CRYPTOGAMIE

er

TOME 12 Fasc

SOMMAIRE

CONTU. - Studi sulle Lepiotaceae - | Alcune note sul genere

А Heinem. in Sardegna ... т А

T.T.T. PHAM, A.-M. SLEZEC and E. ODIER -

Dichomitus squalens (Karst) Reid . 13

A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY - Etude ultrastructurale de

Tuber melanosporum Vitt. en culture isolée et en association avec

des vitroplants de Quercus (Q. robur et Q. pubescens). . 25

J.C. PARGNEY - Cytochimie ultrastructurale des interfaces présentes

dans lassociation ectomycorhizienne Tuber PRONTI Vitt./

Corylus avellana L. 47

M.M.K. BAGY and A.Y. ABDEL-MALLEK - гав on the hair of

small mammals in Egypt .. 63

BS. SHARMA, V.N. PATHAK and K. BHATNAGAR -

Morphological, cultural and pathogenic variations in Sclerotium

rolfsii Sacc. causing root rot of sugarbeet ... E È 71

Analyses bibliographiques ............- 81

Instructions aux auteurs .... 85

CONTENTS

M. CONTU - Study of Lepiotaceae - 1 Some note about genus

Sericeomyces Heinem. in Sardinia (in Italian) 1

T.T.T. PHAM, A-M. SLEZEC and E. ODIER - Fruiting in

Dichomitus squalens (Karst) Reid . 13

A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY - Ultrastructural study of

Tuber melanosporum Vitt. in pure culture associated with Quercus

(0. robur and Q. pubescens) vitroplants (In French) ..... 5225

J.C. PARGNEY - Ultrastructural cytochemistry of different interfaces

in the ectomycorrhizian association Tuber melanosporum bus

Corylus avellana L. (In French) . T 47

M.M.K. BAGY and A.Y. ABDEL-MALLEK - Fungi on the hair of

small mammals in Egypt i 63

B.S. SHARMA, V.N. PATHAK and K. BHATNAGAR -

Morphological, cultural and pathogenic variations in Sclerotium

rolfsii Sacc. causing root rot of sugarbeet Ез 71

Bibliography 81

Instructions to the authors .... 85

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIIE

MYCOLOGIE

TOME 12 Fascicule 1 1991

Ancienne Revue de Mycologie. Dirigée par Roger HEIM

В DIRECTEUR SCIENTIFIQUE : Madame J. NICOT

SECRÉTAIRE DE RÉDACTION : Mme M.-C. BOISSELIER. ÉDITEUR : A.D.A.C.

Publié avec le concours du Muséum National d'Histoire Naturelle

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE est indexé par : Biological Abstracts, Current Contents,

Publications bibliographiques du CDST (Pascal).

Copyright © 1991. CRYPTOGAMIE, Mycologie

SIBL DU} Bibliothèque Centrale Muséum

\ US /

\ PARIS

3 3001 00226868 7

Source : MNHN, Paris

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1991, 12 (1): 1-12 1

STUDI SULLE LEPIOTACEAE - 1 ALCUNE NOTE SUL

GENERE SERICEOMYCES HEINEM. IN SARDEGNA

Marco CONTU

via A. Manzoni, 33. 09128, Cagliari. Italia

ABSTRACT - Nine species of Sericeomyces are reported from Sardinia: S. cylindros-

porus Contu spec. nov. ad int., S. erioderma (Mal.) Contu comb. nov., S. mediofla-

voides (Bon) Contu comb. nov., S. menieri (Sacc.) Contu comb. nov. serenus (Fr.)

Heinem., S. sericatellus (Mal.) Bon, S. sericeus (Cool) Contu comb. nov., S. subglo-

bisporus Contu spec. nov. and S. subvolvatus (Mal. & Bert.) Contu comb. nov. An

emendation of the genus is proposed and a key to the species occurring in Sardinia is

given.

RÉSUMÉ - Neuf espéces de Sericeomyces sont signalées de Sardaigne: S.

cylindrosporus Contu spec. nov. ad int., S. erioderma (Mal. Contu comb. nov., S.

medioflavoides (Bon) Contu comb. nov., S. menieri (Sacc.) Contu comb. nov., S.

serenus (Fr.) Heinem., S. sericatellus (Mal) Bon, S. sericeus (Cool) Contu comb.

nov., S. subglobisporus Contu spec. nov. et S. subvolvatus (Mal. & Bert.) Contu

comb. nov. Ün amendement du genre est proposé et une clé pour les espèces crois-

sant en Sardaigne est fournie.

MOTS CLÉS : Basidiomycetidae, Agaricales, Lepiotaceae, Sericeomyces, taxonomie,

Sardaigne.

INTRODUZIONE

Prima di essere riunite nel nuovo genere Sericeomyces Heinem. (1978:

401) le piccole lepiote gravitanti attorno a ‘Lepiota serena (Fr) Sacc.”

avevano vissuto un intenso travaglio tassonomico. Infatti Fries (1821) le

pose in una sezione Annulosae Fr. della suddivisione infragenerica Lepiota

Pers. mentre Kithner (1936) propose per esse la nuova sezione Sericellae, poi

abbandonata a profitto della sezione Annulosae (Kühner & Romagnesi,

1953). Il collocamento nel genere Lepiota sensu largo delle Sericellae non fu

avvallato da Locquin (1952) il quale, anche sulla scorta di alcune

considerazioni di Singer (1951), preferì assegnare queste specie all’emendato

genere Pseudobaeospora Sing., soluzione subito accolta, fra gli altri, da

Singer (1975) e Moser (1978) ma respinta da Horak (1964) e Bon & Boiffard

(1974). Ad avviso di questi due ultimi Autori L. serena e specie vicine

sarebbero meglio collocate nel genere Leucoagaricus Locq. ex Sing. Рег

risolvere questo intricato problema sistematico, i cui termini sono stati

Source . MNHN, Paris

2 М. CONTU

diffusamente esposti, fra gli altri, da Kühner (1980), Heinemann (1978, cit.)

ha proposto l'istituzione del nuovo genere Sericeomyces, il quale ha

incontrato il favore di Singer (1986) e Moser (1983), oltre che di diversi altri

Autori, mentre Bon (1981) ha preferito riconoscergli il rango di mero sotto-

genere di Leucoagaricus. A me pare, tenuto conto anche di quanto

sostenuto da Kühner (1980) a proposito dell'inserimento di Lepiota serena in

Pseudobaeospora Sing., che la scelta sistematica di quegli Autori che

vogliono le Sericellae separate in un apposito raggruppamento sia, allo stato

attuale delle conoscenze sulla sistematica degli imenomiceti lepiotoidi,

accettabile senza troppe difficoltà. E' chiaro che, a questo punto, il

problema consiste soprattutto nella scelta del rango tassonomico piü

naturale (sezione, sotto-genere o genere). A giudicare dai caratteri macro e

micromorfologici sembra indubbio che il complesso in esame sia piü vicino

a Leucoagaricus piuttosto che a Lepiota stricto sensu, se la sistematica di AA

come Singer (1975) e Bon (1981) è accettata. Tuttavia il genere Leucoagaricus

comprende, almeno per la maggior parte, specie dotate di un rivestimento

pileico a struttura manifestamente tricodermica fino a subpalissadica mentre

è noto che la cuticola di Lepiota serena e specie vicine è una cutis di ife

subparallele o intrecciate (solo in alcune entità essa può essere d'aspetto

subtricodermico, vedi, in proposito, infra), non di rado sormontata da una

ixocutis di ife molto gracili. Questo carattere è molto atipico per i

Leucoagaricus e sembra raro anche fra le rimanenti entità appartenenti al

vasto complesso degli imenomiceti lepiotoidi. Esso sembra ben giustificare

una separazione al rango generico, specie se unito ad altri caratteri peculiari

come habitus dei carpofori, metacromasia dell'endosporio sporale, etc. Va

peró sottolineato che quest'ultimo particolare non va sopravvalutato, in

quanto presente anche in diversi altri generi come Lepiota sez. Lepiota (=

Macrolepiota), Leucoagaricus е ^ Leucocoprinus, principalmente. La

combinazione dei caratteri indicata da Heinemann (1978) mi pare quindi

giustifichi il riconoscimento del complesso Sericellae nel nuovo genere

Sericeomyces, il quale ha come specie-typus la Lepiota serena sensu Kühner

(1936: 213) ed ha il pregio di dare uniformità al genere Leucoagaricus il

quale deve essere ristretto a specie dotate, dal punto di vista strutturale, di

una cuticola realmente tricodermica o subpalissadica.

La presente nota costituisce una studio preliminare sull'ecologia e la

tassonomia delle specie del genere Sericeomyces Heinem. in Sardegna. Le

notizie sulla diffusione nell'Isola degli imenomiceti lepiotoidi in genere sono,

allo stato attuale, ancora troppo scarne e, nel caso del genere in oggetto,

quasi del tutto assenti. E” di tutta evidenza, pertanto, la necessità di studi

floristici specifici, da condurre sulla base delle risultanze della moderna

letteratura. La chiave per la determinazione delle specie studiate, che di

seguito viene proposta, va considerata come ancora provvisoria poiché la

possibilità di reperimento di ulteriori membri del genere non puó essere del

tutto esclusa.

Il materiale studiato, per la quasi totalità raccolto dall'autore della

presente nota, si trova conservato nell’Herbarium Mycologicum

Caralitanum, Istituto ed Orto Botanico dell'Università di Cagliari (CAG).

La nomenclatura utilizzata segue Heinemann (1978) e Bon (1981).

Source : MNHN. Paris

STUDI SULLE LEPIOTACEAE 3

PARTE TASSONOMICA

SERICEOMYCES Heinemann, Bull. Jard. Bot. Natl. Belgique 48: 401, 1978.

Lepiota sez. Sericellae Kithner ex Wasser, Ukraijn. Bot. Zurn. 35: 517, 1978

- Leucoagaricus sez. Sericelli (Kühner) Bon & Boiffard, Doc. Mycol. (Lille)

24: 44, 1976 (nom. inv.) - Pseudobaeospora Singer emend. Locquin, Bull. Soc.

Mycol. France 68: 169, 1952 - Leucoagaricus subgen. Sericeomyces (Heinem.)

Bon, Doc. Mycol. (Lille) 43: 51, 1981.

Imenomiceti lepiotoidi a portamento gracile o medio, colorazioni

biancastre, con anello, senza volva, spore bianche, destrinoidi o amiloidi,

metacromatiche in Bleu di Cresile, lisce, rivestimento pileico composto da

ife parallele, subintrecciate o leggermente rialzate, senza sferociti, sovente

con ixocutis; giunti a fibbia assenti.

Species-typus: Lepiota serena (Fr.) Sacc. sensu Kühner non J. Lange.

Chiave delle specie osservate in Sardegna:

la basidi 2 sporici, spore subfusiformi lunghe oltre 10ym....... S. sericatellus

lb basidi 4 sporici, spore raramente lunghe oltre 104m.. 2

2a rivestimento pileico ad ife confuse e parzialmente erette. 3

2b rivestimento pileico ad ife coricate, parallele o intrecciate ...... 4

3a nelle dune sabbiose, spore 7-9 x 4.5-Sum, cheilocistidi fusiformi

.S. menieri

3b in località erbose, spore 6.5-8 x 4.5-Sum, cheilocistidi clavati m

S. erioderma

4a spore da ета a subconiche

4b spore da ellipsoidi a ellisso-ovoidi......

Sa cheilocistidi fusiformi o lageniformi, spore 7-9 x 3.5-4.5um .... S. sericeus

5b cheilocistidi clavati a sommità sovente incrostata di cristalli.. ро

6a cappello bianco con centro giallo, spore 6-7.5 x 4-4.5um, ا‎ a

sommita non incrostata ... 75 peta

66 cappello bianco puro o con centro un poco ocraceo, spore 6-8.5

3.5-4.5um, cheilocistidi incrostati alla sommità. S. serenus

Ta spore subglobose 6.7-9 x 6-6.7um, cheilocistidi lageniformi

E

7b spore allungate, da ellissoidi a ellisso-ovoid

Sa spore 7-9 x 4.5-6.5um, ellisso-ovoidi, Be: robusta e P con

gambo a base bulbosa marginata ... È S. subvolvatus

8b spore 8-12 x 4-7um, ellisso-subcilindriche, specie SE a gambo corto

à base ingrossata.. ........ S. cylindrosporus

1. Sericeomyces sericatellus (Malengon apud Malengon & Bertault) Bon, Doc.

Mycol. (Lille) 75: 58, 1989.

= Lepiota sericatella Mal. apud Mal. & Bert., Fl. Champ. Sup. Maroc

1: 150, 1970 - Sericeomyces sericatus var. sericatellus (Mal.) Heinem., Bull.

Source : MNHN. Paris

4 М. CONTU

Jard. Bot. Natl. Belgique 48: 404, 1978 - Leucoagaricus sericatellus (Mal.) Bon,

Doc. Mycol. (Lille) 35: 40, 1979 - Pseudobaeospora sericatella (Mal.) Moser

apud Gams.

Materiale studiato: Sardegna meridionale, prov. Cagliari, Mostra

micologica della Società Micologica Sarda, 3.xii.1989, S.M.S.

Questa entità si riconosce agevolmente, dal punto di vista

micromorfologico in quanto sembra l’unica del genere, in Sardegna, a

possedere basidi bisporici. Malengon (1970, cit.) e Bon (1981: 51-52) пе

fanno un'entità autonoma (e con loro, fra gli altri, Moser, 1986) mentre

Heinemann (1978: 404) sostiene che si tratta di una forma bisporica del suo

^S. sericatus" ( — S. sericeus nella presente trattazione). Sembra che, ad avviso

di Bon (1981: 52), l'elemento discriminante fra le due specie sia dato dalla

morfologia delle ife della trama lamellare, apprezzabilmente più larghe in S.

sericatellus. Si tratta di una specie rara in Sardegna, tipica di località erbose

al di fuori dai boschi.

2. Sericeomyces menieri (Sacc.) Contu, comb. nov.

Basionimo: Lepiota menieri Saccardo, Syll. Fung. 9: 4, 1891.

= Lepiota arenicola Menier, Bull. Soc. Mycol. France 5: 174, 1889 non

L. arenicola Peck 1888 - Leucoagaricus arenicola (Menier) Bon & Boiffard,

Bull. Soc. Mycol. France 88: 21, 1972 (nom. inv.) - Leucoagaricus menieri

(Sace.) Sing., Mycopathol. Mycol. Appl. 34: 431, 1968 sensu Auct. pl. non

Singer.

Specie classica, riconoscibile facilmente, oltre che per l'habitat, anche

per i cheilocistidi fusiformi. Bon & Boiffard (1972) e Bon (1981) utilizzano

per essa il binomio “Leucoagaricus arenicola” ma, purtroppo, lo stesso è

invalido poiché basato sull'illegittimo “Lepiota arenicola” Menier 1889 non

Peck 1888. Dovrebbe dunque essere adottato il nuovo nome proposto a suo

tempo da Saccardo (1891: 4), che Singer ha trasferito a Leucoagaricus (cfr.

sopra) ma, secondo i dati in mio possesso, basandosi su una specie che pare

differente da quella originariamente intesa da Menier. Nella mia raccolta le

spore avevano un profilo meno ovoidale di quello evidenziato da Bon &

Boiffard (1972, fig. 2, in basso).

3. Sericeomyces erioderma (Malençon apud Malençon & Bertault) Contu, comb.

nov.

Basionimo: Lepiota serena var. erioderma Mal. apud Mal. & Bert., Fl.

Champ. Sup. Maroc 1: 147, 1970.

= Sericeomyces serenus var. "eriodermus” (Mal.) Heinem., Bull. Jard.

Bot. Natl. Belgique 48: 403, 1978 - Leucoagaricus erioderma (Mal.) Bon, Doc.

Mycol. (Lille) 43: 53, 1981.

Materiale studiato: Sardegna meridionale, prov. Cagliari, Cagliari-città,

Orto Botanico dell'Università, in un'aiuola, su terreno erboso, 5.xii.1989, M.

Contu.

Source : MNHN. Paris

STUDI SULLE LEPIOTACEAE Di

1-3: 5. erioderma, 1: carpoforo, 2: spore, 3: cheilocistidi. Fig

indrosporus, 4: carpofori, 5: spore. Fig. 6-8 ubglobisporus sp. nov., 6:

carpoforo, 7: cheilocistidi, 8: spore. Fig. 9-11: S. medioflavoides, 9: carpofori,

10: cheilocistidi, 11: spore. Disegni di M. Contu.

Dopo aver studiato attentamente alcuni esemplari di questa entità,

originariamente descritta da Malenson come varietà di “Lepiota serena”

(Malençon apud Malengon & Bertault, 1970, cit.), convengo con Bon (1981,

cit.) sull'opportunità di elevarla al rango specifico. In effetti S. erioderma si

caratterizza per la taglia gracile, il cappello bianco con centro tipicamente

grigio-cenere e per l'anello ampio e persistente. Microscopicamente ho

potuto osservare delle spore ellissoidi a membrana molto rigonfiabile in

NH; ed a parete congofila in modo accentuato, caratteri che coincidono

perfettamente con quelli indicati da Bon (1981: 53). L'unica differenza di

rilievo era data dalla presenza di incrostazioni alla sommità di diversi

cheilocistidi ma questo carattere, secondo la mia opinione, non può essere

giudicato eccessivamente importante dato che non risulta costante neppure

Source : MNHN. Paris

6 M. CONTU

nelle specie per le quali viene indicato come tale. La presenza di un

rivestimento pileico a struttura subtricodermica sembrerebbe un’ostacolo ad

una completa assimilazione di S. erioderma al genere Sericeomyces ma

drovrebbe essere osservato che la disposizione delle ife della cuticola di 5.

erioderma non sembra assimilabile al vero e proprio tricoderma che

caratterizza i tipici Leucoagaricus (ad es.: L. carneifolius, pilatinus, etc.). Lo

stesso Heinemann del resto (Heinemann, 1978: 403) considera questa specie

come un vero Sericeomyces, considerandola, tuttavia, come Malengon, una

varietà di S. serenus.

4. Sericeomyces sericeus (Cool) Contu, comb. nov.

Basionimo: Lepiota cristata var. sericea Cool, Meded. Ned. Mycol.

Vereines 12: 24, 1923.

= Lepiota sericea (Cool) Huijsman, Meded. Ned. Mycol. Vereines 28:

46, 1943 non L. sericea Massée 1912 - Pseudobaeospora sericifera Locquin,

Mycol. France 68: 169, 1952 - Lepiota sericifera (Locq.) Locquin,

Friesia 5: 294, 1956 - Lepiota sericata Kühner & Romagnesi, Fl. Anal.

Champ. Sup.: 405 (nom. inv.) - Sericeomyces sericatus (Kühn. & Romagn.)

Heinem., Bull. Jard. Bot. Natl. Belgique 48: 404, 1978 (nom. inv.) -

Leucoagaricus sericeus (Cool) Bon & Boiffard, Doc. Mycol. (Lille) 35: 40,

1979.

Materiale studiato: Sardegna meridionale, prov. Cagliari, dintorni di

Capoterra, 3.xii.1989, M. Contu 89/446.

La situazione nomenclaturale di questo taxon è, come potrà notarsi

dalla congerie di nomi riportata in sinonimia, piuttosto complessa. Il

binomio scelto è, comunque, quello adottato da Bon & Boiffard (1979, cit.)

i quali hanno studiato materiale olandese. S. sericeus è il capostipite di un

gruppo di piccole specie bianche caratterizzate dai cheilocistidi a profilo

lageniforme. All'interno di questo gruppo esso risulta abbastanza

comodamente determinabile a causa delle spore subfusiformi. In Sardegna si

raccoglie, ma raramente, in località erbose aperte, a volte anche nella radure

erbose delle pinete litorali.

5. Sericeomyces medioflavoides (Bon) Contu, comb. nov.

Basionimo: Leucoagaricus medioflavoides Bon, Doc. Mycol. (Lille) 24:

44, 1976.

Materiale studiato: Sardegna centro-meridionale, prov. Cagliari,

dintorni di S. Sperate, in un prato, M. Contu, 4.xii.1988.

Bon ha descritto questa specie sulla base di raccolte fatte in Germania.

S. medioflavoides si riconosce per la taglia gracile, il cappello e la base del

gambo con toni giallastri, le piccole spore amigdaliformi ed i cheilocistidi

clavati. Recentemente Grilli (1990: 3-10) ha descritto un "Leucoagaricus

medioflavoides var. deceptivus Grilli” differente dal tipo per la taglia più

slanciata, il rivestimento pileico viscido, le lamelle subcollariate e le spore

maggiori (fino a 8.8 x 4.2um). A mio avviso questa potrebbe essere

addirittura una buona specie ma, fino ad ora, nessuna raccolta dalla

Source - MNHN. Paris

STUDI SULLE LEPIOTACEAE 7

Sardegna mi è nota. Gli esemplari da me studiati differivano dal tipo solo

рег le spore di taglia maggiore ma nel resto erano macro e

micromorfologicamente identici. Come buona parte delle entità congeneri S.

medioflavoides vegeta, in Sardegna, in località erbose e fuori dai boschi, ha-

bitat differente da quello indicato nella descrizione originale, ma non

inusuale per una specie del genere.

6. Sericeomyces serenus (Fr.) Heinem., Bull. Jard. Bot. Natl. Belgique 48: 403,

1978.

= Agaricus serenus Fries, Hymenomyc. Eur: 38, 1874 - Lepiota serena

(Fr) Sacc., Syll. Fung. 5: 52, 1887 - Pseudobaeospora serena (Fr.) Locquin,

Bull. Soc. Mycol. France 68: 169, 1952 - Leucoagaricus serenus (Fr.) Bon &

Boiffard, Bull. Soc. Mycol. France 90: 301, 1974.

