Memórias do Instituto Butantan

INSTRUÇÕES AOS AUTORES

1 — FINALIDADE

As MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN são publicadas sob a

orientação da Comissão Editorial, sendo que os conceitos emitidos são de inteira

responsabilidade dos autores. Tem por finalidade a apresentação de trabalhos

originais que contribuam para o progresso nos campos da Biologia e da Medi¬

cina, elaborados por especialistas nacionais ou estrangeiros que se enquadrem

no Regulamento dos Trabalhos.

2 — REGULAMENTO DOS TRABALHOS

2.1 — Normas gerais

2.1.1 Os trabalhos devem ser inéditos e destinar-se exclusiva¬

mente à revista “MEMÓRIAS DO INSTITUTO BU¬

TANTAN”. Os artigos serão publicados a convite da

Comissão Editorial.

2.1.2 Estrutura do Trabalho

2.1 .2. 1 Elementos preliminares

a) cabeçalho — título do trabalho e nome do

autor (es);

b) filiação científica e endereço para corres¬

pondência.

2.1.2.2 Texto

Sempre que possível deve obedecer à forma

convencional do artigo científico:

a) Introdução — estabelecer com clareza o ob¬

jetivo do trabalho, relacionando-o com ou¬

tros do mesmo campo e apresentando de

forma sucinta a situação que se en¬

contra o problema investigado, Extensas

revisões de literatura devem ser substituí¬

das por referências aos trabalhos mais re-

SciELO-, 2.1 12 13 14 15 16

centes, onde tais revisões tenham sido

apresentadas.

b) Material e métodos — A descrição

dos métodos usados deve limitar-se ao

suficiente para possibilitar ao leitor a per¬

feita compreensão e repetição dos méto¬

dos; as técnicas já descritas em outros

trabalhos devem ser referidas somente por

citação, a menos que tenham sido consi¬

deravelmente modificadas.

c) Resultados — Devem ser apresentados

com clareza e, sempre que necessário,

acompanhados de tabelas e material ilus¬

trativo adequado.

d) Discussão — Deve restringir-se à apre¬

sentação dos dados obtidos e dos resulta¬

dos alcançados, relacionando-se novas con¬

tribuições aos conhecimentos anteriores.

Evitar hipóteses ou generalizações não

baseadas nos resultados do trabalho.

e) Conclusões — Devem ser fundamentadas

no texto.

Dependendo do assunto do artigo, as divisões acima poderão ser modifica¬

das de acordo com o esquema do trabalho, porém, o artigo deve cònter obriga¬

toriamente:

a) Introdução;

b) Desenvolvimento do tema (com as divisões a critério

do autor);

c) Conclusão.

2.1.2.3 Agradecimentos

Devem ser mencionados antes das Referên¬

cias Bibliográficas.

2.1.2.4 Material de Referência

Todo trabalho deve vir obrigatoriamente

acompanhado de:

a) Resumo — Um no mesmo idioma do tex¬

to, outro ©m inglês, redigidos pelo(s) pró-

prio(s) autor(es), devendo expressar o

conteúdo do artigo, salientando os ele¬

mentos novos e indicando sua importân¬

cia. O resumo na lingua em que está re¬

digido o trabalho deve ser colocado antes

do texto; e o em inglês, no final. Só ex¬

cepcionalmente excederá a 200 palavras.

Os títulos dos trabalhos devem ser tradu¬

zidos para o inglês e vice-versa.

b) Unitermos — Correspondendo a palavras

ou expressões que identifiquem o conteú¬

do, devem ser em número necessário pa-

SciELO

ra a completa descrição do assunto e as¬

sinalados com asteriscos (*) os 3 uniter-

mos principais. Para escolha dos uniter-

mos usar o vocabulário protótipo do

campo especializado.

c) Referências Bibliográficas — Devem ser

incluídas apenas as referências menciona¬

das no texto e arranjadas em ordem alfa-

tica do sobrenome do autor, numeradas

consecutivamente.

Periódico:

AMORIM, M. de F.; MELLO, R.F. &

SALIBA, F. Envenenamento botrópico

e crotálico. Contribuição para o estudo

experimental comparado das lesões.

Mem. Insí. Buíantan, 23: 63-107,

1950-51.

Livro:

BIER, O. Bacteriologia e Imunologia. 1,

13. a ed. São Paulo, Melhoramentos,

1966.

As citações no texto devem ser em números índices correspondendo às res¬

pectivas referências bibliográficas.

Exemplos:

As investigações sobre a fauna flebotomínica no Estado de São Paulo, fo¬

ram feitas em várias ocasiões x > 3 ' 4 ’.

. . . método derivado de simplificação de armadilha de Disney 2 (1968). . .

Referências Bibliográficas (correspondentes aos números índices)

1. BARRETO, M.P. Observações sobre a biologia em condições naturais

dos flebótomos do Estado de São Paulo (Diptera, Psychodidae). São

Paulo, 1943 (Tese, Faculdade d© Medicina da Universidade de São

Paulo).

2. DISNEY, R.H.L. Observations on a zoonosis: lishmaniosis in British

Honduras. J. appl. Ecoi, 5: 1-19, 1968.

3. FORATTIN1, O.P. Algumas observações sobre biologia dos flebótomos

(Diptera, Psychodidae) em região da bacia do Rio Paraná (Brasil).

Arq. Fac. Hig. S. Paulo, 8: 15-136, 1954.

4. FORATTINI, O.P. Novas observações sobre biologia de flebótomos

em condicões naturais (Diptera, Psychodidae). Arq. Fac. Hig. S. Paulo,

25: 209-215, 1960.

3 _ normas para apresentação dos originais

3.1 — Datilografia

Os originais devem ser datilografados, em 3 (três) vias, com es¬

paço duplo, em uma só face, mantendo as margens laterais com

SciELO 1

0 11 12 13 14 15 16

3 cm aproximadamente. Todas as páginas devem ser numeradas

consecutivamente, com algarismos arábicos, no canto superior

direito.

3.2 — Tabelas

Devem ser numeradas consecutivamente com algarismos arábicos

e encabeçadas pelo seu título. Os dados apresentados em tabela

não devem ser, em geral, repetidos no texto. As notas de rodapé

das tabelas devem ser restritas ao mínimo possível e referidas por

asteriscos.

3.3 — Ilustrações (fotografias, desenhos, gráficos, etc.)

3.3.1 Todas as ilustrações devem ser coladas numa extensão

de 2 cm na parte superior de um papelão um pouco

maior.

3.3.2 Para melhor proteção cobrir a ilustração com papel ve¬

getal de comprimento um pouco maior que o papelão,

de maneira a poder ser dobrado para trás na parte su¬

perior e colado.

3.3.3 Tôda e qualquer anotação deve ser feita sobre o papel

vegetal em letra de forma e algarismo arábicos com a

precaução de não calcar muito a fim de não marcar as

ilustrações.

3.3.4 As fotos devem ser entregues inteiras e não recortadas,

em papel fotográfico liso não abrilhantado. Limitar com

um traço no papel vegetal a parte importante da foto;

não colocar letras ou números sobre as fotos, mas sim

sobre o papel vegetal.

3.3.5 Os desenhos e gráficos devem ser feitos com tinta nan-

kin preta em papel Schoeller Hammer 3G ou 4G, ou

equivalente. O tamanho dos desenhos e gráficos quando

ocupar página inteira deve ser no mínimo de 12,6 x

19,8 cm, podendo ser proporcionalmente maior até atin¬

gir ao máximo d© duas vezes aquela dimensão.

3.3.6 A numeração das ilustrações será feita com algarismos

arábicos na parte inferior do papel vegetal. Quanto aos

demais elementos necessários à identificação das ilustra¬

ções (número, nome do autor e título do trabalho), de¬

vem ser escritos atrás do papelão em que as mesmas es¬

tiverem coladas.

3.3.7 As legendas devem ser apresentadas à parte em folhas

datilografadas, constando a numeração correspondente à

ilustração.

A Revista admite até 6 clichês (branco e preto) no texto, para cada tra¬

balho, devendo os demais ser pagos pelo autor. Para clichês coloridos deverá

haver prévia combinação entre a Comissão Editorial e o autor.

De cada trabalho serão impressas 100 (cem) separatas, devendo o autor

pagar as separatas que excedam a esse número, quando solicitar uma quantidade

maior. As separatas em Excesso devem ser solicitadas quando o manuscrito for

encaminhado à Comissão Editorial.

SciEL(J 0

SciELCJo

Ácaros pilícolas do Brasil ( Acarina: Listrophorídae).

Fur-mites of Brazil ( Acarina: Listrophorídae).

Nélida M. LIZASO .

Sobre uma hemogregarina e um tripanossomo de peixe de

mar de São Paulo (Brasil).

On a haemogregarin and a trypanosome of sea fish from São

Paulo (Brasil).

Samuel B. PESSÔA & Pérsio de BIASI .

10.

Nota sobre formas evolutivas de Trypanosoma de serpentes

em meio de cultura.

Note on evolutive forms of snake Trypanosoma in culture mé¬

dium .

Pérsio de BIASI, Samuel B. PESSÔA, Giuseppe

PUORTO & Wilson FERNANDES.

11 .

Kalicephalus subulatus Molin, 1861 {Ne ma toda, Diaphano-

cephalidae). Confirmação desta espécie: informações

sobre sua dispersão geográfica e enumeração de serpen¬

tes parasitadas.

Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda, Diaphano-

cephalidae). Confirmation of this species; information on

its geographic dispersion and enumeration of parasitized

snakes.

Maria da Penha Maia FERNANDES & Paulo de Toledo

ARTIGAS .

103

12.

Bandas G e C em cromossomos humanos tratados com vene¬

nos ofídicos.

G- and C-bands in human chromosomes treated with snake

venom.

Itamar Romano Garcia RUIZ & Willy BEÇAK ....

123 |

1 13.

Observações sobre a ultra-estrutura das células germinativas

masculinas da espécie diplo-tetraploide Odontophrinus

americanus (Amphibia: Anura).

Observations on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Sylvia Mendes CARNEIRO.

135

14.

Mecanismo de extrusão cromatínica em eritrócitos de aves

( Gallus gallus) e sua possível significância.

Chromatin extrusion mechanism in avian erythrocytes {Gallus

gallus) and its possible significance.

José R.R. COIRO & Adolpho BRUNNER Jr.

149 !

15.

Aspectos ultra-estruturais de eritrócitos maturos de Cyprinus

carpio.

Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Adolpho BRUNNER Jr., José R.R. COIRO, Clara Y.

MITSUTANI, Maria Angélica S. CARVALHO DOS

SANTOS & Hércules MENEZES .

157 I

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

16. Estudo comparativo da ultra-estrutura de elementos das sé¬

ries eritrocitárias de aves e mamíferos. Correlação com

a biossíntese de hemoglobina.

Comparative study on the ultrastructure of the elements of the

avian and mammalian erythrocytes series. Correlation

with hemoglobin biosynthesis.

José R. R. COIRO .

169

17. Importância da constituição anatômica da ponta do ventrículo

esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias

do Brasil.

Importance of the anatomic constitution of the left ventricle’s

tip in pathologic processes of this region in myocardio-

pathies in Brasil.

Mércia A.C. BARTKEVITCH, Helena MÜLLER &

Carlos MARIGO . 207

18. Relato e considerações sobre a presença de células de War-

thin-Finkeldey em paciente portador de moléstia de

Hodgkin em atividade.

A rcport and comments on the presence of Warthin-Finkeldey

cells in a patient with active Hodgkin disease.

Jesus Carlos MACHADO & Leonor DENARO . 217

19. Alterações na estrutura cromossômica observada em paciente

com sarampo e moléstia de Hodgkin concomitantes.

Changes in chromosome structure observed in patient with con-

comitant Hodgkin’s disease and measles.

Leonor DENARO, Jesus Carlos MACHADO & Yamara

Rodrigues MARTINS . 225

20. Pseudotuberculose em camundongos. Isolamento de Coryne-

bacterium kutscheri da cavidade oral e da pele de animais

doentes e aparentemente sãos.

Pseudotuberculosis in mice. Isolation of Corynebacterium

kutscheri from the mouth and skin of sick and apparen-

tly healthy animais.

Bruno SOERENSEN, Maria José F. YAR1D, Luiz

ZEZZA Neto & Jesus Carlos MACHADO . 233

21 . Lista remissiva dos trabalhos publicados nas “Memórias do

Instituto Butantan’’ — volumes 34 a 38 (1969-1974).

Remissive list of papers published in “Memórias do Instituto

Butantan” — volumes 34 to 38 (1969-1974) . 239

ÍNDICE DE AUTOR/AUTHOR INDEX . 247

ÍNDICE DE ASSUNTO . 249

SUBJECT INDEX . 253

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

1 '

2 3 4

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

APRESENTAÇÃO

O presente volume das “Memórias do Instituto Butantan” representa justa

homenagem a Afrânio do Amaral, herpetologista de renome internacional, pelo

importante papel que desempenhou na vida do Instituto em momento crítico

de sua existência e pelos relevantes serviços que lhe prestou, através de um

período longo de administração operosa e fecunda.

O trabalho introdutório, de autoria de Edgard C. Falcão, é um relance

biográfico da carreira científica de Afrânio do Amaral. Os demais artigos, em

sua maioria de pesquisadores do Instituto Butantan, foram cuidadosamente se¬

lecionados para este volume, situando-se predominantemente no campo da

Zoologia, particularmente dos Animais Peçonhentos — especialidade à qual o

homenageado dedicou a maior parte de sua atividade científica.

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 3-9, 1975

BREVE NOTICIA SOBRE

A VIDA CIENTÍFICA DE AFRÂNIO DO AMARAL. *

EDGARD C. FALCÀO

INTRODUÇÃO

Há mais de um século atrás, precisamente em meado da década oitocen¬

tista de 60, ou seja, no ano de 1865, instituiu-se na Cidade do Salvador, Bahia

de Todos os Santos, um círculo de estudos médicos de alto nível, composto de

meia dúzia de facultativos, que, após a afanosa labuta diária, ainda tinha tem¬

po e ânimo para trocar idéias acerca dos casos clínicos mais curiosos e educati¬

vos, que se lhes antolhavam.

Desse grupo, que se reunia quinzenal e revezadamente em casa de cada

um deles, três elementos se distinguiram sobremaneira: um médico escocês, for¬

mado em Aberdeen (Inglaterra) e radicado na Bahia havia mais de vinte anos,

John Lidgertwood Paterson, idealizador e animador de tais tertúlias; um alemão,

que se diplomara em medicina pela Universidade dc Tübingen (Wurtenberg),

Otto Edward Henry Wucherer, que também morava na capital baiana há mais de

três lustros, tendo trazido da Alemanha a prática do microscópio e do escalpelo;

e, finalmente, um português, emigrado adolescente, natural duma aldeia d’além-

mar (Vilarinho), e que, no espaço apenas de onze anos, completara estudos de

humanidades e fizera todo o curso médico na Faculdade da Bahia, diploman¬

do-se no ano de 1851. Chamava-se José Francisco da Silva Lima, e veio a tor¬

nar-se o expoente máximo da profissão naquele meio, durante toda a segunda

metade de oitocentos.

Wucherer, levando vantagem sobre os demais, pelos conhecimentos práticos

de microscopia e anatomia patológica, teve oportunidade de iniciar estudos de

medicina experimental na Bahia, sagrando-se pioneiro nesse campo de investi¬

gações em todo o Brasil. Duas grandes descobertas conseguiu realizar em me¬

nos de três anos: l. a ) A demonstração do papel etiológico do Ancylostoma cluo-

denale na hipoemia inter-tropical (opilação ou cansaço) em 1865-66; 2. a ) A

descoberta dum verme ainda não descrito, sob a forma de embriões (microfilá-

rias), em urinas hematúricas e hêmato-quilúricas, no dia 4 de Agosto de 1866,

verme esse mais tarde identificado sob a forma adulta (1876) e hoje universal¬

mente conhecido debaixo da denominação de Wuchereria bancrofíi.

* Baseada em dados fornecidos pelo biografado.

Endereço para correspondência: Rua General Rondon, 17 - Santos, SP.

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

FALCÃO, E.C. Breve noticia sobre a vida científica de Afrãnio do Amaral.

Mem. Inst. Butantan, 39: 3-9, 1975.

Cinquenta anos depois do achado inicial de Wucherer, colava grau de Dou¬

tor em Medicina pela Faculdade da Bahia, em Dezembro de 1916, um jovem

nascido em Belém do Pará, cujo pendor para a pesquisa científica cedo se reve¬

lara capturando répteis para o Museu Goeldi.

Vindo para a Cidade de Salvador, alí bacharelou-se com distinção em Ciên¬

cias e Letras no Ginásio da Bahia e, promovido automaticamente ao estágio

superior, ingressou na Faculdade de Medicina do Terreiro de Jesus, a única

que, no Norte do Brasil, possuia tradição científica e onde, logo no primeiro

trimestre de 1911, serviu de monitor voluntário ao grande Mestre da Parasito-

logia e da Medicina Tropical, que foi M. Pirajá da Silva. Afrãnio do Amaral

era o seu nome.

Concluindo o curso médico com distinção em todas as Cadeiras, Afrãnio

dedica-se profundamente ao estudo da doença produzida pelo nematóide des¬

coberto por Wucherer, tomando-a como tema para obter a láurea doutoral e

faz jus a três prêmios: l.°) Colocação de seu retrato no Pantheon da Escola;

2.°) Viagem ao estrangeiro para aperfeiçoamento; 3.°) Medalha Alfredo Brito

pela originalidade da tese de doutoramento (“Bancroftose”, 236 p.).

Deixando os bancos acadêmicos, partiu então em direção ao Sul, para en¬

frentar a vida profissional em São Paulo. Pondo de lado a especialização que

praticara quando estudante, a alta cirurgia, realizada sob a orientação do Prof.

Antonio Borja, ingressou Afrãnio num campo totalmente diverso, para o qual

já revelava forte pendor, ao escolher o assunto da tese para o doutorado: os

trabalhos de laboratório.

Assim, a partir de Março de 1917, passou a frequentar, no Instituto Bu¬

tantan, os serviços de João Florêncio Gomes, Assistente encarregado de Ofio-

logia e Parasitologia, além de Microbiologia.

Cinco meses mais tarde, precisamente em Agosto, foi contratado para o

cargo de Auxiliar-Médico da referida instituição, instalando então o serviço

de Fisiologia Operatória em relação com a Endocrinologia e a Opoterapia. De¬

dicando-se com afinco a esse mister, já em Outubro de 1918, teve ensejo de

ser um dos três representantes do Butantan enviados à 2. a Conferência Sul-Ame¬

ricana de Higiene, Microbiologia e Patologia, reunida naquela data no Rio de

Janeiro e dispersada pela pandemia gripal, no auge de sua incidência na então

capital do Brasil. A esse certame apresentou original contribuição sob a epí¬

grafe “Tratamento das úlceras atômicas e fagedênicas pelo soro seco”, ilustrada

com peças de cera demonstrativas. Baseado nessa contribuição e em monogra¬

fia de revisão da filariose, concorreu ao posto de Sub-assistente do Instituto, de

cujas “Memórias” então criadas (juntamente com os “Anexos” de Ofiologia),

passou a ser o editor.

Nessa altura (1918), o Butantan veio a sofrer a primeira de suas grandes

crises. Desaviera-se o seu Director Geral, Vital Brazil, com o Governo do Es¬

tado, em virtude da manifesta oposição do Secretário do Interior da Presidên¬

cia Altino Arantes, Dr. Oscar Rodrigues Alves, à criação da Universidade Li¬

vre de São Paulo, da qual fazia parte como professor aquele eminente cientista,

que, em acentuada divergência com o Director do Serviço Sanitário de então,

Arthur Neiva, acabou por aposentar-se, no decorrer de 1919, tão logo com¬

pletou o necessário tempo de serviço. Ao fazê-lo, arrastou consigo todo o pes¬

soal técnico superior do Butantan, levando-o para o Estado do Rio, onde

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FALCÃO, E.C. Breve notícia sobre a vida cientifica de Afrânio do Amaral.

Mem. Inst. Butantan, 39: 3-9, 1975.

veio a fundar uma instituição privada da mesma natureza, a qual recebeu o

seu próprio nome (Instituto Vital Brazil). Apenas não quiseram acompanhá-lo,

apesar de convidados, João Florêncio Gomes e Afrânio do Amaral, o primeiro

naturalmente indicado para suceder a Vital Brazil. Não quis o destino que tal

acontecesse. Em Janeiro de 1919, poucos meses antes da retirada de Vital

Brazil, João Florêncio adoece de infecção gripal e vem a falecer, mais tarde,

de suas complicações. Afrânio do Amaral é, então, promovido a Assistente e

a Encarregado da Seção de Ofiologia. Com a saída do antigo Director, o Bu¬

tantan não só fica acéfalo, mas sobretudo desfalcado da totalidade dos seus

colaboradores científicos (Dorival de Camargo Penteado, Otávio Veiga, Cris-

siuma de Toledo, Arlindo de Assis, Costa Pereira, Nova Gomes e Paulo Araú¬

jo). Apenas Afrânio permanece na estacada. Passa a despachar o expediente

da repartição em cooperação com Arthur Neiva e assume a responsabilidade

de todas as seções técnicas, não deixando perecer a obra magnífica de tantos

anos, orgulho da terra bandeirante; procura e consegue cumprir a promessa

que fizera ao governo paulista, de que “o Butantan não fecharia”, aludindo,

assim ao derrotista vaticínio que corria a respeito do desfecho da série crise

funcional que dificultara a vida da tradicional instituição. São convidados, su¬

cessivamente, para dirigir Butantan, grandes técnicos de Manguinhos, entre

outros Flenrique de Beaurepaire Aragão e FTenrique da Rocha Lima. Apresen¬

taram eles condições tais, que não puderam ser aceitas. Aliviam as tarefas de

Afrânio, encarregando-se o Director do Instituto Bacteriológico, Ulhôa Cintra,

de despachar o expediente de Butantan. Procura Amaral, sobretudo, formar

novos técnicos, em substituição aos que se ausentaram. É nessa época que, me¬

diante indicação do Serviço Sanitário, passam a trabalhar para a instituição

em apreço, J. Lemos Monteiro, J. Pires Fleury, J. Bernardino Arantes, J. Ro¬

cha Botelho e J. Maria Gomes.

Após a mudança do Governo Estadual, em Maio de 1920, Alarico Sil¬

veira, Secretário do Interior da Presidência Washington Luís, convida Afrânio

e o nomeia Director em comissão do Butantan, cargo em que ele permanece

até fins de 1921, quando, por ter de ausentar-se do país em gozo do prêmio

de viagem ao estrangeiro ganho na Faculdade de Medicina da Bahia, afasta-se

por largo tempo do estabelecimento que sua energia e capacidade não deixa¬

ram soçobrar.

Reorganizado assim o Instituto Butantan, pôde Afrânio do Amaral par¬

tir para o Exterior, a fim de aprofundar e actualizar os seus conhecimentos,

aproveitando a oportunidade que se lhe apresentava. Recebeu então da velha

Faculdade o encargo de cumprir o seguinte ternário de estudos, conducentes

aos relatórios que deveria enviar à medida que fosse executando a sua missão:

a) Ensino da Medicina Experimental na Europa e na América do Norte;

b) aspectos práticos do problema das avitaminoses;

c) soro-reações usadas no diagnóstico diferencial da sífilis;

d) orientação do Sistema Universitário na Europa e na América do Norte.

Ao termo de seus estudos e observações nos principais centros universitá¬

rios europeus (Itália, França, Ibéria, Áustria, Alemanha, Países Baixos, In¬

glaterra e Escócia), seguiu para os Estados Unidos onde iria permanecer por

mais 2 anos, aproveitando a bolsa (“fellowship”) que lhe oferecera o Con¬

selho Internacional de Saúde (C.I.S.). Nos Estados Unidos, primeiro esta-

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

FALCÃO, E.C. Breve notícia sobre a vida cientifica de Afrânio do Amaral.

Uem. Inst. Butantan, 39: 3-9, 1975.

giou na Universidade Johns Hopkins, onde o Prof. Elmer V. McCollum o

orientou nas pesquisas sobre vitaminas e nutrição.

Em seguida, ao receber convite da Universidade Harvard, dali prosseguiu

para Boston e Cambridge, a fim de cursar as Faculdades de Filosofia, de Me¬

dicina e de Higiene e Medicina Tropical, estagiando ainda no Mass. Institute

of Technology (que então mantinha convênio com Harvard), onde, a par das

actividades de Engenharia Sanitária, observaria as técnicas de concentração e

de dessecação (inclusivamente do café, de cuja química se enfronhou). Na

Harvard, estudou Fisiologia Animal e Experimental e Herpetologia, além de

Farmacologia, bem como as reacções sorológicas da sífilis, acompanhando

ainda o desenvolvimento de pesquisas que, servindo de base à Medicina e à

Higiene, iriam auxiliá-lo, mais tarde, no progresso de sua carreira no Brasil,

conforme se deduz de seu trabalho in Mem. Inst. Butantan, 1966. 33 (1). Ao

cabo desses estudos, apresentou sua tese de doutoramento em Saude Pública e

Medicina Tropical, intitulada “A General Consideration of Snake Poisoning”,

que recebeu distinção com menção especial por parte de toda a Comissão Exa¬

minadora. Esse trabalho foi julgado como “the most concise and satisfactory

general statement on the principal points of interest conoerning snake poisoning

that has yet appeared”, pelo que passou a ser impresso pela própria Harvard

University Press (incl. todos os clichês para as gravuras em tricromia, prepa¬

rados pela Oxford University Press), tendo aparecido no vol. II da série “Con-

tributions from the Harvard Institute for Tropical Biology and Medicine”.

Essa obra despertou a atenção das autoridades americanas para o agra¬

vamento do problema do ofidismo levando-as, depois de Afrânio ter sido con¬

vidado a ensinar na Harvard, a requisitá-lo, por intermédio do Itamarati (Mi¬

nistério do Exterior) junto ao Governo de São Paulo, para que pudesse organi¬

zar c dirigir os serviços de pesquisa e defesa anti-ofídica nas Américas do Nor¬

te e Central. Nesse meio tempo, antes de regressar ao Brasil para apresentar

à Faculdade da Bahia o relatório final de sua missão, Afrânio conseguiu ainda

que o C.I.S. lhe facilitasse estágio e visitas a grandes instituições de pesquisa,

sobretudo em Nova York (Banzhaf), Philadelphia (Kolmer), Toronto (labo¬

ratórios de pesquisa e estandardização da insulina, dirigidos por Banting e Best),

Minnesotta (metabolismo, nutrição, bócio: Clínica Mayo, E.C. Kendall); In-

dianapolis (produção de insulina: Laboratórios Eli-Lilly).

Graças à ampla experiência assim adquirida, pôde, de volta ao Brasil, aqui

introduzir e divulgar as técnicas de desidratação e liofilização de substâncias or¬

gânicas, de redução de matérias minerais, e estandardização biológica, além de

contribuir com capítulos especiais para vários tratados americanos de Medicina

Interna, Medicina Tropical, Imunoterapia e Terapêutica. Outrossim, coube-lhe

estimular e divulgar em nosso meio a aproveitabilidade da soja na alimentação

humana, como fonte inigualável de proteínas (ricas de amino-ácidos) nutritivas.

Tudo isto no terreno da Tecnologia. No dominio da organização cultural e cien¬

tífica, participou da introdução do Sistema Universitário em nosso meio e da

fundação da Escola Paulista de Medicina, cuja cadeira de Higiene lhe foi reser¬

vada. Ao retomar seu cargo vitalício na direcção técnica do Butantan, transfor¬

mou o Instituto, nele fundando o primeiro Centro de Medicina Experimental

dedicado à Patologia Humana a existir na América Latina, dotando-o de vários

departamentos pioneiros, destinados a pesquisas em Química Orgânica, Bioquí¬

mica, Físico-Química, Farmacologia, Fisiopatologia (Endocrinologia), Histopa-

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FALCÃO, E.C. Breve notícia sobre a vida científica de Afrânio do Amaral.

Mem. Inst. Butantan, 39: 3-9, 1975.

tologia. Botânica Médica e Farmacognosia, Embriologia e Genética, todos pro¬

vidos de facilidades bibliográficas, instalações adequadas e biotérios bem orga¬

nizados .

Desse modo, conseguiu que as “Memórias do Instituto Butantan’’ passassem

a ser publicadas regularmente e, ainda, servir de veículo para permuta com re¬

vistas científicas numerosas e bem selecionadas. Possibilitou, ao demais, o au¬

mento da produção de imunobiológicos, parte para distribuição oficial e

parte para venda aos interessados, assim conseguindo saldos financeiros que,

mediante depósito no Banco do Estado, vieram reduzir o estrangulamento que

a burocracia fazendária impunha às actividades de pesquisa.

ACTIVIDADES DO ESPECIALISTA

No período de pesquisa e divulgação, organização e tecnologia e ensino uni¬

versitário - no Brasil e nos Estados Unidos da América -, Afrânio do Ama¬

ral aprofundou-se em Ofiologia (ofídios, venenos e ofidismo), passando, a par¬

tir de 1935, a trabalhar igualmente em Saurologia, estudando os nossos lacertí-

lios.

Sintetizou as suas pesquisas, catalogando todas as espécies e publicando com

base sistemática 2 Listas Remissivas de Ofídios do Brasil (2 edições) e 1 Lista

Remissiva dos Lacertílios do Brasil (1 edição).

À luz da 2. a edição da Lista Remissiva dos Ofídios do Brasil, continuou a

preparar, em português e em inglês, 4 volumes com gravuras coloridas das princi¬

pais serpentes que ocorrem em nosso território. Essa síntese ilustrada consta

da monografia “Iconografia Colorida das Serpentes do Brasil” (Colour icono-

grapli of the Brazüian Snakes), cuja publicação está em vias de ser efetuada

com o Instituto Nacional do Livro.

O sobre-humano esforço que fez no dito período (em que por duas vezes

teve de reorganizar, modernizar e ampliar o Instituto Butantan; e depois, orga¬

nizar e dirigir, nos Estados Unidos da América e na América Central, o Antivenin

Instituíe of América) não lhe arrefeceu o entusiasmo pela pesquisa, conforme

se vê pela seguinte estatística de sua produção original:

Em Ofiologia: das 245 espécies reconhecidas até então (distribuídas por

7 famílias, 6 sub-famílias, 71 gêneros) são de sua autoria 1 sub-família, 8 gê¬

neros, 21 espécies e 35 subespécies.

Em Saurologia: das 131 espécies que reconheceu em 1935 (distribuídas por

4 famílias e sub-famílias e 59 gêneros), são de sua autoria 7 gêneros e 31 es¬

pécies e subespécies.

BIBLIOGRAFIA CIENTÍFICA

Em sua extensa bibliografia se arrolam actualmente 453 trabalhos, dos

quais 207 versam sobre Ofídios e Ofidismo, Venenos e Animais Veneníferos.

Veterano investigador, é tido como o mais activo e conhecido especialista

na América Latina, onde tem orientado pesquisadores de pelo menos duas ge¬

rações; por isso, costuma ser consultado sobre assuntos técnicos e questões ta-

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

FALCÃO, E.C. Breve notícia sobre a vida científica de Afrânio do Amaral.

Mem. Inst. Butantan, 39: 3-9, 1975.

xonômicas e nomenclaturais, sobre que tem exarado centenas de pareceres cien¬

tíficos ou tecnológicos.

Afastado do Butantan durante 15 anos, soube Afrânio do Amaral tirar

proveito de suas viagens de estudo no Exterior, para ultimar pesquisas e con¬

signar em livros as suas conclusões sobre muitos assuntos científicos, entre os

quais se destacam os seguintes:

a) “Animais Veneníferos, Venenos e Antivenenos” (prefácio do Prof. Ro-

quette Pinto). Ed. Caça e Pesca, 1945; 169 p., 63 fig..

b) “Siderurgia e Planejamento Econômico do Brasil” (Prêmio Carlos de

Laet” da Academia Brasileira de Letras). Ed. Brasiliense, 1946; 460 p.,

31 fig.. (Dissertação científica sobre geogênese, siderogenia e siderotecnia

com farta documentação favorável à introdução da redução directa da he-

matita com vistas à produção do “esponja”. Com carácter pioneiro, as

previsões desse trabalho cada dia mais se confirmam ante a escassez mun¬

dial de sucata, pois o esponja lhe toma o lugar com vantagem e passa

a abastecer os fornos elétricos na produção até dos aços de qualidade).

c) Siphilis — moléstia e têrmo através da História” (Prêmio Arnaldo Vieira

de Carvalho” da Sociedade Paulista de História da Medicina). Ed. Insti¬

tuto Nacional do Livro, 1966; 309 p., 7 fig.. (Vista de conjunto do pro¬

blema mundial das treponematoses, na qual se desvenda o mito da origem

americana da lues venérea; liga em angenericidade muitas entidades mór¬

bidas conhecidas como bejel, irkintja, njovera, dichchwa, yacos-pian-bouba,

pinta, sibbens, lues endêmica ou mal judio ou mal dos Marranos e tantas

outras; divulga, em nosso meio, as vantagens que, para o diagnóstico da

sífile trouxe a reação de Nelson & Mayer — com ulteriores aperfeiçoa¬

mentos, usando os próprios treponemas, obtidos de cultura, como antíge-

no específico (“TPIA test”).

CARREIRA

No Instituto Butantan escalou uma por uma todas as posições científicas,

desde Auxiliar e Sub-Assistente de laboratório, até Director-Científico comis¬

sionado e, depois, efectivo, em cujo cargo se aposentou ao completar 50 anos

de serviço público (prestado no Brasil e no Exterior) e recebendo o prêmio

previsto em lei. Sua brilhante carreira foi coroada pelo já citado convite que

lhe formulou o Governo Norte-Americano, por indicação da Universidade de

Harvard e do Departamento de Saúde do Exército dos Estados Unidos da Amé¬

rica, para voltar aos Estados Unidos e organizar o Antivenin Institute of Ame¬

rica (de cujo Bulletin foi também criador e l.° editor), que dispunha de 3 Museus

c Estações, 1 Laboratório Central de Produção e Pesquisa e 6 Regionais, além

de 7 Serpentários, espalhados desde o Sul © Nordeste dos Estados Unidos até

a América Central e Panamá.

VIDA INTERNACIONAL

Do exercício dessas árduas actividades resultou sua eleição (por 2 Con¬

gressos Internacionais de Zoologia) para os cargos de Membro e Director (até

a Presidência e o Conselho da Comissão Internacional de Nomenclatura Zooló-

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FALCÃO, E.C. Breve notícia sobre a vida científica de Afrânio do Amaral.

Mem. Inst. Butantan, 39: 3-9, 1975.

gica sediada em Londres, no Museu Britânico de História Natural) e também

sua nomeação para Consultor da Organização Mundial da Saúde, em Genebra,

a fim de tratar de questões relativas à produção e aferição de antivenenos e

outras substanciais terapêuticas (Departamento de Produtos Terapêuticos).

SOROTERAPIA ANTI-OFÍDICA

No capítulo relativo ao uso de antivenenos, Afrânio do Amaral defendeu

(nos Estados Unidos da América e no Brasil) a necessidade de serem atendi¬

das as seguintes noções novas:

1. °) A dose do específico deve ser inversamente proporcional ao tama¬

nho (peso) da vítima: criança e cachorro devem tomar dose maior que pes¬

soa adulta ou cavalo. Esta noção não fora prevista por nenhum antecessor na

Europa ou na América.

2. °) Para os venenos necrosantes (proteolíticos), o antiveneno pode ser

também dado por inoculação local em torno do ponto atingido, convindo em

casos mais graves inocular ênzimo permeabilizante (hialuronídase) dos tecidos

afectados.

3. °) Para conservar a potência do antiveneno, o ideal é mantê-lo no

frigo. Para uso no hinterland, Afrânio do Amaral começou a usar nos Estados

Unidos o processo de liofilização (evaporação em vácuo, a baixa temperatura).

Antes da aplicação, o pó do antiveneno deve ser sulubilizado conforme hoje se

adopta para outras substâncias facilmente deterioráveis quando mantidas como

solutos.

4. °) Para actualizar racionalmente a aferição das actividades de vene¬

nos e antivenenos, introduziu as recomendações feitas através da Organização

Mundial da Saúde e constante dos Aperfeiçoamentos científicos e precauções

tecnológicas que descreveu no artigo publicado in OMS-RS 373/1956. Final¬

mente, em novo artigo publicado in OMS-RS 373/1956, sugeriu, à luz de pa¬

cientes pesquisas ecológicas e toxicológicas que realizou em duas “populações”

vizinhas, morfologicamente indistinguíveis, do tanatofídio Jararaca (Bothrops

jararaca) — a existência de “raças biológicas” (bioquímicas), reconhecíveis pe¬

la composição e toxicidade dos respectivos venenos.

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39 : 11-25, 1975

AFRÂNIO DO AMARAL

BIBLIOGRAFIA DE SEUS TRABALHOS.

1. PESQUISAS ORIGINAIS PUBLICADAS EM REVISTAS CIENTÍFICAS

1 . 1

1 . 2

1. 3

1. 4

1. 5

1 . 6

1 . 8

1.10

1.11

1915 Contribuição ao estudo da leishmaniose cutâneo-mu¬

cosa pelas injeções endoflébicas de emético. Arq.

bras. Meei., 5: 145.

1918 A filariose de Bancroft (revisão). Mem. Inst. Bu-

tcmtan, 7 (2): 89.

1918 Do emprego do soro normal sêco no tratamento das

úlceras atônicas e fagedênicas. Mem. Inst. Butantan,

7(2): 209.

1921 Contribuição para o conhecimento dos ofidios do

Brasil. Anexos das Mem. Inst. Butantan, Secção

Ofiologia, 7(1).

1921 Processos biológicos usados na profilaxia da peste

bovina. Boi. Soc. med. cir. S. Paulo, 4(3): 39.

1921 Notas de soroterapia. Boi. Soc. med. cir. S. Paulo,

4(5/6): 109.

1921 Últimos trabalhos inéditos de J.F. Gomes (Duas

novas espécies de Colubridos Opistóglifos brasilei¬

ros). An. Paul. Med. Cir., 9 (7/8): 1.

1921 Um novo soro anti-peçonhento (soro anti-crotálico

norte-americano). Boi. Soc. med. cir. S. Paulo, 4

(5/6): 134.

1923 The Brazilian contribution towards the improve-

ment of the specific snake bite treatment. Proc. N.

York pathol. Soc., 23 (1/5): 89.

1923 New genera and species of snakes. Proc. N. Engl.

Zool. Cl., 8: 85.

1924 Eight short papers on snakes and their biology. Co-

peia, (126): 17.

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

AFRÂNIO DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 11-25, 1975.

1 . 12

1924

New genus and species of South American snakes

contained in the United States National Museum.

J. Wash. Acad. Sc., 74(9): 200.

1. 13

1924

Helminthophis (Studies of Neotropical Snakes. I).

Proc. TV. Engl. Zool Cl., 9: 25.

1. 14

1924

Notes on some Central American snakes. Occ. P.

Boston Soc. Nat. Hist., 5: 129.

1.15

1924

Hyperovarianism and its specific treatment. Endo-

crinology, 8 (5): 652.

1.16

1924

On the biological diferentiation of Neotropical spe¬

cies of snakes Pit-Vipers. Am. J. trop. Med., 4 (5):

447.

1. 17

1925

South American snakes in the collection of the Uni¬

ted States National Museum. Proc. U .S. Nat. Mus.,

67.

1.18

1925

On the oviparity of Lachesis muta. Daudin, 1803.

Copeia, 149: 93.

1 .19

1925

Ofídios de Mato Grosso. Com. (Rondon) L. T. E.,

Mato Grosso ao Amazonas. Publ. 84, 43 p.

1 .20

1926

Ophidia from South America in the Carnegie Mu¬

seum: a critique to Dr. L. E. Griffin’s, “Catalogue

of the Ophidia from South America at present (Ju-

ne 1916) contained in the Carnegie Museum’’.

Ann. Carneg. Mus., 16 (2): 319.

1 .21

1926

Notas de Ofiologia. Rev. Mus. Paulista, 14.

a) Sobre o emprego do nome genérico Micrurus

em vez de Elaps, p. 3.

b) Sobre o emprego do nome genérico Sibynomor-

phus em vez de Leptognathus, Cochliophagus,

etc., p. 7.

c) Sobre a preferência do nome genérico Pseudoboa

Schneider, 1801 a Clelia Fitzinger, 1826 e

Oxyrhopus Wagler, 1830, e do nome específico

Pseudoboa petola (L., 1758) a P. petolaria (L.,

1758), p. 10.

d) Sobre a invalidez de um gênero e algumas es¬

pécies de ofídios sul-americanos, p. 17.

e) Sobre a diferenciação dos nomes genéricos La-

chesis, Trimeresurus e Bothrops, p. 34.

1926

Novos gêneros e espécies de ofídios brasileiros. Arq.

Mus. Nac. Rio de Janeiro, 26: 95.

1926

Nomes vulgares de ofídios do Brasil. Boi. Mus. Nac.

Rio de Janeiro, 2 (2): 19.

AFRÃNIO DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 11-25, 1975.

1.24

1926

1 .25

.26

1926

Série de trabalhos publicados in: Coletânea Ofioló-

gica (14), Rev. Mus. Paulista, 15: 1-110.

a) Albinismo em “cobra coral”.

b) Três subespécies novas de Micrurus corallinus

(Wied): M. corallinus corallinus, M. corallinus

riesei e M. corallinus dumerilii.

c) Da invalidez da espécie de Colubrideo Elapineo

Micrurus ibiboboca (Merren) e redescrição de

M. lemniscatus (L.).

d) Sobre a Lachesis muta (L.), espécie ovipara.

e) Da invalidez da espécie de Colubrideo Dipsadi-

neo Sibynomorphus perua,nus (Boettger).

f ) Albinismo em Dorme-Dorme.

g) Da ocorrência de albinismo em cascavel.

h) Ofídios sul-americanos do Museu Carnegie e

espécies novas de Griffin.

i ) Sobre o nome genérico dos ofídios Liophis (Wa-

gler, 1839) vs. Leimadophis (Fitzinger, 1843).

j ) Da invalidez do nome genérico de ofídios Erpe-

todryas ou Herpetrodyas.

k) Da pholidose dorsal da espécie de Colubridae,

Philodryas aestivus.

1 ) Variações das marcas dorsais de Crotalus terri-

ficus Laurenti, 1768.

m) Bicefalia em ofídios.

n) Estudo comparativo da evolução ontogenética

de Pseudoboa cloelia (Daudin) e Pseudoboa

haasi (Boettger).

On Micrurus mipartitus and allied fornis (Studies

of Neotropical Ophidia. II). Proc. N. Engl. Zool.

Cl., 9: 61.

On Helminthophis jlavoterminatus (Studies of Neo¬

tropical Ophidia. III). Proc. Biol. Soc. Washington,

39: 123.

A new North American Snake. Proc. N. Engl. Zool.

Cl., 9: 79.

The snake bite problem in the United States and in

Central America. Report Med. Dept. United Fruti

Co. Ann. Rept., 15: 229 e Buli. Antivenin Inst.

Am., 7: 31, 1927.

Antivenin specificity. J. Bacteriol., 13 (1): 48.

A new form of Crotalidae from Bolivia (Studies

of Neotropical Ophidia. IV.). Buli. Antivenin

Inst. Am., 1(1): 5.

2 3

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

AFRÂNIO DO AMARAL.

Mem. Inst. Butantan, 39:

Bibliografia de seus trabalhos. j

11-25, 1975. 1

1.31

1927

Notes on Bothrops lansbergii and B. brachys (Stu- |

dies of Neotropical Ophidia. V.). Buli. Antivenin I

Inst. Am., 1 (1): 22. 1

1.32

1927

Studies of African Ophidia. Buli Antivenin Inst.

Am., 1 (1): 25. 1

1.33

1927

A new genus of snakes from Honduras (Studies

of Neotropical Ophidia. VI.). Buli. Antivenin

Inst. Am., 1 (1): 28.

1 .34

1927

The new Antivenin Institute. Hcirvard Alumni

Buli., Febr.: 601.

1.35

1927

Snake poisoning and its treatment. Trans. Coll.

Physns. Philad., 49: 65.

1.36

1927

The snake bite probleni in the United State and

in Central America. Buli. Antivenin Inst. Am., 1

(2): 31. |

1.37

1927

An interesting collection of snakes from West Co¬

lômbia (Studies of Neotropical Ophidia. VII.).

Buli. Antivenin Inst. Am., I (2): 44.

1.38

1927

Crotalus goldmani Schmidt, 1922, a synonym of 1

C. mitchellii Cope, 1861 (Studies of Neartic Ophi¬

dia. 1.). Buli Antivenin Inst. Am., I (2): 47.

1 .39

1927

Crotalus pricei V. Denburgh, 1896, a synonym of

C. triseriatus (Wagler, 1830) (Studies of Neartic

Ophidia. II.). Buli. Antivenin Inst. Am., 1 (2): 48.

1 - 4Ü

1927

The anti-snake bite campaign in Texas and in the

sub-tropical United States. Buli. Antivenin Inst.

Am., I (3): 37.

1 .41

1927

Notes on neartic poisonous snakes and the treat¬

ment of their bites. Buli Antivenin Inst. Am., 1

(3): 61.

1 .42

1927

Trctchyboa Peters, 1860 (Studies of Neotropical

Ophidia. VIII.). Buli Antivenin Inst. Am., I (3):

86. I

1.43

1927

Anomalepis Jan 1861 (Studies of Neotropical Ophi¬

dia. IX.). Buli Antivenin Inst. Am., 1 (3): 88.

1 .44

1927

A new Elapid from Western Panama. Buli Antive¬

nin Inst. Am., I (4): 100.

1 .45

1927

The anti-snake bite campaign in the United States.

Brazil, 1 (1): 13.

1.46

1928

Improved process of venom extraction. Buli Anti¬

venin Inst. Am., I (4): 100.

1 14

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AFRÁNIO

DO AMARAL.

Bibliografia de seus trabalhos.

: Mcm. Inat

Butantan, 39

11-25, 1975.

1 .47

1928

Amounts of venom secreted by Neartic Pit-Vipers

(Studies of snakes venom. I.). Buli. Antivenin

Inst. Am., 1 (4): 103.

1.48

1928

Further notes on an interesting collection of snakes

from W. Colombia (Studies of Neotropical Ophidia.

X.). Buli. Antivenin Inst. Am., 2 (1): 6.

1.49

1928

Snakes from the Santa Marta region, Colombia

(Studies of Neotropical Ophidia. XI.). Buli. Anti¬

venin Inst. Am., 2 (1): 7.

1.50

1928

The fine art of snake culture. Independent, (April);

403.

1 .51

1928

Specific antivenins to combat scorpionism and

arachnidism. Buli Antivenin Inst. Am., 2 (3): 69.

1.52

1928

On Crotalus confluentus Say, 1823 and its allied

forms. Buli. Antivenin Inst. Am., 2 (4): 86.

1.53

1929

Notes on Crotalus tigris Keunicott, 1859. Buli An¬

tivenin Inst. Am., 2 (4): 82.

1.54

1929

On Crotalus tortugensis V. & S., 1921, C. atrox

elegans Sch., 1922 and C. a. lucasensis (V.,

1920). Buli. Antivenin Inst. Am., 2 (4): 85.

1.55

1929

Filogenia das cascavéis. An. Soc. Cient. Argent.,

107 : 369.

1.56

1929

Phylogeny of the rattlesnakes. Buli. Antivenin Inst.

Am., 3 (1): 6.

1.57

1929

Key to the rattlesnakes of the genus Crotalus Linné,

1758. Buli. Antivenin Inst. Am., 3 (1): 4.

1.58

1929

On the Bothrops lansbergii group (Neotrop. Ophi¬

dia. 12). Buli. Antivenin Inst. Am., 3 (1): 19.

1.59

1929

A new colubrine snakes in the Vienna Museum

(Neotropical Ophidia. 13). Buli. Antivenin Inst.

Am., 3 (2): 40.

1.60

1929

Da classificação e conceito de espécie em ofiologia.

Boi. Agric., 30 (7/8): 538.

1 .61

1929

Campanhas anti-ofídicas. An. Congr. Bros. Hig., 5.°,

Recife, p. 145.

1.62

1929

Notas à margem da sciencia. Boi. Mus. Nac. Rio

de Janeiro, 5 (4): 105.

1.63

1929

Ofídios da região neotrópica. Nota sobre as espécies

mais importantes do ponto de vista médico e hi¬

giênico. An. IV Conf. S.A . Hig. Microb. Pat., Rio

de Janeiro, 7: 55.

AFRÀNIO

Mem. Inst.

DO AMARAL.

Butantan, 39:

Bibliografia de seus trabalhos. 1

11-25, 1975. I

1.64

1929

Ofídios do Brasil. An. IV Conf. Sul Am. Hig. Mi- j

crob. Pat., Rio de Janeiro, 1 : 25. ]

1.65

1929

Estudos sobre ofídios neotrópicos. Mem. Inst. ]

Butantan, 4. 1

a) Valor sistemático de várias formas de ofídios 1

neotrópicos. 1

b) Lista remissiva dos ofídios neotrópicos. 1

c) Lista remissiva de ofídios do Brasil. 1

d) Revisão do gênero Spilotes. I

e) Revisão do gênero Phynomax.

f ) Revisão do gênero Drymarchon. j

g) Revisão da espécie C. dichrous (Drymoluber).

1 .66

1930

Uma raridade ofídica do Brasil. Boi. Mus. Nac.

Rio de Janeiro, 6 ( 1 ): 1.

1.67

1930

Notes on Spilotes pullatus. Buli. Antivenin Inst.

Am., 3 (4): 98.

1.68

1930

Princípios e planos de campanha anti-ofídica. Rev.

Hig. Saúde Pubt., 4: 225.

1.69

1930

Notes on two colubrine snakes (Studies of Neo- i

tropical Ophidia. XIV.). Buli. Antivenin Inst. j

Am., 4 ( 1): 12. 1

1.7°

1930

A rare brazilian snake (Studies of Neotropical Ophi¬

dia. XV.). Buli. Antivenin Inst. Am., 4 { 1): 13. |

1 .71

1930

Two new snakes from Central Colombia (Studies 1

of Neotropical Ophidia. XVI.). Buli. Antivenin \

Inst. Am., 4 (2) : 27. j

1 .72

1930

A new brazilian snake ( Atractus serranus) (Studies

of Neotropical Ophidia. XXIV.). Buli. Antivenin

Inst. Am., 4 (3): 65. I

1 .73

1930

A new race of Bothrops neuwiedii (Studies of Neo- |

tropical Ophidia. XXV.). Buli. Antivenin Inst.

Am., 4 (3): 65.

1 ' 74

1930

Sobre a caracterização das espécies em Ofiologia.

Rev. Agric. (S. Paulo), 5 (11/12): 488. j

1.75

1930

Regras internacionais de nomenclatura zoológica

(ed. portuguêsa). Mem. Inst. Butantan, 5: 233. |

| 1.76

1930

Campanhas anti-ofídicas. Mem. Inst. Butantan, 5; j

193. í

| 1.77

1931

Additional notes on Colombian snakes (Studies of

Neotropical Ophidia. XXIII.). Buli. Antivenin

Inst. Am., 4 (4): 85.

I 16

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AFRÀNIO DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 11-25, 1975.

1.78

1.79

1.80

1.86

1.87

1.91

1931 Ophidia of Colombia, Check-list (Studies of Neo¬

tropical Ophidia. XXVI.). Buli. Antivenin Inst.

Am., 4 (4): 89.

1931 O sôro sêco como cicatrizante das úlceras produzi¬

das pelo veneno botrópico. Boi. Soc. med. cir. S.

Paulo, 15 (10): 382. Mem. Inst. Butantan, 6: 251.

1931 Modernas aquisições no terreno da terapêutica pe¬

los agentes biológicos. Boi Soc. med. cir. S. Paulo,

15 (10): 398.

1931 Estudo atual da terapêutica biológica. Bras. méd.,

45 (43): 994.

1931 Maximiliano, Príncipe de Wied. Boi Mus. Nac.

Rio de Janeiro, 7: 187.

1931 Comentários a propósito de alguns boidos (English

translation). Remark on some Boid snakes. Studies

of Neotropical Ophidia. XXVIII.). Mem. Inst. Bu¬

tantan, 6: 173.

1932 Pontos de vista básicos na terapêutica do ofidismo.

Mem. Inst. Butantan, 6: 241.

1932 On two small collections of snakes from Central

Colombia (Studies of Neotropical Ophidia.

XXVII.). Buli Antivenin Inst. Am., 5 (3): 66.

1932 Notas sobre cromatismo de ofídios, I. Primeiro ca¬

so de eritrismo em serpente, observado no Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 7; 75.

1932 Notas sobre cromatismo de ofídios, II. Casos de

variação de colorido de certas serpentes. Mem. Inst.

Butantan, 7: 81.

1932 Aequalia cum aequalibus. Resen. clin. cient., 1 (5):

147.

1932 Aequalia cum aequalibus (Italiano). Rass. clin.

scient., 10 (5): 3.

1932 Novos gêneros e espécies de lagartos do Brasil

(Estudos sobre Lacertílios Neotrópicos. I). Mem.

Inst. Butantan, 7: 51.

1932 Novas notas sobre espécies colombianas (Estudos

sobre Ofidios Neotrópicos. XXIX.). Mem. Inst.

Butantan, 7: 103.

1932 Notas sobre ofidismo no Brasil. Alm. Agric. bras.,

12 .

1932 Hemaglutininas naturais no sangue de serpentes

e de outros animais pecilotérmicos. Mem. Inst.

Butantan, 7: 179.

2 3 4 5

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

1 AFRÂNIO

1 Mem. Inst.

DO AMARAL.

Butantan, 39:

Bibliografia de seus trabalhos.

11-25, 1975.

1 1.94

1932

Ueber die natuerlichen Haemagglutinine der Schlan- !

gen und anderer Kaltblutehier. Z. Imrnunjorsch., 77

(3/4): 315.

1.95

1932

Ensaio de classificação das rickettsioses à luz de i

nossos atuais conhecimentos. Mem. Inst. Butantan,

7: 343. |

1 .9ô

1932

Hábitos curiosos da espécie Tachymenis brasiliensis

Gomes ( Colubridae, Boiginae). Mem. Inst. Butan¬

tan, 7; 89.

1 .97

1932

Sobre um caso de necrofilia heteróloga na jararaca i

( B . jararaca). Mem. Inst. Butantan, 7: 93.

1 98

1932

Uma nova raça de Bothrops neuwiedii. Mem. Inst.

Butantan, 7: 95.

1 .99

1932

Uma nova espécie de Colubrideo opistóglifo, do

gênero Chlorosoma Wagler, 1930. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 7: 99.

| 1.100

1933

Histoire naturelle et classification des Rickettsioses.

Position systématique du typhus exantématique de

S. Paulo. Rev. sud-am. Méd. Cliir., 4 (11): 781.

1.101

1933

Toxemia gravídica e seu tratamento racional. Boi.

Soc. med. cir. São Paulo, 17: 44.

1.102

1933

La toxémie gravidique et son traitment rationnel.

Rev. sud-am. Méd. Chir., 4 (5): 345.

1.103

1933

Alimentação das serpentes do Brasil. Boi. biol .. I

d): 2.

1.104

1933

Significação do aparelho venenífero nos ofídios.

Bahia Rural, 1 (2): out.°. j

1.105

1933

Serpentes venenosas e não venenosas. Bahia Rural, 1 1

(3): nov.°. j

1.106

1933

Principais serpentes venenosas da Bahia. Bahia Ru- 1

ral, 1 (4): dez. 0 1

1.107

1934

Sobre a duração da atividade das antitoxinas e an- I

tivenenos. Mem. Inst. Butantan, 7: 321. et Bras. 1

med., 48 (27): 525. 1

1.108

1934

De la durée de Faction des antitoxines et des anti- j

venins. Rev. sud-am. Méd. Chir., 5: 209. I

1.109

1934

Estatísticas sobre ofidismo. Bahia Rural, 1 (8): 1

157. 1

1.110

1934

Envenenamento ofídico. Preparo dos antivenenos. J]

Bahia Rural, / (7): 107. 1

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AFRANIO DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 11-25, 1975.

1.116

1.117

. 120

1.123

1934

1935

1.127

1935

Envenenamento ofídico. Prevenção das picadas.

Bahia Rural, 1 (6): 55.

Envenenamento ofídico. Sua profilaxia. Bahia Ru¬

ral, 1 (5): 9.

Regras internacionais de nomenclatura zoológica ao

alcance de todos. Boi. biol., 1 (2): 72.

Hábitos da boipeva (Xenodon merremii). Boi.

biol., n.s. 2 (1): 2.

Notas sobre cromatismo de ofídios. 3. Um caso

de xantismo e um novo de albinismo observados

no Brasil. Mem. Inst. Butantan, 8: 149.

Estudos sobre ofídios neotrópicos. 30. Novo gê¬

nero e espécie de Colúbrideo na fauna da Colôm¬

bia. Mem. Inst. Butantan, 8: 157.

Estudos sobre ofídios neotrópicos. 31. Sobre a

espécie Bothrops alternata D. & B., 1854 ( Cro-

talidae ). Variações, redescrição. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 8: 161.

Coleta herpetológica no nordeste do Brasil. Mem.

Inst. Butantan, 8: 183.

Noções práticas sobre picadas de serpentes, ara¬

nhas, escorpiões e centopéias. Boi. biol, n.s. 2 (2):

52.

Lista de animais nocivos ao homem, à lavoura e

à pesca. Boi . biol., n.s. 2 (2): 54.

Schlangen in der Wissenschaft. Med. Welt, 21 : 1.

Estudos sobre lacertílios neotrópicos. 2. Novo gê¬

nero e espécie de lagarto do Brasil. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 9: 249.

Estudos sobre lacertílios neotrópicos. 3. Um novo

gênero e duas espécies novas de Geckonidae e uma

nova raça de Amphisbenidae , procedentes do Bra¬

sil Central. Mem. Inst. Butantan, 9: 253.

Coleta herpetológica no Centro do Brasil. Mem.

Inst. Butantan, 9: 233.

Coleta herpetológica no nordeste do Brasil (Contr.

2). Mem. Inst. Butantan, 9: 225.

Estudos sobre ofídios neotrópicos. 32. Apontamen¬

tos sobre a fauna da Colombia Mem. Inst. Butan¬

tan, 9: 209.

Estudos sobre ofídios neotrópicos. 33. Novas espé¬

cies de ofídios da Colombia. Mem. Inst. Butantan,

9: 219.

2 3

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

AFRANIO

DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos. 1

Mem. Inst.

Butantan, 39: 11-

-25, 1975. II

1.128

1935

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- 1

sil. 7. Novos gêneros e espécies de Colubrideos 1

opistóglifos. Mem. Inst. Butantan. 9: 203. 1

1.129

1936

Schlangengift und Schlangift-Schutzerum. Med. 1

Welt., 10: 851. 1

1.130

1935/36

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- 1

sil. 8. Lista remissiva dos ofídios do Brasil (2. a I

edição). Mem. Inst. Butantan, 10: 87. H

1.131

1937

Estudos sobre lacertílios neotrópicos. 4. Lista re- 9

missiva dos lacertílios do Brasil. Mem. Inst. Butan- 1

tan, 11: 167. 1

1.132

1937

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- 1

sil. 9. Nova espécie de Colubrideo opistóglifo con- j

fundível com Plnlodryas serra (Schlegel, 1837). j

Mem. Inst. Butantan, 11: 205. I

1.133

1937

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- 1

sil. 10. Redescrição de Plúlodryas serra (Schlegel,

1837). Mem. Inst. Butantan, 11: 213.

1.134

1937/38

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- |

sil. 11 . Sinopse das Crotalideas do Brasil. Mem. 1

Inst. Butantan, 11: 237 et in Livro Jubilar Prof.

L. Travassos.

1.135

1937

Estudos sobre ofídios neotrópicos. 34. Novas no- j

tas sobre a fauna da Colombia e descrição de uma 1

espécie nova de Colubrideo áglifo. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 77: 231.

1.136

1937

Regras internacionais de nomenclatura zoológica |

(2, a edição). Mem. Inst. Butantan, 77: 241. 1

1,137

1937

A vacina variólica no laboratório e na prática sani¬

tária. 7 Iras. med., 51 (47): 1157 e 57 (48): 1179.

I 1.138

1946

Nota sobre nomenclatura zoológica. Papeis Avulsos. \

Depto. Zool. Sec. Agric. E. S. Paulo, 7 (14): 181. j

1 1.139

1948

Lacertílios do Pará. Boi. Mus. Goeldi, 10: 107. |

■ 1.140

1948

Ofídios do Pará Boi. Mus. Goeldi, 10: 150. |

1 1.141

1948

Serpentes gigantes. Boi. Mus. Goeldi, 10: 211.

1 1.142

1950

Codificação da nomenclatura zoológica. Arq. Zool. 1

S. Paulo, 7: 379. j

1 1.143

1950

Two new South American lizards. Copeia, 10: 281. 1

1 1.144

1953/54

Reintegração do diretor efetivo. Mem. Inst. Butan¬

tan, 25 (2): vii-xi. ]

■ 1.145

1954

Reorganização dos Serviços T. -A. do Instituto Bu- !

1 20

tantan. Mem. Inst. Butantan, 26: vii-x. (

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AFRANIO

Mem. Inst.

DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos. ■

Butantan, 39: 11-25, 1975. H

1.146

1954

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Brasil 1

(12). Notas a respeito de Helminthophis ternetzii n

Blgr. Mem. Inst. Butantan, 26: 191. 1

| 1.147

1954

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- 1

sil (13). “Cobra-cegas” (Fam. Typhlopidae e Fam. 1

Leptotyphlopidae ). Mem. Inst. Butantan, 26: 197. J

1.148

1954

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- 9

sil (14). Duas novas espécies de “cobra-cega”. 1

Mem. Inst. Butantan, 26: 203. 1

I 1.149

1954

Contribuição ao conhecimento dos ofídios neotró- 1

picos (35). A propósito da revalidação de Coluber 1

lanceolatus Lacépède. Mem. Inst. Butantan, 26: I

207. j

1.150

1954

Contribuição ao conhecimento dos ofídios do Bra- j

sil (15). Situação taxonômica de algumas formas |

de Crotalidae, Lachesinae, recentemente descritas. I

Mem. Inst. Butantan, 26: 215. j

1.151

1954

Contribuição ao conhecimento dos ofídios neotrópi-

cos (36). Redescrição da espécie Bothrops hyoprora

Amaral, 1935. Mem. Inst. Butantan, 26: 221.

1.152

1954

Contribuição ao conhecimento dos ofídios neotró-

picos (37). Sub-espécies de Epicrates cenchria

(L.). Mem. Inst. Butantan, 26: 227.

1.153

1954

Comissão Internacional de Nomenclatura Zoológica.

Mem. Inst. Butantan, 25 (2): xiii. Papéis Avulsos

Depto. Zool. S.A. S. Paulo, XI (27): 517.

1-154

1956

Notes on the principies and procedures for the in-

ternational standadization of antivenins. World

Health Organization (Expert Commit. Biol. Stan-

dardization). WHO/BS/364.

1 1.155

1956

Preliminary data for the collaborative assay of ve-

noms. World Health Organization (Expert Commit.

Biol. Standardization). WHO/BS/373.

1 1-156

1959

Codificação da Nomenclatura Zoológica. Boi. Soc.

Est. Filol., 2 ( 3): 107.

1 1.157

1959/60

Especificidade da composição enzímica dos venenos.

Cien. Cult., 11 (3): 176.

E 1.158

1960

Peçonha e veneno: seu conceito e distinção em lin¬

guística comparada. Boi. Soc. Est. Filol., 2 (4): 151.

1 1.159

1960

Despoupança, neologismo indispensável em Ciência

Econômica. Boi: Soc. Est. Filol., 2 (4): 335.

1 1.160

1961

Prosódia de — Stylus e stilus e seus compostos. Boi.

Soc. Est. Filol., 3 (5): 3.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AFRÂNIO DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos. ■

| Mem. Inst. Butantan, 39: 11-25, 1975. 1

1.161

1961

Ruy e a Medicina Preventiva (Centen. Nasc. Ruy 1

Barbosa). Boi. Soc. Est. Filol., 3 (5): 153. 1

1.162

1963

Herpetological Note: Calamodontophis n.n., for 1

Calamodon Amaral. Copeia, 3: 580. 1

1.163

1963

Comment on the proposal to validate the name 1

Lystrophis Cope. Buli. Zool. Nomencl., 20(2): 83. D

1.164

1963

Venomous animais and zootoxicoses. Proc. XVI In- 9

tern. Congr. Zool., Washington, 1: 95. H

1.165

1964

Comment on the proposal to substitute the generic |

name Dryadophis Stuart for Mastigodryas Amaral. 1

Buli. Zool. Nomencl., 27 (1): 13. j

1.166

1964

Gender of generic names in -ops. Buli. Zool. No- ]

mencl, 21 (3): 212. 1

2. CONFERÊNCIAS,

GAÇÃO

COMUNICAÇÕES E TRABALHOS DE DIVUL-

2. í

1920

Excursão à Ilha da Queimada Grande (Notas so¬

bre a biologia de uma Lachesis ). Com. Soc. Med.

Cir. São Paulo, 15/04. Colet. Trab. Inst. Butantan,

2: 49.

1 2. 2

1920

Anafilaxia e doença do soro. Com. Soc. Med. Cir.

São Paulo, 15/04. Colet. Trab. Inst. Butantan, 2:

77.

