salta, Formosa e Entre Rios. Noroeste do Uruguai.

168

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R„ ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lists,

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inat. Butantan, 38: 167-178, 1974.

Chironius flavolineatus (Boettger)

1885 Herpetodryas flavolineatus Boettger, Zeitz. für Naturwiss., 58 :234.

1955 Chironius flavolineatus; Bailey, Occ. Pap. Mus. Zool. Univ. Mich.,

571 :13.

Localidade tipo: — Paraguai

Distribuição: — Brasil: savanas do oeste e centro da Bahia, nor¬

deste de Mato Grosso, São Paulo, e também, encontrado na

Amazônia, nos campos de Humaitá.

Chironius quadricarinatus (Boie)

1827 Erpetodryas 4 — dricarinatus Boie, Isis von Oken, 20(1) :548.

1955 Chironius quadricarinatus; Bailey, Occ. Pap. Mus. Zool. Univ.

Mich., 571: 15.

Localidade tipo: — Não determinada; restrita a Assunción, Pa¬

raguai, por Bailey, Occ. Pap. Mus. Zool. Univ. Mich., 571 :15.

Distribuição: Brasil: áreas de savanas do norte de Mato Grosso e

São Paulo. Centro da Bolívia. Centro do Paraguai.

Clelia occipitolutea (Duméril, Bibron et Duméril)

1854 Brachyruton occipito-luteum Duméril, Bibron et Duméril, Erp.

Gén., 7:1009.

1970 Clelia accipitolutea; Bailey, in Peters and Orejas-Miranda, Cat.

Neot. Squam. — Part I — Snakes: 64.

Localidade tipo: — Desconhecida.

Distribuição: — Sul do Brasil, até o Uruguai e Centro da Argen¬

tina.

OBSERVAÇÃO: — Maglio, considerou as espécies de Leimadophis,

como Dromicus em: “West Indian Xenodontinae Colubrid

Snakes: their probable origin, philogeny and Zoogeography ”,

Buli. Mus. Comp. Zoology, 141(1) :l-53. 1970.

Dromicus almadensis Wagler

1824 Nairix almadensis — Wagler, in Spix, Sp. Nov. Serp. Bras.: pl. 10.

1926 (Leimadophis) almadensis; Amaral, Rev. Mus. Paulista, 15: 78.

Localidade tipo: — Proximidades da Bahia, Brasil.

Distribuição: — Brasil central, oeste e sul. Paraguai. Argentina.

Uruguai.

Dromicus reginae macrosoma Amaral

1935

Amaral, Mem. Inst. Butantan,

Leimadophis reginae macrosoma

9: 238.

Localidade tipo: — Canna Brava, Goiás, Brasil.

Distribuição: — Brasil: em Goiás, Mato Grosso, Minas Gerais e

São Paulo.

169

SciELO

10 11 12 13 14 15

HOGE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inst. Dutantan, 38: 167-178, 1974.

Drymarchon corais corais (Boie)

1827 Coluber corais Boie, Isis von Oken, 1827:537.

1899 [ Drymarchon corais corais ]; Stejneger, North Amer. Fauna, 14 :70.

Localidade tipo: — América.

Distribuição: — Bacia Amazônica e do Paraguai. Da Venezuela

até a Argentina. Trinidad e Tobago.

Helicops carinicaudus infrataeniatus (Jan)

1865 H. [ elicops\ infrataeniatus Jan, Arch. Zool. Anat. Fis., 5:253.

1916 Helicops carinicauda var. infrataeniata; Griffin, Mem. Inst. Car-

negie Mus., 7: 179.

Localidade tipo: — “Surinam” (in error) e “Brasile”.

Distribuição: — Sul do Brasil: Santa Catarina, Rio Grande do Sul,

a sudoeste, em São Paulo e Mato Grosso. Uruguai e Argentina.

Hydrodynastes bicinctus schultzi Hoge

1966 Hydrodynastes bicinctus schultzi Hoge, Ciência e Cultura, São

Paulo, 15:143.

