ÍNDICE

Pa*.

Noticiário I

J. LEMOS MONTEIRO — Estudos sobre o typho exanthcmatico dc

São Paulo 3

J. LEMOS MONTEIRO, F. i. v FONSECA e ALCIDES PRADO — Pes-

quisas cpidcmiologicas sobre o typho exanthematico de S. Paulo 137

AFRANIO do AMARAL — Estudos sobre ophidios ncotropicos.

— XXVIII. Commentarios a proposito de alguns boideos . . 173

(Studies of neotropical ophidia. XXVIII. Retnarks on some

boid snakes) 183

ALCIDES PRADO — Contribuições ao conhecimento dos culicidcos

de São Paulo.

— I. Notas sobre Mansonia alhifera PRADO e sobre o macho

dc M. albicosta (CHAGAS) . . . . 1 1)1

— II. Notas sobre as cspccics encontradas nos arredores da ca-

pital c sobre a determinação dc Acdes crlnlfer (THEOB.) . 199

— III. Notas sobre Psorophora ( Janthino-oma) discrucians

(WALKER) c dcscripção do exemplar macho 205

— IV. L'ma nova cspecie dc Uranotaenia . 209

J. II. ARANTES e F. da FONSECA — Pesquisas sobre trypanosomas.

— I. Trypanosoma butantar.ense, sp. n., parasita da serpente

Ophl» merremii WAGLER. 1821 213

— II. Trypanosoma manguinhensc. sp. n„ parasita do bugio

Alauatta caraya (IIt’MBOLDT, 1809) 223

— III. Trypanosoma merremii, sp. n„ parasita da serpente

Ophia merremii WAGLER. 182-1 227

t. R. ARANTES — Estudos parasitologicos.

— I. Do comportamento «Io Trypanosoma cruii no Silenns rhesus 231

— II. Ilaemogrrgarina hot-ntsnensis. sp. n., parasita da bolpe-

va. Ophis merremii WAGLER. 1821 237

AFRANIO o. > AMARAL — Pontos de vista Imsicns na lhorapcutica

do ophidismo 211

AFRANIO i>o AMARAL — O soro secco coroo cicntrizantc das ulce-

ras produzidas pelo veneno bothropico 251

J. I.F.MOS MONTEIRO c F. da FONSECA — Modernas tcchnicas

de preparo da antitoxina tctanica 2C7

DIONYSIO vos KLOBUSfTZKY — Estados sobre a unidade dar

fracçôcs albuminosas do soro 275

DIONYSIO vos KLOBCSITZKY — Cro elect ro-nltra filtro modificado 293

PREÇO DO TOMO VI — IOSOOO

2 3 4 5 6 7 SCÍELO i:l 12 13 14 15 16 17 lí

MEMÓRIAS

INSTITUTO BUTANTAN

1931

TOMO VI

São Paulo, Brasil

Caixa Postal, 65

ÍNDICE

Pag.

Noticiário I

J. LEMOS MONTEIRO — Estudos sobre o typho exanthcmatico de

São Paulo 3

J. LEMOS MONTEIRO. F. d* FONSECA e ALCIDES PRADO — Pes-

quisas epidemioiogicas sobre o typho exanthcmatico de S. Paulo 137

AFRANIO do AMARAL — Estudos sobre ophidios neotropicos.

— XXVIII. Commentarios a proposito de alguns boideos . 173

(Studics of neotropical ophidia. XXVIII. Remarks on some

boid snakes) 183

ALCIDES PRADO — Contribuições ao conhecimento dos culicideos

de São Paulo.

— I. Notas sobre Mansonia albifrra PRADO e sobre o macho

de M. alhieosta (CHAGAS) 191

— II. Notas sobre as especics encontradas nos arredores da ca-

pital c sobre a determinação de Aêdes erinifer (THEOB.) . 199

— III. Notas sobre Psorophora (Janthinoaoma) diserueians

(WALKER) e dcscripção do exemplar macho 205

— IV. Uma nos-a especie de Uranotaenta 209

J. H. AHANTKS c F. da FONSECA — Pesquisas sobre trypanosomas.

— I. Trypanosoma butantanenae, sp. n, parasita da serpente

Ophis merremii WAGLER. 1824 213

— II. Trypanosoma manguinhense. sp. n., parasita do bugio

Alauatta caraya (HUMBOLDT, 1809) 223

— III. Trypanosoma merremii. sp. n., parasita da serpente

Ophis merremii WAGLER. 1824 227

J. B. ARANTES — Estudos parasitologicov

— I. Do comportamento do Trypanosoma cruii no Silrnus rheaus 231

— II. tlaemogregarina bntantanenaie, sp. n., parasita da boipe-

va. Ophis merremii WAGLER. 1824 . 237

AFRANIO ■><> AMARAL Pontos de vista hasicns na thcrapcutica

do ophidismo 241

AFRANIO do AMARAL — O soro secco como cicatrizante das ulce-

ras produzidas pelo veneno botbropicn 251

J. LEMOS MONTEIRO c F. da FONSECA — Modcruas technicas

de preparo da antitoxina tetanica 267

DIONYSIO voa KLOBUSITZKV — Estudos sobre a unidade das

fraeções albuminosas do soro 275

DIONYSIO vns KLOBUSITZKY — Um clectro-ultrafiitro modificado 295

PREÇO DO TOMO VI — 10JM»

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

NOTICIÁRIO

Xo período decorrido entre a publicação do tomo V destas Memórias e o

presente tomo \ I foi decretada officialmente a reorganização geral, technica e

administrativa, do Instituto Butantan, iniciada em março de 1928 por sua

actual superintendência, de accordo com o programma que, naquclla occasião,

tòra por ella apresentado ã apreciação do governo do Estado. Por essa reor-

ganização, o Instituto Butantan foi definitivamente desannexado da Directoria

Geral do Serviço Sanitario do Estado e transformado em um estabelecimento

de medicina experimental, dedicado especialmente a trabalhos de patkologia

humana, com os seguintes objectivos:

1 — realizar toda sorte de trabalhos scientifiros sobre animaes venenosos;

2 — estudar questões referentes á pathologia humana ou a ella applicaveis,

investigando cspecialmente os phenomenos de immunidade e outros que sur-

girem no decurso dos trabalhos, de accordo cora a tradição do estabelecimento;

3 — preparar produetos biologiocs necessários á defesa sanitaria c sub-

stancias empregadas em therapeutica humana;

4 — realizar investigações sobre plantas medicinaes brasileiras, tratando

de insular seus princípios ac ti vos applicaveis cm medicina humana, aproveitan-

do as installações do antigo Horto “Oswaldo Cruz”;

5 — fiscalizar o commercio de produetos biologicos, aferindo aquelles

que tiverem applicação na therapeutica ou na prophylaxia de enfermidades hu-

manas;

6 — realizar excursões scientificas ao interior para o estudo de moléstias,

dentro das finalidades do Instituto;

7 — installar e manter postos anti-ophidicos ou filines onde fór julgado

conveniente, afira de estender ás zonas ruraes o beneficio de sua influencia;

8 — organizar e manter cursos práticos de especialização e de divulgação

scicntifica, dentro de suas finalidades;

9 — divulgar amplamente, por meio de publicações, os resultados de seus

estudos;

10 — estabelecer contacto c permuta com outros centros scientificos, para

manter-se cm dia com os progressos de medicina experimental;

11 — cobrar as taxas fixadas pelo regulamento de fiscalização de produ-

etos biologicos;

12 — acceitar doações, mediante previa auctorizaçõo do Governo.

Para consecução desses objectivos, as actividadcs do Instituto ficaram afíe-

ctas a duas ordens de serviços: a) administrativos, comprehendcndo a Directoria

e as secções de Administração, Animaes immunizados. Culturas c Obras; b) te-

chnicos, sob a superintendência do director e distribuídos pelas secções se-

guintes:

1 — Ophiologia e Zoologia Medica.

2 — Immunologia Experimental c Sorotherapia, com as sub-sccçóes de So-

rotherapia: anti-venenosa, anti-toxica e anti-bacteriana.

3 — Bacteriologia Experimental e Bacteriotherapia.

1 — Virus e Virustherapia.

5 — Physico-chimica Experimental.

6 — Protozoologia e Parasitologia.

7 — Botanica Medica.

8 — Chimica e Pharmacologia Experimentaes.

9 — Physio-pathologia Experimental, com as sub-secções: Physiologia.

Endocrinologia e Histologia Pathologica.

10 — Cytologia, Embryologia e Genetica Experimental.

Dessas secções as seis primeiras foram logo providas com tecbnicos e or-

ganizadas, começando a trabalhar independentemente, embora articuladas em

suas finalidades por intermédio da superintendência. As restantes, entre as quaes

a de Cytologia, Embryologia e Genetica Experimental — de cuja installação para

pesquisas autonomas o Instituto Butantan foi o primeiro estabelecimento scien-

tifico do Brasil a cogitar — o decreto determinou que seriam organizadas á me-

dida da necessidade dos serviços e de accordo com os recursos financeiros do

Estado.

Afim de permittir o mais rápido desenvolvimento das actividades do Ins-

tituto em beneficio da collectividade, no que diz respeito ao estudo de enfermi-

dades humanas, á defesa biologica da população e outras finalidades suas de

igual importância, ficou estabelecido em lei que o excesso de producção de

soros, bacterinas, vaccinas e outras substancias que vier a preparar, o Instituto

Butantan o entregaria á senda, revertendo o resultado, conjunctamente com a

renda de analyses e de outras actividades suas, em proveito do estabelecimento.

Por isso, o Instituto começou a tratar de desenvolver sua producção industrial

e agricola e outros recursos, capazes de lhe permittir alcançar logo o equilíbrio

financeiro. Um dos pontos capitaes dessa reforma foi a annexação, pela pri-

meira vez ensaiada em nosso meio, dos trabalhos de pesquisa aos de produc-

çáo, a cargo de technicos differentes mas que collaboram entre si, complctan-

do-se mutuamente, em uma mesma secção, com a necessária amplitude de acção

e articulados com os serviços de contabilidade, o que permitte á administração

manter o necessário control da situação financeira do Instituto.

Presentemente, o pessoal superior encarregado de serviços tecbnicos do

Instituto Butantan é o seguinte:

Dircctor superintendente — Afranio do Amaral, B. Sc. & L., D. M., D. Hyg.

(Med. Trop., Harvard), Editor das “Memórias do Instituto Butantan”.

Assistentes chefes: José B. Arantcs, dipl. Phcia., D. M.

J. Lemos Monteiro, B. Sc. & L., D. M.

S. Camargo Calazans, D. M.

Dionysio von Klobusitzky, D. M.

Assistentes: Raul B. Godinho, D. M.

Joaquim Travassos, B. Sc. & L., D. M.

Cicero Neiva, B. Sc. & L-, Med. Vct..

Alcides Prado, B. Sc. & L-, D. M.

Flavio da Fonseca, D. M.

Toda correspondência scientifica, relativa ás “Memórias”, deve ser diri-

gida ao

EDITOR, MEMÓRIAS DO INSTITUTO BUTANTAN

Caixa postal 65

SAO PAULO, BRASIL

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

ESTUDOS

SOBRE O TYPHO EXANTHEMATICO DE SÃO PAULO

POR

J. LEMOS MONTEIRO

(com 54 grafhicos, 6 estampas com 9 photograph.ias. send <, 1 colorida,

17 desenhos coloridos e 2 micropholografhias )

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

SUM MARIO

Cip.

Cap.

Gap.

Cap.

Cvp.

1.* Parte

Comportamento experimental e propriedades do virus

I - Introducção.

1. - Grupo das febres “ typbo-exanthrmaticas" na America:

a) no continente septentrional ;

b) no continente meridional.

2. - Relações sorologicas entre as differentes formas do typlio.

3. -0 typho exanthematico de São Paulo e seu aspecto cpidemíologico.

II - Comportamento experimental do virus em relação aos pequenos

animaes de laboratorio.

1. - Resultados experimentacs :

A) Marcha da infecção na cobaia:

a) alterações anatômicas;

b) reacção inflammatoria escrotal;

c) immunidade.

B) Comportamento do virus cm relação a outros animaes dc laboratorio:

a) coelho;

b) rato branco ;

c) camondongo branco:

d) rato cinzento;

e) gato.

2. - Discussão

3 - Conclusões.

III - Comportamento experimental do virus cm certos simios ( ilacacus .

Cebus c Alauatla).

1. - Resultados experimentacs.

2. - Resumo e conclusões.

IV - Infecção experimental por inoculação do virus na cantara anterior

do olho.

1. - Resultados experimentaes.

2 - Discussão e resumo.

3. - Conclusões.

V - Algumas propriedades do virus.

1- - Filtrabilidade.

2. - Passagem através da conjunctiva ocular intacta e D.M.I. (dose míni-

ma infectante) do virus.

3. - Resistência do virus sob varias condições:

a) resistência ao deseccamcnto ;

G Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

b) resistência á acção da glycerina pura e diluída a 50 % ;

c) resistenda do virus em congelação.

4. - Discussão e resumo.

5. - Conclusões.

Cap. VI - Febres exanthematicas. Estudos comparativos, em relação á cobaia,

de amostras do vinis do typho clássico do velho mundo, typho

endemico da America do Xorte e typho exanthematico de S. Paulo.

Resumo e conclusões da 1.* parte-

2.* Parte

A “Rickettsia brasiliensis” e suas relações com a infecção

Cap. VII - Introducção: Rickcttsioses e seu conceito pluralista. A rickettsia

do typho exanthematico de São Paulo.

Cap. VIII - Presença de rickettsias nas cellulas da membrana de Descemet em

animaes inoculados com o virus na camara anterior do olho.

a) technica empregada.

b) irequencia e morphologia das rickettsias nas cellulas da membrana de

Descemet.

Cap. IX - Presença de rickettsias nas cellulas mesothcliaes da parede peri-

toneal de cobaias inoculadas com o virus na cavidade.

a) technica empregada;

b) morphologia e disposição das rickettsias nas cellulas da parede peritoneal;

c) frequência das rickettsias nas cellulas mesotheliaes da parede peritoneal.

Ckp. X - Relação das ricketlsias do typho exanthematico de São Paulo com

a infecção experimental.

a) infcctuosidade da Rickettsia brasiliensis Monteiro;

b) poder antigcnico ou vaccinante das rickettsias em relação á infecção

experimental.

c) poder virucida do soro anti-rickettsico ;

d) verificação da Rickettsia brasiliensis cm carrapato {Amblyomma cajen-

nense) infectado.

Resumo e conclusões da 2.* parte.

Ribliographia.

1, | SciELO

614.526:614.47

ESTUDOS

SOBRE O TYPHO EXANTHEMATICO DE SÃO PAULO

POR

J. LEMOS MONTEIRO

1.* PARTE

Comportamento experimental e propriedades do virus

Capitulo I

Introducção

O premente trabalho representa o resultado de estudos realizados durante

o anno de 1931 e primeiro semestre de 1932 e que foram resumidos numa

serie de notas publicadas ím "Brasil Medico”, algumas também apresentadas ao

2.* Congresso Internacional de Pathologia Comparada, reunido em Paris cm

outubro ultimo.

Outros aspectos do problema do typho cxanthematico de S. Paulo, como

sua transmissibilidade, depositários do virus na natureza, etc., da mesma for-

ma, foram objecto de pesquisas que realizámos com a collaboração de distinc-

tos collegas do Instituto, tendo sido também resumidos em notas já publi-

cadas ou apresentadas á Sociedade de Medicina c Cirurgia de S. Paulo (Se-

mana de Laboratorio, janeiro de 1932) c á Sociedade de Biologia de S. Paulo,

constituindo assumptos de outros trabalhos mais pormenorizados.

Em algumas das nossas notas já publicadas in Brasil Medico, vol. XLV,

n* 35. pag. 805, 1931; C. R. Soc. Biologie, vol. CYTII, n.° 30, pag. 521, 1931;

Communicações ao 2.® Congresso Intern. Path. Comp. Paris, outubro de 1931 ;

Brasil Medico, vol XLV, ns. 47, 48, 49, 50 e 51, pags. 1096, 1109, 1140, 1163

e 1188, 1931; vol. XLVI, n.® 3, pag. 49, 1932, foi adoptada a designação de

"typho endemico de S. Paulo”, que foi convenientemente justificada. Tendo,

8 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

porém, surgido controvérsias sobre esta denominação, como passível de con-

fusão, de um lado, com a febre typhoide e, de outro, com o typho endemico

da America do Norte (México e Estados Unidos), resolvemos, de accordo

com collegas que entre nós têm também estudado a nova modalidade do

“typhus” que surgiu no nosso Estado, empregar a primitiva designação de

“typho exanthematico de S. Paulo”.

Dada a enorme complexidade- e confusão reinantes na nomenclatura das

chamadas febres exanthcmcticas ou typhus, nem sempre de accordo com os

preceitos internacionaes de nomenclatura já acceitos, uma revisão completa do

assumpto se impõe, por muitos motivos facilmente comprehensiveis. Esse

grupo de infecções melhor se designaria pelo nome generico de rickcttsioses,

adoptando-se para o caso da modalidade observada em S. Paulo o nome de

Riekettsiose brasileira, conforme Afranio do Amaral e Cesar Pinto propuse-

ram por occasião da discussão deste assumpto numa das sessões da Sociedade

de Medicina e Cirurgia de S. Paulo (Semana de Laboratorio, janeiro de 1932).

Expondo em conjuncto e mais pormenorizadamente, como agora fazemos,

os resultados dos nossos estudos experimentacs, visamos apenas facilitar a ta-

refa dos que desejarem estudar experimentalmente um assumpto particular-

mente importante para o nosso Estado e para o país. Si este escopo for attin-

gido, considerar-nos-emos compensados dos esforços, dedicação e labor dispen-

didos durante mais de um anno de pesquisas continuas.

Retardada a publicação do presente numero das nossas “Memórias”, por

motivos independentes da nossa vontade, tendo sido os originaes entregues em

fins de 1931, o trabalho foi completado e ampliado, quer no texto, quando pos-

sível, quer em notas ao pé das paginas, com novos dados e observações oriun-

das de experiencias feitas posteriormente, não lhe alterando, porém, a primi-

tiva feição nos seus principaes resultados e conclusões.

Nestes últimos annos, o problema do typho exanthematico em geral, ou

das chamadas “febres cxanthematicas” que abrangem todo um grupo de in-

fecções dotadas de certas afíinidades, vem despertando crescente interesse, tanto

sob o ponto de vista scientiíico, como pelo lado propriamente medico-social.

Esse interesse está ligado á descripção e individualização, em differentes partes

do mundo, de um certo numero de infecções que, embora apresentem pontos

de affinidade com o “typhus” clássico do velho mundo, dellc se differenciam

pelo aspecto clinico, caracter epidemiologico e feição experimental, o que lhes

valeu algumas vezes serem consideradas, não como meras transformações da-

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo 9

quella entidade mórbida, mas como doenças autochtonas de determinadas regiões.

Com eí feito, embora o estudo retrospectivo e histórico possa, com relação a

algumas, mostrar uma ligação original com o typho europeu, é provável que,

com o decorrer do tempo e em virtude talvez de adaptações a noras condições

e ambientes, o mal tenha adquirido uma individualização própria.

Em relação ao continente americano, este problema tem merecido interesse

de rarios pesquisadores, principalmente no hemispherio norte; no do sul, com

excepção de alguns países onde o assumpto já tem figurado em ordem do dia,

pouco se tem feito, principalmentc sob o ponto de vista experimental. Isto se

deve attribuir a muitos factores, como, entre outros, ás deficiências das orga-

nizações sanitarias locaes, cujo raio de acção raramente transpõe os limites das

capitaes e das grandes cidades, e á escassez de recursos para o estabelecimento

de diagnostico seguro, com a qual 1 um vam e ainda frequentemente lutam os

clinicos, especialmente nas zonas afastadas e, ás vezes, até em grandes centros.

Por esta razão é que, removidas essas causas, se tem ás vezes a impressão de

surgirem novas doenças que. reinando em verdade ha longo tempo, eram iden-

tificadas com os males mais em voga na occasião ou com os que clinicamentc

mais se lhes approximassem.

Desde 1929, quando foi diagnosticada, vem surgindo em São Paulo uma

infecção do tvpo das referidas “febres exanthematicas”, mas que apresenta uma

individualidade própria, pelo aspecto clinico, caracter epidcmiologico e pelo com-

portamento experimental. Neste trabalho, dividido cm duas partes c dez capí-

tulos, esta infecção, o typho exanthematico dc S. Paulo, será estudada relativa-

mente ao comportamento experimental dc seu “virus” cm relação aos animacs

dc laboratorio e quanto ao seu aspecto etiologico, com a dcscripção e estudo das

suas relações com a rickcttsia responsável, a Rickettsia brasiliensis Monteiro,

1931.

Antes, porém, faremos algumas considerações sobre o grupo de infecções

exanthematicas conhecidas c já estudadas no continente americano.

1. - Orupo das febres “typho-exanthematicas” na America.

O estudo deste grupo de infecções no novo mundo deve ser encarado se-

paradamente com referencia á America do Norte e á America do Sul.

a) Continente scptcntricnal. - No continente norte-americano podemos con-

siderar como demonstrada a existência de 3 typos de infecções pertencentes a

este grupo. Em primeiro logar, o “typho clássico”, importado do velho mundo

com a immigraçáo curopéa; em segundo logar, o “typho endemico”, conhecido

em certas regiões do sul dos Estados Unidos c no México, onde é chamado dc

"tobardillo” ou de "typho mexicano”; finalmentc, a "febre maculosa das Mon-

tanhas Rochosas”.

SciELO

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Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

O typho exanthematico clássico, embora sob um aspecto clinico benigno, pa-

rece ter sido o observado por Brill (1) em 1910, quando descreveu pela pri-

meira vez numerosos casos, surgidos em Nova York, de uma infecção de na-

tureza desconhecida.

Em 1912, Anderson e Goldberger (2) procuraram demonstrar a provável

identidade desta infecção, que foi denominada “doença de Brill”, com o typho

endemico do México, embora este modo de pensar não fosse logo por todos

acceito. Em 1923, Maxcy (3), lançando mão principalmente de experiencias

de immunização cruzada, tentou provar a identidade de ambas estas enfermi-

dades com o typho do velho continente, apesar das differenças observadas no

comportamento experimental dos “vinis” e em certos aspectos epidemiologicos

das infecções em apreço, havendo também descripto a forma do typho ende-

mico nos estados do sul.

Mooser (4), porém, oppôs-se a essa generalização, mostrando que a deno-

minação de “doença de Brill” deve ser reservada unicamente para uma forma

benigna do typho clássico, de importação, representada pelos casos descriptos

por Brill em Nova York, e que não deve ser confundida com o typho endemico,

existente em certos estados do sul e sudeste da União Americana c no México.

Apesar disso, ainda hoje muitos auctores consideram como “doença de Brill” o

typho endemico nos Estados Unidos. Todavia, o typho endemico da America

do Norte deve ser restricto á variedade conhecida em certos paises por "to-

bardillo” e cuja zona de expansão se extende do planalto do México até as

regiões baixas dos Estados Unidos, mormente o Texas, Alabama, Geórgia c

provavelmente outros estados do sul.

Esta forma talvez seja autochtona no continente americano, pelo menos

no hemispherio norte, onde parece ter sido conhecida pelos indios antes da che-

gada dos espanhóes, caracterizando- se, além do mais, por seu comportamento ex-

perimental, pois o seu "virus” provoca frequentemente, quando inoculado no

peritoneo de cobaias, uma rcacção inflammatoria cscrotal. Esta reacção não se

observa, segundo Mooser, na doença de Brill, que elle, como outros, conside-

rava como o typho clássico de natureza benigna, observado nos Estados Unidos.

Hoje, porém, está verificado que certa reacção cscrotal pode ser observada, ás

vezes, com o typho europeu, embora nunca apresente ella a intensidade e a

constância observadas no typho endemico da America do Norte.

A reacção no "tobardillo” caracteriza-se por uma proliferação endothelial

e infiltração na túnica vaginalis do testiculo e cspecialmente na folha parietal,

provocada pela presença de microorganismos intra-cellulares, descriptos por

Mooser (5) e que se assemelham á Rickettsia proxvazcki, sendo também de-

signados "corpúsculos de Mooser”. O conceito moderno sobre as relações entre

estas formas da infecção será exposto no capitulo VI.

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

O “tobardillo” ou o typho endemico dos Estados Unidos differe ainda do

typho do relho mundo pela ausência ou raridade das lesões nodulares observa-

das no cerebro dos animaes inoculados, as quaes são muito frequentes no se-

gundo. Os outros elementos usados na distineção destes typos dc typho serão

com mais pormenor tratados opportunamente.

Finalmeme, quanto ao terceiro typo de infecções do grupo exanthematico,

observado no hemispherio norte, a febre maculosa das Montanhas Rochosas, sua

zona de expansão está indicada pelo proprio nome, pois corresponde principal-

mente aos estados de Montana, Idaho, Arizona e outros, apesar de que, pelo

que se deprehende de um estudo recente de Badger, Dyer e Rumreich (6),

sua expansão e frequenda nos Estados Unidos (ou de alguma infecção afíim)

talvez seja bem maior do que geralmente se pensa. Differencia-se do “tobar-

dillo” prindpalmente pelo aspecto epidemiologico e pelo comportamento experi-

mental do “virus". Quanto a este ultimo aspecto, na febre maculosa se obser-

va, nas cobaias, mesmo que o “virus” não seja inoculado no peritoneo, uma

reacção escrotal, geralmente mais intensa, quasi sempre provocando hemorrha-

gias e necrose do escroto e, portanto, affectando a pelle do mesmo, o que só

raramente acontece com o “tobardillo”.

O “tobardillo”, pois, o typho endemico da America do Norte, infecção

autochtona, segundo Mooser, deve ser collocado entre o typho do velho mun-

do ou typho exanthematico clássico, c a febre maculosa das Montanhas Rocho-

sas. Seu estudo, sob differentes aspectos c coniparat ivamente com o typho

europeu, tem produzido na America do Norte uma grande serie dc trabalhos

expcrimentacs, cuja citação completa é desnecessária, bastando mencionar os dc

Maxcy, Pinkerton, Mooser e os realizados ou orientados pelo professor Zinsscr,

em Boston.

b) Continente meridional. - Pelos motivos já mencionados, no continente

sul-americano o problema das febres cxanthematicas não mereceu ainda o inte-

resse que desjiertou no norte, principalmente sob o ponto dc vista experimental.

E’ certo, segundo os historiadores, que o typho exanthematico foi pela

primeira vez observado na America do Sul no Pcrií, cm meados do século XVI,

durante o reinado de Huaina Capac, celebre Inca, que foi victimado juntamente

com outros membros dc sua familia c cerca de 200.000 de seus súbditos, ü

mal foi então, muito provavelmente, trazido pelos conquistadores espanhóes.

Desde essa epoca, a infecção tem reinado endcmicamente em certas regiões do

continente. Com relação ao Perú, o facto está seguramente averiguado c já

referido em trabalhos apresentados ao 5.° Congresso Medico I-atino-Amcricano,

reumdo em Lima, em 1913 (J. Gonzalez Mendoza, G. Arosemena e outros),

o mesmo podendo-se dizer com relação a certas regiões do norte do Chile.

Relativamcnte á Bolivia, a existência da endemicidade do mal é muito pro-

vável. Foi suspeitada quanto a certas partes da Argentina, cm 1916, por A.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

12 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Xeiva e B. Barbará (7), durante uma viagem de estudos que realizaram nas

provincias do norte do pais. Esta endemicidade do typho na Argentina septen-

trional foi confirmada em 1918 por Kraus, Battaglia e Barbará (8), que estu-

daram um surto epidemico na localidade de Molinos, provinda de Salta, loca-

lizando o fóco endemico no valle Calchaqui. na mesma provinda.

Battaglia e Barbará (7) assim se manifestaram em seu trabalho: “En ei

transcurso de nuestras investigadones, que no fué cosa fadl praticarias, a causa

de la falta de toda ducumentacion oficial o pjdvada, no fué mayor la primer sor-

presa con el hallazo dei tiíus petechial que reinaba en forma epidemica en ia

region, sino después de comprobar que dicha enfermidad pertenecia a la mor-

bilidad corriente desde quien sabe cuantos anos atrás, como endemia benigna”.

Além desta forma do typho endemico, autochtona de certas regiões do nor-

te do pais, o typho dassico também apparcceu na Argentina em 1896, em Entre

Rios, trazido por immigrantes russos (8).

Com respeito ao Brasil, não conhecemos estudo algum referente á exis-

tência de alguma infecção do grupo das febres typho-exanthematicas, até que

se registrassem em São Paulo, em 1929, os primeiros casos de uma infecção

' que, com elementos mais ou menos seguros, foi então diagnosticada como typho

cxanthematico, continuando até agora a surgir de um modo esporádico em cer-

tas zonas da cidade, o que provavelmente vinha de ha muito acontecendo ( *).

Esta infecção tem todos os caracteristicos de uma nova modalidade a distin-

guir-se do typho clássico do velho mundo, pelo set: aspecto clinico, epidemiolo-

gico c experimental. A designação de “typho exanthematico de São Paulo”

foi justificada pelos drs. J. T. Piza, F. e L. Salles Gomes, J. Flcury, J. Meter,

J. Castro, C. Rodrigues e H. da Rocha Lima (9), cm uma nota apresentada

á Sociedade de Biologia de São Paulo, na qual mostraram alguns caracteristi-

cos da infecção e sua diííerenciação do typho exanthematico europeu. A infec-

ção tem-se manif estado, desde então, cm forma endcmica no município da Ca-

pital, principalmente em zona suburbana ou rural da cidade; os casos têm sur-

gido esporadicamente, não sendo impossível, cm todo caso, o apparecimento dz

surtos epidêmicos, si certas condições o favorecerem.

O essencial será estabelecer as relações entre estas formas de infecções e

as do hcmisphcrio norte, para se ter a certeza da existência, também no he-

mispherio sul, do typho endemico, talvez autochtono, provavelmente encontra-

do cm vários outros paiscs.

E’ possivel que a natureza do typho endemico do Pcrú, Chile, Bolivia e

Argentina, embora escassos os estudos experimentaes, se relacione com a do

typho europeu, que originariamente grassou, como vimos, no Perú, no século

(•) Informou-nos J. T. Pira ter já estudado, em annos anteriores, dois casos pan

os quacs ponde firmar o diagnostico de typho exanthematico.

J. Lemos Monteiro — Typho exanthemalico de S. Paulo

X\ I, si bem que tenha adquirido uma feição própria, variando, talvez, segundo

as dif ferentes regiões. Isto parece ser verdadeiro pelo menos em relação ao

typho endemico da Argentina, em virtude do que se deprehende dos trabalhos

de Kraus e Barrera (11), que o estudaram experimentalmente, verificando ser

a reacção de Weil-Felix positiva em 94% dos casos e provocar o virus na

cobaia uma reacção febril “por completo semejante a la descripta por los au-

tores con el virus de Europa, África e Norte America”, e accresccntando ser

idêntico o comportamento experimental da febre petequial no Chile e no Pcrú,

de accordo, neste ultimo pais, com informações prestadas aos auctores pelo dr.

E. Ribcyro, de Lima. Kraus e Barrera julgam que “la íiebre petequial en Sud

America (Perú, Bolivia, Argentina y Chile) es producida por un virus que, a

semejanza dei de Europa, África y en Méjico, determina en el chanchito un

ascenso característico de la curva térmica (tcrmoreación)”. Idênticas conside-

ram também os dois auctores as lesões histopathologicas da pelle e as infiltra-

ções perivasculares observadas no cerebro dos doentes, embora não as reputem

especificas do typho; relativamente á infecção experimental, verificaram lesões

semelhantes “en el cerebro y las meninges de los chanchitos infectados pero sin

ser constantes ni guardar relación alguna con los pasajes”.

Talvez pela epoca em que foi feita, a descripção, dada por Krauss e Barrera,

do comportamento experimental dos “virus” argentino c chileno, responsáveis

pelo typho endemico destes paises, é insufiicientc para se julgar com segurança

quanto á natureza de ambos, embora esses auctores os considerem semelhantes

ao “virus” do velho mundo, ao qual também filiam o prior: o typho mexicano c

o typho endemico da America do Norte. Em todo caso, alguns pormenores da

descripção por clles feita, como a inconstância de lesões nodularcs no cerebro

das cobaias infectadas, parecem approximar o typho que estudaram do typho en-

demico do norte (Estados Unidos e México), e scparal-o do typho do velho

continente, no qual aqucllas lesões, como se sabe, são bem constantes.

Somente novos estudos experimentaes, orientados de accordo com os mo-

dernos conhecimentos sobre este grupo de infecções, estabelecerão a natureza

cxacta do typho endemico do norte da Argentina c do Giile, Pcrú c Bolivia,

elucidando si deverão ser considerados como infecções autochtonas do nosso

hcmispherio, iguacs ou dif ferentes nos vários paises, ou si têm a sua origem

em virtude de uma importação do velho continente, havendo, porém, adquirido

já individualidade própria que lhes daria íóros de doenças cspcciaes.

Estes estudos justificar-se-iam ainda pelos resultados das investigações, prin

cipalmente de natureza experimental, que vem sendo realizadas com o typho

exanthcmatico de São Paulo.

Este é uma infecção provavelmente autochíona, com epidemiologia pró-

pria, e, assim, de grande valor teria verificarem-se as suas relações com as

formas do typho endemico já conhecidas nas Américas do Norte e do Sul, c

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

a sua possível existência em outras regiões do nosso território e em outros

paises do continente americano; si se trata de uma entidade mórbida nova ou,

pelo contrario, si poderá ser identificada a alguma já descripta, ou á infecção

que Badger, Dyer e Rumreich estudaram nos Estados Unidos, considerando-a

muito próxima da febre maculosa das Montanhas Rochosas, com a qual, aliá>,

em trabalho mais recente, chegam a identiíical-a (12), apesar de o nosso typho

apresentar certos caracteres diíferenciaes, que serão estudados opportunamente.

2. - Relações sorologicas entre as differentes formas do typho.

Embora clinicamente apresentem certa semelhança com o typho clássico,

isto é , o typho exanthematico do velho continente, as diversas formas do

“typhus” delle divergem em outros aspectos, como também apresentam difíe-

renças entre si, de accordo com as varias regiões do mundo onde têm sido

descriptas e estudadas.

Estas difíercnças, relativamentc ao typho endemico, accentuam-se, prin-

cipalmente, quanto á epidcmiologia. Xão apresenta, geralmente, tendencia a

uma rapida disseminação, não ha evidencia segura de que se transmitte

somente por intermédio de piolhos e, alem disto, é muito provável a existência

de algum outro intermediário ainda não bem conhecido.

Outro elemento que poderia servir para o estudo' das relações entre as

diversas formas entre si e o typho clássico, seria a reacção sorologica de Weil-

Felix. Segundo estudos conhecidos, a reacção se manifesta positiva em 95Çc

dos casos de typho endemico (doença de Brill) dos Estados Unidos (Havens,

1927), em 100 dos casos de typho endemico da Austral ia (Hone, 1927; Buli,

1923 e Wheatland, 1926).

Com respeito ao typho tropicai dos Estados Malaios, Fletcher (13) e coila-

boradores (Lessler, Field, Lewthwaite) verificaram, entre os doentes, dois

grupos soroiogicos: o primeiro, que dava agglutinação positiva com o Proteus X19

(amostra Varsóvia) e representado pelos casos de zona urbatia que denominaram

grupo \V”; e o segundo, constituído pelos casos de zona rural e que somente

daram reacção positiva com a amostra K (Kingsbury) do X19, que designaram

“grupo K”.

Reccntemehtc, cm virtude da diversa epidemiologia entre estes dois grupos

de infecção, passaram a chamar o grupo urbano (W) de “Shop-typhus” e o

grupo rural (K) de “Scrub- typhus”.

Estas verificações sorologicas de Fletcher e collaboradores são da maior

importância, abrindo novos horizontes para o estudo das relações entre estes

differentes typos de infecção.

E’ preciso dizer que o typo K (Kingsbury) do Proteus X19 é uma va-

riante deste, obtida originalmente pelo dr. Kingsbury, da “Xational Collections

SciELO

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J. Lemos Monteiro — Typho exanlhematico de S. Paulo

of Type Cultures”, e constitue um novo typo do Proteus, que não produz indol e

não fermenta a saccharose e maltose, para o qual Felix e Rhodes dão a designa-

ção de Proteus XK.

Felix e Rhodes (14) confirmaram estas observações de Fletcher, verifi-

cando também que as agglutininas do typo 0 eram as responsáveis pela reacção,

tanto do Proteus X19 para o grupo \V, como do Proteus XK para o grupo K

do typho malaio, conforme já se sabia com referencia ao Weü-Felix no typho

clássico. Estes auctores verificaram ainda que as mesmas agglutininas do typo

0 eram responsáveis pela reacção positiva com o Proteus XK na “tsutsugamushi”.

Em virtude de trabalhos recentes de Spencer e Maxcy sobre a reacção de

agglutinação na febre maculosa das Montanhas Rochosas e no typho endemico

dos Estados Unidos, Felix e Rhodes acreditam, relativamente á primeira, em

duas alternativas: 1.* não ser o virus da febre maculosa antigenicamente uni-

forme, dividindo-se em variedades sorologicas como Fletcher e Lessler estabe-

leceram para o typho tropical malaio; 2* o antigeno do virus poder, então,

corresponder a outro typo de Proteus, alem dos tres já conhecidos.

Xa África do Sul já é conhecida a existência do typho endemico e de

outra infecção affim, para a qual Pijper e Dau (15) propuseram a denominação

de "tick-bite fever”. Segundo estes auctores, o primeiro produz agglutininas

para o Proteus X19 e X2 e a segunda, para estes typos c também para o Proteus

Kingsbury (XK). As cobaias atacadas de ambas as infecções apresentam agglu-

tininas para o typo Kinsgsbury e não para o X19 ou X2. Verificaram ainda

o facto interessante de haver uma “inhibição temporária”, isto é, uma reacção

que se manifesta somente após um repouso do soro durante alguns dias.

No que diz respeito ás formas de typho endemico já verificadas na America

do Sul (Argentina e Chile), parece, segundo as observações de Kraus e colla-

boradores, que se comportam sorologicamente, com relação ao Proteus X19, como

o typho endemico dos Estados Unidos e México.

Finalmente, com referencia ao typho de São Paulo, a reacção de Wcil-

Felix, praticada por J. P. Flcury com o Proteus X19, mostrou-se inconstante,

negativa em alguns casos, embora estes tivessem sido confirmados por outros

meios, como se deprehende do citado trabalho (9) cm que collaborou esse dis-

tincto collega (*). Este facto c de importância c mostra que possivelmente o

nosso typho apresenta mais de um typo sorologico, como acontece com o dos

(*) Em nota mais recente, levada ã "Semana dc Laboratorio” (janeiro de 1932),

J. T. Piza apresentou os resultados de maior numero dc rcacçõcs dc Wcil-Felix. com

o Proteus X19. praticadas no Instituto Bacteriológica. Verifica-se. agora, que na maioria

dos casos as rcacçõcs foram positivas com esse typo dc Proteus X-

No nosso laboratorio, com J. Travassos, t hemos opportunidadc dc praticar a resecáo

com 4 soros, gentilmente fornecidos por L. Salles Gomes, empregando os typos dc Proteus

X2, X19 e XK (com as respectivas variantes O e H), que nos foram enviados por A. Felix.

lã

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Estados Mala : os e, talvez, com a febre maculosa das Montanhas Rochosas, de-

vendo. em todo caso, os estudos sorologicos ser continuados, usando-se também

o Protciis XK (typo Kingsburv) para verificação da possível existência entre

o Protcus XK (* *).

Xo quadro annexo, resumimos as reacções sorologicas das varias formas

de typho e infecções affins (Quadro I).

Estudadas assim, de um modo geral, as formas do typho e infecções pró-

ximas verificadas no continente americano e, rapidamente, as relações, principal-

mente sorologicas, que apresentam com as outras já conhecidas em difíerentes

partes do mundo, passaremos a estudar mais particularmente o typho exanthe-

matico de São Paulo.

Verificamos a rcacção positiva com o Protcus X19 (e também com o Protcus XK em ti-

tulo menos elevado), sendo a agglutmação. com ambos, do typo O.

Estes estudos immunologicos sob este e sob outros aspectos (fixação do complemento,

etc.) devem ser continuados em relação ao typho exanthematico de São Paulo. Ao mesmo

tempo deverá ser tentado o isolamento de novos typos de Protcus dos doentes e animacs

cxperimentalmente inoculados, segundo nos suggeriu o prof. A. Felix que, gentilmente,

nos enviou dados sobre a tcchnica que tem empregado para esse fim e que fornecemos

também a collegas do Instituto Bacteriológico.

(•) Por extrema gentileza do prof. A. Felbc. recebemos uma copia do original de

seu ultimo trabalho, ainda inédito. " The rabbit as experimental animal in the study of

thc typhus of viruses”, no qual figuram os resultados obtidos com soros de doentes e

animacs inoculados com o viras, entre outros, do typho exanthematico de São Paulo. Apro-

veitando-nos ainda do atrazo desta publicação, é-nos grato assignalar as seguintes principaes

conclusões desse eminente pesquisador na parte que nos interessa: “The interesting feature

of these tests, howcver, is thc occurrence of group agglutinins for type XK in the majority

of thc São Paulo sera. Scra from typhus patients irom Europe. Australia and thc United

States of America never contain significant group agglutinins for XK. Agglutinins for

XK are also absent from the scrum patients belonging to FIctchcris “ Group W” of tropical

typhus. as is also sccn from thc reactions of thc Malayan and Javan scra included. The

:irus of the São Paulo endemie typhus is thus shoii.ii to represent still another entigenie

veriety; ils main antigen ir that of type X19 and it differs from other tvell k nenen typhus

liruses by ils content of group antigen of type XK". (O grypho c nosso e visa salientar

a conclusão final).

No instituto Bacteriológico de São Paulo, J. Carvalho Lima conseguiu isolar um novo

typo de Protcus X, cuja agglutinabilidade pelos soros espccificos poude verificar. Este

novo typo, enviado e ha pouco estudado também pelo prof. Felix que o denominou XL, cor-

responderia melhor ao typho exanthematico de São Paulo.

Registamos, com satisfacção, todos estes resultados experimenta es. por confirmarem

a hypothcse, suggcrida numa de nossas primeiras notas, da diversidade sorologica do typho

exanthematico dc São Paulo.

SciELO

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J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

QUADRO I

NOME

REGIÃO vector

Içulitaitfa ctm B. »rt lai I

Typo XI9 Typo XK

Typho exanthematico

íepldemlco)

Noto e relho mundo

piolho»

—

Typho endemico itohar-

dlllo)

México

pulga* (1)

—

Typho endcmico

Estado» Unido»

pulga* (2)

Typho endcmico

Australla

Typho endemico

Italía ?

Febre exantbematlca

martelheta

Hegiâo mediterrânea

pulfia* (?)

—

Febre botooosa

Região mediterrânea

carrapato* (S)

•

Typho tropical (typo W)

Mataia

—

Typho tropical (typo Kt

Mala la

Ttutsugamushi

Malaia e Sumatra

acariano»

—

+ (fraca)

Tsutsugamushl

Japão acarlanos

—

- 4 - (fraca)

Typho exanthematico (fe- Norte da Argentina

bre petechtal) e Chile

piolho* (4)

4 ."

Tlck-blte fever Sul da Afrlca

carrapato* (S)

Febre maculou da* Mon- _ . . ....

. . „ . Es lados L nldo*

tanha* Rochosa*

carrapato»

4- • *

Typho exanthematico de

Slo Paulo

S. Panlo (Brasil)

carrapato» (?) («)

4- (7)

4- — rcaccJo potltlea / — — reaccio negativa / — reacção parvlalmrnle potltl-

Ta /O — reaccão não praticada/? — vrctor ainda desconhecido

(1> A tr»n*ml*»Jo experimental trm tido nMlda também cora piolhos, carrapato* e percevejo».

De arcordo com a verificação de Zlnttcr, o rato \erla nm drpotltarlo do «Iria. At pnigat aio

Incriminada* em trabalho* recente*.

(2) Incriminada* em trabalhos recente* (Dyer, Ituinretch e Badger).

(3) E’ hoje Itrralmrnte retpontablllaado o Rhípicephats* tanaaiaeat (Burnet e Olmer, Duraud e

Conte!!. Ilrumpt. Blanc e Camlnopetro*. etc.).

(4) Segundo te deprehende (lo* trabalho* de Kraut e collaboradorel. derendo-te, em todo cato.

peaqultar outro* posilvel* «ecloret para at endemia* reinante* em certo* togares.

(j) Segundo Pijper e Dau, o titulo da reacçáo 4 baixo com o X13 e elevado com o XK.

(«) ObtlTemo* rrtultado* positivo* de trantmltsáo da lnfeccão experimental com certa* opcclei

de carrapato*. O AnMr*nmi caiennena* dere ter Incriminado (Monteiro e Fonseca).

(7) Segundo retultadot mal* recentemente publicado*, t potitlva com o XI» na malorli do*

rato*. O mesmo acontece com o XK. em titulo menos elevado, a te Julgar pelo* resultado* de al-

guns toro* que estudamos com J. Travassos e pelo* obtido* por A. Fellx, no Inttltuto I.itter, de

Londres.

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

3.-0 typho exanthematico de São Paulo e seu aspecto epidemiologico.

Xo estudo da endemia em São Paulo e dos casos registados, ou, melhor,

somente daquelles cujo diagnostico foi de qualquer maneira confirmado, servimo-

nos das fichas clinicas organizadas e postas á nossa disposição pela Secção de

Dcmographia do Serviço Sanitario do Estado, a cuja directoria aqui consigna-

mos os nossos agradecimentos.

O primeiro caso nestas condições foi confirmado em 11.X.1929 e, até

setembro de 1931, os casos perfaziam um total de 44. Numerosos outros casos

foram suspeitados nesse período, porém tiveram outra confirmação diagnostica

(a maioria como febre typhoide e gripe). Seu estudo clinico foi feito no

Hospital de Isolamento da Capital, por J. T. Piza, e o diagnostico confirmado

bacteriologicamente, quer por meio da reacção de Weil-Felix, feita por J. P.

Fleury, quer pela inoculação em cobaias, realizada, com resultado positivo em

alguns casos, por L. Salles Gomes, no Instituto Bacteriológico, ou, ainda,

pelos exames histopathologicos realizados pelo prof. Rocha Lima e J. R. Meyer,

no Instituto Biologico (*).

De accordo com o estudo que nos foi dado realizar das fichas destes casos,

verificámos a seguinte frequência nestes últimos tres annos:

Em 1929 — 15; em 1930 — 20; em 1931 (até fins de agosto) — 9

(Total 44).

a) de accordo com a nacionalidade: brasileiros, 29; portugueses, 4; ita-

liano, 1 ; austríaco, 1 ; lithuano, 1 ; espanhol, 1 ; russo, 1 ; não registados nas

fichas, 6: b) quanto ao sexo: masculino, 17; feminino, 21; não registado-, 6;

c) quanto á cór: brancos, 30; pretos, 4; pardos, 4; não registados, 6; d)

quanto á idade: até 10 annos, 8; de 11 a 20 annos, 13; de 21 a 30 annos, 13;

dc 31 a 40, 3; acima de 40, 1; não registados, 6; e) finalmente, com relação

á zona de residência: em zona urbana, 6; em zona suburbana, 33; em zona

rural, 5 (proximidades da capital, incluindo 2 casos em municipio vizinho).

Destes 44 casos falleceram 34, o que dá á infecção a mortalidade de 77,2Çó.

Todos estes indivíduos eram residentes havia tempo no local onde contrahiram

a moléstia e, com raríssimas excepções, habitavam a mesma casa dentro do més

anterior. Poucos foram os casos em que foi possível verificar-se a presença

dc piolhos na roupa e no corpo dos pacientes.

(•) Durante a revisão das primeiras provas deste trabalho, em outubro de 1932, chegou-

nos às mãos a publicação “Typho exanthematico de São Paulo" pelos drs. J. T. Piza. J-

R. Meyer e L. Salles Gomes. O aspecto epidemiologico do mal é ahi estudado por J. T.

Piza que também relata os principaes resultados de exames clinkos e de laboratorio effe-

ct uados. assim coroo as observações clinicas dc 60 casos por clle acompanhados e estudados;

a anatomia e histologia pathologicas dos casos nccropsiados é estudada por J. R. Meyer

e por L. Salles Gomes, a parte experimental, relativa á inoculação dc material dos doentes

em animaes de laboratorio e outras pesquisas correlatas.

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J. Lemos Monteiro — Tgpho exanthematieo de S. Paulo

Em investigações feitas com os prezados companheiros de trabalho, Fia vi o

da Fonseca e Alcides Prado, em numerosas casas e zonas onde surgiram casos

do mal, com o fim de pesquisar parasitas hematophagos, encontrámos com fre-

quência vários que poderiam ser incriminados, principalmente acarianos (mesmo

uas camas dos moradores) e carrapatos que têm sido estudados no Instituto.

Seria possivel que algum representante da ordem dos acarianos fosse res-

ponsável pela propagação, em São Paulo, do typho cujo virus poderia

ter como depositário natural algum roedor por elle também parasitado, hy-

pothese já emittida por Shelmire e Dove (16), quanto á transmissão do typho

«ademico da America do Xorte por meio de um acariano, o I.iponyssus bacoii

Hirst. que é parasita do rato cinzento ( Epintys noncgicus) e responsável pela

‘rat mite dermatitis”, cujo apparecimento «em coincidido com o do typho endê-

mico no norte e éste do Estado de Texas.

Além desta possibilidade, foram estudadas outras experimentalmente: com

varias especies de carrapatos, percevejos, pulgas, etc., estas ultimas agora in-

criminadas como responsáveis pela transmissão do typho endemico da America

do Norte; além disto, pesquisámos, com F. da Fonseca, a possibilidade da exis-

tência de depositários do virus entre diversos roedores sylvestres (ratos, preás,

lebres, etc.) e os resultados até agora obtidos, do mais alto interesse epidcmio-

logico, constam de outros trabalhos.

Este resumo sobre os casos verificados e sua zona de expansão, assim

como os possíveis meios de transmissão, dá ao typho exanthematieo de São

1’aulo um caracter proprio, que o distingue do typho clássico, caracter este

que mais se accentuará pelo estudo do comportamento experimental do virus,

como veremos nos capítulos seguintes.

Capitulo II

Comportamento experimental do virus em relação aos pequenos

animaes de laboratorio

No capitulo anterior fizemos considerações geraes sobre as differentes for-

mas do ' typhus”, principalmcnte as observadas no continente americano, assim

como sobre uma nova modalidade endêmica que surgiu cm São Paulo. Agora,

passamos a relatar as nossas observações sobre o comportamento experimental

do “virus” responsável, representando este estudo, juntamente com outros (as-

pecto clinico, histopathologico. etc.), um dos elementos pelos quaes se poderá

estabelecer a rigorosa identificação da infecção, quer justificando sua classi-

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

ficação entTe algumas das formas de typho já descriptas, ou. com mais pro-

babilidade, como modalidade nosoiogica á parte.

A primeira amostra do “virus” que estudámos, isolada de um dos doen-

tes recolhidos ao Hospital de Isolamento de São Paulo, foi-nos cedida peio

distincto collega L. Salles Gomes, a quem renovamos aqui os nossos agrade-

cimentos. Posteriormente, estudámos uma outra amostra, que isolámos de um

novo doente recolhido ao mesmo hospital.

O estudo do comportamento do “virus” foi feito em relação a alguns ani-

maes de laboratorio, especialmente a cobaia, sendo a inoculação praticada pelas

vias sub-cutanea, peritoneal e venosa. A seguir, estudaremos o comportamento

do virus relativamente a certos simios, pertencentes a tres ger.eros differentes

( Macactts, Ccbus e Alauatta), e, por fim, o comportamento dos animaes de

laboratorio, por inoculação por via intra-ocular, ou, melhor, na camara ante-

rior do oiho.

METHODO DE ESTUDO E MATERIAL

Para a inoculação por via peritoneal ou sub-cutanea, o “virus” era repre-

sentado por sangue de um animal infectado, colhido em periodo de reacção fe-

bril, do terceiro ao quinto dia da reacção, geralmente no quarto, ou, então, por

emulsão do ccrebro de um animal nas mesmas condições e sacrificado geral-

mente no quarto dia de reacção febril.

O sangue- era injectado “in r.atura”, immediatamente após a colheita, ci-

tratado ou desfibrinado, e nas doses de 1 a 3 cc. Para o preparo da emul-

são do cerebro infectante, tomavamos geralmente 1 gr. do orgam, colhido asepti-

camente e emulsionado cm 10 cc. de agiu physiologica, praticando a injecção

na dose dc 1 cc. (ás vezes, na dose de 2 cc.), correspondente a cerca de 0,1 gr.

do orgam fresco.

Diversos animaes eram sacrificados durante a reacção febril para fins dc

novas passagens e conservação do “virus”, deixando-se outros, afim dc se acom-

panhar a evolução da infecção experimental.

Decorridos vinte a trinta dias. mas geralmcnte neste ultimo espaço de tem-

po, os que resistiam eram reinoculados Com "virus” activo, para a prova de

immunidade.

Muitos soííriam sangrias, em differentes períodos, para estudos poste-

riores sobre phenomenos de immunidade no decurso ou em consequência da

infecção.

Os animaes sacrificados ou mortos er-im necropsiados e observadas as prm-

cipaes alterações anatômicas, sendo colhido material para exame histopatholo-

gico (usados como fixadores o íormol a 10 c /c, o liquido de Zenker e o li-

quido de Regaud), assim como para a pesquisa de “Rickettsias” em esíregaços.

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J. Lemos Moxteibo — Typho exanthematico de S. Paulo

A temperatura rectal de todos os animaes era tomada diariamente, ás mes-

mas horas (entre 12 e 13 horas). Verificámos em nossas cobaias uma variação

individuai da media normal da temperatura, devendo-se, por isto, fazer sua de-

terminação approximada, para o que se terá uma base pela temperatura do dia

da inoculação, sendo que ás vezes foi também tomada a da vespera. Nas co-

baias em que esta temperatura era comprehendida entre 38°, 5 a 39®, 5, só fo-

ram consideradas como reacção as temperaturas acima de 40°; nos animaes cuja

temperatura inicial estava entre 37®.5 a 3S®,5 a reacção era baseada em tem-

peratura acima de 39®, S.

1. - Resultados da experimentação.

A) Marcha da infecção na cobaia. - O quadro annexo resume os re-

sultados do comportamento experimental do “virus” com relação á cobaia,

mostrando-se elle bastante pathogcnico, pois provoca nesse animal uma rcac-

ção febril característica, após certo período de incubação, terminando a infec-

ção quasi sempre pela morte (Quadro II).

Muitas cobaias, além das designadas no referido quadro, foram já ino-

culadas, num total de mais de 800 (*), cuja relação registar-se-á conjuncta-

mente com experiencias a serem descriptas neste e em outros trabalhos. As

indicadas agora, porém, em numero superior a 100, parecem sufficientes para

se julgar do comportamento experimental do “virus” do typho exanthemati-

co de São Paulo em relação a essa cspecie.

O exame do quadro annexo indica que, inoculando-se o virus por via

subcutânea, o período de incubação da infecção é um pouco mais longo do

que por via pcritoneal e que ella se processa com maior regularidade c cons-

tância empregando-se como material infcctante a emulsão de cercbro.

Tomando-se cm consideração somente os animaes que apresentaram rcac-

ção febril característica, observa-r-e que, por via peritoncal, o período de in-

cubação foi de 3 a 4 dias. cm media, tendo-se observado incubação de até

48 horas c raramente de 6 dias (apenas cm 2 casos ultrapassou 10 dias). Nas

mesmas condições c só considerando os animaes que tiveram evolução, natural

da infecção, verificou-se que o período de reacção febril variou de 3 a 8 dias,

tendo apenas uma vez perdurado 12 dias. No fim deste prazo os animaes

geralmente morrem em menos de 24 horas, cahindo-lhcs a temperatura abaixo

do normal; ás vezes observa-se nova ascensão, menos accentuada, seguida de

nova baixa thermica e da morte. Quando o restabelecimento do animal se

dá, a temperatura volta á media normal e, neste caso, elle se mostra immuni-

zado, não reagindo a uma segunda inoculação do virus activo. Esta immuni-

(•) Este numero comprehendc o total das cobaias inoculadas ale Junho de 1932.

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7 SCÍELO) 2.1 12 13 14 15 16

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

dade pode persistir na cobaia durante 3 meses, não estando ainda verificado

o seu praxo máximo (*). As cobaias apresentam, muitas vezes, nos últimos

dias e após a morte, phenomenos hemorrhagicos cutâneos, mais accentuados nas

extremidades dos membros, que se mostram então arroxeados.

A morte como consequência da infecção, considerando-se apenas os ani-

maes em que a evolução se processou naturalmente, dá-se em cerca de 70%

das cobaias inoculadas.

Pelo quadro II verifica-se ainda a extrema regularidade da infecção quando

utilizada como “virus” a emulsão do cerebro de um animal infectado e sa-

crificado em período propicio. Mesmo no primeiro dia de febre (cob. 2Ó0)

e quarto da inoculação, o cerebro já »e mostrava infectante. Apenas em 8

casos cm que se applicou essa emulsão, não se verificou evolução caracterís-

tica da doença experimental e, destes, somente em 3 animacs (cobs. ns. 9S,

233 e 132, a ultima não devendo ser considerada, em virtude de ter ficado

evidente que o material inoculado era avirulento), a infecção não se proces-

sou, tanto que os mesmos depois não se mostraram immunizados. Nos ou-

tros cinco casos (cobs. ns. S8, 125, 161, 251 e 259) a infecção se processou

provavelmente de um modo atypieo sem reacção febril, mas comprovada por

passagens e observação de microorganismos semelhantes a “Rickettsias” nas

cellulas endotheliaes da parede p^ritoneal. A verificação foi completa, neste

sentido, quanto á cobaia n. # 161.

Esta forma atypica da infecção, que se observa em cobaias sob determi-

nadas condições e na qual com maior facilidade se põe em evidencia a pre-

sença da “Rickcttsia” que descrevemos nas cellulas mesothcliaes do peritoneo

das cobaias com infecção característica (17), será csrudada detalhadamente na

2.* parte deste trabalho.

Ainda pelo estudo do quadro II, verifica-se que o sangue, mesmo

extrahido de animal com reacção febril, ás vezes se mostra menos virulento ou,

então, que. em certas occasiões, nelle existe o “virus” em menor concentra-

ção, sendo necessárias, para que a infecção se processe, doses mais elevadas

(até 4 cc.) ; assim mesmo, observa-se muitas vezes evolução mais benigna, isto

é, com periodo dc incubação mais longo, reacção febril por poucos dias c so-

brevivência do animal, que se mostra, cm todo caso, immunizado a uma se-

gunda inoculação virulenta.

Isto se deve explicar pelo facto de não ser constante a quantidade do

"virus” na corrente circulatória, mesmo durante o periodo de reacção febril,

ou, então que. depois de certo tempo, o elemento virulento soífra a acção de

(•) Por algumas experiências festas com maior praxo, verificámos que a immun idade

não é permanente, diminuindo e desapparccendo, a cobaia reagindo, então, cm relação a

nova inoculação virulenta-

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J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

anticorpos que elle proprio tenha provocado, dando-se, então, a sua concentra-

ção nos organs, prindpalmcnte no cerebro.

Quando se emprega como da de introducção do “virus” a camara ante-

rior do olho de certos animaes (coelho, cobaia, macaco), consegue-se provo-

car a infecção com doses muito menores, mesmo usando-se o sangue, segun-

do mostraremos em capitulo posterior, ou quando se applica como "virus” o

humor aquoso de um animal infectado por via ocular ou o liquido de lavagem

“ raspagem peritoneal contendo "rickettsias”.

A apreciação da marcha da infecção pela sua cu rs- a thermica poderá me-

lhor ser feita nos graphicos de cobaias inoculadas annexados a este trabalho,

não sendo indicados os de todas, por desnecessários (graphicos 1 a 21).

a) Alterações anatômicas. - Designámos apenas, como bastante constan-

*s e tendo valor diagnostico, o augmento do baço das cobaias inoculadas com

0 "virus” do nosso typho, augmento ás vezes bem accentuado e apresentando-

se o orgam com coloração escura e congestionado. Observam-se frequentemen-

te hemorrhagias sub-cutaneas, vendo-se um edema, por vezes gelatinoso e hc-

morrhagico, no tecido cellular, principalmente no nivel das regiões inguinaes,

nas cobaias que apresentem reacção inflammatoria no escroto. As alterações

histopathologicas observadas nos diííerentes orgãos dos animaes infectados cs-

J ão sendo objecto de estudo (*). Apenas desejamos salientar que as lcsõc-

nodulares observadas commummente com o typho clássico europeu não são

'ncontradas, ou talvez sejam muito raras, nos ccrebros dos animaes inoculados

com o “virus” do typho de São Paulo. Os ccrebros de alguns dos nossos ani-

n^nes infectados a p:e sentaram-se histojiathologicamenie normacs, apesar de

teguramente infectados, o que se poderá attribuir á evolução muito rapida do

mal, não havendo tempo para o estabelecimento das alterações histológicas, que

teriam liastante especificas no caso do typho do velho continente.

b) Reacção inflammatoria cscrotal. - Ura symptoma a que attribuimos

'ntportanda, e que verificámos frequentemente em nossas cobaias, c um au-

fjtnento de volume com inflammação do escroto. A reacção pódc ser ligeira.

n otando-se apenas um edema mais ou menos accentuado, ou então, havendo

^cma e maior augmento de volume, iniciando-sc por uma vermelhidão da

Pclle e ficando então os testiculos retidos nas bolsas, nas reacçõcs mais inten-

5a s. Nestas observámos muitas vezes pctechias a principio pequenas, augmen-

ía ndo depois ao ponto de se fundirem, chegando 3 formar placas hemorrha-

(•) Fornecemos também a distinctos collegas histopathologistas, tanto de São Paulo

c°mo do Rio, abundante material (de cobaias c Stacacus rhesus) para estudo mais

Coo >pieto desta parte do problema, sendo que alguns dados a respeito foram já publicados

** A. Fialho ( Rcv. Med. Gr. do Brasil XL(7) .1932). do Rio de Janeiro.

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J. Lemos Monteiro — Typho exanlhemalico de S. Paulo

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Tomo VI

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^cas. A's vezes este processo termina pela necrose da pelle. A reacção es-

^tal somente observámos quando o “viras” era inoculado por via peritoncal.

As figuras que acompanham este trabalho dão uma idéa da reacção, de

'■arias intensidades, em cobaias inoculadas com o “vírus” por essa via.

As figuras 1 c 2 (Estampa I) correspondem á reacção de pequena intcn-

Mdade, jxxlendo-se ver o edema e mesmo {lequciias petechias hemorrhagicas no

Cs croto. As figuras 3 a 4 (Estampa I) da mesma cobaia photographada de

lrc nte e perfil, mostram uma reacção mais accentuada, não podendo os tes-

tículos ser facilmente deslocados das bolsas e observando-se pequenas placas

de hemorrhagias cutaneas. A figura 1 c respectiva ampliação na figura 2

^ Estampa II) mostram uma reacção mais accentuada ainda, vendo-se nos dois

3dos do escroto vasta placa hemorrhagica, dando uma idéa da intensidade da

r eacçáo nesta cobaia, sendo melhor visível na figura I da estampa III, colorida.

•Vs figuras 3 e 4 (Estampa II) mostram outras cobaias com reacção intensa,

y endo-se uma placa hemorrhagica num dos lados do escroto e necrose. A fi-

Su^a 2, estampa III, colorida, mostra o aspecto da reacção intensa cm outra

^baia, evklenciando-se bem os pfcenomenos hemorrhagicos cutâneos.

Com o material original e nas primeiras passagens, a reacção escrotal apre-

'«itou-se com maior frequência ; posteriormente, a frequência diminuiu, sendo

fntão observada cm vários animaes, depois de uma serie de inoculações onde

«*0 era verificada, pelo menos de modo a despertar attenção. Considerando,

03 o 'ó os animaes registados no quadro annexo, como as dematis cobaias machos

J a inoculadas com o “virus”, em experiencias diversas, acreditamos que a

rca cção escrotal. em suas varias intensidades, se manifesta, com os "virus” que

Mudámos, em cerca de 20 a 25 Jc dos animaes inoculados.

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Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

E’ possível que, com as passagens, o “vírus” tenha diminuído a sua pro-

priedade de provocar a inflammação escrota! ou, então, que com ellas tenha

desapparecido alguma causa coadjuvante que influa no processo e que possa

surgir de vez em quando

Este ponto, em todo caso, relativamente ao typho de São Paulo, precisa

de ser melhor elucidado, com o estudo de maior numero de amostras do "virus”,

sendo possível, como acontece em certas infecções do grupo (tobardillo), que

algumas possuam essa propriedade em maior gráu, embora em outras amostras

seja menos accentuada e mesmo ausente. A segunda amostra do virus que

isolámos comporta-se, a esse respeito, como a original que estudámos.

c) Immunidade. - Verifica-se, ainda pelo estudo do quadro, que as cobaias

que resistiram á infecção, tendo tido reacção febril característica, se mostram

immunizadas a uma segunda inoculação do “virus”, seguramente activo, pra-

ticada decorrido cerca de um mês. Isto só não se verifica nas cobaias que

não mostraram reacção thermica característica ou não a apresentaram de todo,

tendo sido inoculadas com material cuja avirulencia ficou demonstrada poste-

riormente. As que tiveram uma infecção ligeira, tendo sido inoculadas com

doses reduzidas de “virus” (principalmente sangue), mostraram-se também

immunizadas, nas mesmas condições.

Outros aspectos relativos á immunidade no typho endemico de São Paulo,

reacções sorologicas, etc., estão sendo estudados.

B) Comportamento do "virus” cm relação a outros animaes de labora-

torio. - Resumiremos apenas os resultados obtidos com a inoculação de alguns

outros animaes.

a) Coelho. - O “virus” inoculado, quer por via sub-cutanea, peritoneal

ou endo- venosa, provoca uma infecção, geralmente não mortal e que se caracte-

riza por um periodo de incubação de 3 a 4 dias c um período de reacção febril

perdurando geralmcnte de 4 a 6 dias.

Os dois graphicos (22 e 23), correspondentes aos coelhos 7 e 14, mostram

a evolução da infecção nestes animaes, de par com sua curva thermica e immu-

nidade a uma segunda inoculação do virus.

b) Ralo branco. - Dos vanos exemplares inoculados com o virus, por

via sub-cutanea ou peritoneal, pudemos verificar que a infecção se manifesta de

forma geralmcnte inapparente; ás vezes, pode-se observar pequena reacção ther-

mica pouco acima da media nesse animal que, de outro modo, nada de anormal

apresenta. O virus persiste durante certo tempo no organismo do rato e, trans-

ferido para a cobaia, determina infecção experimental característica neste

animal.

Das varias observações nesse sentido, citamos a experiencia com o rato

branco 6, inoculado cm 2-IV-932 com 3 cc. de sangue da cobaia 666, infectada

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

com o “virus”. A temperatura do rato não se modificou da media normal, de

36 # ,6 a 37°.4. Depois de 10 dias da inoculação, o rato, com a temperatura de

37*, 3, foi sangrado, sendo inoculada a cobaia 705, em 12-IV-932. A cobaia

705 apresentou infecção característica, com reacção febril durante 8 dias, após

incubação de 6 dias, tendo sido sacrificada em 26-IV-932 e sendo obtidas noras

gerações deste virus, passado pelo rato.

Verificações semelhantes t hemos com a inoculação do cerebro de ratos,

sacrificados alguns dias após a inoculação do virus.

c) Camondongo branco. - Apparentemeníe nada de anormal apresenta

como consequência da inoculação, pelo menos a se julgar pelos resultados

obtidos com alguns exemplares.

d) Rato cimento (Epimys norvegicus). - Foram inoculados alguns

exemplares. O primeiro (E. ttonvgiais 1) foi inoculado por via peritoneal

com o “virus” (emulsão de cerebro de cobaia infectada), em 16-IV-931.

