As "MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN” têm por finalidade a apre¬

sentação de trabalhos originais que contribuam para o progresso nos campos das

Ciências Biológicas, Médicas e Químicas, elaborados por especialistas nacionais

e estrangeiros.

São publicadas sob a orientação da Comissão Editorial, sendo que os con¬

ceitos emitidos são de inteira responsabilidade dos autores.

The "MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN" are the vehicle of com-

munication for original papers written by national and foreign specialists who

contribute to the progress of Biological, Medicai and Chemical Sciences.

They are published under the direction of the Editorial Board which assu¬

mes no responsability for statements and opinions advanced by contributors.

Diretor do Instituto Butantan

Dr. Willy Beçak

Comissão Editorial

Henrique Moisés Canter — Presidente

Adolpho Brunner Júnior - Membros

Olga Bohomoletz Henriques

Raymond Zelnik

Sylvia Lucas

Denise Maria Mariotti — Bibliotecária

Indexado/lndexed: Biosis Data Base, Current Contents, Excerpta Médica, Index Medi-

cus.

Periodicidade: irregular

Permuta/ Exchange: são feitas entre entidades governamentais, com publicações

congêneres, mediante consulta prévia. Exchanges with similar publications can

be settled with academic and governmental institutions through prior mutual

agreement.

Endereço/Address. Instituto Butantan — Biblioteca. Av. Vital Brasil, 1.500

05504 — São Paulo, SP — Brasil

Telefone/Telephone: (011) 211-8211 - R. 129 - Telex: (011) 83325 BUTA-BR

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Governo do Estado de São Paulo

Secretaria de Estado da Saúde

Coordenação dos Institutos de Pesquisa

Instituto Butantan — São Paulo - SP — Brasil

MEMÓRIAS

INSTITUTO BUTANTAN

Volume 50, número 1,1988

São Paulo, SP — Brasil

1988

MEMÓRIAS do INSTITUTO BUTANTAN. (Secretaria de Estado da Saúde)

São Paulo, SP — Brasil, 1918 —

1918 - 1983/84,1-47/48

Publicação interrompida de 1985 a 1986

1987, 49(1-3)

1988, 50(1

ISSN 0073-9901

MIBUAH CDD 614.07205

Solicita-se permuta/ Exchange desired

SciELO

10 11 12 13 14

Mem. Inst. Butantan

50(1), 1988

SUMÁRIO/SUMMARY

Karl Heinrich Slotta . 5-14

Sobre dois novos métodos de preparo do hemipênis de serpentes.

On two new methods for preparing snake hemipenis.

Paulo Roberto MANZANI; Augusto Shinya ABE . 15-20

Soro anti-rábico heterólogo de uso humano. Anticorpos ines-

pecíficos.

Human use heterologous antirabies serum. Inespecific antibodies.

Hisako Gondo HIGASHI; Josefina Farina MORAIS; RosalVo

GUIDOLIN; José Roberto MARCELINO; Valéria Maria Pinhei¬

ro Dl SALVIO . 21-27

Influências sazonal e do processo de extração sobre a produção,

toxicidade do veneno e sobrevida de Bothrops jararaca (Wied,

1824).

Seasonal influence on quantity and toxicity of the venom of

Bothrops jararaca (Wied, 1824) obtained by manual extraction

and through electric stimulation.

Elisabete Gomes Jardim VIEIRA; Raymundo ROLIM-ROSA;

Hideyo IIZUKA; Maria de Fátima Domingues FURTADO; Wil¬

son FERNANDES . 29-35

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mem. Inst. Butantan

50(1): 5-14, 1988.

KARL HEINRICH SLOTTA

1892-1987

"Qu'est-ce qu'un homme révo/té? Un homme qui dit non.

Mais s'il refuse, il ne renonce pas... D'une certaine maniè-

re, il oppose à 1'ordre qui fopprime une sorte de droit à ne

pas être opprimé au delà de ce qu 7/ peut admettre. "

Albert Camus, L'Homme Révolté, 1951

Karl H. SLOTTA, descobridor da PROGESTERONA, nasceu em Bres-

lau, Alemanha (hoje Wroclaw, Polônia) em 12 de maio de 1895 e deu o seu

último alento em Miami, em 17 de julho de 1987, aos 92 anos de idade.

j | SciELO

ZELNIK, R. Kart Hemrich Slotta (1892-1987). Mem. Inst. Butantan, 50(1):b-14,1988.

A sua carreira científica configura uma extraordinária trajetória que se

iniciou na Universidade de Breslau de 1919 a 1935, prosseguiu no Brasil on¬

de lançou as bases da Química e da Farmacologia experimental no Instituto

Butantan no período de 1935 a 1938, e alcançou a América do Norte, onde

atuou, a partir de 1957, como Professor de Bioquímica da Universidade de

Miami.

As suas contribuições abrangem a síntese de produtos naturais, a

química dos hormônios sexuais, os constituintes do café e as toxinas dos

venenos ofídicos, tendo se projetado no cenário mundial pela descoberta

da progesterona em 1934 e pelo isolamento da primeira toxina cristalizada

do veneno de cascavel, a crotoxina, em 1938.

Após lutar na Primeira Guerra Mundial e sofrer graves ferimentos, o jo¬

vem tenente Slotta ingressa em 1919, aos 24 anos, na Universidade de sua

cidade natal, Breslau. Em poucos anos, sob a orientação de Heinrich Biltz,

vence as etapas do currículo universitário até defender tese de doutora¬

mento em 1928. Logo mais dá início a uma brilhante carreira acadêmica, ao

tornar-se Livre-docente em 1929 e Professor do Instituto de Química da

Universidade de Breslau em 1935.

Na década de 20, o mundo da fisiologia estava voltado para os fenôme¬

nos da reprodução humana. O ano de 1930 presenciou a descoberta da ES-

TRONA (I), isolada independentemente nos laboratórios de Doisy, na Uni¬

versidade de St. Louis, e de Butenandt, na Universidade de Gottingen. Ou-

trossim, já em 1903, Ludwig Fraenkel, então Professor de Obstetrícia e Gi¬

necologia da Faculdade de Medicina de Breslau, havia desvendado a natu¬

reza endócrina do corpo amarelo: este tecido de cor amarela, em virtude da

alta concentração em caroteno, exerce importantes funções: impede a

ovulação, mantém as condições favoráveis ao desenvolvimento do em¬

brião e das glândulas mamárias. Convencido de que esta estrutura secreta-

va um hormônio essencial à função de reprodução, Fraenkel sugeriu a Karl

Slotta uma pesquisa química que possibilitasse a identificação dos seus

princípios ativos.

Em trabalhos ininterruptos e a partir de ovários de porcas, Slotta conse¬

guiu isolara PROGESTERONA (II). A pesquisa foi publicada nos "Berichte

der Deutschen Chemisches Gesellschaft", em 1934, sendo co-autores o

químico H. Ruschig e o médico E. Fels. Por se tratar do segundo hormônio

feminino descoberto, o trabalho teve uma enorme repercussão. Tão-

somente Karl Slotta isolou a progesterona, determinou também a sua es¬

trutura molecular, uma façanha que tinha poucos precedentes nos anais

dos Produtos Naturais da época. Na clássica obra "STEROIDS", Fieser e

Fieser prestam a seguinte homenagem ao talento de Slotta: ''The absorp-

tion spectrum of progesterone indicated the presence of an a,p

unsaturated keto grouping and X-Ray studies pointed to a sterol-like mole-

cule. On the basis of these limited observations, Slotta proposed a formula

which shortly proved to be correct by partial synthesis."

ÇOCH,

HO'

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

ZELNIK, R. Karl Heinrich Slotta (1892-1987), Mem. Inst. Butantan, 50(1 ):5-14, 1988.

No mesmo ano de 1934, três outros laboratórios anunciaram o isola¬

mento da progesterona: os de Butenandt (Alemanha), de Wintersteiner

(Estados Unidos) e da Ciba S.A. (Suíça).

Homem de profunda visão humanista, casado com a Dra. Maja Fraen-

kel, de ascendência judaica, Karl Slotta ficou indignado e revoltado com o

regime racista implantado pelo nazismo na sua pátria. Atendendo ao convi¬

te do Governo do Estado de São Paulo, mudou-se com a família em 1935

para São Paulo, onde recebeu a incumbência de dirigir a recém-criada

"Secção de Chimica e Pharmacologia Experimentaes" do Instituto Butan¬

tan, tendo como assistentes os Drs. K. Neisser, G. Szyska e José Ribeiro

do Valle. No preâmbulo da obra "Rattlesnake Venoms", editada por

A.T.Tu (1982), Karl Slotta escreveu: "In 1935, the government of the State

of São Paulo offered me the directorship of the newly established Chemical

department in its world-famous snake and venom Instituto Butantan.

Strangely enough I was not asked to work on snake venoms but rather to

continue my research of sex hormones and also to enter a new field: the

chemistry of coffee... However my prime interest was to do research on

snake venom... I started this research finally in early 1937 and carne to the

conclusion that rattlesnake venom might bea protein... In 1938 we crystal-

lized what we called 'crotoxin' and determined its molecular structure. In a

way, this discovery may have provided the impetus for world-wide re¬

search on animal venoms, the founding of the International Society on To-

xinology in 1962 and its publication Toxicon, and all the great achieve-

ments up to the present time: research on snake venoms, neurotoxins,

phospholipase A, L-aminoacid oxidase and hemolysis and blood coagula-

tion and the search for the pharmacological effects of all animal venoms."

No noticiário do Tomo XI das Memórias do Instituto Butantan (1937),

destacamos o seguinte: "... É pois, com especial agrado que, neste tomo,

se anuncia a publicação de uma grande serie de trabalhos sobre chimica, a

versarem uns sobre a natureza dos hormonios sexuais, outros sobre a com¬

posição do café e outros, finalmente, sobre os princípios constituintes dos

venenos dos batrachios e dos ophidios". De fato, são quatorze trabalhos a

cargo do grupo de pesquisadores liderados pelo Professor Slotta, prenun¬

ciando uma outra serie de publicações que surgem no Tomo XII (1938),

sendo a mais notável a descoberta da CROTOXINA, a primeira proteína tó¬

xica do reino animal, obtida em forma cristalizada, suscitando a atenção do

mundo científico.

Em 1938, a nova direção do Instituto Butantan, nomeada pelo Governo

do Estado que encontrava-se sob intervenção federal, extinguiu a Seção de

Química e demitiu sumariamente o Professor Slotta e o seu grupo de pes¬

quisadores. Esta lamentável atitude, comandada por motivos políticos, cer¬

tamente privou o Instituto Butantan e o País da oportunidade de ingressar,

com toda força, na década de 50, no fabuloso campo dos hormônios, ilus¬

trado pelas descobertas da cortisona e dos anticoncepcionais. Conseqüen-

temente, Karl Slotta se transferiu para o setor privado, tornando-se um dos

fundadores da Endochimica S.A., empresa do ramo biofarmacêutico, na

qual conseguiu desenvolver um núcleo de pesquisas básicas. Assim, na dé¬

cada de 50, publicou artigos científicos, principalmente nas Memórias, tra¬

tando de cromatografia, venenos de abelhas e fator hemolítico dos vene¬

nos ofídicos. O seu prestígio era de tal grandeza que a Universidade de

SciELO

10 11 12 13 14 15

ZELNIK, R. Karl Heinrich Slotta (1892-1987). Mem. Inst. Butantan, 50(11:5-14, 1988.

Miami o convidou, em 1957, para ocupar a cadeira de Bioquímica, onde

permaneceu ativo até 1975.

Sem dúvida alguma, Karl Slotta pode ser considerado como o pai da

Química dos Produtos Naturais no Brasil. Uma lista completa de suas publi¬

cações está sendo editada neste fascículo das Memórias, que tanto presti¬

giou e projetou nos compêndios da literatura científica mundial.

Raymond Zelnik

Diretor do Serviço de Química Orgânica

do Instituto Butantan

j, | SciELO

ZELNIK, R. Karl Heirwich Slotta. (1892-1987). Mem. Inst. Butantan, 50(11:5-14, 1988.

TRABALHOS PUBLICADOS

Karl Heinrich Slotta

1. BILTZ, H.; KRZIKALLA, H.; SLOTTA, K.H. 3,9-Dimethyl-5,7-isoharnsaeure, ihre

Chloriertungsprodukte und ihr Abbau. Ann. Chemie, 457:131, 1927.

2. BILTZ, H. & SLOTTA, K.H. Ueberdie Herstellung von Hydantoinen. J. Prakt. Chem.,

7 13(2) :23A, 1926.

