MUSEO CIVICO DI STORIA NATURALE

«GIACOMO DORIA »

VIA BRIGATA LIGURIA, 9 - 16121 GENOVA

PERSONALE SCIENTIFICO

Direttore - Dott. ROBERTO POGGI

Conservatore - Dott. GIULIANO DORIA

CONSERVATORI ONORARI

Dr.ssa GIANNA ARBOCCO - Zoologia

Dr.ssa LILIA CAPOCACCIA - Zoologia

Prof. Mario GALLI - Mineralogia

Sig. CARLO GALUPPO - Ornitologia

Prof. SALVATORE GENTILE - Botanica

Prof. SANDRO RUFFo - Zoologia

Prof. MICHELE SARÀ - Zoologia

Gli articoli pubblicati sugli Annali del Museo Civico di Storia Naturale “Gia-

como Doria” sono citati e recensiti sui principali repertori bibliografici, tra cui:

Zoological Record, BIOSIS Previews, Biological Abstracts, Abstracts of Ento-

mology, CAB Abstracts, Review of Agricultural Entomology, Review of Medi-

cal and Veterinary Entomology.

The papers published in the Annali del Museo Civico di Storia Naturale “Giaco-

mo Doria” are abstracted and indexed in the main bibliographic records, such as:

Zoological Record, BIOSIS Previews, Biological Abstracts, Abstracts of Ento-

mology, CAB Abstracts, Review of Agricultural Entomology, Review of Medi-

cal and Veterinary Entomology.

Si vedano nella 3* pagina di copertina le norme per gli Autori

ANNALI DEL MUSEO CIVICO

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“GIACOMO DORIA”

Volume XCVII

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ANNALI DEL MUSEO CIVICO

STORIA NATURALE

“GIACOMO DORIA,

PUBBLICATI PER CURA DI R. POGGI

VOLUME XCVII

GENOVA

ERREDI GRAFICHE EDITORIALI

2005

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Museo Civico Gruppo Speleologico Ligure DIP.TE.RIS

di Storia Naturale “ARTURO ISSEL” Università di

“G. Doria” - Genova 70° ANNIVERSARIO DELLA FONDAZIONE Genova

(1932-2002)

PRIMO CONVEGNO NAZIONALE

BIOLOGIA DEI GEOTRITONI EUROPEI.

GENERE SPELEOMANTES

Genova e Busalla (GE) - 26 e 27 ottobre 2002

A cura di

Sebastiano Salvidio, Roberto Poggi, Giuliano Doria

& Mauro Valerio Pastorino

Genova, 2005

COMITATO ORGANIZZATORE

Gruppo Speleologico Ligure “Arturo Issel”

Museo Civico di Storia Naturale “Giacomo Doria” - Genova

DIP.TE.RIS. - Università di Genova

COMITATO SCIENTIFICO

Prof. Benedetto Lanza (Presidente)

Prof. Augusto Ambrosi

Dott.ssa Rossana Brizzi

Dott. Giuliano Doria

Dott. Mauro Valerio Pastorino

Dott. Roberto Poggi

Dott. Sebastiano Salvidio

SEGRETERIA ORGANIZZATIVA

Dott. Fabrizio Oneto

Dott. Mauro Valerio Pastorino

Dott. Sebastiano Salvidio

CON IL CONTRIBUTO DI:

Regione Liguria - Assessorato Tutela del Territorio

Provincia di Genova - Assessorato al Patrimonio Culturale del Territorio

Ente Parco Antola

Comunità Montana Alta Valle Scrivia

Comune di Busalla

CON IL PATROCINIO DI:

Regione Liguria

Regione Piemonte

Provincia di Genova

Comune di Genova

Ente Parco Antola

Comunità Montana Alta Valle Scrivia

Comune di Busalla

Federazione Speleologica della Toscana

Societas Herpetologica Italica

Camera di Commercio, Industria, Artigianato e Agricoltura di Genova

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PREFAZIONE DEI CURATORI

Questo volume, edito all’interno della serie degli Annali del

Museo civico di Storia naturale “Giacomo Doria”, raccoglie la mag-

gior parte dei lavori presentati al “Primo convegno nazionale sulla

biologia dei geotritoni europei - genere Speleomantes” svoltosi sabato

26 e domenica 27 ottobre 2002 a Genova e a Busalla (GE).

Al Convegno sono state presentate, insieme al saluto introduttivo

di Benedetto Lanza, Presidente del Comitato Scientifico, a quello

di Mauro Valerio Pastorino, Presidente del Gruppo Speleologico

Ligure “Arturo Issel”, e al ricordo della figura di Issel da parte di

Roberto Poggi, Direttore del Museo “G. Doria”, 16 comunicazioni

scientifiche di argomenti assai diversi: biogeografia (1), sistematica

(2), genetica di popolazioni (3), fisiologia (1), parassitologia (1) ed

ecologia (8) intesa nel senso più ampio del termine. Nonostante le

differenti tematiche trattate, nessun contributo ha riguardato l’eto-

logia nel senso letterale del termine o la conservazione delle popo-

lazioni di geotritone; questi argomenti sono per ora piuttosto tra-

scurati dagli specialisti ma costituiscono temi sicuramente meritevoli

di considerazione e che in futuro rappresenteranno linee di ricerca

particolarmente interessanti.

Alcuni testi in esteso di lavori presentati al Convegno non sono

giunti ai curatori del presente volume e pertanto non sono stati pub-

blicati; di essi rimane comunque traccia nel fascicolo “Programma e

Riassunti” riprodotto dal Centro Stampa del DIP.TE.RIS. e depo-

sitato presso la Biblioteca del Museo “G. Doria” e presso il Centro

Servizi Bibliotecari - Biologia, Scienze della Terra e del Mare (CSB

- BSTM) dell’Università di Genova. Il fascicolo completo può

comunque essere scaricato gratuitamente dal sito della Soczetas Her-

petologica Italica (www.unipv.it/webshi/) che è stata fra 1 patrocina-

tori dell’iniziativa.

Al Convegno hanno partecipato numerosi specialisti provenienti

dall'Italia e dalla Repubblica di San Marino, personale di Enti di

vigilanza, studenti dell’ Università di Genova e delle scuole superiori

di Busalla, speleologi e semplici appassionati di anfibi o di storia

naturale. L’affluenza ha superato le più ottimistiche previsioni degli

organizzatori: 1 partecipanti sono stati 75 durante la prima seduta

del 26 ottobre svoltasi nell’anfiteatro del Museo “G. Doria” e 34

durante la seconda, tenutasi il giorno successivo a Villa Borzino. In

totale 84 persone hanno preso parte alle due giornate di studio: non

poche per un convegno interamente dedicato ai geotritoni, animali

di enorme interesse scientifico, ma pur sempre organismi a sangue

freddo poco noti al grande pubblico.

Tra le attività collegate al Convegno ci piace ricordare in modo

particolare la visita serale alla ristrutturata Stazione Biospeleologica

di S. Bartolomeo di Savignone, l’unico laboratorio sotterraneo inte-

ramente dedicato allo studio della biologia dei geotritoni nel loro

ambiente naturale. In questo sito hanno svolto la tesi di laurea alcuni

studenti di Scienze naturali e, negli anni, sono state condotte ricer-

che di livello internazionale che hanno fatto conoscere il Gruppo

“Issel” anche al di fuori dei confini nazionali. La messa in sicu-

rezza dell’ entrata, effettuata dal Servizio Mobilità della Provincia di

Genova, garantirà la continuazione delle ricerche sugli Speleomantes

e permetterà alla Stazione di diventare un centro facilmente visita-

bile dal pubblico.

Infine pensiamo che il Convegno abbia rappresentato un’impor-

tante occasione di incontro e di conoscenza, anche personale, e ci

auguriamo che tali occasioni possano ripetersi in futuro.

Ringraziamo gli Enti che hanno concesso contributi e patrocini

e tutti 1 partecipanti, assieme ai quali abbiamo trascorso due intense

giornate di studio.

Infine ci fa piacere ricordare con gratitudine anche gli esperti

che ci hanno aiutato a revisionare criticamente i manoscritti dei

testi pubblicati in questo volume, dedicando al Convegno parte del

loro tempo: Anna Bonardi (Milano), Augusto Gentilli (Milano), Lia

Paggi (Roma), Edoardo Razzetti (Pavia), Gennaro Salvidio (Genova),

Francesca Viazzi (Genova) e David Wake (Berkeley).

Il primo Convegno sulla biologia dei geotritoni resterà nella

memoria degli organizzatori come un “grande” piccolo evento; spe-

riamo che anche la sua traccia possa conservarsi a lungo con la

materia cartacea di questo volume.

Genova, settembre 2005

Sebastiano Salvidio, Roberto Poggi,

Giuliano Doria & Mauro Valerio Pastorino

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. Marco Scarel

. Giulio Gardini

. Riccardo Cattaneo Vietti

Augusto Gentilli

Francesco Surace

Régis Martin

Mauro Valerio Pastorino

. Giuliano Doria

. Lorenzo Repetto

. Enrico Buriola

. Luca Lamagni

. Mirko Ferretti

. Alessandra Pontremolesi

. Fabio Lento

. Giorgio Tarditi

. Anna Bonardi

. Roberto Sindaco

. Edoardo Razzetti

. Ezio Musante

. Roberto Poggi

. Paola Giorgio Lanza

. Lilia Capocaccia Orsini

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Chiara Benvenuto

Alessandra Lanza

Riccardo Jesu

Roberta Piombo

Dario Ottonello

Mara Calvini

Alessandra Ruggi

Fabrizio Oneto

Franco Bernini

Massimo Delfino

Raul Manenti

Christian Pastorelli

Paolo Laghi

Sandro Casali

Anna Sanna

Bianca Maria Uva

Roberta Cimmaruta

Bettino Lanza

Sara Rivero

Maria Luisa Tavano

Sebastiano Salvidio

Massimo Gigante

Federico Melodia

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Foto di gruppo di alcuni dei partecipanti al convegno, sulla scalinata d’ingresso del Museo Civico di

Storia Naturale “G. Doria”, Genova, 26.X.2002.

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SOMMARIO

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PASTORINO NI Vi. = Gruppo” tssel’*«igealicosstoria teo a

Pocci R. La figura! dii Arturo Issel (1842-1922). nev ee

Pocci R. - Note d’archivio sulla fondazione del Gruppo “Issel”.

DELFINO M., RazzeTTI E. & SALvIDIO S. - European

Plethodontids: palaeontological data and biogeographical

COSTCO EA LIONS CATIA L'oro SUA A i

LANZA B., CIMMARUTA R., FORTI G., BULLINI L. & NASCETTI

G. - Bianchi’s cave salamander, Speleomantes ambrosit

bianchi n. ssp. (Amphibia, Caudata, Plethodontidae).......

BurioLa E., PastorINo M. V. & Bona F. - Res Ligusticae

CCXLVII. Distoichometra italica n. sp. (Cestoda, Nema-

totaeniidae) parassita del geotritone europeo Speleomantes

wring i Aellern. 1058) citi tte sco. te, Sos ears teehee

Uva B. M., SturLa M. & Masini M. A. - Kidney and osmo-

regulation in Speleomantes genet (Temminck & Schlegel,

1335) dAtnphibla,Plethadontidaò) ua ateo aI,

CIMMARUTA R., ForTtI G., Lanza B. & NASCETTI G. -

Res Ligusticae CCXLVIII. The effects of Quaternary

glaciations on the genetic structure of Speleomantes

strinatit (Aellen, 1958) (Amphibia, Plethodontidae). ........

ForTI G., LANZA B., CIMMARUTA R. & NASCETTI G. - An ex-

periment of artificial syntopy ex situ between Speleoman-

tes italicus (Dunn, 1923) and S. ambrosti ambrosti (Lanza,

1955) (Amphibia. Pletthodontidag):. 0a sian

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123-133

Rucci A., CIMMARUTA R., Forti G. & NASCETTI G. - Prelimi-

nary study of a hybrid zone between Speleomantes italicus

(Dunn, 1923) and S. ambrosi (Lanza, 1955) on the Apuane

Alps, using RFLP analysis (Amphibia, Plethodontidae). ....

CASALI S., SUZZI VALLI A., BUSIGNANI G. & TEDALDI G.

- I costumi arboricoli di Speleomantes italicus (Dunn,

1923) nella Repubblica di San Marino (Amphibia,

bieodeni da aM ak ee Ns Ae mea RR.

LaGHI P., PASTORELLI C. & ScaraveLLI D. - Individual

pattern recognition of Speleomantes italicus (Dunn, 1923)

(mebibiatelhodentidtie eee kr ged vic sine» Laie

ONETO F. & SaLvipio S. - Res Ligusticae CCXLIX. Dati

preliminari sulla distribuzione delle prede di Speleomantes

strinatu (Aellen, 1958) nella Stazione Biospeleologica di S.

Bartolomeo (GE) (Amphibia, Plethodontidae). ..................

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D. - Spacing of Spe-

leomantes italicus (Dunn, 1923): application of a Geo-

graphic Information System oe I.S.) (Amphibia, Pletho-

GUO Nis ie line Aa

FORTI G., CIMMARUTA R. & NasceTTI G. - Behavioural re-

sponses to seasonal variations of autoecological parameters

in populations of Speleomantes strinatit (Aellen, 1958) and

S. ambrosti (Lanza, 1955) (Amphibia, Plethodontidae). ....

Pag.

135-144

142

153-160

161-168

169-177

179-192

PROLUSIONE

C'era una volta ... «un Re ! direte voi. No, sbagliate. C’era

una volta ... «un pezzo di legno !» Nemmeno ! C’era una volta, in

una fitta siepe di Boboli (a Firenze), una grata di accesso al sistema

di drenaggio del giardino una cui sbarra era piegata abbastanza da

permettere al sottoscritto, allora filiforme ginnasiale dodicenne, di

fare nel lontano 1936 le sue prime esperienze ipogee e di fondare la

“Banda del Buco”.

Erano tempi duri. Le condizioni economiche generali non erano

floride e gli spostamenti, anche modesti, non erano facili: per i più,

una bicicletta era allora quasi altrettanto irraggiungibile di una Fer-

rari al tempo d’oggi. Fu così che soltanto cinque anni più tardi, il

16 settembre 1941, riuscii finalmente a realizzare il mio sogno di

esplorare una vera grotta, precisamente la Spelonca delle Pille sui

Monti della Calvana, tra Prato e Firenze, il numero 1 della mia vita

e, guarda caso, anche il numero 1 del catasto speleologico toscano ...

E fu proprio lì che ebbi il coup de foudre per i geotritoni, inizio di

una infatuazione travolgente per quelli che, stante le loro caratteri-

stiche complessive, possono forse esser considerati i Vertebrati più

interessanti d’ Europa.

Essendo io fedele per natura, la mia passione si trasformò ben

presto in amore e nacquero così 1 primi frutti: lavori forse abba-

stanza ingenui, sì, ma che rappresentarono l’inizio di ben più com-

plesse ricerche sull'argomento, destinate a dare risultati di indubbio

interesse nei campi della genetica, dell’evoluzionismo, della sistema-

tica, della tassonomia, della parassitologia, dell'ecologia, dell’etologia

e della dinamica di popolazione.

Mi piace pensare che probabilmente questo congresso non

avrebbe avuto luogo se la sbarra di una grata del Giardino di Boboli

fosse stata indenne: «Das Schicksal mischt die Karten, und wir spie-

len», «La sorte mischia le carte e noi giochiamo» ha scritto Scho-

penhauer.

Ma soprattutto mi rallegra il fatto che gli amici genovesi abbiano

avuto la splendida idea di abbinare le celebrazioni per il 70° anni-

versario della fondazione del glorioso Gruppo Speleologico Ligure

“Arturo Issel” a questo nostro convegno sui geotritoni, bestioline che,

come noi, hanno per le grotte un feeling particolare. Devo a questi

amici se -ormai assai in là sul viale del tramonto, ma circondato da

tanti giovani, appassionati e valorosi naturalisti- sento rinverdire in

me due delle maggiori passioni della mia vita: la biospeleologia e

l’erpetologia.

Pertanto è veramente di cuore che, anche a nome dei presenti,

ringrazio gli ideatori e gli organizzatori di questo congresso, insieme

a tutti coloro che hanno collaborato alla sua brillante realizzazione.

Cari amici e colleghi genovesi: grazie, grazie e ancora mille volte

grazie!

Benedetto Lanza

OPENING SPEECH

Once upon a time there was ... «A king !» my readers will say

immediately. No, you are mistaken. Once upon a time there was ...

«A piece of wood " Not even that ! Once upon a time, in a thick

hedge in Boboli Gardens (at Florence) there was a grate, covering

the entry of the drainage system, with a bar bent enough to allow

me, a filiform twelve-year-old gymnasial student, to make my first

underground experiences and to found the “Banda del Buco”! in the

far-off 1936’s.

Those were hard times and it was not easy make ends meet.

Then, even short trips were not easy for most people: even a bike

was almost as unaffordable as a Ferrari is today. Thus, it was only

five years later, on the 16" of September 1941, I finally made my

dream of exploring a real cave come true, precisely the Spelonca

delle Pille on the Calvana Mountains, between Prato and Florence.

It was number 1 of my life and, as it happens, also number 1 in

the Tuscan speleological cadastre ... And it was there that I had

my coup de foudre for European cave salamanders. It was the very

beginning of an overwhelming infatuation with those that are likely

to be considered, according to their. overall characteristics, the most

interesting vertebrates in Europe.

Since I am by nature a faithful person, my passion soon turned

into love producing its first fruits: perhaps rather naive works,

which, however, were the beginning of more complex studies on

this subject which eventually were to produce interesting results in

the fields of genetics, evolutionism, systematics, taxonomy, parasito-

logy, ecology, ethology, and population dynamics.

I like to think that this conference probably wouldn’t take place

if a bar of a grate in Boboli Gardens hadn’t been damaged: «Das

! “Banda del Buco”, literally “Band of the Hole”, refers to a gang of thieves notori-

ous for making holes in the walls or digging galleries.

Schicksal mischt die Karten, und wir spielen», «Fate shuffles cards and

we play», as Schopenhauer wrote.

But, above all, I am really pleased that our Genoese friends had

the wonderful idea of joining the celebration for the 70" anniversary

of the foundation of the glorious Gruppo Speleologico Ligure “Arturo

Issel” with this conference on cave salamanders, little beasts sharing

with us the same special feeling for caves. Although I have already

gone quite a way along the sunset boulevard -but always supported

by many young, passionate and valid naturalists-, I owe to these

friends the greening again of two of the biggest passions of my life:

biospeleology and herpetology.

Therefore, also on behalf of all the participants, with all my

heart I thank the devisers and organizers of the meeting, as well as

all the others who collaborated for such a brilliant accomplishment.

Dear Genoese friends and colleagues: thank you, thank you very

much once again!

Benedetto Lanza

Dil

Mauro VALERIO PASTORINO *

GRUPPO’ TSSEL" IDEAL FE STORTA

Catt amici

prima di ogni altra cosa, grazie. Grazie di vero cuore.

La vostra presenza che ci onora, qui, nell’anfiteatro di questo

Museo in cui ha avuto la sua prima sede il Gruppo Speleologico Ligure

“Arturo Issel”, e in cui ci accingiamo a festeggiare insieme a voi, con

il Convegno Nazionale sui geotritoni, il nostro settantesimo anniver-

sario di fondazione, è il regalo più bello in cui potessimo sperare, e ci

aluta a riempire di contenuti e di speranze un momento davvero esal-

tante della nostra storia associativa. Dirlo, può sembrare quasi scon-

tato, e Invece questa non è una frase fatta ma l’espressione fraterna

dei nostri veri sentimenti e della nostra riconoscenza più sincera.

Un momento, peraltro, questo dei nostri per niente senili set-

tant’anni, non del tutto facile per noi, in quanto se da una parte

ci vede impegnati in un quasi frenetico concatenarsi e sovrapporsi

di idee, progetti, ricerche, intuizioni scientifiche ed esplorative, dal-

l’altra non ci può far dimenticare una realtà preoccupante, che noi

continuiamo a considerare diretta conseguenza del fatto che la nostra

visione “globale” della speleologia non coincide con gli indirizzi

attualmente di moda in Italia nella pratica “gestionale” di questa

particolare disciplina naturalistica.

È infatti proprio per il fatto di portare avanti concezioni di vita

associativa considerate obsolete dai più, che noi ci troviamo ad essere

in pochi, troppo pochi; talmente in pochi da nutrire seri dubbi che il

Gruppo, pur così ideologicamente vitale, riesca a sopravviverci.

* Presidente del Gruppo Speleologico Ligure “Arturo Issel”

' Per non appesantire eccessivamente l’avvio del Convegno il mio saluto ai congres-

sisti fu in realtà molto più rapido ed informale rispetto a questo testo, della cui

pubblicazione sugli Atti i partecipanti vennero comunque informati direttamente.

22 M.V. PASTORINO

A meno che, ovviamente, non vi sia nei prossimi anni l’inseri-

mento di nuove presenze giovanili, motivate però dall’accettazione di

un postulato per noi irrinunciabile: “il dissidio fra speleologia spor-

tivo/esplorativa e speleologia scientifica non esiste: la speleologia è

indissolubilmente e pariteticamente sport-esplorazione-scienza”.

Prendere o lasciare: noi non siamo di quelli che cambiano il vino

dentro la bottiglia, o se proprio dovessimo farlo, non saremmo mai

disposti ad accettare che non ne venisse cambiata anche l’etichetta.

In altre parole, siamo gli eredi di una storia, e insieme di una propo-

sta: a questa storia e a questa proposta continuiamo a credere dopo

settant'anni e quindi non vogliamo tradirle per alcun motivo. Meglio

chiudere che cambiare, ma noi chiudere non vorremmo proprio, e la

convocazione di questo Convegno ne è la prova concreta e signifi-

cativa.

A questo punto, accenniamolo dunque brevemente il racconto

di queste virtù originali che tanto continuano ad affascinarci; non vi

parlerò quindi della nostra storia più recente, pur densa di attività,

scoperte, studi, esplorazioni, battaglie civili, che può essere datata

pressapoco a partire dalla seconda metà degli anni ‘60 e che è per

noi ancora cronaca, essendo stata vissuta in prima persona da chi

vi parla: ci vorrebbe troppo tempo, e voi siete qui per un incontro

di alto livello scientifico e non per assistere ad un’autocelebrazione.

No, la storia che vi voglio per sommi capi raccontare è quella delle

nostre origini, e per farlo mi limiterò soprattutto a riportarvi, quasi

pari passo, ciò che ne disse il nostro caro ex Presidente Ing. Enzo

E. Coddé, nel corso del Convegno-Assemblea di Finale Ligure del

1960 in occasione del 10° anniversario di fondazione della Società

Speleologica Italiana.’

Vi dirò subito che in Liguria la storia della Speleologia è molto

più antica di quella del Gruppo “Issel”, che pure è, per data di

nascita, il primo Gruppo Speleologico della Regione. Senza andare

troppo indietro, vale a dire fino al secolo XVIII con le prime osser-

vazioni di Spallanzani e di altri studiosi (neanche a farlo apposta, in

un’area dello spezzino che è attualmente sede di nostre importanti

? Attività del Gruppo Speleologico “Issel” sino all’anno 1955 - Rass. spel. ital.,

Como, 1962, XIV (2): 118-120.

GRUPPO “ISSEL”: IDEALI E STORIA 23

ricerche: quella sulla Sprugola di Zegori), mi basta ricordare con

Coddé che nella seconda meta dell'Ottocento:

“...le ricerche speleologiche vennero intensificate in maniera

sorprendente. Numerose furono le caverne che dalla Valle del Roja

alla Valle del Magra furono meta di studi morfologici e geologici

nonché di scavi sistematici che portarono al rinvenimento di interes-

santissimi materiali. Le scoperte faunistiche permisero la scoperta di

importanti artropodi cavernicoli. Però una raccolta sistematica di dati

riguardanti le grotte liguri si ebbe solo nel 1888 quando il Gestro

con la sua memoria sugli Anophthalmus trovati in Liguria citò, con

dati esatti, una sessantina di cavità liguri. Fu il primo esempio di

catasto della speleologia ligure.

Quasi nello stesso periodo anche le grotte della provincia di La

Spezia furono oggetto di studio e qui dobbiamo ricordare il Cap-

pellini che, nella sua descrizione geologica dei dintorni di La Spezia

e della Magra inferiore, fece un resoconto accurato dei suoi studi

specialmente di preistoria.

Il primo lavoro di insieme delle grotte liguri è però del Bensa.

In esso lA., che era allora molto giovane, riunì tutti 1 dati principali

delle grotte della Liguria e anche delle zone confinanti, specialmente

delle Alpi Marittime, dando assieme alle notizie morfologiche, geo-

logiche, e faunistiche anche una prima bibliografia.”

C'erano state in quei decenni altre grandi avventure di studio e

di ricerca, quali quella di Arturo Issel, il grande geologo al quale la

speleologia ligure è debitrice a tal punto che quando si trattò di dare

un nome alla neonata prima associazione speleologica ligure, quello

di Issel sembrò il riferimento più preciso e quasi obbligato.

Dopo questa fiammata di interessi e di studi, una notevole spinta

alla pratica speleologica si ebbe nuovamente nel secolo successivo,

dopo la nascita, nel 1927, dell’Istituto Italiano di Speleologia di

Postumia. Il Gruppo Issel venne appunto fondato in quel periodo,

pochi anni dopo: nel 1932.

In tal modo anche in Liguria fu avviata “la ripresa dello studio

sistematico e ordinato delle cavità naturali”.

E proprio parlando di “Gruppo Issel”, il fatto più singolare è

che tra i suoi fondatori, fra cui si annoveravano studiosi del calibro

di Brian, Capra, Dodero ecc., figuravano anche i nomi di Gestro e

24 M.V. PASTORINO

di Bensa, che a fare speleologia avevano già cominciato tanti decenni

prima, per cui appare evidente che quella fondazione si inseriva in

un solco tracciato in anni molto più lontani, vale a dire nella seconda

metà dell'Ottocento.

Non mi piacciono le falsificazioni e quindi non intendo certo

retrodatare l’inizio della nostra storia: una cosa sono le ricerche di

singoli studiosi ed altra la scoperta prima e poi la continuità del

momento associativo: due dimensioni evidentemente diverse che non

possono esser fatte artificiosamente coincidere.

Ma lo spirito era quello, e non a caso, e cito ancora, venne ben

presto “compilato un primo elenco delle grotte liguri sulla base

dei dettami dell’ Istituto di Speleologia di Postumia. Questo elenco

comprendeva 118 cavità: fra le più importanti e note specialmente

dal punto di vista paleontologico... È di questo periodo il lavoro

del Brian del 1930 sulle Grotte del Genovesato” e poi “nel 1940 lo

studio accurato delle Grotte di Toirano, lavoro ancora oggi conside-

rato fondamentale...”

L'arrivo della guerra troncò di fatto “il lavoro così ben iniziato

dal Gruppo Speleologico Ligure impedendone le ricerche e soprat-

tutto sciogliendo di fatto, anche se non ufficialmente” |’ Associazione.

“Gran parte del materiale che era stato accantonato presso il Museo

Civico di Storia Naturale di Genova veniva ad essere disperso o

distrutto per via dell'incendio che subi il Museo nel novembre

La ricostituzione del Gruppo avvenne nel 1948, e lo studio delle

grotte liguri fu ripreso “con metodo rigorosamente scientifico e con

criteri moderni. Alla prima esplorazione di assaggio, infatti, ne segui-

vano molte altre, quante cioè ne occorrevano per portare l’esame

della grotta il più profondo possibile ed avere un quadro completo

sotto 1 vari aspetti faunistici, mineralogici, geologici, paleontologici,

archeologici...”

Si arrivò così, nel 1953, ad avere i dati completi di 156 grotte,

e vennero inoltre effettuati studi sistematici “per alcune zone carat-

teristiche della Liguria” quali “il Finalese, la zona di Toirano, la

Provincia di Genova, e una parte della zona della Provincia di La

Spezia”.

Sono inoltre di quel periodo i lavori “di Sanfilippo sulle grotte

della Provincia di Genova, studio sistematico ed accurato dove sono

GRUPPO “ISSEL”: IDEALI E STORIA DS

nominate 48 cavità di cui 21 nuove”, e quello, importante, di Fran-

ciscolo sulle grotte del Finalese.

Fra le altre iniziative di quel periodo, meritano di essere ricordati

il lavoro di Conci (futuro Direttore del Museo di Storia Naturale di

Milano) sulle Arene Candide, corredato di “un bellissimo rilievo”,

e lo studio topografico, che Soprintendenza e Istituto Nazionale di

Paleontologia umana affidarono alla nostra associazione, della nuova

cavità di Toirano, scoperta per l’entusiamo di alcuni appassionati

locali. L'impresa “occupò un mese di lavoro durante il quale si esami-

narono, si può dire passo per passo, 15.000 mq di terreno all’esterno,

comprendenti appunto tutta la zona fra la Basua, la Grotta di S.

Lucia, la Tanassa,.S. Lucia inferiore e le altre piccole cavità che si

trovano nello stesso comprensorio. All’esame dei dati ottenuti si ebbe

una sorprendente scoperta e cioè che tutte queste grotte che si cre-

devano indipendenti appartenevano in effetti ad un unico sistema”.

Sul finire del 1954 la quantità di lavoro portata a termine dal

Gruppo, tenuto anche conto dei mezzi dell’epoca, poteva ben a

ragione definirsi “enorme”.

Si arrivò a un elenco catastale di 258 cavità, che fu pubblicato

appunto da Coddé su Rassegna Speleologica Italiana nel 1955.

Ma non era finita:

“Sempre nello stesso periodo il Gruppo Speleologico Ligure

volle cimentarsi anche in un’altra impresa: in quella cioè di far cono-

scere al pubblico le meraviglie del mondo sotterraneo. Con mezzi di

fortuna e superando con grande entusiasmo difficoltà tecniche ed

organizzative si potè fare un film a carattere documentario all’in-

terno di una grotta: fu scelta la grotta Staricco a Borgio Verezzi a 4

Km da Finale... Le nostre fatiche ebbero anche un riconoscimento

ufficiale perché questo film venne presentato al Festival Internazio-

nale del Film a Passo Ridotto di Rapallo del 1955 ed ebbe il I°

Premio per la parte documentaria.

La campagna di ricerche speleologiche non venne però a cessare

ma, in collaborazione con 1 Gruppi di Trieste e di Torino, si allargò

estendendosi, con la spedizione al Marguareis del 1955, anche alle

Alpi Marittime...”

Del Gruppo erano intanto entrati a far parte tra gli altri il prof.

Gian Maria Ghidini, zoologo e pubblicista di grande valore, per me

in anni più tardi caro maestro di vita e di dignità civile prima ancora

26 M.V. PASTORINO

che di speleologia, il quale nel 1956 avviò una iniziativa di carat-

tere nazionale, il “Centro di Inanellamento Pipistrelli”*, l'archeologo

Giuseppe Isetti, e Milly Leale Anfossi, cui si devono fondamentali

ricerche preistoriche nell’entroterra di Albenga, in Val Pennavaira,

tutte gestite con la stretta collaborazione del Gruppo.

Fu costituita una sezione “Ingauna”; le grotte a catasto raggiun-

sero nel 1959 il numero di 34$; vennero esplorate grotte di notevole

profondità (per il carsismo ligure) quali l'Abisso di Monte Nero N.

306 Li e via di questo passo.

Nel 1959 1l dr. Ing. Paolo Bensa, per tanti anni presidente del

Gruppo, lasciò la carica per motivi di età e di salute. Fu nominato

presidente onorario a vita e gli subentrò il Dott. Felice Capra, ento-

mologo di fama internazionale. Nel Gruppo erano arrivati molti gio-

vani, e l’attività procedette a pieno ritmo per diversi anni (basti per

tutti il nome di Ribaldone); seguì quindi un lungo momento di stasi,

dovuto al fatto che molti dei giovani che avevano costituito il nucleo

operativo dell’associazione, dopo la laurea, furono costretti a pensare

ad altre cose. Purtroppo in Liguria non si è mai riusciti a sbarcare il

lunario facendo speleologia.

E qui mi fermo, perché si sta pericolosamente avvicinando il

1963, anno nel quale all’Issel arrivai io, seguito da molti altri. E

questa non è più, come ho già detto, cronaca ovvero storia su cui

desideri intrattenervi.

Ciò di cui vorrei invece parlarvi brevemente, e poi concludo

lasciando spazio alle comunicazioni, è rappresentato dai “perché” di

una continuità e coerenza così a lungo protratta nel tempo, e che

spesso non è stata indolore.

Avete capito, già da queste rapidissime note, quali sono le nostre

radici. Di che pasta siamo fatti.

Mi sono però chiesto in passato: “siamo fatti” o “sono fatto”? (e

scusate se per forza di cose devo far riferimento alla mia personale

presenza nell’associazione, protrattasi per quasi quarant'anni).

> In seguito abbandonata anche perché non priva di conseguenze microtraumatiche

croniche negative per i pipistrelli inanellati.

GRUPPO “ISSEL”:. IDEALI E STORIA 27

Se una cosa mi corre infatti l’obbligo di ammettere, parlando di

fronte a voi come in confessione, è che il Gruppo Issel, dopo che

10 ne sono diventato presidente (ma per molti versi anche prima) è

stato, sia pure con vari intervalli, ciò che io ho voluto che fosse (nel

bene o nel male lascerò ad altri giudicare).

Non è molto bello quando una Associazione si riduce ad essere

espressione delle volontà di un singolo: questo vuol dire in buona

sostanza che è venuta a mancare la forte vitalità interna che deve per forza

di cose essere legata ad un contraddittorio, ad una pluralità di opinioni.

Si è verificato invece che, a parte uno sparuto manipolo con il

quale condivido valutazioni ed interessi, altri che si sono avvicinati

all’ “Issel” in questi anni se ne siano via via allontanati o siano stati

messi -da me soprattutto- in condizione di doversene andare.

E questo, sia chiaro, non a seguito di antipatie o dissidi personali,

ma sempre e soltanto perché 10 e i pochi che hanno voluto seguirmi

abbiamo costantemente ritenuto che lo “stile” e le finalità ispiratrici

profonde, le ragioni storiche e culturali che riteniamo essere state

alla base dell’ “Issel” fossero un “unicum” anticipatore di futuro e

non conservatore di mentalità e posizioni obsolete; in conseguenza

ho ed abbiamo operato in modo che quello stile e quelle finalità non

venissero mai tradite, con ciò rinunciando a dar vita ad un’associa-

zione, vitale per numero di iscritti, ma snaturata rispetto ai criteri

ispiratori dell’”’Issel” 1932 (e magari 1888...).

“Sport-esplorazione-scienza”. Ovvero: “esplorazione-sport-scienza”.

Ovvero: “scienza-sport-esplorazione”. Nient'altro, ma è tutto. Niente

organizzazioni rigidamente gerarchiche o paramilitari, niente signorsì

e signorno, niente megaraduni con la sbronza obbligata, niente

“voprofondo e non mi guardo intorno”, niente “devofarcideisoldi”,

niente (e questo è più difficile da capire) corso di primo, di secondo,

di decimo livello. Niente istruttore di primo, di secondo, di venti-

duesimo grado. Invece: vieni in grotta con noi e pian piano impari.

E se sei giovane e forte, quando sei diventato bravo sei tu che ti

organizzi la squadra di punta o di fondo abisso. Ma senza spocchia,

senza mettersi la divisa da generale, senza guardare con sufficienza

quello che raccoglie 1 Duvalius nella grottina da cinquanta metri:

“Sport-esplorazione-scienza”. Ovvero eccetera...

Ecco, è di questi postulati irrinunciabili che, nei lunghi anni

della mia presidenza, io ho cercato di farmi portavoce e bandiera.

E vi garantisco che tutta la storia successiva, almeno a partire dal

28 M.V. PASTORINO

momento in cui mi sono state affidate le redini del Gruppo, è stato

un tentativo ininterrotto di non tagliare quelle radici, di non lasciar

venir meno quegli ideali. E penso di esserci riuscito ma, ahinoi, a

un prezzo altissimo; visto che la rete, tirata a riva, di pescato ne ha

prodotto davvero poco...

In più, di mio, ci ho messo un bisogno imperioso: quello di veder

affermato sempre, anche solo parlando di grotte che come noto non

sono la componente essenziale ed irrinuciabile della società civile, il

diritto e il dovere della giustizia, ed è per questo che ho trascinato

il Gruppo in battaglie giudiziarie e di principio forse sproporzio-

nate, ma delle quali non sono a tutt'oggi pentito. Attenzione però

che anche in questo sono stato discepolo e non maestro, perché io

ricordo bene certe vicende degli anni nei quali, studente liceale, ero

appena entrato a far parte del Gruppo, che ebbero il prof. Ghidini

come dignitoso ed indimenticabile protagonista, con comportamenti

che non ho mai più dimenticato e che mi sono stati di sprone e di

viatico nel tentativo di gestire con dignità le personali vicende della

mia vita e non solo quelle dell’associazione con la quale per forza di

abitudine sono quasi portato ad identificarmi.

La sola differenza è che Ghidini, disgustato, anche per soprav-

venuti gravi motivi di salute, con molta signorile dignità, preferì

andarsene, mentre io, puntiglioso fino all’antipatia, a dire signornò

nel Gruppo ci sono rimasto e ci rimango anche ora che sono quasi

vecchio. E a un quasi vecchio (ma non esageriamo) un piccolo vezzo

concedetelo. Avrete capito come appunto Ghidini sia stato, fra i soci

dell’ ”Issel’ quello nel quale maggiormente identifico la “summa”

degli ideali di cui vi ho appena parlato. Per questo, idealmente, a

convocare questo Convegno c’era anche Lui.

Lasciatemele dunque di nuovo pronunciare le parole ormai

obsolete con cui lo ricordai, nel corso del XII Congresso Nazionale

di Speleologia a S. Pellegrino Terme, il 1° novembre 19744:

“Signori Congressisti,

Vi prego di scusarmi ... se sento il bisogno di dedicare qualche

attimo al ricordo di un caro Maestro e Amico recentemente scomparso.

* Intervento nella I° seduta scientifica (1.X1.1974) - Atti XII Congr. naz. Speoleol.,

S. Pellegrino Terme, 1-4.XI.1974, Mem. XII Rass. spel. it., Como, 1978: 27-28.

GRUPPOUYWSSEES ADEA) E STORIA 29

Sia chiaro -per carità- che la mia non è una «commemorazione»:

di queste ne leggeremo a sufficienza, e ben meritatamente, nei bol-

lettini e negli atti delle varie associazioni scientifiche di cui Egli è

stato socio attivissimo per tanti anni.

Eppure è proprio per questo, e nonostante questo, che non mi

sembrano inutili le brevi parole dell’affetto e della memoria. So bene

come vanno a finire queste cose: di Lui saranno ricordate l’appassionata

dedizione e capacità dello studioso, le indiscusse qualità di scienziato

e di animatore nei vari campi dell’entomologia, della protezione della

natura, della ricerca biospeleologica e della divulgazione scientifica.

Ma ci sono cose che quasi sicuramente non verranno riferite

nelle comunicazioni ufficiali, e che pure sono indispensabili a mio

giudizio per capire e ricordare in spirito di verità, e senza storture

retoriche, la nobile autentica figura dello Scomparso.

Gian Maria Ghidini era un uomo scomodo.

Quando opportunismo e convenienza e doppiogioco si davano la

mano e si sedevano al tavolo del compromesso per dire che tutto, si,

andava bene, e che davvero non si vedeva ragione di preoccuparsi

a modificare decisioni con tanta autorevolezza magnanima elargite,

ecco saltar su Lui, puntiglioso e lucidissimo, indisponente e sicuro, a

dire che no le cose non stavano proprio così, che gli dispiaceva tanto

ma sul serio non se la sentiva di avallare le affermazioni o le comode

certezze dei soliti finti amici o vari «titolati» di turno.

Ecco, la vita pubblica di Ghidini è stata punteggiata da siffatte

battaglie, e irrigidimenti, e inevitabili polemiche. E per questo forse,

Lui che avrebbe meritato una prestigiosa cattedra universitaria, se ne

è andato semplicemente come un ex preside di scuole magistrali.

Ma ciò per fortuna non vuol dire nulla per me e per gli amici

che Gli hanno voluto bene. Dirò di più. Anche se sono orgoglioso

di chiamare «mio Maestro» il caro Ghidini, so bene di non averne

potuto seguire che per un troppo breve periodo gli insegnamenti

scientifici, visto che da oltre cinque anni, e cioè a partire dal primo

gravissimo attacco cardiaco, Egli si era in pratica ritirato.

Ma pur se 1 cari giorni del Pro Natura e delle ricerche in grotta

o all’isola Gallinara avevano fatto presto a diventare nient'altro che

un ricordo, vorrei illudermi che per altri insegnamenti siano bastati

i non frequenti incontri di questi anni, la nostra «litigiosa» corri-

spondenza epistolare, od anche solo la sensazione che a «giudicare»

30 M.V. PASTORINO

azioni e proponimenti c’era sempre, nella casa di Via Montevideo a

Genova, quella nascosta ma sicura e un po’ temuta presenza.

Io mi auguro e Vi auguro di avere la forza di non sacrificare mai

il senso delle cose giuste, o anche solo ritenute tali in piena coscienza,

al vario gioco degli interessi, della carriera, degli opportunismi. Se

alla fine ci saremo riusciti (e non è purtroppo così semplice come

l'emozione di momenti può far credere) io sento di poterVi dire con

sincerità assoluta che sarà -fra i primi- all'insegnamento di uomini

come Ghidini che lo avremo dovuto...”

E questo è quanto. E ciò detto (doverosamente detto), l’atten-

zione si sposti ora dal passato al presente. Abbiamo tante cose da

dirci.

Grazie ancora a tutti voi, e buon lavoro!

ROBERTO Pocci *

LA FIGURA DI ARTURO ISSEL (1842-1922)

Nell'ambito delle celebrazioni per i settant'anni di vita del

Gruppo Speleologico Ligure “Arturo Issel” è parso non inoppor-

tuno fornire, soprattutto a beneficio dei soci più giovani, qualche

nota biografica sullo scienziato cui il Gruppo è dedicato, anche se

riesce obiettivamente difficile sintetizzare una vita così lunga ed ope-

rosa come quella del Prof. Issel.

Arturo Issel nacque a Genova I’11 aprile 1842, da una famiglia

israelitica (“Issel” è la trasformazione di “Israel”) con ascendenze in

Francia meridionale. Compì gli studi primari e secondari in città,

frequentando il Collegio diretto da Ippolito D’ Aste, ove ebbe a mae-

stri Francesco Marmocchi per la geografia fisica, Luigi Mercantini

per le belle lettere, Ippolito d’Aste per la calligrafia e la dramma-

turgia, Patrizio Gennari per la botanica, Giovanni Pennacchi per la

letteratura e 1 fratelli Lassovich per la matematica.

