CRYPTOGAMIE

Mycologie

ANCIENNE REVUE DE MYCOLOGIE

Fondée par R. Heim en 1936

Directeur scientifique: Mme J. Nicot

Secrétaire de Rédaction: M. Bruno Dennetiére

Editeur: A.D.A.C. - 12 rue Buffon F-75005 Paris.

BUREAU DE RÉDACTION

Ecologie et Phytopathologie: G. Durrieu (Laboratoire Botanique et Forestier, 39 Allées

Jules Guesde, F-31062 Toulouse Cedex) - Systématique: P. Joly (Laboratoire de Cryptogamie,

Muséum National d'Histoire Naturelle, 12 rue Buffon, F-75005 Paris) - Physiologie: G.

Manachére (Laboratoire de Mycologie, Université de Lyon I, 43 bd du 11 Novembre 1918,

F-69622 Villeurbanne Cedex) - Cytologie: D. Zickler (Laboratoire de Génétique, Université Paris

Sud, Centre. d'Orsay, Bát. 400, F-91405 Orsay) - Autres spécialités: M.F. Roquebert (Laboratoi-

re de Cryptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle, 12 rue Buffon, F-75005 Paris).

COMITÉ DE LECTURE

J. Boidin (Lyon), J. Chevaugeon (Orsay), J. Fayret (Toulouse), W. Gams (Baarn), G.L.

Hennebert (Louvain-la-Neuve), Ch. Montant (Toulouse), Cl. Moreau (Brest), D.N. Pegler (Kew),

B. Sutton (Kew), G. Turian (Genève).

MANUSCRITS

Les manuscrits doivent être adressés directement à un membre du Bureau de Rédaction,

choisi pour sa spécialité. Le Bureau peut demander l'avis d'un lecteur, même s'il n'appartient pas

au Comité de Lecture. Bien qu'étant une revue de langue française, les articles rédigés en anglais,

allemand, italien et espagnol sont acceptés. Les disquettes de micro-ordinateur (IBM, IBM com-

patible, et Macintosh) sont vivement souhaitées. Les recommandations aux auteurs sont publiées

dans le fascicule 1 de chaque tome. Les auteurs recevront 25 tirés-à-part gratuits; les exemplaires

supplémentaires seront à leur charge.

TARIFS DES ABONNEMENTS Tome 14, 1993

CRYPTOGAMIE comprend trois sections: Algologie, Bryologie-Lichénologie, Mycologie.

Pour une section: France: (326 F ht) 332,85 Fttc - Étranger: 357,00 F

Pour les 3 sections: France: (918 F ht) 937,28 Ftic - Étranger: 1000,00 F

Paiement par chèque bancaire ou postal à l'ordre de:

A.D.A.C. - CRYPTOGAMIE (CCP La Source 34 764 05 S),

adressé à: A.D.A.C. 12, rue Buffon, F-75005 Paris.

CRYPTOGAMIE, Mycologie est indexé par Biological Abstracts, Current Contents,

Publications bibliographiques du CNRS (Pascal).

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIE

MYCOLOGIE

TOME 14 FASCICULE 2 1993

CONTENTS

LE. WRIGHT, G. MORENO and A. ALTES - Breeds e attenuatus

(Gasteromycetes, Basidiomycotina) new for Europe

G.I. NAUMOV, E.S. NAUMOVA, Z.M. AZBUKINA, M. KORHOLA and C.

GAILLARDIN - Genetic and kabon identification of Saccha-

romyces yeasts from far east Asia .......

M.P. JUGNET, G. BARRAULT, D. CARON et L. ALBERTINI - Epi-

demiology Fusarium culmorum SE Smith) Sacc. on wheat in south-

West of France (in French) .

C.V. SUBRAMANIAN - Nusia gen. nov. for two interesting 2777

from southeast Asia ..

G. DIAZ y M. HONRUBIA - Growth responses of ee spartum L. to ino-

culation with mycorrhizal fungi and P-fertilization (in Spanish)

N. VIVAS et Y. GLORIES - The study of the oak-wood fongica (Quercus

sp.). Floreduring its natural air-drying for the cooperage ..