3. FELS, E. & SLOTTA, K.H. Ueber das Hormon des Corpus luteum. In: CONGRESS

FOR SEX RESEARCH, 2. London, 1930. Proc.

4. GINSBERG, N.J.; DAUER, M.; SLOTTA, K.H. Melittin used as a protective agent

against X-irradlation. Nature, 220.1334, 1968.

5. HECHT, E & SLOTTA, K.H. The Chemical nature of the lipid activator in blood coagu-

lation. Amer. J. clin. Path., 37:126, 1962.

6. MICHL, H. & SLOTTA, K. H. Electrophoretíc separation of plasminogen. Biochim.

Biophys. Acta, 57:617, 1961.

7. SLOTTA, K.H. Acerca do café. O Estado de São Paulo, S. Paulo, 08 mar. 1936, p. 5.

8. SLOTTA, K.H. Aquisições recentes sobre a insulina. Rev. Med., 25(93): 25,

1941.

9. SLOTTA, K. H. Beitragezur Glukosid-Synthese. 1929. /Habilitationsschrift/.

10. SLOTTA, K.H. Bromcyan und wasserfreis Blausaeure. Ber. dtsch. chem. Ges.,

67: 1028, 1934.

11. SLOTTA, K.H. The cell growth-promoting factor II. Ztschr. physiol. Chem., 367:599,

1980.

12. SLOTTA, K.H. Chemistry and biochemistry of snake venoms. In: ZECHMEISTER, L.

ed. Progress in the chemistry of organic natural products. Wien, Springer-Verlag,

1955. v. 12 p. 406.

13. SLOTTA, K.H. Acrotoxina; primeira substância pura dos venenos ofídicos. An. Acad.

bras. Sei., 10(3): 195-209, 1938.

14. SLOTTA, K.H. Direct and indirect hemolytic factors from animal venoms. In: INTER¬

NATIONAL SYMPOSIUM ON ANIMAL TOXINS. Atlantic City, N.Y., 1966. Proc. p.

369.

15. SLOTTA, K.H. Ein letztes Wort zur Geschlechtsvoraussage nach Luettge V. Mertz.

Ztbl. Gyn.,: 3068, 1926.

16. SLOTTA, K.H. Estrutura química e efeito farmacológico. Brasil-Médico, 87: 81, 1973.

17. SLOTTA, K.H. Estudo sobre os venenos de sapos brasileiros. II. Sobre a adrenalina no

veneno do Bufo marinus. Mem. Inst. Butantan, 7 7:101, 1937.

18. SOTTA, K.H. Estudos químicos sobre venenos ofídicos. II. Sobre a forma de ligação

do enxofre. Mem. Inst. Butantan, 7 7:121, 1937.

19. SLOTTA, K.H. Estudos químicos sobre venenos ofídicos. III. Teor da coagulação e da

lecitinase. Mem. Inst. Butantan, 7 7:133, 1937.

20. SLOTTA, K.H. Further experiments on crotoxin. In: BUCKLEY, E.E. ed. Venoms.

Washington, American Association for the Advancement of Science, 1956. p. 253-

258.

21. SLOTTA, K.H. Grundriss der Modernen Arzneistoff-Synthese. Stuttgart, Ferd. Bnke,

1931, 202 p.

22. SLOTTA, K.H. Os hormonios sexuaes sob o ponto de vista chimico. Rev. Obstet. Gi-

nec. S. Paulo, 2. 261, 1938.

23. SLOTTA, K.H. Hydantoine. Breslau, Hochschulverlag, 1923. Dissertation/

24. SLOTTA, K.H. Increase of aldehydogenic brain lipids due to aging. In: INTERNATIO¬

NAL CONGRESS OF GERONTOLOGY, 7. Viena, 1966. Proc. p. 125.

25. SLOTTA, K.H. Intervenção da chimica em favor dos cafés baixos. Rev. Quim. Ind.

6:500, 1937.

26. SLOTTA, K.H. lodierung und Nitrierung des Diphenyl aether-aldehyde (4). Ber. dtsch.

chem. Ges., 632059, 1935.

27. SLOTTA, K.H. The isolation of progesterone. Amer. J. Obstet. Gynec., 727:428,

1975.

28. SLOTTA, K.H. Ist eine Geschlechtsvoraussage nach Luettge — v. Mertz-Sellheim

moeglich? Ztbl. Gyn. : 1631, 1926.

29. SLOTTA, K.H. Do medicamento ao entorpecente. Rev. bras. Farm., 22. 389, 1941.

30. SLOTTA, K.H. Messbombe fuer Leichtfluechtige Stoffe. Angew. Chem., 40. 1341,

1927.

SciELO

10 11 12 13 14 15

ZELNIK, R. Karl Heinrich Slotta (1892-1987). Mem. Inst. Butantan, 50(11:5-14, 1988.

31. SLOTTA, K.H. Mitochondrial coenzyme Q10 in rats of various ages. J. Gerontol.,

20. 165, 1965.

32. SLOTTA, K.H. Mitochondrial phospholipids in rats of various ages. J. Gerontoi.,

18. 326, 1963.

33. SLOTTA, K.H. Novas noções sobre o princípio antipernicioso do fígado. An. Soc.

Med. Cirurg. R. Janeiro, 1940.

34. SLOTTA, K.H. Pesquisa e prática na hormoterapia. Rev. Assoe. Med. M. Gerais,

7:233, 1950.

35. SLOTTA, K.H. Phenyl-2-carbonsaeure-(4) des Phenols. Ber. dtsch. chem. Ges.,

68:2226, 1935.

36. SLOTTA, K.H. Phospholipases. In: BOYER, P.D.ed Theenzymes. 1960. v. 4, p.551.

37. SLOTTA, K.H. Das Plasminogen. Plasmin-System. SaarlandischeAerzteblatt, 10out.

1963.

38. SLOTTA, K.H. Probleme der hormonchemie. Angew. Chem., 40. 1465, 1927.

39. SLOTTA, K.H. Progesterone, 50yearsago. Trends Biochem. Sei., 8:417, 1983.

40. SLOTTA, K.H. Da química do hormonio do corpo amarelo. An. bras. Ginec., 11,

1941.

41. SLOTTA, K.H. Os recentes progressos da vitaminologia. Brasil-Médico, 51: 831, 1941.

42. SLOTTA, K.H. Schlangengifte. I. Bestimmung von Gift-Koagulase-und lecithinase-

Wert und Beinflussung der Gifte durch physikalische and chemische Mittel. Ber.

dtsch. chem. Ges., 71: 258, 1938.

43. SLOTTA, K.H. Schlangengifte. II. Ueber die Bindungsart des Schwefels. Ber. dtsch.

chem. Ges., 71. 254, 1938.

44. SLOTTA, K.H. Das Schwangerschaftshormon. Umschau, 38.909, 1934.

45. SLOTTA, K.H. Schwangerschaftshormon I und II. Ztschr. Physiol. Chem. 228.201,

1934.

46. SLOTTA, K.H. Sobre a chimica dos hormonios sexuaes. Rev. Brasil-Cirurg., 2. 1940.

47. SLOTTA, K.H. Sobre a chimica dos hormonios sexuaes. Rev. bras. Quim., 32. 632,

1938.

48. SLOTTA, K.H. Sobre a chimica dos hormonios sexuaes. I. Estado actual da questão.

Mem. Inst. Butantan, 7 7:1, 1937.

49. SLOTTA, K.H. Sobre os hormonios proteicos. An. bras. Ginec., 9, 1940.

50. SLOTTA, K.H. Sobre insulina. Selecta Quimica, Dez. 1947.

51. SLOTTA, K.H. Synthese der Terephtal-und Isophtal-aldehyd-saeure-ester. Ber.

dtsch. chem. Ges., 77:335, 1938.

52. SLOTTA, K. H. Synthesen thyroxin-aenlicher Substansen aus Diphenyl aether. Ber.

dtsch. chem. Ges., 69. 556, 1936.

53. SLOTTA, K.H. Thromboplastin. 1. Phospholipid moiety of thromboplastin. Proc. Exp.

Biol. Med., 103.53, 1960.

54. SLOTTA, K.H. Ueber die Oxydation der Harnsaeure-glykols. J. Prakt. Chem., 110

(21:264, 1925.

55. SLOTTA, K.H. Vorschlftflasche fuer Vakuumdestillationen. Chemfa, 3183, 1930.

56. SLOTTA, K.H. Zur Chemie und Gewinnung des weiblichen Sexualhormons. Dtsch.

med. Wschr., (51), 1927.

57. SLOTTA, K.H. Zur Chemie der Schlangengifts. Experientia, 9. 81, 1953.

58. SLOTTA, K.H. Zur Gewinnung von reinem Lecithin und Colaminkephalin mittels

Dünnschicht-Chromatographie. Mh. Chemie, 97: 1723. 1966.

59. SLOTTA, K.H. Zur Gewinnung von 3,4,5 — Trimethoxy-benzaldehyd. J. Prakt. Che¬

mie, 733(2) :226, 1932.

60. SLOTTA, K.H. Zur Synthese Sympathomimetisch wirkender Lokalanesthetica. Ber.

dtsch. chem. Ges., 77:59, 1938.

61. SLOTTA, K.H. & ALTNER, W. Ueber B-Phenyl-aethylamine II. Mitteil: Eine neue

Tyramin-Synthese. Ber. dtsch. chem. Ges., 64:1510, 1931.

62. SLOTTA, K.H. & BALLESTER, A. Determinação colorimétrica da hialuronidase dos

venenos ofídicos. Mem. Inst. Butantan, 26: 311, 1954.

63. SLOTTA, K.H. & BEHNISCH, R. Hydrocuprein-aminoalkyl-aether. Ber. dtsch. chem.

Ges., 68: 754, 1935.

64. SLOTTA, K.H. & BEHNISCH, R. Umsetzung von primaeren und sekundaeren Amino-

alkoholen und Amino-phenolen mit Arylsulfon-saeure-chroriden. J. Prakt. Chemie.,

733(2):225, 1932.

65. SLOTTA, K.H. Et BEHNISCH, R. Zur Alkylierung von Hydro-cuprein. Ber. dtsch.

chem. Ges., 66: 360, 1933.

í, | SciELO

ZELNIK, R. Karl Heinrich Slotta (1892-1987). Mem. Inst. Butantan, 50(11:5-14, 1988.

66. SLOTTA, K.H. & BEHNISCH, R. Zur Bildung des Piperazin-Ringes. Ann. Chemie,

497: 170, 1932.

67. SLOTTA, K.H.; BEHNISCH, R.; SZYSZKA, G. Zur Synthese und Wirkung von Hydan-

toinen. Ber. dtsch. chem. Ges., 67:1529, 1934.

68. SLOTTA, K.H. & BLANKE, E. Zur Methodik der Mikrohydrierung. J. Prakt. Chem.,

143,2) A, 1935.

69. SLOTTA, K.H. & BORCHERT, P. Histamina e toxinas protéicas no veneno de abelha.

Mem. Inst. Butantan, 26:279, 1954.

70. SLOTTA, K.H. & BORCHERT, P. Sobre o fator hemolítico dos venenos ofídicos.

Mem. Inst. Butantan, 26:291, 1954.

71. SLOTTA, K.H. & BRIL, S. Action of câncer serum on the oxydation of catechol. Acta

Un. int. Câncer, 12(4) 1956.

72. SLOTTA, K.H.; BRIL, S.: BELLESTER, A. Der "Sog" in der Papierelektrophorese.

Ztschr. Physiol. chem., 296: 141, 1954.

73. SLOTTA, K.H.; BRIL, S.; FRANKENTHAL, L. Estudos bioquímicos sobre a formação

de melanina na pele humana. O Hospital, 43. 523, 1953.

74. SLOTTA, K.H. & DEUTSCH, E. Thromboplastic activity of split products of phospha-

tidyl ethanol-amine. Thrombos. Diathes. haemorrh., 4. 283, 1960.

75. SLOTTA, K.H. Er DRESSLER, H. Ueber Isocyanate. VII. Neuss Darstellungsverfahren

fur aromatische Senfoele und Isocyanate. Ber. dtsch chem. Ges., 62888, 1930.

76. SLOTTA, K.H. & FORSTER, V.W. Estudos químicos sobre venenos ofídicos. V. De¬

terminação quantitativa dos componentes que contêm enxofre. Mem. Inst. Butan¬

tan., 12. 513, 1938.

