SOMMAIRE

Cl. BIZEAU, Cl. MOREAU, Ph. MICHEL et D. PONCHANT

Microflore fongique de la carposphére de pommes 4 cidre ... el

K.M. ABDEL-GAWAD - Keratinophilic fungi associated with horse

hoofs in Egypt ... "S

F. ESTEVES-RAVENTOS y M. HEYKOOP - Notas micologicas, I.

Hebeloma vaccinum Pon y Hebeloma vaccinum var.

cremeopallidum var. nov. ..... :

J. ORCIVAL et F. LAHBIL - Organisation infrastructurale du

mycélium et des protoplastes de Nectria haematococca (Berk. et

Ber.) Wr. aprés traitement par la cytohélicase …

A. PARGUEY-LEDUC, M.C. JANEX-FAVRE, C. MONTANT -

L'appareil sporophytique et les asques du Tuber melanosporum Vitt.

(Truffe noire du Périgord, Discomycétes) ....

Analyses bibliographiques ........

Instructions aux auteurs

CONTENTS

Cl. BIZEAU, Cl. MOREAU, Ph. MICHEL et D. PONCHANT -

Fungal microflora of the carposphere of cider apples. (In French) 1

K.M. ABDEL-GAWAD - Keratinophilic fungi associated with horse

hoofs in Egypt …

F. ESTEVE-RAVENTOS y M. HEYKOOP - Mycological notes, I.

Hebeloma vaccinum Romagn. and Hebeloma vaccinum var.

cremeopallidum var. nov. (In Spanish) ... m

J. ORCIVAL et F. LAHBIL - Infrastructural organisation of

mycelium and protoplasts from Nectria haematococca (Berk. and

Ber.) Wr. after cytohelicase treatment. (In French) mil

A. PARGUEY-LEDUC, M.C. JANEX-FAVRE, C. MONTANT -

Sporophytic apparatus and asci in Tuber melanosporum Vitt. (black

Perigord truffle, Discomycetes). (In French)

Bibliography ...

Instructions to the authors ....

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIE

MYCOLOGIE

TOME 11 Fascicule 1 1990

Ancienne Revue de Mycologie. Dirigée par Roger HEIM

AWA

[ac DU

T DIRECTEUR SCIENTIFIQUE : Madame J. NICOT

SECRÉTAIRE DE RÉDACTION : Mme M.-C. BOISSELIER. ÉDITEUR : A.D.A.C.

Publié avec le concours du Muséum National d'Histoire Naturelle

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE est indexé par : Biological Abstracts, Current Contents,

Publications bibliographiques du CDST (Pascal).

Bibliothéque Centrale Muséum

2261

Ill

MNHN, Paris.

Source : MNHN, Paris

Cryptogamie, Mycol. 1990, 11 (1): 1-12 1

MICROFLORE FONGIQUE DE LA CARPOSPHERE

DE POMMES Á CIDRE

par Claude BIZEAU, Claude MOREAU,

Philippe MICHEL et Dominique PONCHANT

Laboratoire de Microbiologie Appliquée,

Faculté des Sciences et Techniques,

29287 Brest Cedex, France

RÉSUMÉ - L'inventaire des champignons filamenteux et des levures présents à la

surface de pommes à cidre des variétés "Douce Coetligne" et "Loccart vert" a €

dressé à partir de 3 vergers de Bretagne réguliérement suivis 2.

L'analyse mycologique réalisée sur 8 sites par fruit permet d'établir l'abondance rela-

tive des diverses espèces. 47 champignons filamenteux et 36 levures furent isolés.

Trois espèces apparaissent dominantes: Aureobasidium pullulans, Epicoccum

purpurascens et Cryptococcus laurentii, les autres se regroupent en endémiques

(Alternaria, Cladosporium), erratiques (Mucor, Penicillium) ou rares. Les variations

liées aux cultivars de pommes ou aux conditions externes sont de faible importance.

La flore levurienne de la carposphère susceptible d'intervenir dans la préparation du

cidre, parce qu'insuffisamment représentée, ne semble pas permettre une maîtrise na-

turelle de la fermentation.

ABSTRACT - The list of filamentous fungi and yeasts found at the surface of cider

apples var. “Douce Coetligne” and “Loccart vert” has been drawn up to 3 orchards

from Brittany for two consecutive years. The mycological analyse made on $ points

per fruit has allowed to define the relative abundance of each species. 47 filamentous

fungi and 36 yeasts has been isolated. Three species are dominant: Aureobasidium

pullulans, Epicoccum purpurascens and Cryptococcus laurentii; the others may be la-

belled as endemic (Alternaria, Cladosporium), erratic (Mucor, Penicillium) or un-

common. The variations due to cultivars of apples or to external conditions are of

minor importance. The yeast flora of the carposphere able to act in the cider making

is not sufficiently present to allow a natural control of the fermentive process.

MOTS CLÉS : carposphére, champignons filamenteux, levures, pommes à cidre.

INTRODUCTION

La mycoflore des pommes à couteau a déjà été inventoriée, qu'il s'agis-

Se soit d'un développement superficiel de champignons filamenteux (Moreau

Source : MNHN. Paris

C. BIZEAU et al.

C. & Moreau M., 1960), soit d'accidents de conservation survenus malgré les

soins apportés tant au verger qu'à la cueillette, pendant le conditionnement

ou l'entreposage (Moreau & al., 1965, 1966).

Peu de travaux, par contre, concernent les pommes destinées aux indus-

tries de transformation, à l'exception de ceux orientés vers la recherche de

levures utiles à la fabrication du cidre (Beech & Davehport, 1970) ou, plus

récemment, consacrés aux champignons filamenteux susceptibles d'élaborer

des mycotoxines dangereuses dans l'alimentation (Moreau & al., 1981).

La présente étude vise essentiellement à répertorier l'ensemble de la

microflore fongique de la carposphére et envisager son róle dans la

préparation et la qualité du cidre; elle a porté à la fois sur les champignons

filamenteux et sur les levures des pommes de trois vergers de Bretagne.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Échantillonnage au verger

Les pommes étudiées proviennent de deux vergers du val de Rance

(l'un conduit en basse tige, l'autre en haute tige) et d'un verger du bassin de

Rennes (conduit en basse tige). Il s'agit de plantations en mélange de deux

variétés bretonnes traditionnelles:

- Douce Coetligne, pomme dite “a cidre”, pauvre en acidité, riche en

tannins,

- Loccart vert, dite ”

jus”, riche en acidité, pauvre en tannins.

Dans tous les cas, le sol est couvert de gazon.

Des lots de fruits sont cueillis) tous les 10 jours du 15 septembre au

15 novembre deux années consécutives (1987-1988).

Échantillonnage au laboratoire

Dès leur arrivée au laboratoire, les fruits sont stockés à 4°C dans leur

emballage d'origine.

Trois pommes de chaque échantillon sont retenues 15 jours après la

date de cueillette indiquée.

L'isolement des champignons filamenteux et des levures est réalisé à

partir des zones épidermiques selon le protocole suivant: huit sites de

prélèvements de fragments (d'environ 0,06cm2 chacun) sont définis sur une

() Les échantillons de pommes ont été aimablement fournis par M. J.F. Drilleau,

Directeur de la Station de Recherches cidricoles, INRA, Le Rheu. Qu'il recoive ici

nos remerciements.

Source : MNHN, Paris.

MICROFLORE DE LA CARPOSPHERE DE POMMES A CIDRE p

Figure 1 - Emplacement des prélévements de fragments d'épiderme sur chaque pom-

me en vue de l'isolement des champignons.

Figure 1 - Localization of takings of epidermal samples on each apple for the iso-

lation of fungi.

pomme selon une spirale partant de la cuvette pédonculaire et aboutissant á

l'oeil (Fig. 1).

Pour rechercher les champignons filamen:eux, chaque fragment est

déposé en boite de Pétri sur un milieu gélosé de malt 2% complémenté en

extrait de levures. Après l'incubation à 25"C, l'examen des boites est réalisé

à plusieurs reprises tant pour purifier que pour identifier les espèces.

Pour l'isolement des levures, chaque fragment (prélevé tout à côté du

fragment utilisé pour les champignons filamenteux) est lavé à cinq reprises

avec de l'eau physiologique stérile (2ml) en agitant à l'appareil Vortex. La

suspension obtenue est étalée sur le milieu d'isolement (extrait de levures

0,5%, glucose 1%, gélose 1,5%, pénicilline 100 U/ml, streptomycine 100

U/ml), à raison de 0,Iml par boite de Pétri. Aprés incubation à 25°C, les

colonies développées sont dénombrées, examinées au microscope et isolées

pour détermination ultérieure. Nous avons contrólé que les lavages

supplémentaires avec ou sans détergent n'amenaient aucune amélioration du

procédé.

On remarquera la similitude de ce dispositif avec ceux utilisés par les

écologistes étudiant la végétation de divers écosystèmes (Gounot, 1969); il

Source : MNHN, Paris

4 C. BIZEAU et al.

peut étre considéré comme un prélevement en ligne et traité statistiquement

comme tel.

RÉSULTATS

Inventaire des espéces isolées

Nous avons obtenu prés de 1.500 isolats représentant 47 espèces

différentes de champignons filamenteux et 36 espèces de levures. La liste de

ces champignons figure aux Tableaux 1 et 2.

Tableau 1 - Inventaire des champignons filamenteux isolés de la carposphère des

pommes à cidre. La nomenclature suivie est celle de la "List of cultures” 31e

édit. du C.B.S. (1987).

Table | - List of filamentous fungi isolated from the carposphere of cider apples. The

nomenclature used is that of the “List of cultures” 31st edit., C.B.S. (1987).

Acremonium sp. Penicillium canescens Sopp

Alternaria alternata (Fr.) Keissler Penicillium corylophilum Dierckx

Alternaria tenuissima (Kunge) Wiltshire Penicillium expansum Link

Alternaria sp. Penicillium funiculosum Thom

Arthrinium phaeospermum (Corda) Penicillium janthinellum Biourge

M.B. Ellis Penicillium olsonii Bain. et Sartory

Ascochyta piricola Sacc. Penicillium oxalicum Currie et Thom

Aspergillus flavus Link Penicillium paxilli Bain.

Botrytis cinerea Pers. Penicillium purpurescens (Sopp)

Chaetophoma sp. Raper et Thom

Cladosporium cladosporioides (Fres.) Penicillium thomii Maire

de Vries Penicillium sp. (série fellutana)

Cladosporium herbarwn (Pers.) Link Penicillium sp. (séric glabra)

Cladosporium macrocarpum Preuss Penicillium sp. (série miniolutea)

Cladosporium sphaerospermum Penzig — — Penicillium sp. (série oxalica)

Diaporthe perniciosa El. et Em. Marchal Phoma glomerata (Corda) Wollenw.

(anam.: Asposphaeria pomi Sacc. et et Hochapfel

Schulz.) Phoma sp.

Epicoccum purpurascens Ehrenb. Sphaeronaema sp.

Fusarium avenaceum (Corda) Sa Rhizopus stolonifer (Ehrenb.) Vuill.

Fusarium culmorum (W.G. Smith) Sace. — Sporormia minima Auersw.

Fusarium graminearum Schwabe Trichoderma harzianum Rifai

Fusarium oxysporum Schlecht. Trichothecium roseum (Pers.) Link

Fusarium verticillioides (Sacc.) Nirenberg | Ulocladium consortiale (Thüm) Simmons

Mucor hiemalis Wehmer Verticillium dahliae Kleb.

Mucor racemosus Fres. Mycélium stérile

Nigrospora oryzae (Berk. et Br.) Petch

Source : MNHN. Paris

MICROFLORE DE LA CARPOSPHERE DE POMMES A CIDRE 5

Tableau 2 - Inventaire des levures isolées de la carposphère de pommes à cidre. La

nomenclature suivie est celle de Barnett & al. (1983).

Table 2 - List of yeasts isolated from the carposphere of cider apples. The nomen-

clature used is that of Barnett & al. (1983).

Levures “rouges”

ptococeus hungaricus (Zsolt) Phaff et Fell

Cryptococcus podzolicus (Bableva et Reshetova) Golubev

Metschnikowia pulcherrima Pitt et Miller

Rhodosporidium infirmo-miniatum Fell et al.

Rhodotorula acheniorum (Buhagiar et Barnett) Rodr. Miranda

Rhodotorula glutinis (Frs.) Harrison

Rhodotorula minuta (Saito) Harrison

Rhodotorula pallida Lodder

Rhodotorula pilimanae Hedrick et Burke

Sporidiobolus salmonicolor Fell et Statzell Tallman

Sporobolomyces puniceus (Komagata et Nakase) Ahearn et Yarrow

Sporobolomyces roseus Kluyver et van Niel

Levures “blanches”

Arthroascus javanensis (Klócker) v. Arx

Candida baccarum (Buhagiar) Meyer et Yarrow

Candida cariosilignicola Lee er Komagata

Candida fragariarum (Barnett et Buhagiar) Meyer et Yarrow

Cryptococcus albidus (Saito) Skinner

Cryptococcus flavus (Saito) Phaff et Fell

Cryptococcus humicola (Daszewska) Golubev

Cryptococcus laurentii (Kuff.) Skinner

Cryptococcus terreus di Menna

Debaryomyces hansenii (Zopf) Lodder et Kreger van Rij

Filobasidiella neoformans Kwon-Chung

Hanseniaspora uvarum (Niehaus) Shehata et al.

Hansenula anomala (Hansen) H. et P. Sydow

Hansenula subpelliculosa Bedford

Pichia guillermondii Wickerham

Pichia halophila Shifrine et Phaff

Pichia membranaefaciens Hansen

Pichia salictaria Phaff et al.

Trichosporon beigelii (Küchenmeister et Rabenh.) Vuillemin

Trichosporon pullulans (Lindner) Diddens et Lodder

Williopsis saturnus (Kloecker) Zender

Levures "noires

Aureobasidium pullulans (de Bary) Arnaud

espèce non identifiée I

espèce non identifiée 11

Dans cette liste, les champignons polymorphes communément désignés

sous le vocable levures noires” ont été répertoriés avec les levures, étant le

plus souvent isolés en même temps qu'elles. L'espèce Aureobasidium pullulans

y est la plus fréquente et la plus abondante; deux autres espèces

(mentionnées I et II) n’ont pu être identifiées: elle étaient peu fréquentes,

Source : MNHN. Paris

6 C. BIZEAU et al.

Champignons filamenteux

20 40 60 80 9,

Levures

Source : MNHN, Paris

MICROFLORE DE LA CARPOSPHERE DE POMMES A CIDRE A

caractérisées par la production d'un exopigment noir diffusant dans le mi-

lieu gélosé et leur maintien en culture n'a pu étre obtenu.

Signalons en outre que deux levures, peu fréquentes, n'ont pu étre

rattachées aux espéces décrites dans l'ouvrage de Barnett & al. (1983): leur

auxanogramme est celui de Cryptococcus albidus mais l'une forme des

arthrospores, l'autre des cellules trés allongées.

Abondance relative des diverses espéces

La figure 2 permet une analyse rationnelle de l'abondance relative des

diverses espèces. Le graphique du haut se rapporte aux champignons

filamenteux, celui du bas aux levures. A chaque espéce mise en évidence cor-

respond un emplacement défini:

- en abscisses, par le pourcentage de pommes à partir desquelles

l'espèce est isolée,

- en ordonnées, par le pourcentage moyen de sites par pomme dans les-

quels l'espèce est isolée.

On peut distinguer quatre groupes de champignons.

1) Les espèces “dominantes”, présentes sur la plupart des fruits et dans

la plupart des prélèvements de chaque pomme: Aureobasidium pullulans,

Epicoccum purpurascens et Cryptococcus laurentii.

Figure 2 - Abondance relative des principales espéces fongiques mises en évidenc

Abscisses = pourcentage de pommes à partir desquelles l'espèce a été isolée.

Ordonnées = pourcentage moyen de sites par pomme dans lesquels l'espèce a

été isolée.

En haut: champignons filamenteux (A = Alternaria alternata, B = Botrytis

cinerea, C = Cladosporium cladosporioides, E = Epicoccum purpurascens, F

= Fusarium (toutes espèces confondues), M = Mucor hiemalis, P =

Penicillium (toutes espèces confondues), Q = P. funiculosum, R = P.

expansum). En bas: levures (A = Aureobasidium pullulans, B = Candida

baccarum, C = C. cariosilignicola, D = Cryptococcus albidus, E = C.

laurentii, F = C. podzolicus, G = Debaryomyces hansenii, H = Hanseniaspora

uvarum, I levure noire 1, J = Pichia halophila, K Metschnikowia

pulcherrima, L = Rhodotorula glutinis, M = R. minuta, N = Sporobolomyces

puniceus, O = S. roseus, P = Sporodiobolus salmonicolor, Q = Williopsis

Saturnus).

Figure 2 - Relative abundance of the main fungal species. X axis — percentage of

apples from which the species has been isolated. Y axis — mean percentage of

localization on apples from which the species has been isolated.

Upper diagram: filamentous fungi, lower diagram: yeasts.

Source : MNHN, Paris.