Ad alcune di quelle lezioni partecipò come uditore anche un

“patrizio ancora giovanetto”, con cui Issel avrebbe stretto e mante-

nuto rapporti di stima ed amicizia: si trattava del Marchese Giacomo

Doria, che sarebbe stato il futuro fondatore del Museo Civico di

Storia Naturale di Genova ma che allora, secondo la testimonianza

di Issel, subiva le attenzioni non sempre benevole di “certi scolaretti

screanzati” che, “per far pompa di malintesa democrazia, configgevano

pennine di ferro colla punta rivolta in su nella seggiola che gli era riser-

VOI 110 PE

Nel 1857-58 Issel frequentò a Parigi i corsi del Liceo Napo-

leone e poi, seguendo forse un po’ la scia del padre che si occupava

di ricerche minerarie soprattutto in Sardegna e che aveva radunato

* Museo Civico di Storia Naturale “Giacomo Doria”, Via Brigata Liguria 9, 16121

Genova, Italia; e-mail: museodoria@comune.genova.it

SD l R. POGGI

una bella collezione di minerali, si iscrisse alla Facoltà di Scienze

Naturali dell’ Università di Pisa, ove ebbe come docenti, tra gli altri,

Meneghini per la geologia, la mineralogia e la geografia fisica, Paolo

Savi per la zoologia, Pietro Savi per l'anatomia comparata e poi

Matteucci, Studiati, Felici, Pacinotti, Mossotti, ecc.

Poco dopo la laurea rientrò a Genova, ove iniziò nel 1865 la

carriera universitaria come assistente alla cattedra di scienze naturali

col malacologo Prof. Salvatore Trinchese; l’anno seguente fu incari-

cato dell’insegnamento della Mineralogia e della Geologia; nel 1869

fu nominato straordinario e nel 1876 ordinario. Nel 1889, allorché

vennero separate le cattedre di Mineralogia e Geologia, optò per

quest'ultima. Dal 1893 al 1913 ebbe anche l'incarico di Geografia

per gli studenti della facoltà di Lettere.

Fig. 1 - Arturo Issel in età giovanile.

LA FIGURA DI ARTURO ISSEL (1842-1922) 33

Insegnò fino al 1917, quando compì 1 75 anni; morì a Genova 5

anni dopo, ottantenne, il 27 novembre 1922.

Issel svolse le sue ricerche scientifiche soprattutto in Italia, e in

particolare in Liguria, ma negli anni giovanili effettuò anche alcune

spedizioni oltre 1 confini nazionali.

Ad esempio nel 1865 fu a Malta e sul Canale di Suez allora

in costruzione (e da Alessandria d’Egitto portò con sé in patria il

macaco cui diede 11 nome “Libia”) mentre nel 1870 visitò le coste

del Mar Rosso con Orazio Antinori, Odoardo Beccari e Giuseppe

Sapeto, in occasione dell’acquisto italiano della Baia di Assab.

Nel 1877 partecipò a una delle campagne di esplorazione del

cutter “Violante” del Capitano Enrico D'Albertis e in particolare

esplorò le isole presso le coste tunisine; nel 1895 fu infine a Zante

e in Grecia.

Al Mar Rosso Issel dedicò un'importante monografia (“Malaco-

logia del Mar Rosso”) tuttora citata e consultata e un libro di viaggi

(“Viaggio al Mar Rosso”) di cui si conoscono cinque edizioni.

Issel fu malacologo, geologo, paleontologo, mineralista, palet-

nologo, etnografo, antropologo, geografo, glottologo. Sono poche le

discipline che egli non coltivò e in ognuno di questi campi pubblicò

moltissimi contributi. Si dice che 1 suoi lavori assommino a 312, ma

in tale computo non rientrano i numerosi articoli apparsi su diversi

quotidiani, spesso in forma anonima, anche su argomenti storici,

politici e d’attualita.

Issel è tuttora. famoso per essere stato l’autore di alcuni pon-

derosi saggi, quali “Liguria geologica e preistorica”, pubblicata in

occasione delle Celebrazioni colombiane del 1892, “Liguria preisto-

rica”, stampata nel 1908 dalla Società. Ligure di Storia Patria, e il

“Compendio di Geologia” del 1896, ma va ricordato anche come

il coautore (con Zaccagna e Mazzuoli) della grande carta geologica

della Liguria, come l’inventore del termine “bradisismo” per indi-

care le oscillazioni lente del suolo, o come il fondatore del piano

“Tirreniano” del Pleistocene (per 1 sedimenti di origine marina in

un periodo interglaciale).

Proseguendo le pionieristiche ricerche del Marchese Lorenzo

Pareto, egli svolse indagini sulle valli sommerse del Golfo ligure,

stabilì l'età miocenica della Pietra del Finale e quella triassica del

complesso dolomitico del Monte Gazzo, confermò la linea di confine

34 R. POGGI

tra formazioni alpine ed appenniniche lungo il Torrente Chiarava-

gna e studiò 1 terremoti liguri del 1887, occupandosi poi anche delle

incisioni rupestri delle Alpi Marittime.

Scrisse con Raffaello Gestro le “Istruzioni Scientifiche per i

viaggiatori” e con Enrico Hillyer Giglioli un volumetto (“Pelagos”)

sulla vita nel mare; da solo stese note sulla storia dei naturalisti liguri

e sulla pesca del corallo, delle spugne e delle ostriche e compilò

una fondamentale “Bibliografia scientifica della Liguria” relativa,

come recita il sottotitolo, a “Geologia, Paleontologia, Mineralogia e

scienzetafifimi

Approfittando degli sbancamenti nella zona di Via Venti Set-

tembre, Piazza De Ferrari e Via Roma studiò la fauna pliocenica del

centro di Genova, rinvenendo tra l’altro anche resti di un dugongo

fossile del genere Felsinotherium (oggi Metaxytherium subapenninum).

Si occupò inoltre di applicazioni pratiche della geologia per aperture

di strade, gallerie e linee ferroviarie e per la ricerca di acque sotter-

ranee potabili.

In ambito universitario dal 1888 riorganizzò ed ampliò il Museo

Geologico, che riuscì a portare a Villetta Di Negro, allorché nel 1912

essa venne lasciata libera dal Museo Civico di Storia Naturale, che si

era trasferito nell’attuale sede di Via Brigata Liguria.

Tra le decine di cariche ricoperte da Issel si può ricordare che fu:

- Presidente del R. Comitato Geologico d’Italia;

- Tecnico esperto del R. Comitato Talassografico;

- Membro della Società Imperiale dei Naturalisti di Mosca;

- Socio corrispondente della Reale Accademia delle Scienze di

Torino, della Società Geologica di Londra e della Società Antro-

pologica di Parigi;

- Socio onorario della Società Geologica del Belgio, del Reale Isti-

tuto di Incoraggiamento in Napoli, della Reale Società Geogra-

fica Italiana, della Società di Letture e Conversazioni Scientifiche

di Genova e della Società Ligure di Storia Patria;

- Socio nazionale della R. Accademia dei Lincei, della Società

“Dante Alighieri” e della Società Ligustica di Scienze Naturali

e Geografiche;

- Socio fondatore della Sezione Ligure del Club Alpino Italiano;

- Consigliere Comunale a Genova.

LA FIGURA DI ARTURO ISSEL (1842-1922) 35

Ricevette due medaglie d’argento dalla Società Geografica Ita-

liana ed una d’oro dall’Istituto di Francia e fu inoltre nominato da

Vittorio Emanuele II Commendatore e Grande Ufficiale dei santi

Maurizio e Lazzaro.

E infine il 9 dicembre 1907 ricevette solenni onoranze per il 40°

di insegnamento all’Università; in tale occasione nacque la “Fon-

dazione Arturo Issel” per premiare studenti meritevoli in scienze

naturali e geografia.

Fig. 2 - Gruppo dei partecipanti alla gita all'Isola e alla Grotta di Bergeggi (SV),

organizzata dalla Società Ligustica di Scienze Naturali di Genova il

10.VI.1894. Arturo Issel è seduto in primo piano, a capo chino, ed impu-

gna il martello da geologo.

Ho volutamente lasciata per ultima la citazione relativa al fatto

che Issel fu anche speleologo, anzi fu uno degli iniziatori della spe-

leologia ligure, essendo autore di una cinquantina di pubblicazioni

36 Ri POGGI

riferibili alla speleologia paletnologica e paleontologica, a comin-

ciare dal primo lavoro del 1864, sulla paleontologia della Grotta

delle Arene Candide, nel Finalese, sino a quello su “Le caverne e

la loro esplorazione scientifica”, pubblicato dal Club Alpino Italiano

di Genova nel 1915, che l'Autore definiva un “libercolo”, ma che in

realtà era un importantissimo ed aggiornato testo di consultazione.

Ee per tuttitiquestiimotizizehe ills atebraio 11932, alCircolo..della

Stampa di Genova, si propose di intitolargli il Gruppo Speleologico

Ligure che si andava fondando.

Fig. 3 - Enrico Hillyer Giglioli, Giacomo Doria ed Arturo Issel a Genova, nella

prima decade del 1900.

Arturo Issel è ricordato a Finale Ligure dal Liceo a lui intito-

lato, a Malta, nel Museo della Valletta, per 1 reperti paleontologici

(in particolare gli elefanti nani), a Genova da una strada a Sam-

LA FIGURA DI ARTURO ISSEL (1842-1922) 37

pierdarena (da Via Balbi Piovera a Salita Beccaria), nell’Istituto

Mazziniano per una parte dei suoi scritti e del suo epistolario, nelle

collezioni universitarie di Mineralogia e Paleontologia per una serie

di reperti e nel Museo “Doria” per la presenza di una buona parte

della sua collezione malacologica e della sua biblioteca.

Assai legato a questo Museo, Issel tra l’altro fu uno dei relatori

ufficiali nella cerimonia di inaugurazione del nuovo edificio, il 17

ottobre 1912, mentre l’anno successivo, il 25 novembre 1913, lesse

una documentata biografia di Giacomo Doria, in occasione della

commemorazione ufficiale dell’estinto tenutasi al Consiglio Comu-

nale di Genova.

Ma per concludere questo breve ricordo vorrei fornire qualche

dato anche sulla vita privata di Issel. Dal matrimonio con Bettina

Ascoli, figlia del celebre glottologo goriziano Graziadio Isaia Ascoli,

nacquero 1 figli Lia e Raffaele. Raffaele, nato nel 1878, fu un biologo

marino che lavorò a Rovigno d'Istria e che nel 1922, pochi giorni

dopo la morte del padre, fu nominato Professore di Zoologia presso

l’Università di Genova, ove prese servizio dal 1923; deceduto pre-

maturamente nel 1936, lasciò la moglie Olimpia e le figlie Bettina

e Silvana; da quest’ultima e dal marito Silvio Barni è poi nata Raf-

faella e da lei deriva l’ulteriore discendenza.

Bettina e Raffaella, rispettivamente nipote e pronipote dirette

di Arturo Issel, ci hanno fatto l’onore di presenziare alla cerimonia

di apertura del convegno sugli Speleomantes; la loro partecipazione

costituisce per tutti noi un motivo di grande soddisfazione ed io le

ringrazio di cuore a nome del Comitato organizzatore per aver ade-

rito al nostro invito.

ROBERTO POGGI*

NOTE D’ARCHIVIO SULLA FONDAZIONE DEL

GRUPPO. ISSEL

La relazione sulla fondazione del Gruppo Speleologico Ligure

“Arturo Issel” apparve il 3 febbraio 1932 sul quotidiano “Giornale

di Genova”, in quarta pagina, con una nota redazionale su doppia

colonna.

Il “Giornale di Genova”, ideale prosecuzione del “Caffaro”, si

definiva “Quotidiano del Fascismo ligure” e fu stampato a Genova

dal 1923 al 1943; la sede era posta in Via Brigata Liguria 15, a due

isolati di distanza dal Museo Civico di Storia Naturale.

Nel secondo semestre del 1931, e in particolare dopo una esplo-

razione della Grotta delle Arene Candide (presso Finale Ligure),

svoltasi in giugno, il giornale aveva patrocinato la costituzione di

un gruppo speleologico, ricevendo di mese in mese varie adesioni

al progetto, che si concretizzò poi la sera di lunedì 1° febbraio 1932

con la presentazione formale nel Circolo della Stampa di Genova, in

Piazza San Matteo, annunciata nell’edizione di sabato 30 gennaio.

Data la non facile reperibilità dell’articolo sopra citato, si ritiene

non privo di qualche interesse per gli speleologi trascriverne qui di

seguito il testo e riprodurre la foto che lo correda.

Dal “Giornale di Genova”, Anno 10°, n. 29, pag. 4, di merco-

ledì 3 febbraio 1932:

* Museo Civico di Storia Naturale “Giacomo Doria”, Via Brigata Liguria 9, 16121

Genova, Italia; e-mail: museodoria@comune.genova.it

Questo contributo non è stato presentato al convegno sugli Speleomantes, ma ela-

borato successivamente.

40) Ri POGGI

Gli esploratori di caverne.

Il Gruppo speleologico ligure costituito al Circolo della Stampa.

Il sogno degli appassionati di speleologia, dei solitari e quindi poco

noti poeti di tutti i misteri e di tutte le vergini bellezze della natura si

è dunque realizzato. Anche Genova, anche la Liguria ha finalmente,

come tutte le regioni d’Italia, il suo “Gruppo Speleologico” costituitosi

lunedì sera al Circolo della Stampa e posto sotto il patrocinio del nostro

giornale. Non mai, forse, le sale del Circolo videro adunarsi insieme fra

le loro pareti tanti illustri maestri del pensiero e tanti giovani gagliardi

e volenterosi, entusiasti dell’avventura, della ricerca e dell’ignoto: non

mai forse, gruppo speleologico è nato con più robustezza, con più com-

patta comprensione di idealità fra scienza pensante e volontà operante,

con entusiasmo più alto e più nobile e più sentito del “Gruppo Speleo-

logico Ligure”.

Ma per dare una precisa idea del come nasce questo Gruppo occorre

qui trascrivere qualche nome. Notiamo fra i presenti: il prof. Raffaele

Issel e il prof. Alessandro Brian, entrambi della nostra R. Università,

il prof. Decio Vinciguerra, vice direttore del Civico Museo di Storia

Naturale anche in rappresentanza del direttore, prof. Gestro, il prof.

Renato Santucci della nostra R. Universita, il prof. Vito Zerilli del R.

Liceo Colombo, il prof. Capra, del Civico Museo di Storia Naturale,

il prof. Paolo Paola, il prof. ing. Tito Canessa, membro della Commis-

stone Conservatrice Monumenti per Genova e Liguria, l'avv. cav. uff.

Umberto Ferraris, il comm. dott. G. M. Mignone in rappresentanza

anche del prof. comm. Orlando Grosso, direttore dell’ Ufficio delle Belle

Arti, il dott. ing. Mario Martinengo del nostro Municipio, l’ing. Paolo

Bensa, il prof. Baccino, l’entomologo dott. Cesare Mancini, 1 signori

Albino Torra, Mario Pingue, Stefano Cantelli, Francesco Imperiale,

Giulio Miscosi, Carlo Rodolo, De Benedetti, Giovanni Moro, Amedeo

Pinceti, Giuseppe De Grada, Arnaldo Trabucco, Maurizio Carcero,

Pucillo Umberto, Mario Linari e i nostri coraggiosi e... indispensabili

amici delle Arene Candide: il graduato dei pompieri Gaspare Bertolli e

1 militi Giovanni Ricci, Edilio Torazza e Edelfo Malcapi che di tutto

cuore hanno aderito impazienti di future esplorazioni.

Mandarono, con la loro adesione il loro saluto entustastico e il loro

rincrescimento per l'impossibilità di intervenire alla riunione il nostro

direttore, il prof. Luigi Colomba, già direttore dell’Istituto Mineralogico

NOTE D’ARCHIVIO 41

della R. Universita, il prof. Orlando Grosso, il dott. Carlo Gentile,

direttore del R. Osservatorio di Imperia, l’ing. dott. Gabriele Lincio!,

già professore di Mineralogia e petrografia applicata della nostra R.

Universita, il conte avv. cav. Filippo Gramatica, l’avv.to Eddo Bruno

Cavazzini, il sig. FE. A. Aurnheimer, il collega dott. Federico Striglia,

del “Lavoro”; il Sovraintendente Incaricato ar Musei e Scavi per il

Piemonte e Liguria, prof. Barocelli, il dott. F. G. Cabalzar, i sigg.

Emanuele Garibaldi, Alberto Pasquali, Rossi Giustino, Giorgio Ollin-

ger, Aldo Festa, Gino Padoa e Guido Francone.

Eletto alla presidenza il prof. Raffaele Issel, viene dichiarata aperta

l'assemblea e dopo che tutti gli intervenuti hanno preso il loro posto, il

prof. Issel prende la parola per ringraziare con nobilissime parole tutti

coloro che alla magnifica iniziativa hanno dato impulso e vita. Il prof.

Issel invita quindi uno det rappresentanti il nostro giornale a fare una

rapida relazione dei fatti che hanno portato alla costituzione del Gruppo

e l’esposizione viene fatta da Attilio Ranghieri che accenna brevemente

alla esplorazione delle Arene Candide, compiuta nel giugno 1931, per

passare poi all'interesse che ha animato e anima tutti coloro che all’ini-

ziativa partita dal nostro giornale hanno incondizionatamente aderito.

Poiché il Presidente e i presenti vogliono che parli si alza quindi a

parlare l’amico nostro e collaboratore Umberto Ferraris, che pronuncia

uno di quei discorsi intessuti di arguzia e di poesia che gli sono carat-

teristici. “Evidentemente, egli dice, imponendomi di parlare voi avete

pensato: C'è qui dentro un avvocato, che ha consuetudine di tediare il

prossimo. Parli. Che è venuto a fare tra la seria gente che si occupa di

studi faticosi se non parla? Io vi rispondo: accetto perché la mia fun-

zione è simpatica: tenere a battesimo il gruppo speleologico ligure.”

Precisate le origini del Gruppo, nato appunto attraverso il nostro

giornale, l’avv. Umberto Ferraris commemora la nobile figura di G. B.

Leale che fu uno det primi aderenti e che la morte ha rapito anzi che

potesse vedere il sorgere del Gruppo, quindi continua: “Il Gruppo Spe-

leologico Ligure nasce da un ansito di poesia che si accompagna alla

severità di uno studio. Il suo domani non ne potrà mutare il volto”.

L’oratore conclude il suo dire proponendo, fra grandi applausi, che al

Gruppo Speleologico Ligure sia intitolato ad Arturo Issel. Se la spe-

' Per errore di stampa indicato nel testo originale come “Levicio”.

42 RAPOGGI

leologia ligure, egli dice, ha infatti un nome che la illustri questo nome

è Arturo Issel, scienziato di altissimo ingegno che come pochi fu tenace,

assiduo, laborioso.

Applausi vivissimi, salutano il dire dell'avv. Ferraris al quale il Pre-

sidente rivolge commosso il suo particolare ringraziamento per l'omaggio

che viene fatto alla memoria illustre del padre suo. Dopo di che, discusse

altre varie circostanze viene deliberata l’elezione di un consiglio provvi-

sorto per la compilazione dello statuto e per lo svolgimento delle prime

pratiche inerenti la costituzione del Gruppo. Il Consiglio che st radunera

mercoledì prossimo al Civico Museo di Storia Naturale per la stesura

dello statuto, è composto dai sigg.: prof. Brian, Presidente — Proff.:

Issel, Vinciguerra, comm. Migone, due redattori del nostro giornale, con-

siglieri e Albino Torra, segretario.

NOTE D'ARCHIVIO 43

La foto pubblicata a corredo dell’articolo, e qui riprodotta, porta

la didascalia: “Il primo nucleo di aderenti al Gruppo Speleologico

«Issel» (Foto Binelli - Lastre T'enzi)”.

L'immagine non è certo in condizioni di buona leggibilità, ma

ciò è dovuto, piu che agli oltre settant'anni trascorsi dal momento

dello scatto, soprattutto alla bassa qualità della carta utilizzata ori-

ginariamente per la stampa del giornale e al notevole impatto del

retino fotografico.

Ciononostante si possono individuare almeno alcuni dei per-

sonaggi citati nell’articolo, ed in particolare quelli indicati qui di

seguito e più conosciuti di altri nell’ambito scientifico genovese.

Nella prima fila (seduti):

4° da sinistra = Prof. Alessandro Brian (Istituto di Zoologia

dell’ Università),

5° da sinistra = Prof. Raffaele Issel (Direttore dell’ Istituto

di Zoologia dell’ Università e figlio del Prof.

Arturo),

6° da sinistra = Prof. Decio Vinciguerra (Vice-Direttore del

Museo Civico di Storia Naturale).

Nella seconda fila (in piedi):

1° da destra = Rag. Cesare Mancini (entomologo e speleo-

logo),

2° da destra = Prof. Renato Santucci (Aiuto presso l’Istituto

di Zoologia dell’ Università),

3° da destra = Dr. Felice Capra (Conservatore del Museo

Civico di Storia Naturale),

6° da destra = Ing. Paolo Bensa (speleologo ed entomologo).

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Massimo DELFINO *, EDOARDO RAZZETTI ** & SEBASTIANO SALVIDIO ***

EUROPEAN PLETHODONTIDS: PALAEONTOLOGICAL

DATA AND BIOGEOGRAPHICAL CONSIDERATIONS

(AMPHIBIA)

INTRODUCTION

The family Plethodontidae offers one of the most fascinating

and curious cases of biogeography. Although it is the caudate family

with the highest number of representatives (more than half of the

caudate species), plethodontids show a range that is almost entirely

American, the only exception being the presence of some species

in a limited area of Europe: south-eastern France, part of the Ital-

lan peninsula and Sardinia (LANZA et alia 1995; Gasc et ali 1997;

PouGH et ala 2001). The fact that European populations appear to

be similar to some Californian species, and hence considered by

some authors (among others JACKMAN et ali 1997; POUGH et alii

2001) as belonging to the same genus (Hydromantes Gistel, 1848),

makes the case even more curious deserving the definition written

more than 20 years ago by LANZA & VANNI (1981): “the Hydroman-

tes problem”.

Even not taking into consideration the nomenclatural status of the

European species, whether allocated to Hydromantes or to the genus

Speleomantes Dubois, 1984 (see DuBoIs 1984, for details; LANZA et

alu 1995; SocIieTAs HERPETOLOGICA ITALICA 1996; RAZZETTI et alii

2001), the solution of the biogeographic problem requires answers

* Dipartimento di Scienze della Terra, Università di Firenze, Via La Pira 4,

50121 Firenze, Italia; e-mail: massimo.delfino@unifi.it

** Centro Interdipartimentale di Servizi “Musei Universitari”, Università di Pavia,

Piazza Botta 9, 27100 Pavia, Italia; e-mail: razzetti@unipv.it I

*** Dipartimento per lo studio del Territorio e delle sue Risorse, Università di

Genova, Corso Europa 26, 16132 Genova, Italia & Gruppo Speleologico Ligure

“A. Issel”, Busalla (GE), Italia; e-mail: salvidio@dipteris.unige.it

46 M. DELFINO, E. RAZZETTI & S. SALVIDIO

concerning the phylogenetic relationships of the European and Cali-

fornian species, and, as all the authors agree in recognising a North

American centre of dispersal for this family, when and how the

spread toward Europe took place. Since an answer to such questions

requires the collection of information concerning processes devel-

oped through time, it could be of some help to determine if the

fossil record can furnish any clue.

RESULTS

As already noted by MILNER (2000), the caudate fossil record

is palaeoecologically and taphonomically biased and the terrestrial

and upland stream-dwellers of small size (as the plethodontids)

are under represented. The fossil record of Cenozoic caudates is

relatively poor if compared to that one of anurans and it is based

mostly on remains of isolated vertebrae.

At present Europe is inhabited by members of four caudate

families, Hynobiidae, Plethodontidae, Proteidae and Salamandridae

(Gasc et ali 1997), whose isolated trunk vertebrae are not diffi-

cult to allocate at order and family rank. In particular, plethodon-

tids and salamandrids are the only ones with intravertebral exits of

spinal nerves: vertebrae of these groups are therefore characterised

by a distinct foramen opening on each side of the neural arch, at its

base, caudal to the rib-bearers (EDWARDs 1976). Plethodontids can

be distinguished from salamandrids since their vertebral bodies are

amphicoelous and not opisthocoelous (EsTEes 1981; MILNER 2000).

Even not taking into consideration several other secondary charac-

ters, the presence of these foramina, as well as the centrum condi-

tion, are almost always detectable on fossil material (also on poorly

preserved vertebrae) allowing an easy identification of plethodon-

tids. Hence, it is rather surprising that the European fossil record is

limited to the following 6 localities:

PALAEONTOLOGICAL DATA AND BIOGEOGRAPHICAL CONSIDERATIONS

Locality

Grotta Corbeddu,

Oliena

Valdemino, Borgio-

Verezzi

Grotte du Vallonnet

Monte ‘l'uttavista,

Region (Province)

& Country

Sardinia (NU),

Italy

Liguria (SV),

Italy

Alpes-Maritimes,

France

Sardinia (NU),

Age

Late Pleistocene

and Holocene

Middle Pleistocene

Early Pleistocene

Plio-Pleistocene

References

SONDAAR et alii 1984 and 1988;

CALOI et alti 1986

DeLFINO 2002 and 2004

BAILON, pers. comm. (18-04-2002)

DELFINO 2002; ABBAZZI et alzi 2004

Orosei Italy

Siniscola Sardinia (NU), undet. Pliocene (?) LANZA et alti 1995

Italy

San Giovanni, Sardinia (CA), undet. Pliocene (?) LANZA et alii 1995

Domusnovas Italy

The most striking characteristic of these few data is that all

the localities are relatively young in age (at least post Miocene; the

remains of Siniscola and Domusnovas could be not Pliocene but

Pleistocene in age) and limited in distribution within the modern

range of the genus: 4 of them are on an island (Sardinia) and only 2

are from the mainland (Liguria -Italy- and Alpes-Maritimes -France).

Concerning the specific allocation of the remains, only those ones

from Grotta Corbeddu have been referred at species rank: CALOI

et alu (1986) identify them as Speleomantes supramontis (Hydroman-

tes supramontis in the paper). However, this specific allocation does

not seem to be grounded on morphology (a description is lacking)

but only on the geographical provenience of the material, as Grotta

Corbeddu is located in the S. supramontis range. Using a rigorous

approach, it is therefore advisable to consider this datum simply at

genus rank.

Although some features allowing a discrimination between the

presently recognised 7 living European species have been described

in the analysis performed by LANZA and co-workers (1995), they

are not applicable to fossil remains that are usually represented by

isolated vertebrae or, exceptionally, by disarticulated dentaries, max-

illae and limb bones as in the case of the Monte Tuttavista sites

(DELFINO 2002 and pers. obs.). The fossil remains of the European

plethodontids are therefore not identifiable at species rank.

48 M. DELFINO, (E. RAZZETTI & S. SALVIDIO

‘The fact that European fossils are relatively young, come exclu-

sively from the present range and cannot be identified at species

rank, makes them unsuitable for the determination of the route of

dispersal from America to Europe and apparently useless in resolv-

ing the phylogenetic relationships of the modern taxa.

DISCUSSION

Several hypotheses have been put forward concerning the origin

of European plethodontids. LANZA et alzi (1995) thoroughly sum up

the opinions of different authors grouping them into 3 categories:

introduction by man, spread through a North Atlantic past connec-

tion and spread through the North Pacific Beringian Bridge (and

then across the whole Asia). According to different authors, the

timing of such spreads range from Cretaceous to Pliocene or even to

Holocene if we consider the possibility of an introduction by man.

If the hypothesis of an anthropochorous origin can be easily

excluded because European fossils predate the origin of mankind, it

is rather difficult to evaluate the validity of the two other options.

The background information that should be taken into consider-

ation to correctly confront this aspect of the “Hydromantes problem”

can be summarised as follows:

- plethodontids probably originated in North America and should

be at least 80 million years (Myr) old; their antiquity can be

inferred by the sister-group relationships with the family Amphi-

umidae whose fossil record extends into the Upper Cretaceous

(MILNER 2000);

- the fossil record of plethodontids is astonishingly poor and recent:

not taking into account a single vertebra coming from the Lower

Cretaceous of Spain, that showing intravertebral spinal foramina

could belong either to the Plethodontoidea or the Ambystoma-

toidea clades; the oldest fossils come from the Lower Miocene

of North America (Desmognathinae are known from the Pleis-

tocene, Plethodontini from the Lower Miocene, Hemidactyliini

from the Pleistocene and Bolitoglossini from the Upper Miocene

of North America; MILNER 2000 and cited references);

- North America land continuity with Europe ended approximately

PALAEONTOLOGICAL DATA AND BIOGEOGRAPHICAL CONSIDERATIONS 49

around 49 Myr ago, during the Lower Eocene (McKENNA 1975

and cited references);

- North American permanent land continuity with Asia (through

the Beringian Bridge) ended during the Neogene, probably

already during the Miocene (SHER 1999; MarINcovicH & GLAD-

ENKOV 1999);

- Europe had been isolated between the Lower Eocene and the

beginning of the Oligocene not only from North America but

also from Asia because of the presence of the Obik Sea and the

Turgai Strait which extended from the Arctic Ocean to the Teth-

yan sea (MCKENNA 1975 and quoted references; for the effects of

the closure of Turgai Strait on western European herpetofauna

see Race 1984, 1986);

- on allozyme and immunological basis, the separation between the

Californian and European plethodontids has been assessed to be

28 Myr old (WAKE et ali 1978);

- caudates cannot easily cross salt-water barriers being extremely

sensible to osmotic variations.

The supporters of the “Beringian hypothesis” give credit to the

assumed 28 Myr old separation between the Californian and Euro-

pean plethodontids. Since the Atlantic Ocean was already open at that

time, the only available possibility for plethodontids to reach Europe

was to spread through the Beringian Bridge and subsequently across

Asia. The timing of the separation between the two lineages is not

in conflict with the history of the Beringian Bridge. According to

SHER (1999), Asia and North America “before the Neogene had con-

stituted a single continent”, that is to say that prior to 16-17 Myr

plethodontids could have colonised Asia via the Bering Bridge. This

is supposed to have happened to the anuran families of Bufonidae

and Hylidae during the Oligocene (BORKIN 1999 and quoted litera-

ture) or earlier. Although intermittent contacts took place during the

Neogene and Quaternary, a late Neogene spread of plethodontids

can be excluded not only because of possible unfavourable environ-

mental conditions, but also because fossils indicate their presence in

Sardinia during the Pliocene already.

50 M. DELFINO, E. RAZZETTI & S. SALVIDIO

On the other hand, LANZA et alu (1995) state that “it appears

hardly credible that a whole family [...] disappeared from almost

all of Europe and from all of Asia, or at least from all of Pale-

arctic Asia, all the more so because wide proportions of the latter

(ScHMIDT 1946) surely felt no or only slight effects of the Pleisto-

cene glaciation”. This objection seems to be so strong to deserve

some comments. The “Beringian hypothesis” and a westward spread

towards Europe could agree with the general trend that sees the

post-Oligocene European herpetofauna, the amphibians in particu-

lar, as being largely a product of a westward expansion of Asian

taxa, but in all the cases in which range shrinkage strongly affected

Europe, there are invariably living survivors in south-eastern Europe

or Asia (RAGE 1989, 1997; CHEYLAN 1995; SancHIZ & RocEK 1996;

SANCHIZ 1997; BARBADILLO et alii 1997; Ivanov et alti 2000; DELFINO

2004). The latter continent seems to be an efficient faunal reservoir

for Europe, that preserves living populations belonging not only

to American herpetofaunal taxa that moved westward, through the

Beringian Bridge, permanently colonising Europe (Bufonidae and

Hylidae among anurans), or Asian taxa that temporarily extended

their range into Europe (cryptobranchids and hynobiids among cau-

dates), but also taxa that, although having probably originated in

Europe, now survive in Asia only (the salamandrid members of the

Chelotriton-Tylototriton group; CHEYLAN 1995; BoRKIN 1999; VENC-

ZEL 1999; MILNER 2000).

Assuming a spread via the Beringian Bridge, even if it is some-

how acceptable that plethodontids did not leave fossil remains “while

crossing” the entire Asia, it seems to be unlikely that this north

American family, which undergo an extensive adaptive radiation in

the New World tropics (WAKE 1987), did not leave any relict popu-

lation in Asia.

Moreover, it is worth mentioning that there are cases, supported

by fossil evidences, testifying that among caudates (cryptobranchids

and salamandrids; MILNER 2000) faunal exchanges at the Beringian

Bridge were directed from Asia to America but not the reverse.

LANZA and co-workers (1995) openly support dispersal of

Europe via the “North Atlantic connection”. Due to the ancient-

ness of the last America-Europe direct connection, this hypothesis is

incongruent with the supposed timing of split between the Califor-

PALAEONTOLOGICAL DATA AND BIOGEOGRAPHICAL CONSIDERATIONS 51

nian and European species and their synapomorphies (see JACKMAN

et alii 1997) that seem to require a more recent spread to Europe.

However, NARDI et alzi (2000), on the basis of DNA differences,

contradict the idea of close relationships between Californian and

European species confirming “that the European and American taxa

represent two distantly related groups of species”.

The objection recently moved by MILNER (2000) “As the boli-

toglossines are restricted to western North America [...], it seems

unlikely that they would have passed across eastern North America,

and the developing Atlantic in the Early Cenozoic” is surprising since,

the shortest way to reach southern Europe from the western North

American coast is to cross the North Atlantic Bridge and not to face

the whole of Asia. Moreover, if bolitoglossines originated in eastern

North America (in the area now corresponding to the Appalachia) as

suggested by WAKE (1966), the quoted objection looses its meaning.

The hypothesis that plethodontids could have reached Europe

via the shortest way along with several other vertebrate taxa (McK-

ENNA 1975; Wess 1985; Briccs 1987) during the early-middle

Palaeogene seems to be much more reasonable. Among the pre-Oli-

gocene (that is to say before the closure of the Turgai Strait) small-

sized herpetofauna there are several examples of taxa that spread

from North America to Europe. It could be the case of the cau-

date family Dicamptodontidae that is now represented by a single

genus in western North America but, according to some authors

(EsTES 1981; RoceK 1994), had representatives in Europe during

the Palaeocene and Miocene (MILNER 2000, criticised the allocation

of the European fossils to this family and considered them as enig-

matic forms of uncertain position). Among anurans, a member of

the American family Leptodactylidae has been found in the Upper

(and possibly Lower) Eocene of Europe (see references in: SANCHIZ

1998; Race & RocEK 2003). Among squamates, lizards of the fami-

lies Helodermatidae and (perhaps) Necrosauridae reached directly

Europe from North America (RAGE & AUGE 1994) while the Eocene

snake fauna of Europe is so rich of American representatives that

has been defined as “euro-american” (see IVANOV et alzi 2000 and

quoted literature).

The hypothesis of dispersal through the American-European

connection requires a prolonged survival in Europe without any

a2 M. DELFINO, E. RAZZETTI & S. SALVIDIO

relevant morphological change or with a marked parallel evolution

(among plethodontids “parallelism and convergence are rampant”;

WAKE 1987). Although surprising, this prolonged survival is not so

extraordinary considering that fossils of the living genus Necturus

(a proteid whose closest relative, Proteus, lives in southern Europe)

have been identified in the Palaeocene of North America (MILNER

2000), and caudates are known to be morphologically conservative

(among others, JOCKUSCH & WAKE 2002).

Concerning the origin of the modern European species, some

considerations could be further developed. According to NARDI et

alu (2000; see also STEFANI 1969, and LANZA et ali 1995, for details),

molecular systematic, electrophoretic and morphological data sup-

port the antiquity of the south-western Sardinian species Speleo-

mantes genet (Temmiunck & Schlegel, 1838). Moreover, this species is

the only one in which male digamety doesn’t occur, and that is not

parasitised by the taxa that eastern Sardinian and mainland species

share (see literature in LANZA et ali 1995). It could be hypothesised

that S. gene (or its forerunner) entered Sardinia from the Pyrenees

(or south-western France) before the migration of the Corso-Sar-

dinian microplate (migration referred to the Late Oligocene-Early

Miocene; ALVAREZ 1972; MONTIGNY et ali 1981); the same authors,

as well as LANZA et ali (1995) and NASCETTI et ala (1996) suggest

that the eastern Sardinian species could have colonised the island

coming from the Italian peninsula during the Late Miocene (Mes-

sinian) salinity crisis. The first hypothesis is consistent with what

already supported by CACCONE et alu (1994) for another caudate

genus, genus Euproctus Gené, that entered the microplate before its

rotation and that still survives in both islands as well as in the Pyre-

nean region. For parsimony reasons, and taking into consideration

the well known conservative power of islands (MASINI et alii 2002),

the second hypothesis could be modified in the sense that S. genet,

or its forerunner, entered Sardinia in Oligocene, survived there

while mainland (at least Pyrenean) populations went extinct, giving

rise to the rest of the Sardinian species (3) which are responsible of

the further spread into Peninsular Italy (3 species). This evolution-

ary scenario has been already suggested by LA GRECA (1984), partly

modifying the ideas of STEFANI (1969) who supposed that S. genei

originated both the eastern Sardinian species and the continental

PALAEONTOLOGICAL DATA AND BIOGEOGRAPHICAL CONSIDERATIONS 53

ones (from an ancient stock that reached the Maritime Alps). The

origin of the continental species from the eastern Sardinian ones,

rejected by NASCETTI et ali (1996) because “not supported by the

present patterns of geographic distribution”, is simply speculative

at the moment, and the mode and timing of the speciation process

still have to be defined (but see FROMHAGE et alzi 2004, for a similar

pattern of dispersal in Dzscoglossus).

It would fit the antiquity of S. genez, its lower genetic distance

from the other Sardinian species than from the continental ones

(LANZA et alu 1995: 240; NASCETTI et alii 1996: table 3 and 5) and,

above all, it would better explain the fact that European fossils are

found only inside the present range and mostly in Sardinia (where

they are not rare!), a fact suggesting relatively recent expansion of

the range on mainland Italy and France. Moreover, molecular data

indicate that the separation (from each other) of the modern east-

ern Sardinian species dates back to the Late Pliocene (CIMMARUTA

et alu 1998; note that S. flavus, the northern species -farthest from

S. genei- is relatively more differentiated than the others), while the

separation (from each other) of the continental species is more recent

and seems to be Early Pleistocene in age (FORTI et alii 1998).

CONCLUSIONS

The “Hydromantes problem” does not seem to show any clear

solution. The paucity of fossil remains in both America and Europe

does not allow one to directly find a plausible solution to the prob-

lem, leading to speculations based on contrasting data which are

inferred mainly from biogeography and molecular biology, whose

evolutionary weight has not been unambiguously assessed yet.

Under a parsimony approach, assuming a long-term conservation

of some traits, it seems more likely that the ancestors on the Euro-

pean taxa spread eastward across the North Atlantic land continuity,

rather than westward across the Beringian Bridge and the whole Asia.

In any case, it is possible to predict that outside the modern

range of Speleomantes, the Pyrenean area is the one which surely

can provide fossils of plethodontids.

Furthermore, it is tempting to suggest that the continental species

of Europe derive from the eastern Sardinian ones and not the reverse.

54 M. DELFINO, E. RAZZETTI & S. SALVIDIO

ACKNOWLEDGEMENTS

Salvador Bailon (Nice) kindly shared his unpublished datum

about the fossil plethodontids from south-eastern France. Roberta

Cimmaruta (Viterbo), Benedetto Lanza (Florence), Zbynek Rocek

(Prague), Lorenzo Rook (Firenze) and Marton Venczel (Oradea)

critically commented earlier drafts. David Wake (Berkeley) provided

helpful review and improved the English text.

REFERENCES

ABBAZZI L., ANGELONE C., Arca M., BARISONE G., BEDETTI C., DELFINO M., Kor-

SAKIS T°., MARCOLINI F., PaLomBo M.R., Pavia M., Piras P., Rook L., TORRE

D., Tuveri C., VALLI A. & WILKINS B., 2004 - Plio-Pleistocene fossil verte-

brates of Monte Tuttavista (Orosei, E Sardinia, Italy), an overview - Riv. ital.

Pal. Strat., Milano, 10 (3): 681-706.

ALVAREZ W., 1972 - Rotation of the Corsica-Sardinia microplate - Nature Phys.

Sci., New York, 235: 103-105.

BARBADILLO L.J., Garcia-Paris M. & SancHIZ B., 1997 - Origines y relaciones

evolutivas de la herpetofauna ibérica (pp. 47-100) - In: PLEGUEZUELOS J.M.:

Distribucion y biogeografia de los anfibios y reptiles en Espafia y Portugal.

Monografias de Herpetologia, Volumen 3. Asociacién Herpetologica Espafiola,

Granada, 542 pp.

BoRKIN L.J., 1999 - Distribution of amphibians in North Africa, Europe, Western

Asia, and the Former Soviet Union (pp. 329-420) - In: DUELLMAN W.E. (Ed.),

Patterns of distribution of amphibians. A global perspective. Johns Hopkins

University Press, Baltimore, 633 pp.

Briccs J.C., 1987 - Biogeography and plate tectonics - Development in Paleontol-

ogy and Stratigraphy. 10. Elsevier, Amsterdam, 204 pp.

Caccone A., MILINKovircH M.C., Ssorponi V. & PowEeLL J.R., 1994 - Molecular

biogeography: using the Corsica-Sardinia microplate disjunction to calibrate

mitochondrial rDNA evolutionary rates in mountain newts (Euproctus) - 7.

Evol. Biol., Basel, 7: 227-245.

CaLor L., Korsakis T. & PaLomBo M.R., 1986 - La fauna a vertebrati terrestri del

Pleistocene delle isole del Mediterraneo - Geologica rom., Roma, 25: 235-256.

CHEYLAN M., 1995 - Les reptiles du Paléarctique occidental. Diversité et conserva-

tion - Thèse Ecole Pratique des Hautes Etudes, Montpellier, 525 pp.

CIMMARUTA R., NascetTTi G., Forti G., LANZA B. & BULLINI L., 1998 - Paleogeo-

grafia della Sardegna ed evoluzione degli Hydromantes (Amphibia, Plethodonti-

dae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997): 182-195.

DELFINO M., 2002 - Erpetofaune italiane del Neogene e del Quaternario - Doctoral

Thesis, Modena e Reggio Emilia University, Modena, 382 pp.

DELFINO M., 2004 - 'The middle Pleistocene herpetofauna of Valdemino Cave (Ligu-

ria, North-Western Italy) - Herpet. 7., London, 14: 113-128.

PALAEONTOLOGICAL DATA AND BIOGEOGRAPHICAL CONSIDERATIONS 55

DELFINO M., Race J.-C. & Rook L., 2003 - Tertiary mammal turnover phenomena:

what happened to the herpetofauna? - Deinsea, Rotterdam, 10: 153-161.

Dusois A., 1984 - Miscellanea nomenclatorica batrachologica (IV) - Alytes, Paris,

3 (3): 103-110.

Epwarpbs J.L., 1976 - Spinal nerves and their bearing on salamander phylogeny - 7.

Morph., Philadelphia, 148: 305-328.

Estes R., 1981 - Gymnophiona, Caudata - In: Handbuch der Palaoherpetologie,

vol. 2. Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 115 pp.

Forti G., CIMMARUTA R., NASCETTI G., Lanza B. & BULLINI L., 1998 - Glaciazi-

oni del Quaternario e microevoluzione delle popolazioni continentali del genere

Hydromantes (Amphibia, Plethodontidae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997):

197-211.

FROMHAGE L., VENCES M. & VEITH M., 2004 - Testing alternative vicariance scenar-

ios in Western Mediterranean discoglossid frogs - Mol. Phyl. Evol., Orlando,

31: 308-322.