2. 3

1920

Do preparo de soros antipeçonhentos. Com. Soc.

Med. Cir. São Paulo, 1/06. Colet. Trab. Inst. Bu¬

tantan, 2: 85.

2. 4

1921

Contribuições para o conhecimento da biologia dos

ofídios brasileiros: Habitat, hábitos e alimentação.

Com. Soc. Med. Cir. São Paulo, 1/09. Colet. Trab.

Inst. Butantan, 2: 177. |

1 2. 5

1921

Contribuição para o conhecimento da biologia dos j

ofídios brasileiros: Reprodução. Com. Soc. Med.

Cir. São Paulo, 15/09. Colet. Trab. Instituto Butan¬

tan, 2: 185. 1

1 2.6

1925

Vitaminas e avitaminoses. Conf. Soc. Med. Cir. São |

Paulo. Boi. Soc. med. cir. S. Paulo, 7: 18. j

1 2 ' 7

1925

El metabolismo basal y las endocrinopatias. Conf.

no Inst. Med. Exp. Buenos Aires.

1 2.8

1926

Remarks on some Neartic and Neotropic poisonous

snakes. Lect. Am. Soc. Trop. Med., Wash., May.

I 2.9

1929

Conferência inaugural do V Congr. Bras. de Hi¬

giene, Recife. Brasil Hig., 1: 28.

■ 22

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AFRÂNIO DO AMARAL. Bibliografia de seus trabalhos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 11-25, 1975.

2.10

1930

Serpentes venenosas sul-americanas. Com. Congr.

Int. Biol., Montevideo.

2.11

1931

Campanhas anti-ofídicas no Brasil e nos Estados

Unidos. Conf. realizada na Ac. Nac. Med., Rio de

Janeiro, 16/07.

2.12

1934

Vitaminas e aparelhos endócrino. Conf. inaugural

da Escola Paulista de Medicina, 29/09.

2.13

1959

Modern Toxinology. Conferências (2) realizadas no

Inst. Infect. Dis. & Exp. Med., Tóquio, Japão.

2.14

1966

Comunicação ao Int. Symp. on Animal Venoms,

Instituto Butantan, São Paulo, 17-23/07.

RELATÓRIOS

3.1

1923

O ensino da Fisiologia Experimental nos Estados

Unidos. Prêmio de viagem da Fac. Med. Bahia,

Rei. I. In: Gaz. med. Bahia, 54 (7): 515.

3.2

1924

A questão das vitaminas; sua compreensão atual.

Prêmio de viagem da Fac. Med. Bahia, Rei. II. In:

Gaz. med. Bahia, 55 (4): 147.

3.3

1925

A questão das vitaminas: sua compreensão atual.

Prêmio de viagem da Fac. Med. Bahia, Rei. III.

In: Gaz. med. Bahia, 54 (4).

4 ESTUDOS HISTÓRICOS, BIOBIBLIOGRÁFICOS, SÓCIO-ECONÔMI-

COS, FILOLÓGICOS E LINGUÍSTICOS E TRABALHOS DE DIVUL¬

GAÇÃO

Além dos publicados em livros e que constam das referências 5.17, 5.18,

5.22, 5.28 e 5.38, apresentou o homenageado uma lista de 176 notas e publi¬

cações maiores em jornais diários, que denotam a extraordinária versatilidade

e atividade intelectual do autor. Nada menos de 126 trabalhos versando sobre

Filologia e Linguística (excluídos os que se relacionam à nomenclatura zooló¬

gica, inseridos no item 1 desta relação), 23 sobre histórico de instituições mé¬

dico-científicas e notas biobibliográficas e 27 sobre estudos sócio-econômicos in¬

tegram a lista de tais contribuições, que constituem parte relevante do acervo

bibliográfico do Dr. Afrânio do Amaral e que a Comissão Editorial lamenta

não poder reproduzir in extenso, por absoluta carência de espaço.

5. LIVROS E MONOGRAFIAS

5. 1 1916 A Bancroftose. Tese, Fac. Med. Bahia (Prêmio

Alfredo Britto).

5. 2 1922 Snake Poisoning. In: Am. Med. Encycl. (Nelson

Loose-Leaf Living Med.).

AFRÂNIO

Mem. Inst.

DO AMARAL.

Butantan, 39:

Bibliografia de seus trabalhos. ■

11-25, 1975. 1

5. 3

1924

Snake venoms in relation to the snake bites. Tese |

(m.c.l.), Harvard Univ. School Publ. Health, Bos- 1

ton, Mass. 1

5. 4

1925

General consideration of snake poisoning and ob- 1

servations on Neotropical Pit-Vipers (6 papers), 1

Contr. II. Harvard Inst. for Trop. Biol. & Medicine. 1

Cambridge, Harvard Univ. Press. 64 p. 1

5. 5

1930

Animais venenosos do Brasil. São Paulo, Inst. Bu- 1

tantan, 65 p. 1

5. 6

1931

Animais venenosos do Brasil. São Paulo, Secr. Agr. 1

Ind. Com. 65 p. 1

5. 7

1931

Venoms and Antivenins. In: Jordan, E.O. & Falk. j

— The newer knowledge of bacteriology and 1

immunology. Chicago, Univ. of Chicago Press. p. j

1066.

5. 8

1931

Snake venoms and antivenins. In: Piersol, The Cy-

clopedia of Medicine.

5. 9

1933

Snake poisons and their antidotes. Brennemanms

Practice of Pediatrics, l. a ed.

5.10

1937

Snake bites. Poisonous snakes. In: Sajou’s Cyclo-

pedia of Medicine, 2. a ed.

5.11

1937

Snake poisoning. In: Nelson’s System of Medicine, l

2. a ed. p. 683." ]

5.12

1937

Snake poisons and their antidotes. Brennemann’s |

Practice of Medicine, 2. a ed. i

5.13

1937

Cinco anos de reorganização do Instituto Butantan. \

São Paulo, Rev. Tribunais. 74 p.

5.14

1937

O progresso da Biologia. In: Peixoto, A. et ai, As- '

pectos da cultura americana. São Paulo, Editora |

Nacional.

| 5.15

1941

Serpentes em crise. São Paulo, Rev. Tribunais.

1 5.16

1945

Animais veneníferos, venenos e antivenenos. São '

Paulo, Ed. Caça e Pesca. 169 p. |

1 5.17

1945

Biologia e Lingüística. São Paulo, Edigraf. 150 p.

K 5.18

1947

Siderurgia e planejamento econômico (Prêmio Car¬

de Laet). São Paulo, Ed. Brasiliense. |

■ 5.19

1951

Poisoning (venenation) by punctures of fish and |

other animais. In: Gradwohl, R.B.H. et ai, Clin. ,

Trop. Medicine (St. Louis). p. 1265.

I 5.20

1951

Snake venenation. In: Gradwohl, R.B.H., Clin. 1

Trop. Medicine (St. Louis). p. 1238.

■ 24

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AFRANIO

Mem. Inst.

DO AMARAL.

Butantan, 39:

Bibliografia de seus trabalhos. fl

11-25, 1975. 1

5.21

1951

Poisoning (envenomation) by scorpions and spi- 1

ders. In: Gradwohl, R.B.H. et al., Clin. Trop. 1

Medicine (St. Louis). p. 1224. 1

I 5.22

1951

A soja na alimentação popular (Prêmio Nacional 1

de Alimentação). Rio de Janeiro, SAPS. 152 p. 1

5.23

1951

Pesquisas filológicas. São Paulo, Rev. Tribunais. 1

275 p. 1

5.24

1954

Ofiotoxicoses. In: Roos, Terapêutica Clínica, Ha- I

vana. 1

I 5.25

1954

Os nossos Institutos Científicos (Mem. IV Cent. 1

Fund. São Paulo). São Paulo, Graf. Municipal. 1

5.26

1955

Snake venom poisoning. In: Cecil Textbook of Me- I

dicine, New York. j

5.27

1955

Atividades do Instituto Butantan em 1954 (Pro- I

jeto de autarquia). São Paulo, Rev. Tribunais.

5.28

1958

Soja e alimentação. Monog. São Paulo, Sec. Agric.

5.29

1959

Snake bite. In: Conn, H.F., Current Therapy.

Philadelphia, Saunders.

5.30

1959

Snake venom poisoning. In: Cecil & Loeb, Text¬

book of Medicine, New York.

5.31

1959

The newer knowledge of snake venoms and the an-

tivenomous therapy. Symp. Haffkine Inst. (Diamond

Jubilee), Bombay, 15: 128.

5.32

1963

Snake venoms and their antidotes. In: Brennemann-

Kelley, Practice of Pediatrics.

5.33

1965

Siphilis-Moléstia e têrmo através da História (Prê¬

mio Arnaldo Vieira de Carvalho). Rio de Janeiro,

Inst. Nac. Livro. 309 p.

I 5.34

1965

Iconografia colorida das serpentes do Brasil. Rio

de Janeiro, Inst. Nac. Livro. 4 v.

I 5.35

1966

Venom and antivenin specificity: modern concept.

I Int. Symp. on Animal Venoms, Inst. Butantan.

Mem. Inst. Butantan, 33 (supl.), fase. 1: 293.

I 5.36

1966

Código Internacional de Nomenclatura. Rio de Ja¬

neiro, Inst. Nac. Livro.

1 5.37

1973

Linguagem científica. Rio de Janeiro, Inst. Nac.

Livro.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 27-36, 1975

COMPLEXIDADES NOMENCLATURAIS EM BIOLOGIA.

GÊNERO* DE NOMES GENÉRICOS

TERMINADOS EM -OPS Z. N. (S) 1572. **

AFRÂNIO DO AMARAL

RESUMO: A expressão -ops final de nomes genéricos em Zoo¬

logia não pode corresponder a -WlJ) (-õps), pois esta forma é um

nome defectivo e seu nominativo singular apenas surgiu pela

obra do médico bizantino Areteus, a qual, por definição, não

pertence ao “grego antigo”. Lexigenicamente, proveio da contra¬

ção do substantivo iS(-ópszs) e, como este, conservou breve

a vogal da raiz simpies; oreve, que sempre foi, também admitiu

a ampla faixa polissêmica (de caráter genérico em Zoologia) de:

aspecto, aparência, face, vista e até voz. DesVarte, a admissão de

-õps em Zoologia infringe 2 dispositivos fundamentais do Código

Internacional de Nomenclatura, a saber: a) art. 11 (f), que

exige: “um nome de nível genérico deve ser um substantivo no

nominativo singular ou como tal considerado”; b) art. 29 (a) (i),

que esclarece: “quando ocorre no Código o termo “Latim” cor¬

responde às formas antiga, medieval e moderna do latim; toda¬

via, o termo “Grego” se refere exclusivamente ao “grego anti¬

go”. Finalmente, õpsis (ou õps ) e todos os demais nomes em

-sis sempre foram considerados femininos no grego.

UNITERMO: Nomes genéricos terminados em -ops.

INTRODUÇÃO

No XIV C.I.Z. (Copenhague, 1963), votei pela aprovação das “Re¬

gras Revistas” para a determinação do gênero de nomes genéricos. Nesse do¬

cumento, a Regra t(b) (III)], baseada na Proposta 84, disposição 7, conside¬

ra como sendo do gênero feminino todos os nomes que têm o final em -ops

ou -opsis, ob viamente derivado da correspondente palavra grega. Na discussão

decorrente da publicação das “Decisões de Copenhague sobre Nomenclatura

* Gênero gramatical.

** Buli. 2 ooI. Nomencl., 21(3): 212-221. 1964.

Idem, 21(6): 474, 1964.

Endereço para correspondência: Rua Itacoloml, 623 - Sáo Paulo - Brasil

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturais em Biologia. Gênero de nomes genérlco6

terminados em -o ps Z. N. (S.) 1572.

Mcm. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1975.

Zoológica” insisti na manutenção da dita regra. E, quando chegou o momen¬

to de votar-lhe a revisão, oferecí, no dia 20.XI.57, a seguinte declaração de

de voto [V.P. (57) 631:

“Após investigar profundamente os vários aspectos linguísticos deste caso,

à luz dos argumentos aduzidos em Z.N. (S.) 1020 e Z.N. (S.) 1206,

convenci-me — conforme expliquei em carta de 21 .VI.57 — de que a evi¬

dência favorecia o gênero feminino como o preferível çara osjiomes genéri¬

cos em -õps (no sentido de face, ou de olho) no Gr. oip ou ú)'li , das quais

a 2. a forma talvez fosse variante métrica da l. a . Tendo apoiado a manu¬

tenção da regra que o Congresso em Copenhague estabeleceu, no sentido

de se tratarem como femininos os nomes que terminam em -ops, voto con¬

tra a proposta expressa no V.P. (1957)63 e formulada em Z.N.(S)

1276”.

Agora que a referida questão do gênero que se deve atribuir a todos os

nomes genéricos terminados em -ops, surgiu de novo, e de maneira conflitante,

por meio do Caso n.° 18 (B.Z.N. 1963, 20, 1:73), para ser considerada no

XVI C.I.Z. (Washington, 1963), sinto que me cabe, seja como zoólogo, seja

como antigo professor de grego e de latim, dar as razões deste meu voto.

ANÁLISE LINGÜ1STICA

A - À luz do Código de Nomenclatura Zoológica, “um nome do grupo

de gênero deve ser um substantivo no nominativo singular ou tratado como

tal”.

B - O consequente -opsis de vários nomes genéricos apenas representa a

transliteração de um substantivo grego. Tal substantivo é Ot|UÇ (com os

significados de aspecto, aparência, face, vista, visão, etc.), cuja terminação

( - tjnÇ ) conota a ação exercida pelo verbo: e esta ação significa aparência

ou vista (raiz OU , verbo ò’jioyai ). Todavia, otJnÇ , por ter sido sempre

tratada como feminino em grego (vide, p.ex., Friedrich Preisgke - Wõrterbuch

d. griechischen Papyruskund, Ed. Hubert & Co., Gõttingen, Berlin 1927, 2:217;

e Brighenti, E. - Diz. Greco Moderno - Italiano, etc. Ed. V. Hocpli, Milano,

1927, 1:457), fica fora de discussão no presente caso.

C — O sufixo -ops dc nomes genéricos representa:

(a) pela regra, a transliteração de' qualquer das formas otjt ou wtjt de

um substantivo grego, ambas com o sentido de aspecto, face, aparência, olho

etc. (raiz oIT , verbo 0'jioyai).

(b) por exceção, a transliteração de , que é homônima de 6 < p , como

em (a), mas denotante dc voz, palavra (cognata de efíoÇ , verbo ElUeiV).

Desde que, na classificação dos animais, um nome genérico terminado em

-ops (no sentido de voz, como caracter do grupo) dificilmente entraria em co¬

gitação, dada a sua virtual inaplicabilidade x , na análise só se poderiam versar

as referidas formas de -ops que denotam aspecto, face, aparência, olho, etc.

A esta altura, deve o analista distinguir entre (1) õps ( oip ) c (2) õps

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturais em Biologia. Gênero de nomes genéricos

terminados em -ops Z. N. (S.) 1572.

Mem. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1975.

( üiijj ), a fim de poder fixar o gênero atribuível a um nome genérico que este¬

ja considerando:

(1) O l.° õps nada mais é que a forma contrata de õpsis (e as pessoas

iletradas são sempre capazes de confundí-las na pronúncia): tal qual óijnç.

ela se tem sempre considerado como substantivo feminino em Grego.

(2)0 2.° õps, qual forma poética de õps ( o4> , raiz 07T verbo oipoyat ),

provavelmente foi introduzido em Grego clássico, assim por Homero (século

IX A.C.), como por Hesíodo (século VIII A.C.); e apenas foi^por eles

aplicado no caso acusativo singular como integrante da expressão eíÇtdTTa

no sentido de em face. Em poesia, tbip parece ter sido empregado em vez de

6i}i por motivo de conveniência métrica, conforme se pode verificar ao se es¬

candirem os seguintes versos de Homero:

aívãg á0aváxr|cn 0e7jç eíg téna eotxqv

xexXaíq xuvéog 7tep êúv eíg unta íòéa0ai

auxáp énqv e\0nte, Àtóg x etg unta tòqcrOe

Yvúpevaf oó |iév yáp xi xaxü eíg unta êi^ixet

atpaxóevxa nê\et, betvóg 6’eíg unta íôéa0ai

ou6 etg unta lõeaOai evavxiov. Eu 6 exeov òq

(Ilíada

3:158),

( "

9:373),

( ”

15:147),

(Odisséia

1:411),

( "

22:405),

( ”

22:107).

Na verdade, caso houvesse a forma prosáica sido usaua nestes hexámetros,

o 5.° pé em (a), (b), (c), (d) e (e) e o 2.° em (f) teriam todos sido

formados por 3 silabas breves, quebrando assim o ritmo desses belos versos,

falta esta inadmissível em Homero. Este argumento também se aplica ao últi¬

mo exemplo dado por H.G. Liddell & R. Scott (Greek-English Lexicon, Ed.

Clarendon Press, Oxford 1951, 2: 2.042), viz., Hesíodo — Opera et Dies : 62,

onde o dáctilo entrou igualmente se teria tornado um tríbraco, e esta é outra

impossibilidade, já agora da parte de Hesíodo.

Com relação à forma poética wip , duas outras questões exigem exame

separado: (I) a forma plural inflectiva; (II) o gênero e o sentido

(I) Plural — Admite-se que tnrjj , comojome da 3. a declinação, possui

duas formas de plural: a normal (Ltres(nom.: (Imas , acus.); e a anormal (Lua

(nom. e acus.) que ocorre em Platão (m Cratylus: 409C) - ÒTl xá Sua

’ avaaxpéijieiv [“porque ela (a luz brilhante) obriga os olhos a se des¬

viarem” ].

(II) Gênero e sentido — O gênero varia de acordo com o número e o

sentido deste nome: (a) No singular — quando denota face, aspecto, aparência,

é em geral considerado feminino; todavia, quando significa olho, vista, visão,

é emoregado como masculino; (b) No plural (e então ambas as formas, a

normal úriraç e a anormal toira , têm, apenas o significado de olhos, vis¬

tas) a forma anormal surge como neutra no único exemplo que se conhece

1 Quando morto — para integrar coleções de museu — não pode ter voz; e, quando vivo,

raramente tem voz que possa ser descrita ou caracterizada nqma descrição, de base mor¬

fológica em geral.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturals em Biologia. Gênero de nomes genéricos

terminados em -ops Z. N. (S.) 1672.

Mem. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1975.

na literatura, e esic é justamente o da supra-citada expressão de Platão (in

Cratylus: 409C).

Finalmente, devem ser acentuados mais dois pontos a fim de facilitar a

todos a compreensão desse intricado problema, a saber:

(a) Em Nomenclatura, nenhuma forma plural está em jogo, visto que

um nome genérico, por definição, deve ser um substantivo no nominativo sin¬

gular. Por conseqüência, a nossa escolha se restringe ou confina, limitada como

fica, apenas entre o feminino singular e o masculino singular como indício do

gênero que se deve atribuir a qualquer nome composto sob exame para definir

um gênero.

(b) Caso o elemento final (consequente) -ops do nome genérico tivesse

o sentido de olho ou vista como carácter proeminente escolhido para de¬

finir um gênero animal, então este gênero ( genus) podia ser considerado mas¬

culino. Do contrário, isto é, quando ele conota aspecto ou face como o

escolhido carácter do gênero, então o substantivo composto é feminino.

COMENTÁRIO

Felizmente, apenas em exemplos bastante raros será o caráter olho usa¬

do para definir um gênero (genus), porquanto ele é tão instável e tão freqüen-

te e profundamente mutável após a morte e a preservação de animais (e

todo trabalho taxonômico em Zoologia é baseado virtualmente em exemplares

preservados) que, para fins práticos, podemos chegar, mediante elimina¬

ções sucessivas, a estabelecer a seguinte regra geral: Onde o térmo final (con-

seqüente) do nome genérico é -ops (procedente de òi/r = -ó/w, ou de tòtjj

= -õps), o substantivo composto, correspondente a esse nome genérico, é fe¬

minino, sobretudo quando.tal sufixo (terminação -ops) traz a idéia de aspecto

ou face. Isto representa aparentemente a grande maioria dos casos por con¬

siderar em Nomenclatura Zoológica. Consequentemente e tanto mais que o gê¬

nero masculino representa a exceção neste caso, seria, do ponto-de-vista linguís¬

tico, incorreto usá-lo com base para regra do gênero atribuível a nomes termi¬

nados em -ops.

A fim de tomar o assunto ainda mais fácil para aqueles que não são ver¬

sados em tais complexidades da lingüística, poderrse-ia até estabelecer que a

palavra Ü )ip/ (-õps), sendo apenas uma forma poética de bijt (-õps), não ca¬

rece de ser considerada na determinação do gênero para fins de Nomenclatura

Zoológica. Isto deixaria para consideração, como o conseqüente -õps em nomes

genéricos baseados em substantivos compostos do Grego, apenas a palavra bt|>

(-õps). Isto, todavia, não representa problema, porquanto, no sentido, seja de

face ou de olho, é estrictamente feminino.

A divulgação do fato de até o gênero de u)ijt (no sentido de aspecto)

ser feminino é geralmente imputada a Gaisford (in Etymologicum Magnum,

1848). Sem embargo de tal asserção, o próprio gênero feminino é o aceito nas

antigas edições de tão conceituados léxicos como os seguintes:

1. Henricus Stephanus — Thesaurus Graecae Linguae. Ed. F. Didot,

Paris 1572, vol. 8, p. 2150;

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AMABAL, A. do Complexidades nomenclaturals em Biologia. Gênero de nomes genéricos

terminados em -ops Z. N. (S.) 1572.

Mem. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1975.

2. Fridericus Sylburgius — Etymologicum Magnum. Ed. H. Commelini,

Heldelberg 1595, p. 139 (col. 4).

Quanto a dicionários modernos, sobretudo dos que são facilmente encon¬

trados em instituições científicas à base da preferência nacional, os seguintes

(além do conhecido H.G. Uiddell & R. Scott — loc. cit.) podem ser citados

como atribuindo a -ops ( jOI \) , singular) apenas o gênero feminino:

1. Bailly, A.

p. 1433.

Dict. Grec-Français, E. Hachette & Cie., Paris 1950,

Boisacq, E, — Dict. Étymol. L. Grecque, Ed. C. Winter Heidelberg

1950, p. 1085.

3. Demetrakos, D. — Méga Lexikón t. Hell. Gloss., Ed. D. Demetrakos,

Athens 1950, vol. 9, p. 8056.

4. Hofmann, J.B. — Etymol. Wõrterb. d. Griechischeh, Ed. Olden

bourg, München 1949, p. 433.

5. Rocco, L. — Vocabol Greco-Italiano, Ed. D. Aleghieri & S. Lapi.

Gênova 1943, pp. 1384, 2074.

6. Yarza, F.S. Dicc. Grieco-Espanol, Ed. R. Sopena, Barcelona

1954, pp. 1001, 1547.

Atualmente parece quase impossível tirar a limpo a veracidade de certos

documentos dosQrego antigo (de modo a provar ou reprovar várias afirmações

encontradas na literatura) sobretudo pelo fato de haver a língua de Homero e

Hesíodo, de Aristóteles e Platão, em sua longa evolução, sofrido in-luências es¬

tranhas e deformantes, sobressaindo-se a Bizantina como a primeira e a mais

antiga entre elas.

NOMES MITOLÓGICOS

Resta examinar o gênero (gramatical) que se deve atribuir a tais nomes,

terminados em -ops de origem mitológica ou histórica, quais Cecrops, Cercops,

Cyclops, Glaucops, Merops, Pelops, etc., todos os quais pre-cxistiam na litera¬

tura greco-latina como substantivos compostos aplicados a homens ou divinda¬

des masculinas. O gênero (gramatical) de todos esses nomes também foi pre¬

determinado na língua que primeiro os usou. Quando normalmente aplicados a

seres machos reais ou hipotéticos, tais substantivos têm sempre sido tratados

como nomes próprios masculinos:

1. Buttmann, Ph. K.

Ed. Berlin 1867, p. 67;

2. Stephanus, Henricus — loc. cit., vol. 8, o.

Lexicologus o. Beitr. z. griech. Wo.t-Erklarung

150.

PONTOS ESSENCIAIS

(1) Um nome genérico (singular, por definição) não se pode basear no

plural de qualquer étimo.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturais em Biologia Gênerò' de nomes genéricos

terminados em -ops Z. N. (S.) 1572.

Mem. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1875.

(2) Uma regra em Nomenclatura não se pode basear na forma poética

(que representa em geral uma licença ou exceção ) de qualquer étimo.

Leia-se na 2. a parte * (tradução) deste trabalho o original do seguinte parecer

COMMENTS ON THE GENDER OF GENERIC NAMES END1NG

IN -OPS Z.N. (S.) 1572

By C.W. Sabrosky (U.S. Department of Agriculture, Entomology

Research Diyision, Washington, D.C., USA.

* B.Z.N., 1964, 21 (3): 215-217

Leia-se na 2. a parte * (tradução) deste trabalho o original do seguinte parecer:

By Jaspcr Griffin (Balliol College, Oxford)

Classical Adviser to the International Trust for Zoological Nomenclature

* B.Z.N. 1964. 21 (3): 217-218.

Continuação do parecer de Afrânio do Amaral:

Em minha prévia contribuição ao Caso n.° 18, escrita de modo impessoal

e simplificado para tornar o assunto facilmente compreensível, apenas aflorei

alguns aspectos filosóficos que considerei dignos de atenção.

Ao ser agora citado nominalmente no Comentário que o prof. J. Griffin

foi chamado a preparar para publicação neste “Bulletin”, e havendo, entre¬

mentes, sabido indiretamente da existência de” cartas que o prof. Grensted 1

escrevera ao Secretariado sobre este mesmo caso — sem que eu tivesse acesso

ao assunto nelas contido — sinto-me na obrigação de redigir a presente no¬

ta adicional (não somente para confirmar o resultado de minhas prévias pesqui¬

sas e conclusões, mas para esclarecer, mediante análise objetiva e desprecon-

cebida, alguns argumentos que têm sido aduzidos desde então), na esperança

de tocar, desfarte e para o benefício dos nossos leitores, em todos os aspectos

importantes de que tais documentos se possam ter ocupado.

Ao fazê-lo, tentarei ordenar e considerar a questão fundamental que se

destaca em assunto tão complexo.

Forma poética: Em seu comentário, o prof. Griffin gentilmente admitiu

que a dita “palavra ( õps ) era poética e rara: nos poetas antigos jamais

foi usada de modo a revelar-lhe,o gênero”. Minha tese, minha principal afirma¬

ção lingüística. que objetivou o esclarecimento dos nomenclaturistas, tem sido

assim confirmada. Todavia, peço vénia, agora, para adir que, na minha mo-

Jesta opinião, a disputa entre os velhos gramáticos gregos resultou do fato

de haver a dita palavra sido, durante algumas gerações, usada como substan-

1 Laurence W. Grensted, saudoso mestre, professor emérito da Universidade de Oxford e

ex-conselheiro clássico do Secretariado da Comissão Internacional de Nomenclatura Zooló¬

gica (Londres) .

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturais em Biologia. Gênero de nomes genéricos

terminados em -ops Z. N. <S.) 1572.

Mem. Inst. Butantan, 39- 27-36, 1975.

tivo defectivo, desprovido de forma nominativa singular que pudesse decidir a

questão de maneira definitiva.

A forma nominativa -õps deve ter aparecido nos trabalhos de tais gramá-

eos como mera decorrência de outras formas do caso gramatical (õpa, õpas,

e lc.), criadas, por simples conveniência métrica, no remoto período de Homero.

Sabe-se, à luz de recentes pesquisas bibliográficas c históricas, que o apa¬

recimento da dita forma (ho õps) surgiu no tratado de Aretaeusvsobre o trata¬

mento de moléstias agudas e crônicas (Peri therapeias oxcõn kai khronikõn

pathõn). Todavia, este trabalho médico, escrito em dialeto jónico, foi publicado

no fim do segundo século A. D., correspondendo assim ao fim do período

greco-romano da literatura grega: ele sc acha, tanto no tempo quanto na qua¬

lidade, longe de satisfazer às exigências do C.l.N.Z. [Código: artigo 29 (a)

(i)], tanto que não pode ser (nem tem sido jamais) considerado como uma

publicação clássica do grego antigo (“ancient Greck”).

[A este propósito é taxativo o Código Internacional de Nomenclatura

Zoológica, Art. 29 (a) (i):

“Onde ocorre no Código, a palavra “Latim’’ compreende o latim antigo,

medieval ou moderno, ao passo que a palavra “Grego” apenas se refere ao

“grego antigo”.]

Nota: Vários zoólogos e nomenclaturistas (inclusive, eu próprio) chamados

a expor sua opinião sobre o gênero atribuível a -õps, olho, tiveram que re¬

correr a indicações zoo-estatísticas a fim de justificar sua preferência pelo gê¬

nero masculino ou feminino. Conquanto as estatísticas disponíveis revelem que

os exemplos com o sentido de olho representam a minoria (exceção), tem-se

verificado que o sentido de -õps não tem sido, em grande número de nomes de

gêneros zoológicos, claramente afirmado pelos seus autores, nem pode mais

constituir objeto de apuração cuidadosa, confiável e completa. Felizmente pa¬

ra nós, a dita verificação — relativa à inexistência de -õps no nominativo sin¬

gular em “grego antigo” — remove tal dificuldade e estabelece claramente a

impossibilidade de considerar masculino o termo -õps quando conseqüente de

nomes genéricos de animais.

Forma nominativa - Ainda mais: desde que o referido substantivo não possuia

a forma nominativa singular em “grego antigo”, não pode essa mesma palavra

ser invocada como parte de qualquer nome em nível de gênero, visto que o Có

digo (C.I.N.Z.), em seu artigo 11 (f) exige que ela esteja no nominativo

singular ou seja considerada como tal:

“O nome do grupo de gênero deve ser um substantivo no nominativo sin¬

gular ou ser considerado como tal”.

— õpsis -õps: A ligação entre estes dois substantivos pode ser encon¬

trada, por exemplo, no nome próprio Aethiops, cujo consequente deriva de

-opsis, face, segundo Scheller (Riddle transi.) Totius Latinitatis Lexicon,

Oxford, 1875.

— õps -õps: A ligação existente entre estes dois termos (formas pro-

sodicas) pode ser descoberta na evolução de seu étimo comum e simplificado

"°P, através do grego e de outros idiomas indo-europeus. É considerada em

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturals em Biologia. Gênero de nomes genéricos

terminndos em -ops Z. N. (S.) 1572.

Mem. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1975.

grego como exemplo de alterância quantitativa, a qual se manifesta na inflexão

revelada pela dita raiz (op), isto é, em um dos três étimos que intervêm na for¬

mação do correspondente verbo horaõ, ver: fut. õpsomai vs. aor. õpsamên,

fut. pass. ópththêsoimii vs. aor pass. õphthên.

Gênero - Com relação aos nomes próprios, ou comuns, eu diria que, à luz

da concepção fundamental de gênero (A Meillet — Introd. Étude Comparat.

Langues Indo-Européennes, Paris, 1937), os nomes gregos terminados cm -ops

são masculinos quando definem seres (homens, heróis, divindades, mitos, ani¬

mais) que são considerados machos. Do contrário, eles são femininos. Este

fato banal é suficiente até para explicar por que o gênero masculino é atribuído

por todos os lexicógrafos, inclusive os modernos, a nomes em -ops ( Cercõps,

Dolõps, dr\õps, ellõps, etc.) a despeito de -ops (no sentido de olho e de aspecto)

ser estritamente feminino em grego. Quanto a Cercõps, e Dolõps, seria realmente

de admirar, tendo em vista a conotação essencial de gênero, que algum lingüís-

ta competente considerasse tais nomes como femininos, por causa da respectiva

terminação. Vice-versa um nome em -õps (na hipótese de ser masculino este

sufixo quando significa “olho”), tal como Glaucõps, de olho azul, seria femi¬

nino quando definisse uma divindade fêmea.

Por conseqüência, este argumento de gênero (gramatical) está fora de

discussão: é inaplicável quando se trata de esclarecer a presente controvérsia

nomcnclatural.

Nota: No tocante ao nome próprio Merõps, que é masculino, seu conse¬

quente procede do étimo simplificado oks (ops) com o sentido de voz, sendo

õps também feminino com tal significação. Análise mais profunda dos fatos re¬

lativos a estes exemplos do gênero revela que õps procede realmente de duas

raizes diferentes: OK+ (>OP), Lat, õc-ulus, Gr. õps-is, e WOK + (>- v OKS),

Lat. vox, ambas as quais estão sujeitas a inflexão por alternância quantitativa.

Sua aproximação sob ops parece haver-se produzido por intermédio das formas

flectivas osse ( > okje) da primeira e ossa (> oksa) da segunda. Ainda mais: tal

alternância compreende-se dentro dos limites de outro bem conhecido fenômeno

lingüístico e que se chama variação de vocalismo (F. Sommer — Hb. Latein.

Laut - u. Formenlchre, Heidelberg, 1948), o qual também tem sido invocado

para explicar a ligação -õps -õps.

Dicionários - À lista dos léxicos facilmente disponíveis (e em várias línguas mo¬

dernas), todos a considerarem õps (sing.) como substantivo feminino e assim

citado na l. a parte deste trabalho, o seguinte pode ser acrescentado: Pape, X.,

Griech. - Dcutsch. Wõrterbuch, Brunswig, 1880.

Na minha referida lista eu inclui os principais léxicos que são considerados

“dicionários padrões” sobre o grego, consoante exigência feita pelo Código

[C.I.N.Z.: Art. 30 (a) (i)]:

“Um nome do grupo de gêneros que represente uma palavra em grego, ou

latim, ou nela termine, recebe o gênero (gramatical) que lhe conferem os di-

Forma simplificada (para uso de não especialistas) de OK e WOK

Vendryes - Tr. Gramm. Comparat. Langues Classiques. Paris, 1948.

A. Meillet & J.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturais em Biologia. Gênero de nomes genéricos

terminados em -ops Z. II. (S.) 1572.

Mem. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1975.

cionários padrões de grego ou de latim, a menos que a Comissão decida o

contrário”.

Resumo: Os aspectos glotológicos e nomenclaturais relevantes nesta questão

podem agora ser rapidamente resumidos assim:

1. O termo õps com o sentido de olho não pode, à luz do Código, ser

invocado em Nomenclatura Zoológica, visto que a sua forma nominativa sin¬

gular não existiu em “grego antigo”.

2. O único étimo que, à luz do Código, pode ser corretamente atribuído

a nomes genéricos terminados em ops é õps, o qual é estritamente feminino e

possuidor da tripla conotação de olho, aspecto e voz.

3. Esta conclusão, lingüística e lógica, parece satisfazer às aspirações de

todos os meus confrades, Comissários e lingüistas em geral, com os quais eu me

tenho ultima mente correspondido à procura de “uma decisão para conferir um

único gênero (gramatical) a tais nomes, sem considerar a derivação linguística

de tais nomes” (palavras textuais de Holthuis), ou “uma Regra que torne as coi¬

sas tão simples de manobrar quanto possível” (expressão de Lemcke), ou “u’a

maneira de evitar o esforço de todo desnecessário de rememorar qual é mascu¬

lino e qual é feminino” (modo de sentir de Follett).

Reflexões finais - Esta solução simplificada tem a grande vantagem de não ser

arbitrária. Ela é cientificamente correta. Em face da crescente oposição que o

trabalho da Comissão Internacional vem encontrando, e que procede de vários

quadrantes, parece pouco sábio e inoportuno estarmos novamente a dar demons¬

tração de absolutismo e, à base de falsas premissas, invocar a Cláusula de ple¬

nos poderes contra o restabelecimento da Regra de Copenhague (b) (III), re¬

sultante da Proposta 84, Provisão 7, a qual era lingüisticamente correta e intei¬

ramente despreconcebida. Devemos lembrar-nos que a atual Nomenclatura já

tem sido chamada de “úma espécie de,monstro: virtualmente não existe mais um

zoólogo que possa facilmente localizar e interpretar a regra que ele pretende apli¬

car. A nomenclatura zoológica já tem passado por experiências suficientemente

tempestuosas e cheias de perigo — quais aquelas que decorrem de rivalidade nacio¬

nal, interpretação do liberum veto, aplicação da lei de prioridade e, ultimamente,

as questões relativas a nomina conservando e nomina oblita — para ser posta

em risco pela nossa Comissão mediante uso injustiçado de plenos poderes nes¬

te caso.

ADVERTÊNCIA

1. Desde que -õps, ao contrário de -õps, obedece ao Art. 11 (f), Art.

11 (f), Art. 29 (a) (i) e Art. 30 (a) (i) das exigências do Código Inter¬

nacional de Nomenclatura Zoológica quando aplicadas a nomes do nível de gê¬

nero;

2. Desde que o texto do atual Código Internasional de Nomenclatura

Zoológica, aprovado pela Comissão Internacional de Zoologica, foi adotado

pelo XV Congresso Internacional de Zoologia;

— nenhuma alteração que se introduza nesse texto — até por efeito de

má interpretação ou má aplicação de qualquer de suas provisões e que torne

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

AMARAL, A. do Complexidades nomenclaturais em Biologia. Gênero de nomes genéricos

terminados em -ops Z. N. (S.) 1572.

Mem. Inst. Butantan, 39: 27-36, 1975.

impossível a promoção de estabilidade e universidade nos nomes científicos de

animais — poderá assegurar-se de validez internacional antes que seja explícita

e legalmente adotada por um subseqüente Congresso Internacional de Zoologia.

WARNING

1. Since oiji as opposed to tiiji complies with the provisions of artieles

11 (f), 29 (a) (i) and 30 (a) (i) of the International Code of Zoological

Nomenclature; and

2. Since the text of the present Code, as approved by the international

Commission on Zoological Nomenclature, was adopted by the XV Internatio¬

nal Congress of Zoology:

— No change introduced into that text — whether through misinterpre-

tation or misapplication of any of its provisions or otherwise — which migh,

fail to promote stability and universality in the scientific names of animais will

attarn international validity until it is explicitly and lawfully adopted by a sub-

sequent International Congress of Zoology.”

SUMMARY: -ops, as a final expression of generic names in Zoo¬

logy, could nqt correspond to U)\p (-õps), since this form is a

defective noun, its nominative only appeared in the singular

through the book of the byzantine physician Areteus, which,

by definition, could not be taken as “ancient greek”. Lexigenically

it resulted from -õpsis, through contraction and, like this, it

kept as short its simpleroot vowel; as a short word it also

covered the broad polysemous band of: aspect, appearance, face,

view and, even, voice. Therefore, the admission of -õps in Zoo¬

logy will infringe upon 2 fundamental prescriptions of our Inter¬

national Code of Nomenclature, to wit: a) art. 11 (f): “A genus-

-group name must be a noun in the nominative singular or be

treated as such”; b) art. 29 (a) (i): “When the word “Latin”

is used in the Code it includes ancient, medieval and modern

Latin, but the word "Greek” refers only to ancient Greek”.

Finally, õpsis (or õps) and all the other names in -sis ha ve

always been considered as feminine in Greek.

UNITERM: Generic names ending in -ops.

ReceDldo para publicação em 30-V-1975 e aceito em 28-IX-1975.

2 3 4

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 37-50, 1975

POSIÇÃO TAXONÔMICA DE LYSTROPHIS NATTERERI

(STEINDACHNER). [SERPENTES, COLUBRID AE] *

ALPHONSE RICHARD HOGE, CARMEN LUCIA CORDEIRO e

SYLVIA ALMA DE LEMOS ROMANO

Secção de Herpetologia, Instituto Butantan

RESUMO: Revalidação de Lystrophis nattereri (Steindachner)

1869, espécie até 0 momento incluída na sinonimia de Lystrophis

histricus (Jan) 1863.

UNITERMOS: Serpentes, Colubridae. Lystrophis histricus (Jan)

1863. Lystrophis nattereri (Steindachner) 1869.

Durante a revisão dos especimens de Lystrophis histricus (Jan) 1863, de¬

positados na coleção do Instituto Butantan, observamos a existência de duas es¬

pécies distintas.

HISTÓRICO

1863 Jan descreve Heterodon histricus ( : 224).

1864 Steindachner ( : 223), menciona um exemplar de Heterodon histricus co¬

letado por Natterer no interior do Brasil, mencionando todavia que o exem¬

plar se diferenciava da descrição de Heterodon histricus por vários ca-

ractéres.

1869 Steindachner ( : 90), menciona que o exemplar por ele citado em 1864

( : 233), e, procedente do Brasil, pertence à uma espécie nova, H. nattereri.

Steindachner, não dá uma descrição da espécie nova, mas diz que os da¬

dos e gravura, publicados cm 1864, permitem facilmente distinguir as duas

espécies.

1894 Boulenger ( : 152), coloca a espécie nattereri na sinonimia de histricus.

Desde aquela data, todos os autores mantiveram nattereri na sinonimia

de histricus, inclusive Orejas-Miranda 1966 ( : 203) e Peters e Orejas

Miranda 1970 ( : 188).

* Trabalho realizado com auxílio do Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan

(FEDIB) e do Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).

Endereço para correspondência: Caixa postal 65 - São Paulo - Brasil

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). \ Serpentes, Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

O estudo de 70 exemplares de Lystrophis histricus “sensu” Boulenger per¬

mitiu-nos constatar que Heterodon nattereri Steindachner 1869 é uma espécie

válida, passamos pois a redescreve-la.

CHAVE ARTIFICIAL PARA AS ESPÉCIES DE LYSTROPHIS

I — Dorsais em 21 séries longitudinais

A — Ponta da cauda pontuda (Fig. 3); olho geralmente

separado das sub-oculares; coloração dorsal com 3

séries de manchas pretas ou castanhas, algumas vezes

fundidas (Fig. 5); em bandas transversais irregulares;

ventrais 123 -147 . dorbignyi,

B — Ponta da cauda redonda (Fig. 4); olho em contato

com as supralabiais; coloração dorsal com sucessivos

anéis pretos, amarelos, pretos, vermelhos; os anéis

pretos apresentam-se algumas vezes fundidos no meio

(Fig. 6); ventrais 153 - 173 . semicinctus.

II — Dorsais cm 19 séries longitudinais

A — Coloração dorsal com bandas transversais pretas, es¬

treitas, separadas por espaços vermelhos (Figs. 2, 7

e 12); corpo com 32 - 36 bandas pretas transversais

nas fêmeas . histricus.

B — Coloração dorsal com bandas transversais largas, acas¬

tanhadas ou cinzentas, não separadas por espaços ver¬

melhos (Figs. 8 e 11); corpo com 15-29 bandas

acinzentadas transversais nas fêmeas . nattereri.

Lystrophis nattereri

1864 Heterodon histricus; Steindachner, Verh. zool.-bot. Ges Wien 1864: 233

“1”, Taf. VI.

1869 Heterodon nattereri; Steindachner, Reise der Osterreichischen Fregatte

Novara, Zool. Reptilien: 90.

1894 Lystrophis histricus; Boulenger (partim), Catalogue of the Snak.es in the

British Museum, 2: 152.

1898 Lystrophis histricus; Koslowsky, Rev. Mus. La Plata: 28.

1919-1920 Lystrophis histricus; Griffin, Mem. Carneg. Mus., 7: 192.

1966 Lystrophis histricus; Orejas-Miranda (partim), Copeia, 1966 (2): 203.

1970 Lystrophis histricus; Peters and Orejas-Miranda (partim), Catalogue

of Neotropical Squamata. I. Snakes,: 188.

Localidade tipo: Brasil.

Distribuição: Brasil: Piaui, Distrito Federal, Mato Grosso, Goiás, São Paulo

e Paraná (vide Fig. 19).

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

KOGE, A.R.; CORDEIRO. C.L. & ROMANO. S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette -

Teri (Steindachner). [Serpentes, Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

Fig. 1 - IB N.° 9.101. Lystrophis nattereri - Vista dorsal, Alfredo Ellis, SP. Brasil.

Fig. 2 - IB N.° 7.626. Lystrophis histricus - Vista dorsal, São Leopoldo. RS. Brasil.

Fig. 3 - IB N.° 30.766. Lystrophis dorbignyi - Ponta da cauda. Porto Alegre. RS. Brasil.

Fig. 4 - IB N.° 604. Lystrophis semicinctus - Ponta da cauda. Pampa Central. Argentina

SciEL0 1

KOGE. A.R.; CORDEIRO. C.L. & ROMANO. S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette -

u'ri (Steindachner). [ Serpentes, Colubridac ].

Mcm. Inst. Dutantan, 30: 37-50. 1975.

Flg. 5 - IB N.° 20.948. Lystrophis dorbignyi - Vista dorsal, Higienópolis. R Alegre, RS Brasil.

Fig. 6 - IB N.° 604. Lystrophis semicinctus - Vista dorsal. Pampa Central. Argentina.

Flg 7 - IB N.» 17.623. Lystrophis histricus - Vista dorsal. Passo Fundo. RS. Brasil.

Fig. 8 - IB N.° 9.668. Lystrophis nattereri - Vista dorsal, Piomissão. SP. Brasil.

SciELO

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). [ Serpentes , Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

9 a 11 - IB N.° 25.590. Lystrophis nattereri , Altinópolls, SP. Brasil.

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). [ Serpentes, Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975,

MATERIAL

Lystrophis nattereri: todos os exemplares pertencem à Coleção do IBH e pro¬

cedem dos seguintes Estados e Localidades:

GO — IBH n. os

10.258 e 10.324 de Rio Verde; 33.107 Ipameri.

IBH n. os 29.075 Campo Grande; 8.229 Corrente; 32.165 Coxim; 4.910

Rio Branco; 25.345 Três Lagoas.

IBH n. os 1.700 Eng 0 Dot-Sta Filomena.

IBH n. os 3.069 Piraquara e 3.068 Serrinha.

IBH n. os 12.942, 31.782, 19.775 e 34.357 Agudos; 25.590 e 20.888

Altinópolis; 17.293 Araçatuba; 9.101 Alfredo Elis; 7.731, 9.256 e

7.713 Avanhandava; 10.020 e 9.960 Aymorés da Paulista (Antigo Ay-

rés); 33.514 Boa Esperança do Sul; 32.630 e 32.346 Brotas; 6.546

Caiuá; 9.977 Casa Branca; 4.480 Conde do Pinhal; 3.202 Fortaleza;

10.482 e 13.122 Indiana; 33.576 Limeira; 3.272 Promissão; 12.736

Martinópolis; 10.410 Macedonia; 709 Motuca; 9.469, 8.330, 9.274 e

23.699 Penápolis; 31.319 Paraguassu Paulista; 9.668 Promissão;

209 Pantojo; 1.394 Rio Preto, atual São José do Rio Preto; 16.035

São Joaquim da Barra; 10.498 Toriba; 14.570, 14.579 e 14.556 Uru-

tagua; 10.403 Uparoba; 26.184 e 26.627 Visconde do Rio Claro.

Comprimentos

N.os

Coleção

Sexo

Ventrais

Subcaudais

Cabeça

Corpo

Cauda

• Aneis

1 .700

152

23/23

11,9mm

208mm

21mm

29.075

147

26/26

14,7mm

331 mm

4 lmm

32.165

144

26/26+4

8,3mm

143mm

19mm

8.229

148

34/34

1 l,7mm

250mm

38mm

25.345

148

30/30

11,4mm

255mm

38mm

4.910

148

29/29

11,7mm

255mm

37mm

10.258

152

35/35

8,8mm

164mm

23mm

33.107

145

37/37

14,5mm

270mm

49mm

10.324

150

28/28

162mm

19mm

12.942

147

28/28

17,5mm

396mm

5 lmm

31.782

139

30/30

17,1 mm

387mm

53mm

21.333

153

26/26

17,1 mm

383mm

45 mm

32.630

137

27/27

14,2mm

335mm

46mm

16.035

148

23/23

16,7mm

325mm

33mm

25.590

148

25/25

13,9mm

282mm

29 mm

32.346

138

26/26

9,5mm

175mm

19mm

17.293

151

23/23

41 lmm

40mm

9.469

149

29/29

10,0mm

I49mm

18mm

13.122

147

22/22

11,4mm

196mm

21mm

8.330

151

29/29

440mm

58mm

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L.

feri (Steindachner). [ Serpentes, Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

Posição taxonomica de Lystrophis nette

Fig. 12 - IB N.° 22.549. Lystrophis histricus, São Borja, RS. Brasil.

2 3 4 5 6 SCÍELO 10 X1 12 13 14 15 16

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L.

reri (Steindachner). [Serpentes, Colubridae |.

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

Posição taxonômica de Lystrophis nette-

N.os

Coleção

Sexo Ventrais Subcaudais

Comprimentos

Cabeça Corpo Cauda

Anéis

3.202

143

25/25

15,6mm

390mm

45mm

9.101

142

23/23

373mm

40mm

7.731

150

28/28

380mm

49mm

9.256

149

29/29

430mm

56mm

10.482

145

23/23

12,0mm

354mm

40mm

3.272

152

27/27

15,1 mm

375mm

46mm

10.020

146

30/30

14,9mm

349mm

47mm

1.394

153

26/26

13,8mm

348mm

40mm

9.977

146

26/26

15,2mm

374mm

45mm

208

145

28/28

16,8 mm

383mm

50mm

—

6.546

155

25/25

15,3mm

395mm

43mm

23.699

152

28/28

10,5mm

137mm

16mm

31.309

141

34/34

14,0mm

280mm

48mm

14.570

148

26/26+ 3

13,1 mm

260mm

38mm

14.579

147

33/33

15,2mm

305mm

51mm

33.576

141

33/33

15,6mm

325 mm

52mm

10.403

143

28/28

13,8mm

318mm

49mm

9.668

—

33/33

12,6mm

290mm

49mm

20.888

151

33/33

13,2mm

245mm

37mm

27.627

143

34/34

12,9mm

200mm

28mm

19.775

141

34/34

1 l,7mm

225mm

33mm

14.556

146

29/29

14,2mm

310mm

43mm

26.184

141

32/32

9,2mm

165mm

21mm

33.514

144

32/32

12,8mm

240mm

30mm

10.410

141

35/35

18,2mm

278mm

50mm

209

139

32/32

14,2mm

320mm

53mm

7.713

144

32/32

13,3mm

280mm

45mm

709

141

32/32

10,7mm

244mm

39mm

12.736

148

37/37

12,1 mm

166mm

29mm

9.274

143

33/33

8,9mm

151 mm

21 mm

10.498

147

29/29

9,1 mm

149mm

18mm

9.960

140

34/34

10,5mm

150mm

23mm

4.480

147

33/33

11,3mm

292mm

55mm

3.069

152

29/29

14,5mm

330mm

43mm

3.068

147

28/28

13,7mm

3 25 mm

43mm

Rostral mais larga do que alta, com carena dorsal; internasais de forma

triangular, não em contato por detrás da rostral; pre-frontais muito mais largas

do que longas, frontal tão longa ou ligeiramente mais longa do que larga, mais

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

KOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). [ Serpentes, Colubridae].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

0,5 cm

Pig- 13 - IB N.° 17.293. Lystrophis nattereri - Maxilar, Araçatuba, SP. BrasP

Pig- 14 - IB N.° 17.293. Lystrophis nattereri - Supra-temporal, Araçatuba, SP. Brasil.

Pig- 15 - IB N.° 7.626. Lystrophis histricus - Supra-temporal, São Leopoldo, RS. Brasil.

Pig. 16 - IB N.° 7.626. Lystrophis histricus - Maxilar, São Leopoldo, RS. Brasil.

Pig. 17 - IB N.° 17.293. Lystrophis nattereri - Preocular, Araçatuba, SP. Brasil.

Pig. 18 - IB N.° 7.626. Lystrophis histricus - Preocular, São Leopoldo. RS. Brasil.

Nota-se o número menor de dentes maxilares em Lystrophis histricus, (fig. 16) e a presença

de uma apófise no preocular de Lystrophis nattereri.

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). [ Serpentes, Colubridae],

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

curta do que sua distância da ponta do focinho, tão longa quanto as parietais;

parietais mais largas do que longas; 1 ou 2 pre-oculares; geralmente 2 post-ocu-

lares; temporais 1 + 2, ou 1 + I; supralabiais 7, 3. a e 4. a (excepcionalmente

3. a , 4. a e 5. a ) entrando na órbita; infralabiais 7 a 9; 5 (excepcionalmente 3)

infralabiais em contato com as mentuais anteriores; as mentuais anteriores muito

mais longas do que as posteriores que são muito pequenas; dorsais em 19/19/17

séries longitudinais; ventrais 137 até 155 (139 - 152 nos machos e 137- 155

nas fêmeas); subcaudais 22 a 37 (28 - 37 nos machos e 22 - 30 nas fêmeas);

faixas castanho-cinzentas no dorso, ocupando de 3 até 7 escamas dorsais, sepa¬

radas por faixas cinzentas estreitas (15-29 faixas pretas nas fêmeas e 17 - 27

nos machos); cabeça com três faixas escuras em forma de V invertido e uma

bem larga na nuca, ventre claro manchado de preto. Comprimento total 498mm

nas fêmeas e 377mm nos machos.

Lystrophis histricus

1863 Heterodon histricus; Jan, Arch. Zool. Anat. Fis., 2: 224 “9,15”.

1865 Heterodon histricus; Jan et Sordelli, Icon. Gén. Opliid., Livr. 11 Pr. IV,

fig. 2.

1886 Heterodon histricus; Boulenger, Ann Mag. Nat. Hist., (5) XVIII (108):

434.

1893 Lystrophis histricus; Boettger, Kat. Rept. Sammlung Senck. Naturf. Ges.,

(2): 64.

1894 Lystrophis histricus; Boulenger (partim), Cat. Sn. Brit. Mus., 2: 152.

1898 Lystrophis histricus; Koslowsky, Rev. Mus. La Plata; 164 e 192.

1925 Lystrophis histricus; Devicenzi, Ann. Mus. Hist. Nat. Montevideo: 27, Pr.

IV, fig. 1-3.

1929 Lystrophis histricus; Devicenzi, Le vie dHtalia e Dell' America Latina, 35

(5): 468 + fig.

1929 Lystrophis histricus; Amaral, Mem. Inst. Butantan 4: 176.

1939 Lystrophis histricus; Devicenzi, Publ. Soc. Linneana, Montevideo: 42 + fig.

1966 Lystrophis histricus; Orejas-Miranda (partim), Copeia : 203, Figs. 8e-f,

9f.

1970 Lystrophis histricus; Peters and Orejas-Miranda (partim), Cat Neotr.

Squamata, I, Snakes: 188.

Localidade tipo: Desconhecida.

Distribuição: Sul do Brasil, desde o sul de Mato Grosso c Paraná até o

nordeste da Argentina, Paraguai e nordeste do Uruguai.

MATERIAL

Lystrophis histricus (Jan) - todos os exemplares pertencem à Coleção do Ins¬

tituto Butantan e procedem dos seguintes Estados e Localidades:

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner) . [ Serpentes , Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

Fig. 19 - Mapa de distribuição: 9 Lystrophis nattereri e ^ Lystrophis histricus

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). [ Serpentes, Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975,

MT — IBH n. os 26.012 Três Barras; 1

vidosa; 16.475 Ponta Porã.

PR — 7.622 Carambei; 25.643, 34.381

RS — 9.865 Pinheiro Machado; 9.006

so Fundo; 7.626 São Leopoldo;

6.868 Brilhante; 10.387 localidade du-

Ponta Grossa.

São Simão; 17.623, 8.186, 8.185 Pas-

10.024 Cacequi; 14.367 Pampeiro.

N.os

Coleção

Sexo

Ventrais

Subcauda:

Comprimentos

Anéis

Cabeça

Corpo

Cauda

26.012

142

33/33

13,3mm

260mm

43mm

16.475

145 + 1/1

33/33

9,4mm

136mm

19mm

16.868

142

29/29

10,9mm

240mm

40mm

10.387

136

31/31

10,7mm

228mm

38mm

7.622

134

36/36

13,4mm

250mm

43 mm

25.643

133

31/31

1 l,4mm

238mm

40mm

34.381

137

27/27

15,Omni

281 mm

40mm

9.865

140

35/35

242mm

142mm

9.006

137

34/34

1 l,5mm

215mm

3 5 mm

17.623

141

36/36

10,0mm

228mm

41 mm

8.186

136

27/27

—

375mm

48mm

7.626

136

25/25

350mm

41 mm

8.185

137

26/26

17,5mm

376mm

48mm

10.024

145

32/32

15,2mm

300mm

41 mm

14.367

138

29/29

16,8mm

345mm

48mm

Rostral mais larga cio que alta, com carena dorsal; internasais de forma

triangular não em contato por detrás da rostral; prc-frontais muito mais largas,

do que longas, geralmente em contato, excepcionalmente separada por uma es¬

cama ázigo; frontal tão longa ou ligeiramente mais longa, quanto larga, mais

curta do que sua distancia da ponta do focinho, tão longa quanto as parietais,

que são mais largas do que longas; 1 ou 2 pre-oculares; geralmente 2 post-ocu-

lares; temporais I + 2 ou 1 + 1; supralabiais 7, 3, a e 4. a (excepcionalmente

3, a , 4, a e 5, a ) entrando na órbita; infralabiais 8 a 9; 5 (excepcionalmente 3) in-

fralabiais em contato com as mentuais anteriores; que são muito mais longas

do que as posteriores, que são muito pequenas; dorsais em 19/19/17 séries

longitudinais; ventrais 133 até 146 (133 - 146 nos machos e 133 - 145 nas

fêmeas); subcaudais 25 a 36 (27 - 36 nos machos e 25 - 32 nas fêmeas); fai¬

xas pretas estreitas no dorso, ocupando de 1 1/2 até 3 escamas dorsais, separadas

por faixas vermelhas largas; (32 - 36 faixas pretas nas fêmeas e 24 - 37 nos

machos); cabeça com três faixas pretas em forma de V invertido e uma bem

larga na nuca, ventre claro manchado de preto. Comprimento total 424mm nas

fêmeas e 321 mm nos machos.

Agradecimentos: Ao Sr. Ralph Grantsau pelos desenhos n. os 9, 10, 11 e

12 e ao Sr. João Domingues Cavalheiro pelos desenhos e mapa.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

KOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L. & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). [ Serpentes , Colubridae],

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

GRÁFICO COMPARATIVO DOS ANÉIS DO CORPO NAS FÊMEAS

de E3 Lystrophis nattereri e ■ Lystrophis histricus

n.» de

exemplares

5 -

4 -

15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37

20 número de anéis

GRÁFICO COMPARATIVO DOS ANÉIS DO CORPO NOS MACHOS

de E2I Lystrophis nattereri e O Lystrophis histricus

n.« de

exemplares

6 -

15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37

número de anéis

2 3

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R.; CORDEIRO, C.L, & ROMANO, S.A.L. Posição taxonômica de Lystrophis nette-

reri (Steindachner). [Serpentes, Colubridae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 37-50, 1975.

ABSTRACT: Revalidation of Lystrophis nattereri (Steindachner)

1869, species included till now in the synonymy of Lystrophis

histricus (Jan) 1863.

UNITERMS: Serpentes, Colubridae. Lystrophis histricus (Jan)

1863. Lystrophis nattereri (Steindachner) 1869.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. AMARAL, A. do Estudos sobre Ophidios Neotrópicos. Mem. Inst. Butantan,

4: 3-271, 1929.

2. BOETTGER, O. Katal. der Reptilien - Sammlung in Mus. Senckenbergis-

chenden Gesellschaft in Frankfurt am Main. Frankfurt am Main, Sen-

ckenberg Museu. 1893, ix + 160p.

3. BOULENGER, G.A. A synopsis of the Reptiles and Batrachians of the Pro-

vince Rio Grande do Sul, Brazil. Ann. Mag. Nat. Hist, 28: 423-445, 1886.

4. BOULENGER, G.A. Catalogue of the Snakes in the British Museum (Natural

History). London, British Museum, 1894, v. II.

5. DEVICENZI, G.J. Fauna Herpetológica dei Uruguay. Ann. Mus. Hist. Nat.

Montevideo, s. 2, 3(1): 1-64, 1925.

6. DEVICENZI, G.J. Serpenti DelFUruguay. Le vie ã’Italia e delVAmerica

Latina, 35(5): 467-476, 1929.

7. DEVICENZI, G.J. Ofidios dePUruguay. Publ. Soc. Linneana Montevideo, :

1-53, 1939.

8. JAN, G. Prodromo Delia Iconografia Generale Degli Ofidi. Ila. Parte. VII. 0

Grupo Coronellidae. Arch. Zool, 11(2): 1-120, 1863.

9. JAN, G. & SORDELLI, F. Iconographie Générale des Ophidiens. v. I, pt.

1-17. Milan, 1860/66. (Reprint). Weinheim, J. Cramer, 1961. (Historia

Naturalis Classica, v. 12).

10. GRIFFIN, L.E. A catalogue of the ophidia from South America at present

(June 1916) contained in the Carnegie Museum with descriptions of some

new species. Mem. Carnegie Mus., 7 (3): 163-228, 1919/1920.

11. KOSLOWSKY, J. Ofidios de Mato Grosso (Brasil). Rev. Mus. La Plata, :

25-32, 1898.

12. KOSLOWSKY, J. Enumeracion sistemática y distribucion geográfica de los

reptiles Argentinos. Rev. Mus. La Plata, : 161-200, 1898.

13. OREJAS-MIRANDA, B.R. The Snake Genus Lystrophis in Uruguai. Copeia,

(2): 193-205, 1966.

14. PETERS, J.A. & OREJAS-MIRANDA, B.R. Catalogue of the Neotropical

Squamata. Part I - Snakes. U.S. Nat. Mus. Buli., (297), 1970.

15. STEINDACHNER, F. Ueber Heterodon histricus Jan. Verh zool. bot. Ges.

Wien, : 233-234, Tab. VI, 1864.

16. STEINDACHNER, F Reise der Õsterreichischen Fregatte Novara Zool. Rep¬

tilien. Wien, Karl Gerald.s Sohn, 1869.

Recebido para publicação em 02-VI-1975 e aceito em 24-IX-1975.

2 3 4 5 6 SCÍELO lo h i2 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 51-60, 1975

A NEW SUBSPECIES OF DIPSAS INDICA FROM BRAZIL.

[SERPENTES, COLUBRIDAE, DIPSADINAE}

ALPHONSE R. HOGE and SYLVIA ALMA DE LEMOS ROMANO

Department of Herpetology, Instituto Butantan

ABSTRACT: Description of a new subspecies of Dipsas indica

from Brazil: Dipsas indica petersi subsp. nov. and redescription of

Dipsas bucephala (Shaw) 1802.

ÜNITERMS: Serpentes, Dipsaãinae. Dipsas indica indica Laurenti

1768. Dipsas indica bucephala (Shaw) 1802. Dipsas indica cisticeps

(Boettger) 1885. Dipsas indica ecuaáorensis Peters 1960. Dipsas

indica petersi subsp. nov.

Identification of the specimens of Dipsas indica subsp. in the IBH collection,

according to Peter's revision (1960) shows that Dipsas indica bucephala (Shaw)

1802 “sensu” Peters (1960: 73) is a complex of two subspecies.

The reason why Peters did not recognize two subspecies is probably the

fact that nine of the fourteen specimens at his disposition were either from unk-

nown localities or from São Paulo, Brazil and “the name of the city may be

the point of reception rather than the actual place of collection'’. Peters 1. c.

: 77).

The figure published by Shaw (Fig. 1) although poor, permits to recognize

a subspecies of Dipsas indica characterized by: regular dots on the head (although

Shaw’s artist did not represent them on the drawing, Shaw mentioned the parietal

spots in his description) and a short first dorsal blotch.

The presence of dots on parietais shows its relationship with both Coastal

and inland population of Southern Brazil. The short first dorsal blotch excludes

the population of the coastal Atlantic slopes.

Peters (1960 pl. III fig. a, UMMZ 62706 from São Paulo) represents as

typical for his bucephala a specimen who belongs to the landward slope of Southern

Brazil.

I maintain here the name of bucephala for the subspecies occuring in the

landward slopes and interior of Southern Brazil since Shaw’s, figure shows

Research supported by the National Library of Medicine (Grant L.M. 00418-01) and

Conselho Nacional de Pesquisas (Proc. 2640/66).

Adress: Caixa postal 65 - São Paulo - Brasil

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspecies of Dipsas indica from Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dispsadinae ].

Mem. Jnst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

clearly that his spccimen belongs to a form with short first dorsal blotch (Fig. 1)

instead of the long one observed in the specimcns from the Atlantic slope of

the Coastal range of south eastern Brazil. (Figs. 9 and 10)

Although I have not seen intergrades until now, the new form is so closely

related to D. indica that I will consider it a subspecies, at least for the moment.

The population of the Coastal region of southeastern Brazil is considered

as a new subspecies.

DESCRIPTION OF THE NEW SUBSPECIES

Dipsas indica petersi * subsp. nov.

Holotype: 1BH n. 23.460, a 9 , from Pedro de Toledo, São Paulo, Brazil,

collected by V. Rodrigues, November Ith, 1963.

Diagnosis: A subspecies of Dipsas indica Laurenti 1768 characterized by:

a unicolor light brown head dorsum with a few dark spots occupying less than

one quarter of each plate (Fig. 10); the first pair of dorsal blotches meeting

accross the vertebral row, and occupying 14 to 23 scales at the middorsal line

(Figs. 9 and 10); the dorsal blotches extending laterally to the ventrals (Figs. 4

and 11); no yellowish-white stippling centered at the base of the dorsal blotches;

a more or less distinct white spot on the outer side of blotches (Fig. 11). Ven¬

trals 182 - 196 in c? and 175 - 185 in females; caudais 103 - 118 in cT and

78 - 106 in 9.

