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1, | SciELO

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MEMÓRIAS

INSTITUTO BUTANTAN

Volume 53, número 1, 1991

São Paulo, SP — Brasil

1991

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

MEMÓRIAS do INSTITUTO BUTANTAN. (Secretaria de Estado da Saúde)

São Paulo, SP — Brasil, 1918 —

1990, 52 (1-3, supl.)

Em apenso, a partir de 1990, 52 (3): BOLETIM DE BIOTECNOLOGIA

1991, 53 (1,

ISSNÓ073-9901

MIBUAH CDD 614.07205

Solicita-se permuta/Exchange desired

SciELO

10 11 12 13 14

Mem. Inst. Butantan

53 (1), 1991

SUMARIO/CONTENTS

The influence of three different drying procedures on some enzymatic

activities of three Viperidae snake venoms.

A influência de três diferentes processos de secagem em algumas

atividades enzimáticas de três venenos da serpente Viperidae.

Jürg MEIER, Christoph ADLER, Paul HÒSSLE, Rosário Lo CASCIO 119

Padrões cromáticos, distribuição e possível mimetismo em

Erythrolamprus aesculapii (Serpentes, Colubridae)

Color patterns, distribution, and possible mimicry in Erythrolamprus

aesculapii (Serpentes, Colubridae)

Otávio A.V. MARQUES, Giuseppe PUORTO . 127

Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de São

Paulo (Amphibia, Anura)

Two small species of Hyla from the Atlantic Forest of the São Paulo

State (Amphibia, Anura)

José P. POMBAL JR., Marcelo GORDO . 135

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0 11 12 13 14 15 16

Mem. Inst. Butantán

53 (1): 119-126, 1991

THE INFLUENCE OF THREE DIFFERENT DRYING

PROCEDURES ON SOME

ENZYMATIC ACTIVITIES OF THREE VIPERIDAE

SNAKE VENOMS

Jürg MEIER

Christoph ADLER

Paul HÕSSLE

and Rosário LO CASCIO

ABSTRACT: Some enzymatic activities of lyophilized, sun-dried and

vacuumdried venoms of copperhead (Agkistrodon contortrix), saw-

scaled viper (Echis carinatus sochureki) and lancehead (Bothrops atrox)

snakes were determined and compared to the respective fresh venoms.

It has been shown that none of the drying procedures has a general

advantage over the others. It is concluded that the drying procedure

used may influence the enzymatic activities of snake venoms to a differ-

ent extent. It may be worthwhile to take the drying procedure into con-

sideration, if snake venoms are used as enzyme source, since it may

influence the yield of the enzyme to be purified.

KEYWORDS: Snake venoms; drying procedures; enzyme activities.

INTRODUCTION

It is known that dried snake venoms retain many of their biological activities

over long periods of time 6 ' 8 ' 9 ' 10 ' 12 . Although this has never been demonstrat-

ed it is often said that lyophilized venoms are more stable than desiccator-dried

venoms 11 . Low temperature Processing and drying, however, are more complex

scientifically and technologically than other drying procedures and the physico-

chemical changes which can take place during freeze-concentration and subse-

quent drying may be prominent 3 ' 4 . Thus, in this study the influence of lyophili-

zation, vacuum-desiccation and sun-dryng on some enzymatic activities from

venoms of the broad-banded copperhead (Agkistrodon contortrix iaticinctus), the

Pentapharm Ltd., CH-4002 Basel, Switzerland

Recebido para publicação ern 25.6.1990 e aceito em 17.10.1990

119

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0 11 12 13 14 15

MEIER, J.; ADLER, C.; HÕSSLE, P.; LO CASCIO, R. The influence of three different dryíng proce-

dures on some enzymatic activities of three Viperidae snake venoms. Mem. Inst. Butantan, 53( 1)

119-126, 1991.

saw-scaled viper <Echis carinatus sochureki) and the lancehead (Bothrops atrox)

were investigated. Lyophilization and vacuum-desiccation are widely used labora-

tory procedures, where as sun-drying is a method used under field conditions.

MATERIAL AND METHODS

Snake venoms and drying procedures

Manual VENOM EXTRACTIONS were performed with Agkistrodon contortrix

laticinctus, Echis carinatus sochureki and Bothrops atrox snakes. All animais were

kept ín our own snakefarm in Aesch, Switzerland. The venom pools obtained from

some ten specimens of each snake species were divided into four aliquots and

used in the experiments as fresh venom, lyophilized, vacuum-desiccated and sun-

dried respectively. VACUUM-DESICCATION was performed in a vacuum-

desiccator (Haereus, Zurich, Switzerland) during 4 hours under 10 1 Torr vacu-

um at a temperature of 40°C and the water being removed via the pump.

LYOPHILIZATION was performed in a lyophilizator (FC-600, LSL Secfroid,

Lausanne, Switzerland). Before venom application, the apparatus was cooled

down to -30°C. After deep freezing of the venoms to -45°C within 3 hours 20

minutes, the lyophilization processus with 10 -2 Torr was finished 66 hours later

with a final product temperature of + 30°C. As a sun-drying procedure venom

aliquots were dried for 5 hours outside under the sun on a sunny mid-July day

in Aesch near Basel, Switzerland.

Experimental procedures

The dry weights were determined by weighing venom aliquots before and af¬

ter the drying procedures on an analytical balance (Mettler, Greifensee, Switzer¬

land). The dry weight of the fresh venom samples was estimated by calculating

the mean of the dry weights obtained with the different drying procedures. The

possible error of — 5 % in this dry weight estimation was taken into considera-

tion for the evaluation of the results. SDS POLYACRYLAMIDE GEL-

ELECTROPHORESIS (SDS-PAGE) was carried out in a PhastSystem electropho-

resis unit (Pharmacia, Uppsala, Sweden). The venoms (Img venom per ml bi-

distilled water) were diluted 1 + 1 with sample buffer (10mM Tris/HCI, ImM

EDTA, 2.5% SDS, 0.01 bromphenolblue, pH 8.0). The sample volume applied

to the gels (PhastGel Gradient 8-25%, Pharmacia, Sweden) was 1 p\. The run-

ning conditions were 250 V, 10mA, 3.0W, 15°C and 65Vh at the beginning and

50V, 0.1 mA, 0.5V, 15°C and 0 Vh at the end of the experiment. L-AMINOACID

OXIDASE ACTIVITY was manometrically determined in a differential respiro-meter

(IG-14, Gilson, Middleton, USA) using 50 mM L-Phenyl-alanine (Sigma, St. Louis,

USA) in 1 /15 M Sorensen-phosphate buffer as the substrate. The vessels in which

the enzymic reaction took place were shaked over a 60 minutes time period at

37°C and the oxygen consumption recorded at 10 minutes intervals. Venoms

were used in a concentration of Img per ml bidistilled water. DETERMINATION

OF ENZYME ACTIVITIES USING CHROMOGENIC SUBSTRATES were performed

according to the method described by MEIER et al. 9 . For this purpose, 1,79ml

of Tris-imidazole buffer (pH 8.4, ionic strength 0.15) and O.OIml snake venom

Solutions were preincubated at 37°C in a disposable polystyrene cuvette. Then,

0.2ml of a 2 /xM substrate solution were added and the change in absorbance

at 405nm was photometrically recorded. The enzymatic release of p-nitroaniline

per 3 minutes was measured (A/3 min) and converted into enzyme milliunits (mU)