D.L. HAWKSWORTH - Protected names in current use: a benefit or a threat

to the taxonomist (in French) ..

EE E E E

ІІ

Bibliothèque Centrale Musé

109

117

127

149

159

lll

Source : MNHN, Paris

3 3001 00226852 1

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1993, 14 (2): 77-83 77

DICTYOCEPHALOS ATTENUATUS (GASTEROMYCETES,

BASIDIOMYCOTINA) NEW FOR EUROPE

J.E. WRIGHT*, G. MORENO** and A. ALTES**

* Dpto Ciencias Biologicas, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales,

Universidad de Buenos Aires, 1428 Buenos Aires, Argentina.

** Dpto. Biologia Vegetal, Universidad de Alcala de Henares, 28871

Alcala de Henares, Madrid, España,

ABSTRACT - This is the first record for the Iberian Peninsula and Europe of Dictyocephalos at-

tenuatus, A description and microphotographs of the more salient features are given.

RÉSUMÉ - Première récolte de Dictyocephalos attenuatus pour la Péninsule Ibérique et l'Europe.

Une description et des microphotographies des caractères les plus important sont fournies.

KEY WORDS : Taxonomy, chorology, Dictyocephalos attenuatus, Gasteromycetes

INTRODUCTION

During a revision currently under way of the Order Tulostomatales from the

Iberian Peninsula, we had the opportunity to study a collection of a curious fungus

which, in spite of consisting of only one specimen, we identified as Dictyocephalos at-

tenuatus (Peck) Long & Plunkett. The specimen is small for the species, very mature

and, apparently, wheathered; however, this find is worthy of a record, since it is the

first one for the Iberian Peninsula and for Europe.

The species has not been treated since Long & Plunkett's monograph (1940),

and we still lack further chorological and morphological information. Fischer (1933)

includes the genus in the family Tulostomataceae, as did Lloyd (1903, 1906). The lat-

ter (1906), apparently described teratological forms of the species, under the generic

name Whetstonia. We are following the treatment of Long & Plunkett (op. cit.) who

apparently examined Lloyd's type. The genus is so far monotypic, and was described

by Underwood in 1901 as D. curvatus. But Peck had described the same species in

1895 under Battaraea (curiously with an equally descriptive epithet as that given by

Underwood), for which reason his name must be considered valid.

White (1901) gave a detailed description of the species, and stresses as do

Lloyd and Fischer, among the salient features, the massive size (although Long &

Plunkett give very variable measurements), its very strong odour when fresh, the pres-

ence of a large and hard volva at the base of the stipe, which is contorted, usually S-

shaped, twisted and woody, at times very thick, the presence of a glebal "network" of

Source - MNHN. Paris

78 J.E. WRIGHT, G. MORENO and A. ALTES

filaments all of which do not conform a true capillitium, and globose, uneven, verru-

cose spores.

MATERIAL AND METHOD

The material studied has been deposited in the Herbarium of the Dpto Biolo-

gia Vegetal (Botánica), Universidad de Alcalá de Henares (AH), and has been com-

pared with various collections from the following North American herbaria, namely

National Fungus Collections, Beltsville, Maryland (BPI), and The New York Botanical

Garden (NY).

The SEM photographs were made with a Zeiss DSM-950 instrument. Sam-

ples were critically point dried and submitted to an Argon atmosphere and gold coated

under a Polaron E-5000 sputter, thus obtained a 500 A coating.

DESCRIPTION

Dictyocephalos attenuatus (Peck) Long & Plunkett, Mycologia 32(6): 697 (1940)

(Figs. 1-9)

= Battaraea attenuata Peck, Bull. Torrey Bot. Club. 22: 208 (1895).

Dictyocephalos curvatus Underwood, ibid., 28: 441 (1901).

= Battarraeopsis artini P. Henn., Hedwigia 41: 212 (1912) (fide Long & Plunkett).

Whetstonia strobiliformis Lloyd, Mycol. Writ. 2: 259 (1906) (fide Long & Plunkett).