Gasc J.-P., CABELA A., CRNOBRNJA-ISAILOVIC J., DOLMEN D., GROSSENBACHER K.,

HAFFNER P., LESCURE J., MARTENS H., MARTINEZ Rica J.P., MAURIN H.,

OLIVEIRA M.E., Sorranipou T.S., VEITH M. & ZUIDERWIJK A. (Eds), 1997 -

Atlas of amphibians and reptiles in Europe - SEH & MNHN, Paris, 496 pp.

Ivanov M., Race J.-C., SZYNDLAR Z. & VENCZEL M., 2000 - Histoire et origine

géographique des faunes de serpents en Europe - Bull. Soc. herp. Fr., Paris,

96: 15-24.

JACKMAN T.R., APPLEBAUM G. & WAKE D.B., 1997 - Phylogenetic relationships of

Bolitoglossine salamanders: a demonstration of the effects of combining mor-

phological and molecular data setes - Mol. Biol. Evol., Chicago, 14 (8): 883-891.

JockuscH E.L. & WAKE D.B., 2002 - Falling apart and merging: diversification

of slender salamanders (Plethodontidae: Batrachoseps) in the American West

- Biol. 7. Linn. Soc., London, 76: 361-391.

LA Greca M., 1984 - L’origine della fauna italiana - Le Scienze, Milano, 32 (187):

66-79.

LANZA B., Caputo V., NascETTI G.& BuLLINI L., 1995 - Morphologic and genetic

studies of the European plethodontid salamanders: taxonomic inferences (genus

Hydromantes) - Monogr. Mus. reg. Sc. nat., Torino, 16, 368 pp.

LANZA B. & VANNI S., 1981 - On the biogeography of plethodontid salamanders

(Amphibia, Caudata) with a description of a new genus - Monit. zool. ital.,

Firenze, 15: 117-121.

MarincovicH JR. L. & GLADENKOV A. Yu., 1999. Evidence for an early opening of

the Bering Strait - Nature, London, 397: 149-151.

MAsINI F., BoNFIGLIO L., ABBAzzI L., FERRETTI M., KoTSAKIS T., PErruso D.,

Torre D., DELFINO M., FANFANI F., MARRA A.C. & STUART A., 2002 - Verte-

brate assemblages of central-western Mediterranean islands during the Pliocene

and Quaternary: reflecting on extinction events - Brit. Archaeol. Res. Rep., Int.

Ser. n. 1095, “Vth Deia International Conference of Prehistory”, World Island

in Prehistory 2001, Mallorca, Spain: 437-444.

McKenna M., 1975 - Fossil mammals and Early Eocene North Atlantic continuity

- Ann. Missouri Bot. Gard., St. Louis, 62: 335-353.

MILNER A.R., 2000 - Mesozoic and Tertiary Caudata and Albanerpetontidae (pp.

1412-1444) - In: HeaTwoLE H. & Carrot R.L., Amphibian Biology. Vol. 4.

56 M. DELFINO, E. RAZZETTI & S. SALVIDIO

Palaeontology. The Evolutionary History of Amphibians. Surrey Beatty &

Sons, Chipping Norton, xii + 973-1496.

MonTIGNY R., EpbeL J.B. & THuIzaT R., 1981 - Oligo-Miocene rotation of Sardinia:

K-Ar ages and paleomagnetic data of Tertiary volcanics - Earth Planet. Sci.

Lett., Amsterdam, 54: 261-271.

Narpi I., Marracci S., LoRETI S. & BATISTONI R., 2000 - The European plethodon-

tid salamanders and their evolutionary relationships: a cytomolecular approach

- Atti I Congr. Naz. Societas Herpetologica Italica (Torino, 1996), Mus. reg.

Sci Gat. dormo. 92483801

NASCETTI G., CIMMARUTA R., Lanza B. & BuLuini L., 1996 - Molecular taxon-

omy of European plethodontid salamanders (genus Hydromantes) - 7. Herpet.,

Athens, 306): o)

PoucH F.H., Anprews R.M., CapLe J.E., Crump M.L., Savirzky A.H. & WELLS

K.D., 2001 - Herpetology, Second Edition - Prentice Hall, Upper Saddle

River INI, xi 2612" pp.

Race J.C., 1984 - La «Grande Coupure» éocéne/oligocéne et les herpétofaunes

(Amphibiens et Reptiles): problèmes du synchronisme des événements paléo-

biogéographiques - Bull. Soc. géol. France, Paris, 26 (6): 1251-1257.

Race J.C., 1986 - The amphibians and reptiles at the Eocene-Oligocene transi-

tion in Western Europe: an outline of faunal alterations (pp. 309-310) - In:

PoMEROL C. & PREMOLI-SiLva I. (Eds.), Terminal Eocene events. Develop-

ments in Palaeontology and Stratigraphy, 9. Elsevier, Amsterdam, 414 pp.

Race J.C., 1989 - Origin and history of the Western European herpetofauna - In:

HALLIDAY, T., BAKER, J., & Hosie, L. (Eds.), Abstract book, First World Con-

gress of Herpetology, University of Kent, Canterbury: 1 pag.

Rage J.C., 1997 - Paleobiological and paleogeographical background of the Euro-

pean herpetofauna (pp. 23-28) - In: Gasc J.-P., CABELA A., CRNOBRNJA-ISAIL-

ovic J., DoLMEN D., GROSSENBACHER K., HaFFNER P., LESCURE J., MARTENS

H., Martinez Rica J.P., Maurin H., OLiverra M.E., Sorianipou T.S., VEITH

M. & ZUIDERWIJK A. (Eds). Atlas of amphibians and reptiles in Europe, SEH

& MNHN, Paris, 496 pp.

Race J.C. & Auce M., 1994 - Squamates from the Cainozoic of the western part of

Europe. A review - Rev. Paléobiol., Genève, Vol. spec. 7, (1993): 199-216.

Race J.C. & Rocek Z., 2003 - Evolution of anuran assemblages in the Tertiary and

Quaternary of Europe, in the context of palaeoclimate and palaeogeography -

Amphibia-Reptilia, Leiden, 24: 133-250.

RAzzeTTI E., Bonini L. & ANDREONE F., 2001 - Lista ragionata di nomi comuni

degli Anfibi e dei Rettili italiani - Ital. 7. Zool., Modena, 68 (3): 243-259.

Rocek Z., 1994 - A review of the fossil Caudata of Europe - Abhand. Ber. Naturk.,

Magdeburg, 17: 51-56.

SANCHIZ B., 1997 - Factores causales de biodiversidad: especiati6n, extinction

y migraciòn en la formaciòn de la batracofauna europea (pp. 185-206) - In:

AGUIRRE E. et alii, (Eds.), Registros fésiles e historia de la Tierra, Ed. Univ.

Complutense, Madrid.

SANCHIZ B., 1998 - Salientia - In: Handbuch der Palaoherpetologie, vol. 4. Gustav

Fischer Verlag, Stuttgart/New York, 275 pp.

SANCHIZ B. & Rocek Z., 1996 - An overview of the anuran fossil record (ppsig=

328) - In: TinsLey R.C. & KoBEeL H.R. (Eds.), The Biology of the Xenopus.

PALAEONTOLOGICAL DATA AND BIOGEOGRAPHICAL CONSIDERATIONS 57

The Zoological Society of London, Clarendon Press, Oxford, 464 pp.

ScHMIDT K.P., 1946 - On the zoogeography of the Holartic Region - Copeza, Wash-

ington, 1946 (3): 144-152.

SHER A., 1999 - Traffic lights at the Beringian crossroads - Nature, London, 397:

103-104.

SOcIETAS HERPETOLOGICA ITALICA, 1996 - Atlante provvisorio degli Anfibi e dei Ret-

tili italiani - Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova, 91: 95-178.

SONDAAR P.Y., BoER DE P.L., Sances M., Korsakis T. & Esu D., 1984 - First

report on a Paleolithic culture in Sardinia - Brit. Archaeol. Res. Rep., Int. Ser.,

Oxford, 229: 29-47.

SONDAAR P.Y., MartTIni F., SANGES M., HOFMEIJER G., BERGH G. VAN DER, VISSER

J.A. DE, Spoor C.F., Korsaxis T. & Esu D., 1988 - Grotta Corbeddu - In:

MARTINI F. (a cura di), Field-trip book, International Conference Early Man

in Island Environments, Oliena (Sardinia): 93-115.

STEFANI R., 1969 - La distribuzione geografica e l'evoluzione del geotritone sardo

(Hydromantes genet Schleg.) e del geotritone continentale europeo (Hydromantes

italicus Dunn) - Arch. zool. ital., Napoli, 53: 207-244.

VENCZEL M., 1999 - Land salamanders of the family Hynobiidae from the Neogene

and Quaternary of Europe - Amphibia-Reptilia, Leiden, 20: 401-412.

WAKE D.B, 1966 - Comparative osteology and evolution of the lungless salamanders,

family Plethodontidae - Mem. South. Calif. Acad. Sci., Los Angeles, 4: 1-11.

WAKE D.B, 1987 - Adaptive radiation of salamanders in Middle American cloud

forests - Ann. Missouri Bot. Gard., St. Louis, 74: 242-264.

WAKE D.B., Maxson L.R. & Wurst G.Z., 1978 - Genetic differentiation, albumin

evolution, and their biogeographic implications in plethodontid salamanders of

California and Southern Europe - Evolution, Lawrence, 32 (3): 529-539.

WEBB S.D., 1985 - Main pathways of mammalian diversification in North America

(pp. 201-217) - In: STEHLI F.G. & WEBB S.D. (a cura di), The great American

interchange. Plenum Press, New York, 532 pp.

ABSTRACT

The European fossil record of plethodontids is surprisingly poor (only 6 post-

Miocene localities) if one considers that it is rather easy to identify their remains

among those of the other caudates that inhabited Europe during the Cenozoic. The

facts that European fossils are relatively young, come exclusively from the present

range and cannot be identified at species rank, makes them unsuitable to determine

the direction of dispersal of Europe from America and apparently useless in resolv-

ing the phylogenetic relationships of the modern taxa. Although it is not possible

to assess unambiguously the evolutionary weight of contrasting data inferred from

biogeography and molecular biology, the absence of relict Asian populations can be

interpreted to suggest that a direct spread preceding the separation of Europe and

North America (along with the well known mammal and herpetofaunal dispersal)

is less unlikely than a dispersal requiring the crossing of the Beringian Bridge and

the whole of Asia. There are also reasons to suggest that the continental species of

Europe could derive from the eastern Sardinian ones and not the reverse.

58 M. DELFINO, E. RAZZETTI & S. SALVIDIO

RIASSUNTO

Pletodontidi europei: dati paleontologici e considerazioni biogeografiche

(Amphibia).

Sebbene sia relativamente semplice riconoscere i resti fossili dei membri della

famiglia Plethodontidae da quelli delle altre famiglie di caudati che hanno abitato

l’Europa durante il Cenozoico, il loro registro fossile è limitato a 6 località, di cui

5 italiane (4 in Sardegna e 1 in Liguria) e 1 francese (Alpes-Maritimes), non più

antiche del Pliocene e localizzate all’interno dell’attuale areale. Inoltre, l’assenza di

fossili provenienti dall’ Asia e la scarsità di quelli nordamericani (i più antichi risal-

gono al Miocene inferiore) ostacolano la formulazione di teorie che consentano di

spiegare come si siano originati i popolamenti europei di una famiglia altrimenti

essenzialmente americana. Inoltre, non è possibile valutare in modo inequivocabile

il peso dei molti e contrastanti dati di carattere biogeografico e molecolare. Alcune

considerazioni di carattere bio- e paleobiogeografico, fra cui l’assenza di popolazioni

relitte di pletodontidi in Asia, sembrano però suggerire che una diffusione verso

est (quindi diretta), sulla scia di ben documentate dispersioni faunistiche che hanno

interessato sia la mammalofauna sia l’erpetofauna, e precedente alla separazione del

Nord America dall'Europa, sia più probabile di una diffusione che richieda l’attra-

versamento del ponte di Bering e di tutta l'Asia. Inoltre, la possibilità che le specie

dell'Europa continentale derivino da quelle della Sardegna orientale sembra l’ipotesi

più plausibile.

NOTE ADDED IN PROOFS

An unexpected Plethodontid caudate has been recently found in the Middle

Miocene of Slovakia (VENCZEL & SANCHIZ, 2005). This datum widens considerably

the past European range of the family but seems not to be sharply in contrast with

any of the biogeographical scenarios here reviewed or proposed.

VENCZEL M. & SancHIZ B., 2005 - A fossil plethodontid salamander from the

Middle Miocene of Slovakia (Caudata, Plethodontidae) - Amphibia-Reptilia,

Leiden, 26: 408-411.

BENEDETTO LANZA *, ROBERTA CIMMARUTA **,

GIANLUCA ForTI***, LUCIANO BULLINI **** & GIUSEPPE NASCETTI **

BIANCHIS CAVE SALAMANDER,

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP.

(AMPHIBIA, CAUDATA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUCTION

NASCETTI et al (1996) and FORTI et alti (1998) showed that Spe-

leomantes ambrosti (Lanza, 1955) consists of two well differentiated

forms (D,,.=0.18) living respectively W and E of the Magra River

(NW Italy). The first one, inhabiting the province of La Spezia

(Liguria), terra typica of the species, corresponds to the nominate

taxon Speleomantes ambrosit ambrosti, while the second one, typical

of the province of Massa-Carrara (Tuscany), has to be described as

Speleomantes ambrosti bianchi n. ssp.

MATERIALS AND METHODS

. Genetic variation was investigated in 174 specimens taken from

8 localities covering the whole range of the species. Three localities

are inhabited by S. ambrosi bianchi and the other five by S. ambro-

sat ambrosti (FORTI et alit 1998). An overall number of 33 enzyme

* Dipartimento di Biologia Animale e Genetica & Museo di Storia Naturale

(Sezione Zoologica “La Specola”), Università degli Studi di Firenze, Via

Romana 17, 50125 Firenze, Italia; e-mail: benedetto.lanza@tin.it

** Dipartimento di Ecologia per lo Sviluppo Economico Sostenibile, Università

della Tuscia, Via S. Giovanni Decollato 1, 01100 Viterbo, Italia;

e-mail: cimmaruta@unitus.it & nascetti@unitus.it

*** Museo del Fiore, Piazza G. Fabrizio 17, 01021 Acquapendente (VT), Italia;

e-mail: museo.fiore@tin.it

**** Dipartimento di Genetica e Biologia Molecolare, Università di Roma “La Sa-

pienza”, Via dei Sardi 70, 00185 Roma, Italia; e-mail: l.bullini@uniroma.1.it

B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

following the techniques reported in Table 1 and described in more

detail in LANZA et alti (1995).

loci was analysed by means of multilocus allozyme electrophoresis,

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SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. 61

The morphological data reported in the present paper, unless

specified otherwise, refer only to adults, to avoid the variation due

to allometric growth or to other types of ontogenetic changes. Mea-

surements and counting methods were as follows:

total length (tl) (only in the specimens with tail unregenerated or

seemingly so);

body length (bl)= snout tip-anterior end of the vent;

axilla-groin (ag);

tail length (tal)= total length minus body length;

head length (hl)= snout tip-oral angle (marked by a thin needle);

head width (hw)= between the oral angles, each marked by a thin needle;

head depth (hd)= distance between the tangent of the lower jaw

and the highest point of the head;

lower lip-gular fold (lg)= distance between the midpoint of the

lower lip and the midpoint of the gular fold;

snout length (sl)= from the midpoint of the upper lip border to the

anterior eyelid commissure;

internarial distance (id)= shortest distance between the median mar-

gins of the narial openings;

orbitonarial distance (od)= between the posterior border of the

narial openings and the anterior eyelid commissure;

intercanthal distance (icd)= between each anterior eyelid commissure;

interorbital distance (i10d)= the shortest distance between the medial

margin of the upper eyelids;

eye diameter (ed)= distance between anterior and posterior eyelid

commissures;

mental gland width (mgw)= its greatest width;

mental gland length (mgl)= from the anterior midpoint, just behind

the mandibular symphysis, to the midpoint of the posterior

border (when the latter is concave, to the midpoint of the tan-

gent touching its posteriormost points);

snout-epibranchial tip (se)= distance between the tip of the snout

and the posterior end of the epibranchial sheat with the tongue

at rest position (the end of the sheat exposed by dissection);

foreleg length (fl)= from its anterior attachment to the tip of the

3rd finger;

62 B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

hind leg length (hil)= from the groin to the tip of the longest toe;

foot length (fol)= from the inner border of the foot to the tip of the

4th toe, the latter at 90° against the inner margin of the foot (cf.

Lanza er alu 1995 "fie A)

teeth number (approximate)= tooth counts are based on the visible

teeth, i.e. on the functional, ankylosed teeth, as well as on those

not yet functional but almost piercing the mucous membrane

and about to replace the lost ones (on one side; of course teeth

lacking due to traumatism were also counted as present) (pm=

premaxillar teeth; av= anterior vomerine teeth; m= maxillary

teeth; ma= mandibular teeth);

trunk vertebrae (tv)= number of the trunk vertebrae (i.e. of the pre-

sacral vertebrae, atlas excluded), usually counted on radiographs,

sometimes in skeletonized and double-stained animals;

postsacral vertebrae (pv)= number of the sacro-caudal and caudal

vertebrae, comprising the smallest apical, radiographically

detectable elements.

Fig. 1 - Speleomantes ambrosii ambrosii; 2 23323 MZUF (formerly 294 NHCL

= New Herpetological Collection Lanza); Grotta dei Pitali (= Grotta

dell’Ospizio), cadastral number 1214 Li/SP, 100 m as.l. [44°07715”N-

02°39°21”W (Rome)= 09°47°47”E Greenwich]; locality Chiappa; province

and municipality of La Spezia; leg. S. Vanni & P. Magrini, 17.IX.1989

(photo Stefano Vanni).

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. 63

The following ratios were taken: 1= total length: tail length; 2=

body length: axilla-groin; 3= body length: foreleg length; 4= body

length: hind leg length; 5= hind leg length: foreleg length; 6= body

length: head length; 7= body length: head width; 8= body length:

lower lip-gular fold; 9= body length: foot length; 10= body length:

mental gland width; 11= body length: mental gland length; 12=

mental gland width: mental gland length; 13= body length: snout-

epibranchial tip; 14= head length: head width; 15= head length: head

depth; 16= head length: snout length; 17= head length: internarial

distance; 18= head length: orbitonarial distance; 19= head length:

intercanthal distance; 20= head length: interorbital distance; 21= head

length: eye diameter; 22= internarial distance: interorbital distance.

Since the genome of most populations of S. a. bianchii is more

or less introgressed by genes of Speleomantes italicus (Dunn, 1923)

(see especially RuGGI et alii 2005), we chose to describe morpho-

logically the new taxon only on the basis of the westernmost “pure”

populations of the province of Massa-Carrara, i.e. those from Pulica-

Marciaso’s zone (see “Results” for the material’s list).

Morphology and pattern of S. ambrosi bianchi from Pùlica-

Marciaso’s area have been compared with those of the following 30

parapatric specimens of S. ambrosi ambrosti, all collected in the type

locality and environs (eastern end of the province of La Spezia;

Liguria); all the specimens quoted in the present paper belong to

the collections of the Museo Zoologico dell’Universita di Firenze

(MZUF) and numbers are referred to the catalogue of MZUF, but

two paratypes of S. ambrosti bianchi which are deposited in the col-

lection of the Museo Civico di Storia Naturale “G. Doria” of Genoa

(MSNG); c.n.= cadastral number of the caves:

22 13609, Manarola, along the path to Corniglia (Cinqueterre),

les. S, Laity, 25XTT, 1950;

3 dd 1723, 1724 and 1725, ® 1726 (paratypes of Hydroman-

tes italicus ambrosit), cave Sprugola di Monte Tenero (= Caverna di

Monte Tenero n. 1), c.n. 236 Li/SP, 44°0742” N-02°40’28” W(Rome),

250nmaitdee WA. © Ambrosi, LI VII. 1953;

3 2° 1716, 1717 and 1718 (paratypes), cave Caverna della

Taggia (= Antro del Pantano; Sprugola della Taggia), c.n. 79 Li/SP,

44°06’03” N-02°39°47”W (Rome), 210 m, locality Colle Matellina,

near Pegazzano, leg. A. C. Ambrosi, IV.1953;

64 B. LANZA, R. CIMMARUTA, ‘G. FORTI, LE: -BULLINI & G. NASCETTI

Table 2 - Statistical analysis of 22 morphological ratios in Speleomantes ambrosti

bianchi n. ssp. from Pùlica and S. ambrosit ambrosu from La Spezia

t=Student’s test. Ratios are defined in the section Materials and Methods.

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Ee ee ee ee eee ee eee | Cdn significance |

JETS A MINIERA

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. 65

Table 2 - (continued) Statistical analysis of 22 morphological ratios in Speleomantes

ambrosir bianchi n. ssp. from Pùlica and S. ambrosti ambrosti from La

Spezia. Ratios are defined in the section Materials and Methods.

no significance

10 i 5.69-6.38 | 5.96+0.198 5.76-6.17

Spezia

Pulica .70-6.10 | 5.88+0.126 5.71-6.06

94-454 A 2250217 4.02-4.41

Spezia

no significance

.22-4.55 |4.18+0.286 3.97-4.39

Pùlica

.88-4.61 |4.23+0.204 | 4.06-4.40

Spezia

no significance

11-4.35 | 4.26+0.087 4.13-4.38

Pulica

20-2822 1173622 0.290 7.36-7.88

Spezia

no significance

Pulica 3 05-8.16 | 7.50+0294 (ELE See (ME POT

2,0 ae LS a a

Spezia LTO Sea i 370808024031 Lips 29007 0 | St Flite |

Pulica FAV TA ANAS: ae ee

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Spezia Oe ee a eae Pee oe eee

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Pùlica 1544-1804 AZ ATEO MAL 5-1 lo

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Pulica

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Spezia

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Pulica

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1.08-1.17

Spezia

no significance

Pulica Opes Vee Pa Sea RE ee ae ss

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70-2052 W220: 232 19522127

Pùlica

.00-2.28 _|2.16+0.083 2.08-2.25

Spezia

no significance

7 15 158922035 ‘24130. 157 1.91-2.35

Pulica

B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

Table 2 - (continued) Statistical analysis of 22 morphological ratios in Speleomantes

ambrosu bianchi n. ssp. from Pùlica and S. ambrosit ambrosit from La

Spezia. Ratios are defined in the section Materials and Methods

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SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. 67

4 dd 15943, 15945, 15946 and 15947, 4 2° 15942, 15944, 15948

and 15949, outdoors, close to the above-mentioned cave, 150-220

m, leg. B. Lanza, P. Finotello & P. Malenotti, 14.11.1982; 4 dd

19674, 19675, 19676 and 19677, 2 19679, ibidem, leg. B. Lanza &

G. Tosini, 18.XII.1989;

S 15965, 2 15964, La Spezia (in the town, under stones beside

the road to Bocca Lupara), ca. 80 m, leg. S. Vanni & P. Magrini, —

2 PVEL9S5:

P°1727'‘(holotype), and 3-22 17231729 and: 1/730 (paratypes,

cave Sprugola della Cornese (= Sprugola la Canese), c.n. 186 L1/SP,

44°05°15” N-02°39°14”W (Rome), near Fabiano, 240 m, leg. A. C.

Amibrosiy 423) XA1952

3 1584, Ceppo, ca. 500 m SW of Fabiano (SP), leg. G. Pini,

31.X.1954;

3 92 1623, 1624 and 1625 (paratypes), cave La Paladina, c.n.

1208 Li/SP, 44°05°02”5N-02°38’21”W (Rome), Capoacca Valley,

Coregna on the Mt Castellano, 240 m, leg. A. C. Ambrosi, III and

[V.1953:

RESULTS

Speleomantes ambrosii bianec hii n. ssp. (figs 2-6)

Holotype: Adult d 26107 (formerly 4452 New Herpetological

Collection Lanza = NHCL); cave Tana (or Buca) della Bastiola, c.n.

481 T/MS, 44°08’08” N-02°24’08”W (Rome), on the N slope of Mt

Bastione (698 m) and on the left side of the Rio Grande, about

1.2 km SSE of Pulica (church) and 2.3 km E of Fosdinovo, 360 m

(municipality of Fosdinovo; locality Rio Grande); leg. B. Lanza &

Si. Ampelotti; 4.1.X%.1997,.

Paratypes - 65 specimens as follows:

- same locality as holotype, d 1884, 2 22 1883 and 1885, leg. T.

Bianchi & B. Lanza, 18.X.1942; 2 6611, leg. B. Lanza, 28.X.1945;

9 juv. 1874, 1875, 1876, 1877, 1878, 1879, 1880, 1881, 1882, leg.

E. Bianchi, 10,V 11.952) 4une 5 2255-6, 52235595224 lee; BL} &

M. Lanza, 19.IV & 24.V.1970; 3 17123, leg. S. Vanni, 2.1.1986;

juv. 19159, young d 19161, 5 dé 19154, 19155, 19156, 19157

and 19160, £ 19158, leg. S. Vanni & R. Cimmaruta, 23.1V.1987;

B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

Shur s 2 300329 andi s23 2 SEZ INEIC IM Gd 23233,

23234, 23235, 23236 and 23237 (284-288 NHCL), 1 2 23238

(289 NHCL), leg. B. Lanza & T. Bianchi, 26.111.1989; 4 Juv.

23307, 23308, 23309 and 23310 (3849-3852 NHCL), 2 dd 23303

and 23304 (3845-3846 NHCL), 2 22 23305 and 23306 (3847-

3848 NHCL), leg. S. Vanni & B. Lanza, 16.VI.1995; very young

spec. 26106 (4451 NHCL), d 26109 (4454 NHCL) now 52716 in

MSNG, ® 26108 (4453 NHCL), B. Lanza & P. Giorgio Lanza,

DEXIA gi Dis (4656) NIFICI), 130 2611026111 and

26112 (4651-4653 NHCL), 2 9£ 26113 and 26114 (4654-4655

NHCL), leg. B. Lanza, S. Vanni & G. Nistri, 4.VI.1999;

cliffs near the confluence, ca. 44°08’02” N-02°24’10”W(Rome), of

2 - Speleomantes ambrosti bianchi n. ssp.; juv. 26115 MZUF (formerly 4656

NHCL); Tana della Bastiola, 4.VI.1999 (anaesthetized specimen, sub-

merged in water; photo Saulo Bambi).

the Rio della Calda with the Rio Grande, of which Rio della

Calda isia letitributary, ca. 1.3 kmi SSE of Pulica: (church); ca.

300 m (mun. of Fosdinovo; upper valley of the Torrente Pésci-

ola), 4 juv. 26119, 26120, 26121 and 26122 (4660-4663 NHCL),

5 26116 (4657 NHCL), 2 26117 (4658 NHCL) and ® 26118

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. 69

(4659 NHCL) now 52717 in MSNG, leg. B. Lanza & P. Male-

notti, 12.X.1998;

- Grotta del Paradisi, c.n. 831 T/MS, 44°08’02°”N-02°24°09”W

(Rome), 310 m (probably wrongly named Grotta del Ferdì or

Grotta del Fredì, with a level indication of 360 m, in the Tuscan

Speleological Cadastre; actually the Grotta del Ferdì seems to be

a deep well of the same zone, with no c.n., not far from the

Grotta del Paradisi); ca. 1.3 km SSE of Pulica (church) (mun. of

Fosdinovo; upper valley of the Torrente Pésciola), 6 17124; B.

Lanza, S. Vanni & R. Cimmaruta, 23.III.1986; young d 19165,

3 dé 19162, 19163 and 19164, leg. S. Vanni & R. Cimmaruta,

2311937:

Table 3 - Teeth number of Speleomantes ambrosti bianchi n. ssp. from Pulica and of

S. ambrosti ambrosu from La Spezia. pm= premaxillar teeth; av= anterior

vomerine teeth; m= maxillary teeth; ma= mandibular teeth; G=G-test.

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Poliene ER I Amaia lan Pe 26,21 3950 |. de |e rh ok

70 B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

- left side of the stream Canale Pescioletta, 44°07’ 00” N-02°23°00”W

(Rome), 2 km E of Puùlica and 1 km SW of Marciaso, ca. 580 m

(mun. of Fosdinovo), 2 dd 18520 and 18521, leg. P. Agnelli, B.

Campolmi, B. Lanza & P. Giorgio Lanza, 4.IV.1987.

Dicensiey aytieo Ratosma toga! Nestarespleasedito.dedicate

this subspecies to Dr. Tancredi Bianchi (Massa, born on 18.1.1924),

odontologist, who, alongside with the senior author, collected the

first specimens of the new taxon on the 18" of October 1942, in

the course of a biospeleological campaign on the Apuan Alps.

Diagnosis- A Speleomantes ambrosti distinguishable with

certainty from the whole complex of the nominate form by multilo-

cus electrophoresis only. ‘The two subspecies are indeed genetically

completely differentiated at four diagnostic loci: Pgm-2, NADH-dh,

Sod-1 and Ada-1. Nevertheless, S. ambrosi bianchi may be usually

distinguished from the parapatric S. ambrosi ambrosti by its coloura-

tion, since it lacks the dorsal pattern of the “ambrosii-type” frequently

occurring in the animals inhabiting La Spezia and its surroundings

(fig, “ls sec also-WANZA ver air 10958 fies 97-99, 100: (right), -101-

102); in this pattern type the back is usually monochrome, brown

to blackish, aside from the presence of two light, usually ochreous

yellow, often more or less discontinuous dorsolateral stripes (fig.

1). Morphological characters usually significantly different in S. a.

ambrosti and S. a. bianchi (see below) are not discriminant, due to

the more or less broad overlapping of their independent deviations

from the mean; the ratios 10 (body length : mental gland width) and

11 (body length : mental gland length), where only a scarce overlap-

ping occurs, could deserve further research on more specimens.

DLE prio north ert shten mom ortoy sp. e «(figs 3-4)

- External morphology corresponding to that of the species (LANZA

et alu 1995: 44-45). Head moderately depressed (head width: head

depth = 1.88), its posterior portion feebly convex; snout obtusely

truncate (this character feebly or not appreciable in the fig. 3!).

Measurements (in mm) and ratios: tl= 107; bl= 61; ag= 31.6; tal=

46; hl= 10.6; lg= 13.4; sl= 4.8; id= 3.7; od= 3.5; icd= 4.9; iod= 3.3;

ed= 3.7; mgw= 4.1; mgl= 3.5; se= 2.15; fl= 18.6; hil= 19.1; fol=

8.0; 1= 2.33; 2= 1.93; 3= 3.28; 4= 3.19; 5= 1.03; 6= 5.75; 7= 6.49;

8= 4.55; 9= 7.63; 10= 14.88; 11= 17.43; 12= 1.17; 13= 2.15; 14=

1.13; 15= 2.12; 16= 2.21; 17= 2.86; 18= 3.03; 19= 2.16; 20= 3.21;

21= 2.86; 22= 1.12.

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. 71

Fig. 3 - Speleomantes ambrosti bianchii n. ssp.; left to right: 6 26107 MZUF (form-

erly 4452 NHCL, holotype), juv. 26106 MZUF (4451 NHCL), d 26109

MZUF (4454 NHCL) now 52716 in MSNG, ® 26108 MZUF (4453

NHCL); Tana della Bastiola, 11.X.1997 (26107 MZUF) and 22.X1.1997

(dorsal view; anaesthetized specimens, submerged in water; photo Saulo

Bambi).

Approximate number of teeth on each side: 2 pm, 16 av, 16 m,

32 ma.

Dorsal parts with very reduced dark ground colour, a rather

uniform and thick light brown to ochreous brown marbling, and a

hint of strongly discontinuous ochreous yellow dorsolateral stripes; a

very irregular black V on the neck. Ventral parts dark bistre, dusted

and speckled with off-white dots.

Des crip Po oer SM ihee paratyp e's (figs 2-4) -

Their morphological characters, apart from sex and age differences

peculiar to the genus, correspond well to those of the holotype.

The specimens of S. ambrosti ambrosu from La Spezia and environs

G2 B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

(holotype included) and S. ambrosu bianchi from Pulica-Marciaso

and environs (holotype included) show the characters reported in

tables 2, 3 and 4.

Table 4 - Number of vertebral elements of Speleomantes ambrosi bianchii n. ssp.

from Pulica and of S. ambrosi ambrosiu from La Spezia. tv = trunk ver-

tebrae, pv = postsacral vertebrae.

Locality | Sex | n | Mean | cl (99%) G Se E

Spezia DE (912-1539359

rr (eee ie peer ee 475

no significance

Owe Ea aA Pee

DOE) SO Oe as 23-2685

20E2 To P SAS 7 Peale, 3-26.32

Pùlica

Spezia

Pulica

Fig. 4 - Speleomantes ambrosu bianchii n. ssp.; same specimens of fig. 3, ventral

view (anaesthetized specimens, submerged in water; photo Saulo Bambi).

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. 73

The following ratios and the approximate tooth number turned

out to be significantly different between Sd and PL of the same local-

ity021(Pipst0:01 Spezia) Ba(P=10 05 Ralica)rb(P 07024 pezia) 4

(P < 0.05 Spezia), P < 0.02 Pulica), 17 (P < 0.02 Pulica), 20 (P < 0.01

Pulica), 21 (P < 0.01 Pulica), 22 (P < 0.02 Pulica), pm (P< 0.01 Spezia

and Pùlica), m (P < 0.05 Spezia and Pulica), ma (P < 0.05 Pulica).

Fig. 5 - Speleomantes ambrosti bianchii n. ssp.; left to right: 2 26113 MZUF (for-

merly 4654 NHCL), ® 26116 MZUF (4657 NHCL), d 26112 MZUF

(4653 NHCL), 3d 26111 MZUF (4652 NHCL), d 26110 MZUF (4651

NHCL); Tana della Bastiola, 4.VI.1999 (dorsal view; anaesthetized speci-

mens, submerged in water; photo Saulo Bambi).

Dorsal colour pattern rather variable, usually similar to that of

the holotype (fig. 3), but sometimes recalling that of some S. ztali-

cus (Dunn), with ground colour abundant or prevailing and ochre-

ous yellow blotches, or the so called “gormani”-type, with the dark

ground almost completely hidden by an ochreous yellow to ochre-

ous brown colouration. Ventral parts very variable (fig. 3); ground

colour dark brown to dark bistre with a pattern of “italicus’-type,

“gormani-type or intermediate (according to LANZA et alu 1995:

74 B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

45: “1)“italicus”-type: dark ground colour dusted or closely dotted

with white or off-white; 2) “gormani”-type: dark ground colour with

white or off-white, more or less sparse spots and/or vermiculations;

occasionally the white guanophores prevail over the dark ground

colour”). Especially worthy of mention the tendentially melanic

adult d 26116, blackish and spotless dorsally, dark bistre ventrally

with thick whitish dots on the throat and a dozen whitish dots on

the belly (fig. 6).

Fig. 6 - Speleomantes ambrosti bianchii n. ssp.; left to right: d 26116 MZUF (for-

merly 4657 NHCL), ® 26118 (4659 NHCL) now 52717 in MSNG, 2

26117 MZUF (4658 NHCL), juv. 26121 MZUF (4662 NHCL), juv.

26120 MZUF (4661 NHCL), juv. 26122 MZUF (4663 NHCL), juv.

26119 MZUF (4660 NHCL); cliffs near the confluence [ca. 44°08’02”N-

02°24°10”W(Rome)] of the Rio della Calda with the Rio Grande, near

Pùlica, 10.XII.1998 (ventral view; anaesthetized specimens, submerged in

water; photo Saulo Bambi).

For further morphological data on other populations of the spe-

cies see LANZA et alti (1995; tables V, p. 69, and VI, pp. 71-93, local

samples signed respectively CS for S. ambrosti ambrosii and FO for

S. ambrosii bianchii; table XXXI, pp. 216-224 for the animals of the

hybrid zone between S. ambrosti bianchii and S. italicus).

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP 79

CONCLUSIONS

As already hypothesized by NASCETTI et alzi (1996: 165), the

evident lack of gene exchange between the two subspecies of S.

ambrosti seems to be related to the extrinsic geographic barriers rep-

resented by the Magra River and, probably, by unfavourable ecolog-

ical conditions in the upper course of the river, as suggested by the

presumable absence of the genus Speleomantes from Pontremoli’s

area E of the Magra River.

According to the same authors, “plethodontid salamanders have

provided instances of high genetic divergence associated with low

morphological differentiation” (see also, among others, WAKE et

alu 1978), what implies that some taxa may be identified only after

genetic analyses. Nonetheless some taxa result to be identifiable also

on a morphological basis where sympatry between species or parapa-

try between subspecies occur. The first possibility may be exempli-

fied by the paradigm case of the North-american Plethodon dorsalis

Cope and P websteri Highton whose colour pattern differs only in

sympatry (HIGHTON 1979); the second one is well illustrated by the

case of Speleomantes ambrosit ambrosii and S. ambrosii bianchit.

REFERENCES

AYALA F.J., POWELL J.R., TRAcEY M.L., Mourdo C.A. & Pérez-SALAS S., 1972 -

Enzyme variability in the Drosophila willistoni group. IV. Genetic variation in

natural populations of Drosophila willistoni - Genetics, Baltimore, 70: 113-139.

BREWER G.J. & SING C.F., 1970 - An introduction to isozyme techniques - Aca-

demic Press, New York and London, 186 pp.

Forti G., CIMMARUTA R., NAasceTTI G., LANZA B. & BULLINI L., 1998 - Glaciazi-

oni del Quaternario e microevoluzione delle popolazioni continentali del genere

Hydromantes (Amphibia, Plethodontidae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997):

197220 1,

Harris H., 1966 - Enzyme polymorphism in man - Proc. Roy. Soc. London, ser. B,

London, 164: 298-310.

Harris H. & Hopkinson D.A., 1976 - Handbook of enzyme electrophoresis in

human genetics - North Holland Publishing Company Inc., New York, 284 pp.

HIGHTON R., 1979 - A new cryptic species of salamander of the genus Plethodon

from the south-eastern United States (Amphibia; Plethodontidae) - Brimley-

ana, Raleigh, 1: 31-36.

LANZA B., Caputo V., NASCETTI G. & BULLINI L., 1995 - Morphologic and genetic

studies of the European plethodontid salamanders: taxonomic inferences (genus

Hydromantes) - Monogr. Mus. reg. Sci. nat., 16, Torino, 368 pp.

76 B. LANZA, R. CIMMARUTA, G. FORTI, L. BULLINI & G. NASCETTI

NASCETTI G., CIMMARUTA R., Lanza B. & BULLINI L., 1996 - Molecular taxonomy

of European plethodontid salamanders (Genus Hydromantes) - 5. Herpet.,

Athens, 30 (2): 161-183.

PouLIK M.D., 1957 - Starch gel electrophoresis in a discontinuous system of buffers

- Nature, London, 180: 1477.

Rucci A., CimmMaAruTA R., Forti G. & NAsceTTI G., 2005 - Preliminary study

of a hybrid zone beetwen Speleomantes italicus (Dunn, 1923) and S. ambrosti

(Lanza, 1955) on the Apuan Alps, using RFLP analysis (Amphibia, Pletho-

dontidae) - Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova, 97: 135-144.

RICHARDSON R.H., BAVERSTOCK P.R. & Apams M., 1986 - Allozyme electrophoresis.

A handbook for animal systematics and population studies - Academic Press,

Australia, 410 pp.

SHAW C.R. & PrasaD R., 1970 - Starch gel electrophoresis of enzymes. A compila-

tion of recipes - Biochem. Genet., Dordrectht, 4: 297-320.

SELANDER R.K., SmitH M.H., Yanc S.Y., JOHNSON W.E. & GENTRY J.B., 1971

- Biochemical polymorphism and systematics in the genus Peromyscus. I: Varia-

tion in the old-field mouse (pp. 49-90) - In: Studies in genetics - Univ. Texas

Publ. Austin, 7013, 6.

WAKE D.B., Maxson L.R. & Wurst G.Z., 1978 - Genetic differentiation, albumin

evolution, and their biogeographic implications in plethodontid salamanders

(genus Hydromantes) of California and southern Europe - Evolution, Lancaster,

32 (3): 529-539.

ABSTRACT

The Authors describe Bianchi’s Cave Salamander, Speleomantes ambrosti

bianchi n. ssp., endemic to the Province of Massa-Carrara (NW Tuscany; central

Italy), East of the Magra River.

The new subspecies differs from the nominate one, S. ambrosti ambrosti, occur-

ring West of the Magra River in the Province of La Spezia (E Liguria), especially

from a genetic point of view.

A research on 33 enzyme loci, analysed by means of multilocus allozyme elec-

trophoresis, showed that the two subspecies are genetically completely differentiated

at four diagnostic loci; nevertheless, S. ambrosi bianchi may be usually distin-

guished from the parapatric S. ambrosti ambrosu by its dorsal pattern. The lack of

gene exchange between the two taxa seems to be related to the extrinsic geographic

barriers represented by the Magra River and, probably, by unfavourable ecological

conditions in the upper course of the river, as suggested by the likely absence of the

genus Speleomantes from Pontremoli’s area East of the Magra River.

SPELEOMANTES AMBROSII BIANCHII N. SSP. (7%

RIASSUNTO

Il geotritone di Bianchi, Speleomantes ambrosit bianchi n. ssp. (Amphibia, Cau-

data, Plethodontidae)

Gli autori descrivono il geotritone di Bianchi (Speleomantes ambrosti bianchi),

nuova sottospecie propria delle Alpi Apuane della provincia di Massa-Carrara

(Toscana NW), distinguibile dal complesso della sottospecie nominale [.S. ambro-

sit ambrosti (Lanza, 1955)] solo dal punto di vista genetico, essendo differenziata a

livello di quattro loci diagnostici; essa è tuttavia differenziabile di regola anche a

livello morfologico dalle popolazioni parapatriche della sottospecie nominale per il

diverso disegno dorsale. L'assenza di flusso genico fra 1 due taxa sembra da met-

tere in relazione a barriere estrinseche geografiche, nella fattispecie rappresentate dal

Fiume Magra e probabilmente da zone ecologicamente sfavorevoli nel tratto supe-

riore del corso d’acqua.

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RES LIGUSTICAE CCXLVII

ENRICO BURIOLA*, MAURO VALERIO PASTORINO ** & FRANCO Bona *

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. (CESTODA,

NEMATOTAENIIDAE), PARASSITA DEL GEOTRITONE

EUROPEO SPELEOMANTES STRINATII

(AELLEN, 1958) IN LIGURIA

INTRODUZIONE

In alcuni esemplari di Speleomantes strinatii (Aellen, 1958), pro-

venienti da tre stazioni inedite dell'Appennino genovese, è stata rin-

venuta una nuova specie di Cestode particolarmente interessante per

la morfologia e per Pospite. Sono poche infatti le specie di Cestodi

conosciute nei Plethodontidae e tutte in ospiti nordamericani, se

si eccettua Nematotaenia minor Ricci, 1988, un unico esemplare

adulto reperito in Speleomantes flavus (Stefani, 1969) in Sardegna.