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MEIER, J.; ADLER, C.; HÒSSLE, P.; LO CASCIO, R, The influence of three different drying proce-

dures on some enzymatic activities of three Viperidae snake venoms. Mem. Inst. Butantan, 53(1)

119-126, 1991.

by multiplication of this value by 6'667 9 . One international enzyme unit (U) is

the amount of enzyme, which catalyses 1 ^mole of substrate per minute under

standardized conditions. Substrates with high specificity for thrombin (Chro-

mozym R TH;Na-Tosyl-Glycyl-L-Prolyl-L-Arginyne-p-nitroanilide-hydroacetate),

plasma kallikrein (chromozym PK;Na-Benzoyl-L-Prolyl-L-Phenylalanyl-L-Arginyne-

p-nitroanilide-hydroacetate), glandular kallikrein (Chromozym GK; 2Hydroacetate-

H-D-Valyl-L-Cyclohexylalanyl-L-Arginyne-p-nitroanilide), urokinase (Spectrozyme

UK; Na-Carbobenzoxy-L-Glutamyl (a-tertiary butoxy)-Glycyl-L-Arginyne-p-

nitroanilide-hydroacetate) and plasmin (2Hydroacetate-H-D-Valyl-Phenylalanyl-/.-

Lysyne-p-nitroanilide respectively were used. All substrates are manufactured by

Pentapharm Ltd. and distributed by Boehringer-Mannheim, FRG (Chromozym ser¬

ies) and American Diagnostica, USA (Spectrozyme substrate) respectively. The

standard deviation of the test method has been evaluated with — 8.5%. Thus,

differences of more than 10% were judged being significant.

RESULTS AND DISCUSSION

The drying residues obtained with the different procedures vary within a com-

paratively small range only (Fig. 1). The high dry residues found support the

hypothesis, that snake venoms are probably the highest concentrated secretory

fluids produced by vertebrate organisms 2 ' 13 . The SDS-PAGE also did not reveal

visible differences in molecular weight, indicating that no significant proteolytic

degradation took place during drying (results not shown). This is, however, not

surprising, since the electrophoretic pattern of all venoms investigated is very com-

plex and it has been recently shown that e.g. the venom of Agkistrodon contor-

trix consists of some 80 different protein components 1 . When compared to fresh

venom, every drying procedure led to a decrease in L-amino acid oxydase activi-

ty (figs. 2A, 3A, 4A). This confirms the labile character of this enzyme 5 . For two

reasons the results of the experiments performed using chromogenic substrates

have to be interpreted with some caution. Firstly, the different enzymes present

in the venoms may interact synergistically. Thus, in contrast to the determina-

tion of L-amino acid oxidase activity, the activity measured with the chromogen¬

ic substrate may rather reflect the contribution of different venom components

than the activity of on single enzyme. Consequently, the amidolytic activities meas¬

ured may be attributed to known as well as to so far unrecognized venom pro-

teinases. Secondly, it is not possible to correlate the amidolytic activities of venoms

with the susceptibility of the substrates to mammalian proteinases 7 . Plowever,

although great caution was taken in interpreting these results, some interesting

conclusions may be drawn. In the Agkistrodon contortrix venom, no significant

differences were observed with the different drying procedures (fig. 2, B-F). A

significant decrease in amidolytic activities was observed with sun-dried Bothrops

atrox venom on the substrates for thrombin (fig. 3B) and urokinase (fig. 3D)

respectively, whereas with this venom, no significant differences could be de-

tected between vacuum-drying and lyophilization. The most striking differences

were obtained with Echis carinatus sochureki venom (fig. 4). Obviously, there

must a so far unrecognized inhibitor(s) be present in this venom, which will be

destroyed during the drying procedures, thus leading to much higher enzymatic

activities when compared to the fresh venom (fig. 4B, D, E, F). Surprisingly, sun

— as well as vacuum-drying led to a significantly higher activity of the venom

to the substrate for glandular kallikrein, whereas the activity of the lyophilized ven¬

om was in the same range as the fresh venom.

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MEIER, J.; ADLER, C.; HÕSSLE, P.; LO CASCIO, R. The influence of three different drying proce-

dures on some enzymatic activities of three Viperidae snake venoms. Mem. Inst. Butantan, 53(1)

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CONCLUSIONS

The drying precedure used may influence the enzymatic activities of snake ven¬

oms to a different extent. Thus, it may be worthwhile to take the drying proce-

dure into consideration, if snake venoms are used as enzyme sources, since

different enzymes present in the venom may be influenced in a different way ac-

cording to the drying procedure used. Consequently, the drying procedure to which

the snake venom is submitted may influence the yield of the enzyme to be puhfied.

RESUMO: Algumas atividades enzimáticas de venenos liofilizados, se¬

cos ao sol e secos a vácuo das serpentes Agkistrodon contortrix, Echis

carinatus sochureki e Bothrops atrox foram determinadas e compara¬

das com os respectivos venenos frescos. Demonstrou-se que nenhum

dos processos de secagem tem vantagem sobre os outros. Conclui-se

que o processo de secagem usado pode influenciar as atividades en¬

zimáticas dos venenos das serpentes até uma diferente extensão.

Recomenda-se escolher o método mais adequado se os venenos de ser¬

pentes forem usados como fonte de enzimas.

UNITERMOS: Serpentes-venenos, processos de secagem, atividades

enzimáticas.

REFERENCES

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acting proteins in the coagulant active venom from Agkistrodon contortrix contor¬

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dures on some enzymatic activities of three Viperidae snake venoms. Mem. Inst. Butantan, 53(1)

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Activity of í.-amino acid oxydase

P»rc«ntag« (Fr**h v*nom • K>0 %)

Subatrate for plasma kaJlikrein

mU/mg V«nom

Subatrate for plaamin

mU/mg Vanom

Subatrate for thrombin

mU/mg

Subatrate for urokinaae

mU/mg V*nom

Subatrate for glandular kallikrein

mU/mg Venom

Fig. 2. Enzyme activities of Agkistrodon contortrix venom. With the exception of the L-

amino acid oxidase determination, where every drying procedure leads to a significant

activity decrease, all other differences are not significant with this venom.