Materiale studiato: Sardegna centrale, prov. Oristano, Monte Arci,

loc."Acquafredda”, in un prato, 1.x.1989, M. Contu 89/157.

L'elemento caratterizzante questa specie è dato dalla forma clavata dei

cheilocistidi i quali, nelle mie raccolte, presentavano la sommità incrostata

di cristalli amorfi. Le forme a centro del cappello giallastro possono

facilmente essere confuse con S. medioflavoides il quale, tuttavia, ha spore

usualmente minori e cheilocistidi a sommità priva di incrostazioni. S.

serenus sembra essere solo il capostipite di un complesso di specie che sono

state studiate, nelle regioni mediterranee, principalmente da Malengon &

Bertault (1970).

7. Sericeomyces subglobisporus Contu, spec. nov.

Pileus 1.3-2.5cm latus, haud carnosus, explanatus, in medio depressus,

haud umbonatus, sericeus, albus, ad medium leviter flavus, striis destitutus.

Lamellae confertae, tenues, libero-collariatae, haud ventricosae, albae et

immutabiles, acies concolor. Stipes 3-4.5 x 0.3-0.5ст, cylindraceus vel

subclavatus, glaber, pileo concolor, sericeus. Annulus persistens, superus, albus,

exstriatus. Caro fragilis, incospicua, alba; inodora et insapora. Sporarum pulvis

alba. Sporae 6.7-9 x 6-6.7um, hyalinae, dextrinoideae, endosporium in azureo

cresylico metachromaticum, globosae vel subglobosae vel late ovoideae,

apiculatae, leves, mono-guttatae, poro destitutis. Basidia 22.5-33 x 9.7-11.2ит,

tetraspora, clavata, sine fibula basalis. Subhymenium cellularis. Pleurocystidia

nulla. Cheilocystidia 20.2-46.5 x 9-12.7um, lageniformia vel subfusiformia,

pedunculata, ad apicem saepe levissime incrustatae. Pilei cutis ex hyphis

cylindraceis intertextis constituta, suprapellis in ixocute efformata. Fibulae

nullae. Habitatio in herbidis locis pinetorum littoraneis, sat rara. Autumno.

Typus: Sardinia meridionalis, prov. Caralis, ad locum vulgo dictum

“Villasimius”, 27.xi.1989,M. Contu 89/362 (CAG).

Cappello 1.3-2.5cm, poco carnoso, spianato, depresso al centro, non

umbonato, margine non striato, non cannellato e privo di resti di velo;

Cuticola secca, glabra, nuda, sericea, bianca, verso il centro con lievi

sfumature giallastre. Lamelle sottili, strette, piuttosto fitte, libere, con

evidente collarium, bianche, immutabili. Gambo 3-4.5 x 0.3-0.Scm, cilindrico

o subclavato, talora sfinato verso la base, glabro, liscio, sericeo, concolore al

Source . MNHN. Paris

8 M. CONTU

cappello; farcito. Carne esigua, fragile, bianca, immutabile; odore e sapore

nulli.

Sporata bianca.

Spore 6.7-9 x 6-6.7um, ialine, destrinoidi, metacromatiche, globose о

subglobose, alcune largamente ovoidali, con una grande goccia oleosa cen-

trale, apicolo evidente, lisce. Basidi 22.5-33 x 9.7-11.2um, tetrasporici,

clavati, senza fibbia basale. Subimenio cellulare. Pleurocistidi assenti.

Cheilocistidi 20.2-46.5 x 9-12.7um, lageniformi o subfusiformi, peduncolati,

a parete sottile, sommità leggermente incrostata di cristalli (forse sabbia?).

Rivestimento pileico composto da ife intrecciate, cilindriche o clavate,

suprapellis una ixocutis di ife molto gracili. Giunti a fibbia assenti.

Habitat: in località erbose nelle pinete litorali, piuttosto rara.

Autunno. Finno ad ora conosciuta solamente dalla Sardegna.

Materiale studiato: Sardegna meridionale, prov. Cagliari, loc.

*Villasimius”, in una radura erbosa di una pineta del litorale, in terreno

calcareo e sabbioso, 27.xi.1989, M. Contu 89/362 (typus, CAG).

La presenza di cheilocistidi lageniformi fino a subfusiformi indica

l'appartenenza di questo nuovo taxon alla stirpe di S. sericeus ma nessuna

specie citata da Bon (1981), Heinemann (1978), Moser (1986), etc. le

corrisponde. S. subglobisporus é ben caratterizzato dalla forma globosa o

subglobosa delle sue spore ma anche dalla taglia gracile, l'anello persistente

ed infine dal cappello dotato di sfumature giallastre al centro. Quest'ultimo

carattere potrebbe favorire confusioni con S. medioflavoides (e taxa vicini)

ma questo, tuttavia, ha spore amigdaliformi e cheilocistidi clavati. Fra le

specie a cheilocistidi lageniformi S. sericatellus possiede basidi bisporici e

spore lungamente amigdaliformi mentre S. sericeus ha spore subfusiformi, di

maggiori dimensioni, ben diverse.

8. Sericeomyces cylindrosporus Contu, spec. nov. ad int.

= Leucoagaricus menieri sensu Singer, Mycopathol. Mycol. Appl. 34:

431, 1968, non Auct. pl. (Menier, Bon & Boiffard, etc.).

Materiale studiato: Sardegna meridionale, prov. Cagliari, loc. "Poggio

dei Pini”, 4.xii.1989, leg. V. Mendolia (erb. Mendolia).

Alcuni esemplari di questa entità, corrispondenti al Leucoagaricus

menieri sensu Singer non Auct. pl. (basato su raccolte sudamericane), sono

stati da me studiati grazie alla cortesia di V. Mendolia il quale è solito

raccogliere questa specie da diversi anni. L'esame microscopico ha posto in

luce delle grandi spore subcilindriche paragonabili a quelle di Amanita

curtipes Gilbert, completamente diverse da quelle del taxon di Menier.

Sembra, quindi, che il fungo descritto dall'Uruguay da Singer sia una specie

diversa ma ben distinta meritevole di un nuovo nome; questo è qui proposto

solo provvisoriamente, in attesa di raccolte personali. Nessuna specie del

genere Sericeomyces possiede simili spore e, pertanto, l'identificazione di S.

cylindrosporus non dovrebbe essere troppo difficile, tenuto anche conto

dell'aspetto degli esemplari sardi, abbastanza facilmente scambiabili, sul

Source : MNHN. Paris

STUDI SULLE LEPIOTACEAE 9

terreno, per una piccola amanita del complesso curtipes (della quale,

evidentemente, non hanno le spore amiloidi e la trama lamellare bilaterale

ne' la volva, etc.).

9. Sericeomyces subvolvatus (Malengon & Bertault) Contu, comb. nov.

Basionimo: Lepiota

Bare. 8: 37, 1971

= Leucoagaricus subvolvatus (Mal. & Bert.) Bon, Doc. Mycol. (Lille)

27/28: 22, 1977.

subvolvata Malengon & Bertault, Acta Phytotax.

Questa rimarchevole entità, da me non ancora vista con certezza

nell'Isola, è stata segnalata per la stessa dal dr. Alessio sulla base di raccolte

fatte nell'Oristanese, nella Sardegna centrale (dune di “Is Arenas”, cfr.

Alessio, 1981: 16-19). Essa è caratterizzata soprattutto dalla presenza di una

pseudovolva alla base del gambo, che si presenta marcamente bulboso, come

posto in risalto dalle fotografie pubblicate dallo stesso Alessio. Bon (1981:

53) colloca S. subvolvatus nel suo sottogenere Sericeomyces di Leucoagaricus

affermando, nel contempo, che esso presenta notevoli affinatà con L.

medullatus (Fr.) Bon sensu Boudier, che egli ha studiato dall'erbario Boudier

(Bon, 1977) Recentemente, sulla terra nuda costituita da calcare del

triassico é stata raccolta un'entità (M. Contu 89/461, 22.xii.1989, Orto

Botanico di Cagliari) paragonabile al taxon di Malengon & Bertault ma

differente per l'anello molto più spesso e persistente, i cheilocistidi

largamente clavati e la carne un poco arrossante.

CONCLUSIONE

Come potrà notarsi dall'esposizione precedente in questa trattazione,

da considerarsi, come già detto, ancora provvisoria, è stato adottato un

concetto generico di Sericeomyces leggermente più ampio di quello

originariamente proposto da Heinemannn (1978, cit.) Infatti vengono

considerate come appartenenti a Sericeomyces anche alcune specie provviste

di un rivestimento pileico ad ife un poco rialzate, non esattamente

arrangiate in cutis. Questo emendamento non sembra, tuttavia, in contrasto

con l'originaria concezione di Heinemann poiché lo studioso belga, già nella

trattazione originale, ammetteva nel genere, oltre a specie dotate di

rivestimento pileico ad ife parallele o intrecciate, anche alcune altre entità

aventi lo stesso subtricodermico (cfr. S. serenus var. erioderma e S. gauguei,

fra le altre) ma molto prossime, per molti caratteri, a S. serenus. Sembra,

dunque, che sia necessario un'emendamento dei limiti generici di

Sericeomyces, nel senso che a tale genere vadano ascritte anche alcune specie

presentanti un'epicute subtricodermica, sia pure a struttura differente dal

vero e proprio tricoderma che caratterizza i Leucoagaricus e molte Lepiota.

Una tale concezione, lo sì ripete, non può considerarsi del tutto nuova

perchè essa si deduce agevolmente dal contesto dell’originaria

comunicazione del prof. Heinemann (1978, più volte cit.) ad avviso del

quale potrebbe essere inclusa nel suo genere addirittura la Lepiota cygnea

sensu Huijsman (1943) la quale sarebbe caratterizzata da un rivestimento

Source . MNHN. Paris

10 M. CONTU

pileico con diversi sferociti e dalle ife provviste di giunti a fibbia, due

caratteri che contrastano con i limiti del suo genere specificati nella diagnosi

originale. In attesa di un amenda mento ufficiale di Sericeomyces ad opera

del prof. Heinemann e di una sistemazione in sezioni delle varie entità

riterrei opportuno proporne uno provvisorio che è così concepito:

Sericeomyces Heinem. emend. Contu

Rivestimento pileico ad ife parallele, intrecciate o leggermente rialzate.

Typus emendationis: Sericeomyces erioderma (Mal.) Contu

Sezione 1- 5егісеотусез

= Lepiota sectio Sericellae Kühner ex Wasser - Leucoagaricus sectio

Sericelli (Kühner) Bon & Boiffard (nom. inv., basionimo invalido).

Rivestimento pileico una cutis di ife subparallele o intrecciate, distese.

Typus: S. serenus (Fr.) Heinem.

Species incluse: S. sericeus (Cool) Contu, S. sericatellus (Mal.) Bon, S.

medioflavoides (Bon) Contu, S. subglobisporus Contu, S. subvolvatus (Mal. €

Bert.) Contu nonchè diverse specie extraeuropee como S. viscidulus Heinem.,

ed altre.

Sezione 2- Eriocutis Contu, sect. nov. ad int

Rivestimento pileico ad ife parzialmente erette al disco. Typus: S.

erioderma (Mal.) Contu.

Specie incluse: S. menieri (Sace.) Contu, forse anche A. amylosporus

(Mal.) Heinem., S. gauguei (Bon & Boiff.) Heinem.

Il sezionamento proposto dovrebbe essere strutturato meglio tenendo

conto di alcuni altri caratteri micromorfologici (struttura dell'ipoderma e

della trama lamellare). Come potrà notarsi di, alcune specie menzionate da

Heinemann nella trattazione originaria di Sericeomyces non si è dato qui

alcun conto. La loro posizione tassonomica sembra complessa е

l'assimilazione al genere in oggetto ancora dubbia. Fra queste sembrano non

entrare nei limiti generici di Sericeomyces soprattuto “S. violaceus” Heinem.

(1978: 406) а causa delle spore colorate (‘brunneo-purpureae”), Lepiota

parvannulata (Lasch) C. Gill., per le spore non metacromatiche in Bleu di

Cresile e Lepiota cygnea sensu Huijsman (1943) la quale possiede giunti a

fibbia e sferociti nel rivestimento pileico (caratteri tipici del genere

Cystolepiota Sing., nel quale la colloca, ad es. Moser (1986: 252). D'altra

parte la specie descritta da Huijsman sembra differente da quella

correntemente intesa dagli AA (cfr. per tutti Bon, 1981: 66) i quali ne fanno

un Leucocoprinus della sezione Leucocoprinus (spore dotate di poro

germinativo). Invece sembrano entrare nel genere alcune entità a me non

ancora ben note come 5. cygneoaffinis (Pilat) Heinem. e S. amylosporus

(Mal.) Heinem. In ogni caso, comunque, sarebbe a mio avviso poco

opportuno considerare come appartenenti al genere di Heinemann anche

specie con spore non metacromatiche o con ife fibbiate poichè in tal modo

si finirebbe per trasformare Sericeomyces in un genere dai limiti confusi ed

Source : MNHN, Paris

STUDI SULLE LEPIOTACEAE 11

incerti, come a suo tempo si fece per Pseudobaeospora Sing. (emend.

Locquin), vanificandone cosi l'istituzione.

RINGRAZIAMENTI

Per i preziosi suggerimenti e per la revisione del manoscritto ringrazio

vivamente i sig. profs M. Bon e P. Heinemann.

LETTERATURA

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Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1991, 12 (1): 13-23 13

FRUITING IN DICHOMITUS SQUALENS (KARST) REID

T.T.T. PHAM*, A.-M. SLEZEC** and E. ODIER*0®

* Laboratoire de Microbiologie, Centre de

Biotechnologies Agro-Industrielles, INRA, 78850

Thiverval-Grignon, France

** Laboratoire de Cryptogamie, C.N.R.S., Muséum

d'Histoire Naturelle, 12 rue Buffon, 75005 Paris,

France

chemin Scribe, 92190 Meudon,

France

ABSTRACT - Dichomitus squalens (Karst) Reid (Syn.: Polyporus anceps Peck) prod-

uces fruiting bodies on malt extract agar or on wood blocks at 28°C in controlled

conditions of humidity and light. The life cycle of this fungus is of the

haploid/dicaryotic type with a bifactorial (tetrapolar) interfertility system. Meiosis

takes place according to the classical schemes in homobasidiomycetes resulting in the

formation of four basidiospores per basidia. Basidiospores are predominantly uninu-

cleate and germinate to produce uninucleate mycelium which is unable to fruit.

Compatible pairings result in dicaryons with clamp-connections at every septum.

RESUME - Dichomtitus squalens (Karst) Reid (Syn.: Polyporus anceps Peck) fructifie

en milieu gélosé à l'extrait de malt en boite de Pétri ou sur éprouvettes de bois en

conditions stériles à 28°C dans des conditions contrôlées d'humidité et de lumière.

Le cycle de ce champignon est du type haploïde/dicaryotique avec un système

d'interfertilité bifactoricl (tétrapolaire). La méiose a lieu conformément aux schémas

classiquement observés chez les homobasidiom es avec formation de quatre

basidiospores par baside. Les basidiospores sont majoritairement uninucléées et ger-

ment pour former un mycélium uninucléé incapable de fructifier. Les confrontations

compatibles produisent des dicaryons comportant des anses d'anastomose á chaque

article.

KEY WORDS : Dichomitus squalens - interfertility system - fruiting.

INTRODUCTION

Dichomitus squalens (Karst) Reid (Syn = Polyporus anceps Peck) be-

longs to Homobasidiomycetes, Polyporaceae. This fungus has been studied

for its ability to degrade lignin in wood (Chang et al., 1980; Blanchette et

al., 1988) and in straws (Zadrazil & Brunnert, 1982). Among the white rot

fungi, this species degrades lignin relatively fast with somehow limited de-

gradation of cellulose and hemicellulose when grown in suitable conditions

(Agosin & Odier, 1985). D. squalens produces a laccase presumably involved

Source : MNHN, Paris

14 T.T.T. PHAM, A.M. SLEZEC and E. ODIER

in lignin degradation (Petrovski et al., 1980). No lignin peroxidase has been.

detected in this species (Agosin, unpublished). Several extracellular enzymes

involved in the degradation of cellulose and xylans by this fungus have been

purified and characterised; they include endoglucanases (Rouau & Foglietti,

1985), cellobiohydrolases (Rouau & Odier, 1986), xylanases, a-L-arabino-

furanosidase (Brillouet & Moulin, 1985) and the pattern of xylan degrada-

tion has been characterised (Agosin et al., 1988).

The first description of this species was by Peck in 1895 who observed

fruiting bodies growing on stump of Tsuga canadensis Carr. In 1929, Mounce

reported the mating system of D. squalens to be unifactorial. In 1939, Baxter

& Manis defined more precisely the taxonomic position of Polyporus anceps

compared to Polyporus ellisianus (Murr.) Sace. and Trott. Fruiting was de-

scribed by Long & Harsch (1918), Baxter & Manis (1939), Badcock (1944)

and Nobles (1948). Nobles et al. (1957) reported that the mating system in

P. anceps is bifactorial This species was renamed Trametes squalens then D.

squalens in relation with the high degree of branching of the hyphae.

Basic research concerning D. squalens requires better information con-

cerning its life cycle and its interfertility system. Accurate determination of

fruiting conditions is necessary for the development of a laboratory method

for fruiting in sterile conditions. In this study the life cycle of D. squalens is

characterised and different conditions allowing fruiting are evaluated for

their possible use in classical genetics in this species.

MATERIALS AND METHODS

1. Microbial strain

D. squalens (Karst) Reid (Syn.: Polyporus anceps Peck) was obtained

from the Centraalbureau Voor Schimmelcultures (Baarn, Netherlands) (CBS

432-34).

2. Cultivation methods

Culture media include: 1/ Liquid medium with malt extract 2 % (w/v)

(unless stated otherwise) with 0.2% (w/v) yeast extract, pH 5 (designated liq-

uid malt extract); 2/ Malt extract agar 1.5% containing 3% malt extract.

Media for fruiting include in addition to malt extract agar: 1. malt extract

(5%) agar (1.5%) on the surface of which is deposited a wood block (Pinus

sp.) (Lucas & Fougerousse, 1982); 2. A wood meal supplemented medium

(Picea sitchensis (Bong) Carr.) as described by Holt et al. (1983).

All media containing malt extract were sterilised by autoclaving for 20

min at 120°C. The wood meal medium was autoclaved 25 min at 120°C.

Wood blocks (10 x 2.5 x 2.5 cm) were streaked then autoclaved for 40 min

at 120°C.

Media for fruiting experiments were inoculated with a mycelium freshly

grown in liquid malt extract (not longer than 1 week at 34°C). Cultures were

incubated at 34°C in the dark until colonisation was complete.

Source : MNHN, Paris

DICHOMITUS SQUALENS 1

Cultures on microscope slides were run as follows: a drop of liquid

malt extract was deposited aseptically on a sterile slide, then inoculated with

a small amount of mycelium. Incubation took place in a humid sterile

chamber at 28°C for 65-68 h. Mycelium was stained by Giemsa (see below).

The three basic procedures for fruiting using malt extract agar, wood

blocks and the wood meal media were as follows: malt extract agar: the

malt extract agar medium was poured (30 ml) in Petri dishes (9 cm diam-

eter) and inoculated with a mycelium fragment in the centre. Light when

used was obtained with Sylvania Grolux lamps (210-270 lux at the level of

cultures). Incubation was at 18-24°C (laboratory temperature). Humidity was

maintained by addition of liquid malt extract at regular intervals. Wood

blocks: the method used was according to Lucas & Fougerousse (1982),

ml of 5 % malt extract 1.5 % agar media was poored in | litre flasks. After

inoculation and colonisation of the whole surface of the agar (1 week), a

wood block was deposited onto the agar and incubation proceeded for an-

other 15 days after which mycelium had colonised the wood block. Woods

blocks were removed and mycelium on the surface was scrapped off. Wood

blocks were introduced into a wood box (90 em x 50 cm x 40 cm, 40 blocks

per box) containing vermiculite. The wood box was covered by a transparent

plastic film. Incubation was at ambient temperature with light (9 h light and

15 h darkness) or darkness as specified. Moisture was maintained by addi-

tion of water to the vermiculite. Boxes were opened 30 min for aeration ev-

ery day. Wood meal (Picea sitchenis): the wood meal medium (medium 1

according to Holt et al, 1983) was distributed in 250 ml conical flasks (50

ml per flask). After inoculation and colonisation of the culture (around 15

days) water was added to compensate for evaporation. Incubation pro-

ceeded at ambient temperature as specified: either with light (9h / 15 h) or

with light (12 h / 12 h) or in darkness. Cultures were aerated every week

with a stream of water-saturated sterile air and 2 ml water was added in or-

der to compensate for evaporation.

Lyophilisation of basidiospores was done in milk with 10 % inositol

(w/v) as a protective agent.

3. Interfertility experiments

Mono-basidiospore isolates were obtained by allowing basidiospores to

germinate on malt extract agar at 16°C for 24h. Germlings were picked with

a steel nib and transferred on malt extract agar. After 2-3 weeks incubation,

the absence of clamp-connections in hyphae was verified by microscopic ob-

servation. Pairings were subcultured on malt extract agar and incubation

proceeded at 34°C during 2-4 weeks. Any formation of dicaryons with

clamp-connections was observed under the microscope.

4. Cytological observations

Routine microscopic observations were in Congo red (1 g Congo red;

100 ml concentrated ammonia, Kiihner, 1938). Nuclei were stained accord-

ing to Giemsa using the following procedure adapted from Kühner (1949).

Mycelium was grown on a microscope slide as described above. It was fixed

Source : MNHN, Paris

16 T.T.T. PHAM, A.M. SLEZEC and E. ODIER

in absolute ethanol (20 min), rinsed with water (20 min), hydrolysed with

HCI I N for 10 min and rinsed in running water (10 min) followed by suc-

cessive immersion in absolute ethanol (60 min), ethyl ether (5 min), absolute

ethanol (5 min) then rinsed in water (5 min), Giemsa R solution (35 drops

Giemsa R, 30 ml distilled water). For staining of basidiospores, basidios-

pores suspensions were spread on a microscope slide, then dried. The Giem-

sa stain procedure was applied starting with hydrolysis with HCI.