Apresentou uma pequena reacção thermica acima da media normal no terceiro

dia após a inoculação, perdurando 6 dias, com uma oscillação no terceiro dia

c volta ao normal no nono dia da inoculação. Uma cobaia (X.° 184) inoculada

com sangue do rato (2 cc.), colhido em 24-IV-931, ultimo dia em que a tempe-

ratura se mostrou ainda acima da media normal, não apresentou reacção febril

e não houve indicio de immunidade quanto a uma segunda inoculação do “virus”

Este rato ficou muito mal e foi sacrificado em 13-V-931, sendo inoculada com

emulsão do seu cerebro a colma n.° 216. A’ necropsia do rato verificou-se um

abcesso eneystado produzindo uma adherencia do baço com a parede perito-

neal. A cobaia 216 não apresentou reacção alguma como consequência da

inoculação do cerebro do rato, porém reagiu caracteristicamentc, morrendo

dentro de 8 dias quando reinoculada, decorridos 28 dias, com o “virus”, não

se mostrando, pois, immunizada.

O resultado obtido com o outro rato (3/W rattus 2) foi mais interessante.

Inoculado com “virus” activo, por via peritoneal, em 16-1 V-931, não permittiu

que fosse tomada a temperatura, por ser exemplar pequeno. Apparentemente,

não mostrou symptoma algum, sendo sacrificado cm 6- V-931, isto é, 20 dias

depois da inoculação, quando foi inoculada com emulsão de seu cerebro a cobaia

n.° 215, cm 13-V-31. Esta teve reacção febril característica, amanhecendo

morta em 21-V-31. Com emulsão de cerebro foi feita nova passagem para a

cobaia n.° 229, que teve também reacção escrotal e morreu na noite do sexto

para o sétimo dia da inoculação.

Verifica-se, portanto, que o “virus” pode persistir no organismo do rato.

tornando infcctantc o seu cerebro, mesmo no fim de 20 dias, embora não deter-

mine uma infecção apparcnte.

Outro exemplar ( Epimys norvegicus 3) foi inoculado com o virus (emul-

são cer. da cob. 448) cm 23-X-931 ; nos 3 primeiros dias a media de sua teni-

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J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

peratura foi de 37°,l-37\5, no 4.° d:'a foi de 38°5. mantendo-se entre 38°,4 a 38", 7,

durante 8 dias, quando foi sangrado, morrendo acddentalmente durante esta

operação. O seu sangue foi inoculado na cobaia 491 que, decorridos 4 dias,

apresentou reacção febril (40*) durante 4 dias. Resistindo á infecção, foi

reinoculada com o vinis activo (emul. cer. da cob. 508) no fim de 20 dias. não

apresentando reacção, mostrando-se, pois, immunizada.

Estas verificações embora reduzidas em numero, apresentam grande im-

Portanda epidemiologica, pois indicam que os ratos (Mus e Epimys) pode-

rão servir de depositários do vinis, podendo-se, por isto, acreditar na pos-

sibilidade da transmissão deste ao homem por intermédio de parasitas hemato-

pbagos (pulgas, acarianos, etc.), communs nestes roedores (*).

e) Gaio. - O unico inoculado por via peritoneal, em 25-VI-931, não de-

nunciou nenhum symptoma clinico ou reacção febril. Seu sangue, inoculado na

cobaia 290, decorridos 13 dias, não lhe provocou reacção febril nem immuni-

dade ao virus activo.

f) Carneiro. - Não apresentou nenhuma reacção caracteristica e não nos

«oi possivel rehaver o virus, após 10 dias, por inoculação do sangue desse ani-

«fcal em cobaia.

Uma gallinha também inoculada não apresentou nada de anormal; também

0 seu sangue, no fim de 12 dias, não provocou reacção febril ou immunidade

cobaia 206. com elle inoculada, cm relação ao virus activo.

“• ■ Discussão.

Desde 1912, graças aos trabalhos de Nicolle (18) c collaboradores, em

Tiinis, e de Gavino e Girard (19) no México, se tornou bem conhecida a

^asibilidade apresentada ao typho pela cobaia, que desde então é o animal de

Acolha para o estudo desta infecção e de infecções affins.

Pelos nossos estudos experimentaes expostos, e que anteriormente já

Criamos resumido (20), verifica-se a extrema sensibilidade da cobaia ao virus

(*) Em outro trabalho foi estudado com minúcia este aspecto do problema rclati-

•^mente ao typho exanthematico de São Paulo. Mostrámos que. embora possam ser con-

l) derados como depositários, outros deverão ser pesquisados na iona suburbana c rural

'k cidade, onde a infecção característica se tem manifestado de preferencia. Os ratos

'ktta zona são pouco parasitados por pulgas e o transmissor que maiores probabilidades

^cra. segundo nossos estudos experimentaes, é o carrapato, principalmcntc o Amblyomma

ta )**nensf.

Por outro lado. de ratos da zona urbana da cidade, intensamente parasitados por

'-«gas. foi isolado um virus differente. cujas propriedades e relações com o typho exan-

^utatico de São Paulo (virus de doentes da zona suburbana ou rural) são estudadas

«“ 0r Tncnorúadamcnte nesse outro trabalho.

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4 1

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

do typho exanthematico de São Paulo, que lhe provoca, após uma incubação

de 2 a 6 dias, uma reacção febril perdurando geralmente 4 a 8 dias e termi-

nando com a morte de cerca de 70% dos animaes inoculados. As cobaias ma-

chos, quando inoculadas no peritor.eo, em proporção de 20 a 25%, apresentam

uma reacção escrotal caracterizada por edema e inflammação do escroto, po-

dendo ser, ou ligeira (apenas vermelhidão e edema), ou, ás vezes, mais intensa;

augmento accentuado do volume do orgam, retenção dos testículos, petechias e

placas hemorrhagicas e, embora raramente, mesmo necrose da pelle.

Esta synthese do comportamento experimental da cobaia com relação ao

nosso typhus é sufficiente para mostrar as suas difíercnças com as outras for-

mas do typho endemico e do typho clássico do velho continente.

Deste ultimo se distingue, sob tal aspecto, por apresentar menor período

de incubação e de reacção febril, e por ser muito mais grave. Ainda histolo-

gicamente delle se distingue, pela ausência ou extrema raridade das lesões no-

dulares no cerebro, o que se explica talvez pela evolução mais rapida da infecção,

assemelhando-se, quanto ao aspecto assignalado, a certas formas de typho en-

demico da America do Norte.

O typho exanthematico de São Paulo apresenta, relativamente á infecção

na cobaia, alguns outros aspectos que o differcnciam do typho endemico da

America do Norte ou do tobardillo. Segundo Maxcy (21), a incubação no

typho endemico dos Estados Unidos é, em media, de 6 a 7 dias (a menor de

4 c a maior de 14 dias) e a duração media da reacção febril de 7 dias,

nunca tendo excedido a 14 dias Estes períodos são um pouco mais curtos

no nosso typho. A presença da reacção escrotal verificada primeiramenie por

Ncill (22), em 1918. e muito bem estudada por Mooser (5), observámol-a no

nosso typho cm menor proporção (cerca de 20 a 25%) do que a assignalada

por Neill (70%) c Mooser (92,5%) nas cobaias inoculadas com o typho me-

xicano e por Maxcy (90%) nas inoculadas com o typho do sul dos Estados

Unidos.

No typho endemico do norte, muito raramente se observam phenomenos

hemorrhagicos intensos na região escrotal durante a reacção; no nosso são mais

frequentes, observando-se nos últimos dias também nas partes glabras (patas

principalmcntc) e podendo, em relação á região escrotal, terminar até pela ne-

crose da pelle, embora isto só aconteça raramente. Como na infecção da Ame-

rica do Norte, a reacção escrotal só se verifica nas cobaias inoculadas no peri-

toneo, ao contrario do que acontece com a febre maculosa das Montanhas

Rochosas, cujo vinis parece ter tendcncia á localização escrotal, pois provoca

ahi reacção mesmo quando inoculado por via sub-cutanca; alem disto, a reacção

é geralmente mais accentuada, mais intensos os phenomenos hemorrhagicos.

havendo, na maioria dos casos, necrose da pelle.

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

Mooser e outros têm assignalado raças de vinis do typho norte-americano

(tobardillo) que provocam reacção escrotal em geral ligeira ou mesmo imper-

ceptível, ao passo que, com outras raças, tal phenomeno é constante e mesmo

fcdo como pathognomonico ; em certos casos, a reacção desapparece após uma

5ç ne de passagens para resurgir durante algumas gerações.

Com o typho exanthematico de São Paulo, verificámos a reacção de um

“todo mais ou menos constante, nas primeiras passagens; mais tarde, tornou-se

ç * ; a inconstante, reapparecendo em alguns animaes, após uma serie de passagens

00 que não se observava de uma maneira evidente.

Não podemos ainda formar uma opinião definitiva sobre a reacção escrotal

n ° typho exanthematico de São Paulo, para o que seria necessário um estudo

^perimental de numerosas amostras do virus, o que não nos foi possivel rca-

li*ar. Apenas assignalámos os resultados obtidos com as 2 amostras que estu-

damos e que são objectivados nas photographias que acompanham este trabalho

(Estampas I, II e III).

Com relação á febre maculosa das Montanhas Rochosas, verificam-se seme-

Ihanças em alguns pontos, como a presença, embora não constante, no nosso

^■pho. de phenomenos hemorrhagicos cutâneos, podendo terminar pela necrose

c a accentuada pathogenicidade do virus.

Relativamente ao comportamento experimental do virus para com outros

in :maes de laboratorio, verificou-se com o typho de São Paulo, no coelho, uma

rc acção febril durante uma media de 5 dias após incubação de 4, não termi-

^ndo, em geral, a infecção pela morte. No rato branco, ou cinzento, a in-

ação é, geralmente, inapparente, evoluindo sem reacção febril que pode, ás

Ye * cs > manifestar-se de modo pouco accentuado, ou inapparente, podendo tam-

° Cln . como mostrámos, esses roedores (Mus e Efimys ) scr depositários do

^nis.

As observações sobre o comportamento experimental do virus do typho

^nthematico de São Paulo parecem justificar a sua separação como modali-

^de mórbida á parte, provavelmente de natureza autochtona, embora perten-

ce ao grupo geral das febres exanthematicas, com algumas das quacs se

^Crará, talvez, immunologicamente relacionado, não sendo impossível a sua

üíüra identificação com alguma das formas já descriptas de typho. Esta

pPatação a nosso ver se justifica, por enquanto, não só pelos dados assigna-

0s c por outros que serão mencionados, como pela diversidade do seu mais

P r °vavel agente transmissor, elemento que consideramos como bom critério para

4 difftrcnciação das infecções desse grupo.

4. .

Conclusões.

Estudando o comportamento experimental do virus do typho exanthema-

° 0 de São Paulo cm relação aos animaes de laboratorio, observámos a grande

SciELO

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Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

sensibilidade da cobaia, animal de escolha para o estudo da infecção, pois ella

apresenta, após incubação media de 3 a 4 dias, um 2 reacção febril característica

durante 4 a 8 dias, terminando a infecção pela morte em cerca de 70% dos

animaes inoculados.

As cobaias machos, inoculadas no peritoneo com o virus, apresentam, em

proporção de cerca de 20 a 25%, uma reacção escrotal, caracterizada por edema

e inílammação do escroto, podendo-se observar phenomeno hemorrhagicos (pete-

chias e placas hemorrhagicas) nas reacções mais intensas; estes phenomenos he-

morrhagicos são observados muitao vezes também em certas partes glabras do

animal (patas principalmente), no ultimo período da infecção e são então

muito evidentes logo após a morte.

Os coelhos apresentam reacção febril durante vários dias, após certa in-

cubação, não sendo, geralmente, a infecção mortal.

Com os ratos dá-se, muito provavelmente, uma infecção inapparente, po-

dendo estes roedores desempenhar o papel de possiveis depositários do virus-

Embora considerando o typho exanthematico de São Paulo uma modali-

dade á parte, mostramos e discutimos as suas possiveis relações com outras

infecções do grupo do typho, principalmente com o typho endemico da America

do Norte (tobardillo) e a febre maculosa das Montanhas Rochosas, ou cotC

uma infecção aliiada a esta e recentemente assignalada nos Estados Unidos

Capitulo III

Comportamento experimental do virus em certos simios (Si/enus,

Cebus e Alauatta)

Mostraremos agora o comportamento experimental do virus com relaçá°

a certos macacos pertencentes a tres generos ( SUenus , Cebus e Alauatta), rcsul'

tados já anteriormente resumidos (24) e que agora serão melhor exposto*

Foram ate agora inoculados 11 Silatus (Macacus) rhesus Goldf., 1820, 2 Ceb*

apclla Lin. c 1 Alauatta carayo Humb.

Dc referencia ás experiências com os rhesus, registaremos sómente os tf

sultados colhidos com a inoculação dc 8 exemplares por via pcritoncal (*)

(•) Posteriormente outros Macacus rhesus foram inoculados com as duas amostri*

de virus que estudámos. Estes macacos, nos. XII. XIII e XIV, tiveram todos infccC* 8

característica, mortal, e forneceram excellente material para passagens e para pesqui***

histopathologicas.

A designação dc Macacus rhesus foi também adoptada na texto, por ser ccmmemc 0 * 1

empregada, embora a denominação exacta desse simio seja Silcnus rhesus Goldf.. 1^

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J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

outros 3 serviram a experiencia de inoculação do vinis pela camara anterior

do olho e por isto serão referidos no capitulo seguinte.

O vinis era contido em sangue colhido em período propicio e em emulção

de cerebro de animal infectado, sacrificado em condições favoráveis, e inoculado

«gundo a technica já exposta.

*• * Resultados da experimentação.

O quadro annexo resume os resultados de nossas experiencias sobre o com-

portamento do vinis com relação a estes simios, sendo consignados também os

resultados obtidos em cobaias inoculadas com material delles proveniente e que

c °mprovam a infecção dos animaes (Quadro III).

Pelo estudo do quadro verifica-se que o Macacus rhesus é bastante sen-

tei ao vinis do nosso typho. Após uma incubação de 2 a 4 dias, obscrva->e

“nia reacção thermica característica perdurando uns 4 dias e cahindo brasca-

n*nte no fim deste tempo, seguida de collapso e morte do animal.

A evolução clinica da infecção assemelha-se á infecção amarillica expe-

nt nental, parecendo, embora não tenha sido muito elevado o numero de rhesus

'noculados, que o viras do nosso typho é para elles mais pathogeno do que o

amarillico, mesmo o de origem africana (amostra Asibi).

A infecção neste animal apresenta-se, ás vezes, com caracter grave, vc-

r ‘ficando-se hemorrhagias cutaneas que dão a certas partes mais glabras do

COr po (bolsa escrotal, face, etc.) uma coloração arroxeada, com aspecto de

^hymoses, em alguns pontos mais evidentes no ultimo dia c logo após a

Ol0rt e (Estampa IV).

Sóinente um dos animaes, Mac. rhesus X, não apresentou reacção febril

^ractcristica, sendo muito provável, pelos resultados da reinoculação viralcn-

**» que tenha tido uma forma benigna, inapparente, apesar do resultado ne-

^bvo da inoculação de uma cobaia com o seu sangue, colhido no 11.® dia, o

se poderia attribuir ao facto de não existir na occasião o viras na cor-

rent c circulatória ou existir cm muito pequena concentração, incapaz de pro-

Vocar a immunidade mesmo da cobaia.

Os Cebus também são sensíveis: dos 2 inoculados, um suecumbiu á in-

fec tfo. tendo tido reacção febril após incubação de 2 dias, e o outro teve

*I*nas reacção febril durante 10 dias, provocando também a infecção e im-

unidade de uma cobaia inoculada com o seu sangue.

Quanto ao representante do genero Alauatta, teve elle, após 3 dias de

'ncubação, reacção febril durante 3 dias e morte. Este animal, quando veiu

^* ra o nosso laboratorio, apresentava temperatura elevada (40° em media),

íu ° sendo, porisso, logo inoculado. Em esfregaços de sangue, verificaram os

^ r '- J- B. Arantes e F. da Fonseca estar elle infectado com certo trypanosoma

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52 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

( Trypanosoma manguinhense Fonseca et Arantes, 1932), embora em pequeno

numero e difíicilmente encontrado em preparações coradas. Depois de alguns

dias, quando foi inoculado com o vinis, a temperatura se mantinha em me-

dia de 39°,2, não sendo mais verificada a presença de trypanosomas, quer em

esfregaços ou em exames directos, e sendo negativas as culturas feitas com

o sangue do macaco para isolamento desse protozoário.

Embora estes Cebideos existentes entre nós pareçam sensíveis, somente o

estudo com maior numero de exemplares permittirá um juizo exacto sobre sua

reacção ao vinis do typho exanthematico de S. Paulo. Os graphicos annexos

mostram as reacções dos simios Inoculados, assim como as de algumas cobaia*

com material delles proveniente (Graphicos 24 a 38).

O estudo histopathologico, como acontece com as cobaias, apresenta ele*

mentos (ausência ou extrema raridade de lesões nodulares no cerebro, etc-,'

de distineção com o typho clássico do velho continente.

Esse estudo com o material dos nossos macacos foi feito por J. R. Meye'-

que provavelmente relatará os seus resultados. Communicou-me este colleg 2 3

ter observado nos macacos lesões semelhantes ás que havia verificado em ca-

sos humanos por elle necropsiados e estudados.

O simples comportamento experimental do vinis, com relação ao macaco- 1

como vimos no quadro annexo e pelo que já foi assignalado relativamente *

cobaia, é sufiiciente para dar ao nosso typho uma individualidade própria q 1 * j

o distingue do typho clássico e mesmo de outras formas do typho endemia

já descriptas e estudadas. Esta distineção apoia-se principalmente numa mai' ,í |

virulência c pathogenicidade do vinis.

2 - Resumo e conclusões.

A sensibilidade de macacos ao vinis das varias infecções pertencentes M

grupo do typho tem sido assignalada por differentes auctores. Em geral,

animal apenas apresenta reacção febril após cena incubação e muito raramc fi, ‘[

a infecção termina pela morte.

Estudámos o comportamento do vinis do typho exanthematico de São P aSJ '’ I

relativamcntc a simios pertencentes a tres generos ( SUcnus , Cebus e Alaual^l

Quanto aos dois últimos, embora ficasse evidente a sua sensibilidade ao v.i"- |

nada pudemos concluir cm definitivo, por termos trabalhado com um nufl

muito reduzido de exemplares. Com relação ao Silenus rhesus, foram assig

lados os resultados obtidos pela inoculação, por ria peritoncal, de 8 exemf

res c os das passagens, comprovadoras da infecção, feitas em cobaias.

Como consequência da inoculação do vinis, verifica-se, após uma ir

ção de 2 a 4 dias, uma reacção febril característica perdurando cerca <**

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Memórias do Instituto Butantan

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J. Lemos Monteiro — Typho exanthemalico de S. Paulo

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Graphico 38

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

dias, sendo que, geralmente, a temperatura desce bruscamente, cahindo o ani-

mal em collapso seguido de morte. Sob este aspecto a infecção se assemelha

á provocada pelo virus amarillico, parecendo, todavia, ser o do nosso typho

mais pathogeno ainda para esse animal.

Alguns dos nossos rhcsus apresentaram infecção de caracter mais grave,

verificando-se hemorrhagias cutaneas, manifestadas pela coloração arroxeada de

certas partes do corpo (partes mais glabras, face, escroto, etc.), ás vezes, com

aspecto de vastas ecchymoses, mais evidentes no ultimo dia e após a morte.

Estes estudos experimentaes, completando os obtidos com outros ani-

maes de laboratorio, especialmentc a cobaia, justificam as considerações que já

fizemos sobre a caracterização do typho exanthematico de São Paulo e suas re-

lações com as outras formas do typho.

Capitulo IV

Infecção experimental por inoculação do virus na camara

anterior do olho

Tendo sido estudado, nos capirulos anteriores, o comportamento experimen-

tal do virus do typho exanthematico de São Paulo com relação ao> animaes de

laboratorio e a certos macacos, mostraremos agora a marcha da infecção quando

se emprega como via de inoculação a camara anterior do olho destes animaes.

A proposito devemos declarar que essa inoculação visava especialmentc a pes-

quisa de rickettsias nas cellulas cndotheliaes da membrana de Descemet e no

humor aquoso dos animaes inoculados, o que nos foi suggerido pelos trabalhos

de M. Nagayo e collaboradores, no que concerne á tsutsugamushi (25) e ao

typho exanthematico (26).

Os primeiros resultados dessa pesquisa foram communicados em nota á

Sociedade de Biologia (10) e os estudos feitos no particular serão relatados

na 2.* parte deste trabalho.

Virus empregado e technica

Empregámos como virus: sangue citratado ou desfibrinado de cobaias, in-

fectadas, colhido em período de reacção febril e geralmcnte no seu 4.® dia;

emulsão de cerebro de cobaias e de Silcnus rhesus infectados e sacrificados em

occasião favoravel, sendo o orgam triturado e suspenso em solução physiologica

na proporção de 1 gr. para 10 cc. ; e, finalmente, humor aquoso de cobaias,

coelhos e rhcstu infectados por via ocular.

õG

J. Lemos Monteiro — Typho cxanthematico de S. Paulo

A quantidade inoculada foi geralmente de 0,1 cc. ou menos, raramente de

cc,, em alguns coelhos. Na injecção utilizámos uma seringa apropriada,

sumida de agulha fina, immobilizando o globo ocular do animal, que era anesthe-

stado com ether ou chloroíormio, e retirando previamente uma quantidade cor-

r espondente de humor aquoso.

A reacção local (ocular) e geral do animal inoculado era observada e a

“nfecçâo confirmada pelo resultado positivo apresentado, pelas passagens para

°uteos animaes, feitas com humor aquoso ou emulsão de cerebro. ou pela prova

immunidade praticada nos que resistiam á infecção.

!• • Resultados da experimentação.

O quadro annexo resume os nossos estudos expcrimentaes e as passa-

gens realizadas por meio de inoculação do virus por via ocular, assim como as

^Periencias accessorias relativas á inoculação de emulsão de cerebro dos ani-

les infectados por aquella via (Quadro IV).

Verifica-se, pelo estudo destes resultados, que a evolução da infecção, após

a inoculação do virus pela camara anterior do olho, é mais ou menos idêntica

a que se observa pela inoculação por outras rias (sub-cutanea, peritoneal e ve-

aosa ). conforme se deprehende de alguns graphicos annexos, nos quaes, aliás,

Se notam pequenas variações, explicáveis, porem, pela reacção individual ou pela

c °ncentração do virus no material inoculado (graphicos 39 a 54).

Com a inoculação por via ocular, a infecção se processa com quantidades

Amimas de virus (menores que 0,1 cc.), talvez insuíficicntes (tratando-se de

sangue), muitas vezes, para provocal-a por outra ria, mesmo a peritoneal.

Em certas cobaias inoculadas por via ocular com o sangue virulento, embora

tendo apresentado reacção local e geral característica, verificámos que o virus

P°óia ter soffrido uma attenuação, como nos casos das cobaias 32 e 33, e, na

Pesagem com emulsão de cerebro, apenas determinava uma infecção ligeira, com

mcubação longa, sem provocar immunidade do animal. Este facto é idêntico ao

que se observa ás vezes com o emprego desse material (sangue) em vez de

^ntulsão de cerebro, mesmo por outras vias, visto nelle não ser constante a

'‘irulcncia ou, melhor, a concentração de virus em todos os periodos da infecção.

Sempre que a infecção se processe de modo característico, isto é, com

re acçâo febril, os animaes, quando resistem, se mostram immunizados quanto

a uma segunda inoculação virulenta feita dentro de um mês; não havendo

feacção febril, a immunidade não occorre, nem mesmo quando se nota reacção

ocular, que terá outra causa, provavelmente contaminação por germes estranhos.

Por isto, sempre consideramos como reacção local positiva a seguida de reacção

febril característica.

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Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

SciELO

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J. Lemos Monteiro — Typho exanlhematico de S. Paulo

A reacção geral, isto é, febril, provocada pela inoculação do virus na ca-

anterior do olho das cobaias, coelhos e Macacus rhesus, é indicada no

rfadro, de modo que apenas diremos algumas palavras a respeito da reacção

l°cal, ocular, nestes animaes.

Reacção ocular - Após a inoculação do virus na camara anterior do olho,

certos symptomas oculares que podem ser considerados como especi-

I «os e que apparecem do 2.® ao 5.® dia, geralmente tendo o máximo de inten-

te correspondente ao da reacção geral.

No coelho a reacção ocular não é muito accentuada, em geral observa-se

nejamento, congestão pericorneal e uma irite aguda, com aspecto de irite

ro «. cm virtude do augmento de volume do humor e da tensão intra-ocular ;

opacidade da córnea é ligeira ou inexiste, podendo-se, por isto, facilmente

0i signaes da irite; estes signaes desapparecem depois de alguns dias, geral-

5 ‘ e com a volta da temperatura ao normal, podendo apenas persistir, ás

es . ligeira nebula.

Na cobaia, os symptomas são muito mais accentuados: a inflammação é

Js aguda e maiores o edema e congestão da conjunctiva, secreção e lacrimc-

ato; os signaes da irite são mais difficeis de ser verificados, pela colo-

pigmentar do olho deste animal e porque a opacidade da córnea, mais ou

15 accentuada, é mais precoce; ás vezes, a reacção é muito intensa, havendo

phtalmia em virtude do augmento muito pronunciado do humor e da tensão

,r a-ocular. Verificámos, em algumas cobaias, contaminação do humor por

estranhos, geralmente um diplococco Gram-positivo, depois de algumas

'^gcns, o que se pode attribuir á maior difficuldade technica da inoculação

Ca oiara anterior do olho destes animaes.

No Silcnus rhesus, a reacção é localmente pouco accentuada, mais com-

ly d á que se observa no coelho, talvez ainda menor.

Imntunidadc - Verificámos, por muitas experiencias, que os animaes que

e sen ta vam reacção local e geral característica e sobreviviam, se mostravam

Gizados relativamente a uma segunda inoculação do virus.

^ erificámos ainda que as cobaias immunizadas em consequência da inocula-

do virus por via peritoncal rão reagiram, quando applicada uma segunda

1 Ção por via ocular. Estas experiencias foram feitas, entre outras, nas

aas 4 e 31, que não reagiram febrilmente, embora tivessem tido reacção

* provavelmente traumatica, atypica.

kstes resultados de immunização cruzados das rias de inoculação, mostram

Pela ocular, a infecção se processa nas mesmas condições que pelas outras.

discussão e resumo.

Conforme acontece com o virus da tsutsugamushi e do typho exanthema-

'■ íc gundo as verificações de Xagayo e collaboradores (25, 26). o virus do

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72 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

typho exanthematico de São Paulo provoca, quando inoculado na camara ante-

rior do olho de certos animaes (cobaias, coelho e Silcntis rhesus ) uma reac-

ção ocular característica. Este phenomeno é seguido também de reacção g € "

ral, febril, semelhante á provocada nesses animaes pela inoculação do vim*

por via peritoneal.

Os nossos resultados, já ameriormente resumidos (27) são consignados

no quadro que acompanha o presente trabalho. Verifica-se que o comporta-

mento experimental do virus do typhus de São Paulo, quando inoculado pe**

via ocular, corresponde mais ou menos ao provocado pela inoculação por outras

vias; á reacção geral, febril, dos animaes e á marcha da infecção já assigna*

ladas, accrescc uma reacção local, nitida, no olho inoculado, caracterizada po f

inflammação e congestão da conjunctiva, lacrimejamento e opacidade mais °' J

menos accentuada da córnea e signaes de irite. Estes symptomas, geralmente

mais intensos na cobaia do que no coelho e rhesus, manifestam-se do 2.® ao -•

dia da inoculação, acccntuando-se durante a reacção geral do animal e persistindo

durante alguns dias.

A reacção ocular e a infecção processam-se, por essa via, pela inoculaçã 0

de doses pequenas (0,1 cc. e menos) do vinis (sangue virulento ou emulsão

de cerebro de animaes infectados colhidos em occasião propicia), muitas veze 5

incapazes, principalmente tratando-se de sangue, de determinar a infecção pd 3

via sub-cutanea e peritoneal. A infecção provocada por via ocular determin 3 *

nos animaes que sobrevivem, uma immunidade quanto á inoculação pelas outr3*

vias e, da mesma forma, os immunizados por estas e reinoculados na camar*

anterior do olho não apresentam a reacção local característica acompanhada de

reacção geral, febril.

Registámos inoculações do virus por via ocular c algumas passagens, utih'

zando-nos na inoculação somente do humor aquoso de um animal anteriormen te

infectado por essa via.

Estes estudos, realizados principalmente com o fim de pesquisar nos a* - *

macs inoculados a presença de rickettsias ou microorganismos semelhantes 5135

ccllulas epitheliaes da membrana de Descemet e no humor aquoso, representa* 51,

como se vê, uma confirmação dos trabalhos de Xagayo e collaboradores, real 1 *

zados com infecção aí fim. Quanto ao fim visado, diremos apenas que, naqu^'

las ccllulas c mesmo em macrophagos encontrados no humor, podem ser posW*

cm evidencia microorganismos que não se distinguem das rickettsias, de accot*

do com as descripções dos auctores que delias se têm occupado, devendo,

pesquisa, o animal ser sacrificado em occasião favoravel e que corresponda 31,1

máximo de intensidade da reacção local e geral.

Sendo a via intra -ocular também favoravel á infecção experimental, de**

ser a preferida sempre que se tentar o isolamento do virus, afim de se ve* 1 '

ficar si este, no sangue dos doentes, apresenta comportamento experimen^

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

r-kiU:co ao manifestado após passagem pelos animaes de laboratorio. Tal facto

P 05 o demonstramos com a amostra do virus que isolámos. O sangue citratado

p UJ na doente (virus W), inoculado na cantara anterior do olho de cobaias e

f JC-hos, determinou a infecção nas mesmas condições que após a inoculação

itoneal.

' Conclusões.

I* O virus do typho exanthematico de São Paulo, inoculado na camara an-

f tri °r do olho de certos animaes (cobaia, coelho e Silcnus rhcsus) determina

| Sna reacção ocular característica e reacção geral, febril, semelhante á provo-

por sua inoculação por via peritoneal.

II. Estas reacções são especificas da infecção pelo virus, em virtude dos

Atados das passagens obtidos pela inoculação de sangue ou emulsão de ce-

pkro co baias infectadas por via ocular e da immunidade dos animaes que

p 5) stiam á reinoculação do mesmo virus pelas outras vias.

III. O virus pode ser transmittido em serie por via ocular, utilizando-se

^ a inoculação o humor aquoso de um animal anteriormente injectado por

I ‘ via.

Capitulo V

Algumas propriedades do virus

Embora já resumidas em nota anterior (28), mostraremos agora com mais

/menor algumas propriedades do virus que estudámos, entre as quacs a sua

| l-,r abilidade, passagem através das mucosas, resistência ao dcseccamcnto, á

| da glycerina pura ou diluida e á congelação.

Alguns destes estudos representam a confirmação de factos já estabelecidos

im relação ao typho clássico e certas infecções affins; apresentam, cm todo

I' ’• r * interesse de terem s : ! > realiza los com uma n »vn tnodali la !e le infecção

i^upo das “febres typho-exanthematicas”. Correspondem também a rcsul-

I *o» preliminares de estudos ainda não definitivanicntc concluídos.

1'iltrabilidade do virus.

•Ifa/erín/ e technica. - As experiencias de filtração foram feitas com velas

l^fcelana (Chamberland U e li) e diatomaceas (Mandler, de 7 lbs. de

ç ' 5 ão, e Berkeíeld N). As Chamberland e Mandler, embora já utilizadas

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

anteriormente, verificámos estarem em boas condições pela esterilidade dos fil-

trados do liquido previamente addicionado de uma cultura microbiana (esta-

phylococco). A Berkefeld usada era nova, sendo sua integridade verificada da

mesma forma. A filtração foi feita sob pressão negativa de 30 a 40 cm. de

Hg.. O virus era constituido por cerebro de cobaia infectada, colhido em occa-

sião propicia (4.° dia da reacção febril), emulsionado rigorosamente em agua

physiologica e caldo glycosado a 1% (pH=8,0) na proporção de 1 gr. do orgam

para 10 e 20 cc. do vehiculo. O sangue virulento foi citratado e diluido antes

da filtração em agua physiologica na proporção de 1 para 2, sendo utilizado em

uma experiencia. Os resultados obtidos podem assim ser resumidos:

Experiência I. - Cobaia 15: inoculada em 21-1-931 com 5 cc. de filtrado,

em vela Chamberland L3, de emulsão, em agua physiologica (1 gr. para 10 cc.),

do cerebro da cobaia 8, infectada. Não apresentou reacção febril e foi reino-

culada, em 25-11-931, com o virus activo (emulsão de cerebro do S. rhesus

IV), não se mostrando immunizada, tendo tido, após 4 dias de incubação,

reacção febril e morrendo durante a noite de 11 para 12-III-931.

Experiencia II. - Cobaia 16: inoculada em 21-1-931 com 5 cc. de filtrado

em vela Chamberland L3, de emulsão, em caldo glycosado (1 gr. em 10 cc.) de

cerebro da cobaia 8, infectada. A cobaia não apresentou qualquer reacção fe-

bril como consequência da inoculação do filtrado, pelo que, em 25-11-931, foi

reinoculada com o virus activo (emulsão de cerebro do V. rhesus IV).

Como consequência, após incubação de 4 dias, teve reacção febril durante 6

dias, resistindo, porém, á infecção e permanecendo em observação durante longo

tempo.

Experiencia III. - Cobaia 36: inoculada em 7-II-931 com 1 cc. do fil-

trado (em vela Mandler de 7 lbs. de pressão) de emulsão, em agua physiologica

(1 gr. em 20 cc.), de cerebro da cobaia 24 (sacrificada no 6.° dia após a ino-

culação, 4.° da reacção, com a temperatura de 40°, 6). O liquido ficou quasi

todo retido, apenas pequena porção passando e com grande difficuldade. A

cobaia não apresentou reacção febril, pelo que foi, em 25-11-931, reinoculada

com o virus activo (emulsão de cerebro do S. rhesus IV), que causou, após

4 dias, uma reacção febril durante 5 dias e morte ás 12 horas de 8-1 II 931.

Experiencia 1\ . - Cobaia 3/: inoculada em 7—1 1—93 1 com 8 cc. de fihrado

(em vela Mandler de 7 lbs. de pressão) de emulsão, em caldo glycosado (1 gr-

em 20 cc.), de cerebro da cobaia 24. A filtração, com este vehiculo, dá-se com

relativa facilidade e em pouco tempo. Esta cobaia também não apresentou

reacção febril, sendo reinoculada em 25-11-931 com o virus (emulsão de cere-

bro do S. rhesus IV), que determinou, após incubação de 4 dias, uma reac-

ção febril característica durante 5 dias e morte na manhã de 8-1 11-931.

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo 75

Experiência V - Sangue citratado da cobaia 307, colhido em 24-VII-931, no

6.* dia da inoculação e 3.* da reacção febril (40°,5) foi diluido em agua physio-

logica na proporção de 1 2. Immediatamente foi inoculada a cobaia 312 com

3 cc. da diluição, correspondente h 1 cc. de sangue in natura. Iniciou-se a fil-

tração em vela Berkefeld N, sob pressão negativa de 40 cm. de Hg., processan-

do-se ella com difficuldade. Xo lim de 2 yí horas haviam passado 3 cc. do

liquido, sendo este filtrado (correspondente a 1 cc. do sangue in natura ) ino-

culado no peritoneo da cobaia 313. Na mesma occasião, isto é, decorridas

2 J4 horas após a colheita, outra cobaia, 314, foi inoculada com 3 cc. do res-

tante do liquido que deixara de passar, afim de se assegurar si esse lapso

de tempo não prejudicaria o virus e, portanto, a experiencia. Eis os resulta-

dos obtidos :

Cobaia 312: inoculada em 24-VII-931 com o sangue citratado diluido da co-

ba:a 307, immediatamente após a colheita: reacção febril característica durante

3 dias, após 2 de incubação, e morte ás 12 horas de 30-VII-931.

Cobaia 313: inoculada em 24-VII-931 com o filtrado de sangue citratado di-

vido da cobaia 307 : não apresentou reacção alguma, tendo morrido por outra

causa no fim de alguns dias. Emulsão de seu cerebro foi inoculada na cobaia

316 que, por sua vez, nenhuma reacção apresentou e nem se mostrou immuni-

za da. Este resultado confirma a não infecção da cobaia 313 e que o virus não

havia atravessado a vela.

Cobaia 314: inoculada em 24-VII-931 com sangue citratado diluido da cobaia

307, após 2 y 2 horas da colheita, isto é, com o mesmo lapso de tempo que o fil-

trado também inoculado em outra cobaia: reacção febril característica durante

^ dias, após 3 de incubação, e morte ás 11 horas de l-VIII-931.

Nas experiencias com emulsão de cerebro a actividade do virus nella exis-

tfi nte antes da filtração foi também verificada, como se pode vêr em protocollos

I a assignalados no capitulo II. Pelas experiencias descriptas verifica-se que o

Vlr us existente em emulsão de cerebro, mesmo usando como vehiculo o caldo

Slycosado, e no sangue, nas condições assignaladas, não atravessa as velas Cham-

herland L3 e L5, Mandler de 7 lbs. e Berkefeld N.

2* - Passagem através da conjunctiva ocular intacta e D.M.I. (dose minima

infectante) do virus.

Certos virus atravessam, com relativa facilidade, a conjunctiva ocular e

^stno a própria pelle intacta. Procurámos, por isso, verificar esse facto com

rela Ção ao typho exanthematico de São Paulo, assim como a D. M. I. do virus,

l6l) do obtido os seguintes resultados:

1, | SciELO

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Experiência VI - Passagem através da conjunctiva ocular. Em 25-III-931

collocámos uma grossa gotta de emulsão de cerebro da cobaia 129 (1 gr. do

orgam para 10 cc. de agua physiologica) na conjunctiva ocular da cobaia 140.

A gotta permaneceu durante cerca de 15 minutos sobre o olho do animal, man-

tido em posição e sendo feitos movimentos palpebraes para que a emulsão fi-

casse em contacto com todo o sacco conjunctival ; a gotta, tendo escorrido, foi

renovada uma vez. Como consequência, não se observou qualquer reacção local

e geral da cobaia. Em 22-IV-931 foi, por isto, reinoculada com o virus por

via peritoneal (emulsão de cerebro da cobaia 169) : após incubação de 2 dias,

apresentou reacção febril característica durante 9 dias, morrendo durante a noite

de 3 para 4-V-931. A presença do virus, em dose infectante, nas gottas deposita-

das, demonstrou-se pelas experiencias seguintes referentes á sua D. M. I..

D. M. I. do virus — Varias cobaias são inoculadas por via peritoneal com o

vinis em varias diluições. Al.* considerada a 1 por 10 (sendo de facto menor)

foi preparada, tomando 1 gr. de cerebro da cobaia 129 (sacrificada no 5.° dia da

inoculação e 2.° da reacção febril) para 10 cc. de agua physiologica; a emulsão

foi feita cuidadosamente em gral de porcelana. Desta, foram obtidas as outras

diluições, usando-se, para cada uma. nova pipeta, afim de serem evitadas causas

de erros na diluição do virus. Foi inoculado 1 cc. das diluições do virus a 1

por 10, 1 por 1000, 1 por 10.000 e 1 por 1.000.000.

Experiência VII - Cobaia 135: inoculada em 25-111-931 em emulsão de

cerebro da cobaia 129 (dil. a 1:10), por via peritoneal. Após incubação de 2

dias, apresentou reacção febril característica durante 5 dias, sendo sacrificada e®

l-IV-931 para novas passagens do virus.

Cobaia 141 : também foi inoculada nas mesmas condições, porém por via

subcutânea; após 4 dias, teve reacção febril durante outros 4, sendo também

sacrificada para passagens em 2-IV-931.

Experiência VIII - Cobaia 136: inoculada em 25-III-931 com emulsão de

cerebro da cobaia 129, diluida a 1 por 1000. Após incubação de 5 dias, apre-

sentou reacção febril acima de 40° durante outros 2 e amanheceu morta em

5-IV-931, 10 dias após a inoculação.

Experiência IX - Cobaia 13/ : inoculada em 25—1 11—93 1 com emulsão de

cerebro da cobaia 129, diluida a 1 por 10.000. Após incubação de 6 dias, reac-

ção febril durante 3 dias e morte na noite de 5 para 6-IV-931, isto é, 11 dias

após a inoculação.

Experiência X - Cobaia 13S: inoculada em 25—1 11—93 1 com emulsão di-

luida a 1 por 1 .000.00, do cerebro da cobaia 129. Xão apresentou reacção febrd

pelo que em 22-IV-931 foi reinoculada com o virus activo (emulsão de cerebro

SciELO^o

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

QUADRO V

Resistência do vírus do typho exanthematico de São Paulo

ao deseccamento no vacuo

N.° do

animal

Virus secco

inoculado

Dose,

grs.

Dias de

conser-

vação

Resul-

tado da ■

inocula-

ção

Cobaia 53

(18-11-31)

Cerebro

da cobaia 2

0,105

nega- |

tivo

Cobaia 54

(18-11-31)

Sangue da

cobaia 19

0,120

nega-

tivo

Cobaia 55

(18-11-31)

Sangue do

rhesus I

0,380

Amanhe-

ceu mor-

ta em

20-11-31

Cobaia 56

(19-11-31)

Cerebro do

rhesus II

0.400

negativo,

por não

apresen-

tar reac-

ção fe-

bril

Cobaia 62

(21-11-31)

Sangue do

rhesus I

0,120

nega-

tivo

Cobaia 73

(24-11-31)

Cerebro do

rhesus II

0,400

nega-

tivo

Observações

Em 20-1 11-31 foi reinoculada

com o vinis activo (emul.

cer. cob. 113), tendo tido

reacção febril característica

após 3 dias de incubação.

Em 20-III-31 foi reinoculada

com o vinis activo (emul

cer. cob. 113). tendo tido in-

fecção característica, febre

por 6 dias, após 3 de incu-

bação e morte.

A causa da morte foi perito-

nite, verificada na necro-

psia, não sendo este resulta-

do tomado em consideração-

Em 20-III-31 foi reinoculada

com o virus activo (emul

cer. cob. 113). Não apresen-

tou reacção febril durante

longa observação, mostran-

do-se, pois, immunizada.

Em 20-III-31 foi reinoculada

com o virus activo (er°t*-

cer. cob. 113), tendo inf eC '

ção característica após

dias de incubação.

Em 25-III-31 foi reinocul

.lada

iuL

com o virus activo ( enl

cer. cob. 129), tendo re^Ç

ção febril característica aP® 5

4 dias de incubação.

J. Lemos Monteiro — Typho exanthemalico de S. Paulo

O virus dos animaes, utilizado no dcseccamento, mostrou-se activo ao ser

inoculado fresco, isto é, após a colheita e nas condições que já assignalámos

anteriormente.

Verifica-se pelo quadro acima que o virus do typho exanthematico de São

Paulo, quando no sangue ou cerebro de animaes infectados, depois de secco no

vacuo, sob acido sulfurico. não resiste a uma conservação em condições favo-

ráveis (abaixo de 0°C) por prazo superior a 24 horas. Neste prazo, 24 horas,

° virus secco não provocou reacção febril, porém, a immunidade do animal, ve-

rificada 30 dias depois, em relação a nova inoculação do virus activo, poden-

do-se, portanto, acreditar que tenha apenas provocado uma infecção benigna.

Já em 6 dias de conservação, não só não provoca reacção alguma da cobaia,

como esta não se mostra mais immur.izada em relação á segunda inoculação do

'orus activo. E’ preciso notar que as doses do virus secco inoculado (em 2

e xperiencias de quasi y 2 gramma) foram badante elevadas si se tiver em mente

a dose infectante, principalmente de cerebro fresco, como já mostrámos.

b) Resistência do virus na glyccrina pura e na glycerina a 50%. - Em

u ma nova serie de experiencias procurámos verificar a resistência do virus na

Slycerina pura e na glycerina a 50 %, em condições favoráveis de temperatura

(5°C), meios que, como se sabe, são empregados para a conservação de diver-

503 virus. A glycerina utilizada foi a mesma usada no serviço de vaccina ani-

m al do Instituto (embora sua reacção tenha se mostrado acida em verificação

,e 'ta posteriormente), distribuida em tubos, pura, ou diluida a 50 % com agua

destillada. Introduzido o virus (pedaços de cerebro de animaes infectados, sa-

cr ificados em occasião propicia) eram os tubos lacrados e conservados no frigo,

^corridos vários períodos de tempo, pequena porção era retirada, lavada, emul-

s 'onada em agua physiologica e inoculada em cobaias para verificação da

ac tividade.

Os resultados são resumidos no quadro VI, que segue.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

QUADRO VI

Resistência do virus em glycerina dilui Ja a 50 %

N.* do

animal

e data

Virus

empregado

Dias de

conser-

vação

Resultado da

inoculação

Observações

Cobaia 76

(24-11-31)

Cerebro do

rhesus II

Reacção febril ca-

racterística duran-

te 5 dias. após uma

incubação de 7 c

morte ás 13 hs. de

9-III-31.

Cobaia 77

(24-2-31)

Cerebro do

rhesus I

Reacção febril,

após incubação

de 5 dias. Resis-

tiu á infecção.

Em 25-III-31 foi reinoculada

com o virus activo (emul.

cer. cob. 129), não apresen-

tando reacção febril e raos-

trando-se, pois, immunizada-

Cobaia 78

(24-11-31)

Cerebro da

cobaia 19

negativo

Em 25- II 1-31 foi reinoculada

com o virus (emul cer.

cob. 129). Apresentou reac-

çâo febril característica após

4 dias de incubação, tendo

tido inflammação escrotal.

com placas hcmorrhagicas

nos últimos dias.

Cobaia 79

(24-11-31)

Cerebro da

cobaia 8

negativo

Em 25-III-31 foi reinoculada

com o virus (emul. cer.

cob. 129). tendo tido infec-

ção característica após 4 dias

de incubação. Também apre-

sentou reacção escrotal com

placas hcmorrhagicas nos úl-

timos dias.

Resistência na glycerina pura

Cobaia 75

Cerebro do

negativo

Em 25-1 11-31 foi reinoculada

(24-11-31)

rhesus II

com o virus (emul. cer.

cob. 129). Apresentou rcac-

ção febril característica, após

incubação dc 4 dias.

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

Verifica-se assim que o virus, quando no cerebro, conserva sua vitalidade

cm glycerina diluida a 50 % e em condições favoráveis de temperatura, durante

12 dias. Neste prazo talvez esteja já um pouco attenuado, provocando a in-

fecção com incubação maior do que commummente. Em 7 dias, neste meio,

5Ua actividade é igual á do orgam fresco e em 24 dias se mostrou avirulento,

não provocando nem a immunidade do animal.

Na glycerina pura sua resistência é menor, pois que em 7 dias se mostrou

avirulento (o mesmo virus que, neste prazo e em glycerina a 50 %, se compor-

tou como virus fresco), não provocando siquer a immunidade da cobaia. Neste

nieio não foi verificada a resistência após menor prazo. E’ possivel que me-

lhores condições de reacção favoreçam a sobrevivência do virus neste meio. Em

todo caso estes resultados são sufficientes para mostrar que. com relação á sua

conservação em glycerina pura ou diluida, o virus do typho de São Paulo não se

comporta ccmo os verdadeiros virus chamados filtráveis.

c) Resistência do virus á congelação. - Finalmente, para terminar o es-

tudo de algumas das propriedades do virus do nosso typho e que deverá ser

completado pelo de muitas outras, procurámos verificar o seu comportamento

com relação á congelação do orgam virulento.

Para esse fim, pedaços de cerebro de cobaia infectada eram collocados em

Pequenos tubos que eram simplesmente arrolhados, lacrados e conservados em

congelação (-5° a -10°C). Decorndo certo numero de dias, uma pequena porção

er a retirada, emulsionada em agua physiologica e immediatamcntc inoculada cm

Uf na cobaia normal.

Os resultados até agora observados são resumidos no quadro VII, se-

guinte:

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

QUADRO VH

Resistência do virus em congelação

N* do

animal

Viras em

congelação

e data

Dias de

conser-

vação

Resultado da inoculação

Observações

Cobaia 219

(14- V-31)

Cerebro

cob. 201

(12-V-31)

Reacção febril caracteristica

durante 4 dias, após incubação

de 4 dias c morte durante a

noite de 23 para 24-V-931.

Cobaia 220

(14-V-31)

Cerebro

cob. 19

(6-V-31)

Reacção febril caracteristica

durante 4 dias após 3 de in-

cubação e morte na noite de

21 para 22-V-931.

Cobaia 221

(14-V-31)

Cerebro 15

cob. 182

(29-1 V-31)

Reacção febril caracteristica

durante 3 dias após 3 de in-

cubação e morte pela manhã

de 22-V-31.

Cobaia 222

(14-V-31 ,

Cerebro

cob. 112

(18-1 V-31)

Reacção febril typica durante

7 dias. após 3 de inctiação e

morte na noite de 25 para

26-V-931.

Cobaia 223

(14- V-31)

Cerebro

cob. 141

(2-1 V-31)

Reacção febril caracteristica

durante 5 dias. após 4 de in-

cubação e morte na noite de

23 para 24-V-931.

Cobaia 261

(22- VI -31)

Cerebro

cob. 135

(l-IV-31)

Não apresentou reacção cara-

cterística. mostrando- se nega-

tivo o resultado da inoculação.

Foi reinoculada

com o virus acti-

vo (cm. cer. cob.

275), cm 14-VII-31:

após 2 dias de in-

cubação. apresen-

tou reacção carac-

teristica durante 4

dias e morreu na

manhã de 23-VII-31J

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo 83

r. *-•'

Verifica-se por estes resultados que o vinis do typho exanthematico de

São Paulo no orgam (cerebro) em congelação manteve sua vitalidade e viru-

lência durante um período de tempo superior a 42 dias e inferior, numa expe-

nencia, a 82 dias. O prazo exacto precisa ser ainda verificado por maior por-

centagem de cerebros infectantes, o que presentemente está sendo feito (*).

Esta verificação é de interesse pratico, pois facilita e toma mais economica

a conservação do viras no laboratorio e mostra um meio pelo qual poderá elle

* er transportado, em viagens mesmo longas, sem perda da sua virulência.

- Discussão e resumo.

Embora considerado como pertencente ao grupo de infecções causadas

Pdos chamados “viras filtráveis”, o typho em suas varias modalidades apre-

sta certas particularidades pelas quaes se evidenciam differenças que auctori-

* a m sua inclusão em um grupo á parte. Em primeiro logar se col locam suas

r dações, de causa e ef feito, com as rickettsias, embora ainda não tenha sido

^•ta a ultima palavra sobre estes elementos, sua biologia, evolução, etc.; em

Sç guida, certas propriedades do “viras” do typho não correspondem perfeita-

m cnte ás dos viras verdadeiros. Procurámos estudar, em relação ao “viras”

'1° typho exanthematico de São Paulo, algumas destas propriedades, entre as

l^aes a sua filtrabilidade, passagem através das mucosas e D. M. I., resisten-

C!a ao deseccamento, á acção da glycerina pura ou diluida e resistência á

^ngelação.

Em relação á filtrabilidade, verificámos que o viras, quando no orgam (cc-

r ebro) virulento, diluido em agua physiologica ou em caldo glycosado, meio

1 Ue favorece a filtrabilidade do viras vacei nico, segundo verificámos juntamen-

ie «>m R. Godinho (29), assim como no sangue virulento diluido, não atra-

Vt5 sa as velas Chamberland L3 e L5 e as velas diatomaceas Mandler, de 7 Ibs.

e Bcrkefeld N.

Estes resultados concordam com os de muitos auetores, como Ricketts e

^ilder (30), Olitsky (31), Zinsser e Batchcldcr (32) e mostram que o agente

typho não pode ser considerado filtravcl, como, cm idênticas condições, acon-

iece » por exemplo, com o viras do herpes e o da vaccina, segundo verificaram

01 dois últimos auetores. Alguns resultados duvidosos de filtração assignala-

< ^ 0s Por Nicolle, Conor c Conscil (33) e alguns positivos de Xicollc e Labailly

fazem pensar que o agente seja menor do que as bactérias communs ou

tÇnha phases cm que o é, podendo ás vezes atravessar certos filtros, mas que

a ° maiores do que os verdadeiros viras filtráveis. Isto se justifica pelo que já

** conhece sobre o pleomorphinno, tamanho e outras particularidades das

^cmsias.

e ^f*) Em experiências posteriores, verificámos que o vinis se mantem virulento, nas

^*t'ÇÕes assignaladas (em congelação, em frio sccco) no fim de quasi 1 anno. quando ain-

Pfovocou. numa experiência, reacçáo ligeira, após incubação mais longa.

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Outro facto que se observa geralmente com os virus é sua passagem atra-

vés da mucosa ocular intacta, o que, em uma experiencia, não conseguimos com

o virus do nosso typho, apesar de que sua concentração no material depositado

na mucosa ocular era sufficiente para provocar, por outra via, a infecção. Isto

se evidenciou pela determinação da D. M. I. (dose minima infectante) que cor-

respondeu a uma diluição superior a 1/10.000 e inferior a 1/1 .000.000 da emul-

são cerebral. Sparrow e Lombroso (35) conseguiram, em algumas experiên-

cias, infectar cobaias com o virus do typho clássico através da mucosa nasai.

principalmente repetindo as applicações, e obtiveram resultados inconstantes c

duvidosos por ria conjunctival, sendo que nos casos considerados positivos a in-

fecção era attenuada. com longa incubação e fraca elevação tbermica e não

seguida sempre de immunidade do animal.

Em relação a outra propriedade que estudámos, a resistência ao doecca-

rnento, é um facto geralmente verificado com os virus verdadeiros e, nestes

últimos annos, ficou bem estabelecido para o da febre amarella que, dest»

forma, no vacuo e em baixa temperatura, se conserva por longo tempo, e era

já conhecida em relação ao virus vaccrnico, ao da encephalomyelite enzootk*

(doença de Borna). etc.. O ultimo, segundo verificação de Xicolau e collabo-

radores (36) se conserva em estado secco, mesmo com temperatura de 16* í

20“C e não ao abrigo da luz, pelo menos durante 373 dias.

A nossa verificação neste sentido, em relação ao virus do typho de Sá-'

Paulo, apresenta certa importância epidemiologica, pois, não resistindo elle p° r

alguns dias ao deseccamento, quando, por exemplo, se acha nas fezes de hem< v

sugadores (piolhos, percevejos, carrapatos, etc.), a sua transmissão por e>*

meio através da pelle sã ou com erosões não é provável que se dê, ao contrari»’

do que já foi verificado experimentalmente em relação ao virus amarillico quan-

do nas fezes de Aid cs acgypti (37) e Cimcx lectularhis (38) infectados, a n»* 1

ser que na sua phasc de rickettsia, encontrada no transmissor habitual, sua

sistencia ao deseccamento seja maior.

A outra propriedade estudada que possuem os virus quando, especialmetii*i

em condições favoráveis de temperatura, foi a resistência á glyccrina pura

diluida a 50 % Estes meios são utilizados para a conservação de certos viru>

A este respeito verificámos que o virus do typho exanthematico de São Paul''-

quando no cerebro infectante e em condições favoráveis de temperatura (5*6 1

não resiste durante 7 dias na glycerina pura e que na glyccrina diluida a 5CK* I

bom agua destinada conserva sua virulência durante 12 dias (reacção febril c r

ractcristica ai>ós incubação um pouco mais longa, de 5 dia', e immunidade

animal), estando destruido cm 24 dias e, muito provavelmente, antes deste pra** I

verificado. Esta verificação deve em todo caso, ser repetida com glycerina c: ' \

melhores condições de reacção.

Finalmente, em relação 4 soa vitalidade no organi (cerebro) nwntido c* 1 I

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

J. Lemos Monteiro — Tgpho exanthematico de S. Pauto

congelação, verificámos que o viras do typho de São Paulo reriste durante um

prazo de cerca de 1 anno, r.egundo verificação posterior ás experiencias citadas.

Este facto apresenta interesse pratico, pois a congelação do cerebro in-

fectante (simplesmente collocado num frasco ou tubo arrolhado e em tem-

peratura de -5 o a -10" C) torna mais economica a conservação do viras no

iaboratorio, dispensando as passagens successivas em animaes, e indica um meio

pelo qual poderá ser transportado a grandes distancias, sem perda da sua vi-

rulência.

São estas algumas características do viras do typho exanthematico de São

Paulo, devendo ser continuado o estudo de outras das suas propriedades (*).

5. - Conclusões.

I. O viras do typho exanthematico de São Paulo, quando no sangue ci-

tratado ou no cerebro emulsionado em agua physiologica ou caldo glycosado,

nas condições experimentaes assignaladas neste trabalho, não passa através das

velas Chamberland L3 e L5, Mandlcr de 7 lbs. c Berkefeld X.

II. Xão conseguimos mfectar a cobaia pela deposição do viras (emulsão

de cerebro) na mucosa ocular intacta, embora no material depositado sua con-

centração fosse sufficiente para provocar, por outra via. a infecção.

III. A D. M. I. (doso mínima iníectante) do virus correspondeu a uma

diluição superior a 1 por 10.000 e inferior a 1 por 1 .000.000 da emulsão

cerebral.

IV. Quando secco no vacuo, sob acido sulfurico c conservado tamlicm

no vacuo e em tcmjieratura inferior a 0"C, o virus (sangue ou cerebro)

perde sua vitalidade cm prazo pouco superior a 24 horas, quando apenas pro-

vocou infecção benigna c immunidadc do animal ; cm 6 dias já sc achava des-

truído, não provocando siquer immunidadc.

V. Em glycerina diluída a 50% c em temperatura de 5®C o virus (no

cerebro) apresenta vitalidade e virulência no 12.° dia c não no 24.® dia.

VI. Xas mesmas condições, porém cm glycerina pura, já havia perdido

$ua actividade em 7 dias.

VII. Quando no orgam (cerebro) congelado, o virus do typho cxanthc-

niatico de São Paulo conserva sua vitalidade e virulência por cerca de 1 anno.

(•) Com a collaboração do distincto collcga D. von Klobusitzky. tivemos opportu-

tndade de realizar também algumas experiencias de cataphorcsc com o virus do nosso typho.

Estes resultados serão dcscripto» cm outro trabalho. Diremos apenas que cm soluto

tampão neutro ( pH =6,967) e após 1 horas de corrente o virus passa para o polo

Uegatrvo. sendo, portanto, de carga eléctrica positiva. As experiências com emulsão do

virus cm tampões ácidos c alcalinos e consequente mar dia do virus vara o cathodo e

anodo serão descriptas com pormenor no trahalho assignalado

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

VIII. A congelação do cerebro virulento é, em virtude da conclusão aci-

ma, um meio favoravel para o transporte do virus e, sob o ponto de vista pra-

tico, torna mais economica sua conservação no laboratorio, por trazer uma re-

ducção do numero de animaes necessários para sua manutenção por passagens

successivas.

Capitulo VI

Febres exanthematicas

Estudos comparativos, em relação á cobaia, de amostras do virus

do typho clássico do velho mundo, typho endemico da America do

Norte e typho exanthematico de São Paulo

O conceito sobre a diversidade da infecção exanthematica no velho e no

novo mundo sofíreu ultimamente certas modificações, sendo a primeira consi-

derada como a forma epidemlca, transmitrida pelo piolho e tendo o homem

como depositário do virus e a segunda como a forma endemica. transmittida

pela pulga e tendo como depositário do virus na natureza o rato.

O proprio Mooser (39) modificou alguns dos seus pontos de vista ante-

riormente emittidos e pensa que o virus responsável pelo typho exanthema-

tico clássico tem também uma origem murina e que sua passagem prolongada

pela pulga e sobretudo pela pulga transferida de rato a rato faz com que adqui-

ra as propriedades do virus americano, isto é, da forma endemica. Por outro

lado, o virus responsável por esta forma (virus americano) augmenta sua vi-

rulência pela passagem prolongada pelo piolho-homem, dando a forma epidê-

mica com as características do virus do typho do velho mundo.

Esta supposição, que Mooser pensa ter verificado cxpcrimcntalmente, pa-

receria encontrar confirmação nos resultados obtidos por diversos auetores no

velho continente, em virtude do isolamento, em pulgas e ratos de certos lugares

(Athenas, Pircu, Toulon c mesmo Paris), de amostras de virus com os cara-

cteres experimentaes do typho endemico ou americano (Lcpinc, Mercandicr e

Pirot, Caminopctros e Pangalos, Brumpt).

Apczar destas possibilidades, achamos que se deve manter a diversidade

das duas variedades, tanto sob o ponto de vista scientiíico, por apresentarem

differenças clinicas, experimentaes e cpidcmiologicas, como sob o ponto de vis-

ta pratico para o estabelecimento das medidas de prophylaxia adequadas a cada

uma. Este modo de pensar ainda se justifica pelo que se sabe hoje sobre

as mutações e variações microbianas em geral. No caso do typho exanthema-

tico, a passagem prolongada por novo transmissor e depositário daria á rickettsia

responsável novas propriedades, modificando-lhe a biologia e individualizando,

assim, a forma resultante, causadora da nova forma da infecção.

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

São numerosos na microbiologia os exemplos desta natureza e mesmo en-

tre os vírus verdadeiros é conhecida a mudança da biologia e propriedades do

virus variolico pela passagem em especies animaes diversas, dando entre outros

o virus vaccinico. Ambos apresentam atfinidades, demonstradas pelas provas

d* immunidade cruzada e de reversão, pela passagem prolongada do virus va-

riolico em vitellos. Sob o ponto de vista scientifico c pratico, porém, a diver-

sidade de ambos está estabelecida enquanto a própria identidade ainda não é

ac ceita por todos os experimentadores.

Os conhecimentos das relações vario! o- vacei na poderão scr applicados aos

das do typho exanthematico do velho mundo (epidemico) e do typho améri-

co (endemico).

O typho endemico, igualmente verificado em outras regiões além da Ame-

rica, ainda se distinguiria do typho murino (enzootieo nos ratos) e que póde

também, pelas pulgas, transmittido ao homem, provocando uma infecção

Wgna (doença de Brill, typho náutico, febre marsclhesa).

Ao lado deste primeiro grupo, que tem por typo o typho epidemico, clás-

sico. do velho mundo, temos o segundo, cuja infecção typo é a febre ma-

culosa das Montanhas Rochosas e onde se encontram a febre botonosa, o typho

d« S. Paulo, a tick-bite-fever, etc.; e finalmentc, consideramos um terceiro gru-

P®. cuja infecção typo é a “tsutsugamushi” e cujos transmissores são larvas de

rertos trombidiideos.

Este ponto de vista é o que adoptamos no momento, por considerarmos

Çuc melhor corresponde aos resultados de estudos feitos ultimamente em dif-

erentes países.

Como complemento da primeira parte deste trabalho sobre o typho exan-

thenatico de São Paulo, resumiremos, no quadro seguinte, uma serie de ca-

^cteres que apresenta, rclarivamentc á cobaia, o respectivo virus, compara ti va-

^ente com amostras de virus do typho exanthematico clássico europeu (amos-

tras Wolbach e Breil) e do typho endemico da America do Norte (amostras

^fooser e Maxcy).

Os dados referentes aos dois últimos foram retirados dc trabalhos de di-

v crsos auetores que se têm occupado do assumpto c os relativos ao typho

de São Paulo, dos nossos estudos pessoaes assignalados no presente trabalho.

Além destas differenças quanto ao comportamento experimental na co-

baia, outras existem rclativamcntc á histologia pathologica c epidemiologia destas

diversas formas. Quanto a este ultimo aspecto, pode-se considerar como esta-

belecido que o typho do velho mundo, epidemico, c transmittido pelo piolho;

0 typho americano, endemico. pela pulga c o typho de São Paulo, muito pro-

vaveln v-nt r pelo carrapato Amblyomma cajcnncnsc, segundo nossos estudos cx-

P^rimentaes (-10) e certas observações clinicas e epidcmiologicas de J. T. Piza.

Eis o quadro relativo ao comportamento na cobaia (Quadro VIII):

ISciELO

D 11 12 13 14 15 16

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

RESUMO E CONCLUSÕES DA 1.» PARTE

Al.* parte deste trahalho, que reune os resultados que obtivemos até ago**|

com o estudo experimental do typho exanthematico de São Paulo, está dividio#|

em 5 capítulos, abrangendo cada um determinada serie de pesquisas.

Xo capitulo I, como introducção, fizemos considerações geraes sobre

diversas modalidades da infecção do grupo do “typhus” ou das chamadas "tí"l

bres exanthematicas”, principalmente as encontradas no continente american®!

Mostrámos as formas encontrados no hemispherio norte, onde têm sio®!

bastante estudadas (typho clássico, typho endemico da America do Xorte. ta-' 3 '!

bem denominado typho mexicano ou tobardillo, e febre maculosa das Monta - 1

nhas Rochosas) e os principaes característicos que as distinguem entre si. Cc®|

relação ao liemispherio sul, fizemos considerações sobre as formas do typ^l

endemico já assigraladas principalmente no norte da Argentina, Chile e Pe^l

mostrando as suas possíveis relações com o typho endemico da America d I

X'orte, assim como com as varias outras formas do typho já estudadas **[

outras partes do mundo, especialmente sob o ponto de vista de suas relaçó^l

sorologicas.

Assignalámos, finalmente, a nova modalidade que appareceu em S. Pa^l

e cujos primeiros casos foram diagnosticados em 1929. Trata-se de uma ' r

fecção provavelmente autochtona, distinguindo-se do typho clássico pelo seu * } T

pecto clinico, epidemiologico e pelo comportamento experimental do virus CSM

sador. Julgamos de grande importância proceder-se ao estudo das suas ** I

lações com as formas do typho endemico já conhecidas nas Américas

Xorte c do Sul e da sua possivel existência em outras regiões do nosso **n

ritorio c em outros paises do continente americano, bem como verificar

se trata, como parece, de uma modalidade mórbida nova ou, então, si I

ser identificada com alguma forma do typho endemico já descripta, ou

a infecção -estudada nos Estados Unidos por Badger, Dyer e Rumrcich e

estes auctores consideram muito aí fim e, conforme verificaram ultimam £*^1

idêntica á febre maculosa das Montanhas Rochosas, embora o no^so tyf*|

apresente certos caracteres diífercnciaes.

Os casos confirmados e registados em São Paulo desde 1929 até ag°fl

de 1931 foram cm numero de 44, com uma mortalidade de 77,2 %, sendo

provável que esse numero seja na realidade muito maior e que, mesmo afl *|

daquella cpoca, o mal existisse, embora não diagnosticado conven: I

Quanto ao possivel transmissor intermediário da infecção, mostrámos q^ e I

poderia acreditar no papel de certos acarianos que, alem dos piolhos,

sendo estudados no Instituto, e em ourros possíveis vectores, entre os

SciELO 1

0 11 12 13 14 15 16

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo 91

certos Ixodideos, Cimicideos e Pulicideos, assim como na possibilidade da exis-

tência de depositários do viras entre os roedores silvestres (ratos e preás). Em

outros trabalhos referentes a estes assumptos ficou experimentalmente eviden-

ciado que o carrapato, principalmente o Amblyomma cajenncnsc, pode ser res-

ponsabilizado como transmissor da infecção.

A zona de expansão e o aspecto epidemiologico do mal, assim como seu

Aspecto clinico com a elevada mortalidade, dão ao typho exanthematico de

São Paulo um caracter proprio que o distingue do typho clássico, caracter este

lue mais se accentúa com o estudo do comportamento experimental do viras.

O capitulo II refere-se ao comportamento experimental do virus em rela-

to aos pequenos animaes de laboratorio (cobaia, coelho, rato. etc.).

Em relação á cobaia, que é o animal de escolha para estudos experimentaes,

0 virus do typho de São Paulo mostra-se bastante pathogeno, provocando a

nior te de cerca de 70$c dos exemplares inoculados, os quaes apresentam, após

^ certo periodo de incubação, em media de 3 a 4 dias, uma rcacção febril

^racteristica que dura de 4 a 8 dias. As cobaias machos inoculadas no peri-

toneo com o virus, apresentam, em proporção de cerca de 20 a 25 $c, uma reaç-

ão inflammatoria escrotal, podendo-se obsersar phenomenos hemorrhagicos (pe-

techias e placas hemorrhagicas) nas reacções mais intensas. Estes phenomenos

hemorrhagicos, dando uma coloração arroxeada ao tegumento, são observados

n, uitas vezes também em certas partes glabras (patas principalmente), no ulti-

010 periodo da infecção e são, então, muito evidentes logo após a morte.

Os coelhos apresentam reacção febril durante vários dias, após curta in-

chação, não sendo nelles, geralmentc, a infecção mortal.

Nos ratos, verifica-se geralmentc uma infecção inapparente.