8 C. BIZEAU et al.

2) Des espéces qu'on peut qualifier d’’endémiques”, isolées d’un grand

nombre de fruits, mais sur peu de sites par pomme; tel est le cas de

Alternaria alternata, Cladosporium cladosporioides.

3) Des espéces “erratiques” présentes en forte densité sur quelques

échantillons; ce sont par exemple des espéces à thalles filamenteux étendus,

comme Mucor hiemalis, Penicillium expansum ou des espéces n'apparaissant

que ponctuellement dans un verger.

4) Des espèces “rares”; elles ne se développent que sporadiquement sur

un petit nombre de pommes. C'est le cas des espéces mentionnées dans la

partie gauche et basse des graphiques, mais encore de toutes celles qui n'ont

pas été figurées.

Influence de la variété de pommes et du verger

Les différences entre les populations fongiques isolées des deu

cultivars de pommiers étudiés ne sont guére significatives. Tout au plu

avons-nous constaté que “Douce Coetligne^ héberge un peu plus :

Cladosporium cladosporioides que "Loccart vert; c'est d'ailleurs une varie!

de moins bonne conservation et sensible aux pourritures lenticellaires.

L'influence des pratiques culturales (conduites en basse tige ou en ha

te tige) apparait négligeable pour les espéces dominantes; elle ne se maniles

te que pour quelques espéces erratiques Ou rares.

Dynamique des populations fongiques en fonction de l'année et de la date d

récolte

La comparaison des résultats acquis en 1988 avec ceux de l'annc

précédente ne fait pas apparaitre de différences importantes (Figs 3). On

peut noter:

1) pour les champignons filamenteux :

- une légére augmentation de l' Epicoccum purpurascens, du Clad

sporium cladosporioides et des Penicillium,

- une constance dans les populations d' Alternaria (avec cependant un

peu plus d’ 4. tenuissima en 1987), de Botrytis cinerea et des Mucor,

- une diminution nette des Fusarium,

- là disparition complete en 1988 de I’ Acremonium sp. et du Rhizopus

stolonifer; ces espèces, assez fréquentes en septembre 1987, l'étaient beaucoup

moins plus tard;

2) pour les levures :

^o E i $

- une légère augmentation de la plupart des levures rouges mais, pa

contre, une forte diminution du Metschnikowia pulcherrima,

Source : MNHN. Paris

MICROFLORE DE LA CARPOSPHERE DE POMMES A CIDRE 9

1987

1988 |

D PENSÉES ARE DEIN EEUU

A a IA DRE

DEAS MM E e ef 258 &

D DES EE fe ogee v

D M E Oh P DIN S

& 3 CI EE.

E ES 8

Figure 3 - Comparaison: de l'abondance relative des principales espèces isolées en

1987 et en 1988.

Figure 3 - Comparison of the relative abundance of the main species isolated in 1987

and 1988.

- un faible accroissement des Cryptococcus albidus et C. laurentii,

- une très légere diminution de I’ Hanseniaspora uvarum,

- une constance de I’ Aureobasidium pullulans.

Les récoltes de pommes soumises à notre examen se sont échelonnées

du 15 septembre au 15 novembre.

La population totale de champignons filamenteux, reflétée par le nom-

bre d'isolats obtenus du début à la fin de la campagne de récolte, est à peu

prés constante quel que soit le verger concerné (environ 130 isolats pour 100

sites étudiés). Cependant, un examen attentif permet d'observer une tendan-

ce à l'augmentation pour les Fusarium du groupe roseum et les Penicillium

tandis que les Mucor sont en diminution.

En ce qui concerne les levures, malgré certaines fluctuations d'un

échantillon à l'autre, on peut confirmer les observations de Last & Price

(1969) relatives à la phyllosphére: la fin de l'été et l'automne sont des

Source : MNHN. Paris

10 C. BIZEAU et al.

époques oü la population totale diminue; on dénombre 7.000 + 2.000 cellu-

les de levures par cm2 d’épiderme en septembre et seulement 1.500 + 100, en

novembre.

Tandis que l'année 1987 était marquée par une diminution relative (en

proportion par rapport aux autres espéces), de septembre à novembre, de l^

Aureobasidium pullulans et du. Metschnikowia pulcherrima (Bizeau & al., 1989)

en 1988 on note surtout une augmentation relative des levures rouges et des

Cryptococcus.

DISCUSSION ET CONCLUSION

La carposphére des pommes à cidre étudiées comporte de nombreuses

espéces fongiques. Trois d'entre elles sont largement dominantes:

Aureobasidium pullulans, Epicoccum purpurascens et Cryptococcus laurentii.

Les autres espèces, beaucoup moins représentées, appartiennent essen-

tiellement aux genres Alternaria, Cladosporium, Fusarium et Penicillium d'une

part, aux Cryptococcus et genres voisins ainsi qu'au groupe des levures “rou-

ges” Rhodotorula et Sporidiobolus d’autre part.

Il s'agit de champignons dont les organes de dispersion sont déposés à

la surface des fruits au gré des vents ou des eaux de ruissellement et, pour la

plupart, ils sont communs au niveau de la phyllosphére (Davenport, 1976;

Fokkema & van den Heuvel, 1986).

Les variations observées au cours de deux campagnes fruitiéres d'un

verger à l'autre ou en fonction des conditions culturales présentent une fai-

ble amplitude. Les deux variétés de fruits. possédent des structures superfi-

cielles très proches comparées à celles des feuilles de végétaux variés, Les

conditions climatiques (notamment l'humidité et la pollution

atmosphérique) accusées de jouer un rôle important dans la phyllosphère

(Dowding, 1986) n'ont pas ici marqué de différences significatives. Il en est

de même des traitements pesticides éventuels dont le rôle mériterait des ob-

servations plus précises.

Parmi les champignons filamenteux détectés dans la carposphère, figu-

rent des agents actifs d'altération des fruits (Penicillium expansum, Botrytis

cinerea, Fusarium variés, Mucorales): ils y végétent et leur mycélium est prét

á envahir les pommes á la moindre blessure ou meurtrissure, voire dés que

S'amorcera la sénescence (Moreau & al, 1981). Plusieurs espéces sont

Téputées aptes à élaborer des mycotoxines (patuline du P. expansum,

trichothécènes et autres métabolites des Fusarium) et présentent un risque de

pollution des jus de fruits; ce risque peut d’ailleurs être modulé par la fer-

mentation.

Parmi les levures mises en évidence, il est étonnant de ne rencontrer

que trés peu d'espéces utiles aux industries de transformation des pommes.

Source : MNHN, Paris

MICROFLORE DE LA CARPOSPHERE DE POMMES A CIDRE 11

Par exemple, aucune souche de Saccharomyces n'est présente. Hansenula

anomala, Pichia guilliermondii et Pichia membranaefaciens ne sont que très

peu représentées. Debaryomyces hansenii et Williopsis saturnus qui peuvent

exister dans le jus de pomme (Michel & al., 1988) sont un peu plus

fréquentes mais appartiennent encore au groupe des levures rares. Seul, le

Metschnikowia pulcherrima, quelque peu représenté ici, est apte à faire fer-

menter le glucose; il se maintient quelque temps dans le jus de pomme en

fermentation. Signalons que nous avons isolé I Hanseniaspora uvarum de la

carposphère des pommes examinées; or c'est une espèce voisine, l H.

valbyensis, qui intervient dans la préparation du cidre (Michel & al., 1988).

On peut ainsi affirmer que la mycoflore de fermentation nécessaire à la

préparation. du cidre n'est vraiment pas naturellement présente sur

l'épiderme des pommes, contrairement à ce qui se passe dans le cas du raisin

(Belin & Henry, 1972). Pour assurer une bonne régularité dans la qualité du

cidre, pour obtenir d'agréables caractères organoleptiques liés à une asso-

ciation de composés volatils élaborés par plusieurs espèces de levures, on

peut sans doute tenter de favoriser le développement des espèces déjà

spontanėment présentes sur les fruits. Cela paraît hasardeux étant donné la

faible quantité d'espèces initiatrices de fermentations intéressantes recensées.

Il semble plus judicieux d'ensemencer le moút de pommes par des levures

présélectionnées au laboratoire: ainsi sera mieux maîtrisée la fermentation.

La mycoflore de la carposphère des pommes à cidre n'est cependant

pas sans intérêt. Par exemple, l Aureobasidium pullulans, assez abondant

dans nos isolements, permet de valoriser les déchets de zestes d'orange en

produisant de la polygalacturonase (Petruccioli & al., 1989); ce même cham-

pignon élabore aussi de la glucoamylase (Frederici & al., 1989). On pourrait

tenter d'utiliser de telles enzymes dans des processus de dégradation de

polymères ou d'oxydation dont le rôle est primordial dans l'extraction et la

clarification des jus de pomme. Ainsi, même si la microflore fongique

spontanée de la carposphère des pommes à cidre semble incapable, à elle

seule, d'assurer la préparation rationnelle d'une boisson fermentée, elle pour-

rait apporter divers éléments utiles et faciliter certaines étapes de cette fabri-

cation.

BIBLIOGRAPHIE

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KERATINOPHILIC FUNGI ASSOCIATED

WITH HORSE HOOFS IN EGYPT

Khyria M. ABDEL-GAWAD

Botany Department, Faculty of Science,

Assiut University, Assiut, Egypt.

ABSTRACT - The frequency of occurrence of keratinophilic fungi in 26 samples of

hoofs (26 horses) collected from different localities at Assiut governorate were deter-

mined by using the soil plate technique. Twenty species which belong to 14 genera

were collected: Trichophyton equinum was the most prevalent, Chrysosporium tropi-

cum was isolated in moderate frequency, but in low frequencies keratinophilic and

several species of non-keratinophilic fungi were isolated, At 45°C, on YPSs medium,

16 species belonging to 15 genera of thermophilic and thermotolerant fungi were iso-

lated from 60 hoof samples: Aspergillus was the genus most commonly recovered

Among the true thermophilic fungal species, Talaromyces thermophilus, Malbranchea

sulfurea and Thermomyces laguninosus occurred in low incidence. Several species of

thermophilic and thermotolerant fungi were of rare occurrence.

RESUME - 20 espéces (14 genres) de champignons Kératinophiles ont été isolées sur

26 sabots de cheval provenant de différentes localités (Governorat d'Assiut)

Trichophyton equinum est l'espèce la plus fréquente, suivie par Chrysosporiwn

tropicum. A 45°C, sur milieu YPSs, 16 espèces (15 genres) de champignons

thermophiles et thermotolérants ont été isolées à partir de 60 échantillons de sabots

de cheval: Aspergillus est le genre le plus fréquent. Parmi les espèces thermophiles

vraies, Talaromyces thermophilus, Malbranchea sulfurea et Thermomyces lanuginosus

ont une faible fréquence.

KEY WORDS : keratinophilic fungi, thermophilic fungi, thermotolerant fungi,

horse hoofs.

INTRODUCTION

The occurrence of dermatophytes and other keratinophilic fungi from

animal hoofs has not been examined extensively although they are known to

occur from the hair or skin of mammals (Ajello, 1959; Otcenasek & Dvorak,

1962; Rees, 1967; Scott & al., 1980; Aho, 1983; Marsella & al., 1985; Kuttin

& al., 1986) and in Egypt (Bagy & Abdel-Hafez, 1985; Bagy, 1986). Others

Source : MNHN. Paris

14 K.M. ABDEL-GAWAD

studies have been performed on ringworm and horses infected by dermato-

phytes (de Vroey & al., 1983; Aho & Soveri, 1984; Aho & Skutnabb, 1984;

Connole & Pascoe, 1984; Weiss & al., 1984; Elmula & Idris, 1985; Vrazal &

al., 1985). Hence the aim of this investigation is to study the incidence of

these fungi on horse hoofs.

MATERIALS AND METHODS

Twenty-six hoof samples from 26 horses were collected from different

localities at Assiut governorate. These samples were placed in clean plastic

bags and transferred immediately to the laboratory. The hoof samples were

dissected into small pieces and 5 pieces from each sample were placed in 5

sterilized Petri dishes with double sterilized soil (autoclaving at 121%C for 30

min.) moistened with sterile distilled water, remoistened whenever necessary,

and incubated at 26"C for up to 8 weeks. The moulds which appeared on

the baits were transferred to the surface of Sabouraud's dextrose agar medi-

um (Moss & McQuown, 1969) supplemented with 40 ug/ml streptomycin, 20

units of Penicillin/ml (SSA) and 0.05% cycloheximide (Actidione). The

plates were incubated at 28°C for 2 weeks and the growing fungi were exam-

ined, isolated and identified.

To examine thermophilic fungi, 60 hoof samples were used with the

same method of soil plate technique, but plates were incubated at 45°C and

medium YPSs was used for isolation (g/l: water tap 1/4, distilled 3/4; yeast

extract, 4.0; K3 HPO4, 1.0; MgSO4.7 H;O, 0.5; soluble starch, 12.0; agar,

20.0. Rose bengal (66 ppm) was added as a bacteriostatic agent (Smith &

Dawson, 1944). Eight plates were used for each sample and the plates were

examined after 7 days of incubation at 45°C. The developing fungi were

identified and counted

RESULTS AND DISCUSSION

Twenty species belonging to 14 genera were collected from horse hoofs

(Tab. 1). Trichophyton equinum was the most common species on the horse

hoofs (57.7% of the samples). Trichophyton equinum was previously reported

as a cause of tinea corporis in man and a cause of ringworm in animals,

particularly in horses. Colony appeared to be white and fluffy but later vel-

vety with central folding and cream to tan in colour. Reverse is yellow to

reddish brown. Macroaleuriospores are rare and they are slightly clavate,

smooth and thin-walled, 3-4 celled. — Microaleuriospores are abundant,

slightly clavate to elongate, or nearly spherical, single-celled and either ses-

sile or borne on short, delicate conidiophores. Chlamydospores are abun-

dant in old cultures. It was also isolated from horses with ringworm by Vra-

zal & al. (1985) and studied on dermatophytoses in horses by Garcia & al.

(1981), Aho & Soveri (1984) and Zakopal (1985).

Source : MNHN. Paris

KERATINOPHILIC FUNGI IN EGYPT 15

Table 1: Numbers of cases of isolation (NCI out of 26 samples) and percentage

counts (%) of various genera and species recovered from horse hoofs on

Sabouraud’s medium at 25°C.

Tableau 1: Genres et espéces de champignons isolés à partir de 26 échantillons de sa-

bots de cheval, sur milieu Sabouraud à 25°C.

Genera and species NCL| % | OR.

Trichophyton equinum (Matruchot & Dassonville) Goedelst | 15 | 577 | H

Chrysosporium tropicum Carmichael u |423| M

C. keratinophilum (Frey) Carmichael 4 | 154] 7

C. georgii (Varsavsky & Ajello) Van Oorshot T SLT E

C. merdarium (Link ex Grev.) Carmichael 1 3.9 R

C. pannicola (Corda) Van Oorschot et Stalpers TEE ER

Myceliophthora vellerea (Sacc. & Speg.) ell ge || aS

Geotrichum candidum Link ex Leman lar

Aspergillus flavus Link ex Fries er dise | os

A. terreus Thom By ya lit ak

4. sydowi (Bainier et Sartory) Thom et Church Teen | eR

Acremonium sp. TEE EIS SR E

Fusarium solani (Mart.) Sacc. 208 Pi RE

Trichothecium roseum Link 2, 7.7 R

Alternaria alternata (Fr.) Keissler 1 | 39 cR

Cladosporium herbarum (Pers.) Link ex Fr. SA ER

Mucor sp. 1 |39 | Rk

Penicillium chrysogenum Thom wales oa ees

Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson TUNI ES

Scopulariopsis brevicaulis (Saccardo) Bainier 1 | 39-7 *R

Yeast-like SES ETT INED

moderate

rare occur-

O.R, = occurrence remarks: H =

occurrence, between 6-12; L

rence, between 1-2.

high occurrence, between 13-2

5 as

low occurrence, between

Chrysosporium tropicum was the second most frequent fungal species

(42.3% of the samples). It was also isolated by Bagy & Abdel-Hafez (1985)

from camel and goat hairs and from dog, donkey and cow hairs (Bagy,

1986). It was also isolated from mammals by Rees (1967), Moraes & al.

(1967) and Gugnani & al. (1975).

A. flavus was the third dominant species (19.2% of the samples). It

was also isolated by Bagy & Abdel-Hafez (1985) and Bagy (1986). Chrysospo-

rium. keratinophilum and Acremonium sp. were the fourth common species

(15.4% of the samples). C. keratinophilum was the most common species on

the hairs of goat and camel (Bagy & Abdel-Hafez, 1985) and was also found

on dog, donkey and cow hairs (Bagy, 1986). It was isolated frum mammals

by Otcenasek & Dvorak (1962), Hoffman & al. (1970) and Gugnani & al.

(1975). Acremonium sp. was also isolated by Filipello Marchisio (1986) from

children's sandpits.

Source : MNHN. Paris

16 K.M. ABDEL-GAWAD

Among the group of Chrysosporium-like fungi the species isolated from

the horse hoofs are the same mostly recovered from soils by Guarro & al.