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dures on some enzymatic activities of three Viperidae snake venoms. Mem. Inst. Butantan, 53(1)

119-126, 1991.

Activity of L -amino acid oxydase

Perc«ntag« (Fr*«h vnom • XX) %)

Substrate for thrombin

mU/mg V*rx>m

Substrate for plasma kallikrein

mU/mg Vsnom

Substrate for urokinase

mU/mg Venom

8ubstrate for plasmin

mU/mg Vsnom _

no enzymatic

•ctivities detectable

Substrate for glandular kallikrein

mU/mg Vefwm

w%wfá'/íí.

Fig. 3. Enzyme activities of Bothrops atrox venom. In comparison to fresh venom, sun-

drying leads to a significant activity decrease of L-amino acid oxidase (A) and on the throm¬

bin (B) and urokinase (D) substrates, respectively.

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dures on some enzymatic activities of three Viperidae snake venoms. Mem. Inst. Butantan, 53( 1 i

119-126, 1991.

Activity of í.-amino acid oxydase

P*rc«ntag« (FrMh y*nom • XX) %)

Substrato for thrombin

mU/mg V*nom

Subatrate for plasma kallikrein

mU/mg Vanom

Substrate for urokinase

mU/mg Vanom

Substrate for plasmin

mU/mg V*nom

Substrate for glandular kallikrein

mU/mg V«nom

Fig. 4. Enzyme activities of Echis carinatus venom. The significant increase in activity ob-

served with the thrombin (B), urokinase (D) and plasmin (E) substrates, respectively after

drying, suggests the presence of one or more very labile inhibitors. Vacuum-drying seems

to be the best drying procedure, in respect of enzyme activity as measured with the sub¬

strate for glandular kallikrein.

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PADRÕES CROMÁTICOS, DISTRIBUIÇÃO E POSSÍVEL

MIMETISMO EM ERYTHROLAMPRÚS AESCULAPII

(SERPENTES , COLUBRIDAE)

Otávio Augusto Vuolo MARQUES*

Giuseppe PUORTO**

RESUMO: São reconhecidos nas regiões sul, sudeste e centro-oeste do

Brasil diferentes padrões cromáticos da serpente-coral Erythrolamprus

aesculapii. Tais padrões foram aqui agrupados de acordo com a dispo¬

sição de anéis coloridos ao longo do corpo, sendo possível perceber

que diferentes grupos possuem distribuição geográfica distinta. Suge¬

rimos, neste trabalho, que a distribuição geográfica desses grupos es¬

teja relacionada à convergência mimética com as serpentes altamente

venenosas do gênero Micrurus.

UNITERMOS: Erythrolamprus aesculapii; Micrurus; serpente-

coral; distribuição geográfica; mimetismo.

INTRODUÇÃO

As tentativas para explicar a similaridade do padrão de colorido, em diferentes

espécies de serpentes corais, têm sido assunto controverso. Inicialmente, Wal-

lace (15> referiu-se a esse fenômeno como um mecanismo de defesa, de acordo

com a teoria mimética de Bates ,2) . Numerosas objeções à existência de mime¬

tismo nesses répteis têm sido formuladas por vários autores: alguns sugeriram

que o padrão de serpente-coral seria procríptico e não de advertência e a seme¬

lhança entre diferentes espécies seria o resultado de convergência evolutiva ,31 .

Outra objeção é que algumas espécies de corais seriam noturnas, dessa manei¬

ra, a sua cor de advertência não teria valor, não podendo servir como modelo

para outras espécies ,3 ' 8 ' 16) . Uma terceira objeção diz respeito à pretensa di¬

versidade de distribuição geográfica entre as diferentes espécies de corais (3 ’ 8) .

Greene e McDiarmid l7) sintetizam várias evidências sobre serpentes-corais e

contestam as objeções acima citadas. A coincidência de distribuição geográfica,

* Bolsista FEDIB — Instituto Butantan.

Pós-graduando do Depto. de Ecologia Geral — Instituto de Biociências — USP.

* * Seção de Herpetologia. Instituto Butantan. Recebido para publicação em 05.10.1990 e aceito em 22.1.1991

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MARQUES, 0. A. V. & PU0RT0, G. Padrões cromáticos, distribuição e possível mimetismo em

Erythrolamprus aesculapii (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:127-134, 1991.

com alguns exemplos mencionados por esses autores, parece ser um forte argu¬

mento a favor do mimetismo. Pough (10) faz uma revisão crítica de mimetismo

em corais e outros répteis, adicionando argumentos favoráveis ao mimetismo entre

serpentes. Além da semelhança do padrão de colorido, existem comportamen¬

tos característicos comuns a algumas espécies de corais, que incluem movimen¬

tos de cauda (4 ' 5 ' 6 ' 121 , indicando que o mimetismo não estaria restrito apenas

à coloração mas também a aspectos comportamentais.

0 objetivo do presente trabalho é analisar diversos padrões cromáticos em E.

aesculapii no sudeste do Brasil e tentar relacioná-los àqueles de espécies simpá-

tricas de Micrurus, adicionando argumentos à sugestão de um complexo mimé-

tico neste grupo de serpentes l10 ' 12 > 16) .

MATERIAL E MÉTODOS

Foram utilizados exemplares de E. aesculapii da coleção herpetológica do Ins¬

tituto Butantan (São Paulo — SP), do Museu de História Natural "Capão da lm-

buia" (Curitiba — PR) e da Fundação Ezequiel Dias de Belo Horizonte (MG), que

constituem uma amostra, principalmente das regiões sudeste e sul do Brasil. Não

foram aproveitados os espécimes cujo padrão de coloração estivesse muito alte¬

rado devido à conservação em álcool. Foram analisados 306 espécimes (jovens

e adultos de ambos os sexos) observando-se o padrão de disposição e confor¬

mação dos anéis. Foi analisada a folidose de cada exemplar, com objetivo de

verificar se indivíduos com diferentes padrões cromáticos constituem uma mes¬

ma espécie. Paralelamente, foi realizado um levantamento das espécies do gê¬

nero Micrurus das regiões sudeste, centro-oeste e sul do Brasil, sendo também

observado o padrão de disposição e conformação de anéis destas. Para isto foi

utilizado o material da coleção do IB e MHN "Capão da Imbuia".

Além disso, observamos — em animais cativos — alguns aspectos do com¬

portamento defensivo de E. aesculapii e de Micrurus spp.