Considerando, embora, o typho exanthematico de São Paulo uma moda-

hdade do grupo do “typhus”. mostrámos c discutimos suas possiveis relações

Cotr > outras modalidades de infecções do mesmo grupo, principalmcnte com o

typho endêmico do norte (typho mexicano e do sul dos Estados Unidos) e a

khrc maculosa das Montanhas Rochosas.

O capitulo III refere-se ao comportamento experimental do virus cm rc-

^ão a certos simios, para os quaes se mostra bastante pathogcnico.

Estudámos este comportamento em relação a simios pertencentes a 3 gc-

aer °á ( Silcnus , Cebus e Alauatti). Quanto aos dois últimos, embora ficasse

ev >dcnte a sua sensibilidade, somente a inoculação de maior numero de exem-

Pkfcs permittirá juizo seguro. Os Silcnus rhesus, apenas com uma cxccpção

devida provavelmente a unta infecção inapparente), succumbiram á inoculação

< ‘° virus. Como consequência desta, observa-se, decorridos 2 a 4 dias de in-

^Ção, um periodo de rcacção febril característica, de 4 dias geralmentc, dan-

então o collapso e a morte do animal. A’s vezes a infecção apresenta

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

um caracter mais grave, verificando-se em certas partes do corpo phenomenos

hemorrhagicos mais evidentes no ultimo dia e após a morte (partes glabras, fa-

ce, escroto, etc ).

O capitulo IV mostra os resultados do comportamento experimental do

vinis como consequência da sua inoculação na camara anterior do olho dos

animaes (cobaia, coelho e Silenus rhesus). Verificámos a este respeito que de-

termina uma reacção ocular característica e reacção geral, febril, semelhante á

provocada por sua inoculação por via peritoneal; estas reacções são especifica»

da infecção pelo vinis, em virtude dos resultados das passagens obtidos pela

inoculação de sangue ou emulsão de cerebro das cobaias infectadas por via

ocular e da immunidade dos animaes que resistiam á reinoculação do mesmo

virus pelas outras vias, virus que póde ser transmittido em serie por via

ocular, utilizando-se para a inoculação o humor aquoso de um animal anterior-

mente injectado por essa via.

O capitulo V mostra os resultados dos nossos estudos sobre algumas das

propriedades do virus, entre as quaes sua filtrabilidade. passagem através da

mucosa ocular e dose minima infectaníe, resistência ao deseccamento, á acção

da glycerina e em congelação.

Os resultados obtidos foram commentados no texto e podem ser resumi-

do» nas seguintes conclusões:

O virus do typho exanthemarico de São Paulo, quando no cangue citratado

ou no cerebro emulsionado em agua physiologica ou cm caldo glycosado, nas con-

dições experimentaes assignaladas neste trabalho, não passa através das vela»

Chamberland L3 c L5, Mandler de 7 lbs. e Berkeíeld X ;

não conseguimos infectar a cobaia pela deposição do virus (emulsão dc

cerebro) na mucosa ocular intacta, embora no material depositado sua concen-

tração fosse sufficiente para provocar, por outra via, a infecção;

a D. M. I. (dose minima infectante) do vinis correspondeu a uma diluiç* 0

superior a 1 por 10.000 c inferior a 1 por 1.000.000 da emulsão cerebral;

quando secco no vacuo, sobre acido sulfurico c conservado também no vacti 1

e cm temperatura inferior a 0“C, o virus (sangue ou cerebro) jierde sua vital»'

dade cm prazo pouco superior a 2-1 horas, quando apenas provocou infecção be-

nigna c immur.idade do animal ; em 6 dias já se achara destruído, não provo-

cando siquer immunidade;

em glycerina diluida a 50% c em temperatura de 5“C o virus (no cerebro)

apresenta vitalidade e virulência no 12.® dia e não no 24.® dia:

nas mesmas condições, porém em glycerina pura, já havia perdido »ua ati-

vidade cm 7 dias;

quando no orgam (cerebro) congelado, o virus do typho de São Paulo cot»

set va sua vitalidade e virulência por cerca de 1 anuo;

■SciELO 1

0 11 12 13 14 15 16

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

a congelação do cerebro virulento é, em virtude da conclusão acima, um

o favoravel para o transporte do virus e, sob o ponto de vista pratico, toma

5 economica sua conservação no laboratorio, por trazer uma reducção do nu-

o de animaes necessários para sua manutenção por passagens successivas.

Finalmente, no capitulo VI, resumimos, num quadro, o estudo comparativo,

rivamente á cobaia, de amostras dos virus do typho exanthematico clássico

'opeu (amostras Wolbach e Breil), typho endemico da America do Xorte

' imo>tra Mooser e Maxcy) e do typho exanthematico de São Paulo, no qual

poderá vêr rapidamente uma serie de caracteres differenciaes entre elles.

^'gnalámos também o conceito que adoptamos relativamente ás “febres exan-

ticas”, que são separadas em 3 grandes grupos, aos quaes filiamos cer-

formas, bem estudadas, dessas infecções.

O estudo das propriedades do virus do typho de São Paulo deve ser conti-

% assim como estudados novos aspectos resultantes da infecção cxpcri-

614 . 526 : 611.47

ESTUDOS

SOBRE O TYPHO EXANTHEMATICO DE SÃO PAULO

2* PARTE

Rickettsia brasiliensis e suas relações com a infecção

Capitulo VII

Introducção: Rickettsioses e seu conceito pluralista. A rickettsia

do typho exanthematico de São Paulo

O grupo de infecções representado pelas chamadas "febres typho-exanthe-

maticas” ou “typhus” merece, no estado actual dos nossos conhecimentos, ser

desligado do das infecções causadas pelos verdadeiros virus, para constituir um

grupo autonomo. Isto se justifica pelo facto de o virus do “typhus” (de um

modo geral), quando no sangue ou nes organs (cercbro) dos doentes ou animacs

infectados, não apresentar, como vimos, todos os caracteres csscnciaes dos ver-

dadeiros virus filtráveis, dos quaes sem duvida dif ferem em muitos pontos os

microorganismos do genero Rickettsia, cujas relações ctiologicas com varias in-

fecções daquelle grupo são geralmcntc admittidas hoje em dia. Portanto, não

s e trataria, naquelle caso, de “virus”, porém da existência, no meio circulante

e nos organs, do agente infectuoso sob uma forma, talvez granular, como alguns

Creditam, e que representaria una phasc da evolução das rickcttsias, facilmente

'isiveis c encontradas em outras condições.

Por outro lado, o facto de oão ter sido possivel cultivarem-se artificial-

mente as rickettsias de um modo pratico, a não ser em meio de tecidos (*), o

(•) Oj trabalhos relativos á multiplicação das rickcttsias em culturas de tecidos, prin-

^Palirente os realiiados ultimamente, tem fornecido elementos valiosos, assim ao melhor

c °nhecimcnto da biologia, como da diffcrcnciaçáo das varias especies. Dentre esses tra-

o:,

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

que não permitte, por enquanto, sua utilização, segundo os processos bacterioló-

gicos communs, para o estudo da biologia, acção sobre hydrocarbonatos, etc., vem

diííicultando a differenciação biologica destes microorganismos e sua classifi-

cação de accordo ccm a nomenclatura bacteriológica.

Enquanto isto não acontece, sua distincção systematica sómente poderá ser

tentada pelo estudo do comportamento em relação aos animaes sensíveis, a syn-

drome clinica que determinam no homem, os meios de sim transmissão e conser-

vação na natureza ou, melhor, pelo estudo epidemioiogico das formas de in-

fecção pelas quaes são responsáveis.

Baseado nestes elementos, é já possível fazer-se uma distincção entre as

rickettsias responsáveis pdas varias infecções do grupo do “typhus”, embora

certas modalidades clinicas apresentem relações immunologicas e alguns cara-

cteres communs, que indicam a mesma origem primitiva. E’ o que acontece

com o typho exanthematico clássico, do velho mundo, e o typho endemico na

America do Xorte (México e Estados Unidos), para os quaes a dualidade foi já

admittida por alguns e parece justificar-se pelo que se conhece dos estudos

clássicos sobre o typho do velho mundo e pelos dos auctores que trabalham na

America do Xorte (Mooser, Maxcy, Zinsser, Castaneda, etc.), sobre o typho

endemico no continente septentrional, no que diz respei.o principalmente ao com-

portamento experimental dos virus, localização e frequência das rickettsias c

epidemiologia das infecções.

Julgamos que, mesmo assim, o conceito dualista em relação ás infecções

do grupo do “typhus” é ainda restricto. A este grupo pertencem, sem duvida,

outras infecções que se devem distinguir, pelos elementos assignalados e por

outros, das duas modalidades mencionadas. E’ o que acontece com a febre

maculosa das Montanhas Rochosas, com a febre marselhesa, com a febre bo-

ba lHo.< devemos assignalar aperras os publicados mais recentemente por Pinkerton e Hass

(J. Exp Med. LIV (3): 307. 1931; LVI (1): 131. 1932; LVI (1): 145. 1932 et

LVI (1): 151. 1932) e de Xigg e Landsteiner (J. Exp Med. LV (4): 563. 1932).

A localização das rickettsias nas cellulas mesotheliaes dos animaes e a que se veri-

fica nas cellulas dos tecidos cm cultura ín i-itro mostram certas di ff crenças segundo o

grupo de infecções que occasionam. Assim as rickettsias do typho epdemico (.Rickettsia

frouvzeki) e a do typho endemico (corpúsculos de Mooser ou Rickettsia mooscri) so-

mente se localizam, tanto nas culturas de tecidos, quanto nas cellulas mesotheliaes in rfrJ.

no cytoplasma cellular; a rickettsia da febre maculosa das Montanhas Rochosas ( Riekettsi »

riekettsi ) c a de certas infecções affins (febre maculosa, typho leste, de Minnesota), na*

culturas de tecidos, embora encontradas também no cytoplasma. tem uma apparentc pre-

dilecção pelos núcleos das cellulas (Pinkerton e Hass).

Rclativamcntc á rickettsia do typho de São Paulo (Rickettsia brasiliensis), já ini-

ciámos uma série de expericncias para sua cultura em tecidos m r ilro, afim de veri-

ficar si, nestas condições, cila apresenta também predilecção nuclear, ao contrario do que

acontece m ttVo. nas cellulas mesotheliaes da parede peritoneal da cobaia.

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

tonosa de Tunis, com a tsutsugamushi e lambem com o typho exanthematico

de São Paulo, para somente citar algumas que apresentam distincções mais evi-

dentes quanto ao comportamento experimental, presença e localização de ricket-

tsias e aspecto epidemiologico.

Como nenhuma concepção é definitiva em biologia, na justa expressão de Ni-

colle e Sparrow (41), parece-nos razoa ve! que se torne pluralista o conceito

sobre este grupo de infecções, que se convencionou chamar “typhus”, mas que

melhor se denominaria de “rickettsioses”, pois que a presença de formas dos

microorganismos primeiramente estudados por H. da Rocha Lima na infecção

typo, o typho exanthematico do velho mundo, constitue elemento de distincçáo

já estabelecido em relação a algumas formas clinicas e que provavelmente ainda

será assignalado em outras infecções do mesmo grupo.

Relativamente ao typho exanthematico de S. Paulo, embora não se possa

ainda concluir em definitivo, parecem maiores suas relações com o grupo da

febre maculosa das Montanhas Rochosas, constituindo, talvez, uma nova moda-

lidade da infecção, em virtude do comportamento experimental do "vinis” e

outros caracteres já assignalados (42) e estudados na 1.* parte deste tra-

balho, como pela localização das rickettsias nos animacs infectados, pela diver-

sidade do transmissor intermediário e, finalmente, por constituir o seu virus, se-

gundo A. Felix, uma nova variedade sorologica.

Ass m sendo, até que novos estudos sejam emprehendidos, os “corpúsculos

de Mooser”, que melhor se denominariam Rickettsia mooscri, como homenagem

ao illustre pesquisador que tão bem os estudou no typho mexicano, deverão con-

siderar-se distinctos da Rickettsia brasiliensis. responsável pelo typho exanthe-

matico de S. Paulo. O mesmo poder-se-á dizer, embora maiores suas afíini-

da.ies, cm relação á Rickettsia ( Pcrmaccntro.rcnus ) rickcttsi Wolbach, respon-

sável peia rickettsiose das Montanhas Rochosas, assim como em rc ação as ou-

tras cspecies descriptas, pertencentes ao genero creado pelo prof. Rocha Lima

(43) c responsáveis por outras rickettsioses.

Exposto assim o nosso modo de pensar sobre este importante problema da

Pathologia, passaremos aos resultados das no-sa? pesquisas sobre a presença c

localização da Rickettsia que descrevemos no typho exanthematico de S. Paulo

e das suas relações com a infecção.

Um estudo geral das dffercntcs rickettsias já descriptas c estudadas justi-

ficar-se-ia, talvez, mas o consideramos desnecessário, pois mais proveitoso será

Para o leitor interessado recorrer aos estudos já feitos a respeito, principalmcntc

°o trabalho de Wolbach e ao de Rocha Lima (44), onde, no ultimo, são es-

tudadas de um modo geral as differentes especies conhecidas até então, mais

Particularmente a espccie typo, a Rickettsia prowazeki.

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Estudando a Rickettsia manchuriae, como causadora do chamado typho da

Manchuria. e sua localização nas cellulas epitheliaes do estomago das pulgas, os

auctores japoneses Kodama, Kono e Takahashi (45) fizeram, recentemente, al-

gumas considerações sobre as relações entre o typho epidemico, clássico, do

velho mundo e o typho endemico, principalmente conhecido no México e Estados

Unidos e estudado também em outras regiões. Esse trabalho, em sua traducção

inglesa publicada, é confuso em certos pontos. Em todo caso, os auctores consi-

deram o typho manchuriano distincío do typho genuino e idêntico ao typho

endemico mexicano e ao typho brasileiro, achando que sua distincção repousa

principalmente na differença de transmissor entre as duas modalidades.

Si, por certos aspectos (relações antigenicas do grupo ^ dessas infecções,

typho exanthematico clássico (epidemico) e typho endemico, se pode pensar

que possuem uma mesma origem primitiva, o simples facto da diversidade de

transmissor justifica uma distincção, igualmente apoiada pelo comportamento ex-

perimental dos respectivos vinis. Xestas condições, as rickettsias responsáveis

seriam distinctas, como as consideramos no texto.

A confusão dos auctores japoneses surge igualmente ao ligarem ao typho

endemico da America do Norte o typho exanthematico de S. Paulo, que elles

mencionam como typho brasileiro, ligação talvez originada pelo facto de esses

auctores desconhecerem os outros trabalhos nossos, referentes ao comportamento

experimental do virus e transmissibilidade da infecção brasileira. Por estes as-

pectos e por outros dados já conhecidos de observação clinica (J. T. Piza),

histo-pathologicos (J. R. Meyer) e epidemiologicos, o typho de S. Paulo não

deve ser confundido com o typho endemico (México, Estados Unidos, Man-

churia, etc.), permanecendo como modalidade á parte, talvez mais relacionada

com a febre maculosa das Montanhas Rochosas, da qual, no entanto, se dis-

tingue em muitos aspectos.

O typho exanthematico de S. Paulo não é transmittido pelo piolho ou pela

pulga, porem, com bastante evidencia, pelo carrapato ( Amblyomma cajenncnst)<

como assignalámos em paginas seguintes deste trabalho e cm outros já pubü*

cados ou cm vias de publicação.

Nestas condições, a sua rickettsia, por nós descripta como Rickcttsia bra-

silicnsis, distinguir-se-á, como especic á parte, da rickettsia responsável pc'°

typho endemico ( corpúsculos de Mooser, que chamamos de Rickcttsia tnoosc^

da qual seria synonymo a Rickcttsia manchuriae, dos auctores japoneses), assim

como da responsável pelo typho clássico ( Rickcttsia pronxiseki) ou da causa*

dora da febre maculosa das Montanhas Rochosas ( Rickettsia rickettsi).

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paalo 99

A rickettsia do typho exanthematico de São Paulo

Desde que iniciámos, em principio de 1931, estudos experimentaes sobre a

modalidade do “typhus” que surgiu na capital de S. Paulo, as nossas vistas se

dirigiram para a pesquisa de rickettsias nos animaes (cobaias) inoculados com o

rirus (sangue ou emulsão de cerebro de animaes infectados). Assignalando

•°go de inicio a reacção escrotal em muitos animaes, as nossas experiencias, muito

naturalmente, se orientaram para a pesquisa nas cellulas da túnica vaginal do

testículo. Estas pesquisas iniciaes, feitas em condições óptimas muitas veres,

ao contrario do que occorre com o “tobardillo”, foram geralmente negativas,

iniciámos, então, concomitantemente, a mesma pesquisa nas cellulas da parede

Parietal do peritoneo, obtidas pela raspagem, que era utilizada para os esf regaços.

Facilmente, então, e com frequenda, dependendo do período da infecção, era

v « ri ficada a presença de microorganismos que não se distinguiam morphologica-

«nente das “rickettsias”, segundo as descripções dos difíerentes auctores que

delias se têm occupado, prindpalmente Rocha Lima, Wolbach, Mooser, Zinsser

e collaboradores, Pinkerton e outros, e que denominamos Rickettsia brasiliensis.

Também verificámos que estes elementos podem ser evidenciados nas cellulas

da membrana de Descemet, após a inoculação do “virus” na camara anterior do

°lho dos animaes, confirmando as verificações de Nagayo e collaboradores, em

r elação ao typho clássico e á tsutsugamushi.

Mostraremos, separadamente, os resultados destas duas series de pesquisas.

Capitulo VIII

^ r esença de rickettsias nas cellulas da membrana de Descemet

^ animaes inoculados com o virus na camara anterior do olho

Nagayo, Tamiya, Mitamura e Sato (46), no Japão, verificaram que a ino-

^lação do virus da tsutsugamushi na camara anterior do olho de cobaias e

^Ihos provoca uma reacção local característica e que se podia, então, obscr-

Var nas cellulas da membrana de Descemet a presença de microorganismos sc-

^Ihantes ás rickettsias. Estes elementos e suas relações com a infecção fo-

^ estudados por aquelles auctores e por Hazato c Imamura (47) que os de-

nominaram Rickettsia orientalis.

Tambcm verificaram os auctores japoneses (Nagayo, Tamiya, Mitamura c

^**ato) que o mesmo occorria com o typho exanthematico (48), no qual a

100

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

reacção ocular cra seguida de reacção geral, febril, sendo também possível evi-

denciar-se a presença da Rickeltsia prosi-azeki nas cellulas da membrana de

Descemer.

Repetimos os trabalhos destes auctores com o virus do typho exanthema-

tico de São Paulo.

a) Tcchnica empregada. - Como virus empregámos para as inoculações

sangue citratado ou desfibrinado de cobaia infectada, colhido em período febril:

emulsão de cerebro de Silentes rhesus infectado e humor aquoso de coelho, co-

baia e rhesus infectados por via ocular.

A technica da inoculação na camara anterior do olho, assim como a reac-

ção local e geral que determina, foi anteriormente exposta (49) e tratada com

maior minúcia no capitulo IV.

Para a pesquisa de rickettsias na membrana de Descemet assim proce-

demos: no 2.® ao 5.® dia da inoculação, quando mais intensa se mostrava a

reacção ocular o animal era sacriiicado e o globo ocular enucleado com oí

maiores cuidados de asepsia. Depois de tocar-se num ponto da comea com um

estilete aquecido, introduzia-sc ahi a agulha da seringa especial com a qual - e

retirava pequena porção do humor aquoso para a nova passagem do vim?

Com o auxilio de pinças e tesoura iinas, cortava-se do globo ocular, circular*

mente, toda a córnea que era destacada. Com um canivete delicado, a parte

posterior da córnea era raspada e o produeto da raspagem espalhado em la-

minas convenientemente limpas.

Numa das laminas procedíamos, em seguida, á coloração pelo mcthodo de

Castaneda, para prompto conhecimento da presença dos elementos pesquisados-

Dependendo deste resultado, as outras laminas eram também coradas pela mes-

ma tcchnica ou então pelo mcthodo de Giemsa, que descreveremos adiante, e

que nos fornece coloração com melhores detalhes e mais próprias para con-

servação.

b) Frequência e morphologia das " rickettsias " nas cellulas da membrtn'"'

de Descemet. - A verificação das rickettsias nas cellulas cpithcliacs da mem-

brana de Descemet depende do período em que a pesquisa fòr feita. Geral-

mente, do 2.® ao 5.® dia, quando mais intensa fòr a reacção ocular, coincidindo

com a geral, esses elementos são mais facilmente encontrados.

Em 25 animaes (cobaias, coelhos e Mac. rhesus) pesquisados nestas con-

dições, verificámos cellulas parasitadas em 15, dando uma proporção de 60$í-

Nas pesquisas feitas, muito cedo ou tardiamente, a presença de cellulas para-

sitadas era muito rara e difficilmente verificada.

No conjuncto dos animaes cm que esta pesquisa foi feita, cm numero de

36, a proporção dos resultados positivos foi de 4 7Çí>. Neste total, assignalámo*

100

J. Lemos Monteiro — Typho exanthemalico de S. Paulo

101

11 vezes a presença de germes de contaminação, facilmente distmguiveis mor-

phologicamente (geralmente diplococcos Gram positivo) e pelas culturas, nos

meios communs, obtidas pela semeadura do humor aquoso. Quando não exis-

tiam estas contaminações intensas, as semeaduras do humor aquoso, ou de pro-

ducto da raspagem da face posterior da córnea, foram sempre negativas, mes-

mo nos casos em que era facilmente observada a presença de cellulas rica-

em rickettsias na membrana e no humor aquoso. O mesmo aconteceu com o

emprego de meios especiaes, com soro, ascite, sangue e meio de Xoguchi.

Além deste caracter de não serem cultivadas nos meios artificiaes, as

rickettsias se distinguiam pela sua morphologia e pela localização intracellular

que geralmente apresentam. Morphologicamente se assemelham ás outras er-

pecies descriptas, apresentando também um certo pleomorphismo. Geralmente

são elementos pequenos, de 0,5 micron e até menos, coccoides ou bacillares, aos

pares muitas vezes, com o aspecto bipolar, não ultrapassando os dois elemen-

tos de 1 micron ou, ás vezes, 1,4 micron.

Pela coloração de Castaneda apresentam-se azuladas, distinguindo-se d.»

resto da cellula, cujo protoplasma toma uma coloração roseo clara e roseo car-

regado o nucclo. Pelo methodo de Giemsa, tomam uma totalidade roseo-azu-

lada ou violeta, dependendo da bòa technica da coloração.

A estampa V mostra uma serie de cellulas de preparados obtidos pela ras-

pagem das cellulas da membrana de Descemet, onde melhor se poderá verificar

a morphologia e disposição das rickettsias que descrevemos. Nesta estampa as

figuras 1 a 5 foram obtidas de preparados corados pelo methodo de Castaneda,

e as figuras 6 e 7 pelo methodo de Giemsa. As figuras 1, 2, 3, 4, 6 e 7 mos-

tram o aspecto geralmente encontrado e a figura 5, elementos bacillares, finos,

ás vezes filamentosos, verificados mais raramente.

As relações destes elementos com a infecção, pelas diffcuklades tcchni-

cas da sua obtenção em quantidades convenientes, não podem ser rigorosamente

estabelecidas, como acontece com as rickettsias encontradas nas cellulas mcsothc-

liaes do peritonco, como veremos adiante. Todavia, a rcacção local e geral con-

sequente á inoculação do virus n.i camara anterior do olho, como já assignalá-

mos anteriormente e o facto dc não termos encontrado m : croorganismos se-

melhantes em alguns animaes não inoculados com o virus (emulsão de ccrcbro

cobaia normal), fazem acreditar na sua relação etiologica ou, pelo menos,

que sua formação só se processe sob a influencia do "virus” especifico.

101

102

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Capitulo IX

Presença de rickettsias nas cellulas mesotheliaes da parede

peritoneal de cobaias inoculadas com o virus na cavidade

Bem mais interessante é a pesquisa da rickettsia nas cellulas da parede pe-

ritoneal dos animaes inoculados ca cavidade com o virus (sangue de cobaias

em reacção febril ou de doentes ou emulsão de cerebro de animaes infectados

e sacrificados durante a reacção).

Tendo verificado, desde o inicio, a reacção escrotal em algumas cobaias

inoculadas, as pesquisas originaes foram feitas, como dissemos, nas cellulas de

raspagem das folhas parietal e visceral da túnica vaginal. Ao contrario do que

se verificaria com o typho endemico na America do Norte, as nossas primeiras

verificações foram geralmente negativas, mesmo nos casos de reacção escrotal

intensa e a colheita feita logo que ella se evidenciava.

A este respeito, o virus do nosso typho parecia differenciar-se do typho do

continente septentrional, approximando-se do typho do velho mundo, onde as

rickettsias podem ser vistas na túnica vaginal mais rara e difficilmente, sendo

necessário que a pesquisa seja feita em certa occasião óptima.

Apesar de Zinsser e Castaneda (50) considerarem a presença de rickett-

sias na túnica vaginal relacionada a certas condições, principalmente a uma me-

nor temperatura do testiculo, começámos também a fazer pesquisas nas cellulas

da raspagem da parede peritoneal. Estes microorganismos começaram então a

ser encontrados com relativa facilidade, mesmo nas cobaias já com reacção febril.

Os primeiros resultados de nossas verificações foram resumidos em nota

(51), onde estes microorganismos foram chamados de Rickettsia brasilicnsis e

sobre cuja posição systematica já expusemos o nosso modo de pensar em pa-

ginas atrás.

Mostraremos, agora, a technica que empregámos para sua pesquisa, estudo

da morphologia e frequência, nos animaes inoculados, assim como as suas re-

lações com o typho exanthematico de São Paulo.

a) Technica empregada. - A cobaia a ser pesquisada é sacrificada com

chloroformio e necropsiada com os cuidados usuaes em pesquisas desta natureza.

Deslocada a pelle e tecido cellular sub-cutaneo, o peritoneo é posto á mostra

e pinçado num ponto central, sendo aberto transvcrsalmentc com tesoura. Sus-

pensa pela pinça a parede, para destacal-a dos orgãos abdominacs, raspa-se com

bisturi a folha parietal num dos pontos, fazendo-se logo cs f regaços, bem es-

palhados, em laminas novas e cor.vcnientemente limpas. O mesmo se faz na*

102

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Pauln

103

outras regiões da perede parietal, de modo a se prepararem umas 8 a 12 la-

minas de cada animal.

Pesquisa-se então qualquer alteração macroscópica dos organs abdominaes

(augmento do baço, quasi sempre verificado) ou a presença de derrame na ca-

vidade e colhem-se fragmentos dos organs para exame histologico. O cerebro

e depois retirado com os cuidados necessários, fragmentos são fixados também,

pequena porção é separada e usada para nova passagem e o restante conservado

em congelação, apenas num pequeno tubo esteril e convenientemente arrolhado.

Uma ou duas das laminas preparadas são immediatamente coradas segundo

o methodo de Castaneda. Este methodo (52) tem a vantagem de nos forne-

cer resultados rápidos sobre a presença de rickeitsias características, nas cel-

lulas mesotheliaes, ou da existência de contaminação que, pela sua abundancia,

dispensaria outras colorações.

Si a coloração pelo methodo de Castaneda indicasse a presença de nume-

rosas cellulas parasitadas, outras laminas eram coradas por este methodo ou,

então, pelo methodo de Giemsa, que fornece bellos preparados mais apropria-

dos para conservação.

Por não ser bastante conhecido entre nós, resumimos a seguir o methodo

de Castaneda para coloração de rickcttsias.

Methodo de Castaneda. - Consiste em duas soluções tampões:

A. Phosphato de sodi-, 23,86 grs.

Agua destillada 1000 cc.

B. Phosphato monopotassico 11,34 grs.

Agua destillada 1000 cc.

Tara o preparo da solução tampão, tomar:

Solução A 88 partes

Solução B 12 partes

Filtrar cm vela Bcrkefcld e addicionar ao filtrado, como preservativo,

2 % de formol. A reacção antes da addição do formol deve ser pH = 7,6.

A coloração e fixação se processa ao mesmo tempo, empregando-se:

Solução tampão 20 cc.

Formol 1 cc.

Azul de methylenio Loeffler 3 gottas

Coloração por 2 ou 3 minutos. Lavar por 30 segundos.

Segue-se a coloração de contraste:

103

104

Memórias ilo Instituto Butantan — Tomo VI

Solução aquosa de saíranina, por 1 a 2 segundos e lavar.

Esta é a technica indicada por Casíanecla. Xas nossas colorações ge-

ralmente empregámos na formula acima 4 a 6 gottas do azul de meíhylenio

de Loeffler:

Azul de methylenio U. S. P 21 grs.

Álcool ethylico a 95% 300 cc.

após uma noite, juntar:

Agua desti liada contendo potassa caustica a

1 tlO.OOO 1000 cc.

Usar somente depois de uma semana (*).

Com o methodo de coloração de Giemsa, convenientemente praticado, as

preparações nos fornecem maiores detalhes e melhor se prestam á conservação:

Methodo de Giemsa. - Pode ser utilizada a technica commum de coloração

por este methodo, fazendo-se a diluição do corante em agua destillada (1 ou 3

gottas por cc.). Geralmente, porém, o exsudato existente na parede e que se

cora, diíficulta muitas vezes a verificação das rickettsias e, quando ha excesso

de deposito de matéria corante exigindo lavagem mais prolongada, também os

elementos se descoram, perdendo a coloração rósea e tomando um tom mais

azulado.

Conseguimos boas preparações usando para a diluição do Giemsa a solu-

ção tampão de Castaneda. Melhores resultados, porém, obtivemos com o em-

prego de urna solução tampão, cuja indicação nos foi feita por O. Castro, da

Instituto Biologico. Esta solução é preparada da seguinte maneira:

A. Phosphato mono-porassico (KH : PO»), seg.

Sohrensen-Kahlbaum 9,078 grs.

Agua destillada 1000 cc.

lí. Phosphato di-sodico ( Xa 3 PO«) .... 11,876 grs.

Agua destillada 1000 cc.

(*) Rivcrs apresenta uma modificação da technica de Castaneda, que a simplif* 3 "

E‘ a seguinte :

Phosphato tampão pH = 7.0 ... . 95 cc.

Azul de methylenio de Loeffler .... 10 cc.

Formalina 5 cc.

Corar durante 2 a 5 minutos, lavar e contracorar por 10 segundos com solução aquos*

de safranina a 1

104

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo 105

Para a solução tampão (onde se junta o corante: 1 gotta por cc.) tomar:

4 partes da solução A e 6 partes da solução I» para 10 a 20 vezes o volume

de agua destillada, cujo pH deve ser de 6,8 a 7,0.

As preparações são fixadas com álcool methylico ou ethylico e a colora-

ção feita durante 1/2 a 2 horas, com um volume 10 vezes maior de agua des-

hllada, ou durante uma noite, com o volume de 20 vezes, seguindo-se uma la-

rgem conveniente em agiu corrente.

Vejamos, agora, o aspecto das rickettsias nas cellulas da parede peritoneal.

b) ,\f ornitologia e disposição das rickettsias nas cellulas da parede peri -

toneal. - As rickettsias do typho exanrhematico de S. Paulo, nas cellulas da

parede peritoneal, apresentam a morphologia e tamanho característicos destes

elementos, já descriptos, embora com diversa localização, em outras rickettsioses

e correspondem ás que descrevemos nas cellulas da membrana de Descemet.

Apenas no peritoneo não verificámos formas mais longas, porém somente os

elementos typicos.

São geralmente coccoides ou pequenos bastonetes de 0,5 micron , reunidos pe-

las extremidades, ás vezes mostrando coloração bipolar, indicando que o par cor-

r csp<>nde a um só elemento, quando o tamanho attingc a 1 e 1.4 micron de com-

primento. Outras vezes correspondem somente a pequenos bastonetes finos,

•autos e independentes. Não apresentam uma disposição especial nas cellulas;

‘>calizam-se, ás vezes, cm grupos em certa zona do protoplasma, outras se es-

palham uniformemente. Geralmente são intracellulares, podendo-se ver também

Mementos fóra das cellulas, devido ao rompimento destas, ou quando o seu nu-

mero é muito elevado, como acontece cm certos animaes, com infecção atypica,

H- m reacção febril, e nos quacs não só as cél ulas da parede como o exsudato

Peritoneal se mostram muito ricos em rickettsias.

Pelo methodo de Castaneda. o protoplasma cellular se cora cm rosco claro,

0 núcleo cm roseo carregado c as rickettsias em azul.

Pelo methodo de Giemsa e nas preparações bem coradas, as rickettsias apre-

^ntam-se coradas cm roseo ou violeta, dentro de um protoplasma azulado; nas

preparações em que a coloração não f:cou perfeita, os microorganismos, com

‘na morphologia typica, apresentam um tom azulado. A affinidade corante, com

methodo, depende da technica da coloração c do fixador usado.

Melhor do que qualquer dcscripçáo, esta morphologia e disposição das ri-

c ^cttsias nas cellulas mcsothcliacs da parede peritoneal podem ser vistas nos

desenhos apresentados na estampa VI. Os desenhos foram feitos de preparados

c °rados pelo methodo de Castaneda nas figuras 1, 2, 3, 4 e 5 e mortram diffc-

rc ntes cellulas desenhadas c a disposição dos microorganismos, assim como um

^mpo desenhado, onde se vê um polycariocyto contendo rickettsias phagocyladas.

Muito raramente encontrámos rickettsias cm phagocytos, o que parece estar

* e accordo com a verificação de Pinkerton (5.3) sobre o typo das cellubs pa-

105

106

Memórias do Inslituto Butantan — Tomo VI

rasitadas. Precsa ainda ser feito este estudo cytologico, em relação ao nosso

typho. As figuras 6. 7, 8 e 9 representam desenhos feitos de preparados

corados pelo methodo de Giemsa acima indicado. A figura 6 mostra uma cellula

com os elementos com coloração de aspecto bipolar; num ponto da cellula no-

ta-se u’a massa de pontinhos corados em vermelho que, talvez, representem as

rickettsias numa forma de evolução granular. As figuras 7 e 8 mostram cellulas

contendo elementos bacillares finos e curtos, isolados, vendo-se apenas raros

com aspecto bipolar. A figura 9 mostra parte desenhada de um campo microscó-

pico A estampa VII reproduz microphotographias, mais ampliadas, de 2 cellu-

las contendo rickettsias; a fig. 1 corresponde a uma cellula desenhada (Est. VI,

fig. 8) e a fig. 2 á outra cellula em preparado de outra cobaia. Todos os dese-

nhos foram feitos usando-se o microseopio Zeiss, oc. 4, obj. imm. 1/12, dando

uma ampliação de 940 diâmetros e empregando-se como fonte de illuminação

a Leitz Speziallampe (6 volts e 5 amp.).

Desejamos deixar bem assignalado qeu todas as tentativas de cultura destas

rickettsias em meios communs de laboratorio e mesmo em meios especiaes, e

foram até agora numerosas, deram sempre resultado negativo. Isto quer se

empregasse exsudato peritoneal, quer material de raspagem da parede contendo

cellulas parasitadas. As culturas ás vezes obtidas eram sempre constituídas por

germes de contaminação e que nenhuma relação morphologica ou outra pode-

riam ter com as rickettsias intracellulares descriptas ou com a infecção.

Vejamos agora a írequenda com que são encontradas estas rickettsias eni

consequência da inoculação do virus no peritoneo.

c) Frequência das rickettsias nas cellulas mcsotheliaes da parede perita-

neal. - Quando se tem em vista principalmente a pesquisa da rickettsia, a cobaia

inoculada com o virus no peritoneo deve ser sacrificada pouco antes da reacção

febril (no 3.® ou 4.® dia após a inoculação) ou nos primeiros dias da pyrexia

que. manifestando-se assim, representa nova confirmação da infecção caracte-

rística .

Depois do 4.® dia de reacção febril, as cellulas parasitadas são mais diííi*

cilmcnte encontradas. Com a volta da temperatura ao normal, decorridos vario*

dias, isto é, na convalescença, estes microorganismos não mais são vistos.

Praticámos a pesquisa de rickettsias, não só nesses períodos favoravci*.

como na maioria das cobaias inoculadas e que succumbiram em resultado da i°'

fccção ou que foram sacrificadas para fins de passagem do virus.

Diversas cobaias normaes ou inoculadas no peritoneo com sangue ou emul'

são de cerebro de animaes normaes foram também examinadas, sendo negat vo»

os resultados.

Em duas cobaias inoculadas com o virus por via sub-cutanea e sacrificada*

durante a reacção febril, a pesquisa no peritoneo foi negativa. Embora esta

verificação precise de ser repetida com maior numero de animaes, talvez soment*

106

J. Lemos Monteiro — Typho exanthcmalico de S. Paulo

107

a inoculação do vírus na cavidade da serosa é que provoca o apparecimento das

nckettsias especificas em cellulas de revertimento. Assim sendo, muito prova-

velmente a inoculação do vinis na cavidade pleural ou pericardica. por exempo,

provocará o apparecimento das rickettsias em certas das suas cellulas de revesti-

mento. Esta hypothese merece verificação e também será interessante saber-se

si este facto é proprio ao virus do typho exanthematico de São Paulo ou si é

commum a todas as rickettsioses.

Registamos, a seguir, a pesquisa de rickettsias em mais de 200 cobaias ino-

culadas no peritoneo com o virus.

Os resultados que vamos mostrar e que são resumidos no quadro IX repre-

sentam os verificados em exames relativamente rápidos, não ultrapassando 10

a 15 minutos para cada pesquisa. De modo que as proporções seriam maiores

si, nos casos em que este exame foi considerado negativo, ainda se prolongasse

a pesquisa, correndo-se toda a lamina ou varias delias com material do mesmo

animal.

Nos resultados positivos estão incluídos todos os casos em que se encontra-

ram cellulas parasitadas, desde os em que as rickettsias eram raras (+) e difíi-

cilmente encontradas até os, menos numerosos, em que ellas eram muito abun-

dantes (-| — | — i — f-) e facilmente visiveis em quasi todos os campos microscópicos.

Eis os resultados :

107

108

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

QUADRO IX

Grupo Período da pesquisa

Cobaias Resulta- Resulta-

exami- do po- do ne-

nadas sitivo gativo

Antes da reacção febril ou

que não a apresentaram

após vários dias (formas

atypicas)

Porcentagem dos

resultados po-

sitivos

71.4%

III

Sacrificadas no 1* dia de

reacção febril

Sacrificadas no 2* dia dc 32

reacção febril

100 %

93.7%

IV Sacrificadas no 3* dia de

reacção febril

38 4

90.4%

V Sacrificadas no 4* dia de

reacção febril

28 12

70%

VI Sacrificadas depois do 4*

dia de reacção febril ou

que succumbiram depois

deste período.

32 55.5 %

VII

Cobaias sacrificadas cm

convalescença, isto é. mui-

tos dias depois da volta

da temperatura ao normal.

Total das cobaias exami-

nadas, não incluindo as

do grupo VII

212 156 56

73 5%

108

J. Lemos Monteiro — Typho exaiithe medico de S. Paulo

109

Yeri fica-se, pelo quadro acima, que no total das cobaias inoculadas no pe-

ntoneo com o virus do typho de São Paulo, pudemos descobrir a presença de

n ckettsias nas cellulas mesotheliaes da parede peritoneal em 73, 5% dos animaes.

Ebta porcentagem augmen:a quando a pesquisa é feita em periodo favoravel,

*■*» é, mais precocemeníe. A proporção foi de 71,4 % de resultados positivos

^ animaes sacrificados antes de se ter manifestado a rcacção febril. Neste

SHjpo foram incluídos, não só os casos de infecção atvpica, sem reacção ther-

m >ca, quando as rickettsias são abundantes, mesmo no exsudato peritoneal, que

au gmenta nestes casos, mas também as sacrificadas depois de decorridos alguns

dias, e cuja temperatura não se tinha elevado typica mente, a‘em de um animal,

de resultado negativo, sacrificado, talvez cedo demais, no 2.° dia da inoculação.

A proporção de resultados positivos foi de 100% nas cobaias sacrificadas

°° 1.® dia de reacção febril, sendo variavel, mas geralmente de 3 a 5 dias, o nu-

mero de dias decorridos da inoculação, de accordo com a incubação.

Nos sacrificados no 2.° dia tíe rcacção febril, a proporção foi de 93.7%;

°° 3.° dia de reacção febril, de 90,4%. A proporção foi de 70% no grupo de

Cli baias sacrificadas durante o 4.® dia e de 55,5% nas sacrificadas no 5.® dia

nos dias subsequentes, mas ainda pyrelicas ou então que succumbiram á in-

*feção depois do periodo de rcacção.

Estes resultados correspondem ao 1.® virus (L) que estudámos e que se

^hava então na sua 68.® geração. Com a segunda amostra de virus (W), na

!{$.* geração, num total de 30 cohatas examinadas, foram encontradas as rickettsias

6111 60% dos animaes, cuja maioria se incluiu nos grupos V e VI do quadro (*).

bambem nas cellulas da parede peritoneal de Macacus rhesus, inoculados com

0 v ‘>us no peritoneo, pudemos evidenciar a presença de rickettsias.

Si outros elementos não existissem, liastaria a frequência acima assignalada

^ rickettsias nos animaes inoculados para mostrar sua especificidade c relação

Coa i a infecção.

Com a continuação das nossas cxpcncncias com o exame dc maior numero

^ animaes (superior a 600) c nos quacs a pesquisa foi feita gcralmcnte cm

k-iodo mais avançado, na maioria das vezes depois do 4.® dia de reacção febril

quando succumbiam, somos forçados a acreditar que não existe verdadeira-

fr <ntc um periodo optimo para qut as rickettsias sejam encontradas, embora o

feito mais precocemeníe facilite a pesquisa, como foi assignalado. A sua

^sença deve, muito provavelmente, estar relacionada, não somente ao “virus”

i!H *ulado, como a algum fac.or de natureza individual, variavel, ás vezes, com os

‘* v ersos animaes inoculados. Gcralmcnte depois dc uma grande serie dc passa-

somente com emulsão cerebral, as rickettsias são difficilmcnte encontradas,

Estes virus, em junho de 1932. se encontravam, rcspcctivamcntc. na 91.* c 45.* ge-

109

110

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

reapparecendo. com abimdancia em certos animaes, após algumas passagens com

sangue virulento, e mantendo-se sua presença em novas passagens, mesmo com

cerebro.

Esse factor individual, de natureza ainda não determinada, deve ser levado

cm consideração, parecendo sua existência justificar-se pelos resultados de ex-

periências relativas á influencia que certas substancas, como o benzol, ou una

dieta de carência ou acção de raios X a que se submettem previamente os ani-

maes, exercem sobre o apparecimento das ricketísias especificas.

Com material de ras pagem da túnica vaginal, em numerosas e novas pes-

quisas feitas, mesmo em casos com reacção escroial, menos frequentemente pu-

demos verificar a presença de cellulas contendo ricketísias.

Relativamente á pesquisa nas cellulas da parede peritoneal, os nossos re-

sultados têm sido confirmados por L. Salles Gomes, do Instituto Bacteriológico.

J. R. Meyer, O. Bier, O. Castro, do Instituto Biologico, e outros collegas em Bu-

tantan (*).

Estudadas, assim, a morphoíogia e a frequência da Rickcttsias brasiliensis,

indicaremos a seguir alguns ensaios já feitos para melhor verificação das sua 5

relações com o typho exanthematico de São Paulo.

Capitulo X

Relação das ricketísias do typho exanthematico de São Paul°

com a infecção experimental

Alem da relação entre a rickettsia descripta e a infecção experimental, tra-

duzida pela elevada proporção em que estes microorganismos são encontrado?,

seria do maior interesse a sua determinação pelos meios immunologicos c outroí

de que se dispõe. Para isto, recorremos á verificação do poder infectante e da 5

relações antigenicas que pudessem elles ter em relação á infecção experimental-

(*) Mais Tcccntcmcnte. L Saltes Gomes conseguiu pôr cm evidencia a presença

rickcttsias cm cortes dc organs (íesiicuios). localizando- se os elementos nas paredes vas-

culares (Ccmm. ã Soc. de Biologia de São Paulo, 8-II 1*932). Esta localização é de a 3 *

pertancia pata o estudo das relações histológicas do nosso typho com infecções nfún? -

princ'palmentc com a febre maculosa das Montanhas Rochosas. Em pesquisas feitas cc**

material dc varias cobaias infectadas, pudemos também evidenciar esta localização <1**

rickcttsias. que sc dispõem, cm massas ás vezes consideráveis, na túnica media e 1,0

cndothelio dos vasos.

110

J. Lemos Monteiro — Typho cxanlhemalico de S. Paulo 111

Para o primeiro fim visado, seria indispensável a obtenção das rickettsias

livres do “virus”, phase provavelmente também existente na peritoneo; para a

segunda averiguação do problema, recorrémos ao preparo de uma vaccina com

material rico em rickettsias, segundo a tcchnica já ensaiada por Zinsser e Cas-

taneda (53), cujo poder immunizante em relação ao virus seria verificado, ou

então pelo registo da acção neutralizante in z-itro do soro de um animal immu-

nizado com as rickettsias em relação ao virus.

Vejamos, a esse respeito, as experiencias que até agora realizámos e os

seus resultados.

a) Infectuosidade da ridiettsia. - Para esta verificação, sacrificam-se co-

baias inoculadas por via peritoneal com o virus, isto é, com sangue ou emulsão

de cerebro de animal infectado e sacrificado em occasião favoravel. O perito-

neo é lavado com certa quantidade de agua physiologica, sendo a folha parietal

convenientemente raspada para desprendimento de maior numero possível de cellu-

las parasitadas. Verificada previamente a presença de rickettsias nas cellulas,

a emulsão assim obtida é fortemente agitada num frasco contendo bolas de

'idro, para o maior rompimento possível das cellulas e libertação dos micro-

organismos.

A confirmação da infecção no animal sacrificado é feita pela inoculação de

emulsão do seu cerebro.

Depois de bem agitada, a emulsão peritoneal contendo rickettsias é inocula-

da para verificação da sua pathogenicidade, que, neste caso, poderia ser também

a ttribuida á presença do “virus”. Para eliminação desta ultima hypothese, a

emulsão é centrifugada em alta velocidade e lavada com agua physiologica, sendo

a centrifugação e lavagem do deposito repetidas cerca de 6 a 10 vezes, de modo

a se eliminar o “virus” que já não existiria ou somente cm diluição minima,

incapaz de provocar a infecção exper xnental.

Como controle da expericncia, repetimos a mesma verificação com outra

cobaia, inoculada por via subcutânea c cm cujo peritoneo não foi verificada a

presença de rickettsia.

Resumimos os resultados obfdos:

Experiência I - Cobaia 242: Inoculada em 10-VI-931, no peritoneo, com

'irus (emulsão de cerebro do Ccbus I). Depois de 2 dias de incubação, ini-

riou-se a reacção febril, acima de 40". Foi sacrificada cm 18-VI-931, no 6.® dia

de reacção. A presença de rickettsia foi verificada nos es í regaços da parede.

Porém o numero de cellulas parasitadas era reduzido. Mesmo assim foi apro-

ntado o liquido de lavagem e raspagem pcritoncas obtido pela tcchnica acima

descripta. A infecção do animal confirmou-se pela inoculação de emulsão de

seu cerebro na cobaia 254. A emulsão peritoneal obtida foi inoculada na co-

baia 252. A mesma emulsão depois de 2 lavagens apenas do deposito da ccn-

111

112

Memórias do Instituto üutantan — Tomo VI

trifugação, foi inoculada na cobaia 256, e, depois de 10 lavagens e centrifugações

successivas, foi inoculada na cobaia 257.

Cobaia 254: Inoculada com emulsão de cerebro da cobaia 242 em 1S-VI-931.

Incubação de 3 dias, reacção febril durante 4 dias, sacrificada em 25-VI-931, após

ter sido picada por Ornithodoros. Com emulsão de seu cerebro foi inoculada a

cobaia 27 1 e com o sangue a cobaia 277. Estas ultimas tiveram infecção ca-

racterística.

Cobaia 252: Inoculada em 18- VI -931 com 1 cc. de liquido de lavagem peri-

toneal da cobaia 242. Incubação de 3 dias; temperaturas: 38°, 8, dia da ino-

culação, 38",5; 3S°,6; 3S®,5; 3 dias de reacção febril (40*. 5 ; 39", 8; 40°), e

morreu na manhã de 24-VI-931. Rickcttsias no peritoneo (-j — 1 —

Cobaia 256: Inoculada em 18-VI-931 com 2 cc. de emulsão de produeto de

raspagem e lavagem peritoneal após duas centrifugações. Incubação de 5 dias,

reacção febril durante 5 dias, vclta da temperatura ao normal. Resist u a

infecção.

Cobaia 2 57: Inoculada em 18-VI-931 com 2 cc. de emulsão do produeto de

raspagem peritoneal após 10 lavagens e centrifugações successivas. Incubação de

4 dias e 2 de reacção não muito alta (temperatura: 38",6, no dia de inoculação:

38°.5; 38", 6; 39"; 38", 3; 39®, 7 ; 39", 8). Morreu ás 11 horas da manhã de

25-VI-931. Rickettsias no peritoneo (+).

Verificou-se assim que o liquido peritoneal era infectuoso mesmo depois

de 10 lavagens e centrifugações successivas. Cada lavagem era feita em tubo

ccntrifugador com capacidade para 20 cc. O resultado positivo após 2 lavagens

pode ser ainda attribuido á presença do “virus” no liquido; o mesmo não acon-

tece após a 10.* lavagem, pois o "virus” estaria diluido demais e, assim, a in-

fecção só correria por conta das rickettsias existentes, embora não abundantes

prim tivamentc, e que por serem mais densas, se depositam com os detritos cellu-

lares após cada centrifugação.

Para controle desta cxperiencia, no mesmo dia, fez-se idêntica verifica-

ção com material da cobaia 243, inoculada por via subcutânea, com o mesmo ma-

terial infcctante.

Expkriencta II - Cobaia 243: Inoculada em 10-VI-931, por via subcutâ-

nea com emulsão de cerebro do Ccbus I. Incubação de 4 dias e 4 de reacção fe-

bril. No ultimo dia, em 18-VI-93I, foi sacrificada c aproveitado o material do

peritoneo pela forma indicada. Nos esfregaços da raspagem peritoneal a pes-

quisa de rickettsias foi negativa. Inoculou-se emulsão de cerebro, para confir-

mação da infecção, na cobaia 255; o liquido obtido da lavagem peritoneal, na

dose de 2 cc., foi inoculado na cobaia 253; o mesmo material, após ter sofftido

10 centrifugações e lavagens successivas, foi inoculado na cobaia 258.

112

J. Lemos Monteiro — Typho exanlhematico de S. Paulo

113

Os resultados destas inoculações, feitas todas por via pcritoneal, foram os

seguintes :

Cobaia 255: Inoculada em 18-VI-931 com emulsão de cerebro de cobaia

243. Incubação de 5 dias, reacção febril durante 3 dias, quando foi sacrifi-

cada. Rickettsias no peritoneo ( — ).

Cobaia 253: Inoculada em 18-VI-931 com material (2 cc.) de lavagem e ras-

pagem peritoneal após 2 centrifugações. Incubação de 4 dias, reacção febril

durante 4 dias e morte durante a noite de 27 para 28-VI-931, não tendo sido

feita a pesquisa de rickettsias no peritoneo.

Cobaia 258: Inoculada em 18-V 1-931 com 2 cc. de emulsão de material de

lavagem e raspagem peritoneal após 10 centrifugações suecessivas. Não apre-

sentou reacção febril caracterisrica. Decorridos 22 dias, em 10-VII-931, foi

reinoculada com o virus activo (emulsão de cerebro da cobaia 278) : após 3 dias

de incubação, iniciou-se reacção febril que perdurou 6 dias, morrendo o ani-

mal 4 dias depois, na manhã de 23- VI 1-931. A pesquisa da rickettsias no perito-

nco foi negativa, talvez pelo facto de ter sido tardia.

Como se vê pelos resultados acima, a ausência de rickettsia no material da

raspagem e lavagem peritoneal evita a infecção depois de 10 centrifugações sue-

cessivas (cobaia 258) ; o resultado positivo após 2 centrifugações somente (co-

baia 253) pode ser attribuido ao virus, ainda não sufficicntemcnte diluido e,

Portanto, capaz de provocar a infecção.

Outra experiencia foi emprchendida, sendo a colheita do material do peri-

toneo feita em periodo mais favoravel, e as rickettsias foram mais abundante-

mente encontradas.

Experiencia III - Cobaia 260: Inoculada cm 18-VI-931 com emulsão de

cerebro da cobaia 243; no 4.° dia da inoculação c l.° de reacção febril, foi

mjcctada com 20 cc. de agua physiologica no peritoneo c, cm seguida, sacrificada,

*cndo o liquido do peritoneo recolhido, depois de raspada a parede. Para con-

firmação da infecção foi inoculada com o cerebro a cobaia 263. O liquido de

ia vagem peritoneal contendo rickettsias foi inoculado na cobaia 262. Depois de

6 centrifugações suecessivas e outras tantas lavagens com agua physiologica. a

emulsão do material peritoneal foi inoculada na cobaia 264.

Os resultados destas inoculações, todas por via peritoneal, foram os

seguintes:

Cobaia 263: Inoculada em 22-VI-931 com emulsão de cerebro da cobaia

260, colhido no 1.® dia de reacção febril: incubação de 3 dias, reacção febril

durante 5 dias. Amanheceu morta cm 2-VII-931.

Cobaia 262: Inoculada em 22-VI-931 com 2 cc. do liquido de lavagem c

Apagem peritoneal da cobaia 260: incubação de 3 dias, reacção febril durante

/ dias: foi sacrificada cm 2-VII-931, sendo inoculada uma emulsão de seu cerebro

113

114

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

na cobaia 283, que teve infecção typica com 4 dias de incubação, 2 de reacção

febril e morte na manhã de 9-VII-931 ; a passagem do vinis foi continuada atra-

vés de outras cobaias.

Cobaia 264: Inoculada em 23-VI-931 com 2 cc. de emulsão de raspagem c

lavagem peritoneal após 6 centrifugações successivas. Depois de nova centri-

fugação a emulsão foi feita em agua physiologica formolada a 0,2%, sendo em-

polada e conservada na geladeira para posteriores experiencias de vaccinação.

Depois de uma incubação de 7 dias (num dos quaes a temperatura se elevou 3

40°, 9, para voltar á med«a normal nos dois dias seguintes), iniciou-se a reacção

febril acima de 40°, perdurando 7 dias. Houve mais 5 dias de temperatura

próxima á normal e a cobaia morreu na manha de 13-VII-931.

A infecção desta cobaia deve ser attribuida também ás rickettsias presentes

no material inoculado, embora o numero de lavagens não tenha sido tão elevado

como na experiencia I.

OrTRAs experiencias. - Outras experiencias feitas mostraram de modo evi-

dente a infectuosidade do matéria! obtido de raspagem peritoneal, infectuosidade

geralmente maior do que a da emulsão cerebral, quando era muito rico «n

rickettsias. Citemos, apenas, as seguintes:

Cobaia 170: Inoculada em 14-IV-931, no peritoneo, com 1 cc. de derranií

peritoneal da cobaia 161. Esta ultima teve infecção typica, sem reacção febril

até o 6.° dia da inoculação, quando succumbiu; veriíioou-se abundante derrame

no peritoneo, de aspecto soro-hemorrhagico e baço augmenrado de modo caracte-

rístico. Tanto nos esfregaços de raspagem da parede, como no derrame, e fl '

contra ram-se rickettsias em abundancia (-| — 1 — j— t-). A cobaia 170, inoculada,

apresentou, após 2 dias de incubação, reacção característica durante 5 dias, quando

foi sacrificada, em 21-IV-931, para novas passagens.

Cobaia 230: Foi inoculada no peritoneo, em 21-5-931, com emulsão àc

ccrebro da cobaia 224. No 4.® dia da inoculação, com a temperatura de 39. V»

foi sacrificada. Os esfregaços de raspagem peritoneal mostraram rickettsias

grande abundancia (4 — | — f- + ). O peritoneo foi lavado e raspado, c o materi^

emulsionado cm 20 cc. de agua physiologica. Com 1 cc. desta emulsão foi m 0 "

culada a cobaia 232.

Cobaia 2 32: Inoculada cm 26-V-931 com 1 cc. de liquido de lavagem p cf1 *

toneal da cobaia 230. A reacção desta cobaia foi a seguinte, nos dias que **

seguiram: 3S®,5; 39®7 ; 40" ; 40®,2; 40\1. Morreu na noite de 31 para l-VI-931*

Cobaia 329: Foi inoculada em 21 -VI 1 1-93 1 com liquido de lavagem e rasp*'

gem peritoneal (emulsão cm 20 cc. de agua physiologica), na dose de 1 cc. &

uma diluição a 1% (na realidade maior) da emulsão original. Teve incubaç* 0

de 5 dias c reacção febril de 6 dias, resistindo á infecção, mostrando-se, porc^ -

114

SciELO

0 11 12 13 14 15 16

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

115

®tmunizada em relação a uma segunda inoculação do virus activo feita em

1&-IX-931.

Por todos estes resultados fica evidente a infectuosidade do material de

^P^gem peritoneal e que as rickettsias, desembaraçadas o mais possivel do

^rus”, são capazes de determinar na cobaia a infecção experimental caracte-

^Mica, da mesma forma que quando se emprega o sangue ou emulsão de cerebro

^5 uma cobaia infectada.

Outra comprovação da relação etiologica da rickettsia que descrevemos com

0 typho exanthematico de São Paulo seria a verificação do seu valor antigenico

com a infecção experimental.

Vejamos a seguir as experiencias que fizemos neste sentido e seus resultados.

b) Poder antigenico ou vacei nante das rickettsias cm relação á infecção

tx Penmental. - Todas as tentativas, aliás numerosas, que fizemos para a immu-

auação de cobaias com vaccinas preparadas com o cerebro de animaes infectados,

^ 0r am negativas. Desnecessária se torna agora a descripção completa destas ex-

pendas. Diremos apenas que preparámos a vaccina de accordo com as techni-

^ empregadas para o preparo da vaccina amarillica (com formol, chloroformio,

«'•), com algumas modificações aconselhadas na occasião. Os animaes vacci-

^dos com 1, 2 e 3 doses, espaçadas de uma semana, não resistiam á inoculação

^ prova, com o virus activo, feita gcralmente um mês depois da ultima

sn °culação.

A forma do "virus” representada pela rickettsia possue, porém, proprieda-

antigenicas segundo já havia s;do verifcado por H. da Rocha Lima, com a

^*kettsia proveaseki existente nos piolhos infectados, suggcrindo o preparo de

vaccina com emulsão destes transmissor es, por Spencer c Parker (55) c

^tnor (56), em relação á febre macaosa das Montanhas Rochosas, com o em-

Pre 8o de carrapatos infectados, e, mais reccntementc, por Zinsser e Castancda

^)» que conseguiram o preparo de uma vaccina íormolada dotada de propric-

vaccinantes, com material de túnica vaginal e peritoneo, rico em “corpus-

^-•os <j e Mooser”, tornando estes elementos mais abundantes por meio de in-

jtc Ções de benzol (58) ou por uma dieta especial de carência (59) ou, ultima-

5lent «. submettendo os animaes, previamente, á acção de raios X (GO).

Para a verificação do valor antigenico ou vaccinante da rickettsia do nosso

^ho, preparámos algumas partidas de vaccina com material de raspagem per-

rico nestes microorganismos.

Eis uma das experiencias, a mais completa da serie, c a tcchnica empregada

Preparo:

Tcchnica do preparo da ixiccina. A cobaia 190 foi sacrificada cm 8-V-931,

5* dia após ter sido inoculada, no peritoneo, com o virus (emulsão cere-

d* cobaia 185), estando no !.• dia da rcacção febril. A caridade peritoneal

115

116 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

foi lavada com 20 cc. de agua physiologica formolada a 0,2%, sendo a folha

parietal raspada para que maior numero de cellulas se destacassem. O liquido

obtido foi agitado e lavado com a mesma solução, sendo o deposito da centri-

fugação, rico em rickettsias, emulsionado em 20 cc. da solução formolada e dis-

tribuído em ampolas de 2 cc., que foram conservadas no frigo.

Experiência dc vaccinação. - No dia 13-Y-931, isto é, 5 dias após o preparo

da vaccina, foi iniciada a vaccinação de 2 cobaias, uma com 2 doses e outra coci

3 doses, sendo o virus activo inoculado, para verificação da immunidade. cerca

de 20 dias depois da ultima injecção. Eis os resultados da experiencia:

Cobaia 21 7: Soffreu 3 injecções da vaccina: a 1.* de 4 cc., por via sub-

cutânea, em 13-V-931 ; a 2.* de 4 cc., por via peritoneal, cm 18-V-931 e a 3.* àe

2,5 cc., por via subcutânea, em 23-V-931. Após a l. a inoculação observou-se

rcacção local, com edema, motivo por que a 2." dose foi feita no peritoneo

Como consequência das injecções a cobaia não apresentou reacção febril. Eu 1

17-YI-931, decorridos 25 dias da ultima dose. foi inoculada com o virus segura-

mente activo (emulsão de cerebro da cobaia 244), não apresentando reacção

febril e mostrando-se, pois, immunizada.

Cobaia 218: Soffreu apenas 2 injecções da vaccina: a 1.* dc 4 cc., por via

subcutânea, cm 13-Y-931 e a 2.*, por via peritoneal e na mesma dose, em 1S-Y-931

A 1.* inoculação provocou, talvez devido ao formol, reacção local e ligeira ne-

crose da pelle. A cobaia, porém, não apresentou reacção febril. Decorridos

dias, em 10-YI-931, foi inoculada com o virus activo (emulsão de cerebro &

cobaia 239). Como consequência, a temperatura não passou da media nonu* 1

durante longa observação, mostrando-se, pois, a cobaia immunizada. O virus cr*

seguramente activo, pois serviram como testemunhas da inoculação deste dia ■*

cobaia 244 e o Alauatla I (bugio), que tiveram infecção característica, inclu»:'-

com provas de passagens.

Estas duas experiências, alem dos outros elementos que já estudámos, m°'‘

tram também as relações das rickettsias que descrevemos com o typho de Sã* 7

Paulo, em virtude do poder antigcnico em relação á infecção experimental n* 3 '

nif estado por uma vaccina contendo estes microorganismos.

Finalmente, para completarmos este cyclo de demonstrações, uma vez <F J

as rickettsias provocam uma immunidade activa, tornando, portanto, possive! 1

prophylaxia da infecção por meio de uma vaccina, faltava-nos verificar si

soro de um animal com ellas inoculado teria alguma acção sobre o prop 1 ^

“virus”.

Iniciámos nesse sentido uma serie de expericncias, cujos primeiros res i:

tados, embora sejam os mais animadores, não nos auctorizam ainda a uma C* 1

clusão definitiva.

110

J. Lemos Monteiro — Typho cxanthemalico de S . Paulo 117

Em todo caso, merecem registo desde já, pois talvez encerrem a solução da

therapeutica especifica das “rickettsioses” em geral.

c) Poder virucida do soro anti-rickcitsico. - E’ facto conhecido, depois dos

trabalhos de Nicolle e Conseil (61), que o soro de convalescentes do typho clássi-

co possue propriedades preventivas em relação á infecção. Estas propriedades só

são, de um modo certo, presentes no soro do convalescente como consequência

da infecção, apresentando variações conforme a intensidade desta. E’ o que

acontece também com os animaes sensiveis, embora os anticorpos preventivos ou

neutralizantes do vinis desappareçam depois de certo tempo. Com relação ao

“virus” do typho endemico da America do Norte, Zinsser e Batchelder (62)

verificaram sua neutralização “in vitro” com soro de cobaia, desde que a sangria

fosse feita do l.° ao 10.® dia da deíervescencia sómente. Julgam que se trata

antes de uma immunização activa pelo virus, talvez attenuado, mas ainda existen-

te, do que de uma immunização passiva pelo soro.

O soro de convalescente não apresenta propriedade curativa e não se con-

seguiu, até hoje, o preparo de um soro activo com a inoculação do virus em

anitnaes (*).

Tendo verificado que o asno pode apresentar uma infecção inapparcntc,

após a inoculação do virus, e mesmo reacção febril pela inoculação por via ve-

nosa, Nicolle e Conseil (63) obtiveram com este animal um soro dotado de algum

poder preventivo.

Geralmente todas as numerosas tentativas para a obtenção de um soro

contra o “typhus” são baseados na inoculação em animaes (carneiro, caval os,

etc.) do virus representado pelo sangue ou emulsão de organs (cerebro princi-

palmente) de doentes ou animaes sensiveis infectados cxpcrimentalmente. Estas

tentativas têm talvez falhado pelo facto de, não sendo os grandes animaes susce-

ptíveis ao virus, este se destruir ou se inactivar logo após a inoculação, não

podendo, pois, determinar a formação de anticorpos. Esta occorrcncia se

justifica pelo facto de uma vaccina preparada com emulsão de cerebro de cobaia,

como assignalámos, não proteger estes animaes contra a infecção experimental,

talvez pela circumstancia de, segundo hypothescs suggcridas por A. do Amaral,

oceorrer, no caso da inoculação de cerebro virulento de animal infectado, qualquer

dos dois phenomenos seguintes:

1. ou tuna phase anantigcnica da evolução das rickcttsias;

2. ou a intervenção da conhecida acção phylactica dos lipoides, que impos-

sibilitaria o proprio exercício do poder antigenico do virus inoculado. Em qual-

(•) Mais rcccntemcnte. alguns auctores. entre clles Píaijr c Iermain, referem re-

sultados favoráveis com o emprego do sangue total de convalescente no tratamento da

“ febre exanthematica".

118

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

quer das hypotheses, occorreria a impossibilidade da formação dos anticorpos cor-

respondentes ao virus.

O mesmo não se poderá dizer quando se lança mão, como vimos, das ricket

tsias que são seguramente dotadas de propriedades immunizantes em relação á

infecção experimental. O soro de um animal immunizado com estes elementos

deveria possuir também alguma influencia sobre o “virus” e, portanto, sobre a

infecção, embora não se possa ainda nutrir grandes esperanças quanto a seu

valor curativo, de que é desprovido o proprio soro de convalescente.

Baseado nas considerações expostas, resolvémos immunizar 2 carneiros ;

sendo um com o virus somente e outro com material rico em rickettsias e veri-

ficar si os soros destes animaes possuiam alguma acção neutralizante in vitro

sobre o virus.

Estes animaes soffreram um numero restricto de inoculações, de modo que

os resultados que vamos resumir são somente preliminares, não auctorizando,

como já dissemos, a conclusão definitiva.

Technica empregada. - O virus que serviu para a inoculação do carneiro I

era representado por emulsão de cerebro de cobaias infectadas e sacrificadas em

periodo de reacção febril, geralmente no 4.* dia, emulsionado em agua physiolo-

gica c passado em gaze, sendo a inoculação praticada por via subcutânea. A 1“

dose foi representada por cerebro de uma cobaia e as seguintes por 2 cérebros,

sendo as inoculações espaçadas de vários dias.

As rickettsias que serviam para a inoculação do carneiro II eram represen-

tadas por lavagem peritoneal e emulsão de toda a folha parietal, triturada em

areia, onde os microorganismos eram encontrados com facilidade. A emulsão

assim obtida era centrifugada por poucos minutos e a pequena velocidade, para

depositar os tecidos. O liquido era inoculado por via subcutânea, em doses

crescentes, com o emprego de maior numero de peritoneos e intervallados d<

vanos dias.

Os carneiros não apresentaram reacção febril accentuada alem da media

normal; apenas perderam peso, »> que se poderá attribuir ao facto de terem

ficado presos, pois que viviam soltos no pasto.

Depois de 13 dias da 3.® inoculação, foram sangrados em cerca de 500 cc.

de sangue cada um. Para maior rendimento do soro, o sangue foi recebido cm

balão contendo bolas de vidro e desfibrinado, sendo, em seguida, centrifugado c

o soro separado. Uma parte, usada nas experiencias que vamos descrever, foi

separada e o restante, depois de phenolado a 0,4^ó, foi filtrado cm papel fino c

distribuído cm ampolas de 5 cc.

Para a verificação do poder neutralizante dos dois soros, doses diversas

(2,5 e 10 cc.) eram addidonadas ao virus (emulsão de cerebro infectantc diluido

na dose de 1 gr. do orgam para 10 cc. de agua physiologica, sendo a emulsão

118

SciELO

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J. Lemos Monteiro — Typho exanlhematico de S. Paulo

119

Passada em gaze) ; depois de um contacto de meia hora na temperatura ambiente,

a mistura era inoculada no peritoneo de cobaias e coelhos normaes.