Tutti appartengono ai Nematotaeniidae Luùhe, 1910, una piccola

famiglia di Ciclofillidei (comprendenti forme parassite da adulti in

rettili e anfibi che, secondo la revisione più recente (JONES, 1987),

sarebbe costituita da sole diciotto specie suddivise in quattro generi:

Nematotaenia Liihe, 1910; Cylindrotaenia Jewell, 1916; Distoichome-

tra Dickey, 1921 e Bitegmen Jones, 1987. Dei quattro, Nematotaenia

è l’unico genere finora conosciuto in Europa. Delle diciotto specie

complessive solo tre o quattro sono state osservate in Pletodontidi:

Distoichometra bufonis Dickey, 1921, specie unica del genere, pre-

sente anche in Anuri, Cylindrotaenia americana Jewell, 1916, più

volte citata nei Pletodontidi, ma che JONES (1987) considera paras-

sita solo di Anuri, Cylindrotaenia idahoensis Waitz & Mehra, 1961,

* Dipartimento di Biologia Animale e dell'Uomo, Via Accademia Albertina 13,

10123 Torino, Italia.

** Gruppo Speleologico Ligure/Genovese “Arturo Issel”, Villa Comunale ex Bor-

zino, 16012 Busalla (GE), Italia.

80 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & E BONA

unica ad essere riportata solo in Pletodontidi, e Nematotaenia minor

Ricci, 1988, sopra citata.

Nello studio di questi Cestodi sono emerse alcune difficoltà: 1)

scarsità di materiale a disposizione (tutela del geotritone); 2) diffi-

coltà tecniche di orientamento, distensione e preparazione dell’esem-

plare sul portaoggetto (vedi materiali e metodi); 3) aspetto delle

proglottidi adulte larghe e cortissime, con organi piccoli; 4) descri-

zioni esistenti talvolta superficiali e troppo semplificate; 5) man-

canza, sovente, delle proglottidi totalmente gravide, con difficoltà di

seguire la formazione delle capsule paruterine.

Abbiamo rivolto una particolare attenzione agli organi paruterini,

che paiono costituire un carattere essenziale nella diagnosi generica

(posizione, struttura iniziale e terminale, numero e modalità di svi-

luppo), e all'aspetto dei gusci embrionali, particolare rispetto ai nor-

mali gusci dei Ciclofillidei, ai quali si aggiunge anche una capsula

uterina. Infine è stata osservata ed esaminata, per via istochimica,

la presenza di una struttura ghiandolare apicale dello scolice molto

evidente che non sembra esser stata finora descritta, almeno nelle

proporzioni da noi osservate. L'importanza degli organi apicali in

tutti 1 cestodi è nota.

Quanto alla sistematica dei Nematotaeniidae ci siamo attenuti

essenzialmente al lavoro di JONES (1987). La specie qui descritta

appartiene certamente ad un genere diverso da Nematotaenia, unico

diffuso in Europa ed assente in America (dopo la segnalazione dubi-

tativa di SCHMIDT (1986), la sua presenza, citata da GOLDBERG &

Bursey (1991) e GoLDBERG et alzi (2002), andrà confermata con

adeguata descrizione), mentre ha notevoli affinità morfologiche, oltre

quella di possedere gli stessi ospiti (Plethodontidae), coi due generi

americani Cylindrotaenia e Distoichometra. La nuova specie presenta

caratteri intermedi tra i due generi ma è stata provvisoriamente attri-

buita a Distoichometra in attesa di nuove raccolte e di un confronto

con materiale nordamericano.

' Nel testo di GOLDBERG sono citati von Linstow (1899), Walton (1939) e Kuntz

(1940), che hanno segnalato la presenza di N. dispar in Nord-America. Questi dati

attendono una verifica: all’epoca di Linstow l’unico genere conosciuto era Nemato-

taenia, e quanto agli altri due autori, si tratta di tesi o rendiconti di laboratorio di

difficile consultazione e di cui non è possibile rintracciare il materiale.

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 81

Ciò conferma anche l’importanza del reperto da un punto di

vista zoogeografico e della coevoluzione di certi parassiti e dei loro

Ospiti; In questo caso infatti siamo di fronte a Nematotaeniidae molto

simili in Pletodontidi, paleartici e neartici, separati dall’Atlantico e

tra l’altro di difficile dispersione.

MATERIALI E METODI

Sono stati esaminati dieci esemplari di Speleomantes strinatit

(Aellen, 1958) della collezione Pastorino (etichettati inizialmente

Hydromantes italicus Dunn), datati 1972 e provenienti da tre sta-

zioni inedite, «Rifugio presso 11 Ponte di Rio dei Fontanini», «Rifugio

Rio Noce», «Rifugio Nun-Serrè», rispettivamente di S. Bartolomeo

di Savignone e di Isola del Cantone, in provincia di Genova; otto

sono risultati parassitati. L’intestino, col suo contenuto, era stato fis-

sato e conservato in formalina al 10%.

I cestodi successivamente estratti apparivano un po’ macerati e

contorti ma in discrete condizioni. Erano da uno a più esemplari

per ospite; mancavano esemplari perfettamente maturi, con capsule

paruterine a termine. Tutti gli esemplari sono stati colorati im toto

con carminio cloridrico od emallume diluito, differenziati in alcool

70° acidulato (HCl) e montati in Balsamo del Canada. Di alcuni sco-

lici sono stati confezionati preparati istologici con sezione 8-10 um

per l’esame delle strutture ghiandolari apicali, risultate PAS-positive

(reazione acido periodico-Schiff). Le osservazioni sono state eseguite

con microscopio ad ottica interferenziale (Nomarsky) compresa l’im-

mersione (x100). Nella descrizione per “proglottidi adulte” si inten-

dono quelle con ovario maturo e passaggio delle uova nell’utero,

sovente dette proglottidi mature.

La forma dei Nematotaeniidae non è piatta ben definita, tipica

dei Cestodi, ma può essere quasi cilindrica. Ciò può causare nella

preparazione una rotazione di tratti dello strobilo lungo l’asse lon-

gitudinale, sicché le proglottidi possono presentarsi all’osservatore

o viste dorso-ventralmente (la norma) o di lato. Un punto di riferi-

mento per capire la posizione della proglottide sotto osservazione è

la tasca del cirro: se distesa attesta una visione frontale (=dorso-ven-

trale), mentre se appare in sezione traversa la visione è laterale.

82 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & E BONA

RISULTATI

Distoichometra italica n. sp.

Holotypus: in Speleomantes strinatia (Aellen) di Liguria, Isola

del Cantone (GE), Rifugio Rio Noce, 1972, leg. M. V. Pastorino, un

es. montato su preparato microscopico (Muséum d’Histoire Natu-

relle, “Geneve Svizzera)

Paratypus: stessi dati dell’holotypus, un es. montato su prepa-

rato microscopico (Museo Civico di Storia Naturale “G. Doria”,

Genova).

Descrizione. Va premesso che, data l’anatomia estre-

mamente semplice e uniforme, 1 caratteri significativi sono pochi, e

purtroppo, tra questi, l'apparato copulatore (tasca del cirro e vagina)

non ha potuto essere osservato con precisione. Ci siamo perciò con-

centrati su tre aspetti di interesse per l’identificazione sia generica sia

specifica, di cui solo il primo era a tutt'oggi preso in considerazione.

E precisamente: 1) complesso utero-organo paruterino indicato da

JONES (1987) come “complesso paruterino” (morfologia, numero e

posizione degli organi paruterini, trasformazioni durante lo sviluppo

che coinvolge utero e organo paruterino); 2) organo ghiandolare api-

cale dello scolice; 3) formazione dei gusci embrionali, della capsula

uterina e loro rapporti con l’organo paruterino.

Strobilo tendenzialmente cilindrico, lungo 12-18 mm a matu-

razione quasi completa. Pori irregolarmente alterni. Muscolatura

longitudinale debole, di fasci sottili, netti e spaziati. Scolice largo

445-580 um, inerme, munito di quattro robuste ventose rotondeg-

gianti (140-220 um). Collo lungo e particolarmente largo nel tratto

subito dopo lo scolice, diametro massimo 650 um. Nella parte apicale

dello scolice tutto lo spazio tra le ventose è occupato da un ammasso

cellulare di natura ghiandolare costituito da cellule piriformi molto

allungate, ricche di vacuoli chiari immersi in una sostanza PAS posi-

tiva, e disposte in file colonnari (fig. 1).

Proglottidi adulte presenti a circa 6-7 mm dall’estremità cefalica;

estremamente corte e larghe (65-80 x 500-550 um); quelle gravide

quasi a termine (capsule paruterine non completamente formate) si

allungano rispetto alle precedenti diventando poco più lunghe che

larghe (275 x 220-250). Diametro dei canali escretori, dorsale: 2,5-

3, ventrale: 8-10. I testicoli sono due, dorsali, e possono apparire

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 83

ovali o sferici (55-61 x 80-100 um). Il dotto di ogni testicolo con-

verge nel dotto deferente che si dilata quasi subito formando una

vescicola seminale esterna allungata, sovente ad ansa e abbastanza

centrale, visibile chiaramente a partire dalle proglottidi semigravide;

può raggiungere 1 50-60 um in lunghezza e permanere anche nelle

proglottidi gravide. Questa vescicola non va confusa con un ricetta-

colo seminale come quello che persiste nelle proglottidi a matura-

zione avanzata in molti Ciclofillidei. Dalla vescicola esterna il dotto

deferente raggiunge la tasca del cirro, con sinuosità più o meno

accentuate. Penetrato nella tasca può aumentare leggermente di dia-

metro diventando sinuoso ad anse strette, aspetto assimilabile a una

vescicola seminale interna allungata, ripiegata su se stessa, delicata e

senza forma definita, e non solo a un dotto eiaculatore, che è certa-

mente molto corto data la piccolezza del cirro.

Fig. 1 - Distoichometra italica n. sp., sezione dell’apice dello scolice. In basso e a

sinistra porzione di ventose; in alto a destra limite anteriore dello scolice;

al centro masse scure di struttura ghiandolare Pas positiva.

La tasca del cirro è piccola, stretta, allungata, rastremata se vista

trasversalmente, a parete relativamente sottile, e misura: 125-136 x

22-25 um (quando stirata 170-175 x 18-20 um); il cirro, molto pic-

colo, è di difficile osservazione e non sembra spinescente.

L’ovario è piccolo, leggermente ovale (39-42 x 25-33 um), non

lobulato, difficile da individuare, anche per le poche ovocellule, e

84 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & F BONA

di rapida scomparsa; è ventrale e porale rispetto al vitellogeno. Il

vitellogeno, in posizione più mediana rispetto all’ovario è anch’esso

piccolo (30-35 um), ma facilmente osservabile (nelle proglottidi

adulte e prime gravide) per le sue cellule vitelline caratteristiche,

compatte e rifrangenti. Non è stata osservata la ghiandola di Mehlis,

che tra l’altro non è citata in nessuna descrizione di Nematotaenii-

dae. Tuttavia nella parete del vitellodotto, prima di raggiungere

l’ovidotto, sono state notate piccole cellule tondeggianti, trasparenti,

che potrebbero avere una funzione vicariante. Il lungo tratto tra-

sversale, leggermente sinuoso, che congiunge il punto d’incontro

di ovidotto e vitellodotto con l’orifizio femminile è detto da JONES

“canale copulatorio”. In realtà questo dotto dovrebbe corrispondere,

nella terminologia comune, alla “vagina”; una vagina estremamente

lunga, leggermente ventrale rispetto alla tasca del cirro e al defe-

rente. Questo “canale copulatorio” sembra sboccare nel piccolissimo

atrio con un cono (36-52 um), difficilmente visibile, con base rivolta

verso il poro e strozzato prossimalmente da uno sfintere piccolis-

simo (il cono potrebbe anche rappresentare il fondo dell’atrio). Nelle

proglottidi adulte o semi-gravide, subito dopo questa strozzatura, il

dotto vaginale può dilatarsi formando una ampolla ovale (42-61 x

20-22 um) abbastanza persistente. Questa ampolla sembra la vagina

Vera e propria, senza una parete con struttura differenziata, ma che

s1 evidenzia dilatandosi dopo l’inseminazione. In questo caso la fun-

zione di ricettacolo seminale verrebbe assunta dal lungo tubicino

di diametro irregolare che segue in direzione prossimale. Qualora

invece si volesse considerare come vagina solo lo sfintere e il piccolo

cono terminale, allora ampolla citata corrisponderebbe ad un ricet-

tacolo seminale in posizione terminale con lungo e stretto prolunga-

mento prossimale. L’atrio forma un piccolissimo bulbo (28-30 um di

diametro) sovente indistinto (fig. 2).

L’utero si forma in posizione anteriore, con una massa estesa

dorso-ventralmente (non trasversalmente) a contorno irregolare e

cavità ingombra di ammassi cellulari connessi alla sua parete, che

subito formano una capsula uterina attorno ad ogni uovo penetrato.

Il tessuto paruterino (che sin dall’inizio, prima ancora di assumere

la struttura di organo paruterino, si estende e aderisce sulla faccia

anteriore dell'utero) dà origine ad alcuni organi paruterini digiti-

formi, non rigidi, che gradualmente si allungano rimanendo più o

meno sinuosi e con leggere strozzature. La parete di questi sembra

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 85

in continuazione con lo strato più esterno della parete uterina.

L’utero si divide in due masse, una dorsale e l’altra ventrale, per

un certo tempo a contatto, ma che tendono a separarsi. Ciascuna

è incappucciata da 2 a 4 organi paruterini (raramente 1 solo) che

in totale ammontano a 4-6 (raramente 3 o 8). Gli organi paruterini

Fig. 2 - Distoichometra italica n. sp. Proglottidi adulte in sezione trasversale (a) e in

visione dorso-ventrale (b). Freccia scura: vescicola seminale esterna; freccia

chiara: dilatazione terminale vagina.

di ciascuna metà dell’utero sono diretti dorsalmente o ventralmente,

secondo la massa uterina cui appartengono, e leggermente inclinati

in avanti, soprattutto nelle proglottidi gravide. Si formano molto

vicini, quasi uniti alla base, ma diventano via via più indipendenti.

In ciascuna delle due parti dell’utero (dorsale e ventrale) si delimi-

tano delle porzioni o sacche di embrioni destinate a ciascun organo

paruterino, porzioni che rimangono a lungo a contatto tra loro e più

facili da individuare quando inizia il trasferimento degli embrioni

nell organo paruterino. Questo abbinamento di un organo paruterino

con la porzione di utero che gli compete è la vera unità funzionale

86 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & F BONA

del complesso utero/organo paruterino, indipendentemente dal fatto

che le singole porzioni di utero possano separarsi l’una dall’altra o

rimanere a contatto. Inizialmente l’asse centrale dell'organo parute-

rino è cosparso di nuclei impilati, connessi ad espansioni lamellari

trasversali, concave verso l’utero, che conferiscono all’organo paru-

terino un aspetto striato, caratteristico di molti Nematotaeniidae.

Queste lamelle concave servono a risucchiare dall’utero, con l’ausilio

di probabili movimenti peristaltici dell'organo paruterino, le “capsule

uterine” contenenti l’oncosfera, ed a trascinarle verso l’apice, ove si

formerà la capsula paruterina sferica, che, nel nostro caso, conterrà

da 1 a 3-4 oncosfere. Quando si prepara il risucchio degli embrioni,

nella parte prossimale degli organi paruterini (quella rivolta verso

l’utero) aumenta la spaziatura tra alcune lamelle, e ciò determina

la formazione di una o più cavità delicatissime che richiamano a sé

le “uova”, riteniamo con relativa “capsula uterina”. Queste lamelle

distendendosi e comprimendosi luna contro l’altra sotto la pressione

dell'embrione (o del gruppo di embrioni) penetrato, finiscono per

formare la parte interna, diventata compatta, della parete della cap-

sula paruterina la quale verrà poi anche rinforzata esternamente da

cellule del parenchima.

La formazione dei gusci embrionali dell’oncosfera, così chia-

mati perché derivano dai blastomeri iniziali dell'embrione e non da

cellule accessorie, avviene secondo lo schema tipico di numerose

famiglie di Ciclofillidei e con qualche variazione rispetto ad altre.

Il guscio più esterno possiede due grandi macromeri in posizione

opposta (detta polare) attorno all’oncosfera, mentre quello interno è

formato da tre cellule più piccole, mesomeri, situati all’incirca sotto

1 due macromeri, due da un lato, uno dall’altro. L'ampiezza e la

forma del guscio esterno può variare molto secondo i generi e le

specie; il guscio interno forma l’embrioforo, strato sclerificato ben

riconoscibile e talvolta con struttura caratteristica, sovente accom-

pagnato da uno o due strati amorfi che vi “aderiscono”. Attorno al

guscio esterno si trova una pellicola sottilissima aggiuntiva, difficil-

mente osservabile se non all’inizio dell’embriogenesi, prodotta dalla

ghiandola di Mehlis (“coque” in francese, “capsule” in inglese, da

non confondere con l'eventuale capsula uterina formata dall’utero).

In D. ttalica n. sp., nell’embrioforo che sembrerebbe rimanere

sottile, inizialmente con ispessimenti irregolari, ci è parso rintrac-

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 87

ciare gli avanzi tipici dei mesomeri e segni del processo di scleri-

ficazione che non sembra scostarsi dallo schema classico. Invece il

guscio esterno, che non è una struttura rigida, risulta normale da

una parte, con un grande macromero polare e una sottile pellicola

che lo congiunge al macromero opposto, mentre dall’altra forma un

particolarissimo ammasso di varie cellule, quasi grande come l’em-

brione. Contiene certamente un macromero cui sono addossate 3-5

cellule più piccole, di natura diversa. Una o due potrebbero essere

mesomeri del guscio interno, le altre avanzi di globuli polari, ma

la più strana e appariscente, formante una enorme vescicola, è di

origine dubbia. Potrebbe essere lo stadio finale della cellula vitel-

lina oppure anche un grande e costante vacuolo del macromero del

guscio esterno di un solo polo. Il guscio risulta così profondamente

asimmetrico (fig. 3). Da notare che, durante il passaggio dell’onco-

sfera attraverso l’organo paruterino per raggiungere la capsula paru-

terina, questo guscio esterno viene risucchiato per primo, formando

una propaggine elastica assai sottile e lunga che precede l’oncosfera

e probabilmente serve a richiamarla verso la capsula paruterina.

Fig. 3 - OP: organo paruterino; CU: capsula uterina; Em: embrione con 2 grosse

cellule ghiandolari tipiche e uncini; G,: guscio interno, futuro embriofo-

ro; G,: guscio esterno; Ma: macromero polare del guscio esterno; Ma,:

ammasso cellulare asimmetrico con macromero; Me: mesomeri del guscio

interno (vedi anche fig.8).

88 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & FE BONA

Diver veartnyo nio ien ies eedlmome ztalicarconrcur segna-

liamo la nuova specie riconduce al suo luogo di raccolta ed ha un

preciso valore zoogeografico, essendo questa la prima specie di

Distoichometra descritta per |’ Europa.

DISCUSSIONE

Secondo JONES (1987) la famiglia dei Nematotaeniidae é costi-

tuita da 18 specie suddivise in quattro generi, con l’aggiunta di sette

spectes inquirendae. Limitandoci alle prime, dodici sono presenti negli

Anuri, di cui otto loro esclusive (in Bufonidae, Ranidae, Hylidae e

Leptodactylidae, meno frequentemente in Rhacophoridae e Peloba-

tidae, e molto raramente in Microhylidae), e quattro comuni anche

a Caudati e Rettili (!); le ultime sei, che non compaiono in Anuri, si

trovano: cinque in Rettili ed una in Pletodontidi.

I Nematotaeniidae descritti in Pletodontidi sono pochi e com-

prendono solo generi del Nord-America (Cylindrotaenia e Distoicho-

metra), dove peraltro sono localizzati la maggior parte degli ospiti.

Unica eccezione è Nematotaenia minor Ricci, 1988, la sola specie

segnalata e descritta in Pletodontidi dopo la revisione di JONES

(1987), primo ritrovamento in Europa e prima segnalazione del

genere Nematotaenia nei Geotritoni; comunque questa attribuzione

generica è in attesa di conferma, anche se si può sin d’ora escludere

l'appartenenza a Cylndrotaenia o Distoichometra. Tre dei quattro

generi di Nematotaeniidae (Cylindrotaenia, Distoichometra e Nema-

totaenta) hanno almeno una specie parassita in Pletodontidi ed è in

quest'ambito che dobbiamo inserire la nostra specie. Si può subito

escludere l’appartenenza a Cylindrotaenia, per il numero dei suoi

organi paruterini strettamente limitato a due, e a Nematotaenia, per

il processo di formazione delle sue capsule paruterine che avviene

dopo lo smembramento dell’utero, nonché per il loro numero usual-

mente molto maggiore e la posizione disordinata nel parenchima.

Maggiori concordanze esistono per una attribuzione a Distoichometra.

Distoichometra Dickey, 1921 venne proposto per una nuova specie,

D. bufonis, in Bufo terrestris negli U.S.A., che differiva dalle specie

allora conosciute, Nematotaenia dispar (Goeze 1782) e Cylindrotaenia

americana Jewell, 1916, nella disposizione e nel numero delle capsule

paruterine (3-12). Due specie successivamente aggiunte al genere, e

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 89

precisamente: D. Rozloffi Douglas, 1958, con 6 capsule paruterine,

in Hyla regilla Baird & Girard, 1852 negli U.S.A., e Baerietta ente-

raneides (Helfer, 1948), pure con 6 capsule, in Aneides lugubris (Hal-

lowell, 1849), sempre negli U.S.A., dopo un riesame del materiale

vennero considerate da JONES (1987) come sinonimi di D. bufonts,

sicché il genere è rimasto, a tutt'ora, monotipico. Del resto la vali-

dita di enteranetdes, inizialmente descritta come Proteocephalus e, poi

trasferita al genere Baerietta (con solo specie a 2 capsule, oggi rite-

nuto sinonimo di Cylindrotaenia) da YAMAGUTI (1959), era già stata

messa in dubbio da Waitz & MEHRA (1961) e ScHMIDT (1980). D.

bufonis (fig. 4) rimane perciò l’unica specie cui confrontare D. italica.

Fig. 4 - Distotchometra kozloffi Douglas, 1958 (oggi, secondo JONES, sinonimo di

Distoichometra bufonis Dickey, 1921). Proglottide adulta in sezione tra-

sversale (a); proglottide gravida con capsule paruterine formate in visione

dorso-ventrale con due serie sovrapposte di capsule paruterine. Tratto da

DoucLas, 1958. L’ingrandimento di questa figura è lo stesso della fig. 2.

Col termine “complesso paruterino” JONES (1987) intende tutto

l'insieme formato da utero e organi paruterini, diverso da un genere

all’altro e talvolta anche da una specie all’altra, includendo anche

le trasformazioni che avvengono durante la maturazione nelle pro-

glottidi semigravide e gravide, fino alla formazione definitiva delle

capsule paruterine. Secondo questo schema, quando non c’è smem-

bramento dell’utero l’insieme del complesso paruterino si mantiene

in modo caratteristico per tutto il processo di maturazione. Questo

aspetto, che si distingue da quello di Nematotaenia in cui ogni ca-

psula paruterina finisce isolata nel parenchima, è stato confermato

90 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & FE BONA

da SwIDERSKI & TKACcH (1997a). Comunque anche quando non

esiste una frammentazione visibile dell’utero, si deve ammettere che

all’interno dell’utero rimasto intero vengano delimitate delle sacche

destinate al rifornimento di embrioni per ogni singolo organo paru-

terino. Con o senza separazioni, si formeranno delle “unità fun-

zionali” indipendenti, costituite da un organo paruterino e da una

porzione d’utero, che finiranno per trasformarsi in capsule parute-

rine: nella valutazione delle differenze converrebbe tener conto anche

di queste.

E° opportuno puntualizzare due aspetti funzionali diversi nello

sviluppo dell’organo paruterino. Nella fase iniziale l'organo parute-

rino appare come una appendice (anteriore in Cylindrotaenia e Distot-

chometra) di una porzione d’utero ancora piena di uova, appendice

diretta verso la capsula paruterina che sta formandosi alla estremità

opposta ed è ancora molto ridotta. Nella fase finale invece l’organo

paruterino, o meglio quanto avanza dopo la formazione della capsula

apicale, è diventato un'appendice della capsula paruterina, ormai

piena d’uova, appendice diretta verso i resti dell’utero svuotato.

Sono due aspetti, iniziale (prima del passaggio delle uova) e

finale (dopo il passaggio delle uova) dell’organo paruterino, talvolta

abbastanza simili, ma inversi e che non vanno confusi, per una esatta

interpretazione degli stadi del “complesso paruterino”. L'aspetto

trasversalmente striato dell'organo paruterino finale è da attribuire

alla contrazione di fibre muscolari circolari che strozzano l’accesso

alla capsula paruterina dopo il passaggio delle uova (fig. 3).

Il meccanismo del passaggio delle uova dall’utero alle capsule

paruterine attraverso l’organo paruterino, secondo JONES, è ancora

sconosciuto. Da quanto osservato, le uova di ogni porzione d’utero

vengono “risucchiate” attraverso il corrispettivo organo paruterino,

come si è detto, da movimenti peristaltici del medesimo e grazie alla

sua struttura lamellare (vedi descrizione); dalla sua base raggiungono

il suo apice dove è già iniziata la formazione della capsula.

Alcune osservazioni inedite su N. minor Ricci dimostrano che al

criterio di discriminazione che si basa sullo sviluppo del complesso

utero-paruterino (sensu JONES) e sulla modalità e tempi di distacco

delle singole unità funzionali utero-paruterine, l’una dall’altra e dai

residui dell’utero, bisognerà aggiungere l’aspetto puramente mor-

foistologico della struttura iniziale dell'organo paruterino e dei suoi

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 91

L'orientamento degli organi paruterini, carattere sovente uti-

lizzato in Cylindrotaenia, è di dubbio utilizzo in Distoichometra per

confronti con la letteratura (vedi ad esempio JONES, 1987, figg. 134-

138 di pag. 233), non essendo chiaro lo stadio dell'organo paruterino

considerato, se iniziale o finale.

distale

Fig. 5 - Fasi di sviluppo di una unità funzionale del complesso paruterino. Organo

paruterino (OP), anteriore all’utero (U), prima e durante il passaggio degli

embrioni; capsula paruterina (CP) con resti di organo paruterino (OPT)

dopo il passaggio delle uova, e dell’utero (RU), posteriori alla capsula. In

questo schema le capsule uterine non sono evidenziate. Figure tratte da

JONES (1987).

In Cylindrotaenia ed in D. bufonis, così come in italica, il tessuto

paruterino si sviluppa anteriormente all’utero, come sembra essere

la norma; in tutte le specie di Cylindrotaenia si formano due organi

paruterini (coppia) appaiati dorso-ventralmente che rimangono attac-

cati all’utero e l'ampiezza dell’angolo che li separa avrebbe valore

specifico; in D. bufonis si formano da tre a sei organi paruterini in

due file dorsale e ventrale sovrapposte (6-12 in tutto) e collegate ai

resti di un utero che sembrerebbe rimasto intero; purtroppo non

avendo osservato proglottidi gravide a termine in italica, non sap-

piamo se anche in questa specie, come in bufonis, le capsule parute-

rine rimangono collegate all’avanzo dell’utero.

Invece in D. ttalica l’utero si suddivide sin dall’inizio in due

masse, una dorsale l’altra ventrale, prima connesse da un istmo ma

poi indipendenti. Nella prima fase di sviluppo il complesso utero-

organo paruterino ricorda il modello di Cylindrotaenia con la dif-

ferenza che in italica, come si è detto, l’utero si suddivide in due

masse separate, ciascuna con 2 a 4 organi paruterini, e perciò in

totale da 4 a 8, contro i 6 a 12 in bdufonis e solo 2 in Cylindrotaenia.

92 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & F BONA

Quindi già solo lo sdoppiamento dell’utero e il numero di capsule

paruterine sarebbero sufficienti per distinguere ztalica da bufonis (fig.

6). La sovrapposizione dei loro intervalli di variazione del numero

Visione latero-laterale Visione dorso-ventrale

Anteriore Anteriore

Laterale | | Laterale

Ventrale | Dorsale

Posteriore . E Posteriore

Cylindrotaenia sp.

Anteriore Anteriore

Laterale Laterale

Ventrale | | Dorsale

Posteriori a ; ior

ORIGRIRE Distoichometra bufonis Posteriore

{da un minimo di 6 a un massimo di12 organi paruterini)

Anteriore Anteriore

N° minimo

organi paruterini

Ventrale | lux: _ Dorsale Laterale | Laterale

N° massimo

organi paruterini

Posteriore Posteriore

Distoichometra italica n. sp.

Fig. 6 - Schema del complesso utero-paruterino in Cylindrotaenia, Distoichometra

bufonis e Distoichometra italica n. sp. Utero: tratto spesso; organo parute-

rino: tratto sottile. All’apice degli organi paruterini si formerà la capsula

paruterina, qui omessa.

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 93

di capsule paruterine, 4-8 versus 6-12, non pare tale da infirmare

la differenza tra le due specie, convalidata anche da altri caratteri,

come, in ztalica: la cospicua massa ghiandolare apicale dello sco-

lice, la cui Importanza sistematica andrà meglio valutata, avendone

osservato tracce anche in altri Nematotaeniidae; la tasca del cirro più

stretta, piccola e fusiforme, in cui il rapporto larghezza/lunghezza

è di 1:6 contro 1:2 ed 1:3 (dai disegni di Jones 1987, in quanto

1 suol dati numerici sono difficilmente confrontabili coi nostri); la

vescicola seminale esterna, molto evidente a partire dalle proglottidi

semigravide, non osservata in bufonis; una dilatazione vaginale distale

pronunciata, con probabile piccolo sfintere pre-atriale, ove JONES

(1987) indica per bufonis un semplice “canale copulatorio” uniforme

(considerandolo addirittura tra 1 caratteri generici). Va comunque

precisato che la vescicola seminale esterna e la dilatazione vaginale,

che potrebbe vicariare un ricettacolo seminale in posizione anomala,

si osservano solo in determinati momenti funzionali, il che rende

necessario un controllo dei due caratteri in materiale certo di bufonis.

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Fig. 7 - Distribuzione dei generi: Nematotaenia (tratto continuo) con all’interno

Distoichometra italica n. sp. (area ovale nera), Distoichometra bufonis (trat-

teggio) e Cylindrotaenia (punto e linea) con all’interno (punto pieno) la

distribuzione per i Pletodontidi (da JONES, 1987, modificato).

94 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & E BONA

D'altra parte anche la distribuzione geografica dei due reperti,

Nord-America per bufonis ed Europa per italica, rendono verosimile

una differenza tra le due specie (fig. 7).

Quanto ai gusci embrionali, escluso DouG Las (1961a), con le

sue osservazioni istologiche su Distorchometra kozloffi Douglas, 1958

in Anuri nordamericani e su Cylindrotaenia diana (Helfer, 1948), in

Pletodontidi pure nordamericani, nessuno ha descritto la particolare

struttura del guscio esterno, con enorme cellula vescicolosa, da noi

pure osservata (fig. 8). Neppure lavori recenti di ultramicroscopia,

vedi JONES (1988) su C. hickmani Jones, 1985, SwIDERSKI & TKACH

(1997b) su Nematotaenia dispar (Goeze, 1782) e Conn (1999) su

Distoichometra bufonis Dickey, 1921, forniscono indicazioni in pro-

posito. Il che significa o che questi autori non hanno preso in consi-

derazione la suddetta struttura o che il loro materiale è ben diverso

Fig. 8 - (a): Cylindrotaenia diana (Helfer, 1948) e (b): Distoichometra kozloffi Dou-

glas, 1958. Embrioni, oncosfera ed annessi embrionali in fasi iniziali di svi-

luppo. Notare la particolare formazione vacuolare asimmetrica attribuita a

macromero del guscio esterno da DouGLAS (1961a), molto simile a quanto

osservato in Distoichometra italica n. sp. Tratto da DOUGLAS, 1961a.

dal nostro. Questa caratteristica del guscio esterno potrebbe avere

un significato sistematico interessante non essendo conosciuta, per

quanto si sa, nei Ciclofillidei, e per il fatto che potrebbe essere limi-

tata a una sola parte dei Nematotaeniidae.

DISTOICHOMETRA ITALICA N. SP. 95

La presenza e l’importanza sistematica di un ammasso ghian-

dolare apicale imponente andrà meglio valutata, avendone osservato

tracce anche in altre specie di Nematotaeniidae.

CONCLUSIONI

I Cestodi dei geotritoni sono poco conosciuti in Europa e perciò

sempre interessanti.

Il ritrovamento di D. italica in un geotritone dell’ Appennino

ligure allarga l’areale di diffusione dei Nematotaeniidae confer-

mandoli, per ora, come unica famiglia di Cestodi conosciuta in

questi Caudati.

In Europa l’unico genere conosciuto è Nematotaenia, negli

Anuri e, dopo la descrizione di N. minor Ricci, 1988, anche nei

Pletodontidi, mentre italica ha maggiori affinità con il genere

nordamericano monotipico Distoichometra Dickey, 1921.

Con ttalica il genere Distoichometra si estende anche ai Pletodon-

tidi europei, mentre 1 suoi ospiti tipici (ma non esclusivi, potendo

trovarsi anche in Anuri) sono i Pletodontidi nordamericani.

N. minor e D. italica n. sp. non solo sono stati i primi ritro-

vamenti di un Nematotaeniidae in Pletodontidi europei, ma

appartengono a generi diversi, il che fa pensare, contrariamente

a quanto supposto, ad una maggiore diversificazione di questi

Cestodi.

A parità di gruppo d’ospite ci sarebbe stata una differenziazione

geografica nell’ambito delle specie di uno stesso genere paras-

sita.

Un problema particolare, che esula dal presente lavoro, è sol-

levato da Nematotaenia minor Ricci, 1988, il cui modello di

sviluppo del “complesso paruterino” è nettamente diverso da

quello di Distotchometra italica n. sp., pur essendo stata trovata

in Pletodontidi europei, e diverso anche da quello degli altri

generi noti, compreso Nematotaenia.

96 E. BURIOLA, M.V. PASTORINO & FE BONA

BIBLIOGRAFIA

Conn D.B., 1999 - Ultrastructure of the embryonic envelopes and associated mater-

nal structure of Distoichometra bufonis (Platylminthes, Cestoidea: Nematotaenii-

dae) - Acta Parasitol., Warszawa, 44: 4-10.

DougcLas L.T., 1958 - The taxonomy of nematotaeniid cestodes - 7. Parasit., Law-

rence, 44: 261-273.

DougcLas L.T., 1961a - The development of organ system in nematotaeniid ces-

todes. I. Early histogenesis and formation of reproductive structures in Baeri-

etta diana (Helfer, 1948) - 7. Parasit., Lawrence, 47: 669-680.

DoucLas L.T., 1961b - The development of organ system in nematotaeniid ces-

todes. II. The histogenesis of paruterine organs in Baerietta diana - F. Parasit.,

Lawrence, 47: 681-685.

GOLDBERG S.R. & Bursey C.R., 1991 - Helminths of three toads, Bufo alvarrius,

Bufo cognatus (Bufonidae), der: Scaphiopus couchii (gclonatidas), from Southern

Arizona - 7. helminth. Soc., Washington, 58 (1): 142-146.

GOLDBERG S.R., Bursey C.R., SALGADO-MALDONADO G., BAEZ R. & CANEDA C.,

2002 - Helminths parasites of six species of anurans from Los Tuxtlas and Cat-

emaco Lake, Veracruz, Mexico - Southwest. Natur., Durant, 47 (2): 223-229.

Jones M.K., 1987 - A taxonomic revision of the Nematotaeniidae Lthe, 1910 (Ces-

toda: Cyclophyllidea) - Syst. Parasit., Cordrecht, 10: 165-245.

Jones M.K., 1988 - Formation of the paruterin capsules and embryonic envelopes

in Cylindrotaenia hickmani (Jones, 1985) (Cestoda: Nematotaeniidae) - Austr. 7.

Zool., Collingwood, 36: 545-563.

Ricci M., 1988 - Parassiti del gen. Speleomantes (Amphibia Urodela: Plethodonti-

dae) in Italia - Riv. Parass., Roma, 48 (1) (1987): 5-25.

SCHMIDT G.D., 1980 - Baerietta allisonae n. sp. (Cestoda: Nematotaeniidae ) from

a new Zealand gecko, Hoplodactylus maculatus - N. Zeal. F. Zool., Wellington,

7: 7-9.

ScHMIDT G.D., 1986 - CRC handbook of tapeworm identification - Boca Raton,

Florida: CRC Press Inc., 675 pp.

SWIDERSKI Z. & TKACH V., 1997a - Ultrastructure of the paruterine organs and

paruterine capsules in the nematotaeniid cestode, Nematotaenia dispar (Goeze,

1782) Lithe, 1910, a parasite of Amphibians - Intern. 7. Parasit., Oxford, 27

(6): 635-644.

SWIDERSKI Z. & TKacH V., 1997b - Differentiation and ultrastructure of onchosferal

and uterin envelopes in the nematotaeniid cestode, Nematotaenia dispar (Goeze,

1782) - Intern. 5. Parasit., Oxford, 27 (9): 1065-1074.

Warrz J.A. & MenRra K.N., 1961 - Baerietta idahoensis n. sp. A nematotaeniid ces-

tode from the intestine of Plethodon vandykai idahoensis from northern Idaho

- 7. Parasit., Lawrence, 47: 806-808.

YAMAGUTI S., 1959 - Systhema helminthum. Volume 2: The cestodes of vertebrates

- New York, Interscience Publishers, 860 pp.

DISTOTCHOME TRA PTALICA IN, «SE. 97

RIASSUNTO

Distoichometra italica n. sp. si distingue dalle altre poche specie di Nemato-

taeniidae essenzialmente per sottili differenze dell’apparato utero-paruterino e per

un voluminoso, caratteristico, organo ghiandolare apicale dello scolice. E° la prima

specie di Distoichometra, genere prettamente nordamericano parassita di Anuri e Ple-

todontidi, descritta in Europa, dove era conosciuto soltanto il genere Nematotaenia.

Particolari interessanti sono: la suddivisione dell’utero in una massa dorsale

e una ventrale; il numero totale degli organi paruterini, da 4-6(8); la struttura dei

gusci embrionali dell’oncosfera, in cui quello esterno, con una enorme vescicola

asimmetrica, conferisce all'uovo un aspetto unico tra i Ciclofillidei, confermando la

descrizione di DOUGLAS (1961a) in Distorchometra e Cylindrotaenia.

ABSTRACT

Distoichometra italica n. sp. (Cestoda, Nematotaeniidae) parasite of European

plethodontid Speleomantes strinatit (Aellen, 1958) in Liguria.

Distoichometra italica n. sp. differs from the other few species of Nematotaenii-

dae in details of the uterus-paruterine organs and in a bulky, characteristic glandular

structure on the scolex apical face. It is the first species of Distorchometra described

for Europe, where only the genus Nematotaenia was known till now.

Interesting characters are: the subdivision of the uterus into a dorsal and a

ventral mass; the total number of paruterine organs, varying from 4 to 6(8); the

structure of the oncospheral envelopes, where the outer envelope, showing an enor-

mous asymmetrical vesicle, assumes an aspect unique amongst the Cyclophyllidea,

corresponding to DouGLAS’ (1961) description with reference to Distoichometra and

Cylindrotaenia.

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posta rzie (

Ù an

BIANCA MARIA Uva *, MADDALENA STURLA * &

MARIA ANGELA MASINI *

KIDNEY AND OSMOREGULATION IN

SPELEOMANTES GENET (TEMMINCK & SCHLEGEL, 1838)

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUCTION

Vertebrates that live in hypoosmotic environments maintain the

equilibrium between extracellular and intracellular compartments

excreting the excess of water and reabsorbing ions. Amphibians are

the first Vertebrates that conquered with some success the dry land;

some spend much of their life on the ground but return to water

periodically to reproduce. Some salamanders have adopted a variety

of adaptations to avoid the necessity of returning to water, but very

few succeeded. Plethodontid salamanders like Speleomantes genet

(Temminck & Schlegel, 1838), are among the few that were success-

ful in laying their eggs on the ground of humid caves. They live in

dark limestone caves where the temperature is fairly stable (LANZA

1946), they are lungless and possess an excellent olfactory apparatus

that allows to catch preys in the darkness (UvA & DEPLANO 1983;

Uva 1985). Ions reabsorption and water handling must therefore be

a fundamental priority.

Aim of the present research was to investigate on the presence

and localisation of ion transport and water channel proteins com-

paring in the kidneys tubules of Speleomantes gene: the histological

architecture with the immunohistochemical results.

Sodium ions, brought from the lumen into the cells via Na‘/

K*/Cl cotransport proteins, are transported by the sodium pump in

the extracellular compartment. Water may follow passively. Recently

* Dipartimento di Biologia, Università di Genova, Viale Benedetto XV n. 5,

16132 Genova, Italia.

100 B.M. UVA, M. STURLA & M.A. MASINI

a family of water channel proteins, the aquaporins, that rules the

transmembrane trafficking of water, was identified (AGRE et alti

1993). Calcium ions are also reabsorbed in the kidney tubules. The

mitochondrial density was correlated to the presence of the osmo-

regulatory proteins in the cells of the tubules.

‘The investigation was carried out by histological techniques and

immunohistochemistry using antibodies to Na‘/K*/Cl cotransport

proteins, Na*/K*ATPase and Ca°*ATPase, the water channel pro-

tein AQP, and the antibody to the inner mitochondrial membrane

(AMA).

MATERIALS AND METHODS

Animals and tissue preparation

Six specimens of Speleomantes genet were collected in Sardin-

ian caves and housed in a tank with mud and sand. Within a few

days the animals were killed by a blow to the head and spinal cord

transection. The kidneys were immediately removed at 4°C, fixed in

Bouin’s fluid and then processed for embedding in paraffin wax.

Animal manipulation was performed according to the recom-

mendations of the Ethical Committee and under the supervision of

authorised investigators.

Histology

Bouin fixed sections (5um thick) were stained with the haema-

toxilys-eosin technique.

Immunohistochemistry

Sections (5um thick) from Bouin-fixed samples were subjected

to the indirect immunofluorescence technique (COONS et alzi 1955).

Sections were dewaxed and after exposure in a moist chamber to

Normal Goat Serum (diluted 1:50; Dako, Santa Barbara, CA) at

20°C, the unwashed sections were incubated overnight at 4°C with

the following antisera: Ab-AMA (Antibody to Mitochondrial Anti-

gen) raised in rabbit (diluted 1:20; Medic, Pavone Canavese, Italy),

anti-water channel aquaporin 3 (AQP3) raised in rabbit (diluted 1:300;

KIDNEY AND OSMOREGULATION IN SPELEOMANTES GENEI 101

Sigma-Aldrich, Milano, Italy), Ab-Na'K*-ATPase, subunit, Ab to

Ca°*ATPase, and Ab-Na'/K*/CI (T, NKCC1) cotransporter raised

in mouse (these antibodies were obtained from the Developmental

Studies Hybridoma Bank-Department of Biological Sciences, Uni-

versity of Iowa, Iowa City, IA). After washing in phosphate buffered

saline (PBS, 0.1 M, pH 7.4), a second layer of fluoresceine-isothio-

cyanate conjugated -globulins, swine anti-rabbit (diluted 1:20, Dako)

for the Ab-AMA, Ab-AQP3, and goat anti-mouse (diluted 1:100,

Sigma-Aldrich) for the Ab- Na*K*-ATPase, Ca**ATPase and Na'/

K*/Cl cotransporters treated sections, was applied for 30 min in a

moist chamber, at 20°C. Sections were rinsed in PBS, mounted with

glycerol-PBS (1:9) and examined under an Olympus epifluorescence

microscope. The specificity of the immunostaining was verified by

omitting one of the steps of the immunohistochemical procedure, or

by replacing the primary antiserum with non-immune serum or PBS.

a, : = a,

S22 ni cc. ae

Fig. 1 - Photomicrograph of a transverse section of Speleomantes genet kidney to

show the general arrangement of the tissue. Haematoxylin-eosin x 40.