77. SLOTTA, K.H. Er FORSTER, V.W. Sobre a chimica dos hormonios sexuaes. III. Cons¬

tituição das substâncias estrogênicas obtidas com o anol. Mem. Inst. Butantan,

7 7:31, 1937.

78. SLOTTA, K.H. Er FORSTER, V.W. Schlangengifte. IV. Quantitative Bestimmung der

Schwefelhaltigen Bausteine. Ber. dtsch. chem. Ges., 77:1082, 1938.

79. SLOTTA, K.H.; FORSTER, V.W.; FRAENKEL-CONRAT, H.L. Schlangengifte. V. Ue¬

ber die Schwefelhaltigen Bausteine des Cobragiftes. Ber. dtsch. chem. Ges.,

77:1623, 1938.

80. SLOTTA, K.H. Er FRAENKEL-CONRAT, H.L. Crotoxin. Nature, 744:290, 1939.

81. SLOTTA, K.H. & FRAENKEL-CONRAT, H.L. Estudos chimicos sobre venenos ofídi¬

cos. IV. Purificação e cristalização do veneno da cobra cascavel. Mem. Inst. Butan¬

tan, 12.505, 1938.

82. SLOTTA, K.H. & FRAENKEL-CONRAT, H.L. Schlangengifte. III. Reinigung und

Krystallisation des Klapperschlangengiftes. Ber. dtsch. chem. Ges., 77:1076, 1938.

83. SLOTTA, K.H. & FRAENKEL-CONRAT, H.L. Two active proteins from rattlesnake

venom. Nature, 142. 213, 1938.

84. SLOTTA, K.H. Er FRANKE, W. Darstellun und Verwendung hoeherer Ester der p-

Toluol-sulfonsaeure. Ber. dtsch. chem. Ges., 63. 678, 1930.

85. SLOTTA, K.H. Er FRANKE, W. Das Puffergemisch aus sek. Natriumphosphat und Ci-

tronensaeure. Ber. dtsch. chem. Ges., 64: 452, 1931.

86. SLOTTA, K.H. Er FRANKE, W. Zur Konstitution der Azo-lndicatoren. I. Mitteil:

Naphthol-Orange. Ber. dtsch. chem. Ges., 64:86, 1931.

87. SLOTTA, K.H. Er FRANKE. W. Zur Konstitution der Azo-lndicatoren. II. Mitteil: Die

hoeheren Homologen dez Helianthins und des Methylrote. Ber. dtsch. chem. Ges.,

66:104, 1933.

88. SLOTTA, K.H.; FRANKE, W.; HABERLAND, G. Zur Konstitution der Azo-

lndicatoren. III. Mitteil: Die Alkylierung von Naphthol-Orange. Ber. dtsch. chem.

Ges., 66: 108, 1933.

89. SLOTTA, K.H. Er GIMENEZ, D.R. Preparation of pure phospholípids by thin layer

chromatography and their analysis. Fed. Proc., 23.(2), 1964.

90. SLOTTA, K.H.; GOLUB, A.L.; LOPEZ, V. The cell growth-promoting factor. Ztschr.

physiol. Chemie, 356:367, 1975.

91. SLOTTA, K.H. Er GONZALEZ, J.D. Fractionation of plaminogen by starch gel electro-

phoresis. Thrombos. Diathes. haemorrh., 72126, 1964.

92. SLOTTA, K.H. Er. GONZALEZ, J.D. Native and acid-treated plasminogen. Fed. Proc.,

22(2), 1963.

93. SLOTTA, K.H. Er GONZALEZ, J.D. Native plasminogen. Biochemistry, 3. 285, 1964.

94. SLOTTA, K.H. Et HABERLAND, G. Spasmolytica von Papaverintyp. Angew. Chem.,

46: 766, 1933.

SciELO

10 11 12 13 14 15

ZELNIK, R Karl Heinrich Slotta 11892-1987). Mem. Inst. Butantan, 50(11:5-14, 1988.

95.

96.

97.

98.

99.

100 .

101 .

102 .

103.

104.

105.

106.

107.

108.

109.

110 .

111 .

112 .

113.

114.

115.

116.

117.

118.

119.

120 .

121 .

122 .

SLOTTA, K.H. Er HABERLAND, G. Zur mikro-analytischen Bestimmung von

Methoxyl-und Methylimid-Gruppen. Ber. dtsch. chem. Ges., 65:127, 1932.

SLOTTA, K.H. & HABERLAND, G. Zur Gewinnuhg der Homopiperonylsaeure. J.

Prakt. Chem., 139 21:211, 1933.

SLOTTA, K.H. Er HAMBURGER, R. Zur "Buscaino-ReaktiorT. Arch. Psychiatric,

100. 516, 1933

SLOTTA, K.H. & HELLER, H. Ueber B-Phenyl-aethylamine. I. Mitteil: Mescalin und

mescalin-aehnliche Substanzen. Ber. dtsch. chem. Ges., 63. 3029, 1930.

SLOTTA, K.H. & HELLER, H. Versuche zur Glucosidierung von Phenyl-

aethanolaminen. Ber. dtsch. cheríi. Ges., 63. 1024, 1930.

SLOTTA, K.H. & JACOBI, K.R. Herstellung Organischer Reagenzien im Analytischen

Laboratorium.

77:344, 1929.

SLOTTA,K.H.

Laboratorium.

Ztschr. analyt.

SLOTTA,K.H.

Laboratorium.

Diphenyl-carbazid und Diphenyl-carbazon. Ztschr. Analyt. Chemie,

& JACOBI, K.R. Herstellung Organischer Reagenzien im Analytischen

"Kupferron" (Ammoniumsalz des Nitrosophenylhydroxylamins).

Chemie., 80. 97, 1930.

& JACOBI, K.R. Herstellung Organischer Reagenzien im Analytischen

Diacetyldioxim. Ztschr. analyt. Chemie., 833, 1931.

SLOTTA, K.H. & JACOBI, K.R. Ueber Organische Quecksilberbasen und ihre Salze.

J. Prakt. Chem., 72CX2):249, 1929.

SLOTTA, K.H. Er LAUERSEN, F. 2-Nitro-homoveratrumsaure. J. Prakt. Chem.,

139,21:220, 1934.

SLOTTA, K.H. Er LORENZ, L. Ueber Isocyanate. I. Darstellung Aliphatischer Isocya-

nate. Ber. dtsch. chem. Ges., 55:1320, 1925.

SLOTTA, K.H.; MICHL, H.; SANTOS, B.G. Comparative studies on native and acid-

treated plasminogen. Biochim. Biophys. Acta, 55459, 1962.

SLOTTA, K.H. & MUELLER, J. Halbmikro-Verbrennung nach dem Kontaktverfahren.

Chemfa, 7: 380, 1934.

SLOTTA, K.H. Er MUELLER, J. Ueber dem Abbau des Mascalins und mascalinaehnli-

cher Stoffe in Organisms. Phys. Chem., 238: 14, 1936.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. O café sob o ponto de vista chimico. I. Determinação

do extracto e da cafeina. Mem. Inst. Butantan, 11:39, 1937.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. O café sob o ponto de vista chimico. II. Alcaloides do

café. Mem. Inst. Butantan, 11:49, 1937.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. O café sob o ponto de vista chimico. V. Três novas

substâncias do café. Mem. Inst. Butantan, 7 7:71, 1937.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. O café sob o ponto de vista chimico. VII. Novo méto¬

do para a determinação da trigonelina. Mem. Inst. Butantan, 12.491, 1938/39.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Estudo sobre os venenos de sapos brasileiros. I. Com¬

posição do veneno de Bufo marinus. Mem. Inst. Butantan, 7 7:89, 1937.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Zur Chemie des Kaffees. I. Eine neue Methode zur

Bestimmung der Chlorogensaure. Ber dtsch. chem. Ges., 71 5: 1616, 1938.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Zur Chemie des Kaffes. II. Eine neue Methode zur Bes¬

timmung des Trigonellins. Ber. dtsch. chem. Ges., 775:1987, 1938.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Zur Chemie des Kaffees. III. Die Gewinnung von Ca-

festerol und anderen Verbindungen Aus dem Unverseifbaren des kaffee-Oels. Ber.

dtsch. chem. Ges., 775:1991, 1938.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Zur Chemie des Kaffees. IV. Zur Konstitutionsaüfkla-

rung des Cafesterols. Ber. dtsch. chem. Ges., 775:2342, 1938.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Zur Chemie des Kaffees. V. Neuere Analytische Erfah-

rungen. Ber. dtsch. chem. Ges., 72B: 126, 1938.

SLOTTA, K.H. Et NEISSER, K. Zur Chemie des Kaffees. VI. Ueber den Gehalt des

Roh-und Rostkaffees an Trigonellin und Chlorogensaure. Ber. dtsch. chem. Ges.,

72B: 133, 1939.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Ueber Oxidationen mit Hypojodit. I. Phenole., Neue

Bestimmungsmethoden fuer Adrenalin und Tyroxin. Ber. dtsch. chem. Ges.,

776:1611, 1938.

SLOTTA, K.H. Er NEISSER, K. Ueber Oxidationem mit Hypojodit. II. Stickstoffhaltige

Heterocyclen. Neue Bestimmungemsthode des Aneurins (Vitamin B 1 ). Ber. dtsch.

chem. Ges., 775:1984, 1938.

SLOTTA, K.H.; NEISSER, K.; CARDEAL, A. O café sob o ponto de vista chimico. IV.

Determinação e extracção do acido clorogênico do café. Mem. Inst. Butantan.,

7 7:61, 1937.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

ZELNIK, R. Karl Heinrich Slotta (1892-1987). Mem. Inst. Butantan, 50(11:5-14, 1988,

123.

126.

127.

128.

129.

130.

131.

132.

133.

134.

135.

136.

137.

138.

139.

140.

141.

142.

143.

144.

145.

146.

147.

148.

149.

SLOTTA, K.H.; NEISSER, K.; CARDEAL, A. O café sob o ponto de vista chimico. VI.

Novo método para a determinação do acido clorogênico no café. Mem. Inst.

Butantan, 72487, 1938/39.

SLOTTA, K.H. & OLIVA, F. Estabilidade da vitamina B,. O Hospital, 38. 891, 1951

Determination of ethanolamine and serine. Anal.

The amino-acid composition of crotoxin. Nature,

SLOTTA, K.H. & POWERS, J.K.

Biochem., 4:69, 1962.

SLOTTA, K.H. & PRIMOSIGH, J

168.696, 1951.

SLOTTA, K.H. Er PRIMOSIGH, J. Estudos químicos sobre os venenos ofídicos. VI.

Composição da crotoxina. Mem. Inst. Butantan, 23. 51-62, 1951.

SLOTTA, K.H. & PRIMOSIGH, J. — A new method of quantitative paper chromato-

graphy. Mem. Inst. Butantan, |24(2):85-100, 1952.

SLOTTA, K.H. Er RUSCHIG, H. Die Reindarstellung der Hormone aus dem Corpus lu-

teum. Klim. Wochenschrift, 731207, 1934.

SLOTTA, K.H.; RUSCHIG, H.; FELS, E. Reindarstellung der Hormone aus dem Cor¬

pus luteum I. Ber. dtsch. chem. Ges., 67: 1270, 1934

SLOTTA, K.H.; RUSCHIG, H. Er FELS, E. Reindarstellung der Hormone aus dem Cor¬

pus luteum II. Ber dtsch. chem. Ges., 67: 1624, 1934.

SLOTTA, K.H.; RUSCHIG, H.; BLANKE, E. Reindarstellung der Hormone aus dem

Corpus luteum III. Ber. dtsch. chem. Ges., 67: 1947, 1934.

SLOTTA, K.H.; RUSCHIG, H.; FELS, E. Ueber die Hormone des Corpus luteum.

Helv. chim. Acta, 77:1381, 1934.

SLOTTA, K.H. & SZYSZKA, G. O café sob o ponto de vista chimico. III. Uso do café

no preparo de sabão ou óleo comestível. Mem. Inst. Butantan, 7 7:55, 1937.

SLOTTA, K.H. Er SZYSZKA, G. Estudos químicos sobre venenos ofídicos. I. Determi¬

nação de sua toxicidade em camundongos. Mem. Inst. Butantan, 7 7:109, 1937.

SLOTTA, K.H Er SZYSZKA, G. Instalação dos laboratórios de química para trabalhos

de Seção de Pesquisas do Instituto do Café. Rev. Inst. Café, 721467, 1937.

SLOTTA, K.H.; SZYSZKA, G.; BLANKE, E. Sobre a química dos hormônios sexuais.