= Phellorinia strobilina Lloyd, ibid. 5: 735 (1917).

Collection of only one specimen. Gastrocap 80mm high, composed of a stem

upon which remains a portion of nude gleba, the peridium having almost completely

disappeared due to weathering and overmaturity. Stem woody, recurved and S-shaped,

80 x 15 mm, somewhat thicker in the middle portion and more slender towards the ex-

tremes, without a visible basal volva, and with abundant ochraceous non fungal root-

lets along its length and particularly at tha base. The apical portion of the stem is

widened as a convex button or disk, of some 33mm diam., with acute, wavy and revo-

lute margin, the basal surface with remains of ruptured emergency tissue. Gleba dark

ferrugineous brown, mingled with whitish walls delimiting zones or cavities. This fea-

ture has been recorded as characteristic of the North American specimens and was

well illustrate by Long & Plunkett (op.cit.).

Spores globose to deformed, ochraceous brown under L.M., of uneven shape

and size, mostly 5.4-8 x 5,4-7.2um, with short and thick hilar appendices. Under SEM

the ornamentation appears formed by more or less plane verrucae, with a cerebriform

aspect and generally grouped in small areas, due to the progressive cracking of the

most external portion of the spore wall. Glebal threads rather scarce, tortuous, septate,

thick-walled, staining well with lactic cotton-blue, 3-7m diam.; among them appear

deformed cellular bunches which seem to correspond to groups of collapsed basidia.

These basidia in bunches are 9-11jtm diam. in the North American collections.

Material examined: SPAIN: Madrid, Alcalá de Henares, neighbourhood of

Cerro Malvecino, in loamy gypsum soil, leg. G. Moreno, J.L. Manjón & A. Altés, 3-

XI-1989, AH 13237. UNITED STATES: Arizona: Tucson, leg. Griffiths, autumn

1900, NY; ibid., leg. H.E. Ransier, 25-XI-1940, Herb. Long (BPI). California: Lan-

caster, leg. O.A. Plunkett, 9-IX-1938, Herb. Long 8231 (BPI); ibid., 5-X-1938, Herb.

Long 8344 (BPI); ibid., leg. W.H. Long, 27-VIII-1939, Herb. Long 8437 (NY); ibid.,

Source : MNHN, Paris

DICTYOCEPHALOS ATTENUATUS 79

Figs. 1-9: D. attenuata AH. 13237: 1. Fruit-body. 2-3. Groups of collapsed basidia under LM and

SEM. 4-6. Glebal hyphae. 7-9. Spores.

Source : MNHN. Paris

80 J.E. WRIGHT, G. MORENO and A. ALTES

Source : MNHN, Paris

DICTYOCEPHALOS ATTENUATUS 81

Santa Barbara, leg. P. Rea & M. Rea, ca. 1938, Herb. Long 8436/8437 (BPI). New

Mexico: Sandoval Co., San Ysidro, leg. W.H. Long, 25-X-1927, Herb. Long

8053/8054 (BPI). SOUTH AFRICA: Stellenbosch, leg. A.V. Duthie, Herb. Long ex

Herb. Lloyd - as Phellorinia strobilina - (BPI).

REMARKS

The only specimen found is small, although it coincides with the inferior rank

of measurements given by Long & Plunkett (op. cit.), for the species. It is atypical in

various ways, since it lacks a volva, scales on the stem and a tuberculous/pyramidal

peridium (probably lost). The remains of the basidia in bunches although present, are

much collapsed and are not as visible as in most of the North American collections

(some of Long & Plunkett's lack them, perhaps due to overmaturity). Similarly, the

reticulate remains of the gleba ("network" of Long & Plunkett), much more obscure in

our specimen than in the rest of the material studied, may be due to wheathering.

However, it is practically identical in its spore features, which were well illustrated by

Heim & Perreau (1971) - as Whetstonia strobiliformis and which we show here in

some SEM photomicrographs. These spores are specially similar, within the North

American material studied, to those of the New Mexico collection, Herb. Long

8053/54, both in the ornamentation as in the measurements (6.1-9 x 5.7-7.2um), al-

though they belong to a specimen measuring more than 30cm high.