Relationship: Dipsas indica petersi differs from all other subspecies by

the extension of the first dorsal blotch which occupies 15 to 23 vertebral scales;

differs also from Dipsas indica indica Laurenti 1768 and Dipsas indica

ecuadorensis Peters 1960 by the light brown color of the head with a few

spots, instead of dark brown and heavily variegated or striped (Figs. 12, 13 and

14). It differs from Dipsas indica, cisticeps (Boettger 1885) by the smaller size

of the spots on the head shields and the higher number of subcaudals 103 to

117 cT and 91 to 106 9, instead of 89 to 99 in c? and 76 to 92 in 9 of cisticeps.

From Dipsas indica hucephala (Shaw, 1802) as defined below, it differs by the

absence of light stippling centered on the base of the dorsal blotches (Figs. 5

and 8); by the prcsence of a series of supplementary vertebral white-bordered

dark brown stripes (Fig. 2); and by the higher subcaudal counts: 103 - 117 c? and

78 - 106 9 instead of 80 - 99 cT, 83 - 89 9 in hucephala.

Description: Rostral broader than deep, visible from above; internasals

half as long as the prefrontals, broader than long; prefrontals as long or a

little longer than broad, not entering the orbit; frontal as long or a little longer

than broad, shorter than the parietais; nasal divided; loreal entering the orbit;

8-10 upper labiais (2 or 3 entering the orbit); lower labiais 13 - 16. Ventrals

and subcaudals as given in the diagnosis. First pair of dorsal blotches meeting on

the middorsal line and occupying from 15 to 23 vertebral scales; 17 to 26

dorsal blotches on the body (17 - 21 cT and 16 - 26 in females); vertebral

row strongly enlarged; dorsais in 13 rows, not reducing to eleven, except in two

* in honor to our friend the late James A. Peters.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R. & ROMANO, S»A.L. A new subspecies of Dipsas indica írom Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dispsadinae].

Mem. Inst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

Fig. 1 - Shaw’s figure of Coluber bucephala

Fig. 2

Fig. 3

Dipsas indica petersi IBH 24.169

Dipsas indica bucephala IBH 9.306

Fig. 4

Fig. 5

Dipsas indica petersi IBH 23.631

Dipsas indica bucephala IBH 7.849

SciELO

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspecies of Dipsas indica from Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dispsadinae].

Mem. Inst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

Figs. 6 a 8 - Dipsas indica bucephala IBH 23.404

2 3 4 5 6 SCÍELO lo h i2 13 14 15 16

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspeoies of Dipsas indica írom Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dispsadinae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

F1 gs. 9 a 11 - Dipsas indica petersi IBH 23.460 Holotype

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspecies of Dipsas indica from Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dipsadinae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

specimens. Dorsal ground color of head unicolor light brown, with small dark

brown spots occupying less than a quarter of the plates (Fig. 10); generally

a small longitudinal stripe on occiput (Fig. 10). Dorsal ground color brownish

tan with 16 to 26 dorsal chesnut-brown blotches. The outer ends of dorsal

blotches marked at the base with a very distinct white (sometimes irregular)

dot (Fig. 11) on the first dorsal row or outer ends of ventrals; the dorsal

blotches extending to the ventrals (Figs. 4 and 11); interspaces at middorsal

line with a distinct white-bordercd dark chesnut-brown stripe (Fig. 2).

Description of Flolotype: Rostral as high as broad: internasals less than

half the length of prefrontals, broader than long; prefrontals longer than broad

in contact with nasal, loreal and preocular; frontal a little longer than broad;

shorter than long; frontal a little longer than broad, shorter than parietais which

are nearly as broad as long; temporal 2 + 3; loreal a little longer than deep

entering the orbit; dorsais 13 - 13, vertebral row strongly enlarged; ventrals 185;

anal entire; caudais 28 + n; 9 upper labiais (5th and 6th entering the orbit);

14 lower labiais, three first pairs in contact behind the simphysial a (preocular?)

intercalated between 4th upper labial and the orbit. Ground color brownish tan

with 20 dark chesnut-brown dorsal blotches nearly as wide above as beneath

(Fig. 11); not bordered with white except upper side when not alternate; one

or two yellowish-white dots on the sides of dorsal blotches situated on lst

dorsal row or ventrals; belly powdered with dark brown, the color of dorsal

blotches invading lhe ventrals (Fig. 11); anterior part of belly light, gradually

darker posteriorly. Supplementary light-cdged dark-brown stripes on middorsal

line between the dorsal blotches.

Range: (Fig. 15). This subspecies occurs on the Atlantic slopes of the

Coastal range of southeastern Brazil; from the State of Paraná to Espirito Santo,

and probably as far north as State of Bahia. The known range is entirely in the

broad leaved, tropical humid Coastal forest. Two specimens (see map. Fig. 15)

although apparently localized out of the limits are:one from the gallery forest

of Rio Doce and the other from a region where numerous isolated forests occur.

Paratypes: Brazil: State of Espirito Santo: 1BH 15.632 Castelo; JBH

7.441 Itapina (formerly Ita) Mcp. Colatina; CDZ 2.460 Li¬

nhares, Soretama; MNR 1.272 Santa Teresa.

State of Paraná: IBH 7.157 Paranaguá; IBH 827 Antonina.

State of Rio de Janeiro: IBH 15.464 Barcelos, Mcp. São

João da Barra; IBH 10.478 and 477 Mangaratiba.

State of São Paulo: IBH 13.137 Cubatão; 12.780 and 23.631

Cubatão; IBH 16.049 Embu-guassu; IBH 5.355 Prainha;

IBH 10.391 Santos; IBH 13.938, 13.939, 13.940, 13.941

and 9.244 São Vicente (Praia das Vacas); IBH 2.548 and

2.543 Vicente de Carvalho (formerly Itapema Mcp. Guarujá).

REDESCRIPTION OF D. INDICA BUCEPHALA

Dipsas indica bucephala (Shaw)

1802 Coluber bucephala Shaw, 1802: 422

1810 Bungarus bucephalus; Oppel: 392

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspecies of Dipsas indica írom Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dispsadinae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

^ igs - 12 a 14 - Dipsas indica indica. All figures IBH 23.935 from Conceição do Araguaia,

State of Para, Brazil.

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspecies of Dipsas indica from Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dispsadinae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

1822 Dipsas bucephala; Schinz (in Cuvier): 117 ( partim )

1854 Dipsadomorus indicus; Duméril, Bibron et Duméril: 470 ( partim )

1858 Leptognathus indicus; Günther: 180 ( partim)

1868 D. [ipsadomorus] bucephalus; Jan: 99 ( partim)

1894 Dipsas indica ; Boulenger, 3: 461 ( partim )

1960 Dipsas indica bucephala; Peters: 73 ( partim)

Type locality: “Ceylon” (in error) restricted to Brazil (Peters 1960: 73).

Holotype: unknown: described on basis of Shaw’s (Fig. 1).

Range: (Fig. 15) Brazil, States of Paraná, São Paulo, Mato Grosso (where

it probably intergrades with cisticeps) and Goiás.

Rostral as broad as deep, or a little broader, visible from above; internasals

one third to one half as long as the prefrontals, broader than long; prefrontals

as long or a little longer than broad not entering the orbit; frontal broader than

long, shorter than parietais; nasal divided or semidivided; loreal a little deeper

than long entering the eye: 8-9 upper labiais (2 or 3 entering the orbit); lower

labiais 13 - 15; ventrals 181 - 195 in males, 183 - 189 in females; anal entire;

subcaudals 80 - 99 in males and 77 - 89 in females.

Dorsal groiind color of head unicolor light brown with light edged dark

brown spots occupying less than one quarter of the plates (Fig. 7). Dorsal ground

color of body brownish-tan with 22 - 33 dark brown blotches (Fig. 7) the first

pair in contact at middorsal line (Fig. 7) occupying 4-12 vertebral scales.

Dorsal blotches edged with yellowish-white stippling on the outcr sides of the

base of blotches and a stippling of same color centered at the base (Figs. 5

and 8); belly, at least anteriorly, with brown dots interspersing yellowish white

irregular bordus (Fig. 8).

Material: State of São Pauto: 1BH 5.412 Araçatuba; IBH 16.664; 8.665,

7.377, 6.103, 2.542, 1.704, 1.307, I.720, 7.848, 7.822, 7.392 and 7.387

from Aurora— Mcp. Descalvado; 1 .015 Banharão Mcp. Jaú; 10.336 Brodoski;

13.121 Brotas; 8.440, 5.192, 5.193 Brumado; 9.266 Cajuru; 7.795 Corre¬

deira Mcp. Cajuru; 7.498 Coronel José Egydio Mcp. Tambaú; 2.672 Córrego

Fundo; 7.534 Cravinhos; 9.799 and 9.809 Domingos Vilela Mcp. Ribeirão

Preto; 7.849 Esmeralda; 5.021 Faveiro; 8.466 Fcrnão (formerly Fernão Dias)

8.466 Gália; 10.039 Gália; 10.348 Garça; 5.406 Guatapará Mcp. Ribeirão

Preto; 7.850; 5.639 Itapeva; 1.166 Itobi Mcp Casa Branca; 16.295, 4.757,

4.371 and 6.847 Jacaré Mcp. São Carlos; 9.804 Jacareí; 6.088 Jaguariuna

(formerly Jaguari); 9.306 Jurucê (formerly Sarandi) Mcp Jardinópolis; 8.043,

6.067, 4.440 Leme 692 and CDZ 1.516 Lençóis Paulista (formerly Lençóis)

2.679 Loreto Mcp. Araras; 9.551 Mocóca; 6.925 Ourinhos; 898, 2.675 Pal-

mital; 5.592, 4.514 Pinhal (formerly Espirito Santo do Pinhal); 9.549 Pira-

tininga; 9.234 Porto Ferreira; 9.930 and 6.168 Ressaca Mcp. Mogi-Mirim;

Santa Cruz das Palmeiras 2.673, 1.837, 1.828, 1.375, 1.098; 1.001 Santo Aleixo

(on the margin of Serra Negra Ri ver) Mcp. of Serra Negra; IBH 7.087 Santo

Antônio do Jardim (Formerly Jardim); IBH 1.010 Santa Rita do Passa Qua¬

tro (formerly Santa Rita); IBH 7.520 São Carlos; IBH 4.518 and 6. 100 São

José do Rio Pardo; IBH 922 São Simão; 14.238 Timbira Mcp. Araraquara;

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspecies of Dipsas indica from Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dispsadinae ].

Mem. lnst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

2 3 4

5 6 SCÍELO 10 2.1 12 13 14 15 16

HOGE, A.R. & ROMANO, S.A.L. A new subspecies of Dipsas indica from Brazil. [Serpentes,

Colubridae, Dipsadinae ].

Mem. Inst. Butantan, 39: 51-60, 1975.

IBH 2.674 São José do Rio Pardo; IBH 2.721 Tombadouro Mcp Santa Rita

do Passa Quatro.

State of Goiás: IBH n.° 9.585 Leopoldo Bulhões.

State of Paraná: IBH 16.877 Andirá; IBH 6.617 Coronel Procópio also

n. os IBH 7.372 and 10.263 from same locality; IBH 23.404 Cambará; IBH

9.362 Leoflora Mcp. de Cambará; IBH 10.361 Meireles.

State of Mato Grosso: IBH 22.826; IBH 21.644 and 22.887 Jupiá.

Acknowledgments: We would like to extend our most sincere thanks to

the following persons: to the late James A. Peters who permitted acess to the

specimens under his care; to Ralph Grantsau for the drawings (Figs. 7 to 14);

to João Domingues Cavalheiro for the elaboration of the map (Fig. 15); to

Pedro Villela and Joaquim Cavalheiro for scale counts.

RESUMO: Descrição de uma subsp. nov. de Dipsas indica do

Brasil: Dipsas indica petersi subsp. nov. e redescrição de Dipsas

bucephala (Shaw) 1802.

UNITERMOS: Serpentes; Dipsadinae. Dipsas indica indica Lau-

renti 1768. Dipsas indica bucephala (Shaw) 1802. Dipsas indica

cisticeps (Boettger) 1885. Dipsas indica ecuadorensis Peters 1960.

Dipsas indica petersi subsp. nov.

REFERENCES

1. BOETTGER, O. Liste von Reptilien und Batrachiern aus Paraguai. Zeitsch.

fur Naturwiss, 58: 213-248, 1885.

2. BOULENGER, G.A. Catalogue of the snakes in the British Museum (Natu¬

ral History). London, Taylor & Francis, 1896. v. 3. I-XIV: 1-727 + 25 pis.

3. DUMÉRIL, A.M.C.; BIBRON, G. & DUMÉRIL, A. Erpétologie genérale ou

histoire naturelle complète des reptiles. Paris, Roret. v. 7. (pis. 1-2):

1-1536.

4. GÜNTHER, A. Catalogue of the colubrine snakes in the collection of the

British Museum. London, Taylor & Francis, 1858. I - XVI + 1-281.

5. JAN, G. Elenco sistemático degli ofidi, descritti e designati per Ticonografia

generale. Milan, Tipografia Di Lombardi, 1863. I - VII + 1-143.

6. LAURENTI, J.N. Specimen medicum, exhibens synopsis reptilium emenda-

tum cum experimentis circa venena et antidota reptilium austriacorum.

Wien, Typ. Joan, Thom. De Trattern, 1768. : 1-214 + 5 pl.

7. OPPEL, M. Suite du ler Mémoire sur la classification des reptiles. Ann.

Mus. d’Hist. Nat, 16: 376-395, 1810.

8. PETERS, J.A. The snakes of the subfamily Dipsadinae. Miscel. Publ. Mus.

Zool. Univ. Michigan (114). Ann Arbor : 1-224 + VIII pis. 1960.

9. SCHINZ, H.R. (in Cuvier). Das Tierreich, 2: 117, 1822. (non vidi).

10. SHAW, G. General Zoology and systematic natural history. London; G.

Kearsley, 1802. 3(2): I - VIII + 313-615.

Recebido para publicação em 02-VI-1975 e aceito em 24-IX-1975.

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

Uem. Inst. Butantan

39: 61-71, 1975

ARANHAS COLETADAS NAS GRUTAS CALCÁRIAS

DE IPORANGA, SÃO PAULO, BRASIL.

VERA REGINA D. VON EICKSTEDT

Seção de Artrópodos Peçonhentos, Instituto Butantan

RESUMO: O presente trabalho refere-se a três espécies de ara¬

nha LABIDOGNATHA coletadas no interior da gruta Santana

(município de Iporanga, São Paulo) durante uma expedição bioes-

peleológica.

Uma das espécies mencionadas, Ctenus fasciatus Mello Leitão

1943 (CTENIDAE) era representada até o momento apenas pelo

exemplar-tipo. A fêmea desta espécie é recaracterizada e sua

genitália ilustrada pela primeira vez. O macho, desconhecido

até então, é agora descrito e seus caracteres morfológicos dis¬

tintivos ilustrados.

É relatada a ocorrência na gruta de espécimes de Loxosceles

adelaida Gertsch 1967 ( SCYTODIDAE ) e são feitas algumas consi¬

derações sobre o status taxonômico desta espécie.

Finalmente, algumas notas são fornecidas sobre uma espé¬

cie de THERIDIOSOMATIDAE, a aranha mais comum no inte¬

rior da gruta.

UNITERMOS: Aranhas cavernícolas do Brasil. Ctenus fasciatus

Mello Leitão 1943. Loxosceles adelaida Gertsch 1967. Loxosceles

similis Moenkhaus 1898 THERIDIOSOMATIDAE.

INTRODUÇÃO

O Centro Excursionista Universitário, fundado em 1970 por alunos da

Universidade de São Paulo, tem realizado, periodicamente, expedições bioes-

peleológicas nas grutas e cavernas calcárias do vale do rio Ribeira de Iguape

(São Paulo), na região de Irecê e Morro do Chapéu (Bahia) e no município

de São Domingos (Goiás). Tem como objetivo estudar a topografia e a geo¬

logia das grutas bem como conhecer a fauna espeleológica, através da coleta

sistemática de exemplares cavernícolas.

Endereço para correspondência: Instituto Butantan, Caixa Postal 65, São Paulo, Brasil

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

São exíguas e dispersas as referências existentes na literatura especializada

sobre aranhas encontradas em grutas no Brasil, o que motivou o interesse do

autor em um trabalho conjunto com o C.E.U.

O presente estudo, o primeiro de uma série sobre o assunto, refere-se a

três espécies de aranha LABIDOGNATHA coletadas durante uma expedição

de quinze dias, em janeiro de 1975, no interior da gruta Santana, situada no

vale do rio Betari (afluente da margem esquerda do rio Ribeira de Iguape),

no município de Iporanga, São Paulo.

MATERIAL E MÉTODOS

Com exceção do material determinado por Mello-Leitão, pertencente ao

Museu Nacional do Rio de Janeiro c de um exemplar de Ctenus fasciatus, doa¬

do ao Instituto Butantan por um habitual fornecedor, todos os outros espéci¬

mes que serviram de base à execução deste trabalho foram coletados pelos inte¬

grantes do C.E.U. em diversas ocasiões.

Os exemplares foram, em geral, capturados vivos e mantidos dentro de

frascos individuais, com tampa de plástico perfurada, contendo um chumaço

de algodão embebido em água. As aranhas que morriam durante ou após a co¬

leta eram preservadas em álcool a 75%. Numa etiqueta colada no frasco era

anotada a sigla correspondente ao exemplar c, num caderno de registro, rela¬

cionavam-se as siglas com os respectivos dados de coleta: nome do coletor, lo¬

cal e data de captura e observações ecológicas.

Ao terminar a expedição, o material era trazido ao Instituto Butantan, clas¬

sificado pelo autor e anexado à coleção aracnológica. Uma relação do material

fornecido era, a seguir, entregue ao C.E.U. juntamente com as aranhas em

duplicata.

As figuras 1 a 6 e 8 foram desenhadas pelo autor, em câmara clara e pas¬

sadas a nanquim pela Sra. Dclminda Travassos. O desenho da figura 7 foi

feito pelo Sr. R.C.H. Grantsau. A região das grutas e cavernas mencionadas

no texto é representada, de modo aproximado, em um mapa (Fig. 8).

FAMÍLIA THERIDIOSOMATIDAE

Brignoli 3 observou que as aranhas desta família constituem um grupo niti¬

damente troglófilo nas regiões tropicais, sendo encontradas em grande número

no interior de grutas e cavernas. De fato, a espécie mais frequente de aranha

no interior da gruta Santana pertence a esta família. São aranhas diminutas

(cerca de 2 mm. de corpo), sedentárias, que constroem uma pequena teia orbi-

cular (9-10 cm. de diâmetro) nos espaços entre as estalactites. Suas ootecas,

em forma de cubinhos branco-rosados, ficam penduradas, perto das teias, em

fios verticais de seda, isoladas ou formando séries de duas a quatro ootecas.

Apesar de bastante comuns na gruta, pouco desses espécimes foram cole¬

tados pelos excursionistas. À nossa disposição tivemos, em bom estado de con¬

servação, apenas duas fêmeas adultas, cuja posição genérica permaneceu du¬

vidosa quando seus caracteres morfológicos foram comparados com os dos gê-

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, Sâo Paulo

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

Figs. 1 a 6 - Ctenus fasciatus - Mello-Leltão 1943: 1 - dorso do abdomem. 2 - disposição

ocular. 3 - palpo esquerdo do macho, vista lateral externa. 4 - palpo esquerdo do macho,

Vista ventral. 5 - epígino do holótlpo. 6 - epígino do exemplar 2569A.

2 3

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

neros a que mais se aproximam: Wendilgarda Keyserling 1886 (9, pg. 130),

Totuu Keyserling 1891 (10, pg. 261), Theridiosoma O. Pickard-Cambridge 1879

(11, pg. 193), Allotoíua Bryant 1945 (4, pg. 410) e Parogulnius Archer 1953

(1, pg. 20). Tendo em vista a possibilidade de obtenção de machos em futuras

excursões, permitindo uma definição da posição taxonômica da espécie, acha¬

mos mais indicado registrar, por ora, apenas a ocorrência, deixando para um

trabalho posterior a caracterização.

Material examinado: 1B 2749/13206 — uma fêmea com ootecas, Clayton

F. Lino (C.E.U.) col. set. 73, gruta Ouro Grosso. 1B 2749/15689 - quatro fêmeas

e ootecas, Maria Thereza Temperini (C.E.U.) col. jan. 75, gruta Santana.

FAMÍLIA SCYTODIDAE

Gênero Loxosceles Heinecken e Lowe

São aranhas sedentárias, de seis olhos, cefalotórax plano, colorido geral

castanho amarelado. Constroem teia em lençol, formada por um emaranhado

de fios pegajosos de seda. Diversos acidentes graves e mesmo fatais tem sido

provocados pela picada de várias espécies de Loxosceles.

Essas aranhas são comumente coletadas cm expedições bioespeleológicas 3 > 7 .

Segundo Gertsch 7 , que estudou a fauna araneológica das grutas da América

Central e México, as Loxosceles cavernícolas diferem das achadas do lado de

fora apenas por ligeira despigmentação do colorido e devem ser classificadas co¬

mo troglófilas.

Depois das THERIDIOSOMATIDAE, as Loxosceles foram as aranhas mais

encontradas dentro da gruta Santana. Suas teias irregulares podiam ser vis¬

tas, a cada pouco, pelo chão e revestindo as paredes de calcário; presas a elas,

foram observadas diversas ootecas, em geral, disfarçadas com grumos de argila

e restos de insetos predados pela aranha. Essas Loxosceles alimentam-se, prin¬

cipalmente, de pequenos dípteros, existentes, na ocasião, em grande quantidade

no interior da gruta. Notou-se que, contrariamente ao usual, as Loxosceles pra¬

ticamente “caçavam” essas moscas, em vez de aguardarem, pacientemente, que

elas, inadvertidas, se prendessem aos fios adesivos de sua teia.

A espécie a que pertencem essas Loxosceles inclui-se, sem dúvida, no gru¬

po gaúcho, criado por Gertsch 5 para agrupar um conjunto de espécies sul-ame¬

ricanas relacionadas entre si pelo colorido, proporções corporais e morfologia

da genitália. Em geral, é mais fácil reconhecer as espécies de Loxosceles pela

genitália feminina do que pelo palpo do macho, cuja estrutura é mais ou menos

semelhante nas diversas espécies de um mesmo grupo. A genitália das fêmeas

capturadas nas grutas é idêntica à ilustrada por Gertsch 5 para L. adelaida. Além

disso, o tarso do palpo dessas aranhas é dilatado, um caráter encontrado no

grupo gaúcho apenas em fêmeas de adelaida (5, pag. 138). No entretanto, as

proporções corporais dessas aranhas não coincidem com as obtidas por Gertsch

do holótipo de adelaida. O macho capturado nas grutas apresenta o tipo básico

de genitália das espécies do grupo gancho e proporções corporais mais próximas

às do tipo de similis.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, Sào Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

Eig. 7

Ctenus fasciatus Mello-Leitáo 1943. Vista dorsal, fêmea.

1, | SciELO

GRANTSAU

13 14

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

Brignoli 3 examinou um macho, 4 fêmeas e 12 jovens de Loxosceles, cole¬

tados na gruta das Areias (situada também no vale do rio Betari) que são, com

certeza, co-específicos aos ora em estudo, e os identificou como L. adelaicla.

Segundo êste autor, o macho de L. adelaicla, que êle descreveu, é muito seme¬

lhante ao de similis e variegala Simon 1907 mas pode ser distinguido deles

graças ao êmbolo, que é quase reto em adelaicla. Assim, de acordo com o esta¬

belecido até o momento para as espécies do grupo gaúcho, as Loxosceles cole¬

tadas nas grutas de Iporanga devem ser determinadas como L. adelaida, tendo

em vista, principalmente, a morfologia da genitália feminina. No entretanto, a

meu ver, muitos indícios existem sugerindo que L. adelaida Gertsch 1967 seja a

fêmea de L. similis Moenkhaus 1898 e que as aranhas até agora referidas como

fêmeas de similis sejam, na verdade, pertencentes à espécie surata Simon 1907

que, neste caso, não seria sinônima de similis, como tem sido considerada.

Material examinado: IB 2571 — 3 jovens, Clayton F. Lino (C.E.U.) col.

jul. 72, gruta Santana. IB 2751/14226 — 1 fêmea, C.E.U. col. abr. 74, gruta

Morro Preto. IB 666/15689 — 1 macho, 1 fêmea e 2 jovens, Maria Thereza

Temperini (C.E.U.) col. jan. 75, gruta Santana.

Dimensões da fêmea: IB 2751/14226: Compr. cefal. — 3,5 mm. Fêmur I-

6,5 mm. Compr. relativo das pernas: 2 4 13 (25,6 : 23,2 : 22,5 : 19,6).

Compr. fêmur 1/compr. cefal. — 1,8. Compr. perna I/compr. cefal. — 6,4.

Dimensões do macho: IB 666/15689 — Compr. cefal — 3,0 mm. Fêmur 1-

7,0 mm. Compr. relativo das pernas 2 4 13 (33,5 : 26,0 : 25,5 : 22,5).

Compr. fêmur I/compr, cefal. — 2,3 Compr. perna I/compr. cefal. — 8,5.

FAMÍLIA ctenidae

Os ctenídeos constituem uma família de aproximadamente 400 espécies

tropicais e subtropicais. São aranhas errantes, de hábitos noturnos. Segundo

Gertsch 6 , tem sido registradas com frequência em cavernas, onde costumam ser

encontradas, a plena vista, andando pelo chão e paredes.

Cíenus fasciatus Mello-Leitão 1943

Desta espécie era conhecido, até o momento, apenas o exemplar-tipo, uma

fêmea procedente de Iporanga (N.° 58152, Museu Nacional do Rio de Janeiro).

A sistemática das Cíenus encontra-se ainda bastante precária devido, em

parte, a ocorrências deste tipo. Embora sejam bastante comuns e existam cen¬

tenas de referências a espécies desse gênero, muitas das aproximadamente 120

espécies neotropicais citadas na literatura foram descritas baseadas em um único

exemplar (várias vezes em filhotes, na maioria em fêmeas) e diversas delas não

mais foram coletadas ou estudadas posteriormente. Assim, como bem observou

Bonnet (2, pg. 45), “malgré ses 234 espèces, ce genre Cíenus est loin d’être

bien assis. . . A situação agrava-se ainda mais quando as descrições ori¬

ginais são insuficientes para caracterizar a espécie.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

Big. 8 - Mapa da região das grutas e cavernas calcárias do vaie do rio Betari, Iporanga,

mencionadas no texto (baseado na íig. 15 do item bibliográfico 12): 1 - caverna Alambari.

2 - gruta Morro Preto. 3 - gruta Ouro Grosso. 4 - gruta da Agua Quente. 5 - gruta Santana.

«7

1, | SciELO

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

O estudo do exemplar-tipo de Ctenus fasciaíus e do material coletado pelo

C.E.U. nos permitiu fornecer novos dados para o reconhecimento dessa es¬

pécie.

Diagnose: Espécie pouco pilosa, de colorido geral castanho-avermelhado no

dorso e amarelo pálido na região ventral. Abdome acinzentado, com uma sé¬

rie de linhas claras em forma de telhado na face dorsal (Fig. 1). Pernas 14 2 3

(macho) e 4 1 2 3 (fêmea), longas e finas. Genitália masculina e feminina co¬

mo nas figuras 3 a 6.

Etiomologia: Ctenus jasciatus = Ctenus cingido por faixas. O nome específico

refere-se ao desenho típico encontrado no abdome de macho, fêmea e filhotes

da espécie.

Descrição da fêmea: Quando Mello-Leitão descreveu a fêmea 10 não fêz nenhuma

referência à sua genitália, fazendo supor tratar-se de um exemplar imaturo. O

exame do holótipo, porém, mostrou tratar-se de uma fêmea adulta, cujo epígino é

representado na Fig. 5. Algumas das estruturas morfológicas, citadas por Mello-

Leitão, seriam, a meu ver, melhor caracterizadas como segue: olhos laterais

posteriores (O.L.P.) e medianos posteriores (O.M.P.) do mesmo tamanho;

O.M.P. separados entre si por cerca de um raio e dos laterais posteriores

(O.L.P.) por pouco mais que um diâmetro. O.L.A. alongados, seu maior

diâmetro igual ao diâmetro dos medianos anteriores. O.L.A. separados dos M.A.

por um diâmetro dos M.A. Área ocular mediana tão larga quanto longa,

mais estreita na frente. O.L.A. e O.L.P. cm cômoros isolados. Altura do

clípeo igual ao diâmetro dos M.A. Sulco ungueal com 4 dentes grandes e um

muito pequeno na margem inferior (retromargem). Tíbia 1 com 5 pares de

espinhos ventrais, 1 lateral interno, 1 lateral externo e nenhum dorsal.

Descrição do macho: - IB 2740/15689A

Dimensões: Compr. do corpo: 16,5 mm. Envergadura total 137 mm. Cefal.:

8,3 mm. compr. e 6,5 mm larg. Tíbia do palpo: 3,2 mm. compr. e 0,6 mm.

larg.

Perna

Fêmur

Pa+Ti

Metatarso

Tarso

Total

16,5

24,0

19,0

6,5

66,0

15,5

21,0

16,5

5,5

58,5

III

13,0

16,5

13,5

5,0

48,0

16,0

19,5

5,5

60,5

Colorido: Cefalotórax, palpos e pernas castanho avermelhado no dorso. Tíbia,

metatarso e tarso das pernas castanho mais escuro. Face dorsal dos fêmures com

pelos escuros, formando manchas irregulares. Quelíceras castanho avermelhado

escuro, cobertas por pelos acinzentados. Esterno, face ventral das coxas e fê-

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

mures das pernas, castanho amarelado; dos demais artículos, castanho averme¬

lhado. Lábio e maxilas castanho avermelhado. Dorso do abdome cinza escuro

com uma linha longitudinal clara desde a base até quase a metade do dorso, se¬

guida de 4-5 linhas claras em forma de V aberto, invertido (Fig. 1).

Estrutura: Área ocular mediana tão larga quanto longa, ligeiramente mais es¬

treita na frente. O.M.A. um pouco menores que os O.M.P. Segunda fila de

olhos procurva pelas margens anteriores. Clípeo igual ao diâmetro dos O.M.A.

(Fig. 2). Sulco ungueal das quelíceras com 4 dentes grandes, seguidos de 1 ou 2

dentículos punctiformes na margem inferior (retromargem); promargem com 3

dentes, o segundo maior que os outros dois. Lábio mais longo que largo (2,4 mm.

compr. e 2,0 mm. larg. atingindo a metade das lâminas maxilares, mas não o

têrço apical. Pernas 1 4 2 3. Tíbia I com 5 pares de espinhos ventrais, 1 lateral

interno, 2 laterais externos e 1-2 dorsais. Metatarso 4 reto. Garras tarsais com

3-4 dentes conspícuos e outros muito pequenos em direção à base. Palpo (figs.

3 e 4): Tíbia 5 vezes mais longa que larga, com uma apófise lateral externa no

terço distai e uma apófise apical, recortada na margem anterior. Artículos do

palpo sem escópula veludosa de pelos na face lateral interna.

Material examinado: N.° 58152 Museu Nacional R. Janeiro (holótipo), fe-

mea, Oton Leonardos col. Iporanga, S. Paulo. 1B 2451/7598 — 1 fêmea, C.E.U.

col. jul. 71, vale rio Betari, município de Iporanga. IB 2451/7880 1 fêmea,

Josias Jacobsen col. set. 71, município de Guapiara, S. Paulo. IB 2536/8909A

—• 1 jovem, C.E.U. col. fev. 72, Abismo dos Caramujos, vale rio

Betari. IB 2536/8909B — 1 jovem, C.E.U. col. fev. 72, entrada da caverna

Alambari de Baixo. IB 2569 — 2 fêmeas e 1 jovem, C.E.U. col. jul. 72, Ca¬

verna Ouro Grosso. IB 1976 — 1 fêmea e 1 jovem, C.E.U. col. jan. 73, Gruta

das Figueiras, vale rio Betari. IB 2690/13206 — 1 fêmea com ootecas e filhotes

recém-nascidos, Clayton F. Lino(C.E.U.) col. set. 73, Gruta Ouro Grosso.

IB 2690/13638A — 1 jovem, Martin Christoffersen (C.E.U.) col. jan. 74, Gruta

da Água Quente, vale rio Betari. IB 2690/13638B — 1 jovem, Martin Chris¬

toffersen col. jan. 74, Caverna Alambari de Baixo. IB 1393/14226 — 1 fêmea,

(C.E.U.) col. mar. 74, Abismo das Ossadas, região da Serra da Onça Parda. IB

2740/15689 — 2 machos e 2 jovens, Maria Thereza Temperini (C.E.U.) col.

jan. 75, gruta Santana.

Entre os tipos de Ctenus do Museu Nacional do Rio de Janeiro que me fo¬

ram emprestados para estudo encontrei um exemplar sem número, acompanhado

de uma etiqueta manuscrita por Mello-Leitão, onde se lê: “Ctenus quadrilineatus

typus, Gruta Itaperussu, dez. 46, Dr. Curial”. Nos registros do Museu Nacional,

conforme informações da Dra. Anna Timotheo da Costa, nada consta além dos

dados mencionados na etiqueta e na literatura não encontrei citação dessa espé¬

cie. O exame do exemplar mostrou tratar-se de uma fêmea semi-adulta de Ctenus

fasciatus. A gruta I taperuçu é uma gruta calcária situada no município de Rio

Branco do Sul, a 25 quilômetros de Curitiba, Paraná.

Distribuição geográfica: São Paulo: Iporanga (arredores e interior de grutas

calcárias) e Guapiara. Paraná: Rio Branco do Sul (gruta Itaperuçu).

Dados biológicos: Estas aranhas foram, geralmente, encontradas andando pelas

paredes de calcário próximas à entrada das grutas mencionadas. Um dos exem-

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

piares (IB 2740/15689B) foi coletado no interior da gruta Santana a uma dis¬

tância aproximada de 260 metros em linha reta da entrada da gruta. Uma fêmea

semi-adulta (IB 2690/13638) apresentava um verme parasitando seu abdome.

CONCLUSÕES

Nenhuma das três espécies capturadas no interior das grutas de Iporanga é

cavernícola obrigatória (troglóbia): a não ser por uma ligeira despigmentação

do colorido e um certo alongamento das pernas, não mostram nenhuma adapta¬

ção especial à vida cavernícola. Conforme a terminologia bioespeleológica, essas

aranhas devem ser classificadas como troglófilas.

De maneira geral a presença de aranhas no interior da Gruta Santana foi

constatada até uma distância de aproximadamente 260 m. da entrada, tanto na

galeria do rio Roncador (que corre dentro da gruta) como também nas galerias

superiores, situadas a mais ou menos 15 m. acima.

É interessante observar a ausência de caranguejeiras nas diversas grutas

até agora exploradas pelo C.E.U. Em outras grutas da região tropical elas tem

sido normalmente encontradas 3 .

Os nossos dados confirmam a observação de Brignoli 3 de que na fauna

araneológica cavernícola do Brasil predominam THERIDIOSOMAT1DAE e

SCYTOÜIDAE, seguidas por outros grupos menos frequentes.

Agradecimentos: Este trabalho não teria sido possível sem a colaboração

dos integrantes do C.E.U. A eles e, em especial, a Maria Thereza Temperini,

que dedicou particular interesse à coleta e observação das aranhas cavernícolas,

os meus agradecimentos. À Dra. Anna Timotheo da Costa, do Museu Nacional

do Rio de Janeiro, que gentilmente emprestou-me os tipos de Ctenus sob sua

responsabilidade, o meu agradecimento.

ABSTRACT: This paper deals with three cave-dwelling species

of spiders collected in a large limestone cave (Gruta Santana)

near Iporanga, São Paulo, Brazil, during a fifteen-day biespe-

leological expedition.

One of the species, Ctenus fasciatus Mello-Leitão 1943 ( LABI -

DOGNATHA; CTENIDAE ) was known so far only from the ori¬

ginal description. The female is recharacterized and genitalia

illustrated for the first time. The male, so far unknown, is des-

cribed.

Specimens of Loxosceles ( LABI DOGNATHA-, SCYTODIDAE )

collected during the expedition are mentioned, and remarks are

made about their identification, which is still provisional.

Some notes are given on a species of THERIDIOSOMATI-

DAE, the commonest spider in the caves explored.

UNITERMS: Brazilian cave-dwelling spiders. Ctenus fasciatus

Mello Leitão 1943. Loxosceles adelaida Gertsch 1967. Loxosceles

similis Moenkhaus 1898. THERIDIOSOMATIDAE.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

EICKSTEDT, V.R.D. von Aranhas coletadas nas grutas calcárias de Iporanga, São Paulo,

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 61-71, 1975.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. ARCHER, A.F. Studies in the orbweaving spiders (Argiopidae). Amer. Mus.

Novit., (1622): 1-27, figs. 1-46, 1953.

2. BONNET, P. Bibliographia Araneorum. Toulouse, Douladoure Impr., 1961,

v. 3, 591 p.

3. BRIGNOLI, P.M. Sur quelques araignées cavernicoles d’Argentine, Uruguay,

Brésil et Venezuela récoltées par le Dr. P. Strinati, Rev. suisse Zool.,

79 (1): 361-385, 1972.

4. BRYANT, E.B. The Argiopidae of Hispaniola. Buli. Mus. Comp. Zool, 95 (4):

357-418, pis. 1-4, 1945.

5. GERTSCH, W.J. The spider genus Loxosceles in South America (Araneae:

Scytoãiãae). Buli. Am«r. Mus. Nat. Hist., 136 (3): 117-174, pis. 3-11, 1967.

6. GERTSCH, W.J. A report on some Mexican cave spiders. Buli. Assoe. Mex.

Cave Studies, (4): 47-111, 1971.

7. GERTSCH, W.J. A report on cave spiders from México and Central Ame¬

rica. Buli. Assoe. Mex. Cave Studies, (5): 141-163, 1973.

8. KEYSERLING, E. Die Spinnen Amerikas. Theridiiáae. Nünberg, Bauer &

Raspe, 1886. v. 2, par. 2, 295 p., 11 pis.

9- KEYSERLING, E. Die Spinne Amerikas. Brasilianische Spinnen. Nürnberg,

Bauer & Raspe, 1891. v. 3, 278 p., 10 pis.

10. MELLO-LEITÃO, C.F. Araneologica Varia Brasiliana. An. Acad. Bras. CL,

15 (3): 255-265, 1943.

11. PICKARD-CAMBRIDGE, O. On some new and rare British spiders, with

characters of a new genus. Ann. Mag. Nat. Hist., 4 (5): 190-215, pl. XII,

1879.

12. SÃO PAULO. Secretaria de Economia e Planejamento. Superintendência do

Desenvolvimento do Litoral Paulista. Possibilidades turísticas no vale do

Ribeira e litoral sul. São Paulo, [1971/74].

Recebido para publicação em 09-VI-1975 e aceito em 24-IX-1975.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mera. Inst. Butantan

39: 73-77, 1975

ÁCAROS PILÍCOLAS DO BRASIL

(ACARINA: LISTROPIIORIDAE)

NÉLIDA M. LIZASO

Divisão de Biologia, Instituto Butantan

RESUMO: O gênero Prolistrophorus Fain, 1970 inclui doze es¬

pécies, todas da região neotropical. No presente trabalho é des¬

crita uma espécie nova: Prolistrophorus dolichus parasitando

“rato” capturado no Instituto Butantan, São Paulo.

UNITERMOS: Prolistrophorus Fain, 1970 (Acarina: Listrophori-

dae). Prolistrophorus dolichus sp.n.

INTRODUÇÃO

O gênero Prolistrophorus foi caracterizado por Fain em 1970 para incluir

duas espécies descritas anteriormente por Hirst, 1921 em Listrophorus e mais

seis espécies novas. Em 1973, Fain acrescentou mais quatro espécies à esse gê¬

nero, portanto o total de espécies de Prolistrophorus atualmente é de 12. Todas

a s espécies são da região neotropical, assim distribuídas: Suriname (2), Perú

(1), Brasil (3), Paraguai (1), Argentina (5).

No presente trabalho é descrita uma espécie nova; Prolistrophorus dolichus,

s P-n. coletados em “rato” por Flávio da Fonseca, em 12-III-1934, no Instituto

Butantan.

Prolistrophorus dolichus, sp.n.

Macho (Figs. 2, 3, 4)

Corpo comprimido lateralmente. Dimensões: 440 p. de comprimento. Lar¬

gura máxima ao nível da placa propodosomal de 112 p. Apresenta uma região

segmentada (5 aneis) entre as placas propodosomal e opistosomal; pernas bem

desenvolvidas.

Bace dorsal: distinguem-se 3 placas: uma que recobre o capitulum seguindo-se

sem intervalo pela placa propodosomal, que está separada da opistosomal por

Endereço para correspondência: Caixa postal 65 - São Paulo - Brasil.

1, | SciELO

LIZASO, N.M. Ácaros pilicolas do Brasil ( Acarina: Listrophoridae).

Uem. Inst. Butantan, 39: 73-77, 1975.

5 aneis, que lhe dão aspecto de sanfona, onde se implantam 2 pares de cerdas.

A placa que recobre o capítulum é pontilhada. Placa propodosomal, de aspecto

semelhante à anterior, com 2 pares de cerdas. Placa opistosomal lisa, recobrindo

o dorso até a extremidade posterior, com 1 par de cerdas pequenas na região

posterior.

Faoe ventral: as placas propodosomal e opistosomal se continuam pela face

ventral até quase unir-se na linha média. Fica assim uma faixa média sem quiti-

nizar onde se implantam: 1 par de cerdas pequenas entre as coxas I e II, 1 par

antes da coxa 111, 1 par anterior e outro posterior da coxa IV. Região genital

ao nível posterior da coxa III. Poro anal por detrás do sulco anal. Extremidade

posterior do corpo bilobulada, apresentando 1 par de cerdas longas e 2 pares de

cerdas pequenas, e 1 par de cerdas em posição lateral.

Pernas: os tarsos I e II apresentam 1 par de cerdas longas, sendo as do tarso II

voltadas para trás; apresentam também 3 pares de cerdas menores. Tarsos 111 e

IV com cerdas pequenas.

Fémea (Fig. 1)

Corpo: mede 510 p por 105 p.

Face dorsal: o capítulum semelhante ao do cT. Escudo propodosomal escultu-

rado, apresentando uma zona médio-dorsal diferenciada. Nele implantam-se 3

pares de cerdas. Por detrás do escudo, o corpo apresenta-se segmentado (com as¬

pecto de sanfona) até o seu terço posterior, com dois pares de cerdas. No terço

posterior do corpo, de aspecto liso, implantam-se 3 pares de cerdas.

Face ventral: a região médio anterior semelhante ao á\ Ao nível da coxa III

acha-se o orifício genital, e na extremidade posterior do corpo, o orifício anal e

1 par de cerdas.

Pernas: as pernas I e II semelhantes às do c?. Pernas III e IV menos desenvol¬

vidas que nos cT, com cerdas pequenas.

Ninfa (Fig. 5)

De aspecto semelhante ao adulto mede 420 p de comprimento.

Face dorsal: apresenta somente a placa do capítulum, vendo-se em continuação

o corpo uniformemente segmentado (de aspecto semelhante ao da fêmea adulta).

Face ventral: semelhante à fêmea adulta, orifício genital indistinto.

Pernas: semelhante às do adulto.

Holótipo macho coletado parasitando “rato” procedente do Instituto Butan¬

tan, São Paulo, em I2-III-34, depositado sob o n.° 260 da Coleção Flávio da

Fonseca, do Instituto Butantan. Montados na mesma lâmina parátipos em um

total de 7 9, 18 çT e 1 ninfa. Outro lote com as mesmas características de hospe¬

deiro e localidade de procedência com 7 c? e 8 9.

DISCUSSÃO TAXONÔMICA

Prolistrophorus dolichus diferencia-sc de Prolistrophorus frontolis (Hirst,

1921) por não possuir projeção anterior no escudo do capítulum, caráter este

que o aproxima de P. argentinus (Hirst, 1921), mas do qual se diferencia pela

forma geral do escudo do capítulum, especialmente a projeção lateral.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

LIZASO, N.M. Ácaros pilicolas do Brasil ( Acarina : Listrophoridae ).

Mem. inst. Butantan, 39: 73-77. 1975.

Fi gs. 1 a 3 - Prolistrophorus dolichus sp. n.: 1 - lêmea, vista lateral. 2 - macho, vista

lateral. 3 - macho, vista vertral.

], | SciELO

LIZASO, N.M. Ácaros pllicolas do Brasil ( Acarina: Listrophoridae).

Mem. Inst. Butantan, 39: 73-77, 1975.

Flgs. 4 e 5 - Prolistropdorus dolichur. sp.n.: 4 - macho, vista dorsal. 5 - ninfa, vista lateral.

Flgs. 6 a 8 - Detalhes das regiões anterior e posterior de 3 espécies de Prolistrophorus:

6 - P. argentinus (Hlrst, 1921). 7 - P. frontahs (Hlrst, 1921). 8 - P. dolichus sp. n.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

LIZASO, N.M. Ácaros pilicolas do Brasil ( Acarina : Listrophorid&e).

Mem. Inst. Butantan, 39: 73-77, 1975.

Considerando a região posterior do corpo, em Prolistrophorus dolichus,

sp.n. os pelos se implantam, na seguinte ordem, a partir da linha média do

corpo: 1 longo, 1 pequeno, 1 médio; em P. fronícilis (Hirst) são: 1, pequeno,

1 longo, 1 médio, igual que em P. argentinus (Hirst). (Figs. 6 a 8)

Das espécies descritas por Fain em 1970 e 1973, a descrição é muito su¬

mária e não existem desenhos publicados, para podermos comparar. Não tive¬

mos oportunidade de examinar os exemplares tipos, para poder precisar mais

nitidamente as semelhanças e diferenças.

O c? de P. dolichus diferencia-se do de P. cryptophallus Fain, por não apre¬

sentar arco esclerozado muito largo e espesso em forma de U envolvendo o

pênis, e pelo aspecto do escudo pos-capitular que em dolichus é pontilhado e

em cryptophallus tem aspecto de pseudo escamas.

Diferencia-se do d* de P. striatus pelo escudo opistosomal, que nesta espé¬

cie se apresenta com estrias transversais na sua quase totalidade, e em dolichus

é liso, único, entretanto que em hirstianus há 2 escudos separados na linha mé¬

dia do corpo.

P. nectomys apresenta as ventosas adanais de forma triangular, e dolichus,

arredondadas.

ABSTRACT: Twelve species are considered in the genus Prolis¬

trophorus Fain, 1970, all of them from the Neotropical region.

In the present paper one new species is described: Prolistropho¬

rus dolichus, sp.n. from “rat” of Instituto Butantan, São Paulo.

UNITERMS: Prolistrophorus Fain, 1970 (Acarina: Listrophori-

dae). Prolistrophorus dolichus sp.n.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. FAIN, A. Diagnoses de noveaux Lobalgides et Listrophorides (Acarina: Sar-

coptiformes). Rev. Zool. Bot. Afr., 81 (3/4): 271-300, 1970.

2. FAIN, A. Diagnoses d'Acariens nouveaux (Listrophorides et Myobiidae). Rev.

Zool. Bot. Afr., 87(2): 330-332, 1973.

3. HIRST, S. On some new or little-known Acari mostly Parasitic in habit.

Proc. Zool. Soc. LOnd., 25: 357-378, 1921.

4. Mc DANIEL, B. The subfamily Listrophorinae Gunther with a description

of a new species of the genus Listrophorus Pagenstecher from Texas

(Acarina: Listrophoridae). Acarologia, 7 (4): 704-712, 1965.

5. Mc DANIEL, B. The Superfamily Listrophoroidea and the stablishment of

some new families (Listrophoroidea, Acarina). Acarologia, 10 (3): 477-482,

1968.

Recebido para publicação em 30-III-1975 e aceito em 27-X-1975.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

cm 12 3 4:

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 79-83, 1975

SOBRE UMA IIEMOGREGARINA E UM TRIPANOSSOMO

DE PEIXE DE MAR DE SAO PAULO (BRASIL). *

SAMUEL B. PESSÕA e PÉRSIO DE BIASI

Secção de Venenos, Instituto Butantan

RESUMO: Os autores, após terem estudado o sangue de algumas

espécies de peixes marinhos por eles coletados nas costas de

São Sebastião (Norte de São Paulo), descreveram uma hemo-

gregarina ( Haemogregarina moringa n. sp.) no sangue de uma

moréia (Gymnothorax moringa) e um tripanossomo ( Trypanoso-

ma radiale n. sp.) no sangue de um michole (Diplectrum radiale).

UNITERMOS: Peixe. Haemogregarina. Trypanosoma. Hemopara-

sitas.

INTRODUÇÃO

No ano passado, em outubro de 1974, aproveitamos uns dias de férias que

passamos em São Sebastião (Litoral Norte do Estado de São Paulo), para exa¬

minar o sangue de alguns peixes pescados, por nós mesmos, no mar que banha

as costas daquela localidade. Aqui relatamos o encontro de hemoparasitas em

duas espécies de peixes do mar da localidade em apreço.

MÉTODOS

Os peixes, uma vez fisgados com anzol, eram colocados em um recipiente

com água do mar e levados com vida até nossa casa, onde o seu sangue era ex¬

traído e espalhado em lâminas de microscopia. Para isso fazíamos um corte com

tesoura pelas branquías expondo o coração que era puncionado com uma serin¬

ga armada de agulha para injeção ou, mais frequentemente, com pipeta de Pas-

teur. Retirado o sangue, espalhávamos uma gota em lâminas de microscopia e

fazíamos um esfregaço fino que era imediatamente secado. O sangue colhido e

seco era fixado pelo álcool metílico e corado pelo Giemsa. De cada espécime

de peixe fazíamos em média 4 a 6 lâminas e assim colhemos cêrca de 150 lâ¬

minas com o sangue dos exemplares de peixes pescados.

Trabalho executado com auxílio do Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan

Endereço para correspondência: Caixa postal, 65 - São Paulo - Brasil.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S.B. & BIASI, P. Sobre uma hemogregarina e um tripanossomo de peixe de

mar de São Paulo (Brasil).

Mem. Inst. Butantan, 39: 79-83, 1975.

HEMOPARASITAS

Encontramos unicamente uma hemogregarina no sangue de uma moréia e

um tripanossomo no sangue de um michole.

Trypanosoma : Encontramos um único paixe parasitado por tripanossomo.

Trata-se de um exemplar do peixe vulgarmente denominado michole. Este pei¬

xe, Diplectrum radiale (Quoy & Gaimard, 1824), pertencente à família Serrani-

dae, é muito frequente nas costas norte de São Paulo. De 8 especimens exami¬

nados, só encontramos um único parasitado por tripanossomo (Figs. 1 e 2). O

flagelado que era muito raro no sangue do peixe, pois achamos um único pa¬

rasita nas lâminas examinadas, media 27.5 microns de comprimento e 4,7 microns

de largura, na sua porção mais larga; cinctoplasto situado a 10 microns da extre¬

midade posterior; o flagelo corre ao longo de uma membrana ondulante estreita

e torna-se livre na extremidade anterior do organismo, sendo esta porção quase

imperceptível na nossa preparação. O núcleo alongado, situado no meio do cor¬

po do animal, mede 4 microns de comprimento. A este tripanossomo, que con¬

sideramos uma espécie nova, propomos o nome de Trypanosoma radiale n. sp.

Haemogregarina : Examinamos 4 exemplares da moréia mas somente um re¬

velou algumas hemogregarinas no sangue.

A moréia, como se sabe, pertence à família Muraenidae; parece-nos que há

várias espécies de moréias, classificadas no gênero Gymnothorax. Só pescamos

uma espécie que tem o corpo pontilhado de escuro, denominada pelos pescado¬

res locais “moréia pintada”, identificada como Gymnothorax moringa (Cuvier).

Segundo Halstead e Courville 3 , a distribuição geográfica deste peixe vai do gol¬

fo do México ao Brasil. Como possui um corpo alongado e é um peixe agres¬

sivo, os pescadores de São Sebastião também o chamam de serpente do mar.

Foi Carini 2 quem em 1933 descreveu, pela primeira vez um hemoparasita

de peixe do mar do Brasil, uma hemogregarina da tainha (Mugil brasiliensis).

Não encontramos depois deste trabalho pioneiro, nenhum outro sobre hemopa-

rasitas de peixes marinhos brasileiros, ao contrário do que ocorre com peixes

de água doce, cujos trabalhos são em maior número.

A hemogregarina que encontramos na moréia apresenta-se sob a forma de

um crescente, medindo cerca de seis microns de comprimento, colocada obliqua¬

mente dentro da hemácia; possui núcleo arredondado, bem visível, medindo cer¬

ca de dois microns de diâmetro (Figs. 3 c 4). Alguns outros glóbulos também

se mostraram parasitados por formas da hemogregagrina (Fig. 5), que nos pa¬

recem ser esquizontes jovens.

A este parasita, que julgamos não ter sido ainda descrito, damos o nome de

Haemogregarina moringa, n. sp.

COMENTÁRIOS

A única espécie de hemoparasita de peixe marinho do Brasil até hoje des¬

crita foi, como já assinalamos, uma hemogregarina da tainha, por Carini 2 em

1933. Depois desse trabalho não tivemos conhecimento de outras publicações

abordando o assunto. Na Argentina, Bacigalupo e De La Plaza *, estudaram os

tripanossomos dos peixes do mar da Prata.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

PESSÔA, S.B. & BIASI, P. Sobre uma hemogregarina e um tripanossomo de peixe de

mar de São Paulo (Brasil).

Mem. Inst. Butantan, 39: 79-83, 1975.

F *g- 1 - Microíotografia de Trypanosoma radiale em esíregaço de sangue de mlchoJe

(Diplectrum radiale). Notar a têr,ue membrana ondulante e o cinetoplasto no terço posterior

do flagelado. (X2300).

■Pig. 2 - Desenho da microíotografia anterior.

3 - Microíotografia de Ilaemogregarina moringa em esfregaços de sangue de moréla

(Oymnothorax moringa), mostrando o parasita em forma de crescente e próximo ao núcleo

tia hemácia. (x 1500).

F1 S- 4 - Desenho da microíotografia anterior.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

PESSOA, S.B. & BIASI, P.

mar de São Paulo (Brasil) .

Mem. Inst. Butantan, 39: 79-83, 1975.

Sobre uma hemogregarina e um tripanossomo de peixe de

Relatou-nos pessoalmente, O. Froés (da Faculdade de Medicina da Uni¬

versidade do Rio Grande do Sul), ter examinado o sangue de várias espécies de

peixes marinhos capturados em águas daquele Estado, com resultados negativos.

Além dos parasitas figurados acima (Figs. 3 e 5) também encontramos na

mesma moréia certas formas semi-lunares que por suas extremidades tocam no

núcleo da hemácia. Nelas pode-se perceber um núcleo situado no centro de seu

corpo (Figs. 6 e 8). Estes organismos assemelham-se a formas descritas por

Henry em sangue de peixes europeus 4 .

ABSTRACT: In this paper the authors describe Haemogregarina

moringa n. sp., haemoparasite of the fish “moreia” (Gymno-

thorax moringa) and Trypanosoma raãiale n. sp., in the blood

of the fish “michole” (Diplectrum radiale), collected in São Se¬

bastião, S.P., Brazil.

UNITERMS: Fish. Haemogregarina. Trypanosoma. Hemopara-

sites.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1 BACIGALUPO, J. & DE LA PLAZA, N. Presencia de tripanosomas en las

rayas de iMar dei Plata: Trypanosoma marplatensis n. sp. Rev. Soc. arg.

Biol, 24: 269-274, 1948.

2. CARINI, A. Sobre uma hemogregarina de um peixe do mar do Brasil. Arch.

Biol. (S. Paulo), 172: 13, 1933.

3. HALSTEAD, B.W. & COURVILLE, D.H. Poisonous and Venomous Marine

Animais of the World. Washington, U.S. Government Printing Office,

1967, v. 2, p. 953.

4. WENYON, C.M. Haematractidium Henry, 1910. Protozoology, 2: 1064-1065,

1929.

Recebido para publicação em 22-V-1975 e aceito em 28-IX-1975.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 85-101, 1975

NOTA SOBRE FORMAS EVOLUTIVAS DE TRYPANOSOMA

DE SERPENTES EM MEIO DE CULTURA. *

PÉRSIO DE BIASI, SAMUEL B. PESSÕA, GIUSEPPE PUORTO

e WILSON FERNANDES

Secção de Venenos, Instituto Butantan

RESUMO: Os autores estudaram em meio de cultura de

N.N.N., original e modificado com sangue de serpente ao in¬

vés de sangue de coelho, formas evolutivas de duas espécies

de Trypanosoma de serpentes: T. salamantae (parasita da Epi-

crates cenchria crassus ) e T. phylodriasi (parasita da Phüodryas

nattereri). Não encontraram nas formas evolutivas de ambas as

espécies de Trypanosoma diferenças significativas.

Assinalam que nos organismos destes tripanossomos que se

multiplicam por fissão longitudinal a divisão é rápida, enquanto

que o processo de individualização é lento naqueles em divisão

múltipla (“roseta”).

Fizeram experiências de inoculação subcutânea ou por admi¬

nistração “per os”, de meios de cultura com T. salamantae e

T. phylodriasi em filhotes de serpentes criadas em laboratório.

Resultados positivos foram obtidos com dois filhotes de Bothrops

alternatus (“urutu”) inoculados por via subcutânea com culturas

de T. phylodriasi. Os demais foram negativos.

Experiências de evolução do T. salamantae e do T. phylo-

ãriasi em mosquitos Culex fatigans e C. dolosus que picaram as

serpentes parasitadas e se engurgitaram de sangue, deram resul¬

tados negativos, exceto um exemplar de C. dolosus que apresen¬

tou formas evolutivas flageladas, mostrando a possibilidade de

ser este mosquito vetor potencial.

UNITERMOS: Trypanosoma. Hemoparasitas. Serpentes. Cultura

de Tripanossomo. Transmissão experimental.

INTRODUÇÃO

Ao contrário do que se verifica com os tripanossomos de anfíbios, aqueles

que parasitam as serpentes se constituem num dos grupos menos estudados den¬

tre os tripanossomos encontrados nos vertebrados heterotérmicos.

* Trabalho executado com auxílio do Fundo de Pesquisas do Instituto Butantan

Bndereço para correspondência: Caixa postal 65 - São Paulo - Brasil

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSÔA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W.

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Nota sobre formas evolu-

Isto se deve a uma série de razões, dentre as quais podemos destacar: ser¬

pentes parasitadas por tripanossomos são pouco frequentes; quando apresentam

estes parasitas, são eles encontrados em pequeno número no sangue periférico;

quando em cativeiro, mesmo as serpentes não venenosas, sobrevivem menos e

são mais difíceis e susceptíveis ao manuseio do que os anfíbios; raramente en¬

contramos em curto espaço de tempo, mais de um exemplar de uma mesma es¬

pécie parasitada por tripanossomo.

Em relação a este último fato, podemos citar como exemplo o T. erythro-

lampri descrito por Wenyon 18 em 1908, cm serpente da América do Sul, o qual,

ao que nos consta, nunca mais foi visto por qualquer outro pesquisador. Nós

mesmos, nestes últimos oito anos examinamos, provenientes de várias regiões

do Brasil, 34 exemplares de Erythrolamprus aesculapii, serpente em que foi en¬

contrado o T. erythrolampri e não encontramos um único exemplar parasitado

por ele. No entretanto, cêrca de 40% destes ofídios eram parasitados por outro

hemoparasita ( Hepatozoon ), o que também fôra verificado por Wenyon nestas

serpentes. Outro exemplo temos com T. merremii e T. butantanensis parasitas

da Waglewphis merremii (=Xenodon merremii ) descritos por Arantes & Fon¬

seca 1 (1931) que tiveram de examinar, segundo eles, dezenas de exemplares

durante alguns anos, para encontrar quatro parasitados por T. butantanensis e

seis outros por T. merremii. De 146 exemplares desta serpente por nós exami¬

nados, somente um deles estava parasitado por tripanossomo. Também quere¬

mos nos referir ao fato de termos examinado cêrca de 200 serpentes Crotalus

durissus terrificus e C. d. colillineatus para encontrarmos quase seguidamente 4

exemplares parasitados pelo Trypanosoma cascavelli Pessoa & Biasi 16 , 1972.

Posteriormente examinamos o sangue de cêrca de 100 outras serpentes da mes¬

ma espécie, sem termos encontrado uma única cobra parasitada.

Algumas serpentes apesar de ocuparem “habitat” semelhante apresentam di¬

ferenças acentuadas na frequência desses hemoparasitas: a Rachidelus brazili

(“falsa-muçurana”) serpente de hábito aquático, pouco frequente, apresenta

alta taxa de parasitismo por tripanossomo, pois em 21 cobras examinadas, en¬

contramos seis — 30% — que mostravam tripanossomo. As “boipevas” (Wa-

glerophis merremii) que possuem hábito aquático semelhante à espécie ante¬

rior ou então são de lugares úmidos, apresentam como vimos, baixa percentagem

de infecção para estes parasitas.

Como se sabe, a transmissão dos tripanossomos nos casos de serpentes de

hábito aquático se faz por meio de sanguessugas. Segundo Brumpt 7 (1914), o

T. brazili parasita da Helicops modesta é transmitido por sanguessugas ( Pla-

cobdelta brasiliensis e P. catenigera). Em relação às serpentes terrestres e ar-

borícolas, provavelmente ocorra por meio de insetos hematófagos. É difícil de

se cogitar sobre qual destes vetores é o mais eficiente no mecanismo de trans¬

missão dos tripanossomos.

Laveran & Mesnil 12 (1904) citam, mas sem comprovação positiva, a pos¬

sível transmissão de tripanossomos nos répteis através dos carrapatos.

Há outros pontos que nos parecem obscuros: cm certas épocas do ano de¬

saparece praticamente a infecção das serpentes por tripanossomo, mas perma-

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSÒA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES,

Uvas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101. 1975.

W. Nota sobre formas evolu-

necem aquelas determinadas por Hepatozoon-, em exemplares de algumas espé¬

cies de serpentes conseguimos encontrar parasitismo só por tripanossomo; exem¬

plares de outras espécies (p.ex. Micrurus) aparentemente não apresentam he-

moparasitas. Isto nos leva a recomendar maiores estudos experimentais sobre

a transmissão destes hemoparasitas, afim de conseguirmos melhor compreensão

da sua fenomenologia.

De uma maneira geral, as espécies da Trypanosoma das serpentes foram

descritas baseadas na morfologia das formas encontradas nos hospedeiros ver¬

tebrados, sendo em geral pouco conhecida a morfologia de suas formas evolu¬

tivas, as quais, em outros répteis (na maioria lagartos) foram observadas e des¬

critas nos vetores invertebrados que são em geral insetos (mosquitos e flebóto-

mos) ou sanguessugas (hirudíneos).

Em nossas serpentes, Arantes & Fonseca 1 assinalaram formas evolutivas

do T. butaníanense no sangue periférico da Ophis merremii ( = Waglerophis

merremii) e também em meio de N.N.N; Pessoa e Fleury 17 (1969) observa¬

ram na Haementeria lutzi (sanguessuga) formas evolutivas do T. Iiogei parasita

da Rachidelus brazili; do T. cascavelli, apesar das experiências com mosquitos

do gênero Culex (C. fatigam e C. dolosus ), “barbeiros” ( Triatoma infestam)

e sanguessuga ( Haementeria gracilis) , só foram observados tripanossomos aglu¬

tinados e parcialmente lisados nas sanguessugas (Pessoa & Biasi 16 ).

MATERIAL E MÉTODOS

Trabalhamos com as serpentes n. os NS — 787 ( Epicrates cenchria crassus),

popularmente conhecida por “salamanta”, chegada ao Instituto Butantan no

dia 09/05/74 e NS — 800 (Philodryas nattereri) recebida no dia 20/05/74,

ambas de procedência desconhecida e respectivamente parasitadas pelo Trypa¬

nosoma salamantae Pessoa & Fleury 17 , 1969 e 71 phylodriasi Pessoa 15 , 1928.

O sangue destas serpentes foi colhido por punção direta no coração do

animal, com seringa e agulha estéreis, ou asséticamente com pipeta Pasteur atra¬

vés de corte na extremidade da cauda da serpente.

O sangue colhido foi semeado cm tubos de ensaio com meio de N.N.N.,

mantidos a 26°C.

Utilizamos este meio de cultura, deixando de experimentar outros, pelo

fato de ser o meio que mais facilmente obtivemos através da colaboração da

Seção Meios de Cultura do Instituto Adolfo Lutz, uma vez que, nossas expe¬

riências são desenvolvidas na Secção de Venenos do Instituto Butantan, especia¬

lizada na colheita de venenos de serpentes peçonhentas.

Os esfregaços, tanto da cultura como de sangue, foram fixados pelo me¬

tanol e corados pelo Giemsa ou pelo May Grünwald-Giemsa.

Em geral, os organismos corados pelo May Grünwald-Giemsa mostraram

melhor as suas estruturas do que quando corados só pelo Giemsa. Os núcleos

dos parasitas mostram-se avermelhados, citoplasma com granulações e vacúolos

bent evidentes.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSÔA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre formas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

As duas espécies dc Trypanosoma com que trabalhamos foram suficiente¬

mente descritas em seus trabalhos originais de modo que achamos desneces¬

sária a redescrição (Figs. 1 e 21).