Hymenium was stained according to Lu (1962) as modified by Zickler

(1973).

Table 1: Main characteristics of Fruiting in Dichomitus squalens!.

Tableau 1: Principales caractéristiques des fructifications de Dichomitus squalens.

Fruiting Fruiting method?

characteristics malt extract agar | Wood block Wood meal

delay (weeks) 3.5 + 0.5 11.5 +2.5 1144

before fruiting?

nb fruiting cult./ 30/45 6/40 49/50

total nb of cult.

fruiting bodies

per cult 4.5 + 0.5 1.5 + 0.5 1.5 + 0.5

fruiting

body diam. 1.5 + 0.5 340.5 1.5 + 0.5

nb basidiospores к

per cult. and 1:5 107+ 0.5 1.6 106 + 1.4 7.5 105 + 0.25

per 24 h

1: data are mean and standard deviation

2: culture conditions are as described in Materials and methods; photoperiod is 9h

light and 15h darkness.

3: delay for fruiting is defined as the time between inoculation and formation of

fruiting bodies with visible pores.

RESULTS

1. Fruiting conditions experiments

Fruiting was examined in mycelia grown on malt extract agar, wood

blocks and wood meal. All three conditions allowed fruiting in suitable con-

ditions of humidity and light (see below).

The primordium appears as white thick callus. Adult fruiting bodies

show pores visible to the naked eye more or less regularly on the surface.

Characteristics of the fruiting bodies are shown in table 1. The frequency of

cultures giving rise to fruiting bodies was variable according to the methods,

the wood block method being less efficient than malt extract agar and the

wood meal method. The malt extract agar method was the fastest (3.5

weeks) and resulted in the formation of significantly more basidiospores

than the two other methods.

Source : MNHN, Paris.

DICHOMITUS SQUALENS 17

The effects of culture medium composition and light on fruiting were

investigated in experiments using the three basic fruiting procedures

No fruiting bodies developed in absence of light in any fruiting method

(Tab. 2). The characteristics of fruiting bodies (as described in tab. 1) were

the same whether the photoperiod was 9 h or 12 h light.

Table 2: Effect of light on fruiting in Dichotomus squalens.

Tableau 2: Effet de la lumière sur la fructification chez Dichomitus squalens.

Fruiting bodies formation

Fruiting method darkness 9h light 12h light

malt extract agar 0 + ND

Wood blocks 0 + ND

Wood meal 0 + +

0- vegetative mycelium, + = formation of fruiting body with visible pores, ND =

not determined.

2. Life cycle, cytological observations, interfertility system

The dicaryotic strain CBS 432-34 showed cells of 15 um and 35 um in

length and 0.9 jim and 1.3 um in diameter. The two nuclei were at an equal

distance from the septa and close to each other (Fig. 2) with the exception

of apex cells in which nuclei were near the apex. Binucleate chlamydospores

were also observed (Fig. 11). Branching of mycelium was observed with

anastomosis (Fig. 3). In the hymenium, apical cells differentiated into binu-

cleated basidia. Caryogamy was immediately followed by meiosis (Fig.

4,5,6). At the end of the second meiotic division, the number of nuclei was

four and the extremity of basidia developed sterigmata (Fig. 7). Haploid

nuclei migrated toward the four basidiospores formed at the extremity of

sterigmata (Fig. 8,9). The size of basidia was 6-8 um while basidiospores

were 2-3 um x 7-10 xm. Giemsa staining established that 90% of basidios-

pores were mononucleate, the rest being binucleate or empty (Fig. 10).

Twenty monobasidiospore isolates were examined by Giemsa staining

(Fig. 1): all isolates were uninucleate and showed septa with a septal pore

(dolipore). No clamps were observed in monobasidiospore isolates (homo-

caryons). Certain hyphal cells swelled considerably in comparison with adja-

cent cells, the protoplast contracted and a thick cell wall developed resulting

in the formation of an asexual spore (chlamydospore).

Monobasidiospore isolates were combined with one another in all pos-

sible combinations. The formation of dicaryons showing clamp connections

was examined in crossings. Results (Tab. 3) establish the existence of four

classes of homocaryons in the progeny of the original dicaryon. Formation

of dicaryons showing clamp connections showed no deviation from a tetra-

polar mating system: a given homocaryon was able to form a dicaryon with

clamp connections with all homocaryons of the compatible class and with

no homocaryon of non compatible classes. However not all dicaryons were

able to form fruiting bodies able to generate viable basidiospores (data not

shown).

Source : MNHN, Paris

18 T.T.T. PHAM, A.M. SLEZEC and E. ODIER

Source : MNHN. Paris

DICHOMITUS SQUALENS 19

119 3 4 6 7101516 2 8 91114171820 51213

re аран pem А а

ES A Lin de

TR NE;

AS E E

"lr epe UT TIN 7

Зара аа a

С радая Знаў а

ER e Бабця 1%

Pi Pee ae ek ines Oe

A ig

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ЭЗБЕ а

Ж уч

Table 3: Results of crossing experiments with homocaryons of Dichomitus squalens,

+: presence of clamp connections, - : absence of clamp connections.

Tableau 3: Résultat des croisements entre homocaryons de Dichomitus squalens,

présence d'anses d'anastomose, - : absence d'anses d'anastomose.

Dichotomus squalens at different states of its cycle: 1. Uninucleate homocaryotic cell

with unclamped septa (Giemsa); 2: Binucleate di ryotic cell with clamp con-

nections (Giemsa); 3: Acute-angled branching of dicaryotic hyphae (Giemsa);

4: Basidium in prophase I (Lu stain). 5: Hymenium (Lu stain); 6: Basidium in

metaphase II (Lu stain); 7: Last stage of the second division of meiosis, the ba-

sidium contains four nuclei, sterigmata are apparent (Lu stain); 8: Basidiospore

initiation at the apex of sterigmata (Lu stain); 9: Basidium showing four basid-

iospores (Congo red stain); 10: Uninucleate basidiospores with one binucleate

basidospore (Giemsa); 11: Binucleate chlamydospore in formation (Giemsa).

Cycle de reproduction de Dichomitus squalens. 1: Cellule uninucléée, sans anse

d'anastomose aux cloisons (coloration au Giemsa); 2: Cellule binucléée avec

anses d’anastomoses (coloration au Giemsa); 3: Ramification à angle aigu

d'une hyphe dicaryotique; 4: Baside en Prophase | de méiose (coloration de

Lu); 5: Hyménium (coloration de Lu); 6: Baside en Métaphase Il de méiose; 7:

Fin de méiose II, la baside contient quatre noyaux, les stérigmates sont en ASA

place (coloration de Lu); 8: Différenciation de la basidiospore à l'apex du BIRL.DU

Stérigmate (coloration de Lu); 9: La baside porte les quatre basidiospores (colo- MUSEUM

ration au rouge Congo). 10: Basidiospores uninucléées (coloration au Giemsa); (PARIS

11: Formation de chlamydospore binucléée (coloration au Giemsa). “

Source : ММНМ. Рап$

20 T.T.T. PHAM, A.M. SLEZEC and E. ODIER

Microscopic observation failed to reveal heterocaryons in incompatible

pairings in which the clamps could not fuse with the subterminal cell of the

hypha.

Microscopic examination verified the presence of two nuclei in all

mycelia in pairings forming connection clamps (Fig. 2,3).

Up to 88 % of fresh basidiospores could germinate in liquid malt ex-

tract as shown by microscope examination (Tab. 4). The germination rate

was only around 5% in the same medium with agar. Because of asynchro-

nous germination and clumping of mycelia, initiation of germination in liq-

uid medium followed by inclusion in a solid medium was not reliable for

the generation of mono-basidiospore isolates.

Basidiospores could be stored in a dry state at 4°C or lyophilised with

constant germination rate while storing in a liquid medium at low temper-

ature resulted in a decrease of germination rate.

Table 4: Germination of basidiospores of D. squalens in different cultivation condi-

tions.

Tableau 4: Germination de basidiospores de D. squalens suivant différentes

méthodes.

A Germination Incubation

Cultivation condition rate (24°C) AE

3% malt extract

(liquid medium)

fresh basidiospores 88.3 + 1.8 3 days

lyophilized basidiospores" 72.6 + 1.2 4 days

3% malt extract agar 2.9 + 0.4 6 days

1. lyophilization as described in Materials and Methods; lyophilization in sucrose in-

stead of inositol yielded only 8.2 germination rate.

DISCUSSION

The life cycle of D. squalens is of the haplodicaryophasic type with a

tetrapolar interfertility system (Burnett, 1975; Fincham et al., 1979). Our re-

sults are in accord with previous report by Nobles et al. (1957) and in con-

tradiction with Mounce (1929). In this system two loci designated A and В

need to be present as different alleles for the morphogenetic sequence char-

acterising a dicaryon to take place. In our study no hemicompatible pairings

(B=, A# or B4, A=) could be recognised. In several species including

Schizophyllum commune, common B heterocaryons can be observed in which

apical cells contain paired nuclei and at cell division a clamp cell is formed

and the two nuclei undergo conjugate division. However because septum

dissolution cannot take place, the clamp cell fails to fuse with the subapical

cell and the daughter cell. Such hemicompatible pairings were not observed

in our study and common B crossings were not identified.

The presence of a single nucleus in the vast majority of basidiospores

and in all mono-basidiospore isolates establish that mono-basidiospore iso-

Source : MNHN. Paris

DICHOMITUS SQUALENS 21

lates are homocaryons. Meiosis takes place according to the classical scheme

described in other basidiomycetes with the formation of 4 mononucleate ba-

sidiospores per basidium (Kühner, 1977). No post-meiotic division was ob-

served in this study, but the existence of a few dinucleate basidiospores

could be explained either by a post-meiotic division or by mitosis of a nu-

cleus after migration into the basidiospore (Slezec, 1980). Empty basidios-

pores could be explained by failure of a nucleus to migrate into the basid-

іовроге ог Бу an loss of the nucleus during staining.

Fruiting within an hymenium is not synchronous as in several Pleurotus

species from Unbellifers (Slezec, 1986). This is in contrast to Coprinus spe-

cies (Lu, 1967; Manachére & Bastouill-Descollonges, 1982).

Fruiting is best obtained in the malt extract agar method. Baxter &

Manis (1939) and Nobles (1948) previously reported fruiting in malt extract

agar cultures in D. squalens. The cultivation conditions were however not

entirely defined. The requirement for light is established in this study in ac-

cordance with Baxter & Manis (1939). Fruiting of D. squalens on wood meal

medium was reported by Badcock (1944) with no quantification of the re-

sult. No fruiting on wood blocks was reported according to Baxter & Manis

(1939) and Badcock (1944). The results in this study establish that D. squal-

ens is able to fruit on wood in controlled conditions with light. The malt

agar method is however far more rapid and results in much more basidios-

pores than conventional fruiting methods using wood blocks or wood meal

as a substrate. The malt agar method is simple and asepsis is better ensured

than in cultures with wood. This method can be used without problems in

genetic studies,

The present study establishes D. squalens as a white-rot fungus with a

simple life cycle in which all events take place according to classical

schemes. In D. squalens basidiospores are homocaryons and, in dicaryons,

the cells contain constantly two nuclei. This allows genetic studies to be car-

ried out and interpreted simply. This is in contrast with the well studied

Phanerochaete chrysosporium in which the life cycle is not entirely under-

stood and agreed on.

ACKNOWLEDGEMENTS.

The Spruce wood meal was provided by С. Janin, C.N.R.F., Nancy. The

technical assistance of H. Drouet is gratefully acknowledged.

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Source : MNHN. Paris

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ETUDE ULTRASTRUCTURALE DE TUBER

MELANOSPORUM VITT. EN CULTURE ISOLEE ET EN

ASSOCIATION AVEC DES VITROPLANTS DE QUERCUS

(О. ROBUR ET Q. PUBESCENS).

Ammar BOUTEKRABT et Jean Claude PARGNEY

Laboratoire de Biologie des Ligneux

Université des Sciences de Nancy I. B.P. 239

54506 Vandoeuvre les Nancy Cedex.

RESUME - Le mycélium de Tuber melanosporum et les mycorhizes qu'il forme avec

Quercus robur et O. pubescens ont fait l'objet d'une étude cytologique en microscopie

électronique à balayage et à transmission. L'étude ultrastructurale des parois du

champignon isolé et associé montre l'implication de la couche externe dans la consti-

tution du ciment interhyphal. Des composés pariétaux issus des cellules corticales

peuvent également s'incorporer au ciment qui sépare les deux symbiotes au niveau

du réseau de Hartig. Les premiers stades de la mycorhization sont décrits, Des sub-

stances tanifères sont alors abondamment produites et les cellules corticales semblent

réagir comme dans le cas d'attaque parasitaire. Les bactéries associées au mycélium

auraient un róle favorable dans la mycorhization. mbiose entre les deux parte-

naires est limitée dans le temps car les cellules dégénérent rapidement; la mort de:

cellules corticales précéde celle des hyphes. La mycorhization est assurée par la pro-

duction d'hyphes libres à la surface des racines et par l'extension du système

racinaire.

ABSTRACT - T. melanosporum mycelia and their mycorhizae formed with Quercus

robur and Q. pubescens were cytologically studied by both transmission and scanning

electron microscopy. The ultrastructural study of the fungus walls when isolated or

associated in mycorhizae demonstrated that the outer layer was implicated in inte-

rhyphal matrix building. Wall components from cortical cells might also be incorpo-

rated in the matrix which separates the two symbionts in the Hartig net. The first

stages of mycorhization are described. Tannic substances were found to be produced

in abundance and cortical cells seemed to react as in the case of a parasitic attack.

The fact that bacteria are associated with the mycelium could suggest that they are

beneficial for mycorhization. Symbiosis between the two symbionts is time limited

since cells rapidiy degenerate; cortical cells die before the hyphae. Mycorhization is

ensured by free hyphae production on root surface and by root system extension.

MOTS CLES : Tuber melanosporum, vitroplants, Quercus robur, Quercus pubescens,

tanins, bactéries, mycorhizes.

Source : MNHN, Paris

26 A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY

INTRODUCTION

Les travaux sur les associations ectomycorhiziennes, chez les

Angiospermes, ont fait l'objet d'études cytologiques approfondies, réalisées

en microscopie électronique à transmission (Chilvers, 1968; Strullu, 1974;

Strullu & Gerault, 1977; Debaud et al., 1981; Dexheimer et al., 1985;

Edwards & Gessner, 1984; Malajezuk et al., 1984; Leduc et al., 1986; Lei,

1988; Pargney & Leduc, 1990) et en microscopie électronique a balayage

(Seviour et al., 1978; Malajczuk et al. , 1984; Massicotte et al., 1986). Les

premiers résultats publiés sur l'ultrastructure des mycorhizes ont été obtenus

sur du matériel récolté dans la nature ou en p£piniere. Une meilleure

connaissance des techniques a permis de réaliser des synthéses

mycorhiziennes en conditions contrólées et de travailler sur des couples

symbiotiques bien déterminés (Debaud et al, 1981; Fusconi, 1982;

Duddridge & Read, 1984 a,b,c; Dexheimer et al., 1985; Duddridge, 1986 a,

b; Kottke & Oberwinkler, 1986; Leduc et al., 1986; Massicotte et al., 1986;

Lei, 1988; Boutekrabt et al., 1990).

Diverses espèces du genre Tuber sont utilisées expérimentalement pour

la formation d'associations ectomycorhiziennes: T. aestivus, T. albidum. T.

brumale, T. melanosporum, T. mesentericum, T. rufum, T. uncinatum

(Scannerini, 1968b; Fontana & Palenzona, 1969; Fontana & Fasolo-

Bonfante, 1971; Palenzona et al., 1972; Chevalier, 1973; Chevalier & Desmas,

1977; Delmas & Poitou, 1978; бирге ег а!., 1982; Fusconi, 1982; Giovanetti

& Fontana, 1982, Boutekrabt et al., 1990). Les partenaires végétaux, qui

s'associent avec le genre Tuber, appartiennent à des genres très différents:

Fagus, Corylus, Carpinus, Populus, Betula, Quercus, Tilia, Picea, Cistus etc...

Plusieurs auteurs ont montré que le genre Quercus, en particulier Quercus

pubescens et Q. robur ainsi que Corylus avellana présentent de bonnes aptitu-

des á former des mycorhizes avec les espéces du genre Tuber (Malengon,

1938; Fontana & Centrella, 1967; Palenzona, 1969; Chevalier, 1972; Cheva-

lier et al., 1973; Delmas & Poitou, 1978; Dupré et al., 1982; Olivier &

Mamoun, 1988). Pour son intérét économique, la symbiose avec Tuber

melanosporum a fait l'objet de recherches plus approfondies et les techniques

de mycorhization sont actuellement parfaitement maitrisees (Chevalier &

Grente, 1978; Dupré et al., 1982; Olivier & Mamoun, 1988; Boutekrabt et

al., 1990).

Cependant, les renseignements sur la cytologie et l'ultrastructure du

mycélium manquent. Seuls les aspects physiologiques (Matruchot, 1903 a,b;

Malencon, 1938; Ceruti, 1968; Fontana, 1968; Fontana & Fasolo-Bonfante,

1971; Grente et aL, 1972; Vrot, 1977; Kulifaj, 1984) et la structure fine des

carpophores et les ascospores matures (Parguey-Leduc et al., 1985 et 1987)

sont bien connus. Il nous est paru intéressant d'entreprendre l'étude en

microscopie électronique à balayage et à transmission du mycélium isolé et

en association avec des vitroplants de chênes obtenue en conditions

contrôlées.

Source - MNHN. Paris

TUBER MELANOSPORUM 27

MATERIEL ET METHODES

TECHNIQUES D'OBTE?

TION DES MYCORHIZES

Le mycélium de la souche Mel 24, de Tuber melanosporum Vitt., isolé à

partir de gléba, est cultivé en milieu liquide, sur milieu de référence utilisé à

VINRA de Clermont-Ferrand.

Deux espéces de chénes: Quercus robur et Q. pubescens, sont cultivés in

vitro, par micropropagation de boutures issues de semis de glands sur milieu

de culture de Favre & Juncker (1986) dérivant du milieu de Murashige &

Skoog (1962). Les vitroplants sont cultivés sur milieu de multiplication pen-

dant 6 semaines puis, aprés induction de la rhizogenése, sont transférés sur

milieu solide (tourbe et vermiculite: 1/3 T, 2/3 V), imbibe de solution de

synthèse, où ils subissent une phase d'acclimatation en mini-serre avant

d'étre inoculés selon la technique de Chevalier & Grente (1978) et de

Boutekrabt et al. (1990). En fonction de la technique adoptée, plusieurs

inoculums sont utilisés (spores provenant de broyat de carpophores, racines

excisées inséminatrices ou mycélium cultivé sur milieu gélosé et plaqué

contre les racines). L'apparition de la mycorhization différe, suivant le

systéme et l'inoculum utilisé, de à 60 jours. Les mycorhizes obtenues sont

de couleur claire, en forme de petites massues et correspondent à celles obte-

nues dans la nature ou en conditions contrólées. Les mycorhizes sont

prélevées en fonction de leur morphologie: les jeunes mycorhizes sont de

couleur claire et en forme de petites boules ou légerement allongées, matures

elles sont brun-clair et de forme plus allongée.

TECHNIQUES CYTOLOGIQUES

= Microscopie électronique à balayage:

Les objets sont fixés par le glutaraldéhyde à 2,5 % dans du tampon

cacodylate 0,1 M à pH 7,2 pendant 1 h. Ils sont ensuite rincés par le tam-

pon cacodylate 0,2 M a pH 7,2 puis déshydratés dans des bains d'acétone de

concentrations croissantes et immergés dans l'hexaméthyldizilazan (réf:

804324 Merck) pendant 10 mn.

Pour l'étude du mycélium, l'utilisation de la technique du point criti-

que est indispensable, compte tenu de sa fragilité. Dans un premier temps,

l'acétone est substitué par du CO2 liquide puis est éliminé par la chaleur

pour ne conserver que l'échantillon sec. Enfin les objets sont métallisés à

l'or et observés à l'Autoscan réglé à 20 Kv.

= Microscopie électronique à transmission:

Le mycélium et les sections de mycorhizes de 0,5 mm proches de l'apex

sont fixés par le glutaraldéhyde à 2,5 % dans le tampon cacodylate à pH 7,2

pendant 5 à 7 h. Après lavage par le tampon, les objets sont postfixés 1 h

par le tétroxyde d'osmium á 2 % dans le tampon cacodylate à température

de la glace fondante. Ils sont ensuite lavés, déshydratés par l'acétone et in-

clus dans la résine.

Source - MNHN. Paris

28 A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY

Pour un contròle de la mycorhization, des coupes semi-fines (20 a

30um) sont effectuées. Elles sont recueillies sur lame de verre, colorées à

chaud par le bleu de toluidine à pH alcalin puis observées au microscope

photonique.

Les coupes ultra-minces (6 à IOum), sont contrastées par Vacétate

d'uranyle et le citrate de plomb (Reynolds, 1963) ou par le test PATAg de

mise en évidence des polysaccharides (Thiery, 1967)

RESULTATS

LE MYCELIUM

Les hyphes issues de la germination des spores sont sinueuses et de

couleur jaune clair. Leur diamétre varie de 2 à 3um. Les ramifications sont

simples, peu fréquentes et naissent 4 angle droit. L/utilisation de la

microscopie électronique á balayage permet d'observer une septation assez

réguliére et la présence de renflements de 4 a 6um de diamétre alors que le

point d'étranglement est d'environ l,3um (Fig.l) L'extrémité de l'hyphe se

termine parfois par un renflement (Fig. 2). La paroi, de 0,5um d'épaisseur,

montre une surface rugueuse sur laquelle se trouvent des bactéries en forme

de batonnets (Fig. 2). La détermination des souches de bactéries a montré

qu'elles appartiennent à l'espèce Bacillus polymixa. ll convient de signaler

que le mycélium de Tuber melanosporum est toujours associé à des bactéries.