Localidade tipo: — Presidente Epitácio, Estado de São Paulo,

Brasil.

Distribuição: — Bacia do Paraná.

Hydrodynastes gigas (Duméril, Bibron et Duméril)

1854 Xenodon gigas Duméril, Bibron et Duméril, Erp. Gén., 7:761.

1966 Hydrodynastes gigas; Hoge, Ciência e Cultura, São Paulo, 15:143.

Localidade tipo: — Província de Corrientes, Argentina.

Distribuição: — Brasil: ao sul e no Território Federal do Amapá.

Bolívia: ao leste. Argentina: ao norte. Paraguai.

Leptodeira annulata annulata (Linnaeus)

1758 Coluber annulatus Linnaeus, Systema Naturae, Ed. 10: 224.

1958 Leptodeira annulata annulata; Duellman, Buli. Amer. Mus. Nat.

Hist, 114: 47.

Localidade tipo: — Bacia Amazônica; restrito por Duellman (l.c.:

48), para: Baixo Rio Amazonas, Pará, Brasil.

Distribuição: — Bacia Amazônica: desde a Venezuela, abaixo de

1.100 m de altitude; Equador; Peru e Bolívia, até a foz do

Amazonas. Ao longo da Costa Atlântica, até São Paulo e

Mato Grosso.

Leptophis ahaetulla marginatus (Cope)

1862 Thrasops marginatus Cope, Proc. Acad. Nat. Sei. Phila., 1862:34,9.

170

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

A/em. Inst. Butantan, 38: 167-178, 1974.

1958 Leptophis ahaetulla [marginatus ~\; Int. Comm. Zool. Nomen., Op.

52A :270.

Localidade tipo: — Paraguai.

Distribuição: — Desde o sudeste da Bolívia, até o sul do Brasil.

Paraguai. Norte da Argentina.

Liophis brazili (Amaral)

1923 Rhadinaea brazili Amaral, Proc. New England Zool. Club, 7:87.

1926 Liophis brazili; Amaral, Arch. Mus. Nacional Brazil., 26: 9, pl. 1,

figs. 4-6.

Localidade tipo: — Júlio Pontes, São Paulo, Brasil.

Distribuição: Brasil: Mato Grosso e São Paulo.

Liophis joberti (Sauvage)

1884 Enicognathus Joberti Sauvage, Buli. Soc. Philom. Paris, (7)

8: 146.

1958 Liophis joberti; Hoge, Pap. Avul. Depto. Zool. São Paulo, 13: 223.

Localidade tipo: — Ilha de Marajó, Pará, Brasil.

Distribuição: — Brasil: ao longo da costa, desde o Pará até o

Rio de Janeiro, e Brasil Central, do Mato Grosso ao Ceará.

Bolívia e Paraguai.

Lygophis lineatus meridionalis (Schenkel)

1901 Aporophis lineatus var. meridionalis Schenkel, Verh. Naturforch.

Ges. Basel, 13(1900) :160. ,

1952 Lygophis lineatus meridionalis; Hoge, Mem. Inst. Butantan, 2U

(1952) :252, fig. 3.

Localidade tipo: — “Mte. Sociedad”, Bemalcue, Paraguai.

Distribuição: — Brasil sul. Paraguai. Norte da Argentina.

Mastigodryas bifossatus bifossatus (Raddi)

1820 (1822) Coluber bifossatus Raddi, Mem. Soc. Italiana Sei. Mo¬

derna, 1(5:333.

1970 Mastigodryas bifossatus bifossatus; Peters and Orejas-Miranda,

Cat. Neot. Squam. — Part I — Snakes: 192.

Localidade tipo: — Rio de Janeiro, Brasil.

Distribuição: — Brasil: do Rio de Janeiro e Minas Gerais, até o

Rio Grande do Sul. Uruguai.