(1981) and Marsella & Mercantini (1986) and from Egyptian soils baited

with different keratinaceous materials. Abdel-Fattah & al. (1982) showed

that C. indicum, C. tropicum and C. keratinophilum were common in Egyp-

tian soil baited with human hait, animal hair or pigeon feathers. Also, Ma-

ghazy (1983) isolated C. tropicum, C. keratinophilum, C. indicum, C. pannicola

and C. queenslandicum from Egyptian soils baited with human hair, cow and

buffalo hair and sheep wool. Also they were isolated from feathers of birds

by Otcenasek & al. (1967), Sur & Ghosh (1979), and in Egypt, Bagy (1982)

isolated Chrysosporium species from chicken's and wild sparrow's feathers

and their nests.

Myceliophthora vellerea ( Chrysosporium asperatum) isolated from horse

hoofs, was commonly recovered in soil by Caretta & al. (1977). Geotrichum

candidum was also isolated by Zaror (1979) which cause human nails in-

fection. Yeasts, also isolated by Rippon (1982), and diverse filamentous fun-

gi are referred collectively as onchomycosis.

Most of the other fungi recovered from the horse hoofs are common

soil fungi in Egypt, frequently isolated by Moubasher and his collaborators

on Czapek’s agar.

These keratinophilic fungi which concentrated in the superficial layers

of soil may become hoofs saprophytic or infections. The dispersal of these

fungi in the air and incidence on animal skin or hair may cause infection;

for example Trichophyton equinum which cause ringworm of horses was iso-

lated by several authors; it was also isolated from the horse hoofs in this in-

vestigation,

At 45°C, 16 species belonging to 15 genera of thermophilic and ther-

motolerant fungi were isolated from the hoof samples (Tab. 2).

Aspergillus was the genus most commonly recovered (83% of total

samples). Of the three Aspergillus species, A. fumigatus was of high incidence

(72%) while A. nidulans was of low incidence (20% of the samples).

Among the true thermophilic fungal species, Talaromyces thermophilus,

Malbranchea sulfurea and Thermomyces lanuginosus occurred in low incidence

(21, 20 and 11% of total samples respectively).

Hyphae of Malbranchea sulfurea were colorless at first, later yellow,

1.5-4.5um in diameter, the branches arising at right angles to the supporting

hyphae, at first nonseptate, later becoming regularly septate and forming

blocklike cells from the apex toward the base with thick-walled spores sepa-

rated by thin-walled, sterile cells which soon die and collapse; spores pale

yellow or colorless subeylindrical, often slightly curved as irregular, 3-7 x

3-4.5um.

Source : MNHN. Paris

KERATINOPHILIC FUNGI IN EGYPT 17

Table 2: Incidence (out of 60 samples) and % incidence of thermophilic and thermo-

tolerant fungi recovered from horse hoofs on YPSs Agar medium at 45*C.

Tableau 2: Champignons thermophiles et thermotolérants isolés à partir de sabots de

cheval sur milieu agar-YPSs, 4 45°C.

Genera and species Incidence | % | O.R.

Aspergillus 50 83 | A

A. fumigatus Fres. 43 72 | H

A. nidulans (Eidam) Wint. 12 20 | L

A. terreus Thom 4 7 R

Talaromyces thermophilus Stolk 13 21 L

Malbranchea sulfurea (Miche) Sigler & Carm. 12 E

Thermomyces lanuginosus Tsi Kitnsky 7 n L

Chaetomium thermophilus La Touche 6 10 | R

Mucor sp. 5 8 R

Acremonium alabamensis Morgan-Jones 3 S R

Myriococcum albomyces Cooney & Emerson 3 5 R

Paecilomyces inflatus (Burnside) Carmichael 2 3 R

Corynascus sepedonium Emmons 1 2 R

Humicola stellata Bunce 1 2 R

Rhizomucor pusillus Lindpt (Schipper) 1 2 R

Rhizopus stolonifer (Ehrenb. ex Fries) Lind. 1 2 R

Thermoascus thermophilus (Sopp) Von Arx 1 2 R

Torula thermophila Cooney & Emerson 1 2 R

Occurrence remarks: H high occurrence, between 30-60; M = moderate occur-

rence, between | L — low occurrence, between 7-14; R = rare occur-

rence, between 1-

Hyphae of Myriococcum albomyces were colorless, branched, decumbent

to erect, forming a loose mucedinous subiculum in culture; prostrate hyphae

constricted at the septa, forming branched, chainlike series of cells that

break apart easily, ascocarps superficial, 100-250um diameter, globose,

darkbrown, nonostiolate, wall glabrous, asci pyriform produced in one or

more tufts from a group of central cells.

Paecilomyces inflatus has colonies floccose-funiculose, yellow and cen-

ter faintly pink; reverse white becoming buff or faintly yellow. Conidio-

phores are usually lacking and phialides borne irregularly on aerial hyphae;

phialides have a septum near the base and are usually inflated in the basal

portion appearing flask-like in the upper portion to narrow apical tube, co-

nidia sometimes develop irregularly, becoming lopsided or squared, distinct-

ly lemon-shaped with slightly truncate base and apex with rounded point.

Hyphae of Torula thermophila were colorless, septate, 2-Sum broad;

spores dark brown, smooth walled, translucent, generally globose, to oval,

basipetally produced in chains on hyphal branches or developed intercalari-

ly, colonies white at first, turning jet black. The rest of thermophilic and

thermotolerant fungi were rare.

Source : MNHN, Paris

18 K.M. ABDEL-GAWAD

Most probably, the hoofs are infested with propagules of these fungi

(spores or mycelial fragments) from the soil, the different types of feedstuffs

distributed to the horses, the air or the air-dust mycoflora. These suggestions

are based on the fact that all of the fungi recovered from the horse hoofs

were previously recovered from Egyptian soils (Moubasher & al., 1981 a-b;

Moharram, 1984), wheat and broad-straw, composts (Moubasher & al.,

1982) and other sources.

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NOTAS MICOLOGICAS, I.

HEBELOMA VACCINUM ROMAGN.

Y HEBELOMA VACCINUM

VAR. CREMEOPALLIDUM VAR. NOV.

F. ESTEVE-RAVENTOS y M. HEYKOOP

Dpto de Biología Vegetal (Botánica),

Univ. de Alcalá de Henares, Madrid, Spain.

RESUMEN - Dedicamos un profundo estudio taxonómico, ecológico y bibliográfico

sobre una rara especie del orden Agaricales: Hebeloma vaccinum Romagn. Obser-

vaciones realizadas con material procedente de Holanda y de 2 localidades madrile-

ñas, han revelado suficientes diferencias toxonómicas para la creación del nuevo

taxon: H. vaccinum var. cremeopallidum. Se añaden microfotografias realizadas al

microscopio electrónico de barrido.

RÉSUMÉ - Étude taxonomique, écologique et bibliographique détaillée d'une espèce

rare de l'ordre des Agaricales: Hebeloma vaccinum Romagn. Les observations

réalisées sur du matériel provenant des Pays-Bas et de 2 localités de la province de

Madrid ont montré des différences taxonomiques suffisantes pour la création du

nouveau taxon: H. vaccinum var. cremeopallidum.

ABSTRACT - In this paper we make a taxonomic, ecological and bibliographical

study on Hebeloma vaccinum Romagn. Collections examined from The Netherlands,

as well as from 2 localities from the province of Madrid (Spain) have revealed that

there is enough evidence to create the new variety Hebeloma vaccinum var. cremeo-

pallidum.

MOTS CLÉS : Taxonomie, Hebeloma, Cortinariaceae, Basidiomycotina.

INTRODUCCION

El género Hebeloma Roze forma parte de la familia Cortinariaceae

dentro del amplio grupo de los hongos Agaricales y está bien definido

taxonómicamente por el color de su esporada, que varía desde los tonos

marrón-tabaco a marrón-arcilloso, y por los caracteres esporales (morfología

y oOrnementación) y ecológicos (formadores en su mayor parte de

Source : MNHN. Paris

22 F. ESTEVE-RAVENTOS y M. HEYKOOP

Source : MNHN. Paris

NOTAS SOBRE HEBELOMA VACCINUM ROMAGN. 23

ectomicorrizas). Los limites del género con los próximos Hebelomina Maire

y Alnicola Kiúhner y sus caracteres morfológicos y ecológicos han quedado

bien definidos por Singer (1986).

Es un dato curioso constatar cómo de un género casi cosmopolita en

las áreas templadas del globo, aún desconozcamos monografías a un nivel

superior al meramente local o bien continental, siendo el único trabajo de

esta índole realizado en nuestro continente el de Bruchet (1970), pero en el

que desgraciadamente sólo se recogen parte de los táxones europeos. Util es

también la reciente aportación de Smith & al. (1983) sobre las especies

provistas de velo (Sección Indusiata (Fr.) Jacq.) pero que abarca ünicamente

aquellos táxones encontrados en la parte occidental de Norteamérica.

De entre la treintena de especies que existen aproximadamente en el

continente europea, una de ellas, Hebeloma vaccinum, llama poderosamente

la atención por sus caracteres esporales ünicos y es el objeto de este estudio.

MATERIAL Y METODOS

El material estudiado procede de una localidad holandesa y de 2

diferentes localidades de la provincia de Madrid. Este material, para el que

se utilizaron como medios de observación microscópica el agua, solución

amoniacal al 10% y solución de Rojo Congo amoniacal, ha sido depositado

en el Herbario de Micología del Departamento de Biología Vegetal

(Botánica) de la Universidad de Alcalá de Henares (H.AH), y se encuentra

disponible para cualquier consulta o revisión.

Las medidas esporales han sido realizadas sin considerar el perisporio o

caliptra. Las ilustraciones han sido realizadas a la escala indicada, y las

fotografías al S.E.M. en un microscopio ISI modelo SX25.

Hebeloma vaccinum Romagn., Bull. Soc. Mycol. France $1: 335-336 (1965),

Fig. 1, 2 y 8.

La cita de Moreno (1980) de Riaza (Segovia), en humus de Populus, ha

sido estudiada por nosotros y corresponde a otro taxon cuya identidad es

difícil de precisar, ya que carece de los suficientes datos de campo, tanto

Fig. 1-2 - Hebeloma vaccinum Romagn. (H.AH 10.806): esporas al S.E.M. Fig. 3-7 -

Hebeloma vaccinum var. cremeopallidum Esteve-Raventós € Heykoop (H.AH

9392); esporas al S.E.M.

Fig. 1-2 - Hebeloma vaccinum Romagn. (H.AH 10.806): spores under S.E.M. Fig.

3-7 - Hebeloma vaccinum var. cremeopallidum Esteve-Raventós & Heykoop

(H.AH 9392): spores under S.E.M.

Source : MNHN. Paris

24 F. ESTEVE-RAVENTOS y M. HEYKOOP

macroscópicos como organolépticos, como para poder ser identificado con

precisión. Se trata de un carpóforo de tamaño medio-grande cuya coloración

y esporas no se corresponden con Hebeloma vaccinum Romagn.,

principalmente por su perisporio adpreso.

El material procedente de Holanda concuerda perfectamente con la

descripción original de Romagnesi (1965). Los caracteres más relevantes de

esta especie y del material estudiado radican en la tipica ornamentación

esporal, con un perisporio envainante que se despega con facilidad de un

episporio bien ornamentado y que rodea a toda la espora con excepción de

la apicula, que queda libre. Se trata, según su autor, de una especie de

tamaño medio-pequeño con un sombrero de color marrón-rojizo vivo, sobre

todo en el centro, (que recuerda al de Hebeloma truncatum (Schaeff.: Fr.)

Kummer), con una superficie viscosa de apariencia aceitosa, un estipe

cilindrico y blanco que se macula de amarillo-parduzco en la base con la

manipulación, pruinoso en el ápice y sin restos de cortina. Las láminas

poseen unas tonalidades marrón-ocráceas con un reflejo rojizo y exudan

pequeñas gotas transparentes. Aparte de los caracteres de la ornamentación

esporal ya mencionados, los cistidios marginales se muestran variables, desde

cilindricos hasta progresivamente claviformes e incluso sublageniformes, y la

epicutis pileica, que se encuentra gelificada, no posee ningún carácter

especial de entre los que presenta el género, con una hipocutis formada por

elementos anchos y cortos de tipo pseudoparenquimatoso que aparece como

carácter común en casi todas las especies de Hebeloma.

Las medidas esporales indicadas por Romagnesi (loc. cit.) son de 11-13

x 6-7,7um (Q = L/l = 1,83-1,69). Las del material estudiado son de

11-12,5(-13) x 6,5-7,5um (Q = L/l = 1,70-1,66) y poseen la morfología

típica, anchamente amigdaliforme, illustrada en Romagnesi (1965: 334), en

donde se aprecia un vientre amplio y redondeado en vista tanto frontal

como lateral.

Material estudiado: Holanda, Bijimermeer, Amsterdam Zuid-Oost, en

zonas húmedas entre Poaceae y humus de Populus nigra L., 28-V111-87, M.

Heykoop, H.AH 10806.

Hebeloma vaccinum Romagn. var. cremeopallidum Esteve-Raventós &

Heykoop var. nov., Fig. 3-7 y 9-11.

A varietate typica differt sporis maioribus ((12,5-)13-16(-17) x

(5,5-)6-7(-7.8) um) et pileo albo pallido. Holotypus Pto. de Canencia,

Madrid, entre hierba bajo Salix atrocinera Brot., 10-XI-85, leg. F. Esteve-

Raventós, H.AH 9392.

Sombrero de 1,5-3cm de diámetro, desde convexo hasta aplanado en la

madurez, de color uniforme crema-blanquecino hasta crema-ocráceo, sin

tonos rojizos, con el margen regular y obtuso, luego recto al envejecer, de

apariencia subhigrófana y con la superficie viscosa y brillante, como lacada

Source : MNHN, Paris

NOTAS SOBRE HEBELOMA VACCINUM ROMAGN. 25

. €

. e,”

24m 10 Oum 11

Fig. 8 - Hebeloma vaccinum Romagn. (H.AH 10.806): esporas. Fig. 9-11 - Hebeloma

vaccinum var. cremeopallidum Esteve-Raventós & Heykoop (H.AH 9392); 9:

basidiocarpo. 10: esporas. 11: queilocistidios.

Hebeloma vaccinum Romagn. (H.AH 10.806): spores. Fig. 9-11 - Hebeloma

vaccinum Var. cremeopallidum Esteve-Raventós & Heykoop (H.AH 9392); 9:

carpophore. 10: spores. 11: cheilocystidia.

o barnizada. Pie de -3,5 x 0,3-0,5cm, cilíndrico, de color blanco pero

tomando tonos parduzcos en la base al ser manipulado o al envejecer, con

el ápice pruinoso y sin restos de velo visibles tanto en los carpóforos jóvenes

como adultos. Láminas medianamente apretadas, de hasta Ímm de anchura,

emarginadas, no ventrudas, de color café con leche con un patente reflejo

rojizo, exudando pequeñas gotas hialinas en la arista, que es ligeramente

floconosa. Carne blanca, olor a patata con un matiz dulzaino al corte, y

sabor amarescente. Esporada marrón

Source : MNHN, Paris

26 F. ESTEVE-RAVENTOS y M. HEYKOOP

Esporas largamente amigdaliformes en su mayor parte, (12,5-)13-16(-17)

x (5,5-)6-7(7,8)um, Q (—L/l) > 2, con un perisporio que se despega con

facilidad de un episporio con ornamentación patente formando verrugas

densas, a veces unidas, y con papila apical lisa. Basidios desde claviformes

hasta cilíndricos, tetraspóricos, de 35-40 x 9-10,2um. Cheilocistidios

cilindricos, ensanchándose paulatinamente hacia el ápice, de 40-66 x

7-11,2(-13,6)um. Caulocistidios cilindricos con ápice obtuso, a veces

ligeramente claviformes, de 30-55 x 8-I5um. Epicutis formada por hifas fi

formes, cilindricas a levemente ensanchadas hacia el ápice, de 4-64m de

diámetro con pigmento intracelular amarillo, pasando progresivamente a

una subcutis pseudoparenquimatosa formada por hifas anchas y cortas de

hasta 304m de diámetro. Trama laminal formada por artículos alargados,

dispuestos regularmente de forma más o menos paralela y de hasta 104m de

anchura. Subhimenio formado por articulos muy cortos y ramificados de

hasta Sum de diámetro.

Material estudiado : Madrid, Puerto de Canencia, entre hierba bajo

Salix atrocinera Brot, 10-XI-85, F. Esteve-Raventós, H.AH 9391.