La présence de bactéries semble favorable à la croissance du mycélium,

comme le montre le développement limité en culture pure. En effet, en

présence de chloramphénicol (19), dont l'action est anti-bactérienne, le

développement du mycélium est trés réduit: le diamétre représentant la

croissance du mycélium en culture mixte pendant 30 jours est le double de

celui de la culture pure.

La paroi apparait, en microscopie électronique à transmission,

pluristratifiée, quel que soit le contrastant utilisé: acétate d'uranyle - citrate

de plomb (Fig. 3) et test PATAg (Fig. 4 et 5). Entre les articles, les cloisons

perforées sont bordées de part et d'autre de corps de Woronin (Fig. 4). La

surface est irréguliere et la couche externe, d'aspect mucilagineux, est

impliquée dans les liaisons interhyphales (Fig. 5). Entre les articles, les cloi-

sons sont perforées (Fig. 4). Les bactéries sont présentes aux abords

immédiats du mycélium (Fig. 6). Dans les hyphes, les septa sont réguliers et

les perforations sont bordées de grains de Woronin en nombre régulier (Fig.

4). Le cytoplasme vacuolisé renferme de nombreux organites (mitochondries,

réticulum endoplasmique) et des grains de glycogène (Fig. 3, 4, 5) et des

noyaux (Fig. 3).

LES MYCORHIZES

L'observation á la loupe binoculaire montre que les mycorhizes sont de

petites massues plus ou moins trapues. Jeunes, elles sont de couleur claire

mais en vieillissant, elles virent au brun clair puis au brun foncé. Elles sont

ornementées de spinules perpendiculaires à la surface (Fig. 7), bien visibles

Source - MNHN. Paris

TUBER MELANOSPORUM 29

lorsqu'elles sont observées immergées dans l'eau. De méme couleur que celle

des hyphes, elles ont l'aspect de poils rigides avec une partie basale élargie

qui s'insére à la surface de la mycorhize. La mycorhize est d'abord trapue

puis elle s'allonge; de nouvelles mycorhizes apparaissent alors au niveau de

la partie basale puis médiane. L'allongement dure plus longtemps que l'ap-

parition de nouvelles mycorhizes (4 à 6 semaines pour l'allongement et 2 se-

maines seulement pour les autres). La mycorhize principale atteint 3 à 4 mm

de longueur et les ramifications dépassent rarement 2mm.

En microscopie électronique à balayage, les jeunes mycorhizes sont re-

couvertes d'un manteau constitué d'hyphes agglomérées en plaques (Fig. 8)

entre lesquelles proliférent des bactéries. Elles présentent également des

hyphes libres (Fig. 8), parfois regroupées en amas (Fig. 9) qui longent la sur-

face de la mycorhize et celle de la racine longue sous jacente (Fig. 8). En

coupe, le manteau montre plusieurs couches d'hyphes (3 à 5) mais le réseau

de Hartig n'est pas formé (Fig.10). Dans les mycorhizes plus ágées, la surfa-

ce externe présente le méme aspect mais les hyphes libres sont moins nom-

breuses (Fig. 11). En coupe, les hyphes du manteau sont de sections variées.

Cette structure apparait constante tout le long de la mycorhize. Le réseau de

Hartig est present (Fig. 12). Parfois, à l'apex des mycorhizes ágées, on ob-

serve un redémarrage de la croissance par écartement du manteau et allon-

gement de la racine. Celle-ci est aussitôt recouverte d'hyphes (Fig. 11).

L'utilisation du microscope électronique à transmission permet de dis-

tinguer les phases successives de la formation de la mycorhize. Celle-ci

débute par l'installation progressive des hyphes autour des racines courtes et

aboutissent à l'établissement de la mycorhize mature.

1 - Installation des hyphes

Les trés jeunes racines courtes sont recouvertes progressivement

d'hyphes qui se regroupent et s'accolent entre elles et à la surface racinaire

par des fibrilles réactives au test PATAg (Fig. 13). Le mycélium ne forme

pas encore un véritable manteau. Des bactéries et des dépóts denses aux

électrons sont présents dans les espaces interhyphaux (Fig. 14). Le

cytoplasme fongique est vacuolisé et il renferme un ou parfois plusieurs

noyaux et quelques organites (mitochondries, réticulum endoplasmique) et

surtout des ribosomes. Les cellules racinaires périphériques montrent une

vacuole trés développée dans laquelle s'accumulent, le long du tonoplaste,

des dépóts denses correspondant à des tanins (Fig. 15); leur cytoplasme oc-

cupe une position pariétale et il présente de nombreux organites: les travées

de réticulum endoplasmique et les ribosomes sont particuliérement abon-

dants.

Dans les jeunes mycorhizes, seul le manteau est présent. Il est constitué

de trois ou quatre couches d'hyphes (Fig. 16). Elles sont reliées entre elles

Par un ciment interhyphal dense aux électrons et qui, lorsque les hyphes

sont légèrement séparées, apparaît plus lâche et d'aspect fibrillaire. Le man-

teau est limité intérieurement par des dépôts tanifères allongés qui bordent

les cellules racinaires (Fig. 16). Cependant, des hyphes peuvent être parfois

directement en relation avec la surface de la racine (Fig. 15).

Source : MNHN. Paris

30 A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY

Au stade suivant, les hyphes internes du manteau s'insinuent entre les

dépôts tanifères (Fig. 17), pour former sous les tanins des files de cellules

fongiques qui longent les cellules corticales (Fig. 18). Elles différent des

hyphes externes par leur section moins allongée et par un cytoplasme plus

dense et riche en organites: elles sont peu vacuolisées et renferment notam-

ment beaucoup de ribosomes (Fig. 18). Les cellules corticales sont par

contre très vacuolisées et leur cytoplasme est plus contrasté que

précédemment (Fig. 17).

Les mycorhizes montrent ensuite un début de formation du réseau de

Hartig (Fig. 19). Les parois des cellules corticales voisines sont écartées par

la pénétration des hyphes. La lamelle moyenne est alors altérée et ne subsis-

te plus que sous forme de fibrilles laches reliant les deux parois séparées

(Fig. 20). La paroi fongique émet dans l'espace ainsi créé des excroissances

contrastées par le test TAg (Fig. 19 et 20). La juxtaposition des deux par-

tenaires conduit à la formation d'une interface au niveau de laquelle les pa-

rois fongique et racinaire sont parfaitement distinctes l'une de l'autre; la pa-

roi des hyphes, notamment la zone externe, est plus marquée par le test

PATAg que celle de la cellule corticale

2- Ultrastructure de la mycorhize mature

Dans la mycorhize mature, le réseau de Hartig s'étend plus

profondément sans atteindre le cylindre central. Il n'est toutefois pas présent

dans la zone apicale oü seul le manteau existe (Fig. 21). Les cellules

racinaires adjacentes au manteau sont mortes et allongées par déformation;

elles ne renferment que des tanins. Les cellules sous jacentes montrent par

contre un cytoplasme pariétal trés contrasté et une grande vacuole dans la-

quelle de nombreuses granulations denses sont présentes (Fig. 21).

Au niveau de la zone sous apicale, le réseau de Hartig est bien

développé (Fig. 22). Il est formé d'hyphes vivantes intimement accolées aux

cellules corticales. Entre les deux symbiotes, il existe une fine couche dense

aux électrons et qui devient plus importante aux angles des cellules

fongiques; elle constitue un ciment liant les deux partenaires. Le cytoplasme

des hyphes est peu vacuolisé; les cellules corticales adjacentes sont

dégénérescentes (Fig. 22, 23). Dans la région basale, les cellules corticales et

fongiques sont totalement dégénérées (Fig. 24).

DISCUSSION - CONCLUSION

Tuber melanosporum Vitt. montre les caractéristiques ultrastructurales

des Ascomycètes: parois perforées, corps de Woronin, cloisons incomplètes

(Scannerini,1968 a; Debaud et al., 1981; Dexheimer et al., 1985; Kottke &

Oberwinkler, 1986); toutefois, la formation de vésicules et de dilatations ne

constitue pas un critère spécifique (Chevalier, 1973). Les caractères morpho-

logiques du champignon isolé (structure, ornementation, couleur) sont

déterminants pour la jeune mycorhize (Foster & Marks, 1966; Garbaye,

1990). La paroi des hyphes, de nature polysaccharidique est limitée

extérieurement par une zone mucilagineuse qui assure, lors de la

Source - MNHN. Paris

TUBER MELANOSPORUM 31

mycorhization, la cohésion des différents articles qui constituent le manteau.

Le rapprochement des hyphes autour de la racine et leur accolement à la

surface racinaire sont liés á la production de fibrilles polysaccharidiques

(Lei, 1988; Thomson et al., 1989; Ba, 1990). La couche externe de la paroi

fongique contribue donc à la formation d'un ciment interhyphal qui permet

l'édification du manteau; lors de la mise en place du réseau de Hartig dans

la jeune mycorhize, elle se trouve directement en contact avec la paroi des

cellules. corticales. Cette interface évolue puisque dans les mycorhizes

matures, il apparait, au niveau de la zone de contact entre les deux partenai-

res, un ciment. Celui-ci est marqué quel que soit le contrastant utilisé com-

me chez les mycorhizes à Ascomycétes (Scannerini, 1968b; Strullu &

Gourret, 1980; Dexheimer et al., 1985; Pargney & Leduc, 1990). L'emploi du

test PATAg permet la mise en évidence de sa nature polysaccharidique. La

couche externe de la paroi fongique semble contribuer à sa formation; toute-

fois, les résidus de la lamelle moyenne visibles lors de l'installation du

réseau de Hartig sous forme de fibrilles sont également impliqués. Ces diver-

ses origines ont été mises en évidence par des techniques de cytochimie

ultrastructurale (Pargney, 1990).

De par leur organisation générale, les mycorhizes obtenues en condi-

tions contrólées avec les vitroplants sont comparables à celles de la nature.

Toutefois, des différences peuvent exister. L'une concerne l'évolution de

l'interface au niveau du réseau de Hartig: si dans nos conditions de synthèse,

le ciment qui sépare les deux partenaires s'installe rapidement, il est moins

épais que dans les mycorhizes matures de Tuber melanosporum | Corylus

avellana (Pargney & Leduc, 1990). La composition du milieu, la nature et

l'âge des symbiotes seraient à l'origine de ces différences. La transformation

de la morphologie des mycorhizes, (virement rapide de la couleur du clair

au brun), est le reflet d'une évolution rapide de la mycorhize qui se traduit

au niveau du réseau de Hartig par une dégénérescence précoce de cellules

corticales puis des hyphes. De ce fait, l'évolution des interfaces et le

développement du ciment sont en relation avec l'état physiologique des cel-

lules adjacentes. Lorsque celles-ci dégénérent rapidement, le ciment est peu

développé. Une autre différence par rapport aux mycorhizes de la nature

concerne l'évolution du manteau: contrairement à ce qui est décrit dans cer-

taines mycorhizes (Strullu & Gourret, 1973; Strullu & Gerault, 1977;

Debaud et al, 1981) et notamment dans les mycorhizes formées avec les

espèces du genre Tuber (Scannerini, 1968 b; Pargney & Leduc, 1990), nous

n'observons pas la formation, dans le manteau des mycorhizes matures, de

deux zones, l'une externe et morte, l'autre interne et vivante. Dans notre

matériel, la mort des hyphes est simultanée dans toutes les cellules du man-

teau et elle correspond à la dégénérescence de la mycorhize.

Au cours de l'établissement de la mycorhize, les hyphes ne présentent

pas toutes la méme ultrastructure: celles directement en contact avec les cel-

lules corticales montrent un cytoplasme plus dense, moins vacuolisé et plus

riche en ribosomes que les hyphes de la zone externe du manteau. L'ac-

Croissement du nombre de ribosomes laisse supposer une augmentation de

l'activité physiologique. On sait que les polysomes sont impliqués dans la

Synthèse des polypeptides et que certains sont spécifiques de la

Source - MNHN. Paris

32 A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY

mycorhization (Hilbert & Martin, 1988). La morphologie du cytoplasme et

notamment des ribosomes, traduisent une activité fongique intense qui se

poursuit jusqu'à la mort des cellules corticales; celle-ci précede toujours celle

des hyphes. Elle est l'aboutissement d’une dégénérescence qui se manifeste

par une accentuation progressive du contraste cytoplasmique. Si la

mycorhize ne dégénère pas à la suite d'asphyxie ou de déséquilibre

nutritionnel, elle peut avoir deux évolutions possibles: soit elle reprend sa

croissance par l'apparition de nouvelles mycorhizes sur la partie basale et

médiane de la mycorhize, soit l'apex perce le manteau et continue son

évolution. Dans le cas oü les conditions de milieu sont favorables à la crois-

sance du champignon, la mycorhize se développe et continue d'accomplir la

fonction définie dans le cadre de l'association ectomycorhizienne à savoir les

échanges mutualistes. La propagation de la mycorhization parait assurée par

la présence des hyphes libres liées au manteau. Dans nos conditions de

synthése, elle s'effectue par l'installation du manteau puis par la formation

du réseau, comme dans d'autres mycorhizes (Harley, 1969; Strullu &

Gourret, 1980). Toutefois, dans certains cas, les hyphes du réseau peuvent

assurer la formation du manteau et participer à l'extension de la

mycorhization (Nylund, 1981; Fusconi, 1982); tout dépend de l'abondance

du mycélium et de sa virulence.

Au cours de la formation de la mycorhize, nous avons noté l'importan-

ce des composés taniféres qui se développent dans les vacuoles des cellules

de la plante-hóte et s'accumulent en de larges bandes autour de la racine; la

progression des hyphes paraît ainsi freinée. La formation de tanins dans les

cellules des jeunes mycorhizes traduit une réaction de la plante comparable

aux réactions de défense décrites lors des attaques parasitaires (Biehn et al,

1968; Heath & Heath, 1971; Ravisé & Tanguey, 1973; Littlefield & Bracker,

1972; EI Khatib et al., 1974; Coffey, 1975 ; Steinkamp et al., 1979; Beakes et

al., 1982). Divers auteurs ont remarqué la production de composés

phénoliques dans les ectomycorhizes (Foster & Marks, 1966; Chilvers, 1968;

Scannerini, 1968 b; Marks & Foster, 1973; Carrasco et al., 1977, 1978; Piche

et al., 1983; Malajezuck et al., 1984; Duddridge & Read, 1984; Kottke &

Oberwinkler, 1986); leur présence a été signalée soit dans les vacuoles des

cellules corticales (Bonfante-Fasolo & Scannerini, 1977; Ling-Lee et al.,

1977; Debaud et al., 1981; Nylund & Unestam, 1982; Duddridge & Read,

1984 c; Malajezuk et al., 1984), soit entre le manteau et la surface racinaire

(Scannerini & Bonfante-Fasolo, 1982). Ils peuvent constituer, dans les

mycorhizes matures, une véritable couche à tanins (Foster & Marks, 1966;

Hofsten, 1969; Warmbrodt & Eschrich, 1985). Le genre Quercus est très riche

en substances phénoliques. En culture in vitro, les substances phénoliques

sont rapidement libérées dans le milieu de culture lors du rafraichissement

de la base de la bouture. Ces substances sont toxiques car les boutures non

transférées après la sécrétion des phénols ont un développement réduit voire

nul si l'envahissement du milieu est total.

L'association des bactéries avec le genre Tuber a déjà été signalée par

plusieurs auteurs (Vrot, 1977; Kulifaj, 1984; Mamoun et al, 1986). Elles

peuvent stimuler l'établissement de la mycorhization (Bowen & Theodorou,

1979; Garbaye & Bowen, 1989; Meyer & Linderman, 1986). Chez les

Source : MNHN. Paris

TUBER MELANOSPORUM 33

endomycorhizes, elles induiraient des modifications au niveau des structures

pariétales de la racine qui faciliteraient la pénétration du champignon

(Mosse, 1962). Mamoun et al. (1986) constatent un antagonisme entre

Pseudomonas et mycélium de Tuber cultivé in vitro. Olivier & Mamoun

(1988) et Mamoun & Olivier (1989) dans une étude sur la dynamique des

populations fongiques de la rhizosphère des noisetiers truffiers (relation avec

le statut hydrique du sol puis chélation du fer et répartition taxonomique

chez les Pseudomonas fluorescents), décrivent un antagonisme direct et une

compétition en relation avec le potentiel hydrique. Ils observent en outre

une corrélation étroite entre les effectifs de Pseudomonas fluorescents et la

teneur en eau au niveau du rhizoplan de noisetiers truffiers alors qu'elle

n'existe pas dans le sol nu.

Ainsi, Tuber melanosporum forme avec des vitroplants de Quercus robur

et O. pubescens des ectomycorhizes typiques qui dans nos conditions de

synthèse évoluent rapidement. La cohésion des hyphes constituant le man-

teau est assurée par la zone externe de la paroi fongique. Celle-ci participe

aussi à la formation du ciment qui sépare les deux partenaires dans le réseau

de Hartig; d'autres constituants, tels des résidus de la lamelle moyenne

séparant les cellules corticales, sont également impliqués. Au début de la

mycorhization, les tanins produits par la racine servent probablement de

réaction de défense des racines courtes avant la symbiose et correspondent à

une couche d'isolement comme étant l'expression de la cellule-hôte à la

pénétration du champignon. Les bactéries interviendraient dans la

mycorhization par la stimulation du mycélium. La symbiose qui s'établit en-

tre les deux partenaires est momentanée et se fait tant que les cellules sont

vivantes. De par son cytoplasme dense et riche en ribosomes, le champignon

semble particuliérement actif. La dégénérescence de celles-ci est rapide et en-

traîne la mort des éléments fongiques adjacents. Les échanges entre les deux

symbiontes sont donc limités dans le temps et dans l'espace. Cependant, la

propagation de la mycorhization semble assurée par des hyphes externes li-

bres et la production de nouvelles racines courtes.

REMERCIEMENTS

Les auteurs remercient Monsieur Gerard Chevalier de l'INRA de Clermont-

Ferrand, de leur avoir donné l'inoculum pour la mycorhization de vitroplants de ché-

nes.

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LÉGENDE DES PLANCHES

Fig. 1: Vue d'ensemble d'hyphes en microscopie électronique à balayage. Noter

la présence de renflements (*). Echelle: lum. Fig. 1: Hyphal over view in scaning

electron microscopy. Notice the presence of swellings (*). Scale: lum.

Fig. 2: Détail d'une hyphe présentant un apex renflé. Echelle: lum. Fig. 2:

Detail of an hypha showing a swollen apex . Scale: lum.

Fig. 3: Coupe transversale d'une hyphe en microscopie électronique à transmis-

sion: la paroi est formée de plusieurs sirates. Acétate d'uranyle - citrate de plomb.

Echelle: lum. Fig. 3: Cross sectional area of an hypha in transmission electron mi-

croscope: the wall is composed of several layers. Uranyl acetate-lead citrate staining.

Scale: lum.

Source : MNHN. Paris

TUBER MELANOSPORUM 39

Fig. 4: Coupe d'hyphe montrant une cloison perforée entourée de part et d'au-

tre de corps de Woronin (W). Test PATAg. Echelle: lum. Fig. 4: Cross section area

showing a perforated wall surrounded with a Woronin body (W). PATAg test.

Scale: lum.

Fig. 5: L'association entre deux hyphes se fait par accolement des parois exter-

nes sous forme de mucilage. Test PATAg. Echelle: 0,7um. Fig. 5: Two hyphae are

combined by mucusing of the external walls. PATAg test. Scale: 0.7um.

6: Des bactéries en forme de batonnets sont trés abondantes aux abords

immediats des hyphes. Acétate d'uranyle-citrate de plomb. Echelle: lum. Fig. 6:

Bacillus bacteria are very abondant in the immediate surroundings of the hyphae.

Uranyl acetate-lead citrate staining. Scale: lum.

Fig. 7: Vue macroscopique de mycorhizes obtenues en conditions contrólées. La

présence de spinules (Flèche) perpendiculaires à la surface de la racine constitue le

caractère spécifique des mycorhizes de Tuber melanosporum. Fig. 7: Macroscopic

view of mycorrhizae produced in controlled environnement. The presence of spinulae

(arrow) normal to the root surface is specific to the Tuber melanosporum.

Fig. 8: Vue d'ensemble d'une jeune mycorhize en microscopie électronique à

balayage. Les hyphes du manteau sont agglomérées entre elles en plaques. Des

hyphes libres sont présentes sur la surface du manteau et longent la racine longue

adjacente. Echelle: lum. Fig. 8: Overview of a young mycorrhiza through a

scanning electron microscope. The hyphae of the mantle are gathered in the form of

tablets. The free hyphae are present on the surface of the mantle and along the adja-

cent long root. Scale: lum.

Fig. 9: Les hyphes libres se présentent parfois en amas sur la surface du man-

teau, Echelle: 0,5um. Fig. 9: The free hyphae are sometimes clustered on the mantle

surface. Scale: 0.Sum,

Fig. 10: Coupe transversale d’une jeune mycorhize en microscopie électronique

à balayage. Le manteau (M) est peu épais et le réseau de Hartig n'est pas présent.

Echelle: 0,5um. Fig. 10: Cross sectional area of a young mycorrhiza through

scanning electron microscope. The mantle (M) is thin; the Hartig net is not present.

Scale: 0.5um.

Fig. 11: Détail d'une mycorhize ágée présentant un redémarrage de l'apex (*)

par écartement du manteau. Des hyphes libres (fléche) sont peu abondantes sur la

surface du manteau. Echelle: 0,25um. Fig. 11: Detail of an aged mycorrhiza

showing a resumption of the apex (*) through the mantle. The free hyphae are not

Very abondant оп the surface of the mantle (arrow). Scale: 0.25um.