On the other hand, the similarity between the miscroscopical features of this

taxon and those of Phellorinia herculanea (Pallas:Pers.) Kreisel are striking. This is

also a rare tulosmataceous fungus growing solitary or subgregarious in arid and sandy

places, which has been described in detail for peninsular Spain a few years ago by

Martin & Rocabruna (1988). Both size and spore ornamentation are practically identi-

cal as in Dictyocephalos, it has similar glebal filament and collapsed basidial bunches

can also be observed in the mature gleba. Thus, the separation of both taxa is purely

macroscopic, which may be a source of problems.

The peridial features of Dictyocephalos has not been previously studied. It

only persists in the lower part of the spore sac, it is hard and composed of at least two

layers; the outermost is caducous, rugose and ornamented, greyish brown, and the in-

nermost is smooth, whitish-grey, although stained brown by the mass of spores. The

remains of the gleba persist attached to the internal part of the peridial base at maturi-

ty. Microscopically, the peridium of the North American material studied is composed

of periclinal hyphae which are much interwoven, clampless, thin to regularly thick-

walled, sparsely septate, mixed with very thick (conductive?) enteriform hyphae,

strongly staining with phloxine, 6-15m diam.

So far, D. attenuatus appears recorded in rather xeric regions of Africa (Egypt,

Morocco, and South Africa) and North America (United States), according to Long &

Plunkett (op.cit.), and has recently been found in the State of Baja California, Mexico

(B. Silver, pers. comm.). The two records for Northern Africa make its appearance in

Figs. 10-17. D. attenuatus: 1. Fruit-body (Herb. Zeller ex Herb, Long 8437-NY-). 11. Fruit-

body (Herb. Long. 8436/8437 -BPI-). 12. Groups of collapsed basidia under LM (Herb.

Zeller ex Herb. Long 8437 -NY-) 13-15. Groups of basidia under SEM (Herb. Long

8053 -ВРІ-). 16; hyphae from glebal walls under LM (Herb, Zeller ex Herb, Long 8437

-NY-). 17. Hyphae from glebal walls under SEM (Herb. Long 8053 -BPI-).

Source - MNHN. Paris

82 J.E. WRIGHT, G. MORENO and A. ALTES

Figs. 18-23. D. attenuatus: Spores under SEM. 18,20,23. Herb. Long 8436/8437 (BPI). 19, 21-

22. Herb. Long 8053 (BPI).

Source : MNHN, Paris

DICTYOCEPHALOS ATTENUATUS 83

the Iberian Peninsula more plausible. It is probable that our specimen responds to a

particular ecotype.

ACKNOWLEDGEMENTS

This paper is part of the results of the Research Project C008/90 financed by the Progra-

ma Regional de Investigacion Ambiental of the Community of Madrid. It is also included in a

Research Project granted by the Ministerio de Educación y Ciencia (MEC, Spain), Subdirección

General de Cooperación Internacional, Programma de Cooperación con Iberoamérica.

We wish to thank Dr. A.Y. Rossman (BPI AND Dr. B.M. Thiers (N.Y.) for their kind-

ness in the loan of several collections of this taxon in their keeping. Due thanks also to Mr. J.A.

Pérez for his collaboration with the SEM.

LITERATURE

FISCHER Ed., 1933 - Gasteromyceteae. In: ENGLER A. und PRANTL K., Die Natûrlichen

Pflanzenfamilien. Bd. 7a. 122p., Leipzig.

HEIM R. et PERREAU J, 1971 - Etude ornamentale de basidiospores au microscope

électronique à balayage. /n: HEYWOOD V.H., Scanning Electron Microscopy. Chapter

13: 251-284. London, Academic Press.

LLOYD C.G., 1903 - Mycological Notes 14: 133-136.

LLOYD C.G., 1906 - The Tylostomeae. Mycol. Writings 2, 26 p.

LONG W.H. and PLUNKETT O.A., 1940 - Studies in the Gasteromycetes. I. The genus Dic-

tyocephalos. Mycologia 32: 696-709.