II. Obtenção da estrona da urina de éguas prenhes. Mem. Inst. Butantan, 7 7:17,

1937.

SLOTTA, K.H. & SZYSZKA, G. Synthese des Mescalins. Ber dtsch. chem. Ges.,

67: 1106, 1934.

SLOTTA, K.H. & SZYSZKA, G. Ueber b-Phenyl — aethylamine. III. Mitteil: Neue

Darstellung von Mescalin. J. Prakt. Chemie., 737(21:339, 1933.

SLOTTA, K.H. Er SZYSZKA, G. Ueber b-Phynyl-aethylamine. IV. Darstellung von b

— (Amino-phenyl) — aethylaminen. Ber. dtsch. chem. Ges., 68. 184, 1935.

SLOTTA, K.H. Er TSCHESCHE, R. Ueber Biguanide. I. Zur Konstitution der

Schwermetall-Komplexver — bindungen des Biguanids. Ber. dtsch. chem. Ges.,

62: 1390, 1929.

SLOTTA, K.H. Er TSCHESCHE, R. Ueber Biguanide. II. Die blutzucker-senkende Wir-

kungder Biguanide. Ber. dtsch. chem. Ges., 62. 1398, 1929.

SLOTTA, K.H. Er TSCHESCHE, R. Ueber Isocyanate. II. Umsetzungen des Methyli-

socyanates unter dem Einfluss von Triasethylphosphin. Ber. dtsch. chem. Ges.,

60. 295, 1927.

SLOTTA, K.H. Er TSCHESCHE, R. Ueber Isocyanate. III. Das Symmetrie Prinzip bei

der Bildung derTrimethylcyanursaure-ESTER. Ber. dtsch. chem. Ges., 6Q301, 1927.

SLOTTA, K.H. Er TSCHESCHE, R. Ueber Isocyanate. IV. Untersuchungen an 1, 3, 5

— Oxydiazinen. Ber. dtsch. chem. Ges., 631011, 1927.

SLOTTA, K.H. Er TSCHESCHE, R. Ueber Isocuanate. V. Kondensation mit Methyli-

socyanat, im besonderen mit Blausaure. Ber. dtsch. chem. Ges., 631021, 1927.

SLOTTA, K.H. Er TSCHESCHE, R. Ueber Isocyanate. VI. Kondensation von Methyli-

socyanat mit Cyanamid unter dem Einfluss von Triaethylphosphin. Ber, dtsch. Chem.

Ges., 62. 137, 1929.

SLOTTA, K.H.; TSCHESCHE, R.; DRESSLER, H. Ueber Guanyl-thioharnstoffe. Ber.

dtsch. chem. Ges., 63. 208, 1930.

SLOTTA, K.H. Er VICK, J.A. Identification of the direct lytic factor from cobra venom

as cardiotoxin. Toxicon, 6:167, 1969.

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mem. Inst. Butantan

50(11:15-20, 1988.

SOBRE DOIS NOVOS MÉTODOS DE PREPARO DO

HEMIPÉNIS DE SERPENTES

Paulo Roberto MANZANI*

Augusto Shinya ABE**

RESUMO: São apresentados dois métodos de preparo do hemipênis de

serpentes, para preservação úmida e seca. O preparo para a preservação

em meio úmido consiste no uso do ágar ou gel de amido, de fácil manu¬

seio devido ao baixo ponto de fusão. O preparo do hemipênis seco man¬

tém todas as características do orgão e é de grande durabilidade.

PALAVRAS-CHAVE: Hemipênis: Serpente; Técnica de preparo.

INTRODUÇÃO

Cope 2 ' 3 foi pioneiro em utilizar a morfologia do hemipênis na classifica¬

ção das serpentes. Posteriormente, Vellard 9 ' 10 volta a discutir a importân¬

cia dos caracteres fornecidos pelo hemipênis na classificação das serpen¬

tes. Uma resenha sobre os caracteres do hemipênis empregados na classi¬

ficação, bem como a nomenclatura da morfologia do órgão e musculatura

associada, pode ser vista em Dowling e Savage 5 .

O hemipênis como fonte de caracteres para o agrupamento de serpen¬

tes foi questionado por vários autores, mas, como comenta Dowling 4 , mui¬

to do descrédito teria como origem a preparação precária do hemipênis,

que possibilitaria poucas conclusões em termos comparativos. A importân¬

cia da condição de preparo do hemipênis de serpentes no estudo de sua

morfologia foi recentemente ressaltada também por Branch 1 . Embora

questionada por alguns autores, a configuração do hemipênis pode ser um

dos poucos caracteres morfológicos aplicáveis na classificação de alguns

grupos de serpentes, como as Xenodontinae do Novo Mundo, como enfa¬

tizam Jenner e Dowling 6 .

A técnica utilizada por Cope consistia em dissecar o hemipênis e

estendê-lo sobre uma prancheta. Uma outra forma de preparar o hemipê-

‘ Departamento de Zoologia, Universidade Estadual de Campinas, C.P. 1170 - 13001 - Campínas-SP-Brasil.

” Departamento de Zoologia, Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Campus de Rio Claro, C.P.

178 - 13500 - Rio Claro-SP-Brasil.

SciELO

10 11 12 13 14 15

MANZANI, P.R. & ABE, A.S. Sobre dois novos métodos de preparo do hemipênis de serpentes

Mem. Inst. Butantan, 50(11:15-20, 1988,

nis, consiste em injetar no órgão parafina liquefeita (Ortenburger 8 ;

Vellard 9 ), álcool (Klauber 7 ) ou látex líquido (Dowling e Savage 5 ) preservan¬

do o órgão inflado.

O método ideal para a preservação de peça destinada a uma coleção

deve implicar durabilidade e facilidade de preparo. É também importante

que a peça permita o manuseio contínuo, sem que se deforme gradualmen¬

te ao longo do uso. Neste trabalho apresentamos duas técnicas de preparo

e preservação do hemipênis de serpentes, por método de fácil execução,

grande durabilidade e baixo custo.

MATERIAL E MÉTODOS

Após morta a serpente, faz-se uma incisão longitudinal na linha média,

em serpentes com subcaudais simples, ou entre as subcaudais. A incisão

deve ser superficial, cortando apenas a pele, que deve ser rebatida com

uma pinça ou mesmo com os dedos, expondo uma camada de tecido mus¬

cular ( propulsor), que reveste o músculo retrator do hemipênis (retractor

penis magnus). Dissecado o propulsor, o músculo retractor penis magnus

deve ser delicadamente puxado (Fig. IA), para a localização da região api¬

cal invaginada do hemipênis. Essa região pode ser reconhecida pela colora¬

ção rosada, devido à vascularização, em contraste com o retractor penis

major, que é mais claro. Procura-se, então, seccionar o retractor penis

majore m sua posição mais proximal, em relação ao hemipênis. Nesta ope¬

ração deve-se certificar que o ápice do hemipênis não será amputado.

Uma vez seccionado o músculo retrator, procura-se evaginar o hemipê¬

nis com o auxílio de uma pinça de ponta romba ou por pressão com o dedo

polegar, no sentido cauda-corpo. Ainda com o auxílio da pinça ou com os

dedos, procura-se evaginar completamente o hemipênis, antes de tentar

inflá-lo (Fig. 1B). Se o hemipênis for conservado em separado do corpo da

serpente, pode ser seccionado nesta etapa. Após completamente evertido,

procura-se introduzir uma agulha de ponta romba pela base do hemipênis e

inflá-lo com ar, segurando sua base entre o polegar e o indicador. Ainda

com o hemipênis cheio de ar, pode-se pressionar delicadamente o órgão

entre os dedos, para que suas paredes se distendam completamente. Em

alguns casos, o hemipênis não infla completamente, pois suas paredes não

estão completamente distendidas. Com a leve pressão dos dedos, ao mes¬

mo tempo que se injeta delicadamente o ar, o órgão vai lentamente toman¬

do a sua forma. É importante que o hemipênis tenha sido previamente dis¬

tendido com ar, antes de injetá-lo com o material definitivo (Fig. 1C).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MANZANI, P.R. & ABE, A.S. Sobre dois novos métodos de preparo do hemipênis de serpentes.

Mem. Inst. Butantan, 50(11:15-20, 1988.

Fig. 1 — A. Exposição do músculo retrator do hemipênis {retractorpenis magnus) esquer¬

do, para a localização da região apical do órgão. O hemipênis direito, invagi-

nado, foi cortado longitudinalmente a partir do ponto de conexão com o

retractor penis magnus (rpm), indicado pela seta.

B. Operação de evaginação do hemipênis, antes de inflá-lo com ar.

C. Distensão do hemipênis com ar, antes da injeção do material definitivo.

Após inflar completamente o hemipênis com ar, deve-se murchá-lo por

compressão, se for destinado a preservação em meio líquido. Nesta fase é

preciso cuidado, pois durante a compressão os espinhos basais do hemipê¬

nis podem perfurar a parede do órgão.

Para o preparo do material a ser preservado em meio líquido, uma vez

retirado o ar do hemipênis, injeta-se ágar a 2,5 a 3% ou gel de amido a

aproximadamente 14%. O ágar pode ser o de meio de cultura a ser despre¬

zado, ligeiramente aferventado para se tornar mais consistente. A concen¬

tração do ágar, como a do amido, evidentemente dependem do tamanho

do hemipênis a ser preparado, devendo ser mais consistentes às concen¬

trações descritas, nas peças maiores, em que se injeta acima de três milili¬

tros. Tanto o ágar como o gel de amido apresentam baixo ponto de fusão e

demoram muito mais tempo a se solidificarem, permitindo a injeção cuida¬

dosa do hemipênis, mesmo daqueles de espécies pequenas. Durante a inje¬

ção, segura-se a base do hemipênis para impedir o refluxo, como no caso

do ar, quando se infla o órgão. Após a injeção do ágar ou gel de amido,

amarra-se a base do hemipênis com uma linha forte, apertando-se o nó tão

logo a agulha seja retirada. Para se acelerar a solidificação do ágar, a peça

pode ser mergulhada em água com gelo fundente por alguns minutos. Soli¬

dificado o ágar, a preparação deve ser mergulhada em solução formalina

a 10%, por algumas horas, para a fixação. Uma vez fixada a preparação,

deve-se deixar em água por algumas horas para retirar o excesso de formol

e preservá-la em álcool a 70%.

Quando em trabalhos de campo ou mesmo no laboratório, o hemipênis

pode ser inflado com solução formalina a 5% a 7%, após a distensão das

2 3

MANZANI, P.R. & ABE, A,S. Sobro dois novos métodos de preparo do hemipénis de serpentes.

Mem. Inst. Butantan, 50(1): 15-20, 1988.

paredes com injeção de ar. Neste caso, amarra-se a base do hemipénis

com um nó falso. Posteriormente, a solução de formalina pode ser retirada

por compressão, como no procedimento empregado para o ar. Em segui¬

da, o órgão pode ser injetado com ágar. Desta forma, é possível preparar

parcialmente a peça no campo e depois finalizá-la no laboratório ou quando

se dispuser do ágar.

O hemipénis pode ainda ser preparado a seco, neste caso, obviamente

em separado do corpo da serpente. O processo consiste, basicamente, em

fazer passar um fluxo contínuo de ar através das paredes do órgão inflado

que, ao secarem, permanecem na posição distendida. O procedimento é

idêntico ao anterior, porém, o órgão deve permanecer inflado de ar. A se¬

guir, introduz-se no hemipénis, na dependência do tamanho da peça a ser

preparada, uma agulha de injeção ou bico descartável de pipetador conec¬

tado a uma cânula plástica de aerizador de aquário. Essa cânula deve ser

conectada a uma fonte de ar de fluxo contínuo, como um compressor,

saída de uma bomba de vácuo ou mesmo bomba de aquário, dependendo

do tamanho do hemipénis. Neste processo, o ar deve ser injetado dentro

do hemipénis e sair através das paredes, até a secagem completa do órgão.

Em caso de um compressor ou bomba de vácuo, é muito importante co¬

nectar uma derivação reguladora de fluxo, como as utilizadas em aquários,

para se manter uma saída de escape para o ar. O procedimento correto é

fazer o ar sair por uma das aberturas da derivação e lentamente abrir e au¬

mentar o fluxo para a cânula que serve o hemipénis, inflando-o cuidadosa¬

mente, sem forçar suas paredes. Uma vez controlado o fluxo de ar,

aguarda-se a secagem do hemipénis. A pressão excessiva pode romper as

paredes do hemipénis. Com hemipénis formolizados também é possível

montar a peça a seco, bastando retirar a solução de seu interior antes de in¬

jetar o ar.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os hemipénis preparados segundo as técnicas acima descritas têm-se

mantido inalterados por vários anos, mesmo as peças secas, no caso acon¬

dicionadas em frascos ou recipientes de plástico, sem o emprego de subs¬

tâncias higroscópicas ou antimofo. Em locais de elevada umidade relativa,

no entanto, um cuidado maior seria recomendável, como aquele dispensa¬

do para material fotográfico, por exemplo, sílica gel no frasco com hemipê-

nis.