Fig. 12: Coupe transversale d’une mycorhize mature. Les hyphes du manteau

(M) sont de sections variées Le réseau de Hartig (RH) est présent. Echelle: lum.

d Cross section of an adult mycorrhiza. The mantle hyphae have various sec-

tions (M). The Hartig net is found (HR). Scale: lum.

Fig. 1 Lors du début de la synthése, les hyphes s'accolent entre elles et 4 la

surface de la racine par l'émission de fibrilles. Les bactéries (b) sont déjà présentes.

Acétate d'uranyle-citrate de plomb. Echelle: lum. Fig. 13: At the beginning of a

synthesis, the hyphae stick together and on the surface of the root by emission of.

fibrils . A bacteria (b) are already present. Uranyl acetate-lead citrate staining.

Fig. 14: Vue d'ensemble d'un jeune manteau oi les hyphes sont de différentes

sections et renferment de nombreux organites. Les bactéries (b) sont présentes dés le

début d'infection. Acétate d’uranyle-citrate de plomb. Echelle: lum. Fig. 14:

Overview of a young mantle where the hyphae have various cross sections and

contain numerous organels. Uranyl acetate-lead citrate staining. Scale: lum.

Source MNHN. Paris

40 A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY

Fig. 15: Lors du début de la mycorhization, le contact entre les hyphes et les

cellules corticales (Cc) est intime. Les hyphes émettent des fibrilles à l'approche des

cellules corticales (Ce) qui présentent de nombreuses travées de réticulum

endoplasmique et des tanins dans les vacuoles. Acétate d'uranyle-citrate de plomb.

Echelle: lum. Fig. 15: At the beginning of a mycorrhization, the contact between the

hyphae and the cortical cells (Ce) is close. The hyphae emit fibrils when approaching

the cortical cells (Cc) which present a large number of endoplasmic reticulum and

tannins in the vacuoles. Uranyl acetate-lead citrate staining. Scale: lum.

Fig. 16: L'évolution de la mycorhization est souvent freinée par des bandes à

tanins (T). Le contact entre les hyphes du manteau et les cellules corticales (Cc) est

alors indirect. Les hyphes présentent un cytoplasme vacuolisé avec de nombreux

organites. Acétate d’uranyle-citrate de plomb. Echelle: lum. Fig. 16:

Mycorrhization is often slowed down by tannic bands (T). The contact between the

mantle hyphae and the cortical cells is then indirect, The hyphae are composed of a

yacuolized cytoplasm and a large number of organels. Uranyl acetate-lead citrate

staining. Scale: lum.

Fig. 17: Lors du développement de la mycorhization, l'hyphe s'insinue entre les

bandes à tanins (T) et progresse vers les cellules corticales (Cc) pour la formation du

réseau de Hartig. Acétate d'uranyle-citrate de plomb. Echelle: lum. Fig. 17: During

a mycorrhization, a hypha worn its aways between the tannic bands (T) and move to

words the cortical cells (Cc) to constitute the Hartig net. Uranyl acetate-lead citrate

staining. Scale: lum.

Fig. 18: L'insinuation de l'hyphe sous les bandes à tanins (T) entraine la for-

mation d'un manteau interne (Mi) dont les hyphes sont en file et de section peu

allongée. Elles sont moins vacuolisées et ont un cytoplasme plus dense que celles du

manteau externe (Me). Acétate d'uranyle-citrate de plomb. Echelle: lum. Fig. 18:

The introduction of the hypha through the tannic bands (T) leads to the building of

an inner mantle (Mi) whose hyphae are aligned and have short cross sections. They

are less vacuolated and their cytoplasm is denser than that of outer mantle. Uranyl

acetate-lead citrate staining. Scale: lum.

Fig. 19: Durant la formation du réseau de Hartig, la lamelle moyenne est

écartée. L'interface se caractérise par l'absence de ciment. La couche externe de la

paroi fongique est réactive au test PATAg et émet des excroissances dans les espaces

interhyphaux. Echelle: lum. Fig. 19: During the formation of the Hartig net, the

middle lamella is moved away, the interface is characterized by the absence of

matrix, The external layer of the fungal wall is reactive to the PATAg test and

produces out growths in the interhyphal spaces. Uranyl acetate-lead citrate staining.

Scale: lum.

Fig. 20: L'installation du réseau de Hartig provoque la séparation des cellules

corticales; dans l'espace ainsi créé, des résidus de la lamelle moyenne sont présents

sous forme de fibrilles (flèche). Test PATAg. Echelle: lum. Fig. 20: The instal-

lation of Hartig net produces the separation of the cortical cells; fibrils that are

found in these intercellules spaces are the remnants of middle lamella (arrow).

PATAg test. Scale: 14m.

Fig. 21: Chez les mycorhizes matures, l'apex est recouvert d'un manteau formé

de plusieurs couches mais le réseau n'est pas toujours installé. Les cellules corticales

ne renferment que des tanins. Acétate d’uranyle-citrate de plomb. Echelle: 0,5um.

Fig. 21: In the mature mycorrhizae, the apex is covered with a multi-layered mantle

but the Hartig net is not always developed and the cortical cells contain only

tannins. Uranyi acetate-lcad citrate staining. Scale: 0.Sum.

. Fig. 22: Au niveau de la zone sous apicale, le réseau de Hartig est bien

développé. L'interface se caractérise par un ciment de plus en plus abondant.

Acétate d'uranyle-citrate de plomb. Echelle: Ium. Fig. 22: In the subapical zone,

Source - MNHN. Paris

TUBER MELANOSPORUM 41

the Hartig net is well developed. Matrix is more and more abondant in the interface.

Uranyl acetate-lead citrate staining. Scale: lum.

Fig. 23: Au stade plus avancé de la mycorhization, les hyphes du réseau de

Hartig sont peu vacuolisées alors que les cellules corticales (Cc) présentent un cyto-

plasme dégénérescent. Test PATAg. Echelle: lum. Fig. 23: In a more advanced sta-

ge of mycorrhization, the hyphae of Hartig net are not very vacuolized while the

corticals cells (Cc) show a degenerated cytoplasm. PATAg test. Scale: Ium.

Fig. 24: Les cellules corticales et fongiques présentent un cytoplasme

dégénérescent dans la zone basale de la mycorhize mature. Test PATAg. Echelle:

lum. Fig. 24: The cortical cells as well as the fungal cells present a degenerated

cytoplasm in the basal zone of the mature mycorrhiza. PATAg test. Scale: Гит.

Source - MNHN. Paris

42 A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY

Source : MNHN, Paris

TUBER MELANOSPORUM 43

Source : MNHN, Paris

44 A. BOUTEKRABT et J.C. PARGNEY

Source : MNHN, Paris

TUBER MELANOSPORUM 45

Source : MNHN, Paris

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1991, 12 (1): 47-61 47

CYTOCHIMIE ULTRASTRUCTURALE DES INTERFACES

PRESENTES DANS L'ASSOCIATION

ECTOMYCORHIZIENNE TUBER MELANOSPORUM VITT./

CORYLUS AVELLANA L.

Jean-Claude PARGNEY

Laboratoire de Biologie des Ligneux, B.P. n° 239,

Université de Nancy 1, 54506 Vandoeuvre-les-Nancy

Cedex, France.

RÉSUMÉ - L'association ectomycorhizienne Tuber melanosporum/Corylus avellana

est utilisée pour caractériser cytochimiquement les structures des différentes interfa-

ces qui S'établissent à la suite de la symbiose. Les techniques employées sont, d'une

part des tests d'identification (test PATAg, complexe WGA-or colloidal) et d'autre

part, des digestions enzymatiques (pectinase, cytoh

l'EDTA, le DMSO et la MeNH2. Entre les hyphes, 1’ е раг 1“

lement des parois fongiques et la formation d'un ciment interhyphal; elle est modi

lors de la mort des cellules (manteau externe). Au niveau des zones de contact entre

les deux partenaires, d’autres éléments interviennent dans la constitution du ciment

comme les composés pectiques issus de la lamelle moyenne des cellules racinaire:

Entre les hyphes et les composés tanifères présents dans le manteau interne, des

résidus pariétaux, provenant de cellules dans lesquelles se sont formés les tanins, sont

incorporés au ciment.

ABSTRACT - The ectomycorrhizian association Tuber melanosporum/Corylus avella-

na was used in order to determine the cytochemical characters of the different inter-

faces created by such symbiosis. This investigation was made by identification tests

(test of PATAg, WGA-gold colloidal complex), enzymatic digestions (pectinase, cy-

tohelicase) as well as chemical extractions (EDTA, DMSO and MeNH2). The ob-

Served interface between hypha is built by an adherance of the fungal walls followed

by the formation of an interhyphal matrix and is modified by cell death (external

coat). At the arcas of contact between the two partners, matrix composition includes

several other elements such as pectic components originating from the medial layer

of root cells. Wall elements of tannic cells are incorporated into the matrix seen be-

tween the hypha and tannins present in the internal coat.

MOTS CLÉS : ectomycorhize, Tuber melanosporum, cytochimie.

INTRODUCTION

Tuber melanosporum établit avec Corylus avellana des ectomycorhizes

constituées d'un manteau bien développé et d'un réseau de Hartig (Pargney

& Leduc, 1987, 1990). Les hyphes externes du manteau forment un tissu

Source : MNHN, Paris

48 J.C. PARGNEY

mort périphérique. Les élements fongiques vivants (manteau interne et

réseau de Hartig) s‘organisent autour des cellules corticales, en un ensemble

fonctionnel remarquable, impliqué dans les échanges entre la plante et le

champignon.

Dans les différentes zones de la mycorhize, il s'établit entre les cellules,

des interfaces diverses. Dans le manteau, l'interface est constituée des

plasmalemmes et des parois fongiques séparées par un ciment; lorsque les

hyphes sont mortes comme dans le manteau externe, les plasmalemmes

n'existent plus (Pargney & Leduc, 1990). Au niveau des jonctions entre les

deux partenaires, tous deux participent a la constitution de l'interface; les

contacts s'effectuent parfois directement par juxtaposition des parois (Foster

& Marks, 1966; Duddridge & Read, 1984; Kottke & Oberwinkler, 1986),

mais, le plus souvent, il s'établit entre les parois un ciment, appelé selon les

auteurs, couche d'enrobage (Scannerini, 1968), matrice (Scannerini &

Bonfante-Fasolo, 1983) ou zone d’apposition (Strullu, 1974; Strullu &

Gerault, 1977; Nylund, 1981; Duddridge, 1986a,b).

Le ciment se distingue des parois par son contraste: dans les

mycorhizes à Ascomycétes, il est dense aux électrons (Scannerint, 1968;

Strullu & Gerault, 1977; Strullu & Gourret, 1980; Dexheimer et al., 1985),

alors qu'il apparaît clair dans les mycorhizes à Basidiomycètes (Strullu,

1976a.b: Strullu & Gerauld, 1977; Scannerini & Bonfante-Fasolo, 1983)

Toutefois cette propriété pourrait dépendre du stade de développement de la

mycorhize et de la souche fongique concernée (Kottke & Oberwinkler, 1986).

Des études cytochimiques ont permis de confirmer la nature glycoprotéique

du ciment (Pargney & Leduc, 1990) et de préciser l'origine de certains

constituants (Pargney, 1990); au niveau du réseau de Hartig, il ne presente

pas les mémes caractéristiques cytochimiques que l'une ou l'autre des parois

adjacentes (Pargney, 1990). Les essais de caractérisation cytochimique

effectués sur les structures de l'interface au niveau du réseau de Hartig dans

l'association Truffe/Noisetier (Pargney, 1990) peuvent étre généralisés aux

autres interfaces afin de comparer et d'analyser les structures impliquées

dans leur formation.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

MATERIEL

Des plants de Corylus avellana sont mycorhizés selon la technique de

Chevalier & Grente (1978) par Tuber melanosporum. Après trois mois de

culture en motte Melfert, les mycorhizes matures (de couleur brun clair)

sont prélevées et débitées en courts fragments (0,5 à Imm de longueur); seu-

les les zones apicales et subapicales sont fixées pour la microscopie

électronique.

TECHNIQUES DE CYTOCHIMIE ULTRASTRUCTURALE

Les échantillons sont fixés par le glutaraldéhyde à 2,5%, tamponné à

pH 7,2 par le tampon cacodylate de sodium (à 4°C et pendant 6h). Après la-

Source - MNHN. Paris

INTERFACES DE L'ASSOCIATION TUBER/CORYLUS 49

vage, ils sont post-fixes au tétroxyde d'osmium á 1% dans le même tampon

(à la température de la glace fondante et pendant lh). Ils sont ensuite

déshydratés, inclus dans de l'épon 812, puis coupés.

- Techniques de localisations

Les polysaccharides sont mis en évidence par le test PATAg (Thiery,

1967). Les coupes ainsi traitées servent également de référence pour

apprécier les résultats obtenus après les digestions enzymatiques et les ex-

tractions chimiques subies par d'autres échantillons. La chitine est localisée

sur coupe par utilisation du complexe WGA-or colloïdal permettant de

détecter les résidus de N-acétylglucosamine qu'elle renferme (Roberts et al.,

1983)

- Techniques de digestions enzymatiques

Aprés fixation par le glutaraldéhyde et ringage dans le tampon

cacodylate, les fragments de mycorhizes sont lavés dans une solution de

sorbitol & 2%, puis incubés dans de la pectinase (Sigma), en solution a 5

Jans du sorbitol 4 2% et ä pH 3,5, ou dans de la cytohélicase (IBF) en solu-

tion a 5% dans du sorbitol 4 2% et à pH 5,8. Les digestions enzymatiques

s'effectuent à 37°C pendant 48 et 72h. Les échantillons sont ensuite soi-

sneusement — lavés, —post-osmiés, déshydratés et enrobes comme

précédemment. Les coupes sont contrastées par le test PATAg.

Va

Traitements chimiques

Les fragments de mycorhizes sont fixés au glutaraldéhyde, puis lavés

lans le tampon cacodylate. Ils sont ensuite incubés dans un solvant chimi-

jue: acide éthylénediamine tétracétique (EDTA) en solution aqueuse à 1%,

liméthylsulfoxyde pur (DMSO) ou méthylamine (MeNH2) en solution

iqueuse à 40% (Reis & Roland, 1974; Reis, 1981). Les traitements s’effec-

uent a 25°C pendant 48 et 72h. Aprés lavage et post-fixation, les

*chantillons sont déshydratés et inclus dans l'Epon. Les coupes sont soumi-

ses au test PATAg.

RESULTATS

L'étude ultratsructurale de la mycorhize, présentée dans d'autres publi-

cations (Pargney & Leduc, 1987, 1990; Pargney, 1990), a permis de définir

rois zones: le manteau externe, le manteau interne et le réseau de Hartig

Fig. 1). Elles sont utilisées comme référence pour la présente étude.

LOCALISATIONS ULTRASTRUCTURALES

Après application du test PATAg de localisation des polysaccharides,

loutes les interfaces montrent un marquage important. Dans le manteau ex-

lerne (Fig. 2), la paroi fongique et le ciment interhyphal sont très contrastés

et la limite entre les différentes structures est souvent difficile à définir.

Dans le manteau interne (Fig. 3), la paroi fongique apparaît pluristratifiée et

la couche périphérique fortement marquée permet de mieux localiser le ci-

Source - MNHN. Paris

50 J.C. PARGNEY

ment; les composés tanifères sont parfaitement distincts des structures

pariétales. Au niveau du réseau de Hartig (Fig. 4), le ciment, la paroi des

cellules racinaires et la couche externe de la paroi fongique présentent des

densités électroniques voisines et leurs limites sont difficiles à discerner; la

couche interne de la paroi fongique, moins dense, est par contre de

délimitation plus aisée.

L'utilisation de la WGA associée à l'or colloidal permet le marquage

de la paroi fongique quelque soit la zone considérée (Fig. 5, 6, 7). Les grains

d'or, isolés ou groupés, ne présentent pas de répartition préférentielle. 115

sont plus rares dans le ciment du manteau externe (Fig. 5) et quasiment ab-

sents de celui du manteau interne (Fig. 6) et du réseau (Fig. 7). Les

composés tanifères (Fig. 6) et la paroi des cellules racinaires (Fig. 7) en sont

dépourvus.

DIGESTIONS ENZYMATIQUES

Après utilisation de la pectinase, les interfaces ont subi quelques mo-

difications. On note un affaiblissement de l'intensité du test PATAg au ni-

veau du ciment et ceci quelque soit la zone considérée (Fig. 8, 9, 10). Dans

le manteau externe (Fig. 8), le ciment, moins dense, permet une meilleure

appréciation des limites de la paroi fongique. Des zones d'altération sont

particuliérement visibles au niveau des composés taniféres (Fig. 9) et dans le

ciment du réseau de Hartig (Fig. 10). Les parois des hyphes et des cellules

racinaires ne sont que faiblement modifiées méme aprés des incubations

prolongées (72h).

La cytohélicase a une action plus efficace. Dans le manteau externe

(Fig. 11), le ciment et les parois fongiques sont partiellement attaqués. Au

niveau du manteau interne (Fig. 12), le ciment est fortement altéré; les pa-

rois fongiques présentent une dégradation différentielle de leurs strates: la

couche interne est fortement lysée alors que la couche périphérique reste

bien marquée par le test PATAg. Dans le réseau (Fig. 13), les dégradations

sont tout aussi remarquables: la couche interne de la paroi fongique et les

parois des cellules racinaires sont trés sensibles au traitement, le ciment est

partiellement lysé et la couche externe de la paroi fongique demeure for-

tement réactive au test PATAg.

TRAITEMENTS CHIMIQUES

Le traitement par l'EDTA entraîne un éclaircissement du ciment et des

parois fongiques du manteau externe (Fig. 14). Dans le manteau interne

(Fig. 15), le ciment montre une plus grande sensibilité au solvant; l'attaque

est particulièrement importante au voisinage des composés tanifères. Dans le

réseau de Hartig (Fig. 16), on observe également un éclaircissement du ci-

ment et des structures pariétales des deux partenaires. Dans certains cas, on

assiste, aprés utilisation de l'EDTA, à un gonflement des interfaces (Fig. 16).

Le traitement par la MeNH2 provoque une altération partielle du ci-

ment du manteau externe (Fig. 17); par contre, les parois fongiques semblent

peu dégradées. Au niveau du manteau interne (Fig. 18), l'attaque est plus

importante: le ciment et les composés taniféres sont fortement altérés ce qui

Source - MNHN. Paris

INTERFACES DE L'ASSOCIATION TUBER/CORYLUS SI

entraîne la séparation des hyphes les unes des autres. Dans le réseau de

Hartig (Fig. 19), le ciment est également dissout. Les parois fongiques sont

partiellement dégradées aussi bien dans le manteau interne (Fig. 18) que

dans le réseau (Fig. 19).

Le traitement par le DMSO entraine un éclaircissement des interfaces

du manteau externe (Fig. 20) et du manteau interne (Fig. 21). Les composés

taniferes sont particulierement sensibles à ce traitement: les dégradations

peuvent étre peripheriques (Fig. 22) ou plus profondes (Fig. . Dans le

réseau (Fig. 24), le ciment est également altéré et les parois fongiques parais-

sent plus attaquées que dans le manteau. Sur des coupes favorables (Fig.

23), on peut observer la présence de restes de parois entre deux masses

tanifères,

DISCUSSION ET CONCLUSIONS

Dans l'association ectomycorhizienne Tuber melanosporum! Corylus

wellana, les interfaces qui s'établissent sont donc variées et dépendent, d'une

part, des cellules mises en jeu et, d'autre part, de leur état physiologique. El-

es sont construites sur le méme modéle et sont constituées du plasmalemme

*t de la paroi d'une cellule, d'un ciment, de la paroi et du plasmalemme de

la cellule adjacente; cependant, lorsque les cellules sont mortes, les

»lasmalemmes n'interviennent plus.

La couche pariétale périphérique des hyphes est largement impliquée

lans la formation des interfaces; elle crée entre les cellules fongiques, une

one d'accollement et de contact, le ciment, qui permet leur aggrégation et

‘édification du manteau (Boutekrabt & Pargney, 1990). Bien que d'origine

ongique, le ciment ne renferme toutefois pas de chitine. Les rares grains

l'or observés dans les parois des cellules corticales et dans le ciment ne per-

nettent pas de conclure a la présence de chitine dans ces structures.

Massicotte et al. (1987) ont également noté, lors d'une étude immuno-

ytochimique de l'association ectomycorhizienne Alnus crispus/Alpova

liplophloeus, la présence d'un marquage dans les parois des cellules

acinaires; celui-ci ne serait pas dü à la chitine, mais à la fraction

lycoprotéique pariétale qui renferme de la N-acétylglucosamine (Harder et

iL, 1986).

Le ciment du manteau interne et celui du manteau externe ne

présentent pas la méme sensibilité aux différents traitements. A la suite de

la dégénérescence des hyphes et de leur mort, le ciment est difficilement

Altérable. Les résultats obtenus avec la MeNH2 sont particulièrement specta-

culaires puisqu'ils montrent la dislocation des hyphes du manteau interne

‘lors que l’altération est peu importante dans le manteau externe. Les causes

de cette diversité de réponses pourraient provenir d’une variation dans la

Composition du ciment, mais aussi d'une différence de polymérisation. Dans

le manteau interne, le ciment interhyphal présenterait une structure beau-

coup moins stable que dans le manteau externe, vraisemblablement due à

une différence de liaisons entre les polyméres; ceux-ci sont difficilement

deplagables dans le manteau externe du fait d'une bonne cohésion, alors

Source - MNHN. Paris

J.C. PARGNEY

u

JS

qu'ils sont aisément extraits dans le manteau interne où les liaisons seraient

moins nombreuses ou plus labiles. La dégénérescence puis la mort des

hyphes entraînent donc une transformation profonde de l'interface aboutis-

sant à la formation d'une structure stable et plus résistante aux solvants et

aux enzymes. Diverses modifications y contribuent: modification de la

structure de la paroi fongique dans laquelle les strates ne sont plus visibles,

modification de celle du ciment qui devient peu sensible aux extractions et

aux digestions enzymatiques, enfin, acquisition d'une plus grande

homogenéité de l'interface qui se traduit par une uniformité de contraste des

parois fongiques et du ciment.