MARTIN M.P. y ROCABRUNA A., 1988 - Phellorinia herculeana (Pallas: Pers.) Kreisel en los

Monegros. Burl. Soc. Catalana Micol. 12: 83-92.

WHITE M.V., 1901 - The Tylostomaceae of North America. Bull. Torrey bot. club. 28: 421-444,

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1993, 14 (2): 85-93 85

GENETIC AND KARYOTYPIC IDENTIFICATION OF

SACCHAROMYCES YEASTS FROM FAR EAST ASIA

G.I. NAUMOV'*, E.S. NAUMOVA!, Z.M. AZBUKINA?, M. KORHOLA?

and C. GAILLARDIN*

1, State Institute for Genetics and Selection of Industrial

Microorganisms, 1 Dorozhnyi 1, Moscow 113545, Russia.

2. Institute of Biology and Pedology, Vladivostok 690022, Russia.

3. Research Laboratories of The Finnish State Alcohol Company

(ALKO Ltd.), POB 350, SF-00101 Helsinki, Finland

4. Laboratoire de Génétique des Microorganismes INRA-CNRS, Centre

de Biotechnologies Agro-Industrielles, Institut National Agronomique,

F-78850 Thiverval-Grignon, France

ABSTRACT - Wild isolates of the biological species Saccharomyces paradoxus Batschinskaia

was found for the first time in Far East Asia (Russian continental region) and identified by genet-

ical and molecular criteria. Strains of both species S. cerevisiae Hansen and S. kluyveri Phaff et

al. were also isolated

RÉSUMÉ - Des isolats sauvages de l'espèce biologique Saccharomyces paradoxus Batschinskaia

ont été trouvés pour la première fois en Asie Extrême Orientale (région continentale Russe) et

identifiés par des critères génétiques et moléculaires. Des souches de S. cerevisiae Hansen et S.

Kluyveri Phaff et al. ont également été isolées.

KEY WORDS : hybridization analysis, electrophoretic karyotyping, Saccharomyces paradoxus,

S. cerevisiae, S. kluyveri, taxonomy

INTRODUCTION

According to genetic hybridization analysis and total DNA-DNA reassociation

data, there are three biological sibling species within the taxonomical Saccharomyces

cerevisiae yeast complex: S, bayanus Saccardo, S. cerevisiae Hansen, S. paradoxus

Batschinskaya, and one hybrid taxon S. pastorianus Hansen (syn. S. carlsbergensis

Hensen) (Naumov et al., 1983a; Naumov, 1987; Naumov & Nikonenko, 1989; Vau-

ghan Martini, 1989; Vaughan Martini & Kurtzman, 1985; Vaughan Martini & Martini,

1987). The three sibling species are distinguished genetically, they can be crossed but

interspecies hybrids remain sterile or yield non-viable ascospores. The Saccharomyces

cerevisiae complex, formerly known as Saccharomyces sensu stricto (van der Walt,

1970), is not closely related to another group, Saccharomyces sensu lato, which in-

* Correspondence to Dr. C. Gaillardin,

Source : MNHN. Paris

86 G.I. NAUMOV et al.

cludes S. kluyveri Phaff et al., S. dairensis Naganishi, S. exiguus Hansen, S. servazzii

Capriotti and S. unisporus Jórgensen (Johnston & Mortimer, 1986; Kaneto et al., 1989;

Mikata, 1989; Vaughan Martini & Kurtzman, 1988; Yarrow, 1984).

During many years, Saccharomyces sensu stricto yeasts from East and West

Europe have been intensively studied in order to find wild strains of the domesticated

species S. cerevisiae (Naumov, 1980, 1986, 1987, 1988, 1989; Naumov & Nikonenko,

1987, 1988a; Naumov et al., 1992a). From natural substrates, away from human activ-

ities, such as oak exudates, uncultivated soils or insects, only the biological species S.

paradoxus is found constantly. The second sibling species 5. bayanus able to ferment

melibiose occurs in wine prepared at low temperature (Naumov, 1987; Naumov &

Nokonenko, 1989; Naumova et al., 1991). In previous studies we described two Asian

populations of wild S. cerevisiae yeasts located far from one another: one in Central

Siberia (Novosibirsk) and another in Japan (Naumov & Nikonenko, 1988b, Naumov &

Naumova, 1991). It was thus proposed that European cultivated S. cerevisiae yeasts,

which are now wide-spread over the world, originated from Far East Asia.