RESULTS

Histology

The renal tubule consists of a big corpuscle, a long proximal

segment, a distal segment and a collecting duct; two narrow ciliated

102 B.M. UVA, M. STURLA & M.A. MASINI

segments connect the glomerular capsule with the proximal segment

and the latter with the distal segment (fig. 1 and fig. 2). The long

proximal segment consists of high cells with basal nucleus, a brush

border and vesicles in the apical region, protruding toward the

lumen, in which large quantities of materials are secreted (fig. 2 A).

The distal segment consists of moderatly high cells with no brush

border in the apical region (fig. 2 B). The collecting duct consists

of low cuboidal cells, deprived of brush border and with very few

membrane infoldings at the basal side (fig. 2 C).

Fig. 2 - Diagramatic reconstruction of a renal tubule.(A) section of the proximal

region showing apical vesicles and material into the lumen. (B) section of

the distal segment with basal nucleus and clear apical cytoplasm. (C) sec-

tion of the collecting duct with low cuboidal cells. A,B,C x 100.

KIDNEY AND OSMOREGULATION IN SPELEOMANTES GENEI 103

Immunohistochemistry

Na*/K*/Cl cotransporter. Immunoreactivity for the cotransport

proteins was distributed in the cytoplasm of the cells in the proxi-

mal and distal segments. In the collecting duct the positivity was

mainly localised at the apical region of the cells (fig. 3 a).

Na*K*t-ATPase. Immunoreactivity for the sodium pump was lim-

ited to the distal segments, at the basal-lateral side of the cells (fig. 3 b).

Fig. 3 - (a) Immunoreactivity for the cotransport proteins in the proximal and

distal segments (arrow and arrowhead respectively) and in the collecting

ducts (star). (b) Immunoreactivity for Na*K*-ATPase in the distal seg-

ments locased at the baso-lateral sides of the cells. (c) Immunoreactivity

for Ca2*ATPase distributed in all the cytoplasm of the cells in the distal

segments. (d) Immunoreactivity for AQP, in the cells of the proximal seg-

ment and (e) in the cells of the collecting ducts. (f) Immunostainig for

AMA locased at the luminal side of the cells in the collecting ducts. a x50;

Db x/0: €, a. &, f ZOU,

104 B.M. UVA, M. STURLA & M.A. MASINI

Ca?*ATPase. The immunostaining was localised in the cyto-

plasm of the distal segment’s cells (fig. 3 c)

Aquaporins. The reaction was distributed throughout the cyto-

plasm in the cells of the proximal tubules and limited to the luminal

side of the cells in the collecting ducts, where the immunoreactiv-

ity was very strong. In the proximal tubule AQP3 is also located in

intracellular vesicles protruding into the lumen of the plasma mem-

brane (figs. 3 d, e).

Mitochondria. Immunostaining for AMA (proteins of the inner

mitochondrial membrane) was localised in the cells of the proximal

tubules, gathered around the nucleus, in the distal segment, located

in the basal part of the cells, and in the collecting ducts where mito-

chondria were concentrated at the luminal side (fig. 3 f).

DISCUSSION AND CONCLUSIONS

‘The architecture of the kidney in diverse species of Amphibians

shows no difference: the nephrons consists of the same segments

and the shape of the cells, in each segment, are very similar. In

consequence, the maintenance of the ion-water equilibrium in the

diverse environmental conditions must be allocated in the osmoreg-

ulatory mechanisms, present in the different regions of the nephron.

Na‘/K* ATPase and Na'/K*/CI cotransporters are the major proteins

involved in ion transport across the kidney tubules. Na*/K*ATPase

is, in most eukaryotic cells, the enzymatic activity responsible for

the active transport of Na*. The enzyme has been shown to consist

of two subunits a and B. The o subunit is the catalytic part of the

Na'/K* exchange and shows a highly conserved aminoacid sequence

in diverse vertebrate and invertebrate species (KAWAKAMI et al. 1985;

SHULL et ali 1985).

The family of Aquaporins (AQPs) consists of ten proteins cloned

from lower organisms, like yeast, to mammals (for a review see AGRE

2000; VERKMAN & Mirra 2000). Two aquaporins subgroups appear

to be present: AQPs that are selectively permeable to water (AQPs

1,2,4,5,6,8) and aquaglyceroporins (AQPs 3,7) that are permeable

both to water and glycerol (VERKMAN & MITRA 2000). Functional

expression of aquaporin 3 in Xenopus oocytes confirmed its pre-

dominant water-channel function in Amphibians. AQP3 mRNA was

KIDNEY AND OSMOREGULATION IN SPELEOMANTES GENEI 105

mainly expressed in rat kidney in the cells of the collecting duct

(ISHIBASHI et alu 1994).

In Speleomantes, immunoreactivity for the cotransporter NKCC1

T,, was limited to the distal segment and the collecting duct, seg-

ments involved in ion and water reabsorption. The monoclonal anti-

body to the Na'/R'ATPase, IGg 5, recognised its epitope in the

cells of the distal segment. Immunoreactivity for AQP3 was very

strong and distributed in the proximal and distal segments. The

presence in the proximal segments’ cells of AQP3-filled vesicles pro-

truding into the lumen may indicate a fusion by exocytosis with the

plasma membrane, thus inserting AQP3 into the membrane. This

process was described for AQP2 in mammalian renal cells (BROWN

et alu 1998).

It may be concluded that Speleomantes, that spends its life on

land, reabsorbs from the preurine, by means of the collecting ducts

cells, water and, moderately, ions from the proximal and distal seg-

ments. A similar function is seen in the segments of the kidney of

some Birds and in Mammals.

ACKNOWLEDGEMENTS

This work was supported by the University of Genoa, Italy.

The antibody developed by Fambrough D.M. was obtained from

the Developmental Studies Hybridoma Bank developed under the

auspices of the NICHD and maintained by The University of Iowa,

Department of Biological Sciences, Iowa City, IA 52242.

REFERENCES

AGRE P., 2000 - Aquaporin water channels in kidney - 7. Am. Soc. Nephrol., Phila-

delphia, 11: 764-777.

AGRE P., PRESTON G.M., SmITH B.I., JUNG J.S., Ratna S., Moon C., GUGGINO

W.B. & NIELSEN S., 1993 - Aquaporin CHIP: the archetypal molecular water

channel - Am. 7. Physiol. Renal, Bethesda, 265: F463-F476.

Brown D., Karsura T. & GUSTAVSON C.E., 1998 - Cellular mechanisms of aquapo-

rin traffiching - Am. 5. Physiol. Renal, Bethesda, 275: F328-F331.

Coons A.H., Lepuc E.H. & CONNOLLY J.M., 1955 - Studies on antibody. I. A

method for the histochemical demonstration of specific antibody and its appli-

cation to a study of the hyperimmune rabbit - 7. exper. Med., New York, 102:

49-59.

106 B.M. UVA, M. STURLA & M.A. MASINI

ISHIBASHI K., SASAKI S., FusHimi K., UcHipa S., KuwaHaRA M., Sarto H., FURU-

KAWA I., Nayima K., YAMAGUCHI Y., GojoBorI T. & Marumo F., 1994 -

Molecular cloning and expression of a member of the aquaporin family with

permeability to glycerol and urea in addition to water expressed at the basolat-

eral membrane of kidney collecting duct cells - Proc. natl. Acad. Sci. U.S.A.,

Washington, 91: 6269-6273.

KAWAKAMI K.S., NocucHi M., TAKAHASCHI H., OHTA T., KAwamMurA M., Nojima

H., NaGano K., Hirose T., INAYAMA S., HavyasHIpa H., Miyata T. & NUMA

S., 1985 - Primary structure of the a-subunits of Torpedo california (Na'/K*):

ATPase deduced from cDNA sequence - Nature, London, 316: 733-736.

LANZA B., 1946 - L’Hydromantes Gistel in Toscana e notizie sui suoi costumi -

Arch. z0ol. tial., Torino; 31: 219-237.

SHULL G.E., ScHwaT A. & LLINGREL J.B., 1985 - Amino-acid sequence of the cata-

lytic subunit of the Na'/K*-ATPase deduced from a complementary DNA

- Nature, London, 316: 691-695.

Uva B.M., 1985 - Olfaction, related structures and functional adaptations =, all.

Zool., Modena, 52: 331-337.

Uva B.M. & DepLano S., 1983 - Olfactory structures in Hydromantes italicus: a

morphological basis for a particular prey catching behaviour - Boll. Zool.,

Modena, 50: 57-62.

VERKMAN A.S. & Mirra A.K., 2000 - Structure and function of aquaporin water

channels - Am. 7. Physiol. Renal, Bethesda, 278: F13-F28.

ABSTRACT

Speleomantes genet spends its life in humid habitats and completely avoids

water even during reproduction, its control of ion-water balance must therefore be

a fundamental priority. In Amphibians the kidney is one of the organs involved in

the loss of water, being non-mammalian vertebrates unable to produce hyperosmotic

urine. To reduce water and ion loss the cells in the renal tubules must possess well-

developed osmoregulatory machinery.

Sodium ions, brought into the cells via Na'/K'/CI cotransport proteins, are

extruded by the sodium pump Na'/K*ATPase in the extracellular compartments.

The water channel proteins, aquaporins, rule the transmembrane trafficking of

water. Ca’?*ATPase control the reabsorption of calcium ions. The presence of ion

cotransport proteins, sodium pump, Ca°*ATPase and aquaporins were investigated

in the different regions of the renal tubule. The mitochondrial density was corre-

lated to the presence of the osmoregulatory proteins.

The investigation was carried out by histological staining to identify the seg-

ments of the nephron and by immunohistochemistry using antibodies to Na*/K*/Cl

cotransport proteins NKCC1 T,, to Na*/K*ATPase, to Ca°*ATPase, to the water

channel aquaporin 3 and to proteins of the inner mitochondrial membrane AMA.

The results indicate that ion reabsorption occurs in the distal and collecting

ducts, while water channels are located in the proximal segment and in the collect-

ing duct of the nephron.

In Speleomantes therefore different segments of the renal tubule are specialised

to perform diverse functions, all of which are cooperating to the maintenance of

ion-water balance.

KIDNEY AND OSMOREGULATION IN SPELEOMANTES GENEI 107

RIASSUNTO

Rene ed osmoregolazione in Speleomantes genei (Temminck & Schlegel, 1838)

(Amphibia, Plethodontidae).

Speleomantes genei trascorre la sua vita in ambienti umidi completamente svin-

colato dall'ambiente acquatico anche durante la riproduzione. La difesa del patrimo-

nio idrico-salino deve quindi necessariamente essere un problema prioritario. Il rene

è tra gli organi più coinvolti nella perdita d’acqua poiché i Vertebrati non mam-

miferi producono un’urina ipoosmotica rispetto al plasma. Per ridurre la perdita

d’acqua e di ioni le cellule del tubulo renale devono possedere un ben sviluppato

sistema osmoregolativo. L’ultrafiltrazione glomerulare lascia passare gli ioni nella

preurina, proteine cotrasportatrici, quali la Na*/K*/Cl cotransporter, trasferiscono

gli ioni sodio dal lume all’interno delle cellule del tubulo renale. La pompa sodica

Na'/K'ATPasi estrude gli ioni sodio nel comparto extracellulare. Le aquaporine,

canali per l’acqua, regolano il trasporto delle molecole d’acqua attraverso le mem-

brane plasmatiche. La Ca°*ATPasi controlla il riassorbimento degli ioni calcio.

In questa ricerca la presenza delle proteine cotrasportatrici, della pompa sodica,

della Ca°*ATPasi, e dell’aquaporina è stata studiata nelle differenti regioni del tubulo

renale. La densità mitocondriale è stata correlata alla presenza delle proteine coin-

volte nell’osmoregolazione. La ricerca è stata condotta con colorazioni istologiche

per identificare 1 differenti segmenti del tubulo renale e con metodiche d’immu-

noistochimica utilizzando anticorpi contro la proteina cotrasportatrice Na*/K*/CI

NKCCI T4, gli enzimi Na*/K*ATPasi e Ca?*ATPasi, la proteina aquaporina 3 ed

anticorpi contro proteine della membrana mitocondriale interna AMA. I risultati

indicano che il riassorbimento attivo degli ioni avviene nel segmento distale e nel

dotto collettore, mentre i canali per l’acqua sono localizzati nel segmento prossimale

e nel dotto collettore. In Speleomantes quindi i diversi segmenti del tubulo renale

sono specializzati per eseguire funzioni differenti, tutte però coordinate al manteni-

mento dell’equilibrio idrico-salino.

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109

RES LIGUSTICAR CCXLEVTH

ROBERTA CIMMARUTA*, GIANLUCA FORTI **,

BENEDETTO LANZA *** & GIUSEPPE NASCETTI *

THE EFFECTS OF QUATERNARY GLACIATIONS ON

THE GENETIC STRUCTURE OF SPELEOMANTES

STRINATII (AELLEN, 1958)

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUCTION

The alternation of cold and warm stages of glacial and inter-

glacial periods during the Pleistocene had a strong impact on the

distribution and evolution of vegetation and associated faunal spe-

cies (Comes & KaDEREIT 1998; HewITT 2000). One of the animal

genera strongly influenced by the succession of glacial and intergla-

cial stages has been the plethodontid salamander Speleomantes, due

to its particular biological features. Indeed these salamanders usually

hatch completely metamorphosed from eggs, lack an aquatic larval

stage, are lungless with cutaneous and bucco-pharyngeal respiration

and are strongly associated with underground retreats, offering a

steady cold and moist environment (SALVIDIO et alzi 1994; CIMMA-

RUTA et alti 1999; LANZA 1999). These features, coupled with low

vagility and restricted home ranges, make Speleomantes’ geographic

distribution strongly affected by climatic variations.

In particular, the species Speleomantes strinati has a relatively

wide range, compared with those of the congeneric species, com-

prising north-western Italy and south-eastern France. In these zones

* Dipartimento di Ecologia e Sviluppo Economico Sostenibile, Università della

Tuscia, Via S. Giovanni Decollato 1, 01100 Viterbo, Italia;

e-mail: cimmaruta@unitus.it & nascetti@unitus.it

** Museo del Fiore, Piazza G. Fabrizio 17, 01021 Acquapendente (VT), Italia;

e-mail: museo.fiore@tin.it

*** Dipartimento di Biologia Animale e Genetica & Museo di Storia Naturale (Se-

zione Zoologia “La Specola”), Università degli Studi di Firenze, Via Romana

17, 50125 Firenze, Italia; e-mail: benedetto.lanza@tin.it

110 R. CIMMARUTA, G. FORTI, B. LANZA & G. NASCETTI

the climatic variations of the Quaternary had great influence on the

evolutionary history of local populations because of the uneven

local orography. The genetic diversity of this species, investigated

by means of allozyme electrophoresis, has been correlated with the

paleoclimatic events of the species range, to understand the mi-

croevolutionary mechanisms leading to its extant genetic structure.

A number of subspecies has been described on morphological basis

within this species (see LANZA et ala 1995: p.53) but their validity

has been recently challenged based on genetic ground (NASCETTI et

alti 1996). The data obtained here on the genetic-geographic struc-

ture of S. strinatit have been used to reanalyse the systematics of

these questioned taxa. 3

MATERIALS AND METHODS

About 400 specimens of S. strinati, collected from 29 popula-

tions scattered through the whole range of the species have been

studied (Tab. 1).

The techniques used for multilocus electrophoresis are those

reported in LANZA et ala (2005) and are described in detail in

LANZA et alti (1995). Following these procedures with minor modi-

fications, the following 33 putative loci have been scored: a—Gpdh,

Ldh-1, Ldh-2, Hbdh, Mdh-1, Mdh-2, Mdhp-1, Mdhp-2, Idh-1,

Idh-2, 6-Pgdh, Gapdh, NADH-dh, Sod-1, Sod-2, Np, Aat-1,

Aaa CARRA dA Est, PedpS0, «Bed=D; Lap, Ada; Ada-2, Cad;

Ca-3, Fum, Mpi, Gpi, Pgm-1, Pgm-2. They included about one

third of fast and two thirds of slow evolving loci, sensu SARICH

(1977) and KoEHN & EANEs (1978).

The genetic variability of populations was evaluated using the

following parameters: overall number of alleles per population (A);

percentage of polymorphic loci (P) following 99% (P99) and 95%

(P95) criteria and mean expected (He) and observed (Ho) heterozy-

gosity per population. The statistical significance of departures from

the Hardy-Weinberg equilibrium was estimated using Y? test.

Genetic distances (D,.. and iL apa have been calculated accord-

ing to both NErs (1972) and Rogers’ (WRIGHT 1978) methods.

Calculations were performed using BIOSYS-1 computer program

(SWOFFORD & SELANDER 1989). Times of evolutionary divergence

EFFECTS OF QUATERNARY GLACIATIONS

111

(t) were calculated using the formula proposed by NEI (1975) when

Dior:

ba SALSE

A principal component analysis (PCA) was carried out using

SYSTAT 5.2 (WILKINSON et ali 1992). The PCA was based on a

matrix of the allele frequencies of polymorphic loci, after removing

alleles with frequencies lower than 10%.

Table 1 - Code number of Speleomantes strinatii samples listed with the collecting

Number

o SONA vt bw a

fd —

ND N N N N KH KN KH HK N © KR °° °° T_T °° 7 © n

SCO! SS (GN. “Ga 2 GO IS: = |« © OS Ii ( Ga = Go IN

sites and their province and region.

Collecting sites

Pietra di Vasca Mt.

Eastern Slope of Groppi Mt.

Environs of Carro and Ponte S. Margherita

Pu Mt., in the Rio Frascarese Valley

Near Cassagna

Cave “Tana de Strie”

Cave “Tana da Cruxetta”

Near Codolo

Near Bardi

Near S. Pietro di Novella and Rapallo

Near Scaglia, Bargagli

Near Cartasegna

Near Isoverde

Near Millesimo

Near Roveirola, N slope of Bric Cornavento

Near Finale Ligure

Near Gavone

Near Toirano

Left bank of the Rio Roburentello stream

Near Roaschia and near Rivoera

S. Bartolomeo Hill, S slope

Near Caravonica

Downstream Tenarda dam

Near Rocchetta Nervina

Near Tenda

Near Luceram

Between Peille and St. Martin de Peille

Near Aspremont

Near Maissana and SW slope of Baralucco Mt.

Province

Genoa

La Spezia

Genoa

La Spezia

Massa Carrara

Parma

Genoa

Alessandria

Genoa

Savona

Cuneo

Imperia

Region/Country

Liguria

Tuscany

Emilia Romagna

Liguria

Piemonte

Liguria

Piedmont

Liguria

France

142 R. CIMMARUTA, G. FORTI, B. LANZA & G. NASCETTI

RESULTS

Eleven loci out of the 33 studied were monomorphic, show-

ing the same allele in all the populations sampled: [dh-2, NADH-

dh, Np, Sod-1, Sod-2, Aat-2, Adk, Pep-C, Lap, Fum, Mpi. The

remaining 22 loci showed from two to four alleles per population.

The pattern of allele frequencies at many loci concurred in show-

ing a higher genetic variation in western populations, while samples

from the eastern part of the range were genetically more homo-

geneous. This pattern is confirmed by the distribution of the private

alleles (i.e., alleles found in a single population; NEEL 1973): 15 over

18 private alleles where in the samples from the western part of the

Factor 2

Factor 1

Fig. 1 - A) Geographical distribution of the studied populations, symbols refer

to the subspecies to which they were ascribed on morphological ground.

B) PCA based on allele frequencies, the percentage of the total variance

explained is 88.7 (80.6 is explained by Factor 1). The terra typica of each

subspecies is circled.

m (squares) S. s. ligusticus, * (stars) S. s. argentatus and “nameless” samples

from Finalese (15-18), & (triangles) S. s. bonzanoi, ® (circles) S. s. strinatii.

EFFECTS OF QUATERNARY GLACIATIONS ms

Table 2 - Parameters of genetic variability in the 29 studied populations of S. stri-

natu. Standard errors are in parentheses.

Population A 154 A BL H

99 95 lo) e

ii 1.1 12.1 6.1 0.009 0.011

(0.005) (0.006)

Da 1.1 9.1 9.1 0.047 0.035

(0.029) (0.020)

3: 1.1 6.1 6.1 0.027 0.023

(0.019) (0.016)

4, 1.1 9.1 9.1 0.022 0.022

(0.013) (0.013)

6: 1.1 6.1 3.0 0.010 0.009

(0.008) (0.007)

6. E 6.1 3.0 0.007 0.007

(0.006) (0.005)

a 11 6.1 6.1 0.018 0.022

(0.012) (0.016)

8. i {21 ipa 0.034 0.028

(0.020) (0.015)

9. 11 6.1 6.1 0.014 0.019

(0.010) (0.015)

10. 1.0 3.0 3.0 0.013 0.011

(0.013) (0.011)

(a 1.1 9.1 9.1 0.031 0.037

(0.018) (0.022)

(23 1.1 9.1 9.1 0.035 0.030

(0.022) (0.018)

13. 1.1 9.1 9.1 0.025 0.027

(0.016) (0.017)

14, 1.1 9.1 9.1 0.027 0.024

(0.017) (0.015)

15. 11 9.1 9.1 0.036 0.031

(0.022) (0.018)

16. 1.2 21.2 21.2 0.079 0.085

(0.030) (0.031)

17. (2 18.2 18.2 0.062 0.056

(0.028) (0.024)

18. 1.2 15.2 1349 0.052 0.050

(0.025) (0.024)

19. 1.4 33.3 18.2 0.079 0.077

(0.028) (0.027)

20. 1.1 12.1 4 0.041 0.043

(0.022) (0.023)

21. 1.1 6.1 6.1 0.020 0.021

(0.015) (0.015)

114 R. CIMMARUTA, G. FORTI, B. LANZA & G. NASCETTI

Table 2 - (Continued) Parameters of genetic variability in the 29 studied popula-

tions of S. strinatit. Standard errors are in parentheses.

Population A PP Pr H Tr

99 95 o e

DD 1.4 36.4 30.3 0.093 0.125

(0.027) (0.036)

Vici 1.3 27.3 27.3 0.108 0.108

(0.034) (0.034)

24. 1.4 30.3 dip 0.088 0.091

(0.030) (0.031)

25. 1.3 24.2 24.2 0.093 0.096

(0.031) (0.031)

26. i 24.2 24.2 0.091 0.085

(0.032) (0.030)

OF: 12 18.2 18.2 0.081 0.075

(0.032) (0.030)

28. We ie 1552 0.048 0.065

(0.020) (0.026)

29. 1.3 07 3 24.2 0.077 0.089

(0.026) (0.030)

range (samples 15-29), while only three have been found in the 14

easternmost populations. Moreover, all the private alleles with fre-

quencies higher than 10% have been found in western populations.

The higher genetic variation of westernmost populations is also

evidenced by the values of genetic variability parameters (Tab. 2).

In the easternmost populations (1-14) the averaged expected hetero-

zygosity was 0.022 (range 0.007-0.037) and the percentage of poly-

morphic loci (P,,) had a mean value of 8.0% and a range of 3-12.1%.

The values observed for the samples 15-21 were higher, with mean

values of H, reaching 0.052 (range 0.021-0.085) and P,, between

6.1-33.3 (mean value 16.5). The western populations (samples 22-

29) show the highest levels of genetic variability, with heterozygosity

values ranging between 0.065 and 0.125 and a percentage of poly-

morphic loci from 18.2 to 36.4. Mean values of these parameters

were H =0.092 and P,,=26.1, two to four times those recorded for

the other populations.

The PCA evidences three main groups of samples (fig. 1B).

The group in the upper-right part of the graph clusters the east-

ern samples, which are very similar to each other, in spite they are

EFFECTS OF QUATERNARY GLACIATIONS 115

scattered over a half of the whole range of the species. This group

corresponds to the subspecies S. s. ligusticus (Stefani, 1969), being

the terra typica of this taxon Valdettaro Cave, near Rapallo (sample

11). A second group was represented by the westernmost popula-

tions (samples 22-29), including the samples (22-23) so far described

as S. s. bonzanot (Bruno & Bologna 1973) and S. s. strinatii (Aellen,

1958) (samples 24-29). The samples belonging to the subspecies S.

s. argentatus (Stefani, 1969) (samples 19-21) and those belonging to

a nameless form (15-18) were split in two differentiated groups. The

first group (samples 19-21) was close to S. s. ligusticus. The second

group was in the lower part of the graph and includes the Ligu-

rian populations from the “Finalese” area (samples 15-18). These

four populations are the most genetically differentiated in spite they

are located in the central part of the species range. Therefore, PCA

indicates that three main population groups could be found within

S. strinatit: western populations (22-29), samples from “Finalese”

(15-18), and eastern populations (1-14 and 19-21).

Table 3 - Genetic distances calculated according to Rogers’ method (WRIGHT,

1978) for the three population groups identified within SS. strinatiiz. Mean

values below the diagonal, range of distances above the diagonal. On the

diagonal are the ranges within each group.

Population group “Eastern” “Finalese” “Western”

(samples 1-14,19-21)

(samples 15-18)

(samples 22-29)

The genetic distances calculated according to Rogers’ method

(WRIGHT 1978) supported the identification of three population

groups (Table 3). ‘The eastern samples (1-14 and 19-21) are shown

to have a quite low genetic differentiation, with the easternmost

populations (samples 1-14) showing very low DRogers (between

0.008 and 0.141), that slightly grew to 0.127-0.212 when the three

samples from the central part of the range (19-21) are added. The

populations from western range (samples 22-29) are well differenti-

116 R. CIMMARUTA, G. FORTI, B. LANZA & G. NASCETTI

ated both from the other population groups (DRogers between 0.196

and 0.381) and among them (ranging 0.108-0.344), confirming the

genetic heterogeneity of this cluster. Finally, the populations 15-18

from “Finalese” are confirmed as highly differentiated, showing the

highest recorded average distance from the other populations (aver-

age DRogers 0.312).

Table 4 - Mean genetic distances (D,,, NEI, 1972, below the diagonal) and diver-

gence times in years (t, NEI, 1975, above the diagonal) between the three

genetically characterised forms identified within S. strinatit.

“Eastern”

“Eastern” form (samples 1-14,19-21) t = 590.000 t= 375. 000

“Finalese” form (samples 15-18) t = 500.000

“Western” form (samples 22-29) wor ae

DISCUSSION AND CONCLUSIONS

The results obtained allowed the identification of three geneti-

cally and geographically characterised groups of populations. A

genetically homogeneous group occupies a wide area (samples 1-14

from the eastern part of the range) and is genetically close to the

population group from the western area (19-21). The relatively small

westernmost part of the range hosts populations (22-29) that are

highly differentiated both among them..and from the other clusters

identified. Finally, the most divergent population group is located

in the central part of the range and covers a very small area in the

“Finalese” region (samples 15-18).

From a taxonomic point of view, it was hard to find out a cor-

respondence between these three groups and the formally described

morphological subspecies. The “eastern” group (1-14 and 19-21)

includes the terra typica of the subspecies S. s. ligusticus (Stefani,

1969), but also that of S. s. argentatus (Stefani, 1969) (cave Grotta

delle Ruccaie, near Toirano, sample 19), along with the populations

from Roburent area, usually included in this last subspecies. In the

westernmost group are clustered all together the populations classi-

fied as S. s. strinatit (Aellen, 1958) (with the terra typica: the cave

EFFECTS OF QUATERNARY GLACIATIONS 117

Grotte d’Aspremont, n. 29) and S. s. bonzanoi (Bruno & Bologna,

1973) (samples 22 and 23, with this latter as the terra typica from

the cave Tana I° du Casa). The most genetically differentiated clus-

ter from the Finalese area does not include any terra typica. ‘These

results clearly indicate that the so far proposed subspecies are incon-

sistent with the genetic structure of the species.

The genetic subdivision of ,S. strinatti in the three above iden-

tified population groups was consistent with the paleoclimatic his-

tory and the orography of the species’ range. It is known that the

speciation process in Speleomantes occurs mainly by divergence in

allopatry, as in the larger part of plethodontids (GARCÎA-PARÎS et

alti 2000), and is strongly influenced by paleoclimatic events via the

rising of geographic barriers allowing the differentiation via muta-

tion sum (FORTI et ala 1998; CIMMARUTA et alti 1998). In particular,

it has been speculated that the glaciations played an important role

at the evolutionary level, allowing the origination of the extant spe-

cies by means of the alternation of glacial and interglacial periods

during Quaternary (FORTI et alzi 1998).

To test for the influence of glacial events on the genetic struc-

turing of S. strinati, the genetic distances between the so far identi-

fied groups of populations have been used to estimate the divergence

times among them, according to Nei’s calibration (NEI 1975). The

obtained times have been compared with the paleoclimatic events

occurred in the area, in particular with glacial/interglacial stages, in

order to determinate if glacials can be identified as subdiving events,

promoting population fragmentation and producing the extant ar-

ticulated genetic structure of the species. These results are reported

in 125.4.

The divergence of the most differentiated group from the Fina-

lese area started during glacial stages: during Ginz with respect to

the “eastern” group (about 590.000 ya) and during Mindel (about

500.000 ya) with respect to the “western” group. In the Mediter-

ranean area, the glacial stages were characterised by a dry and cold

climate, while the interglacials had a more mild and humid climate

(WEST 1969; BERTOLANI-MARCHETTI 1985; PIGNATTI 1994). As a

consequence, arboreal vegetation and animal species were restricted

in warmer refugia at low altitude and along coastal areas during

the glacials. The populations from the Finalese live in a small area,

118 R. CIMMARUTA, G. FORTI, B. LANZA & G. NASCETTI

completely surrounded by relatively high mountains (Mt. Settepani,

Mt. Carmo, Mt. Beigua), that have probably acted as efficacious

geographic barriers during ice ages, causing isolation and differen-

tiation of the local remnant population group.

The divergence of the two most far apart population groups

(westernmost vs. easternmost) cannot be reconnected to a glacial

stage. It is dated 350-400.000 years ago, at an interglacial stage,

when higher altitude sites were colonised due to the range expan-

sion of the arboreal vegetation. The genetic pattern of the “eastern”

population group suggests a relatively recent range expansion, as

witnessed by its high genetic homogeneity. Moreover, the close simi-

larity with the populations from the Roburent area (samples 19-21),

suggests an Apennine colonisation route from Emilia and Tuscany

to western Liguria. The slightly higher genetic variability observed

in the Roburent samples could be due to the “secondary contact”

between the re-established populations invading the area and those

resident in the Maritime Alps.

This scenario is supported by the observed pattern of allele fre-

quencies in the populations from Roburent area, holding “western

alleles” together with the more common “eastern alleles”. Moreover,

the Maritime Alps are a well known suture zone for either plant and

animal species and the depicted pattern has been proposed for many

other taxa (KRoPF et ali 2002 and references herein). This sce-

nario could explain the impossibility of dating the divergence time

between easternmost and westernmost population groups, being the

data affected by the subsequent contact and gene flow between these

two forms.

ACKNOWLEDGEMENTS

We are grateful to many people who helped in collecting the

studied specimens and in particular to Mr S. Zoia, who showed us a

number of caves in eastern Liguria, and to the Gruppo Speleologico

Imperiese (CAI).

EFFECTS OF QUATERNARY GLACIATIONS 119

REFERENCES

AELLEN V., 1958 - Sur une nouvelle forme d’Hydromantes (Amphibia, Plethodonti-

dae) - Senck. biol., Frankfurt am Main, 39: 155-163.

BERTOLANI-MARCHETTI D., 1985 - Pollen paleoclimatology in the Mediterranean

since the Messinian time (pp. 525-543) - In: STANLEY D.J. & WEZEL F.C.,

(Eds.), Geological evolution of the Mediterranean Basin. Springer-Verlag, New

York; 574 pp.

Bruno S. & BoLocna M., 1973 - L’Hydromantes italicus Dunn, 1923 nella Liguria

occidentale e descrizione di una nuova sottospecie (Studi sulla Fauna Erpeto-

logica Italiana. XVI) (Amphibia, Caudata, Plethodontidae) - Atti Soc. ital. Sci.

nat. Mus. Civ. St. nat. Milano, 114: 81-92.

CIMMARUTA R., Forti G., NAScETTI G. & BULLINI L., 1999 - Spatial distribution

and competition in two parapatric sibling species of European plethodontid

salamanders - Ethol., Ecol. & Evol., Firenze, 11: 383-398.

CIMMARUTA R., NASCETTI G., ForTI G., LANZA B. & BULLINI L., 1998 - Paleogeo-

grafia della Sardegna ed evoluzione degli Hydromantes (Amphibia, Plethodonti-

dae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997): 183-195.

ComMEs H.P. & KADEREIT J.W., 1998 - The effect of Quaternary climatic changes on

plant distribution and evolution - Trends in Plant Science, Oxford, 3: 432-438.

ForTI G., CIMMARUTA R., NASCETTI G., LANZA B. & BULLINI L., 1998 - Glaciazi-

oni del Quaternario e microevoluzione delle popolazioni continentali del genere

Hydromantes (Amphibia, Plethodontidae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997):

197-211.

Garcia-Paris M., Goop D.A., PARRA-OLEA G. & WAKE D.B., 2000 - Biodiversity

of Costa Rican salamanders: Implications of high levels of genetic differentia-

tion and phylogeographic structure for species formation - Proc. nat. Acad. Sci.

U.S.A., Washington, 97: 1640-1647.

Hewitt G.M., 2000 - The genetic legacy of the Quaternary ice ages - Nature,

London, 405: 907-913.

KoHEN R.K. & EANES W.F., 1978 - Molecular structure and protein variation within

and among populations - Evol. Biol., Amsterdam, 11: 39-100.

Kropr M., KapEREIT J.W. & Comes H.P., 2002 - Late Quaternary distributional

stasis in the submediterranean mountain plant Anthyllis montana L. (Fabaceae)

inferred from ITS sequences and amplified fragment length polymorphism

markers - Mol. Ecol., Oxford, 11: 447-463.

LANZA B., 1999 - Plethodontidae - Lungenlose Salamander (pp. 77-204) - In: Gros-

SENBACHER K. & THIESMEIER B. (Eds.), Handbuch der Reptilien und Amphibien

Europas. Band 4/1: Schwanzlurche (Urodela) I . Aula Verlag, Wiesbaden, 408 pp.

LANZA B., Caputo V., NAScETTI G. & BULLINI L., 1995 - Morphologic and genetic

studies of the European plethodontid salamanders: taxonomic inferences (genus

Hydromantes) - Monogr. Mus. reg. Sc. nat., Torino, 16, 368 pp.

LANZA B., CIMMARUTA R., Forti G., BULLINI L. & NASCETTI G., 2005 - Bianchi’s

cave salamander, Speleomantes ambrosti bianchi n. ssp. (Amphibia, Caudata,

Plethodontidae) - Annali Mus civ. Sc. nat. G. Doria, Genova, 97: 59-77.

NASCETTI G., CIMMARUTA R., LANZA B. & BULLINI L., 1996 - Molecular taxonomy

of European plethodontid salamanders (Genus Hydromantes) - 7. Herpet., Law-

rence, 30: 161-183.

120 R. CIMMARUTA, G. FORTI, B. LANZA & G. NASCETTI

NEEL M., 1973 - Private variants and the frequency of mutation among South Ameri-

can Indians - Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., Washington, 70: 3311-3315.

NEI M., 1972 - Genetic distance between populations - Amer. Natur., Chicago, 106:

283-292.

NEI M., 1975 - Molecular population genetics and evolution - Am. Elsevier, New

York, 290: pp.

PIGNATTI S., 1994 - Ecologia del paesaggio - UTET, Torino, 228 pp.

SALVIDIO S., LATTES A., Tavano M., MeLODIA F. & PastoRrINO M.V., 1994 -

Ecology of a Speleomantes ambrosti population inhabiting an artificial tunnel

- Amphibia-Reptilia, Leiden, 15: 35-45.

SARICH V.M., 1977 - Rates, sample sizes and the neutrality hypothesis for the elec-

trophoresis in evolutionary studies - Nature, London, 263: 24-28.

STEFANI R., 1969 - La distribuzione geografica e l'evoluzione del geotritone sardo

AES REA genet Schleg.) e del geotritone continentale europeo Corea

italicus Dunn) - Arch. zool. ital., Napoli, 53 (1968): 207-243.

SwoFFORD, D.L. & SELANDER, R.B., 1989 - BIOSYS-1: a computer programme

for the analysis of allelic variation in genetics and biochemical systematics.

Release 1.7. - Department of Genetics and Development, University of Illinois,

Urbana-Champaign, Illinois.

WEST R.G., 1968 - Pleistocene geology and biology. Longmans, Green and Co.,

L'TD, London, 377 pp.

WILKINSON L., Hitt M.A. & Vanc E., 1992 - SYSTAT, Version 5.2 Edition. —

SYSTAT Inc., Evanston, IL, 724 pp.

WRIGHT S., 1978 - Evolution and genetic of populations, Vol 4, Variability within and

among natural populations - University of Chicago Press, Chicago, IL, 565 pp.

ABSTRACT

The genetic structure of the plethodontid salamander Speleomantes strinatii

(Aellen, 1958) has been analysed by means of allozyme electrophoresis. The studied

samples were taken from the whole range of the species (north-western Italy and

south-eastern France), to assess the degree and the pattern of genetic differentiation

and to find out possible correlation with the paleoclimatic history of the area. The

results obtained showed three genetically characterised population groups, whose

distribution and levels of differentiation were related to the quaternary alternation of

glacial and interglacial stages in the region. The subdivision of this species in four

morphological subspecies is not supported by the genetic structure here evidenced.

EFFECTS OF QUATERNARY GLACIATIONS 121

RIASSUNTO

Gli effetti delle glaciazioni quaternarie sulla struttura genetica di Speleo-

mantes strinati (Aellen, 1958) (Amphibia, Plethodontidae).

La struttura genetica del geotritone Speleomantes strinati (Aellen, 1958) è stata

analizzata mediante analisi elettroforetica di sistemi gene-enzima, su popolazioni

campionate in tutto l’areale della specie. Il grado di eterogeneità inter- ed intrapopo-

lazionale, 1 livelli di variabilità e le relazioni di affinità genetica tra le varie popolazi-

oni sono stati confrontati con la storia paleoclimatologica dell’area per configurare

i possibili processi microevolutivi che hanno originato l’attuale struttura genetica

della specie. I risultati ottenuti hanno evidenziato la presenza di tre gruppi di popo-

lazioni geneticamente ben caratterizzati, la cui origine è probabilmente riconduci-

bile all'influenza dell’alternarsi dei periodi glaciali ed interglaciali del Quaternario.

I dati ottenuti sono stati anche utilizzati per verificare la validità delle sottospecie

morfologiche attualmente riconosciute, che non risultano essere sostenute da basi

genetiche ed evolutive.

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The, studied

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7 of (iid species in four

evidenced:

$23

GIANLUCA FoRTI*, BENEDETTO LANZA**,

ROBERTA CIMMARUTA *** & GIUSEPPE NASCETTI ***

AN EXPERIMENT OF ARTIFICIAL SYNTOPY EX SITU

BETWEEN SPELEOMANTES ITALICUS (DUNN, 1923)

AND S. AMBROSIT AMBROSII (LANZA, 1955)

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUCTION

The levels of genetic divergence observed within and between

Speleomantes taxa are not correlated to their morphological differ-

entiation, a feature typical of plethodontid salamanders (WAKE et

alu 1983). To assess correctly the taxonomic status and the species

boundaries it is therefore essential to evaluate the degree of repro-

ductive isolation between population groups (LANZA et alu 1995;

NASCETTI et altr 1996). When taxa are allopatric or parapatric with-

out syntopy, differentiation indices such as genetic distances could

be inadequate. In these cases to bring in syntopy allopatric popu-

lations whose individuals are distinguishable using genetic markers

(e.g. discriminant alleles) may give relevant information (COLUZZI &

BULLINI 1971). However, in the case of plethodontid salamanders

the experimental plan is so demanding and time consuming that

has been judged to be unfeasible and scarcely useful (WAKE 1981).

Recent results have on the contrary demonstrated that such experi-

ments can supply relevant data about the ecological and evolution-

* Museo del Fiore, Piazza G. Fabrizio 17, 01021 Acquapendente (VT), Italia;

e-mail: museo.fiore@tin.it

** Dipartimento di Biologia Animale e Genetica & Museo di Storia Naturale

(Sezione Zoologica «La Specola»), Università di Firenze, Via Romana 17,

50125 Firenze, Italia; e-mail: benedetto.lanza@tin.it

*** Dipartimento di Ecologia e Sviluppo Economico Sostenibile, Universita della

Tuscia, Via S. Giovanni Decollato 1, 01100 Viterbo, Italia; e-mail: cimmaruta@

unitus.it & nascetti@unitus.it

124 G. FORTI, B. LANZA, R. CIMMARUTA & G. NASCETTI

ary relationships among plethodontid species, provided they are run

for long time enough (CIMMARUTA et alu 1999).

The range of S. ambrosia (Lanza, 1955), in northern Tuscany

and eastern Liguria, is neighbouring to the ranges of S. italicus

(Dunn, 1923) and S. strinatti (Aellen, 1958). Two different sub-

species have been recently described, geographically separated by

the Magra River. Speleomantes ambrosti ambrosti lives in the area of

La Spezia province situated on the hydrographic right side of the

Magra River; S. ambrosit bianchi (Lanza et alti 2005) inhabits the

southern part of the province of Massa Carrara, i.e. on the left side

of the Magra River (LANZA et ali 2005).

Speleomantes italicus and S. a. bianchi are known to meet and

hybridize on the Apuan Alps, originating a strongly asymmetric

introgression at the level of nuclear genes, without a complete blend-

ing of the two gene pools that remain substantially separated at the

level of mtDNA (CIMMARUTA et alzi 1989; RUGGI et alti 2005). Spe-

leomantes a. ambrosu and S. strinatti are parapatric in eastern Liguria

and neither syntopy nor hybridization have been observed in this

area (CIMMARUTA et ali 1999). Within S. a. ambrosti, however, the

populations from the lower Magra Valley are genetically quite dif-

ferentiated, because they show alleles shared by both S. italicus and

S. strinatu but not typical of S. ambrosia (CIMMARUTA 1993; FORTI

1998). The presence of these alleles within S. a. ambrosi gene pool

can be explained through hybridization between S. a. ambrosii and

either S. italicus or S. strinatit.

Since careful field surveys did not allow the finding of any con-

tact zone in the high Magra Valley area, nor of Speleomantes popu-

lations in the area between Pontremoli and the lower Magra Valley,

two experiments of artificial syntopy in the wild have been carried

out, bringing S. a. ambrosti together with S. strinatti (CIMMARUTA

et alt 1999) and with S. ztalicus. This last experiment, planned and

started before the discovery of the hybrid zone in the Apuan Alps,

has been carried out in a natural cave outside the range of both

the involved species, to test for reproductive isolation mechanisms

between S. a. ambrosi and S. italicus and to study the viability and

fitness of their possible hybrids.