Oxyrhopus petola digitalis (Reuss)

1834 Coluber digitalis Reuss, Mit. Senckenb. Naturforsch Ges., 1 -148 pl

9, fig. 1.

171

HOGE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inst. Butantan, 38: 167-178, 1974.

1970 Oxyrhopus petola digitalis; Bailey, in Peters and Orejas-Miranda,

Cat. Neot. Squam — Part I — Snakes: 233.

Localidade tipo: — Ilhéos, Brasil.

Distribuição: — Partes Amazônicas do norte da Bolívia, Peru e

Equador. Brasil: costeiro e central, nas regiões da floresta.

Região do Chocó da Colômbia e leste do Panamá.

Oxyrhopus trigeminus Duméril, Bibron et Duméril.

1854 Oxyrhopus trigeminus Duméril, Bibron et Duméril, Erp. Gén.,

7:103.

Localidade tipo: — Bahia e Rio de Janeiro, Brasil.

Distribuição: — Brasil: do norte do Rio de Janeiro até o Rio

Amazonas, e a oeste, até o Mato Grosso; Ilha de Marajó.

Philodryas olfersii (Lichtenstein)

1823 Coluber Olfersii Lichtenstein, Verzeichneiss der Doubetten des

Zoologischen der Konigl. Universitát zu Berlin: 104.

1896 Philodryas olfersii; Boulenger, Cat. Sn. Brit. Mus., .7:129.

Localidade tipo: — Brasil.

Distribuição: — Oeste do Brasil. Leste do Peru, até a Bolívia.

Paraguai. Argentina. Uruguai.

Philodryas patagoniensis (Girard)

1857 Callirhinus patagoniensis Girard, Proc. Acad. Nat. Sei. Phila.,

1857: 182.

1964 Philodryas patagoniensis; Hoge, Mem. Inst. Butantan, ,70:67.

Localidade tipo: Foz do Rio Negro, Patagônia, Argentina.

Distribuição: — Brasil. Bolívia. Paraguai. Argentina. Uruguai.

Pseudoboa nigra (Duméril, Bibron et Duméril)

1854 Scytale neuwiedi var. Nigrum Duméril, Bibron et Duméril, Erp.

Gén., 7:1002.

1962 Pseudoboa nigra; Bailey, Buli. Zool. Nomen., 19( 3) :164.

Localidade tipo: — Bahia, Brasil.

Distribuição: — Nordeste do Brasil, até o leste do Pará; ao sul do

Estado do Rio de Janeiro e São Paulo; para oeste, até o noro¬

este do Mato Grosso. Bolívia central. Argentina: do sul ao

norte de Corrientes.

Thamnodynastes rutilus Prado

1942 Dryophilax rutilus Prado, Ciência, México City, ,7:204, fig. 1-2.

172

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inst. Butantan, 38: 167-178, 1974.

1948 Thamnodynastes rutilus; Vanzolini, Rev. Brasil. Biol., #:382.

Localidade tipo: — Gália, Estado de São Paulo, Brasil.

Distribuição: — Estado de São Paulo e Mato Grosso, Brasil.

Thamnodynastes sp.

Xenopholis undulatus (Jensen)

1900

1975

Oxyrhopus undulatus Jensen, Vidensk. Medd. Naturhist. Foren

Kjõbenhavn, 1899 {1900) : 106, fig. 2.

Xenopholis undulatus; Hoge e Federsoni Jr., Mem. Inst. Butantan,

37: fig. 1-16.

Localidade tipo: — Lagoa Santa, Minas Gerais, Brasil.

Distribuição: — Brasil: Paraná, São Paulo, Mato Grosso, Goiás

e Minas Gerais. Paraguai.

1973

Waglerophis merremi (Wagler)

1824 Ophis merremi Wagler, in Spix, Sp. Nov. Serp. Braz.: 47, pl. 14.

Waglerophis merremi', Romano e Hoge, Mem. Inst. Butantan, 36:

209.