Inmediaciones del Embalse de Navalmedio, Cercedilla, en el margen de un

riachuelo bajo Salix atrocinera Brot., 27-X-85, J.M. Barrasa & F. Esteve-

Raventós, H.AH 9392

DISCUSSION

Romagnesi (1965) describió Hebeloma vaccinum como una especie que

recuerda en su coloración a H. truncatum, es decir, de un fuerte color

marrón-rojizo en el pileo y, según los tamaños esporales por él indicados, el

coeficiente longitud/anchura de las esporas no supera el valor de 2. La

morfología esporal por él illustrada nos presenta unas esporas anchamente

amigdaliformes con un vientre ancho en su cara adaxial. Con posterioridad,

Bruchet (1970: 84) hace una descripción similar a la de Romagnesi,

indicando un tamaño esporal de (12)13-14(-16) x (6,5-)7-8(-8,5)um, y, según

se desprende de sus ilustraciones, con una morfología amigdaliforme-

limoniforme prácticamente igual a la de Romagnesi; la coloración del

sombrero es señalada "brune rousse foncée". Clémengon (1976) hace

observaciones similares indicando unas esporas de 9,4-11(-13) x 5,7-6,8um, es

decir pequeñas y más bien anchas. Bohus (1978) lo cita para Hungría bajo

Populus, pero sin hacer ninguna descripción sobre este material. Vesterholt

(1986) hace referencia y describe una recolecta de Dinamarca encontrada

bajo Populus tremula y otros caducifolios; ésta última se caracteriza por su

sombrero rojizo-marrón y porte robusto. El tamaño indicado para las

esporas es de 12-14 x 6,7-7,5um con un contorno amigdaliforme y ancho.

Por ültimo, Hebeloma brunneifolium, especie descrita por Hesler (1977) de

Norteamérica, nos parece próxima a H. vaccinum por sus esporas, y de la

que se diferencia, según su autor, básicamente por la apreciable longitud de

Source : MNHN. Paris

NOTAS SOBRE HEBELOMA VACCINUM ROMAGN. 27

longitud

174

5 6 7 8 9 pm anchura

* Hebeloma vaccinum H.AH 10.806

* Hebeloma vaccinum var. cremeopallidum H.AH 9391

* Hebeloma vaccinum var. cremeopallidum H.AH 9392

Fig. 12 - Gráfica comparativa entre los tamaños esporales (en um) que presentan

Hebeloma vaccinum H.AH 10.806 y H. vaccinum var. cremeopallidum H.AH

9391 y H.AH 9392.

12 - Graphic showing the differences between the spore sizes (in am) of

Hebeloma vaccinum (H.AH 10.806) and H. vaccinum var. cremeopallidum

(H.AH 9391 and H.AH 9392).

Source : MNHN. Paris

28 F. ESTEVE-RAVENTOS y M. HEYKOOP

los caulocistidios (-200um). La única referencia europea sobre este taxon

corresponde a Arnolds (1984) en Holanda.

Estos son los únicos datos que, hasta la fecha, hemos podido recopilar

sobre esta bella y característica especie del género Hebeloma. La creación de

Hebeloma vaccinum var. cremeopallidum se debe fundamentalmente a la

constancia en el carácter cromático encontrado en dos recolectas de

abundantes carpóforos recogidos en localidades muy alejadas entre sí y en

idénticas ecologías. Nunca antes se habia recogido H. vaccinum presentando

un color crema-blanquecino en todos los estudios de crecimiento. Por otra

parte, hemos comprobado un carácter en la forma esporal que reviste cierto

valor taxonómico y que, según la bibliografia consultada, parece tener la

suficiente importancia para apoyar el rango varietal propuesto. Las esporas

de H. vaccinum var. cremeopallidum se han mostrado, en su mayor parte,

como largamente amigdaliformes, y tras la medición de más de 40 esporas y

ser comparadas con el material tipico holandés (Fig. 12), hemos encontrado

que el coeficiente longitud/anchura es superior (a veces muy superior) a 2 en

el taxon madrileño. El coeficiente encontrado en la var. vaccinum, tanto en

las mediciones indicadas en la bibliografía como en las realizadas por

nosotros con el material de Holanda, parece ser constantemente inferior a 2.

Respecto a sus caracteres ecológicos, ha quedado demostrada la

relación micorrizógena del taxon con los géneros Salix y Populus según los

estudios de Hackskaylo & Bruchet (1972) y su presencia constante en

ecologías higrófilas (Bruchet, loc. cit. y Delzenne-van Haluwyn, 1971

"marécages, fossés”). Los tamaños de los carpóforos parecen ser variables

segün se desprende de la bibliografia consultada.

Futuras recolectas intermedias en cuanto a la coloración pileica,

tamaño y morfología esporal podrian hacer suponer que nuestro taxon

nuevo se tratara de un ejemplo extremo de la variabilidad de la especie (fo

ma), pero hasta el momento, no hemos podido constatar en la bibliografía

existente ningün comentario que pudiera reafirmar esta posibilidad, más aün

tras el estudio del material holandés.

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ORG:

ISATION INFRASTRUCTURALE DU MYCELIUM

ET DES PROTOPLASTES

DE NECTRIA HAEMATOCOCCA (BERK. ET BER.) WR.

APRES TRAITEMENT PAR LA CYTOHELICASE

J. ORCIVAL et F. LAHBIL

Laboratoire de Cryptogamie, Université Paris-Sud,

91405 Orsay, France.

RÉSUM Les hyphes de Nectria haematococca traités par la cytohélicase en vue

de l'obtention de protoplastes présentent, aprés 3h de traitement, des remaniements

importants au niveau du noyau et des organites cytoplasmiq: Les protoplastes ob-

tenus montrent au cours de leur évolution des empilements de cules

membranaires formées à partir de la membrane nucléaire; ces empilements sont assi-

milables aux lamelles annelées décrites dans divers matériels tels que les oocytes et

certains tissus glandulaires animaux et dans le pollen de quelques plantes. Le róle de

ces structures est discuté.

ABSTRACT - Nectria haematococca hyphae, treated by cytohelicase for protoplast

obtention, show, after 3h of treatment, important cell modification in the nucleus

and in cytoplasmic organelles. The protoplasts show during their evolution, mem-

brane vesicles stacks which may be assimilated to annulate lamellae described in var-

ious organisms. The function of these structures is discussed.

MOTS CLÉS : Ascomycétes, infrastructure, lamelles annelées, noyau, protoplastes.

Les protoplastes de champignons filamenteux sont des outils de plus en

plus utilisés pour l'étude de nombreux problémes: formation de la paroi,

régénération génétique, transformation. Dans notre laboratoire, nous nous

en servons pour l'étude du déterminisme de la différenciation chez Nectria

haematococca (Daboussi, 1985). Des études préalables sur les divers facteurs

influant sur le rendement optimal (Lahbil, 1984) nous ont amenés à effec-

tuer une étude ultrastructurale du mycélium, soumis à l'action de la

cytohélicase et des protoplastes à divers stades de leur évolution. Il existe ac-

tuellement plusieurs travaux sur l'infrastructure des protoplastes de champi-

gnons filamenteux (Gibson & Peberdy, 1972; Isaac & al., 1979; Tanaka &

Source : MNHN. Paris

32 J. ORCIVAL et F. LAHBIL

al., 1981), mais peu d'observations concernent la structure des hyphes traités

par les enzymes pectolytiques dans le milieu d'incubation. Manocha (1968) a

présenté quelques images de conidies de Neurospora crassa traitées de 3 à 4

heures par une solution d'enzyme d'escargot, dans lesquelles on peut obser-

ver des modifications de structure du noyau. Nos observations recoupent

celles des auteurs précités, et nous permettent d'apporter des précisions sur

l'origine et le róle d'infrastructures cytoplasmiques lamellaires.

MATERIEL ET METHODES

Organisme: Nectria haematococca (Berk. et Ber.) Wr., souche sauvage

Sl, est fourni par le Centraal bureau Voor Schimmerlculture de Baarn

(Netherlands).

Culture et obtention de protoplastes: Ces méthodes ont été décrites dans

un précédent travail (Lahbil, 1984); nous les rappelons brièvement: du

mycélium provenant d’une culture âgée de 20h est préincubé dans une solu-

tion de mercaptoéthanol (0,1%) dans KCI 0,6M pH 5,8. Après 4 rinçages

dans la solution de KCI 0,6M, le mycélium est resuspendu dans cette même

solution contenant la préparation enzymatique (cytohélicase lyophilisee IBF

2 mg/ml, 5 ml de milieu d'incubation pour 0,1g de mycélium). L'incubation

dure de | a 4 heures.

Techniques de microscopie électronique: Le matériel, traité ou non par la

cytohélicase, est fixé pendant 3h dans une solution de glutaraldéhyde à 4%

en tampon phosphate 0,1M pH 6,9 additionné de KCI 0,6M. Après 2

rinçages dans le même tampon, le matériel est ensuite post-fixé pendant 18 h

dans une solution de tétroxyde d'osmium a 2% et est ensuite pré-inclus dans

la fibrine suivant la méthode de Charret & Faure-Fremiet (1967), déshydraté

et inclus dans l'Epon. Les coupes fines sont contrastées par l'acétate

d'uranyle 4 2% pendant 30 mn et par le citrate de Plomb pendant 10 mn.

Pour la détection de polyholosides liés en CI-C4, nous avons utilisé le

test Patag d'après Thiery (1967).

RESULTATS

Ultrastructure des hyphes non traités par l'enzyme

Les hyphes ágés de 24h présentent en coupe transversale des

caractéristiques suivantes:

- la paroi est d'épaisseur réguliére de l'ordre de 90 nm, elle apparait

claire aprés coloration uranyle-plomb (Fig. 1, 2); le test Patag révéle une

structure fibrillaire traduisant la présence de fj 1-4 glucanes, essentiellement

Source : MNHN. Paris

NECTRIA HAEMATOCOCCA 33

de la chitine (Fig. 3); les polyholosides liés en C1-C3 ne sont pas révélés par.

ce test,

- le cytoplasme a une structure comparable à celle que l'on rencontre

généralement chez les ascomycétes; trés dense, il contient la plupart des

organites habituels: noyau d'aspect homogène, ribosomes, mitochondries

(Fig. 2, 3); les amas de glycogène sont abondants (Fig. 1); les vacuoles sont

inexistantes. A partir de 24h, les hyphes se remplissent de grosses inclusions

lipidiques, qui sont les marqueurs de cellules distales; les organites cellulaires

se raréfient, et on peut observer quelques rares vacuoles.

Ultrastructure des hyphes au cours de la digestion enzymatique

On n'observe pas de différence significative entre la structure des

hyphes traités durant Ih dans la solution d'enzymes et celle des hyphes non

traités. Bien que des protoplastes soient libérés à partir de 30 mn

d'incubation (Lahbil, 1984), le nombre d'hyphes sur lequel l'hydrolyse

enzymatique produit un effet visible doit être très faible dans les culots fixés.

Par contre, l'observation des culots d'hyphes traités pendant 3h montre:

- des sections d'hyphes dont la paroi n'a pas été (ou peu) attaquée par

les enzymes; les structures sont identiques à celles des témoins,

- des structures membranaires diverses, essentiellement des vésicules

émises par le plasmalemme au cours de l'extrusion du protoplaste, ou

formées secondairement (“subprotoplaste”),

- des sections de protoplastes totalement démunis de parois,

- des sections d'hyphes dont la paroi est plus ou moins digérée (Fig. 4,

5, 6, 7, 8). L’aspect de la paroi de ces hyphes est variable; il peut étre iden-

tique à celui des hyphes témoins (Fig. 4, flèche) ou moins bien délimité (Fig.

5, 6), pouvant à la limite se présenter comme un résidu fibrillaire diffus

(Fig. 8, flèche). Le test Patag révèle une couche externe fortement positive,

contenant des granules de 37 nm de diamètre environ, d'épaisseur irrégulière

et parfois interrompue par des pores (Fig. 7, flèches). La cytohélicase

hydrolysant les glucanes liés en 1-3, cette couche est essentiellement

constituée de chitine.

Le cytoplasme montre des différences importantes par rapport à celui

des hyphes témoins; il apparaît plus clair, sans doute à cause d'une forte

hydratation et contient des vacuoles caractéristiques (Fig. 4, 7, 8). Le

glycogéne a totalement disparu et ne peut être révélé par le test Patag. Quel-

ques inclusions lipidiques peuvent être observées. Les mitochondries sont

parfois dilatées (Fig. 8).

Le noyau présente les modifications les plus remarquables: on peut ob-

server parfois un réarrangement du matériel intranucléaire, qui est plus

condensé en périphérie qu'au centre, où il peut apparaitre sous forme d'un

Source : MNHN. Paris

34 J. ORCIVAL et F. LAHBIL

réseau fibrillaire láche; ceci se traduit par une différence d'aspect ténue (Fig.

5, flèches) ou marquée (Fig. 6): on observe également des dilatations

localisées ou généralisées de l'enveloppe nucléaire (Fig. 6, 8, têtes de flèches).

Ultrastructure des protoplastes obtenus

Les protoplastes nucléés ont, soit un cytoplasme dont l'organisation est

compatible avec une viabilité, soit un cytoplasme fibreux, dépourvu de

ribosomes et par conséquent non viable.

La première catégorie est représentée dans les figures 9, 10. Le

plasmalemme est plus ou moins ondulé; on peut parfois observer quelques

extrusions (Fig. 10, fléche). Les ribosomes sont abondants.

Les mitochondries sont assez nombreuses, avec des crétes paralléles et

une matrix dense (Fig. 9), ou bien avec des crétes dilatées et une matrix clai-

re (Fig. 10). On observe des inclusions lipidiques denses, et plus rarement de

petits amas de glycogene clairs (Fig. 9) dont la nature a pu étre vérifiée par

le test Patag. Les vacuoles sont généralement présentes et leur taille est va-

riable; elles contiennent parfois des précipités denses constitués de

polyphosphates (donnant une coloration métachromatique avec le bleu de

toluidine); certaines sections sont dépourvues de vacuoles, le protoplaste

n'en contenant pas, ou le plan de coupe ne passant pas à leur niveau.

Nous avons parfois observé des structures assimilables aux appareils de

Golgi (Fig. 11), tels qu'ils ont été décrits dans le mycélium de divers cham-

pignons filamenteux (Dargent & al., 1982; Newhouse & al., 1983).

Une des caractéristiques les plus remarquables des protoplastes est la

présence dans le cytoplasme de cisternes de reticulum lisse; ces cisternes peu-

vent être aplaties (Fig. 9), dilatées, ou alternativement aplaties et dilatées

(Fig. 13, 14, 15); souvent, on peut en observer des empilements importants,

jusqu'à une dizaine (Fig. 13); elles peuvent se situer au sein du cytoplasme

ou en position périphérique, à proximité du plasmalemme (Fig. 9, flèches,

Fig. 11). Ces structures se forment à partir de l'enveloppe nucléaire: celle-ci

se dilate localement (Fig. 15, 16, 17), forme des extrusions qui s'isolent dans

le cytoplasme sous forme de vésicules qui s'aplatissent latéralement et

fusionnent entre elles (Fig. 15, 16).

L'organisation interne du noyau ne présente aucune caractéristique

particuliere (Fig. 9, 10, 17). Nous n'avons pas retrouvé les ségrégations de

matériels vues dans les hyphes en voie de digestion dans la cytohélicase, et

décrites dans des protoplastes d'Aspergillus niger libérés au bout d'lh

(Gibson & Peberdy, 1972). Nous avons parfois observé 2 profils de noyau

par coupe provenant de protoplastes plurinucléés.

Le test Patag appliqué aux coupes de protoplastes ne permet pas de

détecter l'accumulation de polyholosides liés en CI-C4 à l'intérieur des

cisternes; le contraste modéré des membranes est comparable à celui des au-

Source : MNHN. Paris

NECTRIA HAEMATOCOCCA 35

tres organites; seules quelques petites vésicules contiennent un précipité den-

se (Fig. 12, fléche).

DISCUSSION

Le passage de cellules hyphales à l'état de protoplastes entraine des

perturbations physiologiques partiellement visualisées par des modifications

d'infrastructure. Certaines de ces modifications sont précoces et apparais-

sent alors que la paroi n'est pas encore totalement désorganisée: il s'agit de

l'apparition des vacuoles, du gonflement des mitochondries et de l'enveloppe

nucléaire, résultant de l'entrée d'un flux d'eau dans la cellule; la modifica-

tion de l'organisation nucléaire interne signalée par Manocha (1968) dans

des conidies de Neurospora en cours de digestion, Gibson & Peberdy (1972)

dans des protoplastes d’ Aspergillus formés précocement et nous-mêmes dans

des hyphes de Nectria en cours de digestion, ne trouve pas une explication

immédiate; s'il ne s'agit pas d'un artefact, on peut y voir une réorganisation

“d'urgence” du fonctionnement nucléaire face à des conditions extérieures

drastiques, avec modification des priorités au niveau de la transcription; cet-

te hypothèse s'appuie en partie sur le fait que les ribosomes sont abondants

dans le cytoplasme des protoplastes, mais nécessiterait une étude plus appro-

fondie à l'aide d'études cytochimiques des acides nucléiques.

La présence de reticulum est générale dans les protoplastes de champi-

gnons filamenteux; Gibson & Peberdy (1972) observent du reticulum granu-

leux dans des protoplastes d' Aspergillus; des images de cisternes empilées

ont été publiées par Manocha (1968) dans des protoplastes de Neurospora,

par Isaac & al. (1979) dans des protoplastes d’ Aspergillus, et par Tanaka &

al. (1981) dans des protoplastes de Pyricularia oryzae; ces derniers auteurs as-

similent ces structures des appareils de Golgi intervenant dans la

régénération de la paroi; cette interprétation ne peut être retenue: les appa-

reils de Golgi identifiés chez les Septomycétes ont une morphologie trés

différente; des études ont été faites à ce sujet par Dargent & al. (1982) chez

Hypomyces chlorinus et par Newhouse & al. (1983) chez Endothia parasitica;

dans les protoplastes de Nectria, nous avons observé quelques structures

pouvant étre assimilées aux organites décrits par ces auteurs, et trés

différentes des empilements lamellaires.