In the present study we identified Saccharomyces strains isolated in Russian

Far East from regions located not far from Japan. Such floristic study will permit bet-

ter evaluation of endemicity of Saccharomyces yeasts from Japan and, on the other

hand, elucidation of the origin of European cultural yeasts.

MATERIALS AND METHODS

Strains

The list of Saccharomyces strains studied and their origin are presented in Ta-

ble 1. The methods for cultivation, sporulation and hybridization of yeasts have been

described elsewhere (Naumov et al., 1986). The sporulated cultures were treated with

stomach juice of garden snails Helix to destroy ascus walls and then ascospores were

isolated with a micromanupulator (Johnston & Mortimer, 1959). The method used to

isolate natural strains was described before (Naumov et al., 1992a). Yeasts were col-

lected from exudates of Quercus mongolica during expeditions in September-October

1987. Twelve pure cultures of Saccharomyces were isolated from mixed populations of

yeasts, filamentous fungi and bacteria. Preliminary identification of the Saccharomyces

yeasts was done according to size and morphology of ascospores (Yarrow, 1984).

Highly fertile monosporic cultures of S. cerevisiae VKM Y-502 (CBS 5287),

SBY 2576 and S. paradoxus CBS 5829 strains marked by auxotrophic ade mutations

(red colonies) were used as genetic species testers (Naumov, 1987; Naumov et al.,

1983b). Chromosomal DNAs prepared from strains of S. cerevisiae (YNN 295), S. par-

adoxus (CBS 432) and S. kluyveri (NRRL 12651, CBS 4570) were used as standards

for karyotyping studies. The following acronyms of culture collections are used: VKM

= National Collection of Microorganisms, Moscow, Russia; SBY = Seccion de Bioqui-

mica, Instituto National de Investigaciones Agrarias, Madrid, Spain; CBS = Centraal-

bureau voor Schimmelcultures, Delft, The Netherlands; NRRL = Northern Region Re-

search Center, Peoria, IIl., U.S.A.

CHEF gel electrophoresis

Preparation of chromosomal DNAs have been described before (Naumov et

al., 1991). A CHEF-DR™ II apparatus (Bio-Rad, Richmond, CA, U.S.A.) was used to

separate the chromosomal DNAs.The electrophoresis buffer was 0.5 x TBE. The buff-

er was circulated around the gel and cooled to 14 C. Electrophoresis was carried out at

Source : MNHN, Paris

SACCHAROMYCES PARADOXUS IN FAR EAST ASIA 87

Table 1 - List of the Saccharomyces strains studied and isolated from exudates of Quercus mon-

golica in Far East of Russia

Tableau 1 - Liste des souches de Saccharomyces isolées d'exsudats de Quercus mongolica en

Extrême Orient Russe.

Strain Place of isolation Date of

designation isolation

N°42 Botanical garden in 06.VIII.87

the environs of Vladivostok

N°43 The cape "Peschannyi" in 12.VIII.87

the environs of Vladivostok

N°44 The environs of Ternei city 16.VIII.87

N°45 The environs of Ternei city 16.VIII.87

N°46 "Blagodatnoe" department of 17.VIII.87

the nature reserve "Sikhote-

Alinsky"

N°47 "Blagodatnoe" department of 17.VIII.87

the nature reserve "Sikhote-

Alinsky"

N°48 Biological station of 28.VIII.87

Far East State University,

V. Rjazanovka of Khazansky

district

N°491 Biological station of 28.VIII.87

Far East State University,

v. Rjazanovka of Khazansky

district

N°50 The railway station "Chajka", 02.IX.87

Vladivostok

MET The railway station "Chajka", 02.1X.87

Vladivostok

N°52 The nature reserve 09.УІІІ.87

"Kedrovaya pad"

N°53 "Blagodatnoe" department of 17.VIII.87

the nature reserve "Sikhote-

Alinsky"

ÎThe strain was isolated from exudate of Q. dentata.