AN EXPERIMENT OF ARTIFICIAL SYNTOPY IVS

MATERIALS AND METHODS

The site chosen to carry out the experiment of artificial syntopy

in the field was the limestone cave “Buca della Nebbia” just South

of Fungaia (Siena), municipality of Monteriggioni, on the southern

slope of Maggio Mt. at 315 m of height (cadastral number 257 T/

SI, coordinates 43°20’09”N — 11°14’14”E of Greenwich). The site

environment is relatively xeric and is characterized by a thermophy-

lous vegetation: deciduous broad-leaved wood dominated by holm

oaks (Quercus ilex L.) and downy oaks (Q. pubescens Willd). This

site was outside the range of both the species involved, in order to

keep the experiment under control and to avoid spreading a foreign

species into the range of another one.

The artificial syntopy has been realised using specimens from

two populations of S. italicus and S. a. ambrosii that were distin-

guishable by their dorsal colour pattern (LANZA et alii 1995). Thirty

adults of S. a. ambrosi (16 males and 14 females) and 30 specimens

of S. italicus (13 males, 14 females, 3 subadults) were introduced in

the cave “Buca della Nebbia”. S. a. ambrosii specimens were taken

from a very narrow, temporarily waterless stream bed, covered by

leaf litter and stones, near the cave “Grotta della Taglia” (cadas-

tral number 79L1/SP, 44°06’03”N - 09°47’°27”E of Greenwich), 200-

220 m of height, locality Colle Mantellina, “frazione” Pegazzano,

municipality of La Spezia. This is a relatively xeric environment,

covered by an oak wood (Quercus ilex L.) with chestnut trees (Cas-

tanea sativa Miller) and O. pubescens Willd. The specimens of S.

italicus were collected in the northern slope of the sandstone (are-

naria macigno) hill “Colle di San Francesco”, close to Pian di Mug-

none (about 43°48’N - 11°17’E), municipality of Fiesole (Florence),

at 170-190 m of height. This is a relatively mesic area, covered by

a close chestnut wood (Castanea sativa Miller) mixed with Robinia

pseudoacacia L.

The experiment started on 2 April 1983. Animals were released

in the deeper part of the cave, on top of the last room (fig. 1).

During the subsequent 16 years, 35 surveys were carried out in the

site, from 9 April 1983 to 11 April 1999. Till 16 May 1996 the

temperature, the humidity and the number of specimens of both

species, assessed on morphological basis, were recorded. During the

control session of 16 May 1996 newborn individuals were recorded

in the cave for the first time (by B. Campolmi and B. Lanza), 13

126 G. FORTI, B. LANZA, R. CIMMARUTA & G. NASCETTI

years after the beginning of the experiment (LANZA 1999, p. 102).

Since this moment the control protocol was modified, including

measurements of the observed salamanders: weight (W), total length

(L), snout-vent length (SVL).

m Opening

Fig. 1 - Longitudinal section and plan of the cave “Buca della Nebbia” (cadastral

number 257 T/SI) used for the artificial syntopy experiment. Survey by

F. Fallani and G. Adiodati (Gruppo Speleologico Fiorentino, C.A.I.),

drawing by F. Fallani.

AN EXPERIMENT OF ARTIFICIAL SYNTOPY 127

Specimens were also marked singularly by individual toe-clip-

ping. This allowed estimating the population size (N) by mark-

recapture method, using CHAPMAN (1951) index. Being the phalanx

cut a temporary mark, specimens have been also photographed to

allow their further identification using dorsal colour pattern. During

each survey conducted after 16 May 1996, a small piece of the tail

was taken from each newly captured specimen to assess its geno-

type (S. a. ambrosti, S. italicus, F, hybrid or backcross) using al-

lozyme electrophoresis. To this aim, were scored five loci of the six

discriminating between S. a. ambrosi and S. italicus: Ldh-1, Ldh-2,

Sod-1, Ck and Ada-1 (LANza et alti 1995; FORTI et alii 1998) on

an overall number of 55 salamanders. The electrophoretic methods

were those reported in detail by LANZA et ali (1995, 2005).

RESULTS

Thirty-five control surveys were carried out in the experimental

cave between 9 April 1983 and 11 April 1999. In 24 of these control

sessions (68.8%) Speleomantes specimens were observed in the site.

All the specimens were initially released at the end of the cave but

were always recovered within the first 10 m. The higher number of

observations was recorded in autumn and spring (seasonal mean; fig.

2). This is probably due to the scarce effectiveness of the cave itself

as a refuge, since it undergoes marked changes in temperature and

humidity especially during the summer, becoming a scarcely suitable

habitat and preventing high concentration of Speleomantes inside.

Mean (n)

5 —_>— N Wa ODN CO

Spring Summer Autumn Winter

Fig. 2 - Seasonal means of Speleomantes specimens in the cave “Buca della Nebbia”.

Total number of observations: N = 114.

128 G. FORTI, B. LANZA, R. CIMMARUTA & G. NASCETTI

During a first period (9 April 1983 - 16 May 1996) 17 surveys

have been carried out and in 59% (10 surveys) it was possible to find

introduced individuals of both species within the cave, providing an

overall number of 35 adult observations. Several surveys (41%; i.e.,

7 surveys, with 28 observations) were carried out during the first

year after the starting date, to check for the survival of the intro-

duced specimens in the site, a result not to be taken for granted,

because the site is outside the range of the genus.

The mean number of specimens recorded per session was very

low (4 + 1.05 vs. 60 specimens introduced), but both species were

still living in the site in 1989, when the surveys were stopped for 4

years. Adults of both species were still there in 1993, when controls

started again. During the survey carried out on 16 May 1996, new-

born specimens were found for the first time. Since this moment

a second phase started up, with a different sampling protocol (see

Materials and Methods). Between 16 May 1996 and 11 April 1999,

18 surveys have been executed, with 79 specimens of the two spe-

cies observed, with a mean of 4,39 (40.89) individuals per survey.

The population size estimated in 1996 was N = 41 (+9.8) and

overall 55 different individuals were observed between 1996 and

1999, including unmarked newborns. Young specimens were slightly

more numerous than adults (55% vs. 45%). Twenty specimens were

then recaptured during further controls, usually within 2-4 months

after marking. In 3 cases, however, specimens were recaptured 20-29

months after being marked.

All the 55 observed specimens were classified as S. a. ambrosti, S.

italicus, F, hybrids or backcrosses using allozyme markers. Most of

the salamanders were S. a. ambrosti, with 38 (69%) young and adult

specimens recorded (Fig. 3), while only two adults (4%) of ,S. italicus

were observed. Fifteen specimens (27%) were hybrids, both young

and adult. The bulk was F, hybrids (13) but also two adult back-

crosses F, x S. ztalicus were found. None of the young born in the site

was S. italicus: 70% were S. a. ambrosit and the others were hybrids. :

Morphometric data obtained during years 1996-1999 have pro-

vided some preliminary indication on the growth rate of Speleoman-

tes. A male of S. a. ambrosit captured on 16 May 1996 (L= 110 mm,

SVL= 62 mm, W= 4.4 g) was recaptured 8.5 months later, showing a

growth of 2 mm of SVL and an increase of 0.7 g in weight. A young

S. a. ambrosu captured on 16 May 1996 (L= 45 mm, SVL= 25.5 mm,

AN EXPERIMENT OF ARTIFICIAL SYNTOPY 129

W= 0.4 g) during the same 8.5 months increased 1.5 mm in SVL

and 0.2 g in weight. A female F, hybrid captured on 23 November

1996 (L= 119 mm, SVL= 66 mm, W= 5.6 g) was recaptured 2 years

later, showing a growth of 0,5 mm of SVL.

ieee __———————————@—@@P.-rrt(1ttI1Pr[[[[["rrrrrrrr_.'''’SSYAYJYJPS

35 Mi Specimens (n = 55)

O Young specimens (n = 27)

Number of specimens

S. italicus S. a. ambrosii hybrids

Fig. 3 - Specimens of S. ambrosii, S. italicus and hybrids observed in the second

phase of the experiment (i.e. since newborns have been detected) (N =

55).

DISCUSSION

The results obtained show that the site chosen to carry out the

experiment of artificial syntopy between S. a. ambrosti and S. itali-

cus was suitable to host a viable Speleomantes population. The envi-

ronmental conditions of the surface area are quite xeric and strongly

influence the initial part of the cave environment, that becomes

drier and warmer at summer time, as indicated by the bimodal dis-

tribution of Speleomantes frequencies shown in fig. 2 (see also Pa-

STORELLI et alzi 2001; FORTI et alti 2005).

Being the cave a poor refuge, it can not host a large Speleo-

mantes population, as confirmed by the census data, providing an

estimate of N = 41 (+9.8).

Speleomantes a. ambrosti seems to be better settled in the site, as

suggested by its higher demographic abundance (fig. 3) and repro-

130 G. FORTI, B. LANZA, R. CIMMARUTA & G. NASCETTI

ductive success; S. italicus is still inhabiting the site but shows lower

densities with respect to S. ambrosii and does not produce new-borns

in spite the adults are reproductively active, as shown by the birth

of hybrids and backcrosses. This could be due to the fact that S. a.

ambrosti individuals were from a site whose ecological features were

relatively xeric, suggesting a slight pre-adaptation of the former to

the environmental conditions of the xeric experimental site. More-

over, S. a. ambrosi has been already demonstrated able to survive

successfully in xeric Mediterranean habitats, probably because of its

high ecological plasticity (CIMMARUTA et alii 1999; FORTI et alii 2005).

The finding of young and adult F, hybrids shows that S. itali-

cus and S. a. ambrosti hybridize when in syntopy. During the 16

years of the experiment the hybridization occurred several times and

is still frequently happening, as witnessed by the high number of

hybrids observed. Indeed, F, hybrids represented 12% of the overall

number of specimens recorded and 25% of the young individuals.

Moreover, the finding of two backcrosses F, x S. italicus already

adult indicates that hybrids were viable and fertile. This finding also

attests that at least three generations occurred in the experimental

site during the 16 years of the experiment.

CONCLUSIONS

This experiment demonstrates that transplantation experiments

can be successfully carried out in plethodontid salamanders in spite

their long generation time.

The results obtained showed that S. a. ambrosii and S. italicus

hybridize producing viable and fertile hybrids, able to backcross with

parental specimens. This allows to make a hypothesis to explain the

origin of the “foreign” alleles carried by the populations of S. a.

ambrosu from La Spezia, shared by both S. italicus and S. strinatii

but not typical of S. ambrosia (CIMMARUTA 1993; ForTI 1998). These

alleles could be the signs of a past hybridization (paleointrogression)

with S. italicus, rather than with S. strinatit: this study shows indeed

that S. a. ambrosi hybridize at a high rate with S. italicus. On the

contrary, it has been previously demonstrated that S. a. ambrositi and

S. strinatit hybridize in a very limited extent when in syntopy (Cim-

MARUTA et alt 1999), making a past hybridization SS. a. ambrosii x S.

AN EXPERIMENT OF ARTIFICIAL SYNTOPY 131

strinatu less reliable. Further studies on mtDNA are now running

to test this hypothesis.

ACKNOWLEDGEMENTS

We are indebted with all those who willingly helped in collect-

ing the specimens to be transplanted and perseveringly participated

in the 16 years-long survey of the experimental site: Fabrizio Fal-

lani and Giovanni Adiodati of Gruppo Speleologico Fiorentino of

the Club Alpino Italiano (C.A.I.), Bruno Campolmi, Paola Giorgio

Lanza, Stefano Vanni, Annamaria Nistri, Marcello Iaconelli, Ele-

onora Fileti, Alessandra Ruggi, Lucia Rovelli.

REFERENCES

CHAPMAN D.G., 1951 - Some properties of the hypergeometric distribution with

applications to zoological census - Univ. Calif. Publ. Statistics, Berkeley, 1:

131-160.

CIMMARUTA R., 1993 - Ricerche di ecologia genetica ed evolutiva in Pletodontidi del

genere Speleomantes (Amphibia: Plethodontidae) - Tesi di Dottorato di Ricerca,

V Ciclo, Università degli Studi di Parma, Anno Accad. 1992-93, 130 pp.

CIMMARUTA R., ForTI G., NasceTTI G. & BULLINI L., 1999 - Spatial distribution

and competition in two parapatric sibling species of European plethodontid

salamanders - Ethol., Ecol. & Evol., Firenze, 11: 383-398.

CIMMARUTA R., NasceTTi G. & BULLINI L., 1989 - A hybrid zone between the

plethodontid salamanders Hydromantes italicus and H. ambrosii - Proc. II

Congr. Europ. Soc. Evol. Biol. (E.S.E.B.), Roma: 17.

CoLuzzi M. & BuLLINI L., 1971 - Enzyme variants as markers in the study of pre-

copulatory isolating mechanisms - Nature, London, 231: 455-456.

Forti G., 1998 - Parapatria, competizione ed isolamento riproduttivo in specie

gemelle del genere Hydromantes (Amphibia, Plethodontidae) - Tesi di Dot-

torato di Ricerca, XI Ciclo, Università degli Studi di Parma, Anno Accad.

1997-9362" pp.

Forti G., Crmmaruta R. & NAScETTI G., 2005 - Behavioural responses to seasonal

variations of autoecological parameters in populations of Speleomantes strinatti

(Aellen, 1958) and S. ambrosit (Lanza, 1955) (Amphibia, Plethodontidae) -

Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova 97: 179-192.

FORTI G., CIMMARUTA R., NASscETTI G., LANZA B. & BULLINI L., 1998 - Glaciazio-

ni del Quaternario e microevoluzione delle popolazioni continentali del genere

Hydromantes (Amphibia, Plethodontidae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997):

197-211.

LANZA B., 1999 - Speleomantes ambrosti (Lanza, 1955) - Ambrosis Héhlensalaman-

der (pp. 91-135) - In: GROSSEMBACHER K. & THIESMEIER B. (Eds.), Handbuch

182 G. FORTI, B. LANZA, R. CIMMARUTA & G. NASCETTI

der Reptilien und Amphibien Europas. Band 4/1: Schwanzlurche (Urodela) - I.

Aula Verlag, Wiesbaden, 408 pp.

Lanza B., Caputo V., NAscETTI G. & BuLLINI L., 1995 - Morphologic and genetic

studies of the European plethodontid salamanders: taxonomic inferences (genus

Hydromantes) — Monogr. Mus. reg. Sci. nat., Torino, 16, 368 pp.

Lanza B., Cimmaruta R., Forti G., BULLINI L. & NASCETTI G., 2005 - Bianchi’s

cave salamander, Speleomantes ambrosii bianchii n. ssp. (Amphibia, Caudata,

Plethodontidae) - Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova, 97: 59-77.

NASCETTI G., CIMMARUTA R., LANZA B. & BULLINI L., 1996 - Molecular taxonomy

of European plethodontid salamanders (Genus Hydromantes) - 7. Herpet., Law-

rence, 30 (2): 161-183.

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2001 - Studi preliminari sull’ecologia di

Speleomantes italicus (Dunn, 1923) nell'Appennino tosco-romagnolo (Caudata:

Plethodontidae) - Pianura, Cremona, 13: 347-351.

RuGGI A., CIMMARUTA R., Fortr G. & NAsceTTI G., 2005 - Preliminary study

of a hybrid zone between Speleomantes italicus (Dunn, 1923) and S. ambrosti

(Lanza, 1955) on the Apuan Alps, using RFLP analysis (Amphibia, Plethodon-

tidae) - Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova, 97: 135-144.

WAKE D.B., 1981 - The application of allozymes to problems in the evolution of

morphology - Evolution today. Proc. II Intern. Congr. System. and Evol.

Biol.: 257-270.

WAKE D.B., RoTH G. & Wake M.H., 1983 - On the problem of stasis in organismal

evolution - 7. theor. Biol., Sidcup, 101: 211-224.

ABSTRACT

An experiment of artificial syntopy has been carried out in the field, to assess

the degree of reproductive isolation between S. a. ambrosii and S. italicus, two taxa

parapatrically distributed and never found syntopic. The site used for the experi-

ment has been surveyed for 16 years and the results obtained have shown that the

two taxa hybridize extensively when in syntopy and that hybrids are viable and

fertile, as demonstrated by the finding of two backcrosses already grown adult.

Previous allozyme studies highlighted that S. a. ambrosii populations from La

Spezia area have in their gene pool alleles that are not typical of this taxon, but

belonging to both S. italicus and S. strinatii. Our results suggest that these alleles

could be due to a past hybridization (paleointrogression) of S. a. ambrosii with S.

italicus rather than with S. strinatti.

AN EXPERIMENT OF ARTIFICIAL SYNTOPY 133

RIASSUNTO

Un esperimento di sintopia artificiale in natura tra Speleomantes italicus e S.

ambrosti ambrosti (Amphibia, Plethodontidae).

E° stato condotto un esperimento di sintopia artificiale in natura per verificare

il grado di isolamento riproduttivo tra S. italicus e S. a. ambrosii nonché la vitalità

e la fertilità di eventuali ibridi. La realizzazione dell’esperimento è stata resa neces-

saria dalla distribuzione parapatrica senza sintopia di questi due taxa. I 16 anni di

rilievi effettuati hanno dimostrato che i due taxa ibridano in sintopia e che gli ibridi

prodotti sono vitali e fertili, come provato dal ritrovamento di reincroci già adulti.

Precedenti studi hanno mostrato che le popolazioni di S. a. ambrosti dell’area de La

Spezia analizzate mediante elettroforesi multilocus presentano degli alleli estranei

alla specie e tipici sia di S. italicus sia di S. strinatii. Perciò la verifica della possibil-

ità di ibridazione tra S. a. ambrosti e S. italicus porta ad ipotizzare l’origine di questi

alleli come paleointrogressione da S. italicus piuttosto che da S. strinatii.

stessilene Kisege

eto ebinaae elie

di gb iti

salsa armo» Halls

Pietimunary study

i hin, 3) and S. ambdrom

4 the A MSA RELY amabrsie gg bia, Plethodon-

Mus: ese. St, nat: @. Doria, Gegren, 97: | Ri IA

* The application: et. sflosmproee. sar im. the evolution of

bz Prot or Lia AL inter... ae, ay stem. and. vol.

ol Stasis if organismal

Ma bici

rea bei ate Ot in the field: to assess:

em, a. tedden eens and S. ttalicus tro taka

aa aa, ee ate sed for the experi-

Bie palin brave chown that the

oe a. Roi ty brids ave viable and

135

ALESSANDRA RuGGI*, ROBERTA CIMMARUTA *, GIANLUCA FORTI **

& GIUSEPPE NASCETTI *

PRELIMINARY STUDY OF A HYBRID ZONE BETWEEN

SPELEOMANTES ITALICUS (DUNN, 1923) AND

S. AMBROSII (LANZA, 1955) ON THE APUAN ALPS,

USING RFLP ANALYSIS

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUCTION

In the last twenty years the study of hybrid zones has been

increased and dealt successfully (ARNOLD 1992). Hybrid zones are

“natural laboratories” to investigate the evolution of the reproduc-

tive isolation mechanisms in geographically isolated taxa that sub-

sequently met and hybridized in a secondary contact (BARTON &

HewITT 1985; Harrison 1990; Hewitr 1993). Since the glacial/

interglacial stages, characterising the Quaternary epoch, have been

relevant in determining isolation/secondary contact events, it has

been hypothesized that the hybrid zones in the Alps and Pyrenees

could have been formed during the last 9000 years (HEWITT 1988).

The DNA markers have been very useful in describing subspe-

cific divergence and geographical species subdivision (AvIsE 1998).

In particular, mitochondrial DNA is suitable for studies concern-

ing molecular evolution, hybrid zones, phylogeny and colonization

events. This is due mainly to its molecular (WILSON et alii 1985)

and inheritance properties (GYLLENSTEN et alii 1985; Avise 1998).

The rate of divergence of the mtDNA is 5-10 times faster than

* Dipartimento di Ecologia per lo Sviluppo Economico Sostenibile, Università

della Tuscia, Via S. Giovanni Decollato 1, 01100 Viterbo, Italia;

e-mail: alessandra.ruggi@virgilio.it, cimmaruta@unitus.it & nascetti@unitus.it

** Museo del Fiore, Piazza G. Fabrizio 17, 01021 Acquapendente (VT), Italia;

e-mail: museo.fiore@tin.it

136 A. RUGGI, R. CIMMARUTA, G. FORTI & G. NASCETTI

nuclear DNA (Brown et ali 1979); it’s fast enough to show popu-

lation differences across a species range, and slow enough to skip

saturation problems over a few million years. There is also a sub-

stantial difference in the evolutionary rates of mitochondrial DNA

in different taxa (MORITZ et alzi 1987). In the study of hybrid zones

the mtDNA allows to investigate the direction of the gene flow and

to verify if it is sex-biased or not (AVISE & SAUNDERS 1984; CARR

et alti 1986; NELSON et ala 1987; SzymuRA et alia 1985; TayLor &

HERBERT 1993), allowing ecological and ethological inferences. In the

Plethodontid family a few hybrid zones have been investigated so far

(HAIRSTON et alti 1992; YANEV 1980; WYNN 1986; WAKE et alii 1980;

KARLIN & GUTTMANN 1981), and this is the only one found in the

genus Speleomantes.

MATERIAL AND METHODS

Two hundred and five specimens were processed from 22 popu-

lations, collected between 1980 and 1993 (tab. 1, fig.1). Allozyme

electrophoresis was used in a previous study to assess the genotype

of each sampled individual (S. italicus, S. a. bianchit or introgressed)

(CIMMARUTA 1993). From the same electrophoretically characterised

specimens the total genomic DNA was extracted from frozen muscle

tissue following the CTAB/phenol-chlorophorm protocol (MURRAY

& ‘THOMPSON 1980).

The double strand PCR amplification (SAIKI et alzi 1988) was

performed in a 50 ul volume containing: 5-20 ng of total purified

genomic DNA; 2.5 u of Taq DNA polymerase, the primers (0.2

uM), MgClo (2.5 mM), tpl dNTP (0.2 mM). The amplification was

carried out using GeneAmp PCR System 2400 (Perkin Elmer), and

began with an initial denaturation at 94°C for 5 minutes. Thermo-

cycling parameters were: denaturation 94°C for 1’, annealing at 45°C

for 30”, extension at 72°C for 1’, for 35 cycles. The reaction ended

at 72°C for 10°. This yielded 501-bp-sized fragment, a part of the

cytochrome-b region, corresponding to position 16,580 (5’end) and

17,078 (3’end) of Xenopus laevis (ROE et alti. 1985). The following

primers were used for double strand PCR amplification: MVZ25-L

(Moritz et ala. 1992) modified into HY01 (5-AAAGAAACTT-

GAAATATTGGAGT-3’) and MVZ16 (5° - AAATAGGAAWTAT-

PRELIMINARY STUDY OF A HYBRID ZONE 137

CAYTCTGGTTTWAT- 3’), designed to match plethodontid

salamanders (MORITZ et ali 1992).

Table 1 - Sampling list of populations, with the collection locality and province.

The cadastral number of the caves is also reported, when available.

No. Population name and locality Abbreviation

1 Pulica (Tana della Bastiola 481T/MS), Massa Carrara APU

Tana di Bedizzano (130T/MS), Massa Carrara ABE

3 Forno (Buca della Renella 272T/MS and Buca della Cava AFO

dell’Onice 287T/MS), Massa Carrara

+ Near Porneta, Massa Carrara APO

5 Pian della Fioba (botanic garden), Massa Carrara APF

6 Near Galleria di Tecchia, Massa Carrara ATE

7 Near Galleria Valsora, Massa Carrara AVS

8 Near Galleria M.te Pelato, Lucca AMP

9 Within Campagrina built up area, Lucca ACM

10 Near Cave Henraux, Lucca ACH

11 Near Isolasanta, Lucca IIS

12 Near Arni, Lucca AMU

13 Near Galleria del Cipollaio, Lucca ot

14 Near Vagli di Sotto, Lucca IVA

13 Magnano (Tana del Pollone, no cadastral number), IMN

Lucca

16 Piteccio (Buca di Nadia 732T/PT, Buca di Anna 829T/ IPS

PT, Buca delle Fate di Calabianna 830T/PT), Pistoia

1/78 Calvana Mt. (Buca del Castagno 602T/FI), Florence ICA*

18 Near Cardoso Stazzemese, Lucca ICS

19 Borgo a Mozzano (G. della Cartiera 833 T/LU), Lucca IBM

20% Near S.Giovanni in Petroio (Buca Ghiandaia 736T/FI, IFI*

Buca delle fate di casa Ferrucci 192T/FI), Florence

21 S. Martino in Freddana (Buca delle Fate 225T/LU), ISM

Lucca

23% Buca Tana di Maggiano (827T/LU), Lucca IMA*

* 'These samples have been studied using allozymes only, not RFLPs on mtDNA.

138 A. RUGGI, R. CIMMARUTA, G. FORTI & G. NASCETTI

Sequencing was performed using A.B.I. Prisma 310 sequencer

(Perkin Elmer) containing 2 ul of ABI-mix for sequencing (Perkin

Elmer), 1 ul of primer (3.2 pmol) and about 50 ng of PCR product.

The primers for sequencing were the same as PCR amplification.

Mitochondrial DNA (mtDNA) sequences of a double strand

were checked using Chromas program version 1.6 (Technelysium

Pty Ltd, 1998-2000) and aligned using the Clustal X program ver-

sion 1.8 (THOMPSON et ali 1997). The suitable set of endonuclease

enzymes providing specific haplotypes, was obtained using the pro-

gram DNA for Windows version 2.2 (Dixon 1999). The chosen set

of restriction enzymes is the following: HaeIII, SspI, RsaI, Mbol.

Enzymatic digestions were performed in a total volume of 10 pl

containing 7.5ul of the PCR product; 1 ug of BSA and 5u of endo-

nuclease. The digested DNA fragments were run on agarose 3% gel.

La Spezia

i Cipollaio

ts. ambrosii bianchii S.italicus =

Fig. 1 - Mean allele frequencies of the samples of S. a. bianchii and S. italicus. B is

the area of the contact zone enlarged (From CIMMARUTA 1993, modified).

Lucca , +° g Q 2 2 Km :

S. ambrosti bianchii S. italicus pot AVS p AMP | 9 si i

LATO AR ACM CH i

: APF ATE waa ‘

Ean

È n M.Pelato Campagrina :

i Porneta A SEI ar

i M.Altissimo A sia

i M.dei Ronchi :

r] .

3 i Galleria :

: ? del '

i LI

a a

i |

; i

i 8

i i

PRELIMINARY STUDY OF A HYBRID ZONE 139

Table 2 - Haplotypes observed in the studied taxa and in the samples from the

contact zone (A1, AP1, AP2, H1). Different endonuclease digestion pat-

terns referring to each enzyme are shown (A, B, C, D).

Restriction Enzyme HaelIlII SspI Rsal Mbol Haplotype

S. a. ambrosti B B B B Al

S. a. bianchi B C A A API

(Western populations)

S. a. bianchi B D A B AP2

(Eastern populations)

and contact zone

S. italicus A A A A H1

and contact zone

} 2 3

La Spezia APU ABE AFO 0a

M.Pelato Campagrina ®

Porneta A

M.Altissimo a

mor

} Galleria ICI

i del

‘’Cipollaio

Haplotype Ap2 Haplotype HI QS

Fig. 2 - The haplotypes found in the studied samples of S. a. bianchi and S. ita-

licus (A) and from the contact zone (B).

140 A. RUGGI, R. CIMMARUTA, G. FORTI & G. NASCETTI

RESULTS

Full sequences of the cytochrome b 501-bp-sized fragment have

been obtained from an overall number of 17 specimens of S. a.

ambrosti, S. a. bianchi, S. italicus and from the contact zone. These

sequences have been used to infer the restriction patterns and the

corresponding haplotypes per each studied population (tab. 2).

The obtained haplotype frequencies per sample are shown in

fig. 2. The observed pattern show that S. a. bianchi has two differ-

ent haplotypes, observed in different populations. The two western

populations, APU and ABE, have the same fixed haplotype (AP1),

while the nearby sample from eastern population, AFO, is fixed for

a different one (AP2). Interestingly, only this last haplotype (AP2)

is hold by all the samples from the contact zone (n. 4-12 and n. 14;

fig. 2). Southern populations have the S. italicus typical haplotype

(H1) (n.13 and n. 15-16-18-19-21).

DISCUSSION

Previous studies, carried out using allozyme electrophoresis,

have shown that the two taxa S. a. bianchi (LANZA et altr 2005) and

S. italicus have met and hybridized in the Apuan Alps (CIMMARUTA

1993; NASCETTI et alzi 1996). The two taxa have discriminant alleles

fixed at 8 out of the 31 loci studied and their mean allele frequen-

cies are shown in Fig. 1. The pattern observed for the allozymes

is strikingly different respect to that obtained from mtDNA. The

populations in the contact zone have alleles typical of both species,

with frequencies close to 1:1 in many samples, as for example the

populations n. 9-13 in the “Cipollaio” area where the two taxa prob-

ably came in contact and hybridized (fig. 1B). In the contact zone

only recombinant genotypes have been recorded, without parental

specimens neither F1 hybrids. On the contrary, the haplotype fre-

quencies never show the coexistence of S. a. bianchi and S. italicus

haplotypes: all the samples from the contact zone have the same

haplotype (AP2) as population AFO. An exception is represented by

the population n. 13 (ICI), having S. italicus haplotype (H1) (fig.

2B) in spite it is within the hybrid zone boundaries, as identified by

allozyme markers. This shows another difference between nuclear

and mitochondrial patterns: allozymes show an asymmetric intro-

PRELIMINARY STUDY OF A HYBRID ZONE 141

gression, with S. a. bianchi alleles strongly entering into S. italicus

gene pool, far away from the contact zone (fig. 1A), while mtDNA

shows a clean-cut subdivision of the AP2/H1 haplotypes, both unable

to cross the borderline represented by the “Cipollaio” area (fig. 2B).

Differences in the patterns of nuclear vs. mitochondrial markers

are frequently observed in hybrid zones, due to their different fea-

tures. In particular, being mtDNA maternally inherited, its distribu-

tion pattern is strongly dependent from sex-biased dispersal and is

more subject to genetic drift effects, because of the smaller effective

population size (one quarter of total N). ‘These properties, together

with the higher evolutionary rate of mtDNA respect to nuclear

DNA, make mtDNA able to retain the marks of recent paleogeo-

graphic events and can explain the higher fragmentation observed

within S. a. bianchi using mitochondrial markers: two different hap-

lotypes characterise western (n. 1-2) vs. eastern (n. 3) populations, a

difference not highlighted using allozymes.

In conclusion, the comparison of nuclear vs. mitochondrial

markers suggested a biogeographic scenario originating the present

pattern of hybridization between S. a. bianchi and S. italicus. The

genetic subdivision of S. a. bianchi could be a legacy of ice ages,

that fragmented Speleomantes populations in many refugia (FORTI

et ali 1998; CIMMARUTA et alii 2005). Mitochondrial genes could

retain stronger signs of this recent history because of their above

mentioned features, indicating the existence of more than a single

remnant nucleus in the Apuan Alps, as suggested by the presence

of two different haplotypes (AP1/AP2) in the area. The further

expansion during interglacials could have leaded to the meeting of

specimens bearing western-bianchi haplotype (AP2) with S. italicus

(H1). The hybridization occurred was probably due to S. a. bianchii

males entering S. italicus range, as suggested by the presence of

bianchi nuclear genes into S. italicus populations not having bianchi

mtDNA in their gene pool.

ACKNOWLEDGEMENTS

We are grateful to the personnel of the Botanic Garden “Pian

della Fioba” for their kind help during the sampling sessions in the

contact zone. We are particularly indebted to Prof. L. Bullini for his

supervision of the allozyme work carried out.

142 A. RUGGI, R. CIMMARUTA, G. FORTI & G. NASCETTI

REFERENCES

ARNOLD M.L., 1992 - Natural hybridization as an evolutionary process - Ann. Rev.

Ecol. Syst., Palo Alto, 23: 237-261.

AVISE J.C., 1998 - The history and purview of phylogeography: a personal reflection

- Mol. Ecol., Oxford, 7: 371-379.

AVISE J.C. & SAUNDERS N.C., 1984 - Hybridation and introgression among species

of sunfish (Lepomis): analysis by mithocondrial DNA and allozyme markers -

Genetics, Bethesda, 108: 237-255.

BARTON N.H. & Hewitr G.M., 1985 - Analysis of hybrid zones - Ann. Rev. Ecol.

Syst., Palo Alto, 16: 113-148.

Brown W.M., Georce M. Jr. & WILLIAM A.C., 1979 - Rapid evolution of animal

mitochondrial DNA - Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., Washington, 76: 1967-1971.

Carr S.M., BALLINGER S.W., Derr L.N., BLANKENSHIP L.H. & BicKHAmM L.W.,

1986 - Mitochondrial DNA analysis of hybridization between sympatric white-

tailed deer and mule deer in West Texas - Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A..,

Washington, 83: 9576-9580.

CIMMARUTA R. 1993 - Ricerche di ecologia genetica ed evolutiva in Pletodontidi del

genere Speleomantes (Amphibia: Plethodontidae) - Tesi di Dottorato di Ricerca

in Ecologia, V Ciclo, Universita degli Studi di Parma, Anno Accad. 1992-93,

130 pp.

CIMMARUTA R., ForTI G., LANZA B. & NASCETTI G., 2005 - The effects of Quater-

nary glaciations on the genetic structure of Speleomantes strinati (Aellen, 1958)

(Amphibia, Plethodontidae) - Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova, 97:

109-121.

Dixon D., 1999 - A small but powerful DNA sequence editing and analysis pro-

gram for Windows 95/98/NT - free download available at http://website.

lineone.net/~molbio/

ForTI G., CIMMARUTA R., NAscETTI G., LANZA B. & BULLINI L., 1998 - Glaciazi-

oni del Quaternario e microevoluzione delle popolazioni continentali del genere

Hydromantes (Amphibia, Plethodontidae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997):

197-211.

GYLLENSTEN U., WHARTON D. & WILSON A.C., 1985 - Mathernal inheritance of

mitochondrial DNA during backcrossing of two species of mice - 7. Hered.,

New York, 76: 321-324.

HairsTon N.G., WILEY R.H., SMITH C.K. & KNEIDEL K.A., 1992 - The dinamics

of two hybrid zones in Appalachian salamanders of the genus Plethodon - Evo-

lution, Lancaster, 46: 930-938.

HARRISON R. G., 1990 - Hybrid zones: windows on evolutionary process - Oxford

Surv. Evol. Biol., 7: 69-128.

Hewitt G.M., 1988 - Hybrid zones: natural laboratories for evolutionary studies

- Trends Ecol. Evol., Amsterdam, 3: 158-167.

Hewitt G.M., 1993 - After ice age: parallelus meet erythropus in the Pyrenees (pp.

140-164) - In: R.G. Harrison (Ed.), Hybrid zones and the evolutionary pro-

cess. Oxford University Press, Oxford, 376 pp.

KARLIN A.A. & GUTTMAN S.I., 1981 - Hybridization beetwen Desmognatus fuscus and

Desmognatus ochrophaeus (Amphibia : Urodela: Plethodontidae) in northeast-

ern Ohio and northwestern Pennsylvania - Copeia, Lawrence, 1981: 371-377.

PRELIMINARY STUDY OF A HYBRID ZONE 143

LANZA B., CIMMARUTA R., Forti G., BULLINI L. & NASCETTI G., 2005 - Bianchi’s

cave salamander, Speleomantes ambrosti bianchi n. ssp. (Amphibia, Caudata,

Plethodontidae) - Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova, 97: 59-77.

Moritz C., DoELING T.E. & Brown W.M., 1987 - Evolution of animal mitochon-

drial DNA: relevance for population biology and systematics - Ann. Rev. Ecol.

Syst., Palo Alto, 18: 269-292.

Moritz C., SCHNEIDER C.J. & WAKE D.B., 1992 - Evolutionary relationships whitin

the Ensatina eschscholtzii complex confirm the ring species interpretation -

System. Biol., Washington, 41: 273-291.

Murray M.G. & THompson W.F., 1980 - Rapid isolation of high molecular weight

plant DNA - Nucleic Acids Res., London, 8: 4321-4325.

NASCETTI G., CIMMARUTA R., LANZA B. & BULLINI L., 1996 - Molecular taxon-

omy of European plethodontid salamanders (Genus Hydromantes) - 3. Herpet.,

Athens, 30 (2): 161-183.

NELSON K., BAKER J.R. & HONeEycuTT R.L., 1987 - Mitochondrial DNA and pro-

tein differentiation between hybridizing cytotipes of the white-footed mouse,

Peromyscus leucopus - Evolution, Lancaster, 41: 864-872.

RoE B.A., Ma D.P., Wirson R.K. & Wonc J.F., 1985 - The complete nucleotide

sequence of the Xenopus laevis mitochondrial DNA genome - 7. Biol. Chem.,

Baltimore, 260: 9759-9774.

SAIKI R., DELFAND D.H., STOOFFEL S., SCHARF S.J., HiGucHi R., Horn G.T.,

Mu tus K.B. & ERLICH H.A., 1988 - Primer-directed enzymatic amplification

of DNA with a thermostable DNA polymerase - Science, Washington, 239:

487-491.

SZYMURA J. M., SpoLsky C. & UzzeLL T., 1985 - Concordant change in mitochon-

drial and nuclear genes in the hybrid zone between two frog species (genus

Bombina) - Experientia, Basel, 41: 1496-1470.

TayLor D.J. & HeBeERT P.D.M., 1993 - Habitat-dependent hybrid parentage and

differential introgression between neighboringly sympatric Daphnia species -

Proc. nat. Acad. Sci. U.S.A., Washington, 90: 7079-7083.

http.//www.technelysium.com.au/chromas.html

‘THOMPSON J.D., GIBSON T.J., PLEWNIAK F., JEANMOUGIN F. & HIGGINS D.G., 1997 -

The ClustalX windows interface: flexible strategies for multiple sequence align-

ment aided by quality analysis tools - Nucleic Acids Res., London, 24: 4876-4882.

WAKE D.B., Yanc S.Y. & PaApenruss T.J., 1980 - Natural hybridization and its

evolutionary implications in Guatemala Plethodontid salamanders of the genus

Bolitoglossa - Herpetologica, Pittsburgh, 36: 335-345.

WILSON A.C., CANN R.L., Carr S.M., Georce M. Jr. & GYLLENSTEN U.B., 1985

- Mitochondrial DNA and two perspectives on evolutionary genetics - Biol. 7.

Linn. Soc., London, 26: 375-400.

WYNN A.H., 1986 - Linkage disequilibrium and a contact zone in Plethodon cinereus

on the Del Mar Va Peninsula - Evolution, Lancaster, 40: 44-54.

YANEV K.P., 1980 - Biogeography and distribution of three parapatric salamander

species in coastal and borderland California (pp. 531-550) - In: Power D.M.

(Ed.) The California islands: Proceedings of a multidisciplinary symposium.

Santa Barbara Mus. Nat. Hist., 787 pp.

144 A. RUGGI, R. CIMMARUTA, G. FORTI & G. NASCETTI

ABSTRACT

It has been recently demonstrated that the species Speleomantes ambrosit

includes two geographically and genetically distinct forms: S. ambrosti ambrosti, from

the area of La Spezia on the hydrographic right side of the Magra river, and S.

ambrosti bianchi, ranging from Massa Carrara to the west side of the Apuan Alps.

In this area S. a. bianchu and S. italicus came in contact and hybridized, as shown

by previous allozyme analysis.

Within this study a RFLP protocol has been set up to investigate the mito-

chondrial genome of Speleomantes species. The fragment amplified is 501-bp-sized

of Cytochrome b region. The specific haplotypes characterising the taxa S. italicus,

S. a. ambrosit and S. a. bianchi have been obtained using a set of four restriction

enzymes. ‘he haplotypic pattern evidenced is not coincident with the allozyme one,

showing a high genetic fragmentation of S. a. bianchi and a segregation of bianchit-

italicus haplotypes in the contact zone.

RIASSUNTO

Studio preliminare di una zona di ibridazione tra Speleomantes italicus e S.

ambrosi sulle Alpi Apuane, utilizzando l'analisi RFLP (Amphibia, Plethodontidae).

La specie Speleomantes ambrosti presenta due forme geneticamente differenzi-

ate: S. ambrosti ambrosti, in provincia di La Spezia, alla destra idrografica del fiume

Magra, e S. ambrosti bianchi in provincia di Massa Carrara fino al versante occiden-

tale delle Alpi Apuane, dove quest’ultimo è venuto in contatto ed ha ibridato con

S. italicus. In questo studio preliminare è stata messa a punto la tecnica RFLP su

DNA mitocondriale di Speleomantes e si è analizzata una porzione di mtDNA di 501

bp codificante per il Citocromo b. Sono stati individuati gli aplotipi caratteristici di

S. rtalicus, S. a. ambrosti e S. a. bianchii.

I risultati ottenuti mostrano un pattern aplotipico non coincidente con quello

allozimico, ottenuto in studi precedenti. Il confronto fra le due serie di dati ha per-

messo di evidenziare una considerevole frammentazione genetica di S. a. bianchii e

la separazione degli aplotipi di S. a. bianchi e S. italicus, che non sono mai presenti

contemporaneamente nella stessa popolazione.

145

SANDRO CASALI*, ANDREA SUZZI VALLI*. GLAUCO BUSIGNANI *

>) ’

& GIANCARLO TEDALDI**

I COSTUMI ARBORICOLI DI SPELEOMANTES

ITALICUS (DUNN, 1923) NELLA REPUBBLICA

DI SAN MARINO

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUZIONE

Nella Repubblica di San Marino Speleomantes italicus (Dunn,

1923) risulta diffuso tra i 300 e 1 650 m s.l.m. in aree a prevalente

substrato calcareo, mentre in zone limitrofe esso è stato rinvenuto

anche a quote decisamente inferiori (e superiori) e in cavità della

locale formazione gessosa (BAGLI 2001; Guipucci s.d.; LANDI 2000;

PASTORELLI et alzi 2001; TepALDI 1996; TEDALDI & LAGHI 1998).

Nel territorio sammarinese il geotritone italico è noto per diverse

località (LANZA 1955; Suzzi VALLI 1993) e risulta particolarmente

comune e facilmente osservabile anche in ambienti aperti ed in situa-

zioni apparentemente insolite: in qualsiasi periodo dell’anno, infatti,

quando le condizioni atmosferiche non costituiscono un fattore limi-

tante, lo si può reperire anche sui muri e sulle gradinate della città.

Più volte è stato sorpreso in cantine ed in altre parti di edifici rica-

vati direttamente nella roccia ed è stato anche intercettato mentre

compiva spostamenti lungo le vie e addirittura su strade asfaltate. In

ambiente epigeo frequenta le pareti rocciose e si rinviene sovente tra

le pietre poste in prossimità di rupi.

Il presente contributo costituisce un approfondimento dello

studio preliminare condotto nella Repubblica di San Marino a

* Centro Naturalistico Sammarinese, Via Valdes De Carli 21, 47893 Borgo Mag-

giore, Repubblica di San Marino; e-mail: centronaturalistico@omniway.sm

** Riserva Naturale Orientata Bosco di Scardavilla, Piazza F. Orsini 29, 47014

Meldola (FC), Italia; e-mail: scardavilla@comune.meldola.fo.it

146 S. (CASALI. A. SUZZINALLI. Gr BUSIGNANI:8 46. TEDALDI

seguito delle osservazioni sulle “inconsuete” abitudini arboricole del

geotritone italico (CASALI et ali 2002).