Como testemunhas foram usados soros normaes de carneiro e de cavallo.

Resultados preliminares. - Das varias experiencias até agora realizadas com

os soros da primeira sangria destes carneiros, feita depois de 13 dias da 3.* ino-

culação dos antigenos indicados acima, e as testemunhas com soro destes ani-

les tomado antes da immunização e com soro normal de cavallo, pudemos veri-

ficar que, na menor dose usada (2 cc.), somente o soro do carneiro II possuia

°c“o poder virudda "in vitro”.

E’ preciso lembrar, em todo caso, que soros normaes de certos animaes

Podem apresentar poder neutralizante em relação ao virus verdadeiro. Isto ve-

rificámos, ha tempo, com o virus vaccinico, sobre o qual o soro de vitello normal

puro e mesmo diluido a 1/10 apresenta acção “in vitro", sendo que o indice de

Por outro lado, é preciso ver que a quantidade do virus (emulsão de ce-

^'"ez, muito mais de 1000 D. M. I. (doses minimas infectantes) . Mesmo nestas

Audições, por esses resultados preliminares, parece ter havido a formação de

an ticorpos vinicidas em cerra prooerção somente no soro do carneiro II immu-

Somente a continuação dos ensaios, sob outras condições experimentaes (*),

Independente, porém, da confirmação desta ultima hypothese, julgamos ter

demonstrado, pelos resultados obtidos nas diversas phases descriptas das nossas

Cx periencias, o estreita relação e':ologica existente entre a rickettsia que des-

ovemos, Rickettsia brasiliensis, e o typho cxanthcmatico de São Paulo.

d) Verificação da Rickettsia brasiliensis cm carrapato (Amblyomma ca-

(*) Com estr obiect ivo. temos em andamento outras nesoui&ai Entre estas, nssrra-

lf nm unidade (nos vitellos já vaccinados) é indicado pelo poder virucida em titulo

a 1/50 ou 1/100 em relação ao virus de determinada actividade (Gins positivo a

1 / 1000 ).

r ebro) infectanre misturada ao soro era excessivamente elevada, representando.

uizado, como vimos, com material contendo rickettsias.

P°derá fornecer conclusões mais seguras relativamente á possibilidade de se

°bter também uma immunidade passis-a, portanto um soro anti-rickettsico, dota-

'1° de propriedades virucidas e, talvez, preventivas em relação ao virus.

,ett nense) infectado. - Em trabahos anteriores (64 e 65) foram relata-

Prctcndemos igualmcnte. empregar. para a obtenção de material rico para as inocula-

de grandes animaes (carneiro e cavallo). os mcthodos de enriquecimento in vivo, já

e da rickettsia desenvolvida cm carrapatos ( Amblyomma cojennenst) infectados

* °°* quacs são encontradas cm grande quantidade.

119

120

Memórias do Instituto Butantan — • Tomo VI

das as pesquisas realizadas no nosso Instituto sobre a possibilidade da trans-

missão experimental do virus por Ixodidae e as realizadas com alguns arthro-

podos (pediculideos, pulicideos, acarianos, etc.) sob condições naturaes. Os re-

sultados des.es estudos, tendentes a elucidar aspectos epidemiologicos da infec-

ção, os referentes á pesquisa de depositários do vinis na natureza (66) e o es-

tudo de um virus isolado de ratos da zona urbana da cidade, acham-se expostos

em outros trabalhos especiaes e pormenorizados.

Continuando as nossas pesquisas sobre os possíveis transmissores do typh"'

exanthematico de S. Paulo, realizámos uma nova serie de pesquisas com car-

rapatos, com a efficiente collaboração de Flavio da Fonseca, distincto compa-

nheiro de trabalho. Os nossos resultados, bastante intere^antes e que se apoiaffl

na experimentação, são expostos com minúcia em trabalho á parte (67).

Ainda com o fim de accentuar aqui, com novos dados além dos já expos-

tos, a relação etiologica da rickettsia que descrevemos com o typho de S. Paulc,

diremos algumas palavras sobre essas pesquisas.

A infecção experimental pode ser transmittida por intermédio de carrapa-

tos c, dentre as especies encontradas na zona infectada, pelo Boophihis micro-

pius e pelo Amblyomma cajetimnse.

Com o Amblyomma cajcnnense obtivemos a infecção não somente pd a

inoculação de carrapatos infectados, como também pela picada.

Verificámos, em esfrcgaços de ovos de Amblyomma infectado, a presenÇ 1

de microorganismos semelhantes r rickettsia e também a infecção pea inocula-

ção de ovos em cobaia, observando a presença de rickettsias nas cellulas o 3

parede abdominal deste animal. Confirmamos, assim, os resultado- de nossas

anteriores pesquisas, quanto á transmissão hereditária do ‘‘virus” neste car-

rapato. •»

Finalmente, em cortes de Amblyomma infectado pudemos pôr em evi-

dencia a presença de microorganismos, em numero considerável, semelhantes a$

rickettsias e cuja morphologia e localização no organismo do carrapato estão

sendo estudadas e serão descriptas em trabalho a ser publicado cm collaboraçã 0

com aquelle distincto collega (*).

(•) Em nota á margem, num trabalho anterior, apresentado, cm 8-VH-1932. á S 1 *-

Biol. dc São Paulo (“Novas experiências sobre a transmissão experimental do sirus ó->

typho exanthematico de São Paulo por carrapatos”), assignalamos jà este facto. E**“

mnando ma or numero de exemplares infectados expcrimcntalmentc. desde 7 dias após 0

fim da alimentação infectante até prazo superior a 30 dias, quando os carrapatos era*®

lixados, pudemos melhor estabelecer a localização da Rickdlsia brasilLmsis nesse IxodkW 5 '

No inicio se apresentam, com sua morphologia typica. corados em violeta pelo Gietn** -

enchendo numerosas cellulas no interior do intestino (divcrticuloO. cellulas longas e

-e dispõem em columnas partindo da parede e que contém os produetos alimentares

vias dc digestão; nas paredes os micro-organismos são encontrados tambem no cs-topla»***

cellular. As rickettsias são encontradas em outros organs. de sorte que um estudo tlU "

minucioso está sendo feito c constituirá, como dissemos, objecto dc um trabalho á pa***

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SciELO

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J. Lemos Moxteiuo — Typho exanthematico de S. Paulo

121

Assignalando a presença da Rickettsia brasilicnsis no carrapato ( Amblyotn -

cajennense), seu mais provável transmissor intermediário, que havia sugado

um animal infectado experimentalmente, completamos os estudos que empre-

hendemos sobre suas relações com o typho exanthematico de S. Paulo e damos

c °mo concluida a 2.* parte desta mooographia.

Resumo e conclusões da 2.* parte

A 2.* parte deste trabalho representa um estudo de conjuncto sobre a ricket-

^'•a que descrevemos no typho exanthematico de São Paulo, sua frequência

e relação com a infecção experimental.

Numa introducção, fizemos considerações geraes sobre o grupo de in-

tecções que constituem as “febres typho-exanthematicas” ou "typhus”, mos-

hando a conveniência de ser elle desligado do grupo dos verdadeiros virus fil-

háveis para constituir um grupo á parte, ao qual caberia melhor a designação

'* e “rickettsioses”. Mostrámos também que o conceito unicista em relação aos

a g«Ues etiologicos das rickettsioses e mesmo o conceito dualista, deve ser substi-

h«do por um conceito pluralista. Isto porque a este grupo pertencem, sem

duvida, outras infecções, como a febre maculosa das Montanhas Rochosas, a

itbre marselhesa, a botonosa de Tunis, a tsutsugamushi c o typho exanthematico

dc São Paulo, entre outras, que se diffcrenciam por vários aspectos, principal-

^nte de caracter experimental e epidcmiologieo.

Nesta ordem de ideas também as “rickettsias” responsáveis pelas varias

®fccções se diííerenciariam pelo aspecto clinico destas, pelo comportamento

^Perimental e localização e pelos seus agentes transmissores até que tenhamos

^ mão outros elementos, ate agora não obtidos de um modo praticamente utili-

** v *l para esse fim, como a cultura em meios artificiaes, para sua distineção

St *»undo a technica bacteriológica. Da mesma forma que a simples identidade

^rphologica e mesmo certa especificidade antigenica, não podem, por si sós,

‘denti ficar di ff crentes germes em vários grupos microbianos, que se differen-

^m c se classificam por outros caracteres que podem ser estudados de accordo

c ° n i a technica moderna, provavelmente os microorganismos responsáveis pelas

^ettsioses virão a ser melhor distinguíveis quando possivel se tomar a appli-

^*0, cm seu estudo systemarico, de tacs mcthodos aperfeiçoados. No cn-

7 **o, os elementos até agora assignalados parecem sufficientcs para impór sua

^hdncção.

Relativamente ao typho exanthematico de S. Paulo, embora não se possa

4ln 'ia concluir em definitivo, parecem maiores suas relações com o grupo da

,^:e maculosa das Montanhas Rochosas, constituído, talvez, uma nova moda-

‘ ; dade da infecção, em virtude do comportamento experimental do “virus" c

° tttr os caracteres que assignalámos.

121

SciELO

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122

Memórias .do Instituto Butantan — Tomo VI

Assim sendo, até que novos estudos sejam emprehendidos. os “corpúsculos

de Mooser”, que melhor se denominariam Rickcttsia tnooscri , como homena-

gem ao illustre pesquisador que tão bem os estudou no typho mexicano, deverão

considerar-se distinctos da Rickettsia brasiiicnsis, responsável pelo typho exan-

thematico de S. Paulo. O mesmo poder-se-á dizer, embora maiores suas aííi-

nidades, também em relação á Rickcttsia ( Dcrmcccntroxemis ) rickcttsi Wolbach,

responsável pela rickcttsiosc das Montanhas Rochosas, assim como em relação

ás outras especies descriptas, pertencentes ao genero creado pelo prof. Rocha

Lima, responsáveis por outras rickettsioses.

Fizemos um estudo detalhado da rickettsia do typho exanthematico de S.

Paulo dando os resultados da pesquisa destes elementos, primeiramente nas

cellulas endotheliaes da membrana de Descemet, após a inoculação do “virus”

na camara anterior do olho de animaes (cobaia, coelho e Macacus rhcsiis ) I

em seguida, nas cellulas mesothcliaes da parede peritoneal de cobaias após a

inoculação do "virus” no peritoneo. Descrevémos a technica que empregámos

para a pesquisa da rickettsia e os methodos para a coloração destes elementos

(methodo de Castaneda e Giemsa). Assignalámos a morphologia da Rickettsia

brasiiicnsis, sendo a descripção d»:umentada com numerosos desenhos e micro-

photographias.

Relativamente á frequência da rickettsia nas cellulas da parede peritoneal.

após a inoculação do virus no peritoneo, obtivemos resultados positivos e®

73,5 % num total de 212 cobaias examinadas. Esta porcentagem é maior quando

a pesquisa é feita em occasião favoravel.

Estudámos as relações da rickettsia, já evidentes pela sua frequência, cota

a infecção, verificando suas propriedades antigenicas. Mostrámos que a ri-

ckettsia, desembaraçada do virus existente no peritoneo, por meio de lavagens

e centrifugações successivas, é pathogenica, causando infecção experimental

typica e possue evidentes propriedades vaccinantes em relação ao virus. Indi-

cámos a technica para o preparo da vaccina e os resultados da vaccinação de

cobaias comparativamente com os negativos obtidos com uma vaccina prcparad*

com o “virus” (cérebro).

Por fim, em experiencias preliminares, mostrámos que a rickettsia, a ! éto

desta immunidade activa, determina também uma immunidade passiva, ná°

sendo irrazoavel al mentar-se esperança no preparo de um soro, sinão dotado de

propriedades curativas, pelo menos com poder preventivo e ncutralizante e®

relação ao "virus” e á infecção.

Finalmcnte, assignalámos a verificação da presença da Rickcttsia bro&‘

liensis em ovos que se mostraram infectames e em cortes de carrapato (A#'

blyomma cajcnncnsc ) que havia sugado um animal infectado e capaz de tra®'

mitt r. pela picada, a infecção experimental, experiencias estas realizadas com *

collaboraçáo de F. da Fonseca e que serão objccto de trabalho especial.

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J. Lemos Monteiro — Typho exanlhcmatico de S. Paulo

123

As conclusões dos estudos experimentaes, constantes da 2.* parte deste

trabalho, podem asrim ser resumidas:

I. A rickettsia que descrevemos no typho exanthematico de São Paulo,

Rickettsia brasilietisis, pela sua frequência e evidentes relações antigenicas que

apresenta com a infecção, representa o seu agente etiologico ou uma das phases

do “virus”.

n. Como consequenda da inoculação do virus na camara anterior do olho

de certos animaes, a rickettsia pode ser evidenciada nas cellulas endotheliaes da

membrana de Descemet.

III. Após a inoculação do virus no peritoneo, a rickettsia se evidencia,

de preferencia, nas cellulas mesothtliaes da parede periPoneal.

IV. No peritoneo, num total de 212 cobaias, sua frequência foi verificada

e >n 73,5% dos animaes, sendo maior quando a pesquisa é feita em periodo

favorável, sendo respectivamente de 71,4%, 100%, 93,7% e 90,4% nos animaes

sacrificados antes da reacção febril, no l.°, no 2.° e no 3.® dia de reacção, c dc

55,5% nos sacrificados depois do 4.® dia de reacção febril.

V. A rickettsia encontrada no peritoneo é dotada de pathogenicidadc.

Provocando infecção experimental característica quando, desembaraçada do virus

Por meio de lavagens e centrifugações successivas, é inoculada em cobaias.

VI. A rickettsia possue propriedades antigenicas em relação ao “virus”,

Podendo-se obter uma immunizaçâo activa de cobaias com uma vaccina com

ella preparada, e também determina a formação de anticorpos virucidas cm

a n:tnaes immunizados.

VII. A Rickettsia brasiliensis foi verificada, em cortes, no organismo de

carrapato ( Amblyomma cajcnnense ) infectado experimentalmcntc e que convi-

êramos o mais provável transmissor da infecção. Esta conclusão é baseada

dn estudos experimentaes que serão relatados em outro trabalho, onde será

kmbem estudada a disposição c localização da Rickettsia nos carrapatos in-

fectados.

STUDIES OF THE SÃO PAULO TYPHUS

J. LEMOS MONTEIRO

11 »h 54 charts. 6 plates icith 9 fhotographs. of tchich 1 í* colours , 2 micro fhoiogrjfhs

and 17 draxcings.

GENERAL SUMMARY

Pakt I

Experimental behaviour and properties of the virus

‘-Hapteji I - Introduction.

1. - Group of thc “ typhus-cxanthcmatic” fevers in America:

a) in the Septentrional Contincnt; b) in the Merklional Continen:

2. - Serological relationship of thc diffcrcnt forms of typhus.

3. - The São Paulo typhus and its cpidcmiological feature.

* ,,a *tkb II - Behaviour of the virus in thc course of experimcnts on small

laboratory animais.

1. - Results of experimcnts:

A) Course of the infcction in the guinea-ping: a) anatomical

lesions; b) inflammatory rcaction in thc scrotum; c) im-

munity.

B) Behaviour of tlic virus m othcr laboratory animais: a) rabbit;

b) white rat; e) whitc mouse; d) grcy rat; c) cat

2. - Discussion.

3 - Conclusions.

■‘•'PTEn III - Behaviour of the virus in thc course of experimcnts on certain

monkeys ( Silenus , Cebus, Alaualla ).

1. - Results of thc experimcnts.

2. - Summary and conclusions.

123

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126 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Chapter IV - Experimental infection by inoculating the vinis into the anterior

chamber of tbe eye.

1. - Results of the experiments.

2. - Discussion and summary.

3. - Conclusions.

Chapter V - Some properties of the virus.

1. - Filterability.

2. - Passage of the virus through the intact ocular conjunctiva and

M I.D. (min : mum infecting dose).

3. - Resistance of the virus under various conditions: a) resistance to

drying; b) resistance against the action of glycerin pure or diluted

to 50%; c) resistance after freeztng.

4. - Discussion and summary.

5. - Conclusions.

Chapter VI - I.xanthematic fevers. Comparativc testing on guinea-pigs of the

virus of the classical typhus (of the old world) with tbat

of the endemic typhus (or North America) and that of the

exantbematic typhus of São Paulo.

Summary and conclusions of PART I.

Part II

Rickettsia brasiliensis and its relationship with the infection

Chapter VII - Introduction : Rickettsioses and their pluralistic conccpt. The

Rickettsia of the exantheraatic typhus of São Paulo.

Chapter VIII - Presence of Rickcttsiae in the cclls of the Descemefs membrane

in animais inoculated with the virus in the eye anterior

chamber.

tl. - Tcchnique cmployed.

2. - Frequcncy and morphology of the Rickcttsiae in the celts of tbe

Desccmct's membrane.

Chapter IX - Presence of Rickettsiae in the mcsothelial cells of the pcritoneal

wall of guinea-pigs inoculated in that cavity with the virus-

1. - Tcchnique cmployed.

2. - Morphology and arrangemcnt of Rickcttsiae in the cells of the

pcritoneal wall

3. - Frequency of Rickettsiae in the mesothelial cells of the pcritoneal wtll.

Chapter X - Relation of the Rickettsiae of the exanthemalic typhus of São

Paulo with the experimental infection.

126

J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

127

Bibliography.

1. - Infectiveness of Rickettsia brastlicnsis Monteiro.

2. - Ant'genic or vaccinating power oí the Rickettsiae in connexion with

the experimental infection.

3. - Virulicidal power of the anti-rickettsia serum.

4. - Presence of the Rickettsia brasilútisis in infectcd ticks, viz.. Am-

hlvomma cajenstense.

5. - Sranmary and conclusions oí PART II.

ABSTRACT

Part I

I. The prescnt paper is the rcsult of rescarches, made during the year

1931 and the first semester of 1932, most of which have been summarized

: n a series of notes published in “Brasil-Medico”, some, however, having been

Pr^ented to the 2nd International Congress of Comparative Pathology, held in

Paris in October 1931. Such features of the São Paulo typhus as its transmis-

5, veness, hosts to the virus in nature, etc., have likewise been investigated in

^peration with other assistanfs at the Instituto Butantan; a résumé of such

Itlv cstigations has also been published as presented to the “Sociedade de Medi-

ana e Cirurgia de São Paulo” (Laboratory Week, January, 1932) and to the

Sociedade de Biologia de São Paulo”, the subjects dealt with at thosc mecb-

ln gs having, nevertheless, been more throroughly analysed elsewhere.

This English translation covcrs but thosc chaptcrs which dcal particularly

**th the Author's personal contriburion from an experimental standpont and

^ose in which his views are set forth as to the character of the typhus problem

ln our midst. The remaining points referred to in the General Summary

to gether wirh the detailed protocols oí the cxperiments made may bc íound in

ll, c Portuguese text.

— S nce 1929, when it was diagnosed, therc lias appcarcd in São Paulo

infection of the group of the “exanthematic fcvcrs”, which, however, has

lls own individuality, as jier its clinicai and epidcmiological fcature and bchaviour

ttnder experimental conditions. In the prescnt paper, which is divided into two

Parts and ten chapters, the São Paulo tyfltus is analysed with regard tr the

^perimental behaviour of its “virus” on animais and to its etiological featurc

a* well. which includes a description and a study of its relationsh p with the

re ípon«ible rickettsia, Rickettsia brasiliensis Monteiro, 1931.

The designations “typho endêmico de S. Paulo” (S. Paulo endenre typhus)

"typho exanthematico de S. Paulo” (S. Paulo exanthematic typhus) had

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Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

been adopted but the name “S. Paulo typhus” is now used in their stead to

be in conformity with the English nomenclature of this group of diseases.

A comparative study of the exanthematic fevers thus far reported in several

countries of the western world gives ground for the S. Paulo typhus to be

eonsidered as distinct from any of these fevers as it is from the European of

epidemic typhus.

II. In regard to the experimental infectiousness of the vinis for the

various laboratory animais, it seems to be most matked in the guinca-pig since

the virus produces, on inoculation into this animal and after an incubation

period of 3 to 4 days, a íebrile reaction lasting generally from 3 to 8 days

and ending by death in about 70 % of the cases. Just before death the tem-

perature of the iníected guinca-pigs drops to below normal, sometimes rising

for a while to drop definitely. In case of recovery their temperature returas

to normal and they resist further inoculation of the active virus thus showing

to have acquired immunity. This may last for at leasr 3 moníhs but is not

indefinite as it gradually decreases and disappears, the guinea-pigs becoming

again susceptible to the virus.

Among the anatonrcal lesions found in guinea-pigs inoculated with tlie

vini" the splccn enlargement is most marked and constant; subcutaneous hemor-

rhages with jelly-like oedema may also occur especiaily at the inguinal regions

when scrotum inflammation is present; histological alterations such as nodular

lesions of the brain seem to be rare or ab*ent contrary to what prevails in rhe

European typhus.

Upon intrapcritoneal inoculation male guinea-pigs develop in 20 to 25^

of the instances a reaction charactcrized by swelling of the scrotum, either

light with but rcddcning and oedema, or marked, sometimes with great enlarge-

ment, petechiae and purpura, testicle retention and even necrosis of the

local skin.

The behaviour of the S. Paulo typhus as regards the guinea-pig serves

as a means of disiincrion of this infection from other typcs of exanthem-

atic fevers. In this respect the former may indecd be separatcd from the

classical typhus, pathogenically by its shorter period of incubation and ícvcr

and grcatcr severity, and hhtologically by the abscncc or great rarity of brain

nodular lesions. This may be duc to a more rapid evolution in the S. Paulo

tyohus which in this respect resembles certain forms of North American endcmtc

typhus. Howcver, the S. Paulo typhus also d ffers from both the North

American endemic typhus and the “tobardillo” not only in bearing a somewhat

shorter pyrexia but also in being followed by scrotum reaction in a lower

proportion of the cases: 20 to 25 % as against 90$» (Maxcy) in the Southern

typhus of the United States and 70 % (Ncill) to 92 , 5 % (Mooscr) in the

Mexican typhus. Moreover, hemorrhages in the scrotum and even in some

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J. Lemos Monteiro — Typho cxanthematico de S. Paulo

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other bare regions (foot plants) are more írequent in our typhus and are

complicated, although seldom, by necrosis of the local skin. The virus of both

the Xorth .American and the S. Paulo typhuses cause this scrotum reaction in

guinea-pigs only upon intraperitoneal inoculation, \vh:lst that of the Rocky

Mountain spotted fever causes it even on hypodermic injection due to its

more marked tropism for the scrotum and apparently greater hemorrhagiparou*

and cytolytic power.

Rabbits are more resistant as they develop a rather short feverish reaction,

preceeded by a short incubation and seldom followed by death. Rats generally

nndergo an inapparen: infection.

III. The inoculation of the S. Paulo virus into Silenus rhesus monkeys

' s followed by a 2-4 day incubation period and a typical pyrexia usually last-

ln g 4 days and ending in collapsus and death; in some specimens the infection

ls more severe and appears complicated with hemorrhagic phenomena (face,

^rotum, etc.) particularly accentuated on their last day of life and right after

'fcath.Other simia, such as Ccbus and Alcualta, seem also to be susceptible,

^though the number of inoculations is not sufficient ro permit a conclusion.

IV'. Inoculation into the anteror chamber of the eye of guinea-pigs,

mbbits and rhesus monkeys brings about not only a cliaracteristic ocular reaction

kut a feverish general infection similar to that which cnsues its intraperitoneal

•noculation. That such reactions are speciftc is shown by the successful transfer

°f the virus to normal animais by means of an injection of cither blood or

kniin cmulsion of guinea-pigs thus infected as well as by the resistancc to the

as injected into the eye on the part of guinea-pigs that werc alrcady

tmniune; it is also shown by the serial transfer, by the eye channel, of the

v 'tus as containcd in tlic aqueous humour of an animal alrcady ocularly

mfccted:

V. Comparatively with the real filtcrabJc viruses the agcnt of the São

^*aulo typhus bears the following peculiar properties:

a) it did not pass thrcugh the 1-3 and L5 Chambcrland, 7 II*. Mandler

* n d N IJcrkcfcld filtcrs when it was found in citratcd blood, or brain cmulsion

,fl saline or in glucose broth, under the conditions dcscribcd in the text ;

b) it secmed not to infcct guinca-piga when a drop of virulent brain

ett >ulsion, in a concentration capable of cau>ing a tjqiical infection by any other

^nnei, was placcd on their normal eye mucosa;

c) its M. I. D. (minimum infccting dose) corrcspondcd to a dilution

s > re ater than 1 per 10000 and lesser than 1 per 1000000 of brain cmulsion;

d) when found in the blood or brain dried in vacuum over sulfuric acid

4r) d kept in vacuum bclow 0°C it lost its virulence in less than 24 hours, l>ecom-

ln g apt to cause but a mild infection ad immunity in guinea-pigs;

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Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

e) in 6 days it was already dead and caused not even immunity;

f) preserved in pure glycerin at 5°C it (viruient brain) lost its virulence

in less than 7 days; in 50^0 glycerin at the same temperature it lost both

vitality and virulence in more than 12 and less than 24 days;

g) in frozen brain it has been preserved for about 1 year; therefore, the

treezing of viruient brains represents the best means for both the eonservation

in laboratory and transportation of the virus as it is cheaper than the maintenance

by successive transfers from animal to animal.

VI. In view of its clinicai, experimental and ep : demiological peculiarities

the S. Paulo typhus should be given individuality to bc p’aced, together with

the Rocky Mountain spotted íever, the eruptive fever and the tick-bite fever,

in one of the subgroups now recognized in the exanthematic fevers. The other

subgroups would be represented respect vely by those infections which bear

the European or classical typhus as type and by the “tsutsugamushi” and

allied infections in which the larvae of certain írombidiid play the rôle of

virus carriers.

Indeed, in spite of Mooseris arguments, in favour of the reciprocai

reversibleness of the viruses of the epdemic and endemic typhuses. th3t

pluralistic concept seems to be more in conformity w!th various facts of

seientifie ob-'ervation regarding the etio-pathogeny of the exanthematic fevers.

Part II

This section deals with the rickettsia found in the S. Paulo typhus, its

frequency and rclationslvp with the experimental infecrion.

Prom a nomenclatural standpoint the group of infections called “exan-

thematic fevers” no doubt must be separated from the diseases ca use d by real

filterabls viruses so as to form a special group for which the name “rickeítsiosis"

seems to be fitting.

From an etio-pathogenic standpoint this group should be subdivided, a*

shown before, into at least threc subgroups. This pluralistic conception scetn 5

to be fully jusíificd, not only by the clinicai feature of the corresponding

infections but by the experimental infectiousncss, localization and transniis*

siveness of their respective Rickctlsiac as well, until other means such as cultiva*

tion of these organisms in artificial media be made acccss : blc to be applied to

their differeniiation. Until some more satisfactory methods based in th*

modern laboratory technic be developed, the S. Paulo typhus individualization

must bc based on the evidence at hand as already shown. In view of th*

experimental behaviour and other characteristics of its “virus” this discas*

seems to 1« mostly related to the Rocky Mountain spotted fever of which l£

may represent a ncw varicty.

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J. Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo

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In the light of the newer knowledge of the various rickettsia-like organisms

it 5€ems indicated for the so-called “Mooser’s bodies” to be named Rickettsia

rnooseri after the distinguished investigator who so well studied them in the

Mexican typhus. In this respect there is little doubt but that this Rickettsia

be diííerent from that found in the S. Paulo typhus, which, although much

closer to, seems to be also distinct from, R. ( Dcnnaccntroxcnus ) rickcttsi

Wolbach, responsible for the Rocky Mountain spotted fever.

The detailed study of the rickettsiae of the S. Paulo typhus is based a) on

their aspect in the endothelial cells of Descemet’s membrane after inoculation

of the “virus” into the anterior chamber of the eye of guinea-pigs, rabbits

and rhesus monkeys and also in the mesothelial cells of the peritoneal wall

after intraperitoneal inoculation and b) on their morphology after staining

*>y Castaneda’s and Giemsa's methods as found in the enclosed drawings and

microphotographs. This study shows that R. brasilicnsis Monteiro, 1931 may

he found in the mesothelial cells of the peritoneal wall of 73,5% out of 212

guinea-pigs intraperitoneally inoculated and examined, that this percentagc is

still higher when the research is made at the right moment. These cell contained

or free rickettsiae, after repeated washing and centrifuging to free them from

the "vinis” perchance existing in the peritoneum, again set up the discase

Upon injection into normal guinea-pigs: likewise, a bactcrin preparcd with them

contrary to what occurs if brain material is uscd, is capablc of producing

immunity by the formation of virucidal antibodies. The S. Paulo rickettsia

antigenic power is prover, by this capacity to bring about active immunity and

to confer passive immunity as well so as to make possible the preparation of

an anti-serum, if not curative, at least preventivc as regards the virus or

the infcction.

Finally, the prcsence of R. brasilicnsis has been discloscd not only in

sections of ticks ( Amblyontma cajennensc ) that have fed on infected guinca-

pigs but in their eggs that also prove to be infecting, this tick being able to carry

the infection under experimental conditions.

From these experiments the following conclusions may be drawn:

a) Rickettsia brasilicnsis represents either the causative agent or one of

the stages of the "virus” of the S. Paulo typhus in vicw of its írcqucncy and

a n:igcnic relationship with this infection;

b) it occurs in the endothelial cells of Desccmefs membrane after inocula-

tion of the virus into the anterior chimbcr of the eye of certain laboratory

>nimals as well as in the mesothelial cells of the peritoneal wall after intra-

peritoneal inoculation;

c) in the latter instance its frequcncy reaches 73,5% of the guinea-pigs

moculated, but this incidcnce is still higher if the research is made at a more

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Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

favourable period: 90,4% on the 3rd day of reaction, 93,7 % on the 2nd day

and 100% on the lst day.

d) it is also decidedly pathogenic for guinea-pigs in which it causes a

typical infection experimentally even though it be previously frecd from the

“virus” by repeated washing and centrifuging;

e) it bears antigenic properties and so may be used in the preparation

of a bacterin to be applied in actively immunizing guinea-pigs and in stimulating

the formation of specific virucidal antibodies;

f) it has been found in sections of experimentally infected ticks (A. cajen-

ncnse), which seem to be the most likely carrier of the S. Paulo typhus under

natural conditions.

132

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R I B L I O G R A P H I A

1.* Pabte

2 *.

Bri II. N. E. — Amer. J. Med. Sc. CXXXIX :4S4.1910.

Anderson. J. F. & Goldberger, J. — Publ. Health Rep. XXVII(5) :149. 1912.

Maxcy. K. F. — Publ. Health Rep. XI.I ^967.1926; XLIII(47:3084.1928;

XLIV(ll) :589.1929.

Mooser, H. — J. Inf. Dis. XLIV(3) :156. 1929

Mooser. H. — J. Inf. Dis. XLIII (3) -.241.1928.

Badger. L. F„ Dyer. R. E. & Rumreich. A. — Publ. Health Rep. XLVI(9) : 463. 1931.

Battaglia. Sf. 1. & Barbará. B. — Rev. Inst. Bact. (Buenos Aires) 11(1) :35.1919.

Kraus, R. — Rer. Inst. Bact. (Buenos Aires) 11(6) :1. 1921.

Pira. J. T., Saltes Games. F. & Fleury. J. P„ Meyer, ]. R.. Castro. J. O., Ro-

drigues. C. & Rocha Lima. 11. da — C. R. Soc. BioL CVI(ll) :1020.1931.

Monteiro. J. Lemos — C R- Soc. Biol CVII(23) :1161 . 1931

Kraus. R. & Barrera, J. Jf. — Rev. Inst. Bact. (Buenos Aires) 11(6) :55. 1921.

Dyer. R. £.. Badger. L. F. & Rumreich. A. — J. A. M. A. XCVII(9) :589.1931.

Fletcher. W. — Proc. R. Soc. Med. (Sect. Epid) XXII 1 :37. 1930.

Felix. A. & Rhodes, M. — J. of Hyg. XXXI(2) :225.1931.

Pijper, A. & Dau, H. — Brit J. Exp. Path. XII (3) :123.1931.

Shelmire, B. & Dove, IV. E. — J. A. M. A. XCVI(8) :S79. 1931.

Monteiro. J. Lemos — CR. Soc Biol. CVIII(30) :52! .1931 ; Brasil-Medico

XLV (35) :803. 1931.

Kicolle. Ch„ Conseil. E. & Conor. A. — Ann. Inst. Pasteur XXVI(S) :250.1912.

Garino. A. & Girard, ]. — Centr. f. Bakt.. Abt. I. Rcf. LIII :342. 1911.

Monteiro. J. Lemos — Brasil-Mcdico X l.V ( 48 ) : 1 109. 193 1 .

Maxcy. K. F. — Publ. Health Rep. XLIV(ll) :S89.1929.

Keill. M. 11. — Publ. Health Rep. XXXII(28) :1105.1917.

Dyer. R. £_, Rumreich. A. S. 6r Badger. L. F. — J. A. M. A. XCVII(9) :S89.1931.

Monteiro. J. Lemos — Brasil-Medico XLV (49) : 1 1 -40 1931.

Nagayo. M„ Tamiya. T.. Mitamura, T, & Sato. K. — Japan. J. Exp. Med.

VIII (4) '.309.1930.

Kagayo. M., Tamiya. T.. Mitamura. T.. âr Hausto, H. — Japan. J. Exp. Med.

VIII (4) :319. 1930.

Alonteiro. J. Lemos — Brasil-Medico XLV(50) : 1 163 . 1931.

Monteiro. J. Lemos — Brasil-Medico XLV(Sl) : 1 18S . 1 931.

Monteiro, J. Lemos & Godinho, R. — Metn. Inst. Butantan V.1930.

Rieketts. 11. & WUder. M. R. — J. A. M. A. LIV:463.1931.

Olitaky. P. — J. Inf. Dis. XX:349.19I7.

Zinsser, H. & Batchelder. A. P. — J. Exp. Med. LI (6) :847.1931.

Kicollc. /f„ Conor, A.. & Conseil, E. — Ann. Inst. Pasteur XXV (2) :97.1911.

133

SciELO

11 12 13 14 15 16 17

134

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

34. Nieolle, Ch. Sr Lalrailly. Ch. — Arch. Inst. Pasteur TurTs XIV' (2) :213. 1925.

35. Sfarrotc, H. & Lnmbroio. U. — Arch. Inst. Pasteur Tunis VIII ( 1 ) :1 . 1929.

36. Nicolau. Galloway. J. A. & Kopciovska. L. — C. R. Soc Biol. CVTI(14) :30.1931.

37. Aragão, H. B. & Costa Lima, J. — Suppl. Mem. Inst. O. Cruz (8). 1929.

38. Monteiro. J. Lemos — Brasil-Medico XLIII(35) :1037.1929; Mem. Inst. Butantan

V.1931

39. Mooser, H. — Gazeta Med. de México LXIII(4) : 1 S 1 . 1932.

40. Monteiro, J. Lemos & Fonseca, F. da — Comm. á Soc. Biol. de S. Paulo, Sessão

de 8-VTI-1932; Brasil-Medico XLVI(3) :3. 1932.

2.* Parte

41. Nieolle . Ch. <5* Sparrorc, H. — Buli. Inst. Pasteur (Revue) XXIX (20) :945. 1931.

42. Monteiro. J. Lemos — Brasil-Medico XLV(47) :1096.1931 ; XLV(48) :1109.1931:

XLV (49) :1 140. 1930.

43. Rocha Lima, H. — Münch. mediz. Wochenscr. 1:33.1917.

44. Rocha Lima, H. — Rickettsien. Sep. do Handbuch der pathogenen Mikroorganistnen

(Kolle & Wassermann) VIII(45) . 1930.

45. Kcdama, M. Kono, M. Sr Taknshi, K. — Ktasato Arch. Exp. Med. IX (2) :91 e 97.1932.

46. Nagayo. M.. Tamiya, T„ Mitamura, T. & Safo, K. — Japan. J. Exp. Med.

VIII (4) :309. 1930.

47. Nagayo. M„ Miyagaira. Y., Mitamura, T„ Tamiya. T., Saio, Hasalo. H.. & ItnJ-

mura, A. — Japan. J. Exp. Med. IX(2) :87.1931.

48. Xagayo. M„ Tamiya, T„ Mitaumura. T. Sr Hasalo, T. — Japan. J. Exp. Med-

VIII (4) .319.1930.

49. Monteiro, J. Lemos — C. R. Soc BioL CVII(23) :1 161 . 1931 ; Brasil-Medico

XLV(21) : 463. 1931 ; XLV(50) :1 163. 1931.

50. Zinsser, //. & Castaneda. M. R. — J. Exp. Med. LII(5) :649.1930.

51. Monteiro. J. Lemos — C R. Soc Biol. CVIII(30) :521. 1931 ; Brasil-Medico

XLV(35):805.1931.

52. Castaneda. M. R. — J. Inf. Dis. XLVII(5) :416.1930.

53. Pinkerton. H. — J. Exp. Med. LIV(2) :187.1931.

54. Zinsser. H. Sr Castaneda. M. R. — J. Exp. Med. LII(3) :325.1931.

55. Sfencer. R. R. & Parker. R. R. — Publ. Heath Rep. XLI(35).1926.

56. Connor, C. L. — J. Immunology IX (4) :269.1924.

57. Zinsser. H. & Castaneda. M. R. — J. Exp. Med. LIII(3) :325.1931.

58. Zinsser. H. Sr Castaneda. M. R. — J. Exp. Med. LII (5 ) :649.1931.

59. Zinsser. H. Sr Castaneda. M. R. — J. Exp. Med. LIII (3) :333.1931.

60. Zinsser. H. Sr Castaneda. M. R. — Proc. Soc Exp. Biol & Med. XXIX (7) :S40.1932-

61. Nieolle, Ch. Sr Conseil. E. — Ann. Inst. Pasteur XXV(l) :46.1911.

62. Zinsser. H. Sr Batchelder. A. P. — J. Exp. Med. LI(6) :847. 1930.

63. Nieolle. Ch. & Conseil. E. — Arch. Inst. Pasteur Tunis XIV(4) J55.1925.

64. Monteiro. J. Lemos; Fonseca. F. da Sr Prado. A. — Brasil-Medico XLV1(3) :49 . 1932-

65. Monteiro. J. l^mos; Fonseca, F. da Sr Prado. A. — Brasil-Medico XLVI(8) :169.4932

66. Monteiro. J. Lemos; Fonseca, F. da Sr Prado. A. — Brasil-MedicoXLVI(9) ; 19J . 1932-

67. Monteiro, J. Lemos; Sr Fonseca. F. da — Comm. á Soc de Biol. de S. Paulo, (ScssáO

8-VII-I932). Brasil-Medico XLVI(48) $93. 1932.

(Trabalbo da SeccAo de Vírus e Virustberapla do In»d"

tutu DulanUn, julho de 1342),

134

LEGENDA DAS GRAVURAS

Estampa I

Figs. 1 2 — Reacção escrotal de pecjuena intensidade.

Figs. 3, 4 — Reacção escrotal mais acccntuada: frente e perfil.

Estampa II

Figs. 1, 2 — Reacção escrotal intensa, vendo-se melhor, na figura 2. ampliada, as zonas de

hemorrhagia e necrose.

Figs. 3. 4 — Reacção escrotal intensa em cobaia, com phenomenos hemorrhagicos e necrose

da pelle.

Estampa III

Fig. 1 — Photographia colorida da Est. II. fig. 2. salientando o aspecto da reacção.

Fig. 2 — Reacção escrotal intensa em outra cobaia, com phenomenos hemorrhagicos cutâneos;

o processo terminou pela necrose da pelle.

Estampa IV

Figs. 1, 2. 3, 4 — Aspectos da Rickettsia brosiliensis era diversas ccllulas colhidas, pela ras-

pagem da membrana de Descem et. cm animaes inoculados com o “ vírus" na camara

anterior do olho: coloração de Castancda.

Fig. 5 — Elementos mais ou menos filamentosos, observados em uma cellula c?a membrana

de Descemet: coloração de Castaneda.

Figs. 6, 7 — Ccllulas da membrana de Descemet contendo rickettsias: coloração de Giemsa.

Estampa V

Figs. 1. 2. 3. 4 — Aspectos da Rickettsia brosiliensis em ccllulas mesothcliaes da parede peri-

toncal de cobaias inoculadas com o " virus" pelo peritoneo. Coloração de Castaneda

Fig. 5 — Campo mcroscopico de idêntico material: duas ccllulas com rickettsias; um po-

lycariócyto com esses elcmmtos. Coloração de Castaneda.

Figs. 6. 7, 8 — Cellulas mesothebaes da parede peritoneal com rickettsias. Coloração de

Giemsa.

Fig. 9 — Parte de um campo microscopico, revelando diversas ccllulas com rickettsias.

Estampa VI

Figs. 1, 2 — Microphotographias de duas cellulas mesotheliaes da parede peritoneal, ricas em

rickettsias: a figura 1 corresponde ao desenho representado pela Estampa V, fig. 8.

135

SciELO

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y<z. i

cm 1 2 3 4 5 6 7

SciELO

Lemos Monteiro — Typho exanthematico de S. Paulo Mrm. imi. Hutanian

■ Vol. VI. 1931

ESTAMPA I

Ei*. I

Mrm. Insl. Itiraintnn

J- Lemos Monteiro

Typho extuilhemalico de S. Paulo

Voi. vi, is.li

ESTAMPA \ I

rig. :

SciELO

PESQUISAS EPIDEMIOLOGICAS

SOBRE O TYPHO EXANTHEMATICO DE SÃO PAULO

POR

J. LEMOS MONTEIRO, F. da FONSECA e ALCIDES PRADO

( Com 10 graphitos t 2 fhotogrophias)

614426

PESQUISAS EPIDEMIOLOGICAS

SOBRE O TYPHO EXANTHEMATICO DE SÃO PAULO

PoK

J. LEMOS MONTEIRO, F. da FONSECA e ALCIDES PRADO

Possibilidade da transmissão experimental do virus por Ixodidae

Como consequência do interesse ulttmamentc observado pelo typho exan-

^niatico, appareceram na literatura deste anno vários trabalhos referentes á

^'ibilidade de infecção, na ural ou experimental, de carrapatos com virus de

^rias das modalidades dessa moléstia.

Depois dos trabalhos fur.damentaes que demonstraram ser a febre das Mon-

^has Rochosas transmittida por Ixodideos e de verificação semelhante feita

*°® r e uma infecção dos ruminantes (heart-water), a primeira demonstração da

^.«missão de infecções deste grupo por carrapato foi dada, no corrente anno,

*'° r Paul Durand e E. Conseil (1), no Ins.ituto Pasteur de Tunis, ficando pro-

q ue 0 virus da febre botonosa se encontra no Rhipicephalus sanguineus

^ r -. carrapato muito commum, e, que, capturado sobre o cão, triturado c ino-

^do no homem, reproduz a infecção. Verificaram ainda estes pesquisadores

s J e o virus pode permanecer var as semanas no Rhipicephalus sanguineus.

Ainda este anno verificaram Georges Blanc e J. Caminopetros (2) que a

‘Secção é transmittida hereditariamente pela femea do Rhipicephalus sangui-

Kr ^’ s ã sua prole, sendo infeaantcs. não só os ovos, como as larvas dclles oriundas,

^fieação esta da mais alta importância para a ep dcmiologia da infecção, pois

t ' n "* mostrar a desnecessidade do contacto do carrapato inícctantc com o doen-

^ * Possibilidade de grande propagação da infecção, bem como a possibilidade

P^sistencia do virus em determinadas regiões, mesmo na ausência de doentes.

Charles Joyeux e J. Picri, finalmcntc (3), acabam de verificar que o

faephalus sanguineus pode conservar durante lapso de tempo rcla.ivamente

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

longo o virus da febre exanthematica mediterrânea, ainda se mostrando infectan-

te depois de hibernar durante uma parte do anno.

Não só em relação á forma mediterrânea do typho exanthematico possuimos

hoje dados sobre o papel desempenhado pelos carrapatos ; também os temos «obre

o typho endemico norte-americano. Hans Zinsser e Ruiz Castaneda (4) con-

seguem infectar experimentalmente carrapatos ( Dennacentor nitens, Dcrmacentor

andcrsoni e Amblyomma sp.) com o virus e transmittir z infecção a animaes de

laboratorio, verificando que os carrapatos podem permanecer infectados durante

o lapso de 14 dias.

Experiências negativas não têm, certamente, faltado. Mooser e Dummer

(5), trabalhando com o typho dos Estados do Atlântico do Sul, não consegui-

ram infectar, fazendo-os sugar cobaias doentes, os seguintes carrapatos: Ani-

blyomma americanum, Amblyomma cajennense, Rhipicephalus sanguineus, Orni-

thodoros talaje e Oniithodoros turicuta.

Interessado o Instituto Butantan, na pesquisa da modalidade paulista do

“typhus”, que nelle vem sendo estudado desde o inicio de 1931 por um dos signa-

tários do presente trabalho, decidimos emprehender algumas experiencias no

sentido de verificar si os Ixodidac também são sensiveis ao virus brasileiro, que

sob muitos aspectos differe do europeu e mesmo do norte-americano.

O presente trabalho representa o relatorio das verificações empre-

hendidas.

Technica empregada

Utilizámos nestas pesquisas Ixodidac pertencentes á sub-íamilia Argasitiat :

o Omithodoros rostralus Aragão e o Argas pcrsicus (Oken) e ã sub-íamilia

Ixodidac : o Amblyomma cajennense (Fabr.).

A techn ca seguida para a inoculação dos carrapatos constou de lavagem

em solução physiologica dos exemplares a utilizar, trituração destes em gral com

solução isotonica, filtração através de gaze e consecutiva inoculação na cavidade

peri oneal de cobaias. As experitncias de picadas foram feitas com numerosas

larvas de Amblyomma cajennense collocadas sobre cobaias cujos pelos do dorso

tinham sido prevameme raspados e deixadas para sugar por espaço de 2 dias,

quando se colheram os exemplares, cheios ou não, aliás encontrados em numero

reduzido. As experiencias de picada com Omithodoros rostratus foram acom-

panhadas de perto durante todo o tempo, o que é facil, sabido como é que

este Ixodida suga rapidamente, abandonando o hospedeiro cm 1 ou 2 horas,

mais ou menos (figs. 1 e 2). As cobaias que serviram á infecção dos carra-

patos achavam-se sempre cm plena phase de reacção febril.

A verificação da immunidade. praticada em todas as cobaias, era feita sem-

pre com testemunhas normacs, que. sem excepçôes, funccionaram regularmente.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

MoNTEir.o, Fonseca e Prado — Typho eianthematico m

Praticava-se essa prova depois dc submctter as cobaias em experiências a rigo-

roso controle, durante pelo menos 20 dias, constando de curva thcrmica traçada

durante todo o período de obser\-açâo e verificação do apparecimento de reacçáo

escrotal e passagem do virus para novo animal, no caso de rcacçâo febril.

Depois de decorrido o necessário lapso de tempo, eram os animacs em experiên-

cias submettidos á pru\-a de immunidade. inoculando-se- hes emulsão de cére-

bro de cobaias seguramente infectadas com o virus. em dose perto dc 1000 vezes

superior á necessária para determinar a infecção de cobaias norma.', contro-

lando-se a inoculação, como já ficou dito, com varias testemunhas. A observa-

ção era então proseguida nos mesmos moldes já citados até a morte do animal

ou durante lapso de tempo sempre superior a 1 mes, quando estes sobreviviam.

Morto o animal, era necropsiado, verificando-se as dimensões do baço e a exis-

tência de derrames cavitarios, fazendo-se a pesquisa dc ricketisias no raspado

do peritoneo e conser\ando-se material para exame histo-pithologico, Ixrm como

para verificação parasitologicas c bacteriológicas, sempre que havia suspeita de

infecção concomitante.

Ao iniciar estas experiencias, fizemos inoemação de 6 A inblyotntna cajcv -

neme normaes, capturados sobre cavallos do Instituto, cm uma cobaia, para ve-

rificar si a inoculação deste material provocasa, nos antmacs inoculado^, algum.,

reacção que pudesse perturbar as observações. Xão sendo verificada reacçáo

alguma, febril ou outra, durante 2o dias, foi esta testemunha submcttida á in-

fecção com material de SUcnus rhesits ( syn. J/acj.aj rhes.t;) infectado, rea-

gindo typicamente ao cabo dc 6 dias.

farte experimental

Para maior clareza, dividimos as experiencias que reai.zámos segundo o ma-

terial utilizado e o fim que se tinha em vista.

1) Experiencias com AtnbíyonttM eajtnncnse (Tabr.).

a) Receptividade ao virus

b) Poder infectante das fezes.

c) Transmissão hereditária do virus.

2) Experiencias com Argas pcrsicus (Oken).

3) Experiencias com Ornithodoros restrjtus Aragão.

a) Receptividade ao virus.

b) Tmnsmissão por picada.

c) Duração do poder infectante.

d) Poder infectante do liquido coxal.

142

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

1) Experiências com Amblyomma cajamensc (Fabr.)

Os exemplares de Amblyomma cajenttcnsc utilizados nas experiencias foram

obtidos de cavallos do Instituto, ^nde são frequentes,

a) Receptividade do Amblyomma cajennense.

Foram feitas 3 tentativas de infecção, inoculando-se 2, 3 e 1 exemplares de

A, cajennense, respectivamente nas cobaias 39, 40 e 97, os quaes tinham sido

alimentados havia 11, 13 e 60 dias na cobaia infectada n. # 19.

Destas apenas reagiu, mostrando-se infectada, a cobaia n.° 40, que apresen-

Gmphl.-o 1

tou reacção typica do 6.° ao 10. c dia após a inoculação dos carrapatos, como

se verifica pelo graphico n.° 1, tendo-se mostrado, além disso, immune a uma

segunda inoculação, em dose seguramente infectante do virus, praticada 1 mês

após a primeira. As cobaias 39 e 97 morreram, respectivamente, 5 e 1 dia

após a inoculação dos carrapatos, o que prejudicou a observação.

Ficou assim demonstrado que o Amblyomtna cajennense, alimentado em

cobaia infectante em periodo febril, pode conservar em seu organismo, pelo

espaço de 13 dias pelo menos, o germe do typho exanthematico de São Paulo.

Que se trata, não de simples conservação do virus no organismo do canupato,

mas de verdadeira infecção do acariano, demonstra-o a experiencia c), bem como

o facto de ser provavelmente insufficicnte a dose de sangue ingerida pelo aca-

riano para provocar infecção na cobaia.

b) Poder infectante das fezes do Amblyomtna cajennense.

Com o fim de verificar si o virus não só permaneceria no organismo, mas

si era também eliminado com os excreta, foi feita uma experiencia nos molde»

habituató, aproveitando-se fezes emittidas nos 3 primeiros dias que se seguiram

ã infecção do Ixodida, tendo sido negativos os resultados. O pequeno prazo

decorrido entre a ingestão do sangue e o periodo cm que puderam ser colhidas

as fezes, porém, não auctoriza a conclusão alguma sobre a passagem do vinis

pelas fezes.

Monteiro, Fonseca e Prado

Typho exanthematico

143

c) Transmissão hereditária da infecção ás larvas do Amblyomma cajeimcnse.

Para verificar si a prole dos carrapatos submettidos á refeição infectante

adquire hereditariamente a infecção, como succede frequentes vezes em outras

parasitoses, instituiram-se 5 experiencias, das quaes 3 com inoculação na ca-

vidade peritoneal de larvas provenientes de exemplar de Amblyomma infectado

e 2 expondo cobaia normaes ás picadas das larvas.

A unica experiencia positiva foi a feita com a cobaia n.° 166, inoculada

com emulsão de 10 larvas provenientes de ovos postos por uma femea de

Amblyomma infectada na cobaia 19, cerca de 2 meses antes, larvas estas que já

haviam sido alimentadas em cobaia normal. A cobaia 166 não apresentou reacção

até 11 dias depois de inoculada, o que nos levou a sacrifical-a, inoculando a emul-

são de seu cerebro na cobaia 179, a qual, ao cabo de 5 dias, reagiu typica-

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mente, apresentando curva febril durante 4 dias, cahindo em crise e morrendo no

10. # dia após a inoculação. Mostram os graphicos 2 c 3 o decurso desta ex-

periencia, na qual a cobaia inoculada com as larvas apresentou infecção inappa-

rente, como sóe ás vezes acontecer, c a cobaia de passagem 179 teve reacção

característica.

Das experiencias com larvas de Amblyomma cajcnnensc oriundas de femeas

alimentadas em cobaias infectadas verificou-sc, pois, ser possivel a transmissão

hereditária do virus, não tendo, todavia, sido possivel obter infecção de cobaias

pela picada de grande numero de larvas. Deixaremos, todavia, por prudência,

rcsalvada a hypothese de uma contaminação das larvas por fezes infectadas,

caso haja eliminação do virus por esses excreta. Por analogia com outras in-

fecções é, porém, mais certa a infecção hereditária por nós verificada.

2) Experiencias com Argas pcrsicus (Oken).

Com este Argasineo foi feita apenas 1 experiencia, que constou da alimen-

tação de 2 exemplares em cobaia em periodo febril de infecção, seguida de

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

144

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

trituração dos 2 exemplares, 8 dias após sita alimentação e inoculação em cobaia

normal, que não teve reacção e não se mostrou immunizada ao ser feita a

prova de immunidade, após 40 dias de observação.

A experiencia, foi, portanto, negativa.

3) Experiências com Ornithodoros rostrr.tus Aragãô.

Os exemplares de Ornithodoros rostratus Aragâo empregados ne«tas expe-

riências provinham do Estado de Matto Grosso, tendo sido verificado não es-

tarem infectados com espirochetas.

a) Demonstração da receptividade do Ornithodoros rostratus Aragão.

Nas 3 experiencias que foram instituídas, fazendo-se alimentar 3 Ornitho-

doros em cobaias em período infectante e inoculando-se 8, 13 e 18 dias após a

alimentação, respectivamente, nas cobaias 244, 292, 283 e 28 7, não foi conse-

guida infecção, não apresentando as cobaias reacção durante os 20 dias de obser-

vação, motivo pelo qual foram inoculadas com vinis, prova esta que mostrou

não estarem immunizadas. As 3 experiencias foram, portanto, negativas, o que

não quer dizer que os Ornithodoros rostratus não sejam receptiveis, como o

mostraram as experiencias b) e c).

b) Infecção da cobaia pela picada do Ornithodoros rostratus infectado.

Foram feitas neste sentido 9 experiencias, só uma das quaes foi positiva,

como se verá abaixo, resultado este plenamente demonstrado, pois não só a

cobaia picada reagiu typicamcntc, como o seu sangue c ccrcbro inoculados em

outras cobaias provocaram infecção característica, tendo, alem disso, sido in-

fectante o liquido coxal do carrapato que a sugara, como se verá em d).

O decurso da experiencia foi o seguinte: um exemplar de Ornithodoros

rostratus foi alimentado na cobaia 244, em pleno período febril; 13 dias depois

foi posto sobre a cobaia normal 275, alimentando-se abundantemente, pois pe-

sava antes da refeição apenas 0gr..05 e depois delia Ogr.,25. A cobaia 275 apre-

sentou, 13 dias após a picada infectante reacção typica (graphico 4). morrendo

4 dias após em consequência de uma sangria feita para passagem do vinis.

Foi necropsiada, sendo inoculada» as cobaias 297, 298 e 299, aquella com san-

gue e as duas ultimas com emulsão de ccrcbro da n. fc 275, tendo todas cilas rea-

gido typicamente, como se ve pelos graphicos 5. 6 e 7.

Alem desta, foram feitas tentativas de infecção por picada com Ornitho-

doros rostratus que haviam sugado cobaia ou homem doente cm numero de dias

variavcl: 7, 8, 9, 13, 18, 20, 22 c 23 dias utilizando-se para cada experiencia

uma nova cobaia, sendo todas submettidas á pro%’a de immunidade. Em todas

estas experiencias foi negativo o resultado observado.

Como se deprchende destas experiencias, a infecção do Ornithodoros ros-

tratus é possivel após sua alimentação em coliaia infectante, porém não se dá

sempre, sendo menor o numero de casos positivos do que o dos negativos.

Monteiho, Fonseca f. Piiado — Typho exanthemalico

115

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c) Duração do poder infectaute do Ornithodoros rostratus.

Com o fim de verificar si o poder infcctantc c duradouro ou si, ao con-

trario. é passageiro em Omithodcros rostratus, ícz-se o mesmo exemplar, que

já infectara a cobaia 275 por picada, 13 dias após a refeição infcctantc, picar,

agora 28 dia»: depois de se ter infectado, a col>aia 301. Esta ultima cobaia,

porém, observada durante 1 mês, nenhum symptoma apresentou de infecção;

foi então submettida á prova de immunidadc, inoculando-se-lhe virus represen-

tado pelo triturado do cerebro da cobaia infectada n* 321, o que determinou

apparecimento de reacção typica 3 d. as depois.

Por esta experiência se conclue que, ou bem o poder infectante do Ornitho-

doros rostratus pouco dura. pois um exemplar que, 13 dias depois de infectar-se.

transmittia seguramente a infecção, já não mais a transmitte 15 dias depois,

ou bem nem todas as picadas de utn exemplar infectado são capazes de transmit-

tir o virus.

SciELO

LO 11 12 13 14 15 16

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

d) Poder infectante do liquido coxal do Ornithodoros rostratus.

Sabido, como é, que o liquido coxal dos carrapatos é muitas vezes infectan-

te, foi neste sentido instituida uma experiencia, da qual resultou demonstrar-se

a possibilidade da transmissão do v : rus por este mechanismo. Foi para isto

aproveitado o liquido coxal do mesmo carrapato que já infectara a cobaia 2 75,

liquido este eliminado no momento tm que o acariano sugava esta cobaia. O

liquido colhido em pipeta foi diluido em solução physiologica e inoculado na

cobaia 276, a qual, observada durante 26 dias. não apresentou reacção febril

Submettida, porém, á prova de immunidade, inoculando-se-lhe vírus da cobaia

infectada 307, mostrou-se immunizada. não tendo reagido a es.a ultima inocula-

ção. Isto demonstra que a inoculação do liquido coxal tinha determinado uma

infecção benigna, inapparente, seguida de immunidade.

RESUMO

Esta 1.* parte das pesquisas epidemioiogicas pode ser resumida do seguinte

modo:

1. O Amblyotnnia cajcnncnse (Fabr.) alimentado em cobaia infectada com

typho exanthematico de São Paulo, é susceptível de adquirir a infecção, trans-

mittindo-a á cobaia, quando triturado e inoculado nesse animal 13 dias depois

de infectar-se, não sendo, porém, constante a infecção do Ixodideo.

2. Larvas provenientes de ovos postos por uma íemea infectada de Am-

blyomma cajcnncnse, inoculadas em cobaias, provocaram nestas uma infecção

inapparente, o que ficou demonstrado pela inoculação do cerebro da primeira

cobaia em uma segunda.

3. A unica tentativa de infecção de Argas pcrsicus (Oken) foi negativa.

4. E’ possivel, embora não sempre, conseguir-se infectar experimental-

mente Ornithodoros rostratus Aragão, alimentando-o em cobaia em phase in-

fectante.

5. A picada do Ornithodoros rostratus é infectante para a cobaia 13 dias

após sua infecção.

6. Um Ornithodoros rostratus, infectante 13 dias após sua alimentação em

cobaia doente, póde não infectar quando sugar 28 dias depois de contaminado.

7. No liquido coxal dc Ornithodorns rostratus infectado existe o virus

com capacidade infectante (immunizante) para a cobaia.

8. O período de incubação na infecção experimental da cobaia pela pi*

cada do Ornithodoros rostratus infectado é mais longo do que o periodo de in-

cubação geralmente observado após injecção do virus na cavidade peritoneal.

Monteiro, Fonseca e Prado — Typho exanthemalico

147

Pesquisa do viras em alguns arthropodos sob condições naturaes.

Recentes pesquisas sobre rickettsioses deixaram bem patente que a transmis-

são dos agentes desse grupo de infecções pode correr por conta de outros ar-

thropodos além do Pcdiculus vestimenti, piolho das roupas e do PedicuJus capi-

tis, piolho de cabeça, transmissores da RUkettsia prozvaxeki Rocha Lima, 1916,

agente do typho clássico do \ elho Mundo.

Relativamente ao typho exanthematico de S. Paulo, que ha alguns annos

vem sendo observado nesta cidade, com pequena disseminação, mas com eleva-

díssimo indice lethal, que orça por mais de 70 decidimos emprehender uma

serie de pesquisas tendentes a verificar a infecção natural de alguns arthropodos

parasitas do homem ou de animaes, domésticos ou não, assumpto este que consti-

tue uma das numerosas incógnitas que obscurecem a epidemiologia do nosso “ty-

phus” e que corresponde exactamentc aos objectivos deste Instituto, votado como

é ao estudo da pathologia humana.

Ao iniciarmos taes verificações, não ignoravamos a serie de difíiculdades

com as quaes deveriamos contar, peculiares a es:e genero de pesquisas c oriundas,

quer da difficil obtenção do material para estudo, quer do grttndc numero de

animaes sensíveis necessários á experimentação em larga escala, ou do perigo

que apresenta a pesquisa do transmissor de um agente morbigeno dotado da vi-

rulência do causador do typho de São Paulo. De todas as diíficuldadcs, porém,

a maior, ao que já previamos, seria a que reside na diluição dos transmissores

naturalmente infectados em relação ao« indivíduos não infectados da mesma es-

pecie, diluição esta que se deduz dever ser muito elevada, dada a relativa rari-

dade dos casos observados c o seu espaçamento, a menos que se trate de arthro-

podos que só raramente entrem cm contacto com o homem.

Algumas das difficuldades apontadas foram, aliás, contornadas, graças ao

apparelhamento do Instituto Butantan para este genero de pesquisas c graças ao

auxilio por nós recebido da Secção de Moléstias Infcctuosas do Serviço Sanitario

do Estado, cujo Inspector-chefe, dr. Francisco Salles Gomes c Inspectores, drs.

Sampaio Corrêa e César Diogo, bem como o Inspector Geral da capital,

dr. Eloy Lessa, são credores do nosso agradecimento, extensivo á turma de ca-

Ptura de ratos chefiada pelo Sr. Jove Gomes e posta á nossa disposição durante

algum tempo, a qual nos forneceu material precioso para as pesquisas até agora

r ealizadas.

143

Memórias do Instituto Bulantan — Tomo VI

Resumo das pesquisas effectuadas

Tivemos occasião de pesquisar, nos últimos meses, pediculideos. pulicideos

e cimicideos colhidos, quer sobre os proprios doentes, ou sobre o leito em que es-

tes se encontravam, quer em suas casas, bem como pediculideos, pulicideos, ixo-

dideos e outros acarianos capturados sobre animaes, domésticos ou não. exis-

tentes nas habitações onde se tinham verificado casos de typho exanthematico ou

em suas vizinhanças, no bairro mais infectado da cidade, limitrophe com a zona

rural.

Os trabalhos mais recentes sobre a transmissão de rickettsioses outras que

não o typho exanthematico clássico do Velho Mundo, accusam vários arthropo-

dos da transmissão dessas infecções: as pulgas dos ratos no caso do typho en-

dêmico norte-americano e o Rhipicephalus sanguincus, carrapato do cão, no caso

da febre botonosa de Tunis e da febre exanthematica de Marselha; alem desses,

o acariano Dcrmanyssidac, Liponyssus bacoti (Hirst, 1913), tem sido incrimina-

do de transmittir o “typhus” dos Estados Unidos e a moléstia de Brill do Medi-

terrâneo. Está demonstrado, alem disso, ha mais tempo, que a rickettsiose co-

nhecida por febre das Montanhas Rochosas é transmittida pelos carrapatos ücr-

macentor andcrsoni e Dcrmacentor variabüis e que o “tsutsugamushi” japonês,

outra infecção pertencente ao mesmo grupo, tem sua disseminação assegurada

pelas larvas do acariano Trombicula akamushi.

Vejamos, em rápido golpe de vista, quaes desses arthropodos occorrem na

zona mais infectada da cidade, isto é, zona suburbana e rural.

Em nossas investigações, observámos que justamente no bairro mais infec-

tado de São Paulo as pulgas de ratos são de extrema raridade, embora abundem

em outros bairros, apenas tendo sido capturados, na zona de Pinheiros e limirro-

phes, 1 Xcnopsylla cheopis e 22 Crancopsylla min erva em 128 ratos desta zona

pesquisados, ao passo que a oolheita de pulgas em ratos da zona mais central da

cidade, onde tem sido muito mais raro o “typhus”, foi sempre abundante.

Só raramente foi capturado Rhipicephalus sanguincus sobre cães nas casas

dos doentes e os exemplares pesquisados, bem como outras especies de ixodideos

examinados, não se achavam infectados.

Entre os acarianos encontrámos com grande frequência parasitando ratos:

Echinolaclaps echidninus ( Berlese, 1887) e Laelaps nutlalli Hirst, 1915, e só mui-

to raramente Liponyssus bacoti (Hirst, 1913).

Ao contrario disso, porém, foi Liponyssus bacoti encontrado com grande

frequência c abundancia sobre o preá ( Cavia aperea), cavideo muito commum

nos arredores de São Paulo, tendo sido verificada 6 vezes a sua presença em 9

preás capturados na zona infectada, chegando a ser observada a existência de

cerca de 500 exemplares sobre um mesmo preá. Além disso, foi Liponyssus

Monteiro, Fonseca e Prado — Typho exanthematico

149

bacoti capturado uma vez parasitando uma creança em casa donde acabava de

sahir doente de typho exanthematico.

Alem das pesquisas com ecto-parasitas capturados na zona suburbana ou

mesmo rural, estão em andamento outras, com pulicideos capturados sobre ratos

de zona urbana, da rua Florida, onde occorrera um caso de “typhus”, tendo sido

identificadas as seguintes especies de pulgas: Xcnopsylla cheopis, Xenopsylla

brasüiensis, Ctenopsyllus musculi, Ccratophyllus fasciatus e Ctcnoccphalidcs fclis.

Durante as pesquisas até agora realizadas foram examinados os seguintes ar-

thropodos, os quaes, depois de triturados em gral com solução physiologica, eram

injectados na cavidade peritoneal de cobaias:

1.* Serie (da zona suburbana e rural) :

26 Pulex irritans colhidos em roupas de camas de onde acabavam de sahir

doentes com typho exanthematico; inoculados em 3 cobaias.

97 Ctenoccphalidcs fclis capturados sobre cães e gatos de casas de doentes;

inoculados em 4 cobaias.

16 Crancopsylla mincrva capturados sobre ratos; inoculados em 1 cobaia.

6 Pcdiculus capitis colhidos sobre 2 doentes de typho exanthematico na

ultima phase da moléstia ; inoculados em 1 cobaia.

20 Pedicuius capitis colhidos sobre creanças de casas de doentes; inocula-

dos em 1 cobaia.

10 Linocjnathus piliferus, piolhos de cão, capturados sobre cães de casa dc

doente.

120 Cimcx Icctularius colhidos, quer no proprio leito dos doentes, quer cm

camas de outros habitantes da casa infectada, tendo sido feita a ino-

culação, não só do triturado, como também de fezes, submettendo-se,

alem disso, cobaias á picada dos hemipteros, experiencias estas pratica-

das em 7 cobaias.

350 larvas de Boophilus microplus colhidos na vegetação da zona infectada;

inoculadas em 2 cobaias.

4 Rhipiccphahts sanguincus colhidos em cães de um dos doentes; inoculados

em 1 cobaia.

13 Amblyomma ovale de igual procedência; inoculados em 2 cobaias.

100 Liponyssus bacoti capturados sobre 5 preás da zona infectada; inoculados

em 2 cobaias.

600 Echinolaclaps echidninus e Laelaps nuttalli capturados sobre ratos da zona

infectada; inoculados ou obrigados a picar cobaias, utilizando-se 9

cobaias.

150 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

4 Liponyssus bursa, capturados sobre gallinhas de casas de doentes de typho

exanthematico ; inoculados em 1 cobaia.