RESULTADOS

GRUPOS CROMÁTICOS DO PADRÃO DORSAL

De acordo com a disposição e conformação dos anéis coloridos em E. aescu¬

lapii é possível o arranjo dos indivíduos examinados em dois grupos distintos:

GRUPO I — Seqüência de dois anéis pretos separados por um branco (DÍA-

DES), tendo cada um dos pretos contato com o vermelho (Figuras 1 a e 2). Den¬

tre o material examinado 184 espécimes pertencem a esse grupo, os quais foram

coletados predominantemente no interior do continente (154 indivíduos) e o res¬

tante (30 indivíduos) em regiões litorâneas (Figura 5).

GRUPO II — Difere do anterior por possuir estreitos anéis brancos adicionais

interpostos entre os pretos e os vermelhos; alguns espécimes apresentam fusão

parcial dos anéis pretos na região dorsal e outros possuem essos anéis inteira¬

mente fundidos (Figuras 1b, 1c, 1d). Dentre o material examinado 122 pertencem

a esse grupo e todos foram coletados em regiões próximas do litoral (Figura 5).

ASPECTOS COMPORTAMENTAIS

Quando perturbados com toques, ou aproximação brusca do observador, tanto

indivíduos do grupo I como do grupo II, de E. aesculapii, enrodilham-se e reali¬

zam movimentos com a cauda, espiralada (Figura 2). 0 achatamento do corpo

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MARQUES, 0. A, V. & PU0RT0, G. Padrões cromáticos, distribuição e possível mimetismo em

Erythrolamprus aesculapii (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:127-134, 1991.

também foi observado em alguns espécimes de ambos os grupos. ( M. frontalis,

M. lemniscatus e M. corallinus, ao serem perturbados, achatam o corpo,

enrodilham-se e exibem a cauda parcialmente espiralada (Figura 4) — este últi¬

mo comportamento foi menos evidente e raramente observado em M. corallinus.)

DISCUSSÃO

Diversos autores admitem que serpentes com veneno, possivelmente letal aos

seus predadores, não poderiam servir de modelo mimético, já que estes últimos,

morrendo no primeiro contato, não chegariam a adquirir aversão por experiência

desagradável 1161 . Dessa maneira, faria sentido admitir que tanto as espécies al¬

tamente venenosas quanto as inofensivas seriam mímicas de uma espécie me¬

dianamente venenosa* 161 . 0 gênero Erythrolamprus, geralmente opistóglifo 11 - n) ,

provavelmente pode infligir mordidas dolorosas em seus predadores, sendo tam¬

bém caracterizado como medianamente venenoso* 7 ' 9 ' 16) . Logo, essa espécie

de serpente poderia ser considerada modelo para as espécies de Micrurus alta¬

mente venenosas e outras espécies não venenosas, como Simophis rhinostoma,

hipótese proposta por Mertens e difundida por Wickler* 16 *. Todavia, Smith* 13 ' 141

mostra em seus experimentos, realizados com pássaros predadores potenciais

de répteis, que o padrão cromático das corais é evitado inatamente por esses

predadores. A partir desses experimentos pode ser considerada a possibilidade

de determinados predadores poderem distinguir, inatamente, as diferentes es¬

pécies de corais, através do padrão de diposição de anéis coloridos ao longo do

corpo. Desse modo, esses predadores poderiam também reconhecer aquelas que

são letais e que devem ser evitadas. A distinção desses padrões poderia ser tam¬

bém por aprendizado, no caso de predadores observarem a experiência fatal de

outros* 71 . Com base nessas considerações, seria plausível as Micrurus constituí¬

rem modelo para as Erythrolamprus. Além disso, Greene e McDiarmid* 71 forne¬

cem evidências de que o encontro entre Micrurus e seus predadores nem sempre

resulta fatal para estes últimos, o que reforçaria a hipótese de Micrurus como

modelo em certos complexos miméticos.

Essa hipótese, em que Micrurus serviria como modelo, estaria mais coerente

com a distribuição geográfica observada no presente trabalho. De fato, o ma¬

peamento (Figuras 5 e 6) demonstra que no interior do continente só ocorrem

indivíduos de Erythrolamprus do grupo I — anéis escuros em díades (Figuras 1 a

e 2) — simpátricos com espécies de Micrurus com anéis em tríades (M. frontalis

e M. lemniscatus — Figura 4) e anéis únicos (M. corallinus — Figura 3). Nenhu¬

ma dessas espécies de Micrurus parece copiar o padrão de Erythrolamprus —

que têm anéis em díades. De acordo com certos autores (7), poder-se-ia admitir

que as Erythrolamprus do grupo I (Figuras la e 2) seriam um padrão intermediá¬

rio entre tríade e anel único. Ou, ainda, que devido à ausência dos anéis brancos

estreitos entre os pretos e vermelhos, esses indivíduos do grupo I assemelhar-

-se-iam às Micrurus que possuem o padrão de anéis em tríades. Serpentes com

este último padrão (M. frontalis e M. lemniscatus — Figura 4) parecem ocorrer

no interior com mais freqüência que as de anel único (M. corallinus — Figura

3), pois 88% das espécies de Micrurus, recebidas do interior do Estado de São

Paulo, pelo Instituto Butantan durante o período de 1984 a 1988, possuem tríades.

Em regiões próximas do litoral, E. aesculapii do grupo II (Figuras 1b, 1c, 1 d)

são simpátricas com M. corallinus (Figura 3) que é a espécie de Micrurus mais

abundante nessas regiões (além de M. decoratus, espécie aparentemente rara

e com distribuição mais restrita). Os indivíduos do grupo II (Figuras 1b, Ice 1 d)

apresentam sempre anéis brancos estreitos, interpostos entre os pretos e ver-

SciELO

MARQUES, 0. A. V. & PU0RT0, G. Padrões cromáticos, distribuição e possível mimetismo em

Erythrolamprus aesculapii (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:127-134, 1991.

melhos, alguns com tendência à fusão dos anéis pretos.(Figuras 1c e 1 d), imi¬

tando portanto o padrão de M. corallinus (Figura 3). Considerando válida a hipó¬

tese de que certos predadores reconheceriam os diferentes padrões de disposição

de anéis, seria pertinente supor, ainda, que houvesse pressão seletiva favorável

aos mímicos mais parecidos ao presumível modelo — M. corallinus. 0 mesmo

poderia ser válido em relação aos indivíduos do grupo I, que imitariam outras es¬

pécies de Mlcrurus (com tríades), o que poderia explicar o baixo número de indi¬

víduos de Erythrolamprus desse grupo oriundos da região litorânea, entre o

material examinado.