MATERIALI E METODI

L’area di studio è localizzata in una località mai segnalata in

precedenza posta tra Borgo Maggiore (RSM) e San Marino, a circa

550 m s.l.m., in ambiente fresco ed ombreggiato con esposizione

nord. La vegetazione è di tipo mesofilo e si compone di un bosco

misto di latifoglie con dominanza di Carpino nero (Ostrya carpinifo-

lia), Orniello (Fraxinus ornus) ed aceri (Acer sp.); lo strato arbustivo

è rado, mentre quello erbaceo è a copertura diffusa e ricco di specie

(fig. 1). Al fine di procedere ad un’analisi più dettagliata del feno-

meno è stata individuata una superficie di studio “ridotta” (pari a

circa 600 mq) comprendente una imponente emergenza rocciosa e

diversi alberi di specie e dimensioni variabili (tab. 1).

Fig. 1 - Ambiente in cui sono state effettuate le osservazioni di geotritone.

Le osservazioni sono state effettuate in giorni con differenti

condizioni meteorologiche e sempre in ore notturne (fig. 2). Per

I COSTUMI ARBORICOLI DI SPELEOMANTES ITALICUS 147

l'attribuzione alle classi di età “adulti” (e quindi esemplari sessual-

mente maturi) e “subadulti” o immaturi è stato utilizzato il lavoro di

PASTORELLI et alzi (2001) che fissano nella lunghezza muso-cloaca di

42 mm la presumibile forbice di separazione tra gli individui maturi

e quelli immaturi. Per la distinzione tra maschi e femmine si è con-

siderata la presenza/assenza della ghiandola mentoniera, facilmente

rilevabile nei maschi adulti.

Tab. 1 - Caratteristiche degli esemplari arborei e numero di osservazioni di geotri-

tone effettuate nell’area di studio.

(cm) geotritone

Pe |.

Mj_atterga di [fanghi papa a a Ae Ai !

eae Ee I ese 8

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pm MT pp 20 ae

RISULTATI E CONCLUSIONI

Delle 240 osservazioni di geotritone effettuate nell’area indagata,

184 (77%) riguardavano individui localizzati su tronchi di piante vive

e 56 (23%) individui rinvenuti a terra o su roccia. Al di fuori del-

l’area di studio, 6 esemplari sono stati osservati anche su pali in

ferro a sostegno di reti paramassi. Di giorno, entro l’area è stato

rinvenuto un solo esemplare sotto un tronco marcescente, al di fuori

due esemplari fra le rocce e seminascosti fra muschi e felci.

I dati relativi al numero e alla localizzazione delle osservazioni

e la struttura della popolazione esaminata durante lo studio sono

riportati nella tab. 2.

148 - S. CASALI, A. SUZZI VALLI, G. BUSIGNANI & G. TEDALDI

i nei Bot ot —"

* CC n ol te Gio be

* * oe

& pe è * a vr ni RESTO.

10/10/01 17/10/01 | 24/10/01

23.30-0.30

+ 10°C

| pieggia dopo

| lungo per. secco

23.45-0.45

+3°C

pioggia

0.30-230 || 2310050 23.45-2.00

+15° | +43°C | +12°C

dopo pioggia, sereno || dopopioggia,

sereno, nebbia | serena, nebbia

Tot. esemplari

Su piante

0 Ì

A terra o su roccia |

i |

Maschi

Femmine

Subadulti

Tot. esemplari Tet. asemplari | Tat. esemplari

29 | 9 | 60

Su piante | Su piante | Su piante

24 | 8 | 41 |

Aterra osu roccia || A terra o su receia || A terra o su receia |

15 | 1 | 19 |

Maschi = || Maschi Maschi

13 4 | 20

Femmine | Femmine Il Femmine

20 5 | 25

Subadult Subadutti Subadulti

Tot esemplari

Su piante

A terra o su roccia

Maschi

Femmine

Subadulti

08/04/02

23.15-2.15

+7 °C

pioggia

dopo pioggia,

sereno, nebbia

serano, nebbia

Tot. esemplari

Su piante

A terra 0 su roccia |

Maschi

Femmina

Subadulti

Tot. asempiari

Su piants

A terra o su roccia

Maschi

Femmina

Subadulti

Tot, asemplari

Su piante

| A terra o su rocda

Tot. esemplari

Su piante

0 È

A terra 0 su roccia |

| 0

Maschi

Femmine

Subadulti

Tot. esemplari

Su piante

|| A terra o su roccia

! o

Maschi

Femmine

Subadulti

Fig. 2 - Date, condizioni meteorologiche e numero di geotritoni osservati.

I COSTUMI ARBORICOLI DI SPELEOMANTES ITALICUS 149

Tab. 2 - Numero di osservazioni di geotritone ripartite in base al sesso, alle dimen-

sioni e al tipo di substrato di rinvenimento.

osservazioni N. osservazioni N. osservazioni

totali su specie arboree a terra o su roccia

udu ie

I geotritoni sono stati trovati su varie specie arboree (tab. 1) e

la loro distribuzione sui tronchi era concentrata entro 1 primi 90 cm

di altezza da terra, con un numero decrescente di osservazioni ad

altezze superiori. L’altezza massima di rinvenimento è stata di poco

superiore ai 350 cm (fig. 3).

n. osservazioni

20-29

40-49

60-69

80-89

100-109

120-129

140-149

160-169

180-189

200-209

220-229

240-249

260-269

280-289

300-309

320-329

340-349

altezza dal suolo (cm

San

Fig. 3 - Distribuzione altitudinale degli esemplari di geotritone lungo i tronchi

degli alberi.

In due occasioni è stato verificato che la maggior parte dei geo-

tritoni iniziava a risalire lungo i tronchi verso le 23 e che quasi tutti

stazionavano ad altezze diverse per alcune ore (fig. 4).

150 S. CASALI, A. SUZZI VALLI, G. BUSIGNANI & G. TEDALDI

Fig. 4 - Esemplare di Speleomantes italicus in risalita e in sosta su un tronco.

In condizioni meteorologiche sfavorevoli (notti con temperature

inferiori a 3°C o superiori a 16°C), i pochi animali osservati si trova-

vano sui tronchi e nessuno è stato osservato a terra o su rocce. Non

sono state rilevate differenze significative nel rapporto tra i sessi e

fra adulti e subadulti presenti sui tronchi e quelli a terra e/o su

roccia; in queste fasi della ricerca non sono stati mai osservati esem-

plari neonati (tab. 2).

Sulla corteccia e fra l’edera sono state osservate diverse specie

di artropodi, quasi sempre ben in vista e facilmente predabili; l’at-

tività trofica potrebbe in parte spiegare l’attività arboricola, come

in effetti è stato dimostrato nel pletodontide americano Plethodon

cinereus (Green) da JAEGER (1978). Sui tronchi alcuni esemplari di

sesso diverso sostavano molto vicini, altri apparentemente si segui-

vano camminando (fig. 5). Nessun esemplare è stato però sorpreso

in attività di corteggiamento, forse a causa del disturbo provocato

dal fascio luminoso della torcia.

Le osservazioni condotte accertano un fenomeno sicuramente

rilevante sotto il profilo ecologico e comportamentale; infatti il

numero dei geotritoni osservati in attività sui fusti delle piante era

I COSTUMI ARBORICOLI DI SPELEOMANTES ITALICUS 151

molto più elevato di quello degli esemplari presenti a terra e ciò sug-

gerisce che quanto osservato non può essere un fenomeno casuale.

Fig. 5 - Due esemplari di Speleomantes italicus di sesso opposto che apparentemente

“interagiscono” sul tronco di un albero.

BIBLIOGRAFIA

BagLI L., 2001 - Segnalazioni faunistiche n° 43: Speleomantes italicus - Quad. Studi

nat. Romagna, Cesena, 14: 128.

GUIDUCCI P., s.d. - Grotte e luoghi sotterranei - Provincia di Rimini, Rimini: 27-28.

JAEGER R.G., 1978 - Plant climbing by salamanders: periodic availability of plant

dwelling prey - Copeia, Lawrence, 1978: 686-691.

LANDI L., 2000 - Segnalazioni faunistiche n° 40: Speleomantes italicus - Quad. Studi

nat. Romagna, Cesena, 13: 72.

LANZA B., 1955 - Notizie sulla distribuzione in Italia del Geotritone (Hydromantes

italicus Dunn) e descrizione di una nuova razza (Amphibia Plethodontidae) -

Arch. zool. ital., Napoli, 39 (1954): 147-162.

152 S. CASALI, A. SUZZI VALLI, G. BUSIGNANI & G. TEDALDI

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2001 - Studi preliminari sull’ecologia di

Speleomantes italicus (Dunn, 1923) nell'Appennino tosco romagnolo (Caudata:

Plethodontidae) - Pianura, Cremona, 13: 347-351.

SocIETAS HERPETOLOGICA ITALICA, 1996 - Atlante provvisorio degli Anfibi e dei Ret-

tili italiani - Annali Mus civ. St. nat. G. Doria, Genova, 91: 95-178.

Suzzi VALLI A., 1993 - Repubblica di S. Marino. Ambiente e Aree tutelate - Ed.

Dicastero al Territorio e Ambiente AIEP, San Marino, 211 pp.

TEDALDI G., 1998 - Guida agli Anfibi e ai Rettili della Romagna - Ed. Maggioli,

Rimini, 94 pp.

TEDALDI G. & LaGui P., 1998 - Il Progetto Atlante Erpetologico della Provincia di

Forlì-Cesena: resoconto dopo i primi cinque anni di attività: primo contributo

(Amphibia, Urodela, Anura) - Quad. Studi nat. Romagna, Cesena, 10: 33-45.

RIASSUNTO

Nella Repubblica di San Marino il geotritone Speleomantes italicus, noto per

diverse località, risulta particolarmente comune e facilmente osservabile, con con-

dizioni atmosferiche favorevoli, anche in ambienti aperti ed in città. Recentemente

sono state compiute osservazioni sistematiche autunnali e primaverili su un cospicuo

numero di esemplari con costumi arboricoli i quali risalgono 1 fusti degli alberi e vi

stazionano per alcune ore, posizionandosi ad altezze differenti e senza una apparente

discriminazione nella scelta della specie vegetale, del suo diametro e della scabrosità

del tronco.

Nonostante il numero totale di esemplari rilevati comprenda catture ed even-

tuali ricatture, risulta che le osservazioni di esemplari in attività sui tronchi degli

alberi sono state circa il triplo di quelle effettuate sul terreno, suggerendo che il

fenomeno non può essere riferito al caso; si ipotizza quindi che tale comportamento

sia legato ad una maggior disponibilità di prede.

ABSTRACT

Arboral customs of Speleomantes italicus (Dunn, 1923) in the Republic of San

Marino (Amphibia, Plethodontidae).

In the Republic of S. Marino, the Italian Cave Salamander Speleomantes ita-

licus is common and widespread. During favourable weather conditions, the Italian

Cave Salamander is commonly observed, even in rather unusual sites such as on

stony walls, stone stairs and balconies within the city and in cellars or other parts of

buildings that are constructed directly upon the rock. Recently, repetitive observa-

tions have been made on a conspicuous number of tree climbing specimens. During

the night, salamanders climb and stay upon tree trunks for several hours, without

any preference for the tree species, tree diameter or trunk roughness.

These observations took place during several nights both in autumn and spring

and confirm that plant climbing is a relevant activity in the studied population,

suggesting that this behaviour is probably related to feeding upon arboreal inver-

tebrates.

153

PaoLO LAGHI*, CHRISTIAN PASTORELLI **

& DINO SCARAVELLI ***

INDIVIDUAL PATTERN RECOGNITION OF

SPELEOMANTES ITALICUS (DUNN, 1923)

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUCTION

Individual recognition of the animals by means of marking is

one of the bases of most ecological studies. The marking of amphib-

lans is especially difficult, problems arising from the often small

size of the animals and their peculiar skin morphology and physiol-

ogy; the several tecniques that have been so far proposed have both

advantages and limits, which should be carefully taken into account

according to investigation’s aims (cf. FABER, 2001). Toe-clipping

is still among the most commonly employed techniques, although

it cannot be used in long-term researches on tailed amphibians,

because of their high regeneration potential (about regeneration in

Speleomantes, cf. SALVIDIO, 1997). Furthermore, the resulting inju-

ries may increase the risk of mortality or affect animals fitness.

Pattern recognition is also among the most considerate methods

for amphibians (especially Caudata), which effectiveness is compara-

ble to that of other techniques, such as toe clipping and application

of P.I.T. (Passive Integrated Transponders) (cf. FABER, 2001). This

technique was first applied to Speleomantes by SALVIDIO et alii (1994),

who used backlimb colour pattern to individually recognize S. stri-

natu (Aellen, 1958); herein we reports the results coming from pattern

recognition of S. italicus (Dunn, 1923) over two consecutive years.

* Via Bruno Costante Garibaldi 22, 47100 Forlì, Italia; e-mail: spelerpes@libero.it

** Via Cerchia di Sant'Egidio 2205, 47023 Cesena (FC), Italia;

e-mail: pastorellic@libero.it

*** Associazione Chiroptera Italica, Via Veclezio 10/A, 47100 Forlì (FC), Italia;

e-mail: dinosc@tin.it

154 P. LAGHI, C. PASTORELLI & D. SCARAVELLI

MATERIALS AND METHODS

The study site is a tectonic cave called «Grotta del Tritone»,

located in northern Apennines (province of Forlì-Cesena, Italy).

The S. italicus population gravitating around the cave has been

object of a long term study, in order to investigate several natu-

ral history traits of the species (cf. PASTORELLI et alzi 2001, 2002a,

2002b and 2005).

The site was visited monthly from September 1998 to August

2000 (except for October 1998); all cave salamanders captured were

measured and sexed by means of exterior sexual characters. Dorsal

pattern was photographed under near-freezing water, in order to

avoid reflections in images (cf. LANZA et alii 1995) and to speed

up animal’s immobilization; a transparent millimetered paper sheet

laying on tank bottom provided an additional reference as regards

to salamanders size.

Images were taken by a reflex camera 35 mm, equipped with a

100 ASA color slide film, and a flash-lamp. Date of capture, sex,

body length (from snout tip to the anterior end of the vent), and

identification code of each animal were recorded and stored up in a

digital data bank. At the end of all sample sessions each salamander

was released in the place where it was captured. Later, in the labora-

tory, for each specimen an identification mark was chosen: a single

blotch, a group formed by few blotches, or an area lacking ochra-

reddish pigments; then, individual recognition occurred by means of

direct slide comparison.

RESULTS AND DISCUSSION

The studied population shows “italzcus”-type colour and pat-

terns, as described by LANZA et alti (1995): dorsal pattern with brown

ground colour abundant and sometimes prevailing; ochra-reddish

blotchings and/or marblings on the trunk and tail; pattern reduced

or lacking on the head and neck, often more and more widespread

towards the tail, where light markings usually overwhelm the darker

ground colour (fig. 1); ventral pattern with dark ground colour (nut-

brown to dark bistre) dusted or closely dotted with white or off-white.

Because of its wider range of colours and higher complexity,

dorsal pattern was chosen instead of ventral one in order to recog-

nize animals.

INDIVIDUAL PATTERN RECOGNITION OF SPELEOMANTES ITALICUS 155

Fig. 1 - Example of S. :talicus «mug shot». Male, «blotched» phenotype. The arrow

indicates the «C» shaped blotch used as identification mark.

According to LANZA et alia (1995) dorsal pattern of Speleomantes

is highly variable also within the same population. We arbitrarily

recognized three main «pattern phenotypes» within the studied

population [percentages of each phenotypes within a section of the

sample (n = 96) have been cited in round brackets]:

1) «uvenile» (26.0%): dark ground colour prevailing, with only few,

almost reddish or rarely ochra, dustings and speckles;

2) «blotched» (52.1%): ochra-reddish chromatophores arranged

in quite defined blotches, variable in size and shape, pattern

roughly corresponding to «talicus»-type described by LANZA et

alu (1995);

3) «marbled» (21.9%): ochra-reddish chromatophores arranged in

marblings, an intermediate pattern between «reticulate»-type and

«corman»-type of LANZA et alu (1995).

The frequency of phenotypes in the different sex categories 1s

reported in tab. 1.

156 P. LAGHI, C. PASTORELLI & D. SCARAVELLI

Tab. 1 - Percentages of each phenotype in the different sex categories, calculated

for a section of the sample (n = 96).

Juvenile

Blotched

Marbled

An identification mark should be easy recognizable, and durable.

In order to match these conditions we chose blotches characterized

by a relatively big size (less affected than speckles by pattern varia-

tions caused by age), a peculiar shape and a good contrast against

the ground colour (allowing a quick spotting), and a middorsal posi-

tion on animal’s back (always noticeable in images, while blotches

on sides may not be visible due to animal’s torsion or inclination).

Such blotches are more often found from the posterior half of sala-

mander’s trunk to the tail (86.5% of cases, in a sample section of 96

specimens), thus this is the body region on which attention should

be focused for individual cave salamanders recognition.

Individual dorsal pattern also changes gradually with age. As

already written, most of juvenile salamanders (15-28 mm in body

length) display a pattern characterized by few reddish dustings and

speckles on the darker ground colour. As the animal grows, due

to the addition of ochra-reddish chromatophores, the small spots

increase and sometimes merge into others to form larger blotches

(fig. 2), the pattern turning gradually into «blotched» or «marbled»

phenotypes.

Over the study period we were able to recognize 243 specimens:

118 adults (60 males and 58 females) and 125 immatures. 96 speci-

mens were captured more than once (up to 8 times) and it was possi-

ble to recognize salamanders even two years after their first capture.

As all the salamanders were collected within an area of 300 m?, the

extrapolated density is 0.8 individuals/m’, that is exactly the same

mean value estimated by SALviIDIO (1998) for S. strinatii sampled

on a rock-face habitat. Quite lower density values were obtained for

S. supramontis by VOESENEK et ali (1987: 300 animals/ha) and for

S. strinatit by CORTESOGNO & BALLETTO (1989: 0.1 individuals/m?),

INDIVIDUAL PATTERN RECOGNITION OF SPELEOMANTES ITALICUS 157

who sampled respectively in a dense holm oak forest and in a seep-

age area located in a beech forest.

Fig. 2 - S. italicus pattern variations caused by age. Immature, «juvenile» phe-

notype. The arrows indicate areas with visible ground colour, that were

progressively filled with reddish chromatophores (1), and the growth of

a blotch, due to the appearance of new ochra chromatophores (2). Left =

date of capture: May 17" 1999; body length = 16 mm. Right = date of

capture: February 2"° 2000; body length = 24 mm.

Recapture rate (calculated for each sample session as % of known

specimens on the total number of salamanders captured) averaged

48.8%, showing an increasing trend over the 24 months period (fig. 3).

In conclusion the technique proved effective in individual rec-

ognition of salamanders, moreover it allowed the collection of addi-

tional data about pattern variations within the sample. On the other

hand some factors limit the applicability of the method (cf. FABER,

2001). Photographic techniques are quite laborious and expensive,

and the risk of incorrect identification increase in direct proportion

to the size of the sample. Also, pattern recognition should be car-

ried out regularly, without interruptions; otherwise, the effectiveness

of the method might be affected by pattern changes over the years

(especially as regards to juvenile specimens), in proportion to the

length of the discontinuance. Finally, the technique does not seem

to be suitable for an automation by digital image analysis, due to the

heterogeneity of mug shots.

158 i P. LAGHI, C. PASTORELLI & D. SCARAVELLI

100,0 |

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oSLt=s<qs3?3903AÀA£L=35CI13539)?2I

Sample session

Fig. 3 - Recapture rate distribution over the study period; broken line shows the

increasing trend.

REFERENCES

CoRTESOGNO L. & BALLETTO E., 1989 - Lineamenti dell’ecologia dei Rettili e degli

Anfibi dell'Alpe di Rezzo (Imperia) e considerazioni sulla erpetofauna delle

faggete italiane - Boll. Mus. Ist. biol. Univ. Genova, 53 (1987): 123-140.

FABER H., 2001 - Individual recognition of amphibians with special emphasis on

PIT (passive integrated transponders) - Pianura, Cremona, 13: 17-24.

LANZA B., Caputo V., NAscETTI G. & BuLLINI L., 1995 - Morphologic and genetic

studies of the European plethodontid salamanders: taxonomic inferences (genus

Hydromantes) - Monogr. Mus. reg. Sc. nat., Torino, 16, 368 pp.

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2001 - Studi preliminari sull’ecologia di

Speleomantes italicus (Dunn, 1923) nell’ Appennino tosco-romagnolo (Caudata:

Plethodontidae) - Pianura, Cremona, 13: 347-351.

PASTORELLI C., LaGHI P. & SCARAVELLI D., 2002a - Seasonal activity and spatial

distribution of a Speleomantes italicus population in a natural cave - Biota,

Petroyce,’ 3 (122): 119-826.

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2002b - Speleomantes antipredator stra-

tegies: a review and new observations - Biota, Petrovée, 3 (1-2): 127-131.

PASTORELLI C., LAGHI P. & ScaRavELLI D., 2005 - Spacing of Speleomantes itali-

cus (Dunn, 1923): application of a Geographic Information System (G.I.S.)

(Amphibia, Plethodontidae) - Annali Mus. civ. St. nat. G. Doria, Genova, 97:

169-177.

SALVIDIO S., 1997 - Tail injuries in Speleomantes ambrosti (pp. 313-316) - In: BOHME

W., BiscHorr W. & ZIEGLER T. (Eds.), Herpetologia Bonnensis, Bonn, 416 pp.

INDIVIDUAL PATTERN RECOGNITION OF SPELEOMANTES ITALICUS 159

SALVIDIO S., 1998 - Estimating abundance and biomass of a Speleomantes strinatit

(Caudata, Plethodontidae) population by temporary removal sampling - Amphi-

bia-Reptilia, Leiden, 19 (2): 113-124.

SALVIDIO S., LATTES A., Tavano M. & MELODIA F., 1994 - Ecology of a Speleo-

mantes ambrosi population inhabiting an artificial tunnel - Amphibia-Reptilia,

Leiden, 15 (1): 35-45.

VOESENEK L. A. C., VAN Rooy P. T. J. C. & STRIJBOoscH H., 1987 - Some autoeco-

logical data on the Urodeles of Sardinia - Amphibia-Reptilia, Leiden, 8 (4):

307-314.

ABSTRACT

For two consecutive years individual recognition of Speleomantes italicus, by

means of dorsal pattern «mug shots», was tested; pattern variations caused by age

and among individuals were also recorded. Within the studied population three

main «pattern phenotypes» were arbitrarily recognized. Juveniles display few, almost

reddish speckles on the darker ground colour («juvenile» phenotype); as time goes

by, speckles increase in larger markings, due to the appearence of ochra-reddish

chromatophores. In larger immatures and adult salamanders light markings may be

arranged in quite defined blotches («blotched» phenotype), as well as in marblings

(«marbled» phenotype).

Over the study period 243 cave salamanders (60 males, 58 females and 125

immatures) were individually recognized, and salamanders recognition was possible

even two years after their first capture. In agreement with those observed for S.

strinatii, the calculated density of S. italicus was 0.8 individuals/m?. Recapture rate

showed an increasing trend over the 24 months period, averaging 48.8%.

The technique proved effective in individual recognition of salamanders,

although quite laborious and expensive, as well as not suitable for an automation

by digital image analysis.

RIASSUNTO

Riconoscimento tramite il disegno individuale di Speleomantes italicus (Dunn,

1923) (Amphibia, Plethodontidae).

Per due anni consecutivi è stato sperimentato il riconoscimento individuale di

Speleomantes italicus, mediante fotografie della colorazione dorsale; sono state inoltre

registrate le variazioni della colorazione tra i diversi individui, nonché in funzione

dell’età. All’interno della popolazione studiata sono stati arbitrariamente riconosciuti

tre principali fenotipi di colorazione. Gli individui giovani hanno poche macchioline,

per lo più rossastre, sul colore di fondo più scuro (fenotipo «giovanile»); col passare

del tempo le macchioline si estendono in macchie più grandi, grazie alla comparsa

di cromatofori ocra-rossastri. Negli individui immaturi più grandi e negli adulti le

ornamentazioni chiare possono essere organizzate sia in macchie piuttosto definite

(fenotipo «macchiato»), che in marmorizzazioni (fenotipo «marmorizzato»).

160 P. LAGHI, C. PASTORELLI & D. SCARAVELLI

Nell’arco del periodo di studio sono stati riconosciuti individualmente 243 geo-

tritoni (60 maschi, 58 femmine e 125 immaturi) e il riconoscimento è stato possibile

fino a 2 anni di distanza dalla prima cattura. In accordo con quanto osservato per

S. strinatti, è stata calcolata per S. italicus una densità di 0,8 individui/m?. Nell’arco

dei periodo di 24 mesi il tasso di ricattura ha mostrato una tendenza all’incremento

(media = 48,8%).

La tecnica si è dimostrata efficace per il riconoscimento individuale dei geotri-

toni, seppur piuttosto laboriosa e dispendiosa, nonché inadatta ad un’automazione

tramite analisi d'immagine digitale.

161

RES LIGUSTICAE CCXLIX

FABRIZIO ONETO* & SEBASTIANO SALVIDIO *

DATI PRELIMINARI SULLA DISTRIBUZIONE DELLE

PREDE DI SPELEOMANTES STRINATII (AELLEN)

NELLA STAZIONE BIOSPELEOLOGICA

DI S. BARTOLOMEO (GE)

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUZIONE

Il geotritone di Strinati Speleomantes strinatit (Aellen, 1958) è

un predatore opportunista, legato a una notevole varietà di prede,

soprattutto invertebrati del suolo e volanti (Morisi 1981; SALVIDIO

1992; SALVIDIO et ali 1994). Le popolazioni epigee di questa specie

si nutrono di Molluschi, Aracnidi, Isopodi e numerosi gruppi di

insetti tra cui Collemboli, Coleotteri, Ditteri e Imenotteri (SALVI-

DIO 1992), mentre quelle cavernicole catturano in prevalenza Ditteri

Limonidi che abbondano sulle pareti umide delle cavità sotterranee

(Moris! 1981; SaLvipio et ala 1994). Le popolazioni cavernicole di

geotritone mostrano un ciclo di attività stagionale ben definito, con

minimi in inverno e massimi in primavera-estate (SALVIDIO et ali

1994).

Il presente studio ha come scopo quello di mettere in relazione

l’attività di una popolazione di S. strinatit con la disponibilità delle

sue potenziali prede, all’interno della Stazione Biospeleologica di S.

Bartolomeo di Besolagno. In questo sito l'alimentazione dei geotri-

toni avviene prevalentemente a spese del Dittero Limonia nubeculosa

Meigen, 1804 (SaLvipIo et ali 1994).

* Dipartimento per lo studio del Territorio e delle sue Risorse, Università di

Genova, Corso Europa 26, 16132 Genova, Italia & Gruppo Speleologico Ligure

“A. Issel”, Busalla (GE), Italia; e-mail: salvidio@dipteris.unige.it

162 F ONETO & S. SALVIDIO

MATERIALI E METODI

La Stazione Biospeleologica di S. Bartolomeo si trova a 392 m

s.l.m. in Valle Scrivia, nel comune di Savignone (GE). Si tratta di

un ex rifugio antiaereo, scavato con cariche di mina nella Seconda

Guerra Mondiale e colonizzato spontaneamente da una popolazione

di geotritoni da ormai 30 anni (PASTORINO & PEDEMONTE 1974).

L'ingresso, con esposizione Nord-Est, si trova 1 m sotto il livello del

suolo ed è accessibile per mezzo di una scaletta. L’entrata è chiusa

con un grata di ferro e l'andamento della cavità si presenta oriz-

zontale con curve e diramazioni per circa 35 m (PASTORINO et alzi

1997). All’interno, sono stati collocati strumenti per la misura della

temperatura e dell'umidità relativa. Le pareti della cavità sono state

suddivise, tramite fili di nylon, in settori di circa 1 m? ciascuno e la

quadrettatura arriva fino a 24 m dall’imbocco.

La disponibilità e la distribuzione spaziale delle potenziali prede

dei geotritoni è stata stimata collocando all’interno della stazione

trappole adesive, costituite da fogli di acetato trasparente (21 x 29,7

cm) spalmati con colla entomologica su entrambi 1 lati. Sette trap-

pole, collocate ogni 4 metri lungo i primi 24 m del cunicolo, sono

state appese al soffitto della cavità. Inoltre, una trappola è stata

collocata anche all’esterno, in prossimità dell'entrata. Ogni mese

le trappole sono state rimosse, controllate e sostituite. Il ricono-

scimento sistematico degli invertebrati catturati è stato effettuato a

livello di Ordine o Sottoclasse, a seconda del gruppo sistematico.

Durante ogni campionamento mensile sono state rilevate le tempe-

rature dell’aria all’esterno e all’interno in corrispondenza di ciascuna

trappola ed è stato effettuato il conteggio degli esemplari di geotri-

tone in attività sulle pareti della cavità. Nel mese di luglio 2002,

il numero delle trappole all’interno del cunicolo è stato aumentato:

una ad ogni metro, in modo da ottenere una stima più accurata della

distribuzione spaziale delle prede nel periodo di massima attività

dei geotritoni, sono pertanto state utilizzate 24 trappole adesive. La

posizione di ogni esemplare di geotritone relativa alla quadrettatura

della cavità è stata annotata su una apposita scheda.

In luglio 2002 l’abbondanza, la struttura e la distribuzione spa-

ziale della popolazione di Speleomantes strinatti sono state stimate

tramite un esperimento di rimozione temporanea, durante il quale

gli animali sono stati rimossi dal loro ambiente in tre occasioni suc-

DISTRIBUZIONE DELLE PREDE DI SPELEOMANTES STRINATII 163

cessive. Ogni individuo catturato è stato misurato con un righello

trasparente, valutando la lunghezza corporea tra l’apice del muso e il

margine posteriore della cloaca. Il peso è stato determinato con due

dinamometri Pesola, uno con portata 5 g e sensibilità 0,1 g, l’altro

con capacità 10 g e sensibilità 0,2 g. Il sesso degli esemplari adulti

è stato riconosciuto in base alla presenza nei maschi di un corpo

ghiandolare mentoniero (LANZA 1959). Poiché le femmine diventano

riproduttive ad una lunghezza corporea superiore ai 58 mm (SALVI-

DIO 1993), gli individui di dimensioni inferiori sono stati considerati

immaturi. Al termine dello studio gli esemplari sono stati liberati

all’interno del loro habitat.

La stima dell'abbondanza numerica della popolazione è stata

effettuata sul totale degli individui catturati in tre successive occasioni,

tramite il programma Capture (WHITE et ali 1982). Le relazioni tra

le temperature e l'abbondanza stagionale di geotritoni e degli inver-

tebrati sono state analizzate tramite il coefficiente di regressione (7).

RISULTATI

Nel corso dello studio sono stati catturati con le trappole adesive

1202 invertebrati: tutti artropodi appartenenti a vari gruppi sistema-

tici. In tutti 1 campionamenti mensili, i Ditteri risultano il gruppo

più numeroso, rappresentando più del 97% del totale (tab. 1).

Tab. 1 - Numero totale di invertebrati catturati per gruppo sistematico e relative

percentuali. Il totale comprende anche gli esemplari catturati nel campio-

namento intensivo di luglio con 24 trappole.

Classe Ordine Numero catture % catture

Chilopodi Litobiomorfi

Aracnidi Araneidi

Insetti Imenotteri

Ditteri

Omotteri

Coleotteri

164 F ONETO & S. SALVIDIO

Per quanto riguarda la distribuzione delle prede lungo la cavità,

Sl osserva una presenza maggiore nei pressi dell’ingresso, a cui fa

seguito una distribuzione piuttosto uniforme nel resto della galleria

(tab. 2). Nel sito di studio, la disponibilità di prede tende ad aumen-

tare fra marzo ed agosto, quindi il totale sembra calare a partire da

settembre tornando verso 1 più bassi valori primaverili (tab. 2).

Tab. 2 - Distribuzione degli invertebrati nel periodo di studio (7 trappole per

mese): * indica la mancanza dei dati a causa di una rimozione della trap-

pola da parte di estranei.

Mese di campionamento

ase |

Zonacampionata] | |

129

agosto

N ITN

N | [N

(CS

—

> —

VI NO Sal VI

> Lena a

(GO) (ee) NI Sal *

Non è emersa nessuna relazione statisticamente significativa tra

le temperature e l'abbondanza degli invertebrati catturati lungo la

cavità (P > 0.25 in tutti 1 casi). Per quanto riguarda invece i geotri-

toni, è stata osservata una relazione significativa con la temperatura

misurata a 4 metri dall’ingresso (7 = 0,78, N = 7, P = 0,037).

Durante il conteggio effettuato con 24 trappole a luglio, sono

stati raccolti 184 esemplari, tutti artropodi. Anche in questo caso il

97% degli esemplari appartiene all’ordine dei Ditteri, confermando

1 risultati ottenuti per l’intero periodo di studio. La disponibilità di

prede lungo la galleria mostra una tendenza a diminuire a partire

dall'ingresso verso la parte più interna (fig. 1).

DISTRIBUZIONE DELLE PREDE DI SPELEOMANTES STRINATII 165

Numero esemplari

(ce)

IE? SATS OES? 4884 94140! 19 4231399444 BSL6AE-781,87 4.982: 21422 123: 24

Metri dall'ingresso

Fig. 1 - Andamento della distribuzione spaziale dei Ditteri (triangolo nero), dei

geotritoni giovani (cerchio bianco) e degli adulti (cerchio nero) all’interno

del sito di studio, nel mese di luglio 2002.

Per quanto riguarda i geotritoni, l'abbondanza di giovani ed

adulti è stata stimata rispettivamente in 39 e 62 individui, per una

popolazione totale valutabile in 102 individui (errore standard 1,8).

Giovani ed adulti presentano una distribuzione diversa sulle pareti

della cavità. Infatti 1 giovani risultano concentrati nei primi 13 metri,

con una drastica diminuzione nella parte più interna della galleria,

mentre gli adulti presentano una distribuzione concentrata nella

zona centrale della galleria, con circa il 53% degli individui (fig. 1).

Confrontando la distribuzione dei predatori con quella delle prede,

non sono stati ottenuti risultati statisticamente significativi né consi-

derando la numerosità (fig. 1) né l'andamento del peso delle singole

classi e dell’intera popolazione (P > 0,05 in tutti 1 casi). Tuttavia se

si tiene conto delle diverse condizioni di luminosità (che si riflettono

sulle variazioni di temperatura e di umidità relativa) si perviene a

risultati più interessanti. Infatti, nella zona buia della galleria (oltre

17 metri circa dall'ingresso), esistono relazioni significative fra la

biomassa delle singole classi di età e la distribuzione delle prede (P

= 0,05 mit tutti 1 eas)

CONCLUSIONI

Benché questo sia da considerare uno studio preliminare, si pos-

sono tuttavia trarre alcune conclusioni generali. Le potenziali prede

166 F ONETO & S. SALVIDIO

dei geotritoni mostrano un netto ciclo stagionale di abbondanza, che

risulta massima nei mesi estivi. Per quanto riguarda la numerosità

dei Ditteri catturati all’interno del sito di studio, si osserva una netta

diminuzione lungo la galleria. I geotritoni giovani colonizzano prin-

cipalmente la parte più esterna della cavità dove si raggruppano e

dove le condizioni ambientali sono più variabili, mentre gli adulti si

concentrano nel primo tratto susseguente alla zona illuminata. Valu-

tando le relazioni esistenti tra i geotritoni e gli invertebrati nell’intera

galleria, non si ottengono correlazioni statisticamente significative, in

quanto l'intensità luminosa appare un fattore importante nel deter-

minare la distribuzione spaziale dei geotritoni, come già evidenziato

da PASTORELLI et alzi (2002).

In conclusione si può ipotizzare che nella Stazione Biospeleolo-

gica, 1 rapporti tra prede e predatori siano influenzati dalla combi-

nazione di vari fattori, fra cui intensità luminosa e umidità relativa

mentre la temperatura sembra giocare un ruolo secondario. Inoltre,

le relazioni tra prede e predatori appaiono più strette nella zona

della galleria dove esiste una maggiore stabilità ambientale. Occor-

rerà in ogni caso attendere di avere a disposizione dati più completi

per valutare in maniera approfondita gli effetti delle interazioni tra

le diverse variabili esaminate.

RINGRAZIAMENTI

Lo studio dei geotritoni è stato condotto con autorizzazione

del Ministero dell’ Ambiente, Servizio Conservazione della Natura

(SCN/2D/2001/378). Si ringrazia Anna Bonardi per la lettura critica

del manoscritto.

BIBLIOGRAFIA

LANZA B., 1959 - Il corpo ghiandolare mentoniero dei “Plethodontidae” (Amphibia,

Caudata) - Monit. zool. ital., Firenze, 67 (1-2):15-53.

LANZA B., Caputo V., NAscETTI G. & BULLINI L., 1995 - Morphologic and genetic

studies on the European plethodontid salamanders: taxonomic inferences (genus

Hydromantes ) - Monogr. Mus. reg. Sc. nat., Torino, 16, 368 pp.

Morist A., 1981 - Osservazioni sulla dieta in natura del geotritone Hydromantes

italicus Dunn (Amphibia, Caudata, Plethodontidae) - Riv. piem. St. nat., Car-

magnola, 2: 79-87.

DISTRIBUZIONE DELLE PREDE DI SPELEOMANTES STRINATII 167

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2002 - Seasonal activity and spatial

distribution of a Speleomantes italicus population in a natural cave - Biota,

Petrovée: 3 (1-2): 119-126.

PastoRINO M.V. & PEDEMONTE S., 1974 - Nuove stazioni di raccolta del geotritone

nell’Oltregiovo genovese - Atti XI Congr. naz. Speleol., Mem. XI Rass. spel.

it., Genova, 2: 81-82.

PASTORINO M.V., SaLvipio S. & Tavano M., 1997 - La stazione biospeleologica

di San Bartolomeo (Savignone, GE) - Atti XVII Congr. naz. Speleol., Castel-

nuovo Garfagnana: 47-50.

SALVIDIO S., 1992 - Diet and food utilization in a rock-face population of Speleo-

mantes ambrosti (Amphibia, Caudata, Plethodontidae) - Vie Milieu, Paris, 42

(1): 35-39.

SALVIDIO S., 1993 - Life history of the European plethodontid salamander Speleo-

mantes ambrosu (Amphibia, Caudata) - Herpet. #., London, 3: 55-59.

SALVIDIO S., LATTES A., Tavano M. & MELODIA F., 1994 - Ecology of a Speleo-

mantes ambrosit population inhabiting an artificial tunnel - Amphibia-Reptilia,

Leiden, 15 (1): 35-45.

WHITE G.C., ANDERSON D.R., BURNHAM K.P. & OTIS D.L., 1982 - Capture-recap-

ture and Removal Methods for Sampling Closed Populations. Los Alamos

National Laboratory 8787 NERP - Los Alamos, New Mexico, 235 pp.

RIASSUNTO

L’abbondanza degli esemplari di Speleomantes strinati e delle potenziali prese

è stata stimata da marzo a settembre 2002, all’interno della Stazione Biospeleologica

di S. Bartolomeo di Besolagno (GE). La frequenza degli invertebrati è stata valutata

utilizzando trappole adesive che sono state appese all’esterno e lungo la cavità ad una

distanza di 4 m l’una dall’altra, fino a 24 m dall’ingresso. Durante il mese di luglio

sono state posizionate 24 trappole, un metro l’una dall’altra, al fine di ottenere dati

più puntuali sulla distribuzione delle prede.

I risultati preliminari mostrano che, degli oltre 1200 invertebrati catturati con

le trappole, circa il 97% è rappresentato da Ditteri. L’abbondanza delle prede varia

nei mesi e decresce sempre dall'esterno verso l’interno. Non sono state trovate cor-

relazioni significative tra abbondanza di geotritoni e di prede lungo l’intera cavità,

ma escludendo il tratto più esterno ed illuminato, si osserva una stretta relazione tra

numero di prede e di predatori.

ABSTRACT

Preliminary data on the distribution of the preys of Speleomantes strinatii

(Aellen) in S. Bartolomeo (GE) Biospeleological Station (Amphibia, Plethodontidae).

The availability of potential prey for the European plethodontid Speleomantes

strinatu was studied, from March to September 2002, in the Biospeleological Sta-

tion of S. Bartolomeo di Besolagno (Genova province, Liguria, NW Italy). Adhe-

sive traps were placed outside and inside the underground environment every four

168 F ONETO & S. SALVIDIO

meters from the entrance, up to 24 meters inside. In July, traps were located every

meter along the cavity, to assess prey availability and distribution during the highest

activity of salamanders. Overall more than 1200 potential preys were caught and

Dipterans constituted the 97% of total catches. Trapped Invertebrates showed sea-

sonal variation in activity inside the study site.

As expected, prey abundance was higher outside and near the entrance, while

it decreased towards the inner part of the cavity. There was no relationship between

prey and salamander abundance along the cavity, but when the external illuminated

zone was excluded from calculations significant statistical correlations were found.

These preliminary results show that the salamander distribution inside underground

sites was probably influenced by the interaction of several factors, such as light

intensity, air humidity together with prey abundance.

169

CHRISTIAN PASTORELLI *, PAOLO LAGHI **

& DINO SCARAVELLI ***

SPACING OF SPELEOMANTES ITALICUS (DUNN, 1923):

APPLICATION OF A GEOGRAPHIC

INFORMATION SYSTEM (G.I.S.)

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

INTRODUCTION

Geographic Information System (G.I.S.) is defined as: «an orga-

nized set of hardwares, softwares and people purposed to the acqui-

sition, management, analysis, and visualization of alphanumeric and

graphic informations referred to a determinate territory» (BALLESTRA

et alu 1996, translated from Italian). In practice G.I.S. allows to

represent determinate kinds of informations (i.e. georeferred data

falling within a class or a physical quantity, that are positioned in a

determinate reference system, usually a Cartesian one, such as UTM

or Gauss-Boaga), showing them in form of maps.

Geographic Information Systems allow to carry out spatial anal-

ysis and manage large amounts of data with sustainable time and

costs and are employed mainly in technological webs management,

urban and territorial planning, and natural sciences (geobotany, fau-

nistic, ecology, etc.) (cf. BALLESTRA et ali 1996), but so far G.I.S.

have been used in herpetology only in few cases (VIGATO et alu

2001; CARAFA & BIoNDI 2002).

This paper reports the results obtained from the first applica-

* Via Cerchia di Sant'Egidio 2205, 47023 Cesena (FC), Italia;

e-mail: pastorellic@libero.it

** Via Bruno Costante Garibaldi 22, 47100 Forlì (FC), Italia;

e-mail: spelerpes@libero.it

*** Associazione Chiroptera Italica, Via Veclezio 10/A, 47100 Forlì (FC), Italia;

e-mail: dinosc@tin.it

170 C. PASTORELLI, P LAGHI & D. SCARAVELLI

tion of G.I.S. in the study of Italian cave salamander Speleomantes

italicus (Dunn, 1923) spacing strategies.

MATERIALS AND METHODS

The study site is a natural cave called «Grotta del Tritone»,

43°53’52” N - 11°58’°06” E, near Bagno di Romagna, (province of

Forlì-Cesena, Italy), already described by PASTORELLI et alii 2002a.