Nous avons vu que, chez Nectria haematococca, les empilements de

cisternes dans les protoplastes proviennent d'un bourgeonnement de l'envi

loppe nucléaire; ce type de structure est comparable aux lamelles annelées

décrites dans diverses cellules animales reproductrices ou néoplasiques, et

dans des grains de pollen (voir les revues de Wischnitzer (1970) et de Kessel

(1983)). Les fonctions attribuées à ces structures sont variées: transport de

matériel nucléaire dans le cytoplasme, genése de reticulum, fixation de

polysomes; il n'y a encore aucune évidence pour qu'une ou plusieurs de ces

Source : MNHN, Paris

36 J. ORCIVAL et F. LAHBIL

fonctions puissent étre attribuées á ces structures dans les protoplastes de

Nectria.

Des bourgeonnements de l'enveloppe nucléaire ont été décrits chez di-

vers Ascomycétes, en particulier par Carrol (1967), Wells (1972) et Beckett

(1981); les vésicules issues de ces bourgeonnements participent à la for-

mation de la membrane délimitant l'ascospore. Dans les protoplastes de

Nectria, des cisternes issues de la membrane nucléaire bordent le

plasmalemme et peuvent avoir un róle voisin des bourgeonnements

nucléaires des noyaux de l'asque qui participent à la formation du

plasmalemme de l'ascospore.

L'organisation de protoplastes naturels, tels que les zoospores de

Pythium (Groves & Bracker, 1978) et de Phytophthora (Bartnicki-Garcia &

Hemmes, 1976), nous apporte des informations utiles: dans le cytoplasme de

ces cellules, on observe divers types de vésicules périphériques; les unes

contiennent des glycoprotéines participant à l'adhésion de la spore, d'autres

interviennent dans l'expulsion de l'eau; leur membrane se fusionne avec le

plasmalemme et le renouvelle (Pinto da Silva & Nogueira, 1977); des

cisternes aplaties bordent la face interne du plasmalemme, sans qu'il y ait

évidence d'une fusion éventuelle avec ce dernier; ce type de cellule, provisoi-

rement dépourvu de parois, met en place des structures adaptées à un pas-

sage aquatique. Les protoplastes "artificiels", obtenus par digestion des pa-

rois des hyphes, réorganisent leur cytoplasme en développant des systémes

membranaires comparables, bien que moins spécialisés; d'autre part,

l'hétérogénéité des hyphes (répartition des organites, nature et quantité des

réserves nutritives, composition du plasmalemme) explique en partie la

variabilité des structures observées dans les protoplastes de Nectria et le fait

qu'une partie seulement d'entre eux peut régénérer. Cette réorganisation

cytoplasmique, caractérisée par une synthèse importante de membranes, mo-

bilise les réserves préexistantes dans les hyphes, glycogène et lipides, et s'ac-

compagne d'une activité mitochondriale importante.

En conclusion, nous proposons un schéma interprétatif de la transfor-

mation de la cellule hyphale en protoplaste chez Nectria haematococca (Fig.

18).

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Source : MNHN. Paris

38 J. ORCIVAL et F. LAHBIL

EXPLICATION DES FIGURES

Echelle: 0,5um.

Figure 1: Coupes d'hyphes d'une culture de 24h. Les sections les plus jeunes

sont riches en glycogène. Les sections plus âgées (à droite) contiennent des inclusions

lipidiques (en noir). g =glycogéne, 1 — inclusion lipidique.

Figure 2: Section transversale d'hyphe. Le noyau (N) a une structure

homogène, la paroi est peu contrastée.

Figure 3: Coupe d'hyphe témoin traité par le test Patag; le glycogène est

contrasté en noir, la structure fibrillaire de la paroi est mise en évidence. (N — noyau,

m= mitochondrie).

Figure 4: Vue d'ensemble d'hyphes traités par la cytohélicase pendant 3h. Le

elycogéne a disparu; on observe des vacuoles (V). L'aspect des parois est variable. La

fléche indique une paroi comparable à celle de la Fig. 2.

Figure 5: Coupe d'hyphe traité par la cytohélicase: la paroi apparaît légèrement

digérée (tête de flèche): on observe une légère ségrégation du matériel nucléaire

(flèches).

Figure 6: Même traitement: la digestion de la paroi cst plus avancée; l'envelop-

pe nucléaire est dilatée, et on observe une ségrégation spectaculaire entre un matériel

nucléaire fibreux central et un matériel granulaire périphérique.

Figure 7: Test Patag; il ne reste de la paroi qu'une couche granulaire fortement

positive et percée par endroits (fléches).

Figure 8: Coupe traitée par la cytohélicase; l'enveloppe nucléaire est dilatée par

endroits; le cytoplasme contient des vacuoles (V) ( m —mitochondries).

Figure 9: Vue générale d'un protoplaste de Nectria haematococca; on observe

un noyau (N), une vacuole remplie de matériel dense (V), des mitochondries à matrix

dense et crétes développées (m), des cisternes de reticulum dont certaines bordent le

plasmalemme (fléches).

Figure 10: Autre type de protoplastes; les mitochondries ont une matrix claire

et des crêtes peu développées (flèche); le plasmalemme est sinueux avec quelques

extrusions (flèche).

Figure 11: Empilement de cisternes de reticulum lisse; l'organite indiqué par

des flèches est peut-être un appareil de Golgi.

Figure 12: Cisternes dilatées contre la face interne du plasmalemme; la coupe a

été traitée par la méthode Patag; seule une vésicule présente une légère réaction posi-

tive (fléche).

Figure 13: Empilements de cisternes dans le cytoplasme; ce type de structure

est assimilable aux lamelles annelées.

Figure 14: Autre aspect des empilements; les cisternes sont périodiquement

s et aplaties à droite, agglomérat de débris membranaires.

dila:

Figure 15: Formation des cisternes; la membrane nucléaire externe présente

une série de dilations (fléches) dont l'aspect est comparable aux cisternes dilatées du.

cytoplasme.

Figure 16: Détail de 2 bourgeonnements de la membrane nucléaire externe.

Source : MNHN. Paris

NECTRIA HAEMATOCOCCA 39

Figure 17: L'enveloppe nucléaire montre des régions aplaties, d'autres dilatées

(flèches), précédent la formation d'une nouvelle travée de cisternes. (nu — nucléole:

v — vacuole).

Figure 18: Représentation schématique de la transformation d'un hyphe en

protoplaste chez Nectria haematococca: L'hyphe (1) perd sa paroi (2) et le

protoplaste se réorganise (3,4).

EXPLANTATION OF THE PLATES

Scales: 0, Sum.

Figure 1: Hyphae section from a 24h culture. Youngest hyphae are rich in

glycogen. Older hyphae (on the right) countain lipid inclusions (in black)

£ —glycogen, L —lipid inclusions.

Figure 2: Hyphae transversal section. Nucleus (N) has an homogeneous struc-

ture, wail is not very contrasted.

Figure 3: Hyphae section after Patag test; glycogen is black, fibrillar structure

of the wall appears. (N=nucleus, m=mitochondria).

Figure 4: Global view of 3h cytohelicase treated hyphae. Glycogen has

desappeared. Some vacuoles are observed (V). Walls appearance varies. Arrow

shows a wall comparable with the on of Fig.2.

Figure 5: Cytohelicase treated hyphae: Wall is slightly digested (arrow head); a

slight segregation in nuclear material may be observed (arrows).

Figure 6: Same treatment. Wall digestion is more advanced. Nuclear cover is

dilated, and dramatic segregation is seen between a fibrous central nuclear material

and a granular peripheric material.

Figure 7: Patag test: a strongly positive granular layer, with holes (arrows) is

the rest of the wall.

Figure 8: Cytohelicase treatment: nuclear cover is dilated in places; the

cytoplasm countains vacuoles (V). (m — mitochondrion).

Figure 9: General view of a protoplast of Nectria haematococca: it is observed

a nucleus (N), a vacuole with dense material (V), mitochondria with dense matrix

and developed cristae (m), reticulum cisternae of which some are along the

plasmalemme (arrows).

Figure 10: Other type of protoplast; mitochondria have clear matrix and little

cristae (arrow); plasmalemme is sinuous with some extrusions (arrow).

Figure 11: Stacks of smooth reticulum vesicules; structure pointed out by arrow

is perhaps a Golgi apparatus.

Figure 12: Dilated vesicles along plasmalemme inner face; the section is treated

by Patag method; a single vesicle (arrow) shows a slight positive reaction.

Figure 13: Cisternae stacks in the cytoplasm; this structure may be assimilated

to annulate lamellae.

Figure 14: Other appearance of stacks; the cisternae are periodically dilated

and flattened; on the right, agglomerate of membrane fragments.

Source : MNHN. Paris

40 J. ORCIVAL ct F. LAHBIL

Figure 15: Cisternae formation; outer nuclear membrane shows serial dila-

tations (arrows) whose appearance is comparable to dilated cisternae in the

cytoplasm.

Figure 16: Detail of two blebs of outer nuclear membrane.

igure 17: Nuclear cover shows flattened zones, other are dilated, before the

formation of a new row of cisternae.

Figure 18: Schematic representation of hyphae into protoplast transformation

in Nectria haematococca: The hyphae (1) loss his wall (2) and the protoplast is

reorganized (3, 4).

Source : MNHN. Paris

NECTRIA HAEMATOCOCCA 41

Source - MNHN. Paris

42 J. ORCIVAL et F. LAHBIL

Source : MNHN. Paris

NECTRIA HAEMATOCOCCA 43

Source : MNHN. Paris

J. ORCIVAL et F. LAHBIL

Source : MNHN, Paris

NECTRIA HAEMATOCOCCA 45

Source : MNHN, Paris

46 J. ORCIVAL et F. LAHBIL

Figure 18

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol., 1990, 11 (1): 47-68. 47

L'APPAREIL SPOROPHYTIQUE ET LES ASQUES

DU TUBER MELANOSPORUM VITT.

(Truffe noire du Périgord, Discomycètes)

A. PARGUEY-LEDUC*, M.C. JANEX-FAVRE*, C. MONTANT**

* Laboratoire de Cryptogamie, Université Pierre et

Marie Curie, 7, Quai Saint-Bernard

- 75252 Paris Cedex 05 - France

** Laboratoire de Cryptogamie, Université Paul

Sabatier, 118, Route de Narbonne

- 31602 Toulouse Cedex - France

UMÉ - L'appareil sporophytique du Tuber melanosporum comprend succes-

sivement une phase prosporophytique (vésicule plurinucléée) et une phase

ascosporophytique (hyphes dicaryotiques terminées par des dangeardies ascogen

Les asques présentent des particularités remarquables : forme globuleuse, polarité

dans la répartition des constituants, relative simplicité de la paroi, délimitation indi-

viduelle des ascospores, réduction de leur nombre et présence d'un sac postsporal.

Ces caractéres, également trouvés chez d'autres espéces du genre Tuber et dans le

genre voisin Terfezia, justifient, au moins pour ces deux genres hypogés très proches,

la distinction d’un ordre des Tubérales au sein des Discomycètes.

ABSTRACT - In Tuber melanosporum sporophytic apparatus comprises two succes-

sive stages: 1. prosporophytic multinucleate vesicles and 2. ascosporophytic dicaryot-

ic hyphae with ascogenous croziers at the tip. Asci show strong peculiarities : globu-

lar shape, polarity in the components distribution, non-complexity of ascus wall,

process of individual ascospore delimitation, occurrence of a postsporal membrane

surrounding the ascospores which are less than eight in number. Tuber melanospo-

rum shares those features with other species in the genus Tuber as with Terfezia spe-

cies, which justifies, for both hypogeous genera at least, the distinction of order

Tuberales within Discomycetes.

MOTS CLÉS : appareil sporophytique, asque, ultrastructure, Tubérales, Tuber.

Dans le cadre de l'étude approfondie de l'ascocarpe de Tuber

melanosporum Vitt. que nous avons entreprise (Montant et al., 1983; Kulifaj,

1984; Parguey-Leduc et al, 1984, 1985, 1987a et b, 1988, 1989) nous

décrivons dans cet article nos observations en microscopie photonique et

Source

MNHN, Pari:

48 A. PARGUEY-LEDUC et al.

électronique sur l'appareil sporophytique et les asques qui en dérivent; par

contre, nous ne reprendrons pas l'étude de l'ascosporogénése et de

l'évolution des ascospores que nous avons déjà rapportée antérieurement.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Les échantillons étudiés, récoltés à divers stades pour que l'évolution

ontogénique puisse étre suivie, proviennent de France (Visan et Valréas -

Vaucluse -; Les Eyzies - Dordogne -).

Pour les études en microscopie photonique, des préparations par

écrasement ont été effectuées dans l'eau ou divers colorants : le rouge neu-

tre, le bleu BZL, le bleu coton, l'encre stylographique, le lugol et le vert

Visba. Des colorations sur coupes (aprés fixation par le liquide de

Westbrook et inclusion dans la paraffine) ont en outre été réalisées à l'aide

de l'hématoxyline ferrique.

Pour les études en microscopie électronique par transmission, des frag-

ments des ascocarpes ont été traités par les méthodes classiques : double

fixation par le glutaraldéhyde á 6% et le tétroxyde d'osmium á 2%, avec

tampon de Sórensen, inclusion dans la résine de Spurr. Les coupes,

effectuées à l'aide d'un ultramicrotome Reichert OMU 3, ont été contrastées

par l'acétate d'uranyle et le citrate de plomb (18 minutes) ou traitées par la

technique de Thiéry (1967), et observées à l'aide d'un microscope Philips

30.15 sous une tension d'accélération de 80 KV. Des coupes semi-fines,

colorées par la pyronine, ont été observées au microscope photonique.

I - APPAREIL SPOROPHYTIQUE ET FORMATION DES ASQUES

Les éléments sporophytiques se distinguent aisément, en microscopie

photonique, sur les coupes colorées par l'hématoxyline du fait de leur gran-

de affinité pour ce colorant, et ce aux divers stades du développement de

l'ascocarpe (Parguey-Leduc et al., 1984, 1985, 1987b).

Au stade apothécioïde (Parguey-Leduc et al., 1985 et Fig. 1), l'appareil

sporophytique se présente sous forme de filaments disposés en cupule

Ultérieurement, alors que l'ascocarpe est devenu globuleux (Parguey-Leduc

et al., 1984 et Fig. 2), ces filaments sont disposés dans la glébe au sein de

veines fertiles, enserrées dans les circonvolutions de veines stériles aérifères.

Localisés en premier lieu dans la partie axiale des veines fertiles (vf, l, Fig.

3), ils se développent ensuite en direction centrifuge (2) et atteignent ainsi la

base de la palissade de paraphyses qui borde les veines stériles (vs). Plus

tard, ils progressent vers la périphérie de l’ascocarpe jusqu'à la base des

écailles (e) du péridium (3, puis 4), dans lesquelles ils peuvent même excep-

tionnellement pénétrer (Parguey-Leduc et al., 1987b).

Source : MNHN. Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 49

— <- yf —s-

1 à 3 : structure de lascocarpe (microscopie photonique). Fig. | : jeune

ascocarpe au stade apothécioide; Fig. 2: jeune ascocarpe devenu globuleux; Fig.

3: détail de la périphérie d'un ascocarpe montrant la progression de l'appareil

sporophytique, puis des asques, de la partie axiale d'une veine fertile ve:

base d'une écaille du péridium (de 1 à 4). e: écaille; wf veine fertile; vs

stérile. Echelle: Fig. 1, 12,5um; Fig. 2, 5004m; Fig. 3, 1004m.

Fig. | to 3: ascocarp structure (light microscope). Fig. | : young ascocarp,

apothecioid stage; Fig. 2 : young globular ascocarp; Fig. 3: detail of the

peripheral part of an ascocarp showing sporophytic apparatus and asci e

from the axial part of a fertile vein to the base of a vua scale. e: scale; vf:

fertile veil sterile vein. Scale: Fig. 1, 12,5um; Fig. 2, 500um; Fig. 3, 100um.

Source : MNHN, Paris

50 A. PARGUEY-LEDUC et al.

Fig. 4 et 5 : appareil sporophytique (microscopie photonique). Fig.4: portion d'une

veine fertile comportant, autre les éléments stériles (sr), des éléments fertiles:

vés

cule prosporophytique (psp), hyphes ascogènes (ha) et asques (as). Fig. 5, A

étail d'hyphes ascogènes. Echelle : 10um.

Fig. 4 and 5 : sporophytic apparatus (light microscope). Fig. 4: part of a fertile vein

comprising sterile (sr) and fertile elements: — prosporophytic vesicle (psp).

ascogenous hyphae (ha) and asci (as). Fig. 5, A to D: detail of ascogenous

hyphae. Scale: 104m,

Enfin, au stade adulte apparaissent les premiers asques; l'ascocarpe at-

teint alors un poids de quelques milligrammes. Ils deviennent ensuite

sporogénes et de plus en plus abondants, ce qui entraine un important

développement des veines fertiles, tandis que les veines stériles sont écrasées

et s'amenuisent.