Além de algumas microfotografias, também fizemos em maior número

desenhos dos parasitas, por se tratar de organismos cuja estrutura é complexa

e pode ser melhor representada por desenhos.

Nas experiências de transmissão em filhotes de serpentes dos gêneros

Crotalus e Bothrops criados em laboratório, procedemos à inoculação sub-cu-

tânea ou administramos “per os”, culturas em N.N.N., positivas para T. sa-

lamantae e T. phylodriasi e triturados de mosquitos Culex clolosus e C. fatigans

engurgitados com sangue parasitado das serpentes E. c. crassus e P. nattereri.

Os mosquitos foram criados na Seção de Arboviroses do Instituto Adolfo

Lutz e mantidos em gaiolas apropriadas, contendo 50 a 60 mosquitos cada

uma. As experiências foram feitas conforme técnicas descritas anteriormente

(Biasi e cols 4 ).

RESULTADOS

Na maioria das vezes, 48 horas após havermos semeado sangue de E. c.

crassus ou de P. nattereri positivo, respectivamente, para T. salamantae e T. phy¬

lodriasi, em tubos de ensaio com meio de cultura de N.N.N., já eram observa¬

das formas evolutivas daqueles tripanossomos. O período de permanência dos

organismos vivos nas culturas não é em geral muito longo, pois, rapidamente elas

se apresentam contaminadas, levando-nos a crer que o sangue das serpentes

apresenta contaminação natural. Todavia uma das culturas de T. phylodriasi

manteve-se estéril por mais de 45 dias.

O meio de N. N. N., que modificamos substituindo o sangue de coelho

pelo sangue de serpente não se mostrou mais favorável do que o meio original.

Realmente encontramos, em tais condições, poucas formas evolutivas de tripa-

nossomo, mesmo quando a cultura era examinada 4 a 5 dias após a semea¬

dura.

Em todas as culturas pudemos identificar formas que classificamos como

amastigota, promastigota e epimastigota, ao lado dc outras que se mostravam

ou não em divisão e que dificilmente pudemos relacioná-las com uma das clás¬

sicas formas evolutivas dos flagelados. Não conseguimos identificar formas tí¬

picas de tripomastigota, mas acreditamos estarem elas presentes nas culturas

visto termos conseguido infectar cobrinhas negativas para estes protozoários.

Admite-se serem as formas tripomastigota as únicas infectantes.

a) Formas evolutivas do Trypanosoma salamantae:

Nota-se uma grande variação no tamanho de uma mesma forma evoluti¬

va destes flagelados. Encontram-se alguns organismos de dimensões relativa-

mente pequenas e outros maiores como amastigota com cêrca de 7 a 18 mi-

crons (Figs. 2 a 6), promastigota com 14 a 36 microns (Figs. 7 a 9) c epimas¬

tigota com 18 a 27 microns (Figs. 10 a 14).

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSOA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre formas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

il,

WrM:

(

53 :

W '

íéWl

Plg. 1 - Trypanosoma salamantae. Esfregaço de sangue da serpente Epicrates cenchria crassus

(X 1800).

Plgs. 2 a 7 - Formas evolutivas de T. salamaniae em meio NNN*: 2 - Forma amastigota:

notar o reservatório no cinetoplasto. 3 - Forma amastigota: notar o clnetoplasto dividido

e m 3 partes. 4 - Agrupamento (roseta) com 8 organismos (X 2600). 5 - Agrupamento de

forma multiplicativa, com 3 organismos. 6 - Dois organismos amastigota. 7 - Forma pro-

mastigota (x 2300).

* O tamanho dos organismos desenhados o<-n a -se referido no texto.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSÕA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W.

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Nota sobre formas evolu-

Nas culturas desta espécie de Trypanosoma liá predominantemente orga¬

nismos isolados, sendo poucos os casos em que são eles encontrados agrupa¬

dos (“rosetas”). Neste caso, é pequeno o n.° de indivíduos associados não ul¬

trapassando em geral 6 a 8 (Figs. 4 e 5).

Amastigota : tem o citoplasma granuloso (Figs. 2, 3 e 5), o cinetoplasto al¬

gumas vezes circundado por uma área hialina — reservatório — (Fig. 2); nas

formas em multiplicação verifica-se primeiramente uma divisão do cinetoplasto

(Fig. 3), podendo-se encontrar duas ou mais destas organelas num mesmo in¬

divíduo.

Promastigota .: o núcleo nestes organismos, se localiza em geral, no terço an¬

terior do corpo (Figs. 7 e 8); citoplasma também granuloso e,em alguns casos,

o reservatório é visível (Fig. 8); flagelo de comprimento variável alcançando até

20 microns.

Um destes organismos em divisão, apresenta dois flagelos com respectivos

cinetoplastos individualizados; o citoplasma, em começo de fissão longitudinal

mostra cinco massas cromáticas que nos levam a pensar tratar-se de um orga¬

nismo em divisão mútlipla (Fig. 9).

Epimastigota : organismos de tamanho variável, com inúmeros deles apresen¬

tando uma membrana ondulante bem visível (Figs. II a 13), enquanto outros

não tem membrana evidente (Figs. 10 e 14).

Algumas formas evolutivas peculiares foram notadas e dentre elas desta¬

camos:

a) dois organismos paralelos, um deles já individualizado enquanto que o ou¬

tro, com aproximadamente o dôbro do comprimento, apresenta um núcleo e

um cinetoplasto em cada extremidade, deixando entrever que está concluindo

a sua divisão por fissão longitudinal (Fig. 14);

b) organismo em forma esférica (“esferimastigota ou pirimastigota”), com

flagelo e cinetoplasto em polos opostos (Fig. 15). Parece-nos que quando es¬

tes organismos adquirem esta forma, tendem a evoluir para uma fase multi¬

plicativa, aumentando o volume de seu citoplasma e adquirindo, cm seguida,

um aspecto amebóide, às vezes desprovido de flagelo.

c) o parasita apresenta a massa citoplasmática em princípios de fissão longi¬

tudinal, podendo-se notar já formados dois núcleos e dois cinetoplastos, bem

como as respectivas membranas ondulantes (Figs. 16 e 17).

d) organismo com larga área citoplasmática granulosa e grande vacúolo cen¬

tral junto ao qual há dois núcleos e logo atrás deles um cinetoplasto com pe¬

queno flagelo. A área citoplasmática forma estreito prolongamento em S, cuja

extremidade posterior bifurca-se num ramo curto e outro longo. Ao lado do

ramo menor vê-se um cinetoplasto que se encontra fora do citoplasma (Dutton

e cols. 10 em 1907, observaram que o flagelo pode ser desprendido e abandona¬

do juntamente com o cinetoplasto). O ramo maior curva-se em 180° retornan¬

do sobre a área citoplasmática inicial onde forma uma nova membrana ondu¬

lante (Fig. 18).

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSÓA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre formas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Figs. 8 a 15 - Formas evolutivas de T. salamantae em meio NNN*: 8 - Forma promastigota

com reservatório e cinetoplasto. 9 - Forma promastigota em fissão longitudinal. Notar cine-

toplasto e flagelo divididos; presença de 5 massas cromáticas. 10 - Forma epimastlgota sem

membrana ondulante aparente. 11, 12 e 13 - Formas epimastigota com membrana ondulante

aparente. 14 - Forma epimastigota em divisão, notando-se um organismo isolado e outro en

fase final de divisão. 15 - Forma “esferimastigota” ou "pirimastigota”, notando-se flagelo <

cinetoplasto em polos opostos.

* O tamanho dos organismos desenhados acha-se referido no texto.

BIASI, P.; PESSOA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W.

tivas de Trypanosoma de serpentes em melo de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Nota sobre íormas evolu-

b) Formas evolutivas do Trypanosoma phylodriasi :

Em meios de cultura de N.N.N., semeado com sangue da P. nattereri in¬

fectada com o T. phylodriasi desenvolveram-se como nas culturas da espécie

anterior, indivíduos amastigota, promastigota e epimastigota, com tamanhos va¬

riáveis dentro de uma mesma forma evolutiva e aproximadamente iguais aos do

T. salamantae. São encontrados frequentes agrupamentos (“rosetas”) de orga¬

nismos em multiplicação, podendo-se contar neles até 27 organismos ou mais

(Figs. 19, 20, 22 e 23).

As formas evolutivas do T. phylodriasi (amastigota, promastigota e epi¬

mastigota), são muito semelhantes àquelas do T. salamantae (Figs. 19, 20 e 22

a 26); alguns organismos resultantes da multiplicação, que podemos considerar

como formas promastigota, porém sem flagelo aparente, apresentam numa das

extremidades uma área de citoplasma hialino, não chegando a se constituir ain¬

da numa verdadeira membrana ondulante. Esta área cora-se ligeiramente em róseo

pelo May Grünwald-Giemsa, (Figs. 19 e 20).

Nas culturas do T. phylodriasi em N.N.N., pudemos observar algumas

formas peculiares que se tratam em geral de organismos em fase de multipli¬

cação: a) indivíduo longo de extremidades alongadas e finas, com flagelo, por¬

tando 2 núcleos e 2 cinctoplastos (Fig. 27); b) forma aparentemente epimasti¬

gota, mas sem flagelo, só com membrana ondulante, com 3 núcleos (Fig. 28);

c) organismo em fissão longitudinal, apresentando um só núcleo, porém o ci-

netoplasto dividido em 2 grânulos (Fig. 29); d) forma evolutiva com 2 núcleos

próximos, 2 cinetoplastos separados, partindo de cada um deles um flagelo,

que ao sairem do corpo celular unem-se formando um flagelo único (Fig. 30);

e) organismo com 2 núcleos bem evidentes,, cinetoplasto bipartido, porém ain¬

da próximos e na extremidade do flagelo aparece uma pequena área de expan¬

são citoplasmática (Fig. 31); f) forma epimastigota em término de fissão lon¬

gitudinal, ligados sómente por pequena ponte citoplasmática (Fig. 32); g) for¬

ma evolutiva com 2 grandes vacúolos na massa citoplasmática (Fig. 33); h)

organismo estreito alongado com grande dilatação vacuolar em uma de suas

extremidades (Fig. 34).

EXPERIÊNCIAS COM MOSQUITOS E INOCULAÇÕES EM SERPENTES

Ambas as serpentes, E. c. crassas (“salamanta”), NS — 787, e P. nattereri,

NS — 800, foram colocadas em gaiolas com mosquitos Cale.x fatigans e C. dolo¬

sas para serem sugadas. Foram feitas três tentativas cm datas diferentes e 24,

48 e 72 horas após os mosquitos terem se engurgitado com sangue das serpen¬

tes foram alguns deles dissecados. Em lâminas confeccionadas com um dos mos¬

quitos da primeira experiência, após coloração com Giemsa foram identificadas

duas formas que acreditamos serem formas evolutivas do T. phylodriasi (Figs.

35 e 36). Na terceira experiência que fizemos, quando colocamos a E. c. crassus

(“salamanta”) para os mosquitos C. dolosus sugarem, 24 horas após a sucção

um dos mosquitos dissecados apresentava formas evolutivas flageladas, em mo¬

vimentação, que infelizmente não se coraram satisfatoriamente pelo Giemsa,

não permitindo microfotografias.

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSÔA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W.

tivas de Trypanosoma de serpentes em melo de cultura.

Metn. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Nota sobre formas evolu-

F ‘gs. 16 a 18 - Formas evolutivas de T. salamantae em melo NNN*: 16 e 17 - Organismo

em divisão, notando-se dois flagelos, dois clnetoplastos e dois núcleos. Inicio de fissão

■ongltudlnal do citoplasma (Flg. 17 - x 2.000). 18 - Organismo em multiplicação, apresen¬

tando d-„s massas cromáticas, grande vacúolo, clnetoplasbo com pequeno flagelo, prolonga¬

mento cltoplasmátlco bipartido, com um clnetoplasto; outro clnetoplasto fora do citoplas¬

ma, no ramo menor da bifurcação. 19 e 20 - Trypanosoma phylodriasi: agrupamento (roseta)

úe formas promastlgota.*

* O tamanho dos organismos desenhados acha-se referido no texto.

SciELO

BIASI, P.; PESSÔA. S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre formas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em melo de cultura.

Mem. .Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Culturas em meio de N. N. N., do T. sàlamantae e T. phylodriasi, bem co¬

mo triturado de mosquitos C. fatigans e C. dolosus engurgitados com sangue da

“salamanta” — E. c. crassus — e da P. nattereri foram inoculados ou adminis¬

tramos “per os” nos seguintes filhotes de serpentes dos gêneros Crotalus e Bothrops

nascidos e mantidos no laboratório em caixas a prova de prováveis vetores: 4

filhotes de C. durissus terrificus (“cascavel”), 1 de B. neuwiedi (“jararaca-pin-

tada”), 1 de B. jararacussu (“jararacussu’’) e 4 de B. alternatus (“urutu”).

Obtivemos resultados positivos para 2 filhotes de B. alternatus (“urutu”),

que 5 dias após a inoculação da cultura de N.N.N., semeada com T. phylodriasi,

apresentaram formas sanguíneas deste tripanossomo (Figs. 37 e 38).

COMENTÁRIOS E CONCLUSÕES

As espécies de Trypanosoma que parasitam os répteis e outros animais de

sangue frio, tem sido identificadas principalmente com base no seu hospedeiro

vertebrado. Os caractéres- morfológicos destes flagelados (comprimento do cor¬

po e flagelo, posição relativa do núcleo e cinetoplasto, aspecto da membrana on¬

dulante, etc.) nem sempre tem se revelado suficientes para a diferenciação es¬

pecífica.

Através do reconhecimento dos vetores e das formas evolutivas dos tripa-

nossomos, quer nos hospedeiros intermediários, quer nos meios de cultura, os

autores tem procurado encontrar caractéres diferenciais que permitam melhor

identificação específica dos tripanossomos de répteis ou de outros animais hete-

rotérmicos.

Entre os mais antigos estudos das formas evolutivas de tripanossomos dos

vertebrados de sangue frio, temos o de Bouet 5 que observou estes flagelados do

sangue de rã em meio de cultura; o de Brumpt 6 que as descreveu em sangues¬

sugas que sugaram lagartixas positivas para tripanossomos e o de Dutton e

cols. 10 que as observaram em preparações a fresco, do sangue de diversos verte¬

brados com tripanossomo.

Mais recentemente, nos animais hcterotérmicos citamos, para os anfíbios:

Lehmann 13 que em sanguessuga do género Erpobdella verificou formas evoluti¬

vas do T. ambystome parasita do Taricha granulosa (“salamandra”); Bailey 3

que estudou formas do tripanossomo de rã em Aedes aegypti, admitindo ser este

inseto provável vetor; Pereira e cols. 14 que, estudaram em meio de cultura

formas evolutivas do T. rotatorium, parasita de rãs, assinalando como vetor o

Culex territans. Dos tripanossomos de répteis alguns autores estudaram formas

evolutivas nos hospedeiros intermediários, citando-se para os Sauria, Fromen-

tin 11 que em meio de cultura observa o T. therezieni, parasita do camaleão,

Chamaeleo brevicornis; Ayala e cols. 2 que identificaram o flebotomíneo Lutzomya

ve.xatrix occidentalis como provável vetor do T. thecadactyli parasita do geconídeo

Thecadactylus rapicaudus ; e para as serpentes, Pessoa e Fleury 17 que assinala¬

ram a sanguessuga Haementeria lutzi como hospedeiro intermediário do T. hogei,

parasita da Rachidelus brazili (“falsa-muçurana”). Ainda fazemos menção do

trabalho de Arantes & Fonseca 1 que em meio de cultura e por inoculação direta

em serpentes, observaram formas evolutivas do T. butantanense parasita da Wa-

glerophis merremii (=Xenodon merremii).

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

BIASI, P.; PESSÔA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre íormas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em melo de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Flgs. 33 e 34 - Trypanosoma phylodriasi: formaB evolutivas em melo NNN. 33 - Forma evo¬

lutiva aparentemente "plrlforme", portando dois grandes vacúolos no citoplasma, (x 1600).

34 - Forma evolutiva com grande vacúolo em uma das extremidades, (x 1800).

? lgs. 35 e 36 - Trypanosoma pnylodriast: prováveis formas evolutivas em Culex fatigans

( X 1400;.

SciELO

BIASI, P.; PESSOA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre formas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Figs. 37 e 38 - Formas sangüineas de Trypanosoma phylodriasi em sangue de filhotes de

Bothrops alternatus inoculados com cultura de triponossomo em NNN. (X 2600).

BIASI, P.; PESSôA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre formas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Jnst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

No presente trabalho estudamos formas evolutivas de duas espécies de Try¬

panosoma, uma parasita da “salamanta” — Epicrates cenchria crassus — o T.

salamantae e outra parasita da Philodryas nattereri, o T. phylodryasi, em meio

de cultura de N.N.N., tanto no meio original como em meio modificado pela

substituição do sangue de coelho por sangue de serpente. O meio de N.N.N.,

original, mostrou-se melhor que o modificado com sangue de serpente, apresen¬

tando mais rapidamente o aparecimento das formas evolutivas das espécies de

Trypanosoma semeados.

O T. phylodriasi mostrou melhor desenvolvimento do que o T. salamantae

em meio de N.N.N., originando culturas com maior número de organismos.

As formas evolutivas das duas espécies de Trypanosoma estudadas apre¬

sentaram ligeiras diferenças que não podemos considerar significativas para a

diferenciação específica. Podemos citar que em meio de cultura de N.N.N.,

grupos multiplicativos (“rosetas”) do T. phylodriasi mostram até cêrca de 27

organismos ou mais por agrupamento (“roseta”), enquanto que em T. sala¬

mantae esse número é bem menor (6 a 8); organismos promastigota de T. phy¬

lodriasi são mais alongados e com área citoplasmática anterior ampla e hialina,

melhor evidenciada pela coloração de May Grünwald-Giemsa.

Ao microscópio, em preparações a fresco de culturas em N.N.N., acom¬

panhamos a velocidade de multiplicação de formas evolutivas do T. salamantae.

Os organismos de um agrupamento (“roseta”) observados por mais de uma

hora não se individualizaram, enquanto que, em poucos instantes ocorreu em

um outro organismo a divisão por fissão longitudinal com a separação de 2 in¬

divíduos.

Alguns invertebrados (insetos e sanguessugas) são vetores potenciais ou

transmissores dos tripanossomos de animais de sangue frio, sendo este ainda

um campo pouco conhecido da biologia destes flagelados. Em nossas experiên¬

cias, na tentativa de verificar prováveis vetores do T. phylodriasi e T. salaman¬

tae, utilizamos os mosquitos Culex dolosus e Culex fatigans. Um dos mosquitos

Culex dolosus que havia engurgitado sangue da “salamanta” — E. c. crassus —,

quando dissecado apresentou formas evolutivas flageladas, demonstrando que

este mosquito é um transmissor potencial do T. salamantae.

Agradecimentos: Agradecemos ao chefe da Seção de Meios de Cultura do

Instituto Adolfo Lutz, Dr. Julio Jacques Parigot de Souza a valiosa cooperação

em nossos trabalhos, bem como ao técnico do Instituto Butantan, Sr. Joaquim

Cavalheiro. Ainda estendemos os agradecimentos à Dna. Delminda Vargas Tra¬

vassos pela confecção dos desenhos, ao Dr. Oscar de Souza Lopes, chefe da Seção

de Arboviroses do Instituto Adolfo Lutz por nos ter fornecido os mosquitos.

ABSTRACT: In N. N. N. médium, original and modified with

snake blood instead of rabbit blood, the authors studied evolu-

tive forms of 2 species of snake Trypanosoma: T. salamantae

(parasite of Epicrates cenchria crassus ) and T. phylodriasi (para-

1, | SciELO

BIASI, P.; PESSOA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W.

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

Nota sobre formas evolu-

site of Philodryas nattereri). No significant differences were

found in the evolutive forms of both species of Trypanosoma.

The authors point out that the individualization process is

rapid in the organisms multiplying by longitudinal fission, and

slow in those of multiple division (“rosette”).

Subcutaneous inoculation or application “per os” of cultura

media with T. salamantae and T. phylodriasi in laboratory-bred

juvenile snakes were carried out. Positive results were obtained

in two young Bothrops alternatus ("urutu”) subcutaneously ino-

culated with cultures of T. phylodriasi. All the other experiments

were negative.

Experiments to show the evolution of T. salamantae and

T. phylodriasi in mosquitoes Culex fatigans and C. dolosus that

had sucked blood from parasitized snakes gave negative results,

except for one specimen of C. dolosus that presented flagellated

evolutive forms, wich suggests that mosquitoes are potential

vectors.

UNITERM S: Trypanosoma. Hemoparasites. Serpentes. Trypano¬

soma culture. Experimental transmission.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. ARANTES, J.B. & FONSECA, F. Pesquisas sobre Trypanosomas. I. Trypa¬

nosoma butantanense, sp.n. parasita da serpente Ophis merremii Wagler,

1824. Mem. Inst. Butantan, 6: 215-222, 1931.

2. AYALA, S.C. & McKAY, J.G. Trypanosoma gerrhonoti n.sp. and Extrinsic

Development of Lizard Trypanosomes in Califórnia Sandflies. J. Proto-

zool, 18: 430-433, 1971.

3. BAILEY, J. K. Aedes aegypti as a possible new invertebrate host for frog

trypanosomes. Exp. Parasit., 12: 155-163, 1962.

4. BIASI, P. de; PESSÕA, S.B. & VIEIRA, F.C.G. Nota sobre longa latência

de infecção por Hemogregarina em uma serpente peçonhenta: Bothrops

moojeni Hoge, 1965. Atas Soc. Biol. R. Janeiro, 15(2): 71-72, 1972.

5. BOUET, G. Culture du Trypanosoma de la grenouille (Trypanosoma rota-

torium). Ann. Inst. Pasteur, 20(1): 564, 1906.

6. BRUMPT, E. Expériences relatives au mode de transmission des trypanoso¬

mes et des trypanoplasmes par les hirudinées. C. R. Soc. Biol., 61: 77,

1906.

7. BRUMPT, E. Le xenodiagnostic. Application au diagnostic de quelques in-

fections parasitaires et en particulier à la trypanosome de Chagas. Buli.

Soc. Path. Exot, 7: 706, 1914.

8. CHRISTENSEN, H. A. & TELFORD JR., S. R. Trypanosoma thecadactyli

sp.n. from Forest Geckoes in Panama, and its Development in the Sahd-

fly Lutzomyia triniâadensis (Newstead) (Diptera, Psychodidae). J. Proto-

zool., 19: 403-406, 1972.

9. DESSER, S. S.; McIVER, S. B. & RYCKMAN, A. Culex territans as a po¬

tential vector of Trypanosoma rotatorium. I. Development of the fla-

gellate in the mosquito. J. Parasit., 54: 353-358, 1973.

10. DUTTON, J.E.; TODD, J.L. & TOBEY, E.N. Concerning certain parasitic

Protozoa observed in África. Part. II. Ann. t?op. Med Parasit., 1: 287-372,

1907.

too

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

BIASI, P. De; PESSÔA, S.B.; PUORTO, G. & FERNANDES, W. Nota sobre formas evolu¬

tivas de Trypanosoma de serpentes em meio de cultura.

Mem. Inst. Butantan, 39: 85-101, 1975.

11. FROMENTIN, H. Mise en culture de Trypanosoma therezieni Brygoo, 1963.

Arch. Inst. Pasteur Madagascar, 36: 51-62, 1967.

12. LAVERAN, A. & MESNIL, F. Trypanosomes et Trypanosomiases. Paris,

Masson, 1904, p. 1-407.

13. LEHMANN, D.L. Notes on the biology of Trypanosoma ambystomae Leh-

mann, 1954. II. The Life cycle in the invertebrate Host. J. Protozool.,

5: 96-98, 1958.

14. PEREIRA, N.M.; COSTA, S.C.G.; COLOMBO, T. & TRAVASSOS, J.M.C.

Formas de cultura de Trypanosoma rotatorium Mayer, 1843 - Isolado da

rã Leptodactylus ocellatus, do Brasil. Mem. Inst. Oswaldo Cruz, 71:

357-367, 1973.

15. PESSÔA, S.B. Contribuição ao estudo dos Hemoparasitas dos Ophideos. I.

Nota: Nova espécie de Trypanosoma parasita do Philodryas nattereri.

Rev. biol. hyg. S. Patão, 1(3): 51-62, 1928.

16. PESSÔA, S.B. & BIASI, P. de Trypanosoma cascavelli sp.n. parasita da

cascavel: Crotalus durissus terrificus (Laurenti). Atas Soc. Biol. R. Ja¬

neiro, 15(2): 67-70, 1972.

17. PESSÔA, S.B. & FLEURY, G.C. Duas novas espécies de Tripanosomas

parasitas de serpentes do Brasil. Rev. brasil. Biol., 29(1): 81-86, 1969.

18. WENYON, C.tM. A trypanosome and haemogregarine of a tropical Ameri¬

can snake. Parasitology, 1: 315, 1908.

Recebido para publicação em 22-V-1975 e aceito em 24-IX-1975.

101

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 103-121, 1975

KALICEPHALUS SUBULATUS MOLIN, 1861 (NEMATODA,

DIAPIIANOCEPIIALIDAE). CONFIRMAÇÃO DESTA ESPÉCIE;

INFORMAÇÕES SOBRE SUA DISPERSÃO GEOGRÁFICA E

ENUMERAÇÃO DE SERPENTES PARASITADAS. *

MARIA DA PENHA MAIA FERNANDES e PAULO DE TOLEDO ARTIGAS

Departamento de Parasitologia, Instituto de Ciências Biomédicas, U.S.P.

RESUMO: Ê confirmada neste trabalho a espécie K. subulatus

Molin, 1861, redescrita por Schad, em 1962.

Por nós, K. subulatus foi encontrado em Boa constrictor

constrictor, em Epicrates cenchria cenchria e em Corallus ca-

ninus; todas essas serpentes provieram da região amazônica.

De acordo com o ponto de vista exposto no trabalho, desde

que K. i. coronellae e K. subulatus se confundam morfologica¬

mente e desde que suas áreas de dispersão se sobreponham,

em parte pelo menos, é de se prever que K. i. coronellae e

K. subulatus sejam sinônimos. Verdadeira esta hipótese o para-

sitismo de K. subulatus, que é uma espécie sul americana e cen¬

tro americana, devendo atingir o México, não se restringirá a

serpentes Boidae.

UNITERMOS: Kalicephalus subulatus. Nematoda, Diaphanoce-

phalidae. Morfologia. Incidência. Ofídios.

INTRODUÇÃO

Schad, em 1962, redescreve a espécie Kalicephalus subulatus Molin, 1861;

no momento, utilizando material colhido por nós, podemos confirmar a descri¬

ção de Schad, embora existam algumas divergências, por exemplo a presença

de “coronula radiata” no interior da cápsula bucal, negado por Schad.

A redescrição de Schad tornou-se possível com o exame do material co¬

lhido por Natterer e do qual se serviu Molin, para sua publicação. A descrição

original de Molin não permite, por si apenas, o reconhecimento de K. subulatus.

Possivelmente esta composição específica deveria se tornar “nomen nudum”,

* Trabalho executado com auxilio da Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São

Paulo - FAPESP.

Endereço para correspondência: Caixa postal 4.355 - São Paulo - Brasil

103

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

não fosse a iniciativa cie Schad e a existência do material colecionado por

Natterer.

Schad, em sua monografia sobre calicéfalos (1962), procurou solucionar a

sistemática desse gênero, no qual se enumeram cinqüenta espécies (Yamaguti,

1961), número que Schad reduz a vinte e quatro, embora mantendo e criando

sub-espécies.

Não obstante, parece-nos que o gênero Kalicephalus Molin, 1861 ainda

apresenta dúvidas quanto às espécies que o compõem. Tal situação é natural

pelos motivos seguintes: 1) Distribuição universal e contínua dos calicéfalos;

2) Uniformidade anatômica impressionante das diferentes espécies; 3) Frouxa

especificidade parasitária; isto é, determinado calicéfalo é, freqüentemente, encon¬

trado em várias espécies de ofídios.

No caso do K. subulatus, Schad afirma scr este nematóide específico de

Constrictor constrictor (—Boa constrictor ) e declara ter encontrado dezesseis co¬

leções do parasito, sendo doze de C. constrictor do U.S.N.M., uma de C. cons¬

trictor do Zoológico do Rio de Janeiro, duas dc C. constrictor imperator (res¬

pectivamente do National Zoological Park (U.S.A.) e de Santa Rosa (Guate¬

mala), além do material tipo, oriundo do Estado do Mato Grosso (Brasil).

Os herpetologistas tendem para considerar Constrictor sinônimo de Boa;

Stimson (1969), em seu catálogo, refere-se a espécie Boa constrictor com as se¬

guintes sub-espécies:

Boa constrictor constrictor

Leste do Equador, norte e leste do Peru, norte da Bolívia; Brasil, ao

norte do Paralelo 13.°5; Colômbia central e oriental; Venezuela; Guia-

nas; Trinidade e Tobago.

Boa constrictor amarali

Bolívia oriental; Brasil, desde os estados de Mato Grosso e Goiás,

para o sul, até São Paulo.

Boa constrictor imperator

Norte de Sonora e Taumalipas central, México, para o sul através

da América Central ao noroeste e oeste do Equador e noroeste do

Peru.

Boa constrictor nebulosa

Dominica, Pequenas Antilhas.

Boa constrictor occidentalis

Paraguai e Argentina entre os Andes e o Rio Paraná, para o sul até

as províncias de Córdoba, San Luis e Mendoza.

Boa constrictor orophias

Santa Lúcia, Pequenas Antilhas.

Boa constrictor ortoni

Noroeste do Peru.

104

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 (Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Aí em. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975

0.1 mm

PRANCHA I - Kalicephalus subulatus. Material proveniente de Boa constrictor constrictor :

1 e 3 - Extremidade cefálica de fêmea. 2 e 4 - Extremidade anterior de fêmea. 5 e 9 - Ex¬

tremidade caudal de fêmea. 6 - Ovos desenhados, quando ainda na cavidade uterina.

7 e 8 - Desenho total de fêmea.

OBS.: Chama-se a atenção para a "coronula radiata” interna cefálica, bem observada em

todos os calicéfálos que temos examinado. Tal particularidade não é mencionada por Schad.

105

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; Informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

Diante desta situação, deveríamos modificar a maneira de dizer de Schad

e admitir que K. subulatus seria encontrado em várias subespécies de D. cons-

trictor. Entretanto, a especificidade de K. subulatus é ainda mais frouxa, como

prova seu encontro em dois exemplares de Epicrates cenchria cenchria e cm um

exemplar de Corallus caninus (—Boa canina ). Portanto, até que outras verifi¬

cações ocorram, devemos ter como certo que K. subulatus é parasito de ser¬

pentes da família Boidae, gêneros Boa, Epicrates e Corallus. Ademais, desde que

a área de distribuição de K. subulatus se superponha, pelo menos em parte, a

de K. inermis coronellae e sendo este calicéfalo anatomicamente igual a K. su¬

bulatus avoluma-se a dúvida da validade da subespécie de Ortlepp. Confirmada

esta hipótese, deixará de ser válida a relativa especificidade do calicéfalo em cau¬

sa, como parasito de boideos.

Motivos dessa ordem obrigam-nos a cautelas; é a razão de, neste trabalho,

nos alongarmos mais do que aparentemente necessitaria a simples comparação

de um nematóide.

Molin (1861), utilizando-se do material colhido no Brasil pelo viajante e

naturalista Natterer, depositado no Museu de História Natural de Viena, redes-

crcveu, entre outras espécies do gênero, o Kalicephalus subulatus.

Transcrevemos na íntegra a descrição de Molin:

“Caput cupaeforme, anulo corneo interno e reliquo corpore discre-

tum, fulcris interne suffultum, diaphanum; os terminale, bivalve, am-

plum, limbo lineari diaphano papilloso; corpus semicirculariter infle-

xum, subcylindricum, retrorsum sensim attenuatum; extremistas cau-

dalis maris bursa genitali terminali integra, obliqúe truncata, radio

dorsali diramato hinc bis tripartito, fasciculisque lateralibus quadrira-

diatis radio primo bifido, ex qua epistomium retractile; penis duplex,

cruribus Iongis filiformibus utrinque alis alinearibus; vagina penis

simplex, longa, valida, in curva; extremistas caudalis feminae subu-

lata; anus apici caudali haud proximus; apertura vulvae in apice pa-

pillae conicae valve prominulae posterioris corporis partis; uterus

bicornis. Longit. mar. 0,005-0,009; crassit. 0,0002-0,0003. Longit.

fem. 0.006-0,013; crassit. 0,0004-0,0005.”

“Hospedeiros; Lachesis rhombeata: no esôfago e no ventrículo, julho;

no ventrículo e no delgado, junho, Borba; Bothrops jararaca, julho,

Ipanema; Boa constrictor, abril, Mato Grosso; por todo o intestino.”

Observação: Eu tive oportunidade de examinar da referida espécie:

“1) 15 machos e 36 fêmeas muito bem conservados e perfeitamente

transparentes encontrados na maior parte aderentes ao esôfago mas

em parte também no estômago de um Lachesis rhombeata macho,

que também abrigava 32 pequenos Pentastomos em parte aderentes

ao pulmão e em parte fixados às paredes do grande saco aéreo, ain¬

da 3 longos Cestoides inteiros e 2 curtos sem cabeça com 6 fragmen¬

tos no intestino. Mais 12 machos e 16 fêmeas achados no estômago

e no delgado de um outro réptil macho da mesma espécie igualmen¬

te de Borba, em 28 de junho de 1830. Esta continha ainda 5 fragmen¬

tos de um longo nematóide e I outro nematóide longo no delgado.”

106

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 (Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mera. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

0,2 mm

0,1 mm

1 mm

PRANCHA II - Kalicephalus subulatus. Material proveniente de Boa constrictor constrictor:

1 - Extremidade anterior de fêmea. 2 - Extremidade cefálica de fêmea. 3 - Extremidade

caudal de fêmea. 4 - Porção terminal da genitália de fêmea. 5 - Desenho total de fêmea.

6 - Extremidade cefálica de macho. 7 - Extremidade anterior de macho. 8 - Bolsa copula-

dora, vista lateral. 9 - Raia dorsal. 10 - Espículos e bolsa copuladora, vista lateral. 11 - Gu-

bernáculo. 12 - Desenho total de macho.

107

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 (Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

“2) 1 macho e 1 fêmea encontrados no ato da copula no intestino

de Bothrops jararaca macho, que ainda continha Pentastomos no pul¬

mão e na cavidade abdominal, e vermes semelhantes a Ligulas no

ventre entre os músculos e as costelas, em 27 de julho de 1819.”

“3) Finalmente 2 machos e 5 fêmeas recolhidos juntamente com 1

Equinorinco livre no intestino de um Boa constricíor macho, em 7

de abril de 1828.”

A observação de Molin, acima transcrita, é desacompanhada de desenhos

que permitam o perfeito conhecimento de K. subulatus, como de outros calicé-

falos descritos nessa ocasião. Esta falha, desvaloriza acentuadamente o trabalho

de Molin, no capítulo pertinente ao gênero Kalicephalus, no qual oferece dese¬

nhos (aliás muito imperfeitos) de uma única espécie, K. inennis. Com descri¬

ções que não oferecem elementos seguros para a identificação das espécies por

ele criadas, Molin motivou um impasse de real envergadura aos helmintologistas

interessados nas espécies sul americanas dos calicéfalos. Na verdade, os especia¬

listas brasileiros, inclusive Lauro Travassos, sempre se sentiram sem condições

para estudar a situação dos nematóides do gênero Kalicephalus, ante a impossi¬

bilidade de reconhecer as espécies de Molin, mal definidas na monografia da¬

quele pesquisador.

Tornava-se necessária a revisão do material de Natterer, para um exato

conhecimento dos tipos de Molin. Tal oportunidade coube ao pesquisador cana¬

dense G.A. Schad, que, em 1962, publicou uma minuciosa revisão dos calicéfa¬

los de todo o mundo, contando, para a execução de tal tarefa, com a colabora¬

ção de grandes institutos, museus, zoológicos e outras organizações de vários con¬

tinentes que lhes forneceram imenso e precioso acervo de calicéfalos. Schad re¬

viu os tipos de Molin; agora baseados no seu depoimento, encontramos condi¬

ções, até então inexistentes, para uma apreciação razoável sobre as espécies de

Kalicephalus sul americanos.

Vimos, há meses, procurando calicéfalos em ofídios brasileiros, já tendo

conseguido uma boa coleção, com 381 coletas positivas, conseguidas em serpen¬

tes venenosas e não venenosas, tendo sido feitas 1.444 necropsias.

Somente cinco serpentes, todas cias da família Boiclae, provenientes da re¬

gião amazônica apresentaram o calicéfalo em apreço, sendo que uma delas (ne¬

cropsia n.° 3211), Boa constricíor constricíor, oriunda do Marabá (Pará) apre-

sentava-se parasitada por K. subulatus (10 fêmeas e 4 machos), K. inennis (2

fêmeas e 2 machos e uma fêmea de um calicéfalo com cabeça desviada do eixo

de simetria corporal (K. appendiculatus ?). Já necropsiamos doze giboias da re¬

gião sul do Brasil (Boa constricíor amarali ); até agora, resultou negativo o en¬

contro de K. subulatus em boideas da região sul do país. Temos, pois, razões pa¬

ra presumir que K. subulatus começa a aparecer na região amazônica e que sua

zona de dispersão se expande para o norte.

Nas necropsias números 2422, 3211, 3212, 3218 e 3275 nos deparamos com

um calicéfalo que, morfologicamente se situa nas características que Schad rees-

tabeleceu para K. subulatus. Entretanto, nossa verificação põe em choque a afir¬

mativa categórica de Schad, de que a espécie em apreço é parasita extrito de

giboia (Constricíor constricíor), pelo fato de nossos espécimes terem sido en¬

contrados em Epicrates cenchria cenchria e Corallus caninus, além de Boa cons-

trictor constricíor.

SciELO

108

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematnda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

0,2 mm

0,1 mm

1 mm

PRANCHA III - Kalicephalus subulatus. Material proveniente de Boa constrictor constrictor:

1 e 6 - Extremidade anterior de macho. 2 - Bolsa copuladora, espículos e gubernáculo.

3 e 9 - Espículos e gubernáculo. 4 e 8 - Raia dorsal. 5 e 10 - Desenho total de macho.

7 - Bolsa copuladora, vista lateral.

109

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; Informações sobre sua dispersão geográfica

o enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

CONCEITO DE KALICEPHALUS SUBULATUS, SEGUNDO SCHAD.

O que está acima exposto, impõe a análise do trabalho de Schad, quando

focaliza Kalicephalus subulatus.

Primeiramente, transcreveremos a exposição do autor canadense; a seguir,

discutiremos o assunto.

“Diagnose morfológica de K. subulatus

Integrante do grupo inennis; cutícula cervical não inflada; raias la¬

terais digerventes; raia dorsal do tipo III; restrita a Constrictor cons-

trictor.

Descrição: Calicéfalo relativamcnte curto e grosso (stout). Face ar¬

queada, ligeiramente voltada dorsalmente. Anel quitinóide anterior lar¬

go. Cantos cutilares inflados muitas vezes irregulares. Goteira dor¬

sal com ou sem curva anterior. Peça posterior ventral um tanto trian¬

gular, peça posterior dorsal arredondada. Esôfago robusto, largo ante¬

riormente, estreitando de repente para formar o bulbo. Poro excretor

e papilas cervicais usualmente na área do bulbo esofagiano mas oca¬

sionalmente pós-esofagiano.

Fêmea: Vulva perto do início do terço posterior do corpo, lábios

apenas ligeiramente salientes, muitas vezes numa depressão escavada.

Anfidelfica, ovejectores curtos, grossos. Alças ovarianas enoveladas

anteriormente ao útero anterior. Cauda estreita, alongada; lábio pos¬

terior do anus geralmente mais proeminente que o anterior (Fig. 98).

Macho: Raias ventrais da bolsa acoladas na maior extensão de seu

comprimento, separadas apenas nas extremidades. Laterais com um

tronco comum. A externolateral destacada desde a base, mais romba,

mais policiforme. Extremidades das laterais regularmente espaçadas.

Raia dorsal do tipo III. Espículos longos, alados, com extremos alon¬

gados e espatulados. Gubernáculo com apêndice (addendum) poste¬

rior cordiforme e proeminente telamon.”

Discussão: O nome Kalicephalus subulatus c aqui restringido à espécie

ocorrendo em Boa constrictor, Constrictor constrictor. O material ori¬

ginal de Molin é heterogêneo, consistindo em K. subulatus de C. cons¬

trictor e uma outra espécie de Bothrops e Lachesis. Os espécimes na

coleção 4232 do Naturhistorisches Museum, Viena, são sintipos dos

quais nenhum lectotipo foi selecionado desde que os espécimes são

tão quebradiços (brittle) que nem um único exemplar poderá resistir

incólume a maior reexame.

Todas as 15 coleções estudadas deste hospedeiro são claramente co-

nespecíficas. Nenhum outro calicéfalo foi encontrado em serpentes que

fossem seguramente C. constrictor nem foi nenhum K. subulatus ob¬

servado cm Bothrops ou Lachesis. Parece portanto, que K. subulatus

é hóspede específico, e que a restrição acima proposta é justificável.

Tal circunstância também admite checar redescrições e informes de

Ortlepp (1923), Stiles e Hassal (1894), Caballero c Vogelsang

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; Informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

0,1 mm

0,2 mm

0,1 mm

1 mm

0,2 mm

0,1 mm

1 mm

0,2 mm

PRANCHA IV - Kalicephalus inermis. Material proveniente de Boa constrictor constrictor:

1 - Extremidade anterior de macho. 2 - Extremidade cefálica de macho. 3 - Bolsa copula-

dora, espiculos e gubernáculo, vista lateral. 4 - Raia sorsal (tipo IV de Schad). 5 - Dese¬

nho total de macho. 6 - Extremidade anterior de fêmea. 7 - Extremidade cefálica de fê¬

mea. 8 - Extremidade caudal de fêmea. 9 - Porção terminal da genitália de fêmea. 10 -

Desenho total de fêmea.

OBS.: Esta prancha é apresentada como comprovação do poliparasitismo de Boa constrictor

constrictor.

111

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

(1950), e Herman (1939), disso resultando um mínimo de confusão."

K. chitwoodi Caballero, 1954, é posto na sinonímia de K. subulatus

desde que um espécime macho e outro fêmea presenteados pelo Dr.

Caballero se enquadram no rígido conceito de K. subulatus. Stron-

gylus boae Mac Calium foi posto na sinonímia de K. boae (Blanchard)

por Harwood (1932). Eu examinei um preparado (USNM 35409)

com dois espécimes de Mac Calium de C. constrictor e eles são K. su¬

bulatus. Deve, entretanto, ser notado que o material de Mac Calium

era heterogêneo. Seus calicéfalos de hospedeiros norte americanos e

de Python sebae, que foram rotulados como K . boae, são certamente

outras espécies. Embora não seja aparente através das diagnoses, pe¬

las quais a distinção entre K. subulatus e K inermis depende essen¬

cialmente do hospedeiro, existe considerável diferença na morfologia.

Isto é especialmente real quando são simpátricos. Dentro da área

(range) de K. subulatus, K. inermis tem a raia dorsal com suas rami¬

ficações terminais associadas em dois grupos palmados, e os pares

mais internos dessas ramificações são longos.

Para o norte da área de K. subulatus, a subespécie K. inermis coro-

nellae tem uma raia dorsal igual a de K. subulatus. As ramificações

terminais são separadas e os pares mais internos dessas ramificações

são curtos. Liminarmente, as caudas das fêmeas de K. subulatus e K.

inermis diferem fortemente quando as espécies são simpátricas, en¬

quanto que a cauda do alopátrico K.i. coroneltae se assemelha a de

K. subulatus. K. subulatus difere de K.i. coronellae no contorno da

face, no fortemente desenvolvido reborbo quitinóide anterior e no esô¬

fago (compare medidas e figuras).”

Julgamos prudente transcrever o relato de Schad pertinente a K. subulatus,

para desenvolver as considerações relativas ao assunto, que a nosso ver merece

alguns reparos.

KALICEPHALUS SUBULATUS, 1861 (Segundo nosso entendimento)

As espécies de Kalicephalus, decididamente sul americanas admitidas por

Schad, podem ser distinguidas pelos caracteres apresentados na seguinte chave,

cujos dados são os oferecidos na publicação daquele pesquisador.

a) Espécies anfidelfas:

1) Com a extremidade cefálica terminando em ponta ou forte¬

mente arredondada; cabeça dirigida para a frente ou apenas ligeira¬

mente desviada para o lado dorsal. Esôfago longo, mais largo anterior-

mente do que na região bulbar. Fêmeas com a vulva proeminente, pen-

dunculada, podendo estar situada em depressão escavada; situa-se no

terço posterior do corpo. Ovejectores bem desenvolvidos; úteros opos¬

tos; cauda curta forte, terminando em ponta, com espinho curto. Ma-

112

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTTGAÍj, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 (Nematnda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

PRANCHA V - Kalicephalus subulatus. Material proveniente de Boa constrictor constrictor:

1 - Extremidade anterior de fêmea, 2 - Extremidade cefálica de fêmea. 3 - Extremidade

caudal de fêmea. 4 - Ovos desenhados, quando ainda na cavidade uterina. 5 - Desenho

total de fêmea. 6 - Extremidade cefálica de macho. 7 - Extremidade anterior de macho.

8 - Desenho total de fêmea. 9 - Extremidade caudal de fêmea.

113

1, | SciELO

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 (N ema toda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

chos com a bolsa copuladora ampla. Raia dorsal do tipo 1V-V, sen¬

do a sub-ramificação interna a mais longa.

K. inermis

2) Calicéfalos parasitas específicos de C. constrictor (giboia).

Face arqueada, ligeiramente voltada para o lado dorsal. Esôfago ro¬

busto, mais estreito anteriormente do que na região bulbar. Fêmeas

com a vulva situada na porção inicial do terço posterior do corpo ei

com lábios apenas salientes, às vezes em depressão escavada; cauda

estreita, longa, sem espinho apical; lábio posterior do anus via de

regra mais proeminente que o anterior. Machos com a raia dorsal do

tipo III.

K. subulatus

3) Calicéfalos localizados no reto das serpentes suas hospe¬

deiras. Face dirigida para a frente; esôfago mais estreito anteriormen¬

te do que na região do bulbo. Fêmeas com a vulva situada na

metade posterior do corpo, relativamente em situação mais anterior

que as duas espécies já referidas; cauda brevicônica, sem espinho

terminal. Machos com a raia dorsal do tipo lí.

K. rectiphilus rectiphilus

b) Espécies prodelfas:

1) Calicéfalos caracterizados por apresentarem a cápsula bu¬

cal assimétrica e a face nitidamente voltada para o lado dorsal. Fê¬

meas com a vulva no último quarto do corpo, frequentemente pen-

dunculada. Genitália feminina prévulvar; cauda curta, podendo apre¬

sentar dilatação pré-terminal. Machos com a raia dorsal frequente¬

mente curta e reforçada, externo dorsais robustas; complexo dorsal

do tipo III — II.

K. appendiculaíus

2) Cápsula bucal simétrica. Face dirigida para a frente. Fê¬

meas com a vulva no quarto posterior do corpo; vulva penduncula-

da, formando proeminente corcova; cauda brevicônica, com robusto

espinho terminal. Machos com a raia dorsal do tipo III.

K. costatus

O calicéfalo encontrado nas necropsias n.° 2422, 3211, 3212, 3218 e

3275, deve ser, por suas características morfológicas, identificado a K. subu¬

latus; as cobras que o continham foram respectivamente:

Necropsia n.° 2422 — Epicrates cenchria cenchria, macho; procedên¬

cia, Vale do Guaporé (Estado do Acre); material colhido em

24/09/74; vermes localizados no intestino médio, encontrados dois

machos c duas fêmeas. A serpente foi sacrificada e necropsia efetuada

logo após.

114

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

0,2 mm

PRANCHA VI - Kalicephalus subulatus. Material proveniente de Boa constrictor constrictor:

1 - Extremidade anterior de macho. 2 - Extremidade cefálica de macho. 3 - Bolsa copu-

ladora; vista lateral. 4 - Bolsa copuladora, espículos e gubernáculo; vista lateral. 5 - Raia

dorsal. 6 - Gubernáculo. 7 - Desenho total de macho. 8 - Desenho total de fêmea.

9 - Extremidade cefálica de fêmea. 10 - Extremidade anterior de fêmea. 11 - Porção ter¬

minal da genitália de fêmea. 12 - Extremidade caudal de fêmea.

115

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

Necropsia n.° 3211 — Boa constrictor constrictor; procedência, Ma¬

rabá (Estado do Pará); material colhido em fevereiro de 1975; ver¬

mes localizados no intestino delgado; encontrados 29 exemplares;

sendo uma fêmea de cabeça torta (K. appendiculatus ?)\ quatro ma¬

chos e dez fêmeas, com caractéres de K. subulatus; dois machos e

duas fêmeas, com caractéres de K. inermis.

Necropsia n.° 3212 — Epicrates cenchria cenchria, fêmea; procedên¬

cia Marabá (Estado do Pará); material colhido em fevereiro de 1975;

vermes localizados no intestino médio; encontrados dois exemplares

machos.

Necropsia n.° 3218 — Boa constrictor constrictor; procedência Ma¬

naus (Estado do Amazonas); material colhido em março de 1975;

vermes localizados no intestino médio; encontrados dezoito machos

e vinte e quatro fêmeas.

Necropsia n.° 3275 — Corallus caninus (—Boa canina,)-, procedên¬

cia Marabá (Estado do Pará); material colhido em abril de 1975;

vermes localizados no intestino médio; encontrados dois exemplares

fêmeos.

Passamos a descrever o nematóide por nós classificado como K. subulatus

e. em seguida, faremos a comparação do nosso material com os dados apresen¬

tados por Schad para a espécie em foco.

Kalicephalus subulatus Molin, 1861

Nematóide de tamanho pequeno, relativamentc a outros calicéfalos (K.

inermis, por exemplo atinge o triplo do comprimento de K. subulatus). A cabe¬

ça é típica de um calicéfalo; face ligeiramente arredondada e dirigida para a fren¬

te; presentes peças quitinóides em cada valva bucal; peça lateral posterior ven-

tral triangular; peça lateral posterior dorsal também tendendo para a forma de

triângulo, porém com os ângulos acentuados. Goteira dorsal bem destacada. No

fundo da cápsula bucal uma franja a moda de uma “coronula radiata” inter¬

na (esta formação está rigorosamente presente em todos os calicéfalos por nós

observados; é estranho que Schad não assinale em nenhuma das espécies brasi¬

leiras tal formação, que é facilmente observada). Eventualmente, verifica-se no

prolongamento da goteira dorsal a presença de rugosidades. Esôfago relativamente

curto; o esôfago é ligeiramente menos largo, em seu início, do que o bulbo; es¬

treita-se a seguir para formar um istmo curto e depois expande-se no bulbo eso-

fagiano. Poro excretor situado na altura da dilatação bulbar. Papilas cervicais,

difíceis de se observar, situadas na mesma região do poro excretor.

Fémea: Vulva situada no terço posterior do corpo; lábios da vulva apenas

salientes; úteros opostos, genitália tipicamente anfidelfa. Ovos bastante numero¬

sos e já mondados na ocasião da oviposição, são de casca delgada. A cauda da

fêmea atenua-se progressivamente e é relativamente longa, do tipo subulado; na

abertura anal observa-se que o lábio posterior é ligeiramente mais pronunciado;

não existe espinho terminal caudal.

Macho: Bolsa copuladora campánulada e regularmente ampla; raias ventrais

bem separadas do grupo lateral e fendidas apenas na porção terminal. Grupo

lateral nascendo de um tronco único; a antero-lateral, mais curta, tem a ponta

116

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae ). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mern. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

arredondada e dirige-se para diante; a médio e a postero lateral dirigem-se para

trás e são independentes. A raia dorsal é do tipo III (sistematização de Schad,

1961). Espículo e gubernáculo bem quitinisados; os espículos não são longos;

delgados, vão se afilando progressivamente e terminam em ponta, são iguais; o

gubernáculo apresenta-se como uma cunha estreita longa, com a parte proximal

mais larga; não verificamos a existência de telamon.

Foram medidos e desenhados 2 machos e 2 fêmeas da necropsia n.° 3211,

1 macho da necropsia n.° 3212, 2 machos e 4 fêmeas da necropsia n.° 3218, 2

machos e 3 fêmeas da necropsia n.° 2422 e 2 fêmeas da necropsia n.° 3275.

Desenhos, feitos com auxílio de câmara clara, acompanham este trabalho.

Oferecemos medidas de 11 fêmeas e 7 machos (Tabela n.° 1).

DISCUSSÃO E CONCLUSÕES

Os calicéfalos, grupo genérico de dispersão mundial, caracterizam-se por

sua uniformidade anatômica, seja qual for sua procedência; por isso as caracte¬

rísticas definidoras de diferentes espécies, eventualmente, não são de impressionar.

De outro lado, há a circunstância de tais nematóides apresentarem, via de regra,

uma frouxa especificidade parasitária, a mesma espécie sendo encontrada em di¬

ferentes ofídios.

Diante de tal situação, não é de estranhar o fato de Yamaguti (1961) apre¬

sentar uma lista de cinqüenta espécies e, logo a seguir, Schad (1962), ao fazer

a revisão taxonômica do gênero, reduzí-la a vinte e quatro espécies e subespécies.

Três autores interessaram-se de modo particular por uma apreciação crí¬

tica dos dados anatômicos usados para a diferenciação dos diferentes calicéfalos

(Hsu, 1934, Campana-Rouget, 1950 e Schad, 1962). Pelo que dizem esses au¬

tores, bem como pela apreciação dos diferentes calicéfalos, verifica-se que são

poucas as espécies que se identifiquem por um determinado caracter de maior

imponência. É o caso de K. megacephalus Schad, 1961, individualizado pelo vo¬

lume cefálico; o de K. longispicularis Schad,. 1961, que se destaca pelo compri¬

mento dos espículos; ou o da espécie sul americana K. appendiculatus Molin,

1861, que se reconhece pela cápsula bucal assimétrica. Nas outras espécies

“brasileiras” não encontramos elementos tão marcantes de diferenciação; isso

explica a razão de ter Schad reduzido a cinco os calicéfalos da região brasileira,

que na listagem de Yamaguti são oito.

Pelo exame da chave simplificada das espécies brasileiras, aceitas por Schad,

presente neste trabalho e totalmente baseada em dados colhidos na monografia

desse autor, há dois grupos de calicéfalos “nacionais”: o das espécies prodelfas

(incluindo K. appendiculatus e K. costatus ) e o das espécies anfidelfas (incluin¬

do K. inermis, K. subulatus e K. rectiphilus neorectiphilus) . A individualização

das espécies nesses grupos obedece essencialmente a características anatômicas,

como situação da vulva, conformação da cauda nas fêmeas, tamanho relativo do

esôfago, torção cefálica (K. appendiculatus) , estrutura da raia dorsal nos machos.

Apenas K. subulatus apresentaria um caracter de natureza biológica: o de para¬

sitar exclusivamente C. constrictor.

117

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephaliãae). Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. lnst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

O calicéfalo que dá motivo à presente publicação identifica-se por sua mor¬

fologia, na chave presente neste trabalho, a K. subulatus, isto é, apresenta os ca¬

racteres anatômicos definidos por Schad.

Schad coloca na sinonímia de K. subulatus: K. boae (Blanchard, 1886) e

K. chitwoodi Caballero, 1954. Tidas como perfeitas as afirmações de Schad, am-

pl ia-se consideravelmente a área de dispersão de K. subulatus, que passa a incluir

Antilhas e América Central e possivelmente o México.

Discutindo K. inermis coronellae, Schad declara que K. agkistrodontis Har-

wood, 1932; K. humilus Caballero, 1958; K. implicatus Kreis, 1938 e K. conoi-

deus Comroe, 1948, são sinônimos daquela subespécie.

É sibilina a argumentação de Schad, quando confronta K. inermis e suas

subespécies; foi por isso que transcrevemos quase integralmente sua opinião.

Aliás, à páginas 1047 e 1048 de sua monografia, diz ele; “Similarmente, K. iner¬

mis é difícil de definir morfologicamente, de modo a se excluir K. subulatus. To¬

davia K. subulatus não é difícil de se distinguir de K. iriermis na prática, desde

que apenas é necessário ser distinguido de K.i. inermis e de K.i. macrovulvus,

que são os representativos de K. inermis ocorrendo dentro da área de K. subu¬

latus. Onde coincidem, as espécies apresentam diferenças muito pronunciadas na

forma da cauda da fêmea e na composição da raia dorsal. K.i. coronellae, que

ocorre ao norte dequelas, mostra maior semelhança com K. subulatus na forma

da cauda e tem uma composição idêntica da raia dorsal”.

Levando na devida conta as informações a nosso dispor, merecem ser res¬

saltadas as seguintes ponderações:

a) Não encontramos K. subulatus em serpentes (incluindo boideos) na região

centro-sul do Brasil. Aparentemente, a área de dispersão de K. subulatus se

estende desde a Amazônia até a América Central e Antilhas. Em parte, pe¬

lo menos, se superpõe à área de dispensão de K. inermis coronellae.

b) Segundo Schad, até o presente, K. subulatus foi considerado parasito exclu¬

sivo de Boa constrictor (acrescentamos, e suas subespécies). Nesta publicação

assinalam-se novos hospedeiros, Epicrates cenchria cenchria e Corallus ca-

ninus. Provavelmente, uma investigação mais profunda aumentará o número

de hospedeiros do nematóide em apreço.

c) K. inermis coronellae morfologicamente se confunde com K. subulatus; quan¬

do se superpõem as áreas de dispersão dessas duas espécies não existe ou¬

tro elemento classificatório que o dos hospedeiros (K.i. coronellae ainda não

foi referido em ofídios da família Boidae).

d) É de se prever que um estudo adequado concluirá pela sinonímia de K.i.

coronellae, como sendo realmente K. subulatus; contribui para esta hipótese,

repetimos, a frouxa especificidade parasitária dos calicéfalos.

e) Confirmada a hipótese d, deixará de existir a especificidade de K. subula¬

tus, como parasito de boideos; aliás a regra entre os calicéfalos, é a frou¬

xa especificidade quanto aos hospedeiros.

119

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae) . Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. Inst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

Agradecimentos: Entendemos justo deixar nossos agradecimentos à Direto¬

ria, aos pesquisadores e auxiliares do Instituto Butantan, pelo franco apoio, for¬

necendo-nos material e cooperando por todas as maneiras; à srt. a Wilma Garcia

de Souza, pelos serviços de datilografia; aos srs. Cassiano Pereira Nunes, dese¬

nhista do Departamento, pela execução dos desenhos; José Navas, técnico, co¬

laborador nas necropsias e coleta de material e Wagner de Mello, auxiliar técni¬

co, participante das várias atividades no decurso da pesquisa.

ABSTRACT: Kalicephalus subulatus Molin, 1861, is redescribed

and confirmed as a valid species.

We have found K. subulatus in Boa constrictor constrictor,

Epicrates cenchria cenchria and Corallus caninus; all those snakes

had been brought from the Amazonic region.

According to the view point exposed in this paper, since K.

inermis coronellae and K. subulatus are morphologically alike

and their expanding areas are common in part, it is possible

that K. i. coronellae and K. subulatus may be synonymous. If

this hypothesis is true, the parasitism of K. subulatus, a South

and Central America species reaching México, is not limited to

Boidae snakes. Considering the information at our disposal, the

following conclusions may be related: a) K. subulatus has not

been found in snakes of South-Brasil, including Boidae species.

It seems that the dispersion of K. subulatus reaches from Ama¬

zónia to Central America and the Caribbean Islands. At least,

part of this dispersion is common to that of K. i. coronellae.

b) According to Schad, the only host of K. subulatus is Boa

constrictor (its subspecies, must be added). In this paper new

hosts are reported: Epicrates cenchria cenchria and Corallus

caninus. Further investigation will probably show that a larger

number of snakes can harbor K. subulatus, as it is known how

feeble is the parasitic specificity of Kalicephalus species. c) K.

inermis coronellae is morphologically similar to K. subulatus:

since their dispersive areas overlap, there is no other classifying

element besides the host range. K i.coronellae has not yet been

found in snakes of the Boidae family. d) Future research may

well show that KÀ.coronellae is really a synonym of K. subu¬

latus.. e) If hypothesis d can be confirmed, the specificity of

K.subulatus for Boidae must be set aside; this conclusion will

fit the general rule that Kalicephalus are helminths with feeble

host-specificity.

UNITERMS: Kalicephalus subulatus. Nematoda, Diaphanocepha¬

lidae. Morphology. Incidence. Snakes.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. BLANCHARD, R. Notices helminthologiques (première série). Buli. Soc.

Zool., 11: 294-304, 1886.

2. CABALLERO Y.C., E. Nematodes parasites des reptiles du Mexique. Ann.

Parasitol., 16: 327-333, 1938.

1, | SciELO

120

FERNANDES, M.P.M. & ARTIGAS, P.T. Kalicephalus subulatus Molin, 1861 ( Nematoda,

Diaphanocephalidae) . Confirmação desta espécie; informações sobre sua dispersão geográfica

e enumeração de serpentes parasitadas.

Mem. lnst. Butantan, 39: 103-121, 1975.

3. CABALLERO Y.C., E. Nematodes de los reptiles de Mexique III. Ann. Inst.

Biol. Univers. Nac. México, 10: 73-82, 1939.

4. CABALLERO, Y.C., E. Estúdios helmintologicos de la region de México y

de la República da Guatemala. Nematoda, 8. a parte. Ann. Inst. Biol. Univ.

Nac. México, 25: 259-274, 1954.

5. CABALLERO, Y.C., E. & VOLGELSANG, G. Fauna helmintológica Venezuela¬

na. III. Alguns nematodas de animales silvestres. Alv. Med. Vet. y Parasit.

Caracas, 9: 55-57, 1950.

6. CAMPAJMA-ROUGET, A. & CHABAUD, G. Note sur quelques nematodes afri-

cains. Collection Camile Desportes. Ann. Parasitol., 25: 308-324, 1950.

7. HSU, H.F. On some Kalicephalus species from China with a description of

certain characters of the genus. Peking Nat. Hist. Buli, 8: 375-389, 1934.

8. SCHAD, G.A. Studies on the Genus Kalicephalus (Nematoda , Diaphanoce¬

phalidae). II. A taxonomic revision of Genus Kalicephalus Molin, 1861.

Can. J. Zool., 49: 1035-1165, 1962.

9. STIMSON, A.F. Liste der rezenten Amphibien und Reptilien. Boidae (Boi-

dae + Boyeriinae + Loxoceminae + Pythoninae). in: Das Tierreich.

Berlin, 1969, Lief., 89, Seite 1-XI, 1-49.

10. YAMAGUTI, S. Systema helminthum. London, Interscience Publishers, 1961.

Recebido para publicação em 30-VI-1975 e aceito em 27-X-1975.

121

1, | SciELO

Mem. Inst. Butantan

39: 123-133. 1975

G- AND C-BANDS IN MUMAN CHROMOSOMES TREATED

WITH SNAKE VENOMS. *

ITAMAR ROMANO GARCIA RUIZ and WILLY BEÇAK

Serviço de Genética, Instituto Butantan

ABSTRACT: The in situ effect of the Bothrops jararaca venom

and that of other snake species on human chromosomes has

been studied. G-bands and in some instances C-bands similar

to those obtained with trypsin have been observed. Tests carried

out with the proteolytic fraction of the Bothrops jararaca ve¬

nom as well as the effect of pH and temperature variation

demonstrated that banding is due to venom proteases. The Cro-

talus durissus terrificus venom considered of low proteolytic

activity evidenced bands in preparations treated for 30 min,

while highly proteolytic venoms as those of Bothrops jararaca

and Lachesis muta provoked the same effect within only 1-2

min. Weak G-banding was observed in preparations treated with

Micrurus frontalis venom after 5 min of exposition. The pro¬

teases of the venoms studied Show trypsin-like properties but

their activity is lower than that of trypsin.

UNITERM: Chromosome banding by snake venoms.

INTRODUCTION

The different G-banding techniques reveal a similar pattern for each pair

of homologue chromosomes in all organisms referred up to present. Constancy

as to the number of bands and their position in each chromosome indicates a

stable and characteristic distribution of its components. In the case of human

chromosomes it was possible to determine the type of DNA present in the G-bands

and in some of the C-bands. The G-bands are AT-rich DNA while the interbands

are GC-rich (Comings 5 , 1973).As to the C-bands the pericentromeric region

of the chromosomes 1 and 16 are AT-rich satellite II DNA (Corneo et al. 6 ,

1970); the pericentromeric region of chromosome 9, the centromeres and

* Research supported by the Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo,

Brazilian National Reseach Council and Fundo. Especial de Despesas do Instituto Butan¬

tan. This work was approved as part of a Thesis for Master of Sciences submitted to the

Instituto de Biociências da Universidade de São Paulo.

Adress: Serviço de Genética — Instituto Butantan — Caixa Postal 65 — S. Paulo — Brasil.

123

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

RUIZ, I.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chromosomes treated with snake

venoms.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

satellite of the D and G chromosome groups contain satellite III DNA (Jones

et ai. 10 , 1973), AT-and GC-rich (De La Chapelle et al. 3 , 1973) and

finally the distai region of the Y chromosome is highly repetitive AT-rich DNA

(De La Chapelle et al. 3 , 1973).