As preparações com ágar ou gel de amido são de fácil montagem e não

apresentam os inconvenientes da parafina ou cera de abelha utilizadas por

Ortenburger 8 e Vellard 9 . Como esses materiais têm o ponto de fusão muito

elevado, solidificam-se rapidamente dentro da agulha ou em contato com o

tecido do hemipénis, dificultando a operação. Por outro lado, em caso de

se empregar agulha de grosso calibre, quando possível, a parafina ou cera

quente podem danificar as paredes delicadas do hemipénis, pela tempera¬

tura excessivamente elevada. Disto resultam hemipénis incompletamente

inflados, que podem levar a interpretações errôneas de sua morfologia

(Branch, 1 ). Assim, os trabalhos de Vellard 9 - 10 ilustram o hemipénis de uma

série de espécies, como por exemplo o de Spilotes pullatus, Constrictor

constrictor(s\c), Philodryas schotti (sic) e P. olfersii, parcialmente inflados,

que são bem diferentes dos órgãos adequadamente preparados.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MANZANI, P.R. & ABE, A.S. Sobre dois novos métodos de preparo do hemipênís de serpentes.

Mem, Inst.-Butantan, 50( 1): 15-20, 1988.

São descritas na literatura algumas preparações de hemipênis injetados

com álcool etílico (Klauber, 7 ) ou mesmo glicerina. Todavia, as paredes do

hemipênis não são completamente impermeáveis a essas substâncias e,

com o tempo, a preparação tende a murchar. Especialmente no caso da gli¬

cerina, que é solúvel em álcool a 70%, tende a se difundir para a solução

em pouco tempo. A temperatura do álcool dos frascos pode-se elevar

quando a coleção é mantida em recinto sem muito isolamento térmico.

Nessas condições, a glicerina tende a se difundir ainda com mais rapidez.

Todavia, o ágar e o gel de amido, além de terem o ponto de fusão mais ele¬

vado que a temperatura que normalmente atinge o álcool nas condições

descritas, não se difundem pela parede do hemipênis.

Fig. 2 — Preparação seca do hemipênis de Mastigodryas bifossatus (A) e Boa c. amarali

(B). Notar como as pregas e microornamentação do ápice se mantém inalteradas.

As preparações a seco não se deformam com o tempo e mantêm todas

as características morfológicas, como os espinhos, pregas e microorna¬

mentação do ápice (Fig. 2A e 2B). Essa preparação é apropriada para o

exame em estereomicroscópio ou talvez microscópio de varredura, sendo

assim possível examinar a microornamentação do ápice, sem o risco de

ressecamento e eventual deformação, como ocorre com as peças preser¬

vadas em álcool. O único inconveniente do hemipênis preservado a seco é

a deformação por compressão mecânica. No entanto, como peça delicada,

deve ser acondicionada e manuseada com cuidado, o mesmo que se dedi¬

ca a um crânio, por exemplo.

ABSTRACT: Two new methods for preparing snake hemipenis for liquid

and dry collection are described. For liquid preservation hemipenis are fil-

led with either agar or starch gell which are convenient due to low mel-

ting point and easy handling. The dry method keeps all structures of the

hemipenis unchanged and is a long lasting preparation.

KEYWORDS: Hemipenis, Snake, Preparing technique.

2 3 4

SciELO

10 11 12 13 14 15

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. BRANCH, W.R. Hemipenial morphology pf african snakes: A taxonomic review. Part 1.

Scolecophidia and Boidae. J. Herpetol., 20: 285-99, 1986.

2. COPE, E.D. Classification of snakes. Amer. Nat., 28: 831 -844, 1894.

3. COPE, E.D. The classification of the Ophidia. Trans. Amer. Phil. Soc., 28: 186-219, 1895.

4. DOWLING, H.G. The hemipenis ef Philodryas Günther: a correction (Serpentes, Colubri-

dae). Amer. Mus. Novitates(237b): 1-6, 1969.

5. DOWLING, H.G. Et SAVAGE, J.M. A guide te the snake hemipenis: a survey of basic

structure and systematics characteristics. Zoologica, 45: 17-28,1960.

6. JENNER, J.V. Et DOWLING, H.G. Taxonomy of American Xenodontine snake: the tribe

Pseudoboini. Herpetologica , 47:161-72, 1985.

7. KLAUBER, L.M. Rattlesnakes. Their habits, Hfe histories, and influence on mankind. 2

ed. Berkeley, Univ. Calif. Press, 1972. 1533 p.

8. ORTENBURGER, A.l. A method of preparing reptile penes. Copeia/. 71-3, 1923.

9. VELLARD, J. Importance des caractères fournis par 1'hemipenis pour la classification des

ophidiens. Buli. Soc. Zool. France, 53:406-18, 1928.

10. VELLARD, J. Morfologia dei hemipenis y evolución de los ofidios. ActaZool. Lilloana,

3: 263-88, 1946.

Recebido para publicação em 26/5/1987 e aceito em 17/11/1987.

2 3 4 5 6

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantan

50(11:21-27, 1988.

SORO ANTI-RÁBICO HETERÓLOGO DE USO HUMANO.

ANTICORPOS INESPECiFICOS*

Hisako Gondo HIGASHI**

Josefina Farina MORAIS**

Rosalvo GUIDOLIN**

José Roberto MARCELINO**

Valéria Maria Pinheiro Dl SALVIO**

RESUMO: O soro anti-rábico heterólogo de uso humano é constituído de

imunoglobulinas, que podem ser obtidas do plasma de eqüídeos hiperi-

munizados com suspensão de cerebros de coelhos infectados com o vi-

rus rábico fixo. As imunoglobulinas são purificadas e concentradas por

digestão péptica. Entre as provas efetuadas para a liberação do produto

encontra-se a de pirogenicidade, avaliada pela inoculação do soro por via

intravenosa em coelhos. Durante a execução desta prova tem-se verifica¬

do, em algumas partidas, a morte súbita de coelhos. Pela técnica de imu-

nodifusão dupla anticorpos antitecido nervoso, anti-soro e de antimate-

rial extraído de hemácias de coelhos, foram detectados no plasma e tam¬

bém no soro purificado e concentrado, levando os autores à conclusão

de que as mortes dos coelhos estariam ligadas à presença desses anticor¬

pos inespecíficos. Face aos resultados e para a validação dos testes de pi¬

rogenicidade, recomendam que a hiperimunização dos animais produto¬

res seja feita, preferencialmente, com vírus rábico desenvolvido em culti¬

vos celulares.

PALAVRAS-CHAVE: Soro anti-rábico; Anticorpos inespecíficos: Piroge-

nicídade.

INTRODUÇÃO

O soro anti-rábico heterólogo de uso humano é, geralmente, obtido a

partir do plasma de cavalos ou muares 3 ' 6 - 9 > 8 hiperimunizados com suspen¬

sões de vírus rábico, purificado e concentrado, segundo a técnica de diges¬

tão péptica 7 . A suspensão imunogênica, da maior parte dos produtores, é

constituída de triturado de cérebro de animais (coelhos, camundongos,

carneiros), infectados intracerebralmente com amostras de vírus fixo. O te-

"Trabalho apresentado no XIV Congresso Brasileiro de Microbíologia - Viçosa - MG - Brasil, 1987.

"Instituto Butantan — Seção de Concentração e Fracionamento de Soros — C.P.65 — CEP.: 01051 - São Paulo -

Brasil.

2 3

5 6

11 12 13 14 15

HIGASHI, H.G.; MORAIS, J.F.; GUIDOLIN, R.; MARCELINO, J.R ; Dl SALVIO, V.M P. Soro anti-

rábico heterólogo de uso humano. Anticorpos inespecificos Mem. Inst. Butantan, 50(11:21-27,

1988.

eido cerebral homogeneizado em presença de solução salina é inoculado

por via subcutânea, em doses crescentes, nos cavalos ou muares. Alguns

produtores de soro utilizam o cérebo de coelhos para a hiperimunização,

face ao rendimento de material, ótima adaptabilidade do vírus ao sistema

nervoso central desses animais e, ainda, pelas facilidades de manuseio dos

coelhos em laboratório.

Após o processamento este soro é submetido às diversas provas quími¬

cas e biológicas exigidas 4 , entre as quais encontra-se a detecção de pirogê-

nio. A pirogenicidade é avaliada pela leitura da elevação de temperatura

dos animais inoculados por via intravenosa com o soro anti-rábico.

Algumas partidas produzidas nessas condições têm causado mortes de

coelhos por "choque" imediatamente após a sua inoculação. Suspeitou-se

que essas mortes estivessem ligadas à presença de anticorpos inespecífi-

cos, tais como os de: antitecido nervoso, anti-soro e o de anti-material de

hemácias, todos eles induzidos pela inoculação de material de coelhos. As¬

sim, estudou-se a presença desses anticorpos no plasma e nos soros deri¬

vados de cavalos hiperimunizados com süspensões de tecido cerebral de

coelhos, infectados com o vírus rábico fixo. Como contraprova os mesmos

testes foram efetuados com plasma e soro derivados de eqüínos hiperimu¬

nizados com vírus fixo replicado em cultivo celular.

MATERIAL E MÉTODOS

1 — Plasmas hiperimunes

Foram obtidos de cavalos pela inoculação subcutânea de doses de dois

tipos diferentes de antígenos:

1.1 — com suspensão a 10% p/V em água bidistilada, de cérebros de

coelhos infectados com a amostra PV1 de vírus fixo.

1.2 — com suspensão de vírus fixo, amostra PV, replicado em cultivo

de células BHK 5 .

Os animais foram sangrados sete dias após a 3. a dose semanal de

antígenos e o sangue recebido em recipientes contendo solução esteriliza¬

da de citrato de sódio a 1,7% em relação ao sangue. Após 24 horas a 4-5°C

o plasma foi separado por sifonagem e adicionado de 0,3% de fenol (mistu¬

ra éter-fenol a 50%).

2 — Processamento dos plasmas

Foi utilizado o método de digestão enzimática 7 , diálise durante 48 horas

em água corrente a 7°C é; finalmente, o soro concentrado foi isotonizado

com cloreto de sódio p.a. e recebeu como conservante 0,3% de fenol.

3 — Doseamento dos plasmas e soros purificados

Os títulos foram obtidos pela técica soro-vírus neutralização 1 e expres¬

sos em Unidades Internacionais frente a um Soro Padrão fornecido pelo

CEPANZO, ARGENTINA.

4 — Detecção de anticorpos inespecíficos

Pela técnica de imunodifusão dupla em gel de ágar, sobre lâminas de

microscopia.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HIGASHI, H.G.; MORÂIS, J F.; GUIDOLIN, R.; MARCELINO, J.RDl SALVIO, V.M P. Soro anti-

rábico heterólogo de uso humano. Anticorpos inespecíficos. Mem. Inst. Butantan, 50(11:21-27,

1988.

4.1 — preparação das lâminas: lâminas de microscopia, lavadas com

solução sulfocrômica, recobertas com 1 ml de solução de Bacto

Ágar Difco a 1 % em água destilada. As lâminas eram mantidas

em estufa a 37°C até a secagem completa da primeira camada

de ágar. No momento do uso recebiam uma segunda camada

de 3ml de solução do mesmo ágar, dissolvido em solução salina

contendo 1/10.000 de timerosal. Após a solidificação do ágar,

com perfuradores de 3mm de diâmetro interno, foram feitos os

orifícios, dispostos quadrangularmente.

5 — Preparação dos antígenos reagentes de coelhos normais e sadios

5.1 — Tecido cerebral

O cérebro era triturado na proporção de 10% p/V em solução

salina. O material centrigufado até obtenção de sobrenadante

límpido era mantido a -20°C até o momento do uso.

5.2 — Hemácias

Obtidas por punção cardíaca com seringa e agulha lavadas com

solução de heparina (5000 Ul/ml) eram lavadas quatro vezes

com solução salina. A um ml da papa de hemácias eram adicio¬

nados três ml de água destilada para a lise dos eritrócitos. O ma¬

terial era centrifugado para a eliminação dos detritos celulares,

diluído a 1:50 em solução salina e armazenado a -20°C até o

momento do uso.