2* Serie (zona urbana) :

75 Ctenopsyllus ntusculi; inoculados em 4 cobaias.

69 Xenopsylla cheopis; inoculados em 4 cobaias.

2 Xenopsylla brasiliensis ; inoculados em 1 cobaia.

1 Ceratophyllus fasciatus; inoculado em 1 cobaia.

1 Ctenocephalides felis; inoculado em 1 cobaia.

As cobaias utilizadas para essas experiendas foram todas submettidas a

observação rigorosa, traçando-se a curva de temperatura durante um prazo

minimo de 20 a 30 dias, findos os quaes eram submettidas á prova de immunida-

de Sempre que havia reacção febril a cobaia era sangrada no coração e o san-

gue inoculado em outra, para passagem do virus, afim de verificar si teria sido

esta a causa da reacção.

Para a prova de immunidade inoculava-se, por via peritoneal, virus de pas-

sagem, isolado de doente proveniente da zona rural, virus já descripto por um

dos auctores em trabalhos anteriores e representado por emulsão de cerebro de

cobaia infectada, em dose seguramente infectante, havendo sempre testemunhas

das inoculações.

Resultados :

Pelas experiendas realizadas, tomando, como critério de verificação positi-

va, reacção febril de mais de um gráo centígrado adma da media individual da

cobaia ou a immunidade apresentada contra a infecção por dose de virus cerca

de 1000 vezes superior á dose minima infectante, verificámos que nenhuma das

cobaias inoculadas, com pediculideos, pulicideos, cimicideos, ixodideos ou aca-

rianos, se apresentou infectada, pois nem uma só das 37 cobaias utilizadas apre-

sentou reacção febril typica e todas as já submettidas á prova de immunidade

reagiram fortemente, demonstrando não terem ficado immunizadas após a ino-

culação com aquelles arthropodos.

Discussão

Maxcy, em 1929 (6), estudando o “fyphus” do sul dos Estados Unidos,

julga que o virus não é transmittido pelo Pcdiculus humanus, acreditando, basea-

do em considerações de ordem epidemiologica, que a transmissão deve correr por

conta de arachnideos (carrapatos ou outros acarianos), aventando a hypothese de

serem roedores os depositários do virus.

Monteiro, Fonseca e Prado — Typho exanthemalico

131

Mooser e Dummer, em 1930 (5), estabeleceram a possibilidade da infecção

experimental do piolho do homem com o vinis do typho dos estados do Atlântico

Sul (America do Norte).

Castaneda e Zinsser, em 1930 (7), infectaram experimentalmente perceve-

jos (por via rectal, pelo methodo de Weigl), os quaes, injectados em cobaias,

a estas conferiam infecções typicas. Os resultados de tentativas de infecção de

cobaias pela picada ou pelas fezes dos percevejos foram, entretanto, negativas.

Conseguiram ainda os mesmos pesquisadores infectar piolhos utilizando a mes-

ma technica, verificando que os pediculideos inoculados em cobaias determina-

vam infecção.

Durand e Conseil (8), em 1931, provaram ser o Rhipicephatus sanguincus,

carrapato do cão, o responsável pela transmissão da febre marselhesa ou botono«a

de Tunis.

Em 1931, Dyer e Badger (9) deram, pela primeira vez, a prova de que exis-

te, naturalmente infectado, um outro insecto que não o Pcdiculus humanas, capaz

de transmittir o “typhus” do Novo Mundo. Conseguiram estes pesquisadores

capturar, em Baltimore, pulgas do rato, que trituradas e inoculadas em cobaias

conferiram a estas infecção typica, apresentando-se as cobaias, restabelecidas da

infecção, immunes a nova infecção provocada pela raça norte-americana do vi-

nis. A verificação de Dyer e Badger constitue uma contribuição da mais alta

relevância para a elucidação dos problemas epidemiologicos relacionados com a

forma norte-americana do typho exanthematico, representando uma prova deci-

siva de sua distincção do typho clássico da Europa.

Complemento de grande valor da verificação de Dyer e Badger c a prova

que acabam de dar Mooser, Castaneda e Zinsser (10), de que a propagação do

“typhus” americano do norte entre os ratos, seus depositários naturaes, é devida

ao piolho Polyplax spinulosa, parasita do rato dos esgotos, ficando desse modo

fechado o cyclo da modalidade norte-americana da infecção, o que não quer, to-

davia, dizer que não venha a ser demonstrada a possibilidade da existência de

outros vectores.

Está, além disso, bem estabelecido por pesquisas mais antigas que a rickett-

siose conhecida por febre das Montanhas Rochosas é transmittida pelo Denna-

centor andersoni e pelo Demutcenlor modestas, encontrados naturalmente infe-

ctados, respectivamente, por Ricketts e por Maver. Sabe-se também, ha muito,

serem Trombicula akamushi e Trombicula dcliensis, respectivamente, os trans-

missores do "tsutsugamushi” japonês e do “pseudo-typhus” das índias Hollan-

desas.

Em relação ao typho de S. Paulo, assignalámos no capitulo anterior, que,

experimentalmente, é possível a transmissão do virus por intermédio do Am-

blyomma cajenncnsc e Ornithodoros rostralus.

152

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

Em condições naturaes, porém, não pudemos, até agora, chegar a uma

conclusão definitiva em relação á existência do virus em uma grande serie de

arthropodos examinados.

Estes resultados, entretanto, permittem concluir que, para a transmissão na-

tural do typho exanthematico de S. Paulo, é muito pequena a probabilidade de

ser este papel desempenhado por Pediculus capitis, Pulcx irrifans ou Cimex lc-

ctularius, que são os ectoparasitas que apresentam relações mais immeditas com

o homem, entre nós. Estes insectos foram capturados em flagrante parasitismo

dos doentes, quer sobre elles proprios, quer nos seus leitos, ou sobre pessoas ou

leitos de casas onde acabavam de ser assignalados novos casos, havendo, portan-

to. toda a probabilidade de que se achassem infectados, caso fossem susceptíveis

á infecção, o que não se verificou.

Necessário, porém, se faz resalvar a hypothese de exigirem elles um prazo

de incubação maior, para transm itirem a infecção, do que o que lhes foi con-

cedido. Os exemplares examinados foram em regra colhidos, em media, cerca

de uma semana após o inicio da infecção dos doentes, sendo inoculados no mes-

mo dia ou no dia seguinte ao da captura. Sabendo-se que em condições natu-

raes esses parasitas se alimentam com frequência, a probabilidade é de que o vi-

rus já tivesse tido tempo de soffrer multiplicação sufíiciente para que o insecto

se tornasse infectante, caso fosse receptivel.

E’ sabido, como o assignalou Rocha Lima (11). que os piolhos alimentados

cm doentes de typho exanthermatico europeu exigem prazo de 4 a 5 dias para se

tornar infectantes, falhando, porém, ás vezes essa regra e só vindo a apresentar

infecção demonstrável depois de 8 dias. Não é impossível que, no caso do

typho de S. Paulo, o prazo habitual de incubação seja mas longo do que o exi-

gido para o “typhus” do Velho Mundo, nisso residindo a razão de não ter sido

obtida a infecção, quer com os piolhos, quer com as pulgas e os percevejos exa-

minados.

Não é, alem disso, conhecido o gráo de receptividade que porventura pos-

sam apresentar no caso do typho de S. Paulo, não sendo impossivel, embora seja

menos provável, que só um numero muito pequeno de exemplares se torne in-

fectante, o que se verifica em menor escala, aliás, com o typho exanthematico

clássico, em que nem todos cs piolhos se infectam ao sugar o doente em phase

infectante. Nesse caso só o exame de um numero muito maor de exemplares

capturados sobre doentes poderia conduzir a resultado definitivo.

São estas, porém, meras hypotheses, que aventamos apenas para deixar

bem patente não considerarmos definitivos os resultados a que até agora che-

gámos.

Fomos levados, no decurso das pesquisas, a algumas conclusões de interes-

se, baseados no estudo da fauna de ectoparasitas dos roedores examinados.

Monteiro, Fonseca e Prado — Typho exanlhemalico 153

Notável contraste foi observado relativamente ao indice pulicideano dos

ratos capturados nas zonas suburbanas ou mesmo rural e na zona propriamente

urbana da cidade. Nos ratos daquellas zonas (suburbana e rural) foi inteira-

mente excepcional o encontro de publicideos (1 Xrnopsylla cheopis e 22 Cra-

neopsylla minerva em 128 ratos), os quaes, entretanto, parasitam abundante-

mente os ratos da zona urbana (*).

Occorrendo o maior numero de casos de “typhus” justamente nas zonas su-

burbana e rural, onde se reveste de particular gravidade, zonas estas nas quaes

quasi não são encontradas pulgas parasitando ratos, somos forçados a concluir

que é pequena a probabilidade de serem as pulgas dos ratos os transmissores ha-

biruaes do “typhus” observado nessas zonas. Existindo, entretanto, as pulgas

em abunclancia nos ratos da zona urbana, onde o typho também occorre, si bem

que mais raramente e talvez sob forma mais benigna, torna-se acceitavel a hypo-

these de representarem o pape! de transmissores da infecção na zona urbana.

Por outro lado. segundo tivemos opportunidade de verificar (12), existe

Uas zonas suburbana e rural de S. Paulo um pequeno cavideo, o preá, Cavia

operea, frequente e intensamente parasitado por Liponyssus bacoli, acariano pa-

•asita também do rato e do homem. Este acariano vem sendo incriminado com

insistência de transmittir ao homem o typho norte-americano, tendo ficado pro-

vado, em novembro do anno findo, por Dove e Shelmire (13), que, experimen-

talmente, elle pode ser infectado ao alimentar-se sobre um animal doente, trans-

niittindo então a infecção pela picada.

Diante desses dados é perfetamente licito perguntar si em São Paulo não

será o typho da zona urbana, onde abundam as pulgas dos ratos, transmittido ao

bomem por estes syphonopteros, tal como succede na America do Norte, segun-

do o provaram Dyer e Badgcr (9) e si o typho das zonas suburbana c rural,

onde as pulgas de ratos são extremamente raras, não terá como transmissor o

Liponyssus bacoli (como o querem Dove e Shelmire) ou algum outro acariano,

eomo, p. ex., as larvas de carrapatos, que verificámos serem sensíveis ao “ty-

phus” experimental.

Succederia nesta hypothese com o typho exanthematico de S. Paulo o

niesmo que já está verificado para o typho tropical dos Estados Malaios, onde

occorre uma forma urbana e uma rural da infecção.

Tal hypothese. porem, somente poderá ser defendida após um estudo so-

rologico das duas possíveis formas da infecção, bem como após verificações

®curadas do comportamento experimental dos respectivos virus.

(•) As designações de urbana, sub-urbana e rura! por nós empregadas não devem

**r interpretadas como correspondentes ás divisões admin : strativas da cidade c do Estado,

5! gnificando apenas o grao de densidade dr hab tações e o aspecto da zona cm questão,

factores de importância no estudo que emprchendemos.

154

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

RESUMO

1. Tendo inoculado, em cobaias, exemplares de Pcdiculus capitis, Pulcx

irritans e Cimex lectularius, colhidos sobre doentes ou pessoas da casa e nas

camas dos mesmos, acreditam os auctores ser muito pouco provável que estes

hematophagos desempenhem o papel de transmissores habituaes do typho exan-

thematico de S. Paulo.

2. Foram negativas as experiencias tendentes a demonstrar a presença

do virus, em condições naturaes, nos seguintes arthropodos, capturados em li-

berdade ou em parasitismo em ratos, cães, gatos e gallinaceos das zonas in-

fectadas :

Pulicideos: Xenopsylla cheopis, Xcnopsylla brasiliensis, Ctenopsyllus inns-

culi, Ceratophyllus fasciatus e Craneopsylla minerra, capturados sobre rato c

Ctctwcepltalides fclis capturados sobre cão, gato e rato.

Pediculideos : Linognathus pilifcrus, piolho do cão.

Ixodideos: Amblyomma ovale e Rhipicephalus sanguineus, carrapatos do

cão e Boophilus microplus, carrapato do boi, este em phase de lana e captu-

rado quando em liberdade.

Acarianos Dennanyssidae : Echinolaehps echxdninus, Laelaps nuttalli e Li-

ponyssus bacoti capturados sobre ratos e o ultimo também sobre preás; Lipo-

nyssus bursa capturado sobre gallinaceos.

3. O estudo da fauna de ectoparasitas das zonas da cidade onde occorre

a infecção, a suburbana ou rural e a urbana, alliado a razões de ordem epide-

miologica e de comportamento experimental do virus, parece indicar que o trans-

missor habitual do virus deve ser a pulga dos ratos na zona urbana e um acaria-

no, Dennanyssidae ( Liponyssus bacoti) ou Ixodidae, na zona suburbana ou ru-

ral, facto que, sendo verdadeiro, coincidirá com uma possível diversidade do vi-

rus nas duas zonas, tornando-se necessárias outras pesquisas para que se confir-

me a hypothesc.

III

Os ratos como possíveis depositários do virus.

A existência de outros depositários de “virus”, alem do proprio homem, na

natureza é facto hoje acceito em relação a varias “rickettsioses”. Para a febre

maculosa das Montanhas Rochosas são incriminados vários roedores silvestres,

principalmente coelhos selvagens; no caso do “tsutsugamushi”, do Japão, o roe-

Monteiro, Fonseca e Prado — Typho exanthematico 155

dor Microtus montebelloi e outros; quanto ao typho endemico da America do

Xorte (Estados Unidos e México) os estudos recentes (1931) de Mooser, Cas-

íaneta e Zinsser (14), no México, provaram ser os ratos depositários do vinis,

graças á inoculação de emulsão de cerebro destes animaes em cobaias e confir-

mando, deste modo, as verificações de Dyer e Badger (15) quanto á fonte natu-

ral de infecção das pulgas, incriminadas por estes como transmissores do virus

ao homem.

A transmissibilidade por intermédio das pulgas dos ratos foi confirmada

por Mooser, Zinsser e Castaneda, nos Estados Unidos e, logo depois, por

Kemp (16).

A infecção de rato a rato é entretida não só por meio das pulgas, mas prin-

cipalmente, segundo Mooser, Castaneda e Zinsser (10), por meio do piolho do

rato, o Polyplax spimdosa.

Estudando o typho exanthematico de S. Paulo sob vários dos seus aspe-

ctos, não podíamos deixar de emprehender a pesquisa de possíveis depositários

naturaes do seu virus. Nossos estudos neste sentido foram iniciados antes de

termos tomado conhecimento dos recentes trabalhos dos auctores americanos, e

se justificavam em virtude do aspecto epidemiologico da própria infecção.

Nos capitulos anteriores foram relatados os resultados da transmissão expe-

rimental do virus por meio de Ixodideos e os das pesquisas feitas para a verifica-

ção de infecção natural em arthropodos diversos: Pulicideos, Pediculideos, Cimi-

cideos, Ixodideos e outros acarianos.

Mostraremos, agora, os resultados obtidos para a verificação da possibilida-

de de serem os ratos depositários naturaes do virus do typho de S. Paulo.

Technica empregada

Ratos capturados na zona infectada da cidade e enviados vivos ao Instituto

pela Secção de Prophylaxia de Moléstias Infectuosas do Serviço Sanitario do

Estado eram immediatamente examinados. Com os cuidados technicos neces-

sários, eram colhidos os ectoparasitas porventura existentes, separados de accor-

do com a especie, para estudo estatístico da frequência com que eram verificados,

sacrificando-se e necropsiando-se em seguida os hospedeiros. Durante a necro-

psia era colhido material, inclusive de hematozoarios e Leptospiras, visando o

conhecimento dos parasitas dos ratos da zona correspondente. Nos exemplares

que apresentaram alguma lesão evidente macroscópica, eram colhidos fragmen-

tos de organs diversos para estudo histo-pathologico. O cerebro de todos os

fatos era retirado asepticamente e collocado em placas de Petri esterilizadas.

Em seguida era feita emulsão, em agua physiologica, do cerebro, sendo esta im-

tneditamente inoculada em cobaia por via peritoneal. Para economia de ani-

Pesquisas epidemioJogicas sobre o typho exanthematico

7 SCÍELO, 2.1 12 13 14 15 16 17

PROVA DK IMMUNIDADE

7 SCÍELO, 2.1 12 13 14 15 16 17

PROVA DE IMMUNIDADE

7 SCÍELO, 2.1 12 13 14 15 16 17

(*) Halos provenientes da zona urbana da cidade.

Monteiro, Fonseca e Prado

Typho cxanthematico

165

maes reactivos, era geralmente inoculada a emulsão de cerebro de vários ratos

em cada cobaia, dividindo-se em regra o material de accordo com a especie do

rato e sua proveniência. As cobaias eram submettidas a observação, sendo sua

temperatura registada diariamente e sempre á mesma hora. Decorridos, em

media, 20 a 30 dias, eram submettidas á prova de immunidade, com a inocula-

ção de virus de passagem, seguramente activo e sempre com testemunhas, re-

presentando a dose inoculada mais de 1000 D. M. I. (doses minimas infectantes).

A existência da immunidade nesta prova com a testemunha positiva era

considerada indicio da infecção, embora benigna e muitas vezes sem reacção fe-

bril, determinada pela inoculação dos cerebros dos ratos. As que apresentavam

reacção febril eram sangradas para passagem do virus porventura existente.

Resultados das inoculações experimentaes e discussão

Fizemos até agora inoculação de cerebros de 128 ratos capturados na zona

suburbana ou rural (em casas de onde haviam sahido casos confirmados, ou em

suas proximidades) e 24 ratos provenientes da zona urbana da cidade. O qua-

dro annexo resume as experiencias.

Da 1.* serie (zona suburbana ou rural) apenas podemos concluir pela exis-

tência do virus em 2 grupos; o grupo constituído pelos Epimys norvegicus 8 e

9, capturados ao mesmo tempo em uma mesma casa da zona infectada, na rua

do Futuro, em Villa Magdalena, os quaes, foram sacrificados sendo a emulsão

dos cerebros de ambos inoculada na cobaia 377, a qual não apresentou reacção

febril, mas se mostrou immunizada ao ser reinoculada, 26 dias depois, com dose

elevada do virus, infectante para muitas testemunhas.

O segundo grupo é o constituído pelos Epimys norvegicus 98, 99 e 100,

dos quaes os dois primeiros provinham da Estrada do Cotia e o ultimo da rua

Oscar Freire. A emulsão do cerebro desses ratos, inoculada na cobaia 469, não

determinou infecção apparente, mas a cobaia mostrou-se, do mesmo modo que

a 377, perfeitamente immune a uma nova inoculação de dose massiça do virus

feita 21 dias depois.

E’ sabido que a immunidade nas infecções do grupo do “typhus”, desde

<jue não seja obtida com as “rickettsias”, que possuem propriedades antigenicas,

só se estabelece como consequência de uma infecção, mesmo benigna.

Isto provavelmente aconteceu com os resultados positivos assignalados, nos

Quaes o “virus” inoculado com o cerebro dos ratos provocou uma infecção be-

nigna, com ligeira reacção febril ás vezes, sem reacção outras, porém sufficientc

Para determinar a immunidade da cobaia em relação a dose seguramente infe-

ctante do virus de passagem.

1G6

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

Mesmo nesta hypothese, verifica-se que a porcentagem de ratos possíveis

portadores do vinis e provenientes da zona suburbana e rural é pequena, ape-

nas 1,5 %.

Um dos resultados, considerado duvidoso, com cerebro dos ratos 125 a

12P, somente não é dado como positivo em virtude de termos verificado conco-

mitante infecção da cobaia com toxoplasma, apezar de termos obtido passagem

da infecção para um segundo animal, sendo que na terceira passagem a morte

da inoculada teve logar prematuramente, apresentando o animal phenomenos

de paralysia.

Xos casos de resultado considerado positivo, póde ser objectado que a

cobaia, depois de inoculada com o vinis para prova de immunidade, tenha

tido uma infecção inapparente, e que se deveria ter feito inoculação do seu sangue

em outras cobaias para provar a ausência do virus. Reconhecemos a validade

da objecção, embora a raridade destas formas e a dose elevada do vinis ino-

culada torne pouco provável a hypothese invocada, pois outras cobaias e a tes-

temunha inoculadas no mesmo dia, como se vê no quadro, apresentaram infecção

característica.

Por estes resultados seria licito considerar o rato como possivel depositário

do virus, sendo muito provável que outros existam entre os roedores silvestres,

talvez mesmo desempenhando entre nós papel mais importante na propagação

da infecção na zona rural ou suburbana da capital. Este modo de ver encontra

justificativa no facto de os ratos colhidos nessa zona da cidade, fóco da in-

fecção, serem muito pobres em pulgas, apontadas como transmissoras do typho

endemico, quasi também não sendo parasitadas pelo acariano Liponyssus bacoti

(Hirst), responsabiüzado também pela sua transmissão, porém, somente pelo

Echinolaelaps echidninus e Laclaps nuttalli, ainda não incriminado em qualquer

parte do mundo.

Por outro lado, verificámos que o Liponyssus bacoti é extraordinariamente

frequente nas preás, Cavia aperca, que são facilmente encontradas nesta prin-

cipal zona infectada.

Sómente novos estudos, já iniciados, mostrarão si estes outros roedores

podem também desempenhar o papel de depositários do virus e a importância

que poderá ter o Liponyssus bacoti assim como outros acarianos, como trans-

missores do typho de São Paulo.

Os resultados da 2.* serie de experiencias apresentam também interesse não

pequeno, tendo sido feitas com ratos provenientes da zona urbana da cidade

(Rua Florida), capturados em uma casa, donde sahira um caso da infecção e

num moinho de trigo e deposito de cereaes da vizinhança. O caso clinico fo?

confirmado e se manifestou de forma benigna.

Os ratos desta proveniência eram extremamente parasitados por pulgas.

Monteiro, Fonseca e Prado

Typho cxanthematico

167

A pesquisa do virus no cerebro foi feita somente em 24 destes roedores (*).

Xeste numero, reduzido relativamente ao da primeira serie, já obtivemos,

pelo menos, um resultado de certa significação.

Os cerebros dos ratos ( Epimys norvegicus) 132 e 133 inoculados na

cobaia 529, determinaram reacção febril acima do normal depois de um período

de incubação de 8 dias. A evolução da reacção não foi, porém, muito seme-

lhante á provocada pelos virus que estudámos (isolados de doentes da zona su-

burbana ou rural) ; a temperatura, embora acima da media normal, mostrou

o máximo de 39°S e apresentou remissões durante certos dias (graphico 8).

A existência deste outro typo de virus, determinando na cobaia uma infecção

com evolução mais lenta e mais benigna, ficou bem demontsrada pelas passa-

gens já feitas, em numero de 4 até agora. A cobaia 529, no 12.° dia após a

AN NO -1334

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Graphico 8

inoculação dos cerebros de ratos, com a temperatura de 39°4, foi sangrada

no coração e 4 cc. de sangue foram inoculados na cobaia 544. Esta ultima

(graphico 9), após incubação de 13 dias, apresentou reacção febril durante vários

dias, attingindo em alguns a temperatura 40*1. Xo 3.° dia de reacção febril

(*) Por um lapso foi dado anteriormcnte este numero, o que agora corrigimos, rccti-

ficanao-o para 20. Esse menor numero dos exemplares pesquisados mais salienta a pro-

porção de resultados positivos com estes roedores da zona urbana.

168

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VT

firaphico 9

Graphlr» 10

Monteiro, Fonseca e Prado — Typho exantbemalico 169

foi sangrada, sendo inoculada com seu sangue (4 cc.) a cobaia 559. Esta apre-

sentou, no 6.® dia da inoculação, 39“9; no 7°, 39°; no 8.®, 41®; no 9.°, 39"5

e no 10.®, 41.®, graphico 10. Neste dia foi sacrificada, notando-se na necropsia

a existência de esplenomegalia característica, sendo inoculadas, para 4.® passagem

do vinis, a cobaia 573, com 4 cc. de sangue e a cobaia 574, com emulsão de

cerebro. Estas duas estão, ao ser escripta esta nota, no 4.® dia de inoculação.

A primitiva cobaia, 529, foi reinoculada com o virus de passagem segura-

mente activo e proveniente do doente da zona suburbana ou rural, depois de 35

dias da inoculação com os cerebros dos ratos. Não apresentou reacção febril

característica (apenas um dia teve 40°), porém morreu na noite do 6.® para

o 7.® dia. A pesquisa de rickettsia no peritoneo foi positiva.

Também a cobaia da 2.* passagem foi reinoculada com o mesmo virus de-

corridos 23 dias. Apresentou reacção no 3.® e 4.® dias (40 e 39®7), con-

tinuando viva.

A pesquisa de rickettsia no peritoneo na cobaia da 3.* passagem (virus

urbano) e que foi sacrificada, deu resultado negativo.

As pesquisas com este novo virus, proveniente de ratos capturados na zona

urbana da cidade, estão sendo continuadas. Do que já foi verificado e resu-

mido acima, póde-se pensar que, immunologicamente, o virus da zona urbana

seja também differente do virus oriundo de doentes da zona suburbana ou rural.

De outro grupo de ratos (ns. 138 e 139) foi isolado novo virus murino, apre-

sentando o mesmo comportamento (*).

Estes resultados experimentaes, embora sob certo ponto de vista não possam

ser considerados definitivos, trazem algum apoio á hypothese, já emittida por

um de nós (17), da possibilidade de o typho exanthem3tico de S. Paulo se

manifestar sob duas formas, talvez distinctas pelo seu aspecto clinico, immuno-

logico, pathogenico e epidemiologico, como acontece com o typho tropical dos

Estados Malaios. Neste, as duas formas (urbana e rural) foram definidas,

primeiramente, em virtude dos resultados da reacção de Weil-Felix praticada

com os typos de Proteus X19 e XK (Kingsbury) e, depois, pelo estudo expe-

rimental dos virus.

Estes estudos devem ser continuados entre nós e emprehendidos novos,

afim de serem bem estabelecidas as relações entre estas duas possíveis formas

da infecção; si representam apenas uma variação de virulência do mesmo virus

ou si são devidas a virus differentes, sendo diversas as infecções, embora per-

tencentes ao mesmo grupo.

RESUMO

1. Baseados em provas de immunidade e no resultado de pesqui?as an-

teriormente feitas e já assignaladas, somos levados a acreditar na possibilidade

(*) O estudo deste virus consta de outro trabalho onde foram feitas as conside-

rações e conclusões que comporta.

170

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

de serem os ratos, talvez, depositários do vinis do typho exanthematico de São

Paulo.

2. Em relação á infecção manifestada na zona suburbana ou rural da

capital, embora admittido o pape! dos ratos, outros possíveis depositários do

virus devem ser pesquisados entre roedores silvestres, conforme indicação dos

resultados do estudo da fauna de ectoparasitas nelles encontrada.

3. Quanto á infecção manifestada na zona urbana, o papel do rato como

depositário do virus, parece-nos ter sido o melhor demonstrado, embora ainda

não definitivamente.

4. A hypothese de uma diversidade de infecções, de accordo com o meio

suburbano ou rural e urbano, justifica-se pelo comportamento dos respectivos

virus, sendo o que foi isolado de ratos da zona urbana, já na 4.* geração, muito

menos pathogenico para a cobaia do que o já estudado e isolado de doentes pro-

venientes da zona suburbana ou rural.

5. Somente os resultados de estudos clínicos e immunologicos (reacções

sorologicas com os differentes typos de Proteus X), assim como a continuação

das pesquisas experimentaes e epidemiologicas, confirmarão de modo definitivo

a hypothese suggerida na conclusão anterior.

ABSTRACT

In the course of three new series of experiments undertaken with a view

to finding out not only if certain species of Ixodid might carry the São Paulo

typhus under experimental conditions (series I) and if some Arthropoda were

naturally infected with its virus (series II), but also if rats might play the

rôle of host to the virus (series III), new facrs ha ve come to light which

may bc summarized as follows:

Series I

1. Amblyomma cnjennensc (Fabr.) fed on a guinea-pig infected with the

São Paulo typhus is capable of transmitting this infcction to another guinea-pig,

provided that it be crushed thirteen days after its fecding and be inoculated

into this animal; the infection of this Ixodid, however, is not constant.

2. Larvac, hatched from eggs laid by an infected female of Amblyomma

cajennense, upon inoculation into guinea-pigs, cause these to develop an inapparent

infection as shown by the inoculation of the brain of these pigs into normal ones.

3. The only attempt to infect Ar nas persicus (Oken) was negative.

4. Ornithodoros rostratus Aragão may occasionally become infected by

experimentally feeding on a guinea-pig at the infecting stage.

5. The sting of Ornithodoros rostratus thirteen days following its infection

is infecting for the guinea-pig.

Monteiro, Fonseca e Prado — Typho exanthemalico

171

6. The sting of the sam; specimen of Ornithodoros rostratus, however,

may not be infecting twenty-eight days following its contaminating feeding.

7. In the coxal liquid of an infected Ornithodoros rostratus is found the

virus with infecting (immunizing) power for the guinea-pig.

8. The period of incubation in the guinea-pig’s experimental infection by

sting of an infected Ornithodoros rostratus is longer than that generally following

intra-peritoneal inoculation of the virus into a guinea-pig.

Series II

1. It is very unlikely for Pcdiculus capitis, Pulex irritans and Cimc.v

Icctularius to play the róle of natural carriers of the virus of the São Paulo

typhus, to judge from experiments made with the inoculation, into guinea-pigs,

of specimens taken from patients, their beds or members of their family.

2. This conclusion holds good also for the following Arthropoda as

captured in freedom or on rats, dogs, cats and chicken at infected places:

Pulicidae: Xcnopsylla cheopis, Xenopsylla brasiliensis, Ctenopsyllus iiius-

culi, Ceratophyüus fasciatus and Craneopsylla minerva, as captured from rats

and Ctcnocephalidcs fclis from dogs, cats and rats.

Pediculidae: Linognathus pilifcrus, dog’s lousc.

Ixodidae: AnMyomma ozule and Rhipiccphalus sangumcus, dog's ticks, and

Boophiius microplus, ox’ tick, the latter at larval stage and captured in freedom.

Parasitidae and Dermanyssidae : Echinolaclaps echidninus, Laclaps nuitalli and

Liponyssus bacoti, as captured on rats, the last species also on '“preás” (Caria

apcrea); Liponyssus bursa, as captured on chicken.

3. In the light of the fauna of ectoparasites found in the city districts,

either rural or urban, where the infection has been reported, it appears that the

ordinary carrier of the virus must be the rat’s fleas in the urban districs, whilst

this rôle must be played by some mite, either Dermanyssid (Liponyssus bacoti)

or Ixodid, in the rural section. This hypothesis seems to be justified both by

the epidemiology of the São Paulo typhus and the experimental behaviour of

its virus; anyway, it coincides with the apparent specificity of the virus found

in either section, thus rendering necessary the undertaking of ncw experiments

in this regard.

Series III

1. Rats seem to be the hosts of the virus of the São Paulo typhus to

judge both from immunological cross-reactions and from the result of experi-

ments previously reported on.

2. The ectoparasitic fauna found on some wild rodents seems to indicate

that these may play the róle of host to the virus in the rural section of this city.

172

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

3. However, house rats chieíly seem to play this rôle in the urban section

according to experiments made although not very condusive yet.

4. The behaviour of the virus isolated either in the rural or in the urban

districts is different, the latter having become, in its fourth generation, much

less pathogenic for the guinea-pig than the íormer.

5. The confirmation of the diversity of the type of typhus infection

found in the urban districts from that reported from the rural section depends

on further clinicai and epidemiological study supplemented with a more complete

experimentation.

BIBLIOGRAPHIA

1. Durand, P. & Conseil. E. — Arch. Inst. Pasteur Tunis XX(1) :34.1931.

2 B.anc, G. & Caminopctros, J. — CR. Acad Sciences CXCII(25) :1682.1931.

3 Joycux, C/i. & Picri, J. — C. R. Acad. Sciences CXCII(ll) :705 . 1 93 1 .

4. Zinsser, H. & Castancda, 37. R. — J. Expcr Medicine LIV(l) :11. 1931.

5. Mooser, H. & Dummer, C. — J. Inf. Discases XLVI(2) :1~0. 1930

6. Maxcy, K. F. — Public. Health Rep. XLIII:3079; XLIV:SS9.1920; XLIV: 1735. 1929.

7. Zinsser, H. «S • Castancda, ií, R. — J Exper. Medicine LII(õ) :661 . 1930.

8. Durand, P. & Conseil, E. — Arch Inst. Pasteur Tunis XX(1) ;54. 1931.

9. Dyer, R. E. & Badger, L. F. — Science LXXIII(1886) :10. 1931.

0 Mooser, H.\ Castancda, M. R. & Zinsser, H. — J. Exper. Medicine LIV(4) :567. 1931.

1 . Rocha Lima, H. da — Handbuch der path. Riclc. Kolle e Wassermann. Bd. VIII :

1347.1930.

Fonseca, F. da — Apresentação á Semana do Laboratorio da Soc. Med. & Cir. de

São Paulo. Janeiro 1932.

Dove. W. E. & Shelmire, B. — J. Amer. Med. Assn. XCVII(21) :1S06.1931.

Mooser, ff . ; Castancda, M. R. & Zinsser, H. — J. Amer. Med. Assn. XCVII(4) :

231.1931.

Dyer. R. E ; Rumreich. A.. & Badger, L. F. — Science LXXIII(1886) :10. 1931 ; PubL

Health Rep. XLVI :334.1931.

Kemp, ff. A. — J. Amer Med. Assn. XCVII(ll) :775.1931.

Monteiro. J. Lemos — Brasil Medico XLV(47) :1906.1931 ; Mem. Inst. Butantan VI:

1.* art.1931.

12 .

Este trabalho, agora revisto, foi apresentado á Semana

de Laboratorio da Soe. Med. * Cir. de S. Paulo

(Janeiro de 19321, em 3 Xotas, resumidas em publi*

cações in Brasil Medico XLVI (3): 19.1932; XLVI (8):

169.1932 e XLVI (9) : 193.1932.

(Trabalho das Secções de Virus e de Parasitologia do

Instituto Butantan, dezembro de 1931).

SciELQ

11 12 13 14 15 16 17

ESTUDOS

XXVIII.

SOBRE OPHIDIOS NEOTROPICOS

Commentarios a proposito de alguns boldeos

POR

AFRAXIO no AMARAL

398.12

ESTUDOS SOBRE OPHIDIOS NEOTROPICOS

XXVIII. Commentarios a proposito de alguns boideos

POR

AFRAXIO do AMARAL

Em um artigo publicado recentemente no Bulletin oi the Antivenin Instituto

oi America (1). a distincta ophiologa, Olive G. StulI, criticou minha maneira

de encarar algumas formas neotropicas de Boideos, versadas em tres de minhas

ultimas publicações (2, 3, 4).

Embora limitado sobretudo ao genero Tropidophis e nelle directamente

interessado, o artigo de Stuli contém certos reparos, particularmente a proposito

da synonymização por mim usada ao tratar da maioria das “formas das índias

Oecidentaes, que quasi não se acham representadas nos museus sul-americanos”

e “daquellas que se conhecem apenas pela literatura”, de sorte que me acho na

obrigação de examinar esses pontos antes de iniciar a analyse de seu trabalho.

Desde 1922, quando comecei meu estudo de revisão das serpentes neofcro-

picas no Museu de Zoologia Comparada (Universidade de Harvard), graças á

generosa hospitalidade do professor Thomas Barbour, até 1928, quando voltei

finalmente para o Brasil, tratei de aproveitar da melhor maneira o meu tempo

e a opportunidadc que se me deparava, para examinar criticamente e tomar notas

sobre grande numero dc exemplares existentes na collecção daquella instituição,

que é bastante rica em material antilhano. Visitei igualmente, em varias occa-

siões, o Museu Nacional dos Estados Unidos (Instituição Smithsoniana) e ali

examinei muitos exemplares, inclusive, naturalmente, numerosas especies ca-

raibas, nelle tão bem representadas; porisso, apresento aqui meus agradeci-

mentos ao dr. Leonhard Stejneger e sua assistente Doris Cochran, pelas fa-

cilidades de que cercaram o meu estudo. Ainda mais. antes dc preparar minha

Lista Remissiva dc Ophidios Neotropicos (publicada no t. IV destas Memó-

rias), consultei toda a bibliographia da matéria e tive a rara felicidade de poder

completar a minha experiencia pelo exame, virtualmente, dc todos os typos de

°phidios neotropicos contidos nos museus sul-americanos, norte-americanos e

176

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

europeus; as únicas excepções a essa regra eram representadas por aquelles

typos que, no momento de minhas visitas, estavam ausentes por empréstimo

ou não puderam ser encontrados por motivos vários.

Por conseguinte, Stull estava enganada quando acreditou que a minha expe-

riencia dos ophidios antilhanos repousava em especimes porventura representados

"nos museus sul-americanos” ou, então, apenas em meu conhecimento da “lite-

ratura”. Apparentemente, Stull, ou não leu os trabalhos que citou, ou, si os

leu, não comprehendeu o que eu escrevi ; do contrario, ella teria achado a sobre-

dita explicação do plano que eu segui no meu trabalho de revisão, na introducção

mesma dos tres artigos que ella citou em sua nota (2, 3, 4).

Tratando agora da parte propriamente systematica de seu artigo, devo accen-

tuar desde logo que, embora dedicando metade do seu trabalho á discussão de

alguns pontos concernentes ao genero Tropidophis — talvez porque este já fôra

objecto de sua unica revisão (5), Stull affirmou que os erros menos justifi-

cáveis e mais importantes por mim commettidos no tratamento dos Boideos

d r ziam respeito ao genero Epicrates, exemplificando essa sua affirmação com

as especies H. stríatus Fischer, E. monensis Zenneck, E. subflavus Stejneger,

E. xvieningeri Steindachner e E. sabogae Barbour.

Quanto a H. stríatus Fischer, eu apenas segui o parecer de Meerwarth (6)

que, em 1901, mostrou ser esta uma variedade, especificamente synonyma de

E. angulifer Bibron. Ao que eu saiba, nenhum outro especialista desde então

se occupou daquella forma e ninguém provou, por meio de uma revisão satis-

factoria, a incorrecção do opinar de Meerwarth. Portanto, agi da maneira mais

sensata possível em collocando H. stríatus na synonymia de E. angulifer Bibron.

Sem duvida, entre diversos enganos commettidos na primeira edição de

minha Lista Remissiva, o nome “Santo Domingo”, que representa seguramente

a localidade mais importante na distribuição de angulifer, foi omittido em minha

correcção de provas, na qual passaram sem emenda as graphias incorrectas

nrightii, em vez de svrighti, e semicincta, em logar de semicinctus. Cumpre-

me, pois, agradecer a Stull a indicação destes enganos, coherente com um pedido

que fiz, na introducção daquella minha monographia (4), aos meus collegas, para

que assignalasscm quaesquer erros ou omissões que encontrassem no texto, con-

tribuindo, assim, para a melhora da Lista Remissiva, em beneficio de todos os

especialistas.

Em seguida, Stull accentuou: “A forma chrysogaster Cope, representada

por quatro exemplares do Museu de Zoologia Comparada de Harvard, e que

cu considero subespecie valida de stríatus, não é siquer mencionada”.

Em resposta devo dizer que, na synonymia de Epicrates fordii (Günther),

citei sem restricção o nome usado no tratado de Boulcnger. Desde que eu não

accrescentei uma nota “ pro parte" ou " partim” áquelle nome, pensava que

todos os biologos comprehenderiam que eu havia concordado automaticamente

com a synonymia de fordii, constante do trabalho de Boulenger, inclusive, por-

A FR AN IO do Amaral — Ophidios neolropicos

177

tanto, H. chrysogaster Cope. Assim sendo, deve-se concluir que Stull, ou não

comprehende, ou não segue, o systema universal de citações em matéria de

nomenclatura. Igualmente quando terminei minha Lista RemissiA^ dos Ophidios

Xeotropicos, em maio de 1930, não poderia eu prever que chrysogaster viesse

a se tornar subespecie valida de striatus, porquanto Stull só emittiu sua opinião

a esse respeito em setembro de 1931. Todavia, mesmo que eu possuísse o

dom de adivinhar, eu não estaria obrigado a concordar com o seu ponto de vista,

si ella não houvesse delle demonstrado a razão de ser de uma maneira satis-

factoria. Indiscutivelmente escapa ás finalidades de qualquer lista remissiva

propor alterações ou mesmo seguir apressadamente modificações outras que não

hajam ainda resistido á prova do tempo.

De referencia a E. inonensis, Stull af firmou que: “A forma Epicrates

inonensis Zenneck apparece na synonymia de E. fordii (Günther), embora delia

se possa distinguir, não só pela coloração, sobretudo pelo numero bem menor

de manchas dorsaes, mas também pelas diííerenças appareníemente constantes

no numero de escamas dorsaes, de ventraes e caudaes, o que pareceria justificar-

lhe pelo menos uma collocação subcspecifica”.

Por consequência, Stull não estava ainda bem segura, quer da constância

dos caracteres differenciaes que indicou, quer da posição systcmatica a ser

occupada pela forma cuja validez ella defende. Neste particular também acom-

panhei Meerwarth (loc. cit., p. 8), que considerou inonensis apenas como va-

riedade de E. fordii. Desde que, por motivos obvios, não é usual, nem acon-

selhável, incluirem-se variedades em listas remissivas, aquella forma de Zenneck

foi posta na synonymia de fordii, dada a inexistência de qualquer revisão satis-

factoria a respeito. Ainda sobre este ponto eu deveria accentuar que o proprio

Sdimidt (7), que acceita a validez de inonensis, indicou rccentcmente que "o

esclarecimento do estado das relações desta especie caberá a um revisor do genero,

que tenha á mão exemplares das varias especies dominicanas”.

No tocante a E. subflavus Stejneger, achei preferível não a reconhecer

como tal, para não precipitar o meu juizo, na falta de uma revisão, sobre a

sua validez, tanto mais quanto são bem conhecidas as enormes variações apre-

sentadas pelas serpentes insulares, variações que explicam a extrema subd visão

que a fauna ophiologica antilhana tem sofírido nas mãos de vários herpetologos.

E’ certo haver Stejneger baseado a diagnose de subflavns sobretudo no

intimo contacto das prefrontaes com a preocular; todavia, o material que teve

em mão pareceu-lhe insufficiente a uma completa verificação diagnostica, con-

forme se deprehende da seguinte annotação (8) :

“A coloração também é bastante differente e ha outros numerosos

caracteres na escutellação, cuja constância só se póde demonstrar em face

de um material mais abundante do que o presente no momento”. Portanto,

a inclusão de subflavns na synonymia de inomatus talvez tenha a vantagem

178

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

real de provocar uma revisão meticulosa deste grupo, sobremodo confuso, de

serpentes e facilitar, assim, o trabalho de futuros especialistas.

A proposito de minha maneira de encarar E. zeieningeri, eis o commentario

de Stull: “Efncratcs zeieningeri Steindachner, especie paraguaya conhecida so-

mente pelo typo, foi fundida com Eunectes notaeus Cope simplesmente talvez

porque occorre na patria de notaeus e apresenta um numero correspondente dc

filas de escamas e um desenho algo semelhante”.

Ainda aqui, Stull, ou não leu o que eu escrevi acerca de zeieningeri, ou.

si o leu, não poude ligar as idéas por mim expostas. Embora E. zeieningeri não

possa de maneira alguma ser incluída entre ‘‘formas antilhanas que não estão,

quasi inteiramente, representadas nos museus sul-americanos”, porquanto, pri-

meiro, ella procede do Paraguay (facto que Stull deve conhecer) e, segundo,

representa um estricto synonymo de E. notaeus Cope (forma relativamente com-

mum em nossas collecções), ainda assim não posso deixar passar sem reparo o

facto de eu não me ter referido a qualquer “desenho”, ao comparar zeieningeri

com notaeus. Conseguintemente, a affirmação de Stull no particular é intei-

ramente gratuita. A opinião por mim emittida (p. 9) sobre E. zeieningeri, em

meu trabalho (2), foi, textualmente, a seguinte: “Esta especie, baseada num

exemplar jovem procedente de Altos, no Paraguay, caracteriza-se principal-

mente pela presença de 47 filas de escamas dorsaes. Trata-se, indiscutivelmente,

de um mero synonymo de Eunectes notaeus, especie que é a representante

do genero no valle do Paraguay, enquanto E. murinus é própria dos valles do

Amazonas. São Francisco e Paraná”. Ao examinar o typo de zeieningeri no

Museu de Historia Natural de Vienna, em presença de meus prezados collegas

Otto Wettstein e Franz Werner, aos quaes demonstrei o engano commettido

por Steindachner, verifiquei com segurança ser aquelle typo um estricto syno-

nymo de notaeus. Esta foi realmente a idea que eu procurei justificar.

Desde que estou a occupar-me desta especie, devo aproveitar o ensejo

para dizer que a variação de suas placas subcaudaes vae de 46 a 59, o numero

mais baixo tendo surgido a Serié (9, 10), em uma serie de exemplares por

elle examinada, c o mais alto, em outra ora á minha disposição e cujo nu-

mero de ventraes oscilla entre 218 e 244. Nestas condições, a variação de*

finitiva de 55 a 59 para as subcaudaes e a de 218 a 231 para as ventraes,

ambas citadas por Stull, estão incorrectas. A pequena differença encontrada

no numero das subcaudaes (64, inclusive diversas placas divididas, no typo de

Steindachner, a contrastar com 59, encontrado em duas series relativamente pe-

quenas de notaeus ) não justifica a validez de zeieningeri, que não se póde dis-

tinguir da typica notaeus por qualquer outro caracter.

Stull considera que a inclusão de E. sabogae Barbour na synonymia de

Constrictor constrictor imperator está em desaccordo com o meu reconhecimento

de subespecies brasileiras, baseadas apenas em côr, e isto porque: “Deve-se

lembrar que nada menos de oito nova> subespecies de Botlirops nc.tzeiedii Wagle'

Afranio do Amaral — Ophidios neolropicos

170

foram descriptas, em correspondência com outros tantos Estados brasileiros,

no trabalho do doutor Amaral, relativo a envenenamento por accidentes, baseadas

em differenças de desenho e coloração, e que todas ellas foram conservadas nos

artigos ora discutidos.”

Como resposta, devo dizer, em primeiro logar, que esta nota difficilmeute

me é applicavel, pois presumo que uma analyse imparcial da moderna litera-

tura ophiologica mostraria, não somente que eu tenho sido um dos especia-

listas mais avessos a descripções baseadas apenas em coloração — attitude essa

que tem até sido objecto de critica (11) — , sinão também que eu fui talvez

o primeiro ophiologo a recorrer a provas de precipitina e a estudos physio-immu-

nologicos de venenos, como auxilio ao estabelecimento da diagnose de serpentes

(12, 13 e 14). Em segundo logar, não devo deixar patssar esta opportu-

nidade para declarar que, ao me decidir a publicar a descripção daquellas subes-

pecies de Bothrops netnmedü, eu já havia tomado a precaução de praticar provas

de soro-precipitação, para poder conferir as conclusões a que chegara, ao exame

de uma grande serie de exemplares vivos daquellas formas. Este trabalho, por

mim iniciado em 1921-1922, está sendo continuado em coiiaboração com um

dos assistentes (J. Travassos) deste Instituto e está produzindo resultados bem

interessantes, cuja publicação reservamos para muito breve.

Tendo até agora visto mais de cem mil serpentes vivas (só este anno o

Instituto Butantan recebeu cerca de vinte mil exemplares nessas condições),

tornei-me tão >ceptico a respeito do valor e caracteres chromaticos que, quando

possivel, recorro a quaesquer outros meios de identificação. Sem duvida, fui

coherente ao synonymizar li. sabogac com C. conslrictor impcrator, da qual a

primeira não se póde distinguir: as variações encontradiças no colorido de

formas insulares são tão profusas (capazes até de affectar, igualmente, certos

caracteres anatômicos de menor valia), que considero apenas natural que exem-

plares de impcrator, procedentes da ilha Saboga, apresentem um colorido mais

■ndefinido ou pallido do que os oriundos do continente.

Infelizmente, Stull estava tão compenetrada do valor de coloração como

caracter distinctivo, que a elle recorreu como argumento em todo o seu trabalho,

confirmando, portanto, essa tendencia, já bem demonstrada ao versar o genero

Tropidophis (5). Para provar esta minha affirmação, devo lembrar o com-

nientario já feito a proposito de haver-me a auctora imputado, no caso de

li. zvieningeri, um argumento de ordem chromatica (differenças de desenho)

em que eu siquer jamais pensei ; cabe-me, em seguida, convidar o leitor a ler

criticamente a monographia da auctora, sobre Tropidophis, e a defesa por ella

apresentada (1) de todas as formas que reconheceu em 1928: basta isto para

convencer qualquer especialista do abuso, por ella praticado, de differenças

chromaticas na identificação de serpentes insulares.

Aos fins visados neste artigo resta-me agora declarar o meu scepticismo

quanto ao valor porventura apresentado pelos caracteres dos dentes e pela con-

180

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

formação dos hemipenes, na dif ferenciação, assim de serpentes tão nitidamente

atrophiadas como as Tropidophis, como de exemplares conservados, idêntico*'

aos que Stull examinou para preparar a sua sobredita monographia.

Quanto aos caracteres dentários, certamente todos os ophiologos experi-

mentados conhecem os innumeros erros commettidos em descripções e oriundos

das causas seguintes: dissecções imperfeitas de material improprio; esquecimento

das differenças decorrentes da idade e das faltas da dentição devidas a luctas

ou á alimentação; omissão de dentes não desenvolvidos ou de falhas naturaes

na mandíbula de exemplares estudados, etc.

No tocante aos caracteres hemipenianos, tenho encontrado differenças tão

nitidas, mesmo em material preparado de exemplares vivos, que, por mais que

eu me sinta tentado pela abundancia de especimes á mão, eu os tenho evitado

usar na dif ferenciação de serpentes. A essa variação accresce a circunstancia

de serem muitas espedes de ophidios conhecidas apenas pelo typo, que fre-

quentes vezes é uma femea ( ^ ) ; portanto, caso prevalecesse o critério da

identificação das especies pelos caracteres penianos, daquella circunstancia decor-

reria a impossibilidade da classificação definitiva de taes exemplares, a menos que

se estabelecesse e logo se generalizasse em herpetologia um processo seguro de des-

cripção de “formas provisórias”, cuja incorporação final em systematica fi-

casse a depender da applicação daquelle critério phallologico. O risco que se

corre é naturalmcnte muito maior quando se u?3 este caracter peniano á luz

da dissecção de exemplares conservados. Para provar esta minha affirmação

cu poderia simplesmente aconselhar o leitor que procedesse a uma analyse critica

de certas gravuras constantes da monographia fundamental de Cope sobre

classificação de serpentes de accordo com a sua estruetura hemipeniana. Para

mostrar, com ef feito, que, até em especies de grandes dimensões, a conformação

dos hemipenes representa um critério bastante falho para a distineção delias,

cu indicaria uma comparação, por exemplo, entre pl. XVI, fig. 7 e pl. XXI

fig. 1 (da monographia de Cope), ambas pertencentes d mesma especie Chironius

fuscus (L.) ; entre pl. XVIII, fig. 2 e pl. XVIII, fig. 3, ambas concernentes

a Drymobius boddaerlii (Sentzen) e, especial mente, entre pl. XVII, fig. 6 c

pl. XIX, fig. 2, ambas relativas á especie Drytnobius der.drophis ( Schlcgel) . . •

A precariedade de tal caracter ainda mais se revela cm serpentes pequenas, con-

forme parece sempre acontecer com as do gencro Tropidophis.

Finalmente, devo declarar que, ao ler a monographia de Stull, achei inaccei-

taveis os grupos básicos A e AA propostos em sua “Chave das especies c

subespecies do genero Tropidophis", em virtude de haver cila baseado o pri-

meiro grupo na presença de “escamas dorsaes lisas, hemipenes bifurcados" *

caracterizado o segundo pela presença de "escamas dorsaes carinadas. pelo menos

nas filas vertebraes, hemipenes quadrifurcados”, isto apesar de não ter exa-

minado hemipenis algum das especies paucisquamis e taczanoveskyi, nem visto

um exemplar siquer de ambas, como, aliás, francamente confessou. Pouco

Afkaxio do Amaral — Ophidios neolropicos

181

tempo depois de ter assim encarado o trabalho de Stull, deparou-se-me ensejo

de confirmar minha recusa á acceitação daquella sua chave synoptica: ao

examinar um exemplar vivo de T. paucisquamis, verifiquei positivamente (16)

que as escamas dorsaes desta especie são de facto carinadas, ao contrario, pois,

do que a auctora havia antecipado. Nessa occasião, cu escrevi: “Da revisão

de Stull resultou o esclarecimento de algumas questões relativas, quer á dis-

tineção, quer á identidade de varias formas de Tropidophis. Infelizmente,

algumas conclusões de seu trabalho deram-me a impressão de ser demasiado

apressadas, a saber: a subdivisão extrema da especie pardalis, a descripção de

wrighti como especie nova, baseada num unico exemplar que pode bem repre-

sentar uma variação extrema de pardalis, e a separação, em dois grupos, das

especies continentaes paucisquamis e taczanozvskyi. Em sua opinião, esses dois

grupos, cujos typos são, respectivamente, maculai us e pardalis, podiam caracte-

rizar-se da seguinte maneira:

A. Escamas dorsaes lisas; hemipenes bifurcados — grupo maculatus.

AA. Escamas dorsaes carinadas, pelo menos na fila vertebral ; hemipenes

quadrifurcados — grupo pardalis.

“Desde que Stull declarou em seu trabalho não haver visto exemplar al-

gum, seja de paucisquamis, seja de taczancnvskyi, e desde que nenhum outro

auctor jamais descreveu os caracteres penianos de qualquer destas especies, a

separação delias á luz desses caracteres não se justificaria de modo algum.

Estou certo igualmente de que, á luz da carinação das escamas, paucisquamis c

taccanowskyi não se podem agrupar separadamente, porquanto já verifiquei que

o exemplar de paucisquamis, actualmente na collccção do Instituto Butantan,

apresenta escamas carinadas sobre o dorso, justamente como acontece oom

tacsatunvskyi

Consequentemente, da revisão de Stull apenas restam as variações numé-

ricas das escamas para lhe confirmar as conclusões relativas á subdivisão de

Tropidophis. Este é o ponto que eu, baseado no conhecimento que tenho do

genero, resolvi não acceitar, deixando-o primeiro resistir á prova do tempo.

Concluindo, direi que, .antes de algum revisor confirmar as conclusões de

Stull, tenho por perfeitamente justificada a deliberação que tomei de omittir de

minha Lista Remissiva de Ophidios Ncotropicos os novos nomes errados pela

auctora.

393.121

STUDIES OF NEOTROPICAL OPHIDIA

XX VI II. Remarks on some boid snakes

r.v

AFRAXIO no AMARAL

TRAXSLATIOX

In a recent article published in the Bulletin of the Antivcnin Institute of

America (1), the distinguished ophiologist, Olive G. Stull, criticized my views

on some of the neotropical íorms of Boidae as set forth in three of my

latest publications (2, 3, 4).

Although mainly confincd to and directly interested in the gcnus Tropi-

dopltis, Stull made some general criticai statements particularly on my “ill-advised

synonymizing” in dealing with most of “the West-Indian íorms, which are

almost unreprcsented in the South American muscums”, “as well as those

known only from the literature”. The accuracy of thesc statements merits

being examined before I enter into the analysis of her paper.

Since 1922, when I commcnccd my revisionary work on neotropical snakes

at the Museum of Comparativc Zoology, thanks to Prof. Thomas Barbour’s

generous hospitality in his laboratory, until 1928, when I definitcly rctunied

to Brazil, I made the best use of my time and the opportunity to examine

critically and to take notes on a great tnany specimcns in the collection of that

institution, which is quite rich in Antiüean material. On various occasions I

also visited the United States National Museum and examined inany spccimens,

iiKluding, of course, a great many West-Indian íorms which are also well

represented there. I am gratcful to Dr. Lconhard Stejneger and Miss Doris

Cochran for permission to do so. Moroover, before preparing my Chcck-list

of Neotropical Snakes, I was successíul in gaining access to the complete bibliogra-

phy of the subject and to supplement my expcrience by the examination of

virfually all types of neotropical ophidia as contained in the South American,

North American and Europcan museums, the only exceptions being tliosc types

181

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

which either were away on loan or could not be locaíed at the time of my

visits.

Therefore, StulI misrepresented the matter when she rhought my experienct

of Antillean ophidia to be based on specimens perchance represented “in the

South American museums” or elsc on my knowledge oí “the literature".

Apparently Stull either did not read the papers she quoted, or, if she read

them, did not understand what I wrote, otherwise she would have found the

explanation I gave above of the plan I followed in my revisionary work, in

the ver)- introduction of all of the three papers she cited in her article (2, 3, 4).

Turning now to the very scientific statements of her criticai article, I may

first say that, although devoting half of her article to the discussion of some

points regarding the genus Tropidophis, perhaps be cause this had already been

reviewed by herself (5), Stull stated that the least justiíiable and the greatest

errors I made in dealing with the Boidae are found in the genus Epicrates, a

statement she exemplified with the species H. striatus Fischer, E. monensis

Zenncck, E. subflavus Stejneger, E. r cienmgeri Steindachner and E. sabogac

Barbou r.

In regard to H. striatus Fischer I followed Meerwarth (6) who, in 1901,

showed that this is a variety and the name a synonym of Epicrates angulifer

Bibron. As far as I am aware no other specialist has since dealt with this

forni, nor has anyone pnoved, through a satisíactory revision, Meerwarth’s

finding to be incorrect. Therefore, I followed the most sensible course in the

matter on placing H. striatus in the synonymy of E. angulifer Bibron.

Xo doubt, among many slips found in my List, the name “Santo Domingo",

which is of course the most important locality in the angulifer range, was omitted

in my proof-reading, in which the incorrect spellings zvrightii (instead of

xvnghti ) and seniicincta f instead of semicinctus) also jassed unnoticcd. I aro

rnuch indebted to Stull for pointing out these mistakcs. As I wrote in the

introduction of the first edition of my monograph (4), I asked all my collcagues

the spccial favour of pointing out any errors or omissions they might find in

the texr so as to help improve that List for the benefit of all.

Stull next wrote: "The form chrysogastcr Cope, represented by four

spccimcns in the Museum of Comparative Zoology at Harvard, and which I

consider a valid subspecies of striatus, is not even mentioned”.

In dealing with the synonymy of Epicrates fordii (Günthcr), I quoted

without restriction the name given it in Bou!enger’s catalogue. Since I did not

add a "pro parte” or “ partim " to the quotation of that name I thought that

every biologist would understand that I had automatically agreed with the

synonymy of fordii as recognizcd by Boulcnger, including of course H.

chrysogaster Cope. Therefore, it is apparent that Stull either does not com-

prehend or does not follow the universal system of nomenclatorial quotations.

On the other hand, when I finished my check-list of neotTopical ophidia in

Afranio do Amarai. — Xeolropical ophidia

185

May, 1930, I could not foresee that chrysogaslcr would ever bccome a valid

subspecies of striatus, because Stull made her opinion known only in September,

1931. Even had I possessed such a divinatory instinct, I was not obliged to

agree with her if she had not proved the correctness of her standpoint in a

sarisfactory manner. Indeed, it is not the scope of any check-list to initiate

or even to follow hastily any proposed modifications that have not yet stood

the test of time.

In reference to E. monensis, Stull stated that: “The form Efncrates mo-

nensis Zenneck is synonymized with E. fordii (Gõnther), although it can bc

dininguished from the latter not only by its coloration, particularly the consi-

derably smaller number of dorsal spots, but also by apparently constant

differences in the numbcrs of scale rows, ventrals, and caudais, which would

seem to entirfe it to at least subspecific rank”.

Therefore, Stull was not yet sure about either the constancy of those

differences she indicated or the rank to be dcfinitely assigned to the form

the validity oi which she defended.

In this case I also followcd Meerwarth ( loc . cit., page 8) who considered

monensis but as a variety of E. fordii. Since, for obvious reasons, it is neither

customary nor advisable for check-lists to rccognize varieties, Zcnneck’s form

was included in the synonymy of fordii, in the abscnce of a satisfactory revision

of same. In this connexion I may as well point out that even Schmidt (7), who

accepts monensis as a good spccics, has rccently indicated that “the clearing

up of the status of the relations of this species must be left to a reviser of

the genus, with spccimens of the several Santo Domingan spccics at hand”.

In vicw of the well -known wide variations borne by island snakes, a fact

which seems to bc responsiblc for the considerablc splitting that the Antillean

ophiological fauna has undergone in the hand- of several herpetologists, I found

it to bc advisable not to acccpt E. subflavus Stcjncger as a full spccics, pending

a revision that might prove its validity.

To bc sure, Stejncger bascd the diagnosis of subflavtis cspecially in the

broad contact of the prefrontal with the preocular, but the material hc had al

hand appeared to be insufficient to any complete diagnostic vcriíication for he

(8) clearly stated: “The coloration is also quite diffcrent, and there are nu-

merous other charactcrs in the scutellation, the constancy of which can only bc

demonstrated by a larger material than I lm-e access to at present”. The

placing of subflavus in the synonymy of inomatus may have the real merit of

provoking a thorough revis r on of this most confusing group of serpents so as

to facilitate the work of future specialists.

In relation to my treatment of E. zvieningeri, Stull wrote: ” Epicrat cs

tuim ingeri Steindachncr, a species from Paraguay known only from the typc,

is referred to Euncctes nolaeus Cope, apparently simply because it occurs w.thin

186 Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

lhe range of notaeus and has a corresponding number of «cale rows and a so-

me what similar pattern”.

Here again Stull either did not read what I wrote about -uieningeri or, if

she did, she could not make out my opinion. Although E. ivieningeri could

not in any way be included among “West-Indian forms, whkh are almost

entirely unreprcsented in South American museums” «ince it proceeds from

Paraguay — a fact of whkh Stull is aware — and is a strict synonym of E-

notaeus Cope — a íorm rather common in our collections — yet I cannot help

pointing out that in my text I did not mention any “pattern” in the comparison

I made between Tvicningcri and notaeus. Therefore, Stull’s statement in this

regard is entirely gratuitous. Indeed, the opinion I rendered (page 9) on E.

* aeningeri in my paper (2) is the following in plain English: “This species,

as based on one young specimen proceeding from Altos, in Paraguay, is

characterized principally by the presence of 47 rows of dorsal «cales. It is

undoubtedly a mere synonym of Eunectes notaeus, which is the representative

of the genus in the Paraguay valley, whilst E. murinus i« the one found in the

Amazon, the São Francisco and the Paraná valleys”. Having examined the

type of xdeningeri in the Vienna Museum in the presence of my esteemed

colleagues Otto Wettstein and Franz Werner to whom I showed SteindachnerV

mistake. I positively verified that it was a strict synonym of notaeus. This is

the thought I really tried to convey.

Since I am dealing with this forni it may be proper to point out that the

varia tion of its subcaudal count is 46-59, the former figure having been found

by Serié (9, 10) in a series he examined and the latter in another I have at

hand, the vcntral count varying from 218 to 244. Therefore, Stull’s definite

figures 55-59 for the caudais and 218-231 for the ventrals are not correct. The

slight diffcrence noted in the number of subcaudals (64, including scvcral divided

shields, in Steindachneris type, as against 59 found in two by no means large

series of notaeus ) does not justify the validity of xvieningeri, which can not be

distinguished from typical notaeus by any other character.

Stull considers the inclusion of E. sabogae Barbour in the synonymy of

Conslrictor constríctor imperator to be highly inconsistcnt with my policy of

rcoognizing Brazilian subspecies only by colour and this because “It will be

remembered that no less than eight new subspecies of Bolhrops neutvirdii

Wagler, convenicntly corresponding to as many Brazilian States, are describcd

in Doctor Amarais paper on snake poisoning on the basis of differences in

pattern and coloration, and these are all recognized in the papers under

discussion”.

In reply, may I say, first, that this remark is hardly applicable to me,

liecause I feel tliat an impartial analysis of the modern literature on snakes

would disclose not only tliat I have been one of those who have shown the

greatest dislike for descriptions of forms based onlv on colouration — an

A franjo do Amarai. — Neotropical ophidia

187

attitude that has, as a matter oi íact, been criticized (11), but also that I was

jierhapá the first spedalist to resort to predpitin tests and venoni physio-immuno-

lical analysis as a help in the establishment of diagnosis of snakes (11, 13, 14),

Second, I must take this opportunity to State that, when I decided to publish my

article on the subspedes of Bothrofs ncutviedi í, I had already taken the precaurion

of checking the condusions I arrived at on the examination of fairly large

series of lhe specimcns, with the necessary scrum precipitin tests. This work,

which I started in 1921-192 2, bas of late been continued in collaboration with

one of my assistants (J. Travassos) at this Institute and is yielding very in-

teresting results, the publication of which we anticipate for the near future.

Having thus far seen over one hundred thousand live snakes (this year

alone the Instituto Butantan has received over 20,000 of such specimens), I

have become so skeptical about colour characters that whenever possible I resort

to some other means of Identification. Therefore, I was consistent when I

synonymized E. sabogac with C. constrictor imperator, from which the former

can not be distinguished. The \ariations found in the colour of island forms

are so profound (they sometimes may aftect certain minor anatomical characters

as wdl) that it is only natural that specimens of imperator taken on Sabogn

Island bear a more indefinite or pallid shade than the mainland ones.

Unfortunately, Stull was so imbucd with the idea of colourarion as a

distinctive cliaracter, that she brought this forth as an arguinent throughout her

paper in the samc way thar she did in dealing with the gcnus Tropidophis (3).

To prove this point I have already commcnted on her having imputcd to me,

in rcgard to E. t vUnmgeri, a pattern difícrence of which I cvcn ncvcr thought.

The reader is now invited to criticaly examine her monograph on Tropidophis

and the deíense she madc (1) of all forms she recognizcd in 1928, to bc con-

vinccd of how much she abuscd of colour differcnccs in scparating island snakes.

For the purposc of this article it seems to suffice now for me to State that,

in the case of such nitidly dwarfed snakes as the Tropidophcs as well as in the

case oi preserved material such as that Stull had access to in the preparation of

her monograph, I am sceptical also about differcnccs in tooth characters and

hemipenia! structurc.

Indeed, in regard to tooth characters, all thosc who have sufficicnt experience

with snakes know that many errors have crept into descriptions from the following

causes: imperfect dissections of improper material: overlooking of age difíe-

rences as wdl as of losses of teeth due to fights or feeding: omission of

undeveloped teeth or else of natural gaps in both the maxillary and the mandiblc

of the specimens under consideration, etc..

As rcgards hcmipenial characters, I have found such wide differcnccs, cvcn

in malcrial mountcd frotn lhe specimens, that much as I have been tempted

by the abundance of material I have at hand, I have refrained from using them

in the differentiation of snakes. To this variation I may add the fact of

188

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

many species of serpents to be known only from the type, which oftentimes is

a j? ; therefore, should this criterion of identification of species in the light of

their penial characters prevail, it would be impossible definitely to classify those

type specimens unless a sound process of descnption of “provisional forms

were established and generally accepted in herpetology, the final incorporation

of these forms into systematies remaining dependent on the applkation of that

phallological criterion.

The risk one takes in attempting to use this phallic character as revealed

by the dissection of preserved specimens is naturally much greater. To prove

this contention I could refer the reader to a criticai analysis of some of the

figures in Cope’s fundamental monograph (15) on the classiíication of snakes

of which belong to Drymobius boddacrtii (Sentzen), and parricularly between

pl. XVI, fig. 7 and pl. XXI, fig. 1, both of which belong to the same species

Chironius fiiscus (L.) ; between pl. XVIII, fig. 2 and pl. XVIII, fig. 3. both

of which belong to Drymobius boddacrtii (Sentzen), and particulary between

pl. XVII, fig. 6, and pl. XIX, fig. 2, both of which belong to Drymobius

dcndrophis (Schlegel), are sufíicient to sbow ihat even in large forms as those

cited above, the hemipenis strueture is a very uncertain criterion to be followed

in the distinction of snakes. The precariousncss of this character is naturally

still more marked when one deals with small individuais as seems always to be

the case with those of the genus Tropidophis.

Finally, I am obliged to State that, upon rcading Stull’s monograph, I could

not accept the main groups A and AA as proposed in her “Key to the species

and subspccies of the genus Tropidophis", becausc she based the former in the

presence of "dorsal scales smooth, hemipenis bifurcate”, and the latter, in the

presencc oi “dorsal scales kcelcd, at least in the vertebral row, hemipenes qua-

drifurcatc”, despite the fact that she had neither examined any hemipenis of

paucisquamis or of tacsanozvskyi nor sccn one single specimen of eithcr, as she

frankly admitted. A latcr development proved that I was correct in refusing

to accept her synoptic key; it carne about with the veriíication I made (16) that

the dorsal scales of paucisquamis are really carinated. Thcn I wrote: "In

consequencc oi Miss Stul)’s revision, quite a few questions concerning either the

distinction or the identity of various forms of Tropidophis bccame settled.