Les composés tanifères sont sensibles à certaines extractions (pectinase,

EDTA, DMSO et surtout MeNH2); les dégradations peuvent être

périphériques ou plus profondes. Dans certains cas (après traitement par

VEDTA notamment), le ciment qui borde ces composés tanifères montre des

altérations locales, plus prononcées que celles observées entre les hyphes, et

qui traduisent une hétérogénéité de composition. À ce niveau, les polymères

impliqués dans la constitution du ciment apparaissent donc de nature

différente de ceux situés entre les hyphes. Le traitement par l'EDTA, classi-

quement utilisé pour caractériser certaines zones préférentielles, comme la

lamelle moyenne des cellules (Reis, 1981), agit sur les structures riches en

composés pectiques (Thibault, 1980); sa spécificité, testée au niveau de la

lamelle moyenne des cellules corticales de ces mycorhizes (Pargney, 1990),

permet de conclure à la présence le long des composés taniféres de consti-

tuants pectiques dont l'origine est à chercher dans les structures parietales

préexistantes qui les entouraient. Les composés tanifères sont issus de cellu-

les racinaires devenues tanifères et dont les parois sont lysées lors de la mise

en place du champignon (Boutekrabt & Pargney, 1990); des éléments

pariétaux peuvent ainsi s'incorporer au ciment avoisinant. La figure 24 mon-

tre notamment des restes de structures pariétales entre des composés

taniféres. Le ciment qui borde ces composés présente donc deux fractions

d'origine différente: l'une est fongique comme dans les autres parties du

manteau; l'autre est constituée de polymères issus de la lyse pariétale des

cellules tanifères et qui n'ont pu être mobilisés par le champignon.

L'édification de ce type d'interface nécessite une réorganisation entre les

polymères fongiques et ceux issus des cellules tanifères, qui aboutit à la for-

mation d'une nouvelle structure.

Dans le réseau de Hartig, le ciment qui s'établit entre les deux parte-

naires peut avoir plusieurs origines. La fraction. glycoprotéique, détectée

d'une part par le test PATAg, et d'autre part, par la réaction de Gomori

(Pargney, 1990), proviendrait des parois des deux organismes (Debaud et al.,

1981). L'utilisation des techniques de cytochimie ultrastructurale montre que

des parentés existent entre les composés pariétaux des deux partenaires et les

constituants du ciment qui les unit (Pargney, 1990). Certains constituants du

ciment pourraient avoir une origine fongique, comme, par exemple, les

polysaccharides non extraits par la cytohélicase abondants dans la couche

externe de la paroi du champignon et qui sont également présents, en

quantité plus réduite, dans le ciment. Enfin, d'autres constituants ont une

origine racinaire: les extractions par la pectinase et l'EDTA révèlent une fai-

Source - MNHN. Paris

INTERFACES DE L'ASSOCIATION TUBER/CORYLUS

u

ble quantité de composés pectiques qui pourraient correspondre à des

résidus de la lamelle moyenne des cellules corticales, libérés lors de la mise

en place du réseau de Hartig (Debaud et al., 1981; Massicotte et al., 1986;

Pargney, 1990; Boutekrabt & Pargney, 1990). Ces résidus détectés пе

représentent que la partie des constituants de la lamelle moyenne non

mobilisés par le champignon. L'édification du ciment au niveau du réseau

de Hartig est donc le résultat de la transformation locale des structures

pariétales et d’une réorganisation de polymères issus des deux partenaires

conduisant à la mise en place d'une nouvelle structure.

Ainsi le ciment, qu'il soit interhyphal ou situé entre les deux partenai-

res, apparait comme une structure d'accrochage, moins stable que les parois

adjacentes et dont l'évolution semble cependant liée à celle des cellules qu'il

unit: dans le manteau, lorsque les hyphes meurent, le ciment et les parois se

transforment en une structure stable, cytologiquement homogéne et diffici-

lement altérable. Dans le réseau, d'autres composés peuvent étre incorporés

à ce ciment lors de la mise en contact du champignon entre les cellules de la

plante-hóte; ils sont issus de la lyse partielle et de la transformation de cer-

taines assises pariétales (lamelle moyenne et, peut-être, zone externe de la

paroi). Lorsque les conditions de culture provoquent une dégénérescence ra-

pide des cellules racinaires et des hyphes, le ciment se développe peu

(Boutekrabt & Pargney, 1990). Par contre, lorsque les cellules restent fonc-

tionnelles, il devient important. Il pourrait constituer une zone de l'interface

dans laquelle les métabolites, qui migrent entre les deux partenaires, pour-

raient momentanément s’accumuler en fonction des besoins des symbiotes.

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LEGENDES DES PLANCHES

Fig. | - Détail d'une coupe transversale de la mycorhize montrant le manteau

externe (ME), le manteau interne (MI) avec les composés taniféres (1) et le réseau de

Hartig (RH) entre les cellules racinaires (C). Acétate d'uranyle-citrate de plomb.

Echelle: Sum.

Fig. 1 - Portion of a cross section of the mycorrhizae showing the outer sheath

(ME), the inner sheath (MI) with the tannic substances (t) and the Hartig net (RH)

between the root cells (C). Uranyl acetate-lead citrate staining. Scale: Sum.

Fig. 2 à 4 - Test PATAg (échelle: Ium). Fig. 2 - Manteau externe. Fig. 3 -

Manteau interne. Fig. 4 - Réseau de Hartig. Les parois fongiques (h), celles des cel-

lules racinaires (p) et le ciment (c) sont fortement marqués. La paroi des hyphes (h)

montre une zone externe plus dense que la strate interne.

Fig. 2 to 4 - PATAg test (scale: Im). Fig. 2 - Outer sheath. Fig. 3 - Inner

sheath. Fig. 4 - Hartig net. The fungal walls (h), the walls of the root cells (p) and

the matrix (c) are electron dense. The fungal wall (h) shows an outer layer more

electron dense than the inner layer.

Fig. 5 û 7 - Marquage par le complexe WGA-or colloidal. Fig. 5- Manteau

externe. Echelle: Ium. Fig. 6 - Manteau interne. Echelle: ит. Fig. 7- Réseau de

Hartig. Echelle: 0,5jm. Les résidus de N-acétylglucosamine sont localisés essen-

tellement dans les parois fongiques (h), mais rarement dans le ciment (c), les

composés taniféres (t) et la paroi des cellules racinaires (p).

Fig. 5 to 7 - WGA-gold labelling. Fig. 5- Outer sheath. Scale: lum. Fig. 6 -

Inner sheath. Scale: lum. Fig. 7 - Hartig net. Scale: 0,5um. Residues of N-

acetylglucosamine are principally detected on the fungal walls (h), but rarely on the

matrix (c), the tannic substances (t) or the wall of the root cells (p).

Source : MNHN. Paris

Y

a

J.C. PARGNEY

Fig. 8 à 10 - Digestion par la pectinase. Test PATAg (échelle Im). Fig. 8 -

Manteau externe. Fig. 9 - Manteau interne. Fig. 10 - Réseau de Hartig. Le ciment

(© et la zone périphérique (flèches) des composés tanifères (t) sont partiellement

altérés, Les parois des hyphes (h) et des cellules racinaires (p) ne sont que faiblement

modifiees.

Fig. 8 to 10 - Action of pectinase. PATAg test (scale: 14m). Fig. 8 - Outer

sheath. Fig. 9 - Inner sheath. Fig. 10 - Hartig net. The matrix (c) and the periphery

(arrows) of tannic substances (t) are partially damaged. The fungal walls (h) and the

walls of the root cells (p) are slightly modified.

Fig. 11 4 13 - Digestion par Іа eytohélicase. Test PATAS. Fig. 11 - Manteau

externe. Echelle: Ium. Fig. 12 - Manteau interne. Echelle: 1m. Fig. 13 ~ Réseau de

Hartig. Echelle: 2um. Les parois des hyphes (h), celles des cellules racinaires (p) et

le ciment (c) sont plus ou moins attaqués.

Fig. 11 to 13 - Action of cytohelicase. PATAg test. Fig. 11 - Outer sheath.

Scale? tum. Fig. 12 - Inner sheath, Scale: 1pm. Fig. 13 - Hartig net. Scale: 24m.

The fungal walls (h), the walls of the root cells (p) and the matrix (c) are more or

less degraded.

Fig. 14 à 16 - Extraction par ГЕРТА. Test PATAg (échelle: Тит). Б

Manteau externe. Fig. 15 - Manteau interne. Fig. 16 - Réseau de Hartig. Le

des hyphes (h) et des cellules racinaires (p) sont peu alterées. Le ciment (c) est par-

tiellement degrade surtout le long des composés taniféres (t) du manteau interne

(flèches) et au niveau du réseau de Hartig.

Fig, 14 to 16 - EDTA extraction. PATAg test (Scale: 14m). Fig. 14 - Outer

sheath. Fig. 15 - Inner sheath. Fig. 16 - Hartig net. The fungal wal (h) and the

ls of the root cells (p) are slightly modified. The matrix (c) is partially damaged

essentially along tannic substances (t) inside the inner sheath (arrows) and in the

Hartig net.

Fig. 17 à 19 - Extraction par la MeNH2. Test PATAg (échelle: Lum). Fig. 17

- Manteau externe, Fig. 18 - Manteau interne. Fig. 19 - Réseau de Hartig. Le ci-

ment (c) et les composés taniféres (t) sont trés dégradés. Les parois (h et p) sont

également attaquécs.

Fig. 17 to 19 - MeNH2 extraction. PATAg test (scale: lum). Fig. 17 - Outer

sheath. Fig. 18 - Inner sheath. Fig. 19 - Hartig net. The matrix (c) and the tannic

Substances are highly degraded. The walls (h and p) are also modified.

Fig. 20 à 24 - Extraction par le DMSO. Test PATAg (échelle: 1um). Fig. 20-

Manteau externe. Fig. 21 à 23 - Manteau interne. Fig. 24 - Réseau de tig. Les

parois (h et p) et le ciment (c) sont plus ou moins alt Noter la dégradation par-

tielle des composés taniféres (t) et la présence de structures pariétales entre deux

masses tanifères (Fig. 23, fléches).

Fig. 20 to 24 - DMSO extraction. PATAg test (scale: 1pm). Fig. 20 - Outer

sheath. Fig, 21 to 23 - Inner sheath. Fig. 24 - Hartig net. The walls (h and p) and

the matrix are more or less degraded. Note a modification of tanic substances (t)

and the presence of walls between two tannic areas (Fig. 23, arrows).

Source : MNHN. Paris

INTERFACES DE L’ASSOCIATION TUBER/CORYLUS 57

Source : MNHN. Paris

J.C. PARGNEY

ur

Source - MNHN. Paris

INTERFACES DE L'ASSOCIATION TUBER/CORYLUS 59

Source : MNHN. Paris

60 J.C. PARGNEY

Source : MNHN. Paris

INTERFACES DE L’ASSOCIATION TUBER/CORYLUS 61

Source : MNHN, Paris

Cryptogamie, Mycol. 1991, 12 (1): 63-69 63

FUNGI ON THE HAIR OF SMALL MAMMALS IN EGYPT

M.M.K. BAGY and A.Y. ABDEL-MALLEK

Botany Department, Faculty of Science, Assiut

University, Assiut, Egypt.

ABSTRACT - Hair samples from small mammals were examined for the presence of

keratinophilic and saprophytic fungi. 119 specimens were examined of which 58 were

from rabbits, 25 from guinea pigs, 20 from mice, 14 from cats and 2 from rats. 23

genera and 53 species were isolated. The commonest in order of frequency were

members of the genera Aspergillus and Penicillium. In low frequency, several derma-

tophytes (Trichophyton, Microsporum and Arthroderma) were recovered as well as

some other fungal species pathogenic to man and animals (Myceliophthora, Chaeto-

mium, Mucor, Fusarium, Rhizopus, Syneephalastrum, Botryotrichum, Cladosporium,

Alternaria, Scopulariopsis, Circinella, Cylindrocarpon, Arthrobotrys, Drechslera, Tri-

choderma, Humicola and Acremonium).

RÉSUMÉ - 23 genres et 53 espèces de champignons kératinophiles et saprophytes

ont été isolés à partir de 119 échantillons de poils de petits mammifères (lapins, co-

bayes, souris, chats, rats). Les champignons les plus communs appartiennent aux

genres Aspergillus et Penicillium. En faible fréquence, plusieurs dermatophytes

furent isolés (Trichophyton, Microsporum et Arthroderma), ainsi que quelques autres

espèces pathogènes de l'homme et d'animaux (Myceliophthora, Chaetomium, Mucor,

Fusarium, Rhizopus, Syncephalastrum, Botryotrichum, Cladosporium, Alternaria,

Scopulariopsis, Circinella, Cylindrocarpon, Arthrobotrys, Drechslera, Trichoderma,

Humicola and Acremonium).

KEY WORDS : Keratinophilic fungi, dermatophytes, Egypt.

INTRODUCTION

Small free living mammals have been recognized as a source of both

human and animal dermatophytes caused by the fungi (Ajello, 1959; Otcena-

sek & Dvorak 1962; Rees, 1967; Gugnani et al., 1975; Hubalek et al., 1979;

Otcenasek et al., 1980; Aho 1983), and the isolations of dermatophytes and

other keratinolytic fungi from the hair of mammals has been reviewed by se-

veral authors (Ajello, 1959; Marples, 1961, 1967; Otcenasek & Dvorak, 1962;

Varsavsky & Ajello, 1964; Alteras et al., 1966; Smith et al., 1969; Hoffmann

et al., 1970; Knudston & Roberstad, 1970; Mantovani & Morganti, 1971;

Houin et al., 1972; Gugnani et al., 1975).

In Egypt, Bagy (1986) studied the frequency of fungi on the hair sam-

ples from dog, donkey and cow. Also, Bagy & Abdel-Hafez (1985) studied

Source - MNHN. Paris

M.M.K. BAGY and A.Y. ABDEL-MALLEK

64

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Source : MNHN. Paris

65

FUNGI ON MAMMALS HAIR IN EGYPT

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(GEL) TEL (г) зен (pL) 380 (02) әоти (sz) Brd voumo (gc) aTaqer setoeds рив елэиээ

Source - MNHN. Paris

66 M.M.K. BAGY and A.Y. ABDEL-MALLEK

the mycoflora of camel and goat hairs. The present investigation was under-

taken to examine the occurrence of fungi on hair samples taken from rabbit,

guinea pig, mice, cat and rat.

MATERIAL AND METHODS

119 hair samples from rabbit, guinea pig, mice, cat and rat were col-

lected from faculty of Agriculture and animal house of Faculty of Science,

Assiut University. These samples were placed in a clean plastic bag and

transferred immediately to the laboratory. The hair samples were placed on

sterile soil moistened with sterile distilled water, remoistened whenever nec-

essary, and incubated at room temperature for up to 10 weeks. The moulds

which appeared on the baits were transferred to the surface of Sabouraud’s

dextrose agar medium (Moss & McQuown, 1969) which was supplemented

with 20 units/ml of sodium penicillin and 40 g/ml of dihydrostreptomyein.

The plates were incubated at 28°C for 3-4 weeks and the developing colonies

were examined and identified

RESULTS AND DISCUSSION

53 species which belong to 23 genera were recovered from rabbit, gui-

nea pig, mice, cat and rat hairs (Table 1). Aspergillus was the most common

genus on the hair of rabbit, guinea pig. mice, cat and rat and was encount-

cred in 100, 80, 70, 78 and 100% of the samples respectively. Six species of

Aspergillus were isolated from the five types of hair and these were 4. fumi

gatus (40%), A. flavus (22%), A. niger (21%), À. terreus (1%), A. sydowii

(1%) and A. nidulans (0.8%). Bagy (1986) isolated A. flavus, A. sydowii, A.

nidulans and A. fumigatus from the hair of dog, donkey and cow and they

were occurred in 4.6, 2.7, 2.3 and 0.8% of the samples respectively. Bagy &

Abdel-Hafez (1985) also isolated 4. niger (19.2%), A. flavus (13.3%), A. sy-

dowii (10%), А. nidulans (9.2%), A. fumigatus (2.5%), A. tamarii (2.5%), A.

ustus (2.5%) and A.ochraceus (1.7%) from the hair of camel and goat.

Penicillium was the second most frequent genus on the hair of rabbit,

guinea pig, mice, cat and rat and emerged in 100, 28, 75, 57 and 100% of

the samples respectively. It was represented by seven species of which P.

chrysogenum was the most common species on the hair of the five animals.

Bagy & Abdel-Hafez (1985) isolated P. chrysogenum (5%), P. verruculosum

(3.3%), P. funiculosum (1.7%) and P. islandicum (0.8%) from the hair of ca-

mel and goat.

Chrysosporium came in third position. It was recorded in 100, 36, 10, 57

and 100% of rabbit, guinea pig, mice, cat and rat hair, respectively. Eight

species of С) sporium were isolated from the five types of hair. C. indi-

cum and C. tropicum occurred in 41, 12 and 21%, and 27, 12 and 14% of

rabbit, guinea pig and cat hair respectively. Bagy & Abdel-Hafez (1985) iso-

lated C. indicum from the hair of camel and goat which emerged in 8.3 and

20% of the samples respectively. C. tropicum was isolated from mammals in

Source - MNHN. Paris

FUNGI ON MAMMALS HAIR IN EGYPT 67

Australia by Rees (1967), in Venezuela by Moraes et al. (1967), in India by

Gugnani et al. (1975) and in Egypt by Bagy (1986).

C. keratinophilum was encountered in 20, 10, 14 and 100% of rabbit,

mice, cat and rat hair respectively. It was isolated from mammals in Cze-

choslovakia (Otcenasek & Dvorak, 1962), Germany (Hoffmann et al., 1970),

India (Gugnani et al., 1975) and Egypt (Bagy, 1986; Bagy & Abdel-Hafez,

1985). Bagy (1986) reported that C. keratinophilum was the most common

species on the hair of dog, donkey and cow and was represented in 15.3,

32.9 and 22.1% of the samples respectively.

Five species of Chrysosporium were of less frequencies and these were

C. parvum (rabbit, guinea pig), C. pannorum (rabbit), C. xerophilum (rabbit),

C. dermatitidis (guinea pig) and C. queenslandicum (cat). Bagy & Abdel-Ha-

Гег (1985) isolated C. pannorum, C. parvum and C. dermatitidis less frequently

from camel and goat hair (4.2, 1.7 and 0.8% of mammals examined respec-

tively).

Myceliophthora occupied the fourth place and was represented by two

species namely, M. anamorph of Corynascus sepedonium and M. anamorph

of Corynascus novoguineensis. M. anamorph of C. sepedonium was isolated

from the five types of hair comprising 26% of mammals examined. M. ana-

morph of C. novoguineensis was recorded only in cat hair constituting 0.8%

of mammals examined. Bagy & Abdel-Hafez (1985) isolated Myceliophthora

vellerea in low frequency from camel and goat hair (0.8% of mammals ex-

amined).

Trychophyton occupied the fifth place and was encountered in 36, 40,

10 and 42% of rabbit, guinea pig, mice and cat hair respectively. It was re-

presented by two species namely, 7. equinum and T. mentagrophytes.

Microsporum occupied the sixth place and was represented by two spe-

cies namely, M. boullardii and M. racemosum. They were isolated only from

rabbit and guinea pig hair. The isolation of dermatophytes and other kerati-

nophilic fungi (Trichophyton mentagrophytes, T. phaseoliforme, T. ajelloi, T.

біті, Т. terrestre, Microsporum racemosum, M. gypseum, M. persicolor, Ar-

throderma ciferri and A. insigulare) from the hair of small free living mam-

mals have been recorded by many workers (Ajello, 1959; Otcenasek & Dvo-

так, 1962; Varsavsky & Ajello, 1964; Borelli, 1965; Borelli & Feo, 1966;

Houin et al., 1972 and Hubalek et al., 1979).

Chaetomium globosum, Mucor hiemalis, Fusarium spp., Rhizopus oryzae,

Syncephalastrum racemosum, Arthroderma sp., Botryotrichum piluliferum, Cla-

dosporium cladosporioides, Alternaria alternata and Scopulariopsis brevicaulis

were isolated in low frequency from the five types of hair tested and were

represented in 6-21% of the samples.

Circinella muscae, Cylindrocarpon cylindroides, Arthrobotrys oligospora,

Drechslera spicifera, Trichoderma viride, Humicola fuscoatra and Acremonium

strictum were less common and emerged in 0.8-5% of the samples of mam-

mals tested (Table 1).

Source : MNHN. Paris

68 M.M.K. BAGY and A.Y. ABDEL-MALLEK

Most of the preceeding genera and species were isolated previously

from the hairs of dog, donkey, cow, camel and goat as recommended by

Bagy (1986) and Bagy & Abdel-Hafez (1985).

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MORPHOLOGICAL, CULTURAL AND PATHOGENIC

VARIATIONS IN SCLEROTIUM ROLFSII SACC. CAUSING

ROOT ROT OF SUGARBEET

Bhim Sen SHARMA, V.N. PATHAK and Kalpna BHATNAGAR

Plant Pathology Section, Agricultural Res

Station, Rajasthan Agricultural University

Durgapura, Jaipur - 302001, India.