The Speleomantes italicus population gravitating around the cave is

object of a long-term study in order to investigate several natural

history traits, such as population structure, seasonal activity, habi-

tat use and displacement, and behaviour (PASTORELLI et alii 2001,

2002a and 2002b; LAGHI et alti 2005).

The site was visited monthly from January 1999 to December

2000 and during each sample session salamanders were searched for

by two persons inside and outside the cave (close to the entrance)

for about an hour. For each salamander captured, sex, body length

(from the snout tip to the anterior end of the vent), distance from

the entrance and from the cave floor were recorded. Adult salaman-

ders were sexed by means of the observation of exterior secondary

sexual characters -i.e. the presence, in the adult males, of a mental

body gland (LANZA 1959) and enlarged premaxillary teeth- and all

individuals reaching a wider body length than the smallest male

possessing a mental body gland (41 mm) were considered as adults;

as in Speleomantes females reach sexual maturity at a larger size than

males (SALVIDIO 1993), in this study some large subadults were likely

considered as adult females.

Salamanders were photographed to allow individual recogni-

tion by means of comparison of the dorsal patterns (SALVIDIO et

alti 1994; LAGHI et alii 2005) and at the end of each session were

released at their capture site.

A virtual map, integrated in a Cartesian reference system in real

scale, with co-ordinates in meters, was obtained from the longitu-

dinal section of the cave, with the aid of softwares ArcView GIS

version 3.1 and Topol 4.0 (see figs. 1-3 and fig. 4, above). Another

virtual space (see fig. 4, below), representing on the same plane

the cave floor and walls, was created to allow a reliable calculation

of home range size. For the sake of ease, in this latter space cave

SPACING OF SPELEOMANTES ITALICUS {70

floor was assumed to be 2 m wide along the whole extension of the

cavity; actually floor width range from 0.4 to 3.2 m, 2 m being the

average value in the first 25 meters from the entrance.

Data about spacing of S. italicus were integrated in both vir-

tual spaces by software ArcView GIS version 3.1, then processed by

software Animal Movement for Spatial Analyst 2.04 Beta, by means

of kernel (95% and 50%) method, a nonparametric statistical method

for estimating probability densities from a set of points. The result-

ing graphs provide immediate visualization of the probability of

find animals in any one space, by means of a colour scale (RODGERS

& CARR 2002).

Calculation of home range shape and size, by means of the

Minimum Convex Polygon (MCP) model, were also provided by

Animal Movement for Spatial Analyst 2.04 Beta.

RESULTS AND DISCUSSION

During the study period 440 records on the spacing of S. itali-

cus were collected (236 in the year 1999 and 204 in the year 2000).

Some data, which were not included in calculations in the study

by PASTORELLI et alzi (2002a), have been herein taked into account,

therefore sample size is larger than that reported in the previous

paper.

Spatial distribution of salamanders was statistically different

between the two years (Student t = -2.437, df = 438, P = 0.015),

thus data obtained in different years were separately processed.

The number of active salamanders observed in the study site

(mainly on cave walls and floor, rarely under stones or in clefts,

both inside and outside the cave) was related to distance from the

entrance, in function of sex (two records, referring to unsexed spec-

imens, were excluded from calculations) and season. In all cases

G.I.S. produced graphs that allow a quick and easy reading of the

phenomena described by statistical analysis.

Cave salamanders were found at a mean distance from the

entrance of 6.2 + 4.4 m (n = 236) and 7.2 + 4.6 m (n = 204) in

the year 1999 and 2000 respectively. In both years only few sala-

manders (n = 3 in 1999; n = 2 in 2000) were observed outside the

cave close to the entrance, and no captures were made inside the

1474) C. PASTORELLI, P. LAGHI & D. SCARAVELLI

cave beyond 25 meters from the entrance (fig. 1) confirming previ-

ous studies (CIMMARUTA et ali 1999: S. strinatit and S. a. ambrosti;

Morist 1981 and SALvipio et ali 1994: S. strinatit; PASTORELLI et

alti 2001 and 2002a: S. ztalicus).

SH SHEVA AD

UST pa, PPP EN] Ve

SAUNA a, a É

Fig. 1 - Distribution of captures in the year 1999 (above) and 2000 (below). The

colour becomes darker as the estimated probability of salamander presence

increases. 1-1, 2-2, 3-3, and 4-4 indicate where transversal sections (showed

in the original drawing) were taken.

Juveniles were found on average more close to cave entrance

(3.8 = 2.8 m,n = 110 in 1999; 4.2 + 2.7 m, n = 93 in 2000) than

SPACING OF SPELEOMANTES ITALICUS 173

adults (8.3 + 4.4 m, n = 125 in 1999; 9.8 + 4.4 m, n = 110 in 2000)

(fig. 2). These data suggest that also in S. italicus a spatial segrega-

tion between juvenile and adult salamanders, such as that assessed

by SALVIDIO & PASTORINO (2002) in S. strinatit, may occur (cf. also

PASTORELLI et alzi 2002a). No meaningful differences were found

between spatial distributions of males and females in 1999, 2000 and

both years added (Student t, P > 0.05 in all cases), although males

were often found at an higher distance from the entrance than females.

o — n

PU —

ye ——

22 23 24 25 Meters

Fig. 2 - Spatial segregation between juvenile (above) and adult (below) S. italicus

in the year 1999. The colour becomes darker as the estimated probability

of salamander presence increases.

174 C. PASTORELLI, P. LAGHI & D. SCARAVELLI

In summer, when external conditions are prohibitive, cave sala-

manders are usually found at higher distance from the entrance than

in spring and autumn (PASTORELLI et ali 2002a: S. italicus; SALVI-

DIO et ala 1994: S. strinatti; VOESENEK et alii 1987: S. supramontis).

Fig. 3 shows that a similar seasonal spacing pattern occurred in the

studied population in the year 1999. In summer months the ani-

mals were observed at a higher mean distance from the entrance

(7.3 = 4.4 m, n = 45) than in spring (5.5 + 4.2 m, n = 96), and in

autumn (7.0 + 3.8 m, n = 71); in winter, when external environmen-

tal parameters were very similar to internal ones, cave salamanders

were active close to cave entrance, even outside (4.3 + 5.2 m, n =

24) (cf. PASTORELLI et alzi 2002a).

SÌ

= (Baa

8 5

IR L

il x

pene ava

RB È

Fig. 3 - Seasonal spacing of S. italicus in the year 1999; clockwise from the upper

left: spring, summer, winter, and fall. The colour becomes darker as the

estimated probability of salamander presence increases

From January 1999 to August 2000 individual recognition by

means of photographs of dorsal pattern was obtained for 215 speci-

mens (108 immatures, 52 males and 55 females). Home range size,

calculated only for 11 individuals captured at least 4 times, averaged

21.75 + 25.24 mì (range = 1.75-82.26 m°). It goes without saying

that the observed home range represents only a part of the actual

SPACING OF SPELEOMANTES ITALICUS £75

one, this latter being larger, as it extends also in rock interstices.

Fig. 4 shows the home range of specimen n. 71, a female captured

six times from May 1999 to July 2000. Data support LANZA’s (1986)

statement that cave salamanders possess much more vagility than is

usually understood.

25 Meters

left wall

entrance

LANE TTT cal LETT

right wall

1 00 24 8G £ 2 2 1014 4213 14110 16: ty 48. 10 20/21 22:-2324 25. 26027 20 20.50 Meters

Fig. 4 - Home range of the specimen n. 71 (MCP size: 3.93 m?). Above: kernel

graph on the longitudinal section of the cave (the colour becomes darker as

the estimated probability of salamander presence increases); below: MCP

graph on the virtual space representing on the same plane cave walls and

floor.

176 C. PASTORELLI, P LAGHI & D. SCARAVELLI

ACKNOWLEDGEMENTS

We thank Stefano Gellini and Franca Monti for the indispens-

able help provided in data processing.

REFERENCES

BALLESTRA G., BerTOZZI R., BUSCAROLI A., GHERARDI M. & VIANELLO G., 1996

- Applicazione dei sistemi informativi geografici nella valutazione delle modifi-

cazioni ambientali e territoriali - Franco Angeli, Milano, 280 pp.

Carara M. & BionpI M., 2002 - Nuove metodologie d’indagine nello studio popo-

lazionale di Salamandra salamandra gigliolii Eiselt & Lanza, 1956 in un’area

dell'Appennino centrale: risultati preliminari - Riassunti 4° Congr. Naz. Soci-

etas Herpetologica Italica, Ercolano (Napoli), 18-22 giugno 2002: 50.

CIMMARUTA R., FortTI G., NAscETTI G. & BuLLINI L., 1999 - Spatial distribution

and competition in two parapatric sibling species of European plethodontid

salamanders - Ethol., Ecol. & Evol., Firenze, 11: 383-398.

LAGHI P., PASTORELLI C. & SCARAVELLI D., 2005 - Individual pattern recognition of

Speleomantes italicus (Dunn, 1923) (Amphibia, Plethodontidae) - Annali Mus.

Civ. St. nat. G. Doria, Genova, 97: 153-160.

LANZA B., 1959 - II corpo ghiandolare mentoniero dei “Plethodontidae” (Amphibia,

Caudata) - Monit. zool. ital., Firenze, 67 (1-2): 15-53.

LANZA B., 1986 - I Rettili e gli Anfibi (pp. 289-321 & 549-550 + pl. XX-XXI) - In:

CAMARDA I., FaLcHI S. & Nuppa G. (Eds.), L'ambiente naturale in Sardegna

(Elementi di base per la conoscenza e la gestione del territorio) - Carlo Delfino,

Sassari, 557 pp.

Morisi A., 1981 - Osservazioni sulla dieta in natura del geotritone Hydromantes

italicus Dunn (Amphibia, Caudata, Plethodontidae) - Riv. piem. St. nat., Car-

magnola, 2: 79-87. 4

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2001 - Studi preliminari sull’ecologia di

Speleomantes italicus (Dunn, 1923) nell’Appennino tosco-romagnolo (Caudata:

Plethodontidae) - Pianura, Cremona, 13: 347-351.

PASTORELLI C., LacHI P. & SCARAVELLI D., 2002a - Seasonal activity and spatial

distribution of a Speleomantes italicus population in a natural cave - Burota,

Petrovée, 3 (1-2): 119-126.

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2002b - Speleomantes antipredator strat-

egies: a review and new observations - Biota, Petrovée, 3 (1-2): 127-131.

Ropcers A. R. & Carr A. P., 2002 - HRE: The Home Range Extension for

ArcView™ (Beta Test Version 0.9, July 1998) User’s Manual.

SALVIDIO S., 1993 - Life history of the European plethodontid salamander Speleo-

mantes ambrosti (Amphibia, Caudata) - Herpet. 7., London, 3: 55-59.

SALVIDIO S., LATTES A., Tavano M. & MELODIA F., 1994 - Ecology of a Speleo-

mantes ambrosti population inhabiting an artificial tunnel - Amphibia-Reptilia,

Leiden, 15 (1): 35-45.

SALVIDIO S. & PastorINo M. V., 2002 - Spatial segregation in the European

plethodontid Speleomantes strinati in relation to age and sex - Amphibia-

Reptilia, Leiden, 23: 505-510.

SPACING OF SPELEOMANTES ITALICUS 177

VIGATO C., SCALI S. & GuIDALI F., 2001 - Una metodologia per l’individuazione

delle metapopolazioni di anfibi - Pianura, Cremona, 13: 27-29.

VOESENEK L. A. C., VAN Rooy P. T. J. C. & STRIJBoscH H., 1987 - Some auto-

ecological data on the Urodeles of Sardinia - Amphibia-Reptilia, Leiden, 8 (4):

307-314.

ABSTRACE

For two consecutive years Speleomantes italicus spacing were studied with the

aid of a Geographic Information System (G.I.5S.), in a natural cave in northern

Apennines. Individual displacement and spacing patterns with regard to sex classes

and season were analyzed. 'The salamanders are found only the first tract (up to

25 meters from the entrance) of the cave, which is the area providing contempo-

rarily plenty of food and steady environmental conditions. There were no differ-

ences between male and female spatial distributions. Most immature specimens were

observed close to cave entrance, while adults were active mainly in deeper zones.

The occurrence of a spatial segregation between juveniles and adult cave sala-

manders has already been assessed in S. strinati and it is likely to occur also in S.

italicus. Spacing patterns were strongly seasonal, with the highest mean distance

from entrance recorded in summer, and the lowest one in winter. Home range size,

estimated for 11 specimens captured at least four times, ranged from 1.75 to 82.26

m° (mean = 20575 in’):

RIASSUNTO

Uso dello spazio in Speleomantes italicus (Dunn, 1923): applicazione di un

Sistema Geografico Informatizzato (G.I.S.) (Amphibia, Plethodontidae).

Per due anni consecutivi l’uso dello spazio di Speleomantes italicus è stato stu-

diato, con l’aiuto di un Sistema Geografico Informatizzato (G.I.S.), in una cavità

naturale dell’ Appennino Settentrionale. Sono stati analizzati gli spostamenti indi-

viduali e le variazioni nell’uso dello spazio in funzione della stagione e del sesso.

Gli animali frequentano esclusivamente il primo tratto (fino a 25 m dall’entrata)

della cavità, ossia il settore che fornisce sia abbondante cibo sia condizioni ambi-

entali stabili. Non sono state riscontrate differenze significative tra le distribuzioni

spaziali dei maschi e delle femmine. La maggior parte degli individui immaturi sono

stati osservati nelle vicinanze dell’ingresso della cavità, mentre gli adulti frequentano

principalmente zone più profonde.

L'esistenza di una segregazione spaziale tra geotritoni giovani ed adulti è già

stata verificata in S. strinatii ed è verosimile anche per S. italicus. La distribuzione

spaziale dei geotritoni è fortemente condizionata dal ciclo stagionale, con la mas-

sima distanza media dall’ingresso registrata nei mesi estivi e la minima in inverno.

La dimensione dello spazio vitale, stimata per 11 individui catturati almeno quattro

volte, varia tra 1.75 e 82.26 m? (media = 21.75 m?).

| “ Cailnts) = ‘Monit ool. ital. Firenze, 6 (1-2): 48.8 a

= CAMARDA by Faves So& Nuppr Gas), L'ambiente Yukiitate: in Sardi

finta ti base per la conosceniza ¢ la ssi del teritori OTH: |

as ce pinne allabi validi antes i

i "i pila diri raro età -

sò iu sub 199

bt as ab

alan Pb PURE

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179

GIANLUCA FORTI, * ROBERTA CIMMARUTA ** & GIUSEPPE NASCETTI **

BEHAVIOURAL RESPONSES TO SEASONAL VARIATIONS

OF AUTOECOLOGICAL PARAMETERS IN POPULATIONS

OF SPELEOMANTES STRINATII (AELLEN, 1958)

AND S. AMBROSII (LANZA, 1955)

(AMPHIBIA, PLETHODONTIDAE)

ENTRODUCGEION

Plethodontid salamanders are characterized by specific and dis-

tinctive morphological and physiological features, which confine

them to very humid environments and relatively mild temperatures.

However, they are able to respond to adverse environmental condi-

tions (low relative humidity and extreme temperatures), remaining

in suitable underground refuges until conditions improve (JAEGER

1980; BoBKA et alii 1981; FEDER 1983; HarrsTON 1987). The species

belonging to Speleomantes, which is the only genus of the Plethod-

ontid family present in Europe, are general predators which were

long considered to live exclusively in caves, whereas it has been

ascertained that, given favourable conditions in terms of humidity

and temperature, they can also be found in epigean environments,

especially at night (LANZA 1946, 1999; STEFANI 1969; SaLvipio 1991;

LANZA et alii 1995).

The ecological and ethological responses given by Speleomantes

populations to the changes of various environmental parameters have

been the object of a few studies (LANZA et alti 1995; LANZA 1999)

until, recently, a number of research papers have been published

* Museo del Fiore, Piazza G. Fabrizio 17, 01021 Acquapendente (VT), Italia;

e-mail: museo.fiore@tin.it

** Dipartimento di Ecologia e Sviluppo Economico Sostenibile, Università della

Tuscia, Via S. Giovanni Decollato 1, 01100 Viterbo, Italia;

e-mail: cimmaruta@unitus.it & nascetti@unitus.it

180 G. FORTI, R. CIMMARUTA, G. NASCETTI

on the ecology of Speleomantes populations in Italy (this volume).

These studies have provided interesting data regarding population

size and structure and their relationships with environmental param-

eters. There is still some doubt, however, on the interpretation of the

behavioural responses of individuals found in hypogean or epigean

habitat, and on their possible seasonal movements between these two

habitats. We, therefore, decided to investigate the seasonal ecologi-

cal responses given by two populations of S. strinatti and two of S.

ambrosit ambrosti (FORTI et alia 1997; CIMMARUTA et alii 1999).

MATERIALS AND METHODS

The researches were carried out in two sites populated by S.

strinatit (Aellen, 1958) (sites 1 and 2) and two by S. a. ambrosti

(Lanza, 1955) (sites 3 and 4). Sites were selected from populations

already genetically characterized to ensure their correct taxonomic

identification (NASCETTI et alzi 1996; FortI et alti 1998). They

were situated in easily accessible caves, with external rock walls that

could also be inspected without difficulty at night. The location and

main characteristics of the sites are shown in tab. 1. Environmen-

tal parameters of the four sites were regularly analysed from 1990

to 1997 and measurements of temperature (T) and relative humid-

ity (H), both inside (T., H) and outside (T,, H,) the caves, were

taken. Inside the cave, measurements were taken approximately 6-7

metres from the entrance. The availability of potential preys was

also quantified by recording the number of invertebrates inside the

cave either by direct count or, where they were present at high den-

sity, through estimation based on a 1m° surface sample area.

The surface activity of Speleomantes (1.e., specimens active on

walls and floor either inside either outside the cave: N. and N,

respectively) was estimated by direct count. Outside the caves,

counting was carried out over a standard sample area of approxi-

mately 200 m2 around the entrance, starting two hours after sunset,

when salamanders activity is potentially highest. On the basis of its

total length each individual was classified in one of three age classes,

according to DURAND (1970, 1973): I) newborns: juvenile individuals

from hatching to 5-6 months (from 26 to 38 mm); II) juvenes: juve-

nile individuals from 6 months to three years (42 to 75 mm); III)

BEHAVIOURAL RESPONSES TO SEASONAL VARIATIONS 181

adults: individuals older than three years (length greater than 75 mm).

The correlation between the various parameters was extrapo-

lated using the Pearson method.

Table 1 - Geographical location and environmental description of the four studied

sites.

Site Coordinates Height Vegetation Canopy Geological Cave Entrance

m type extent substrate length width (m

S. strinatit

Site nm: di 44°20°16°N 435 mesophilous 100% limestone 35 5.58 es

(Rocca 09°28 01°R

Roncallo)

Site n. 2 44°16°25°N 760 mesophilous 100% ophiolites LOS Dl i

(Baracchino) 09°33’23”E

S. ambrosit

(Monte 09°30°43”E

S. Nicolao)

Site n. 4 44°12°37°N 180 mesophilous 100% limestone 14,5 0,7 x 0,6

(Cassana) 09°5127°E

RESULTS

1) Seasonal activity in epigean and hypogean habitats.

The observations carried out evidenced that all the four studied

populations showed activity both inside and outside the hypogean

part of the site. Moreover, there was a marked seasonal variation in

the number of individuals found inside and outside the cave at each

site, correlated to environmental parameters (figs. 1-4 and tab. 2).

In the S. strinatti population from site 1, surface activity of the

individuals outside the cave (N) was higher in spring and autumn,

the lowest degree of activity being observed in the summer (fig. 1a).

Surface activity in the cave (N) was highest in summer and lowest

in winter, with intermediate levels in spring and autumn (fig. la). At

this site, the internal temperature (T.) of the cave was higher during

the summer but was relatively constant with respect to the outside

temperature (T.) which varied more greatly (fig. 1b). The relative

humidity within the cave (H,) was high and steady whilst the out-

side value (H.) was variable, with summer minimums being directly

related to rainfall in the area (fig. 1c).

182 G. FORTI, R. CIMMARUTA, G. NASCETTI

x 50

S 40

5. 30

D :

= 20

9 lal

Spring Summer Autumn Winter

. (b)

—~ 20

= 10

= 5

Spring Summer Autumn Winter

100

Mean Humidity (%)

a %

Spring Summer Autumn Winter

180

160

140

120

100

20 i

Spring Summer Autumn Winter

Limonia density/sqm

Fig. 1 - Mean values averaged per season of the following parameters recorded

inside (white) and outside (black) the cave from S. strinati site 1: a)

number of specimens (N, and N); b) temperature (T., T.); c) humidity

(H, H,); d) density of Limoma flies (N,,__).

BEHAVIOURAL RESPONSES TO SEASONAL VARIATIONS 183

60 (a)

xe 50

S 40

2. 30

fu 20

0 _|

Spring Summer Autumn Winter

= 15

E 10

i / | }

Spring Summer Autumn Winter

Mean Humidity (%)

aS se

Spring Summer Autumn Winter

200

180 ( d)

= 160

= 140

“a 120

S 100

E 80

= 60

0 |

Spring Summer Autumn Winter

Fig. 2 - Mean values averaged per season of the following parameters recorded

inside (white) and outside (black) the cave from S. strinatii site 2: a)

number of specimens (N. N); b) temperature (T., T.); c) humidity (H,,

H); d) density of Limonia flies AGR

184 G. FORTI, R. CIMMARUTA, G. NASCETTI

Moreover, inside the cave there was a marked presence in

summer of flies (Limonia nubeculosa Meigen) (fig. 1d). These insects

spend the summer in caves and other humid retreats and are actively

preyed upon by the plethodontid salamanders, as can be seen from

analysis of faeces and stomach contents (pers. obs.). As reported in

tab. 2 in this population the number of individuals found inside the

cave (N.) showed a positive correlation with the internal and exter-

nal temperature and flies’ density and a negative correlation with

external humidity. ‘The number of individuals found outside the

cave (IV) showed a positive correlation with the external humidity

and negative correlation with the flies’ density and with both the

internal and external temperature.

A similar seasonal pattern has also been observed in ‘the S. stri-

natu population from site 2 (fig. 2, tab. 2). The number of individu-

als found within the cave (NN) correlates positively with the internal

and external temperature and the flies’ density, whilst the number

of individuals found outside the cave (NN ) correlates positively with

the external humidity.

Table 2 - Correlation coefficients (r) between the number of Speleomantes observa-

tions inside (N.) and outside (N) the cave and the environmental para-

meters recorded (T;: internal temperature; T,: external temperature; H.:

internal humidity; H,: external humidity; N, : density of Limonia flies

within the caves); + (-) positive (negative) significant correlation P<0.05;

++ (--) positive (negative) highly significant correlation P<0.01; +++ (---)

positive (negative) very highly significant correlation P <0.001.

N, N

Site US US US US US US US US US US

poe bis EL. FIL NIE da dA H, BI lim

n. 1 S. strinatii "iaia | Er T sa se a Aa

0.58 0.68 -042 0.67 0:53 9920167 O81 - 30:56

n.2 S. strinatti A £ if sete

0.68 0.62 0.66 0.78

n.3 S. ambrosti _ des Ca de

-0.34 0.52 0.64 0.78

n. 4 SS \ambrosa fr bb stele = ttt ==

0.62 0.541 0.564 -0.35 0.70. -0.440

In the S. ambrosti population from site 3 (fig. 3) we found,

instead, a surface activity of the individuals in the cave (N) which

BEHAVIOURAL RESPONSES TO SEASONAL VARIATIONS 185

60 (a)

we 50

S 40

= 30

Sani

fu 20

0 i a

Spring Summer Autumn Winter

25 (b)

—~ 20

<= 45

(Di

= 10

= 5

0 T "y

Spring Summer Autumn Winter

100

Mean Humidity (%)

an ©

Spring Summer Autumn Winter

2 (d)

Limonia density/sqm

0 — = [es]

Spring Summer Autumn Winter

Fig. 3 - Mean values averaged per season of the following parameters recorded

inside (white) and outside (black) the cave from S. ambrosti site 3: a)

number of specimens (N. and N); b) temperature (T., T.); c) humidity

(H,, H.); d) density of Limonia flies (N, ).

186 G. FORTI, R. CIMMARUTA, G. NASCETTI

is similar to that outside the cave (N), usually higher in spring and

autumn, with the lowest values falling in summer (fig. 3a). At this

site, the internal temperature of the cave (T.) in summer reaches

values higher than those recorded at the other studied sites, and

the external temperature (T) undergoes greater variations (fig. 3b).

The relative humidity inside the cave (H.) is not constant and varies

according to the external values (H ) with lower values in summer

(fig. 3c). Furthermore, in summer, Limonia flies are not present

inside the cave with high numbers (fig. 3d). As shown in tab. 2,

in this population the number of individuals found inside the cave

(N.) correlates positively with the internal and external humidity. It

also correlates negatively with the external temperature, whilst the

number of individuals found outside the cave (N) correlates posi-

tively with the external humidity.

In the S. ambrosit population from site 4 we found a seasonal

pattern similar to that noted for the S. strinati populations from

sites 1 and 2 (fig. 4, tab. 2). In this latter population, the number

of individuals found inside the cave (N.) correlates positively with

the internal and external temperature and with the density of flies,

whilst the number found outside the cave (NN) correlates positively

with the external humidity and pil iti with the flies density and

the external temperature.

2) Observations on the dispersal of individuals.

Individual movements between the cave and the outside envi-

ronments were recorded at site 2 for three subsequent years by

individual toe-clipping of adults, in the frame of an experiment

of artificial syntopy (CIMMARUTA et alu 1999). A female recaptured

for three consecutive seasons provided direct evidence of individu-

als moving repeatedly inside and outside the cave. First caught in

the central part of the cave in November 1992, it was recaptured

and marked again in January 1993 outside the cave, some 25 metres

from the entrance. In September 1993, this specimen was captured

once again in the central part of the cave. Salamanders move from

inside to outside also in short times: a young specimen observed

outside the cave, about 5m from the cave entrance, was inside the

cave the following night. More generally, considerable movements

were observed for several specimens, as far as 80m from the cave

BEHAVIOURAL RESPONSES TO SEASONAL VARIATIONS 187

60 (a)

Frequency %

0 | |

Spring Summer Autumn Winter

Mean Temperature (C)

bi —_ N

Spring Summer Autumn Winter

Mean Humidity (%)

an ow

Spring Summer Autumn Winter

È (d)

Limonia density/sqm

20 È

Spring Summer Autumn Winter

Fig. 4 - Mean values averaged per season of the following parameters recorded

inside (white) and outside (black) the cave from S. ambrosti site 4: a)

number of specimens (N. N); b) temperature (T., T.); c) humidity (H,,

H.); d) density of Limonza flies (N,,_).

188 G. FORTI, R. CIMMARUTA, G. NASCETTI

entrance. Between October 1991 and September 1993, 21 specimens

were observed alternatively inside and outside the cave during dif-

ferent surveys. Individual movements are in the order of tens of

metres per month, with a mean recorded value of 0.5 (+0.2) m/

day.

DISCUSSION AND CONCLUSIONS

All the studied populations revealed a marked seasonal cycle in

their surface activity inside and outside the caves. In all cases such

pattern appear to be closely linked to main environmental param-

eters such as temperature, humidity and availability of trophic

resources (tab. 2). In particular, the data show that the underground

environment may be considered as a retreat, used mainly as a refuge

from adverse climatic conditions. In this sense, retreats are more

or less effective proportionally to their ability to preserve a relative

humidity close to saturation and to provide the necessary density of

invertebrate prey, as in the case of Limonia nubeculosa, summering

in the caves.

‘The comparison of the studied populations revealed a tendency

in the two species to show the same seasonal responses with a bi-

modal frequency. The higher peaks fall in spring and autumn (figs.

1, 2, 4), indicating a direct correlation with external humidity and an

inverse correlation (partial) with both the external temperature and

the availability of prey inside the cave. During the dry season, the

two species also seek humid retreats, in which peaks of activity may

be seen in the summer, involving the whole population (N, figs. 1,

2, 4) and directly correlated to both the internal and external tem-

perature and, in part, to the availability of prey within the cave (tab.

2). The exception represented by the S. ambrosiit population inhab-

iting site 3, suggests that a bi-modal behavioural response may be

observed also inside the caves (NN) if the hypogean retreat is scarcely

efficacious (1.e., if internal conditions do not differ significantly from

the external ones). This site, in fact, presents unfavourable microcli-

matic conditions and is characterised by thermophylous vegetation,

mainly Mediterranean maquis. The summer refuge is, moreover, a

cave with a wide entrance that makes it impossible for a constant

level of humidity to be maintained or for a high summer density of

BEHAVIOURAL RESPONSES TO SEASONAL VARIATIONS 189

flies or other invertebrates to persist within the cave. Such adverse

conditions are not present in the other studied sites, all of which

occur in mesic environments characterised by deciduous woods fur-

nishing thick cover (CIMMARUTA et al. 1999). Also the distribution

of the Speleomantes observed within the caves confirms the use of

such habitats on the basis of their suitability, with the frequency of

individuals decreasing from the entrance and following a “zoning”

pattern according to environmental and trophic parameters (SALVI-

DIO et ala 1994; SaLvipio & PasToRINO 2002; Forti 1998; Cim-

MARUTA et alii 1999; PASTORELLI et alzi 2001; our unpublished data)

The numerical peak observed during summer inside caves was

mainly due to the high abundance of juveniles, which also repre-

sent the population component subject to seasonal influences. The

numerical variations shown by adults should probably not be inter-

preted only as a response to seasonal environmental variations, but

could also be determined by reproductive behaviour causing them

to associate in high density at the beginning of the summer. This

applies especially to the pregnant females, maybe due to eggs laying

which is likely to begin in late autumn (DURAND 1970, 1973; SAL-

VIDIO et alu 1994).

Our data on movements of single specimens showed a different

frequency of individuals observed within and outside the cave in

different seasons. Also, the recapture of the same specimens either

inside either outside the cave confirms that salamanders perform

different behavioural strategies under different environmental condi-

tions. This confirms the existence of a single salamander population

in each site, a portion of which moves daily or seasonally between

the cave and the outside. Finally, our observations support the

already advanced hypothesis that competitive interaction for space,

to be used as a refuge, may exist between S. strinati and S. ambro-

sit when in sympatry (CIMMARUTA et alzi 1999), since these species

share the same general ecological requirements.

ACKNOWLEDGEMENTS

We are grateful to the many people involved in the field survey

and in data analysis, they all provide an invaluable help: Gianni

Amori, Rossella Cianchi, Cristian Di Camillo, Paolo Fabiani, God-

190 G. FORTI, R. CIMMARUTA, G. NASCETTI

frey Hewitt, Marcello Iaconelli, Benedetto Lanza, “il Marietto”,

Andrea Nascetti, Vincenzo Petrarca, Lucia Rovelli, Andrea Ungaro

and Stefano Zoia.

REFERENCES

BosKA M.S., JAEGER R.G. & MacNauGHT D.C., 1981 - Temperature dependent

assimilation efficiences of two species of terrestrial salamanders - Copeia,

Lawrence, 1981: 417-421.

CIMMARUTA R., Forti G., NasceTTI G. & BULLINI L., 1999 - Spatial distribution

and competition in two parapatric sibling species of European plethodontid

salamanders - Ecol., Ethol. & Evol., Firenze, 11: 383-398.

DURAND, J.-P., 1970 - Fortpflanzung und Entwicklung von Hydromantes, dem Héòh-

eaceual Aqua Terra, 7 (4): 42-48.

DURAND, J.-P., 1973 - L’Hydromante. Reproduction et Développement - Compt.

rend. Quatre-vingt-serzième Congr. Nat. Soc. Sav., Sect. Sc., Toulouse, 3: 267-

Ai a i

FEDER M.E., 1983 - Integrating the ecology and physiology of plethodontid sala-

manders - Herpetologica, Emporia, 39: 291-310.

Fort! G., 1998 - Parapatria, competizione ed isolamento riproduttivo in specie

gemelle del genere Hydromantes - Tesi di dottorato di ricerca in Ecologia, XI

Ciclo, Università degli studi di Parma, Anno Accad. 1997-98, 62 pp.

FoRTI G., CIMMARUTA R., NasceTTI G. & BULLINI L., 1997 - Parapatria e com-

petizione in pletodontidi del genere Hydromantes - Atti S. it. E., Parma, 18:

121-124.

Forti G.; CIMMARUTA R., NASscETTI G., LANZA B. & BULLINI L., 1998 - Glaciazioni

del quaternario e microevoluzione delle popolazioni continentali del genere

Hydromantes (Amphibia, Plethodontidae) - Biogeographia, Siena, 19 (1997):

197-211.

HairsTton N.G., 1987 - Community ecology and salamander guilds - Cambridge

Univ. Press, 230 pp.

JAEGER R.G., 1980 - Fluctuations in prey availability and food limitation for a ter-

restrial salamander - Oecologia, Berlin, 44: 335-341.

LANZA B., 1946 - L’Hydromantes Gistel in Toscana e notizie sui suoi costumi

(Amphibia, Caudata, Plethodontidae) - Arch. zool. ital., Napoli, 31: 219-237.

LANZA B., 1999 - Plethodontidae - Lungenlose Salamander (pp. 77-204) - In: Gros-

SENBACHER K. & THIESMEIER B. (Eds.), Handbuch der Reptilien und Amphi-

bien Europas. Band 4/1: Schwanzlurche (Urodela) I. Aula Verlag, Wiesbaden,

408 pp.

Lanza B., Caputo V., Nascetti G. & BuLLINI L., 1995 - Morphologic and gene-

tic studies on the European plethodontid salamanders: taxonomic inferences

(genus Hydromantes) - Monogr. Mus. reg. Sci. nat., Torino, 16, 368 pp.

NASCETTI G., CIMMARUTA R., LANZA B. & BULLINI L., 1996 - Molecular taxonomy

of European Plethodontid Salamanders (Genus Hydromantes) - 7. Herpet., New

Haven, 30 (2): 161-183.

BEHAVIOURAL RESPONSES TO SEASONAL VARIATIONS 191

PASTORELLI C., LAGHI P. & SCARAVELLI D., 2001 - Studi preliminari sull’ecologia di

Speleomantes italicus (Dunn, 1923) nell Appennino tosco-romagnolo (Caudata:

Plethodontidae) - Pianura, Cremona, 13: 347-351.

SALVIDIO S., 1991 - Habitat ed attività stagionale delle popolazioni interstiziali

di Speleomantes ambrosti nell’alta Val Bisagno (Liguria centrale). (Amphibia,

Plethodontidae) - Riv. piem. St. nat., Carmagnola, 12: 69-74.

SALVIDIO S. & PasToRINO M.V., 2002 - Spatial segregation in the European pletho-

dontid Spelomantes strinati in relation to age and sex - Amphibia-Reptilia,

Leiden, 23: 505-510.

SALVIDIO S., Tavano M., LATTES A., MELopia F. & PastorIno M.V., 1994 -

Ecology of a Speleomantes ambrosi population inhabiting an artificial tunnel

- Amphibta-Reptilia, Leiden, 15: 35-45.

STEFANI R., 1969 - La distribuzione geografica e l’evoluzione del geotritone sardo

(Hydromantes genet Schleg.) e del geotritone continentale europeo (Hydromantes

italicus Dunn) - Arch. zool. ital., Napoli, 53 (1968): 207-244.

ABSTRACT

Two populations of Speleomantes strinatii and two of S. ambrosi have been stud-

ied between 1990 and 1997 to determine their ecological and behavioural responses

related to the changes in temperature and humidity. Each studied site presented

a cave and neighbouring stone walls easy to be checked for salamanders presence

or absence. The number of specimens recorded and their behaviour resulted to be

different in different seasons and related to the values of temperature and humidity

and to the availability of prey both within and outside the caves.

The cave was used as a retreat, mainly during the summer, providing favour-

able values of temperature and humidity and prey availability. When external con-

ditions were favourable (spring and autumn, mainly) a large part of the specimens

(both young and adult) moved outside. If the cave is poorly efficacious as a retreat

and is placed in a xeric, less suitable environment there is no difference between the

activity observed within and outside, as in the case of a S. ambrosti population living

in a site with a Mediterranean habitat and a wide-opening small cave.

RIASSUNTO

Risposte comportamentali e variazioni stagionali di parametri autoecologici

in popolazioni di Speleomantes strinatit (Aellen, 1958) e S. ambrosia (Lanza, 1955)

(Amphibia, Plethodontidae).

Le risposte ecologiche e comportamentali che le popolazioni di Speleomantes

attuano in risposta ai cambiamenti di diversi parametri ambientali (soprattutto umi-

dita e temperatura) sono state studiate dal 1990 al 1997 in due siti abitati da S. strz-

natu e in due da S. ambrosti. Nei quattro siti è stato rilevato un ciclo stagionale del

numero di individui attivi, correlato a temperatura, umidità relativa e disponibilità

di risorse trofiche, tanto nella porzione epigea che ipogea (grotta) del sito abitato.

In particolare, la parte ipogea del sito rappresenta un rifugio che viene utiliz-

zato più frequentemente in estate per sfuggire alle condizioni stagionali avverse se

192 G. FORTI, R. CIMMARUTA, G. NASCETTI

mantiene un sufficiente tenore di umidità e disponibilità di insetti predabili. Con

condizioni ambientali favorevoli si assiste allo spostamento all’esterno di almeno

una parte degli individui di tutte le classi d’età, con picchi di attività superficiale

all’esterno in primavera e autunno. Se il rifugio ipogeo a disposizione risulta poco

efficace, come nel caso della popolazione di S. ambrosti localizzata in un ambiente

tipicamente mediterraneo, si osserva un’attività superficiale interna simile a quella

esterna, con un utilizzo del rifugio meno marcato in estate e con picchi di attività

primaverili e autunnali.

GRUPPI E FORME NUOVE DESCRITTI NEL PRESENTE VOLUME

AMPHIBIA

Urodela

Plethodontidae

Speleomantes ambrosit. bianchii Lanza, Cimmaruta,

Forti) Butlins & Nascere mw spinach eae ecee mes 67

CESTODA

Cyclophyllidea

Ne. @ tO ae filed Ave

Distoichometra italica Buriola, Pastorino & Bona, n. sp. . 82

INDICE

Pag.

BuRIOLA E., PastorINo M. V. & Bona F. - Res Ligusticae

CCXLVII. Distoichometra italica n. sp. (Cestoda,

Nematotaeniidae) parassita del geotritone europeo

Speleomantes strinatii (Aellen, 1958) in Liguria

(@08.X1=2005DI X. 0) -etroto 4 Hosbi asl toe. MM 79-97

CasaLI S., Suzzi VALLI A., BUSIGNANI G. & TEDALDI G.

- I costumi arboricoli di Speleomantes italicus (Dunn,

1923) nella Repubblica di San Marino (Amphibia,

Plethaedontrdao) 9532009 BUM eA een 145-152

CIMMARUTA R., Forti G., Lanza B. & NASCETTI G. -

Res Ligusticae CCXLVIII. The effects of Quaternary

glaciations on the genetic structure of Speleomantes

strinatti (Aellen, 1958) (Amphibia, Plethodontidae)

ee ae OR nto ott annie sato tronantà be eanneni oa dai Fa FALLE di 109-121

DELFINO M., RazzeTTI E. & SALVIDIO S. - European Plethodon-

tids: palaeontoiogical data and biogeographical considera-

tioris (Anmbibia) (08 50 OY Le ano se ila 45-58

ForTI G., CimmaruTa R. & NASscETTI G. - Behavioural

responses to seasonal variations of autoecological param-

eters in populations of Speleomantes strinati (Aellen, 1958)

and S. ambrosi (Lanza, 1955) (Amphibia, Plethodontidae)

CES UR Sy ein de ee ee DD 179-192

Forti G., LANZA B., CIMMARUTA R. & NASCETTI G. - An experi-

ment of artificial syntopy ex situ between Speleomantes itali-

cus (Dunn, 1923) and S. ambrosi ambrosiu (Lanza, 1955)

(Amphibia, Plethodontidae) (28X11, 2005). 4.4. iui 123-133

LaAGHI P., PASTORELLI C. & SCARAVELLI D. - Individual pat-

tern recognition of Speleomantes italicus (Dunn, 1923)

(Amphibia, Plethodoitidaes (28 X11, 2005); cia 153-160

LANZA B..- Opening Speech (25.21 1.2008 4.8 4 ides savertierined 19-20

Lanza B. = Prolusione CEDE a a aes oases 17-18

LANZA B., CIMMARUTA R., FoRTI G., BULLINI L. & NASCETTI

G. - Bianchi’s cave salamander, Speleomantes ambrosti

bianchi n. ssp. (Amphibia, Caudata, Plethodontidae)

Corde 0): eine A nck yi er Sa iii

ONETO E & SaLvipio S. - Res Ligusticae CCXLIX. Dati pre-

liminari sulla distribuzione delle prede di Speleomantes

strinatu (Aellen, 1958) nella Stazione Biospeleologica di S.

Bartolomeo (GE) (Amphibia, Plethodontidae) (28.XII.2005).

PASTORELLI C., LAGHI P. & ScARAVELLI D. - Spacing of

Speleomantes italicus (Dunn, 1923): application of a

Geographic Information System (G.I.S.) (Amphibia,

Blethedcntida (76 elle OWS ee ren siii

PASTORINO M. V. - Gruppo “Issel”: ideali e storia (28.XII.2005).

PoGGI R. - La figura di Arturo Issel (1842-1922) (28.XII.2005).

PoGGI R. - Note d’archivio sulla fondazione del Gruppo “Issel”

PN ZOD) RA DIO IE SR ie

RUGGI A., CIMMARUTA R., FortTI G. & NASCETTI G. - Prelimi-

nary study of a hybrid zone between Speleomantes italicus

(Dunn, 1923) and S. ambrosti (Lanza, 1955) on the Apuan

Alps, using RFLP analysis (Amphibia, Plethodontidae)

ERRE bis 2 Lain SEDI. LE

SALVIDIO S., PoGcr R., Doria G. & PasToRINO M.V. - Prefazione

PIRRO See eS ee ay ee PR ORE eee ore

59-77

161-168

169-177

21-30

31-37

39-43

135-144

Uva B. M., SturLa M. & Masini M. A. - Kidney and osmoreg-

ulation in Speleomantes genet (Temminck & Schlegel, 1838)

(Amphibia,.Plethodomtidae) OS X11. 2005) soi ri

REGISTRATO AL TRIBUNALE DI GENOVA AL N. 74 IN DATA 17 giugno 1949

DOTT. ROBERTO POGGI - DIRETTORE RESPONSABILE

Finito di stampare nel mese di dicembre 2005

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I riferimenti bibliografici vanno compilati secondo i seguenti esempi:

GESTRO R., 1924 - Contributo allo studio dei Paussidi della Somalia - Boll. Soc. ent. ital.,

Genova, 56, (2): 17-19. [nel caso di un articolo su un periodico]

BINAGHI G., 1950 - Coleotteri d’Italia. Vita, ambienti, utilità, mezzi di lotta - Ed. Briano,

Genova, 210 pp., 104 figg. [nel caso di un’opera monografica]

Capra EF, 1987 - Italian and European Dermaptera of the museums of Florence and

Milan studied by H. Steinmann (pp. 157-173) - In: Baccetti B. (ed.), Evolutionary Biology of

Orthopteroid Insects, E. Horwood Ltd., Chichester, 612 pp. [nel caso di un capitolo di un

volume]

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