Although a number of substances and procedures were quoted in the

literature to evidence those chemically differentiated regions, no reference was

found as to a possible snake venom effect. The particular composing substances

of a venom are still not well known. Yet several of them show proteolytic

activity which would be interesting to test on the chromosomes. The aim of

this work was to investigate whether the venoms would produce any different

alteration in human chromosomes, and whether there was an specific action

for a type venom and/or for a determined region of one or more chromosomes.

MATERIAL AND METHODS

Metaphase chromosomes were obtaincd by short-term cultures from peripheral

blood leucocytes incubated for 72 h at 37°C (Beçak 2 , 1961) Colcemid (Ciba)

lxlO' 6 M, 0.05 ml, was added 2 h prior to harvesting the culture. After hypotonic

treatment with 0.075M KCI, the material was fixed with 3:1 methanol-acetic

acid. Air-dried 2 or 3 day old cytological preparations were treated with Solutions

of a crystallized snake venom pool and dissolved in M/15 Sorensen buffer pH

7.0, in concentrations varying between 0.025-0.1% at 37°C. The preparations

were then washed in buffer and immediately stained in 2-3% Giemsa (Merck)

diluted in phosphate buffer pH 6.8 for 5-10 min.

Control preparations were treated with Sorensen buffer pH 5.0-9.0 and

others with trypsin (Maknur, 1:250) in Sorensen in the same concentration and

pH used for the venoms.

The following tests were carried out in order to identily the active component

in the Bothrops jararaca venom:

1. Addition of inhibitors

a) EDTA-2Na

Solution 0.1% of Bothrops jararaca venom, pH 7.0 plus 10% EDI A-2Na

was incubated at 37°C for 6 h prior to the tests. Another solution using trypsin

instead of Bothrops jararaca venom was used as EDTA control over the venom

proteases. In order to determine any effect of the EDTA on the chromosomes an

EDTA solution was also tested.

b) HgCl,.

Solution 0.1% of Bothrops jararaca venom, pH 7.0 with 0.2% HgCL was

incubated for 1 h at 3' 70 C prior to the tests. Trypsin solution in the same condi-

tions served as control. Another control was prepared with HgCL diluted only in

phosphate buffer.

2. Proteolytic fraction

Preparations were treated with 0.1% proteolytic fraction solution of

Bothrops jararaca venom, pH 7.0, 37°C for 2 min.

124

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

RUIZ, I.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chromosomcs treated with snake

venoms.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

3. Temperature variation

Bothrops jararaca venom Solutions 0.1 % , pH 7.0, were kept for 1 h at the

following temperatures: 50, 75 and 95°C, and after that for 1 h at 37°C before

the tests were carried out.

4. pH variation

The Bothrops jararaca venom was dissolved to 0.1 % in phosphate buffer,

pH 5.0, 8.0, 9.0, adjusted with HC1 or NaOH.

5. Other venoms

Besides the tests with Bothrops jararaca venom, other ones were done

with the venoms of Lachesis muta, Crotalus durissus terrificus and Micrurus

frontalis. The Solutions were prepared as mentioned for B. jararaca venom tests

and the treatment time was different for each species venom.

Several hundreds of metaphases were analysed for each treatment in a blind

test.

RESULTS

Chromosome preparations treated with the four species venoms showed

G-banding according to the standards established in the Paris Conference

“Standardization in Human Cytogenetics” 12 (1971). However variations were

observed as to the requirements to obtain such results. Solutions of the whole

and of the proteolytic fraction of Bothrops jararaca venom, as well as the Lachesis

muta venom were able to produce banding in almost all metaphases in only 1-2

min (Fig. 1). Venom solution of Crotalus durissus terrificus produced banding

in about 30% of the exposed metaphases after 30 min (Fig. 2a). Venom So¬

lutions of Micrurus frontalis produced a wealc G-banding in most metaphases after

5 min (Fig. 2b).

On the other hand, the phosphate buffer control pH 6.8 produced a weak

G-banding in about 10% of the metaphases after 30 min (Fig. 2c). As to

trypsin, G-banding was produced after only 10-12 sec in most of the metaphases;

when those preparations were treated for a longer time they were destroyed.

Some old preparations treated with Bothrops jararaca venom evidenced

C-bands in all chromosomes similar to those obtained with trypsin (Fig. 3a, b).

These bands were not identical but wider than those obtained by the Arrighi &

Hsu 1 (1971) techniquc. The pericentromeric regions of the chromosomes 1, 9

and 16 were not specially differentiated as referred by Merrick et al. 11 (1973).

Other alterations observed in fresh preparations using a venom solution, mainly

of Bothrops jararaca and Lachesis muta were similar to those produced by an ex-

cessive treatment with trypsin solution. Therefore prolonged treatments or the

use of very concentrated venom Solutions produced “ghost” chromosomes with

a barely visible delineation, circular in some cases (Fig. 3c).

Solutions of Bothrops jararaca venom, pH 5.0 do not alter the chromosomes.

The best G-banding effect was obtained at pH 8.0-9.0.

í, | SciELO

126

RUIZ, I.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chroMosomes treated wlth snake

venoms.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

,00

'# 1 *

Jük . ''0'

9 Al '

w * <

" I

f é jr f í

; " ... , *...

M H, V

w. m 1

#» u 4»

“I#

lw?\

[ j

Hr * 7

V /

*» m

•«», / "1%

*v—•_/

/ *

aftas # ■? 7 7

10/um

lOíon

10/un

Flg. 2 - Weak G-bands produced by low proteolytic venoms and buffer at 37°C: (a) 0.1%

Crotalus durissus terrificus venom pH 6.8. The bands were similar to the ones wlth buffer

but the C.d. terrificus venom frequencies of banding were hlgher; (b) 0.1% Micrurus

frontalis venom pH 7.0. It was necessary 30 min the C.d. terrificus venom to produce

the same effect as M. frontalis ln 2 min; (c) M/15 Sòrensen buffer pH 9.0 for 30 min.

127

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

RUIZ, I.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chromosomes treated with snake

venoms.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

When previously kept at 50 ( ’C the Bothrops jararaca venom does not lose

its banding capacity; however, when heated to 75°C and 95°C this property is

completely lost.

In the presence of EDTA-2Na, the venom Solutions of B. jararaca or trypsin

undergo some reduction in their activity (Fig. 4). On the other hand Solutions

of Bothrops jararaca venom, or of trypsin containing HgCF, do not produce any

alteration in the chromosomes. The EDTA and HgCF control Solutions diluted

only in phosphate buffer did not evidence any banding.

DISCUSSION

The proteolytic effects obtained with the Lãchesis muta venom and with the

Bothrops jararaca venom, (which contains at least 3 proteases according to Hen¬

riques et al. 8 , 1966) are known to be more intense than with the Crotalus

durissus terrificus and Micrurus jrontalis venoms (Rosenfeld 13 , 1959). Those

so called proteolytic venoms (from Bothrops jararaca , and Lãchesis muta) were

much more efficient in G-banding production.

The best banding results were obtained with Solutions at pH 8. 0-9.0, the

optimal pH of proteases.

It was reported that at 75°C and 95°C venom proteases become inactivated

(Sarkar & Devi 14 , 1968). Venom Solutions previously heated at these temperatu-

res acíually do not produce any banding. EDTA inhibits some of the snake venom

components, mainly proteases (Henriques et al. 7 , 1960). Under our conditions,

EDTA-2Na reduced the banding capacity of Bothrops jararaca venom Solutions,

reducing also the activity of trypsin used as control. These substances were

totally inhibited in the presence of HgCE, known as a proteolytic inhibitor

(Taborda 16 , 1940). The effects obtained with the proteolytic fraction and with

the whole venom of Bothrops jararaca are identical to those obtained by trypsin

and other proteases (Seabright 15 , 1972).

It can be inferred that the chromosome alterations are due to the venom

proteolytic fraction. Apparently all other venom components (Jiménez-Porras 9 ,

1970) had no influence on these alterations. The resistance of the centromeric

region to the proteolytic action is possibly due to its special composition

(repetitive DNA) and packing.

Some authors (Chiarelli 4 , 1973) suggest that the proteases exert a denaturing

effect on the proteins of the DNA-protein complcx. At the optical levei, the

alterations described in this paper are seen as a gradual deformation of the

chromosomes starting with an uncoiling of the chromatids. Apparently this is

followed by an apposition of certain corresponding regions in both chromatids,

and the formation of bands, that by a more intense effect become destroyed.

Under these conditions the centromeric material may be more resistant to the

treatment, showing the aspect of bands. Only the contour of the chromatids,

which may join, is thcn observed; a less visible inner contour is also noted

(Fig. 3c). There are instanccs where the p and q arms seem to become

continuous, the centromeric material disappears and the chromosome shows a

circular aspect.

128

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

RUIZ, I.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chromosomes treated wlth snake

venoms.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

IlO/rm

m t M t

% ^

i-1

10/un

3 V

* }

IQítm

Fig. 3 - Chromosomes showing remnants of bands: (a) C-bands produced by 0.05% B.

jararaca venom pH 7.0 at 37°C for 10 min on 4 month old chromosome preparation. Similar

but not identical to the ARRIGHI & HSU patterns; (b) C- and G-bands produced by 0.1%

trypsin diluted in Sõrensen buffer pH 6.8 at room temperature for 15 sec; (c) C-bands

or circular aspect produced by 0.1% B. jararaca venom pH 9.0 at 37“C for 6 min.

129

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

SciELCy 0

RUIZ, I.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chromosomes treated with snake

venoms.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

RUIZ, I.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chromosomes treated with snake

venoms.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

CONCLUSION

The observed banding phenomenon is due to the proteolytic fraction of

the venoms studied. The effect varied according to their degree of proteolytic

activity and the experimental conditions.

Acknowledgmcnts: We thank Mrs. Sibylle Hellcr for the editorial aid and

Javier Coll, M. Sc., for his suggestions.

RESUMO: Foi estudado o efeito in situ do veneno de Bothrops

jararaca e outras espécies de ofídios sobre cromossomos huma¬

nos. Observaram-se bandas G, e em alguns casos bandas C,

semelhantes às observadas com tripsina. Testes efetuados com

fração proteolítica do veneno de Bothrops jararaca bem como

o efeito da variação de pH e temperatura demonstraram que

esse bandeamento é devido às proteases dos venenos. O veneno

de Crotalus durissus terrificus, considerado de baixa atividade

proteolítica evidenciou bandas em preparações tratadas por 30

min, enquanto venenos altamente proteolíticos como os de Both¬

rops jararaca e Lachesis muta produzem o mesmo efeito em

apenas 1-2 min. Bandeamento G fraco foi observado em prepara¬

ções tratadas com veneno de Micrucus frontalis após 5 min de

exposição. As proteases dos venenos estudados mostram pro¬

priedades semelhantes às da tripsina, porém, sua atividade é

menor que a daquela.

UNITERMO: Bandeamento cromossômico com venenos ofídicos.

REFERENCES

1. ARRIGHI, F.E. & HSU, T.C. Localization of heterochromatin in human

chromosomes. Cytogenetics, 10: 81-86, 1971.

2. BEÇAK, W. Human chromosomes in short-term cultures from Peripherie

blood leucocytes. Rev. brasil. Biol, 21: 281-286, 1961.

3. CHAPELLE, A. DE LA; SCHRODER, J.; SELANDER, R. K. & STENSTRAND,

K. Differences in DNA composition along Mammalian metaphase chro¬

mosomes. Chromosoma (Berl.), 42: 365-382, 1973.

4. CHIARELLI, B. Hypothetical mechanism of action involved in producing

bands with trypsin and other substances on chromosomes. Mamm. Chrom.

Newsletter, 14: 19-21, 1973.

5. COMINGS, D.E. Biochemical mechanisms of chromosomal banding and

color banding with acridine orange. in: Nobel 23 Chromosomc Identifica¬

tion, : 293-299, 1973.

CORNEO, G.; GINELLI, E. & POLLI, E.

DNA. J. Mol. Biol, 48: 319-327, 1970.

Repeated sequences in human

7. HENRIQUES, O.B.; FICHMAN, M. & HENRIQUES, S.B. Partial purifi-

cation and some properties of the blood-clotting factor from the venom

of Bothrops jararaca. Bioch°m. J., 75: 551, 1960.

8. HENRIQUES, O.B.; MANDELBAUM, F.R. & HENRIQUES, S.B. Proteoly¬

tic enzymes of Bothrops venom. Mem. Inst. Butantan, 33: 359-370, 1966.

132

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

RUIZ, X.R.G. & BEÇAK, W. G- and C-Bands in human chromosomes treated with snake

venoras.

Mem. Inst. Butantan, 39: 123-133, 1975.

9. JIMÉNEZ-FORRAS, J.M. Biochemistry of snake venoms (a review). Clin.

Toxicol., 3: 389-431, 1970.

10. JONES, K.W.; PROSSER, J.; CORNEO, G. & GINELLI, E. The chromo-

somal location of human satellite DNA III. Chromosoma (Berl.), 42:

445-451, 1973.

11. MERRICK, S.; LEDLEY, R.S. & LUBS, H.A. Froduction of G and C band-

ing with progressiva trypsin treatment. Pediat. Res., 7: 39-44, 1973.

12. Paris Conference 1971. Standardization in human cytogenetics. Birth Defects:

original artiele series, VIII, 7. New York, The National Foundation,

1972.

13. ROSENFELD, G.; HAMPE, O.G. & KELEN, E.M.A. Coagulant and fibrino-

lytic ac ti vi ty of animal venoms; determination of coagulant and fibrino-

lytic index of different species. Mem. Inst. Butantan, 29: 143-163, 1959.

14. SARKAR, N.K. & DEVI, A. Enzymes in snake venoms. In: Bücherl, W.,

Buckley, E.E. and Deulofeu, V. (eds.). Venomous animais and their

venoms. New York, 1968. p. 169-216.

15. SEABRIGHT, M. Tha use of proteolytic enzymes for the mapping of struc-

tural rearrangements in the chromosomes of man. Chromosoma (Berl.),

36: 204-210, 1972.

16. TABORDA, L.C. A influência da temperatura sobre os princípios; tóxico,

coagulante e proteolítico do veneno de Bothrops jararaca. Mem. Inst.

Butantan, 14: 167-180, 1940.

Recebido para publicação em 30-V-1975 e aceito em 9-VI-1975.

133

2 3 4 5 6 SClELO o 2.1 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 135-148, 1975

OBSERVATIONS ON THE GERM CELL ULTRASTRUCTURE

OF MALE DIPLOID AND TETRAPLOID ODONTOPIIRYNUS

AMERICANl/S (AMPHIBIA: ANURA ). *

SYLVIA MENDES CARNEIRO

Serviço de Genética, Instituto Butantan

ABSTRACT: An ultrastructural study on the male germinal cells

from diploid and tetraploid specimens of Odontophrynus ame-

ricanus (Amphibia — Anura, Ceratophrydidae) was performed

from spermatogonia I to early spermatids. The ultrastructural

aspects of cells and organelles are similar in the 2n and 4n

specimens. The pairing of the four homologues in tetraploids

does not occur simultaneously, since only normal synaptonemal

complexes were observed.

UNITERMS: spermatogenesis, spermatocytes, synaptonemal

complex.

INTRODUCTION

Spermatogenesis in Anura has been studied mainly by light microscopy

(King 14 , 1907; Saez et al. 25 , 1936; Burgos and Mancini 5 , 1948). Generally,

the ultrastructural studies were made on spermiogenesis (Burgos and Fawcett 4 ,

1956; Burgos and Vitale-Calpe 6 , 1967; Sandoz 26 , 1970; Zirkin 29 , 1971). The

germ cell development in the Xenopus laevis male was recently described (Reed

and Stanley 23 , i 97 2 ; Kalt n , 1973).

This paper deals with the ultrastructural aspects of the spermatogenesis

of Odontophrynus americanus, a species presenting natural diploid and tetraploid

morphologically identical populations, whose cytogenetic aspects have been des¬

cribed by Beçak, M. L. et al. 1 ' 2 ' 3 (1966, 1967, 1970). The zygotene chro-

mosomes pair in a bouquet-like configuration forming 4 loops in the tetraploids

(Beçak, M. L. et al. 2 , 1967).

Research supported by the “Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo"

and “Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan”. This Work was approved as

part of a Thesis for Master of Sciences submitted to the Instituto de Biociências at the

University of São Paulo.

Adress: Caixa Postal 65 — S. Paulo — Brazil

135

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure of male diploid and te-

traploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

The aim of this study was to analyse by the electron microscope the different

spermatogenetic phases in lhe diploid and tetraploid systems, as well as the

behavior of the synaptonemal complex in the 4n specimens.

MATERIAL AND METHODS

Testis fragments of diploid and tetraploid specimens from Botucatu and

São Roque (S.P.) respectively, were fixed for 2 h at 4°C in 0.26 M of a 2%

glutaraldehyde solution, pH 7.2, in Millonig buffer (Millonig 17 , f961). The

material was washed in isotonic buffer and postfixed in 1% osmium tetroxide in

Millonig buffer for 30 min, then rinsed in 0.85% saline. Staining was made

with 1% uranyl acetate according to Kellenberger 12 , (1958), and dehydration

ingraded ethanol. Pre-inclusion was carried out in Polylite 8001 mixed 1:1 with

acetone from 2 to 12 h, and the embedding in the same resin mixed with benzoil

peroxide at 0.1 g/ml (Coiro et al. 8 , 1972).

Ultrathin sections of about 50-70 nm obtained with a Porter-Blum MT I

ultramicrotome were stained with 2% uranyl acetate for 10-20 min followed

by lead citrate (Reynolds 24 , 1963) for 5-10 min, and examined in a Siemens

electron microscope Elmiskop I at 60 KV. Sections of about 2-3 /i.m were used

as Controls in the light microscope.

RESULTS

a) General observations in the light microscope

Diploid and tetraploid seminiferous tubules in transversal sections are seen

surrounded by conjunctive tissue, rich in interstitial cells (Fig. 1). Sparse

capillaries are also found. At the inner tubular wall, cysts surrounded by follicular

cells are seen in different development stages. Spermatids in differentiation are

observed in the follicular cell cytoplasm.

b) Germ cell ultrastructure

Spermatogonia I (Figs. 2, 3, 15) are surrounded by one or more follicular

cells. Their longest axis is of about 20-30 /un. The lobated nucleus shows

dispersed chromatin, and one or more large nucleoli with some clear zones. The

cytoplasm contains smooth endoplasmic reticulum and sparse ribosomes. In some

cells, annulate lamellae with a variable number of components (Fig. 3), and a

circular chromatoid body are observed (Fig. 2). Groups of mitochondria are

polarized at one or more regions of the cell. Among these organelles, material

of great electron density can be seen.

Spermatogonia II (Fig. 4) present a slightly lobated nucleus, and a more

condensed chromatin content. The nucleolus is large and compact, frequently

showing a linear electron dense component, delimited by a narrow clear zone of

polygonal or circular outline (Fig. 16). In the cytoplasm, Golgi complex, sparse

and grouped mitochondria, ribosomes, and a chromatoid body were observed.

Spcrmatocytes I present a circular nucleus. During leptotcne, chromatin

begins to condense, but axial formations were rarely seen (Fig. 5). The nucleolus

is compact as in spermatogonia II, and also may show the linear electron dense

136

/ l SciELO

CARNEIRO, S.M. Observatlons on the germ cell ultrastructure o£ male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus (Amptiihia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

Fig. 1 - Light micrograph of a cross section oí the seminiferous tubule (4n). Within the

tubule: spermatocysts (S) contalning spermatocytes I in zygotene or pachytene; follicular

cells associated spermatids (F), Conjunctlve tissue with Leydig cells and one capülary

(arrow) surrounding the tubule.

Fig. 2 - Chromatoid body (CB) in the cytoplasm oí a 2n spermatogonium I.

Fig. 3 - Spermatogonium I (4n). Highly lobulated nucleus (N) with dispersed chromatin,

and one nucleolus (n) with some clear zones. In the cytoplasm (C) : mitochondria

aggregate (M) polarized at the cell bottom with electron dense material between some of

th em; annulate lamellae (1). Follicular cell (F) cytoplasm enveloping the spermatogo¬

nium I.

137

SciELO

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastrueture oí male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus (Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

2pm

2 Am

Fig. 4 - Spermatogonla II (4n) : the sllghtly lobulated nucleus (N) presents chromatin

more condensed than ln the earlier phase. Some compact nucleoll (n) Show ln thls phase

an electron dense component wlth polygonal or lamellar aspect (arrows). Cytoplasm (C)

wlth mltochondria, Golgl complex, polysomes and chromatoid body.

Fig. 5 - Pre-melotic leptotene spermatocytes (2n) of synchronous development ln the cyst

surrounded by íolltcular cells (F). Nucleus (N) nearly circular wlth a sllghtly condensed

chromatin, and a nucleolus (n). Cytoplasm with Golgi complex, mltochondria and polysomes.

138

SciELO

CARNEIRO, S.M. Observatlons on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraplold Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

, l/i in

Plg. 6 - Early zygotene stage spermatocyte (4n). The nucleus (N) shows short axial

elements (arrows) converging to a plane zone of the nuclear membrane where the homo¬

logue pairlng probably starts. Cytoplasm presents mitochondria, Golgl complex, polysomes,

and smooth endoplasmic reticulum.

Fig. 7 - Pachytene spermatocyte (4n) characterlzed by the presence of synaptonemal com¬

plex (thick arrow). In thls section, the synaptonemal complexes converge to the same

nuclear membrane reglon assuming a bouquet-liike configuration. In the cytoplasm (C),

electron dense perlnuclear formations are seen (arrows).

139

SciELO

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraploid Odontophrinua americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975,

component of lamellar and polygonal aspect (Fig. 12). The cytoplasm is similar

to that of the spermatogonia II. Zygotene (Figs. 6, 8) is characterized by the

onset of synaptonemal complex formation. Axial elements are polarized at a more

plane region of the nuclear membrane. In both animais the synaptonemal complex

is formed by two electron dense lateral elements, 25-35 nm, and one central

element of approximatcly 15 nm. The mean distance betwecn two lateral

elements, i.e., the width of the central region, is 130-150 nm. The lateral

elements at the zone of insertion in the membrane are ramified and form an

electron dense plate over the membrane. The nucleolus (Figs. 14, 17) contains

a clear zone which increases in the course of zygotene, attaining finally a ring-

like configuration; a parallel array of the nucleolonema was also seen in early

zygotene (Fig. 13). In pachytene (Figs. 1 . 9 ), the synaptonemal complexes are

completely developed, and in some sections, bouquet-like configurations can be

found (Fig. 7). No double or anomalous synaptonemal complexes were observed

in the animais under study. The cytoplasm surrouding the membrane, mainly

at the region of synaptonemal complex convergency, presents rounded perinu-

clcar electron dense formations (Figs. 9, 10) with diameters of about 100-200

nm. These elements are observed from leptotene onwards, although in lesser

numbers. Cytoplasm is similar to that described for the earlier phase.

In the early spermatids (Figs. 19, 20), chromatin appears in form of fine

filaments, regularly distributed in the nucleus. The rarely seen nucleolus (Fig.

20) has a compact aspect, and is placed near the membrane. The cytoplasm

presents cysterns of smooth endoplasmic reticulum, flattened peripheric vesicles,

ribosomes, and centrioles next to a small depression in the nuclear membrane

(Fig. 20). In several sections, a chromatoid body is observed (Fig. 19).

As the spermatid matures, chromatin becomes more electrondense and

granular (Fig. 18); a clear region appears between the condensed chromatin

grains, where an electron-dense round body, probably a nucleolus, is noted. At

this region, a paracrystalline hexagonal formation approximately 8 nm in

diameter can be observed in some spermatids (Fig. 18). In transversal sections,

this formation is constituted by circular electron-dense units of about 27 nm

in diameter, grouped according to a hexagonal pattern at a distance of about

25-27 nm. At the periphery of this structure, there seems to be a continuity

between the fine fibrils, radiating from the units, and the fibrils emerging from the

condensed chromatin rods. In longitudinal sections, the paracrystalline body is

constituted by clcctron-dense bands, 200 nm in length, and approximately 27

nm in width. The distance between the bands is 18-27 nm.

The cytoplasm of spermatids in an advanced stage shows microtubules

next to the nucleus; at the periphery there arc polyribosomes, fused mitochon-

dria, cysterns and vesicles of smooth endoplasmic reticulum, and annulate

lamellae (Fig. 11) with a variable number of elements close to the vesicles

or to the nuclear membrane.

DISCUSSION

Spermatogenesis develops in the seminiferous tubules with out topographic

progression. This fact makes identification of the different phases more difficult.

Cellular cysts in different stages of spermatogenesis do not follow a special

140

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

Fig. 8 - Zygotene spermatocyte (2n) shows paired axial (lateral) elements (thin arrows)

íorming a synaptonemal complex next to a not yet paired axial element (ae). Lateral

elements present ramified ends forming a dense plate (thick arrow) over the nuclear

membrane.

Fig. 9 - Pachytene nucleus (2n) The synaptonemal complexes are formed by 2 dense late¬

ral elements (le) and a central element (ce). Electron dense formations are seen at

the periphery of the nucleus (arrows).

Fig. 10 - Part of the nuclear membrane from an early zygotene spermatocyte (2n). Close

to the nuclear membrane pores, electron dense formations are seen ln the cytoplasm

(arrows).

Fig. 11 - Annulate lamellae (arrows) in the cytoplasm of maturing spermatids.

141

SciELO

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

radial or peripheral order, suggesting that there is no chronological or spatial

disposition, except within the cysts originated through division and differentiation

of a single spermatogonia I.

The scattered aspcct of the chromatin in the spermatogonia, the developed

nucleolus with clear inner areas, the scarcity of polysomes and endoplasmic

reticulum in the cytoplasm agree with the idea of Reed and Stanley 23 (1972),

that there is an active transcription process in this phase. The large nuclear

surface, determined by the great lobulation of the nucleus in spermatogonia I

evidences a high degree of nuclear-cytoplasmic interaction (Reed e Stanley 23 ,

1972) . In this phase the transcribed RNA is probably transfered to the

cytoplasm to becomc part of the ribosomes found in later phases.

Spermatogonia II show structural characteristics similar to those described

by Kalt 11 (1973) in Xenopus laevis.

The meiotic prophase of Odontophrynus americanus in its general structural

aspect, is similar to that of Xenopus laevis (Reed and Stanley 23 , 1972; Kalt n ,

1973) .

Synaptonemal complex

Comparison of the synaptonemal complex ultrastructure in a great number

of sections obtained from various specimens, allowed the eonclusion that the

synaptonemal complexes of the 2n and 4n are similar.

Through light microscope observations it was possible to observe that

Odontophrynus americanus homologue chromosomes pair only at the ends and

in a bouquet-like configuration (Beçak, M. L. et al. 2 , 1967). The clectron

microscope shows evidence of this bouquet-like configuration, but it seems that

the pairing occurs not only at the homologue’s ends, but also at those distant

zones of the nuclear membrane where they normally attach.

No double synaptonemal complexes or polycomplexes were observed in

the phases studied in this paper. However, Comings and Okada (personal

communication, 1971), examining the same material found polycomplexes, not

associated with the homologues, in cells in diplotcne and diakynesis. Likewise,

in the autotetraploid Lilium longiflorum only single synaptonemal complexes

appear (Moens 18 > 20 , 1968, 1970). In this plant, serial sections of sporocytes I

allow the observation of an interchange of lateral elements between two bivalents,

probably homologues. The formation of the synaptonemal complex is first

evidenced when axial elements are seen close togethcr in zygotene. According

to Moens 19 (1969), pairing is indueed through a still unknown process, and

only when the homologues attain a distance of about 300 nm. In Odontophrynus

americanus the distance between the polarized homologue terminais in zygotene

is quite small, facilitating the formation of the synaptonemal complex.

Chromatin condensation is already observed in the phase preceding the

pairing although the axial elements are not yet visible. According to Moses 21 ,

1968, axial elements can be observed only when the chromatin attains a sufficient

degree of condensation to enable an alignment of the proteic material setllcd on

it. In the phases where the synaptonemal complexes are more evident, the

perinuclear electron-dense formations mentioned before, appear in higher

numbers. Similar but larger structures were observed in oocytes I of amphibians

142

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure oí raale diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia.: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

143

Flg. 12 - Compact nucleolus with a lamellar electron dense component (arrow) from a

leptotene spermatocyte (2n).

Fig. 13 - Nucleolus from an early zygotene spermatocyte presenting nucleoloneme in a

parallel array.

Fig. 14 and 17 - Nucleolus (2n and 4n) from zygotene spermatocytes with a large central

clear zone (z).

Flg. 15 - Portion of a nucleolus (n) from spermatogonium I, close to the nuclear mem-

brane. A ribosome aggregate (R) located in the cytoplasm at the opposite side of the

nucleolus.

Flg. 16 - Nucleolus from spermatogonium II with polygonal electron dense components

(arrow) and á small clear zone.

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

by Eddy & Ito 9 (1971). These authors suggest that these structures are formed

by proteic material of nuclear origin; they do not exclude, however, the

possibility of a RNA constituent. Clérot 7 (1968) observed these structures in

spermatocytes I of Rana, which in this case are always associated with groups

of mitochondria, and supposedly related to their biogenesis.

In Odontophrynus americanus, the following characters suggest a nuclear

origin of this material:

— round perinuclear electron-dense bodies are always near or associated

to nuclear membrane pores;

— electron density of the composing material is similar to that of chromatin;

— material of the same electron density is also found within the pores.

It is known that in oocytes I of amphibians an extra synthesis of nuclear

DNA normally occurs, corresponding to the amplification of the DNA in ribosomal

cystrons, giving rise to the multiple micronucleoli that migrate to the nuclear

pcriphery (Painter and Taylor 22 , 1946; Gall 10 , 1967). In Acheta, Lima de

Faria et ai. 16 (1969) affirmed that there is a relationship between the

formation of polycomplexes associated to ccrtain structures in oocyte I, and

the amplification of their DNA.

Based on these data, a possible analogy is suggested between the perinuclear

formations observed in Odontophrynus americanus spermatocytes I, and the RNP

granules described in oocytes I of amphibians. In spermatocytes, these structures

may be the produet of a small genie amplification, perhaps due to the preservation

of an evolutive character, more favorable in the female germ line.

Hence, based on the findings of Lima de Faria et al. 16 , 1969, it also could

be suggested that in Odontophrynus americanus exists a relationship between

the synaptonemal complex formation, and the appearance of the dense peri¬

nuclear structures since both are probably related to a genie amplification.

Nucleolus and paracrystalline body

Clear zones filled with dense granules suggest that there is a more intense

nucleolar activity in spermatogonia I, and during zygotene. The nucleoli assume

a ring-like configuration at the end of zygotene, as observed also in Triturus,

at the time of the highest synthetic activity (Lane 15 , 1967).

Lamellar and polygonal forms seen in the compact nucleoli of spermatogonia

II, and in nucleoli of cells in leptotene, had not been reported before in male

germ cells.

Occurence of paracrystalline bodies in spermatogenesis as a result of a

nucleoprotein polymerization is relatively rare (Yasuzumi et al. 27 , 1970).

According to Moses 21 (1968) there is a trend for chromatin and other

substances to occur in periodical arrays in the nucleoplasm of gametogenic cells.

Wettstein and Sotelo 28 (1965) related the evolution of a periodical strueture

to a hexagonal pattern in spermatocytes I of an Arachnida. The possibility

can not be exeluded, however, that the paracrystalline strueture is a virus

aggregate.

í, | SciELO

144

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure oí male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

Fig. 18 - Maturlng spermatid with condensed granular chromatin and a clear zone (z)

where normally appears a compact nucleolus. The upper spermatid presents a paracrystalline

body.

Inset: Longitudinal section oí another paracrystalline body at hlgher magnlfication, with

alternated clear and dense bands.

Flg. 19 and 20 - Early spermatids (2n). The nucleus (N) presents a compact nucleolus (n),

and a fine granular chromatin more condensed at some regions. Cytoplasm (C) contains:

centriolus (ct) next to a small depression oí the nuclear membrane; chromatoid body

(c.b.), ílattened, electron dense vesicles at the cytoplasm periphery, and polysomes.

145

SciELO

CARNEIRO, S.M. Observatlons on the germ cell ultrastructure oí male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibía: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

Chromatoid bodies

The chromatoid body of Odontophrynus americanus is similar to that

described by Kalt 11 (1973), also named “nucleolar-like body”. As Kalt, we

did not obtain any evidence that the chromatoid body is related to the nucleolus,

since we did not find any relationship betwecn these two structures. The function

of the chromatoid body is unknown, and in amphibians there is no evidence that

they partake in the formation of spermatozoa as they do in mammals.

Annulate lamellae

The proximity of annulate lamellae to cytoplasmic vesicles could suggest

that they are formed by a linear aggregation of the latter as already observed

by Kessel 13 (1968).

During spermiogenesis, the nucleus decreases in volume by chromatin con-

densation, and consequently, elimination of a part of the nuclear membrane

must occur. This could be due to the deletion of small segments in forni of

vesicles aggregating in a linear and parallel array in the cytoplasm. In the

spermatids a great part of the cytoplasm is also eliminated. In fact, degenerating

material as well as many membranous structures are seen in peripheric position.

The annulate lamellae observed in spermatogonia 1 may likewise be explained:

the nuclear surface is very large due to the great lobulation of the nucleus and,

a chromatin condensation would be necessary to provoke the division for sper¬

matogonia II formation, resulting consequently in a reduction of the nuclear

volume and nuclear membrane surface, part of which is then eliminated.

Acknowledgements: The author wishes to thank Dr. Maria Luiza Beçak

and Dr. Willy Beçak for their helpful orientation and assistance during the course

of this investigation; Dr. A. Brunner Jr. for his orientation in the field of Electron

Microscopy; Miss Clara Y. Mitsutami, for her technical aid; Mrs. Sibylle Heller

for the editorial aid and translation.

RESUMO: Foi feito um estudo ultra estrutural das células ger-

minativas masculinas de Odontophrynus americanus (Amphibia

— Anura, Ceratophrydidae) diplóides e tetraplóides, desde a fase

de espermatogônia I, até o início da espermiogênese. A esperma-

togênese, quanto ao aspecto ultra-estrutural, é semelhante nas

populações diplóides e tetraplóides.

O pareamento dos quatro cromossomos homólogos nos ani¬

mais 4n ocorre dois a dois, com a formação de complexos sinap-

tônêmicos simples.

UNITERMOS: espermatogênese, espermatócitos, complexo sinap

tonêmico.

REFERENCES

BEÇAK, M.L.; BEÇAK, W. & RABELLO, M.N. Cytological evidence of

constant tetraploidy in the bisexual South America frog Odontophrynus

americanus. Chromosoma (Berl.), 19: 188-193, 1966.

146

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

CARNEIRO, S.M. Observatíons on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

2. BEÇAK, M.L.; BEÇAK, W. & RABELLO, M.N. Further studies on poly-

ploid Amphibians (Ceratophrydidae). I. Mitotic and meiotic aspects.

Chromosoma (Berl.), 22: 192-201, 1967.

3. BEÇAK, M.L.; BEÇAK, W. & VIZOTTO, L.D. A diploid population of the

polyploid Amphibian Odontophrynus americanus and an artificial intras

pecific triploid hybrid. Experientia (Basel), 26: 545-546, 1970.

4. BURGOS, M.H. & FAWCETT, D.W. An electron microscope study of

spermatid differentiation in the toad Bufo arenarum Hensel. J. biophys.

biochem. Cytol, 2: 223-240, 1956.

5. BURGOS, M.H. & MANCINI, R.E. Rev. Soc. Argent. Biol., 24: 328, 1948.

Apud Burgos e Fawcett, 1956.

6. BURGOS, M.H. & VITALE-CALPE, R. The fine structure of the Sertoli

cell-spermatozoan relationship in the toad. J. Ultrastr. Res., 19: 221-237,

1967.

7. CLEROT, J.C. Mise en évidence par cytochimie ultrastructurale de 1'émis-

sion de protéines par le noyau d’auxocytes de Batraciens. J. Microsc.,

7: 973-992, 1968.

8. COIRO, J.R.; WEIGL, D.R.; KISELIUS, J.; MENEZES, H. & BILLOTA,

A.T. A new embedding médium (Folylite 8001) for biological material.

Ciência e Cultura, 24: 660-662, 1972.

9. EDDY, E.M. & ITO, S. Fine structural and radioautographic observations

on dense perinuclear cytoplasmic material in tadpole oocytes. J. Cell Biol.,

49: 90-108, 1971.

10. GALL, J. Synthesis of nucleolar DNA in amphibian oocytes. J. Cell Biol.,

35: 43-A, 1967.

11. KALT, M.R. Ultrastructural observations on the germ line of Xenopus lae-

vis. Z. Zellforsch., 138: 41-62, 1973.

12. KELLENBERGER, E.; RYTER, A. & SECHAND, J. Electron microscope

study of DNA containing plasma. II. Vegetative and nature phage DNA

as compared with normal bacterial nucleoids in different physiological

States. J. biophys. biochem. Cytol, 4: 671-677, 1958.

13. KESSEL, R.G. Annulate lamellae. J. Ultrastr. Res. (SuppL), 10: 5-82, 1968.

14. KING, H.D. Am*r. J. Anal, 7 (3), 1907. Apud Saez e cols., 1936.

15. LANE, N.J. Spherical and ring nucleoli in amphibian oocytes. (Patterns of

uridine incorporation and fine structural features). J Cell. Biol. 35-

421-434, 1967.

16. LIMA DE FARIA, A.; BIRNSTIEL, M. & JAWORSKA, H. Amplification of

ribosomal cistrons in the heterochromatin of Acheta. Genetics (Suppl.)

61: 145-159, 1969.

17. MILLONIG, G. Advantages of a phosphate buffer for OsO, Solutions in fixa-

tion. J. Appl. Physiol, 32: 1637, 1961.

18. MOENS, P.B. The structure and function of the synaptonemal complex in

Lilium longiflorum sporocytes. Chromosoma (Berl.), 23: 418-451, 1968.

19. MOENS, P.B. The fine structure of meiotic chromosome polarization and

pairing in Locusta migratória spermatocytes. Chromosoma (Berl.), 28:

1-25, 1969.

20. MOENS, P.B. The fine structure of meiotic chromosome pairing in natural

and artificial Lilium polyploids. J. Cell Sei., 7: 55-63, 1970.

21. MOSES, M.J. Synaptonemal Complex. Ann. Rev. Genet., 2: 104-175, 1968.

147

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

CARNEIRO, S.M. Observations on the germ cell ultrastructure of male diploid and

tetraploid Odontophrinus americanus ( Amphibia: Anura).

Mem. Inst. Butantan, 39: 135-148, 1975.

22. PAINTER, T.S. & TAYLOR, A.N. Nucleic acid storage in the toacfs egg.

Proc. Nat. Acad. Sei. (Wash), 28: 311-317, 1942.

23. REED, S.C. & STANLEY, H.P. Fine structure of spermatogenesis in the

South African clawed toad Xenopus laevis Daudin. J. Ultrastr. Res., 41:

277-295, 1972.

24. REYNOLDS, E.S. The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque

stain in electron microscopy. J. Cell Biol., 17: 208-212, 1963.

25. SAEZ, F.A.; ROJAS, P. & DE ROBERTIS, E. Investigaciones sobre las cé¬

lulas sexuales de los Anfíbios Anuros. El processo meiotico en Bufo

arenarum Hensel. Rev. dei Inst. dei Museo de la Univ. Nac. de La Plata,

2: 95-143, 1936.

26. SANDOZ, D. Étude cytochimique des polysaccharides au cours de la sper-

matogenèse d’un amphibien anoure: le Discoglosse, Discoglossus pictus

(O). J. Microsc., 9: 243-262, 1970.

27. YASUZUMI, G.; SUGIOKA, T.; TSUBO, I. & MATANO, Y. Spermatogenesis

in animais, as revealed by electron microscopy: XIX. Peculiar granular

body clusters in early spermatid nuclei of grasshopper. Z. Zellforsch.,

109: 450-464, 1970.

28. WETTSTEIN, R. & SOTELO, J.R. Electron microscope study on the'

meiotic cycle of Acaniopachylus aculeatus (Arachnida: Opiliones). The

composite bodies of primary spermatocytes. Chromosoma (Berl.), 17:

246-257, 1965.

29. ZIRKIN, B.R. The fine structure of nuclei during spermiogenesis in the

leopard frog Rana pipiens. J. Ultrastr. Res., 34: 159-174, 1971.

Recebido para publicação em 27-6-75 e aceito em 6-8-1975.

Mem. Inst. Butantan

39: 149-155, 1975

Cl I ROM ATI N EXTRUSION MECHANISM

IN AVIAN ERYTHROCYTES (GALLUS GALLUS ) AND

ITS POSSIBLE SIGNIFICANCE. *

JOSÉ RAFAEL R. COIRO and ADOLPHO BRUNNER Jr.

Laboratory of Electron Microscopy, Instituto Butantan

ABSTRACT: The detection through supravital staining of bodies

close to or distant from the nucleus of avian erythrocytes, led

to the study of tlieir origin and significance by the Feulgen

reaction, hemolysis in smears, and ultrathin sections. By those

methods it was confirmed that the bodies are vesicles of mito-

chondrial origin which received chromatinic material into their

interior, and later acquired an aberrant ultrastructure. Fixaton

in a glutaraldehyde gradient followed by osmium tetroxide faci-

litated the visualization of hemoglobinized cytoplasm passages

into the nucleus, through the nuclear membrane pores. In this

paper, the phenomena of hemoglobin penetration and chromatin

extrusion in chicken erythrocytes are discussed.

UNITERM: Chromatin extrusion mechanism in avian erythro¬

cytes.

INTRODUCTION

Davies 10 (1961), Wilt 29 (1962), and Grasso et al 18 (1962) detected

hemoglobin within vertebrate erythrocyte nuclei. Hammel et al. 18 (1963)

suggested that the final hemoglobin biosynthesis could occur within the nuclei of

avian erythrocytes. However, Coiro et al. 13 (1973), and Brunner et al. 6 > 5

(1972, 1973) demonstrated in chickens and mammals, respectivcly, that the

final biosynthesis occurs in organelles termed hemosomes.

Tooze & Davies 28 (1963) proposed that hemoglobin within the nuclei

could act in the same manner as histone, furthering a complete nuclear DNA

condensation. Thus, hemoglobin would be able to interrupt heme and globin

synthesis through a negative retroalimentation mechanism (Granick & Levere 17 ,

1968).

This work was supported by the Conselho Nacional de Pesquisas (Proc. 11.263/74 and

10.112/71) and Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan.

Address: Caixa Postal 65 — São Paulo -— Brasil.

149

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. & BRUNNER Jr„ A. Chromatin extrusion mechanism in avian erythrocytes

(Gallus gallus) and its possible significance.

Mem. Inst. Butaiitan, 39: 149-155, 1975.

In mammals it is possible to observe hcmoglobin presence in immature

erythrocytary fornis as polychromatophile and orthochromatic erythroblasts. In

the less immature stage of orthochromatic erythroblasts it is observed that these

cclls acquirc cytoplasmic expansion and contraction movements, with posterior

extrusion of the nucleus with its chromatinic material (Jolly 20 , 1907; Comandon

& Jolly 15 , 1923; Bessis & Bricka \ 1952; Rind & Stobble 27 , 1957).

The two main objectives of this paper are to evidence and discuss; a) that

the Feulgen-positive vesicles originate from mitochondria juxtaposed on the nu¬

clear membrane in order to receive chromatinic material; b) that the intra-

nuclear hemoglobin present in the erythrocytes probably does not act as histone

with regard to the blocking of genic activity in the nucleus.

MATERIAL AND METHODS

Blood of normal adult chickens was collected from the marginal vein of

the wing or by cardiac puncture, using an anticoagulant constituted of 0.75ml

2% EDTA, and 0.25ml 4% NaHCO :i , in a 0. lml/5ml ratio.

Supravital staining

Cells were stained at a ratio of one blood drop to nine drops of 0.1%

brilliant cresyl blue in 0.85% saline, and suspended for 1 min.

Modified Feulgen reaction (Lison 21 , 1960).

Rcaction was carried out in accordance with the original indications from

the authors, except for the fixation. Methanol was used for 3 min in whole

smears. Control by the treatment through DNase was carried out in 0.67M

phosphate buffer with 0.003M MgSO, (pH 6.5).

Hemolysis of blood smears

Thin blood smears were prepared on collodion-coated histological slides

and allowed to dry at room temperature for 18-20 h; hemolysis was performed

in a 0.8% sodium chloride solution containing 2.5% v /v of concentrated for-

malin. The smears were then stained for 5 min in an 1 % aqucous phosphotungstic

acid solution, washed in distilled water and dried at room temperature. The filrns

were transferred to copper grids and submitted to the chadow-casting process

with palladium (Brunner & Vallejo-Freire 7 , 1956). Also a 25% aqueous

glutaraldehydc solution was used at 2.5 v /v instead of concentrated formalin

(Coiro, Brunner & Mitsutani 12 , 1974).

Fixation and embedding for thin sectioning

Fixation in a glutaraldehyde gradient followed by osmium tetroxide

(Brunner & Coiro, 3 1973) in Millonig buffer (pH 7.3) (Millonig 25 , 1961).

Two fixing Solutions were prepared, the first with 2% glutaraldehyde (A), and

the second with 1% (B). Twelve drops of solution A were addcd drop by drop,

each followed by slight agitation, to an equal volume of blood mixed with the

150

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO. J.R.R. & BRUNNER Jr. t A. Chromatin extrusion mechanism in avian erytm-ocytes

(Gallus gallus) and Its posslble signiíicance.

Mem. Inst. Butantan, 39: 149-155, 1975.

anticoagulant. After 30 min, the blood fixed in solution A was mixed with the

solution B, proceeding the fixation for 2 h.

Direct fixation in potassium permanganate followed by osmium tetroxide

in veronal-acetate buffer (pH 7.3). For this method of fixation, blood was

harvested in 3.8% sodium citrate. Washings were carried out in the buffer; a

final fixation with 1% osmium tetroxide was done for 30 min.

Staining was done in an 1 % aqueous uranyl acetate solution for 30 min,

except for the cells directly fixed in potassium permanganate. Dehydration was

achieved in the alcohol series followed by acetone as intermediate médium, and

embedding in Polylite 8001 (Coiro & Brunner n , 1972). Ultrathin sections

were obtained in a Porter-Blum MT-I ultramicrotome, and the final staining was

achieved with lead citrate (Reynolds 26 , 1963). All preparations were examined

in UM 100b, and Elmiskop I electron microscopes with magnifications of X

1,300 - 40,000 at 60, and 80 Kv.

RESULTS

Light microscopy

Whole normal adult avian blood supravitally stained with brilliant cresyl

blue shows erythrocytes with refringent bodies, close to or distant from the

nucleus, varying in number from 1 to 3, with a predominant frequency of two

per erythrocyte. In some erythrocytes, bodies are observed closely contacting

the nuclear periphery, showing the same dye-affinity as the intranuclear material.

Through Feulgen reaction it was verified that some of the bodies present

in the cytoplasm, more or less distant from the erythrocyte nucleus, are positive.

In the DNase treated control smears none of the erythrocytes shows any Feulgen

positive cytoplasmic structure.

Electron microscopy

In hemolysed smears there appears a marked number of stromas containing

bodies with dimensions between 0.42 x 0.64, and 0.88 1 .2/x, and apparently

with the same nuclear density. Thcse components appear at several points, in

numbers varying from 1-3, generally two per stroma (Fig. 1). Excepting these

dense forms, the stroma shows itself free of structures that could suggest the

presence of whole organelles.

The material fixed in potassium permanganate followed by osmium tetro¬

xide shows vesicles at various cytoplasmic sites. In some instances, the configu-

ration suggcsts a continuity between the vesicle and the nucleus (Fig. 2).

However, cells fixed in a glutaraldehyde gradient followed by osmium tetroxide

show mitochondria close to an alrcady pyenotie nucleus. Such mitochondria

receive chromatinic material into their interior, at the same time when, through

the nuclear membrane’s pore, the passage of hemoglobinized cytoplasm to the

nucleus can be observed (Figs. 3,4). The cytoplasm does not show any more

polysomes, but monosomic forms can be present or not at all.

151

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. & BRUNNER Jr„ A. Chromatin extrusion mechanism in avian erythrocytes

(Gallus gallus) and lts possible significance.

Mem. Inst. Butantan, 39: 149-155, 1975.

DISCUSSION

Whole cells when supravitally stained show more or less spherical fornis.

Comparatively, the position is identical to that of Feulgen positive bodies, as

well as to the dense bodies observed in hemolysed smears.

In ultrathin sections it was possible to observe a simple connection between

the vesicle and the nuclcus, or a visible continuity between them, in such a way

that at certain points the filamentous or quite condcnsed chromatin is seen to

pass into the mitochondria, as in Figs. 3 and 4. Coiro 9 (1972) and Menezes et

al 22 (1972), observed by light microscopy Feulgen positive vesicles in erythrocytes

of Gallus gallus, Bufo ictericus, and Liophis miliaris miliaris, apparently origi-

nating from the nucleus. Brunner et al. 4 (1975), examining the peripheric blood

of adult carps ( Cyprinus carpio ) observed that mitochondria juxtapose themselves

on the nuclear membrane in order to receive chromatinic material, showing thus

the uncquivocal mitochondrial origin of those vesicles. Carvalho dos Santos 8

(1974) in Bufo, Coiro 10 (1974) in chickens and Menezes et al. 24 ( 1974) in 5

species of Bothrops, demonstrated the identity of the vesicle’s origin based on the

findings in C. carpio. These morphological observations were corroborated by

3 H-tymidine labelling of nuclei and vesicles of mitochondrial origin in Bufo (Me¬

nezes et al. 23 , 1974; Coiro et al. 14 , 1974).

Considering the elimination of a chromatinic fraction, that would displace

itself from the nucleus into the mitochondria (Fig. 4), perhaps it could be

suggested that this loss is somehow related to the chromosomic function,

blocking the genic activity of the nucleus. This hypothesis is supportcd by the

fact that the chromatinic elimination occurs simultaneously to the end of the

hemoglobin synthcsis, polysome degradation, as well as a determined inhibition

of the nuclear activity, where chromosomcs becomc heteropycnotic.

By comparison it may be infered that losses of chromatinic material in

chickens and mammals, in the latter by a complete extrusion of the nuclcus,

are possibly corrclated phenomena, although different as regards the hemoglobin

synthesis periods of time, considering that while the reticulocyte is engaged

in intense synthcsis, there occurs a chromatin loss in chicken erythrocytes

concomitant to the cessation of globin synthesis.

All those observations suggest that the problem of the DNA activity

blocking during maturation is also related to a chromatin reduction, and would

not occur through a simple negative retroalimentation mechanism. Admitting

that the hemoglobin present in the nuclei acts as histone, condensing the nuclear

DNA (Tooze & Davies 28 , 1963), it is obvious that a synthesis blocking would

occur alrcady during the immature phases, since mammal and avian erythroblats

present a considerable levei of intranuclear hemoglobin. However, this hypothesis

has no support on the fact that at this period of time the cells of mammals

(Borsook et al. 2 , 1968) and chickens devclop and intense hemoglobin synthesis.

l he presence of intranuclear hemoglobin seems to be more related to physical

phenomena, such as molecular pressure. As in Fig. 3, membrane pores, giving way

to pressure, would allow the passage of hemoglobinized cytoplasm into the nuclcus.

152

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. & BRUNNER Jr„ A. Chromatin extrusion mechanism in avian erythrocytes

(Gallus gallus) and its possible significance.

Mem. Inst. Butantan, 39: 149-155, 1975.

CHICKEN ERYTHROCYTES

Flg. 1 - Hemolyzed erythrocyte showing folds (arrows), electron dense bodies (b) and

nucleus (N).

Plg. 2 - Direct íixation in potassium permanganate followed by osmium tetroxide. Vesicle

(V); nucleus (N).

Fig. 3 - Flxation ln a glutaraldehyde gradient followed by osmium tetroxide. Vesicle (V);

arrows Show passage of chromatin filaments into the vesicle (V), and hemoglobinized cyto-

plasm into the nucleus through the nuclear membrane pores; nucleus (N).

Fig. 4 - Flxation in a glutaraldehyde gradient followed by osmium tetroxide. Mitochondrion

receiving dense chromatinic material (arrows); nucleus (N).

153

COIRO, J.R.R. & BRUNNER Jr., A. Chromatin extruston mechanism in avian. erythrocytes

(Gallus gallus ) and its possible signifícance.

ülem.. Inst. Butantan, 39: 149-155, 1975.

Acknowleclgements: The authors wish to thank Mrs. Vera Mondin Wcisz,

Mr. Alípio Silva Gonzales, Heitor Costa and Carlos Alberto Gonçalves Silva for

their technical assistance, and Mrs. Sibylle Heller for translation.

RESUMO: A constatação de corpos próximos ou distantes do

núcleo de eritrócitos de aves, levou a estudar sua origem e

significância através da reação de Feulgen, hemólise em esfre-

gaço e cortes ultrafinos. Ficou confirmado através dos métodos

utilizados, que os corpos são de origem mitocondrial, que rece¬

bem material cromatínico para o seu interior e, mais tarde,

adquirem uma ultra-estrutura aberrante, vesiculosa. A fixação

em gradiente de glutaraldeído seguido pelo tetróxido de ósmio,

facilitou a visualização da passagem de citoplasma hemoglobi-

nizado para o interior do núcleo, bem como a penetração de

cromatina, altamente condensada, para os mitocôndrios justa-

nucleares. Neste trabalho, os fenômenos da penetração de hemo¬

globina e extrusão cromátinica em eritrócitos de aves são dis¬

cutidos.

UNITERMO: Extrusão cromatínica em eritrócitos de aves.

REFERENCES

1. BESSIS, M. & BRICKA, M. Aspect dynamique des cellules du sang. Son

étude par la microcinématographie en contraste de phase. Rev. Hémat.,

7: 407-435, 1952.

2. BORSOOK, H„ HEIGLER, D. & GUNDERSON, A. Different patterns of

protein and hemoglobin synthesis before and after terminal differentia-

tion in adult rabbit marrow. Arch. Biochem., 125: 439-435, 1968.

3. BRUNNER JR., A. & COIRO, J.R.R. Fixation of erythrocytes in a glutaral-

dehyde gradient, followed by osmium tetroxide. An. Acad. brasil. Ciênc.,

45 (3/4): 678-679, 1973.

4. BRUNNER JR., A„ COIRO, J.R.R., MENEZES, H„ MITSUTANI, C.Y. &

CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S. Vesicles carrying nuclear material in

mature Cyprinus carpio erythrocytes. Experientia (Basel), 31: 531-532,

1975.

5. BRUNNER JR., A., COIRO, J.R.R., SCHWANTES, M.L. & SCHWANTES,

A.R. Hemosome and hemoglobin biosynthesis in embryos and in regres-

sive anemias. Mem. Inst. Butantan, 37: 335-344, 1973.

6. BRUNNER JR., A., SCHWANTES, A.R., SCHWANTES, M.L. & BEÇAK, W.

Hemoglobin in immature erythrocyte mitochondrion-like organelles. Expe¬

rientia (Basel), 28: 569-571, 1972.

7. BRUNNER JR., A. & VALLEJO-FREIRE, A. Electron microscopic observa-

tions on granules and filaments (reticulosomes) of reticulocytes. Exp. Cell

Res., 10: 55-62, 1956.

8. CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S. Personal communication. (1974).

9. COIRO, J.R.R. Unpublished observation. (1972).

10. COIRO, J.R.R. Estudo comparativo da ultra-estrutura de elementos da série

eritrocitária de aves e mamíferos. Correlação com a biossíntese de hemo¬

globina. São Paulo, 1974. [Tese Un. São Paulo].

154

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. & BRUNNER Jr., A. Chromatln extrusion mechanism in avian erythrocytes

(Gallus gallus) and its possible signiíicance.

Mem. Inst. Butantan, 39: 149-155, 1975.

11. COIRO, J.R.R. & BRUNNER JR., A. Polylite 8001: A new embedding mé¬

dium for electron microscopy. Rev. microsc. Electr., 1(1): 12, 1972.

12. COIRO, J.R.R., BRUNNER JR., A. & MITSUTANI, C.Y. Unpublished ob-

servations (1974).

13. COIRO, J.R.R., BRUNNER Jr., A., SCHWANTES, M.L. & SCHWANTES,

A.R. Hemoglobin in mitochondrion-like organelles of immature chick

embryo erythrocytes. Mem. Inst. Butantan, 37: 327-333, 1973.

14. COIRO, J.R.R., MENEZES, H., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SAN¬

TOS, M.A.S. & BRUNNER JR., A. Chromatin extrusion in erythrocytes

of Gallus, Bothrops, Bufo and Cyprinus species, and its significance. II. 0

Congresso Latino Americano de Microscopia Eletrônica e IV. 0 Colóquio

Brasileiro de Microscopia Eletrônica. Ribeirão Preto (S. Paulo), 1974.

15. COMANDON, J. & JOLLY, J. In: Traité techniques d’hematologie. Paris,

Maloine, 1923. v. 2.

16. DAVIES, H.G. Structure in nucleated erythrocytes. J. Biophys. Biochem.

Cytol, 9: 671-687, 1961.

17. GRANICK, S & LEVERE, R.D. Sintesis dei hem en las células eritroides.

In: Moore, C.V. & Brown E.B. Progresos en hematologia. Barcelona,

Editorial Científico-Médica, 1968. v. 2, p. 31.

18. GRASSO, A., SWIFT, H. & ACKERMAN, G.A. Observations on the develop-

ment of erythrocytes in mammalian fetal liver. J. Ceil Biol. 14- 235-254

1962.

19. HAMMEL, C.L., RASMUSSEN, P. & BESSMAN, S.P. Hemoglobin synthe-

sis. A nuclear function in the avian erythrocytes. J. Cell Biol., 19: 31-A,

1963.

20. JOLLY, J. Recherches sur la formation des globules rouges des mammifères.

Arch. Anat. micr. Morph. exp., 9: 133-314, 1907.

21. LISON, L. Histochimie et Cytochimie Animales. Principes et méthodes. Paris,

Gauthier-Villars, 1960. v. 2, p. 736.

22. MENEZES, H., COIRO, J.R.R. & BRUNNER JR., A. Vesículas FEULGEN

positivas de Bufo, Gallus e Liophis. Reun. Extraord. da Sociedade Brasileira

de Microscopia Eletrônica, (São Paulo) 1972.

23. MENEZES, H., MITSUTANI, C.Y. & BRUNNER JR., A. Unpublished ob¬

servations, 1974.

24. MENEZES, H., MITSUTANI, C.Y., COIRO, J.R.R., CARVALHO DOS SAN¬

TOS, M.A.S. & BRUNNER JR., A. Ultrastructure of mature erythrocytes

from five Bothropic species. Mem. Inst. Butantan, 38: 51-62, 1974.

25. MILLONIG, G. Advantages of a phosphate buffer for OsO., Solutions in fixa-

tion. J. Appl. Phys., 32(8): 1637, 1961.

26. REYNOLDS, E.S. The use of lead citrate of high pH as an electron opaque

stain in electron microscopy. J. Cell Biol., 17: 209, 1963.

27. RIND, H. & STOBBE, H. Über reife und unreife Retikulozyten. Folia

Haemat., 1: 219-229, 1957.

28. TOOZE, J. & DAVIES, H.G. The occurence and possible significance of

haemoglobin in the chromosomal regions of mature erythrocyte nuclei of

the newt Triturus cristatus cristatus. J. Cell Biol., 16: 501-511, 1963.

29. WILT, F.H. The ontogeny of chick embryo hemoglobin. Proc. Nat. Acad.

Sei., 48: 1582-1590, 1962.

Recebido para publicação em 16.IV. 1975 e aceito em 28.IX. 1975.

155

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 157-168, 1975

ULTRASTRUCTURAL ASPECTS OF MATURE

CYPRINUS CARPI O ERYTHROCYTES. *

ADOLPHO BRUNNER JR., JOSÉ RAFAEL R. COIRO,

CLARA Y. MITSUTANI, MARIA ANGÉLICA S. CARVALHO

DOS SANTOS and HÉRCULES MENEZES

Laboratory of Electron Microscopy, Instituto Butantan

ABSTRACT: Mature Cyprinus carpio erythrocytes Show a phe-

nomenon of Feulgen positive vesicle formation, begining from

a mitochondrion juxtaposed at the nuclear membrane. While con-

densed chromatin enters the mitochondrion, modifications occur

in the lamellar inner structure of the organelle, giving rise to a

vesicle which detaches from the nucleus and displaces itself

through the cytoplasm. Some aspects suggest that the vesicle

content is expelled from erythrocytes. It seems that this is a

general event for other mature nucleated vertebrate erythrocytes.

Other vesicles of unknown origin, some originating from de-

generated mitochondria, and others from the nuclear membra-

nes, were found.

A dense amorph material, never found in erythrocytes of

other vertebrates, was frequently present in the nucleoplasm, and

in the cytoplasm associated to the smooth endoplasmic reticu-

lum. Marginal bands, thinner than those found in erythrocytes

of other groups, were observed.

UNITERM: Ultrastructure of Cyprinus carpio erythrocytes.

INTRODUCTION

Information is scarce on the cytology of mature fish erythrocytes, espe-

cially at the ultrastructural levei. Concerning the mature erythrocytes of other

vertebrates, except mammals, there are only a few interesting references with

regard to the ultrastructure of mature chicken 6 ' 9 , bothropic species 14 ,

amphibians 5,6,10,19,21 anc j toadfish 10 erythrocytes.

* This research has been supported by the Conselho Nacional de Pesquisas (Proc. 10.112/71

and 11.268/74) and Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan.

Address: Caixa postal 65 - S. Paulo - Brazil

157

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

BRUNNER, J„ A., COIRO, J.R..R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

The structural coniponents of mature erythrocytes differ from group to

group, depending on the physiological behaviour of the respective speciniens.

However, such coniponents as the marginal band 6 ' 9 ’ 10 ' 14 ’ 19 ' ai * and vesicles

carrying chromatinic material 2 , 5 , 6 , 14 ^ are CO mmon occurrences in all mature

nucleated erythrocytes.

This paper reports on the ultrastructure of mature Cyprinus carpio

erythrocytes in comparison with findings in other nucleated erythrocytes.

MATERIAL AND METHODS

Blood samples were obtained by cardiac puncture from adult speciniens

free of hemoparasites, without the use of anticoagulants, or using 10% v /v of

2% EDTA solution adjusted to pH 7.3 — 7.4 by the addition of a 4%

NaHCO :i solution, resulting in a final concentration of 0.15% anticoagulant.

Rosenfeld staining

This staining according to Rosenfeld 17 , has been employed for the evalua-

tion of the general hematological aspects, and to assure the absence of parasitism.

Supravital staining

One drop of blood was added to 10 drops of a 0.65% NaCl solution,

containing 0.1% brilliant cresyl blue, to evaluate the proportion of erythrocytes

with basophilic reticulum.

Feugen reaction

In an attempt to verify whether the erythrocyte vesicle content could be

in part DNA, thin blood smears were submitted to the reaction according to

Lison 12 . Control smears were previously treated by 0.5% DNase in O.IM

phosphate buffer (pH7.2), for 50 min at 37°C, and by the buffer only, under

the same conditions.

Electron microscopy

Thin blood smears were submitted to hemolysis after drying for 4-6 h under

environmental conditions, in a 0.80% NaCl solution containing 2.5% v /v

concentrated formalin 3 , or a 2.5% v /v aqueous glutaraldehyde solution 8 ,

followed by phosphotungstic acid staining, and several washings in distilled

water 3 . Some hemolysed smears were then covered by a thin palladium film at

a 15.°-20.° shadow-casting angle.

For thin sectioning, fixation of the blood was performed as follows 1 : to

15 drops of blood, 15 drops of 2% glutaraldehyde in 0.20M Millonig’s buffer 15

were added, drop by drop, each of which followed by slow agitation; after 30

min, the suspension was diluted with 2-3 volumes of 1% glutaraldehyde in the

buffer, and fixed for 2 h. Erythrocytes were washed three times in the buffer,

and fixed for 20 min in 1 % osmium tetroxide in the same buffer. After staining

in an 1% aqueous uranyl acetate solution for 30 min, erythrocytes were

dehydrated in the alcohol series, and embedded in Polylite 8001-P 7 . Thin

sectioning was donc in MT-I and MT-2 Porter-Blum microtomes; the sections

were stained by lead citrate 16 .

158

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

BRUNNER, J., A., COIRO, J.R.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

AII preparations were examined in the ÜM 100b and Elmiskop I electron

microscopes, at 60 Kv, from 2,500 to 20,000 magnification.

RESULTS

Blood smears stained according to the Rosenfeld technique showed 2.5%

to 3 . 0% of immature erythrocytes, as well as absence of parasites in the

peripheral blood. Almost the same proportion of immature erythrocytes was

íound in blood supravitally stained with brilliant cresyl blue, in which these red

cells are characterized by a variable amount of basophilic reticulum. A high

number of mature erythrocytes presented from one to four basophilic granules

individually disposed at several cytoplasmic sites. Positive results for the Feulgen

reaction, were hardly visible in the cytoplasm. A good visualization of positive

results was possible in the vicinity of the nuclei. However, they could be mistaken

for nuclear protrusions. Erythrocytes of blood smears submitted to partial drying,

and then hemolysed, show an ellyptical stroma containing a central nucleus, gra¬

nular and rod-shaped forms with variations in diameter and length of about

0.40 fx or 0.25 — 0.60 /i x 1.20 — 1.50 //., respectively; in general, the

granules are more electron-dense than the rod-shaped forms (Figs. 1, 2).