Complementando dados de outros autores 14 ' b ' 6 . 12 >, observamos que alguns

espécimes de E. aesculapii (independentemente dos padrões cromáticos) reali¬

zam movimentos com a cauda, bem como o achatamento do corpo. Esses com¬

portamentos também são observados em M. corallinus (observação pessoal). 0

movimento de cauda em Erythrolamprus assemelha-se àquele realizado por M.

frontal /s' 4 . 12) , que exibe a cauda parcialmente espiralada, comportamento inter¬

pretado como um modo de despistar o predador (Figuras 2 e 4). Portanto, além

da semelhança entre o padrão de coloração de E. aesculapii e diversas espécies

de Micrurus no Sudeste brasileiro, certos padrões comportamentais também pa¬

recem estar envolvidos no mimetismo dessas corais' 121 .

CONCLUSÃO

Os dados obtidos e analisados neste trabalho sugerem que E. aesculapii, da

Região Sudeste brasileira, mimetiza certas espécies de Micrurus, sendo essa se¬

melhança mais acentuada na região oriental (Mata Atlântica), onde esse colubrí-

deo se assemelha a M. corallinus.

AGRADECIMENTOS

Agradecemos a Ivan Sazima pelo incentivo, sugestões e também pela leitura

crítica do manuscrito. A Euclydes Marques pelas sugestões e críticas durante a

elaboração do mesmo. A Miguel T. Rodrigues por algumas sugestões. A Marília

Becker Angeli e Marília Seelaender pela versão em inglês. A Paulo E. Vanzolini

pelas sugestões bibliográficas. Aos companheiros do M.H.N. Capão da Imbuia,

por permitirem o exame do material deste museu, bem como o apoio e ajuda

durante nossa estada no Estado do Paraná. Somos gratos também a todos aque¬

les colegas da Seção de Flerpetologia do I.B. que direta ou indiretamente nos

ajudaram durante a execução deste trabalho.

ABSTRACT : Various color patterns of the false coral snake, Erythrolam¬

prus aesculapii have been described in the Southern, Southeastern

and Central Western regions of Brazil. Such patterns are here grouped

accordingly to the disposition of the colored rings along the body, which

permits to establish a cleary defined geographic distribution for each

group. We sugnest that the geographic distribution of color pattern

groups is related to mimicry of Erythrolamprus to some species of the

highly venomous snake Micrurus.

KEYWORDS: Erythrolamprus aesculapii; Micrurus; coral snake; geogra¬

phic distribution; mimicry.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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MARQUES, 0. A. V. & PU0RT0, G. Padrões cromáticos, distribuição e possível mimetismo em

Erythroiamprus aesculapii (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:127-134, 1991.

FIG. 1

FIG. 2

FIG. 3

FIG. 4

Fig. 1. Padrões cromáticos de E. aesculapii : a — GRUPO l/b,c,d — GRUPO II.

Fig. 2. E. aesculapii (Valinhos — SP), com padrão cromático do grupo I, realizando movi¬

mento com a cauda espiralada; note o corpo achatado dorso-ventralmente (Foto I. Sazima)

Fig. 3. M. corallinus (Florianópolis — SC), mostrando o padrão de anel preto único e a

cauda espiralada.

Fig. 4. M. frontalis (Votorantim — SP) realizando movimento com a cauda e mostrando

o padrão de anéis pretos em tríades; note cabeça parcialmente abrigada.

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MARQUES, 0. A. V. & PU0RT0, G, Padrões cromáticos, distribuição e possível mimetismo em

Erythrolamprus aesculapii (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:127-134, 1991.

55°

45°

Fig. 5. Distribuição dos padrões cromáticos de E. aesculapii, no sul, sudeste e centro-

-oeste brasileiros.

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2 3

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MARQUES, 0. A. V. & PU0RT0, G. Padrões cromáticos, distribuição e possível mimetismo em

Erythroíamprus aesculapii (Serpentes, Colubridae). Mem. Inst. Butantan, 53 (1): 127-134, 1991.

M. frontalis e

M. lemniscatus

ANEL ÚNICO — M. corallinus

(baixa freqüência)

ANEL ÚNICO — M. corallinus

(alta freqüência)

Fig. 6. Distribuição dos padrões cromáticos de Micrurus no sul, sudeste e centro-oeste

brasileiros.

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Mem. Inst. Butantan

53 (11:135-144, 1991

DUAS NOVAS ESPECIES DE HYLA DA FLORESTA

ATLÂNTICA NO ESTADO

DE SÃO PAULO (AMPHIBIA, ANURA)

José P. POMBAL JR.

Marcelo GORDO

RESUMO: São descritas duas novas espécies de Hyla, da Estação Eco¬

lógica da Juréia-ltatins, Mata Atlântica do Estado de São Paulo. Hyla

llttoralis, sp. n. e Hyla jureia, sp. n., são membros dos grupos cathari-

nae e rizibilis, respectiva mente.

UNITERMOS: Hyla llttoralis, sp. n.; Hyla jureia, sp. n.; Sudeste do Brasil.

INTRODUÇÃO

Durante o levantamento das espécies de anfíbios anuros na Estação Ecológi¬

ca da Juréia-ltatins, litoral sul do Estado de São Paulo, tivemos a oportunidade

de observar e coletar indivíduos de duas espécies, do complexo cathannae ("sen-

su" Lutz 11 ) e do grupo rizibilis ("sensu” Andrade e Cardoso 2 ), que julgamos no¬

vas e passamos a descrever.

PROCEDIMENTO

As abreviaturas das coleções aqui citadas são: MNRJ (Museu Nacional, Rio

de Janeiro), WCAB (Coleção Werner C.A. Bokermann, São Paulo) e ZUEC (Mu¬

seu de História Natural da Universidade Estadual de Campinas).

Os exemplares adultos das novas espécies foram coletados manualmente, du¬

rante à noite e à luz de lanternas, dentro de mata. As desovas foram obtidas a

partir da captura de casais em amplexo, mantidos em sacos plásticos com água

e vegetação. O girino descrito foi mantido em aquário a partir da desova. As me¬

didas, em milímetros, dos adultos e girino, foram tomadas com paquímetro e

dos ovos com ocular micrométrica.

Departamento de Zoologia. IB. Universidade Estadual de Campinas. 13081 — Campinas-SP. Brasil

Recebido para publicação em 11.12.90 e aceito em 22.1.91.

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SciELO

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POMBAL JR, J. P. & GORDO, M. Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de

São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

Descrição:

Hyla littoralis, sp. n.

Diagnose — Espécie de Hyla de pequeno porte (cr cr26,7 a 29,6; ÇÇ 38,3

a 39,9); pertencente ao complexo catharinae: saco vocal subgular; duas linhas

brancas abaixo de cada olho; coxas barradas de preto sobre fundo branco.