5.3 — Soro

Obtido de sangue extraído por punção cardíaca, após a coagu¬

lação e separação a 4-5°C.

5.4 — Tratamento dos soros com tecido cerebral de coelho normal.

O tecido cerebral foi triturado em gral até obtenção de pasta

uniforme. O soro anti-rábico concentrado foi tratado com 40%

p/V de tecido, a 37°C, durante 2 horas, com agitação a cada 15

min. e a mistura centrifugada a 4000 rpm para eliminação do te¬

cido em suspensão.

6 - Testes de imunodifusão dupla

Após a deposição dos antígenos nos orifícios centrais e dos anticorpos

nos externos, as lâminas eram colocadas em câmara umidecida, durante 48

horas.

7 — Coloração das lâminas

As lâminas eram lavadas por imersão em solução salina durante três

dias, envolvidas em papel de filtro umidecido com água destilada, e coloca-

SciELO

10 11 12 13 14 15

HIGASHI, H.G.; MORAIS, J.F.; GUIDOLIN, R.; MARCELINO, J.R.; Dl SALVIO, V.M P, Soro anti-

rábico heterólogo de uso humano. Anticorpos inespecííicos. Mem. Inst. Butantan, 50(11:21-27,

1988.

das em estufa a 60°C até a secagem do papel. Em seguida lavadas em água

corrente e o ágar dessecado a 60°C. A coloração era obtida com solução a

4% p/V de amido Schwarz em ácido acético, em seguida lavadas em água

corrente e secas à temperatura ambiente.

RESULTADOS

Na Tab. 1 estão agrupados os resultados obtidos nas reações de preci¬

pitação antígeno-anticorpo por imunodifusão dupla em gel de ágar, com

diferentes lotes de plasmas e soros concentrados, anti-rábicos e um con¬

trole negativo com soro antibotrópico concentrado.

A Tab. 2 demonstra o desaparecimento de anticorpos antitecido cere¬

bral em soros positivos, após adsorção com tecido nervoso de coelho nor¬

mal.

Imunodifusão dupla com diferentes lotes de plasmas e soros concentra¬

dos, frente a tecido cerebral, soro e material extraído de hemácias, de coe¬

lhos normais.

TABELA 1

Prod. Analisado

Testes de Imunodifusão dupla- n.° lotes/

positivos.

Tecido cerebral

coelho normal.

Soro normal

coelho normal

Material extraído

de hemácias

coelho normal

Plasma de cavalos

hiperimunizados

c/suspensão Vírus/

Tecido cerebral.

4/4

1/1

Plasma de cavalo

hiperimunizado

c/suspensão de Vírus/

Cultivo celular.

0/1

Soro concentrado de

cavalos

hipérimunizados

c/suspensão Vírus/

Tecido cerebral.

11/11

3/3

Soro concentrado de

cavalos

hiperimunizados

c/suspensão Vírus

Cultivo celular.

0/1

Soro concentrado

antibotrópico*

0/2

‘Controle negativo

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

HIGASHI, H.G.; MORAIS, J.F.; GUIDOLIN, R.; MARCELINO, J.R.; Dl SALVIO, V.M P. Soro anti-

rábíco heterólogo de uso humano. Anticorpos ínespecíficos. Mem. Inst. Butantan, 50(11:21-27,

1988.

Imunodífusão dupla. Absorção de anticorpos antitecido cerebral de so¬

ro positivo com 40% p/v de tecido cerebral de coelho normal.

TABELA 2

Plasma e Soros

anti-rábico

Tempo de

Incubação 37°C

Resultado

Soro anti-

rábico R. 1.86.06

150 minutos

Negativo

Soro anti-rábico

R. 7.84.103

150 minutos

Negativo

Soro anti-rábico

R. 2.85.20

120 minutos

Negativo

Soro anti-rábico

R. 6.1.85

120 minutos

Negativo

Soro anti-rábico

R. 86-09-90

120 minutos

Negativo

Soro anti-rábico

R. 1-86-06

Não tratado com

tecido cerebral.

Positivo

DISCUSSÃO

Pela análise da Tab. 1, segundo a metodologia aplicada, verifica-se que

houve indução à formação de anticorpos antitecido cerebral, soro e mate¬

rial extraído de hemácias de coelhos normais, quando os cavalos eram hi-

perimunizados com vírus rábico fixo replicado em cérebro de coelhos.

Através da reação de imunodifusão dupla verificou-se que o tratamento

dos soros positivos com uma suspensão de tecido cerebral de coelho nor¬

mal, como demonstra a Tab. 2, foi eficaz, através de reação antígeno-

anticorpo, na eliminação total dos anticorpos antitecido cerebral.

Nestas condições, os plasmas e os soros concentrados, anti-rábicos,

obtidos pela hiperimunização de animais com antígenos rábicos oriundos

de tecido cerebral de coelhos, não podem ser testados pela inoculação em

coelhos, como é o caso da prova para detecção de pirogênio, sem o risco

de incorrer em falsos resultados. Algumas inoculações intravenosas em

coelhos, de soros anti-rábicos purificados, por ocasião de prova de piroge-

nicidade exigida, determinaram a morte desses animais ao cabo de minu¬

tos. Acredita-se que o fenômeno com início e evolução tão rápidos carac¬

terístico de "choque”, tenha ocorrido segundo uma reação mediada por

anticorpos, principalmente por aqueles de anti-soro de coelhos que, de

acordo com as provas de imunodifusão, estavam presentes no soro. Rea¬

ções dessa natureza não foram observadas com o soro de animais hiperi-

munizados com antígenos rábicos derivados de cultivo celular, bem como

não ocorreram também, obviamente, com o soro antibotrópico usado co¬

mo padrão negativo.

], | SciELO

HIGASHI, H.G.; MORAIS, J.F.; GUIDOLIN, R.; MARCELINO, J.R.; Dl SALVIO, V.M P. Soro anli

rábico heterólogo de uso humano. Anticorpos inespecíficos. Mem. Inst. Butantan, 50(11:21-27,

1988.

CONCLUSÕES

1 — No plasma e no soro anti-rábico purificado e concentrado, de cava¬

los hiperimunizados com suspensão de tecido cerebral infectado com o

vírus rábico fixo ocorrem, além do anticorpo rábico específico, anticorpos

anti-tecido cerebral, anti-soro e anti-material extraído de hemácias de coe¬

lhos normais.

2 — A inoculação endovenosa desse soro em coelhos inviabiliza o teste

para detecção de substâncias pirogênicas porque pode levar o animal à

morte face a ocorrência de choque imediato, mediado pela presença de an¬

ticorpos anti proteínas de coelhos (tecido cerebral, soro sangüíneo, mate¬

riais contidos nas hemácias);

3 — Para evitar a ocorrência das reações indesejáveis mencionadas,

recomenda-se a utilização de antígenos rábicos mais puros como, por

exemplo, aqueles obtidos pela replicação do vírus em cultivos celulares

apropriados.*

ABSTRACT: The heterogeneous anti-rabies serum for humam use is

constituted of imunoglobulins that can be obtained from plasma of equi-

nes hyperimmunized with rabbit brain suspension fixed rabies virus infec-

ted. The immunoglobulins are purified and concentrated by pepsin diges-

tion. Among the tests for product releasing the pyrogenicity test is made

by intravenously serum inoculation in rabbits and some suddenly rabbits

dead was observed. By double immunodifusion technique, antibodies

against brain, serum and material extracted from erythrocytes, of normal

rabbits were founded in plasma and in concentrated serum. The authors

concluded that rabbit on death can be related to the inespecific antibo¬

dies present in the serum. Based on these results, in order to validate the

pyrogen test, the author advise that producer horses should be hyperim¬

munized with rabies virus developed in cell culture.

KEYWORDS: Anti-rabies serum; Inespecific antibodies; Pyrogenicity.

AGRADECIMENTOS

Agradecemos ao Sr. Silvio de Jesus pelo auxílio técnico prestado du¬

rante o desenvolvimento do trabalho e ao Sr. Ademir Pires pela manuten¬

ção dos animais utilizados.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. ATANASIU, P. Quantitative assay and potency test of anti-rabies serum and immuno-

globulin of animal: method used in USSR. In: KAPLAN, M.M. Et KOPROWSKI, G.

H.'ed. Laboratory Techniquesin Rabies. 3. ed. Geneva, WPIO, 1973. p. 314.

2. CROWLE, A.J. Immunodifusion. New York, Academic Press, 1961.

3. D'ANTONA, D. G. & FALCPIETTI, E. La production du serum antirabique chez cheval

In: CONGRESSO INTERNAZIONALE Dl MICROBIOLOGIA, 6., Roma, 1953. A ff/ Ro¬

ma, 1953. V.3. Sez. 8. p. 319 - 21.

4. FARMACOPEIA dos Estados Unidos do Brasil. 2. ed. São Paulo, Gráfica Siqueira, 1959.

5. GUIDOLIN, R.; BALTAZAR, M.G.G.; ZELANTE, F. Produção da vacina anti-rábica ve¬

terinária em suspensão de células BHK. Rev. Microbiol, 14(1):27-35, 1983.

6. LEPINE, P.G. & ATANASIU, P. Production of anti-rabies serum of animal origin. In: KA¬

PLAN, M.M. & KOPROWSKI, G. H. Laboratory Techniques in Rabies. 3 ed Gene¬

va, WHO, 1973. p. 299.

'0 soro anti-rábico heterólogo produzido pelo Instituto Butantan vem sendo preparado pela imunização de cavalos

com cultivos celulares infectados com virus rábico fixo.

SciELO

HIGASHI, H.G.; MORAIS, J.F.; GUIDOLIN, R.; MARCELINO, J.R.; Dl SALVIO, V.M P. Soro anti-

rábico heterólogo de uso humano. Anticorpos inespecíficos. Mem. Inst. Butantan, 50(11:21-27,

1988.

ORGANIZACION PANAMERICANA DE LA SALUD — Manual de procedimentos; pro-

duccion y pruebas de control en la preparacion de antisueros diftérico, tetânico, bo-

tulínico, antivenenos y de la gangrena gaseosa. Ed. rev. Washington, OPS, 1977. p.

104-41.

MIRCHAMSY, H. — Sur la preparation et la concentration du serum antirabique in Iran.

Arch. Inst. Razi. (15): 83-116, 1963.

SELIMOV, M. G.; GORDIENKO, E. Preparation of anti-rabies immunoglobulin of animal

origin. In: KAPLAN, M. M. & KOPROWSKI, G. H. Laboratory Techniques in Rabies.

3. ed. Geneva, WHO, 1973. p. 304.

Recebido para publicação em 19/10/1987 e aceito em 17/12/1987.

SciELO

10 11 12 13 14 15

Mem. Inst. Butantan

50(11:29-35, 1988.

INFLUÊNCIAS SAZONAL E DO PROCESSO DE EXTRAÇÃO SOBRE

A PRODUÇÃO, TOXICIDADE DO VENENO E SOBREVIDA DE

BOTHROPS JARARACA (WIED, 1824)

Elisabete Gomes Jardim VIEIRA

Raymundo ROLIM-ROSA

Hideyo IIZUKA

Maria de Fátima Domingues FURTADO

Wilson FERNANDES

RESUMO: Foram utilizadas, no presente trabalho, 240 serpentes da es¬

pécie Bothrops jararaca: 120 animais foram estudados durante o inverno

e 120, durante o verão. Estes grupos foram submetidos a diferentes trata¬

mentos: 60 serpentes tiveram seus venenos extraídos, numa seqüência

de quatro operações, pelo processo elétrico, e 60, em igual número de

extrações, pelo processo manual, no inverno. Outro grupo de 120 ofídios

foram submetidos ao mesmo procedimento, porém no verão.

Verificaram que as maiores porcentagens de mortes após quatro extra¬

ções foram registradas no inverno pelo processo elétrico (35,59%).

Quanto à produção de veneno, foi constatado que o maior rendimento

ocorre no verão pelo processo manual. A toxicidade foi aferida através da

determinação de DL50 em camundongos inoculados pela via intraperito-

neal.

PALAVRAS-CHAVE: Bothrops jararaca-veneno ; Toxicidade, produção.

Influências sazonais.

INTRODUÇÃO

No Brasil, o maior número de acidentes ofídicos ocorre durante os me¬

ses quentes do ano, isto é, de novembro a abril e, em menor número, de

maio a outubro, de acordo com Rosenfeld 14 .