Localidade tipo: — Bahia, Brasil.

Distribuição: — Brasil. Bolívia. Paraguai. Norte e centro da

Argentina.

SUBFAMÍLIA Dipsadinae

Sibynomorphus mikanii mikanii (Schlegel)

1837 Dipsas mikanii Schlegel, Essai Physionom. Serpens, 2 :277

Sibynomorphus mikanii mikanii; Peters, Misc. Publ. Zool. Univ.

1960

Mich., 114: 148.

Localidade tipo: — Brasil.

Distribuição: — Sudeste do Brasil, não incluindo áreas costeiras,

com exceção do norte; nos Estados de Mato Grosso, Minas

Gerais, Paraná, Rio Grande do Norte, Rio Grande do Sul e

São Paulo.

EAMiLIA Elapidae

SUBFAMÍLIA Elapinae

1936

Micrurus frontalis frontalis (Duméril, Bibron et Duméril)

1859 Elaps frontalis Duméril, Bibron et Duméril, Erp. Gén., 7:1223.

Micrurus frontalis frontalis; Schmidt, Zool. Ser. Field. Mus. Nat.

Hist., 20: 199.

Localidade tipo: — Corrientes e Missiones, Argentina.

Distribuição: — Brasil sul. Paraguai sul. Incluindo região adja¬

cente da Argentina.

173

SciELO

10 11 12 13 14 15

HO GE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inst. Butantan, 38: 167-178, 1974.

FAMÍLIA Viperidae

SUBFAMÍLIA Crotalinae

Bothrops moojeni Hoge

1966 Bothrops moojeni Hoge, Mem. Inst. Butantan, 32(1965) : 126, pl.

4-5, fig. 2.

Localidade tipo: — Brasília, Distrito Federal, Brasil.

Distribuição: — Brasil, desde o Maranhão, através das savanas

do Brasil Central, até o Paraná.

Crotalus [ Crotalus ] durissus collilineatus Amaral.

1926 Crotalus terrificus var. collilineatus Amaral, Rev. Mus. Paulista,

15:90.

1966 Crotalus durissus collilineatus; Hoge, Mem. Inst. Butantan, 32

(1965) : 139, pl. 13.

Localidade tipo: — Não especificada na descrição original; restrita,

através da designação de um neótipo, para Mato Grosso, Brasil,

por Amaral e Hoge, in Hoge, Mem. Inst. Butantan, 32, 1965

(1966) :139.

Distribuição: — Brasil: Goiás, Distrito Federal, Minas Gerais, nordeste

de São Paulo e sudoeste de Mato Grosso.

COMENTÁRIOS

Embora o material coletado, ainda não tenha sido estudado, devido

às suas grandes proporções, chamamos a atenção para o pequeno número

de espécies de serpentes peçonhentas coletadas. Somente uma espécie

de Micrurus; uma espéeie de Bothrops e uma espécie de Crotalus.

Faz-se digno de nota, a ausência total de Bothrops alternatus, Bo¬

throps jararaca e Bothrops neuwiedi, tão comuns nas zonas próximas da

área de captura.

O número de gêneros e espécies coletados, com exceção das peço¬

nhentas, é bastante elevado:

22 gêneros e 30 espécies; de maneira geral, cada um representado por

grande número de exemplares. Como exemplo, citamos os gêneros: Chi-

ronius e Philodmjas, dos quais foram coletados mais de mil espécimes de

cada um; e gênero Thamnodynastes e, também, as Boa constrictor ama-

rali, com várias centenas de exemplares cada uma.

Como era de esperar, o número de exemplares de espécies aquáticas

foi reduzido, devido às condições ambientais, que lhes propiciaram a fuga,

já que estavam em seu meio de vida normal.

Digna de nota, também, se faz, a coleta de cinco exemplares de Xeno-

pholis undulatus, antigo Paroxyrhopus undnlatus (vide página ...).