Holótipo — ZUEC 8892, macho adulto proveniente do vale do Rio Verde, Es¬

tação Ecológica da Juréia-ltatins, Município de Iguape, Estado de São Paulo, Brasil

(aprox. 24° 30'S, 47° 15'W), coletado entre 3 e 7. ix. 1988 por José P. Pom¬

bal Jr. e Marcelo Gordo.

Parátipos — Todos os parátipos coletados juntamente com o holótipo, a sa¬

ber: MNRJ 14199, 14200, 14201, uma fêmea e dois machos, respectivamen¬

te; WCAB 49658-49660, uma fêmea e dois machos, respectivamente; ZUEC

8876, 8893, 8894, 8882-8891, 8880 onze machos e três fêmeas, respecti¬

vamente.

Descrição do holótipo — Porte esbelto (figura 1); comprimento da cabeça

(10,9) pouco maior que 1 13 do comprimento total (28,9) largura da cabeça pou¬

co menor que seu comprimento. Focinho em vista dorsal e lateral ligeiramente

protuberante (figuras 3a e 3b); narinas salientes, localizadas na extremidade do

focinho. Canto rostral evidente e ligeiramente côncavo. Olhos grandes, salien¬

tes; espaço interocular (2,4) menos de 1/4 da largura da cabeça (10,9). Tímpa¬

no ligeiramente ovalado. Saco vocal subgular pouco desenvolvido. Dentes

vomerinos em duas séries separadas entre as coanas, que são elípticas. Língua

oval livre nos bordos laterais e posterior, ligeiramente entalhada na porção pos¬

terior. Mãos com membrana interdigital reduzida (figura 3c); disco adesivo do

primeiro dedo menor que os demais, os quais são pouco menores que o tímpa¬

no; um calo subarticular em cada dedo, sendo o do quarto dedo o maior. Calos

metacarpais desenvolvidos, o mais externo dividido. O comprimento conjunto

do fêmur e tíbia, pouco maior que o comprimento total. Discos adesivos dos ar¬

telhos (Figura 3d) de tamanho semelhante ao dos dedos; os discos do quarto

e quinto artelhos são maiores que os restantes. Membrana interdigital pouco de¬

senvolvida entre o primeiro e segundo artelho; nos demais atinge cerca de 2/3

do comprimento dos artelhos. Calos subarticulares e metatarsais desenvolvidos.

Pele do ventre granulosa; dorso e flancos cobertos por tubérculos.

Medidas do holótipo — Comprimento total 28,9; comprimento da cabeça

10,9; largura da cabeça 9,0; diâmetro do olho 3,6; espaço interocular 2,4; dis¬

tância olho-narina 3,0; diâmetro do tímpano 1,5; comprimento da coxa 15,0;

comprimento da tíbia 16,5; comprimento do pé 12,8.

Coloração em vida — Coloração dorsal com desenho (Figura 1 ) castanho es¬

curo sobre fundo castanho claro, faixa interocular marrom escura, que pode ser

interrompida; abaixo dos olhos duas linhas brancas; iris acobreada com vermi-

culado preto; partes ocultas das coxas barradas de preto em fundo branco ou

levemente esverdeado; ventre creme salpicado de marrom escuro. Os animais

quando estão vocalizando podem apresentar tonalidades amareladas. Similarmen¬

te a algumas espécies do grupo rubra, mudanças para tonalidades amareladas

durante a vocalização (Fladdad e Sasima 9 ), talvez sejam frequentes em Hyla do

grupo catharinae e rizibilis uma vez que, além desta espécie, já observamos esta

tonalidade em Hyla rizibilis Bokermann e em Hyla hiemalis Haddad e Pombal.

Variação — A série-tipo apresenta variação nas dimensões, no número e for¬

ma das calosidades das mãos e dos pés e na forma do desenho dorsal. Ocorre

dimorfismo sexual no tamanho, sendo as fêmeas muito maiores que os machos.

Biologia — Hyla littoralis, sp. n., foi observada vocalizando de setembro a abril,

sendo a época de maior atividade de vocalizações entre dezembro e janeiro.

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POMBAL JR, J. P. & GORDO, M. Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de

São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 111:135-144, 1991.

Reproduz-se no interior de mata, em poças permanentes de água parada com

fundo lodoso e grande quantidade de matéria orgânica, ou riachos semi-

permanentes de fundo arenoso, com pouca correnteza e presença de poças pe¬

quenas ao longo do leito, onde há acúmulo de matéria orgânica. Nas noites de

maior atividade de vocalização, machos vocalizando foram encontrados em ria¬

chos da água corrente e também em poças permanentes na região de restinga.

Como sítios de vocalização são utilizados pequenos ramos ou folhas entre 60

e 1 70 cm acima do solo, podendo estar sobre a água ou afastado até cerca de

dois metros de distância. Hyla llttoralis, sp. n., começa a vocalizar antes do oca¬

so a, aproximadamente, 6 metros de distância da água. À medida que a noite

se aproxima, os indivíduos se deslocam para as proximidades da água. Fêmeas

ovadas foram vistas aproximando-se dos machos por volta das 21:00h..0 am¬

plexo é axilar. As desovas formam massas gelatinosas próximas à superfície da

água, presas a ramos e folhas submersas. Durante o dia foram encontrados al¬

guns indivíduos em repouso entre o folhedo no chão da mata, próximos aos sí¬

tios de vocalização. Não observamos Hyla littoralis, sp. n., acima de 200m de

altitude.

Desova — Em setembro de 1989 obtivemos, em laboratório, duas desovas

de dois casais de Hyla llttoralis, sp. n.. Uma das desovas continha 398 ovos e

outra 701. Os ovos mediam entre 1,1 e 1,5 mm de diâmetro e eram pretos.

Girino — Um girino no estágio 37 da tabela de Gosner 7 , com 19,6 mm de

comprimento total, possui o corpo (12,3) oval em vista dorsal (Fig. 4a) e leve¬

mente comprimido dorsoventralmente (Fig. 4b); narinas situadas superiormen¬

te, entre os olhos e o focinho; olhos dorso laterais, seu diâmetro menos da metade

do espaço interocular (3,3); espiráculo do lado esquerdo, abaixo da linha media¬

na e na parte posterior do corpo; tubo externo reduzido; altura máxima da cauda

pouco maior que a altura máxima do corpo; nadadeira caudal superior mais lar¬

ga que a inferior; cauda lanceolada terminando em ponta arredondada; boca (Fig.