De um total de 2.709 casos, devidamente identificados e atendidos pelo

Hospital Vital Brasil, do Instituto Butantan, durante o período compreendi¬

do entre os anos de 1966 e 1977, cerca de 90% dos envenenamentos foram

causados por ofídios do gênero Bothrops. Conforme constam nos registros

do referido hospital, 40% dos acidentes foram provocados por B. jararaca,

o que bem demonstra a relevância do estudo dessa espécie e de seu vene¬

no 4 .

Endereço para correspondência: CEP 01051 - Caixa Postal 65 - São Paulo — SP — Brasil.

1, | SciELO

VIEIRA, E.G.J.; ROLIM-ROSA, R , IIZUKA, H.; FURTADO, M.F.D.. FERNANDES, W Influências sa¬

zonal e do processo de extraçêo sobre a produção, toxicidade do veneno e sobrevidn de Bothrops

jararaca (Wied, 1824) Mem. Inst, Butantan, 5001:29 35, 1988,

Schenberg e cols 15 trabalhando com grupos de jararacas extraídas ma¬

nualmente em intervalos variáveis, encontraram variações de diversos

componentes do veneno após a primeira extração. Todavia, a atividade

coagulante em relação ao seu volume mantinha-se normal enquanto que a

atividade coagulante específica era aumentada em 100%.

Alguns autores já demonstraram a influência da sazonalidade sobre a

composição dos venenos ofídicos. Gubencek e cols 9 , analisando a peço¬

nha de Vipera ammondytes, a mais comum e perigosa serpente do sul eu¬

ropeu, verificaram evidente variação de seus componentes, durante os me¬

ses de verão e de inverno. Bertrand e col. 3 já haviam encontrado diferen¬

ças sazonais de toxicidade no veneno de vipera.

Embora o Instituto Butantan utilize um "pool" de veneno de várias es¬

pécies de serpentes do gênero Bothrops, para a produção industrial dos so¬

ros antibotrópico e antiofídico polivalente (fração botrópica) a sua titulação

é realizada, conforme preceitua a Farmacopéia Brasileira 5 , somente frente

ao veneno de Bothrops jararaca. A quantidade de exemplares de serpentes

B. jararaca mantidos na Seção de Venenos do Instituto Butantan é em tor¬

no de 40%, em relação ao total de serpentes peçonhentas.

Considerando todas essas observações foi que nos propusemos estu¬

dar a peçonha de jararaca quanto à sua produção, oscilação do seu grau de

toxicidade, bem como número de mortes de exemplares, correlacionando-

os com possíveis processos de extração e de influências sazonais.

MATERIAL E MÉTODOS

Serpentes utilizadas — Foram utilizados dois grupos de 120 exemplares de

Bothrops jararaca (Wied, 1824) recebidas pela Seção de Venenos do Insti¬

tuto Butantan, sendo um, durante o mês de dezembro — verão — e, ou¬

tro, durante o mês de junho — inverno. As serpentes foram confinadas em

gaiolas individuais, tendo sido controlada a produção do veneno obtido a

cada extração, e o número de mortes verificado durante o experimento. Os

répteis foram alimentados com camundongos em intervalos de 21 dias, e a

água era fornecida "ad libitum" em um recipiente de barro, que serve tanto

para o animal quanto para a manutenção da umidade do microclima. A

temperatura média do ambiente oscilava entre os valores de 18 a 22°C no

inverno, e de 23 a 25°C no verão.

Extrações de veneno — As extrações eram efetuadas regularmente a cada

período de 21 dias. Um lote de 60 jararacas recebidas no verão mais 60 re¬

cebidas no inverno, foram extraídas pelo processo manual; enquanto que

60 outras recebidas no verão, mais 60 recebidas no inverno, foram ex¬

traídas mediante desgarga elétrica de 4 Volts, aplicada sobre o pálato 2 .

O veneno foi colhido em cálice, centrifugado e imediatamente após,

submetido à dessecação a vácuo e conservado a 4°C logo após ter sido

convenientemente pesado em balança analítica.

Soluções de Veneno — O veneno seco, na concentração final dos 400 mi-

crogramos por mililitros, era dissolvido em solução fisiológica a 0,85% de

NaCI,PA. Estas soluções eram distribuídas em flaconetes, os quais, uma

vez hermeticamente fechados, eram conservados em congelador a -25°C,

conforme técnica adotada por Furlanetto 7 .

No momento da manipulação, ao proceder o preparo das doses neces¬

sárias para a determinação da DL50, cada frasco era descongelado, obser-

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

VIEIRA, E.G.J.; ROLIM-ROSA, R.; IIZUKA, H.; FURTADO, M.F.D ; FERNANDES, W. Influências sa¬

zonal e do processo de extração sobre a produção, toxicidade do veneno e sobrevida de Bothrops

jararaca (Wied, 18241. Mem. Inst. Butantan. 50(11:29-35, 1988.

vando a mesma técnica empregada por Rolim-Rosa, R. et al 13 e Bancher 1 .

Animais Utilizados — Todos os ensaios para a determinação da DL50, fo¬

ram realizados em camundongos de 18 a 22 gramas de peso, sem distinção

de sexo, fornecidos pelo Biotério Geral do Instituto Butantan. As inocula¬

ções eram feitas pela via intraperitoneal 16 .

Cálculo da DL50 — A DL50 de cada teste foi sempre calculada com os re¬

sultados verificados após 24 e 48 horas das inoculações, pelo método de

Reed & Muench 12 e ratificada pelo método prático preconizado por Miller

& Tainter 11 , em papel milimetrado em escala "log-probit”.

Método estatístico — Para a análise estatística das médias independentes,

foi aplicado o teste "t" ao nível crítico de 5% 17 .

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os resultados quantitativos e percentuais representados pela Tabela 1,

referentes a mortes de exemplares de B. jararaca extraídas pelos processos

manual e elétrico, no inverno e no verão, revelam que as operações efetua¬

das durante os meses frios causaram maior número de vítimas que nos me¬

ses quentes, principalmente quando elas são efetivadas mediante descarga

elétrica, aliás fato também comprovado em trabalho anterior 13 em relação a

Crotalus durissus terrificuse C.d. collineatus.

Nesta observação, não foi verificada apreciável diferença no número de

baixas de exemplares da espécie em estudo entre os processos aplicados

para a obtenção de peçonha, posto que foram registrados percentuais de

11,67 no elétrico e 13,33 no manual, no verão, e 35,59% e 28,33%, no in¬

verno, respectivamente, fenômenos ligados, evidentemente, ao metabolis¬

mo de animais pecilotermos.

A extração elétrica efetuada no inverno partiu de 59 exemplares ao in¬

vés de 60, uma vez que um morrera antes da primeira operação, como

consta na Tabela 1.

Conforme registra a Tabela 2, o processo de extração elétrico foi, em¬

bora com pequena diferença, mais produtivo que o manual durante o inver¬

no.

Constata-se, ainda pela Tabela 2, que as extrações realizadas por am¬

bos os processos, elétrico e manual, tendem a diminuir a produção média

por exemplar, de um modo geral, a partir da primeira operação, com exece-

ção da 4. a manual. Nota-se, também, que a primeira extração elétrica foi

aquela que apresentou o maior rendimento, 47,99 mg, a qual por apresen¬

tar a que seria a carga presumível de veneno das glândulas veneníferas de

serpentes ainda não alimentadas em cativeiro, seria o produto representati¬

vo da quantidade secretada e acumulada pelo ofídio na natureza, razão pe¬

la qual atribuímo-lhe o valor relativo igual a 100,00.

Kochva 10 , admite que a considerável quantidade de veneno encontrada

nas glândulas de serpentes extraídas no inverno se deva ao armazenamen¬

to do produto sintetizado durante o verão precedente, e que a crença po¬

pular de que uma serpente venenífera é menos perigosa no inverno, seria

possível, menos pela carga de veneno de suas glândulas, que a lentidão de

movimentos do animal, durante esse período do ano.

Corroborando ao que admite Kochva 10 , a primeira extração, quer pelo

procedimento de compressão manual das glândulas, quer através de des-

SciELO

10 11 12 13 14 15

VIEIRA, E.G.J.; ROLIM-ROSA, R.; IIZUKA, H.; FURTADO, M.F.D.; FERNANDES, W. Influências sa¬

zonal e do processo de extração sobre a produção, toxicidade do veneno e sobrevida de Bothrops

jararaca (Wied, 1824). Mem. Inst. Butantan, 50(11:29-35, 1988.

carga elétrica, apresentou a maior quantidade de veneno, isto é, 42,25 mg

e47,99 mg, respectivamente.

A Tabela 3 expressa resultados mediante os quais ressalta a maior pro¬

dutividade, em miligramas, do veneno B. jararaca extraído no verão, pelo

processo manual, considerado em termos médios/exemplar; ao contrário,

portanto, do que se verifica no inverno onde a maior produção de veneno

deu-se com a extração pelo processo elétrico, conforme o exposto pela Ta¬

bela 2.

Nesta oportunidade foi considerado valor relativo igual a 100,00, a pri¬

meira extração pelo processo manual, considerando, como o foi para a pri¬

meira extração elétrica efetuada no inverno, isto é, admitindo ser a carga

de veneno contida nas glândulas veneníferas secretada pela serpente em

condições naturais de vida livre.

E de se notar que o maior rendimento de produção de veneno ocorre

nas terceiras extrações, manual e elétrica, respectivamente 62,79 mg (valor

relativo igual a 152,22%) e 41,43 mg (valor relativo correspondente a

100,44%).

Se a diferença entre as médias gerais das extrações realizadas no inver¬

no e no verão pelo processo manual, foi de, aproximadamente, 20,0 mg,

precisamente 19,81 mg, o mesmo não se verificou quanto ao processo elé¬

trico que foi, praticamente, nulo, ou seja, de apenas 0,62 mg, demonstran¬

do que durante o inverno o processo de extração de veneno não apresen¬

tou diferença significativa para a produção, enquanto que no verão seria

mais recomendável utilizar-se do meio manual de extração de peçonha.

A Tabela 4 apresenta resultados, expressos em termos do DL 50, para

camundongos inoculados pela via intraperitoneal, demonstrando que a to¬

xicidade do veneno de B. jararaca não varia significativamente (p>0,05),

seja entre os métodos de extração empregados, seja entre as diferentes es¬

tações do ano. Rolim-Rosa e cols. 13 verificaram que as serpentes do gêne¬

ro Crotalus - Crotaius durissus terrificus e Crotalus durissus collilineatus

produzem peçonha mais tóxica quando obtida pelo processo manual.

TABELA 1

Mortes de Bothrops jararaca após extrações de veneno pelos processos

elétrico e manual, durante o inverno e o verão

Estação

Inverno

Verão

Extração\^

Ordem

Vivos

Mortos (1%)

Vivos

Mortos (%)

1. a

10(16,95)

0(0,00)

Elétrica

2 a

3( 5,08)

3(5,00)

3. a

0( 0,00)

2(3,33)

4, a

8(13,56)

2(3,33)

Total

(21(35,59)

7(11,67)

1. a

8(13,33)

1(1,67)

Manual

2. a

5( 8,33)

0(0,00)

3. a

3( 5,00)

2(3,33)

4, a

1( 1,67)

5(8,33)

Total

17(28,33)

8(13,33)

VIEIRA, E.G.J.; ROLIM-ROSA, R.; IIZUKA, H.; FURTADO, M.F.D.; FERNANDES, W. Influências sa¬

zonal e do processo de extração sobre a produção, toxicidade do veneno e sobrevida de Bothrops

jararaca (Wied, 1824). Mem. Inst. Butantan, 50(11:29-35, 1988.

TABELA 2

Produção média, por exemplar, em miligramas de veneno de Bothrops

jararaca, verificada durante o inverno, através de processo de extração elé¬

trico e manua 1

Extração

Ordem

Elétrica

Extração Manual

Quantidade

de veneno

(mg)

Produção

relativa*

Quantidade

de veneno

(mg)

Produção

relativa*

1 ,*

47,99

100,00

42,25

88,04

2. 3

33,55

69,91

31,14

64,89

3. 3

34,14

71,14

27,46

57,22

4. 3

34,52

71,93

40,61

84,62

Média **

37,55

35,37

rroauçao relativa 11 . extraçao eietric;

Diferença não significativa 'p > 0,05)

TABELA 3

Produção média, por exemplar, em miligramas de veneno de Bothrops

jararaca, verificada durante o verão, através de processo de extração elétri¬

co e manual

Extração

Ordem n.