Unfortunatcly. a few conclusions stated in her paper strike me as being perhaps

a little too hasty, to wit: the extreme subdivision of the species pardalis, the

description of wrighti as a new species based on a single specimen which may

as well represent an extreme variation of pardalis, and the separation of the

continental species paucisquamis and tacsanawskyi into two groups. In her

opinion, these groups which bear maculatus and pardalis as their rcspcctive

types, might be characterized as follows:

A. Dorsal scales smooth; hemipenes bifurcate — maculatus group

Afraxio do Amarai. — Neotropical ophidia

189

AA. Dorsal scales keeled, at least in the vertebral ro’.v ; hemipenes

quadrifurcate — pardalis group

“Since Stull wrote in her paper that she had not seen any specimen oi

either paucisquamis or tacsanozvskyi, and since nobody else has ever described

the penial character of either species, the separation of these forms in the light

of their penis formation appears to be entirely umvarranted. That paucisquamis

could not be separated from tacsanowskyi in the light of scale carination I am

siso quite sure, because I have found that the specimen of paucisquamis, now in

the collection of the Instituto Butantan, bears keeled scales in the dorsum just as

is the case with tacsanmvskyi” .

Consequently there remain in Stull’s revision but the scale counts to

confirm her conclusions on the subdivision of Tropidophis. This I have

decided, on the knowledge I have of the genus, not to accept, but let it stand

the test of time. Before some reviser confirms her findings I feel that I am

Pcrfectly justified in the action 1 took when I omitted Stull’s new nomes from

oiy Check-list of Neotropical Ophidia.

BIBLIOGRAPHIA

(REFEREXCES)

1- Stull. O. C. — Corrections to some recent papers on neotropical snakes — BulL

Antivcnin Inst. Amer. V(2) J9.1931.

~ .Imaral, A. do — Valor systematico de varias formas de ophidios neotropicos —

Mem. Inst. Butantan IV :3-68. 1929.

•k Amaral, A. do — Lista remissiva dos ophidios do Brasil, loc. cil. IV :69-125.1929.

t Amaral, A. do — Lista remissiva dos ophidios da região neotropica — loc. cit. —

IV :127-271.1929.

5. Stull, O. G. — A revision of the genus Tropidophis — O. P. Mus. Zool. Univ.

Michigan. 195:1-49.1928.

é. Meeruorth, H. — Die wcstindischcn Reptilien und Batrachicr des naturhistorischcn

Muscums in Hamburg — MitteiL Xaturh. Mus. Hamburg XVIII (2) ^5 . 1901 .

Schmidt, K. P. — The amphibians and reptilcs of Mona Island. West Indies —

Fidd Mus. N. H. PuM. 236 ZooL Ser. XII(12) :159. 1926.

3- Stcjneger. L. — A new systrmatic name for the yellow boa of Jamaica — Proc. U.

S. Nat. Mus. XXII (12181:469.1901.

Serie, P. — Sur la distribution géographkjue des deux expéces de Boas aquatiques

Eunectes murinus (L.) et Eunectes nalaeus Cope. — BulL Soc. Phys. 1:443.1914.

t®. Ribeiro. A. de ti. — Sobre a ampliação da area geographica de Eunectes notaeus

Cope . — BoL Mus. Nac Rio 1(5) Ü63. 1924.

190

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

11. Buri, C. E. (and M. D. Buri) — S. A. lizards in the collecíion of the American

Museum of Natural Historjr — Buli. Amer. Mus. Nat. Hist. LXI:313.1931.

12. Amaral. A. do — Excursão á Ilha da Queimada Grande ''notas sobre a biologia de

uma Lach.es is ali existente) — Comm. Soc. Med. Cir. São Paulo 15. IV. 1920.

Amaral. A. do — Contribuição para o conhecimento dos oíidios do Brasil — Anex. Metn-

Inst. Butantan, 1(1). 1921.

Amaral, A. do — On the biological difíerentiation of the neotropical spedes of

snakes, Bothrofs atrox (Linné. 1758), B. jararaca (Wied. 1824) and B. /orara*

eiusu (Lacerda. 1884) — Amer. J. Trop. Med. IV:447-452.1924.

Cofc. E. D. — The classification of the ophidia — Transact. Amer. Philos. Soc-

XVIII. 1895.

16. Amaral, A. do — A rare Brazilian snake — Buli. Antivcnia Inst. Amer. IV(1) : 1 5 . 1930.

(Trabalho da Secçio de Ophlologla do InsUtuto Butaa*

tan, dezembro de 1931.

(From the Ophiolo*kal Department of the Instituto B°*

tantan, December, 1331).

SciELO,

11 12 13 14 15 16 17

5Í5.771

CONTRIBUIÇÕES AO

CONHECIMENTO DOS CUUCIDEOS DE SÃO PAULO

I. Notas sobre Mansonia albifera Prado e sobre o macho

de Mansonia a/bicosta (Chagas)

por

ALCIDES TRADO

Entre os mosquitos capturados cm Butantan, durante o mês de março do

corrente anno, identifiquei as seguintes cspecics de Mansonia: Mansonia (Rhyn-

chotacnia), juxtamansonia (Chagas), Mansonia ( Rhynchotacnia ) fasciolata

(Lynch Arribalzaga), Mansonia ( Mansonia ) amazonensis (Theobald) c uma es-

pccie que me pareceu nova, para cuja dcscripção me utilizei de exemplares dos

dois sexos. Os criadouros de mosquitos Mansonia são provavelmente os charcos

das proximidades do rio Pinheiros, em Butantan, onde as plantas aquaticas da

familia das Araccac existem abundantemente. Segundo Costa Lima, as larvas

de Mansonia apresentam na extremidade do syphão dois pequenos ganchos mo-

veis, que podem ser introduzidos nas partes submersas das plantas aquaticas : uma

vez fixado o syphão, a larva aspira o ar dos canaliculos acri feros, muito desen-

volvidos nestas plantas.

Ao anoitecer, os alados desse genero procuram as habitações próximas ou

distantes, onde são facilmente capturados. Em Butantan, as capturas se faziam

nas partes teladas das janelas, em casas de empregados do Instituto.

Mansonia (Rhynchotacnia) albifera Trado

(mosquito novo capturado em Butantan)

Femca — Proboscida longa, negra, com um largo anel branco pouco alem

do meio; ponta, com exclusão dos labellos, branca. Palpos curtos, negros, com

escamas brancas no apice do ultimo articulo. Antennas mais curtas que a pro-

boscida, negras e pilosas. Toros amarellos, com algumas escamas escuras no

194

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

lado interno. Clypeo negro, glabro. Ocdpicio pardo-escuro, com escamas bran-

co-amarelladas e curvas, em mistura com outras negras e erectas ; vertice com

um pequeno grupo de escamas branco-amarelladas. Lobos prothoracicos negros,

não muito salientes e com algumas escamas branco-amarelladas. Mesonoto pardo-

escuro, com escamas pallido-doiradas, na parte anterior; e'sas escamas se dif fun-

dem para os lados na parte mediana; ainda escamas pallido-doiradas em forma

de pequenas estrias na parte posterior, alem de estrias iguaes nos lados, onde

também se notam escamas pardo-escuras. Escutello pardo-escuro, trilobado, com

um reduzido numero de escamas pallido-doiradas sobre o lobo medio. Metn-

noto pardo-escuro e nú. Balancins inteiramente branco-pallidos. Pleuras com

duas nitidas separações pardo-escuras e com tufos de escamas brancas. Abdome

recoberto de escamas escuras e com cintas basaes brancas, estreitas, alargando-se

lateralmente, em todos os segmentos; ventre da mesma côr, com leve faixa

branca apicilar dos segmentos. Pernas pardo-escuras ; coxas e trochantéres pardo-

escuros, com algumas escamas brancas; femores da mesma côr, com um anel

branco subapicilar e os ápices levemente brancos, possuindo todos, na face interna,

uma larga faixa de escamas pallido-esbranquiçadas ; tibias pardo-escuras, com

os ápices ligeiramente brancos e face interna de todas, com uma estreita linha de

escamas pallido-esbranquiçadas; tarsos pardo-escuros, com aneis brancos en-

volvendo ambas as extremidades das junta-. Unhas iguaes c simples. Azas

revestidas de escamas escuras, ovaes estreitas, características; um pequeno grupo

de escamas branco-amarelladas inserido na parte basal da primeira nervura lon-

gitudinal ; primeira cellula submarginal mais comprida e ligeiramente mais es-

treita que a segunda posterior; peciolo da primeira cellula pouco menor que a

metade do comprimento da cellula ; peciolo da segunda cellula cerca de um terço

do comprimento da cellula.

Macho — Proboscida longa, negra, com anel branco pouco alem do meio:

ponta, com exclusão dos labellos, branca. Palpos longos não excedendo o com-

primento da proboscida, negros, com algumas escamas brancas na base; um largo

anel branco entre o primeiro e segundo articulos ; dois outros menores, da mesma

côr, respcctivamente, na base do terceiro c quarto articulos. Antennas mais

curtas que a proboscida, pardo-amarelladas e com plumas da mesma côr. Gypeo

negro, com raras escamas branca'. Occipicio c lobos prothoracicos como na

femea. Mesonoto pardo-acastanhado e com ornamentação mais ou menos idên-

tica á da femea. Abdome, pernas e aza< como na femea.

HyPopygio (Fig. 1) — Peça basilar quasi duas vezes mais longa que lar-

ga; lobo basilar pequeno, um tanto arredondado, supporta um espinho muito

mais longo que clle; um denso tufo de finas ccrdas collocado pouco acima

do lobo basilar. Pinça (clasper) larga, deprimida na base, angulosa c com

uma ponta portadora de um pequeno dente forte e terminal. Décimos ester-

nitos estreitos, fortemente chitinizados. tendo na extremidade seis dentes dis-

postos em ordem decrescente. Nonos tergitos acuminado3, encerram nove a

Alcides Prado — Culicldeos de São Paulo

195

dez cerdas. Mesosoma com dois pares de appendices: par interno chitinizado,

erecto, expandido na ponta; par externo também chitinizado, divergente e ligei-

mmente triangular.

Comprimento da femea e do macho: 5 mm.

Holotypo e allotypo, femea e macho, se acham na collecção do Instituto

Butantan, São Paulo.

Larva — desconhecida.

Alansonia (Rhynchotaenia) albicosta (Chagas, in PeryassÍ*. 1908)

(descripção do exemplar macho)

Tive occasião de encontrar numa caixa com insectos, no In?tituto Butantan,

um exemplar macho de Aíansonia albicosta. Apenas constava como referencia,

que o mesmo fôra capturado em Butantan, no anno de 1918. Exemplar mal

conservado, mas integro ; delle pude conseguir uma boa preparação do hypopygio,

conforme desenho junto, obtido do original, em camara clara. A seguir, passo

á descripção summaria do adulto em questão, com seu respectivo hypopygio,

risto não ter sido feita, ao que eu saiba, até esta data.

Macho — Proboscida moderada, negra, com um largo anel branco alem

do meio; ponta, sem os labellos branca. Palpos longos, excedendo cm com-

primento a proboscida, pardos, com poucas escamas brancas na base; um largo

anel branco entre o primeiro e segundo articulos ; aneis brancos menores, res-

pectivamente, na base dos dois últimos articulos. Occipicio negro, com escamas

brancas e curvas c outras negras c crectas. Mcsonoto pardo-escuro, com escamas

pallido-doiradas formando tres faixas, uma longitudinal mediana c duas pa-

mllelas lateraes; faixa mediana larga e as lateraes apenas constituídas por es-

camas mais ou menos esparsas. Abdome pardo-escuro, com leves manchas de

escamas brancas, nas partes latero-basaes dos segmentos; ventre com escamas

pardo-escuras e um pequeno grupo de escamas brancas na parte media dos

segmentos. Pernas negras; femores da mesma cór, com um estreito anel branco

subapicilar; tibias manchadas de branco, formando no par posterior, lado interno,

a ma linha da mesma cór; tarsos com aneis brancos envolvendo ambas as extre-

midades das juntas. Azas com escamas escuras, ovacs estreitas, características;

Primeira nervura longitudinal com uma fileira de escamas branco-amarelladas

todo o quarto basilar; primeira cellula submarginal mais comprida e ligeira-

mente mais estreita que a segunda posterior.

Hypopygio (Fig. 2) — Peça basilar mais ou menos longa e arredonda-

da no apice; lobo basilar curto, um tanto conico, supporta um espinho muito

mais longo que clle e apparentemente curvo. Pinça (clasper) grande, delgada

sua metade basilar e entumecida na outra, onde se notam raros pêlos; um

dente terminal alongado e forte. Décimos esternitos estreitos, chitinizados, com

196

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

cinco dentes divergentes na extremidade. Nonos tergitos acuminados, com cerca

de nove a dez cerdas. Mesosoma com dois pares de appendices: o interno cm

columna, erecto, expandido na ponta, onde também se observa uma serie de

denticulos; o externo, divergente, curto e curvo.

Lan>a — desconhecida.

RESUMO E COMMENTARIOS

Os exemplares que serviram para a descripção de M. albifcra, foram ca-

pturados em Butantan, durante o mês de março do corrente anno.

Essa especie é affim de Aíansonia albicosta (Chagas), distinguindo-se desta

ultima pelos caracteres especificos seguintes: côr geral das tibias, naquella —

pardo-escura, nesta — manchada de branco; coloração das azas: naquella — um

pequeno grupo de escamas branco-amarelladas na base da primeira nervura lon-

gitudinal, nesta — uma fileira de escamas da mesma côr, occupando mais ou

menos o quarto basilar da nervura.

Differe de AI. chrysonotum (Peryassú), considerada próxima de AI. ol-

bicosta, pela coloração do mesonoto. Em Aí. chrysonotum as escamas doiradas

do mesonoto formam tres largas faixas medianas e parallelas, unidas, que sc

extendem desde a parte anterior do mesonoto até pouco além do meio; na

metade posterior as escamas doiradas formam manchas em continuação ás faixa 4

anteriores ou adiante da raiz das azas; lateralmente e posteriormente escamas

escuras. Em Aí. albifcra as escamas pallido-doiradas da parte anterior do

mesonoto, apenas se dif fundem para os lados na parte mediana; pequenas estrias

de escamas da mesma côr nas partes lateraes e posteriores, alem de escamas

pardo-escuras lateraes.

Distingue-se de Aí. juxtamansonia (Chagas), pelo mesonoto que, nesta es-

pecie, é constituido por escamas pallido-doiradas distribuídas em estreitas linhas

longitudinaes ; pelas tibias que nesta espccie, ao contrario de albifcra, são man-

chadas de branco, com uma linha da mesma côr no lado interno do par posterior;

ainda pela coloração das azas que nesta especie é caracterizada pela presença

de escamas ovaes estreitas, brancas e pretas misturadas.

Finalmente, Aí. albifcra não poderá confundir-se com Aí. fasciolata (Lynch

Arrib.), pela ornamentação de mesonoto que é um pouco differente, como espe*

cialmente pela côr das tibias. Enquanto que as tibias de Aí. albifcra, cotn

cxcepção dos ápices, são pardo-escuras, as de Aí. fasciolata são salpicadas de

branco.

O hypopygio de albifcra tem caracteres firmes e typicos, o que dispensa

qualquer comparação.

Quanto á AI. albicosta, o macho desta especie parece muito idêntico á femea

respectiva, descripta por Chagas. O exemplar que serviu para a presente des-

cripção foi encontrado por mim em uma caixa com insectos, no Instituto Bu-

Alcides Prado — Culicideos de São Paulo

197

tantan, apenas constando ter sido o mesmo capturado no proprio Butantan. no

anno de 1918.

O hypopygio de albicosta parece também bastante característico, não se

confundindo com o de outras especies consideradas próximas e pertencentes ao

mesmo subgenero.

ABSTRACT

Mansonia albifcra Prado seems to be closest to M. albicosta (Chagas), J /.

chrysonotum (Peryassú), M. juxtamansonia (Chagas) and M. fasciolata ( Lynch

Arrib.), from all of which it can be easily separated by the hypopygium characters,

besides some other points discussed in the text.

Mansonia albicosta (Chagas) seemed to be known thus far only from the

female so that the male is described and its hypopygium represented for the

first time, showing this species to be easily distinguishable from all of those

included in the same subgenus.

BIBLIOGRAPHIA

1. TheobaU. F . í*. — A monograph of the Culicidae, III. 1903.

2. Bhnehard. R. — Les Moustiqucs. 190S.

3. Peryassú. A. — Os Culicideos do Brasil. Rio. 1908.

4 Peryassú. A. — Uma nova e^pecic dc Culicideo brasileiro — Folia Medica 111(15):

117.1922.

5. Becptaert. J. — Hamilton Rice Seventh Expedition to the Atiuzon, in conjunction

with the Dtp. of Trop. Med. a: Harvard University. 1924-1925.

6. Bonne & Bonne — Mos<j. of Surinara. Royal Col. Inst. of Amstcrdam. 1925.

7. Shannon. R. C. âr Del Ponte, E. — Los Culic. en la Argentina — Rev. Inst.

Bact. V( 1)^9.1927.

8. Dyar, H. G. — The Mosquitocs of the Américas. 1923.

9. Jf atheson. R. A. — A Handbook of the North America 1929.

10. Lima. A. da Costa — Sobre algumas especies de Mansonia encontradas no Brasil

— Mcm. Inst. Oswaldo Cruz XXII ^97. 1929.

11. Lima. A. da Costa — Sobre a revalidação do genero Tacniorhynchus — Mem. Inst

Oswaldo Cruz XXIII(2) :105. 1930.

12. Edxeards. F. II'. — Mosq. notes. X — BulL Entom. Rcs. XI(4) :54t.l931.

13. Marti <n. E.-Ueber einige suedameriltanische Culiciden — Rcr. de Entom. 1(2) :199.1931.

(Trabalho da Secçio de Protoioologla e Parasltologla

do Instituto Dutanlan, agosto de 1931).

Alcides Prato — Culicideos de São Paulo

Mrm. In»l. Hnlant.m

Vol. VI, 1931

rir. i

Hypo;»jrgio dr M. albifrra Pra.lo

ri«. J

HjP*>p>gio dr M. albiraala «Chlga»

593.771

CONTRIBUIÇÕES AO

CONHECIMENTO DOS CULICIDEOS DE SÃO PAULO

II. Notas sobre as especles encontradas nos arredores da capital

e sobre a determinação de Aêdes crinifer (Tiieob.)

por

ALCIDES PRADO

A partir do verão do anno passado, iniciei uma serie de pesquisas para o

estudo das especies de mosquitos existentes nos arredores de São Paulo. Estendi

esses trabalhos aos bairros do Jardim America, Jardim Europa, Itahim, Cidade

Jardim, Varzca do Ticté, Casa Verde, Pinheiros e Butantan. Si mais dilatada

fo^se a arca percorrida c mais {requentes essas pesquisas, certamente a lista de

Culicideos, que ora apresento, estaria grandemente augmentada. Entretanto, quer

de exemplares obtidos de larvas, quer dos obtidos por meio de capturas, as

especies discriminadas são, em sua maioria, interessantes c raras, razão pela quai

não me arrependo do tempo gasto neste mister.

Vários entomologos tem-se occupado da distribuição dos mosquitos cm São

Paulo, a começar por Lutz, que apresenta valiosa contribuição, conforme se 1c

«n Pcryassú. As larvas, grandes de preferencia, trazidas ao laboratorio, foram

separadas por mim, em boccaes de vidro, contendo geralmente agia do proprio

fóco. Depois da primeira metamorphose as exuvias respectivas eram montadas;

algumas vezes o mesmo se fazia cm relação ás exuvias nymphaes. Após a emer-

gencia dos adultos, eram elles fixados em alfinetes entomologicos, debaixo para

rima. entre os pares de patas e em seguida collocados em vidros apropriados,

numerados e fichados. Os hypopygios, da mesma forma, foram conveniente-

mente preparados e colleecionados.

Adoptando tal critério, pude determinar as seguintes especies de mosquitos

cm São Paulo :

Dos mosquitos domcstkos, nas aguas estagnadas impuras, em valias e vallc-

tas, depressões de terreno, recipientes diversos, as larvas mais communs eram

200

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

as de Culex ( Culex ) quinqucfasciatus Say e Culex ( Culex ) coronator Dyar &

Knab; em aguas da mesma natureza, somente em um ou outro fóco, em zona

povoada, me foi dada occasião de encontrar o Aêdes ( Stegomyia ) acgypti

(Linnaeus). Influencias sazonaes e outras, elevam de muito pouco o numero

dos fócos dos mosquitos dessa ultima especie em Sãc Paulo. Antes mesmo da

organização actual do serviço de policia de fócos, notára que mesmo em bairros

de população densa, em pleno verão, o indice estegomico não excedia nunca de

2 %, na capital.

Adultos das duas primeiras especies citadas, em certos bairros, predomi-

naram sempre dentro das habitações, sendo conhecidas como as mais importunas.

Especies silvestres, algumas das quaes também importunas, predominaram

nos bairros ou arcas afastadas da cidade. As larvas desses mosquitos abun-

daram nas aguas temporárias das depressões de terreno, agias de fonte, charcos

com vegetação aquatica: Uranotaenia geomctríca (Theobald). Uranotaenia pul-

chcmma Lynch Arribalzaga, este ultimo assignalado num fóco da Cidade Jardim,

nas proximidades do rio Pinheiros; Lutxia bigoti (Bellardi) e Lu teia brasilia e

Dyar, ambos igualmente communs em São Paulo: Psorophora ( Psorophora )

cilipcs (Fabricius), Psorophora ( Psorophora ) ciliata (Fabricius), Psorophora

( Janthinosoma ) discrucians (Walker), Psorophora ( Janlhinosoma ) ferox (Hum-

boldt ) .Psorophora ( Janthinosoma ) lutzii (Theobald), Psorophora (Janlhinosoma)

eyantscens (Coquillett), sendo alguns adultos dessas especies capturados no horto

c na mata em Butantan; Aêdes ( Ochlerotatus ) serrams (Theobald), Aêdes

( Ochlerolatus ) scapularis (Rondani ), Aêdes ( Ochlerotatus ) erinifer (Theobald).

especies quasi sempre obt : das em fócos temporários (aguas de chuva), muito

dis«eminadas; Mansonia ( Mansonia ) amazonensis (Theobald), Mansonia (Man-

sonia) tilillans (Walker), Mansonia ( Mansonia ) pseudotitillar.s (Theobald),

Mansonia ( Rhynehotacnia ) juxtamansnnia (Chairas). Mansonia ( Rhynchotut -

«ia) fasciolata (Lynch Arribalzaga), Mansonia ( Rhynehotacnia ) albifera Prado,

adultos quasi sempre capturados ao anoitecer, na parte exterior telada das ja-

nelas, em casas de empregados em Butantan. Obtive innumeros exemplares

de algumas das citadas especies, cspecialmentc nos meses de abril c maio deste

anno, após as grandes chuvas do verão. Acredito que esses mosquitos sejam

provenientes dos grandes charcos marginaes ao rio Pinheiros, onde existe uma

vegetação aquatica mu to rica. Entre os anophelineos citarei as seguintes es-

pecies: Anophcles ( Nyssorhynchus ) argyritarsis Robineau-Desvoidy, Anophe-

les (Nyssorhynchus) tarsimaculatus Goeldi, Anophcles ( Nyssorhynchus ) albi-

tarsis (Lynch Arribalzaga), Anophcles ( Nyssorhynchus ) cransi (Brethés), Ano-

phcles ( Anophcles ) maculipcs (Theobald), sendo das mais frequentes a especic

A. evansi. Chagasia fajurdoi (Lutz) existe na mata em Butantan, onde f 01

capturada no outomno. Das especies bromelicolas, quasi todas obtidas de

larvas colhidas em bromelias, na mata, em Butantan, mencionarei : 1 1’yeoinyia

(IV ycomyia) longirostris Theobald, U'yeomyia (Dyartna) tripartita Bonne-

Alcides Prado — Culicideos de São Paulo

201

Wepster & Bonne, Myamyia ( Cleobonnea ) negrcnsis (Gordon & Evans),

Afegarhinus ( Ankylorhynchus ) trichopygus (Wiedmann), Isostomyia paranensis

(Brethés), Sabcthes remipusculus Dy ar e Culcx (Síicroculcx) imitalor Theobald.

.As larvas das especies bromdicolas, geralmente vivem longo tempo no

laboratorio, em agua do proprio fóco, não renovada. Nessas condições difficil-

mente morrem. Sua meíamorphose se dá lentamente, mesmo com farta alimen-

tação e temperatura favoravel.

DepoÍ3 da determinação que acabo de fazer das especies de mosquitos dos

arredores da capital e de estudar certos factos relativos á biologia de algumas

das especies enumeradas, quero referir-me ás especies de Acdcs mais frequentes

cm São Paulo e das mais importantes sob o ponto de vista epidemiologico: A.

scapularis, A. serratus e A. crinifcr. Martini, em um dos seus últimos tra-

balhos, estuda o A. scapularis e o A. serratus, acompanhados de desenhos

dos respectivos hypopygios, não deixa duvida quanto á sua identificação, porém

nada referindo sobre A. crinifer, cuja determinação, a não ser pelos caracteres

geraes do adulto, ainda me parece um tanto confusa c incerta. Para estudar

com pa ra t i va me n te as tres especies, começo por reproduzir adiante a microphoto-

graphia do hypopygio de A. serratus (Fig. 3), perfeitamente individualizada

por Dy ar e Martini. A seguir, a microphotographia do hypopygio de A. scapu-

iarij (Fig. 4). cujo desenho no trabalho de Martini é perfeito, mas que na

ntonographia de Dyar presumo não o seja. As microphotographias que se seguem

são do hypopygio de A. crinifer (Fig. 5) e larva da mesma cspecic (Fig.

b). Tenho a impressão de que, na monographia de Dyar, o desenho do

hypopygio de A. crinifer deve pertencer a A. scapularis. A especic A. crinifer

descripta por Theobald em 1903, de dois exemplares que lhe foram enviados

de São Paulo, por Lutz, c facilmente reconhecível pela sua ornamentação thora-

eica. Quanto á larva, creio apenas existir uma mxrophotographia, essa devida

a Peryassú e estampada em seu livro, em 1908. Dessa maneira pelos caracteres

do hypopygio e da larva me foi difficil determinar os primeiros exemplares

da referida especie.

Faço, em seguida, um resumo dos caracteres específicos de A. crinifer, ba-

seado em varias preparações montadas do hypopygio c lana.

Hypopygio de A. crinifer — Peça lateral longa c estreita, levemente arre-

dondada no apice ; lobo apicilar redondo, saliente, continuando em baixo ate formar

o lobo basilar, igualmente saliente, acuminado e com pequenas cerdas inseridas sobre

grandes tubérculos; uma grande c espessa espinha adjacente. Pinccta (claspette),

com uma longa haste levemente incurvada e entumecida na ponta; filamento

longo, dobrado em angulo ao meio, para terminar em ponta, tendo um entalhe

inferior muito pronunciado, onde se notam alguns dentes recurvados. Pinça

(clasper) longa, afilada na extremidade c com espinho alongado e fino. Décimos

estemitos moderados, fortemente chitinizados e espessos na ponta, onde, em

cada um, ha um dente apparentemente voltado para os lados. Nonos tergitos

202

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

pequenos, quadrados, com quatro espinhos. Mesosoma cylindro-conico e com

uma pequena abertura no apice.

Lan\i dc .4. crinifcr — Cabeça arredondada e enfunada dos lados, cerdas

superiores da cabeça múltiplas, em numero de cinco; cerdas inferiores tam-

bém múltiplas, em numero de tres. Tufo ante-antennai múltiplo. Anten-

na moderada, delgada, com um pequeno tufo antes do meio. Pente lateral

do oitavo segmento, com numerosas escamas, em mancha triangular e em nu-

mero de vinte e duas ou mais; algumas dessas escamas apresentam ponta es-

pessa, aguda; outras com pontas rectas ou ligeiramente curvas, ornadas todas

de espinhas lateraes muito delicadas. Tubo aereo (syphão respiratório) curto

e duas vezes mais comprido que largo; pente excedendo o meio do tubo e

seguido de um tufo múltiplo; dorsalmente, com tres pares de tufos, de cada

lado. Segmento anal cercado por uma placa chitinosa e com uma escova

ventral posterior. Tufo dorsal acompanhado de uma longa cerda de cada lado;

cerda lateral simples, pequena. Branchias anaes muito longas, levemente sinuosas,

finas e pontudas.

RESUMO

Iniciando, a partir do verão do anno passado, uma serie de pesquisas para

o estudo dos mosquitos dos arredores de São Paulo, pude determinar a presença

dc vários culicideos, alguns dos quaes interessantes e raros.

Depois de estudar ligeiramente factos relativos á biologia de algumas das

espedes citadas, quiz referir-me á determinação de Aidcs scafularis, A. scmUus

e A. crinifcr, muito disseminadas e importantes, sob o ponto de vista epidenrio-

logico.

Quanto a A. crinifcr, cuja determinação pelos caracteres específicos do

macho e larva me parece ainda um tanto confusa e incerta, procurei esclareci-

mentos nas preparações montadas do hypopygio e exuvia larval desta especie-

ABSTRACT

In the course of a revisionary study of the mosquitoe3 found in the suburbs

o í São Paulo severa! specimens of Culicidae were encountered some of which

proved to bc cspecially interesting. Besides many other species the biology of

which is discussed in the text, Aidcs scapularis, A. serratus and A. crinifcr were

particularly scrutinized due to their epidemiological importance.

A. crinifcr, the status of which seemed to be in a rather confusing and

uncertain condition, was closely investigated in the light of its hypopygial and

larval characters which leave no doubt as to its validity.

BIBLIOGRAPHIA

1. TheobaU. F. I . — A monograph of the Culicidae, III. 1903.

2. Peryassv. A. G. — Os Culicideos do Brasil. Rio, 1908.

3. BcHHt, C. & Bonne-Wefslcr — Mosquitoes of Surinam. 1925.

4. Dyar, H. G. — The Mosquitoes of thc Américas. 1923.

5. Pinio. C. — Mosquitos da região neotropica — Mem. Inst. Oswaldo Crui, XXIII(3):

153.1930.

6. Shannon, R. C. — Relatorio de uma inspecção de mosquitos na cidade de Borafim.

Bahia. Saneamento. 8(11)1930.

7. Shannon, R. C. — Relatorio de uma rapida investigação de mosquitos cm Recife.

Saneamento. 8(12). 1930.

8. Marúni, /:. — L'cber einigc síklameriVanische Culiciden. Rcv. de Entom. 1(2) :199.1931

(Trabalho da Srcçâo de Protoioologla e TaraiItolo«le

do Inatltulo de Dutantan. outubro de 1331).

Alcides Prado — Cidicideos de São Paulo

Mrni. Inst. Bulantan

VoL VI, 1931

FIs. S

Hypopyjti» de A. »c rralní

Fi*. I

Itypopyjdo dr A. ícapulirli

Ti». «

L.U'a Jc A- crinitar

Ff*. 7

Lirvi Uc A. crinlfrr

5S5.771

CONTRIBUIÇÕES AO

CONHECIMENTO DOS CULICIDEOS DE SÃO PAULO

III. Notas sobre Psorophora (Janthinosoma) d/scrucíans

(Walker) e descripção do exemplar macho.

POR

ALCIDES PRADO

No decurso do mês de dezembro ultimo, pude, com o auxilio dos srs. Arnaldo

França e Edison A. Dias, capturar, em Butantan, numerosos adultos da especie

cujo nome encima estas notas. Durante dias consecutivos, em capturas diurnas

e nocturnas, collcctaram-sc algumas dezenas de mosquitos dessa especie, com a

presença apenas de um macho, que serviu de base para esta dcscripção.

Até á presente data, parcce-me não ter sido descripto o macho de Ps.

discrucians, segundo bibliographia que consultei, restando, porém, desconhecida

a larva respectiva.

Psorophora (Janthinosoma) discnicians (Walker)

Macho — Proboscida delgada, negra, com reflexos purpurinos. Palpos mais

longos que a proboscida, negros, com reflexos egualmcnte purpurinos e com a

extremidade voltada para cima; porção apicilar do penúltimo e ultimo articulos

com pêlos innumcros. Antcnnas escuras, longo-plumosas. Toros negros, brilhan-

tes e inteiramente nús. Oecipicio todo revestido de escamas amarello-acobreadas.

Mesonoto negro, brilhante, com escamas curvas pardo-bronzeada.', ao meio; es-

camas fusiformes, amarello-doiradas lateralmente. Escutello negro, brilhante e

com algumas escamas fusiformes amarello-doiradas; algumas ccrdas apenas sobre

os lobos. Pleuras e coxas com escamas amarello-esbranquiçadas. Abdome es-

curo, purpurino, com manchas branco-amarelladas na parte lateral dos segmen-

tos ; ventre da mesma côr, com os auices de todos os segmentos branco-amarellados.

206

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Pernas escuras, com brilho purpurino; femores com raras escamas branco-cinzas

na ponta; quarto articulo tarsal do par posterior branco nos seus 2/3 basilares.

Azas ennegrecidas, com escamas estreitas e escuras; primeira cellula sub-

marginal pouco mais comprida, porem muito mais estreita que a segunda poste-

rior ; peciolo da primeira cellula pouco mais da metade do comprimento da cellu-

la; nervura transversal media muito próxima da nervura transversal posterior.

Hypopygio (Est., fig. 1) — Pega lateral mais ou menos cylindrica, com a

junta truncada, pilosa. Pinceta (claspette) delgada, fortemente curva com uma

expansão sub-apicilar em sua face interna, constituida por cerca de nove cerdas

rectilineas; ponta com tres visiveis appendices: um externo, espesso e curvo e

dois internos, sendo o primeiro anelado e membranoso e o segundo em forma de

íoliolo. Pinça (clasper) entumecido, estreito na base e no apice, terminando

com um espinho alongado. Décimos esternitos fortemente chitinizados, estreitos;

ponta espessa onde se contam cerca de quatro denticulos. Nonos tergitos re-

duzidos. Mesosoma cylindrico, ligeiramente estreito, exteriormente.

O hypopygio differe pouco de ferox, lutzii e champerico, assignalados os

tres na monographia de Dyar, 1928.

Comprimento — 6mm.50.

Larva — desconhecida.

RESUMO E COMMENTARIOS

Neste trabalho limito-me a descrever o macho de Ps. discrucians, capturado

em Butantan. A descripção que ora faço do adulto é summaria, pois clle apre-

senta o colorido geral da femea já descripta. Dif fercncia-se de Psorophoro

varipes (Coquillett), espccic norte-americana, por não possuir de cõr branco-

prateada as pontas dos femores posteriores. Pelo exame do hypopygio esta

difíerença com Ps. varipes è ainda mais evidente.

O hypopygio de Ps. discrucians, ao meu ver, differe de ferox, lutzii e cham-

perico apenas pelos appendices da ponta da pinceta. Em Ps. discrucians são

tres os appendices: um externo, espesso e curvo e dois internos, sendo um ane-

lado e membranoso e outro em forma de foüolo; em Ps. ferox. Ps. lutzii e P s -

champerico, segundo os desenhos publicados por Dyar, são apenas dois esses

appendices : um externo, espesso e curvo e outro interno anelado c membranoso-

ABSTRACT

A male spedmen of Psorophora discrucians, captured at Butantan, **

described and its hypopygium represented in the text so as to show its dif fer-

entation from Ps. varipes, lutzii and champerico.

Blanchard,

Throbald.

Prryasiú,

Dyar , II.

BIBLIOGRAPHIA

, R. — Les rooustkjucs : 232-253. 1905.

F. V. — A monograph of the Cullcklac V :121 . 1911.

A. G. — Folha Medica IV:70.1923.

G. — The mosq. of the Américas: 120.1928.

(Trabalho da Secção de Protoroologla e l*ara»itolo*ta

do Instituto Rutantan, dnembro de 1931).

595.771

CONTRIBUIÇÕES AO

CONHECIMENTO DOS CULICIDEOS DE SÃO PAULO

IV. Uma nova especie de Uranotaenia (Diptera, Culicidae)

POR

ALCIDES PRADO

Em julho deste anno, quando muito reduzida era a densidade dos mosquitos

adultos, pude, auxiliado pelo sr. Domingos Yered, capturar nas matas de Bu-

tantan, alguns exemplares de Chagasia fajardoi (Lutz) e uma femea e dois

machos de uma especie nova de Uranotaenia, cuja descripção constitue o objceto

deste estudo. Xo mesmo local, cm differentes estações do anno, reuni interes-

santes especimes da fauna culicidica, inclusive Aêdes, que tem grande impor-

tância epidcmiologica na febre amarclla.

Dessa forma, com material proveniente cm grande parte dos arredores desta

capital, consegui iniciar o trabalho de reorganização da collecção cntomologica

do Instituto.

Uranotaenia ditaenionota, sp. n.

Femea — Proboscida longa, pardo-escura; ponta entumecida da mesma

cõr. Palpos curtos, inteiramente pardo-escuros. Antennas pilosas, pardas ;

toros pardo-amarellados, nús. Clypeo pardo-escuro, glabro. Occipicio revesti-

do de escamas chatas, negras; outras crcctas c bifurcadas da mesma cõr, espar-

sas; larga faixa de escamas chatas, pallido-azuladas, delimitando os olhos, do

vertice adiante, e, de cada lado, seguindo cm direcção aos lobos prothoracicos.

Lobos prothoracicos pouco salientes, pardo-escuros, com uma mancha consti-

tuída de escamas pallido-azuladas. Mesonoto pardo-escuro e com escamas es-

treitas, delgadas, quasi rectas, levemente acobreadas e disseminadas; larga faixa

de escamas chatas, pallido-azuladas, desde o angulo anterior á base da aza. cm

ambos os lados; pleuras pardo-amarelladas ; cada uma com nitida separação

210

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

pardo-escura, apparecendo, ao centro, uma mancha de escamas chatas, pallido-

azuladas. Escutei lo visivelmente trilobado, pardo- amarellado, brilhante, cpnl

escamas chatas da mesma côr, especialmente sobre o lobo medio e com tres

ccrdas marginaes sobre cada um dos lobos. Metanoto pardo-escuro e comple-

tamente nú. Ralancins pardo-escuros, com os capítulos de tonalidade mais

carregada do que os pedúnculos respectivos. Abdome quasi negro e com brilho

metallico, devido ao seu revestimento de escamas chatas e negras, com excepção

da base de todos os segmentos, esta com uma larga faixa de escamas chatas e de

côr branco-perola ; ventre pardo-amarellado e sensivelmente mais claro que o

dorso. Pernas negras, de brilho metallico; coxas e trochanteres amarello-palli-

dos; parte inferior dos femores amarelio-desmaiado ; par posterior com a metade

apicilar do 3.°, todo o 4.® e 5.® artículos inteiramente brancos; juntas articulares

branco-pallidas. Unhas eguaes, delgadas e simples. Azas membranosas, sem

villosidades, com escamas lanceoladas longas, pardo-claras, em toda a porção

apicilar da 1.*, 2.® e 4.® nervura longitudinaes c ao longo da 3.*: escamas espatu-

ladas curtas, escuras, em toda porção basilar da 1.®, 2.*, e 4.® nervuras longitu-

dinaes e ao longo das demais nervuras; 1.® cellula submarginal pouco menor c

mais estreita do que a 2.® posterior; peciolo da 1.® cellula quasi duas vezes mais

comprido do que a cellula; peciolo da 2.® cellula uma e meia vez mais comprido

do que a cellula; nervura transversal supranumerária formando com a transver-

sal media um angulo obtuso; nervura transversal posterior distante da trans-

versal media duas vezes seu comprimento; nervura anal não ultrapassando a for-

quilha do cubito.

Macho — Proboscida longa, pardo-escura; ponta entumecida da me-ma côr.

Palpos muito curtos, inteiramente pardo-escuros. Antennas plumosas, pardas;

toros pardo-amarellados, nús. Gypeo pardo-escuro, nú. Occipicio revestido

de escamas chatas negras; outras ercctas e bifurcadas da mesma côr, esparsas;

larga faixa de escamas chatas, pallido-azuladas, delimitando os olhos, do vertice

adiante, e. de cada lado, seguindo em direcção aos lobos prothoracicos. Lobos

prothoracicos pouco salientes, pardo-escuros, com uma mancha formada de esca-

mas pallido-azuladas. Mcsonoto pardo-escuro c com ornamentação idêntica a

da femea. Abdome, pernas c azas como na íemea.

Hyf>of>ygio — Peça lateral curta e um tanto cônica; lado basilar projectado

lateralmentc, acuminado e com a inserção de algumas cerdas longas. Pinça

(clasper) forte, exeavada na ponta e com um espinho curvo, terminal. Ramo

divergente longo, espesso e denticulado. Mesosoma com suas placas lateraes se-

paradas ; par interno (cada placa elevada em columna espessa) tendo a formação

de tres dentes muito curvos para o lado de fóra; par externo (cada placa pouco

elevada) tendo dois dentes cm forma de bico de passaro, igualmente voltados

para o lado de fóra (Est., fig. 2).

Comprimento da femea e do macho: 4 mm.

Larva — Desconhecida.

Alcides Prado — CtdiciJeos de São Paulo

211

Holotypo e allotypo, femea e macho, montados e conservados em vidros,

respectivamente, sob os n°». 175 e 176, na collecção do Instituto Butantan, São

Paulo. Paratypo, macho, conservado em vidro, sob o n.° 177 e o hypopygio

montado do allotypo, em lamina, sob n. 176, na mesma collerção.

COMMENTARIOS

Pela configuração exterior do adulto, Uranotaenia ditaenionota, n. sp. parece

affim de Uranotaenia lozvii Theobald e de Uranotaenia calosomata Dy ar &

Knab, ambas encontradas no Brasil. Embora o revestimento externo de Urano-

taenia Icnvii seja mais ou menos semelhante ao de Uranotaenia ditaenionota, ha

a distingu : l-a o colorido do mesonoto. O mesonoto de Uranotaenia lown é

pardo-acastanhado, brilhante, com uma lista negra central ; uma mancha da mesma

cõr adiante da base da ara, com um centro de escamas chatas, azul-prateadas.

em ambos os lados. O mesonoto de Uranotaenia ditaenionota é, entretanto,

pardo-escuro, com escamas estreitas, delgadas, quasi rectas, levemente acobreadas

e disseminadas; larga faixa de escamas chatas, pallido-azulada-, vae desde o

angulo anterior do mesonoto á base da aza, em aml>os os lados.

Uranotaenia calosomata, alem de outros caracteres diífcrenciacs específicos,

tem seu mesonoto pardo-escuro, com uma estreita linha dc escamas chatas c

brancas, que vae desde o angulo anterior á base da aza, cm ambos os lados, o

que certamente diverge, pelo colorido, de Uranotaenia ditaenionota. Ainda, o

abdome de Uranotaenia calosomata que c negro, apresenta uma larga faixa apici-

lar de escamas chatas, branco-amarclhdas, em toslos os segmentos, enquanto cm

Uranotaenia ditaenionota ha uma larga faixa basilar de escamas chatas e dc côr

branco-pcrola, cm todos os segmentos. Os caracteres específicos do hypopygio

de Uranotaenia ditaenionota são de tal forma evidentes, que dispensam confronto

com os existentes nas espccics próximas, citadas.

RESUMO

Neste trabalho, utilizando-mc de exemplares dos dois sexos, descrevo uma

espccie nova dc Uranotaenia, capturada nas matas de Butantan. durante o mês

de julho do corrente anno, conjunctamente com alguns exemplares de Chagasia

fajardoi (Lutz).

Uranotaenia ditaenionota, sp. n., affim de Uranotaenia tmini Theobald e de

Uranotaenia calosomata Dyar & Knab, ambas encontradas no Brasil, difíerc

destas ultimas, pelo revestimento exterior do adulto, como também pelos caracte-

res específicos do hypopygio.

\l.ClDKS PRADO

Cuhcidcos tlc Sâo Paulo

Mrm. In*l. fUilantan

\ol. VI, 1931

llyPWglo <Jc L ranotar nia ditarni.n.ta. » p

SciELO

Hypopynlo <Ir p. dUrraciana (Walker)

PESQUISAS SOBRE TRYPANOSOMAS

POR

J. 13. ARANTES E FLAVIO da FONSECA

393.16:616 961

PESQUISAS SOBRE TRYPANOSOMAS

I. Trypanosoma butantanense, sp. n., parasita da serpente

Ophis merremii Wagler, 1824

POR

J. B. ARANTES e FLAVIO da FONSECA

Entre muitas dezenas de exemplares de Ophis merremii Wagler, 1824, de

proveniência diversa, cujo sangue peripherico foi examinado, tivemos opportu-

nidade de encontrar em alguns duas es peei es diversas de Trypanosoma.

Uma das especies, Trypanosoma merremii, constituc objccto de uma outra

nota. No presente trabalho occupar-nos-cmos do Trypanosoma butantanense, sp.

n., o qual foi objccto de estudo mais acurado, aliás ainda cm andamento.

Trypanosoma butantanense, encontrado por 4 vezes cm infecção natural e

pura, differe totalmentc da outra especic de Trypanosoma que oceorre cm

Ophis merremii, pois trata-se aqui de uma especic menor, dotada fie grande poly-

morphismo, multiphcando-sc activamcnte no sangue peripherico, onde é encon-

trado cm grande abundancia em infecção natural c em numero ainda maior em

certos casos de infecção experimental, onde o seu numero chega a ser superior ao

de globulos vermelhos (Est. II, fig. 18, photographia de preparado obtido de ser-

pente viva), divergindo ainda pela enorme mobilidade de que é dotado. Esses ca-

racteres difíerenciaes, alem de outros de menor importância, bem como o facto

de serem os dois Trypanosomas encontrados cm estado de pureza, serviram de

base á distineçáo que estabelecemos, embora occorram na mesma espede de ophidio.

MORPHOLOOIA

Exame a fresco — Trypanosoma butantanense apresenta grande mobilida-

de, quando visto 3 fresco, sendo mais moveis as formas do typo 1. Alem do mo-

vimento de propulsão observa-se também, nas formas longas, movimento retro-

grado, quando encontrado algum obstáculo.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

216

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Também se observam a fresco formas de reproducção, assistindo-se com

frequência os esforços levados a ef feito para terminar a separação dos elemen-

tos em phase final de divisão.

Exame após coloração — O estudo comparado das 4 amostras desta espe-

cie de Trypanosouxa, feito em laminas de sangue obtido, quer dos exemplares

naturalmente infectados, quer de outros ophidios inoculados, permitte distin-

guir um certo numero de typos, dos quaes nos oc cu paremos separadamente.

A distineção destes typos foi baseada apenas cm exemplares adultos, i. é,

apresentando já a morphologia perfeita dos representantes do genero, não sendo

tomada em consideração a morphologia variada de exemplares em phase de

divisão ou em phases atrazadas de desenvolvimento, como a phase de crithidia,

leptomonas e outras, que também são observadas no sangue peripherico de

cobras vivas. E’ possível que os tres typos morphologicamente distinctos que

descrevemos constituam algumas phases de evolução do typo mais adiantado.

TYPO I

ESTAMPA I

Neste typo foram incluídas as formas apparentemente mais adiantadas, ca-

racterizadas pelo maior comprimento do corpo, que se apresenta naturalmente

alongado, perdendo em largura o que ganha em comprimento, com núcleo peque-

no muito mais proximo da extremidade anterior do que da posterior, cineto-

plasta muito volumoso, occu pando toda a largura do Trypanosoma e também

muito afastado da extremidade posterior; a porção posterior ao cinetoplasta

apresenta-se espiralada. O corpo apresenta numerosas granulações azuladas em

toda a porção situada adiante do cinetoplasta. A coloração é violeta pallida. O

núcleo é avermelhado c o cinetoplasta vermelho carregado. A membrana nitida.

muito estreita, e pouco sinuosa acompanha um dos bordos do corpo desde o cine-

toplasta até a extremidade anterior (fig. 1).

Foram medidos 3 exemplares:

DIMENSÕES

» *

Mrdia

Máxima

Min ima

Comprimento total excluído o flagello

45.9

48.5

44.6

Largura ao nivcl do núcleo

2.4

245

2.1

Distancia do cinetoplasta á extremidade posterior . .

17.5

( Comprimento

Nucle ° I Largura

2.4

2.6

1.0

2.1

1.0

i Comprimento

Cmetoplasta J, jrgura

0.4

Flagcllo livre

8.1

8.75

7.0

Arantks e Fonseca — Pesquisas sobre trypanosomas

211

TYPO II

A este typo correspondem os exemplares adultos de tamanho medio, dif fe-

rindo dos do typo I não só por esse caracter, como também pela largura maior

do corpo ao nivel do núcleo, pelo menor comprimento relativo da zona posterior

ao cinetoplasta, que é espiralada, presença de grande numero de granulações

nessa porção do corpo, menor comprimento do flagello livre e dimensões rela-

tivamente maiores do cinetoplasta, maior largura do núcleo e situação mais

central do núcleo em relação ao comprimento do flagellado (Fig. 2).

DIMENSÕES

As medidas de 3 exemplares deram os seguintes resultados:

Comprimento total excluído o flagello ....

Largura ao nivel do núcleo

Distancia do cinetoplasta á extremidade posterior

Comprimento

Largura

Nocleo

f Comprimento

Cinetoplasta .

Flagello livre

Mrdu

Masima

3/im'ma

21,9

23.1

20.5

245

2.6

7.8

8 7

7.0

2,6

2.6

1.7

0.4

6,6

7.8

TYPO III

O typo que nos occupa c representado por exemplares ainda menores do que

os precedentes e, proporcionalmente ao tamanho, ainda mais largos. Um dos

aspectos mais característicos desse typo é a proximidade do cinetoplasta do

núcleo. As dimensões do núcleo e do cinetoplasta não variando sensivelmente

nos differentes typos, succede que também aqui, cm relação ás dimensões do

corpo, se apresentam estes elementos maiores. Também o flagello é longo, rcla-

tivamente ás dimensões do Trypanosoma. O protoplasma parece ser mais pobre

em granulações do que o das formas restantes.

O protoplasma cora-se cm violeta mais pallido do que os do typo I e o

núcleo em tom vermelho habitual, sendo o cinetoplasta vermelho mais vivo

(Fig. 3).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

21S Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

DIMENSÕES

Comprimento total excluído o flagello ....

Largura ao nível do núcleo

Distancia do cinetoplasta á extremidade posterior

( Comprimento

Núcleo ; .

) Largura

! Comprimento

Largura

Flagello livre

Medio

Maxima

Mínimo

137

15 2

12.6

2.6

2.1

1,8

2.1

0.4

6.4

7.0

6.1

Formas de reproducção

No Trypanosoma butantancnse uma das verificações mais interessantes é o

numero extraordinário das formas de reproducção que occorrem no sangue pe-

ripherico. Assumem estas formas os aspectos mais variados, indo desde a forma

arredondada da Lcishmcnia (Fig. 4), até a forma perfeita do Trypanoso-

ma, passando pelas formas intermediarias de Leptomonas e Crithidia

(Figs. 5 e 6). A impressão que se tem á primeira vista é a de estar examinando

uma cultura e não uma lamina de sangue. Chamamos muito a attenção para o

facto de tratar-se de sangue retirado de serpentes vivas e não (como se poderia

suppor, devido á apparição de formas de Lcishmania, Leptomonas e Crithidia)

de sangue retirado para exame após a morte do animal, quando o trypanosoma

se comportaria como meio de cultura artificial, apresentando então as formas de-

nunciadoras de sua derivação phylogenetica.

A reproducção no sangue peripherico effectua-se quasi sempre pela forma

binaria, predominando, porem, as formas anômalas, nas quaes os resultantes de

divisão são desiguaes (Figs. 7 e 8). Por excepção, divisão múltipla em

tres e quatro, neste caso divisão múltipla do cinetoplasta ou do núcleo em pri-

meiro logar c posteriormente separação do protoplasma (Figs. 9 e 10).

Alem desta frequente anomalia, observa-se também o facto, em contradicção

com a morphologia geral dos Trypanosomas, de preceder muitas vezes a divisão

do núcleo á do cinetoplasta, vendo-se frequentemente o núcleo perfeitamente

dividido e já afastados os dois núcleos filhos, ao passo que o cinetoplasta apenas

teve sua divisão esboçada (Figs. 11, 12, 13 e 14).

As formas que mais frequentemente são vistas cm reproducção são formas

cujo cinetoplasta se encontra na mesma altura do núcleo, parecendo formas em

transição entre Crithidia e Trypanosoma. Os resultantes dessa divisão são dois

Arantes e Fonseca — Pesquisas sobre trupanosomas

219

elementos, um dos quaes é uma Crithidia, sendo o outro ura Trypanosoma

(fig. 8).

Seguem-se por ordem de frequência, entre as formas vistas em divisão, as

que se acham em phase de Crithidia (fig. 7), vindo depois os verdadeiros

Trypanosomata (fig. 8) aos quaes se seguem as Leptomonas (fig. 6) e fi-

nalmente a de Leishmania (fig. 5).

Além das citadas, são ainda vistas muitas outras fôrmas, quer representando

variantes de um dos typos descriptos, quer fôrmas anômalas que não se enqua-

dram nestes typos (figs. 15-20).

ESTAMPA II

Coloração pelo methodo de Rosenbusch — Pelo methodo de coloração de

Rosenbusch. observa-se, nos exemplares dos 3 typos descriptos, que o cineto-

plasta apresenta forma mais linear do que a dos preparados corados pelo metho-

do de Giemsa: o núcleo em repouso tem zona de sueco nuclear mais rica e um

caryosoma bastante volumoso, central e redondo (figs. 1, 2, 3), sendo fre-

quente ver-se um vacuolo na metade posterior do parasita.

As figuras 4, 5, 6 e 7 representam, rcspcctivamente, formas dc leishmania,

leptomoi.»: c crithidia.

As figuras 8 e 9 mostram formas de divisão dando resultantes de tamanho

desigual, sendo que na fig. 8 está representada uma phase mais atrazada de

divisão, na qual os dois caryosomas filhos ainda se apresentam ligados pela

centrodcsmose c a fig. 9 uma phase terminal do processo.

O facto, assignalado paginas atrás, de terminar-se a divisão nuclear antes

da do cinetoplasta, é confirmado também pelo exame dc preparados corados pela

hematoxylina, como se verifica nas figs. 10, 11, 12.

Foi-nos igualmcntc dado observar, em preparados fixados a húmido, formas

dc reproducção em que um dos resultantes é um trypanosoma, ao passo que o

outro está ainda cm phase dc crithidia (figs 9, 13, 14).

As figs. 15, 16. 17 representam formas anômalas coradas pelo methodo

de Rosenbusch.

BIOLOGIA

Inoculações experimentaes

Trypanosoma butantanense é facilmente inoculavel, tendo sido obtidos ino-

culações positivas, quer com sangue, quer com culturas nas seguintes espccies de

ophidios: Ophis merremii, Drymobius bifossatus, S pilotes pulIaJus, Leimadophis

poecilogyrus, Chlorosoma schottii c Pseudoboa trígemina entre as não venenosa?

e Bothrops jararaca, Bothrops atrox e Bothrops altemata entre as venenosas

Mostraram-se refractarias : Constrictor constrictor e Epicrates cenchria. Chiro-

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

220

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

mus carinatus foi inoculada uma só vez, não tendo sido obtida infecção, nada

se podendo concluir, porque também em Ophis merremii, embora excepcionalmen-

te, falhou a inoculação. Crotalus terrificus foi inoculado varias vezes, como,

porém, morre em poucos dias, quando manipulado com frequência, nada se pode

concluir quanto á sua sensibilidade á infecção experimental.

Alem de ophidios, foi também obtida a inoculação em um batrachio. Bufo

paracnemis Lutz. De 5 exemplares, inoculados com sangue de Ophis merremii

infectada, um apresentou infecção. Em 2 exemplares de Bufo marinus não foi

obtida infecção.

As cobras infectadas pareceram sofírer pouco com o parasitismo, tendo-se a

impressão de que a virulência é diminuta, pois as cobras duram ainda muito

tempo, apesar do numero colossal, muitas vezes, de Trypanosomata presentes

na circulação.

Cultura artificial

Foram obtidos, aliás com certa difficuldade inicial, culturas em meio de

NNN, preparado com sangue de coelho e com sangue de cobra, attribuindo-se a

contaminação, tão frequentemente observada, a uma possivel bacteriemia das

cobras conservadas em captiveiro em condições precarias de saúde.

Uma vez obtidas, as culturas se desenvolveram em geral com exhuberan-

cia, casos havendo, porém, de mau desenvolvimento.

As culturas persistem vivas durante quasi todo o tempo em que existe agua

de condensação no meio.

Continuamos a manter I. bulantanense no laboratorio, por meio de inocula-

ções successivas em serpentes e de culturas; estamos tentando ainda sua trans-

missão por meio do Ixodideo, Amblyomma dissitnile.

RESUMO

No sangue de exemplares, naturalmcnte infectados, de Boipeva (Ophis

merremii Wagler, 1824) foi encontrado um trypanosoma que, por seus caracte-

res morphologicos e propriedades biológicas, representa uma nova especie a ser

chamada de Trypanosoma bulantanense, n. sp.. Na phase adulta, este trypano-

soma apresenta 3 typos differentes de morphologia; reproduz-se activamente no

sangue de serpentes natural ou experimentalmente infectadas, apresentando então

todas as phases conhecidas do cyclo evolutivo dos trypanosomas ; infecta facil*

mente %*arias especies de ophidios que, todavia, não parecem ser por elle moles-

tadas; finalmcnte, mostrou-se cultivavel no meio NNN, no qual sobreviveu em-

quanto havia presença de agua de condensação.

Abastes e Fonseca — Pesquisas sobre trypanosomas

221

ABSTRACT

Trypanosoma butantanense, n. sp. has been íound in naturally infested

'pecimens of the Boipeva snake ( Ophis merremü Wagler, 1824) and differs

írom T. boipcvae (described elscwhere in this issue) by its smal! size, type of

motility, polymorphism, heavier infestation (Pl. II, fig. 18), besides other mor-

phological and physiological peoiliaritics.

Comparison of specimens in adult stage ( T ry panos oma- f orm ) discloses 3

different tvpes : Type I bears a body larger and proportionately narrower,

with a small nucleus, lying nearer the anterior end, a voluminous kinetoplasta at

a great distance f rora the posterior extremity ; the body is spiral-like behind the

kinetoplasta; protoplasma granulous, pale violet. Nucleus red and kinetoplasta

deeplv red. Undulanting membrane narrow with little pronounced sinuosities,

well visible (Pl- I, fig- 1). In type II the total length in decrcased and the

width increased; the length of the body behind the kinetoplasta is smallcr and

this portion *is not spiral-like as in type I ; the kinetoplasta is relativcly larger ;

the nucleus is widcr and occupies a more central position ; the flagcllum is shorter

(fig. 2). In type III the body is still shorter and widcr than in type

II and kinetoplasta lies at a shorter distance from the nucleus. In comparison

with the length the nucleus and the kinetoplasta are of larger size (fig. 3).

Reproduction takes place vcry actively in the blood of the naturally or

experimentally infcctcd snakcs, a feature which is cliaracteristic of this new

species. The forms found in the blood of living snakcs rcpresent all stages

known in the liíc-cycle of Trypanosomata: Lcishmar.ia — (fig. 4), Leptomo-

nas, Crit hidia — ( figs. 5 and 6) and T rypanosoma-íoun, so as to appcar

as a real artificial culture of the parasite rather tlxan anything cise.

It must be emphasized that this aspect was seen in living snakcs; therefore, it

has nothing in common with a simple culture that may occur in the blood of

dead animais.

Reproduction is almost always binary and the resulting individuais are

unequal (figs. 7 and 8). Exccptionnally multiplc d i vision may be seen (figs.

9-10). Division of the nucleus may prccccd that of the kinetoplasta (figs. 11, 12.

13. 14), a fact that is also seen in blood-films staincd by hematoxylin (figs. 10.

11, 12). The most frequent reproduction form bears the kino'eplasia at the

levei of the nucleus and scems to bc an intermediate form bctwecn Cri: hidia and

Trypanosoma, a Crithidia and a Trypanosoma (figs. 8, 9, 13, 14) resulting from

the samc division. Anomalous forms are seen in Pl. I. figs. 15-20 and PI. II,

figs. 15-17.

Trypanosoma butantanense in both blood and cultures is readily inoculablc

to other species of snakes, the following species having been found to be

susceptible: Ophis merremii, Drymobius bifossatus, S pilotes pullatus, Leima-

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

222

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

dophis poccilogyrus, Chloroscmc schottii, Pseudoboa trigemina, Bothrops jararaca,

Bothrops atrox and Bothrops altemata. In Constrictor constrictor, Epicrates

ccnchría, Chironius carinatus and Crotalus terríficus the experimental infection

was unsuccessful.

One toad out oí five ( Bufo paracncmis) also became infectetd but in Bufo

marinus it was not possible to obtain infection.

The infected snakes seemed to li ve about as long as those used as Controls.

Culture was easily obíained in NNN médium (with rabbit’s or snake’s

blood), and remained alive so long as condensation water was present in the

médium.

(TraLallio da StvçSo de Protozooiogia e Parasitologia

do Instituto Butantan, dezembro de 1331).

592.16:616.961

PESQUISAS SOBRE TRYP AN OSOMAS

II. Trypanosoma manguinhense , sp. n., parasita do bugio

Alauatta caraya (Humboldt, 1809)

POR

J. B. ARANTES e FLAVIO da FONSECA

Muito pequeno é o numero de es peei es do gencro Trypanosoma observadas

em macacos brasileiros, cifrando-se os até hoje descriptos a Trypanosoma crusi

Chagas, 1909 (1), Trypanosoma minasense Chagas, 1908 (2, 3 e 4) e Trypano-

soma prozcascki Behrenberg — Gossler, 1908 (5).

Em Junho de 1931, examinando preparados, corados pelo liquido de Giemsa,

de sangue de bugio da especie Alaualta caraya (Humboldt, 1809), encontrámos

um Trypanosoma de morphologia bastante diversa dos acima citados.

Provinha o macaco cm questão da localidade denominada Ccrqueira Ccsar,

Est. de São Paulo, tendo sido offerecido ao Instituto Butantan pelo sr. Augusto

R. D. Arruda, ao qual agradecemos tão interessante material.

O trypanosoma alludido era extremamente raro nos esíregaços, nos quacs

apenas foram vistos poucos exemplares.

Como se deprehende da gravura e dn descripgâo abaixo, distingue-se o

Trypanosomideo, por nós verificado em Alauatta caraya, com facilidade dos

outros Trypanosomata assigi -.alados cm macacos brasileiros (Est. I. fig. 21).

Do Trypanosoma prcnoaseki Behrenberg — Gossler, 1908, dif ferencia-sc

com facilidade, pois este, além de dimensões muito menores, apresenta blepharo-

plasta terminal, tal como Trypanosoma crusi Chagas, 1908, do qual muito se

approxima.

Com o Trypanosoma crusi também não c comparável, dif ferindo totalmen-

le na morphologia.

Approxima-se mais do Trypanosoma minasense Chagas, 1908, do qual to-

davia se distingue pelos caracteres seguintes: cm Trypanosoma minasense

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

224

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

a largura do corpo ao nivel do núcleo é maior e variavel, bem como ao nivel do

cinetoplasta, segundo se deprehende das dimensões apresentadas por A. Carini

(loc. cit.) e do exame da gravura apresentada por este pesquisador; o núcleo tem

maior diâmetro transversal e não toca os bordos do corpo; o cinetoplasta é

mais ou menos central, ao contrario do que succede ao Trypanosoma de Alauatta

caraya, em que este é marginal ou sub-marginal.

O nome especifico, T rypanosoma manguinhense, é dado em homenagem ao

Instituto Oswaldo Cruz, antigo Instituto de Manguinhos, no qual foram reali-

zadas pesquisas da maior relevância sobre Trypanosomas.

ASPECTO GERAL: — T rypanosoma relativamente grande e largo, apre-

sentando-se o protoplasma bem corado em azul, ás vezes de aspecto finamente

granulado e com zonas vacuolares localizadas principalmente nas proximidades

do núcleo.

O núcleo é volumoso, occupa toda a largura do flagellado, apresentando

coloração homogenea, vermelha pallida. O cinetoplasta é pequeno, de situação

predominantemente marginal, arredondado e situado a meia distancia entre o

núcleo e a extremidade posterior. A membrana ondulante, bem nitida, é estreita

c se estende desde proximo do cinetoplasta até a extremidade anterior, descre-

vendo sinuosidades muito pronunciadas. O flagello, bem visivel desde o cineto-

plasta, acompanha o bordo externo da membrana ondulante e se toma livre na

extremidade anterior, onde apresenta comprimento variavel.

DIMENSÕES

Foram computados cinco exemplares que deram as medidas abaixo:

J tedii

Maximj

Miiiitr.a

Comp. total cxcluido o flagello

livre

micra

36 micra 30

32 micra

Largura ao nivel do núcleo .

• •

micra

£0

3 micra 50

3 micra

Distancia do cinetoplasta à cxt.

post.

micra

14 micra 0

10 micra

Comprimento do núcleo

micra

5 micra 25

3 micra

Dimensão do cinetoplasta. .

micra

0 micra 50

0 micra

Comprimento do flagello livre .

micra

10 micra 50

3 micra

Com sangue obtido por puneção cardíaca foram inoculados um Silenus rhesus

(Macacus rhesus) jovem, com 5 cc. de sangue por via peritoneal, e duas cobaias,

com 2cc.5 de sangue pela mesma sua, uma das quaes morreu acddentalmente

no dia seguinte.

Nenhum desses animaes, porém, apresentou infecção, mesmo após exames

prolongados e repetidos até data muito posterior.

Ahantes e Fonseca — Pesquisas sobre trypanosomas

22Õ

Posteriormente foram feitas tentativas de isolamento do trypanosoma em

questão em meios artificiaes, semeando-se sangue obtido por puncção cardiaca

em sete tubos com meio de Noguchi para leptospiras e dez tubos de XNN.

No dia em que foram semeados taes meios, porém, não foi mais possível ver

trypanosoma no sangue pelo exame a fresco, o que correu certamente por conta

do facto de ter sido o macaco dias antes inoculado com virus do typho exanthe-

matico de fórma paulista, tendo apresentado forte reacção febril, achando-se nos

últimos dias de vida quando foi sangrado.

Seja pelo facto de não mais existirem trypanosomas na circulação, seja

pela maior difficuldade opposta por esta especie ao cultivo artificial, não foi

possível o seu isolamento, tendo-se conservado estereis os tubos.

RESUMO

E’ descripta uma nova especie de trypanosoma, Trypanosoma manguinhense

sp. n., parasita do bugio de S. Paulo, Alauatta caraya (Humboldt, 180)).

Não foram conseguidas inoculações ou culturas do novo parasita.

ABSTRACT

Trypanosoma manguinhense, sp. n., is describcd as a parasite found in a

Brazilian howler-monkey, Alauatta caraya (Humboldt, 1809). As pointed out

in the text, this new specics differs from all the other species hithcrto

describcd of Brazilian monkeys, thus: body broad and large; protoplasm

coloured in blue by Gicmsa, vacuolated near the nuclcus and finely granulous;

nucleus voluminous, as broad as the body itself ; kinctoplasta small, gencrally

marginal, rounded, lying halfway from nucleus and posterior end; undulanting

membrane sinuous, narrow, extending from near the kinctoplasta to the anterior

end; flagcllum distinct, with variable lcngth (PI. I, fig. 21).

Total lcngth. flagcllum cxcltrlc '

Brcadth at nuclear levei . . .

Distance klnetoplasta-postcrior en<l

Lcngth of núcleo»

Length of kinctoplasta . . .

Length of flagellum ....

Measurements :

AverOije

34 micra 54

3 micra 50

II mera 12

4 micra 35

0 micra 50

7 micra 52

yfúximum

36 micra 30

3 micra 50

14 micra

5 micra 25

0 micra 50

10 micra 50

Miiiimum

32 micra 37

3 micra 50

10 micra 50

mtera

micra

Culture in NNN and Noguchi’s médium as well as inoculation in a young

SUcttus rhesus (syn. Macacus rhesus) were negative.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

BIBLIOGRAPHIA

1. Chagas. C. — Arch. f. Schiffs-u. T ropenhyg. XII(4) :120.1909; Scicncia Medica

11(2) :7S. 1924; C. R. Soc. BioJogie XC(12) :873.1924.