4c) ântero-ventral, com papilas labiais à sua volta, exceto na porção anterior do

lábio superior; lábio superior com duas fileiras de dentículos córneos, sendo a

interna interrompida na região mediana; lábio inferior com três fileiras contínuas

de dentículos córneos.

Etimologia — 0 epíteto específico littoralis faz referência ao fato da série-tipo

ter sido coletada em região litorânea.

Comparações com outras espécies — Hyla angrensis B. Lutz parece similar

a Hyla littoralis, sp. n., a julgar pela descrição original (B. Lutz 10 ). Conhecemos

dois síntipos (MNRJ 2018 e MNRJ 2512), provenientes do município de Angra

dos Reis, litoral Sul do Estado do Rio de Janeiro. Todavia, não sabemos o sexo

destes exemplares ou, mesmo, se são adultos, o que prejudica uma compara¬

ção com nova espécie. Desta forma, preferimos descrever como nova esta po¬

pulação do litoral Sul do Estado de São Paulo, até que exemplares adicionais,

provenientes de Angra dos Reis, possam esclarecer o status de Hyla angrensis

B. Lutz e Hyla littoralis, sp. n..

Hyla littoralis, sp. n., é prontamente separada de Hyla humilis B. Lutz e Hyla

carnevallii Carasmachi e Kisteumacher pelo maior tamanho (principalmente das

fêmeas). Difere de Hyla trapicheiroi B. Lutz pelo maior desenvolvimento dos dis¬

cos adesivos e pelo formato da mancha interocular. De Hyla albicans Bokermann

difere pelo padrão de coloração mais escuro e pelo canto rostral menos cônca¬

vo. Pode também ser separada prontamente de Hyla flavoquttata A Lutz e B. Lutz

e Hyla heyeri Weygoldt pela ausência de coloração alaranjada nas partes ocultas

das coxas. A comparação com Hyla catharinae Boulenger é prejudicada, uma

vez que.o nome da localidade tipo ("Sierra do Catharina”) não está associado

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POMBAL JR, J. P. & GORDO, M. Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de

São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

a nenhum nome atual de localidade, de maneira que é difícil aplicar o nome ca-

tharinae a qualquer população conhecida. Somente a comparação dos tipos de

Boulenger com material proveniente de localidades do Estado de Santa Catarina

poderá esclarecer o problema.

Hyla jureia, sp. n.

Diagnose — Espécie de Hyla de pequeno porte; machos e fêmeas de tama¬

nho semelhante (crcr 29,0 a 30,0; 9 9 32,3 e 33,6); pertencente ao grupo

rizibilis (saco vocal lateralizado); comprimento da coxa e da tíbia juntos maior

que o comprimento total; mancha interocular com ápice voltado para trás.

Holótipo — ZUEC 8875, macho adulto proveniente do alto do maciço da Es¬

tação Ecológica da Juréia-ltatins (aprox. 24° 30'S, 47° 15'W; 300m alt.), mu¬

nicípio de Iguape, Estado de São Paulo, coletado entre 3 e 7. ix. 1989 por Marcelo

Gordo.

Parátipos — MNRJ 14202, 14203 (dois machos); ZUEC 8863, 8864, 8865,

8868, 8869, 8870, 8872 (uma fêmea e seis machos, respectivamente) coleta¬

dos no mesmo local e pelo mesmo coletor que o holótipo em 20 de fevereiro

de 1990; ZUEC 8896 (fêmea) e WCAB 49662-49663 (uma fêmea e um macho,

respectivamente) coletados no mesmo local que o holótipo em 6 de novembro

de 1988 por C. Strüssmann; WCAB 49661, macho coletado na mesma ocasião

que o holótipo.

Descrição do holótipo — Porte esbelto; comprimento da cabeça (10,4) mais

que 1/3 do comprimento total (29,3); cabeça pouco mais comprida (10,4) que

larga (9,5). Focinho em vista dorsal e lateral levemente acuminado (Figura 5a

e 5b); narinas salientes e próximas à extremidade do focinho. Canto rostral evi¬

dente; região loreal côncova. Olhos salientes; espaço interocular (2,7) pouco me¬

nor que o diâmetro do olho (3,3). Tímpano ovalado, seu maior diâmetro mais

que a metade do espaço interocular. Prega supratimpânica evidente. Saco vocal

lateralizado, subgular e pouco desenvolvido. Dentes vomerinos em duas séries

separadas entre as coanas; coanas elípticas. Língua livre nos bordos laterais e

posterior, levemente entalhada na porção posterior. Mãos com membranas in¬

terdigitais vestigiais (Figura 5c); disco adesivo do 1 0 dedo menor que os demais,

o disco adesivo do 3 o dedo é aproximadamente do mesmo tamanho que o tím¬

pano. Um calo subarticular em cada dedo, sendo o do quarto dedo o maior. Ca¬

los metacarpais pouco desenvolvidos. O comprimento conjunto da coxa (20,3)

e da tíbia (16,1) maior que o comprimento total. Discos adesivos dos artelhos

menores que os dos dedos; membrana interdigital entre o 1 0 e 2° artelhos pou¬

co desenvolvida (Figura 5d), entre os demais é bem desenvolvida; calos subarti-

culares desenvolvidos, o do 1 °, 2 o e 3 o artelhos de tamanho semelhante; calo

metatarsal pouco desenvolvido. Pele do ventre granulosa. Pequenos tubérculos

na cabeça (Figuras 5a e 5b).

Medidas do holótipo — Comprimento total 29,3; comprimento da cabeça

10,4; largura da cabeça 9,5; diâmetro do olho 3,3; espaço interocular 2,7; dis¬

tância olho-narina 3,3; diâmetro do tímpano 1,6; comprimento da coxa 20,3;

comprimento da tíbia 16,1; comprimento do pé 13,0.

Coloração do holótipo — Em álcool, a coloração dorsal é castanho-escuro

com desenhos enegrecidos, pouco nítidos; região inguinal esbranquiçada com

desenhos pretos; coxas com três barras pretas; ventre esbranquiçado salpicado

de marrom-escuro.

Variação — A série-tipo apresenta variação nas dimensões e no número e for¬

ma das calosidades das mãos e pés. As fêmeas são pouco maiores que os

machos.

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POMBAL JR, J. P. & GORDO, M, Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de

São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

Biologia — Encontramos Hyla jureia, sp. n., em atividade reprodutiva, em um

riacho de água corrente com fundo pedregoso no interior de mata de galeria em

campo de altitude, a aproximadamente 300m de altitude. Em visitas mensais,

esta espécie foi observada em três ocasiões: 6.11.1988, 11.11.1989 e

20.2.1990. Vocalizam entre 10 e 50 cm de altura em pequenos ramos e folhas

sobre o riacho. Aparentemente, preferem ramos que tenham uma das extremi¬

dades dentro da água. Observamos interações físicas, entre machos (figura 2),

em disputas territoriais por sítios de canto. Os machos começam a vocalizar de¬

pois do ocaso; fêmeas ovadas foram vistas por volta das 21:00h.. As desovas

são depositadas próximas à superfície, formando massas aderidas aos ramos par¬

cialmente submersos.