Em trabalho que oportunamente será publicado, daremos detalhada¬

mente a lista dos exemplares e espécies coletados na região.

174

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inst. Butantan, 38: 167-178, 1974.

175

2 3 4 5 6 SClELO 10 n 12 13 14 15

HOGE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. Inst. Butantan, 3ti: 167-178, 1974.

MAPA

Figura I — Mapa da região de Coleta

Legendas das localidades:

1 — Cidade de Ilha Solteira

2 — Barragem de Ilha Solteira

3 — Cidade de Véstea (Antiga — Nossa Senhora de Guadalupe do Alto Rio Paraná)

4 — Rio São José dos Dourados

5 — Ribeirão da Ponte Pensa

6 — Porto Tabuado (São Paulo e Mato Grosso)

7 — Rubinéia

8 — Porto Itamaraty (São Paulo e Mato Grosso)

9 — Ilha dos Três Estados

10 — Ilha Grande

A região do Rio Paraná, indicada em branco no mapa, representa o rio, antes do enchi¬

mento da represa. Os limites externos representam as atuais margens do rio, com a elevação

máxima das águas. Tais dados foram fornecidos pela C.E.S.P (Centrais Elétricas de São

Paulo).

As partes, tracejadas mostram os' locais de captura cm toda a sua extensão.

As partes pontilhadas, representam as regiões não exploradas por nós, ou exploradas,

porém, onde não se encontrou nenhum material durante nossa permanência.

176

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A. R., ROMANO, S. A., FEDERSONI JR., P. A. & CORDEIRO, C. L. S. — Lista

das espécies de serpentes coletadas na região da usina hidroelétrica de Ilha Solteira.

Mem. hiat. Butantan, 38: 167-178, 1974.

AGRADECIMENTOS

Agradecemos à Direção Geral das Centrais Elétricas de São Paulo

C.E.S.P. — na pessoa do Professor Lucas Nogueira Garcez; ao Sr. João

Francisco Aranha, da Administração de Ilha Solteira em São Paulo;

à Direção da Usina de Ilha Solteira, representada por Dr. José Roberto

Monteiro, engenheiro residente da Obra, por nos ter facilitado o acesso

às localidades de captura e por nos ter franqueado o acesso a algumas de

suas dependências, na Cidade de Ilha Solteira, como as dependências de

sua Unidade Hospitalar, dirigida por Dr. Wanderley Torraca de Almeida,

para a instalação de nosso posto de coleta e preparação do material, bem

como, 'agradecemos a colaboração de seus funcionários pela presteza de

seus serviços; e de maneira toda especial, ao Sr. Francisco Takahashi,

colaborador em todas as explorações feitas e diuturnamente à nossa

disposição.

Estendemos nossos agradecimentos:

— à Prefeitura da Cidade de Nova Rubinéia, pela sua acolhida e cola¬

boração.

— à Dra. Jandyra Planet do Amaral, Diretora do Instituto Butantan, pelo

apoio prestado às equipes.

— à Diretoria Administrativa do Instituto Butantan; em especial, ao

Serviço de Finanças e à Subfrota, pelas facilidades prestadas às

equipes.

— ao Sr. João Domingos Cavalheiro, pelos desenhos confeccionados.

Somos gratos também, aos seguintes funcionários e estagiários do

Instituto Butantan, que participaram ativamente da captura, durante o

período de enchimento da Represa. Em ordem alfabética:

— Arthur Teophilo Martins Filho — Dirceu dos Santos — Helena Ribas

Lopes = Estagiária (na época) — Joaquim Cavalheiro — Laerte

Paula Santos — Liberato Caetano dos Santos (f) — Luiz Otávio de

Assis Melin = Estagiário (na época) — Manoel Caetano — Marcílio

Pereira Bueno — Maria Angélica Girotto = Estagiária (na época) —

Pedro Nascimento Martins Ferreira — Pedro Villela — Sérgio Branco

de Miranda.