Source : MNHN, Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 51

Fig. 6 et 7 : appareil prosporophytique (microscopie électronique). Fig. 6 (technique

de Thiéry): vésicule prosporophytique environnée de filaments stériles; Fig. 7, a

et b: détail des septums. Echelle: Fig. 6, 24m; Fig. 7, 0,54m.

Fig. 6 and 7 : prosporophytic apparatus (electron microscope). Fig. 6 (Thiéry's tech-

nique): prosporophytic vesicle surrounded by sterile filaments; Fig. 7, à and b:

detail of septa. Scale: Fig. 6, 2um; Fig. 7, 0,3um.

1 - Appareil sporophytique

Les veines fertiles sont composées d'éléments stériles (st, Fig. 4) étroits,

à cellules en principe uninucléées, et d'éléments fertiles correspondant aux

Stades successifs de l'évolution de l'appareil sporophytique, telle que l'a

décrite Chadefaud (1944, 1952, 1953a et b, 1960) Selon cet auteur,

rappelons-le, l'ascogone, en principe aprés fécondation, évolue en un appa-

Source : MNHN. Paris

32 A. PARGUEY-LEDUC et al.

Fig. 8 et 9 : appareil prosporophytique (microscopie électronique). Fig. 8, a et b:

vésicules plurinucléées; Fig. 9, a et b: bourgeonnement des hyphes ascogénes.

Echelle: 24m.

Fig. 8 and 9 : prosporophytic apparatus (electron microscope). Fig. 8, a and b:

multinucleate vesicles: Fig. 9, a and b: budding of ascogenous hyphae. Scale:

2um.

Source : MNHN. Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 53

reil sporophytique, formé d'abord d'un prosporophyte puis d'un

ascosporophyte bourgeonné par celui-ci.

Chez le T, melanosporum, Vascogone n'a pas été identifié du fait que les

tout premiers stades de formation de l'ascocarpe n'ont pu étre repérés sur le

terrain, en raison de leur petitesse. Rappelons toutefois que Chaze (1950) a

obtenu en culture des vésicules qu'il considére comme des oogones du T.

melanosporum et que Marchisio (1964) a décrit, chez le Tuber maculatum, des

oogones et des anthéridies, différenciés à l'extrémité d'"hyphes ascogénes';

d'aprés ce dernier auteur, les oogones, apres fécondation, se transforment di-

rectement en asques; ce processus est en désaccord avec les vues de

Chadefaud et nos propres observations. Celles-ci débutent au stade du

prosporophyte ( psp, Fig. 4), composé de volumineuses vésicules

boursouflées irrégulièrement, vacuolisées et plurinucléées. En microscopie

électronique (Fig. 6, 8 a et b), elles apparaissent tantót sub-cylindriques, tan-

tót bosselées ou méme pourvues de protubérances marquées. Leurs cloisons

transversales présentent un pore médian, qui peut étre simple (Fig. 7a) ou

obturé par une formation opaque aux électrons, en forme de sablier (Fig.

7b).

Le bourgeonnement de l'ascosporophyte à partir de vésicules

prosporophytiques a été observé en microscopie électronique (Fig. 9 a et b);

il en résulte des éléments de diamètre moindre et à contenu plus dense aux

électrons, avec deux volumineux noyaux associés que l’on peut probablement

considérer comme un dicaryon (Fig. 9a). Ceux-ci évoluent ensuite en hyphes

ascogènes, bien visibles en microscopie photonique du fait de leur forte

colorabilité (ha, Fig. 4); plusieurs fois ramifiées elles sont composées de cel-

lules généralement binucléées (Fig. 5).

Les filaments de l'appareil sporophytique avaient déjà été observés par

Greis (1938) chez le Tuber aestivum et le T. brumale, mais nous n'avons pas

retrouvé les crochets accompagnant la formation de chacune des cloisons

transversales que décrit cet auteur; il s'agirait peut-être, en réalité, comme

chez le T. melanosporum, de jeunes ramifications latérales (Fig. SA). Par

contre, nous avons retrouvé le crochet terminal figuré par Greis (Fig. 5B): il

est à l'origine d'une cellule proascale (Fig. 5C) et termine une hyphe

ascogène à cellules binucléées (Fig. SD).

2 - Formation des asques

Dans le crochet qui termine une hyphe ascogène, deux cloisons trans-

versales se forment, l'une à la base et l'autre prés du sommet, délimitant, se-

lon le processus décrit par Dangeard (1894), une cellule proascale binucléée

et un bec latéral (Fig. 5C, 10). Ce dernier se soude ensuite au pied; leur cloi-

son mitoyenne disparaissant, il s'ensuit la formation d'une cellule sous-

ascale dans laquelle sont associés le noyau de la cellule-pied et celui du bec

(Fig. 11). Corrélativement, la cellule proascale, terminant une hyphe

Source : MNHN, Paris

A. PARGUEY-LEDUC et al.

Source : MNHN, Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 55

ascogene à cellules binucléées (Fig. 5D, 12), s'allonge; son contenu est plus

dense aux électrons (Fig. 13) que celui de la cellule sous-ascale, abondam-

ment vacuolisé. Après fusion de ses deux noyaux en un volumineux noyau

unique, disposé au centre de la cellule (Fig. 14), elle devient un asque, de

forme encore allongée; dans tout son volume sont disséminées de petites

vacuoles autour desquelles se répartissent des grains de glycogène fortement

réactifs au test de Thiéry.

11 - EVOLUTION ET STRUCTURE DES ASQUES

(microscopie photonique)

Elles ont été suivies sur préparations par écrasement et sur coupes. Le

jeune asque représenté par la figure ISA est encore rattaché à l'hyphe

ascogene; à sa base est bien visible le bec latéral, vestige du crochet

dangeardien (Chadefaud, 1944).

Au stade suivant, l'asque est devenu plus gros et sub-globuleux

(Fig.15B). Les vacuoles sont particulierement bien individualisées, réparties

dans tout le volume ascal, autour du noyau central. Par la suite, l'asque

continue à grossir; sa paroi s'épaissit et ses constituants tendent à se répartir

en zones distinctes (Fig. 15C); une telle zonation est caractéristique du gen-

re Tuber (Parguey-Leduc & Janex-Favre, 1977, 1981) et méme d'autres

Tubérales (Janex-Favre et al, 1988). La partie inférieure de l'asque, corres-

pondant à plus des 2/3 de son volume, est remarquablement riche en

glycogéne; au-dessus se localisent la majorité des vacuoles, souvent pourvues

chacune d'un précipité pyroninophile visible sur les coupes semi-fines puis,

tout à fait au sommet, un cytoplasme finement granuleux entourant le

noyau. Par la suite, ce dernier se divise et les noyaux-fils deviennent les

noyaux sporaux : les jeunes ascospores sont ainsi différenciées au sommet de

l'asque (Fig. 15D).

Ultérieurement, le groupe d'ascospores en voie de maturation se locali-

se au centre de l'asque (Fig. I3E); il est alors contenu à l'intérieur du sac

postsporal antérieurement décrit chez diverses Truffes (Chadefaud, 1976;

Parguey-Leduc & Janex-Favre, 1977, 1981); d'épaisseur irréguliére, ce sac est

nettement souligné par les divers colorants utilisés. A l'extérieur du sac, le

Fig. 10-12 : formation des asques (microscopie électronique). Fig. 10: crochet

dangeardien; Fig. 11: cellule proascale et sa base dangeardienne; Fig. 12: cel-

ule proascale à l'extrémité d'une hyphe ascogene. Echelle: lum.

Fig. 10-12: ascus formation (electron microscope). Fig. 10: crozier; Fig, |l: proascal

cell with basal crozier; Fig. 12: proascal cell at the tip of an ascogenous hypha.

Scale: Ium.

Source : MNHN, Paris

56 A. PARGUEY-LEDUC et al.

Fig. 13 et 14 : transformation de la cellule proascale en asque (microscopie

électronique, technique de Thiéry). Fig. 13: cellule proascale binucléée; Fig. 14:

jeune asque uninucléé; les bases dangeardiennes sont bien visibles. Echelle:

lum.

Fig. 13 and 14 : evolution from a proascal cell into an ascus (electron microscope,

Thiérys technique). Fig. 13: binucleate proascal cell; Fig. 14: young uni-

nucleate ascus. Note the basal croziers. Scale: lum.

Source : MNHN, Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 57

Fig. 15, A-H: évolution et structure des asques (microscopie photonique). G (mon-

tage dans l'eau) est une figure inédite de M. Chadefaud. Colorations: bleu Co-

ton (D), hématoxyline (E, H), lugol (A), pyronine (B, C, F). Echelle: 104m.

Fig. 15, A-H : evolution and structure of asci (light microscope). G (water mounting)

is an unpublished drawing of M. Chadefaud. Stains used are Coton blue (D),

haematoxylin (E, H), lugol (A), pyronine (B, C, F). Scale: 104m.

Source : MNHN, Paris

58 A. PARGUEY-LEDUC et al.

Fig. 16 et 17 : jeunes asques uninucléés, globuleux; noter l'évolution dans la

répartition des vacuoles (microscopie électronique). Echelle: lum.

Fig. 16 and 17 : young uninucleate globular asci; note changing of vacuole

localization (electron microscope). Scale: lum.

contenu ascal est fortement vacuolisé. Au stade figuré chaque ascospore

contient plusieurs globules lipidiques et sa paroi comporte une périspore,

d'épaisseur irrégulière; les périspores des différentes ascospores sont

indépendantes et toujours clairement distinctes du sac postsporal.

A un stade un peu plus avancé de son évolution, la paroi ascosporale

porte des mamelons fortement colorables (Fig. 15F) qui représentent le

début de son ornementation. Sur les coupes semi-fines la pyronine colore

fortement des granules de taille variable disposés sur le trajet du sac

postsporal.

L'asque adulte, de forme sub-globuleuse (90-140 x 80-120um) et porté

par un pied souvent assez long, pourvu d'une anse dangeardienne (Fig.

15G), contient un nombre variable d'ascospores (de 1 à 6, le plus souvent 4),

autour desquelles le sac postsporal n'est plus distinct. De forme elliptique

(30-40 x 22-30um), les ascospores présentent une paroi brune hérissée

Source : MNHN. Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 59

Fig. 18 : asque uninucléé avec zonation horizontale précédant l'ascosporogénése

(microscopie électronique). Echelle: lum.

Fig. 18 - uninucleate ascus, typical polarity preceding ascosporogenesis (electron mi-

croscope). Scale: lim.

Source : MNHN, Paris

60 A. PARGUEY-LEDUC et al.

d'épines serrées, souvent légérement courbes; les bases coniques jointives des

épines sont bien visibles en coupe (Fig. 15H). Sur cette méme figure, on no-

tera que l'ascospore, ici unique dans l'asque, a des dimensions supérieures à

la moyenne (40 x 25um pour le seul corps sporal) et que le sac postsporal,

vraisemblablement en voie de lyse, est fragmenté en segments disjoints.

HI - ULTRASTRUCTURE DES ASQUES

Les stades d'évolution des asques suivis en microscopie photonique

sont également identifiables sur les micrographies électroniques. Ainsi,

lasque uninucléé, primitivement allongé (Fig. 14) devient globuleux (Fig.

16) son contenu (noyau central, vacuoles éparses, cytoplasme riche en

glycogène) contraste avec celui de la cellule sous-ascale, fortement vacuolisé.

L'établissement de la zonation caractéristique du stade précédant

lascosporogenése se manifeste d'abord par le regroupement des vacuoles

dans la partie sus-jacente au noyau (Fig. 17). Un peu plus tard, la stratifica-

tion préalablement décrite est établie (Fig. 18): masse basale de elycogéne,

puis, au-dessus, couche à vacuoles dominantes et région sommitale à

cytoplasme riche en organites (mitochondries notamment) autour du noyau,

toujours unique.

Dans la couche où dominent les vacuoles est observable une évolution

caractéristique qui se produit à l'approche de la division nucléaire et de

l’ascosporogénèse qui s'ensuit. Entre les vacuoles, à contenu initialement

clair, se différencient progressivement des petites masses ovoïdes à

subsphériques, d'abord moyennement opaques aux électrons, puis très denses

(Fig. 19a). La plupart d'entre elles sont progressivement incluses dans les

vacuoles selon un processus qui peut étre suivi sur la figure 19b. Les masses

denses s'appliquent sur le tonoplaste des vacuoles en prenant la forme de

calottes, puis elles le traversent et reprennent leur forme globuleuse primitive

à l'intérieur des vacuoles, dont le tonoplaste est alors reconstitué.

Corrélativement à l'évolution du contenu ascal se produit, au stade de

l'asque uninucléé, une complication de la paroi ascale qui, préalablement

simple, devient double (Fig. 20a) : couche externe (— exoascus) mince et

sombre, fortement réactive au test de Thiéry et couche interne (—

endoascus) beaucoup plus épaisse et de densité moyenne. Les deux couches

de la paroi ascale présentent une texture granuleuse tandis que la substance

interascale apparait sous forme de fibrilles, à orientation désordonnée.

Ultérieurement, la paroi ascale se complique encore, une couche basale

située contre le plasmalemme s'individualisant à l'intérieur de l'endoascus

(Fig. 20b).

La polarité de l'asque se maintient au stade de la division du noyau

unique (Fig. 21) puis lors de l'ascosporogénése (cf. Parguey-leduc & Janex-

Favre, 1981). La figure 22 montre un sommet d'asque oü sont présents

Source : MNHN, Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 61

conjointement de jeunes ascospores et des noyaux : inutilis lors de

l'ascosporogénése, ceux-ci sont probablement en voie de dégénérescence, ce

qui explique le nombre limité d'ascospores à l'intérieur de l'asque.

Le stade oü les ascospores en voie de maturation sont groupées au cen-

tre de l'asque, à l'intérieur du sac postsporal, est aisément identifiable en

microscopie électronique (Fig. 23). Le contraste entre les deux régions

délimitées par le sac est particulierement évident : à ce stade, à l'extérieur,

entre la paroi ascale et le sac postsporal (fléche), l'épiplasme contient essen-

tiellement du glycogéne tandis qu'à l'intérieur, autour des ascospores, sont

visibles les vacuoles å masse globuleuse dense. Le sac postsporal lui-méme

(fléche) est souligné, sur sa face externe, par de petites masses globuleuses

opaques aux électrons et réactives au test de Thiéry, qui fait apparaitre un

liseré limitant plus fortement noirci (Fig. 24). Ainsi que nous l'avons

indiqué en rapportant nos observations en microscopie photonique,

l'ectospore (ec) limitant la périspore (pe) de chaque ascospore est par-

faitement distincte du sac postsporal (flèche, Fig. 25) et ne peut en

conséquence être impliquée dans la formation de celui

CONCLUSION

L'étude approfondie des ascocarpes du T. melanosporum nous permet

d'apporter ici diverses précisions sur l'appareil sporophytique, dont l'obser-

vation est délicate et la cytologie souvent encore mal connue. Ainsi, nous

avons pu confirmer la subdivision du sporophyte en deux phases, reconnues

chez les Ascomycétes par Chadefaud depuis 1944: première phase

prosporophytique formée de vésicules plurinucléées et deuxième phase

ascosporophytique composée d'hyphes à cellules dicaryotiques bourgeonnées

par les vésicules; celles-ci produisent à leur extrémité, au moyen de

dangeardies ascogènes, des cellules proascales, également dicaryotiques. Ces

derniéres se transforment en asques par fusion de leurs deux noyaux.

Les asques du T. melanosporum ont une organisation tout à fait confor-

me à celle des espèces de Tuber décrites antérieurement (Parguey-Leduc &

Janex-Favre, 1977, 1981). Ses caractères les plus originaux sont:

- la forme globuleuse du corps de l'asque: celle-ci est acquise dés le sta-

de uninucléé : la forme allongée de la cellule proascale n'est en effet

conservée que peu de temps après la fusion des deux noyaux;

- la polarité dans la répartition des constituants internes: elle s'établit

au stade uninucléé et se modifie au cours de l'évolution de l'asque. Au mo-

ment où le noyau de fusion est sur le point de se diviser, préalablement à

l'ascosporogénése, elle est horizontale, la zone sporogène se localisant au

sommet de l'asque. Cette premiére zonation disparait lorsque les jeunes

ascospores ont achevé la différenciation de leur paroi primaire et commen-

cent à acquérir leur paroi secondaire. Elles tendent alors à se regrouper au

Source : MNHN, Paris

62 A. PARGUEY-LEDUC et al.

centre de l'asque, à l'intérieur d'un sac postsporal, ce qui détermine une

nouvelle zonation, concentrique;

- le mécanisme de l'ascosporogénése: rappelons ses caracteres originaux,

décrits récemment chez le 7. melanosporum (Parguey-Leduc et al., 1987a,

1988) et analogues à ceux déjà rapportés chez le Tuber aestivum (Janex-Favre

& Parguey-Leduc, 1976; Parguey-Leduc & Janex-Favre, 1977). Chez ces deux

espèces les ascospores sont délimitées individuellement au sommet de

Vasque, a partir de diverticules lomasomiens, et non a partir d'une vésicule

ascale, comme c'est le cas chez les autres Eu-Ascomycétes; ce mode de

différenciation rappelle le type d'ascosporogénése rencontré chez les Hémi-

Ascomycètes où les ascospores sont également formées indépendamment les

unes des autres, mais suivant des modalités différentes, mettant en jeu le dis-

que astérien:

- la structure de la paroi ascale: les deux couches qui la composent

classiquement n'ont pas la complexité de celles des autres Discomycétes,

Fig. 19 et 20 : détails d'asques immatures (microscopie électronique). Fig. 19, a et b:

formation et incorporation dans les vacuoles de masses denses aux électrons;

Fig. 20, a et b (technique de Thiéry): évolution de la paroi ascale. Echelle:

0,25m.