ABSTRACT - Variability in the Scleroriwm root rot of sugarbeet (Beta vulgaris L.)

pathogen (Selerotium rolfsii Sacc.) was studied in 5 isolates collected from different

sugarbeet-growing areas in Srigan, Rajasthan State. Isolate Sr. 1 displayed

significantly higher growth tog h maximum number, size and weight of scle-

rotia than rest of the isolates. Oat meal agar and potato dextrose agar proved to be

the best media for growth and formation of sclerotia, respectively. Isolate Sr. 1

proved most aggressive and caused higher incidence of seedling blight and root rot.

RÉSUMÉ - La variabilité de Sclerotium rolfsi, agent de la pourriture de racine de

la betterave à sucre (Beta vulgaris L.), est étudiée pour 5 isolements provenant de

différents champs de betterave à Sriganganagan, Etat du Rajasthan. L'isolat Sr. I

montre une croissance significativement plus importante, ainsi qu'un nombre, une

taille et un poids de sclérotes maximaux. Il est également le plus agressif. Le milicu

PDA est le meilleur pour la formation des sclérotes tandis que le milieu gélosé à la.

farine d'avoine donne une meilleure croissance.

KEY WORDS : Sugarbeet, Beta vulgaris, root rot, Sclerotium rolfsii, variability.

Root rot of sugarbeet incited by Sclerotium rolfsii Sacc. is a very de-

structive disease in various countries including India. Since no disease man-

agement strategy can be perfect without understanding variability in patho-

gen, the present investigation was aimed to find out morphological, cultural,

pathogenic and physiological variations in S. ro/fsii causing root rot of su-

garbeet in Rajasthan.

MATERIALS AND METHODS

Preparation of isolates: The fungus was isolated, purified and single-hy-

phal-tip cultures of 5 isolates collected from 5 distant areas of Sriganganagar

designated as Sr. 1, Sr. 2, Sr. 3, Sr. 4, Sr. 5 were maintained on potato dext-

rose agar at 30 + I°C.

Source : MNHN. Paris

72 B.S. SHARMA, V.N. PATHAK and K. BHATNAGAR

Cultural and morphological variations: Variation in growth and pro-

duction of sclerotia (shape, size, colour and weight of sclerotia) were re-

corded by growing the isolates on 7 agar media viz., Asthana & Hawker's,

Brown's, Czapek's, Oat Meal, Potato dextrose, Richards’ and Sabouraud’s

medium. The amount of growth was recorded 4 days after inoculation by

measuring radial growth along 2 diameters at right angle to each other from

each of the 5 replicates. Number of sclerotia formed were counted 15 days

after inoculation.

Morphology of sclerotia produced in culture: For each 15-day-old culture

medium, 25 sclerotia were randomly picked up and observed visually for

shape and colour. To record the size, each sclerotium was measured with the

help of a calibrated microscope. To record weight, sclerotia of all the 4 rep-

lications were mixed (with a total of 100 sclerotia) and weighed on an ana-

lytical balance.

Morphology of sclerotia produced on host: Sugarbeet plants of cv. Ra-

monskaya raised under aseptic conditions in 30cm earthen pots were inocu-

lated 4 months after sowing by placing 5 sclerotia (1.0-1.1mm dia) of each

isolate in the root zone of each plant. Sclerotia were collected from 20-day-

old culture grown in sterilized soil (100g) amended with 8% wheat bran.

Eight plants were inoculated with each of the 5 isolates. At the time of har-

vesting (175-day-old crop), 4 roots infected with each isolate were selected.

From each root, 25 sclerotia were randomly collected and their morphologi-

cal observations were recorded.

Pathogenic variations: 2 types of symptom incited by 5. rolfsii are see-

dling blight and root rot. Attempts were made to detect pathogenic variabil-

ity amongst the isolates in both phases of the disease.

Seedling blight: Plants of sugarbeet cv. Ramonskaya were raised in

30cm earthern pots and inoculated in the manner as described above. Unin-

oculated plants served as check. The seedlings were accommodated in a

green house where maximum and minimum temperatures fluctuated from 24

to 38°C and 10 to 26°C, respectively and relative humidity ranged from 21

to 94%. There were 5 replications with 3 pots (15 seedling in each pot) un-

der each replication. The disease incidence was recorded 20 days after inocu-

lation using the formula,

з Е Number of infected plants

Disease incidence — S; r- af olante inoculated © 100

Number of plants inoculated

Root rot: The plants of cv. Ramonskaya raised as described above were

inoculated in the second week of February, 1982 when they were

4-month-old. The plants were accommodated in a green house were maxi-

mum and minimum temperatures fluctuated from 18 to 39°C and 6 to 26°C,

respectively and relative humidity ranged from 21 to 97%. There were 6 rep-

lications with 10 pots in each replication. Observations of disease incidence

were recorded at the time of harvest.

Source : MNHN. Paris

SCLEROTIUM ROLFSII 73

OBSERVATIONS

Cultural variation: Isolate Sr. 1 displayed significantly (p=0.05) higher

growth (Tab. 1) than rest of the isolates. The other 4 isolates did not differ

significantly amongst themselves. All the media differed significantly

(p=0.05) from each other in favouring growth of the fungus except that the

growth supported by Brown’s agar, Sabouraud’s agar and Czapek’s agar was

statistically at par (p=0.01). Oat meal agar proved to be the best medium

and Asthana & Hawker's agar the poorest. The isolates x media interactions

were not significant.

solates of S. rolfsii

replications.

Table I: Radial growth (recorded 4 days after inoculation) of

on different culture media at 30 + 1°C. Data are mean of

Tableau 1: Croissance (4 jours aprés l'inoculation) des 5 isolats de S. rolfsii sur

différents milieux à 30 + 1°C (moyenne de 5 expériences)

Radial growth (mm)

Isolates | Sr. 1 | Sr. 2 | Sr. 3 | Sr.4 | Sr. 5 | Mean of

Medium media

P.D.A. 78.8 | 752 | 750 | 752 | 748 | 76.00

Oat Meal Agar 88.8 | 860 | 87.6 | 87.8 | 848 | 87.00

Brown's Agar 53.4 | 51.2 | 50.2 | 49.2 | 49.8 | 50.76

Richards’ Agar 64.0 | 60.8 | 624 | 60.8 | 62.2 | 62.04

Sabouraud’s Agar 50.0 | 514 51.6 | 50.2 | 50.96

a & Hawker's Agar 458 | 434 47.8 | 41.2 | 4528

^s Agar 56.0 | 53.6 | 48.6 | 47.2 | 52.6 | 51.60

Mean of Isolate 62.4 | 60.23 | 60.51 | 60.08 | 59.37

C.D. at 5% C.D. at 1%

Isolate (1) 1.77 N.S.

Media (M) 2.09 2.75

Interaction (I x M) NS №5.

Maximum number of sclerotia were formed by isolates Sr. l. This

number was significantly (p— 0.05) more than that formed by any other iso-

late. There was no significant difference (p=0.05) in number of sclerotia

formed by Sr. 2, Sr. 3 and Sr. 4 (Tab. 2). Potato Dextrose Agar was most

favourable medium for formation of sclerotia. The number of sclerotia

formed on this medium was significantly (p=0.01) more than that on any

other medium. Richards’ agar medium supported minimum number of scle-

rotia. Media x isolates interactions were not significant for number of scle-

rotia.

Source - MNHN. Paris

74 B.S. SHARMA, V.N. PATHAK and K. BHATNAGAR

Table 2: Number of sclerotia (recorded 4 days after inoculation) formed by the 5 iso-

lates of S. rolfsii on different culture media at 30 + 1°C. Data are mean of 5

replications.

Nombre de sclérotes formés (4 jours aprés l'inoculation) pour les 5 isolats

rolfsii sur différents milieux à 30 + 1°C (moyenne de 5 expériences).

Number of sclerotia

Isolates | Sr. 1 | Sr.2 | Sr. 3 | Sr. 4 | Sr. 5 | Mean of

Medium media.

P.D.A. 167.4 | 156.2 4

Oat Meal Agar 145.6 | 142.8 2

Brown's Agar 50.0 | 49.8 2

Richards’ Agar 38.0 | 35.2 .6

Sabouraud’s Agar 106.6 | 98.6 0

Asthana & Hawker's Agar 70.2 72.8 8

Czapek’s Agar 54.0 | 52.8 8

| Mean of Isolate 90.26 | 86.88 | 89.43

C.D. at 5%

Isolate (1) 4.49

Media (M) 5.31

Interaction (I x M) N.S.

Morphological and physiological variations:

- On culture media: the size of sclerotia varied significantly (p= 9.01)

with the isolate as well as with the type of media used. Isolate Sr. 1 prod-

uced largest sized sclerotia (mean dia: 1.375mm), Sr. 3, Sr. 4 and Sr. 5 did

not differ significantly (p=0.01) in respect of sclerotial size. Sclerotia prod-

uced on Sabouraud’s agar were the largest (mean dia: 1.423mm) (Tab. 3),

however, in size they were statistically at par (p=0.01) with those produced

оп Asthana € Hawker's medium. Size of sclerotia was significantly (p=0.01)

smaller on Brown's agar (mean dia: 1.11lmm) than on rest of the media.

Isolates x media interactions were significant (p — 0.01) for the size of sclero-

tia. Shape of sclerotia was spherical to sub-spherical and it was similar in

all the isolates on different media. The colour of sclerotia of all the isolates

was white at first later turning to reddish-brown and finally to dark-brown.

The type of medium neither influenced the colour nor the shape of sclerotia

formed. On different culture media, maximum weight of 100 sclerotia was

recorded in Sr. | (86.86 mg, Tab. 4) followed by Sr. 4, Sr. 2 and Sr. 3. Out

of 7 media, Sabouraud’s medium supported highest sclerotial weight

(93.80mg) while the lowest sclerotial weight (77.6mg) was recorded on Pota-

to Dextrose Agar.

Source : MNHN, Paris

SCLEROTIUM ROLFSII

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Source - MNHN. Paris

76 B.S. SHARMA, V.N. PATHAK and K. BHATNAGAR

Table 4: 100-sclerotia-weight of 5 isolates of S. rolfsii on different media.

Tableau 4: Poids de 100 sclérotes pour les 5 isolats de S. rolfsii sur différents milieux.

Weight (mg)

Isolates | Sr. 1 | Sr.2 | Sr.3 | Sr.4 | Sr.5 | Mean of

Medium media

P.D.A. 55 о а І rd 77.6

Oat Meal Agar ЕСІЛ |, ER 80.6

Brown's Agar СОЕ E 812

Richards’ Agar 90 | SI 78 | 80 | 79 81.6

Sabouraud’s Agar 100 | 94 | 94 | 91 | 90 93.8

Asthana & Hawker's Agar 80 | 79 | 79 | 88 | si 814

Czapek's Agar so | 79 | 88 | 79 | 78 82.6

Mean of isolate 86.86 | 82.14 | 81.57 | 83.85 | 78.57

- On sugarbeet plant: significantly (p=0.01) larger sclerotia were ob-

served in Sr. | (mean dia: 1.595mm). Isolate Sr. 2 produced smallest (mean

dia: 1.305mm) sclerotia (Tab. 5).

The weight of sclerotia also varied with the isolate. The sclerotia of

isolate Sr. 1 had maximum weight (121mg/100 sclerotia) whereas sclerotia of

Sr. 5 had minimum weight (74mg/100 sclerotia) (Tab. 5). No differences in

shape and colour of sclerotia were observed amongst different isolates.

Table 5; Variation in diameter and weight of sclerotia of the 5 isolates of S. rolfsit

formed on sugar beet cv. Ramonskaya. Data on size are mean of 4 replications

(25 sclerotia per replication).

Tableau 5 - Variation du diamètre et du poids des sclérotes des 5 isolats de S. rolfsii,

sur betterave à sucre cv. Ramonskaya (4 exp., 25 sclérotes par exp.).

Size of sclerotia (dia in mm) Weight of 100

Isolates Mean Range sclerotia (mg)

Stal 1.595 121

Sn 1.305 113

Sr.3 1.558 84

Sr. 4 1,445 117

Sr. 5 1.425 74

C.D. at 5%

C.D. at 1%

Pathological variability (pathogenic variations): Isolate Sr. 1 caused sig-

nificantly (p=0.01) higher incidences of seedling blight (97.33%) as well as

root rot (91.66%) than rest of the isolates (Tab. 6). Isolates SE ОЭ

4 and Sr. 5 did not exhibit significant (p=0.01) difference among themselves

in causing incidences of seedling blight as well as root rot.

Source : MNHN. Paris

SCLEROTIUM ROLFSII 77

Table 6: Pathogenic variability amongst the 5 isolates of S. rolfsii in causing seedling

blight (mean of 5 replications) and root rot (mean of 6 replications) phases of

Slcerotium root rot of sugar beet (in parentheses are angular values)

Tableau 6: Pathogénicité des 5 isolats de S. ro/fsii vis-à-vis de la betterave à sucre.

Isolates Disease incidence (%)

Seedling blight phase — Root rot phase

Sr. 1 91.66 (76.36)

Sr. 2 68.33 (5

Sr. 3 70.00 (56.89)

Sr. 4 67.09 (5 68.33

Sr. 5 67.99 (55.55) 70.00 (5

C.D. at 4.18 7.49

C:D. at 1% 5.70 10,13

DISCUSSION

Allison (1952), Higgins (1927) and Weber (1931) compared the mor-

phology of isolates of S. rolfsii and concluded that the difference in the cul-

tures studied were relatively small. In the present investigations, the 5 iso-

lates were found indistinguishable in respect of colour and topography of

mycelial growth. Isolate Sr. 1 displayed significantly higher radial growth

and formed significantly more number of sclerotia as compared to other iso-

lates. This indicates that isolates of the pathogen can vary in cultural char-

acters.

In the present studies, maximum growth of all the isolates was re-

corded on Oat Meal Agar followed by PDA. Growth on rest of the media

such as Brown’s agar, Richards’ agar, Sabouraud’s agar, Asthana &

Hawker’s agar and Czapek's agar was comparatively poorer. These findings

are in agreement with the results obtained by Takahashi (1927), Higgins

(1927), Endo (1940) and Grover & Chona (1960). Sharma & Kaushal (1979)

reported that S. rolfsii produced highest number of sclerotia on PDA. Simi-

lar observations were recorded in the present investigations. As observed by

Indulkar (1962), Mathur $: Sarbhoy (1976) and Sharma £ Kaushal (1979),

Richards’ medium was found to be less suitable for sclerotial production.

Davey & Leach (1941) observed that sclerotia produced on sugarbeet

were larger than those produced in pure culture. Similar observations were

recorded in the present investigations. The size of sclerotia varied sign

icantly with the isolates of pathogen as well as with the type of artificial me-

dium used. The isolates x media interactions were significant for the size of

sclerotia but not for number of sclerotia and radial growth. It is likely that

the formation of sclerotia is more profoundly influenced by the nature and

synthesis of the morphogenic factor of the fungus as reported in case of

Corticium rolfsii by Goujon (1969, 1970) while the size of sclerotia may not

be so rigidly controlled by the fungal genetic make-up. This possibility re-

mains to be critically examined through systematically planned experiments.

Source - MNHN. Paris

78 B.S. SHARMA, V.N. PATHAK and K. BHATNAGAR

Of the 5 isolates studied, one isolate (Sr. 1) differed contrastingly from

the rest in radial growth and sclerotial characters. This indicates that the pa-

thogen is highly variable physiologically.

Some investigators could not detect pathogenic variability in isolates

from various sources (Taubenhaus, 1919; Weber, 1931; Allison, 1952). Epps

et al. (1951) comparing pathogenicity of 4 isolates on several hosts demon-

strated differences in rate of pathogenesis but no difference in total number

of plants killed. Matheswaran (1979) recorded a range of variation in see-

dling mortality of sugarbeet cv. Ramonskaya inoculated with 9 isolates of S.

rolfsii. In the present investigations, isolate Sr. 1 caused significantly higher

incidence of seedling blight as well as root rot than rest of the isolates. This

indicates that the pathogen can be variable pathogenically. The fact that the

pathogen can be variable pathogenically should get due importance in pro-

grammes for resistance breeding.

Of all the isolates tested, Sr. | proving most aggressive displayed maxi-

mum growth on culture media. If highly aggressive isolates are always found

displaying more growth on a culture medium and vice-versa then the aggres-

sive races could be identified easily on culture medium obviating the necessi-

ty of inoculation of host plants for the purpose.

ACKNOWLEDGEMENT. - We are thankful to the Director of Research for

providing facilities.

REFERENCES

ALLISON J.L., 1932 - Sclerotium rolfsii, a destructive pathogen of alfalfa and ladi-

no clover. Phytopathology 42: 1.

DAVEY A.E. and LEACH L.D., 1941 - Experiments with fungicides for use against

Scleratium rolfsii on soils. Hilgardia 13: 523-547.

ENDO S., 1940 - Physiological studies on the causal fungi of Selerotium diseases of

the rice plants, with special reference to some factors controlling the occurrence

of the disease. Bull. Miyazaki Coll. Agric. 11: 55-218.

EPPS W.M., PATTERSON J.C. and FREEMAN LE., 1951 - Physiology and para-

sitism of Sclerotium rolfsii. Phytopathology 41; 245-256

GOUJON M. 1969 - Nature et synthése du facteur morphogéne responsable de

l'apparition des sclérotes chez le Corticium rolfsii (Sacc.) Curzi. Compt. Rend.

Hebd. Séances Acad. Sci., Ser. D, 269: 2195-2198.

GOUJON M., 1970 - Physiological mechanisms in the formation of sclerotia in Cor-

ticium rolfsii (Sacc.) Curzi. Physiol. Vég. 8: 349-360.

GROVER R.K. and CHONA B.L., 1960 - Comparative studies on Sclerotium rolfsii

Sacc. and Ozonium taxanum Neal & Wester var. parasiticum Thirumalachar.

Indian Phytopathol. 13: 118-129.

HIGGINS B.B., 1927 - Physiology and parasitism of Sclerotium rolfsii Sacc. Phyto-

pathology 17: 53.

INDULKAR A.S., 1962 - M. Sc. Thesis, Vikram University, Ujjain.

MATHESWARAN C., 1979 - Variation among the sugarbeet isolates of Sclerotium

rolfsii Sace. M. Sc. (Ag.) Thesis, G.B. Pant Univ. of Agric. & Tech., Pantna-

gar, 77p.

Source - MNHN. Paris

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MATHUR S.B. and SARBHOY A.K., 1976 - Physiological studies on Sclerotium

rolfsii causing root rot of sugarbeet. Indian Phytopathol. 29: 454-455.

SHARMA S.L. and KAUSHAL B.R., 1979 - Cultural and physiological studies

with sunflower isolate of Sclerotium rolfsii. Indian J. Mycol. Pl. Pathol. 9:

105-107.

TAKAHASHI T., 1927 - A Sclerotium disease of Larkaspur. Phytopathology 17:

239-245.

TAUBENHAUS J.J., 1919 - Recent studies on Sclerotium rolfsii Sacc. J. Agric. Res.

18: 127-138.

WEBER G.F., 1931 - Blight of carrots caused by Sclerotium rolfsii with geographic

distribution and host range of the fungus. Phytopathology 21: 1129-1140.

Source : MNHN. Paris

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1991, 12 (1):81-84 8I

NALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

HESS W.M., SING R.S., SING U.S. and D.J. WEBER, 1988 - Experimental and

conceptual plant pathology. 1: 1-136 and I-V p. S 50. ISBN 2-88124-198-0. 2:

139-456 and 1-У р. $ 80. ISBN 2-88124-199-9. 3: 460-599 and I-Vp. S 50.

ISBN 2-88124-202-2. New York, Gordon and Breach.

П пе s'agit pas d'un "traité" de phytopathologic, mais d'une séric d'une trentai-

ne de monographies originales, traitant chacune d'un point précis. Elles se partagent.

entre trois grandes rubriques: techniques, pathogenése et spécificité parasitaire,

résistance.

Ainsi tous les domaines de la phytopathologie ne sont-ils pas couverts, il n'est

pas question par exemple d'épidémiologie. En revanche les interactions cellulaires et

moléculaires sont traitées sous de multiples aspects, comme l’utilisation des

anticorps-monoclonaux, les problèmes de reconnaissance höte-parasite,

l'ültrastructure des phénomènes de réaction, la spécificité parasitaire chez divers

groupes, la résistance induite... L'étude des phénomènes d'interaction concerne aussi

bien les principaux types de pathogènes fongiques, que les bactéries. les viroides, les

nématodes et de plus déborde du strict domaine de la phytopathologie puisque des

chapitres sont consacrés aux lichens, aux Rhizobium et à l'incompatibilité pollinique

des Angiospermes.

Dans l'ensemble il s'agit de toute une série de mise au point de grand intérêt

méme, et peut être surtout pour le non spécialiste.

G. Durrieu

WASSER S.P., 1989 - Tribe Agariceae Pat. of the Soviet Union. Koenigstein,

Koeltz Scientific Books. DM 180. ISBN 3-87429-292-4.

S.P. WASSER, professeur à l'Institut de Botanique de l'Université de Kiev,

membre de l'Académie des Sciences d'Ukraine, est un mycologue bien connu par de

nombreuses publications et ouvrages divers, la plupart en langue russe. Avec ce livre

en langue anglaise, il signe l'une des rares monographies qui soit le fruit d'investi-

gations conduites en faisant appel aux méthodes et techniques modernes.

Les réflexions de l'auteur sur cette tribu, = partie de la grande famille des

Agaricaceae, sont exprimées ici dans 118 pages de texte (dont 6 de références

bibliographiques: 150 titres environ), 22 planches en couleurs reproduisant des pein-

tures de l’auteur pour 40 espèces dont les carpophores sont vus entiers à différents

stades de leur développement (c'est si important pour expliciter l'aspect des voiles,

écailles ct anneau), ainsi qu'en coupe longitudinale, 6 planches (un peu chargées!...)

en noir et blanc, regroupant des dessins au trait de carpophores et des spores,

basides, cellules remarquables, etc..., et pour 36 des 55 espéces étudiées, 6 planches

de spores vues au microscope à balayage. Les pages de texte sont consacrées à la des-

cription classique des espéces, et pour chacune d'elles, des données fort appréciables

sur leur répartition en URSS et dans le monde.