Thin section of mature carp erythrocytes, commonly contain different kinds of

vesicles, mitochondria in various degenerative stages, and moderately dense

amorph masses, more or less compact and agglomerated, concomitantly pre-

sent in the cytoplasm, associated to the endoplasmic reticulum, and in the

nucleoplasm (Figs. 3, 4, 8, 9); an amorph mass can be seen in the nuclear

membrane pore, between cytoplasm and nucleoplasm (Fig. 5).

Mitochondria and erythrocyte nuclei are frequently connected by an

apposition of the externai mitochondria! and nuclear membranes (Fig. 4), or

through the passage of dense chromatinic material into the organelles (Figs.

5, 6). Such connections occurs always at nuclear region where chromatinic

material is juxtaposed to the nucleolema, at sites of variable distan-

ces from the nuclear pores, through which hemoglobinized cytoplasm enters

the nucleoplasm (Figs. 3, 4, 8, 9, 11). Convoluted chromatinic threads,

invade mitochondria still presenting their chracteristic structure (Figs. 5, 6),

or organelles which already had suffered a modification (Fig. 8). Mitochondria

that had received chromatin, modify and detach themselves from the nucleus

giving rise to frce vesicles (Fig. 9) containing dense, fibrous, as well as granulated

material.

Free vesicles containing myelin-like figures are constantly present in

erythrocytes. They seem to originate from the externai nuclear membrane, as

suggested in figures 10 and 11; some vesicles presenting myelin-like figures

originate from degenerated mitochondria which had not received chromatinic

material (Fig. 7). Vesicles apparently of other types, contain mainly small

vesicles or besides these small round elements, a fine fibrous material (Fig. 3a);

several vesicles contain only a few membrane traces or nothing at all (Figs. 3,9).

Vesicles carrying granular, fibrous, dense, amorphous materiais, and myelin-like

figures or traces of membrane, were found approaching the invaginated plasmic

membrane (Figs. 12, 13). These vesicles may be simple, or may agglomerate,

fusing among themselves.

159

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

ERUNNER. J., A., COIRO, J.R.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Biitantan, 39: 157-168, 1975.

MATURE CARP ERYTHROCYTES

Plgs. 1 and 2 - Cells from hemolysed blood smears.

Plgs. 1 and 2 - Cells from hemolysed blood smears. (N) nuclei;

large vesicles.

Flgs. 3 and 3a - Thln sectlon of the same cell. (N) nucleus; (n

drion: (er) endoplasmic retlculum; (arrow) amorph material; (V

origln; (V) vesicles of unknown orlgln.

(m)

mitochondria;

(V)

(m) degenerated mitochon-

(V) veslcle of mitochondrial

160

SciELO

ERUNNER. J., A., COIRO, J.R.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

THIN SECTIONS OF MATURE CARP ERYTHROCYTES

Fig. 4 - (N) nucleus; (m) mitochondrion juxtaposed at the nuclear membrane; (arrow)

amorph material.

Fig. 5 - (N) nucleus; (m) mitochondrion receiving chromatinic material; (arrow) amorph

material in the nuclear membrane pore.

Fig. 6 - (N) nucleus; (arrow) passage oí condensed chromatin into a partially modiíied

mitochondrion (m).

Fig. 7 - (N) nucleus; (m) partially modiíied mitochondrion containing dense material;

(V) vesicle, possibly of mitochondrial origin, containing myelin figures.

161

,• - : KW

0,5/xm

SciELO

BRUNNER. J., A., COIRO, J.R.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

0,5 fim

THIN SECTIONS OF MATURE CARP ERYTHROCYTES

Fig. 8 - (N) nucleus; (arrow) amorph mass; (p) - nuclear membrane pore; (V) a recently

constltuted vesicle; nearly detached from the nucleus, showlng condensed chromatinic

material.

Fig. 9 - (N) nucleus; (arrows) amorph masses ln cytoplasm and nucleoplasm; (V) vesicle

containing dense material, recently detached from the nucleus.

162

SciELO

BRUNNER J„ A., COIRO, J.B.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS,

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

M.A.S.

THIN SECTIONS OP MATURE CARP ERYTHROCYTES

Pig. 10 - (N) nucleus showing invagination. A convoluted membrane wlthin the increased

perlnuclear space can be observed (arrow).

Flg. 11 - (N) nucleus; (V) vesicle conataining a myelin-like figure, almost detached from

the nucleus.

Pig. 12 - (V) vesicles fusing among themselves, approaching the plasmic membrane at an

invaginated region (arrow).

163

SciELO

BRUNNER, J., A., COIRO, J.B.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

Several sections of mature erythrocytes show relatively thin marginal bands

ranging from 140 to 250 m^ in diameter. They are frcquently detected in

longitudinal sections (Fig. 14), and occasionally in cross sections (Fig. 15),

where fifteen to eighteen microtubules of 18 to 21 m/x in diameter can be seen.

DISCUSSION

The absence of parasitism in the peripheral blood of Cyprinus carpio

spccimens, as confirmcd through the Rosenfeld staining 17 , allows secure

interpretations on hemolyscd, as well as on sectioned erythrocytes. In the former

instance (Figs. 1, 2), the rod-shaped forms, generally disposed around the

nucleus, can be taken as mitochondria, according to earlier demonstrations on

immature mammalian erythrocytes 4 ’ 20 . This interpretation is also supported by

thin sectioned erythrocytes, where mitochondria are observed in the same

dispositions (Figs. 4, 6, 7, II). The granular forms, more electron-dense than

the rod-shaped ones (Fig. 2) present themselves in the same disposition,

and possibly correspond to the vesicles carrying nuclear material (Figs.

8, 9). Their higher density may be due to the condensed chromatinic

content. Hemolysis of red blood cells in partially dricd smears, permits a global

visualization of their organelle constitution, as well as on the disposition of

such elements.

The outstanding phenomenon is the formation of vesicles carrying

chromatinic material. They originate from mitochondria, an event which

seems to be general for mature chickcn 6 , bothrops snake 14 , frog 5 and

carp 2 erythrocytes. Feulgen reaction, donc on erythrocytes from spccimens of

all those vertebrates, was always positive, although these results were not con-

clusive. However, mature frog erythrocytes showed labelled vesicles when

3 H-thymidine was given to animais, previously turncd anemic through

phenylhydrazine in order to activate erythropoiesis, and thus enhancing the

incorporation of this DNA basis 13 . Obviously chromatin labelling persists until

the last erythrocytic maturation stage where the phenomenon of vesicle formation

takes place. This occurrence was never detected in immature forms through

Feulgen reaction or electron microscopy.

Formation of vesicles begins by mitochondria juxtaposition on the nuclear

membrane at regions where chromatin is disposed (Fig. 4); hence, this occurs

at points more or less distant from the nuclear pores through which hemoglo-

binized cytoplasm enters the nucleoplasm (Figs. 3,4,8,11). While condensed

chromatin penetrates into the mitochondrion, a disorganization of its inner

lamellar strueture gradually occurs (Fig. 6). Alter cessation of chromatin

penetration, mitochondria may still present vestiges of their strueture (Fig. 7)

or lose it completely, as shows in figures 8 and 9. These modiíied organelles

displace themselves through the cytoplasm, approaching the plasmic membrane.

At this region the membrane invaginates (Figs. 12, 13), suggesting a possible

occurrcnce of a phenomenon of exocytosis, like that which may occurs in final

maturation stages of mammalian reticulocytes n ’ 18 . When inner mitochondrial

membranes disappear, organelle diameters increase gradually from about 0.14

(Fig. 4) to 0.40 p (Fig. 8); vesicles in the proximity of the plasmic membrane

reach diameters ranging from 0.60 (Fig. 12.) to 0.70 p (Fig. 13).

164

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

BRUNNER J., A., COIRO, J.R.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

0,5/xm

THIN SECTIONS OF MATURE CARP ERYTHROCYTES'

Fig. 13 - (V) vesicles near the plasmic membrane, one oí which already contacting the

invaginated plasmic membrane; (arrow) amorph mass partially surrounded by the smooth

endoplasmic reticulum.

Fig. 14 - Longitudinally sectioned microtubules, constituting the marginal band (arrows).

Flg. 15 - Transversally sectioned microtubules (arrow).

165

BRUNNER J„ A., COIRO, J.B.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS. M.A.S.

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects oí mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

It would be of interest to verify whether vesicles still contain active DNA

or only produets from the DNA degradation. On the other hand, the possibility

of a correlation between this phenomenon and the nuclear extrusion in mammal

orthochromatic erythroblasts, shoud be considered.

Several vesicles commonly found in erythrocytes are of different origin. In

figures 3 and 3a it is difficult to ascertain the origin of vesicles of low density

and of the one containing small vesicles among granular and fibrous material.

The degenerated mitochondrion of figure 3, distant from the nucleus, continuing

the degenerative process, could originate the moderately dense vésielê of figure

3a. Mitochondria may also degenerate (Fig. 7) through modifications oceurring

in their inner lamellar strueture, from which myelin figures rise.

A region of the nucleus may invaginate, accompanied by a convolution-like

process of the inner nuclear membrane, and an increase of the perinuclear space

at this region (Fig. 10). Afterwards the whole set protrudes, giving rise to a

vesicle limited by the externai nuclear membrane whose content is a myelin-like

figure originating from the inner membrane (Fig. 11). This may be related with

the nuclear volume reduction possibly oceurring even in the last stage of

erythrocytary maturation. No such phenomenon was detected in erythrocytes

of spccimens of other groups.

Erythrocyte nucleoplasm and cytoplasm frequently contain some amorphous

material presenting an intermediary density between ehromatin and both plasmas

(Figs. 3, 8, 9, 13). These masses, generally associated to the smoth endoplasmic

reticulum (Figs. 3,13), were never found in erythrocytes of other groups. Their

nature and origin are unknown, but the presence of such a mass in the nuclear

membrane pore (Fig. 5), and its position sometimes distant from the nucleus

(Figs. 3, 13) may, although remotely, suggest a nuclear origin.

The marginal bands of carp erythrocytes are thin, compared to that found

in erythrocytes of other groups 6 , 9 , 10 , 14 , 19 , 2 ^ S p C cially as regards the diameter,

about 700m/z of the chelonian erythrocyte band 8 . Correspondingly the number of

microtubules is also lower, although the possibility that degenerative bands of

old erythrocytes had been observed, can not be excluded.

Acknowledgements: The authors wish to tank Mrs. Vera Mondin Weisz,

Mr. Alípio Silva Gonzales, Mr. Carlos Alberto Gonçalves Silva and Mr. Heitor

Costa for their excellent technical assistance, and Mrs. Sibylle Heller for her

editorial aid and translation.

RESUMO: Eritrócitos maturos de Cyprinus carpio mostram um

fenômeno de formação de vesícula Feulgen positiva, originária

de um mitocôndrio justaposto à membrana nuclear. Enquanto

a cromatina condensada penetra no mitocôndrio, o organelo

sofre modificações na estrutura lamelar, dando origem a uma

vesícula que se destaca do núcleo e se desloca através do cito¬

plasma. Alguns aspectos sugerem que o conteúdo da vesícula é

eliminado do eritrócito. Este mecanismo parece ser geral para

os eritrócitos maturos nucleados de outros vertebrados. Outras

vesículas de origem desconhecida, algumas originadas de mito-

166

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

BRUNNER, J„ A., COIRO, J.R.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S.

& MENEZES, H. ültrastructural aspects oí mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

côndrios degenerados e outras da membrana nuclear, foram

observadas.

Um material denso e amorfo, nunca encontrado em eritró-

citos de outros vertebrados, estava frequentemente presente no

nucleoplasma e no citoplasma, associado ao retículo endoplas-

mático liso. Bandas marginais, de menor diâmetro que as de

eritrócitos de outros grupos, foram observadas.

UNITERMO: Ultra-estrutura de eritrócitos de Cyprinus carpio.

REFERENCES

1. BRUNNER JR., A. & COIRO, J.R.R. Fixation of erythrocytes in a glutaral-

dehyde gradient, followed by osmium tetroxide. An. Acaá. bras. Ciên., 45:

678-679, 1973.

2. BRUNNER JR., A., COIRO, J.R.R., MENEZES, H., MITSUTANI, C.Y. &

CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S. Vesicles carrying nuclear material in

mature Cyprinus carpio erythrocytes. Experientia (Basel), 31: 531-532,

1975.

3. BRUNNER JR., A. & VALLEJO-FREIRE, A. Electron microscopic observa-

tions on granules and filaments (Reticulosomes) of reticulocytes. Exp. Cell

Res., 10: 55-62, 1956.

4. BRUNNER JR., A., VALLEJO-FREIRE, A. & SOUZA SANTOS, P. Electron

microscopy of thin sections of reticulocytes. Experientia (Basel), 12: 255,

1956.

5. CARVALHO DOS SANTOS, M A S. Unpublished observations, 1973.

6. COIRO, J.R.R. Ültrastructural comparative study on elements of avian and

mammalian erythrocytary series. Correlation with hemoglobin biosynthe-

sis. Thesis (condensation), Univ. S. Paulo, 1975. Mem. Inst. Butantan (in

press).

7. COIRO, J.R.R. & BRUNNER JR., A. Behaviour of Polylite 8001 with plas-

ticizing additives. An. Acad. bras. Ciên., 45: 679-680, 1973.

8. COIRO, J.R.R., BRUNNER JR., A. & MITSUTANI, C.Y. A simple method

for the observation on the marginal band in avian and chelonian erythro¬

cytes (submitted to appreciation).

9. DAVIES, H.G. Structure in nucleated erythrocytes. J. Biophys. and

Biochem. Cytol,, 9: 671-687, 1961.

10. FAWCETT, D.W. & WITEBSKY, F. Observations on the ultrastructure of

nucleated erythrocytes and thrombocytes, with particular reference to the

structural basis of their discoidal shape. Z. Zelljorsch., 62: 782-806, 1964.

11. GASKO, O. & DANON, D. Deterioration and disappearance of mitochondria

during reticulocyte maturation. Exp. Cell Res., 75: 159-169, 1972.

12. LISON, L. Histochimie et Cytochimie Animales. Príncipes et méthodes. Pa¬

ris, Gauthier-Villars, 1953. I, p. 475-480.

13. MENEZES, H„ BRUNNER JR., A. & MITSUTANI, C.Y. Unpublished

results, 1974.

14. MENEZES, H., MITSUTANI, C.Y., COIRO, J.R.R., CARVALHO DOS SAN¬

TOS, M A S. & BRUNNER JR., A. Ultrastructure of mature erythrocytes

from five bothropic species. Mem. inst. Butantan, 38: 51-62, 1974.

167

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

BRUNNER, J„ A., COIRO, J.B.R., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S,

& MENEZES, H. Ultrastructural aspects of mature Cyprinus carpio erythrocytes.

Mem. Inst. Butantan, 39: 157-168, 1975.

15. MILLONG, G. Advantages of a phophate buffer for OsO, Solutions in fixa-

tion. J. Appl. Phys., 32 (8): 1637, 1961.

16. REYNOLDS, E.S. The use of lead citrate of high pH as an electron opaque

stain in electron microscopy. J. Cell Biol., 17: 209, 1963.

17. ROSENFELD, G. Corante pancrômico para hematologia e citologia clínica.

Nova combinação dos componentes do May-Grünwald e do Giemsa num

só corante de emprego rápido. Mem. Inst. Butantan, 20: 329-334, 1947.

18. SIMPSON, C.F. & KLING, J.M. The mechanism of mitochondrial extrusion

from phenylhidrazine-induced reticulocytes in the circulating blood. J.

Cell Biol., 36: 103-109, 1968.

19. TOOZE, J. & DAVIES, H.G. Cytolysomes in amphibian erythrocytes. J. Cell

Biol., 21: 146-150, 1965.

20. VALLEJO-FREIRE, A. & BRUNNER JR., A. Eritrócitos na reticulocitose do

saturnismo experimental. Mem. Inst. Butantan, 28: 245-266, 1958.

21. VANKIN, G.L., BRANDT, E.M. & DeWITT, W. Ultrastructural studies of

red blood cells from thyroxin-treated Rana catesbeiana tadpoles. J. Cell

Biol., 47: 767-772, 1970.

Recebido para publicação em ll-IV-1975 e aceito em 28-IX-1975.

168

2 3 4 5 6 SCÍELO lo h i2 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 169-206, 1975

COMPARAI !VE STUDY ON THE

ULTRASTRUCTURE OF THE ELEMENTS OF THE AVIAN

AND MAMMALIAN ERYTHROCYTIC SERIES.

CORRELATION VVITH HEMOGLOBIN BIOSYNTHESIS. *

JOSÉ RAFAEL R. COIRO

Laboratory of Electron Microscopy, Instituto Butantan

ABSTRACT: Ultrastructural studies of the erythron of birds and

mammals were made in smears of stromata and in ultrathin sec-

tions of erythrocytes from the peripheral blood of normal and

anemic animais.

Polyacrylamide gel electrophoresis and spectrophotometry

were also used to detect intrahemosomal hemoglobin and the

presence of heme group in the supernatants of fraction lysates.

Chromatin extrusion in mature avian erythrocytes was correla-

ted to nuclear extrusion in mammal orthochromatic erythro-

blasts. Furthermore, the nature of “Substantia Granulo-Filamen-

tosa” (Sgf) was studied in birds and mammals, as well the

degree of cell maturation as reaveled by polysome countings per

H 2 . The marginal band has been investigated in ultrathin sec-

tions and smears of hemolysed blood.

Results may be summarized as follows:

1. In smears of hemolysed blood, filaments of larger dia-

meter representing Sgf may be identified as mitochondria,

whereas those of smaller diameter are interpreted as hemosomes.

2. In bleeding anemias, Sgf is almost exclusively made out

of mitochondria.

3. The genesis of hemosomes is the same in birds and

mammals and is related to hemoglobin biosynthesis.

4. No connection exists between intranuclear hemoglobin

and synthesis blockade. This is related to chromatinic extrusion

concomitant to polysomic dissociation.

5. In bleeding anemias avian and mammalian responses of

the hemopoietic tissue differ in reaction time.

» Condensed írom a Doctorate’s Thesis presented to the Instituto de Biociências da Uni¬

versidade de São Paulo, Brasil. Supported by grant. n.° 11.218/74 írom the Conselho

Nacional de Pesquisas.

Address: Caixa Postal 65 — São Paulo — Brasil.

169

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure oí the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206. 1975.

UNITERMS: Ultrastructure of avian and mammalian erythro-

cytes. Hemoblobin biosynthesis.

INTRODUCTION

Through microspectrophotometry it has been demonstrated that during

erythrocyte maturation basophilia decreases as hemoglobin concentration in-

creases (Thorell 93 , 1950). In basophilic erythroblasts a decrease of ribonu-

cleoprotein is noted, as well as the disappearance of the nucleolus. The Golgi

complex, other structures, and organelles (Orlic et al. 69 , 1965; Simpson &

Kling 91 , 1967) have been observed.

The polychromatophilic erythroblast is characterized by a decrease in the

number of mitochondria; hemoglobin synthesis is initiated, conferring a higher

cytophasmic density in relation to the basophilic erythroblast.

In orthochromatic erythroblasts the membrane pores tend to disappear,

and chromatin undergoes condensation. Still in this phase the nucleus is extruded,

and less frequently suffers karyolysis or karyorrhexis according to the observa-

tions of Astaldi et al. 1 (1950) and Leonardi 59 (1951 ). After the extrusion,

the reticulocyte phase follows, showing an intense hemoglobin synthesis in the

Peripherie blood (Seno 87 , 19 5 8; Fantoni et al. 41 , 1968; Brunner 14 , 1968),

which results in the appearance of the mature erythrocyte.

The first observations of microtubules in lower vertebrate erythrocytes were

made by Ranvier 80 (1875), Dehler 35 ( 1895) and Nicholas 67 (1896). Me-

ves 65 (1903) observed these structures in avian erytrocytes by supravital

staining, and suggested that the microtubules, composing the marginal band,

confer to them their chracteristic biconvex shape. Weidenreich 97 (1905) con-

sidered the band as an artifact due to the staining technique. Fawcett 42 (1959)

however, was able to ascertain by electron microscopy the actual existence of the

marginal band in erythrocytes of the toadfish ( Opsanus tau). Fawcett & Wi-

tebsky 43 (1964) described the band as forrned by 25 parallel tubules of about

200 A each, and State that this band is responsible for the elliptical shape of

lower vertebrate erythrocytes. They proposed the term “endoplasmic ring" for

this structure of both erythrocytes and thrombocytes of the toadfish. Grasso 46

(1966) supposed that the function of the band is closely related to the shape

and elasticity of mammalian erythrocytic cells.

Endocytosis is the generic term given to any type of incorporation of subs-

tances into the cell (Bessis 6 , 1972). Lewis 60 (1931 ) observed the incorporation

of droplets, 1-5 /x in diameter, calling this mechanism pinocytosis. Endocytosis

of dense substances such as ferritin has been analysed by Bessis & Breton-Go-

rius 7 (1956) and Bessis 5 (1958). Parks & Chiquoine 70 (1957) observed

this mechanism for silver compounds.

Ribonucleoproteins are constituted of about 50% RNA, and 50% proteins

(Dintzis et al. 38 , 1958). Warner et al. 96 (1962), found in reticulocytes that

ribonucleoproteins can present themselves from monosomic to polysomic forms.

The arrangement most frequently found is the pentamerous one whose mono-

somes are united by a thin filamentous m-RNA bridge. Mathias et al. 63 (1964)

demonstrated that this bridge of ribonucleic nature is sensitive to RNase.

Glowacki & Millette 45 (1965) believed that in the course of maturation a

170

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

total disaggregation of pentamerous polysomal forms directly to monomerous

forms would occur, contrary to Marks et ai. 62 ( 1963) and Rifkind et al. 83

(1964) who affirm tliat this disaggregation is gradual, i.e., pentamerous, tetra-

merous, trimerous, dimerous, and momomerous. Burka & Marks 24 (1967),

maintain that the last RNA to disappear is the t-RNA, although no more globin

synthesis occurs in the already nearly mature reticulocyte. The polysomic acti-

vity during the protein synthesis is higher in the polychromatophil and the

orthochromatic erythroblasts (Rifkind et al. 83 , 1964), as well as in the less

mature reticulocytes (Glowacky & Millette 45 , 1965). Based on the theory

of Jacob & Monod 51 (1961) as to the relationship between nucleus and cy-

toplasm it is possiblc to assume that the m-RNA and t-RNA are synthesised

still in the erythroblastic phase, since reticulocytes do not contain any more

DNA. There is evidence that biosynthesis of the r-RNA precursors occurs within

the nucleolus (Brown & Gurdon 12 , 1964; Penman et al. 72 , 1966; Edstron &

Daneholt 40 , 1967; Izawa & Kawashima 60 , 1968). Seno et al. 88 (1963) and

Pinheiro et al. 75 (1963) demonstrated the absence of DNA synthesis both in

reticulocytes and the different RNA types.

Brunner & Vallejo-Freire 22 (1964) found convoluted forms in reticulo¬

cytes, similar to myelin figures, which can be observed in a great variety of

cells, such as mature erythrocytes about to lyse (Policard et al. 76 , 1957),

branchial epithelium of salamander (Schultz & De Paola 86 , 19 5 8), cultured

cells of guinea-pig testides infected with viruses and rickettsiae (Brunner, 1961

— personal communication), mitochondria of leucocytes within the epithelium

of patients with American tegumentary leishmaniosis (Coiro et al., 1973 —

umpublished observations), and mitochondria of pancreatic cells of normal adult

rats (Coiro & Souza Dias, 1973 ■— umpublished observations).

Since the work of Cesaris-Demel 26 (1907) up to present, the pre-existen-

ce of organelles in reticulocytes has becn discussed although the work of

Simmel 90 (1926), Seyfart 89 (1927), Sano 85 ( 19 5 5) and Brecher 11 (1958),

allowed cleary the observation of the “Substantia granulo-filamentosa” (“Sgf”).

Even so, other authors considered the “Sgf” as an artifact resulting through the

applied staining technique, due to ribonuclcoprotein precipitation caused by su-

pravital dyes such as brilliant cresyl blue and Janus green B (Dustin 39 , 1947;

Thorell 93 , 1950; Burt et al. 25 , 1951; Bessis 4 , 1954; Thoma 92 , 1959).

Bernhard et al. 2 (1949) observed under the electron microscope reticulo¬

cytes after osmotic hemolysis. This procedure allowed the observation of circular

membranous intrareticulocytary forms whose nature also was much discussed by va-

rious authors as Braunsteiner & Bernhard 9 (1950), Bessis 3 (1950), Peters & Wi-

gand 74 (1950), Wolpers 100 (1956), Brunner & Vallejo-Freire 21 (1956),

Jung 54 (1959) and Hug et al. 49 (1959). Brunner & Vallejo-Freire 21 (1956)

however, found filamentous forms, granules, and fine filaments in hemolysed

reticulocytes after partial drying. At this same period of time, Braunsteiner et

al. 10 (1956), and Brunner et al. 23 (195 6) confirmed the presence of mito¬

chondria in those cells. Later, Brunner 13 (1962) clearly demonstrated the mi-

tochondrial and ribosomic nature of the “Sgf” in association with the dye. Gra¬

nules and fine filaments were interpreted as ribosomes and smooth endoplasmic

reticulum (ER) respectively.

Reimann 81 (1942) working with chicken proerythrocytes concluded that

171

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytlc series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

the hemoglobin biosynthesis is not related to the nuclcus but to the “Sgf”. Jensen

et al. 52 ( 19 5 3) verified that hemoglobin biosynthesis is related to the amount

of “Sgf”. Brunner & Mombrum 19 (1972) demonstrated in mammalian reticu-

locytes the presence of organelles, which, on account of their ultrastructural

similarity with mitochondria, were denominated mitochondrion-like organelles

(MLO). Brunner et al. 20 (1972) suggested that the final hemoglobin biosyn¬

thesis occurs in the MLO or hemosomes.

The purpose of the present work is to analyse comparatively the ultras-

tructural aspects os the avian and mammalian erythron, and to clucidate several

points in relation to morphology and physiology. Aecordingly, we planned a

study on the following: a) origin and nature of the cytoplasmic vesicles

present in avian erythrocytes; b) ultrastructural identity of avian and

mammalian “Substantia granulo-filamentosa”; c) genesis of the mitochondrion-

like organeles; d) hemoglobin presence in MLO from birds; e) estimation

of the cell maturity degree in the avian erythron.

MATERIAL AND METHODS

Material

Avian blood

Adult chickens (Gallus gallus), 2.5 — 3.0 kg. Blood was harvested from

the marginal wing vein or by cardiac puncture.

Embryos, 14-18 days old, and newborn chicks. Blood was harvested by

cardiac puncture.

Adult chickens with anemia induced by bleedings, withdrawing daily

30-40 ml of blood during 2-3 days. One to two days after the last cardiac

puncture, blood was harvested.

Adult chickens with anemia induced by phenylhydrazinc in an 1 % aqueous

solution in a 1 ml/kg ratio, by subcutaneous injections per 4 days. Five days

after the last dosis the blood was harvested.

Mammalian blood

Adult guinea-pigs (Cavia porcellus), weighing 250-300 g, with

phenylhydrazine-induced anemia injected in an 1% aqueous solution in a

1 ml/kg ratio, during 3 successive days. Three days after the last dosis, blood

was withdrawn.

Adult guinea-pigs (Cavia porcellus ) 250-300 g eacli, with anemia induced

by successive bleedings by cardiac puncture, withdrawing 5 ml during 5

successive days. Three days after the last puncture, blood was harvested.

Rabbit embryos (Oryctolagus cuniculus), 16-20 days old. Blood was har¬

vested after sectioning the umbilical cord.

Human blood

Blood from a patient with acquired hemolytic anemia was harvested by

venous puncture.

172

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparaiive study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytie series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

Methods

Rosenfeld 84 staining (1947, modified)

The modification consisted in the dilution of the dye in a 1:4 ratio on the

slide, with degasified distilled water, leaving the diluted dye in contact with the

sntear for 2 h.

Supravital staining with brilliant cresyl blue

One gram dye was dissolved in 1 liter of a 0.85% (1:1000) saline solu-

tion. Cells were stained in a 1:9 ratio of blood drops and dye respectively.

Feulgen reaction (Lison 61 , 1953, modified)

The original indications of Feulgen-Rosembeck (1924) were followed

except for the fixation of the smears, which was carried out in methanol for

3 min.

Hemolysis. Technique A — According to Brunner & Vallejo-Freire 21

(1956). Technique B — Followed the procedure of technique A, but with a modified

fixing process introduced for mature erythrocytes. Instead of formol, 25%

glutaraldehyde in 90 ml NaCl at 0.80% in an amount of 10 ml was used

mainly in order to improve the degree of preservation of stroma structures, as

for instance the marginal band, and organelles (Coiro et al., 1973 —

unpublished observations). Technique C — The same as A, however, modified

as to the partial drying. The drying lasted for 5 min at 40°C in order to obtain

circular forms (Coiro & Brunner, 1972 — unpublished observations). Technique

D — Hemolysis in suspension to obtain circular forms in mammalian blood

(Brunner & Vallejo-Freire 21 , 1956).

Fixation

Blood was harvested into an anticoagulant consisting of 0.75 ml of 2%

EDTA, and 0.25 ml of 4% sodium bicarbonate in a 1 ml per 10' ml ratio.

Double fixation

Fixation in a glutaraldehyde gradient followed by osmium tetroxide in

Millonig buffer (pH 7.3) (Brunner & Coiro 16 , 1973).

Direct fixation in potassium permanganate followed by osmium tetroxide

in veronal acetate buffer (pH 7.3).

Simplc fixation

Direct fixation in 1% osmium tetroxide in Millonig buffer (pH 7.3)

for 20 min.

Fixation in hypotonic médium for phosphotungstic acid (PTA) staining

(Brunner & Mombrum 19 , 1972).

For blood fixed in glutaraldehyde and osmium tetroxide, the staining was

done in an aqueous 1% uranyl acetate solution (Kellenberger et al. 56 , 195 8)

for 30-40 min.

Dehydration was carried out in the alcohol series at 30%, 50%, 70%,

173

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparatlve study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

95%, 100% with pure acetone in a 1:1 ratio, and finally in pure acetone, for

10 min each.

Pre-imbibition — Imbibition — Embedding

Pre-imbibition was carried out in a 1:1 Polylite 8001 (Coiro et al. 33 ;

Coiro & Brunner 28 , 1972) and pure acetone mixture for 1-2 h.

Polylite 8001 mixtures

A — Polylite 8001 . 10 ml (Coiro et al. 33 , 1972)

Benzoyl peroxide . 0,2 g

B — Polylite 8001 . 9 ml (Coiro & Brunner 29 , 1973)

Dibutylphtalate . 1 ml

Benzoyl peroxide . 0,2 g

C — Polylite 8001 . 7 ml (Coiro 27 , 1972)

Benzoyl peroxide . 0,2 g

Polylite T 200 . 3,0 ml

Imbibition of all material was carried out with Polylite 8001 or Polylite

8001-P (Polylite with a plastifyer) for 24 h in intermittent resuspension. Em¬

bedding was carried out in gelatin capsules, n.° 0 or n.° 00. Into all capsules,

5 drops of blood imbibed in polyester were placed, and made up with the

polyester in use. The cells were then centrifuged at 550Xg for 30 min. Poly-

merization was achieved in an incubator at a constant temperature of 58°C

for 72-96 h.

Ultramicrotomy — final staining — electron microscopy

MT-1. and MT-2 (Porter Blum) ultramicrotomes were used with crystal

or diamond knives. Ultrathin sections were stained by lead citrate (Reynolds 82 ,

1963), and washed in degasified distilled water. Electron microscopes Siemens

UM 100b, Elmiskop I, and Zeiss EM-9S2 were used for the examinations.

Accelerating potencies varied from 60 to 100 Kv.

Fractionation, organelle isolation, and hemoglobin determination in avian blood

Blood was harvested by cardiac puncture from 60 embryos, 16 days old.

Immature crythrocytes were fractionated, and the mitochondrion-like organelles

(MLO) were isolated, washed and lysed according to the following procedure:

a) addition of 4 ml blood to 8 ml of a solution prepared according to

Glowacki & Millette 45 (1965); b) centrifugation of the cell suspcnsion at 200Xg

(900 rpm R=21 cm) for 10 min; c) resuspension of the sediment in a 0.32 M

sucrose solution, 10 times its volume, according to Wcinbach 98 (1961); d)

homogenization in a Potter-Elvehjem tube, in the cold at about 1,000 rpm with

10 movements; e) centrifugation of the homogenate at l,350Xg (R=21 cm) for

10 min; f) centrifugation in the cold of the supernatant at 14,830Xg (15,000

rpm — Spinco L, rotor 40) for 10 min; g) three washings by resuspension of

the pellet with 0.32M sucrose, and controlling of the fraction’s purity degree by

electron microscopy; h) harvesting the last washing supernatant to be used as

174

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

/jim

líEMOLYSED SMEARS

Flgs. 1 and 2 - Mature avian erythrocytes: 1 - (N) nucleus;

Flgs. 1 and 2 - Mature avian erythrocytes: 1 - (N) nucleus; (V) vesicles. 2 - (N)

(F) fold; (arrow) microtubule bundle.

Fig. 3 - Immature avian erythrocytes: (N) nucleus; (f) filaments.

Fig. 4 - Orthochromatic mammal erythroblast: (N) nucleus in extrusion: (f)

(Sgf); (arrow) stroma.

nucleus;

filaments

SciELO

COIRO, J.R.R. Comparatlve study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammallan erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

control; i) osmotic lysis by resuspcnding the pellet in 3 ml degasified distilled

water; j) centrifugation of the suspension at 20,000Xg for 10 min, and concentra-

tion in a vacuum chamber of the supernatants and control; k) determination

of hemoglobin by electrophoresis.

Fractionation, organelle isolation and hemoglobin determination in mammalian

blood

For mammalian blood, several modifications of the procedure were adapted.

In item “f”, 10,000Xg instead of !4,830Xg was used, and in item “g”, 5 instead

of 3 washings were carried out.

Electrophoresis in disc polyacrylamide gel, and spectrophotometry of the

concentrated supernatants

The method of Dietz & Lubrano 37 (1967), was used for electrophoresis,

and spectrophotometry was performed in accordance with the method of Kampen

& Zijlstra 55 (1964).

Estimation of the degree of erythrocyte maturation (Brunner & Coiro, 1973 —

unpublished observations)

In mammals, the orthochromatic phase is easily recognized by the irregular

cytoplasm configuration as well as by the eccentric disposition of the nucleus.

Therefore, tliis phase has been selectcd as the point of reference for the polysome

countings.

In birds, in the orthochromatic phase no evidence of irregular cytoplasmic

configuration or perceptible nuclear eccentricity can be found. Therefore, an

identification of the various maturation phases is very difficult. Basophilia of a

cell, in a higher or lesser degree, depcnds on the amount of polysomes. Knowing

the frequency of the polysomes, and their variations in the orthochromatic

mammalian erythroblast (x ± y), the determination of the polysome frequencies

in immature avian cclls allows a close estimate of their identity.

A valuc higher than x + y would allow the identification of an avian

erythroblast at least as polychromatophilic; a value between x ± y, as

orthochromatic, and less than x — y, as proerythrocyte, corresponding to the

reticulocytc of mammals.

To attain these results, the following procedure was used:

1) Estimation of the negative magnification;

2 ) weighing of the photographic paper in order to estimate a determined area

per gram;

3) weighing of the cytoplasm free of organelles, nucleus, and othcr structures

for subsequent estimate of the cytoplasmic area;

4) conversion of the cytoplasmic area to ju. 2 ;

5) counting of the polysome number in the whole cytoplasmic area, and

estimate of the polysome number per /t 2 .

176

l l SciELO

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

5/j.m

2/j.m

HEMOLYSED SMEARS

Figs. 5 and 6 - Mammal embryo reticulocytes (Prohematia) : 5 - (er) endopalsmic reti-

culum (arrow) polysome; (í) filaments. 6 - (f) a great number of fllaments

Fig. 7 - Immature cell of avian embryo: (N) nucleus; (f) filaments; (p) polysome; (arrow)

stroma.

Fig. 8 - Reticulocyte (Prohematia) from phenylhydrazine intoxicated adult mammal: (f)

filaments; (asterisk) stroma; (star) segmented filament.

177

SciELO

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammallan erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

Calculation of the polysome number per p. 2 can be made according to the

following formula:

Np/p. 2 =

Pp. A 2 . Np

. Ap

Np/ju. 2 = number of polysomes per p 2 ;

Pp = weight of the known area of the photographic paper;

A 2 = increase of the photographic magnification, squared;

Np = polysome number in the cytoplasm free of other structures;

weight of the cytoplasm free of nucleus, organelles, and other

structures;

known area of the photographic paper.

RESULTS

Rosenfeld 84 staining (1947 — modified)

ln order to estimate the percentage of the different immature forms, this

staining was used for the normal blood of chickens, embryos, as well as for the

blood of animais with anemia induced by successive bleedings or phenylhydra-

zine intoxication.

Immature

forms

Blood

Basophilic

erythroblast

Polychromatophil

erythroblast

Orthochromatophil

erythroblast

Embryos - 15 days

0 ,8%

11 %

Bleedings

1,4%

14%

6 %

Phcnylhydrazine

1,4%

18%

Brilliant cresyl staining

Through this staining blood samples of normal animais and others with

anemia of different types were examined. The immature forms are characterized

by the presence of the “Substantia granulo-filamentosa”.

Aves

Embryos

1007 o

Phcnylhydrazine

30%

Bleedings

30%

Normal adult

0,5%

Mammals

Embryos

Phenylhydrazine

Bleedings

Human with acquired

hemolytic anemia

1007 o

307o

30%

178

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mcm. lnst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

2 um

HEMOLYSED SMEARS

Pigs. 9 and 10 - Erythroblast and prohematia (reticulocyte) of a patient with acquired

hemolytic anemia: 9 - (N) nucleus; (f) filaments. 10 - (f) filaments.

Figs. 11 and 12 - Immature erythrocyte and prohematia (reticulocyte) from bled adult

chicken and mammals: 11 - (N) nucleus; (f) filaments; (p) polysome; (arrow) stroma.

12 - (f) filaments; (p) polysome; (arrow) stroma.

179

SciELO

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

Feulgen reaction

The presence of Feulgen positive cytoplasmic vesicles, close to or distant

from the nucleus has been verified. In DNase treated control smears, the

cytoplasm did not present any Feulgen positive structures.

Hemolysis

Adult animal blood

In birds, most of the stromas are elliptical and with a dense central nucleus.

Bodies with dimensions between 0.42 x 0.64 /x and 0.88 x 1.2 /x, apparently

with the same nuclear density, can be observed at variable sites either distant

from the nucleus or very close. The number of these bodies varies from 1 to 3

(Fig. 1). At the periphery of many stromas, filamentous formations can be

seen of about 300 Â in diameter, parallel among themselves and to the periphery

(Fig. 2). In mammals, the stromas are circular and with scarce dense granules.

Embryo blood

ln the avian and mammalian stromas, dense fiiaments of variable configu-

ration and disposition are observed; the mean diameter is 0.19 p.. Among the

fiiaments, granules are seen with less density than that of the fiiaments and

with a mean diameter of 0.20 /x. Dense fiiaments in mammals reach a mean

diameter of 0.15 /x. Often it is possible to observe extremely thin fiiaments

with a diameter of about 660 Â, whose extremities seem to be in contact

with the stroma’s periphery, and the dense fiiaments. In the anucleated

mammalian stromas, dense fiiaments are less numerous and present a diameter

of about 0.16 n (Figs. 3 and 5).

Blood from adult birds and mammals with anemia induced by phcnylhy-

drazine and human blood from patients with acquired hemolytic anemia

Avian stromas present dense central nuclei; around them, dense fiiaments

in a much variable disposition and configuration are seen. Among the fiiaments

there are granules of less density than that of the nucleus. Many fiiaments

become fragmented, giving rise to segments of indefinite contour. In the preserved

fiiaments the diameter is of abount 0.19 /x In mammals, the fiiaments achieved

a mean diameter of 0.17 /x, and within the interfilamentous spacc, granules

with a mean diameter of 0.15 /x are seen (Figs. 7 to 10).

Blood from birds and mammals with anemia induced by successive bleedings

In birds, stromas present themselves circular or elliptical with dense

fiiaments, howevcr, in a smaller number than in embryos. Configuration and

position of the fiiaments are varied. In the interfilamentous space, there are

scarce granules of Iittle density, and with diameters of about 0.15 /x, with

dense fiiaments achieving up to 0.20 fj. in diameter. Mammalian fiiaments,

howcver, may reach up to 0.30 /x in diameter, disposition and configuration

varying from one stroma to another. Between the fiiaments, granulation of Iittle

density and diameters of about 0. 15 /x can be detected (Figs. 11 and 12).

180

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39 : 169-206, 1975.

i um

HEMOLYS1S IN SUSPENSION

Flgs. 13 and 14 - Immature chicken embryos erytbrocyte and mammal embryos erythroblast:

13 - (N) nucleus; (cf) circular íorms; (arrow) fold. 14 - (N) nucleus; (cf) circular forms;

(asterisk) stroma.

ULTRATI11N SECTIONS

Plg. 15 - Mature avian erythrocyte: (Ec) mature erytluocyte; (Np) picnotic nucleus;

(crd) dense chromatin; (N) nucleus (chromatin is not condensed); (arrow) immature

erythrocyte.

181

SciELO

COIRO, J.R.R. Compara tive stucly on the ultrastructure oí the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation wlth hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

Circular forms

Immature cell submitted to hemolysis in suspension give rise to distinctly

circular bodies, with diameters of about 1.57 /x. In birds, the same circular

forms are obtained through hemolysis in smears after a very rapid drying (Figs.

13 and 14).

Ultrathin sections

Blood of adult birds and mammals

In birds, erythrocytes present a pycnotic nucleus. Through the nuclear

membrane pores, penetration of hemoglobinized cytoplasm can be observed,

conferring to the caryoplasm a density close to that of the cytoplasm. Vesicles

are seen, in which, when justaposed, chromatin passing from the nucleus to

their interior is clearly visible. These vesicles show formations of a fibrous or

membranous aspect. In the cytoplasm, less dense lamellar formations are also

present, suggesting degenerating mitochondria, as well as lamellar formations

with dense particles in the interlamellar space. Occasionally it is possible to obserse

pinocytosis, Golgi complex, and smooth endoplasmic reüculum, whose diameters

vary from 0.02 to 0.07 /x. In the peripheric portion, depending on the sectioning

levei, long parallel microtubules are detected with a diameter of about 270 A.

In transversal sections, microtubules show an interior void of density.

Mature mammalian erythrocytes show a dense cytoplasm containing he¬

moglobin molecules with diameters ranging from 55-60 Â. There are no traces

of any type of structures or organelles (Figs. 15 to 18).

Blood of avian and mammalian embryos, adult birds and mammals with

phenylhydrazine-induced anemia, and blood of humans with acquired hemolytic

anemia

In the nuclei of immature avian erythrocytes, chromatin is not compacted.

Through the membrane pores, the passage can be observed of hemoglobinized

cytoplasm to the caryoplasm, that becomes nearly as dense as the cytoplasm.

In the latter, typical mitochondria are observed with variable forni, position, and

dimension, and with a mean diameter of 0.20 /x. Frequently, longitudinally la-

mellated bodies are found, and less frequently, bodies with obliqúe or even

without any lamellae. In the interlamellar space, dense particles are seen,

ranging between 80-100 Â diameter, identical to those of the hemoglobin mo¬

lecules of the cytoplasm. Polysomic granulations can be observed in high

numbers, as compared to monosomic forms, whose diameters are of about

150 Â. Many cells show an intense pinocytotic activity. Near the site of pino¬

cytosis, vesicles containing dense particles and a diameter of about 100 Â, are

detected, which, by their aspects, dimension, and density suggest to be ferritin.

In some cells it is possible to observe ferritin as free agglomerates in the cytoplasm,

denominated hemosiderin. At other regions this ferruginous mass becomes

amorph, and is enveloped by a smooth membrane similar to that of the smooth

endoplasmic reticulum. Sometimes, this material is seen involvei in a

smooth membrane, with rarefied internai points, presenting a honeycomb-

like aspect. Microtubules, composing the marginal band, are detected, in dispo-

sition, form, and aspect identical to the microtubules of mature erythrocytes,

including their average diameters of 270 Ã.

182

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

ULTRATH1N SECTIONS

Flg. 16 - Normal human "hematia" (mature erythrbcyte) : (mp) plasmlc membrane (Inset

shows details of the membrane unlt); (H) hematia.

1'lgs. 17 and 18 - Mature avian erythrocytes: 17 - (N) nucleus; (V) veslcle origlnated

lrom a mitochondrion (permanganate íixatlon). 18 - (N) nucleus; (cr) chromatln; (m)

mitochrondrla; (V) vesicle origlnated lrom a mitochondrion; (arrow) Show hemoglobin

penetration into the nucleus. (Glurataldehyde gradlent flxution).

SciELO

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobln biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

In mammals, most immature forms present themselves anucleated, i.e.,

in a reticulocytary forni. However, in the erythroblastic forms, the nuclei show

non-compacted chromatin, and caryoplasm with a high density caused by the

penetration of cytoplasm through the membrane pores. A few cells present an

eccentric pycnotic nucleus, and a membrane without pores. It is possible to

observe in these immature forms an already extruded nucleus covered by a fine

layer of cytoplasmic material (Figs. 21 and 22). In the cytoplasm there are

typical mitochondria with a diameter of about 0.20 /x, and smooth endoplasmie

rcticum with a mean diameter of 0.07 p. as well as the Golgi comples with all its

constituents. Besides these elements, lamellar formations are seen with dense

interlamellarly disposed particles whose diameter is about 60 Â, identical to the

diameters of hemoglobin molecules of the cytoplasm. In some reticulocytes, there

are dense masses bound by membranous systems with rarefied points, conferring

to them a honeycomb-like aspect. The cytoplasmic membrane shows pinocytosis.

Near the pinocytotic region in the cytoplasm there are agglomarates whose

isolated particles are of the same density and diameter as ferritin. Diameters of

these agglomerates vary from 0.03 to 0.08 /x. Polysomic granulations of penta-

merous form are observed, distributed in the cytoplasm, and less often, mono-

merous forms near the polysomic ones (Figs. 24 to 31, 33, 37 to 40).

Blood of adult birds and mammals with anemia induced by successive bleedings

Immature forms of chickens present the same characteristics as those of

embryos and adults with hemolytic anemia. However, only mitochondria are

present, and dense lamellar forms are absent. Their mitochondria present a

slightly higher average diameter, i.e., about 0.25 p.. In these immature forms,

polysomes, mostly of pentamerous aspect, are observed. Also particles of fer-

ruginous material can be detected in form of hemosiderin or as free granules

in the cytoplasm. The nucleus of the erythroblastic forms show besides loose

chromatin, the penetration of cytoplasmic material through the membrane pores,

the caryoplasm thus acquiring approximately the same density as the cytoplasm

(Figs. 34 to 36).

Aspects of the oiganelle genesis in immature erythrocytes of the peripheric

avian and mammalian blood

The beginning of the phenomenon is characterized by the condensation of

the plasmic membrane at determined sites, followed by the formation of an

invagination, i.e., pinocytosis. Next to this site, pinocytotic vesicles with a

dense and thick membrane are observed. In continuation, several pinocytotic

vesicles blend together, originating a larger one with abundant dense particles

altached to the membrane. This vesicle gradually loses its restraining membrane,

and the inner particles become free, originating agglomerates of ferruginous

material in the cytoplasm. This ferruginous material is then encircled by a

smooth membrane similar to the smooth endoplasmie reticulum and aequires

an amorphous aspect, due to less dense regions, a honeycomb-like aspect.

In many mammalian cells an association has been observed between mitochon¬

dria connected by a dilatation of low density, and the honeycomb-like bodies

or bodies already with an outline of lamellar formation, with dense interlamellar

particles. These lamellated bodies in cells at the end of maturation, present

ruptures in their membranes, and the dense inner particles spread to the

surrouding cytoplasm.

184

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

0,2/tm 20

0,2/rm

0,5fim

ULTRATHIN SECTIONS

Fig. 19 - Proerythrocyte II: (N) nucleus; (m) aberrant mitochondria; (mf) myelin

figure; (ms) monosomic forms.

Fig. 20 - Mature avian erythrocyte: (mt) microtubules in longitudinal section; (E) mature

erythrocytes. (inset shows transversal sections).

Fig. 21 - Typic mammals orthochromatic erythroblast: (N) nucleus (cr) compacted chromatin.

Fig. 22 - Orthochromatic mammal erythroblast: (N) free nucleus; (arrow) cytoplasm.

185

SciELO

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosyntliesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

Estimate of the erythrocyte maturation degree

In orthochromatic mammalian erythroblasts the polysome number varies

from 58-65 per /i 2 . In immature avian cells, the countings revealed 80, 65, 40,

and 16 polysomes per /x 2 .

Fractionation, organelle isolation, and hemoglobin determination. Blood f avian

embryos ( Gallus gallus), and blood of adult chickens ( Gallus galtus ) with

anemias induced by phenylhydrazine, and successive bleedings

Cytoplasmic hemoglobin of the blood of these animais, when stained with

benzidine, reveals two components of about the same concentration in polya-

crylamide gel. The concentrated supernatants of the lysate revealed hemoglobin

of identical patterns, in healthy embryos as well as in those with phenylhydrazine

induced anemia (Figs. 46 and 48). For animais with anemia induced by

successive bleedings, no traces of hemoglobin were found in the concentrated

supernatants of the last washings, the same as for the Controls.

Blood of mammalian embryos (Oryctolagus cuniculus), adult mammals with

phenilhydrazine induced anemia ( O. cuniculus and Cavia porcellus), with

acquired hemolytic anemia (humans), and with anemia induced by successive

bleedings (C. porcellus )

Cytoplasmic hemoglobin of the blood of these animais, when stained with

benzidine, reveals one single component in polyacrylamide gel. Concentrated

supernatants of the lysate reveal hemoglobin of the same pattern, in embryos

and in animais with anemia induced by phenylhydrazine or with acquired

hemolytic anemia (Figs. 47 and 49). On the other hand, the animais with

anemia due to successive bleedings did not reveal any trace of hemoglobin, the

same as the Controls, represented by the concentrated supernatants of the last

washings.

Macroscopic aspects, and control of purity degree of the pellets by electron

microscopy

In embryonic blood of chickens and mammals, as well as in adult avian

and mammalian blood with phenylhydrazine induced anemia and in the blood

of humans with acquired hemolytic anemia, it is observed that integral pellets

possess a reddish-pink central region, that becomes light brown through the

washings. After osmotic lysis, the pellets begin to show a fine granular mem-

brane with an undefined color. In animais with anemia induced by successive

bleedings, the pellets show a yellowish central region, even after the washings.

After osmotic lysis, the sediments aequire the aspect of a fine, nearly imper-

ceptible membrane. Examined by the electron microscope, the integral pellets

are constituted by sac-like formations, in general ellyptical, filled with dense

material. On the other hand, the lysed pellets show a less dense interior.

Furthermore the lysed pellets aequire a greater volume (Figs. 42 to 45).

Spectrophotometry

In birds and mammals, spectrophotometric determinations in the concen¬

trated supernatants of lysates and in hemoglobin were carried out at 5.400 Â.

186

SciELO

COIRO, J.R.R'. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

. /im

ULTBATHIN SECTIONS

Figs. 23 to 28 - Immature avian embryos erythrocytes: 23 - (N) nucleus; (p) polysome;

(h) hemosome with longitudinal lamellae. 24 - (N) nucleus; (h) hemosome filled with

hemoglobin moiecules. (Osmium tetroxide fixation). 25 - (N) nucleus; • (mf) ferritin mole-

cules; (s) hemosyderine. 26 - (G) Golgi complex; (re) endoplasmic retlculum; (v) vesicles.

187

SciELO

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure oí the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

Absorbance was observed in the lysate supernatants, suggesting the presence of

the hemo group. In some control supernatants (Iast washings) some absorbance

was observed, but much less than that of the corresponding lysate supernatant.

DISCUSSION

Mature erythrocytes — Feulgen positive vesicles

CTBrien 68 (1960), Davies 34 (1961), Wilt 99 (1962) and Grasso et al. 47

(1962) found hemoglobin in erythroblast nuclei. Tooze & Davies 94 (1963),

suggested that hemoglobin could act as histone, causing DNA condensation.

According to Moore & Brown 66 (1968), the presence of large amounts of

intranuclear hemoglobin could act by a negative retroalimentation mechanism,

and interrupt heme and globin synthesis. Based on our findings related to the

Feulgen positive vesicles, as well as on the observations in hemolysed smears

and ultrathin sections, we present another hypothesis. Ultrathin sections show

continuity (Fig. 17) or close connection between vesicles and nucleus (Fig.

18). In the cases of close connections, passage of condensed or filamentous

chromatin into the vesicles is observed (Fig. 18). In chickens (Coiro, 1972 —

unpublished observations), as well as in Gallus, Bufo and Liophis (Menezes et

al. 64 , 19 72), Feulgen positive vesicles apparently originating from the nucleus

are observed. The mitochondrial origin of those vesicles was clearly determined

by Brunner et al. 17 (1975) in blood from Cyprinus carpio and by Coiro et

al. 32 (1974) in blood from Gallus, Bufo, Bothwps and Cyprinus. Menezes et

al. (1974 — unpublished observations), and Coiro et al. 32 (1974) observed,

after Iabelling Bufo ictericus erythrocytes with 3 H-tymidine, that those vesicles

of mitochondrial origin, filled with chromatin, show DNA or the product of

its degradation. Such findings suggest that the blocking of DNA activity may

also be related to chromatin reduction, and not only to a negative retroalimen¬

tation mechanism, because, as already know, hemoglobin is synthesized in

mammalian erythroblastic forms, in avian erythroblasts as well as in proerythrocytic

forms, even when their nuclei had received a large amount of hemoglobin

through the pores of the membrane. Actually, we observed that at the mornent

when the vesicles appear, filled with chromatinic material, erythrocytes may still

contain monosomes, indicating desaggregation of polysomes and cessation of globin

synthesis, and therefore hemoglobin synthesis (Fig. 19). Comparing the

phenomenon of nuclear extrusion in orthochromatic mammalian erythroblasts

(Figs. 4, 21 and 22), much more frequent than caryolysis or caryorhexis

according to Astaldi et al. 1 (1950), with the partial extrusion of chromatinic

material in avian erythrocytes, it may bc suggested that thesc phenomena possibly

could be correlated, in spite of the differences as to the periods of hemoglobin

synthesis. While reticulocytes work intensely at synthesis, the loss of chromatinic

material in avian erythrocytes is concomitant with hemoglobin synthesis cessation.

Considcrations on the structures of immature avian and mammalian erythrocytes

Bernhard et al. 2 (1949) observed circular forms in hemolysed cells in

suspension. Origin and nature of thesc circular forms were much discussed by

Braunsteiner & Bernhard 9 (1950), Peters & Wigand 74 (1950), Wolpers 100

(1956), Jung 54 (195 9) and Hug et al. 49 (1959). Through hemolysis in immature

188

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

0,2,um 28

0,5/um

'< 1

wbb&sBBÊSêBb&êéi

o,2Mm 30

0.2,, m

ULTBATHIN SECTIONS

Flgs. 27 and 28 - Immature avian embryo erythrocytes: 27 - (V) vesicle; (pH) prohemo-

ttòine. 28 - (mt) longitudinally sectloned microtubules. Inset shows transversal seetion.

(Osmlum tetroxide fixation).

Flg. 29 and 30 - Mammal embryo raticulocytes (prohematia) : 29 - (f) ferritin; (p) poly-

some; (arrow) smooth membrane. 30 - (p) polysomes; (Hm) mature hemosome: (Hb)

hemoglobin molecules; (double asterlsk) linklng-body.

189

2 3

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian. and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

cell smears, Brunner & Vallejo-Freire 21 (1956), obtained dense filamentous

structures with a diameter of about 0.20 /x, and extremely fine filaments with a

mean diameter of 600 Â, as well as granules of 0.25 /x in diameter (Fig. 5).

Such granules were interpreted as polysomes, since they desintegrate when

submitted to RNase, traces of proteic material remaining at the site (Brunner 14 ,

1968). As to the filaments, they were interpreted as smooth endoplasmic reti-

culum similar to the interpretation of Porter 79 (19 5 3), when he observed very

fine filaments of 500-700 A in diameter, in integral mesothelial rabbit cells. The

dense filaments about 0.20 p. in diameter were considered to be mitochondria.

This interpretation is justified by the fact, that these dense filaments have an

affinity with ferric hematoxilin (Régaud) and acid fuchsin (Altmann), also

used for the identification of the forementioned organelles. Brunner et al. 23

(1956) and Braunsteiner et al. 10 (1956), found filamentous mitochondria in

mammal reticulocytes. It has also been observed that these filaments are reduced

in numbers when immature cells evolve to maturity, the same as observed with

mitochondria. It is important to point out that in mammalian erythroblasts and

reticulocytes with lead intoxication, the dense filaments in hemolysed smears

increase three fold in diameter on the average, and that this fact occurs also

in mitochondria (Vallejo-Freire & Brunner 95 , 1958).

Porter 79 ( 19 5 3), in integral endothelial rabbit cells, observed dense fila¬

ments with diameters of about 0.20 /x morphologically interpreted as mito¬

chondria. Such result coincides with the ultrastructural measurements and

aspects of the dense avian and mammalian immature erythrocyte filaments

that we have observed (Figs. 5 and 6).

Brunner & Vallejo-Freire 21 (1956) and Vallejo-Freire & Brunner 95

(1958) verified that in immature mammalian cells submitted to hemolysis in

suspension, without interruption by a fixative, the filamentous mitochondria

become desintegrated, giving rise to circular fornis (Fig. 14). However, these

authors obtained intermediate forms when hemolysis was performed in a less

hypotonic médium, containing formol. In ultrathin sections they also observed

that filamentous mitochondria increase in volume at determined sites, separated

by constrictions. However, if an interruption had not occurred, the intermediate

forms would have given rise to circular forms.

In birds, due to the intense agglutination during hemolysis in suspension,

circular forms were obtained through hemolysis in smears, with a modification,

i.e., rapid drying at a temperature of 40°C. The circular forms thus obtained

presented a diameter of about 0.68 /x (Fig. 13).

Relationship between “Substantia granulo-filamentosa” (Sgf), mitochondria, and

other structures

The immature avian and mammalian forms, stained by brilliant cresyl

blue, show a dark-blue reticulated formation denominated “Sgf”. Simmel 90

(1926), and Seyfarth 89 (1927) through dark-fied microscopy, and Sano 85

(1955) through phase contrast microscopy, observed intrareticulocytary

structures. Since these structures only were visualized with definition in stained

reticulocytes, many investigators interpreted the reticulum as an artifact. On the

other hand, reticulocytes treated with a supravital dye and subsequently treated

with Giemsa did not show diffuse basophily, thus leading to the supposition

that both dyes evidence one and the same structure. Dustin 38 (1947) showed

190

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure oi the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mcm. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

0,5/ttm 32

0,2 /im

ULTRATHIfr SECTIONS

Figs. 31 and 32 - Reticulocytes or “prohematia” of mammal embryos, and a patient with

acquired hemolytic anemia: 31 - (pH) prohemosome; (double asterisk) linking-body, (pi)

pinocytosis (Fixation by formalin in hypotonic médium). 32 - (fe) ferritin, (arrows

membrane unit.

Figs. 33 and 34 - Immature avian erythrocytes of embryos and adults with bleedings ane¬

mia: 33 - (m) mitochondrion; (Hb) hemoglobin molecules; (double asterisk) linking-body.

34 - (pi) pinocytosis; (re) endoplasmic reticulum. Immature cells obtained by success \e

bleedings, present a developed endoplasmic reticulum.

191

SciELO

COIRO, J.R.R. Compara tive study on the ultrastructure of the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

that basophily was given by the cytoplasmic ribonucleic acid, since there was

no basophily in reticulocytes previously treated by RNase. When reticulocytes

evolve to erythrocytes a RNA decrease occurs (Burt et al. 25 , 1951; Thoma 92 ,

1959) and at the same time hemoglobin concentration increases up to 30%

(Bessis 6 , 1972).

Kosenow 57 (195 2) and Brunner 13 (1962) also concluded the same as

to the concentration of the acrydine-orange and Janus green B dyes. With a

dilution higher than 1 x IO -4 and hemolysis in smears it was possible to observe

larger filaments, polysomal granules, and thin filaments corresponding to the

smooth endoplasmic reticulum. Brunner 13 (1962) observed Janus green B

stained reticulocytes in a 5 x IO* 5 dilution in hemolysed smears, with none of

the structures presenting aglomerations. The same author, in ultrathin sections

of reticulocytes previously treated with Janus green B, observed that the mi-

tochondria displayed dye in their interior, smooth endoplasmic reticulum, and

ribosome particles next to the dye. Since the mitochondrion is the predominant

structural element in the reticulocyte, it is possible to consider it to be the main

component os the “Sgf”. It is necessary to point out that the concept os “Sgf”

in non-stained reticulocytes is restricted only to mitochondria (Brunner 13 ,

1962).

In avian erythroblasts and proerythrocytes we used the same concentration

as proposed by Brunner 13 (1962) for the mammalian reticulocytes. When

brilliant cresyl blue was used in a 1 x IO -3 concentration, the reticulocyte be-

came well evidenced. Due to the simillarity of immature avian and mammalian

forms, i.e., evidencing the same structures, we may infer that the “Sgf” in

birds is also constituted by filamentous mitochondria agglomerates, smooth

endoplasmic reticulum and ribosomes with dye, and furthermore affirm that

these mitochondria are elements fundamental for the “Sgf” formation in

immature avian cells (Fig. 3).

With hemolysis in immature cell smears of humans with acquired hemolytic

anemia, filaments were observed with diameters varying between 0.14 - 0.30 /x

(Figs. 9 and 10). In rabbit-embryos, the filaments show variations of 0.11 -

0.31 /x (Fig. 5).However, it has been observed that filaments with greater

diameter (0.30 /x) correspond to the filaments of reticulocytes of guinea-pigs

anemic through bleedings (Fig. 12). These filaments of a larger diameter are

mitochondria of a proportional size in ultrathin sections. It was verified that fi¬

laments of animais with bleeding anemia show a larger diameter when compa-

red to filaments of embryos, or nimals with phenylhydrazine induced anemia

(Figs. 6 and 8). This fact leads to lhe conclusion that the obtention of only

large filamentous mitochondria is related to the type of induced anemia. In

the bleeding type, we remove erytrocytes and other components important for

hemoglobin formation, related to thinner filaments. The latter are probably or-

ganelles related to hemoglobin synthesis.

Brunner 14 (1968), in a comparative study on the number and extension

of “Sgf” in orthochromatic erythroblast and reticulocytes verified that the area

was about 7.5 /x 2 in erythroblasts, whereas in mature reticulocytes it reached

about 17.2 /x 2 , i.e., a 100% increase of the filamentous structures (Figs. 6

and 4). Reimann 81 (1942) and Jensen et al. 52 (19 5 3) in birds, and Brunner 24

(1968) in mammals, indicated the dependence between the higher intensity of

hemoglobin synthesis and the amount of “Sgf”. Brunner & Mombrum 19 (1972)

192

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparatlve study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytlc series. Correlation with hemoglobin biosynthesls.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

ULTRATHIN SECTIONS

Fig. 35 and 36 - Immature avian erythrocyte and mammal reticulocyte (prohematia) from

sucessive bleedings. 35 - (N) nucleus; (m) typical mitochondrion. 36 - (m) mltochondria.

Figs. 37 and 38 - Immature avian erythrocyte (phenilhydrazíne intoxication ) t and human

prohematia (reticulocyte) írom acquired hemolytic anemia. 37 - (p) polysome; (Ph) prohe-

mosome; (mp) plasmic membrane showing clearly the three components. 38 - (Hm) mature

hemosome; (arrow) hemoglobin molecules.

193

SciELO

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure oí the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Iiist. Butantan, 39: 169-206, 1975.

investigated the mechanism of the filament increase in rabbit-embryo reticulo -

cytes, and demonstrated the existence of an organelle probably formed “de no¬

vo”, which they denominated mitochondrion-like organelle (MLO). Brunner

et al. 20 (1972), suggested that the final hemoglobin biosynthesis occurs in the

MLO, called hemosomes (Fig. 29). The filaments of immature cells of animais

anemic through bleedings are in fact mitochondria. This statement is supported

by the findings related to the dimensions found in hemolysed smears, ultrathin

sections, and electrophoresis of the lysed fraction supernatant, that showed

absence of hemoglobin synthesis (Brunner et al. 18 , 1973; Coiro et al. 31 , 1973),

in mammals and birds, respectively. However, in mammalian embryo reticulocy-

tes (Brunner 14 , 1968) and in avian proerythrocytes (Coiro et al. 31 , 1973) as well

in immature forms from individuais with hemolytic anemia, the filaments (“Sgf”)

correspond, in their majority, to hemosomes (Figs. 3 and 8). Evidently, the

“Sgf” filament increase in reticulocytes is related to the number of hemosomes

and not to the number of mitochondria.