200 V for 15h with a switching time of 60 s and then for 8h with a switching time of

90s. For better separation of chromosomal DNAs of S. kluyveri strains electrophoresis

Source : MNHN, Paris

88 G.I. NAUMOV et al.

was carried out at 200 V for 15 h with a switching time of 70s and then for 8 h with a

switching time of 120 s.

RESULTS AND DISCUSSION

Monosporic cloning

For genetic analysis, monosporous, highly fertile strains should be used. Such

strains with homozygous chromosome sets are also more suitable for electrophoretic

karyotyping because they do not carry chromosomes. To obtain highly fertile lines

6-10 asci (tetrads) were dissected in each strain. All strains studied were homothallic

with very high ascospore viability in the range of 85-100%.

Two strains N° 52 and N° 53 were not suitable for genetic analysis because

their ascus walls were not destroyed by the enzyme treatment. In this respect they are

similar to strains of Saccharomyces kluyveri (McCullough & Herskowitz, 1979).

Electrophoretic karyotyping

All strains under examination were compared by electrokaryotyping (Fig. 1A)

Karyotyping patterns of 10 strains (N° 42-51) were very similar to each other and to

those of standard testers of S. cerevisiae and S. paradoxus. These two species are

known to display similar karyotyping patterns, while karyotypes of S. bayanus were

clearly distinguishable from those of S. cerevisiae and S. paradoxus (Naumova et al.,

1991; Naumov et al., 1992b). So, it was possible to conclude that the strains studied

belonged either to S. cerevisiae or to S. paradoxus, but not to S. bayanus. Karyotyping

pattern of strain N° 43 (Fig. 1A, lane 5) was slightly different from the others for

chromosomes VII and XV, which usually migrate together, and for chromosomes V,

VIII and IX which differ in size from the other strains.

The two strains N° 52 and N° 53 were very different in terms of karyotype

from other Saccharomyces strains studied (Fig. 1A, lane 14, 15). Chromosomal DNA

of these strains was resolved into 6 bands with chromosome sizes ranging from 2.2

Mb to 1.0 Mb, while other strains including standards showed 12-15 bands ranging

from 2.2 Mb to 245 Kb. Karyotyping profiles of these two strains corresponded more

closely to that of S. Kluyveri (Johnston et al., 1988). Karyotyping patterns of strains N°

52 and N° 53 were further compared with two strains of S. kluyveri including the type

culture NRRL Y-12651 (Fig. B). All four strains showed identical karyotypes, suggest-

ing that strains N° 52 and N° 53 may belong to the species S. kluyveri. This suggests

that it may now be possible to identify by molecular karyotyping the species S. kluy-

veri (data of the present study), S. unisporus (Mikata, 1989), 5. bayanus and the com-

plex S. cerevisiae - S. paradoxus (Noumova et al., 1991; Naumov et al., 1992b.

Genetic hybridization analysis

Monosporic cultures of 10 strains (N° 42-51) were crossed with S. cerevisiae

VKM Y-502 and S. paradoxus CBS 5829 tester strains. Crosses were made by the

"spore-to-spore" mating method using a micromanipulator. Zygote formation was ob-

served in all crosses. These experiments confirms the karyotyping data and show that

all strains 42 to 51 belong to the complex Saccharomyces cerevisiae. To establish the

fine species belonging of the strains, all hybrids were studied by tetrad analysis (Table

2, 3). Species assignment of the strains was determined on the basis of the viability of

hybrid ascospores. Viability of hybrid ascospores and regular meiotic segregation of

control ade marker indicated the high homology of the genomes of the parent strains

Source - MNHN. Paris

SACCHAROMYCES PARADOXUS IN FAR EAST ASIA 89

A B

1 234 5 6 7 8 9 101112131415 | 1234

"remm

Figure 1 - CHEF gel electrophoresis analysis of chromosomal DNAs from natural Saccharomyces

strains isolated in Russian Far East and from standard strains of S. cerevisiae, S. para-

doxus and S. kluyveri.