2. Chagas, C. — Brasil Medico XXII(48) :471 . 1906 ; Arch. i. Schiffs-u. Tropenhyg.

XIII (4) .*120.1909; Buli. Soc. Path. Exotiquc V(2) :304.1912.

3. Carim. A. — Arch f. Schiffs-u. T ropenhyg. XII :447. 1909.

4. Ccrqueira, D. — Scicncia Medica 11(3) :155. 1924

5. Bthrtnbtrg & Cossler — Arch. f. Schiffs-u. T ropenhyg. XII :541 . 1908 ; Maiaria 1(1):

53.1908; Laveran & Mcsnil — Trypanosomes et Trypanosomiases :8 12. 1912.

(Trabalho da Sec<ão de Protozoologia e Parasltologia

do Instituto Butantao, dezembro de 1931).

593 16:616.961

PESQUISAS SOBRE TRYP ANOSOMAS

m. Trypanosoma merremi/, sp. n., parasita da serpente

Ophis merremi / Wagler. 1824

POR

J. B. ARANTES e FLAVIO da FONSECA

Por occasião de estudos parasitologicos em ophidios, tivemos opportunidade

de observar cm Ophis tmrremü Wagler, 1824 (boipcva) parasitismo por um

flagellado do genero Trypanosoma, que foi verificado por seis vezes em condi-

ções naturaes, no sangue peripherico de exemplares de procedência diversa.

Verificámos posteriormcnte que a especic de ophidio cm questão, também

póde ser parasitada por um outro Trypanosoma, de caracteres perfeitamente dis-

tinctos, que será objecto de uma communicação á parte.

A especic que descrevemos é rara, pois elevou-se a muitas dezenas o nume-

ro de exemplares de Ophis merremii examinados.

Exame a fresco — O trypanosoma é pouco abundante no sangue peri-

pherico em condições naturaes, sendo dotado de pequena mobilidade, custando

a deslocar-se, o que talvez corresse em parte por conta da compressão da lami-

nula sobre seu volumoso corpo. A extremidade do flagello é gcralmente curta,

dando impressão de que a membrana ondulante quasi attinge sua porção terminal.

O núcleo é visivel sob a fôrma do corpo granuloso c refrigente. Cineto-

plasta visivel sob a fôrma de agglomerado de granulações, situadas no inicio da

porção mais estreitada do corpo, no ponto em que tem inicio a membrana

ondulante.

Vêem-se granulações esparsas por todo o corpo, mais numerosas na extre-

midade posterior.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

228

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Exame após coloração pelo Giemsa

ASPECTO GERAL — Trypanosoma de grandes dimensões, apresentando

grande tendencia para enrolar-se sobre si mesmo, corando-se com facilidade. O

protoplasma toma coloração violeta pallida, apresentando-se finamente granuloso,

oodendo mostrar zonas vacuolares. ás vezes numerosas, porém de pequenas

dimensões.

O núcleo é alongado no sentido do grande eixo, collocado mais ou menos a

meia distancia das duas extremidades, não tocando os bordos do corpo; cora-se

em vermelho, apresentando granulações de aspecto uniforme por toda sua massa,

intensamente coradas em vermelho.

O cinetoplasta é marginal, situado bem mais proximo do núcleo do que da

extremidade posterior do parasita, de maior dimensão transversal e de colora-

ção mais viva do que o núcleo. A membrana ondulante, muito nitida e larga, é

bastante ondulada e percorre toda a margem do corpo desde o cinetoplasta até a

extremidade anterior.

O ílagello, adherente á margem externa da membrana onduiinte, é muito

nitido, sendo sua porção livre relativamente reduzida (Est. I, fig. 22).

Este Trypanosoma caracteriza-se, portanto, pelo seu constante monomor-

phismo, bem como pela ausência de fôrmas de reproducção no sangue periphe-

rico

dimensões:

Foram medidos setet exemplares, dos quaes se calcularam os dados abaixo:

Media

3 ias ima

Minima

Comprimento total excluído o flagello

•

micra

77 micra 8

64 micra 7

Largura ao nivcl do núcleo . . . .

micra

10 micra 5

6 micra

Distancia do cinetoplasta á extremidade post

micra

36 micra 6

26 micra ~

t Comprimento

NTuc,co j Largura

micra

10 micra 0

7 micra 0

mera

6 micra 1

3 micra 5

( Comprimento . . . .

micra

1 micra 7

0 micra 8

Cinetoplasta / Largue

0 micra

0 micra 8

0 micra 5

Flagello livre

micra

8 micra 7

0 micra ©

Para o Trypanosoma que acabamos de descrever propomos o nome de Try-

panosoma nurremii, sp. n., do nome especifico do ophidio em que é encontrado.

Por varias vezes tentada a obtenção de culturas em meios apropriados

(N N N original e N N N com cangue de boipeva c meio de Noguchi para

leptospiras), sempre sem resultado, apesar de não terem os meios sido con-

taminados.

Da mesma fôrma foram infructiícras as tentativas dc inoculação desse try-

panosoma cm serpentes da mesma especie.

Arantes e Fonseca — Pesquisas sobre tnjpanosomas

229

A especie em questão não póde, pelos motivos apresentados, ser mantida

viva no laboratorio.

Nos seis casos em que nos foi dado observar parasitismo pelo Try panos osr.a

em causa, pareceu-nos ser este relativamente bem tolerado pelas serpentes.

RESUMO

Os auctores descrevem uma nova especie de ttypanosoma, Trypanosome.

merremu, sp. n. parasita de Ophis merremii Wagler, 1824, observador por dua>

vezes em infecção natural entre muitas dezenas de cobras examinadas.

Não foram conseguidas culturas, nem foi obtida inoculação positiva em

outros ophidios da mesma especie.

ABSTRACT

Trypatwsoma mtrrenui, sp. n. is described as a parasite found in the snake

Ophis merremii Wagler, 1824. When stained by Giemsa its protoplasm appears

íinely granulous, vacuolated and coloured in pale violet. Its nucleus is elongated

and lies about halfway bctween the anterior and posterior extremities; it is

narrower than the body, appearing coloured in red and granulous. The kineto-

plasta lies nearer the nucleus than the posterior extremity, is broader than long and

has a more deeply red color than the nucleus. The undulanting membrane is

broad, wavy and distinguishable from the kinetoplasta at the anterior extremity

oi the body. The flagellum is short. This Trypanosoma secms to be strictly

monomorphic; division forms were not seen in the pcriphcral blood (Pl. I,

tig. 22).

MEASUBEMENTS:

Aieragt

Maximum

Minimum

70 micra

77 micra 8

64 micra 7

8 micra

10 micra S

6 micra 0

32 micra

36 micra 6

26 micra 2

8 micra

10 micra 0

7 micra 0

4 micra

6 micra 1

3 micra 5

1 micra

1 micra 7

0 micra 8

0 micra

0 micra 8

0 micra 5

4 micra

8 micra 7

0 micra 0

Total Icngth. flagellum excluded . .

Breadth at nucleus levei

!):>tance kinetoplasta-post. extremity . . .

I length

.Nucleus l

kmetoplast, J hr(a * h

Flagellum

Cultures in NNN (with snake or rabbit blood) and Noguchi’s médium, as

well as inoculation in snakes of the same species were negative.

(Trabalhos da Secção de ProtozoologU e ParasllotoKla

do Instituto Butantan, dezembro de 1931).

Estas 3 Notas foram apresentadas A Semana de Ubo-

ratorlo (Soc. Med. 4 Clrurgiz. S. Paulo), Janeiro de

1932.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Arastes e Fonseca

I Trypanosoma butantanense. sp. n.

I T. manyuinhense, sp. n.; T. merremii.

sp.

Mcm. Insl. Itutantan

Vo L vi. is»

ESTAMPA I

“t. (lli) prriplm.

^ »pt. 142 <fl*> «po<hr«m.

I.rit* 2 mm-

SciELO

Arastes e Fonseca — Trypanosmiuj Imlantnncnxe. sp. n. MüD* In '’ nmantan

Vol. VI. 1931

ESTAMPA II

^ r\

wtCft.a m.Cf

ESTUDOS PARASITOLOGICOS

POR

J. B. ARANTES

616 . 96 : 593.16

ESTUDOS PARASITOLOGICOS

I. Do comportamento do Trypanosoma Cruz i no

Silenus rhesus

POR

J. B. ARANTES

Trabalhando com Trypanosoma cru:i existente cm “barbeiros” da especie

Triatoma infestans, encontrados numa casa velha duma fazenda do municipio di

Orlandia, neste Estado, pelo sr. Theophilo Martins, quando, em serviço deste

Instituto, fôra escolher animaes para immunização, verificamos seu alto gráu

pathogenico para Silenus rhesits, provocando infecção fatal cm seis destes animaes

experimentados.

Os primeiros dois macacos foram inoculados com sangue infectante de

cobaias que haviam sido injectadas com fézes de barbeiros abundantes em formas

em crithidia.

O macaco n. 3 foi injcctado com sangue do n. 1, quando mostrava em seu

sangue peripherico numero regular de parasitas.

O n. 4 foi injcctado com fezes de barbeiros com estadia de seis meses

no laboratorio, alimentados nesre periodo em cobaia. Os dois últimos, ns. 5 e 6

foram injectados com sangue de coração do macaco n. 4, quando mostrava em

seu sangue 4 a 5 trypanosomas por campo visto com grande augmento a sccco.

Todos os seis macacos inoculados o foram subeutaneamente com 1 cc. de

material infectante: um com fézes de barbeiros diluídas cm sôro physiologico,

dois com sangue de cobaia, tres com sangue de outro macaco.

A duração destes animaes injectados variou de rrinta e dois dias, como

prazo minimo, para o n. 1 e, máximo, de 83 dias para o n. 5.

Não houve uniformidade mesmo naquelles injectados da mesma fórma;

dos tres injectados com sangue de outro macaco: o n. 6 durou trinta e cinco dias;

o n. 3 resistiu mais, morrendo depois de 65 ; o n. 5 mais ainda, pois só morreu

83 dias depois da inoculação, o mesmo acontecendo com dois inoculados cont

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

23 1

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

sangue de cobaia infectada : o n. 1 durou trinta e dois dias e outro, n. 2, setenta

e dois. Depois duma semana de inoculação é que foram encontrados os pri-

meiros trypanosomas em exames a fresco do sangue peripherico, em outros

animacs só após dezeseis dias como orazo máximo. Inicialmente eram raros ; após

tempo variavel augmentavam de numero, nos mais abundantes a seis em media

por campo visto com grande augmenío microscopico a secco. Nessa occasião

todos os macacos apresentaram a temperatura elevada: approximadamente 41°.

O numero de parasitas no sangue, depois de attingir um máximo, tende a di-

minuir e mesmo desapparecer. A temperatura também decahe: antes de morrer

apresenta-se o animal em hypothermia.

Não pareceu haver nestes casos moléstia intercurrente. Na occasião da

necropsia de cada animal, preparados a fresco eram feitos para exame imme-

diato, esfregaços e preparados por impressão dos diversos organs que também

forneceram material para fixação, inclusão e córtes.

O exame assim feito mostrou, desde o primeiro material examinado, grande

abundancia de parasitas, em fórma de leishmania ou intermediaria, mas prin-

palmente fôrmas adultas em material colhido do coração, musculo peitoral c

outros musculos.

Esta observação foi confirmada depois pelo exame dos córtes corados, feito

em material dos seis animaes necropsiados.

Com pequeno poder ampliador já se verifica a presença de grandes e nu-

merosas zonas mais coradas pelas còrcs ba^icas, destacando-se do resto do mus-

culo. Com maior augmento verifica-se que muitas fibras são quasi inteira-

mente occupadas por trypanosomas ou na fórma de leishmania de transição, ou

pHncipalmente na fórma adulta. Também se verificam parasitas isolados es-

parsos, em numero não pequeno sob as diversas fôrmas de evolução, dentro c

fóra da fibra muscular. Em algumas fibras onde existiram grandes agrupamentos

c que pela ruptura deram sahida aos trypanosomas, seu tecido nobre c substi-

tuído por tecido de cicatrização. Em outros pontos ha verdadeiros fócos de

necrose.

Est. I, fig. 1 : córtc de coração de SUenus rhesits, fixado pelo formol a

10 % c corado pelo processo de Giemsa: vê-se uma fibra cardíaca abundante-

mente parasitada pela forma adulta do Tryfanosoma crua.

Microphotographias, Est. 11. íigs. 1, 2 e 3: córtc longitudinal de musculo pei-

toral. fixado pelo sublimado-alcool de Schaudinn, corado pelo Giemsa; na fig. 1

vc-se uma fibra muscular estriada, parasitada em seu centro j?or formas cm

leishmania; na fig. 2 vê-;e uma fibra muscular estriada, intensamente pa-

rasitada por formas adultas; na fig. 3 vc-se outra fibra muscular es-

triada. compJctanicnte cheia de T rypanosoma crusi em differentes estados de

evolução c di ff iceis de se distinguir devido ao accumulo de parasitas; as figs.

4, 5 c 6 representam cortes longitudinaes de coração, fixados pelo formol a

lO^ó e corados pelo Giemsa : nestas tres microphotographias vêcm-se fibras mus-

J. B. Auvntes — Estudos parasitologicos

235

culares cardiacas geralmente prejudicadas na sua textura por infestação intensa

pelo T rypanosoma cruzi que apparece com predomínio manifesto da forma

adulta.

Pelo exame de algumas destas photogTaphias, verificamos o predomínio das

fôrmas adultas que apparecem com o cinetoplasta redondo intensameníe co-

rado, e menos apparentes núcleo e protoplasma, não se vendo nitidamente todo o

parasita adulto pela diííerença de nivel em que ficam no córte suas partes

componentes.

As formas em leishmania apparecem em menor numero c apparentam

maior tamanho, pois, sendo fôrmas arrendondadas, são vistos em conjuncto pro-

toplasma, núcleo e cinetoplasta que neste caso geralmente é em bastonete.

RESUMO

Verificamos uma amostra de Trypanosoma cruzi ser muito pathogenica para

o Silenus rhesus; dentre seis animaes inoculados: um, directamcnte com fé/. es

de Triatoma infestans, dois, por meio de sangue de cobaia infectada, tres, com

sangue de macaco já infestado, todos tiveram moléstia experimental com 100 %>

de morte.

Ao grande parasitismo dos musculos cardíacos e estriados pelo Trypano-

soma crua accrcsce a particularidade da predominância dos agrupamentos cm

fôrma adulta sobre os de forma intermediaria e de leishmania.

ABSTRACT

A sample oí Trypanosoma cruzi has becn cncountercd which is vcry patho-

genic for Silenus rhesus. In a group oí six Silenus mpnkcys, of which one was

inoculated dircctly with faeces oí Triatoma infestans, Iwo with blood of an in-

fected guinea-pig and three with blood oí an infected Silenus, all developed thc

infection and died írom it (100$o mortality).

Besides the marked parasitic infestation of both the skclctal and thc cardiac

muscles by Trypanosoma cruzi, the lesions found wcre characterized by the

definite prcponderancy of groups of thc adult fomis over thosc of both thc

intermediate and thc Ieishmania-like fonns (PI. I, íig. 1; pl. II, figs. 1-6).

(Trabalho da Sccçio de Protaaoologta c Paraaltolagla

do Inatltuto BaUntan, draembro de 1331).

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

393. 19:616.9 til

ESTUDOS PARASITOLOGICOS

Haemogregarina butantanens/s, sp. n., parasita da

boipeva, Ophis m errem // Wagler, 1824

POR

J. B. ARANTES

Ha vários annos vimos praticando exames de es f regaços de sangue, humano

e animal, á procura de hemo- parasitas. Examinando recentcmcnte o sangue

]>eripherico de exemplares de Ophis tnerremii Wagler, 1824, especic conhecida

vulgarmente pelo nome “boipeva”, tivemos occasião de encontrar uma hemo-

gregarina encapsulada em infestação muito adiantada.

Os parasitas, quando cndoglobulares, localizavam-se, na maioria das vezes,

parallelamcnte ao maior diâmetro do núcleo do crythrocyto ; quando existiam

dois num só globulo, deixavam o núcleo de permeio, como vemos nos desenhos

(Est. I, fig. 2) ou latcralmcntc (fig. 3). Existindo tres parasitas, o núcleo cn-

contrava-se cm geral muito comprimido lateralmentc (fig. 4). A’s vezes tam-

bém acontecia cncontrarem-sc os parasitas entrccruzados (fig. 5), cm vez dc

parallelos, quando occorriam dois no mesmo crythrocyto.

Dentro dos globulos essa hemogregarina apresentava-se sempre encapsu-

lada; cila abandonava essa capsula cm sua phase vermkular, raramente dentro

do proprio globulo (fig. 6) ; na maioria das vezes, ella deixava o globulo, ainda

colierta com a capsula (fig. 7), da qual procurava dcsprcndcr-sc dobrando-sc e

distendendo-se bruscamente. Esse movimento, operado sobre o maior diâmetro,

forçava a capsula, que ficava assim muito esticada na direcção da pressão que

se exercia sobre as suas extremidades; em um dado momento, rompia-se a

capsula por uma das pontas c delia sahia o parasita (figs. 8, 9. 10 c 11). Si

a abertura da capsula era muito estreita, o parasita sahia por meio de movi-

mentos ameboides; si, porém, era bastante larga, ellc apresentas-a apenas o mo-

vimento commum de reptação, parecendo que, de qualquer maneira, sua extre-

midade posterior, mais estreita, servia de orientador: percebia-se perfeitamente

movimento antecipado dessa extremidade para a direita ou para a esquerda,

antes mesmo que o parasita tomasse qualquer direcção definitiva.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

238

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

Ao exame a fresco, além de se notar o que acaba de ser referido, perce-

bia-se igualmente que a extremidade mais grossa do parasita era a anterior e

que seu núcleo se achava mais perto da extremidade posterior, mais afilada.

Nos es f regaços fixados pelo sublimado-alcool de Schaudinn e corados pela

hematoxylina ferrica de Heidenhain ou de Rosenbusch, as capsulas não se co-

ravam, ficando apenas em seu logar um espaço vazio, ao redor dos parasitas,

quando ainda em phase propicia.

Ao exame desses esfregaços devidamente corados, verificava-se que as di-

mensões do parasita, quando encapsulado, eram em media de 0,87 X 3,9 micra;

fora da capsula, suas dimensões eram em media de 0,5 X 5,25 micra, tendo

seu núcleo, de maior diâmetro, no sentido longitudinal, 0,5 X 1,3 micra. Via-se,

assim, que o parasita era mais comprido fóra da capsula, o que indicava, por-

tanto, achar-se elle mais ou menos comprimido dentro delia, cuja distensão e

rompimento eram assim facilitados.

O parasita que acabamos de descrever, não só não havia ainda sido assigna-

lado na Boipeva ( Ophis mcrremii), mas ainda tinha um processo de eclosão da

capsula bem caracteristico, conforme se vê ao exame dos desenhos annexos e

da Photographia n. 1 ; além disso, apresentava elle fôrmas eschizogonicas por

nós encontradas em cortes do coração, alem daquellas já assignaladas, em re-

lação a outras espccies, prindpalmente no pulmão e no figado. Essas formas

eschizogonicas, descobertas no coração (Est. II, figs. 8, 9), apparentemente

nellc não produzem reacção, pelo menos aecentuada; todavia, quando existentes

cm grande numero, é provável que não o deixem de prejudicar, pelo menos pelo

ef feito mecânico de compressão que sobre elle exercerão. Em córtes do co-

ração descobrem-se pequenos espaços vazios, correspondentes, em aspecto e ta-

manho, aos occupados pelas formas eschizogonicas; pela evolução destas formas

e sua destruição cm seguida á formação dos merozoitos, aquelles espaços trans-

formar-se-iam cm pequenas cavidades.

As formas eschizogonicas apresentavam as dimensões medias de 16,7 X 22.7

micra c, quando já formados, os merozoitos contavam-se em numero de 14 a 26

indivíduos.

Conquanto a serpente parasitada tenha durado muito tempo em captiveiro,

é provável que a hemogregarina não a tenha deixado de prejudicar pela inten-

sidade da infecção, porquanto havia invadido grande numero de erythrocytos

que mais tarde rompia c destruía, ao se libertar dclles: na Est. II, fig. 7 perce-

bem-se residuos de erythrocytos em plena destruição.

Os esfregaços correspondentes aos desenhos c Est. II, fig. 7 foram fixados

pelo alc-xjl absoluto e corados pelo methodo de Giemsa.

O córte de coração, representado nas figs. 8. 9 (Est. II) foi feito em material

fixado pelo formol a 10 %, incluído em parafina e corado pela hematoxy-

lina-cosina e hematoxvlina de van Gieson.

J. B. Arantes — Estudos parasilologicos

239

Em virtude dos caracteres acima descriptos, achamos que se tratava de

uma nova especie que descrevemos agora com o nome de Haemogregarir.a bu-

fantanensis, sp. n..

RESUMO

No sangue peripherico de um exemplar de Ophis merrcmii, serpente aglypha,

foi encontrada uma hemogregarina que se apresenta sempre encapsulada quando se

acha dentro do erythrocyto. Haetnogrcgarina butar.tanensis, sp. n., sae, ainda

encapsulada, do interior do globulo; sua capsula é bem coravel pelo methodo

de Giemsa, mas não o é pela hematoxylina íerrica.

O parasita descripto deve corresponder a uma nova especie, não só por

ainda não ter sido assignalado na Ophis merremii, como por apresentar um pro-

cesso especial de ruptura da capsula, bem visivel nos desenhos (Esr. I e Est.

II, fig. 7), e também pela presença de formas eschizogonicas encontradass em

cortes do coração (Est. II, figs. 8, 9). A perfuração produzida pelas hemogre-

garinas encapsuladas, ao se libertarem, determina uma grande destruição de gló-

bulos vermelhos. As dimensões medias do parasita eram : a) quando encapsu-

lado — 0,87 X 3,9 micra ; b) fóra da capsula — 0,5 X 5,25 micra ; núcleo,

de diâmetro maior no sentido longitudinal, 0,5 X 1,3 micra; formas eschizo-

gonicas — 16,7 X 22.7 micra; numero de merozoitos resultantes — de 14 a 26.

ABSTRACT

In the pcriphcral blood of the aglyph snake, Ophis tnerremii, thcre lias bccn

found a ncw hemogregarina always bearing a capsule whcn inside of the cry-

throcyte. Haemogregarina butontoncnsis , sp. n. is still encapsulated at the mo-

ment it Icaves the erythrocyte ; the capsule stains wcll by Giemsa but not so by

ferric hcmatoxylin.

This blood parasite seems to represem a new specics, not only for not

having been yet rcported in Ophis tnerremii, but also for showing a peculiar

process of capsule rupturc as clearly indicated in the encloscd drawings and photo

no. 1 as well as for bearing schizogonic forms to be found in sections oi the

heart. The average size of this parasite is the following: a) when cncapsu-

lated — 0,87 X 3, 9 micra; b) whcn free — 0,5 X 5,25 micra; nucleus, of

greater longitudinal diameter, 0,5 X 1,3 micra; shizogonic forms — 16,7 X 2 2,7

micra; number of resulting merozoits — from 14 to 26 (Pl. I, figs. 2-11 ; pl. II,

figs. 7-9).

(Trabalho da Seeçio de Protocoologla e Paradtolo-

(la do Instituto Butantan — deiembro de 1931).

Nota* apresentada* A Semana de t-aboratorlo (Soe. Med.

A Cirurgia S. Paulo), Janeiro de 1932.

SciELO

10 11 12 13 14 15 16

Mrlii. Inst. Hulantau

| Trypanosoma cruzi

Abantes

Vol. VI. 1931

I Haemogregarina bnlanlanensis, sp. n.

ESTAMPA I

Tr)pino«om» cru*»

JSciELO

\juntfs ^ TriJiiaiutsoma cnizi

I U aemogregarina bulanlanensis , xj>. n.

Mrm. In»t. llji.mtuti

VoL VI, 1931

ESTAMPA II

<!•»> ptripUn. L»il»

Obj. ,pt. i,jí <»•„ ,p efhrom . L , iu ,

mra.

PONTOS DE VISTA BÁSICOS

NA THERAPEUTICA DO OPHIDISMO

POR

AFRANIO no AMARAL

615J7 :612.31t.õl : 391.69

PONTOS DE VISTA BÁSICOS

NA THERAPEUTICA DO OPHIDISMO

POR

AFRANIO do AMARAL

O cuidadoso estudo feito, nestes últimos annos, de estatísticas realizadas no

Brasil e nos Estados Unidos, sobre a evolução clinica de innumeros casos de acci-

dentes ophidicos e de sua resposta ao tratamento especifico, tem permittido re-

saltar o papel que certos factores, até ha pouco relativamente desprezados, podem

representar no caso ora discutido.

Esses factores são os seguintes:

1* Constante gravidade maior do envenenamento em crianças c pequenos

animaes ;

2. ® uso de medicação popular de urgência;

3. ° via de applicação do soro especifico;

4. ® repetição das injecçõcs a curtos intervallos;

5. ® cicatrização das ulceras resultantes de certos envenenamentos.

Examinemos esses pontos separadamente.

Constante gravidade maior do envenenamento em crianças e pequenos animaes

Em trabalho recente (1) mostrei que, qualquer que seja o typo de envene-

namento, a dose de antiveneno a empregar cm caso de picada em crianças e pe-

quenos animaes deve ser sempre maior do que a indicada para adultos e grandes

animaes, ou, por outra, deve ser inversamente proporcional ao tamanho ou peso

da victima: o volume do soro deve ser tanto maior quanto mais leve for o fa~

ciente.

A explicação deste facto reside em que a cobra, ao picar, trata apenas de

defender-se contra um provável aggressor. Sem ter meios de discernir entre um

inimigo grande c um pequeno e, pois, mais ou menos tcmivel, a serpente não

244

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

gradua a quantidade de veneno a inocular. Dessa circunstancia resulta que, em

geral, a dose de peçonha injectada é mais ou menos a mesma, qualquer que seja

a victima.

Si nós considerarmos agora que todos os venenos matam quando attingem nos

tecidos uma concentração mais ou menos fixa, o que em toxicologia e immuno-

logia se chama de dose minima letal (DML), é facil comprehendermos que,

quanto menor for a pessoa ou o animal of fendido, mais depressa e facilmente

essa concentração será attingida. E’ isso, de facto, o que a pratica tem demons-

trado e o que se pode reproduzir do ponto de vista experimental.

Assim, si se tomam vários animaes (cães, por exemplo) de pesos diíferentes

e se injecta em cada um delles a mesma quantidade de um determinado veneno,

se verifica que, sem excepção, os symptomas conducentes á morte são tanto mais

graves e mais depressa apparecem quanto menor é o animal. Si, porém, se in-

vertem os termos da experiencia e, tomando-se alguns animaes do mesmo peso,

se injecta em cada um delles uma dose differente de um determinado veneno, se

observa que os symptomas conducentes á morte são mais graves e occorrem mais

depressa justamente naquelle que recebe maior quantidade de veneno em relação

ao seu peso.

Si neste segundo grupo, de animaes de igual peso, se inocula a mesma dose

de veneno, procurando-se salvar a todos por meio do soro especifico dado pela

via mais adequada, verifica-se o seguinte:

A. — Si os animaes são tratados no mesmo intervallo, com dose idêntica de

antiveneno, todos recuperam mais ou menos ao mesmo tempo.

B. — Si, porém, são tratados em intervallos differentes, recupera primeiro

aquellc que mais depressa é inoculado com o soro. Outrosim, nestas condições,

a dose curativa do especifico passa necessariamente a variar na mesma ordem:

é tanto maior quanto mais tardiamente é empregada, porque, neste caso, a into-

xicação dos tecidos se acha mais adiantada e as lesões mais acccntuadas.

Não se tendo em vista estes factos, poder-se-ia pensar que, por simples in-

jecção, nas crianças e pequenos animaes, de uma dose de soro correspondente as

minimas mortacs do veneno nclles inoculadas pela serpente, se evitaria comple-

tamenfe o effeito toxico. Isto, porém, não se dá na pratica, porque intervém

então no caso o íactor tempo que actua na ordem inverna do peso: a intoxicação

geral é tanto mais rapida quanto mais leve ou menor é a victima, isto é, quanto

menor for a massa do corpo que a peçonha tem de impregnar. Na verdade, é

devido á concorrência desses factores que as crianças e os pequenos animaes ás

vezes morrem, a despeito mesmo do tratamento.

E’ isto pelo menos o que as recentes estatísticas do Instituto Butantan re-

velam a um exame menos superficial. Considerando-se, por exemplo, cngloba-

damente os casos de picada, communicados ao Instituto e tratados por antivenenos

nestes 6 últimos annos (1926-1931), verifica-se que seu numero ascende a 1.520.

A. do Amaral — Therapeulica do ophidismo

245

Desse total de casos tratados, 969 correspondem a pessoas adultas ; 294, a crian-

ças até 15 annos; 257, a animaes de todas as especies. A mortalidade, que foi

apenas de 2,48% entre os adultos, chegou a 4,42% entre as crianças e a 8.94%

entre os animaes, sendo de notar que, entre estes, só os cães contribuiram com

mais de 1/3. Sem duvida, nos dois últimos grupos, alem do pequeno porte ou

peso (massa do corpo), contribuem para difficultar o tratamento as seguintes

circunstancias: as crianças, quando picadas, só raramente podem contar com

exactidão o que lhes succedeu e, por isso, não facilitam a applicação do soro espe-

cifico, facto que entre os animaes occorre com o aggra vante de geralmente só

rirem elles a ser tratados quando alguém lhes dá pela falta e, pois, quando

a intoxicação já lhes está muito adiantada: num caso, indecisão do tratamento,

complicada, no outro caso, por demora de sua applicação, a concorrer para a

elevação da mortalidade nesses dois grupos.

Nestas condiçõeõs. geralmente, quando o soro é administrado, o envenena-

mento já tem produzido, nos centros vitaes da economia, lesões tanto mais graves

e irreparáveis quanto maior for a concentração em que actuou a peçonha.

Assim sendo, o único meio que se pode empregar para contrabalançar até

certo ponto essa desvantagem da parte das crianças e pequenos animaes é dar-

lhes doses sempre maiores de soro.

E’ bem verdade que, á luz dos nossos actuaes conhecimentos, a ef ficada do

tratamento especifico está ligada também a certos factores, taes como:

a) dependentes das victimas — relativa avidez dos tecidos para com certos

princípios dos venenos, concorrência de lesões preexistentes, grau de immunidadc

adquirida, etc.;

b) dependentes do antiveneno — actividade especifica, relativa avidez para

cora os elementos vitaes afícctados ou os princípios toxicos, densidade, concen-

tração ionica ou composição elcctrolytica, etc.. Esses factores, porém, ou exer-

cem influencia pouco decisiva no caso, ou são convenientemente comprehendidos

na technica de preparo dos soros curativos.

Uso de medicação popular de urgência

Nunca é demasiado insistir na necessidade de se contraindicarem cm abso-

luto os remedios caseiros a que, assim os lavradores nacionaes, como os trabalha-

dores estrangeiros, costumam recorrer cm casos de envenenamento ophidico.

Esses tratamentos empíricos consistem, sobretudo, no uso de beberagens as mais

diversas com base de álcool e kcrozene. O álcool é cm geral administrado de

mistura com produetos de origem vegetal, taes como alho, cebola, fumo, araticum

e muitas outras substancias, cujo numero no Brasil deve andar por perto de uma

centena. O kerozenc é administrado também por via gastrica e em doses variá-

veis, de accordo com a maior ou menor ignorância dos curandeiros.

246

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

No uso de retnedios akoolicos cumpre distinguir o que corre por coma dos

princípios vegetaes e o que é devido ao excipiente. Dentre as innumeras plantas

no particular recotnmendadas entre nós, não se poude demonstrar ate agora cm

nenhuma a menor influencia therapeutica. Ainda ha pouco tempo Mhaskar e

Caius (2) chegaram a idêntica conclusão no estudo que fizeram de 314 vege-

taes usados na índia pelo povo no tratamento de picadas de cobra. E’ destes

auctores a seguinte affinnação: “Nenhuma das plantas indianas recommen-

dadas para o tratamento de picadas de cobra exerce no caso qualquer et feito pre-

ventivo, neutralizante ou therapeutico”.

No referente á acção do vehiculo alcoolico, é sabido que ella é apenas nociva.

Longe de curar ou siquer facilitar a marcha do envenenamento, o álcool, pelo

contrario, a difficulta, porque, determinando num primeiro tempo um augmento

da tensão arterial, favorece a absorpção do veneno; causando, numa segunda

phase, uma baixa da pressão sanguinca, retarda a reacção do organismo e a eli-

minação do toxico. Porisso, administrado sob qualquer forma, o álcool produz

dois ef feitos oppostos ao que se deve obter na cura do envenenamento e que é a

parada da absorpção do veneno seguida de sua eliminação mais rapida possível.

Em certos casos o álcool é empregado com o proposito de embriagar a

victima, tirando-lhe a consciência do perigo ou embotando-lhe a dor. Todavia,

quando esse ef feito é attingido, a acção nociva acima assignalada, sobre a ab-

sorpção e eliminação do toxico, torna-se muito maior.

Quanto ao kerozene, seus ef feitos são mais prejudiciaes ainda. Sobre não

exercer qualquer acção bcncfica no envenenamento, este derivado do pelrolco

aggrava, pelo contrario, os symptomas, porquanto por si só é capas de causar

uma intoxicação aguda com destruição do sangue e degeneração do figado.

\ ia de applicação do soro especifico

Dada a diversidade de efieitos e do modo de absorpção das peçonhas, é

indispensável que em todos os casos se procure determinar com cuidado o typo

do envenenamento, tanto mais quanto desse conhecimento decorre a escolha da

via de infroducção do soro curativo.

E’ sabido que os ophidios que em nosso meio causam maior numero de

accidentes, se reunem, do ponto de vista zoologico e immunologico, em dois

grupos principacs: o crotalico e o bothropico. O veneno crotalico neotropico

(sobretudo o sul-americano) é absorvido muito rapidamente e attinge os centros

vitaes por intermédio dos troncos nervosos. Possuindo uma acção quasi que

estrictamente neurotropica, embora seja muito activo, este veneno não determina

maior reacção, nem qualquer destruição de tecido ao nivel da picada (3).

Os venenos bothropicos e os crotalicos nearcticos (sobretudo os norte-ame-

ricanos), por seu lado, penetram na economia mais lentamente e são absorvidos

cm grande parte por via lymphatica, de envolta com os proprios produetos de

A. uo Amaral — . Therapeutica do ophidismo

247

destruição cellular. Sendo especialmente cytolyticas, estas peçonhas dão origem

a grande reacção inflammatoria, com gradativa destruição dos tecidos, a partir

do ponto em que são inoculadas pelas especies correspondentes.

Dada essa diversidade de mecanismo c natural que, no envenenamento cro-

talico sul-americano, se faça a injccção do soro em qualquer ponto do corpo, de

preferencia por via muscular ou intravenosa, de accordo com a gravidade do acci-

dente, facilitando-se, assim, o rápido contacto do especifico com os princípios

leti feros. Ao invés disso, nos envetienamentos bothropicos c nos crotalicos norte-

americanos, se deve empregar pelo menos uma parte do soro cm redor do ponto

attingido, formando-se a esse nivel unta verdadeira barragem, para se delimitar

a destruição dos tecidos ; deve-se reservar a outra parte para injecção á distancia,

afim de se reduzir a acção que sobre os centros vitaes possa exercer a porção do

veneno já porventura absorvida. A proposito, tenho verificado que, em casos

tratados sem demora, a injecção local do soro, feita em dose apropriada, deter-

mina uma cura rapida e sem maiores incidentes.

Repetição das injecções a curtos intervallos

A quantidade de veneno oscilla de cspccie a espede c, num mesmo exem-

plar, varia de accordo com a idade, prévia alimentação, frequência de luetas e

outros factores, resultando disso tudo que nunca se pode determinar previamente

e com exactidão a dose de antiveneno que se deve empregar para curar o

paciente.

E’ indispensável, portanto, que, depois de se applicar uma primeira dose

em quantidade inversa ao tamanho do paciente, se procure observar com cuidado

a marcha dos symptomas. Em geral a primeira injecção determina uma melhora

subjectis-a e objectiva, que, si a dose não foi suíficiente — o que frequentemente

acontece — , dentro em pouco dcsapparcce, voltando então a aggravar-se o estado

do paciente.

Assim sendo, é indispensável que, si em resultado da primeira injecção as

melhoras não são definitivas, se procure repetir a mesma dose de soro de tres em

tres horas, até que se haja inoculado um volume de soro sufficiente para effecttiar

a cura completa do caso. Dessa maneira, não somente se pode assegurar uma

efficacia de 100% no tratamento especifico, sinão também se consegue evitar o

desperdício de soro que resultaria necessariamente, em certos casos, si se pro-

curasse attingir de inicio a dose óptima.

Cicatrização das ulceras resultantes de certos envenenamentos

A experiencia tem mostrado, de um lado, que, em resultado de sua intensa

acção cylolytica, os venenos bothropicos (neotropicos) e os crotalicos da região

nearctica costumam determinar gangrenas mais ou menos extensas em redor dos

24 S

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

pontos picados, sempre que não se recorre ao tratamento especifico, ou quando

este não é feito de accordo com os preceitos da technica moderna. Doutro lado,

se tem verificado que, em resultado da diminuição da vitalidade dos tecidos

affectados, a cicatrização das ulceras, resultantes dessas gangrenas mais ou menos

parciaes, é muito demorada e precaria.

Impressionado com esse facto, eu tenho, nesses últimos annos, recorrido em

taes casos ao soro normal secco em applicações locaes. Em todas as observações

que tenho feito, o soro sccco tem demonstrado aquclle mesmo rápido effcito cica-

trizante que assigmlei em um outro trabalho que versazn sobre as ulceras atônicas

e phagedenicas (4).

Mesmo em ulceras bastante extensas, resultantes de gangrenas que haviam

causado desínrções musculares e nervo-vasculares importantes, como num caso

de minha recente observação (5), o pó do soro normal tem estimulado a

r cocção do organismo e produzido, em um espaço bastante curto, a cicatrização

completa da região attingida, sem necessidade do recurso a enxertos ou outros

processos que taes, de ef feito mais ou menos demorado.

ABSTRACT

An analysis of the recent statisties on the clinicai evolution of cases of

snakc bites and their response to the specific treatment by antivenins discloses

many interesting facts which may be briefly summarized as follows:

1. Snake poisoning is much more severe on children and small animais:

this severity is inversely proportional to the size, weight or body mass of the

rictim. For this reason the volume of antivenin to be given must be as great as the

patient be small. Application of this principie has already resulted in the saving

of many lives.

2. Of the many empirical treatments, consisting of the application of

alcoholic beverages, vegetable infusions and Chemical Solutions, as resorted to in

cases of snake-bite, none seems to be really efficacious. In this rcspect both

alcohol and kerozene must be absolutely condemncd.

3. In cases of neurotoxic type of poisoning antivenin must be given intra-

muscularly or intra-venously so as to come rapidly in contact with the poison

principies in the blood or in the tissues. In cases of proteolytic and hemor-

rhagiparous type of poisoning, otherwise, the injection must be given (in part at

least) around the site of the bite so as to prevent the absorption of the poison

and rcducc the destruction of both tissues and blood; in Iate cases this must be

done together with an injection of the serum given away from the site of the

bite.

4. In view of the difficulty encountered in determining the approximate

amount of venon a snake is apt to inoculate at a bite it is necessary for the

A. do Amarai. — Therapetilica do ophidismo

249

injection of antivenin to be repeated at three hour intervals so as to ensure

the complete neutralization of the poison principies and a 100% efficacy in the

treatment. The injection of a very large dose of antivenin at once may represent

a waste in many cases such as those in which the amount of poison is not large

enough to cause death or serious symptoms.

5. Local application of dried normal serum appears to be the quickest and

most economic process for the healing of ulcers as resulting from the necrotic

effects of poisons on the externai tissues.

BIBLIOGRAPHIA

1. Atnaral, A. do — Animaes venenosos do Brasil :36. 1930.

2- Mhaskar. K. S. &■ Caius. J. F. — Indian plant remedies used in snake-bite in Ind.

Med. Res. Man (19) :1-96.19J1.

3. Amoral, A. do — Phjlogeny oí the rattlcsnakes in Buli. Antiv. Inst. America 111(7)

:7.1929; Anales Soc. Cient. Argentina CVII :373.1929.

4. Amaral, A. do — Contribuição ao tratamento das ulceras atônicas c fagcdénicas in

Mem. Inst. Butantan 1(2) :209-231. Est XXXIX-LX.1919.

5. Amaral. A. do — O soro secco como cicatriza nte das ulceras produzidas pelo veneno

bothropico in Boi. Soc. Med. Cir. XV(10) :382-393. 1931.

(Trabalho djt Secçfie» de Optilologla e Imimiologla

tio Instituto Butantan, terminado em dezembro de

1931 e apresentado A Semana do Laboratorlo, Soc.

Med. A Cirurgia S. Baulo, Janeiro 1932).

'SciELO

0 11 12 13 14 15 16

61 3 . 67: £1 2 314 - 5 : 616.97

0 SORO SECCO COMO CICATRIZANTE

DAS ULCERAS PRODUZIDAS PELO VENENO BOTHROPICO

POR

AFRAXIO do AMARAL

Considerações geraes

E’ facto sobremodo conhecido de todos aquelles que acompanham de perto

a marcha do envenenamento bothropico experimental, ou observam, com o ne-

cessário critério scientifko, successivos casos clinicos de intoxicação pelo veneno

de serpentes do genero Bothrops, taes como, entre nós, a jararaca (B. jararaca ),

a jararacassú (B. jararacussu) , a caissaca (B. alrox), a urutú ( B . altcmata),

a jararaca pintada (B. neuxaedii) c a cotiara (B. coiiara), que a administração

do antiveneno especifico, feita á distancia do ponto picado, de accordo com a

pratica corrente, não consegue, em via de regra, cri ta r completamente a gan-

grena resultante da acção proteolytica e cytolytica exercida sobre os tecidos cir-

cunjaccntes á zona attingida. Estudando melhor esta questão, verifiquei que

a razão de tal incfíicacia do soro cm attender os phenomenos locacs do envene-

namento bothropico reside na demora do agente therapeutico cm chegar cm con-

tacto com os tecidos affectados, permittindo dess’arte a acção mais ou menos

integral dos princípios biochimicos constitutivos da peçonha, no exercício mesmo

de sua affinidade para com os elementos cellulares.

No envenenamento experimental sobre cães, Florencio Gomes (1) já havia

verificado que, para salvar todos os exemplares preriamente inoculados com a

peçonha da jararaca, era mister que o antiveneno, sendo dado por via hypo-

dermica, fosse administrado dentro de uma hora após a inoculação do toxico,

o que bem mostra a rapidez da própria acção geral da peçonha sobre o orga-

nismo animal. Na sua opinião, em casos semelhantes de envenenamento expe-

rimental se poderiam esperar resultados mais seguros com a applicação intrave-

nosa do soro em dose equivalente ao dobro do veneno injectado.

Baseado no estudo analytico de varias centenas de boletins de accidentes

bothropicos, oommunicados ao Instituto por pessoas residentes no interior, e em

254

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

muitas observações por mim proprio realizadas, resolvi ha dois annos modificar

no particular as instrucções já antiquadas, contidas nas bulias que acompanham

as empolas de antivenenos entregues ao consumo, no sentido de aconselhar a

applicação local de uma porção do especifico nos casos de intoxicação bothro-

pica e a injecção de doses inversamente proporcionacs ao tamanho ou peso do

paciente. Dada a importância que o assumpto offerece para as populações ru-

raes, não me parece fora de proposito que aproveite esta opportunidade para citar

na integra as affirmações por mim feitas sobre o caso em um dos meus últimos

trabalhos :

"Já desde 1919 eu venho verificando, assim em experiencias de labo-

ratorio, como pela observação de pacientes, que as doses até ha

pouco recommendadas pelo Instituto Butantan para o tratamento de

accidentes ophidkos em crianças e em certos animaes de pequeno ta-

manho, eram insufficientes. Por isso mesmo é que nas novas ins-

trucções a serem expedidas pelo Instituto sobre o methodo de tra-

tamento e as doses a empregar em taes casos, aconselhamos, con-

forme se lê abaixo, o repetição das injccçõcs cm intervallos de duas

horas, sempre que o accidente seja grave, e quantidades de antive-

neno tanto maiores quanto menores e mais jovens forem as victi-

mos. Assim, nas crianças c nos cãcs é necessário que se injecte

pelo menos uma dose inicial de 40 a 60 cc., desde que, pelo quadro

symptomatico, se verifique a gravidade dos casos. Alem disto, c

aconselharei, segundo observações que venho fazendo ha algum

tempo, injectar-se em tomo do ponto of fendido pelo menos uma

parte da dose do soro indicada, nos casos de picada pela jararaca

e outras serpentes do mestno gencro ( Bothrops ), a acção necrosante

de cujo veneno sobre os tecidos é bem conhecida " (2).

Envenenamento pelas serpentes

Quasi todas as serpentes são capazes de produzir picadas dolorosas e isto

porque são dotadas de pequenos dentes aguçados, dispostos gcralmente em 4

fileiras do lado de cima (1 fila maxillar e 1 fila palatino-pterygoidea de cada

lado, na maioria dos typos) e 2 do lado de baixo (fila mandibular). Todos

esses dentes têm a ponta dirigida para trás, para o fundo da bocca, de sorte

a tornar difficil a escapa dos animaes que os ophidios caçam para comer.

A mordedura de qualquer serpente, portanto, costuma produzir lesões dos

tegumentos, nelles deixando certos signaes que servem para o diagnostico diffe-

rencial do typo causador da picada. Acontece, porém, que muitas mordidas

são causadas por cspecies desprovida? de presas ou apparelho inoculador e, pois.

A. do Amaral — Envenenamento bothropico

são susceptíveis de sarar rapidamente, mesmo sem qualquer applicação medica-

mentosa. Sabedores deste facto, o<s nossos espertos curandeiros exploram a

ignorância do povo, a quem convencem do alto valor de suas mesinhas costu-

meiras e da verdade mesma de seus milagres repetidos.

Os casos de envenenamento ophidico observados no Brasil são produzidos

por especies de Elapideos, representantes da serie proteróglypha, e de Crota-

lideos, correspondentes á serie solenóglypha. Conforme se tem verificado os

accidentes determinados pelos nossos Elapideos, vulgarmente conhecidos pelo

nome de “cobras coraes verdadeiras”, são absolutamente excepcionaes, devido a

•varias circunstancias peculiares a elles. De qualquer modo, cumpre dizer que

as picadas destas serpentes de typo elapidico, são frequentemente muito graves

e caracterizam-se por intensa dor na região attingida, acompanhada de salivação

abundante, lacrimejamento, diarrhéa, paresia da zona aííectada e asthenia mais

ou menos profunda.

De seu lado, as serpentes solcnóglyphas brasileiras, que se distinguem logo

á primeira vista pela presença de 2 orifícios de cada lado do focinho, causam

dois typos bem diversos de envenenamento: o crotalico e o bothropico, sem

mencionar o lachefico, produzido pela surucutinga (Lachcsis muta ) c que é

muito raro.

Os principacs symptomas de envenenamento do typo crotalico, isto c, deter-

minados pela cascavel ( Crotalus terrificus), são geralmente os seguintes:

Dor local quasi nulla; fraqueza progressiva e rapida; paresia ou paralysia

das palpebras, com perturbações da visão, até completa cegueira; impressão de

pescoço quebrado (cabeça cahida), devido á paralysia dos musculos cervicacs;

vomitos ou. ás vezes, diarrhéa e urinas sanguinolentas (hematúria) ; pulso fraco

e capillar; algidez, principalmente das extremidades; somnolcncla profunda e,

nos casos graves, morte por parada da respiração.

Os príneipaes symptomas de envenenamento do typo bothropico, que resulta

da picada da jararaca, caissaca, jararacussú, urutu, cotiara c outras especies de

Bothrops, são em resumo os seguintes:

Dor intensa na região attingida; edema hemorrhagico ascendente, com for-

mação de bolhas (phlyctcnas) ; engorgitamento ganglionar; hemorrhagia pelas

mucosas, taes como a da bocca, ouvido e estomago, intestino, rim. etc. ou, nas

mulheres, a do útero, acompanhada de suspensão das regras; destruição pro-

gressiva dos tecidos mais de perto affectados, com formação de eschara, alcan-

çando os tecidos profundos, e, por vezes, quando a picada aftinge os membros,

com perda dos segmentos (mãos ou braço, pé ou perna), devida á gangrena ex-

tensiva que se installa; finalmente, morte, nos casos mais graves, principalmcntc

observados em crianças e pequenos animaes.

256

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Tratamento dos accidentes ophidicos

O tratamento dos accidentes ophidicos baseia-se na applicação dos antive-

nenos ou soros especificos e comprehende uma serie de cuidados e medidas que

se podem assim resumir:

a) Primeiros cuidados — O primeiro cuidado de tratamento dos acciden-

tes ophidicos é transportar o of fendido para logar onde possa receber os necessá-

rios soccorros, devendo-se evitar nesse transporte, tanto quanto possivel, gran-

des abalos para o paciente. Em seguida, deve-se desapertar toda a roupa e collo-

car o of fendido em uma cama ou maca, ou mesmo sobre o sólo, extendido e com

a cabeça baixa.

Si o paciente estiver muito abatido, pode-se dar-lhe a beber uma chicara

de café quente.

Antes de mais nada, é de toda convenienda verificar a especie de serpente

causadora do accidente, pois esse conhedmento será de grande utilidade na es-

colha do espedfico a empregar.

b) Escolha do antiveneno a empregar — Deve-se empregar o soro anti-

crotalico nos accidentes de typo crotalico, isto é, determinados pela cascavel: o

soro anti-bothropico, nos envenenamentos de typo bothropico, isto é, produzidos

pela jararaca, caissaca, jararacussú, urutú, cotiara, etc.; o soro anti-bothropico

mono valente, nas picadas pela jararaca, devendo-se reservar o soro mixto ou

polyvalente, soro anti-ophidico, para os casos de não se reconhecer a serpente

que mordeu.

c) Opportunidadc do tratamento — A rapidez com que se recorre ao trata-

mento espedfico tem grande influencia sobre o seu resultado e sobre a quantida-

de de soro a empregar: quanto mais cedo for injectado o soro, tanto maior a

probabilidade de cura e menor a dose necessária para neutralizar o veneno

inoculado.

Em via de regra, mesmo nos casos graves, a primeira injecção poderá ser

coroada de exito completo si for feita em dose suffidente e dentro das duas

primeiras horas após o acddente.

d) Doses indicadas — Xos casos de envenenamento de extrema gravidade,

ou naquelks em que os symptomas se apresentam rapidamente, conforme succe-

de nas crianças e nos pequenos animaes, deve-se injectar logo 40 ou 60 c.c. de

soro ; nos de media intensidade, metade destas doses (20 a 30 c.c.) ; nos benignos,

cerca de um terço (10 a 20 c.c.).

Desde que cada empola contém 10 c.c. de soro, é necessário injectar o con-

teúdo de 4 a 6 empolas, nos casos mais graves ; 2 a 3 empolas, nos casos médios ;

1 a 2 empolas, nos casos benignos.

A. do Amaral — Envenenamento bothropico

257

Para as crianças e os pequenos animaes a dose de soro deve ser sempre

maior do que para os adultos e os grandes animaes, isto é, deve ser sempre

tanto maior quanto menor for o paciente.

e) Local da injecção — Possuindo o soro effeito geral, a injecção póde ser

feita por via sub-cutanea (hypodermica) em qualquer parte do corpo, devendo-

se, entretanto, preferir região de pelle distensivel e pouco movei, como as costas,

no intervallo das espaduas, ou os lados do ventre (flancos). Nos casos de

envenenamento do typo bothropico é indicado, porém, injectar-se uma parte da

dose em redor do ponto picado, pois assim se circunscreve mais facilmente a

destruição dos tecidos.

Nos casos graves e nas crianças e pequenos animaes, a injecção deve ser

feita por via venosa, ou peritoneal desde que o calibre das veias seja diminuto.

Afim de facilitar-se a eliminação do veneno e a reacção do doente, é necessário

que, nos casos graves, alem do soro ou de mistura com elle. se injectc agua phy-

siologica com adrenalina (100 a 250 c.c. de agua physiologica para 1 c.c. de

soluto de chlorhydrato de adrenalina a 1 :1000). Nos casos de extrema gravi-

dade ou nos que se apresentam com tendência a collapso é bom fazer também

injecções de cafeina e estrychnina.

f) Escolha c preparo da seringa — Qualquer seringa grande e esterilizavel

pode servir para a injecção dos soros anti-peçonhentos.

Antes de se encher com o soro, a seringa deve ser fervida conjunctanicnte

com as agulhas. Para isso, col!ocam-se seringa e agulhas cm uma pequena va-

silha com agua em quantidade sufficiente para as cobrir completmcnte c ferve-

rem-se durante 5 a 10 minutos pelo menos. Vasa-se depois cuidadosamcntc parte

da agua, deixando-se esfriar um pouco, antes de retirar a seringa. Esta não

deve ser posta na agua já a ferver, porque pode partir, nem deve ser cheia

quando ainda quente, porque, alem de ficar sujeita a quehrar, pode coagular

o soro.

g) Modo de encher a seringa — Para se transvasar o soro, basta quebrar-se

a extremidade afilada da empola e aspirar-se o conteúdo por meio da seringa.

h) Preparo da região — Escolhido o ponto a ser injcctado, nas costas ou

perto da picada, lava-se cuidadosamente com agua c sabão e um pouco de antisépti-

co ou, na falta deste, mesmo com aguardente.

i) Modo de injectar o soro — Preparado o ponto onde se vai fazer a in-

jecção, trata-se de levantar, com a mão esquerda, a pelle, de modo a formar uma

dobra ou cone, em cuja base se implanta uma das agulhas que acompanham a

seringa (e que devem também ter sido esterilizadas), depois de retirado o pequeno

fio metallico que lhe garante o funccionamento.

A agulha deve atravessar completamente a pelle, o que se verifica pela

impressão que dá, de estar já com a ponta livre e dentro do tecido subcutâneo.

258

Memórias do Instituto Gutantan — Tomo VI

Retiram-se então as bolhas de ar que porventura tenham ficado no interior da

seringa, a qual então se liga á agulha implantada, injectando-se o soro por um

movimento de propulsão lento de embolo.

Si a seringa não tem a capacidade sufficiente para injectar de uma só vez

toda a dose do soro, deve-se, ao terminar a injecção da primeira quantidade, se-

parar a seringa da agulha e conservar esta implantada para evitar nova picada,

inteiramente desnecessária. Separada a seringa, trata-se de adaptar a ella a

outra agulha esterilizada e proceder ao seu enchimento com nova quantidade de

soro, findo o que se passa a ligar á agulha já implantada, e assim successivamente.

j) Cuidados com a seringa — Depois de occupada, a seringa deve ser

cuidadosamente lavada em agua, afim de serem remov.dos os traços de soro

porventura depositados em suas paredes, os quaes, pelo deseccamento, poderiam

inutilizal-a completamente.

k) Cuidados com o paciente — Terminada a injecção, o paciente deve ser

deixado na C3ma, no mais completo repouso, evitando-se qualquer causa de

excitação.

Si a dose injectada é sufficiente e feita em tempo opportuno, as melhoras

apresentam-se dentro de 3 a 6 horas. Si, porém, não for sufficiente, nem admi-

nistrada bastante cedo, é necessário repetir-se a injecção cada 3 ou 6 horas até

que se complete a dose necessária á cura do caso.

Xos accidentes determinados pela cascavel acontece ás vezes que os pheno-

menos de intoxicação, depois de cederem app ar ent emente sob a influencia do

tratamento, a ponto de darem ao paciente a impressão de cura completa, sobre-

vêm novamente, com certa intensidade e podem determinar a morte, caso não

se faça logo nova injecção de soro. E', pois, necessário, nos envenenamentos de

typo crotalico, prolongar a observação por 3 semanas no mínimo, ou então admi-

nistrar, logo no começo, uma grande dóse de antiveneno.

Enquanto estiver sob a influencia da intoxicação, a pessoa picada deve ser

mantida em dieta liquida, constituída por leite, caldos, café, chá.

Do segundo para o terceiro dia, caso já tenha melhorado, o paciente deve

tomar um purgativo salino brando, como sulfato de sodio ou citrato de magnésio.

l ) Instrucções sobre os soros — Embora os antivenenos entregues ao con-

sumo pelo Instituto Butantan sejam geralmente concentrados, c frequente for-

mar-se um pequeno precipitado que se deposita sobre a parede ou fundo das

empolas. Esse precipitado não indica alteração do produeto e representa a

parte que não possue eí feito therapeutico, de sorte que é preferível não agitar as

empolas antes de ser extravasado o seu conteúdo.

Conservados em empolas intactas, ao abrigo da luz e em logar fresco, os

soros mantêm suas propriedades curativas por muitos annos, tendo-se verificado

no Instituto que, mesmo depois de 25 annos, ainda podem ser empregados. Por

A. do Amaral — Envenenamento bothropico

259

esse motivo c que não se acceitam em devolução os antivencnos entregues ao

consumo publico.

Isto quanto ao tratamento scientiíico das picadas.

Tratamentos empíricos

E’ sabido, porém, que, especialmente entre a classe baixa, muita gente ainda

acredita que mordedura de cobra passa com remedios caseiros, cuja base é em

via de regra o álcool ou kerozene. Assim, tanto no Brasil, como nos demais

países americanos, é frequente se verem pessoas, picadas por serpentes, procurar

beberagens com base de álcool, sendo que nos Estados Unidos, em virtude da

lei secca, muitos pretos se fazem propositalmente picar por cobras não venenosas

só para terem direito a uma dose de whiskey de que sentem tanta falta... No

entanto, experiencias realizadas com todo o rigor scientiíico têm demonstrado

que o álcool, longe de curar ou siquer facilitar a cura, pelo contrario a diífi-

culta, porque a principio favorece a absorpção do veneno e, mais tarde, em

resultado da baixa da pressão sanguínea, retarda a reacção do organismo e a

eliminação do toxico.

No que diz com o kerozene, os effeiros observados ainda são mais prejudi-

ciaes. Além de não ter qualquer acção beneíica sobre o envenenamento, o kero-

zene, ingerido nas doses que o povo emprega, complica os symptomas, porque

por si só produz uma intoxicação aguda, com destruição do sangue e degeneração

do figado.

Ha 2 annos tive ensejo de soccorrer a um trabalhador, reccnchegado de

Portugal, que, ao ser picado por uma cascavel nos arredores da cidade de São

Paulo, foi obrigado a ingerir cerca de meia garrafa de kerozene que lhe adminis-

traram os companheiros de trabalho. Apezar da applicaçào intensiva do antive-

neno especifico (soro anti-crotalico) , esse paciente não poude reagir, vindo a

fallecer no dia seguinte com todos os symptomas de envenenamento pelo kero-

zene. Ainda ha pouco tempo, tive sob observação uma franzina menina de 7

annos, residente á margem da estrada de São Paulo a Itú e que, depois de um

copioso almoço, foi, em certo domingo, picada por uma cascavel que mataram c

trouxeram ao Instituto para identificação. Ao examinar o ophidio, dei pela

falta do crepitacuJum (chocalho) e, ao ser notificado da morte da doente, apezar

do tratamento especifico, tratei de averiguar o que os parentes da victima haviam

feito com esse appcndicc. Fui informado de que o mesmo havia sido triturado

e posto em um copo de kerozene que foi dado a beber á desventurada criança.

Logo depois deste caso, observei um outro de um rnemino de 12 annos de

idade, residente em um velho sitio além do Ypiranga, no município de São

Paulo, o qual fora mordido por uma cascavel, no momento em que estava traba-

lhando na roça. Soccorrido pelo pai que conseguiu matar a serpente causadora

do accidente, recebeu essa criança como medicação de urgência uma "boa dose”

2C0

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

de cachaça com alho grande, na crença de ter ingerido um antídoto efíicaz. Não

havendo naturalmente o remedio produzido o effeito desejado, foi a victíma, ja

em estado grave, trazida ao Instituto Butantan pelo proprio pai que, ao ser in-

quirido sobre o accidentc e a medicação usada, declarou que administrara um

cálice de pinga com alho, só não tendo augmentado a dose para um copo, por se

ter o of fendido recusado a ingerir mais, devido aos vomitos que provocara o

“remedio’’. Para fazer face ao envenenamento dessa criança foram necessá-

rias 9 empolas de soro anti-crotalico injectadas por via sub-cutanea, intravenosa

e intraperitoneal, de mistura com cerca de meio litro de agua physiologica com

adrenalina, seguido de estrychnina e caíeina.

A minha primeira experiencia com tratamentos dessa natureza passou-se ha

cerca de nove annos, quando tive conhecimento de um caso de envenenamento

ophidico cuja unica “medicação” consistira em couro de jacaré administrado

com "pinga e oleo de candeia (3).

Enquanto não se generalizar o conhecimento das novas instrucções e a<

doses dc antiveneno bothropico continuarem a ser integralmente administradas

á distancia da região of fendida surgirão novos casos de mutilação mais ou menos

extensa, consequente ao empeçonhamento de pessoas ou animaes. In felizmente,

em taes circunstancias, o veneno não se limita a destruir os tecidos por elle di-

rectamente affectados, sinão leva alem a sua acção e eterniza, muita vez pela

vida do mutilado, o effeito deleterio, antitrophico, de seus princípios biochimi-

cos, representado por ulcerações de caracter atonico e resistentes aos tratamentos

ordinários.

Tratamentos usuaes de ulcerações atônicas

N'o tratamento das ulcerações de caracter torpido, provenientes do envenena-

mento bothropico, como no das ulceras atônicas cm geral, a maioria dos medico?

continua, para infelicidade dos doentes, a lançar mão dos recursos da velha anti-

sepsia, representada pelas pulverizações phenoladas de La Tourette e pelo inesgo-

tável arsenal dc pomadas da velha pharmacopéa, desde a de Réclus até a de

Unna; só por cxcepção é que algum mais avisado e moderno recorre ás maça-

gens de Maylard, ao effluvio eléctrico de Marquant. á diathermia ou ás applica-

ções de ar quente e de raios ultra-violetas ou aos proprios enxertos de Thiersch

c Rcvcrdin. cujo emprego tem, todavia, suas naturaes e frequentes limitações.

Ao ler, logo que ingressei no terreno da sorologia, o excellcnte manual de

Darier (4), fiquei impressionado com a multiplicidade de applicações, ainda não

convenientemente exploradas peh clinica, do soro normal como excitador da nu-

trição geral, da hematogenese c da actividade phagocytaria. Dahi resultou o pri-

meiro ensaio que fiz no anno de 1917, de curar, pelo soro normal equino, uma

ulcera atônica da perna dc um paciente e, logo depois, um profundo ferimento

deformante numa das phalanges de outra pe-soa, por signal que ajudante de

A. do Amaral — Envenenamento boihropico

261

carpinteiro em Butaman, havendo o resultado, em ambos os casos, excedido as

espectativas mais optimistas. Em seguida a esses dois ensaios procurei aper-

feiçoar o methodo e generalizar sua applicação a condições correlatai da neces-

sidade de se estimular a proliferação cellular com intuitos de activar a cicatri-

zação, havendo por final communicado a uma sociedade local o resultado de mi-

nhas observações (5).

Para gáudio meu. sinão para honra da sciencia nacional, esse methodo, que

tão de perto attendia á economia dos doentes, por ser de facil applicação, de

preço pouco elevado e de effeito seguro na grande maioria dos casos, se tem

generalizado em nosso meio e tem recebido mesmo o favor de comprovações no

estrangeiro, segundo se deprehende, por exemplo, de um artigo (6) publicado,

em 1923, pelo eminente collega de Lausanne, Dr. R. Feissly, que assim se ma-

nifestou :

“J’eus 1'idée d’cssayer à mon tour le traitement du Dr. Amaral,

et je fis préparer à 1’Institut sérothérapique de Berne la poudre de

cheval qui m’était néccs-aire.

Le résultat de son application a été ce que je viens de dire; il

confirme donc cntièrement les observations de mon conírcre brési-

lien, car il est diíficile d’invoquer ici une coincidcnce entre les dates

de 1’application de sérum et un proccssus de réparation spontanéc.

II ne me parait pas non plus qu’on puisse attribuer cette cicatrisation

rapide. att tulle gras si précieux, de Lumière, car il ne faut pas oublier

que mon observation ne fait que s’ajouter aux nombrcux cas d’ulcè-

res phagédéniques publiés par le Dr. Amaral, dont 1’évolution a cté

semblable sous 1’unique influence du sérum sec.”

1 ^

A proposito, cumpre referir que, por ter o meu trabalho sido publicado cm

português — conhecido tumulo do pensamento humano — de 1920 a esta pane o

processo de tratamento das ulceras pelo soro normal tem sido victima de novos

“descobrimentos” por parte de profissionaes de outras paragens, ignorantes de

nossa bibliographia scientifica. Para não me alongar em citações, basta dizer

que, ha apenas pouco mais de dois annos, surgiu, no conceituado orgam da Asso-

ciação Medica Norte-Americana, um artigo de dois collegas de Nova York (7)

sobre o tratamento de queimaduras por meio de soro normal equino. Embora

a idéa não fosse original, conforme accentuei em carta dirigida aos alludidos col-

legas e ao editor que a publicou em numero ulterior daquelle periodico (J. Amcr.

Med. Assn. vol. 93, n.° 6, pag. 476, 1929), o processo empregado, que consistiu

na applicação local do soro normal cm estado liquido e addicionado de 0.35ÇÓ de

cresol como preservativo, é indiscutivelmente inferior ao por mim descripto, isto

é, á applicação do soro deseccado em pó e sem addição de qualquer substancia

antiséptica, porquanto, nestas condições, a acção do medicamento é muito mais

202

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

intensa e prolongada e, pois, mais economica, alem de que a ausência de preser-

vativo evita qualquer destruição cellular e acção retardante, por minima que seja,

sobre a marcha da cicatrização da ferida, ao contrario do que se passa com o uso

do soro liquido e cresolado. De qualquer sorte e apezar destes dois inconve-

nientes apontados, a applicação do soro normal (mesmo liquido e cresolado como

no caso em apreço) produz resultados superiores aos de quaesquer outros pro-

cessos até agora aconselhados no tratamento de queimaduras (e, por extensão,

no de outras ulcerações e perdas de tegumento), conforme se deprehende das

seguintes conclusões do trabalho de Monteith & Gock ora commentado:

“ 1 . The method oí treating bums with normal horse serum

as here described is simple and easily applied. It does not soil bed

linen or cloíhing.

2. In our hands, this method has yielded íar better end-results

than any other method that we ha ve employed for the treatment of

burns due to fire, hot water or acids.

3. The important advantages of this method of treating burns

are (a) absence of scar tissue; (b) rapidity of formation of new

epidermal tissue in all parts of the wound; (c) freedom from pain;

(d) prevention of infection, and (e) climination of toxemia by pre-

venting the absorption of the toxins.

4. Even when the destruction of tissue involves a large area,

the wound becomes covercd with sound, hcalthy tissue and there is

no contraction with rcsulting deformity; splints, traction or skin

grafts are not required.

5. When bums are treated by our method, bactcrial growth is

inhibited by the cresol in the serum and pus formation is minimized.

6. When bums of the skin bearing hair are treated with normal

horse serum by our method, the denuded arca becomes covered with

hcalthy epidermal tissue which again bears hair.

7. Wc would cmphasize the value of the preliminary bath oí

warm physiologic solution of sodium chloride. It not only facilitates

remo vai of the devitalized tissue but also prevents absorption of the

toxins gencratcd in the bumed area.

8. Normal horse serum containing cresol, when sprayed on the

bumed arca, coagulates the exuding tissue plasma and thus provides

the hcalthy cclls with physiologic food. so that the cells can proliferate

and form new, hcalthy epidermal tissue.

9. The serum should be applied at least twice daily to prevent

drying of the tissues in the bumed arca, which would cause death of

the cells.

A. do Amarai. — Envenenamento bothropico

263

10. After the normal horse serum has been applied, thc

wounded surface is protected with rubber tissue, which prevents

evaporation and thus insures prolonged acrion of tlie serum”.

Soro secco e gangrena por envenenamento bothropico

Estas considerações vêm a proposito de um interesante e gravíssimo caso

de envenenamento bothropico determinado pela jararacassú (D. jararacussu)

observado na pessoa do Sr. A. K., brasileiro, de 42 annos de idade e residente

nesta capital, onde se entrega á profissão de dentista.