Hemosome genesis in birds

Brunner & Mombrum 19 (1972) described the genesis of mitochondrion-

like organelles (MLO). Brunner et al. 20 (1972), proposed the term hemosome

for these MLO. In birds (Fig. 41), hemosome genesis follows the same stages

described for mammals: 1) Plasmic membrane with increased density and for

mation of a pinocytotic vesicle rich in ferritin (Figs. 31 and 32); 2) fusion

of the pinocytic vesicles and formation of a larger vesicle; 3) disappearance

of the vesicle’s walls and release of the ferritin molecules in the cytoplasm (Fig.

25); 4) at the time when the ferritin molecules become amorph they are en-

circled by a smooth membrane similar to the smooth endoplasmic reticulum

(Figs. 25, 26 and 29); 5) the inner part of the smooth membrane folds into

the element in formation parallel to the joining of both free ends. In this way

the molecules of ferruginous material jointly with the globin synthesised in the

polysome remain separated from the cytoplasm. These transformations give rise

to a honeycomb-like body; this set was called prohemosome (Figs. 27, 31 and

39) ; 6) the prohemosome may appear attached to a mitochondrion through

an enlarged element we called “linking body” (Figs. 30, 31 and 33 — arrows);

7) the assemblage of prohemosome and mitochondrion joined by the linking

body gives rise to the hemosome. This hemosome already shows longitudinal

lamellae, but still with one of the transversally lamellated ends derived from the

same mitochondrion (Figs. 30 and 31 — arrows); 8) mature hemosome, whose

walls disintegrate, allowing scattering of hemoglobin into the cytoplasm (Fig.

40) .

The enzyme that acts upon the iron for heme formation was detected in

mitochondria of rat hepatocytes, and in duck erythrocytes by Labbe &

Hubbard 58 (1961), as well as in mitochondria of pig hepatocytes by Porra &

Jones 78 (1963). These findings suggested that the connection between the mi¬

tochondrion and a prohemosome is related to the iron for heme formation within

the prohemosome, and moreover interferes in the growth of this prohemosome

furthering structural protein synthesis. Synthesized globin in polysome (Warner

et al. 96 , 1962) is taken off the cytoplasm together with ferruginous particles

and polysomes, as observed by Brunner et al. (unpublished observations), in

HeLa cells induced to hemoglobin synthesis. Finally, cnergy necessary to com-

194

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

JOIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

VLTRATHIN SECTIONS

Pigs. 39 and 40 - Human prohematia (reticulocytes) írom acquired hemolytic anemia: 39

(Ph) Prohemosome (see the honeycomb-like aspect). 40 - (Hm) mature hemosome.

Pig. 41 - Schema oí hemosome genesis.

195

SciELO

COIRO, J.R.R. Compara tive study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

bine heme and globin, also wold be provided by the mitochondrion associated

to the prohemosome.

Hammel et al. 48 (1963) described hemoglobin synthesis in nuclear fractions

of avian erythrocytes, However, the nuclear fraction had been contamined by

cytoplasmic particles. lt is probable that these particles were hemosomes, the

elements responsible for the final hemoglobin biosynthesis, contributing, in this

case, with erroneous results. In general, hemosomes have longitudinal lamellae

(Fig. 30). Perhaps this lamellar disposition is due to the pressure exerted by

the hemoglobin molecules on the circular lamellae; these pressures would flatten

the circular lamellae of the prohemosome, dislocating them alongside the greater

axis of the hemosome in formation. The mature hemosome is characterized by

abundant hemoglobin molecules within the interlamellar space (Fig. 40). It is

possible that the hemoglobin release into the cytoplasm depends on a gradient

where the hemosome would distribute the molecules in less hemoglobinized ré-

gions of the cytoplasm, a displacement of the hemosome thus occuring from the

more concentrated region to the less concentrated region. This may well be so,

because immature avian or mammalian cells, hemolysed in smears, were never

found with the same type of filamentous hemomose distribution (Figs. 3, 5, 6, 7

and 9).

Relationship between hemoglobin confirmation by electrophoresis and hemosome

presence in the immature avian and mammalian forms

Brunner et al. 20 (1972) determined the hemoglobinic nature of the par -

ticles present in the interlamellar spaces of the hemosomes. In birds, the Iden¬

tification of the nature of interlamellar particles was confirmed by the presence

of hemoglobin molecule by spectrophotometric determinations in the lysed su-

pernatant read at 5.400 Â, and by electrophoresis in polyacrylamide gel. In

mammalian embryos, electrophoresis revealed that the cytoplasmic hemoglobin

has only one component (Fig. 47-1). The supernatant of the hemosome “pellet”

lysate showed also only one component (Fig. 47-III). Flowever, in relation to

the blood of mammals anemic after bleedings, it has been observed that the

“pellet” lysate as well as the supernatant of the 3rd washing did not reveal any

component. This result leads to the conclusion that the pellet of animais with

bleeding anemia was composed nearly exclusively by mitochondria instead of

hemosomes and mitochondria; this results was completed by hemolysis in smears

and ultrathin section (Brunner et al. 18 , 1973). In avian embryos, cytoplasmic

hemoglobin in gel revealed two components (Fig. 46-1), the same as the su¬

pernatant of the hemosome pellet lysate (Fig. 46-111). In the blood of adult

birds with bleeding anemia the results were negative, coinciding with the results

obtained in mammals with bleeding anemia. These results in birds had been

expected, since the lysed pellet is mostly formed by mitochondria. These

mitochondria appear in the immature cells of animais with bleeding anemia

because we removed a considerable variety of factors closely related to hemo¬

globin biosynthesis. Among these are iron, folie acid, proteins and copper besides

a fundamental factor of the blood plasma according to observations in HeLa

induced to hemoglobin synthesis, by Brunner et al., 1975 (unpublished obser¬

vations). This statement was corroborated by the positive results obtained by

electrophoresis, when daily withdrawn blood was homogenized and returned

to the same bled animais by intraperitoneal route. In parallel, in hemolysed

196

l SciELO

COIBO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

0,2 fita 43

_! 0,5nm

H o,2í»m 45

o.õ.um 46

Pigs. 42 to 45 - ULTBATHIN SECTIONS OF HEMOSOME PELLETS:

42 - Integral avian heraosome pellet. 43 - Integral mammal heffiosome pellet. 44 - Lysed

avian hemosome pellet. 45 - Lysed mammal liemosome pellet.

ELECTROPHORES1S IN POLY ACRYLAMIDE GEL

Figs. 46 - Avian embryos blood: I - (Hb) cytoplasmic hemoglobin; (o) origin. II - super-

natant of lysed hemosomes. III - last washing supernatant (control).

Pigs. 47 - Mammal embryo blood: I - (Hb) cytoplasmic hemoglobin. II - supernatant of

lysed hemosomes; (o) origin; (d) dye.

Pigs. 48,- Immature avian erythrocytes from phenilhydrazine intoxication ; I - (Hb) cyto¬

plasmic hemoglobin; (d) dye. II - (Hb) supernatant of lysed hemosomes. III - last washing

supernatant (control).

Pigs. 49 - Human immature erythrocytes (prohematia and erythroblasts) from acquired

hemolytic anemia; I - (Hb) cytoplasmic hemoglobin.. II - supernatant of lysed hemosomes;

(d) dye.

197

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

smears and ultrathin sections, the presence of typical hemosomes was verified

(Brunner et al. 18 , 1973).

In adult mammals with acquired hemolytic (Fig. 49) or phenylhydrazine

induced anemia, the electrophoretic results are the same as in embryos (Fig.

47). In birds with phenylhydrazine induced anemia, the presence of components

in polyacrylamide gel demonstrates that the hemoglobin synthesis in these

recuperating animais is cytologically the same as the hemoglobin synthesis in

embryos (Fig. 47).

Evaluation of the maturation degree

In the avian erythron, it is possible to determine, through morphological

data, the characteristics of an orthochromatic erythroblast and a proerythrocyte.

Since the mammalian orthochromatic erythroblast is morphologically recogni-

zable, it was selected as reference for the polysome countings. In several

mammalian orthochromatic erythroblasts the counts pointed out a polysome

number varying between 58 and 61 per /x 2 . In birds, one of the cells showed

65 polysomes per /x 2 , and therefore could be classified as a probable

orthochromatic erythroblast. Subsequent countings showed variations of 8, 16,

and 49 polysomes per /x 2 . The values between 8 and 16 demonstrated that the

proerythrocytes nearly reached the point of definitive transformation into

erythrocytes. However, it is possible to find slightly basophile cells where

basophily is evidcnced only by monosomic forms from the desintegrated polysome

forms (Fig. 19). In this case, although basophilic, they cannot be considered

as a proper proerythrocyte. Therefore, it is necessary to denominate these cells

Proerythrocytes II. To the proerythrocytes, although presenting a reduced poly¬

some number, the denomination Proerythrocyte I is proposed. Furthermore, it

is suggestcd that the reticulocyte forms of mammals should be called more

correctly “prohematia”, since the anucleated reticulocyte no longer can be

characterized as a cell.

Fawcett & VVitebsky 43 (1964), stated that the marginal band is responsible

for the maintenance of the ellipsoidal form of avian erythrocytes. Grasso 46

(1966) reaffirmed that the marginal band is responsible for the elasticity and

form of mammalian erythrocytes. Dervichian et al. 36 (1947), Ponder 77 ( 194 8),

Perutz 73 (1948) and Pauling et al. 71 (1949), suggested the possible existence

of a molecular arrangement in the “hematia”, however, without any explanation

as to the possible influence of this arrangement on the discoidal bi-concave

shape of the mature mammalian forms. Furchgott & Ponder 44 (1940),

Ponder 77 (1948) and Bessis & Bricka 8 ( 1950), affirmcd besides an inner mo¬

lecular arrangement, the shape could be confered by a physical-chemical

phenomenon related to the surface of the “hematia”. Brunner 13 (1962) inves-

tigating “hematias” maintained in a hypotonic médium, and treated with osmium

tetroxide, carne to the conclusion that the biconcave form could be essentially

conditioned by an inner structural arrangement. The statements of this author

are supported by the fact that no marginal band, forming microtubules, wcre

found in mammalian erythrocytes throughout the course of this study, exccpt

the microtubule remnants of the achromatic fuse in still immature forms

(Grasso 46 , 1966; Jones 53 , 1969; Brunner 15 , 1972). Actually, if a marginal

band existed in erythroblasts, mammal “prohematias” and “hematias” could

easily show it in ultrathin sections, e.g., figures 20 and 28, or in hemolysed

198

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure oi the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

smears (Coiro et al. 30 ,1973) (Fig. 2), the latter being very efficient for the

idcntification of marginal band forming microtubules.

CONCLUSIONS

1 —- Avian erythroblasts and proerythrocytes, as well as mammalian

erythroblasts and reticulocytes show, in hemolysed smears after partial

drying, dense and filamentous structures. Those of larger diameter are

mitochondria, and those of smaller diameter, hemosomes. Among these

filaments, extremely thin thread-like structures appear, corresponding to

the smooth endoplasmic reticulum. Besides these structures there are

scattered polysomic granules in the stroma.

2 — In the mammalian immature forms submitted to hemolysis in suspension

without prior drying, mitochondria and filamentous hemosomes undergo

disintegrations which originate the circular forms. Mitochondria and he¬

mosomes of the immature avian forms also give rise to the same circular

forms, however, only when hemolysed in smears after a rapid drying at

40°C.

3 — Avian erythroblasts and proerythrocytes, when supravitally stained, show

the “Substantia granulo-filamentosa” consisting of mitochondria and

hemosomes besides the dye and the precipitated polysomic granules. In

the immature forms obtained by bleeding of adult chickens, the

“Substantia granulo-filamentosa” consists of only mitochondria besides

the dye and the precipitated polysomic granules, showing therefore an

identical behaviour as the immature mammalian forms.

4 — Hemosomes, those organelles responsible for hemoglobin biosynthesis,

originate from the smooth membranes that agglomerate ferruginous

material together with globin. From this phase onwards, transformations

occur that originate a prohemosome associated to a mitochondrion, a

phase that gives rise to a mature hemosome. The phenomenon of avian

hemosome formation is similar to that of mammals.

5 — Spectrophotometric determinations in the lysed fraction supernatant, and

the cytoplasmic hemoglobin were performed at 5.400 Â, demonstrating

the presence of the henie group. By electrophoresis, hemoglobin was

detected in the supernatant of the lysed hemosomic fractions of avian

and mammalian embryos as well as in adult animais with hemolytic

anemia, exCept in those animais with anemia induced by successive

bleedings in which no hemoglobin was found through electrophoresis

of the lysed fraction supernatant.

6 — The presence of hemoglobin in mammalian erythroblast nuclei, and avian

erythroblasts, proerythrocytes and erythrocytes is not related with a

blocking of synthesis; it is a consequence of the pressures of molecules

that penetrate through the nuclear pores.

7 — In mammalian erythroblasts the total loss of chromatinic material occurs

by extrusion, karyolysis or karyorrhexis, the levei of hemoglobin synthesis

continuing and even increasing in reticulocytes. In chickens, the blocking

of hemoglobin synthesis seems to be related to the extrusion of a small

199

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Compara tive study on the ultrastructure oí the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. lnst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

chromatin portion into the vesicles, parallel to the disaggregation from

polysomic forms to monosomic fornis.

8 — In chickens, vesicles which receive the chromatinic material originate

from mitochondria fixed at the nuclear membrane and gradually lose

their ultrastructural features. This phenomenon is concomitant to the

cessation of hemoglobin synthesis.

9 — In successive-bleeding anemias of chickens and mammals, the results

differ as to the period of time of the reaction in the erythropoietic tissue.

In chickens, the interval between the beginning of the bleedings and the

observation of the maximal reaction, confirmed by means of a proery-

throcytosis in the peripheral blood, is of about 24 h, compared with the

maximal reaction in mammals where the interval can be up to 72 h.

10 — As to the cytological aspect, the mechanism of hemoglobin synthesis

is identical in adults with hemolytic anemia in recuperation phase, as

well as in embryos. This similarity occurs in both chickens and mammals.

11 — Determination of the degree of the mammalian erythroblast maturation

by the counting method of polysomes per area unit, taking as point of

reference the orthochromatic phase, characterized by the eccèntric nucleus,

allows an evaluation of the maturation degree of avian erythron phases,

where no characteristic morphological evidence is found as a point of

reference for identification.

12 — The less immature avian forms, when stained according to Rosenfeld,

may show some basophilia due to the presence of monomere forms ori-

ginating from dissociated polysomes. Such forms must not be regarded

as immature, considering the cessation of globin synthesis. For the cell

in this maturation phase the term Proerythrocyte II is proposed. For

the cells still containing polysomic forms, the term Proerythrocyte I is

suggested.

13 — In chickens, in immature as well as in mature forms, microtubules were

found to constitute the marginal band, as observed in hemolysed smears

and ultrathin sections. In mammals, no microtubules were detected,

except their remnants, constituents of the achromatic fuse.

Acknowledgements: The author wishes to express his thanks to Dr. A.

Brunner Jr., Head of the Laboratory of Electron Microscopy of the Instituto Bu¬

tantan, for valuable guidance, as well as to Drs. L.C. M. França, M. Velloni

and J. Guidagli for their contribution is various phases of the cytopathologic

work and to Drs. Arno Rudi Schwantes and Maria Luiza Barcellos

Schwantes for performing the electrophoresis experiments. Thanks are also due

to A. Silva Gonzales, H. Menezes and Vera Mondin Weisz for technical assis-

tanoe and specially to Mrs. Sibylle Heller for editorial aid and translation.

Finally, thanks to Mr. Heitor Costa and Mr. José do Nascimento for their colla-

boration in the illustrations.

200

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

RESUMO: Estudos ultra-estruturais de eritron de aves e ma¬

míferos foram realizados no sangue periférico de embriões e de

animais adultos normais ou anemizados, mediante o emprego

de diferentes métodos, como a hemólise em esfregaço e cortes

ultrafinos. Foram utilizados também a eletroforese em gel de

poliacrilamida e a espectrofotometria, com a finalidade de de¬

tectar hemoglobina intrahemossomal, bem como a presença do

grupo hemo nos sobrenadantes de lisados de diferentes frações.

Estudou-se ainda a extrusão cromatínica nos eritrócitos maturos

de aves, correlacionando a com a extrusão do núcleo de eritro-

blastos ortocromáticos de mamíferos e comparou-se a gênese

dos hemossomos em mamíferos e em aves. Também foi estu¬

dada a identidade da “Substantia granulo-filamentosa” (Sgf) de

aves e mamíferos, bem como a avaliação do grau de maturação

de células do eritron de aves, através de contagens de polissomos

por M 2 - Por fim, verificou-se a existência de banda marginal,

através de cortes ultrafinos s de esfregaços de sangue he-

molisado.

Os resultados mostram que:

1. Nos esfregaços de sangue hemolisado (“Sgf”) em aves,

os filamentos de maior diâmetro são mitocôndrios e os de me¬

nor diâmetro são hemossomos.

2. Nas anemias por sangrias sucessivas, a “Sgf” é consti

tuida quase que exclusivamente por mitocôndrios.

3. Os hemossomos das aves têm gênese idêntica à dos

mamíferos e participam da biossíntese de hemoglobina.

4. A presença de hemoglobina intranuclear, não está rela¬

cionada ao bloqueio da síntese, o qual se relaciona com a ex¬

trusão cromatínica concomitante a uma desagregação polissômica.

5. Nas anemias por perda de sangue, as respostas do teci¬

do hematopoiético em aves e mamíferos diferem no tempo de

reação.

UNITERMOS: Ultra-estrutura do eritron em aves e mamíferos.

Biossíntese de hemoglobina.

REFERENCES

1. ASTALDI, G., GALLO, V & INVERNIZZI, P. Valutazione quantitative degli

asincronismi di maturazione nuclso-citoplasmica delle cellule midollari. I.

Recherche sugli eritroblasti delPanemia perniciosa prima e durante il tra¬

tamento. Arch. Sei. Med., 90: 502-505, 1950.

2. BERNHARD, W., BRAUNSTEINER, H. & MANGINI, H. Étude des ré-

ticulocytes au microscope électronique. C. R. Soc. Biol■ (Paris), 143:

1513, 1949.

3. BESSIS, M. Studies in electron microscpoy of blood cells. Blood, 5:

1083-1098, 1950.

4. BESSIS, M. Traité de cytilogie sanguine. Paris, Masson, 1954. p. 219.

5. BESSIS, M. Étude au microscope électronique de la destinée d’une mo-

lécule dans 1’organisme. La ferritine et le cycle hémoglobinique du fer.

Buli. Acaã. nat. Méd. (Paris), 142: 629-643, 1958.

201

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparatire study on the ultrastructure of the elements oí the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

6. BESSIS, M. Cellules du sang normal et pathologique. Paris, Masson, 1972.

p. 7, 179.

7. BESSIS, M. & BRETON-GORIUS, J. Incorporation de granules ferrugi-

neux par les érythroblastes observée au microscope électronique. C. R.

Soc. Biol. (Paris), 150: 1903, 1956.

8. BESSIS, M. & BRICKA, M. Étude au microscope élétronique sur 1’agglu-

tination, la forme et la structure des globules rouges. Rev. Hémat., 5:

396-427, 1950.

9. BRAUNSTEINER, M. & BERNHARD, W. Reticulocyten und Innenkõrper in

Elektronenmikroskop. Acta haemat. (Basel), 3: 167-170, 1950.

10. BRAUNSTEINER, H., FELLINGER, K. & PAKESCH, F. Über die Struk-

tur der Reticulocyten. Acta haemat. (Basel), 16: 322-328, 1956.

11. BRECHER, G. The structure of unstained reticulocytes. Proc. Soc. exp.

Biol., 69: 89-90, 1948.

12. BROWN, D.D. & GURDON, J.B. Absense of Ribosomal RNA synthesis in

the ánucleolate mutant of Xenopus laevis. Proc. nat. Acad. Sei. (Wash.),

51: 139-146, 1964.

13. BRUNNER JR., A. A estrutura intrareticulocitária. Mem. Inst. Butantan,

30: 15-26, 1962.

14 . BRUNNER JR., A. Maturação eritrocitária em roedores. (Tese — Univer¬

sidade de São Paulo). São Paulo, 1968.

15. BRUNNER JR., A. Microtubules and microfilaments in immature erythro-

cytes. Ciênc. Cult., 24: 644-646, 1972.

16. BRUNNER JR., A. & COIRO, J.R.R. Fixation of erythrocytes in a gluta-

raldehyde gradient, followed by osmium tetroxide. An. Acad. brasil. Ciênc.,

45: 679, 1973.

17. BRUNNER, JR., A., COIRO, J.R.R., MENEZES, H., MITSUTANI, C.Y. &

CARVALHO DOS SANTOS, M.A.S. Vesicles carrying nuclear material

in mature Cyprinus carpio erythrocytes. Experientia (Basel), 31: 531-532,

1975.

18. BRUNNER JR., A., COIRO, J.R.R., SCHWANTES, M.L. & SCHWANTES,

A.R. Hemosome and hemoglobin biosynthesis in embryos and in re-

gressive anemias. Mem. Inst. Butantan, 37: 335-344, 1973.

19. BRUNNER JR., A. & MOMBRUM, I.C. Genesis of mitochondrion-like or-

ganelles in reticulocytes of rabbit-embryos blood. Ciênc. Cult., 25: 448-451,

1972.

20. BRUNNER JR., A., SCHWANTES, A.R., SCHWANTES, M.L. & BEÇAK, W.

Hemoglobin in immature erythrocytes mitochondrion-like organelles.

Experimentia (Basel), 28: 569-571, 1972.

21. BRUNNER JR., A. & VALLEJO-FREIRE, A. Electron microscopic obser-

vations on granules and filaments (Reticulosomes) of reticulocytes.

Exp. Cell Res., 10: 55-62, 1956.

22. BRUNNER JR., A. & VALLEJO-FREIRE, A. Estruturas lamelares em reti-

culócitos. Mem. Inst. Butantan, 31: 9-14, 1964.

23. BRUNNER JR., A., VALLEJO-FREIRE, A. & SOUZA SANTOS, P. Elec¬

tron microscopy of thin sections of reticulocytes. Experientia (Basel),

12: 255, 1956.

24. BURKA, E.R. & MARKS, P.A. Ribosomes active in ribosomes disappea-

rance during “in vivo” erythroid maturation. Nature (Lond.), 213:

724-726, 1967.

SciELO

202

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. l7ist. Butantan, 39: 169-206, 1975.

25. BURT, B.A., MURRAY, R.G.E. & ROSSITER, R.J. Nucleic acids of rabbit

reticulocytes. Blood, 6: 906-915, 1951.

26. CESARIS-DEMEL, A. Studien über die Roten Blutkõrperchen mit den Me-

thode der Fãrbung in Frishen Zustande. Folia haemat. (Lpz.), 4 (suppl.

1): 1-32, 1907.

27. COIRO, J.R.R. “Polylite 8001, T 213, 200 e 208 como meio de inclusão para

microscopia eletrônica”. Reunião Extraordinária da Sociedade Brasileira

de Microscopia Eletrônica. São Paulo, 1972.

28. COIRO, J.R.R. & BRUNNER JR., A. Polylite 8001: a new embedding mé¬

dium for electron microscopy. Rev. Microsc. Electr., 1: 12, 1972.

29 COIRO, J.R.R. & BRUNNER JR., A. Behaviour of Polylite 8001 with plas-

ticizing additives. An. Acad. bras. Ciênc., 45: 680, 1973.

30. COIRO, J.R.R., BRUNNER JR., A. & MITSUTANI, C.Y. A simple method

for the observation on the marginal band in avian and chelonian ery-

throcytes. 1973 (submitted to appreciation).

31. COIRO, J.R.R., BRUNNER JR., A., SCHWANTES, M.L. & SCHWANTES,

A.R. Hemoglobin in mitochondrion-like organelles of immature chick

embryo erythrocytes. Mem. Inst. Butantan, 37: 327-333, 1973.

32. COIRO, J.R.R., MENEZES, H., MITSUTANI, C.Y., CARVALHO DOS SAN¬

TOS, M.A.S. & BRUNNER JR., A. Chromatin extrusion in erythrocy¬

tes óf Gallus, Bothrops, Bufo and Cyprinus species, and its significance.

Congresso Latino Americano de Microscopia Eletrônica, 2.°. Resumos,

1: 36. Ribeirão Preto (São Paulo), 1974.

33. COIRO, J.R.R., WEIGL, D.R., KISIELIUS, J., MENEZES, H. & BILLOTA,

J.A.T. A new embedding médium (Polylite 8001) for biological mate¬

rial. Ciênc. Cult., 24: 660-662, 1972.

34. DAVIES, H.G. Structure in nucleated erythrocytes. J. biophys. biochem.

Cytol., 9: 671-687, 1961.

35. DEHLER, A. Beitráge zur Kenntnis des feineren Banes der Roten Blutkõr

perchen beim Hühnerembryo. Arch. mikr. Anat., 46: 414-430, 1895.

36. DERVICHIAN, D.G., FOURNET, G. & GUINIER, A. Mise en evidence

d’une structure submicroscopique dans les globules rouges par la diffu-

sion des rayon X aux petites angles. C.R. Acad. Sei. (Paris), 224:

1848-1850, 1947.

37. DIETZ, A.A. & LUBRANO, T.

drogenase isoenzymes by

246-257, 1967.

Separation and quantitation of lactic dehy-

disc electrophoresis. Analyt. Biochem., 20:

38. DINTZIS, H., BORSOOK, H. & VINOGRAD, J. Microsome particles in

protein synthesis. New York, Pergamon, 1958, p. 95.

39. DUSTIN JR., P. Ribonucleic acid and vital staining of cytoplasmic vacuo-

les in animal cells. In: Symposia Society Experimental Biology. Nucleid

Acids. Cambridge, University Press, 1947. v. 1, p. 114.

40. EDSTROM, J.E. & DANEHOLT, B. Sedimentation properties of the moly

synthesized RNA from isolated nuclear components of Chironomus ten-

tans salivary gland cells. J. molec. Biol., 28: 331-343, 1967.

41. FANTONI, A., DE LA CHAPELLE, A., RIFKIND, R.A. & MARKS, P.A.

Erythroid cell development in fetal mice: synthetic capacity for different

proteins. J. molec. Biol., 33: 79-91, 1968.

42. FAWCETT, D.W. Electron microscopic observations on the marginal band

of nucleated erythrocytes. Anat. Rec., 133: 379-380, 1959.

203

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure of the elements of the avian and

mammalian erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

43. FAWCETT, D.W. & WITEBSKY, F. Observation on the ultrastructure of

nucleated erythrocytes and thrombocytes, with particular reference to

the structural basis of their discoidal shape. Z. Zellforsch., 62: 782-806,

1964.

44. FURCHGOTT, R.F. & PONDER, E. Disk-sfere transformation in mamma¬

lian red cells. II. The nature of the antisphering factor. J. exp. Biol., 17:

117-127, 1940.

45. GLOWACKI, E.R. & MILLETTE, R.L. Polyribosomes and loss of hemoglo¬

bin synthesis in the maturing reticulocyte. J. molec. Biol., 11: 116-127,

1965.

46. GRASSO, J.A. Cytoplasmic microtubules in mammalian erythropoietic cells.

Anat. Rec., 156: 397-414, 1966.

47. GRASSO, A., SWIFT, H. & ACKERMAN, G.A. Observations on the develop-

ment of erythrocytes in mammalian fetal liver. J. Cell Biol., 14: 235-254,

1962.

48. HAMMEL, C.L., RASMUSSEN, P. & BESSMAN, S.P. Hemoglobin synthe¬

sis. A nuclear function in the avian erythrocyte. J. Cell Biol. (Abstract),

19: 31A, 1963.

49. HUG, O., LIPPERT, W. & MOSER, P: Comp. Red. lst Congress Inter.

Microsc. Electron. 672, 1950. Cited by LOWENSTEIN, L.M. The mamma¬

lian reticulocyte. In: Int. Rev. Cytol., 8: 141, 1959.

50. IZAWA, M. & KAWASHIMA, K. RNA synthesis in the nucleoli of mouse

ascites tumor cells in relation to nucleolar components. Biochim,

biophys. Acta (Amst.), 155: 51-62, 1968.

51. JACOB, F. & MONOD, J. Genetic regulatory mechanism in the synthesis of

proteins. J. molec. Biol., 3: 318-356, 1961.

52. JENSEN, W.N., ASHENBRUKER, H., CARTWRIGHT, G.E. & WINTROBE,

M.M. The uptake in vitro of radioative iron by avian erythrocytes. J.

Lab. clin. Meã., 42: 833-846, 1953.

53. JONES, O.P. Elimination of midbodies from mitotic erythroblasts and their

contribution to fetal blood plasma. J. nat. Câncer Inst., 42: 753-763, 1969.

54. JUNG, F. Folia haemat. (Lpz), 7: 258-259, 1956. In: LOWENSTEIN, L.M. The

mammalian reticulocyte. Int. Rev. Cytol., 8: 142, 1959.

55. KAMPEN, E.J.V. & ZIJLSTRA, W.G. Erythrocytometric methods and their

standardization. Basel, Boroviczény & Karger, 1964. v. 18, p. 68.

56. KELLEMBERGER, E., RYTER, A. & SÉCHAUD, J. Electron microscope

study of DNA containing plasma. II. Vegetative and mature phage DNA

as compared with normal bacterial nucleoids in different physiological

States. J. biophys. biochem. Cytol., 4: 671-676, 1958.

57. KOSENOV, H. Ueber den Strukturwan, der Basophilen Subsatnz Junger

Erythrocyten in Fluoreszensmikroskop. Acta haemat. (Basel), 7: 360-368,

1952.

58. LABBE, R.F. & HUBBARD, N. Metal specificity of the iron protoporphyrin

chelating enzime from rat liver. Biochim. biophys. Acta, 52: 130-135, 1961.

59. LEONARDI, P. Valutazione e significato delle picnosi dei nuclei eritroblas-

tici midollari in condizioni mormali. Haematologica, 35: 409-427, 1951.

60. LEWIS, W.H. Pynocytosis. Buli. Johns Hopk. Hosp., 49: 17-27, 1931.

61. LISON, L. Histochimie et cytochimie animales. Principes et méthodes. Paris,

Gauthier-Villars, 1953, v. 1, p. 475-480.

204

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Compara tive study on the ultrastructure oí the elements of tlie avian and

mammalian erythrocytlc series. Correlation with liemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

62. MARKS, P.A., RIFKIND, R. & DANON, D. Polyribosomes and proteins syn-

thesis during reticulocyte maturation “in vitro”. Proc. nat. Acaá. Sei.

(Wash.), 50: 336-342, 1963.

63. MATHIAS, A.P., WILLIANSON, R., HUXLEY, H.E. & PAGE, S. Occurren-

ce and function of polysome in rabbit reticulocytes. J molec. Biol., 9:

154-167, 1964.

64. MENEZES, H., COIRO, J.R.R. & BRUNNER JR., A. Vesículas Peulgen

positivas ds Bufo, Gallus e Liophis. Reunião Extraordinária da Sociedade

Brasileira de Microscopia Eletrônica. São Paulo, 1972.

65. ME VES, F. Gesammelte Studien an roten Blutkürperchen der Amphibien.

Arch. mikr. Anat., 77: 465-540, 1903.

66. MOORE, C.V. & BROWN, E.B. Progresos en Hematologia. Barcelona, Edi¬

torial Cientifico-Medica, 1968. v. 2.

67. NICHOLAS, A. Sur quelques particularités de structure des erythrocytes

nuclées après coloration par d’hematoxyline ferrique. Bibl. Anat. (Basel),

4: 16-20, 1896.

68. 0’BRIEN, B.R.T. The presence of haemoglobin withim the nucleus of the

embryonic chick erythroblasts. Exp. Cell Res., 21: 226-228, 1960.

69. ORLIC, D., GORDON, A.S. & RHODIN, J.A.G. An ultrastructural study of

erythropoietin — induced red cell formation in mouse spleen. J. Ultras-

truct. Res., 13: 516-542, 1965.

70. PARKS, H.F. & CHIQUOINE, A.D. Observations on early stages of phago-

cytosis of colloidal particles by hepatic phagocytes of the mouse. In:

Proceedings of the Stockholm Conference Electron Microscopy. Uppsala,

Almquist & Wiksells, 1957. p. 154.

71. PAULING, L., ITANO, H.A., SINYER, J. & WELLS, I.C. Sickle cell ane¬

mia, a molecular disease. Science, 110: 543-548, 1949.

72. PENMAN,, S., SMITH, I. & HOLZMAN, E. Ribosomal RNA synthesis and

Processing in a particulate site in the HeLa cell nucleus. Science, 154:

786-789, 1966.

73. PERUTZ, M.F. Submicroscopic structure of the red cell. Nature, 161:

204-205, 1948.

74. PETERS, D. & WIGAND, R. Elektronenmikroskopishe Untersuchung der

Struktur Hámolisierter Reticulocyten. Klin. Wochschr., 28: 37-38, 1950.

75. PINHEIRO, P., LEBLOND, C.P. & DROZ, B. Synthetic capacity of reti¬

culocytes as shown by radioautography after incubation with labeled

precursors of protein or RNA. Exp. 0°ll RCs., 31: 517-537, 1963.

76. POLICARD, A., BESSIS, M. & BRETON-GORIUS, J. Structures myéliniques

observées au microscope électronique sur des coupes de globules rouges

em voie de lyse. Exp. Cell Res., 13: 184-186, 1957.

77. PONDER, E. Hemolysis and related phenomena. New York, Grune &

Stratton, 1948, v.I.

78. PORRA, R.J. & JONES, O.T.G. An investigation of the role of ferroche-

latase in the biosynthesis of various haem prosthetic groups. Biochem.

J., 87: 186-192, 1963.

79. PORTER, K.R. Observations on a submicroscopic basophilic component of

cytoplasm. J. exp. Meã., 97: 727-750, 1953.

80. RANVIER, L. Récherches sur les élements du sang. Arch. Physiol., 2: 1-15,

1875.

81. REIMANN, F. Retikulâre Substanz und Haemoglobinbildung. Schweiz. Z.

Path., 5: 343-352, 1942.

205

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

COIRO, J.R.R. Comparative study on the ultrastructure oí the elements of the avian and

mammallan erythrocytic series. Correlation with hemoglobin biosynthesis.

Mem. Inst. Butantan, 39: 169-206, 1975.

82. REYNOLDS, E.S. The use of lead citrate of high pH as an electron opaque

stain in electron microscopy. J. Cell Biol., 17: 209, 1963.

83. RIFKIND, R.A., DANON, D. & MARKS, P.A. Alterations in polyribosomes

during erythroid cell maturation. J. Cell Biol., 22: 599-611, 1964.

84. ROSENFELD, G. Corante pancrômico para hematologia e citologia clínica.

Nova combinação dos componentes do May-Grünwald e do Giemsa

num só corante de emprego rápido. Mem. Inst. Butantan, 20: 329-334,

1947.

85. SANO, S. Studies on the nature of basophilic stippled cell in lead poiso-

ning. Report. 2. Studies on the mechanism of granule formation of ba¬

sophilic stippled cell in lead poisoning. Acta haemat. Jap., 18: 631-635,

1955.

86. SCHULTZ, H. & DE PAOLA, S.D. Delta-Cytomembranem und Lameláre

Cytosomen. Z. Zellforsch., 49: 125-141, 1958.

87. SENO, S. The structure and the function of reticulocyte. Acta haemat.

Jap., 21: 171-181, 1958.

88. SENO, S., MIYAHARA, M„ OCHI, O., MATSUOKA, K., TOYAMA, Y. &

SHIBATA, T. Does reticulocyte synthesize RNA? Acta med. Okayama,

17: 253-256, 1963.

89. SEYFARTH, C. Experimentelle und klinische Untersuchungen über die vi-

talfárbbaren Erythrozyten. Folia haemat. (Lpz), 34: 7-38, 1927.

90. SIMMEL, H. Untersuchungen an jungen Erythrozyten (Studies on young

erythrocytes). Folia haemat. (Lpz), 32: 97-102, 1926.

91. SIMPSON, C.F. & KLING, J.M. The mechanism of denucleation in cir-

culating erythroblasts. J. Cell Biol., 35: 237-245, 1967.

92. THOMA, K. Klin. Wochschr., 28: 215-216. 1950. In: LOWENSTEIN, L.M.

The mammalian reticulocyte. Int. Rev. Cytol., 8: 141, 1959.

93. THORELL, B. Relation entre les modifications cytochimiques et citologi-

ques au cours de 1’erythropoiese. Rev. Hémat., 5: 561-564, 1950.

94. TOOZE, J. & DAVIES, H.G. The occurrence and possible significance of

haemoglobin in the chromosomal regions of mature erythrocyte nuclei

of the newt Triturus cristatus crisattus. J. Cell Biol., 16: 501-511, 1963.

95. VALLEJO- FREIRE, A. & BRUNNER JR., A. Eritrócitos na reticulocitose

do saturnismo experimental. Estrutura mitocondrial. Mem. Inst. Butan¬

tan, 28: 245-266, 1958.

96. WARNER, J.R., RICH, A. & HALL, O.E. Electron microscope studies of

ribosomal clusters synthesizing hemoglobin. Science, 138: 1399-1404, 1962.

97. WEIDENREICH, F. Studien über das Blut die blutbildungen und-zer-

stõrenden Organe. III über den Bau der Amphibien-erythrocyten. Arch.

mikr. Anat., 66: 270-298, 1905.

98. WEINBACH, E.C. A procedure for isolating stable mitochondria from rat

liver and kidney. Analyt. Biochem., 2: 335-343, 1961.

99. W ILT, F.H. The ontogeny of chick embryo hemoglobin. Proc. nat. Acad.

Sei. (Wash.), 48: 1582-1590, 1962.

100. WOLPERS, C. Elektronemikrospiche Untersuchungen der Innenstruktu-

rem Kernloser Erythrocyten. I. Reticulocyten und Pseudoreticulocyten.

Klin. Wischr., 34: 61-69, 1956.

Recebido para publicação em 16-IV-1975 e aceito em 9-VI-1975.

206

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 207-215, 1975

IMPORTÂNCIA DA CONSTITUIÇÃO ANATÔMICA DA

PONTA DO VENTRÍCULO ESOUERDO NA PATOLOGIA

DESSA REGIÃO NAS MIOCARDIOPATIAS NO BRASIL.*

MÉRCIA A.C. BARTKEVITCH, HELENA MÜLLER e

CARLOS MARIGO

Departamento de Patologia, Faculdade de Ciências Médicas da

Santa Casa de São Paulo

RESUMO: A grande incidência de processos patológicos (adel¬

gaçamento, aneurisma, fibrose e ou trombose mural) da ponta

do ventrículo esquerdo do coração nas miocardiopatias em nosso

meio, consideradas mesmo por alguns autores como patognomô-

nicos da moléstia de Chagas, levou-nos a estudar a morfologia

dessa região em corações normais, comparativamente com ou¬

tros patológicos. Verificou-se sistematicamente (em corações nor¬

mais) que a espessura da ponta é mais fina, quando comparada

com a espessura do restante da parede do ventrículo esquerdo,

fato este que se acentua com a idade, variando de 1:2 até 1:22.

Muitas vezes a morfologia normal dessa região é representada

apenas por uma fenda, limitada pelo endocárdio e pericárdio,

com escassa musculatura. O objetivo deste trabalho é o de de¬

monstrar a existência desse fator constitucional como predispo-

nente à alta incidência da patologia acima citada, aí localizada,

principalmente quando esse escasso miocárdio é lesado.

UNITERMOS: Miocardites. Moléstia de Chagas.

INTRODUÇÃO

A grande ocorrência de processos patológicos na ponta do ventrículo es¬

querdo, em nosso meio, processos esses caracterizados principalmente por adel¬

gaçamento, aneurisma, fibrose e ou trombose mural (Fig. 1), relatados comu-

mente na Moléstia de Chagas 6 ' 10 ' n - 12 ’ 13 ' levou-nos a verificar qual

a incidência dessas alterações no material da Santa Casa de São Paulo e suas

* Parte deste trabalho foi apresentado no VIII Congresso da Sociedade Brasileira de Patolo¬

gia — julho de 1968 — Ribeirão Preto. SP.

Endereço para correspondência: Faculdade de Medicina de Catanduva. Catanduva, São Paulo,

Brasil.

207

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

BARTKEVITCH, M. A. C.; MULLER, H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tômica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 207-215, 1975.

possíveis relações com as miocardiopatias em geral, não chagásicas, uma vez que

nosso hospital recebe pacientes das mais diversas regiões do país. Tendo em

vista a noção existente em nosso Departamento, de que a morfologia da ponta

dos corações normais predispõe a esse tipo de patologia 9 fizemos o estudo da

anatomia normai dessa região.

MATERIAL E MÉTODOS

Utilizamos para este trabalho material de 1222 necropsias de rotina, sendo

600 de adultos e 622 de crianças, da Santa Casa de São Paulo, Departamento

de Patologia, cujas idades variaram desde recém-nascidos de 1 dia até adultos

de 70 anos, de ambos os sexos e de diversas raças. Para o estudo da morfologia

normal da ponta foram escolhidos casos sem patologia cardíaca de qualquer

natureza e selecionados 100 casos, que tinham sido cortados rigorosamente de

acordo com o método utilizado. Fizemos também o levantamento dos casos

com processos patológicos do miocárdio, utilizando cerca de 4.000 necropsias

consecutivas e anotando aqueles com alterações da ponta do ventrículo esquerdo,

os quais totalizarm 112 casos (Tab. 1).

TABELA 1

Patologia da ponta do coração — 112 casos de Miocardiopatias

Doenças

Número de

Com Patologia

Porcentagem

Casos

da Ponta

Miocardite chagásica

64%

Miocardite reumática

—

Miocardites de etiologia não

esclarecida*

50%

Miocardiosclerose

20%

Dep. Patologia Santa Casa S.P.

Os corações foram examinados da seguinte maneira: realizamos um corte

frontal no coração compreendendo ambos os ventrículos e septo, para me-

todizar as mensurações. Estas foram feitas ao nível do terço médio da parede

lateral do ventrículo esquerdo, e na ponta, usando-se lupa manual e régua

milimétrica. Os corações foram previamente lavados com água, no sentido da

corrente sanguínea para remover o sangue e fixados em formol a 10% por

24 - 48 horas. Toda a amostra foi examinada também em cortes histológicos

corados pelo HE e tricrômico de Masson.

* Miocardites intersticiais provavelmente a virus e alguns casos provavelmente chagásicos,

não confirmados.

208

SciELO

BARTKEVITCH, M. A. C.; MULLER, H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tômica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Butantan. 39: 207-215. 1975.

Fig. 1 - Aspecto macroscopico do ventrículo esquerdo na miocardite chagásica com a cha¬

mada "lesão da ponta".

5 6 SciELOo h 12 13 14 15 16

BARTKEVITCH, M. A. C.; MÜLLER, H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tômica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 207-215, 1975.

RESULTADOS

Verificamos em nosso estudo de corações normais que a parede da ponta

é sistematicamente fina, fato esse que mais se evidencia, se relacionado com

a espessura da parede do ventrículo esquerdo. Esta relação variou de 1:2 até

1:22 aumentando progressivamente com a idade (Tab. 2).

TABELA 2

Alguns exemplos em vários grupos etários, mostrando a relação das espessuras

da parede do ventrículo esquerdo e sua ponta em corações normais

N.° Autópsia Idade Sexo Cor Ponta-V.E. Parede-V.E. Relação

cm cm Parede/Ponta

.927

0 .

. 1

12.

429

13d

0 .

12.

506

0 .

12.

.496

0 .

:2,5

12.

.730

0 .

: 1,5

.710

0 .

:2,3

12.

509

1 lm

0 .

12.

.766

3 a lm

0 .

:2,3

13.

.676

10a

1 .

.715

11 a 6m

0 .

14.

034

15a

0 .

1 .

: 6,5

12.

,454

20a

14.

152

25a

0 .

1 .

13.

.996

36a

.296

40a

. 1

:20

.720

41a

.829

52a

: 10

13,

,030

54a

:22

d = dia a = ano P = preto Dep. Pat. Santa Casa S.P.

m = meses B = branco M = mulato

Os dados obtidos revelam que o aumento da espessura da parede lateral

do ventrículo esquerdo com a idade, não é acompanhado nas mesmas propor¬

ções, pela parede da ponta, existindo um verdadeiro índice de adelgaçamento

dado pela relação espessura da ponta/espessura da parede do ventrículo es¬

querdo. Temos alguns exemplos dessa morfologia em corações normais nas

figuras 2 a 6.

Foram também revistos 112 casos de cardiopatias com lesões miocárdicas,

das quais 45 apresentavam as lesões de ponta já referidas anteriormente. A

incidência das mesmas em relação com a patologia do miocárdio é vista na

Tabela 1. Como se verifica a patologia da ponta ocorre não só na Moléstia

de Chagas, como é frequentemente referida na literatura, mas em outras enti-

210

SciELO

BARTKEVITCH, M. A. C.; MULLER, H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tômica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 207-215, 1975.

Fig. 2 - Coração de criança, 13 dias, masc., Dr.. Relação parede/ponta do V.E. = 1:3.

Fig. 3 - Coração de criança, onze meses, masc., pardo. Relação parede/ponta do V.E. = 1:5.

Fig. 4 - Coração de criança, vinte e um meses, fem., pardo. Relação parede/ponta do V.E. =

— 1:12. Notar a ponta limitada apenas pelo epicárdio.

Fig. 5 - Quinze anos, masc., br.. Relação parede/ponta do V.E. = 1:6,5.

211

BARTKEVITCH, M. A. C.; MÜLLER. H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tômica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 207-215, 1975.

dades mórbidas dc nosso meio como miocardites intersticiais a vírus, miocar-

dioesclerose, etc. (Tab. 1).

COMENTÁRIOS

A morfologia dessa região cardíaca, no que diz respeito à sua espessura,

não é referida nos tratados de Anatomia e sequer mencionada nos compêndios

de cirurgia cardíaca por nós consultados 2 > 3 ’ 4 - 5 ’ 8 ’ 11 ■ 18 ’ 19 ’ 20 ’ bem como em

publicações especializadas ou comunicações prévias 7 ’ 14 - 15 ’ 16 . Fato digno de

nota é que, na maioria dos casos, a ponta do ventrículo esquerdo é representada

apenas por uma fenda, delimitada pelo epicárdio, endocárdio e com escassos fei¬

xes musculares, entremeados e descontínuos (Fig. 7).

Os nossos achados fazem supor que a espessura da ponta ao contrário

do restante da parede do ventrículo esquerdo não acompanha o completo de¬

senvolvimento do órgão, representando não uma anomalia, mas um fator de

variação constitucional anatômico.

É óbvio portanto, que nas cardiopatias em que as fibras musculares pro¬

priamente ditas estão comprometidas ou substituídas por fibrose, a incidência

de alterações anatomo-patológicas neste “locus minoris resistentiae" aumente,

como realmente demonstra nosso material de miocardites. A menor ocorrência

de lesões de ponta na miocardite reumatismal poderia ser explicada exata¬

mente pelo não comprometimento das fibras miocárdicas e sim somente no

tecido peri-vascular (nódulos de Aschoff e suas sequelas). Acreditamos que

em casos de intensa miocardite reumatismal possa haver uma incidência pouco

maior dc patologia da ponta do que a vista na Tabela 1, mesmo porque estes

corações foram abertos pelo método normalmente utilizado pelos patologistas

(obedecendo o sentido da corrente sanguínea), para melhor estudo das válvulas

e dessa maneira nem sempre é possível evidenciar nitidamente as diferenças

de espessura da parede lateral e ponta do ventrículo esquerdo.

Com este trabalho de observação de material de rotina, julgamos contri¬

buir para a melhor compreensão da patologia da ponta do coração nas mio¬

cardiopatias em geral, particularmente no nosso meio, quase sempre atribuídas

a uma só entidade mórbida e para a qual vários mecanismos patogênicos são

aventados, C 6 ’ 10 ' 12 ' ]3 .

CONCLUSÕES

1 — Existe um fator constitucional anatômico predisponente para a alta

incidência dc alterações da ponta do ventrículo esquerdo do coração nas mio¬

cardiopatias, inflamatórias ou não. Esse fator anatômico é representado por

uma parede delgada e pobre em fibras musculares.

2 — A “lesão da ponta’’ não é patognomônica da Moléstia de Chagas,

mas apenas mais frequente nesta entidade mórbida.

212

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

BARTKEVITCH, M. A. C.; MÜLLER, H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tômica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 207-215, 1975.

Flg. 6 - Quarenta anos, fem., bç. Relação parede/ponta do V.E. = 1:20.

Pig. 7 - Ponta do coração: corte histológico, corado pelo trlcrômico de Masson. Aumento

6,3 x. Notar a ponta do V.E. representada apenas pelo eplcárdio e escassos íeixes musculares

descontínuos.

213

SciELO

BARTKEVITCH, M. A. C.; MULLER, H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tómica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Butantan, 39: 207-215, 1975.

ABSTRACT: In view of the high incidence of pathological pro¬

cesses in the tip of the heart, in myocardiopathies found in

Brazil, a study of the morphology of this region has been under-

taken. Normal hearts have been studied and compared with

pathological hearts. The normal hearts were obtained from

1220 necropsies of individuais ranging in age from 1 day to

70 years. The heart tip was systematically thinner when com¬

pared with the remainder of the left ventricle wall. Thinness

increase with age. The relationship between the findings and

several pathological processes (thinness of the wall tip, aneurism,

fibrosis and mural thrombosis), as well as Chagas’ disease and

other myocardiopathies in Brazil was discussed. The authors

draw special attention to the meaning of the anatomic consti-

tutional factor as predisponent to the several pathologies stu¬

died.

UNITERMS: Myocarditis. Chagas’ disease.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

ANDRADE, Z. A lesão apical do coração na miocardite crônica chagásica.

Hospital, 50: 59-72, 1956.

Ventricular Septal defects. Phila-

2. BAILEY, C. P. Surgery of the Heart

delphia, Febeger, 1955.

3. FARINA, A. Atlante de Anatomia Humana Discrittiva. Milano, Ricordati,

1957.

4. GARDNER, E. Anatomia - Estudo Regional do Corpo Humano. 2. a ed. Rio

de Janeiro, Koogan, 1967.

5. HOLLINSHEAD, W. H. Text book of Anatomy. 2. a ed. New York, Harper

& Row, 1967.

6. KOBERLE, F.; BRITO COSTA, R. de; MELLO DE OLIVEIRA, J. A. &

OLIVEIRA, J. S. Patologia da moléstia de Chagas - Medicina. Rev. C. A.

Rocha Lima e Hosp. Clínicas - Fac. Med. Ribeirão Preto, 1: 5-45, 1972.

7. LEV, M. & SIMKINS, C. S. Architecture of the human ventricular myo-

cardium. Avier. Heart J., 5: 397-409, 1956.

8. LOCKHART, R.D.; HAMILTON, G. F.; FYFE, F. W. Anatomia Humana.

México, Editorial Interamericana S. A., 1965.

9. MAFFEI, W. E. Fundamentos da Medicina. São Paulo, Procienx, 1968. v. II.

10. MELLO DE OLIVEIRA, J. A. Patogenia do aneurisma da ponta na cardio-

patia chagásica. Ribeirão Preto, 1967 (Tese - Faculdade de Medicina de

Ribeirão Preto).

11. MIGNONI, C. Alguns aspectos da anatomia patológica da cardite chagásica

crônica. São Paulo, 1958 (Tese - Faculdade de Medicina da Universidade

São Paulo).

12. MOIA, B.; ROSENBAUN, M. B. & HOYMAN, D. Aneurysmas ventriculares

en la miocarditis crônica chagásica. Rev. argent. Cardiol., 22: 113-115, 1955.

13. RASO, P. Contribuição ao estudo da lesão vorticilar na cardite chagásica

crônica. Belo Horizonte, 1964 (Tese - Faculdade de Medicina de Belo

Horizonte.

214

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

BARTKEVITCH, M. A. C.; MÜLLER, H. & MARIGO, C. Importância da constituição ana¬

tômica da ponta do ventrículo esquerdo na patologia dessa região nas miocardiopatias no

Brasil.

Mem. Inst. Dutantan, 39: 207-215, 1975.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

20 .

RASO, P. Variações antômicas do vórtex do coração em crianças. Congres¬

so Brasileiro de Patologia, VII. Ribeirão Preto, 1968.

ROBB, J. S. & ROBB, R. C. Abnormal distribution of the superficial mus-

cle bundles in the human heart. Amer. Heart J15: 597-603, 1938.

ROBB, J. S. & ROBB, R. C. The normal heart - Anatomy and physiology

of the structural units. Amer. Heart J ., 23: 455-467, 1942.

ROUVIERE, H. Anatomia Humana Descritiva y Topográfica. 6. a ed. Paris,

Masson, 1948.

Atlas de Anatomia Humana. 3 a ed. Barcelona, Labor,

Tratado de Anatomia. 9. a ed. Barcelona, Salvat,

TANDLER, J. Tratado de Anatomia Sistemática. Barcelona, Salvat, 1929.

SPALTEHOLZ, W

1967.

TESTUT, L. & LATARGET, A

1968.

Recebido para publicação em 30-V-1975 e aceito em 28-IX-1975.

215

2 3 4 5 6 SCÍELOq 2.1 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 217-223, 1975

RELATO E CONSIDERAÇÕES SOBRE A PRESENÇA DE

CÉLULAS DE WARTHIN-FINKELDEY EM PACIENTE PORTA¬

DOR DE MOLÉSTIA DE HODGKIN EM ATIVIDADE. *

JESUS CARLOS MACHADO e LEONOR DENARO

Secção de Anatomia Patológica, Instituto Butantan

RESUMO: A Célula de Warthin-Finkeldey presente nos tecidos

linfóides de pacientes portadores de Sarampo, é tida como espe¬

cífica dessa entidade nosológica. Aparecendo nos tecidos linfói¬

des na fase pré-exantemática, segundo numerosos autores, per¬

mite não só o diagnóstico anátomo-patológico dessa entidade

como também até prever com antecipação o surgimento do

surto exantemático. Os autores do presente trabalho apresen¬

tam caso de paciente portador de Moléstia de Hodgkin no

qual a retirada de um gânglio linfático cervical, mostrou nessa

estrutura numerosas células de Warthin-Finkeldey, sem a ocor¬

rência no paciente de qualquer manifestação clínica de saram¬

po. Também nenhuma outra criança da Enfermaria Infantil

onde estava o paciente apresentou a sintomatologia do sarampo.

Analisam as possíveis interpretações desse achado.

UNITERMOS: Moléstia de Hodgkin. Sarampo. Virologia.

INTRODUÇÃO

A histopatologia da Moléstia de Hodgkin e os aspectos peculiares im uno-

patológicos que a acompanham têm sido objeto de grande estudo e avanço

nesses últimos dez anos. A etiopatogenia apesar disso tem-se constituído ain¬

da em uma grande incógnita. Desta forma a apresentação de certos quadros

patológicos intercorrentes, merecem, a nosso ver, relatos especiais para que

possíveis ilações etiopatogenéticas ou outras possam ser mais convenientemente

analisadas. Assim achamos oportuno relatar o encontro de células de Warthin-

Finkeldey, tidas como patognomônicas do quadro anátomo-patológico do Sa-

* Trabalho realizado em colaboração com o Instituto Central - Hospital A. C. Camargo -

Fundação Antonio Prudente e com auxílio do Conselho Nacional de Desenvolvimento

Cientifico e Tecnológico (CNPq) e Fundo Especial de Despesas do Instituto Butantan

(FEDIB). Apresentado no Congresso de Anatomia Patológica da Soc. Bras. de Patologis¬

tas, realizado em Curitiba (PR) em 1974.

Endereço para correspondência: Caixa postal 65 - São Paulo - Brasil

217

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

MACHADO, J. C. & DENARO, L. Relato e considerações sobre a presença de células de

Warthin-Finkeldey em paciente portador de moléstia de Hodgkin em atividade.

Mem. Inst. Butantan, 39: 217-223, 1975.

rampo, em gânglio linfático cervical de um menor, portador da Moléstia de

Hodgkin. Ainda mais que, nêle não se observou, o quadro clínico do sarampo.

Esses achados, quais sejam, a concomitância da Moléstia de Hodgkin com a

célula de Warthin-Finkeldey e a ausência do quadro clínico do sarampo jus¬

tificam, a nosso ver, amplamente este relato.

O quadro anátomo-patológico do sarampo, está bem estabelecido, e se¬

gundo Roberts e Bain 5 (1958), foi inicialmente descrito por Ciaccio (1910)

e Alagna (1911), que mostraram alterações nos folículos linfóides onde en¬

contraram células gigantes multi-nucleadas e com grande massa de cromatina,

lembrando segundo eles, megacariocitos. Foram Warthin 6 (1931) e Finkeldey 2

(1931) que descreveram o quadro anátomo-patológico típico do sarampo em

amígdalas e no apêndice de crianças com a célula típica que levou os seus

nomes. Trata-se de uma célula gigante com grande riqueza de núcleos dispos¬

tos por vezes em cachos de uva ou moruliformes. Hathaway (1935) mostrou

que esses elementos eram difusos pelo organismo. A presença dessas células

gigantes no tecido linfóide precedia a fase exantemática.

Células gigantes epiteliais também foram descritas no sarampo, como no

epitélio dos brônquios por Hecht (1910), segundo Roberts e Bain 5 ( 1958).

Mas, estas podem ser encontradas em afecções que não o sarampo, constituin¬

do o chamado quadro das pneumonias de células gigantes. Também nos alvéo¬

los elas foram descritas e sobre isso Janigan 3 (1961) publica extensa lista

de autores que as observaram.

Ao que saibamos não há relato na literatura médica especializada da pre¬

sença de células de Warthin-Finkeldey associadas a outras afecções, que não

o sarampo.

MATERIAL

Tratava-se de uma criança do sexo masculino, de cor branca — cauca¬

siano — com 7 anos de idade, originário de Pouso Alegre, Minas Gerais.

Apresentava volumosas massas tumorais nas regiões cervicais e inguinais, iden¬

tificadas também claramente pela Linfografia. O quadro clínico completava-se

com surtos febris intermitentes após os quais os gânglios aparentemente dimi¬

nuíam de volume, sem desaparecer. Em Campinas foi feito o diagnóstico his¬

tológico, pela Faculdade de Medicina, Serviço de Anatomia Patológica do

Prof. Dr. J. Lopes de Faria, de Moléstia de Hodgkin. Com êsse diagnóstico

foi enviado ao Hospital de Câncer de S. Paulo. Nele foi realizada outra biópsia

cujo gânglio linfático mostrou o quadro anátomo-patológico que iremos des¬

crever. O gânglio linfático bem aumentado de volume (3 x 3 x 2,5 cm), mostra¬

va macroscopicamente cápsula distendida, de cor branca e consistência elástica.

Ao corte, observava-sc que não havia delimitação da cortical com a medular,

sendo todo ele ocupado por tecido brancacento uniforme. Os cortes histológi¬

cos mostraram forte proliferação linfática, tanto na zona correspondente à

cortical como na medular. Desde logo destavam-se elementos linfocitóides que

se agrupavam dando idéia de “aglutinação nuclear”, constituindo pequenos

conglomerados. O escasso citoplasma na maioria era acidofílico. Os núcleos se

218

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

MACHADO, J. C. & DENARO, L. Relato e considerações sobre a presença de células de

Warthin-Finkeldey em paciente portador de moléstia de Hodgkin em atividade.

Mem. Inst. Butantan, 39: 217-223, 1975.

aglomeravam com variada morfologia, ora alongados, ora como “cachos de

uva” ora moruliformes, dispondo-se nos cordões medulares, na cortical, na re¬

gião inter-folicular ou dispostos peri-vascularmente. Os núcleos são linfocitói-

des e não histiocitóides como os encontrados nas outras células gigantes sendo

também facilmente distinguíveis de megacariocitos. Processos degenerativos des¬

sas células gigantes são encontrados, chamando atenção raras inclusões intranu-

cleares basofílicas. Fenômenos de cariorexis são comuns. Eosinfilia e plasmacé-

lulas não são frequentes. A célula gigante (Figs. 1 a 4) é facilmente identificável

como aquela descrita por Warthin e Finkeldey no sarampo.

DISCUSSÃO

A célula gigante de Warthin-Finkeldey, com as características descritas,

quais sejam a de possuir grande número de núcleos de tipo linfocitário, contido

em citoplasma não muito abundante acidofílico e raramente basofílico, com os

núcleos aglutinados e dispostos como em “cachos de uva” ou moruliformes,

superpostos e dispersos irregularmente pela estrutura lnfocitária que a alberga,

é segundo M. Matumoto 4 (1959) e outros autores, patognomônica para o

sarampo, a exemplo do que seria a célula de Sternberg para a Moléstia de

Hodgkin. Segundo Haas, o tamanho da célula e o número de núcleos é pro¬

porcional a intensidade da multiplicação vírica. Também G.B.S. Roberts

e A.D. Bain 5 (1958) afirmam que o desenvolvimento dessas células gigantes

multi-nucleadas no tecido linfóide do organismo, no sarampo, é ocorrência cons¬

tante. Trata-se, segundo esses autores, de resposta específica do tecido linfóide

à presença do vírus, apesar deles não terem sido ainda nelas identificados.

Essas células aparecem 7 dias antes do exantema e desaparecem após este

ter-se manifestado. O mecanismo de formação dessas células gigantes, segun¬

do Roberts e Bain 5 (1958) Aoyama 1 (1959) e Matumoto 4 (1966), no sa¬

rampo e outros mixovírus está esclarecido. Forma-se a partir da fusão das

membranas periféricas de cada uma das células. O fator que dissolve as pare¬

des celulares é idêntico ao que produz a atividade hemolítica do vírus do sa¬

rampo ou ao menos encontra-se ligado às mesmas estruturas lipo-proteicas

do vírus.

Assim, não padece dúvida, do encontrado na literatura, que a célula de

Warthin-Finkeldey é patognomônica do sarampo, aparecendo na fase pródrô-

mica pré-exantemática e desaparecendo com o surgir deste. Não encontramos

na literatura médica especializada referência do encontro dessa célula em

outras afecções e mesmo os livros textos de patologia, mais usuais, ignoram

habitualmente esta célula. Foi, com surpresa que, ao diagnosticarmos

este quadro histopatológico, não observássemos o quadro clínico posterior

exantemático típico do sarampo no paciente. Diante do não encontro do qua¬

dro anátomo-patológico da moléstia de Hodgkin, solicitamos à Faculdade de

Medicina de Campinas as lâminas do caso e na revisão efetuada, comprova¬

mos a existência desta afecção no primeiro gânglio retirado. A sub-tipagem, a

nosso ver, enquadrou a Moléstia de Hodgkin na fase de para-granuloma de

Jackson e Parker ou na predominância linfocitária da classificação de Rye.

219

SciELO

.0 11 12 13 14 15 16

MACHADO, J. C. & DENARO, L. Relato e considerações sobre a presença de células de

Warthin-Pinkeldey em paciente portador de moléstia de Hodgkin em atividade.

Mem. Inst. Butantan, 39: 217-223, 1975.

’£

>>5

A*.

■'W

tjT*. ^ ^ /<• A -1 • ^ * 1

u -5

L ' d

>?«

# 5 >w.

w vv*'

^8*-í»

%***>

• #»»

*4S^J«5£*»S*..-5? tStól t'

rí

s^&i&ssBggs

VS»ii.

v*>». •

;t«v

*v«

N«-

« *

.*_•*

■w ■

.'*w;

rçV-y®

■^skss

•>!

Fig. 1 - Gânglio linfático apresentado na parte central, células gigantes de Warthin-

Finkeldey, destacando-se no parênquima. (X 200). Col. H.E.

Fig. 2 - Aspecto do gânglio linfático com a célula de Warthin-Finkeldey, salientando-se

no campo, na parte central. (X 220). CoL H.E.

•j8£Ji

-\%v

& % Ã-

220

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

MACHADO, J. C. & DENARO, L. Relato e considerações sobre a presença de células de

Warthln-Finkeldey em paciente portador de moléstia de Hodgkin em atividade.

Mem. Inst. Butantan, 39: 217-223, 1975.

Flg. 3 - Célula gigante de Warthln-Finkeldey, de aspecto moruliíorme, representada por

aglutinado de núcleos llnfocitóldes. (X 400). Col. H.E.

Flg. 4 - Célula gigante de Warthln-Finkeldey apresentando núcleos aglutinados. (x 400).

Col. H.E.

221

SciELO

MACHADO, J. C. & DENARO, L. Relato e considerações sobre a presença de células de

Warthin-Finkeldey em paciente portador de moléstia de Hodgkin em atividade.

Mem. Inst. Butantan, 39: 217-223, 1975.

CONCLUSÃO

O encontro da célula de Warthin-Finkeldey em gânglio linfático de pa¬

ciente com Moléstia de Hodgkin, sem que o mesmo apresentasse o quadro

clínico do sarampo, nos leva a várias suposições. A primeira delas é a de que

a célula de Warthin-Finkeldey não seria patognomônica do sarampo, podendo

acompanhar outras afecções. Mas, é bem sabido que os pacientes com Molés¬

tia de Hodgkin apresentam deficiências imunológicas bem características e

provavelmente essas seriam as responsáveis pelo não aparecimento da Sinto¬

matologia clínica clássica do sarampo. A nossa experiência em Moléstia de

Hodgkin é significativa e das centenas de casos que já observamos somente es¬

te é que apresentou tal quadro anátomo-patológico. Creio podermos supor que

talvez realmente o paciente apresentou o quadro anátomo-patológico do sa¬

rampo sem a sua manifestação clínica, pelas peculiaridades imunológicas da

Moléstia de Hodgkin de que ele é portador. Somente apreciaríamos acrescentar

que nenhuma criança da enfermaria em que o paciente esteve internado apre¬

sentou sintomatologia ou quadro clínico específico de sarampo. Após o trata¬

mento específico para a Moléstia de Hodgkin, o paciente encontra-se bem

(5-4-1975).