La présentation de l'ouvrage est claire, l'impression de qualité. On regrettera le

manque d'index récapitulatif pour les espèces, au moins celles décrites, ainsi que le

manque d'échelle dans les illustrations de spores: il faut se reporter au texte pour les

dimensions des spores et aux légendes pour les grandissements au microscope

électronique.

Les systématiciens intéressés par la fam. des Agaricaceae trouveront une

présentation succincte du système adopté par WASSER, pour la tribu Agariceae,

Source - MNHN. Paris

82 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

une description-définition des genres retenus, et pour chaque espèce, des données sur

Mes tribulations d'un genre à l'autre au gré des conceptions de tel ou tel auteur... ou

des régles de nomenclature, Ils seront sùrement “accrochés” par la position adoptée

par WASSER qui place le genre Melanophyllum à voile universel de structure

Pal ulcuse dans cette tribu, done loin des Lépiotes. Le bien-fondé de l'existence de ce

sente ne fait pas de doute, mais qu'il soit considéré comme plus proche des

Poalliotes” que des Lépiotes donnera sûrement sujet à discussion entre spécialistes.

D. Lamoure

HANLIN R.T., 1990 - Illustrated genera of Ascomycetes. St. Paul, Minnesota,

A.P.S. Press. 263p. dont 103 pl., $ 40. ISBN 0-89054-099-3.

Cet ouvrage, qui regroupe cent genres d'Ascomycétes parmi les plus fréquents

en phytopathologie, s'adresse à un public de non spécialistes cherchant à identifier

ces champignons par référence à des schémas et à des descriptions.

La description de chaque taxon comprend: le nom, suivi de celui de l'auteur,

une description morphologique de l'anamorphe, de l'habitat, d'une espèce

représentative, et quelques commentaires brefs sur les genres voisins.

Chaque genre est associé à une planche au trait illustrant une espèce

représentative et comprenant un dessin du champignon sur son hôte, dos 25615, des

Aceospores et d'une coupe dans l'ascome. Bien qu'assez schématiques, les dessins sont

clairs et précis.

Le système de détermination repose sur une clef dichotomique et, dans le corps

du livre, les genres sont citès selon l'appartenance des ascospores aux types de

Saccardo: hyalosporées, allantosporées, hyalodidymiées, etc.

Dans l'introduction, l'auteur effectue une mise en garde sur l'exploitation des

clefs dichotomiques n'impliquant aucune relation phylogénétique entre genres voisins.

sur le papier’, sur le recours obligatoire à la description du genre pour confirmation

du résultat obtenu par la clef, sur la nécessité d'observer plusieurs spores pour avoir

une idée de la morphologie dominante, etc. Autant de conseils pratiques qui

précisent les limites d utilisation du livre. Celui-ci n'étant pas destiné aux spécialistes

des Ascomycétes, il manque à notre avis quelques schémas ou un glossaire précisant

le sens des termes utilisés concernant surtout la morphologie des spores ou des

ascomes. Un index alphabétique où sont regroupés les noms de genres ct d'espèces

illustrés ainsi que des plantes hôtes spécifiques succède à une bibliographie (environ

é surtout centrée sur les articles contenant des clefs ou des descriptions

Expérience faite, ce livre qui se veut être un outil d'identification des

Ascomycètes les plus communs remplit bien sa fonction.

M.F. Roquebert

HENNEBERT, BOULENGER & BALON, 1990 - La Mérule. Science, Technique

et Droit. Bruxelles, Editions Ciaco, 196 p.

Ce livre, consacré aux champignons lignivores et, en particulier à la Mérule,

agent de pourriture cubique sévissant dans les habitations parait bien à propos, alors

qu'un regain de développement de ce champignon est constaté en Europe et

particulièrement dans certaines capitales comme Bruxelles et Paris.

Méconnu du grand public, ce champignon, qui peut s'étendre de manière spec-

taculaire en détruisant tous les éléments en bois au fur et à mesure de sa progression,

laisse celui qui le découvre à la fois effrayé et décontenancé, Ce manuel apporte tout

ce qu'il faut connaître sur ce champignon dont l'action destructrice est déjà relatée

dans la bible: il donne tous les éléments qu'il faut savoir pour l'éviter et le combattre.

Sa lecture très agréable, car les chapitre sont bien structurés et comportent cha-

cun un court résumé, donne tous les renseignements sur les conditions de

développement de la Mérule, sa biologie particulière, son adaptation à l'environ-

Source - MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 83

nement par ses possibilités de transporter l'eau et aussi, d'étendre son champ d'ac-

tion en passant même à travers les murs et les maçonneries.

Un diagnostic devient à la portée des non mycologues grâce à la description de

la forme typique d'altération du bois (pourriture cubique) ainsi que celle des organes

variés du champignon: diverses manifestations végétatives, fructifications chargées de

milliards de spores brun rouille assurant la pérennité de l'espèce, cordonnets qui sont

de véritables ‘tuyaux transportant l'eau”. Ces descriptions sont abondamment

illustrées de prises de vues magnifiques de développements abondants et spectaculai-

res du champignon.

Le chapitre des solutions à apporter est d'un grand intérêt, celles-ci sont

décrites avec précision et tout particulièrement le traitement curatif. Celui-ci doit

commencer par l'élimination des sources d'humidité et la suppression du bois

dégradé ainsi que de tout élément fongique sur le bois et les murs; le traitement chi-

mique par un produit fongicide pourra être appliqué. Les différents procédés visant à

faire pénétrer le produit pour atteindre tout élément fongique en profondeur sont

décrits. Une liste des matiéres actives actuellement sur le marché de la Préservation

est donnée. Ces produits ont fait preuve de leur efficacité par des tests en laboratoi-

re et ont reçu l'homologation de l'Association belge pour la Protection du Bois.

Enfin, le dernier chapitre consacré au "DROIT" est fort intéressant car cet as-

pect des conséquences de la dégradation du bois en oeuvre par la Mérule n'est pas

souvent abordé dans les ouvrages scientifiques. Des experts parfois pris au

dépourvus, apportent peu de solutions. Ce chapitre valable sur le plan de la

législation belge fait toutefois réfléchir tous ceux qui, en tant qu'experts, maîtres

d'oeuvres, architectes, assureurs sont confrontés au probléme.

Sans aucun doute, l'ensemble de cet ouvrage intéresse non seulement les

mycologues curieux du caractére originel du champignon mais également tout expert

et technicien du bátiment ayant à régler des problèmes de non respect des "REGLES

DE L'ART” entraînant l'apparition du “champignon des maisons”.

D. Dirol

MOENNE-LOCCOZ P. et REUMAUX P., 1989 - Cortinaires récents, nouveaux ou

fantômes. Fungorum Rariorum Icones Coloratae. Pars XVIII. Berlin, J.

Cramer, 59p. DM 48. ISBN 3-443-69004-1

Une vingtaine de cortinaires, très rares, réhabilitės ou nouveaux, sont étudiés

la plupart représentés pour la première fois en couleurs; les planches sont dues au ta-

lent de P. Moénne-Loccoz, dans un style pour le moins rare en mycologie puisqu'il

s'agit d'icones effectuées au crayon de couleur et, de plus, absolument

"époustouflantes de vérité... avec un relief qui donne envie de cueillir les exemplai-

res". Le texte est (en grande partie) issu d'un autre talent, celui de Patrick

Reumaux, aussi littéraire que scientifique et qui, de ce fait, peut rendre relativement

agréable la lecture de ces lignes normalement ingrates (parfois avec quelques

tonalités humoristiques... ou plus ou moins moqueuses, mais le titre lui-même ne

l'est-il pas un tantinet?). Seuls quelques discussions et découpages s; tématiques sem-

bleraient devoir étre cri par certains cortinariologues... mais ce serait une

révolution dans le genre s'il en était autrement!

M. Bon

MOÉNNE-LOCCOZ P., POIRIER J. et REUMAUX P., 1990 - Inocybes criti-

quables et critiqués. Fungorum Rariorum Icones coloratae. Pars XIX. Berlin, J.

Cramer, 55p. DM 58. ISBN 3-443-69005-Х.

18 espèces sont représentées de la même manière que dans l'ouvrage précédent,

avec un troisième auteur à qui on doit la plupart des études microscopiques, dessins

au trait et nombreuses observations, les commentaires étant, dans la plupart des cas,

réservés à P. Reumaux, dans le style particulier évoqué ci-dessus. Les planches sont

tout aussi séduisantes, même dans un genre que l'on qualifie souvent d'ingrat. Du

Source : MNHN. Paris

84 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

point de vue taxonomie signalons que la plupart des synonymies "oedémateuses^ de

quelques auteurs modernes n'ont pas été suivies et que de nombreux taxons connus

des anciens ont été conservés: /. gausapata Kühn., /. subtigrina Kühn., 1. sororia

Kauffm., /. perlata (Cke.) Sacc., I. subnudipes Kühn. etc. avec deux nouvelles

espèces: /. sulcata et I. suboreina ainsi qu'une interprétation moderne de 177. asinina

de Kalchbrenner, le tout émaillé de démonstrations relativement convaincantes; mais,

comme il a été dit á propos des cortinaires du numéro précédent, le genre Inocybe

n'est pas non plus réputé pour sa simplicité et les avis sont et resteront encore long-

temps partagés.

M. Bon

LARPENT J.P. et SANGLIER J.J., 1989 - Biotechnologie des antibiotiques. Coll.

Biotechnologies. Paris, Masson, 496p.

S'il est-un domaine où l'apport de biotechnologies nouvelles laisse entrevoir des

progrès considérables, c'est bien celui des antibiotiques. Cet ouvrage de référence est

une synthèse des connaissances actuelles, réalisé par une vingtaine de spécialistes de

nationalités diverses. Il comporte dix chapitres.

Il nous est rappelé que, sur 10.000 antibiotiques naturels, 1.200 sont d'origine

fongique, les principaux étant les Ф lactamines (pénicillines et céphalosporines). Neuf

especes de champignons seulement sont actuellement exploitées industriellement pour

la production d'antibiotiques: Aspergillus flavus, A. fumigatus, Cephalosporium

acremonium ( Acremonium strictum W. Gams ou A. chrysogenum (Thirum. et

Sukap.) W. Gams), C. caerulens (Fusarium?), Fusidium coccineum ( — Acremonium

fusidioides (Nicot) W. Gams), Helminthosporium siccans Drechslera siccans

(Drechs) Shoemaker), Paecilomyces variotii, Penicillium chrysogenum et P. griseo-

fulvum.

Les problémes posés par la sélection des souches, la caractérisation physico-

chimique ct le dosage des molécules actives sont abordés; la biosynthése et la physio-

logie de la production des antibiotiques constituent des chapitres importants. Ils in-

troduisent le sujet d'actualité qui, á notre avis, constitue la clef de voüte de cet

ouvrage: l'amélioration génétique des souches. Déjà, les techniques classiques de

traitement mutagénique suivi d'un criblage des organismes survivants ont permis

d'augmenter considérablement le rendement des productions. L'amélioration des sou-

ches et l'optimisation de la production peuvent passer par les recombinaisons

génétiques intervenant au cours du cycle parasexuel. Mais si le développement de

nouvelles méthodes relevant de la génétique moléculaire ont déjà permis d'importants

progrès, ce sont des Voies de recherches dont l'exploration est loin d'être terminée.

La dimension industrielle n’est pas négligée: elle est développée dans deux chapitres

traitant de la production, de l'extraction et de la purification des molécules actives.

En conclusion, une réflexion est proposée sur l'utilisation des antibiotiques en

thérapeutique humaine et en zootechnie (13% du marché pharmaceutique mondial).

Bien des progrès sont encore attendus et espérés dans ce domaine: ‘élimination des

effets secondaires indésirables, l'augmentation de l'efficacité du traitement (la

thérapeutique antifongique par exemple, reste souvent décevante). Il serait souhai-

table que de tels traitements n'amoindrissent pas les défenses naturelles immunitaires

de l'organisme qu'on soigne. C'est là un sage conseil qui se dégage de ce livre et qui

nous invite à poursuivre inlassablement l'exploration du monde microbien.

C. Moreau

Source : MNHN. Paris

85

INSTRUCTIONS AU

AUTEURS

D'une fagon generale, la revue peut publier tous les travaux apportant une in-

formation fondamentale nouvelle, au plan de la systématique ou de la Biologie des

Champignons. Le Comité de Lecture pourra susciter la rédaction d'articles de

synthèse sur un sujet donné, ainsi que des mises au point bibliographiques

périodiques.

Les manuscrits proposés à CRYPTOGAMIE, Mycologie, doivent être fournis

en double exemplaire, dactylographiés à double interligne, sans rature ni surcharge.

Outre la langue française, la revue accepte les articles rédigés en langue anglaise, al-

lemande, espagnole. Chaque manuscrit devra comporter:

- le titre de l'article, dans la langue du manuscrit, et sa traduction en anglais;

- le titre courant (haut-de-page) de 50 signes au maximum;

- le nom et les prénoms des auteurs et leurs adresses;

- deux résumés, l'un dans la langue du manuscrit, l'autre en français ou en anglais,

d'environ 180 mots ou 15 lignes, faisant ressortir les résultats essentiels exposés dans

l'article;

- des mots-clés qui seront sélectionnés par le Comité de Lecture;

- des légendes explicites des figures, planches et tableaux dans la langue du manus-

crit et en anglais (ou français);

- une liste bibliographique par ordre alphabétique des auteurs et chronologique par

auteurs sans tenir compte des auteurs secondaires. Les titres des périodiques devront

etre abrégés suivant le B-P-H (Botanico-Periodicum-Huntianum, Pittsburg: Hunt

Botanical Library, 1968), les ouvrages cités selon F.A. Stafleu & R.S. Cowan, 1976-

.. Taxonomic literature. Ed, 2 Utrecht/Antwerpen: Bohn, Scheltema & Holkema

(Regnum vegetabile 94, 98, 105, 110...). Les références suivront les modèles suivants:

PATOUILLARD N., 1881 - Sur l'appareil conidial de Pleurotus ostreatus.

Bull. Soc. Bot. France 27: 125.

HEIM R., 1937 - Les champignons d'Europe. Paris, Boubée et Cie,

MANDELS G.P., 1965 - Kinetics of fungal growth. /n : G.C. AINSWORTH

& A.S. SUSSMAN, The fungi. N.Y. & London, Academic Press, 1: 599-612.

TEXTE. - La présentation du texte devra faire apparaitre clairement ses subdi-

visions et leur hiérarchie, ainsi que le début des paragraphes (- insérer une ligne

blanche avant les titres et sous-titres; - faire un alinéa de plus de 3 caractéres au

début de chaque paragraphe; - supprimer toute ligne blanche entre deux paragraphes

et aprés les titres ct sous-titres). Les renvois à la liste bibliographique se feront par le

nom de l'auteur et l'année de publication (utiliser "et al." lorsque l'article est signé

par plus de deux auteurs) et non par les renvois numériques. Les notes

infrapaginales sont à éviter. La place des illustrations devra être indiquée dans la

marge.

ILLUSTRATIONS. - Toutes les illustrations, y compris les tableaux, doivent

être des originaux de qualité suffisante pour la reproduction directe en offset. Elles

devront comporter les échelles (les grandissements x ... sont prohibés), les symboles

nécessaires à leur compréhension, et être numérotées dans l'ordre d'appel dans le tex-

te. Les tableaux devront être dactylographiés clairement, sans rature ni surcharge,

en s’assurant de la qualité de la frappe. Les documents photographiques doivent être

montés par planches. Les dimensions des originaux ne devront pas excéder le triple

de celle de leur reproduction définitive (justification de la revue: 11,5 x 17,5cm) et les

auteurs choisiront l'épaisseur des traits et la taille des caractères en fonction de la

réduction éventuelle.

571 p.

Source - MNHN. Paris

86 INSTRUCTIONS AUX AUTEURS

CRYPTOGAMIE, Mycologie souhaite vivement que les auteurs envoient leurs

textes en mode ASCII sur disquettes 31/2 ou 5” 1/4 de micro-ordinateur (IBM,

IBM compatible et MacIntosh). Ils doivent ètre impérativement conformes aux ins-

tructions suivantes:

= ne pas utiliser de codes spéciaux de mise en page ou de format (gras, italiques, cen-

trage, etc.);

- ne pas couper les mots;

- ne pas justifier à droite;

= les mois (ou les groupes de mots) qui doivent apparaitre en italiques lors de l'im-

pression devront étre encadrés par un des caractéres suivants: #, £, S.

- ne pas insérer de code de fin de page;

Les disquettes, accompagnées d'une copie sur papier comportant le texte final

corrigé selon les avis du Comité de Lecture, seront adressées à la Rédaction.

Tirages à part: limités à 150, dont 25 gratuits.

Conformément à la règle, les auteurs décrivant une espèce nouvelle doivent

déposer le matériel type (échantillon sec ou culture) dans un herbier officiel: P.C.

(Paris, Cryptogamie), CAB-IMI (Kew, Surrey) ou une collection de souches: L.C.P.

(Lab. Cryptogamie, Paris), CAB-IMI, C.B.S. (Baarn, Hollande), etc.

NS

BIBL.DU!

MUSEUM;

Commission paritaire n° 58611

3 27

PARIS Dépôt légal n° 15500 - Imprimerie de Montligeon

ж Sortie des presses le 30 mars 1991

Imprimé en France

Éditeur : A.D.A.C. (Association des Amis des Cryptogames)

Président : R. Baudoin: Secrétaire : D. Lamy

Trésorier : J. Dupont; Directeur de la publication : H. Causse

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIE — MYCOLOGIE

BUREAU DE RÉDACTION

MM. DURRIEUG., pour les articles traitant d’Ecologie et de Phytopathologie

Laboratoire de Botanique, Faculté des Sciences,

Allées Jules Guesde, 31000 Toulouse (France).

JOLY P., pour les articles traitant de Systématique

Laboratoire de Cryptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle

12, rue de Buffon, 75005 Paris (France).

MANACHERE G., pour les articles traitant de Physiologie

Laboratoire de Mycologie, Université de Lyon 1,

43, Bd du 11 Novembre 1918, 69622 Villeurbanne Cedex (France).

Mmes ZICKLER D., pour les articles traitant de Cytologie

Laboratoire de Génétique, Université de Paris Sud,

Bat. 400, Centre d’Orsay, 91405 Orsay (France).

ROQUEBERT M.F., s'occupera des autres spécialités.

Laboratoire de Cry ptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle

12, rue Buffon, 75005 Paris (France).

COMITE DE LECTURE

BOIDIN J., Lyon (France) MONTANT Ch., Toulouse (France)

CHEVAUGEON J., Orsay (France) MOREAU Cl., Brest (France)

GAMS W., Baarn (Hollande) PEGLER D.N., Kew (Grande-Bretagne)

HENNEBERT G., Louvain-la-Neuve SUTTON B., Kew (Grande-Bretagne)

(Belgique) TURIAN G., Genève (Suisse)

LACOSTE L., Paris (France)

Les manuscrits doivent être adressés (en 2 exemplaires) directement à

un membre du Bureau de Rédaction, choisi pour sa spécialité. Le Bureau

peut demander l'avis d'un lecteur choisi pour sa spécialité, méme s'il n'ap-

partient pas au Comité de lecture. ts

Bien qu'étant avant tout une revue de langue frangaise, les articles

rédigés en Anglais, Allemand et Espagnol sont acceptés. \ kt,

Les recommandations aux auteurs sont publiées dans le ler fascicule de

chaque tome.

Source : MNHN. Paris

ABONNEMENTS A CRYPTOGAMIE

‘Tome 12, 1991

CRYPTOGAMIE comprend trois Sections:

Algologie, - Bryologie-Lichénologie, Mycologie

Abonnement à l'une ou l'autre Section pour 1991:

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Abonnement aux 3 Sections pour 1991:

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Les anciens tomes et fascicules séparés de là REVUE DE MYCOLOGIE er de

CRYPTOGAMIE-MYCOLOGIE sont toujours disponibles.

MEMOIRES HORS SERIF

NO 2 (1942). Les matiéres colorantes des champignons, par 1

Pastac. 88 pages: 15 Р.

NO 3 (1943). Les constituants membrane chez les champi-

gnons, par R. Ulrich. 44 pages : 15 F;

N° 6 (1958). Essai biotaxonomique sur les Hydnés résupinés et les

Corticiés, par J. Boidin. 390 pages, pl. et fig. « 120 F.

NO 7 (1959). Les champignons et nons (Chroniques) (15. par б.

Becker. 94 pages : 25 F.

NO 8 (1966). Catalogue de la Mycothéque de la Chaire de Cr a-

mie du Muséum National d'Histoire Naturelle. (1) Micromy-

cetes. Macromycètes (première partie), 68 pages : 25 F.

NO 9 (1967), Table des Matières (1936-1965). 85 pages : 20 Р.

(1966-1975), 30 pages : 10 F.

FLORE MYCOLOGIQUE DE MADAGASCAR ET DÉPENDANCES

publiée sous la direction de M. Roger HEIM

Tome . 1, Les Lactario-Russulés, par Roger Heim (1938) (épuisé)

Tome I. Les Rhodophylles, par Henri Romagnesi (1941), 164 pages,

46 fig. : 90 F.

Tome IIL Les Mycénes, par Georges Métrod (1949), 144 pages,

88 fig. : 90 F.

Tome IV. Les Discomycétes de Madagascar , par Marcelle Le Gal

(1953). 465 pages, 172 fig. (150 F

Tome V. Les Urédinées, par Gilbert Bouriquet et J.P. Bassino

(1965). 180 pages, 97 fig., 4 pl. horstexte : 90 F.

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‘par virement postal au nom de ADAC. - CRFPTOGAMIE

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