Fig. 19 and 20 : close up of nonmature asci (electron microscope). Fig. 19, a and b:

electron opaque bodies incorporating in clear vacuoles; Fig. 20, a and b

(Thiéry's technique); evolution of ascal wall. Scale: 0,25um.

Fig. 21 et 22 : sommets d'asques au moment de l'ascosporogénése (microscopie

a A d d Be g

électronique, technique de Thiéry). Fig, 21: asque plurinucléé; Fig. 22: jeunes

ascospores et noyaux probablement abortifs. Echelle: lum.

Fig. 21 and 22 : apical portion of ascus during ascosporogenesis (electron microsco-

pe, Thiéry's technique). Fig. 21: multinucleate ascus; Fig. 22: young ascospores

and likely abortive nuclei. Scale: lum.

Fig. 23-25 : sac postsporal et zonation concentrique dans un asque sub-adulte

(microscopie électronique). Fig. 23: vue d'ensemble; Fig. 24 (technique de

Thiéry): détail du sac postsporal et de ses masses globuleuses; Fig. 25: détail du

sac postsporal et de la paroi ascosporale. ec: ectospore; pa: paroi ascale; pe:

périspore; les fléches indiquent le sac postsporal. Echelle: lum.

Fig. 23-25 : postsporal membrane and concentric zonation in sub-adult ascus

(electron microscope). Fig. 23: general view; Fig. 24 (Thiéry's technique): close-

up of postsporal membrane with globular bodies; Fig. 25: close-up of

postsporal membrane and ascospore wall. ec: ectospore; pa: ascus wall; pe:

perispore; arrows point to the postsporal membrane. Scale: lum.

Source : MNHN. Paris

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORU

Source : MNHN. Paris

A. PARGUEY-LEDUC et al

Source

MNHN, Paris.

SPOROPHYTE ET ASQUES DU TUBER MELANOSPORUM 65

Source : MNHN, Paris

66 A. PARGUEY-LEDUC et al.

lichénisés ou non (Bellemére, 1975, 1977; Bellemére & Hafellner, 1982, 1983;

Bellemere et al., 1986a et b).

- la paroi ascosporale, complexe et ornementée (Parguey-Leduc et al.,

19872).

Certaines de ces particularités des asques des Tuber ont également été

trouvées chez divers Terfezia (Janex-Favre & Parguey-Leduc, 1985; Janex-

Favre et al., 1988), ce qui confirme l'originalité de ces deux genres hypogés

au sein des Discomycètes. Celle-ci ne se limite d'ailleurs pas aux caractères

ascaux mais porte également sur l'organisation de l'ascocarpe, avec notam-

ment l'absence d'un hyménium typique. Ceci incite à conserver, au moins

pour ces deux genres trés proches, l'ordre des Tubérales comme ordre dis-

tinct au sein des Discomycétes.

REMERCIEMENTS

Nous remercions B. DARCHEN (Station biologique des Eyzies), R. GLEIZE

(Valréas) et M. KULIFAJ (Université Paul Sabatier de Toulouse) qui nous ont ai-

mablement procuré les échantillons, ainsi que M. AVNAIM, J. BIDOUX, C.

FOURNIGAULT et N. JAMPSIN pour leur collaboration technique compétente et

amicale.

Avec le concours financier du Conseil Régional de Midi-Pyrénées (décision n°

86/005325/Déc.) auquel nous exprimons nos remerciements.

BIBLIOGRAPHIE

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ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

HARRINGTON T.C and COBB F.W., Jr, 1988 - Leptographium Root

Diseases on Conifers. St Paul, Minnesota, APS Press, 149p. (Sympo-

sium series).

La série des ouvrages rapportant le contenu des symposiums organisés

par la Société Américaine de Phytopathologie à l'échelle du continent nord-

américain vient de s'enrichir d'un mémoire sur les maladies racinaires des

coniféres, induites par des Leptographium. Les ouvrages de cette série se dis-

tinguent par un format réduit et un mode de reproduction directe de textes

dactylographiés. Le symposium sur ces maladies racinaires particulières s'est

tenu en 1985, suite à une recommandation faite en 1978 par le Comité de

Pathologie Forestière de la Société. A noter que les travaux imprimés en

1988 intègrent les observations publiées entre ces deux dates.

C'est à partir des années soixante que les champignons du genre

Leptographium, les entités génériques voisines et leurs téléomorphes, ont fait

l'objet d’un intérêt croissant de la part des phytopathologues forestiers, et

cela pour trois raisons principales. Ces dernières résultent, d'une part, de la

découverte de l'importance du rôle de pathogène majeur de ces champignons

à l'encontre de certaines espèces d'arbres forestiers en Amérique du Nord, et

des interactions écologiques particulières révélées par ces mêmes champi-

gnons avec divers insectes vecteurs. D'autre part, les téléomorphes et

anamorphes du groupe fongique Verticicladiella sensu lato présentent des

liens taxonomiques complexes qui ont entravé la recherche de solutions à

ces affections racinaires; cette situation se refléte dans la variabilité des

concepts génériques prévalants pour cet ensemble de champignons et qui

confirme la nécessité de poursuivre des travaux à caractère fondamental.

Les différents aspects des maladies racinaires des conifères sont cou-

verts dans ce petit ouvrage instructif qui aboutira à focaliser l'attention sur

les intriguants problèmes biologiques et théoriques posés par ces affections

complexes et les organismes associés à eux. Les six chapitres qui le compo-

sent traitent de la distribution des espèces de Leptographium, des hôtes et des

insectes vecteurs. On trouve aussi une synthèse de la biologie du L. wageneri

sur deux variétés de Pin et également de la biologie et évolution de la mala-

die racinaire tache noire du Sapin Douglas. Le quatrième chapitre traite des

espèces de Leptographium associées aux affections racinaires des conifères en

Colombie Britannique. Il est suivi par une étude du rôle pathogène deL.

procerum sur les Pins et une analyse des perspectives internationales des

Leptographium pathogénes des racines des coniféres. La bibliographie de

Source - MNHN, Paris

70 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

l'ensemble des travaux représente 240 titres, et est sans contexte exhaustive

pour les sujets abordés.

J. Mouchacca

PEARSON R.C. and GOHEEN A.C., 1988 - Compendium of Grape

diseases. St Paul, Minnesota, APS Press, 93p., 30 fig. trait, 188 fig. cou-

leur.

Ce compendium des Maladies de la Vigne est l'un des derniers nés

d'une série de manuels, parus sous l'égide de la Société Américaine de

Phytopathologie et consacrés aux maladies de certaines cultures agricoles ou

horticoles. Les mémoires précédents ont établit un style informatif

préemptoire, souvent de portée internationale, que l'on retrouve également

dans cet ouvrage. D'ailleurs, l'examen de l'importante liste des personnes

ayant participé, à des degrés divers, à la réalisation de ce Compendium,

confirme que ce manuel est la synthése des compétences de spécialistes origi-

naires de toutes les régions du monde oü se pratique la culture de cette

plante y compris la Chine et l'Australie.

L'ouvrage comporte une introduction traitant de la biologie de la vi-

gne, accompagnée de quelques notes préliminaires sur les pathogènes connus

et des informations, de nature historique, sur les liens existant entre ces der-

niers et cette plante particulière. La première section représente la majeure

partie de l'ouvrage; elle développe les maladies induites par des facteurs

biotiques: affections des divers organes de la vigne résultant de l'activité des

champignons, des bactéries et organismes affines, des virus et des nématodes.

La seconde concerne les dégâts provoqués par certains acariens et insectes.

Vient ensuite le chapitre des maladies ayant pour origine des facteurs

abiotiques, celui de l'impact des pratiques culturales sur les maladies de la

vigne et, enfin, une analyse des techniques de sélection des variétés et des

régles législatives définissant les caractéristiques respectives des cépages et

leur mode de propagation. Le Compendium se termine par un appendix

donnant les termes descriptifs anglais des maladies de la vigne en plusieurs

langues: francais, allemand, italien et espagnol, suivi d'un glossaire et d'un

index.

Dans les diverses sections, chaque maladie ou affection est décrite avec

précision par ses symptómes, avec indication de l'agent causal, des modalités

du cycle de l'affection, de son épidémiologie et des moyens de contróle de la

maladie; sont également fournies quelques références bibliographiques ma-

jeures. Des figures au trait des organismes responsables illustrent la plupart

des cas et ce type d'information se trouve largement conforté par un ensem-

ble de 188 figures en couleur regroupées en 28 pages au centre de l'ouvrage.

L'iconographie en couleur est, dans l'ensemble, d'excellente qualité.

Les caractéristiques de ce Compendium perpétuent la tradition de hau-

le qualité de présentation et de niveau scientifique révélée par les numéros

Source : MNHN. Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 71

précédents de cette série. Sans aucun doute, cet ouvrage sera largement et

pour longtemps consulté par tous les producteurs de raisins, les viticulteurs

et les industriels gravitant autour de la culture de la vigne et des produits

dérivés des raisins.

J. Mouchacca

CLARK C.A. and MOYER J.W., 1988 - Compendium of sweet potato

diseases. St Paul, Minnesota, APS Press, 74p.

Ce compendium de 74 pages, avec 74 photos en couleur et 53 fig., est

le résultat d'une grande coopération scientifique signalée dans la préface.

Aprés l'introduction résumant l'importance de la culture et des maladies de

cette plante, la lére partie de cet ouvrage est consacrée aux maladies infec-

tieuses bactériennes, puis fongiques: du sol (Sclerotinia, Rhizoctonia...),

foliaires (Alternaria, Cercospora, Phyllosticta, Septoria, Coleosporium, Spha-

celoma, Albugo..), des tubercules ( Ceratocystis, Sclerotium, Rhizoctonia,

Macrophomina, Streptomyces, Plenodomus (Phomopsis), Fusarium (diverses

espéces), Pythium, Phymatotrichum, Monilochaetes, Helicobasidium, Rhizopus,

Botryodiplodia, Diplodia, Diaporthe. Trichoderma, Penicillium, Botrytis...) Sui-

vent les maladies dues aux nematodes (Meloidogyne, Rotylenchulus,

Pratylenchus, Ditylenchus, Belonolaimus, Paratrichodorus...), et les viroses

(SPFMV, SPLV, SPMMV, SPYDV, SPCV...).

Parmi les désordres non infectieux (2ème partie), nous signalons les

mutations somatiques et leurs effets, les dégâts de l'environnement: eau,

température, soleil (trop ou trop peu), les dégâts des herbicides, les

déficiences et toxicité de nutrition (décrites par élément).

Toutes ces données sont exposées nettement, avec photo ou figure clai-

re, avec symptômes et cycle du pathogène, évolution de la maladie, de

l'épidémie et son contrôle. Elles sont complétées par une bibliographie sur

chaque maladie. Un glossaire et un index terminent ce compendium d'une

trés grande valeur pour les enseignants et pour les usagers de cette culture

Ch, Zambettakis +

WYLLIE T.D. and SCOTT D.H., 1988 - Soybean diseases of the North

Central Region. St Paul, Minnesota, APS Press, 149p.

C'est la contribution de plusieurs auteurs trés spécialisés dans les disci-

plines traitées qui donne la valeur de cet ouvrage pour les détails et les

nouveautés scientifiques: Barnes explique justement dans le ler chapitre

l'intérêt d'une telle composition interdisciplinaire des articles.

Abney & Polper analysent les derniéres données sur les maladies des se-

mences, Ferriss étudie leur épidémiologie, Henning les traitements. McGee

évalue les méthodes de contrôle, plus spécialement pour Phomopsis, tandis

Source : MNHN. Paris

72 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

que Hill analyse les recherches sur la détection des pathogènes, et que Sauer

conclue sur la valeur et la qualité des grains.

Les maladies de la plante sont commentées en général par Kennedy et

par Dunleavy. Plus spécialement, Smith & Backman étudient Diaporthe

phaseolorum (Phomopsis sojae), Grau: Sclerotinia sclerotiorum ( Whetzelinia),

Scott: le syndrome SDS, lié probablement au Pseudomonas, Schmitthenner:

Phytophthora megasperma f. sp. glycinea. Deux articles concernent les

Nematodes: Edwards et Niblack, pour Heterodera glycines. Un intérêt

spécial est donné à lanthracnose: Colletotrichum truncatum (Glomerella

cingulata) par Sinclair, et le complexe Diaporthe] Phomopsis par lè même au-

teur. La résistance est étudiće par Tachibana pour Phialospora gregata, par

Wyllie pour Macrophomina phaseolina tandis que Lockwood synthétise les

travaux permettant d'obtenir une résistance, au moins partielle, et de stopper

les épidémies.

Ces différents articles ne font pas un ensemble cohérent, mais donnent

les idées et les résultats personnels des chercheurs cités. A noter, une

intéressante bibliographie, riche de 572 références concernant les auteurs

américains, mais on peut regretter l'absence des recherches récentes

européennes.

Ch. Zambettakis +

PEDERBY J.F., 1987 - Penicillium and Acremonium. ^ Biotechnology

handbooks 1. NY & London, Plenum Press, 297 p.

Le but de la collection est de fournir l'information nécessaire pour sui-

vre l'évolution des connaissances des microorganismes utilisés dans les

biotechnologies et leur exploitation dans l'industrie d'aujourd'hui.

Ce manuel se propose de traiter deux genres de champignons:

Penicillium et Acremonium afin que l'utilisateur puisse à la fois identifier le

matériel sur lequel il travaille et trouver un guide pratique pour sa maitrise

et son exploitation. Ces deux genres, taxonomiquement assez éloignés, sont

regroupés dans l'ouvrage sur le critére de leur aptitude commune à produire

des métabolites proches et économiquement importants, les molécules beta-

lactame penicilline et cephalosporine. Le premier chapitre traite de la

taxonomie des Penicillium et Acremonium. 1 souligne l'intérét de procéder à

des identifications correctes et à l'étude rigoureuse du matériel biologique.

Les autres chapitres portent sur les aspects physiologiques, biochimiques et

génétiques des procédés où interviennent les genres en question.

Concernant les apports du chapitre 1, on peut douter que sous une for-

me à la fois si résumée et chargée de détails inutiles, un microbiologiste in-

dustriel ou universitaire puisse parvenir à une identification correcte. On ne

voit pas en particulier, de recommandations concernant la variabilité des

espéces, ni l'influence des milieux de culture pourtant si importants pour

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 73

une identification précise. Les facteurs morphogénétiques analysés et discutés

sont intéressants. Par contre les données écologiques sont sommaires puisque

limitées à la pathogénie et aux exigences trophiques de quelques espéces. Le

chapitre 3 traite de la génétique des Penicillium, en particulier P.

chrysogenum, d'une façon très résumée: mutations, recombinaisons

somatiques et RNA recombinant. On trouve d'intéressants commentaires sur

l'obtention de recombinants interspécifiques entre P. baarnense et P.

chrysogenum, obtenus par fusion de protoplastes, capables de synthétiser de

la penicilline. A propos de la génétique des Acremonium, les auteurs signa-

lent les difficultés de la manipulation de ce champignon dont les études re-

montent à une dizaine d'années. Ils analysent de façon détaillée comment on

peut isoler des mutants, le cycle parasexuel et la génétique de la production

de la cephalosporine C. Les chapitres 6 et 7 sont ceux qui correspondent le

mieux aux buts fixés par les éditeurs. Il y est traité de la biochimie et de

l'enzymologie associées aux voies de biosynthése de la penicilline et de la

cephalosporine. Les mécanismes d'action de la penicilline N synthétique et

l'ouverture enzymatique du cycle sont exposés. Les auteurs proposent aussi

quelques voies possibles pour la production artificielle des deux antibio-

tiques avec des chaines latérales autres que l'acide x aminoadipique. Dans le

chapitre 6 on trouve la liste des métabolites secondaires produits par les

Penicillium; les possibilités de biosynthése des Talaromyces et Eupenicillium

sont également abordées. Les auteurs établissent avec raison une relation trés

claire entre divers aspects de la biologie des Penicillium, les affinités

interspécifiques et les relations phylogénétiques à partir des origines

biosynthétiques des métabolites secondaires. Le chapitre 7 traite de l'aptitu-

de des Penicillium à produire des enzymes extracellulaires. L'utilisation de

ces activités et des enzymes immobilisés est suggérée en méme temps que le

développement de l'ingénierie génétique pour une nouvelle exploitation

économique de ces microorganismes.