O paciente achava-se, no dia 23 de julho p. passado, a passeio no interior

do estado, perto da localidade Presidente Epitacio, á margem do rio Paraná,

no exercido, calmo e distrahido de seu predilecto desporto venatorio, quando, ao

se baixar para colher algo de sobre o solo, foi picado por uma enorme jarara-

cassú que elle, com grande presença de espirito, conseguiu matar e medir, veri-

ficando ter cerca de um metro e meio de comprimento.

Ambas as presas da serpente attingiram-lhe profundamente os tecidos molles

da porção distai da região interna do antebraço direito a cerca de 6 centímetros

acima da dobra do punho, causando-lhe intensa dor, e profundos soffrimentos

durante longo tempo. Apczar de gravemente empeçonhado, o paciente só poude

ser soccorrido cerca de 2 horas mais tarde, quando recebeu o antiveneno bothro-

pico polyvalente. A injecção foi-lhe applicada na região inter-escapular, por

via hypodermica e na dose de 3 empolas do especifico, quando, em virtude da

gravidade do caso, parecia indicado ter a applicação sido feita por via venosa

(ou cm redor do ponto picado, conforme julgo preferível em taes circunstancias)

e em dose duas ou tres vezes maior, afim de poder neutralizar o ef feito da quan-

tidade de veneno, em excesso da capacidade normal dos tecidos humanos e que

medeia por um milligrammo por kilo de peso. Ora, c sabido que a jararacussú

pode inocular de vez de 100 a 300 milligrammos de veneno e, portanto, de 30 a

230 milligrammos alem da capacidade de resistência do organismo. Nestas con-

dições. é indispensável que nos casos em que se presuma ou se tenha presente

uma inoculação completa de peçonha por parte da cobra, se procurem dar ao

of fendido doses repetidas de soro, ate attingir-sc a quantidade capaz de fazer

face ao excesso de veneno injectado pelo ophidio.

Infelizmente bem poucos são aquellcs que vão caçar no interior perfeita-

mente munidos do remedio protector, de sorte que, sem embargo da constante e

generalizada campanha desenvolvida neste sentido pelo Instituto Butantan, ainda

de vez em quando occorrem casos como o de que trato no momento.

Continuando a aggravar-se os soffrimentos do paciente, foram-lhe applica-

das mais duas empolas do soro especifico, e isto só no dia seguinte, quando já

era demasiado tarde para evitar ou siquer remediar o damno causado pelo ophi-

dio. Assim, não é de admirar que, a despeito de todos os esforços e dedicação

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

2<U

dos médicos consultados, a gangrena se houvesse installado extensivamente e em

marcha ascendente pelo antebraço e braço até perto da axilla, havendo o edema

invadido a própria parede thoracica do lado correspondente, pelo que se chegou

a pensar na necessidade urgente de amputação do membro. Felizmente, cinco dias

mais tarde a gangrena estava bem delimitada ; para facilitar a queda do esphacelo,

fez-se necessária uma pequena intervenção cirúrgica que, de seu lado, facilitou

a drenagem do pús. Demorando a reacção cicatricial e apresentando a ulceração

um caracter pouco satisfactorio, aconselharam os médicos que o paciente vol-

vesse a esta capital onde encontraria melhores recursos para tratar-se. Por esse

motivo, veiu elle á minha procura na ultima semana de agosto (um mês após o

accidente), quando lhe examinei. Nesse momento a ulceração alongara-se desde

o punho até o terço medio do braço pela face interna, estendendo-se até a ex-

terna do antebraço, na qual existia então uma faixa, de cerca de cinco centíme-

tros de largura, de tegumento. O exame attento da região revelou ter havido

destruição completa dos tendões do pequeno palmar e do cubital anterior, do

nervo cubital c da artéria e veias que o acompanham normalmente e lesão parcial

do flexor superficial commum e do longo supinador, tudo conforme ficou gra-

vado na photographia que no momento fiz tirar para a necessária documentação

do caso (Fig. 1).

Tratamento — Apezar da extensão formidável da lesão e da profunda des-

truição de tecidos, não hesitei em lançar mão de applicações locaes de soro secco,

precedidas de lavagens com agua physiologica, em detrimento de quaesquer

substancias antisépticas ou pomadas, cujo emprego rae cada vez mais cahindo em

desuso, por anti-economico ou mesmo prejudicial aos pacientes. Desde então,

tenho feito o curativo duas vezes por semana e protegido a região, quer por

meio de uma membrana de gutapercha, quer especialmente por meio de um

penso occlusivo de esparadrapo, com o fim de conservar o mais possível a acção

do soro posto cm contacto com os tecidos lesados. Ultimamente, a conselho meu,

o paciente tem submettido o membro afíectado a maçagens manuaes e eléctri-

cas, com o fim de estimular a cinética da região, atirn de que elle possa voltar

ainda a exercer a sua profissão de dentista.

E’ bem verdade que elle está avisado da impossibilidade de uma completa

restitutio cd integrum, em virtude das grandes lesões nervo-vasculares e mus-

culares de que foi victima. Em todo caso é de esperar que, dentro em pouco,

a cicatrização da pclle já esteja ultimada e elle possa então submetter-se a uma

mcchanotherapia mais intensiva para poder retomar os trabalhos de sua profissão.

Actualmente a cicatrização da extensa zona ulcerada está quasi completa, con-

forme se vê na Fig. 2.

A. do Amaral — Envenenamento bothropico

265

ABSTRACT

Application oi dried normal serum on an extensive ulceration with deep

de5truction of skin, muscles, nerve and vessels of the fore-arm (Fig. 1), result-

ing from the cytotTopic, proteolytic and hemolytic efíects of the poison of

Bothrops jararacussu has been followed by a gradual and satisfactory healing

of the lesion (Fig. 2) with nearly complete recovery, by the patient under obser-

vation, of the motion of his fore-arm and hand.

BIBLIOGRAPHIA

1. Comes. J. Florencio — Da acção do soro ami-bothropico sobre a intoxicação experi-

mental pelo veneno da Lachesis lanceolatus in Ann. Paul. Med. Cir. XI(7) :149-

158. 1920.

2. Amaral, Afranio do — Campanhas anti-ophidicas in Mem. Inst. Butantan V :213. 1930.

3. Amaral, Afranio do — Animacs venenosos do Brasil: 39-41 (Secret. Agric. São

Paulo) 1931.

4. Dar Ur, A. — Vaccins, serurns et ferments dans la pratique journaliêrc. Paris, 1912.

5. Amaral, Afranio do — Contribuição ao tratamento das ulceras atônicas e fagedcnicas.

— Do emprego do soro normal seco. Cbmm. Soc. Med. Cir. São Paulo 16.VI.1919

in Ann. Paul Med. Cir. X (12) ^84-288.1919.

6. Feissly, R. — Contribution à la question du traitement des plaies atones. (Ulceration

ã bords cyanotiqnes traitée par 1c «crum de cbeval cn applications localcs) in

Schwetx. mcdiiin. Woch. 29:1-6.1923.

7. Monteith, S. R. & Clock, R. O. — The treatment of bums with normal horse serum

in J. Amer. Med. As«n 92(14) :1173-1176.1929.

'Trabalho dai Sceçóe» de Ophlologla e ImmunoIogl.i

do Instituto Dutantan. terminado em novembro de

1931 e eommunlcado á Soc. Med. Cirurgia. S. Pau-

lo. 1-XIM932. Nota in Boi. Soc. Med. ar. S. Pau-

lo XV (18): 3S2 -395. 1931).

A. do Amaral

Envenenamento bothropico

Mrm. Inst Butautan

Vai. VI, 1931

SciELO

MODERNAS TECHNICAS

DE PREPARO DA ANTITOXINA TETANICA

POR

J. LEMOS MONTEIRO e FLAVIO da FONSECA

61 2.393.3: 61 6.S U

MODERNAS TECHNICAS

DE PREPARO DA ANTITOXINA TETANICA

POR

J. LEMOS MONTEIRO e FLAVIO da FONSECA

Grande tem sido nos últimos annos o progresso da sorotherapia antitetanica

e notável a excellencia das antitoxinas produzidas pela technica moderna, em

relação ás obtidas com os processos menos recentes, o que trouxe como con-

sequência a progressiva melhora nas estatísticas da therapeutica do tétano.

O progresso observado nos últimos annos originou-se das verificações basicas

de Ramon (1) sobre o augmento do titulo antitoxico do soro de cavallos que

apresentavam, accidentalmente, um abcesso no ponto da inoculação da toxina

diphterica no decurso da immunização. Procurando estabelecer um processo de

immunizaçâo em que pudesse ser obtido experimentalmentc um resultado idên-

tico, este auctor verificou, após múltiplos ensaios, que a addição, ao antigeno

diphterico, de pó de tapioca esterilizada provoca\*a apparccimcnto de edema e

af fluxo leucocytario no ponto de inoculação, acompanhado de lenta absorpção do

antigeno, do que resultava producção muito mais intensa de antitoxina.

Applicando esse methodo nos animaes produetores de soro antitetanico, ve-

rificaram Ramon e Descomby (2) que o teor cm antitoxina dos cavallos assim

immunizados augmentava também de modo notável, tornando-se esse o processo

de escolha para a obtenção de antitoxinas de alto valor.

Glenny, Pope, Waddington e Wallacc, em 1926 (3), observaram que os

precipitados insolúveis obtidos das toxinas addicionadas de alume de potássio

gozam de elevado poder antigenico; Ramon, em 1927 (4), demonstrou a possi-

bilidade de obtenção de antitoxinas tetanicas dotadas de notável acção ncutra-

lizantc, por meio de immunização com anatoxina tetanica addictonada de pó

de tapioca. Representam taes trabalhos outras tantas contribu ções de mui alta

valia para o progresso da sorotherapia antitetanica, porquanto desse modo ficava

também reduzido de muito o prazo necessário á completa immunização dos ani-

maes produetores de antitoxina.

270

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

Esses resultados deram logar ao apparecimento, na literatura sorologica, de

larga copia de artigos, todos tendentes a comprovar e ampliar as verificações

fundamentaes que acima citámos.

Immunização de cavallos por meio de toxina addicionada

de alume de potássio

Acompanhando de perto o progresso realizado no particular, têm sido

ensaiadas e estão em vigor no Instituto Butantan as technicas aciualmente mais

preconizadas para a obtenção das antitoxinas tetanicas, cujos títulos ultrapassam

de muito os até ha pouco obtidos.

Representa esta nota a summula dos resultados verificados com a applicação,

na 1* phase da immunização de cavallos, de anatoxina adsorvida pelo alume de

potássio, seguida de inoculações de toxina precipitada por essa mesma substancia.

Alem dos resultados obtidos com essa technica, apresentamos também os

observados com a applicação do methodo já em 1925 (5) aconselhado por Glenny,

Pope, Waddington e Wallace, isto é, da instituição de um repouso de um mês

que deve ser concedido aos animaes em inicio de immunização antitetanica, re-

pouso que dá em resultado uma elevação notável do poder antitoxico. Este

methodo constitue um precursor da recente technica de Ramon e Lemétayer,

vinda á luz em 1931 (6) e baseada na verificação de que os cavallos submet-

tidos um anno antes á vaccinação antitetanica com anatoxina addicionada de

tapioca, administrada em duas injecções de 10 c.c. seguidas por intervallo de

um mês, forneciam, ao serem definitivamente immunizados, antitoxina de titulo

que superara todos os outros processos atê então utilizados. Experiências nesse

sentido foram também instituidas em Butantan, tendo sido feitas cerca de 250

immunizações preparatórias em cavallos, pela technica actualmente aconselhada.

O quadro seguinte mostra os titulos obtidos em alguns animaes antes e

depois de utilizada a technica da addição de alume de potássio a 0gr.,5Çó

aos antigenos tetankos.

L. Monteiro e F. da Fonseca — Antitoxina tetanica

271

N* do

cavallo

Maior titulo obtido na immti-

Maior titulo obtido após addi-

nizaçáo por ana toxina seguida

çáo de OgT.,5% de alume á

de toxina pura

ana toxina e á toxina

SOI

200 u. a. por cc.

600 u. a. por cc

504

200 u. a. por cc

400 u. a. por c.c

506

200 u. a. por cc.

400 u. a. por c.c

510

? u. a. por c.c

1500 u. a. por cc

512

100 n. a. por cc

500 u. a. por c.c

516

350 u. a. por cc

900 u. a. por cc

318

250 u. a. por cc

1000 a a. por c.c.

520

400 u. a. por cc

900 a a. por cc

524

200 a a. por cc

500 u. a. por c.c

525

150 u. a. por cc

800 u. a. por cc.

527

350 u. a. por cc

1400 u. a. por cc

528

200 u. a. por cc

800 u. a. por c.c.

529

550 u. a. por cc.

1000 u. a. por cc

550

300 u. a. por cc

600 u. a. por cc.

Ltgtnda : u. a. — unidade antitoxica expressa de accordo com o mcüiodo de

Rosenau e Anderson.

Segundo se deprehende do quadro acima, dos 14 cavallos em que foi feita

a experiencia, todos apresentaram augmento extraordinário do titulo antitoxico,

tendo triplicado a media geral dos valores. No caso do cavallo n. 510 não foi

estabelecido o limite máximo da dosagem anterior, apenas existindo nos pro-

tocollos a verificação de ter o seu sôro doscado 100 u. a..

272

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

Augmento do poder antitoxico do plasma de animaes submettidos

a repouso de um mês no inicio da immunização

Em outra experiencia, destinada a pôr em pratica a technica do re-

pouso no inicio da immunização, foram tomados 2 cavallos novos (ns. 536

c 537), cuja immunização obedeceu á seguinte norma:

50 c.c. anatoxina tetanica -f- alume de potássio a 1 %

150 c.c. anatoxina tetanica + alume de potássio a 0.5 %

300 c.c. anatoxina tetanica -f- alume de potássio a 0,5 %

Estas injecções eram separadas por 8 dias de intervallo.

Após 1 mês de repouso, foi iniciada a immunização com toxina, segundo

a tabella abaixo, com inoculações separadas por uma semana de intervallo:

50 c.c. toxina tetanica + alume de potássio a 0,5%

100 c.c. toxina tetanica -f- alume de potássio a 0.5%

200 c-c. toxina tetanica + alume de potássio a 0.5%

300 c.c. toxina tetanica -f- alume de potássio a 0.5%

400 c.c. toxina tetanica -f- alume de potássio a 0,5%

Sangrados 15 dias após a ultima inoculação, verifeou-se o titulo de 800 u.a.

para o cavallo n. 536 e 1000 u.a. para o de n. 537. Fizeram-se mais 3 sangrias

acompanhadas da inoculação de 500 c.c. de toxina e alume, seguida de 15 dias

de intervallo, tendo sido os mais altos titulos obtidos o de 1400 u.a. para o

n. 536 e o de 1500 u.a. para o n. 537.

O cavallo n. 537, depois do repouso de 5 meses, submettido a reimmuni-

zação com 30, 50, 100, 150, 300 e 350 c.c. de toxina + alume de potássio

a Ogr., 5% forneceu, 15 dias após a ultima injecção, soro de 1600 u.a..

Os titulos antitoxicos assignalados são representados em Unidades Ameri-

canas. de accordo com o methodo de dosagem de Rosenau e Anderson, adoptado

entre nós, o qual representa o dobro de Unidades Intemacionaes, designação

esta ultima acceita pelo Comité de Hygiene da Liga das Nações e que figura

em muitos soros encontrados no commercio. O conhecimento desta distineção

é de grande importância para o medico, em beneficio proprio e do seu doente.

JSciELO 0

BIBLIOGRAPHIA

1. Ramon, G. — Sur la production de 1’antitoxine diphtérique ín C. R. Soc. Biologie

XCIII :506.1925; C. R. Acad. Sciences CLXXXI :157. 1925.

2. Ramon, G. & Descombey, P. — Sur rimmr.nisation antitétanique et sur !a production

de 1'antitoxinc tétanique — C.R. Soc. Biologie XCIII :306. 1925.

3. Glenny, A. T ., Pope , C. C Waddington, H, & Wallace, U . — XXIII. The anii-

genic value of toxovd precipitated by potassium alum — J. Path. and Bacteriology

XXIX :38. 1926.

4. Ramon, G. — Sur la production des antitoxines — CR. Acad. des Sciences

CLXXXI: 157. 1925.

5. Glrnny, A. T., Pope, C. (7„ 11'addington, H. & WaUoee, U. — Immunological notes,

J. Path. and Bacteriology XXVIII :46J. 1925.

6. Ramon, G. & Lemétayer, E. — Sur 1'aptitude a la production de 1’antitoxine tétanique

de chcvaux antérieurcmcnt vaccinés contre lc tétanos — CR. Soc. Biologie

CVI(l) :21 . 1931. Sur une méthode de production intensive de 1'antitoxine tétanique

— C. R. Soc. Biologie CVTíl) :23.1931.

(.Trabalho da Secção de Immunologla do Instituto Bu-

tantan, terminado em dezembro de 1331 e commu-

nleado á Semana de Laboratorio da Soc. Med.

Cirurgia, S. Paulo, Janeiro de 1333).

ESTUDOS SOBRE A UNIDADE

DAS FRACÇÕES ALBUMINOSAS DO SORO

POR

DIONYSIO vos KLOBUSITZKY

612-393.12:612.121

ESTUDOS SOBRE A UNIDADE

DAS FRACÇÕES ALBUMINOSAS DO SORO

POR

DIONYSIO vos KLOBUSITZKY

A maior parte das experiencias sobre soro normal é constituida por tra-

balhos que se relacionam com compostos albuminosos existentes no soro. A

causa do interesse e attenção especial despertados por estes corpos, tanto

na actualidade como no passado, — abstrahida sua importância medica e bioló-

gica — reside em primeiro logar nas múltiplas difficuldades c impecilhos que

se deparam aos investigadores. Essas difficuldades, na maioria, podem ser attri-

buidas a uma causa unica, isto é, ao enorme volume da molrcula c ao conse-

quente estado colloidal destes corpos. O excessivo peso molecular explica o

facto de não ser conhecida, até a epoca presente, nem mesmo de modo appro-

ximado, a constituição chimica dos corpos albuminosos; sua classificação ou

identificação, destituída de base chimica systematica, apoia-sc em outras pro-

priedades, até mesmo na procedência anatómica, o que nos parece ainda mais

deficiente, sob o ponto de vista sdentifico. E’ mais facil approximar-se da

precisão exigida pelo espirito das sciencias naturaes por meio da verificação

das propriedades physico-chimicas, devendo-se, porém, ter constantemente pre-

sente a noção de que numa identificação obtida á custa de um processo indi-

recto como este não basta a concordância de uma unica constante physico-chimica

para se concluir que dois corpos também não são diversos quanto ás suas pro-

priedades, até mesmo na procedência anatómica, o que nos parece .ainda mais

varias constantes physico-chimicas, só sendo possivel af firmar com alguma pro-

babilidade de acerto a identidade chimica dos dois corpos quando não houver

divergência essencial. Seria igualmente erroneo seguir o caminho contrario, isto

é, comprehender como idênticos corpos dotados de propriedades physico-chimicas

muito differentes.

A incerteza ainda hoje reinante em sorologia relativamente ás relações de

parentesco chimico porventura existentes entre os compostos albuminosos do

278

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

soro que apresentam estabilidade variavel em relação a saes neutros, tem por

causa principal o facto de serem os resultados de pesquisas physico-chimicas, ora

levados em consideração demasiada, ora desprezados. A validade do grupamento

dos compostos albuminosos baseados nos vários methodos de floculação salina

é questão ainda não resolvida, não se sabendo si se trata de estabilidade va-

riavel das mesmas fracções ou de modificações de um mesmo composto albu-

minoso ou então si exprimem realmente a existência de corpos perfeitamente

distinctos, sob o ponto de vista chimico, que, no máximo, tenham origem bio-

lógica commum.

No presente trabalho propomo-nos a esclarecer este problema, baseado em

parte na literatura chimica e physico-chimica já existente e em parte em nossas

próprias experiencias, pesquisando o assumpto tão completamente quanto nos

permittirem os dados de que dispomos.

Passando revista á historia da sorologia normal, verificaremos que até a

primeira metade do século XIX apenas ha noticia de um corpo albuminoso,

denominado seralbumina. Foi Liebig, o notável chimico alemão, o primeiro

a observar que a addição de algumas gottas de addo acético ao soro dava logar

a uma turvação ligeira, mas sem duvida devida á albumina. Preoccupadissimo com

outros estudos, não teve Liebig occasião de dedicar maior attenção a esta obser-

vação, tendo, todavia, publicado suas experiencias, despertando a curiosidade de

Zimmermann sobre o problema. Este, em 1846, não só repetiu os trabalhos de

Liebig, como também os ampliou, tendo filtrado o precipitado, diluido forte-

mente o soro clareado em agua destillada e deixado longo tempo em repouso,

depois do que verificou apparecer ainda no soro nova turvação.

Os trabalhos dos dois pesquisadores não tiveram, porém, repercussão, o que

determinou que o medico escandinavo Panum, em 1851, redescrevesse esse phe-

nomeno, dando-o como novo. Segundo confessa, fez a observação por acaso,

juntando pequena quantidade de soro a um vidro com agua, surprehendendo-se

ao ver que o conteúdo se turvava, dando deposito amarello esbranquiçado. No

fim de 24 horas filtrou o deposito facilmente, verificando ser elle solúvel em

alcali diluido, acido acético diluido e bicarbonato de sodio, ao passo que se

mostrara insolúvel em álcool, ether e agua destillada. Concluiu, pela consistên-

cia do deposito e pelas propriedades de solubilidade, tratar-se seguramente de

um composto albuminoso ainda desconhecido. Não externou a principio um

juizo preciso sobre a natureza desse composto albuminoso, considerando varias

possibilidades, como a albumina de Mulder, então conhecida por bioxydo de

proteina, o albuminato de sodio, a caseina. Mais tarde, baseado em pesquisas

mais apropriadas, concluiu tratar-se de uma qualquer modificação da albumina,

dando certeza de ser um composto independente, ao qual chamou sero-casei-

na (4). Panum determinou, ao mesmo tempo, que a quantidade de precipitado

de um soro diluido augmenta consideravelmente quando se acidifica a diluição,

Dionysio vos Kloblsitzky — Fracções albttminosas 279

quer pela addição de algumas gottas de acido acético, quer fazendo passar por

elle uma corrente de CO 5 .

Este phenomeno foi observado e descripto quasi ao mesmo tempo por

Scherer e Denis (5) que, completando e controlando os trabalhos do ultimo

relativos ás albuminas vegetaes, applicaram essas verificações ao soro. A des-

coberta de Pa num foi em primeiro logar examinada por Schmidt, que lhe

ampliou as pesquisas, verificando que o precipitado se redissoive quando o

anhydrido carbonico (CO 5 ) é expulsado por um gas inerte, como o azotico.

Apoiando-se na opinião de Lehmann (7), tomou Schmidt esta albumina por glo-

bulina de Berzelius (Berzelius deu o nome de globulina á albumina dissolvida,

de caracter albuminoide, extrahida por pressão do coagulo sanguineo (8)), dando-

lhe o nome de substancia fibrinoplastica, para exprimir a relação, na sua opinião

existente, entre esta albumina e a formação da íibrina.

Alguns annos mais tarde, verificou Kuehne (9), ao controlar os trabalhos

de Panum, que os corpos albuminosos obtidos com o processo deste nenhum

papel representam na formação da fibrina, sendo, portanto, completamente

erradas as denominações de corpos albuminosos de Berzelius ou substancia fi-

brino-plastica. Kuehne tinha os corpos albuminosos precipitáveis pelo anhy-

drido carbonico e pelo acido acético na conta de duas fracções diversas, recom-

mendando para o primeiro a designação de globulina ou paraglobulina e para

o ultimo a de albumina to de sodio. Interpretação idêntica foi a de Eichwald ( 10),

que dividiu os corpos albuminosos do soro em tres grupos, distinguindo a sero-

caseina, a seroglobulina e a seralbumina, e acceitando, portanto, tal como Kuehne,

duas fracções de globulina. O proprio Panum adoptou o ponto de vista unitário

em relação ás fracções de globulina, alliando-sc mais tarde á sua interpretação

Heynsius (11), Bruecke (12) e mesmo Kuehne. Conseguiram os citados aucto-

res demonstrar, por um lado, que muitos dos casos de formação de fibrina no

soro correm por conta de impurezas e que o soro puro não contem substancia

geradora de fibrina; e, por outro lado, que a pesquisa das restantes proprie-

dades (principalmente de solubilidade) da paraglobulina de Kuhne e do albu-

minato de sodio não revelava entre os dois differenças esscnciaes, o que os

levou a considerar a globulina como substancia una.

Os trabalhos assim originados e os debates dclles decorrentes despertaram

logo o interesse por essa fracção labil do soro, determinando na literatura o

apparecimento de um numero sempre crescente de trabalhos sobre este assumpto.

Dos trabalhos mais antigos só consideramos, porém, necessário citar os que apre-

sentarem importância basica para o ponto de vista hoje acceito.

Entre os últimos figura o trabalho de Heynsius, que, em sua communicação

acima citada, demonstrou não ser possivel, pelo processo de Panum, separar

do soro todas as substancias que não apresentem caracter albuminoso, ficando

sempre uma parte, precipitavel pelo chloreto de sodio saturado. Considerou as

280

Memórias do Inslituto Butantan — Tomo VI

duas fracções como uma única, descrevendo-a sob o nome de globulina. Digno

de nota é também o trabalho de Weyl (13), não só porque apresentou o primeiro

processo de purificação da albumina de Panum, como também porque originou

o nome, hoje de emprego generalizado, de seroglobulina, dado a essa albumina,

Weyl fora discipulo de Hoppe-Seyler (14), que denominava globulmas a todos

os corpos albuminoides que se precipitam á diluição com agua destillada, vol-

tando a dissolver-se em solutos alcalinos neutros.

E’ dessa epoca (1870-1880) que datam os methodos ainda hoje applicados

na separação das globulinas e albuminas. Em 1878 Hammarsten (15) intro-

duziu, para a precipitação da globulina pelo sal, a solução saturada de sulfato

de magnésio e, oito annos mais tarde, publicou Kauder (16) as experiencias

de Hofmeister sobre o fraccionamento pelo sulfato de ammonio, processo este que

constituiu o ponto de partida para as numerosas pesquisas emprehendidas por

um grupo de investigadores, os quaes proseguiram no fraccionamento da sero-

globulina.

Mais um adiantamento na pesquisa da globulina foi a verificação de que

pela dialyse é precipitada apenas uma parte da mesma com sulfato de ammonio

parcialmente saturado, ou com sulfato de magnésio saturado, de maneira que

a insolubilidade na agua, considerada propriedade característica da globulina, é

observada somente numa parte delia (Hammarsten (15), Burckhardt (17), Mar-

cus (18), etc.). Hofmeister denominou euglobulina a parte precipitada pela

dialyse e pseudoglobulina a parte solúvel. Hammarsten accresccntou, ás duas

fracções que se podem precipitar com o minimo de 33% e o máximo de 505o

de soluto de sulfato de ammonia saturado, uma terceira, a íibrinoglobulina,

nome pelo qual se comprehcnde o corpo albuminoso residual das soluções de

fibrinogeno terminada a formação da fibrina. Deu-se-lhe o nome de fibrino-

globulina por possuir as propriedades do fibrinogeno (isto é, ser precipitavcl com

28-33% de soluto de suliato de ammonia), assemelhando-se, porém, mais á glo-

bulina, quanto a não formar fibrina.

A classificação indicada por Hofmeister determinou a separação das glo-

bulinas cm grupos distinctos. A divisão mais generalizada comprchendc — não

inclusa a íibrinoglobulina — tres grupos ( Docrr-Berger (20), Halliburton (21),

Kimura (22), Porges-Spiro (23), etc.). O primeiro, constituido pela parte

precipitavcl em 30-36% de soluto de sulfato de ammonio saturado; o segundo,

em 37-43% e o terceiro, cm 44-50% do mesmo soluto. A primeira pane cor-

responde approximadamente á euglobulina precipitada pela dialyse; a segunda e

a terceira diíferenciam-se ordinariamente por pseudoglobulina I e pseudoglobu-

lina II. Alguns auctores, entre elles B. Burckhardt (17), admittem ainda como

grupo distincto a parte precipitada pela passagem da corrente de anhydrido car-

bônico ou em soluto de sulfato de ammonio saturado a 30%, denominando-a

paraglobulina. Existiriam, portanto, quatro especies de globulina, a saber: para-

2 3 4

5 6 7

I -I 1 -I 1 >w/ I

11 12 13 14 15 16

Dionysio von Klobisitzky — Fracções albuminosos

281

globulina, predpitavel por diluição, corrente de CO 2 ou em 30 % de soluto

saturado de sulfato de ammonio; euglobulina, predpitavel pela dialyse ou em

30 -365o de sulfato de ammonio; pseudoglobulina I, predpitivel em 37-43% de

sulfato de ammonio saturado e, finalmente, pseudoglobulina II, predpitavel em

44-50% de sulfato de ammonio ou em soluto de sulfato de magnésio saturado

(reacção neutra).

Essa divergência do primitivo conceito monistico de Panum não se res-

tringiu ás globulinas, pois no decorrer do tempo um numero sempre crescente

de pesquisadores pôs em duvida também a unidade da seralbumina. O primeiro

a adoptar a classificação das seralbuminas em grupos foi Halliburton (21).

Chegou á conclusão de que na seralbumina crystallizada pelo methodo de Gruber,

quanto a seu comportamento na coagulação pela calor, se podem distinguir tres

grupos : seralbuminas Alpha, Beta e Gamma, coagulando respectivamente a

70-73°C, 76-78°C e 82-85"C. Hoje não podemos mais admittir como exactos os

resultados de Halliburton, visto como em sua epoca não existia ainda o processo

da dialyse, pelo qual se obtêm solutos albuminosos completamente livres de sal e o

sal exerce influencia considerável sobre a temperatura de coagulação. A unidade da

seralbumina hoje em dia é contestada, não em face das experiências de Halli-

burton, mas sobretudo pela observação de que é impossível quantitativamente

crystallizar-se a seralbumina. Este corpo assemelha-se á ovalbumina, isto é,

póde-se obter a crystallização de uma parte apenas, ou sejam no máximo 40%

do material primitivo, segundo as experiências de Robertson (24), Dahi a dis-

cordância sobre si a seralbumina crystallizavel é ou não, sob o ponto de vista

chimico, idêntica á não crystallizave!.

Ao lado dessas duas questões, a unidade da seralbumina c a da seroglo-

bulina, surgiu ha cerca de 10 ou 15 annos uma terceira, sobre a possibilidade

da transformação da albumina cm globulina ou vice-versa, na corrente sanguinea

ou in vitro. Xo decurso de experiências clinicas, tacs como pesquisas de immu-

nidade, fez-se frequentemente a observação de que a quantidade do corpo albu-

minoso, que pelo seu comportamento na floculação de sulfato de magnésio ou

sulfato de ammonio deve ser incluido entre as globulinas, augmenta considera-

velmente. Em parte dos casos [Locbncr (25), Galchr (26), Gussio (27)] dá-se

es'c accrescimo de globulina sem o augmento do conteúdo total de albumina.

Seria, portanto, natural a supposição de que nesses casos a albumina se con-

verte em globulina, dentro da corrente do sangue. As analyses chimicas provam,

como veremos, que as globulinas e as albuminas são corpos albuminosos

distinctos. E\ pois, de importância capital a questão da transformação das

albuminas em globulinas, pelo que tratarei desse assumpto em primeiro logar.

— O modo mais racional de encarar a questão c começar pela comparação

das experiencias physicas c physico-chimicas relativas á albumina e á globulina,

pois esse processo nos permitte determinar immediatamente si a albumina e a

282

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

globulina são apenas modificações do mesmo corpo albuminoso ou si realmente

constituem corpos distinctos sob todos os pontos de susta.

Desejo ainda fazer notar que se trata, sempre que não houver indicação

em contrario, de corpos albuminosos obtidos de sangue de cavallo, entendendo-

se por globulina sempre a globulina solúvel em agua, isto é, a mistura das pseu-

doglobulinas I e II.

As analyses chimicas — conforme se evidencia pela tabella I — não são,

infelizmente, numerosas, nem recentes, porém, visto como os resultados coin-

cidem exactamente, podemos consideral-os positivos.

TABELLA I

Composição porcentual dos corpos albuminosos

C H

N S O

Autor

Scroglobulina

5Z71 7.01

15.85 1.11 23.52

Hammarstcn (28)

Scralbumina

53.04 1 7.10

15.71 1.86 I 2229

Michel (29)

Scralbumina

53.05 6£S

16.01 1.71 ! 2229

Starkc (30)

Scralbumina crystallizada .

53.06 7.05

15.60 1.89 22-51

Maxiraowhsch (31)

Pela comparação dos dados verificamos primeiramente que a composição da

parte crystallizavel da scralbumina coincide com a da parte não crystallizavcl.

Confrontando os resultados relativos á globulina e á albumina, encontra-se

differença apenas quanto ao teor de enxofre, o qual está seguramente alem do

limite dos erros analyticos.

Uma notável differença entre a globulina e a albumina foi encontrada também

por auctores que examinaram o conteúdo de acido aminado desses dois corpos.

A tabella abaLxo é constituída pelos resultados de auctores diversos, porque o

isolamento dos vários ácidos aminados é um processo tão difficil e moroso que

toma quasi impossível a determinação numa substancia albuminosa de mais

de um ou dois desses corpos.

2 3 4

5 6 7

' V—' — J — -I 1 -I — I I

11 12 13 14 15 16

Dionysio von' Klobcsitzky — Fracções albaminosas

283

TABELLA II

Porcentagem de acido aminado contido nos corpos albuminosos

Acido aminado

Seroglobulina

Seralbumina

Auctores

Glycocolla ....

3.5

0.0

Alanina

Valina

traços

Leucina

18.7

20.0

Phenylalaninr. . . .

3.8

3.1

Tyrosina

Abdcrfialdcn (32) (35)

Scrina

0.0

0.6

Abderhalden c

C >-5 ti na

1.5

Samucly (33)

Moerner (34)

Prolina

2.8

1.0

Addo asparaginico .

3.1

Acido glutaminico .

8.5

Histidma

3.4

Arginina

3.9 5

4.9

Lysina

8.95

13.2

Em vista, não eó de serem os resultados apresentados por auctores diversos,

mas terem estes também trabalhado com methodos differentcs, deve-se attribuir

importância somente a uma divergência pronunciada. Ha quatro pontos de dis-

cordância que se devem considerar: 1. A globulina contem glycocolla, ao passo

284

Memórias do Instituto Gutantan — Tomo VI

que na albumina este acido, o mais commum dos ácidos aminados, não se en-

contra em absoluto. 2. A globulina contem muito menos cystina do que a

albumina, o que está de accordo com os resultados das analyses elementares,

pois tanto a globulina como a albumina só contêm enxofre em forma de cystina

[Mõmer (36)]. 3. A seralbumina é muito mais pobre em Drolina do que a

soroglobulina. 4. A globulina contem 30% menos lysina que a albumina.

Esta ultima indicação foi confirmada pelas experiencias em que era determi-

nada apenas a quantidade do nitrogênio que apparecia em diversas ligações [Ki-

mura (22), Thomas e Lock (23)].

Alem disso, verificou-se ainda que na albumina ha mais nitrogênio titu-

lavel com formol, segundo Sõrensen (38), do que na globulina, pois o quo-

ciente do nitrogênio total e do nitrogênio titulavel com formol é na primeira

13, na segunda 21 [Obermayer e Wilhelm (39)].

Diversos pesquisadores estudaram a questão da fixação de halogenio e

cálcio desses corpos albuminosos, indicando suas experiencias que deve existir

uma differença chimica entre soroglobulina e soroalbumina. A globulina, por

exemplo, pode ligar cerca de 25% menos iodo do que a albumina [Blum (40)].

Blum e Strauss (41) mostraram que ha differença, não só relativamente á

quantidade total do iodo combinado, mas lambem quanto á distribuição do

iodo. No caso de iodização completa (em meios alcalinos), a soroglobulina liga

8,3% de iodo, dos quaes 6.64% passam para o annel de tyrosina e 1.66%

tomam o logar de um hydrogenio d 0 grupo NH 2 . Na albumina a quantidade

total de iodo é de 8,96%, sendo 223 %, quasi 50% mais do que na globu-

lina, ligados ao grupo NH 2 . Quanto á fixação de cálcio. Csapó e Faubl (42)

verificaram que 100 grs. de seroglobulina podem ligar 37,5 mgrs. e 100 grs. de

seralbumina 78.0 mgrs. de cálcio, no máximo.

Rclativamente ao peso molecular, podem-se considerar como os mais exa-

ctos os resultados de Svedberg c Sjõgren (43), que usaram nas suas expe-

riencias o ultracentrifugador de Svedberg (44). Segundo as observações dos

citados auctores, o peso molecular de seralbumina com pH 4,8 obtido com

soluto tampão, c de 67 500, o de seroglobulina, com pH de 5,5, de 103 800.

Ha differença entre os corpos albuminoides também quanto á temperatura

de coagulação. A temperatura de coagulação maxima de seroglobulina con-

tendo 5-10% de chloreto de sodio, segundo verificação de Hammarsten (45),

c de 75°C; a da albumina, nas mesmas condições, é de 85°C. Spiegel-Adolí

(46) observou que a seroglobulina coagulada pelo calor perde definitivamente

a solubilidade na agua, o que não sc dá com a seralbumina.

Determinou-se também por repetidas vezes a capacidade rotativa óptica

desses dois corpos albuminosos. Os resultados, entretanto, são contradictorios,

devido á difíiculdade da obtenção de solutos perfeitamente homogêneos, trans-

parentes. Só soluções fortemente diluídas, de 2-3%, são bastante homogêneas

para se poderem usar na determinação da capacidade rotativa. A rotação ma-

Dionysio von* Klobcsitzky — Fracções albuminosos

285

xima de taes soluções é de 1-2°, o que naturalmente não permitte uma leitura

exacta, podendo, pois, occorrer graves erros. Das medições recentes as mais

precisas parecem ser as de Hafner (47), que determinou a rotação a 20,5®C,

á luz vermelha, amarella, verde e azul. Segundo suas indicações, a differença

da capacidade rotativa especifica á luz azul e á luz vermelha é, na seroglobu-

lina, 78°, 5, o quociente sendo de 2,1, ao passo que na seralbumina essa diffe-

rença é de 66°, 5 e o quodente 2,3.

A refracção da globulina é também mais intensa do que a da albumina,

conforme demonstrou Schretter (48). Em relação á absorpção, Svedberg e Sjõ-

gren provaram não ser igual nos dois corpos albuminosos, visto como a curva

do coefíiciente de absorpção da globulina é muito mais ascendente do que a da

albumina. Tratando-se de globulina, os coefficientes de absorpção máximo e

minimo, isto é, o valor do log 1/1 1 era, respectivamente, 1,35 e 0,63, enquanto

para a albumina era de 0,68 e 0,45.

O facto, ha muito conhecido, de que esses dois corpos dif ferem conside-

ravelmente também pelos seus pontos isoelectricos, foi ultimamente confirmado

por Pauli e Valkó (49), que fizeram as determinações em corpos albuminosos

electrodialysados, sendo sua pureza controlada com repetidas medições de con-

duetividade. Segundo estes auctores, o ponto isoclectrico da globulina corres-

ponde ao pH 5,5, o da albumina ao pH 4,99.

Relativamente á conductividade especifica, concentração dos iões de hy-

drogenio, condições de dissociação, viscosidade e comportamento da globulina c

da albumina para com saes neutros, os quadros abaixo apresentam os resul-

tados por mim obtidos. Os dados referem-se, quando não houver indicação

espedal, a solutos absolutamente livres de sal, obtidos pela electrodialyse (50).

TABELLA III

Conductividade especifica dos corpos albuminosos

Concentração

percentual

Conductirida-

de reciproca

C H

Pseudoglobulina

151

1,90.10-*

8.90. 107

Pseudoglobulina

277

326.10*

1.09.10*

Albumina do soro

1.72

3.42.10*

8.12.10*

Albumina do soro

277

3.98.10*

924.10*

286

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

TABELLA IV

Viscosidade relativa das substancias albuminosas do soro (a 25’C)

Concentração

percentual

Pseudoglobulina

1.0008

PscudoglobuUna

1.1886

Albumina do soro

1.0590

Albumina do soro

1.1139

Ha unia difíerença bem pronunciada entre os dois corpos albuminosos

quanto ás constantes de dissociação calculadas pela conductividade, velocidade

de movimento, concentração dos iões de hydrogenio e concentração molecular,

pois a globulina é mais fortemente dissociada numa solução a 3%, correspon-

dendo a parte dissociada (*) a mais de 80% da concentração total.

Sendo a concentração superior ou inferior a 3%, a dissolução (percentual)

diminue; assim, p. ex., numa solução de 0,95% são dissociados apenas 34% e

55% numa solução de 5,49%, ao passo que na albumina do soro a diminuição

está cm razão directa do augmento da concentração total. Albumina de soro

a 0,49% dissocia 43% ; a 1,72%, 20% e a 3.33%, pouco menos de 15%. Quanto

á diversa sensibilidade em relação a soluções salinas neutras posso estabelecer

o seguinte (51): para se produzir numa solução albuminosa constituida por

euglobulina e pseudo-globulina e contendo 0,9% de XaCl (cuja concentração

era graduada de 3,69 a 5,39%, por meio de 2,5 de soluções salinas normaes,

cm temperatura ambiente, dentro de uma hora), uma turvação filtravel, são

precisos 2,2 cc. de n/30 II NO 3 ou HO. usando-se Xa J S0 4 0,0, XH 4 S0 4 0,3,

XaCl 0,5 c MgSO 4 .

(*) Os cálculos são baseados na theoria de Pauli, da dissociação dos corpos albu-

minosos. A concentração dos iões de hydrogenio foi considerada como causada totalmente

pelas partes ionizadas e a quantidade dos iões ampholyticos calculada por meio da formula

K”.1000

A — 4- A + = — » sendo K” = K-K\ 10 = velocidade de movimento do ião de

10 + 10

C H 360.

albumina. K' = 360 = som ma da velocidade de movimento do ião de hydroge-

1000

nio (350) com a do ião de albumina (10).

SciELO

Dioxysio von Klobcsitzky — Fracções albuminosax

287

Experiências festas pelo mesmo methodo com albuminas de soro mostra-

ram que Na 2 S0 4 flocula sem addicionamento de acido, NaCl após accrescimo

de 0,6 (XH 4 ) s S0 4 de 1,S cc.. ao passo que que MgSO 4 era ainda inactivo ao

addicionamento de 3,0 cc. de addo.

Após os dados acima, que indicam claramente a diversidade, sob todos os

pontos de vista, da albumina e da globulina do soro, consideremos os factos

experimentalmente provados e geralmente apontados como indicios da unici-

dade dos dois corpos albuminosos.

Segundo Moll (52), um dos primeiros pesquisadores que procurou provar

a identidade da albumina com a globulina, tanto os clínicos, como os theoristas,

fundam suas affirmações em que ou a albumina é mais labil para com saes

neutros, ou a chamada euglobulina é solúvel em agua. A alterada sensibilidade

da albumina para com os saes neutros não pode, entretanto, constituir argu-

mento contra as determinações chimicas, physicas e physico-chimicas, visto de-

pender a floculação pelos saes de um colloide, em primeiro logar, do grau da

dispersão. Quanto mais dividido for um colloide lyophilo, tanto maiores devem

ser as concentrações do sal afim de ser destabilizado. Si bem que não conhe-

çamos ainda a sensibilidade do mecanismo da actuação do sal, está íóra de

duvida que ao menos parcialmente se baseia na deshydratação, isto c, na sub-

tracção do meio solúvel, ou seja da agua. Quanto mais íraccionado for o

corpo albuminoso, maior é sua superfície, cctcris faribus a energia superficial

com que fixa a agua, e tanto mais difficil se toma a deshydratação. O facto,

porem, de a albumina destabilizar-se a qualquer intervenção pela acção de con-

centrações salinas menores do que as gcralmentc usadas ou antes de qualquer

intervenção, indica apenas que na sua dispersão occorreu alguma alteração, isto

é, alguma impureza. A floculação do sal não é, de resto, um methodo perfeito

para separação das globulinas e albuminas, por ser muito provável que á addição

de um sal, p. ex., sulfato de ammonio meio saturado, por maior que seja o

cuidado empregado, se instabilize uma parte de albumina, ficando ao mesmo

tempo uma pequena quantidade de globulina em solução. Esta circunstancia,

a meu ver, explica os pequenos erros de analyse. Posso provar esta minha

affirmação pelo seguinte: é da natureza dos corpos colloidacs que o tamanho

das partes dispersadas, mesmo quando nada influe sobre a solução, se altere

constantemente, dentro de certos limites. E\ portanto, perfeitamente plausível

que numa solução de globulinas e albuminas haja também partículas de glo-

bulina que no momento de ser addicionado o sal sejam mais finamente disper-

sadas do que a media geral, podendo simultaneamente existir na solução

particulas de albumina cujo grau de dispersão seja também menor do que o

da maioria das particulas de albumina. Addicionando-se a um soro uma con-

centração salina que é boa concentração de limiar para instabilizar a globulina,

as partes de globulina finamente dispersadas não se destabilizam, mas sim as

particulas de albumina mais grosseiramente dispersadas. A concentração salina

288

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

necessária á instabilização determina apenas o grau de dispersão. E\ entre-

tanto, erroneo concluir-se que a diminuída estabilidade é indicio de uma trans-

formação chimica. Na floculação com sulfato de ammonio devemos ainda levar

em consideração o modo de preparar a solução de (NH 4 ) 2 SO 2 . O (NH 4 )SÜ 4

decompõe-sc ao calor (a solução acidifica), podendo-se, pois, considerar so-

mente os resultados obtidos com soluções saturadas em temperatura am-

biente. «

As experiencias de Fanconi (53) provaram cabalmente que é erro acredi-

tar-se numa transformação da albumina só pelo facto de se destabilizar com

maior facilidade. Este auctor conseguiu preparar globulina artificial com uma

parte de albumina obtida de soro de sangue, pelo methodo de Moll (52) modi-

ficado por Ruppel (54), e que consiste essencialmente na alcalinização. Pela

comparação de suas propriedades physicas com as da albumina preparada com

o mesmo soro e com a globulina natural, verificou que eram iguaes ás da

globulina natural somente quanto á floculação de sulfato de ammonio, sendo as

demais propriedades diversas das da globulina natural e semelhantes ás da

albumina. •

Alguns auctores relatam casos de transformação da albumina em glo-

bulina, nos quaes a albumina floculada era sujeita a qualquer influencia, p. ex.,

por meio de ácidos gordurosos [Jarisch (55) e Katsumura (56)] ou sendo

electrodialysada a óO^C (Gutzeit (57) etc.] (58). Julgamos desnecessário

provar que por tão sensiveis influencias são alterados, não só a dispersibilidade,

mas também outras propriedades dos corpos albuminosos. A circunstancia de

não terem os auctores observado sinão a alteração da precipitação é devida ao

facto de não haverem examinado outras propriedades da “albumina convertida”.

Também os casos, bastante frequentes, de augmento da globulina in vivo

(moléstias infcctuosas, inanição, immunização, irradiações, etc.) ficou em parte

provado que são motivados unicamente pelo augmento do grau de dispersão

[Knipping c Kowitz (59)]. Também nos casos cm que — como, p. ex., num

certo estado das doenças infectuosas — existe de facto um augmento de globu-

lina, isso não se traduz necessariamente por uma transformação da albumina,

pois é muito mais lógica a explicação de que nesses casos as cellulas do orga-

nismo — por um motivo que ainda desconhecemos — synthetizam e fazem

passar para a corrente sanguínea maior quantidade de globulina do que em

condições physiologicas.

Em resumo, posso determinar que a albumina e a globulina são corpos albu-

minosos chimica e physico-chimicamente diversos e que em absoluto não se

convertem um no outro, quer in vitro, quer in vivo, sendo errôneas todas as

conclusões nesse sentido, por se basearem, ou em resultados experimentaes que

permitem uma conclusão apenas sobre a modificação do grau de dispersão, ou

em experiencias nas quaes a molécula soffrera alguma alteração profunda.

4 5 6 7

' V— ' I J 1 -I 1 >w/ I

11 12 13 14 15 16 17

Dioxysio von Klobusitzky — Fracções albutninosas

289

A questão da identidade das albuminas de soro crystallizavel e não crys-

talüzavel não pode ainda ser resolvida de modo satisfactorio, por não dispormos

por ora de resultados comparativos precisos sobre albumina crystallizada e não

crystallizada preparadas do mesmo soro. As analyses chimicas de Maxtmo-

vitsch a que acima me referi não indicam differença alguma entre as duas

modificações da albumina. Alem disso, o facto de a albumina do soro, ao

contrario da hemoglobina, só se crystallizar na presença de uma considerável

quantidade de sal e de serem as formas de crystaes muito differentes, indica

que a albumina do soro crystallizada não é uma substancia pura, mas forma

com o sal qualquer combinação, provavelmente de adsorpção. E’ por esse

motivo que nessa questão não posso attribuir importância á crystallização. As

experiencias feitas com a crystallização [Wichmann (60), Gürber (61), Michel

(62)] não deram resultados regulares, não constituindo prova para a plurali-

dade da albumina do soro. As analyses hoje á nossa disposição, determinações

physico-chimicas, etc., ao contrario, evidenciam a unidade da albumina.

Seguindo o programma estabelecido, trataremos agora da unicidade das

fracções de globulina. Nessa questão o ponto mais discutido é a posição desta-

cada da euglobulina, pelo que iniciaremos por ahi a nossa exposição.

Sobre as diversas fracções da globulina conhecem-se ainda menos dados do

que sobre a globulina total. O quadro a seguir apresenta alguns dos elementos

conhecidos.

Conforme essa tabella, somente Porges e Spiro encontraram differenças

notáveis, mas também estas apenas relativamcntc ao conteúdo de C c N das

duas ultimas fracções. As indicações de Kimura, que não encontrou grandes

differenças, coincidem com os resultados das analyses de fracções de globulina

de Hartley (63) e Woodmann (64). Alem disso, Woodmann determinou

ainda a actividade óptica da euglobulina e pseudoglobulina, sem encontrar diffc-

rença entre as duas fracções.

TABELLA V

Concentração do

sulfato de immo-

Auctor

nio percentual

30-37

5168

7.65

16.03

1.13

37-44

50.48

7.78

15-50

0.98

Porges e Spiro (23 í

44-50

47,52

8.14

14.40

0.92

25-29

5US

7.56

16.19

128

30-36

5122

733

15.98

125

37-43

50.53

7.48

15.90

121

Kimura (22)

44-50

50,15

7.53

1523

1.19

290

Memórias do Instituto Butantan

Tomo VI

E’ compleíamente errada a separação da globulina em euglobulina e pseudo-

globulina de conformidade com a precipitação pelo sulfato de ammonio. Todas

as causas de erro na separação das globulinas e albuminas, de que adma já

tratámos mais detidamente, desempenham papel muito mais importante, porque

a dispersão da globulina é muito mais variavel do que a da albumina, pois a

globulina em si já é um corpo albuminoso bem mais labil do que a albumina.

Pelas minhas experiencias que, no tocante á precipitabilidade da albumina e da

globulina, foram feitas com differentes saes neutros e CH diverso (65), ficou

bem evidente que a globulina é muito mais sensível á variação do CH do que a

albumina, o que é indicio de que existe na solução uma verdadeira escala de

proporções da globulina.

A quantidade de globulina precipitada por uma certa concentração da solução

salina é, por conseguinte, muito mais determinada pelo acaso do que a separação

de albumina e globulina. A separação dos saes não constitue, pois, uma prova

para a diversidade da globulina e da albumina.

E’ muito mais convincente o argumento de a euglobulina ser insolúvel na

agua, ao passo que a pseudoglobulina, conforme se observa no quadro III,

possue uma conductibilidade que equivale quasi á da agua destillada. Electro-

dialysando-se uma solução de globulina precipitada com (NH 4 ) SO 4 saturada

a 50%, ella não se dissolve por completo, mas fica sempre uma parte do preci-

pitado de albumina que só se dissolve com o addicionamento de pequenas quan-

tidades de sal. Sou de opinião que é exacta a distineção das íraeções solúveis

e das não solúveis em agua, por ser a solubilidade uma propriedade caracte-

rística das ligações chimicas. O facto de na composição chimica e na activi-

dade óptica não terem sido encontradas differenças não pode ser considerado

um argumento tão importante que exclua a pluralidade dos dois corpos albu-

minosos, tanto mais quanto os resultados das determinações da actividade

óptica, como já ficou dito, são pouco seguros.

Segundo Hartley (66), também se póde dissolver a euglobulina na agua,

quando o soro houver sido extrahido pelo processo de Hardy e Gardiner (67).

Os resultados de Hartley, porem, não podem comprovar a solubilidade da euglo-

bulina na agua, pois não podemos considerar os corpos albuminosos assim prepa-

rados como naturaes. O processo consiste na precipitação dos corpos albumi-

nosos no soro por meio de álcool e ether, sendo o precipitado primeiramente

lavado com ether quente e depois seccado no vacuo sobre H*S0 4 . O fim destas

experiencias era originalmente a obtenção de corpos albuminosos livres de lipoi-

des. O corpo albuminoso precipitado com saes neutros adsorve uma parte dos

lipoides, os quacs, segundo diversos auctores [Mansíeld (68), Forssmann (69),

etc.], são muito difficeis de ser separados dos corpos albuminosos. Confir-

mou-se ainda que os lipoides são adsorvidos principalmente pelas globulinas.

Essa determinação — apesar de que nunca foi provado si as globulinas circu-

lantes no sangue adsorvem os lipoides ou não — fez com que alguns auctores,

Dionysio von Klobusitzky — Fracções albuminosos 291

como Sõrensen (70) e Hartley (66), considerassem as globulinas como com-

postos de corpos albuminosos e lipoides.

O passo seguinte seria examinar-se a parte precipitavel pela passagem da

corrente de CO*, a paraglobulina de Burckhardt, que forma uma parte do preci-

pitado de euglobulina. Sobre as propriedades physicas e physico-chimicas da

mesma não estamos ainda bem orientados, não me sendo, porisso, possivel dar

uma opinião sobre si este corpo albuminoso forma uma fracção unica, a

mais labil da euglobulina, ou si é um corpo albuminoso independente. E’ um

acido muito mais fraco do que a euglobulina, approximando-se também seu

ponto isoelectrico muito mais da reacção neutra do que o desta substancia. Esta

é a unica explicação razoavel do facto de até um acido tão fraco como o acido

carbomco lhe produzir a floculação. Seria de grande vantagem que se fizessem

experiendas mais aprofundadas sobre esse ponto.

Os dados de que hoje dispomos nos auctorizam apenas a considerar a euglo-

bulina, por ser insolúvel na agua, diversa da pseudoglobulina solúvel na agua.

A paraglobulina de Burckhardt — até prova contraria — só pode ser designada

como fracção da euglobulina.

O terceiro e ultimo problema é a questão da subdivisão da pseudoglobu-

lina. Sobre essa questão só temos a dizer que até hoje não ha prova nenhuma

que permita estabelecer-se definitivamente a pluralidade da globulina solúvel

na agua. Todos os argumentos apresentados a favor do grupamento da pseu-

doglobulina, como, p. ex., a alteração das differentes fracções nas moléstias

infectuosas, a distribuição diversa dos corpos immunes e anticorpos, etc., só

indicam uma modificação da dispersão, ou da homogeneidade da dispersão, mas

de maneira alguma a classificação chimica especifica. E’ de lamentar que só se

tenham feito muito poucas experiencias physico-chimicas sobre as fracções da

globulina precipitáveis em concentrações salinas diversas; essas, porém, como,

p. ex., no referido trabalho de Woodmann sobre a capacidade rotativa óptica ou

nas determinações de Rciner (71) relativas ao ponto isoelectrico, indicam todas o

contrario, isto é, a unidade da pseudoglobulina.

O enorme trabalho empregado na identificação deus corpos albuminosos do

soro só nos deram resultados positivos quanto á diversidade da globulina c da

albumina, contrariando, pois, o principio da transformação de um desses corpos

no outro. Em virtude dos resultados actuaes — si bem que pouco satisíactorios

— devemos considerar a pseudoglobulina e a euglobulina corpos albuminosos

differentes um do outro, mas a subdivisão tanto da pseudoglobulina como da

euglobulina em fracções chimicamente distinctas considero-a inexacta e desti-

tuída de fundamento. Com isto não quero, entretanto, dizer que a theoria do

grupamento mais minucioso seja de todo infundada e inútil, mas sou de opinião

que não se podem considerar as diversas fracções como globuiinas differentes

e independentes. Principalmente no isolamento dos corpos immunes o processo

do fraccionamento é utilíssimo, porque, segundo as experiencias praticas, os

292

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

corpos immunes são precipitados com as globulinas de proporções determinadas ;

assim, p. ex., esse methodo pode ser de grande utilidade e muito pratico na con-

centração dos corpos immunes. Não se deve, contudo, perder de vista que a

capacidade de adsorpção de um colloide depende prindpalmente da proporção de

suas particulas.

A ultima palavra na questão do fraccionamento das globulinas só pode

ser dita quando tivermos uma idéa precisa ao menos sobre o teor de acido

aminado de cada fracção.

BIBLIOGRAPHIA

1. Von Fthling, li. — Handwoerterbuch der Chemie. 1:875.1875. Editor: Vieweg et

Sohn. Braunschwcig.

2. Zimmtrmann, G. — Arch. für physiol und pathol Chemie und Mikroskipie III :197

et 299.1846.

3. Panum. P. — Arch. für path. Anat und Physiol. und für die klin. Medizin 111:251.1851.

4. Panum. P. — loc cit. 1V:17 et 419.1852

5. Dcnis (de Commcrcy), P. S.; Schtrer et Denis — Annalen der Chemie und Pharmak.

XL.1859.

6. Schmidl. A. — Arch. für Anat und Phyjiol. :428.1862 et Arch. für Physiol. VI :413.1S72.

7. Lrhmann — Lehrbuch der physiol. Chemie :359.1853. 2.* edição. Leipzig.

8. Rkhtl, Ch. — Dictionnaire de Physiol. VIII :206. 1907. Editor: Alean, Paris.

9. Kühnt — Lehrbuch der physiol. Chemie : 168-175 . 1860. Leipzig.

1C. Etchimld Jr„ E. — Bcitrãgc zur Chemie der gcwebsbildenden Substaruen (1) . 1873.

Berlim.

11. Htynsius, A. — Arch. für Physiol 11.1869.

li Hammarstcn, O — Ergebnisse der Physiol. L:330.19Q2.

13. Wtyl. Th. — Zeitschrift für physiol. Chemie 1:72.1877-78.

14. Hofft — Seyltr. E. — Handbuch der physiol Chemie :1926.1870. 3.* edição.

15. Hjmmarstcn. O. — Pflügers Archtv XVII :413. 1878.

16. Kiiudtr. G. — Arch. für exper. Pathol. und Pharm. XX:411.1886.

17. Burckhardt. E. — loc cit XVI :322.1884.

18. Morcut. E. — Zeitschr. für physiol Chemie XXVIII :559. 1899.

19. Hammarjtfn, O. — Pflügers Arch XXX :437. 1883.

20. Dotrr. R. tl Brrgtr, W. — Zeitschr. für Hyg. XCVI:191.19Z2.

21. Halliburton. IV. D. — J of Physiol. V .152. 1885.

21 Kimura, R. — Zeitschr. für Immunitãtsforsch. LVI :330.1928.

23. Purgrt tl Sfiro — Hofmeisters Beitr. 111:276.1903.

24 Robrrtson. Th. — J. of biol. Chemistry XIII :455. 4912.

Dionysio von Klobvsitzky — Fracções albumlnosas

293

25. Loebnrr, Ch. et Wreschner — Deut. Arch. für klin. Med. CXXVII :307. 1918.

25. Galrhr.. O. — Wiener Arch. für inn. Med. IX:379.1924.

27. Gujsio — Tumori X:1.1923.

28. Hammarstcn, O. — Pflügers Arch. XXII :431 .1880.

29. Michel. A. — Arbeiten der Würzburger physiol. — Med. Ges. N. Serie XXIX:117.1895.

30. Starke. K. V. — Mahlys Jahresb. XI:17.1881.

31 btnximoveitsch, S. — loc dt XXXI :34. 1902.

32 Abderhalden, E. — Zeitschr. für physioL Chctnic XLIV:17.1905.

33. Abderhalden, E. et Samuely. F. — loc. dt. XLVI : 193. 1905.

34. Hoerner, K. — Die chcm. Koostitntion der Eiweisskoerpcr. 1924. Trad. Matula. Edi-

tor: Steinkopff. Dresden.

35. Abderhalden, E. — Zeitschr für physioL Chemie XXXVII :495. 1903.

36 Sloemer. K. — loc. dt. XXXIV =207. 1901.

37. TUomas. K. et Kock. K. — Zeitschr. für physioL Chemie LXXXVII :74.1913.

38. Soermsen. S. P. L. — Bioch. Zeitschr. VII :43. 1907.

39. 0'oermayer, F. et Wühelm. R, — loc. cit. XXXVIII J31. 1912.

40. B:um, F. — Zeitschr. für physioL Chemie XXVIII -.288.1899.

41 Plum. F. et Strauss. E. - loc dt. CXII :111.1920 et CXXVII :199. 1923.

42. Csapó. 1. et Faubl. J. — Bioch. ZeiUchr. CL:509.1924

43 Svfdberg, Th. et Sjoegrcn, B. — J. Amer. Chcm. Soc L:3318.1928.

44. Svtdbtrg . Th. — Zeitschr. für physik. Chemie CXXVII :51. 1927.

43. Hammarsten. O. — Lehrb. der physioL Chemie :207-208. 1926. XI.* edição.

46. Spitgel-Adolf. M. — Die Naturwissenschaften. XXXIX :799. 1927.

47 Hafntr. E. — Biodi. Zeitschr. CLXV :424.1923.

48. Schrcttrr, G. — loc dt. CLXXVII J35 et 349. 1926.

45. Pauli W. et Valkó, E. — Die Elektrochcmie der Kolloide: 443.1929. Editor: Springer.

Wien.

50. ve» Khbusiisky. D. et Pauli. W.\ von Klobusitsky. D.; von Khbusitsky, D. et von

ifagyary, C. — a ser publicado no Bioch. Zeitschr.

51. von Klobusitoky. D. — Bioch. Zeitschr. CCXXIII :120.1930.

51 Koll. L. — Beitr. chcm. PhysioL und Path. IV:563.'1904 et VH-.311.1906.

53 Faneoni. G. — Biochem. Zeitschr. CXXXIX :32 1 . 1 923 .

54. p.upptl. W. G.; Omtslein, O.; Cari. J. et Lasch. G. — Zeitschr. für Hygiene

XCVII :183.1923.

55. Jarisch, A. — Pflügers Arch CXCIV:337.1922.

56. Katrumura — Kolloid Zeitschr. XXXII :173. 1921

57 Gutseit, K. — Deutsches Arch. für klin. Med. CXLIII :238. 1924.

58. Adlrr, E. — Plasma und Serum. in Bethc A. et von Bergmann. G. — Handbuch der

norm. und pathol. Physiol VI ( 1 ) :23 5-306. 1928. Editor: Springer.

59. Knipping et Koxtril: — Fortschritte auf dem Gebict der Roentgenstrahlen XXXI :660.-1913.

60 W ifhmann. A. — Zeitschr. für Physiol. Chemie XXVII.

61 Gürbff. A. — Sitzungsberidue der physik. chem. Gesellschaft ni Würiburg 1:43.1894.

61 Sthuls. V. — Abderhalden. E. Handbuch der bioL Arbeitsmethoden 1(8) :458. 1922.

Editor: Urban et Schwarienberg. Berlin et Wien.

63. Hartley, P. — Bioch. Joum. VIII :541. 1914.

64 Woodmann. H. E. — loc cit XV:187.1921.

65. von Klobusitaky. D. — Bioch. Zdtschr. CCIX :304.1929.

66. Hartley. P. — Brit J. Exper. Pathol. VI :180. 1925

67. Hardy, W. B. et Gardiner, S. — J. of Physiol XLI :180. 1911.

68. MansfeU. G. — Zentralbl. für Physiol. XXI :666. 1908.

VI V|

294

Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

69. Forssmann, J. — Bioch. Zeitschr. CXXI :180. 1921.

0. Sccrenscn. S. P. L. — CR. Trav. Lab. Carlsberg XI:15.1925.

71. Reibef. L. —

Bioch. Zeitschr. CXCI :158.1927.

(Trabalho da Secção de Physico-Chlmica do Instituto

Butantan, terminado em março de 1931 e publicado

cm alemão in KoUoidchem-Beihefte XXXII (7-13) ;

382-403.1931).

UM ELECTRO-ULTRAFILTRO MODIFICADO

POR

DIONYSIO vos- KLOBUSITZKY

542-67 : 621.332.9 : 612.393.12

UM ELECTRO-ULTRAFILTRO MODIFICADO

POR

DIONYSIO vox KLOBUSITZKY

A electro-ultrafiltração de Bechhold (H. Bechhold- «n Zschr. £. physik.

Qiemie LX:257.1907) que, como é sabido, dá rapida dialyse concentTando ao

mesmo tempo a solução, sendo, por isso, de grande utilidade num laboratorio

de chimica e de physico-chimica, tem para nós a desvantagem de ser feita com

apparelhos de porcellana Bechhold-Kõnig, somente fabricada na Alemanha. Isso

torna necessária a compra de peças sobresalentes ou, em caso de alguma que-

brar, a interrupção do trabalho por certo tempo. A primeira alternativa é muito

dispendiosa e a segunda atrapalha a pesquisa. Meu objectivo foi, portanto,

construir um clectro-ultra filtro com peças de uso e montagem fáceis.

Como orientação servi-me do electro-ultrafiltro de Bechhold, modelo grande,

com sucção numa só direcção. Usei como recipiente para a solução um cylindro

de vidro forte tendo um gargalo numa das extremidades. Este recipiente é

fechado com uma membrana de pergaminho amarrada por um barbante, afim

de evitar a entrada de agua, podendo-se, caso seja necessário, parafinar ou então

cobrir, com uma camada de uma mistura derretida de cera e colophonia, a

parte superior do pergaminho. No recipiente colloca-se uma vela de porcellana

de qualquer fabricante (*). Esta vela é toda vidrada com exccpção da parte

de baixo. E’ fechada com uma rolha de borracha contendo dois furos, num

dos quaes está ligado um dectrodo de platina, chegando ate o fundo e, no outro,

um tubo de vidro em forma de também chegando até o fundo. A parede

de baixo da vela é, como no recipiente de Bechhold-Kõnig, primeiramente embe-

bida numa solução a lOjb de collodio cm acido acético e depois endurecida c

lavada cm agua até desapparecercm todos os traços de acido. Assim ficam os

dois recipientes impermeáveis a colloides. Debaixo da membrana de perga-

(•) A* velai empregadas foram fabricadas e offerccidas a titulo de experiência pelo

»r. Ranzini (São Paulo), tendo cilas dado bons resultados. Assim, este Instituto só tem

a agradecer a gentileza desse industrial.

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Memórias do Instituto Butantan — Tomo VI

minho colloca-se um electrodo de prata; no recipiente de vidro, um agitador e

um thermometro, sendo todo o apparelho immerso numa vasilha contendo agua

destillada. Liga-se a uma corrente continua, no máximo de 110 Volts e 0,5

Ampères: o polo positivo, ao electrodo interno de platina; o polo negativo, ao

externo de prata. O tubo em forma de — 1 é ligado a uma trompa de agua. A

reacção do soluto que dialysa pode ser regulada pela intensidade da sucção

Quando o colloide contém electrolytos, precisa-se augmentar a distancia do ele-

ctrodo de prata á membrana de pergaminho, afim de evitar que aqueça e assim

coagule. No mais a manipulação, a especie de dialyse, a capacidade funccional

são iguaes ás do apparelho de Bechhold.

A montagem do apparelho pode ser vista no eschema annexo.

RESUMO

Descreve-se e figura-se um apparelho para electro-ultrafiltração, de uso e

montagem fáceis.

(Trabalho da Secção de Phyalco-chlmlca do Imtltuto

Butaotau, dezembro de 1931, a ler publicado em

lnglfi ln J. of Phyaícal Chemljtry XXXVI (U) .1932».