Manual

Elétrica

Quantidade

de veneno

(mg)

Produção

relativa*

Quantidade

de veneno

(mg)

Produção

relativa*

1 ."

41,25

100,00

32,03

77,65

2. 3

55,78

135,22

35,75

86,67

3. a

62,79

152,22

41,43

100,44

4. 3

60,90

147,64

38,52

93,38

Média **

55,18

36,93

Produção relativa (1 . a extração manual = 100)

Diferença significativa (p < 0,05)

SciELO

10 11 12 13 14 15

VIEIRA, E.G.J.; ROLIM-ROSA, R.; IIZUKA, H,; FURTADO, M.F.D.; FERNANDES, W. Influências sa¬

zonal e do processo de extração sobre a produção, toxicidade do veneno e sobrevida de Bothrops

jararaca IWied, 1824). Mem. Inst. Butantan, 50111:29-35, 1988.

TABELA 4

Variação da atividade tóxica do veneno de Bothrops jararaca, em função

do processo de extração empregado no inverno e no verão, em termos de

DL50 para camundongos inoculados pela via peritoneal e observados em

24 e 48 horas após a inoculação

Estação

Inverno

Verão

Ordem

DL 50

em pg

DL 50 em pg

Extração

(24 h)

(48h)

(24h)

(48h)

1, a

61,31

51,60

Elétrica

2. 3

46,00

41,10

3. 3

47,42

46,49

44,58

43,37

4. 3

33,30

45,50

Média’

47,00

46,77

45,69

45,39

I. 3

46,00

49,50

44,50

Manual

2. 3

38,55

36,32

51,92

50,45

3. 3

49,75

47,87

36,42

4. 3

35,30

35,70

35,00

Média’

44,90

43,85

43,37

41,59

* Diferença não significativa (p > 0,05).

CONCLUSÕES

1. O maior número de mortes de exemplares de Bothrops jararaca, após

extrações de veneno realizadas pelos processos elétrico e manual, durante

o inverno e o verão, a intervalos de vinte e um dias, foi registrado no inver¬

no.

2. Tanto no inverno quanto no verão, o registro do maior contingente

de baixas verificou-se após a primeira extração, elétrica ou manual.

3. O maior rendimento médio de veneno de Bothrops jararaca, foi obti¬

do por extração manual efetuada no verão.

ABSTRACT: For the present study, 240 snakes of the species Bothrops

jararacavrete used: 120 in winter and 120 in summer. These groups were

submitted to different assays: In winter, the venom of 60 snakes was ob-

tained by electrical stimulation of the glands at four different times; other

60 snakes by manual extraction at the same intervals. Another group of

120 snakes was submited to the same process however in summer. It

was verified that the highest number of deaths after 4 extractions occur-

red in winter by electrical stimulation (35,59%). As to the venom produc-

tion, the highest amount of venom was obtained in summer by the ma¬

nual process.

KEYWORDS: Bothrops jararaca-venom. Toxicity, production. Influence

ofseason.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. BANCHER, W.; ROLIM-ROSA, R. Et FURLANETTO, R.S. Estudos sobre a fixação ele¬

tiva e quantitativa do veneno de Crotalus duríssus terrificus nos tecidos nervoso, re¬

nal, hepático e muscular de Mus musculus Linnaeus, 1758. Mem. Inst. Butantan,

37/139-148, 1973.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

VIEIRA, E.G.J.; ROLIM-ROSA, R.; IIZUKA, H ; FURTADO, M.F.D.; FERNANDES, W Influências sa¬

zonal e do processo de extração sobre a produção, toxicidade do veneno e sobrevida de Bothrops

jararaca (Wied, 1824), Mem. Inst. Butantan, 50(11:29-35, 1988,

2. BELLUOMINI, H.E. Extraction and quantities of venom obtained from some brazilien

snakes. In: BUCHERL, W & BUCKLEY, E., ed. Venomous animais and their venoms.

New York, Academic Press, 1968. p. 97-117.

3. BERTRAND, G. & VLADESCO, R. Sur la variation cyclique annuelle du toxicité du

sang de la vipèra. Ann. Inst. Pasteur, 68/51, 1942.

4. INSTITUTO BUTANTAN. Atualização em acidentes por animais peçonhentos. São

Paulo, 1984. 66p.

5. FARMACOPÉIA dos Estados Unidos do Brasil. 2. ed. São Paulo, Indústria Gráfica Si¬

queira, 1959. 1265 p.

6. FONSECA, F. Animais Peçonhentos. S. Paulo, Empresa Gráfica da "Revista dos Tribu¬

nais Ltda", 1949. 376p.

7. FURLANETTO, R.S. Emprego de camundongos tratados com doses preparatórias de

venenos botrópicos para avaliação de DL50 desses venenos. S. Paulo, 1965 (Tese -

Faculdade de Odontologia da USP).

8. FURLANETTO, R.S.; ROLIM-ROSA, R.; SILES VILLARROEL, M. & SIRACUSA, Y.Q.

Contribuição ao estudo da determinação da DL50 de venenos botrópicos inoculados

por via venosa em camundongos Mus musculus Linnaeus 1758. I. Fenômenos que

ocorrem na tentativa de determinação de DL50. Mem. Inst. Butantan, 37.99-107,

1973.

9. GUBENCEK, F.; SKET, D.; TURK, V. Et LEBEZ, D. Fractionation of Vipera ammodytes

venoní and seasonal variation of its composition. Toxicon, 72/167-171, 1974.

10. KOCPIVA, E. A quantitative study of venom secretion by Vipera palestinae. Amer. J.

trop. Med. Hyg., 9/381-390, 1960.

, 11 . MILLER, L.C. & TAINTER, M.L. Estimation of the ED50 and its error by means of loga-

rithmic probigraph paper. Proc. Soc. exp. Biol. Med., 57/261-264, 1964.

12 REED L J. & MüENCH, H. A simple method estimating fifty percent endpoints. Amer.

J. Hyg., 27131:493-497, 1938.

13. ROLIM-ROSA, R.; BELLUOMINI, H.E.; SILES VILLARROEL, M. & IIZUKA, H. Efeitos

sobre a toxicidade da mistura de venenos e a sobrevida de exemplares de Crotalus du-

rissus terrificus e Crotalus durissus col/ilineatus, submetidos às extrações elétrica e

manual. Mem. Inst. Butantan, 44/45. 245-251, 1980/81.

14. ROSENFELD, G. Acidentes por animais peçonhentos. In: VERONESI, R. ed. Doenças

Infecciosas e Parasitárias. 4.ed. Rio de Janeiro, Ed. Guanabara-Koogan, 1978.

15. SCHENBERG, S.; PEREIRA LIMA, F.A.; SCHIRIPA, L.N. Et NAGAMORI, A. Regene¬

ração não paralela dos componentes do veneno de serpentes em extrações sucessi¬

vas. In: REUNIÃO ANUAL DA SBPC, 22, Salvador, 1970. Resumos. São Paulo, Em¬

presa Gráfica Revista dos Tribunais S.A., 1970, p. 385.

16. SILES VILLARROEL, M.; ROLIM-ROSA, R.; ZELANTE, F. & FURLANETTO, R.S. Pa¬

dronização da titulação da atividade tóxica de venenos botrópicos em camundongos.

Mem. Inst. Butantan, 42/43. 311-323, 1978/79.

17. ZAR, J.H. Biostatisticalanalysis. London, Prentice-Flall Inc., 1974. 620 p.

Recebido para publicação em 04/6/1987 e aceito em 25/2/1988.

í, | SciELO

ARTE-FINAL, COMPOSIÇÃO,

FOTOLITOS E IMPRESSÃO

IMPRENSA OFICIAL

DO ESTADO SJUMESP

RuadaMooca, 1921 Fone 291 3344

Vendas, ramais: 257 e 325

Telex 011 34557 DOSP

Caixa Postal: 8231 Sào Paulo

C.G.C. (M F ) N u 48.066 047/0001-84

GOVERNO QUÉRCIA

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

INSTRUÇÕES AOS AUTORES

Somente serão aceitos trabalhos inéditos c que se destinem exclusivamente à revista. Ê proibida a reprodução

com fins lucrativos. Os artigos de revisão serão publicados a convite da Comissão Editorial.

Os trabalhos deverão ser redigidos cm português, inglês ou francês, datilografados preferencialmeme cm má¬

quina elétrica, em espaço duplo em 3 (três) vias, em papel formato ofício e numerados no ângulo superior direi¬

to.

No preparo do original será observada, sempre que possível, a seguinte estrutura: Página de rosto: título do ar¬

tigo, nome(s) do(s) autor(es) c filiação científica. Texto: introdução, material c métodos, resultados, discussão,

conclusões, agradecimentos (antes da referência bibliográfica). Material de referência: resumos (em português e

inglês); palavras-chave (palavras ou expressões que identificam o conteúdo do artigo; devem ser incluídas até

um limite máximo de três, cm português c inglês); Referências bibliográficas.

As referências bibliográficas deverão ser ordenadas alfabeticamente e numeradas.

Exemplos:

Para livros: autor, título, edição, local de publicação, editor, ano, páginas.

7. B1ER, O. Microbiologia c imunologia. 24.ed. São Paulo, Melhoramentos, 1985. 1234p.

Para artigos: autor, título do artigo, título do periódico, volume, página inicial c final, ano.

8. MACHADO, J.C. & SILVEIRA F.“, J.F. Obtenção experimental da pancreatite hemorrágica aguda no cão

por veneno escorpiônico. Mem. Inst. Butantan, 40/41: 1-9, 1976/77.

As citações no texto devem ser por números-índices correspondentes às respectivas referências bibliográficas.

Exemplos:

... método derivado de simplificação de armadilha de Disney 1

... segundo vários autores 2 * ' 1

As ilustrações (fotos, tabelas, gráficos etc.) deverão ser originais e acompanhadas de legendas explicativas. As le¬

gendas serão numeradas e reunidas em folha a parte. Os desenhos deverão ser a nanquim e as fotografias bem

nítidas, trazendo no verso o nome do autor c a indicação numérica da ordem a ser obedecida no texto. As ilus¬

trações deverão ser organizadas de modo a permitirem sua reprodução dentro de uma página normal da revista

(22 x 12.5cm).

Òs artigos deverão conter no máximo 6 (seis) ilustrações (branco e preto). De cada trabalho serão impressas 50

(cinquenta) separatas, sendo 10 para a Biblioteca do Instituto e 40 para os autores.

Òs textos originais não serão devolvidos e os originais das ilustrações estarão à disposição dos autores.

INSTRUCTIONS TO AUTHORS

2 .

6 .

Manuscripts submitted to the Editorial Board should be unpublishcd texts and should not bc under considcra-

tion for publication clsewhere. Reproduction for commercial purposes is not allowed. The Editorial Board will

plan the publication of revision articlcs.

The original and two copies of papers should be typewritten in Portuguese, English or French, double spaced,

on typing paper (31 x 2 lcm). Pages should be numbered consecutively at the típper right corner.

The following strueture should be considered in the preparation of the manuscript: Title page: with article ti-

tlc, name of author(s), professional address. Text: with introduction, material and methods, results, discus-

sion, conclusions, acknowledgments, references, summary (in Portuguese and English), and key-words. A ma-

ximal nurnbcr of 03 key-words should be included in Portuguese and English.

References in alphabetical order should be numbered consecutively.

Examples:

Books

7. BIER, O. Microbiologia c imunologia. 24.cd. São Paulo, Melhoramentos. 1985. 1234p.

Articles

8. MACHADO, J.C. & SILVEIRA F.°, J.F. Obtenção experimental da pancreatite hemorrágica aguda no cão

por veneno escorpiônico. Mem. Inst. Butantan, 40/41: 1-9, 1976/77.

Citations in the text should bc identified by the reference number.

Examples:

... método derivado de simplificação de armadilha de Disney 1

... segundo vários autores 2 5 ' 1

lllustrations (photographs, tables, figures etc.) should bc the originais and legends should be submitted typew¬

ritten on a separate sheet. Line-drawings should be with China ink and photographs must be of top quality. On

the back of each figure or photograph the name of the author(s) should bc lighly written and the number indi-

cating the sequence in the text. lllustrations should fit in a page measuring 22 x 12,5cm.

No more than 6 lllustrations will bc accepted and photographs should be black and white. Fifty reprints of each

article are provided without chargc, and 10 will be kept at the library.

Submitted manuscripts will not bc returned to the author(s) but the original illustrations are availablc to au-

thor(s) by request.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17