ABSTRACT — Prelimir.ary list of snakes

collected in the “Ilha Solteira” regíon São

Paulo, Brasil. Till now 30 species are iden-

tified.

UNITERMS — Preliminary list of snakes

collected in the “Ilha Solteira” region, São

Paulo, Brasil.

Kecebido para publicação em 17-V-1974

Aceito para publicação em 10-X-1974

177

SciELO

10 11 12 13 14 15

ÍNDICE de autores

EICKSTEDT, V. R. von

HOGE, A. R. & Federsoni, Jr., P. A.

HOGE, A. R. & Romano, S. A.

HOGE, A. R., Romano, S. A., Federsoni Jr., P. A. & Santos Cordeiro, C. L.

LOPES, R. A.; Oliveira, C.; M. Campos, G. & Barros, J. M.

MACHADO, J. C. & Denaro, L.

MACHADO, J. C. & Silveira Filho, J. F.

MENEZES, H.; Mitsutani, C. Y.; Coiro, J. R. R-, Carvalho dos Santos,

M. A. S. & Brunner Jr., A.

PELUFFO, C. A.; Irino, K. & Mello, S.

PESSOA, S. B„ De Biasi, P. & Sacchetta, L.

PESSOA, S. B.; De Biasi, P. & Sacchetta, L.

PESSOA, S. B.; De Biasi, P. & Puorto, G.

SILES VILLARROEL, M.; Furlanetto, R. S.; Rolim Rosa, R.; Zelante, F. &

Navas, J.

SILES VILLARROEL, M.; Zelante F., Furlanetto, R. S. & Rolim Rosa, R.

SOERENSEN, B.; Zezza Neto, L.; Perez, M. D,, Bulka, G. M. & Ono, A. E. G.

SH: 131-136

SH : 137-146

SH: 167-178

SH: 147-158

SH: 41 - 50

SH: 161-164

SH: 157-160

SH: 51 - 62

SH: 1 - 12

SH: 119-122

SH: 123-130

SH: 69-118

179

SciELO

10 11 12 13 14 15

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SciELO

10 11 12 13 14 15

Moscas parasitas de aranhas caranguejeiras

1 uixiodara klmji hspocdeiru de Kxctaxix cicktcdtfic

SX:

1 . 31-130

Pancreatite hemorrágica aguda

Veneno escorpiónico

SH:

157-100

Varoxyrhopux Schenkel, 1902

Tarox y rhopux rc 1 iciilat.HH Schenkel, 1902

SX:

137-145

Plasmódium

Freqüência de hemoparasitas

SX:

09-118

Sangue

Frequência de hemoparasitas

SX:

09-118

Serpentes

Freqüência de hemoparasitas

SX:

09-118

S. typhimurium

cepas epidêmicas multirresistentes a drogas

cepas não epidêmicas — sensíveis

SX:

1- 12

Tacuia pixiformix

Tacuia a erra ta

SX:

03- 08

Toddia

Freqüência de hemoparasitas

SX:

09-118

Trimerexurux brou yerxmai Iloge 1909

Trimerexurux puniceux (Boie) 1827

Trimerexurux cornutux Smith 1930

SX:

147-158

Trirnerexurux kanburienxix Smith 1943

Trimerexurux borneenxix (Peters) 1872

SX:

147-158

T rypanosoma

Freqüência de hemoparasitas

SX:

09-118

Tumor de Burkitt

Cultura

SX:

101-104

Ultraestrutura de eritrócitos

Both rops

SX:

51- 02

Venenos botrópicos

dupla difusão

imunoeletrofore.se em gel de ágar

componentes antigênicos

SX:

31- 42

Veneno escorpiónico

Pancreatite hemorrágica aguda

SX:

157-100

Virulência comparativa para camundongo

»S\ t yph im u riurn

SX:

1- 12

Xevopholix Peters, 1809

Xevopholix xcolarix (Wucherer) 1801

Xenopholix undulatus (Jensen ) 1900

SX:

147-158

182