Desova — Obtivemos uma desova, em laboratório, entre 16 e 20.2.1990.

Continha 120 ovos de coloração enegrecida, que mediam entre 1,3 e 1,4mm

de diâmetro.

Etimologia — O epíteto específico jureia é um nome em aposição, do Tupi

(juré + eia), que significa “maré alta que lava as pedras", sendo ao mesmo tempo

parte do nome do local de coleta, Estação Ecológica da Juréia-ltatins.

Comparações com outras espécies — Hyla jureia, sp. n., difere de H. ob-

triangulata B. Lutz pelo menor tamanho das fêmeas; de H. rizibilis Bokermann,

H. brieni De Witte e H. luizotavioi Caramaschi e Kisteumacher pelo maior tama¬

nho dos machos e pela cabeça mais larga; difere de Hyla ranki Andrade e Cardo¬

so pela mancha interocular mais desenvolvida, além do maior tamanho; de H.

hiemalis Haddad e Pombal-Jr., pelas pernas maiores, mancha interocular maior

e prega inguinal menos desenvolvida.

Comentários — Mantivemos uma atitude conservadora e não incluímos Hyla

littoralis, sp. n. e Hyla jureia, sp. n., no gênero Ololygon Fitz., como proposto

por Fouquette e Delahoussaye 6 para as espécies dos grupos rubra, catharinae,

rizibilis, perpusillae rostrata, com base em morfologia de espermatozóides. A mor¬

fologia de espermatozóides representa um critério questionável para a sistemáti¬

ca, dado o seu alto grau de variabilidade individual 1 e a probabilidade de

agrupamento artificial das espécies 8 . Além disso, a utilização do nome genérico

Ololygon apresenta problemas de ordem nomenclatural, uma vez que, pela aná¬

lise da lista de sinonímia do gênero Hyla apresentada por Duellman 5 , o gênero

Scinax Wagler, 1830 teria prioridade sobre Ololygon Fitzinger, 1843. A espécie-

-tipo de Scinax é Hyla aurata Wied, a qual, segundo Bokermann 4 , pertence ao

grupo rubra\ a espécie-tipo de Ololygon é Hyla strigilata Spix. Vale ressaltar que

H. strigilata é um nome que atualmente não pode ser atribuído a nenhuma popu¬

lação conhecida 3 , não sendo, portanto, possível reconhecer a espécie-tipo do

gênero Ololygon.

AGRADECIMENTOS

Werner C. A. Bokermann, Adão J. Cardoso, Célio F. B. Fladdad e Ivan Sazima

pela leitura e sugestões ao manuscrito. Werner C. A. Bokermann e Ulisses Cara¬

maschi pelo empréstimo de material. Erich A. Fischer, Wagner A. Fischer, Fran¬

cisco A. M. Gimenez, Célio F. B. Fladdad, L. Patrícia C. Morellato, Éllen C. P.

Pombal pela ajuda no trabalho de campo. Christine Strüssmann pela ajuda no

campo e no laboratório. Jaime Somera pelas ilustrações dos adultos e Adalberto

Geraldini pelo desenho do girino. À SEMA« ao IBAMA pelo apoio logístico e pela

autorização para trabalhar na Estação Ecológia da Juréia-ltatins; à CAPES pelo

auxílio PICD a J. P. Pombal-Jr. (PG em Zoologia, UNESP — “Campus de Rio

Claro") e CNPq pela bolsa a M. Gordo.

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POMBAL JR, J. P. & GORDO, M. Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de

São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

ABSTRACT: Two small species of Hyla, from the Atlantic Forest at the

Southern portion of the State of São Paulo, Southeastern Brazil, are

described as new. Hyla littoralis, sp. n., and Hyla jureia, sp. n., are al-

lied to the catharlnae and rízlbills groups, respectively.

KEYWORDS: Hyla littoralis, sp. n.; Hyla jureia, sp. n.

Brazil.

Southeastern

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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de Hyla fuscovaria (Amphibia, Anura) e seu significado taxonômico. Rev. bras. Biol.,

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São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

Fig. 1. Macho adulto de Hyla llttoralis, sp. n., em vida.

Fig. 2. Machos adultos de Hyla jureia, sp. n., em disputa territorial durante atividade re¬

produtiva.

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São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

i—---

5 mm

Fig. 3. Holótipo de Hyla llttoralis, sp. n. Cabeça em vista dorsal (a) e lateral (b); mão (c)

e pé (d) em vista ventral.

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POMBAL JR, J. P. & GORDO, M. Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de

São Paulo (Amphibia, Anura), Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

Fig. 4. Girino de Hyla llttorahs, sp. n. (19,6 mm de comprimento-total). Vista dorsal (a)

e lateral (b); detalhe da boca (c).

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POMBAL JR, J. P. & GORDO, M. Duas novas espécies de Hyla da Floresta Atlântica no Estado de

São Paulo (Amphibia, Anura). Mem. Inst. Butantan, 53 (11:135-144, 1991.

Fig. 5. Holótipo de Hyla jureia, sp. n.. Cabeça em vista dorsal (a) e lateral (b); mão (c)

e pé (d) em vista ventral.

144

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Para livros: autor, título, edição, local de publicação, editor, ano, páginas.

7. B1ER, O. Microbiologia e imunologia. 24.ed. São Paulo, Melhoramentos, 1983. 1234p.

Para artigos: autor, título do artigo, título do periódico, volume, página inicial c final, ano.

8. MACHADO, J.C. & SILVEIRA F.°, J.F. Obtenção experimental da pancreatite hemorrágica aguda no tão

por veneno escorpiônico. Mem. Inst. Ilutantan, 40/41: 1-9, 1976/77.

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Exemplos:

... método derivado de simplificação de armadilha de Disney 1

,.. segundo vários autores 2 - 3,4

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gendas serão numeradas e reunidas em folha à parte. Os desenhos deverão ser a nanquim e as fotografias bem

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Books

7. BIER, O. Microbiologia e imunologia. 24.ed. São Paulo, Melhoramentos, 1985. 1234p.

Articles

8. MACHADO, J.C. & SILVEIRA F.°, J.F. Obtenção experimental da pancreatite hemorrágica aguda no cão

por veneno escorpiônico. Mem. Inst. Butantan, 40/41: 1-9, 1976/77.

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