Méme si les chapitres sont un peu disparates et donnent des exposés

forcément trés résumés des différents aspects des questions traitées, l'ouvrage

peut servir de base pour des chercheurs engagés dans la recherche sur ces an-

tibiotiques fameux.

L. Bettucci

BON M., 1988 - Pareys Buch der Pilze. Über 1500 Pilze Europas davon

1230 in Farbe. Hamburg und Berlin, Verlag Paul Parey, 362p., ill. col

(Übersetzt und bearbeitet von Till R. Lohmeyer).

Publié d’abord en anglais, puis presque simultanément en français et en

allemand, cet ouvrage est vite devenu indispensable à tous ceux qui, dans

toute la partie occidentale de l'Europe, souhaitent nommer leurs récoltes de

champignons. En effet, quels atouts ce nouveau guide mycologique ne

possède-t-il pas? Un format ‘de poche” très pratique, une présentation assez

aérée pour un contenu fort dense puisqu'on y trouve les descriptions de plus

Source : MNHN, Paris

74 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

de 1500 espéces et variétés, une illustration en couleurs abondante (prés de

150 planches), remarquable de fidélité et de fraicheur; par ailleurs, des

conseils judicieux, de multiples renseignements, évidemment des clés de

détermination ainsi que l'indication des noms scientifiques et de leurs

éventuels synonymes. Voilà de quoi étudier les champignons dans de trés

bonnes conditions !

Présentant en introduction les données essentielles à la compréhension

des textes, le livre offre également l'obligatoire chapitre sur les empoison-

nements fongiques, inséré de facon plutót inattendue entre l'explication sur

la formation des “boucles” et le glossaire des termes techniques. Ce dernier,

suivi de tableaux montrant les principales caractéristiques des basidiocarpes,

vient compléter l'exposé des notions qu'il est nécessaire de connaitre pour

une observation macro- et microscopique précise des champignons. En ou-

tre, un modele de fiche de récolte et de description donnera à chacun la

possibilité d'organiser valablement son herbier.

Des clés générales conduisent à la reconnaissance des différents groupes

tandis que d'autres, plus détaillées, permettent de distinguer les taxons de

rang inférieur à la famille. A la suite du rappel de leurs caractères fonda-

mentaux communs, les espéces, mentionnées sous le nom allemand ainsi que

sous la combinaison latine avec ses auteurs, font l'objet d'une analyse

lapidaire mais véritablement diagnostique, comportant souvent des remar-

ques inédites dues à la grande expérience mycologique de l'Auteur. Chaque

description est accompagnée du profil sporal et d'une représentation en cou-

leurs. Cette illustration a été réalisée spécialement pour l'ouvrage, avec toute

l'attention scientifique que demande une telle entreprise. C'est d'ailleurs là

l'occasion de constater la supériorité, dans ce style de livre, du dessin et de

Vaquarelle sur la photographie, en particulier lorsque cette derniére n'est pas

excellente ou ne révèle pas l'aspect en quelque sorte "idéal" des carpophores

d'une espéce.

On retrouvera, dans l'index qui compléte le Guide, les noms de toutes

les espéces examinées ou citées : communes ou plus rares, celles-ci se

répartissent chez les Bolets, Russules, Lactaires, Entolomes, etc., jusqu'aux

Lépiotes, Amanites, Gastéromycètes et Aphyllophorales, parmi les

Ascomycétes et méme les Myxomycétes. Les noms d'auteurs des appella-

tions latines sont indiqués en tenant compte des régles et recommandations

du Code International de Nomenclature Botanique. Toutefois, les

dénominations traditionnellement utilisées ont été signalées et cette

synonymie ne manque pas d'être appréciée. Bien sûr, il y a déjà eu - et il y

aura encore - des changements dans ce domaine : les éditions ultérieures in-

troduiront les modifications appropriées. D'un autre côté, on notera le soin

extrême qui a présidé à la correction des textes, faisant disparaître les co-

quilles relevées dans les versions anglaise et française où, en particulier, les

abréviations des noms d'auteurs sont parfois fantaisistes.

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 75

En bref, cet ouvrage renouvelle avec bonheur et sérieux la série des li-

vres consacrés aux champignons. Peut-être d'un accès un peu difficile pour

les débutants, il sera par contre le parfait vade-mecum de ceux qui ont déjà

quelque connaissance du monde fongique et souhaitent augmenter leur sa-

voir.

J. Perreau

DORFELT H., 1989 - Lexikon der Mykologie. Stuttgart, Gustav Fisher

Verlag, 432p., Spl. n. bl., 40pl. coul.

"Lexikon der Mykologie^ est un dictionnaire dans lequel le mycologue

averti ou méme amateur peut trouver non seulement les termes employés en

morphologie ou en systématique des champignons, mais encore ceux utilises

en phytopathologie, microbiologie, génétique, cytologie, écologie, physiolo-

gie et biochimie des champignons. Pour chaque terme expliqué et illustré

par des exemples et/ou des dessins, le domaine d'utilisation est mentionné.

Une bibliographie sélective des travaux les plus récents dans les différents

domaines de la mycologie compléte ce lexique.

MICHAEL E., HENNIG B. & KREISEL H., 1988 - Handbuch für

Pilzfreunde 6- ^ Grosspilze Europas. Bestimmungsschlüssel.

Gesamtregister der Band 1-5. Stuttgart, Gustav Fischer Verlag, 310p.

Ce sixième volume du manuel de mycologie édité par E. Michael, B.

Hennig et H. Kreisel est le dernier de l'ouvrage. Il contient donc la table des

matiéres des 5 premiers volumes. Les auteurs y ont ajouté des données

complémentaires: bréve histoire de la mycologie, clé des genres de champi-

gnons d'Europe, glossaire, liste des noms de genres reconnus et de leurs s.

nonymes avec le type et des renvois bibliographiques pour chacun, classifica-

tion des champignons et index des auteurs de taxons avec leurs abréviations.

Ce sixième volume vient donc très utilement compléter les 5 premiers.

SAMSON R.A, EVANS H.C. and LATGE J.P. 1988 - Atlas of

entomopathogenic Fungi. Berlin, Springer Verlag, I87p., 109pl., 16 fig.

Dans le domaine de la littérature scientifique, un “Atlas” est un ouvra-

ge constitue d'illustrations avec légendes. L'ouvrage de Samson et al. est cer-

tes, un très bel atlas de champignons entomopathogènes; il comporte aussi

plusieurs chapitres, de moindre extension, mais fort intéressants sur la biolo-

gie de ces champignons et leur utilisation.

Aprés l'historique de la connaissance du groupe, le chapitre 2 traite de

la taxonomie des principaux genres (51) avec bréve description de chacun

d'eux et références bibliographiques afférentes. A cette partie descriptive

succède une clef de détermination générique par groupe (Entomophtorales,

Ascomycota, Deuteromycota).

Source : MNHN. Paris

76 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

Le chapitre 3 (107 pages) constitue le corps de l'ouvrage: l'Atlas. 109

taxa y sont illustrés à raison de 4 photos par taxon. Ces photos, en noir et

blanc, prises au microscope optique, sont de bonne qualité mais de valeurs

inégales quant à l'aide à la détermination des champignons par un non

spécialiste. On connait bien la difficulté de faire des photographies d'orga-

nismes dont les filaments sont généralement groupés en textures compactes,

mais on regrette que quelques dessins au trait ne viennent pas expliciter les

photographies. Groupées en tête de l'ouvrage, une trentaine de photos en

couleur des champignons sur leurs hôtes sont beaucoup plus spectaculaires.

La pathologie des champignons vis-à-vis des insectes est abordée au

chapitre 4. Malgré l'état moins avancé des connaissances dans ce domaine

que dans celui des parasites des vertébrés, les données actuelles sur la

fixation des spores sur la cuticule, leur germination et leur pénétration à

l'intérieur de l'hôte sont exposées en même temps que les problèmes concer-

nant les réactions immunitaires, la résistance des hôtes, l'agressivité des sou-

ches, etc. L'écologie et la biologie des champignons entomopathogenes sont

étudiées (chapitre 5). tour à tour dans les écosystémes primaires (inexploités)

et les écosystèmes agricoles. Il s'agit de fort intéressantes considérations

générales (bibliographiques et personnelles) et d'observations au champ plus

que de données expérimentales. Après un exposé assez technique de la

biotechnologie de production des mycopathogènes (principalement des

spores), l'ouvrage se termine par un chapitre sur le contróle biologique. Les

auteurs y prennent le soin de préciser les définitions de termes couramment

employés. Ils distinguent ainsi le "contróle naturel^ oü les interactions

insecte-champignon se produisent sans intervention volontaire des hommes,

du "contróle biologique" faisant intervenir la manipulation des organismes.

La situation passée et actuelle, les résultats et les propositions pour l'avenir

y sont successivement évoqués.

Les informations concernant les champignons entomopathogènes

étaient jusqu'ici dispersées dans des revues spécialisées difficilement consul-

tables par des chercheurs de specialités différentes quoique dans le même

domaine, taxonomistes et biotechnologistes par exemple. Cet ouvrage a le

mérite de réunir des données provenant d'horizons trés disparates; il consti-

tue un bilan qui intéressera non seulement les agriculteurs, les

biotechnologistes, les entomologistes mais aussi les scientifiques de terrain

ou de laboratoire pour lesquels il constituera un guide d'identification. Ou-

tre des considérations personnelles, originales, des spécialistes qui ont

participe à la rédaction de cet "Atlas", on apprécie la richesse de la biblio-

graphie (460 références) sur tous les aspects abordés.

M.F. Roquebert

Source : MNHN, Paris

TA,

INSTRUCTIONS AUX AUTEURS

D'une facon générale, la revue peut publier tous les travaux apportant une in-

Tormation fondamentale nouvelle, au plan de la systématique ou de la Biologie des

Champignons. Le Comité de Lecture pourra susciter la rédaction d'articles de

synthése sur un sujet donné, ainsi que des mises au point bibliographiques

périodiques.

Les manuscrits proposés à CRYPTOGAMIE, Mycologie, doivent être fournis

en double exemplaire, dactylographiés à double interligne, sans rature ni surcharge.

Outre la langue française, la revue accepte les articles rédigés en langue anglaise, al-

lemande, espagnole. Chaque manuscrit devra comporter:

- le titre de l'article, dans la langue du manuscrit, et sa traduction en anglais;

- le titre courant (haut-de-page) de 50 signes au maximum;

- le nom et les prénoms des auteurs et leurs adresses;

- deux résumés, l'un dans la langue du manuscrit, l'autre en francais ou en anglais,

d'environ 180 mots ou 15 lignes, faisant ressortir les résultats essentiels exposés dans

l'article;

- des mots-clés qui seront sélectionnés par le Comité de Lecture;

- des légendes explicites des figures, planches et tableaux dans la langue du manus-

crit et en anglais (ou français);

- une liste bibliographique par ordre alphabétique des auteurs et chronologique par

auteurs sans tenir compte des auteurs secondaires. Les titres des périodiques devront

étre abrégés suivant le B-P-H (Botanico-Periodicum-Huntianum, Pittsburg: Hunt

Botanical Library, 1968), les ouvrages cités selon F.A. Stafleu £ R.S. Cowan, 1976-

.. Taxonomic literature. Ed. 2 Utrecht/Antwerpen: Bohn, Scheltema & Holkema

(Regnum vegetabile 94, 98, 105, 110...). Les références suivront les modèles suivants:

PATOUILLARD N., 1881 - Sur l'appareil conidial de Pleurotus ostreatus.

Bull. Soc. Bot. France 27: 125.

HEIM R., 1957 - Les champignons d'Europe. Paris, Boubée et Cie, 2: 571 p.

MANDELS G.P., 1965 - Kinetics of fungal growth. /n : G:C. AINSWORTH

& A.S. SUSSMAN, The fungi. N.Y. & London, Academic Press, I: 599-612.

TEXTE. - La présentation du texte devra faire apparaitre clairement ses subdi-

visions et leur hiérarchie, ainsi que le début des paragraphes (- insérer une ligne

blanche avant les titres et sous-titres; - faire un alinéa de plus de 3 caractères au

début de chaque paragraphe: - supprimer toute ligne blanche entre deux paragraphes

et aprés les titres et sous-titres). Les renvois à la liste bibliographique se feront par le

nom de l'auteur et l'année de publication (utiliser ‘et al.” lorsque l'article est signé

par plus de deux auteurs) et non par les renvois numériques. Les notes

infrapaginales sont à éviter. La place des illustrations devra être indiquée dans la

marge.

ILLUSTRATIONS. - Toutes les illustrations, y compris les tableaux, doivent

être des originaux de qualité suffisante pour la reproduction directe en offset. Elles

devront comporter les échelles (les grandissements x ... sont prohibés), les symboles

nécessaires à leur compréhension, et être numérotées dans l'ordre d'appel dans le tex-

te. Les tableaux devront être dactylographiés clairement, Sans rature ni surcharge,

en s'assurant de la qualité de la frappe. Les documents photographiques doivent être

montés par planches. Les dimensions des originaux ne devront pas excéder le triple

de celle de leur reproduction définitive (justification de la revue: 11,5 x 17,5em) et les

Source

MNHN. Paris

INSTRUCTIONS AUX AUTEURS

auteurs choisiront l'épaisseur des traits et la taille des caractéres en fonction de la

réduction éventuelle.

CRYPTOGAMIE, Mycologie, accepte les textes en mode ASCII sur disquettes

3"1/2 ou 5” 1/4 de micro-ordinateur (IBM, IBM compatible et MacIntosh). Ils doi-

vent être impérativement conformes aux instructions suivantes:

- ne pas utiliser de codes spéciaux de mise en page ou de format (gras, italiques, cen-

trage, etc.);

- ne pas couper les mots;

- ne pas justifier à droite;

~ les mots (ou les groupes de mots) qui doivent apparaître en italiques lors de l'im-

pression devront être encadrés par un des caractères suivants: #, £, S.

~ ne pas insérer de code de fin de page;

corrigé selon les avis du Comi

déposer le matériel type (échantillon sec ou culture) dans un herbier offici

(Paris, Cryptogamie), CAB-IMI (Kew

gnées d'une copie sur papier comportant le texte final

6 de Lecture, seront adressées à la Rédaction.

Les disquettes, accomp:

Les tirages á part sont á la charge des auteurs.

Conformément à la règle, les auteurs décrivant une espèce nouvelle doivent

: P.

ou unc collection de souches: L.C.P.

Surrey

(Lab. Cryptogamie, Paris), CAB-IMI, C.B.S. (Barn, Hollande), etc.

BIBL.DU

MUSEUM

PARIS

Commission paritaire n» 58611

Dépôt légal n° 14986 - Imprimerie de Montligeon

Sortie des presses le 20 mars 1990

y Imprimé en France

Éditeur : A.D.A.C. (Association des Amis des Cryptogames)

Président : A. Couté; Secrétaire : D. Lamy

Trésorier : R. Baudoin; Directeur de la publication : H. Causse

Source : MNHN, Paris.

CRYPTOGAMIE — MYCOLOGIE

BUREAU DE RÉDACTION

MM. DURRIEU G., pour les articles traitant d'Écologie et de Phytopathologie

Laboratoire de Botanique, Faculté des Sciences,

Allées Jules Guesde, 31 000 Toulouse (France).

JOLY P., pour les articles traitant de Systématique

Laboratoire de Cryptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle

12, rue de Buffon, 75005 Paris (France).

MANACHERE G., pour les articles traitant de Physiologie

Laboratoire de Mycologie, Université de Lyon I,

43, Bd du 11 Novembre 1918, 69622 Villeurbanne Cedex (France).

Mmes ZICKLER D., pour les articles traitant de Cytologie

Laboratoire de Génétique, Université de Paris Sud,

Bát. 400, Centre d'Orsay, 91405 Orsay (France).

ROQUEBERT M.F., s'occupera des autres spécialités.

Laboratoire de Cryptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle

12, rue Buffon, 75005 Paris (France).

COMITÉ DE LECTURE

BOIDIN J., Lyon (France) MONTANT Ch., Toulouse (France)

CHEVAUGEON J., Orsay (France) MOREAU Cl., Brest (France)

GAMS W., Baarn (Hollande) PEGLER D.N., Kew (Grande-Bretagne)

HENNEBERT G., LouvainlaNeuve SUTTON B., Kew (Grande-Bretagne)

(Belgique) TURIAN G., Genéve (Suisse)

LACOSTE L., Paris (France)

Les manuscrits doivent étre adressés (en 2 exemplaires) directement à

un membre du Bureau de Rédaction, choisi pour sa spécialité. Le Bureau

peut demander l'avis d'un lecteur choisi pour sa spécialité, méme s'il n'ap-

partient pas au Comité de lecture.

Bien qu'étant avant tout une revue de langue française, les articles

rédigés en Anglais, Allemand et Espagnol sont acceptés.

Les recommandations aux auteurs sont publiées dans le ler fascicule de

chaque tome.

Source : MNHN. Paris