ABSTRACT: The Warthin-Finkeldey cell, present in the lym-

phoid tissue of patients affected by measles, is considered as

specific for this nosological entity. According to numerous au-

thors, when these cells appear in the lymphoid tissues during

the preexanthematic phase, not only the anatomo-pathological

diagnosis of measles is justified, but even an antecipation of the

appearance of the exanthematic eruption is possible. In the

present paper, the case of a patient with Hodgkin’s disease is

presented. A removed cervical lymph node showed numerous

Warthin-Finkeldey cells, although the patient did not present

any clinicai manifestation of measles. No other child in the

same hospital ward presented symptomatology of measles. The

authors analyse the possible interpretations of these findings.

UNITERMS: Hodkin’s disease. Measles. Virology.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. AYOAMA, Y. Changes of altered cells infected with measles virus. Jap. J.

exp. Med., 29: 535-545, 1959.

2. FINKELDEY, W. Über Riesenzellbefunde in den gaumennandeln, zugleica

ein Beitrag zur Histopathologie der mandelverãnderungen im maser

ninkubations stadium. Wirc. Arch. Path. Anat., 281: 323, 1931.

3. JANIGAN, D. T. Giant cell pneumonia and measle: an analytical review.

Canad. meã. Ass. J., 23: 741-748, 1961.

4. MATUMOTO, M. Multiplication of measles virus in cell cultures. Bact. Rev.,

30: 152-176, 1966.

Obs.: Foi realizado estudo do cariograma deste paciente a partir de leucócitos do sangue

circulante que está sendo publicado à parte, em colaboração com L. Denaro.

222

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

MACHADO, J. C. & DENARO, L. Relato e considerações sobre a presença de células de

Warthin-Finkeldey em paciente portador de moléstia de Hodgkin em atividade.

Mem. Jnst. Butantan, 39: 217-223, 1975.

5. ROBERTS, G. B. S. & BAIN, A. D. The pathology of measles. J. Path.

Bact, 76: 111-118, 1958.

6. WARTHIN, A. S. Occurence oí numerous large giant cells in the tonsils

and pharingeal mucosa in the prodromial stage of measles. Arch. Path.,

11: 864, 1931.

Recebido para publicação em ll-IV-1975 e aceito em 28-IX-1975.

223

SciELO

Mem. Inst. Butantan

39: 225-231, 1975

CHANGES IN CHROMOSOME STRUCTURES

OBSERVED IN PATIENT WITH CONCOMITANT

IIODGKIN 7 S DISEASE AND MEASLES. *

LEONOR DENARO, JESUS CARLOS MACHADO AND Y AM ARA

RODRIGUES MARTINS

Secção de Anatomia Patológica, Instituto Butantan

ABSTRACT: A case of a patient presenting an anatomo-patho-

logical picture of concomitant Hodgkin’s disease and Warthin-

Finkeldey cells, the latter regarded as pathognomonic for meas-

les, without clinicai evidence of this infection, led us to study

the chromosomal set in the patienfs leukocytes. Cells with

structural chromosomal aberrations (gaps and breaks) were

found in a statistically significant higher frequency in relation

to the control. Numerical alterations without statistical signifi-

cance were also observed.

UNITERMS: HodgkhTs disease. Measles. Chromosomal aspects.

INTRODUCTION

The presence of Warthin-Finkeldey (W-F) giant cells in lymphoid tissues

of the human organism, described independently by both authors in 1931, is

considered pathognomonic for infection with measles, and seem to be specific

reactions of the lymphoid tissue cells against the measles virus.

These giant cells appear during the prodromal phase (±7 days after infec-

'tion), and disappear soon after the onset of the rash. They contain a great

number of small nuclei of a morula-or-grape-,cluster-like aspect, and are typical

for elements of the lymphocytic series.

In the present case we point out the striking concomitance of the anato-

mo-pathological pictures of measles and Hodgkin’s disease, as well as the ab-

sence of clinicai manifestation of measles in the patient or in any other child

in the same hospital ward. This fact seems to justify the publication of this

paper although it reports only an isolated case.

* This work was supported by the Conselho Nacional de Pesquisas, Fundo Especial de

Despesas do Instituto Butantan and Divisão Nacional do Câncer.

Adress: Caixa postal 65 - São Paulo - Brasil

225

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

DENARO, L.; MACHADO, J.C. & MARTINS, Y.R. Changes in chromosome structure obser-

vecl in patient with concomitant HodgkiiTs disease and measles.

Mem. Inst. Butantan, 39: 225-231. 1975.

Oncc there is an invasion of virai agents, the measles virus in particular,

an analysis of the chromosomal set of the patient seems to be appropriate to

elucidate the situation, and to establish whether unbalances of the cell metabo-

lism are actually occurring due to this virus invasion.

Generally, upon an atack by physical, Chemical and biological agents, one

of the cell responses becomes manifest through breakages, often restricted to

the vulnerable points of the structure of the chromosomes and through struetu-

ral dissarray of these elements.

Ostergren and Wakonig 15 , 1954, described the breakage as an anomaly

of the secondary constriction in a single chromatid, or as a typical example of

a secondary constriction in one chromatid accompanied by a corresponding

break in the other, up to the complet breakage in both chromatids.

Ferguson-Smith et al. 3 , 1962, defined the secondary constrictions as con-

tracted regions in both chromosome chromatids, distinct from the centromere,

or as a strongly marked-area of negative heteropycnosis.

These sites of secondary constrictions seem to be associated with delayed

DNA replication blocks (heterochromatin) where chromosomal aberrations

occur with the highest probability (Ferguson-Smith and Handmaker 4 , 1961).

Ferguson-Smith et al. 3 , 1962, described 20 sites of secondary constrictions,

and their relative frequencies in normal human somatic chromosomes; based

on this description we analysed our results.

MATERIAL AND METHODS

A 7 year-old male child (A.P.S., register n.° 732.284) of Caucasian

origin, was admitted to the Serviço de Pediatria of the Instituto Central — Hos¬

pital A. C. Camargo.

Physical and lymphographic examinations showed swollen cervical and in¬

guinal lymph nodes, some of which confluent.

Biopsies of cervical lymph nodes revcaled upon histological examination

a typical picture of Hodgkin’s disease, and the presence of giant cells from

the lymphocytic series of Warthin-Finkeldey type (1931) regarded as pathogno-

monic for infection with measles virus.

The global aspect of the histopathological findings were already described

by Machado & Denaro (in press).

At the moment of the surgical exploration, a 10 ml sample of peripheral

blood was collected in a heparinized syringe.

Chromosome preparations were obtained from 72 h leukocyte cultures,

according to the modified tecnique of Moorhead et al. 10 , 1960.

Concomitantiy, leukocytes of a healthy individual were cultured as control

under the same laboratory conditions.

226

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

DENARO, L.; MACHADO, J.C. & MARTINS, Y.R. Changes in chromosome structure obser-

ved in patíent with concomitant Hodgkin’s disease and measles.

■* Mem. Inst. Butantan, 39 : 225-231, 1975.

3 5

Figs. 1 to 5 - Types oí structural chromosome anomalies observed: 1 - dicentric. 2 e 3 - gap

in one chromatld. 4 - break in one chromatid. 5 - break in both chromatids.

227

DENARO, L.; MACHADO, J.C. & MARTINS, Y.R. Changes in chromosome structure obser-

ved in patient with concomitant Hodgkin's disease and measles.

Mem. Inst. Butantan, 39: 225-231, 1975.

Following the descriptions of Ferguson-Smith et al. 3 , 1962, and pointing

out anew the frailty of these secondary constrictions to physical, Chemical and

biological agents, we shall try to classify the phenomena found as:

1. Achromatic lesions, breaks or gaps as a discontinuity smaller than

the width of chromatid whose distai and proximal portions point in

the same direction. These lesions may affect one or both sister chro-

matids at the same regions, in this case called isochromatidic lesion.

2. Breaks as a discontinuity larger than the width of the proper chroma¬

tid, in general with dislocated terminal fragments.

RESULTS

Table 1 summarizes the numerical chromosome picture of the patient APS

and the corresponding control.

TABLE 1

Chromosome

number

Total

of cells

analysed

APS

Control

—

Table 2 and Figures 1 to 5, summarize, the cell types found in patient

APS and the corresponding control.

TABLE 2

with

Total

Cell

normal

structural

of cells

types

altera tions

analysed

APS

16 (20%)

control

3 (3.75%)

2 2

X = 10,09 : X (P = 0,05) = 3,84 : < P < 0,01

1 o

The results of the statistical analysis show that the difference in frequen-

cy of those breaks and chromosomal gaps is not due to chance alone. On the

228

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

DENARO, L.; MACHADO, J.C. & MARTINS, Y.R. Changes in chromosome structure obser-

ved in patient with concomitant Hodgkin’s disease and measles.

Mem. Inst. Butantan, 39: 225-231, 1975.

other hand, the frequency of cells with hypodiploid number indicates that such

losses are fortuitous in the APS patient as well as in the control.

The frequency of hyperdiploid cells in the APS patient, although higher

than in the control, is not significam when the appropriate statistical test is

applied. From tables of low frequencies:

P = 0,29 > Pc

0,025.

However, the excess of hyperdiploid cells in the case of the APS patient

in relation to its control (5/80 against 0/80) could be significant in a larger

sample. Therefore, if it is not demonstrated that divisional faults due to the

patienfs disease occur, on the other hand such possibility cannot be excluded.

The finding of a dicentric chromosome in one of the hyperdiploid cells

under study confirms the occurrence of breaks and possible structural rearran-

gements.

In view of the forementioned results, and considering the peculiarity of

this case, two hypotheses can be suggested.

If we admit that the W.F. cells are really pathognomonic for measles, as

Matumoto 8 (1966) and other authors claim, we would have to admit an inva-

sion of measles agents, even through, by reasons unknown, no clinicai manifes-

tation of the disease is evident.

Gripenberg 6 , 1965, points out an increase in the chromosomal aberration

incidence in a lymphocyte culture from a patient affected with measles among

other virai infections in relation to the normal control group.

Aula 1965, reports the presence of gaps and chromosomal breakages in

patients with measles, mumps and smallpox. In the case of measles, the breaks

seem to be distributed at random in all chromosomes; however, in a higher

frequency in the long arms.

Norrby et al. 14 , 1965, described pulverization phenomena in cells showing

a chromosome number higher than normal,, produced by the measles virifs

action.

If, on the other hand, we reject the hypothesis that W.F. cells are pa¬

thognomonic for measles, based on the absence of clinicai manifestations of the

disease, we would have to blame the possible causal Hodgkin’s disease agent

as also responsible for the presence of W-F cells and for the increase of the

chromosomic aberration incidence in relation to the control group.

Aberrations of the normal chromosome model, such as doubling of the

chromosome set, are described for tissue preparations from patients with

Hodgkin’s disease, as well as for neoplasias in general. Based on these findings,

Miles 9 , 1973, suggest the hypothesis of a cytogenetic progression in the onco-

genesis where in the early stage, or at the moment of oncogenetic transformation,

the cell would present a normal chromosomal pattern that later would lead to

sucessive doubling of the chromosome set with possible selective advantage to

the new population.

The presence of breaks or chromosomal gaps evidenced in preparations

obtained from lymph nodes affected by Hodgkin's disease is not mentioned in

229

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

DENARO, L.; MACHADO, J.C. & MARTINS, Y.R. Changes in chromosome structure otaser-

ved in patient with concomitant Hodgkin’s disease and measles.

Mem. Inst. Butantan, 39: 225-231, 1975.

the litterature on the cytogenetics of this disease, but descriptions of marker

chromosomes together with numerical aberration were given by Coutinho et

a]. 2 , 1971, leading us to assume a previous occurrence of breaks and structu-

ral rearrangements, and consequent formation of those marker chromosomes.

The fact that we did not find a significant excess of hyperdiploid cells in the

APS patient does not disagree with the above findings, since the cited authors

worked always with lymph nodes affected by Hodgkin’s disease while we used

in our study the peripheral blood of the patient. It is conceivable that the fre-

quency of hyperdiploid cells would be much lower in the peripheral blood than

in the affected nodes.

Nichols 12 , 1966, believes that the possibility must be considered that any

virus able to produce genetic rearrangements (activities also verified in onco-

genetic viruses) could develop a carcinogenic potential if the exact karyotype

for autonomy had been accidentally established. Based on these conclusions,

Nichols et al. 13 , 1962, and Nichols n , 1963, point out the increase in frequen-

cy of acute lymphatic Icukemia during childhood after a serious measles epidemic

in Philadelphia, in 1962.

In our opinion, the fact that Hodgkin’s disease patients present characte-

ristic immunopaíhological defects, reinforces our admission of pathognomy of

the W.F. cells for measles, since the immunological defect caused by the

Hodgkin’s disease picture may be responsible for the absence of clinicai mani-

festation of measles.

Acknowledgements: The authors wish to thank Dr. P.A. Otto for his colla-

boration to the statistical part of this work. Our thanks to Mrs. Sibyllc Heller

for the translation.

RESUMO: Num caso de paciente apresentando quadro anato-

mo-patológico concomitante de Moléstia de Hodgkin e células

de Warthin-Finkeldey, estas últimas tidas como patognômonicas

do sarampo, sem evidências clínicas desta infecção, levou-nos a

estudar seu cariótipo. Células com aberrações cromossômicas

estruturais (falhas e quebras) foram encontradas com freqüên-

cia significativamente maior em relação ao controle. Alterações

numéricas sem significância estatística foram também obser¬

vadas.

UNITERMOS: Moléstia de Hodgkin. Sarampo. Aspectos cromos-

sômicos.

REFERENCES

1. AULA, P. Virus-associated chromosome breakage. A cytogenetic study of

chickenpox, measles and mumps patients and of cell cultures infected

with measles virus. Acad. Sei. Fennicae, 89, 1965.

2. COUTINHO, V.; BOTTURA, C. & FALCÃO, R. P. Cytogenetic studies in

malignant lymphomas: a study of 28 cases.. Brit. J. Câncer, 15: 789-801,

1971.

230

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

DENARO, Ij.; MACHADO, J.C. & MARTINS, Y.R. Changes ln chromosome structure obser-

ved in patient with concomitant Hodgkin’s dísease and measles.

Mem. Inst. Butantan, 39: 225-231, 1975.

3. FERGUSON-SMITH, M. A.; FERGUSON-SMITH, M. E.; ELLIS, P. M. &

DICKSON, M. The sites and relative frequencies of secondary cons-

trictions in human somatic chromosomes. Cytogenetics, 1: 325-343, 1962.

4. FERGUSON-SMITH, M. A. & HANDMAKER, S. D. Observations on the

satellited human chromosomes. Lancet, 7(7178): 638-640, 1961.

5. FINKELDEY, W. tíber riesenzellbefunde in den Gaumennandelm zugleica

un Beitrag sur Histopathologie der mandelverãnderungen in maser

ninkubations stadium. Wirc. Arch. Path. Anat., 281: 323, 1931.

6. GRIPENBERG, U. Chromosome studies in some virus infections. Hereditas,

54: 1-18, 1965.

7. MACHADO, J. C. & DENARO, L. Relato e considerações sobre a presença

de células de Warthin-Finkeldey em paciente portador de Moléstia de

Hodgkin em atividade. Mem. Inst. Butantan (no prelo).

8. MATUMOTO, M. Multiplication of measles in cell cultures. Bact. Rev., 30:

152-176, 1966.

9. MILES, C. P. Chromosomes changes in HodgkkVs disease. International

Symposium on Hodgkin’s Disease. Nat. Câncer Inst. Monogr., 36: 197-201,

1973.

10. MOORHEAD, P. S.; NOWELL, P. C.; MELLMAN, W. J.; BATTIPS, D. M. &

HUNGERFORD, D. A. Chromosome preparations of leukocyte culture

from human peripheral blood. Exp. Cell Res., 20: 613-616, 1960.

11. NICHOLS, W. W. Relationships of viruses, chromosome and carcinogenesis.

Hereditas, 50: 53-80, 1963.

12. NICHOLS, W. W. The role of viruses in the etiology of chromosomal abnor-

malities. Amer. J. hum. Genet., 18: 81-92, 1966.

13. NICHOLS, W. W.; LEVAN, A.; HALL, B. & CATERGREN, G. Measles. Asso¬

ciated chromosome breakage. Hereditas, 48: 367-370, 1962.

14. NORRBY, E.; LEVAN, A. & NICHOLS, W. W. The correlation between

the chromosome pulverization effect and other biological activities of

measles virus preparations. Exp. Cell Res., 41: 483-491, 1965.

15. ÕSTERGREN, G. & WAKONIG, T. True or apparent sub-chromatid break¬

age and the induction of labile States in cytological chromosome loci.

Bot. Not., : 357-375, 1954.

16. WARTHIN, A. S. Occurence of numerous large giant cells in the tonsils

and pharingeal mucosa in the prodomial stage of measles. Arch. Path.,

11: 864, 1931.

Recebido para publicação em 30-V-1975 e aceito em 28-IX-1975.

231

2 3 4 5 6 SCÍELOq n 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 233-238, 1975

PSEUDOTUBERCULOSE EM CAMUNDONGOS.

ISOLAMENTO DE CORYNEBACTERIUM KUTSCHERI

DA CAVIDADE ORAL E DA PELE

DE ANIMAIS DOENTES E APARENTEMENTE SÃOS.

BRUNO SOERENSEN, MARIA JOSÉ FARABELLO YARID,

LUIZ ZEZZA NETO e JESUS CARLOS MACHADO

Divisão de Microbiologia e Imunologia e Divisão de Patologia,

Instituto Butantan

RESUMO: Foi estudada uma epizootia de pseudotuberculose

que acometeu cerca de 40% de uma criação de aproximada¬

mente 20.000 camundongos no Instituto Butantan, tendo-se iso¬

lado Corynebacterium kutscheri do material purulento de nódu¬

los subcutâneos e realizado o respectivo estudo histopatológico.

Corynebacterium kutscheri foi ainda isolado da cavidade

oral de 68% dos animais doentes e de 82% de animais aparen¬

temente sãos da mesma criação. A superfície da pele dos ani¬

mais doentes não revelou a presença do germe; entretanto, de

6% dos animais aparentemente sãos, pôde a bactéria ser isolada

da superfície cutânea.

De acordo com a literatura compulsada, esta é a primeira

vez que se registra o isolamento de Corynebacterium kutscheri

da cavidade oral e da superfície cutânea de camundongos doen¬

tes e aparentemente sãos. A verificação ora realizada sugere a

possibilidade da detecção de portadores através da pesquisa do

germe na cavidade oral.

UNITERMOS: Corynebacterium kutscheri. Pseudotuberculose de

camundongos. Isolamento de Corynebacterium kutscheri da ca¬

vidade oral e da pele de camundongos.

INTRODUÇÃO

Há aproximadamente 20 anos, vinham sendo observados, na criação de

camundongos do Instituto Butantan, animais com nódulos subcutâneos loca¬

lizados preferencialmente na região dorsal.

Endereço para correspondência: Caixa postal 65 - São Paulo - Brasil

233

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN. B.; YARID. ZEZZA NETO, L. & MACHADO, J.C. Pseudotuberculose

em camundongos. Isolamento de Corynebacterium. kutscheri da cavidade oral e da pele de

animais doentes e aparentemente sãos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 233-238, 1975.

Recentemente, o aumento da incidência de tais nódulos nos camundongos

fornecidos ao Serviço de Controle do Instituto para provas de inocuidade fo¬

calizou a atenção sobre a moléstia em causa, que pôde ser identificada à pseu¬

dotuberculose.

A primeira referência sobre a pseudotuberculose do camundongo foi feita

em 1894 por Kutscher 10 , o qual isolou um germe que denominou Bacillus

pseudotuberculosis murium, mais tarde denominado por Migula, Bacterium

kutscheri. Nesta oportunidade, foi reproduzida experimentalmente a doença

mediante a inoculação pela via intraperitoneal, observando-se lesões localizadas

no baço, fígado e rins.

O mesmo germe foi isolado novamente de casos de pseudotuberculose em

1901 por Bongert 3 . Em 1927, Holzhauzen 8 isolou, de casos de septicemia de

camundongos, o Corynebacterium murisepticum, que produziu, à inoculação ex¬

perimental, septicemia mortal em 48 horas.

Condrea 4 , em 1930, isolou germe que denominou Corynebacterium mu¬

rium, de uma doença do camundongo, caracterizada também pela ocorrência

de abcessos subcutâneos, porém considerada distinta da pseudotuberculose e

reproduziu-a experimentalmente mediante a inoculação pela via intravenosa,

verificando lesões nos rins e pulmões.

Em 1931, Fischl e col. 5 descreveram uma artrite purulenta em camun¬

dongo, provocada por um germe ao qual deram o nome de Corynebacterium

arthritidis-murium e, em 1945, Polak 12 observou em camundongos uma epizo-

otia de hepatite supurada, com elevada mortalidade, que relacionou ao Coryne¬

bacterium pseudotuherculosis-murium.

Friedlander e col. 6 , em 1951, isolaram igualmente germe do gênero Co¬

rynebacterium de camundongos que apresentavam abscessos subcutâneos, ten¬

do feito inoculações pela via intraperitoneal e verificado que grande parte dos

animais morria, mostrando, à necropsia, abscessos múltiplos nos pulmões, rins,

fígado e baço.

Bicks em 1957, descreveu também a doença em camundongos, nos quais

registrou lesões caseosas no fígado, pulmão, baço e coração, além de abscessos

subcutâneos. Identificou o microorganismo como sendo Corynebacterium pseu-

dotuberculosis-murium.

Juillan 9 , em 1959, isolou de camundongos com lesões pulmonares, germe

que identificou à bactéria primeiramente isolada por Kutscher, para a qual Ber-

gey et al., em 1929, adotaram a denominação de Corynebacterium kutscheri,

que passou a prevalecer.

Pestana de Castro e col. n , em 1964 e Giorgi e col. 7 , em 1965, relataram

a ocorrência da moléstia em criações de camundongos e de ratos, bem como o

isolamento de Corynebacterium kutscheri de abscessos localizados no fígado,

rins, pulmões e baço.

O presente trabalho refere o isolamento de Corynebacterium kutscheri da

cavidade oral e da pele de animais doentes e aparentemente sãos de uma colo-

nia de camundongos do Instituto Butantan, com elevada incidência de pseudo¬

tuberculose.

234

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B.; YARID, ZEZZA NETO, L. & MACHADO, J.C. Pseudotuberculose

em camundongos. Isolamento de Corynebacterium kutscheri da cavidade oral e da pele de

animais doentes e aparentemente sãos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 233-238, 1975.

MATERIAL E MÉTODOS

Foram retirados ao acaso 19 camundongos adultos, de ambos os sexos,

de uma criação de aproximadamente 20.000 animais, na qual cerca de 40%

dos adultos apresentava doença de evolução crônica, manifestada pela pre¬

sença de nódulos subcutâneos localizados preferentemente na região dorsal

(Fig. 1).

Os animais foram sacrificados e, à necropsia, pelo exame macroscópico

observou-se grande número de abscessos no tecido subcutâneo, cujo diâmetro

media de 0,3 a 0,5 cm. Os demais órgãos e tecidos apresentavam-se normais.

Do pus dos abscessos foram feitos esfregaços e colorações pelos métodos

de Gram e Ziehl-Neelsen. Paralelamente, realizaram-se exames diretos, entre lâ¬

mina e lamínula, para pesquisa de fungos. Parte do material foi reservada pa¬

ra culturas em placa de ágar sangue em meio de tioglicolato modificado por

Brewer, incubados a 37°C por 24 horas, e em meio de Sabouraud sólido, man¬

tido a 25°C durante 3 meses.

Para o exame histopatológico, retiraram-se fragmentos dos diversos órgãos

e dos abscessos subcutâneos, que foram fixados em formol a 10%.

Finalmente, procedeu-se a culturas do material retirado da cavidade oral

e da superfície da pele dos 19 animais doentes, assim como de 51 animais

aparentemente sãos, a fim de investigar a presença da corinebactéria, já que

abcessos idênticos aos da infecção em causa podiam ser provocados, como ti¬

vemos a ocasião de verificar, pela mordedura na pele dos animais que se ataca¬

vam mutuamente.

RESULTADOS

Exames bacterioscópicos do material retirado dos abscessos subcutâneos re¬

velaram, ao lado de numerosos leucócitos, a presença de bacilos gram-positivos

de aspecto difteróide (Fig. 2). Os exames feitos para pesquisa de fungos, assim

como para bacilos ácido-resistentes, resultaram negativos.

Em todos os tubos contendo meio de tioglicolato Brewer, houve crescimen¬

to de C. kutscheri, que, nas placas de ágar-sangue, após 24 horas a 37°C, de¬

senvolveu pequenas colônias lisas, de côr branco-amarelada, bordos irregulares,

medindo aproximadamente 1 mm de diâmetro. O estudo bacteriológico destas

culturas revelou tratar-se de bacilos gram-positivos semelhantes aos observados

nos esfregaços feitos com material retirado dos abscessos subcutâneos (Fig. 3).

O microorganismo isolado foi enviado, para confirmação diagnóstica, ao Dr.

Robert E. Weaver, do “Center for Disease Control, Department of Health, Edu-

cation and Welfare Public Health Service, Atlanta, Geórgia, U.S.A.”, ao qual

consignamos o nosso agradecimento.

Quanto aos exames histopatológicos, revelaram o seguinte resultado: 1)

Pele — presença de abscessos com área central de necrose, rodeada por zona

edemaciada, na qual se observaram hiperemia vascular, presença de polimorfo-

nucleares e de raros linfoplasmócitos esparsos; 2) Fígado — focos ocasionais

de polimorfonucieares, com escassos linfoplasmócitos nos espaços-porta; 3)

235

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B.; YARID, ZEZZA NETO, L. & MACHADO, J.C. Pseudotuberculose

em camundongos. Isolamento de Corynebacterium kutscheri da cavidade oral e da pele de

animais doentes e aparentemente sãos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 233-238, 1975.

■MH|

Z? - í \V

■ ^

fm. m

■’V

MÊÊÊÊÊÊÊÊÊÊ

r- <•

> r .

S ■» 5 •* ._

Flg. 1 - Camundongo apresentando nódulos subcutâneos.

Flg. 2 - Exame bacterloscóplco de material retirado dos nódulos. Coloração de Oram.

Flg. 3 - Aspecto microscópico do germe Isolado.

236

2 3 4

6 SCÍELO lo X1 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B.; YARID, ZEZZA NETO, L. & MACHADO, J.C. Pseudotuberculose

em camundongos. Isolamento de Corynebacterium kutscheri da cavidade oral e da pele de

animais doentes e aparentemente sãos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 233-238, 1975.

Rim — hiperplasia glomerular e dos vasos medulares, raras infiltrações de po-

limorfonucleares; 4) Baço — discreta proliferação da polpa branca, com nu¬

merosas células gigantes bi ou multinucleadas, de citoplasma acidófilo.

As culturas feitas do material retirado da cavidade oral e da superfície da

pele, com o intuito de revelar a presença de portadores, deram os resultados con¬

signados na Tabela 1.

TABELA 1

Isolamento do Corynebacterium kutscheri da cavidade oral e da superfície da

pele de camundongos aparentemente sãos ou com pseudotuberculose.

Estado do Animal

Percentagem

de isolamento

Cavidade oral

Superfície da pele

Aparentemente sãos

82 (43/51)

6 (2/32)

Doentes

68 (13/19)

0 (0/19)

CONCLUSÕES

A doença estudada, por suas características clínicas, lesões anatopatológi-

cas„ macro e microscópicas, bem como pelos achados bacteriológicos, pôde ser

identificada à pseudotuberculose.

Deve ser especialmente mencionado que o agente causador, identificado ao

C. kutscheri, pôde ser isolado com maior frequência da cavidade oral de ani¬

mais doentes do que dos aparentemente sãos da mesma colônia.

Segundo sugestão feita por Bicks 1 em 1957, a transmissão da moléstia pos¬

sivelmente se processaria por ingestão, em virtude da verificação da presença

de Corynebacterium kutscheri em ulcerações do intestino e em nódulos linfáti¬

cos mesentéricos.

Embora trabalhosa, a identificação de portadores, poderá, portanto, ser

feita através da pesquisa do germe na cavidade oral dos camundongos. Seja ain¬

da ressaltada a necessidade imprescindível de iniciar colonias de camundongos

a partir de reprodutores livres do germe patogênico.

SUMMARY: In the course of an epizootic outbreak of pseudo-

tuberculosis affecting 40% of a colony of approximately 20.000

mice, Corynebacterium kutscheri was isolated from subcutaneous

nodules and an histopathological study of the cases was perfor-

med.

Corynebacterium kutscheri was present in the mouth of

about 68% of sick animais and 82% of apparently healthy ani¬

mais of the same breeding colony. The microorganism could

237

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

SOERENSEN, B.; YARID, ZEZZA NETO, L. & MACHADO, J.C. Pseudotuberculose

em camundongos. Isolamento de Corynebacterium kutscheri da cavidade oral e da pele de

animais doentes e aparentemente sãos.

Mem. Inst. Butantan, 39: 233-238, 1975.

not be demonstrated on the skin surface of sick animais. Howe-

ver, from 6% of apparently healthy mice, Corynebacterium kuts¬

cheri has been isolated from the skin.

These findings, for the first time registered in the literature,

suggest the possibility of detecting carriers through the demons-

tration of the microorganism in the mouth.

UNITERMS: Corynebacterium kutscheri. Mouse pseudotubercu-

losis. Isolation of Corynebacterium kutscheri from the mouth

and skin of mice.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. BICKS, V.A. Infection of laboratory mice with Corynebacterium murium.

Austr. J. Sei, 20: 20-22, 1957.

2. BREED, R.S.; MURRA Y, E.G.D. & SMITH, N.R. Bergey’s Manual of De-

terminative Bacteriology. 7. a ed. Baltimore, Williams, 1957.

3. BONGERT, In Dumas, J. Les animaus de Laboratoire. Paris, Flammarion,

1953.

4. CONDREA, P. Nouvelle maladie contagiuse de la souris blanche. Agent

pathogène. Maladie expèrimentale. C. R. Soc. Biol. (Paris), 104: 1361-1363,

1930.

5. FISCHL, V.; KOECH, M. & KUSSAT, E. Infektarthritis bei Murien. Z. Hyg.

Infekt.-Kr., 112: 421, 1931.

6. FRIEDLANDER, H. et al. Experimental arthritis in albino rats produced

by a strain of Corynebacterium. J. inf. Dis., 88: 290-297, 1951.

7. GIORGI, W. et al. Infecção espontânea de camundongos por Corynebacte¬

rium kutscheri. Ocorrência de um surto epizoótico. Biológico, 31(12):

284-289, 1965.

8. HOLZHAUZEN, V.C. Ein bisher undekannter Erreger Mauseptikamie ( Cory-

bacterium musisepticum n. sp.). Zbl. Bakt., I. Abt. Ref., 105: 94-99, 1928.

9. JUILLAN, M. Pseudo-tuberculosis in with mice caused by Corynebacterium

murium. Arch. Inst. Pasteur Algér., 37: 198-201, 1959.

10. KUTSCHER, Ein Beitrag zur Kenntniss der bacillaren pseudo-tuberculose

der Nagethiere. Z. Hyg. Infekt.-Kr., 18: 327-342, 1894.

11. PESTANA DE CASTRO et al. Estudo de uma amostra de Corynebacterium

kutscheri isolada de ratos e camundongos. Infecção experimental. Arch.

Inst. biol. (S. Paulo), 31(3): 91-99, 1964.

12. POLAK, M. Epidèmie survenue parnú les souris blanches à la suite d’une

infection par le Corynebacterium pseudo-tuberculosis murium. Antonie.

v. Leeuwenhoeck, 10: 23, 1944/45.

Recebido para publicação em ll-V-1975 e aceito em 28-IX-1975.

238

2 3 4 5 6 SCÍELO lo n 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 239-245, 1975

LISTA REMISSIVA DOS TRABALHOS PUBLICADOS NAS

“MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN”. *

Volumes 34 a 38 (1969-1974)

OFÍDIOS

Sistemática

726. AMARAL, A. do Ofionímia Ameríndia na Ofiologia Brasiliense. Mem. Inst.

Butantan, 37: 1-16, 1973.

727. CORDEIRO, C.L.S. & HOGE, A.R. Contribuição ao conhecimento das ser¬

pentes do Estado de Pernambuco. Mem. Inst. Butantan, 37: 261-290, 1973.

728. HOGE, A.R. Chironius scurulus (Wagler) recorded from Venezuela. Mem.

Inst. Butantan, 34: 85-86, 1969.

729. HOGE, A.R. Notes on Holotype of Dipsas indica cisticeps (Boettger). (Ser¬

pentes, Dipsadinae). Mem. Inst. Butantan, 34: 87-88, 1969.

730. HOGE, A.R. & FEDERSONI JR., P.A. Notes on Xenopholis Peters and

Paroxyrhopus Schenkel (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan,

38: 137-144, 1974.

731. HOGE, A.R. & LIMA VERDE, J.R. Liophis mossoroensis nov. sp. do Bra¬

sil (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 36: 215-220, 1972.

732. HOGE, A.R. & ROMANO, S.A. Notes on Pseutes dieperinckü (Schlegel)

— Serpentes. Mem. Inst. Butantan, 34: 89-92, 1969.

733. HOGE, A.R. & ROMANO, S.A. A new species of Chironius (Serpentes, Co¬

lubridae). Mem. Inst. Butantan, 34: 93-96, 1969.

734. HOGE, A.R. & ROMANO S.A. Micrurus hemprichii hemprichii recorded

from Brazil (Serpentes, Elapidae). Mem. Inst. Butantan, 35: 107-110, 1971.

735. HOGE, A.R. & ROMANO S,A. Sinopse das serpentes peçonhentas do Brasil

(Serpentes, Elapidae e Viperiãae). Mem. Inst. Butantan, 36: 109-208, 1972.

736. HOGE, A.R. & ROMANO, S.A. Notes on Trimeresurus brongersmai Hoge

1969 (Serpentes Viperidae, Crotalinae). Mem. Inst. Butantan, 38: 145-158,

1974.

737. HOGE, A.R.; ROMANO, S.A.; FEDERSONI JR., P.A. & CORDEIRO,

C.L.S. Lista das espécies de serpentes coletadas na região da usina

hidroelétrica de Ilha Solteira, Brasil (Nota prévia). Mem. Inst. Butantan,

38: 167-178, 1974.

* A lista correspondente aos volumes 1 a 33 íoi publicada no volume 34.

239

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

COMISSÃO EDITORIAL Lista remissiva dos trabalhos publicados nas “Memórias do Insti¬

tuto Butantan”. Volumes 34 a 38 (1969-1974).

Mem. Inst. Butantan, 39: 239-245, 1975.

738. HOGE, A.R.; SANTOS, N.P.; HEITOR, C.; LOPES, L.A. & SOUZA, I.M.

Serpentes coletadas pelo Projeto Rondon VII em Iauareté, Brasil. Mem.

Inst. Butantan, 36: 221-232, 1972.

739. ROMANO, S.A. Notes on Leptomicrurus Schmdit. Mem Inst. Butantan,

35: 111-116, 1971.

740. ROMANO, S.A. & HOGE, A.R. Nota sobre Xenoãon e Ophis (Serpentes,

Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 36: 209-214, 1972.

OFÍDIOS

Biologia

741. LANGLADA, F.G. de Ciclo sexual bienal de serpentes Crotalus do Brasil.

Comprovação. Mem. Inst. Butantan, 36: 67-72, 1972.

742. LANGLADA, F.G. de & BELLUOMINI, H.E. Contribuição à técnica ope¬

ratória de serpentes. I. Hemipeniceetomia bilateral em serpentes. Mem.

Inst. Butantan, 36: 73-78, 1972.

743. LANGLADA, F.G. de & BELLUOMINI, H.E. Contribuição à técnica opera¬

tória de serpentes. III. Ablação de glândulas de veneno em serpentes

do gênero Crotalus. Mem. Inst. Butantan, 36: 89-100, 1972.

744. LANGLADA, F.G. de; GONÇALVES, M.F. & RODRIGUES, E.T. Determi¬

nação da época de fecundidade em fêmeas do gênero Crotalus. Mem

Inst. Butantan, 37: 253-260, 1973.

745. LANGLADA, F.G. de & SHINOIYA, N. Contribuição à técnica operatória

de serpentes. II. Derivação intestinal, colostomia e cloacrorrafia (para ob¬

tenção de urina sem contaminação fecal em cloaca de serpentes). Mem.

Inst. Butantan, 36: 79-88, 1972.

ARACNÍDEOS E ARTRÓPODOS

Sistemática

746. BUCHERL, W. Aranhas da família Cteniãae. II. Phoneutriinae, subfamília

nova. Mem. Inst. Butantan, 34: 25-32, 1969.

747. BUCHERL, W.; COSTA, A.T. & LUCAS, S. Revisão de alguns tipos de

aranhas caranguejeiras (Orthognatha) estabelecidos por Mello-Leitão

e depositados no Museu Nacional do Rio. Mem. Inst. Butantan, 35:

117-138, 1971.

748. BUCHERL, W. & DESSIMONI von EICKSTEDT, V.R. Aranhas da famí¬

lia Ctenidae, Sub-família Phoneutriinae. V. A segunda fila ocular em Pho-

neutria Perty, 1833. Mem. Inst. Butantan, 34: 43-46, 1969.

749. BUCHERL, W. & LUCAS, S. Sobre a posição sistemática de Porrima cal -

lipoda Mello Leitão 1924 (Aranae — Lycosidae). Nota prévia. Mem. Inst.

Butantan, 36: 267-268, 1972.

750. BUCHERL, W.; LUCAS, S. & DESSIMONI von EICKSTED, V.R. Spiders

of the family Ctenidae, subfamily Phoneutriinae. VI. Bibliographia Pho-

neutriarum. Mem. Inst. Butantan, 34: 47-66, 1969.

751. DESSIMONI von EICKSTEDT, V.R. Aranhas da família Cteniãae, sub-fa¬

mília Phoneutriinae. III. Redescrição do macho de Phoneutria fera Per¬

ty, 1833. Mem. Inst. Butantan, 34: 33-36, 1969.

752. DESSIMONI von ECIKSTEDT, V.R. & LUCAS, S. Revisão dos tipos de

Phoneutria paca (Mello-Leitão) 1922 e Phoneutria luederwaldti (Mello

Leitão) 1927. ( Aranae; Labidognatha, Ctenidae). Mem. Inst. Butantan,

34: 75-78, 1969.

240

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COMISSÃO EDITORIAL Lista remissiva dos trabalhos publicados nas “Memórias do Insti¬

tuto Butantan”. Volumes 34 a 38 (1969-1974).

Mem. Inst. Butantan, 39: 239-245, 1975.

753. DESSIMONI von EICKSTEDT, V.R.; LUCAS, S. & BUCHERL, W. Ara¬

nhas da família Ctenidae, sub-família Phoneutriinae. VII. Contribuição

ao estudo de Phoneutria fera Perty, 1833. Mem. Inst. Butantan, 34: 67-74,

1969.

754. LUCAS, S. & BUCHERL, W. Redescrição de Dryptopelmiães Strand 1907

(Aranae, Theraphosidae, Ischnocolinae) e descrição de Dryptopelmiães

rondoni sp. n. Mem. Inst. Butantan, 36: 233-240, 1972.

755. STEWIEN, K.E. Estudos sistemáticos sobre aranhas caranguejeiras, Des-

criação da fêmea de Acanthoscurria musculosa Simon 1892. (Avicularii-

dae, Theraphosinae). Mem. Inst. Butantan, 34: 79-84, 1969.

ARACNÍDEOS E ARTRÕPODOS

Biologia

756. BUCHERL, W. Escorpionismo no Brasil. Mem. Inst. Butantan, 34: 9-24,

1969.

757. DESSIMONI von EICKSTEDT, V.R. Some complementary notes on the

biology of Exetasis eickstedtae Schlingen 1972, a fly parasiting Mygalo-

morph spiders. Mem. Inst. Butantan, 38: 131-136, 1974.

758. LUCAS, S. Aranhas da família Ctenidae, sub-família Phoneutriinae. IV.

Contribuição ao estudo da ooteca, dos ovos e a eclosão da aranha ar-

madeira Phoneutria sp. Mem. Inst. Butantan, 34: 37-42, 1969.

PATOLOGIA

759. AMORIM, M.F. de; MELLO, R.F. de & SALIBA, F. Lesões renais indu¬

zidas experimentalmente no cão pelo veneno crotálico. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 34: 137-158, 1969.

760. BEUTNER, E.; WODD, G.W.; CHORZELSKI, T.P.; ABREU LEME, C. &

BIER, O.G. Produção de lesões semelhantes às do Pênfigo Foliáceo

pela injeção intradérmica em coelhos e macacos, de soros de doentes

com título elevado de auto-anticorpo. Mem. Inst. Butantan, 35: 79-94,

1971.

761. FRANCO DA SILVEIRA F.°, J. & MACHADO, J.C. Alterações do epitélio

e esfregaços vaginais da preá ( Cavia aperea aperea) durante o ciclo

estral e estudo comparativo com as da cobaia. Mem. Inst. Butantan,

35: 63-78, 1971.

762. LANGLADA, F.G. de Anomalias congênitas em uma ninhada de cascavéis.

Mem. Inst. Butantan, 37: 239-252, 1973.

763. LANGLADA, F.G. de; BELLUOMINI, H E. & MACHADO, J.C. Conseqüên-

cias da ablação cirúrgica da glândula principal de venenos em Crotalus.

Comportamento do animal e estudo histopatológico da glândula acessória.

Mem. Inst. Butantan, 36: 101-108, 1972.

764. MACHADO, J.C. Incidência e comprometimento cardíaco pela gota úrica

em Crotalus d. terrificus. Mem. Inst. Butantan, 34: 159-164, 1969.

765. MACHADO, J.C. & DENARO, L. Obtenção de culturas de linfomas huma¬

nos — Tumor de Burkitt. Mem. Inst. Butantan, 38: 163-166, 1974.

766. MACHADO, J.C. & FRANCO DA SILVEIRA, F.°, J. Obtenção experimen¬

tal do quadro anatomopatológico da pancreatite hemorrágica aguda no

cão pela inoculação de veneno de Tityus serrulatus. Mem. Inst. Butantan,

38: 159-162, 1974.

241

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

COMISSÃO EDITORIAL Lista remissiva dos trabalhos publicados nas “Memórias do Insti¬

tuto Butantan”. Volumes 34 a 38 (1969-1974).

Mem. Inst. Butantan, 39 : 239-245, 1975.

767. MACHADO, J.C.; FRANCO DA SILVEIRA F.°, J. & RUSSO, A.D. Epide-

miology of Hodgkin”s disease in children. A study of 36 cases. Mem. Inst.

Butantan, 35: 55-62, 1971.

768. MACHADO, J.C.; KONDA, I. & LIMA, L.S. Ocorrência de neoplasia me-

senquimal fuso-celular em peixe da espécie Moenkhausia dichroura (Kner,

1858). Mem. Inst. Butantan, 37: 233-238, 1973.

769. MACHADO, J.C. & ROSENFELD, G. Achados anatomopatológicos em ne-

croscopia de paciente falecido por envenenamento elapídico. Mem. Inst.

Butantan, 35: 41-54, 1971.

770. MACHADO, J.C.; SOERENSEN, B.; AMARAL, J.P.; PINTO. E.A. & DO-

NOSO, N. Avaliação histopatológica comparativa da intensidade do

fenômeno proliferativo na imunidade celular à tuberculose, em cobaios

vacinados oralmente e intradérmicamente pelo BCG. Mem. Inst. Butan¬

tan, 36: 57-66, 1972.

771. PIAZZA, R. Lesões da medula espinhal no megacólon. Mem. Inst. Butantan,

37: 149-232, 1973.

772. SALIBA, F. & MACHADO, J.C. Comprometimento dos vasos nutridores da

aorta em dois casos de ruptura espontânea dessa artéria em equinos

soro-produtores. Mem. Inst. Butantan, 34: 165-170, 1969.

PARASITOLOGIA

773. ARTIGAS, P.T. & PEREZ, M.D. Sistemática de Opisthoponimiãae (Trema-

toda, Plagiorchoidea). Criação da familia Bieriidae n.fam. Mem. Inst.

Butantan, 34: 97-110, 1969.

774. BIASI. P : PESSÔA. S B & BELLUOMINI, H E. Novas observações sobre

a transmissão congênita de hematozoários de serpentes peçonhentas vivi-

paras. Mem. Inst. Butantan. 36: 245-250, 1972.

775. DESSIMONI von EICKSTEDT. V R. Three cases of parasitism in tbe

Mygalomorph spider Lasiodora klugi (C L. Kock) by a fly of the genus

Exetasis (Diptera, Acroceridae) in Brazil. Mem. Inst. Butantan. 35: 139-

146, 1971.

776. FONTENELLE, T.J.H. Bionomia de Triatoma pseudomaculata Corrêa &

Spinola 1964, em laboratório. Mem. Inst. Butantan, 36: 251-262, 1972.

777. PESSÔA, S.B. & BIASI, P. Considerações taxonômicas sobre cistos esqui-

zogônicos e sobre gametócitos de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogrega-

rinidae) parasitas de serpentes brasileiras. Mem. Inst. Butantan, 37:

291-298, 1973.

778. PESSÔA, S.B. & BIASI, P. Nota taxonômica sobre cistos esporogônicos

de algumas espécies de Hepatozoon (Sporozoa, Haemogregarinidae)

parasitas de serpentes brasileiras. Mem. Inst. Butantan, 37: 299-308, 1973.

779. PESSÔA, S.B. & BIASI, P. Plasmódio de uma lagartixa Urostrophus vau-

tieri D. & B. (Sauria, Iguanidae). Mem. Inst. Butantan, 37: 309-316, 1973.

780. PESSÔA, S.B.; BIASI, P. & PUORTO, G. Nota sobre a frequência de he-

moparasitas em serpentes do Brasil. Mem. Inst. Butantan, 38: 69-118, 1974.

781. PESSÔA, S.B.; BIASI, P. & SACCHETTA, L. Evolução do Hepatozoon sp.

parasita de Leptophis ahaetulla (Lineu) (Serpentes, Colubriáae ) no

Culex fatigans. Mem. Inst. Butantan, 38: 119-122, 1974.

782. PESSÔA, S.B ; BIASI, P. & SACCHETTA, L. Notas sobre o Hepatozoon

tupinambis (Laveran & Salibeni, 1909) (Protozoa, Apicomplexa) parasita

do Teju (Tupinambis teguixin Lineu, 1758) (Sauria, Teiiãae). Mem. Inst.

Butantan, 38: 123-130, 1974.

242

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COMISSÃO EDITORIAL Lista remissiva dos trabalhos publicados nas “Memórias do Insti¬

tuto Butantan”. Volumes 34 a 38 (1969-1974).

Mem. Inst. Butantan, 39: 239-245, 1975.

783. PESSÔA, S.B.; BIASI, P. & SOUZA, D.M. Esporulação no Culex ãolosus

(L. Arribalzaga, 1891) do Hepatozoon roulei (Phisalix e Laveran, 1913)

parasita de Bothrops alternatus (D. & B., 1854), transfundido com o

sangue da Bothrops moojeni Hoge, 1965. Mem. Inst. Butantan, 36: 241-244,

1972.

784. SOERENSEN, B.; ZEZZA NETO, L.; PEREZ, M.D.; BULKA, G.M. & ONO,

A.E.G. Presença de Cysticercus pisiformes, (Bloch, 1780) em coelho e

lebre importados. Mem. Inst. Butantan, 38: 63-68, 1974.

785. TRAVASSOS F.°, L. Triatoma williami Galvão, Souza e Lima, 1965, captu¬

rado em Mato Grosso, BR, novo vector da Moléstia de Chagas. Mem.

Inst. Butantan, 36: 263-266, 1972.

786. TRAVASSOS, L.P.; SOERENSEN, B. & FONTENELLE, T.H. Ação larvi e

molusquecida do “Tego 51”. Mem. Inst. Butantan, 37: 317-326, 1973.

QUÍMICA

787. ZELNIK, R. & STREHLAU, F. /7-Oxo N-Substituted Benzezoles. I. The

/j-Acylethylation of Benzimidazoles with Mannich Bases. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 35: 147-156, 1971.

BACTERIOLOGIA

788. PELUFFO, C.; IRINO, K. & MELLO, S. Virulência y multirresistencia a

drogas de cepas epidêmicas de S. typhimurium aisladas en hospitales

infantiles de Sudamerica. I. Virulência comparativa para el raton de

cepas epidêmicas y no epidêmicas de S. typhimurium. Mem. Inst. Butan¬

tan, 38: 1-12, 1974.

789. SOERENSEN, B. & ROSENBERG, G.M. A antibioticoterapia no choque

transfusional por sangue contaminado. Estudo experimental em camun¬

dongos. Mem. Inst. Butantan, 36: 41-50, 1972.

790. SOERENSEN, B.; YOSHIO, M.E. & ROCHA, M.C. Determinação da con¬

taminação bacteriana em sangue estocado através da dosagem de glicose

com tira reagente. Mem. Inst. Butantan, 36: 51-56, 1972.

VIROLOGIA

Microscopia Eletrônica

791. BRUNNER JR., A. Erythrocytary maturation in rodents. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 35: 1-40, 1971.

792. BRUNNER JR., A.; COIRO, J.R.R.; SCHWANTES, M.L. & SCHWANTES,

A.R. Hemosome and hemoglobin biosynthesis in embryos and in re-

gressive anemias. Mem. Inst. Butantan, 37: 335-344, 1973.

793. COIRO, J.R.R.; BRUNNER JR., A.; SCHWANTES, M.L. & SCHWANTES,

A.R. Hemoglobin in mitochondrion-like organelles of immature chick

embryo erythrocytes. Mem. Inst. Butantan, 37: 327-334, 1973.

794. MENEZES, H.; MITSUTANI, C.Y.; COIRO, J.R.R.; CARVALHO DOS SAN¬

TOS, M.A. & BRUNNER JR., A. Ultrastructure of mature erythrocytes

frorri five bothropic species. Mem. Inst. Butantan, 38: 51-62, 1974.

795. RIZZO, E. de; BRUNNER JR., A. & VALLEJO-FREIRE, A. Multiplication

of Myxoma Virus in epithelial cell culture of rabbit kidney. Mem. Inst.

Butantan, 34: 121-128, 1969.

243

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

COMISSÃO EDITORIAL Lista remissiva dos trabalhos publicados nas

tuto Butantan”. Volumes 34 a 38 (1969-1974).

Mem. Inst. Butantan, 39: 239-245, 1975.

‘'Memórias do Insti-

796. TOLEDO, C. de Considerações sobre a ultraestrutura de um melanoma ma¬

ligno do corpo ciliar. Mem. Inst. Butantan, 34: 129-136, 1969.

797. VALLEJO-FREIRE, A.; OLIVEIRA F.o, B. & BRUNNER JR., A. Myxoma-

tose experimental em Oryctolagus sp. e Sylvilagus sp. Mem. Inst. Bu¬

tantan, 34: 111-120, 1969.

HISTOLOGIA

798. LOPES, R.A.; OLIVEIRA, C.; CAMPOS, G.M. & BARROS, J.M. Estudo

morfológico e histoquímico da Glândula de Harder de alguns répteis bra¬

sileiros. I — Ophidea. Mem. Inst. Butantan, 38: 41-50, 1974.

IMUNOLOGIA

799. OLIVEIRA, E.P.T. Estudos sobre a preparação de soro antibotulínico tipo

A. Mem. Inst. Butantan, 36: 1-40, 1972.

800. SOERENSEN, B.; AMARAL, J.P.; MUTTI PEREIRA, M.M. & SILVA, M.A.

Estudo comparativo da alergia tuberculínica e da proteção conferida pela

vacina BCG via oral e intradérmica em cobaios. Mem. Inst. Butantan,

35: 95-106, 1971.

HEMATOLOGIA

801. FERRI, S.; MARTINS, L.F.; LEITE RIBEIRO, M.C. & WORSMAN, T.U.

Blood proteinic picture of throughbred horses. Mem, Inst. Butantan,

34: 171-178, 1969.

802. MARTINS, L.F.; ARANTANGY, L.R. & MEDEIROS, L.O. Relationships

among performance, sex and erythrogram in throughbred horses. Mem.

Inst. Butantan, 34: 179-190, 1969.

803. SOERENSEN, B. Contribuição para o estudo do ácido bórico como antis¬

séptico de sangue conservado. Mem. Inst. Butantan, 37: 17-42, 1973.

VENENOS

804. BANCHER, W.; ROLIM ROSA, R. & FURLANETTO, R.S. Estudos sobre a

fixação eletiva e quantitativa do veneno de Crotalus ãurissus terrijicus

nos tecidos nervoso, renal, hepático e muscular de Mus musculus Lin-

naeus 1758. Mem. Inst. Butantan, 37: 139-148, 1973.

805. FURLANETTO, R.S.; ROLIM ROSA, R.; SILES VILLARROEL, M. & NA-

VAS, J. Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos

botrópicos inoculados por via venosa em camundongos Mus musculus

Linnaeus 1758. III — Possibilidade de determinação da DL50 através da

proteção cruzada conferida por doses infra-letais de outros venenos de

serpentes do mesmo gênero. Mem. Inst. Butantan, 37: 123-130, 1973.

806. FURLANETTO, R.S.; ROLIM ROSA, R.; SILES VILLARROEL, M. & SI

RACUSA, Y.Q. Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de

venenos botrópicos inoculados por via venosa em camundongos Mus

musculus Linnaeus 1758. I — Fenômenos que ocorrem na tentativa de

determinação da DL50. Mem. Inst. Butantan, 37: 99-108, 1973.

807. FURLANETTO, R.S.; ROLIM ROSA, R.; SILES VILLARROEL, M. & ZE

LANTE, F. Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos

botrópicos inoculados por via venosa em camundongos Mus musculus

244

SciELO

L0 11 12 13 14 15 16

COMISSÃO EDITORIAL Lista remissiva dos trabalhos publicados nas “Memórias do Insti¬

tuto Butantan”. Volumes 34 a 38 (1969-1974).

Mem. Inst. Butantan, 39: 239-245, 1975.

Linnaeus 1758. II — Possibilidade de determinação da DL50 através da

inoculação prévia de doses infra-letais do próprio veneno. Mem. Inst.

Butantan, 37: 109-122, 1973.

808. ROLIM ROSA, R.; FURLANETTO, S.M.P.; SILES VILLARROEL, M. & ZE-

LANTE, F. Contribuição ao estudo da determinação da DL50 do veneno

de Crotalus durissus terrificus (Laurenti, 1768) em Mus musculus Lin¬

naeus 1758. Mem. Inst. Butantan, 37: 131-138, 1973.

809. SILES VILLARROEL, M.; FURLANETTO, R.S.; ROLIM ROSA, R.; ZELAN-

TE, F. & NA VAS, J. Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos

botrópicos. II — Análise comparativa dos componentes antigênicos co¬

muns de seis espécies de venenos botrópicos. Mem. Inst. Butantan, 38:

31-40, 1974.

810. SILES VILLARROEL, |M.; FURLANETTO, R.S.; ZELANTE, F. & ROLIM

ROSA, R. Localização do fator coagulante no espectro eletroforético do

veneno de Bothrops moojeni. Mem. Inst. Butantan, 37: 91-98, 1973.

811. SILES VILLARROEL, M.; ROLIM ROSA, R.; FURLANETTO, R.S. & ZE¬

LANTE, F. Estudo eletroforético em “Cellogel” de venenos do gênero

Bothrops. Mem. Inst. Butantan, 37: 83-90, 1973.

812. SILLES VILLARROEL, M.; ZELANTE, F.; FURLANETTO, R.S. & ROLIM

ROSA, R. Contribuição ao estudo imunoquímico de venenos botrópicos.

I — Análise comparativa dos componentes antigênicos de seis espécies

de venenos frente a seus respectivos antivenenos, através das técnicas

de dupla difusão e imunoeletrofore em gel de ágar. Mem. Inst. Butantan,

38: 13-30, 1974.

DIVERSOS

813. AMORIM, L.M. O desenho microscópico na documentação científica. Nor¬

mas para seu aprendizado. Mem. Inst. Butantan, 34: 191-208, 1969.

814. KELEN, E.M.A. Bibliografia dos trabalhos do Dr. Vital Brazil. Mem. Inst.

Butantan, 34: 1-8, 1969.

815. PIMONT, R.P. A área de Educação do Instituto Butantan. Mem. Inst.

Butantan, 37: 43-82, 1973.

816. ROSENFELD, G. Biografia do Dr. Vital Brazil (1865-1950). Mem. Inst. Bu¬

tantan, 34: IX-XVI, 1969.

245

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

■

. ’

. s\

2 3

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 247, 1975

ÍNDICE DE AUTOR/AUTHOR INDEX

AMARAL, A. do

39:

ARTIGAS, P. T.

39:

103

BARTKEVITCH, M. A. C.

39:

207

BEÇAK, W.

39:

123

BIASI, P. De

39:

BRUNNER JR., A.

39:

149

39:

157

CARNEIRO, S. M.

39:

135

CARVALHO DOS SANTOS, M. A. S.

39:

157

COIRO, J. R. R.

39:

149

39:

157

39:

169

CORDEIRO, C. L.

39:

DENARO, L.

39:

217

39:

225

EICKSTEDT, V. R. D. von

39:

FALCÃO, E. C.

39:

FERNANDES, M. P. M.

39:

103

FERNANDES, W.

39:

HOGE, A. R.

39:

LIZASO, N. M.

39:

MACHADO, J. C.

39:

217

39:

225

39:

233

MARIGO, C.

39:

207

MARTINS, Y. R.

39:

225

MENEZES, H.

39:

157

MITSUTANI, C. Y.

39:

157

MÜLLER, H.

39:

207

PESSOA, S. B.

39:

PUORTO, G.

39:

ROMANO, S. A. L.

39:

RUIZ, I. R. G.

39:

123

SOERENSEN, B.

39:

233

YARID, M. J. F.

39:

233

ZEZZA NETO, L.

39:

233

247

SciELO

Mem. Inst. Butantan

39: 249-251, 1975

ÍNDICE DE ASSUNTO

Ácaros

Acarina, Listrophoridae

Prolistrophorus dolichus sp.n. 39: 73

Afrânio do Amaral

breve notícia sobre a vida científica 39: 3

bibliografia 39: 11

Aranhas

cavarnícolas do Brasil

Ctenus fasciatus

Loxosceles aãelaiãa

Loxosceles similis

Theriosomatidae 39: 61

Aves

eritrócitos

extrusão cromatínica

hemoglobina

série 39: 169

39: 149

Colubriãae 39: 37

Complexo sinaptonêmico 39: 135

Corynebacterium kutscheri 39: 233

Cromossomos

bandeamento com venenos ofídicos

moléstia de Hodgkin concomitante

ao sarampo 39: 225

Ctenus fasciatus 39: 61

Dipsadinae 39: 51

Dipsas indica subsp. 39: 51

Eritrócitos

aves

extrusão cromatínica 39: 149

série 39: 169

hemoglobina 39: 169

mamíferos

série 39: 169

peixes

Cyprinus carpio 39: 157

39: 123

249

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 249-251, 1975

Espermatogênese

espermatócitos

complexo sinaptonêmico

39: 135

Etimologia

nomes genéricos terminados em -ops

39: 27

Extrusão cromatínica

eritrócitos de aves

39: 149

Hemoglobina

séries eritrocitárias de aves e mamíferos

Hemogregarina

peixes 39 :79

Hemoparasitas

peixes

hemogregarina

tripanossomo

serpentes

tripanossomo

39: 169

39: 79

39: 85

Kalicephalus subulatus 39: 103

Listrophoridae 39: 73

Loxosceles adelaiãa 39: 61

Loxosceles similis 39: 61

Lystrophis histricus 39: 37

Lystrophis nattereri 39: 37

Mamíferos

eritrócitos, série

hemoglobina 39: 169

Miocardites 39: 207

Moléstia de Chagas

miocardites 39: 207

Moléstia de Hodgkin

concomitante ao sarampo

aspectos cromossômicos 39: 225

virologia 39: 217

Peixes

Cyprinus carpio

eritrócitos 39: 157

hemoparasitas

hemogregarina

tripanossomo 39: 79

Prolistrophorus dolichus sp.n. 39: 73

Pseudotuberculose

roedores 39: 233

Roedores

pseudotuberculose

250

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 249-251, 1975

Corynébacterium kutscheri, isolamento

da cavidade oral e da pele 39: 233

Sarampo

concomitante à Moléstia de Hodgkin

aspectos cromossômicos 39: 225

virologia 39: 217

Serpentes

Colubriáae 39: 37

Dipsaáinae 39: 51

Dipsas indica subsp. 39: 51

hemoparasita

tripanossomo

cultura

transmissão experimental 39: 85

Lystrophis histricus 39: 37

Lystrophis nattereri 39: 37

parasitismo

Kalicephalus subulatus

morfologia

incidência 39: 103

Sistemática

ácaros

Acarina, Listrophoridae

Prolistrophorus ãolichus sp.n. 39 : 73

aranhas

Ctenus fasciatus

Loxosceles adelaida

Loxosceles similis

Theriáiosomatidae 39: 61

serpentes

Colubriáae 39: 37

Dipsaáinae 39: 51

Dipsas indica subsp. 39: 51

Lystrophis histricus 39: 37

Lystrophis nattereri 39: 37

Theriosomatiãae 39: 61

Tripanossomo

serpente

cultura

transmissão experimental

peixe 39: 79

39: 85

Virologia

moléstia de Hodgkin concomitante

ao sarampo 39: 217

251

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

39: 253-255, 1975

SUBJECT INDEX

Acarid

Acarina, Listrophoridae

Prolistrophorus dolichus sp.n. 39: 73

Afrânio do Amaral

a glance of the scientific life 39: 3

bibliography 39: 11

Birds

erythrocytes

chromatin extrusion 39: 149

hemoglobin

serie 39: 169

Chagas’ disease

myocarditis

39: 207

Chromatin extrusion

avian erythrocytes

39: 149

Chromosomes

banding by snake venoms 39: 123

Hodgkin’s disease concomitant

to measles 39: 225

Colubridae 39: 37

Corynebacterium kutscheri 39: 233

Ctenus fasciatus 39: 61

Dipsaãinae 39: 51

Dipsas indica subsp. 39: 51

Erytrocytes

birds

chromatin extrusion 39: 149

serie 39: 169

fishes

Cyprinus carpio 39: 157

hemoglobin 39: 169

mammals

serie 39: 169

Etymology

generic names ending in -ops 39: 27

253

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

Tilem. Inst. Butantan

39: 253-255, 1975

Fishes

Cyprinus carpio

erythrocytes

hemoparasites

hemogregarin

trypanosome 39: 79

Hemoglobin

erythrocitary series of

birds and mammals 39: 169

Hemogregarin

fishes 39: 79

Hemoparasites

fishes

hemogregarin

trypanosome 39: 79

snakes

trypanosome 39: 85

Hodgkin’s disease

concomitant to measles

chromosomal aspects 39: 225

virology 39: 217

Kalicephalus subulatus 39: 103

Listrophoriãae 39: 73

Loxosceles aãelaiãa 39: 61

Loxosceles similis 39: 61

Lystrophis histricus 39: 37

Lystrophis nattereri 39: 37

Mammals

erythrocytes, serie

hemoglobin 39: 169

Measles

concomitant to Hodgkin’s disease

chromosomal aspects 39: 225

virology 39: 217

Myocarditis 39: 207

Prolistrophorus ãolichus sp.n. 39: 73

Pseudotuberculosis

rodent 39: 233

Rodent

Pseudotuberculosis

Corynebacterium kutscheri, isolation

from the mouth and skin 39: 233

Snakes

Colubridae 39: 37

Dipsadinae 39: 51

Dipsas indica subsp. 39: 51

254

Mem. Inst. Butantan

39: 253-255, 1975

Lystrophis histricus 39: 37

Lystrophis nattereri 39: 37

hemoparasite

trypanosome

culture

experimental transmission

parasitism

Kalicephalus subulatus

morfology

incidence 39: 103

Spermatogenesis

spermatocytes

synaptonemal complex 39: 135

39: 85

Spiders

brazilian cave-divelling

Ctenus fasciatus

Loxosceles aãelaida

Loxosceles similis

Theriosomatiãae 39:

Synaptonemal complex 39: 135

Systematics

acarid

Acarina, Listrophoriãae

Prolistrophorus áolichus n.sp.

39: 73

snakes

Colubridae 39: 37

Dipsadinae 39: 51

Dipsas indica subsp.

Lystrophis histricus

Lystrophis nattereri

spiders

Ctenus fasciatus

Loxosceles aãelaida

Loxosceles similis

Theriosomatiãae 39: 61

39: 51

39: 37

Theriosomatiãae

39: 61

Trypanosome

fishes 39: 79

snakes

culture

experimental transmission

39: 85

Virology

Hodgkin’s disease concomitant

to measles 39: 217

255

SciELO

0 11 12 13 14 15 16