(A) Lanes 1, 2 and 13, S. cerevisiae, YNN 295, X2180-1A and N 51, respectively; lanes

3-12, S. paradoxus, CBS 432, N 42, N 43, N 44, N 45, N 46, N 47, N 48, N 49 and N

50, respectively; lanes 14 and 15, S. kluyveri, N 52 and N 53, respectively.

(B) Lanes 1-4, S. kluyveri, NRRL Y-12651, CBS 4570, N 52 and N 53, respectively.

All cultures studied are monosporic isolates, with the exception of S. kluyveri ones.

Figure 1 - Analyse électrophorétique en gel CHEF d'ADN chromosomique d'isolats naturels de

Saccharomyces d'Extrême Orient Russe et de souches de références de S. cerevisiae, S.

paradoxus et S. kluyveri

(A) Pistes 1, 2 et 13, S. cerevisiae, YNN 295, X2180-1A et N 51; pistes 3-12, S. para-

doxus, CBS 432, N 42, N 43, N 44, N 45, N 46, N 47, N 48, N 49 et N 50; pistes 14 et

15, S. kluyveri, N 52 et N 53.

(B) Pistes 1-4, S. kluyveri, NRRL Y-12651, CBS 4570, N 52 et N 53.

Toutes les cultures étudiées proviennent d'isolements monosporaux, à l'exception de S. kluyveri.

and their belonging to the same biological species (Table 2). Conversely, non viability

of hybrid ascospores enabled us to assign the corresponding parents to different spe-

cies (Table 3). According to the results obtained, strains 42 to 50 belong to the species

S. paradoxus. Strain N? 51 corresponds to the species S. cerevisiae sensu stricto; intra-

species control crossing of S. cerevisiae 502 x 2576 gave normal meiotic segragation

(Table 2)

Thus, three species S. paradoxus (9 strains), S. cerevisiae (1 strain) and S.

kluyveri (2 strains) were found among wild Saccharomyces yeasts of the continental

part of Russian Far East. S. cerevisiae strain N° 51 was isolated in Vladivostok not far

from dwelling buildings. Rare semicultivated wine yeasts of S. cerevisiae have been

formerly identified in Far East of Russia (Naumov, 1988, 1990a, b). In the continental

Source : MNHN, Paris

90 G.I. NAUMOV et al.

Table 2 - Genetic analysis of intraspecies hybrids of S. paradoxus and S. cerevisiae.

Tableau 2 - Analyse génétique d'hybrides intraspécifique de S. paradoxus et S. cerevisiae.

Origin of No. of No. of No. of Proportion Segrega-

hybrids spore zygotes tetrads of viable tion of

pairs obtained isolated ascospores = ade: ADEL

crossed of hybrids

(%)

S. paradoxus x S. paradoxus

42 x 5829 32 6 38 45 35:33

43 x 5829 29 6 45 24 :

44 x 5829 30 2 44 55

45 х 5829 33 2 34 33 2

46 x 5829 35 9 45 39 33:38

47 x 5829 37 7 44 43 37:38

48 x 5829 30 7 36 45 31:34

49 x 5829 32 5 40 46 40:33

50 х 5829 31 5 41 50 41:41

8. cerevisiae x S. cerevisiae

51 x 502 ‘34 2 12 92 2:2 (10)

502 х 2576 46 5 25 86 2:2 (16)

bata of random spore or tetrad analysis are presented.

Number of tetrads is indicated in parenthesis.

part of Russian Far East, wild yeast of the complex S. cerevisiae correspond more

likely to the species S. paradoxus than to the species S. cerevisiae sensu stricto. On the

contrary in Japan, S. cerevisiae strains are common in nature (Yoneyama, 1957, 1958;

Kodama, 1974; Banno, 1975; Banno & Mikata, 1981; Naumov & Nikonenko, 1988b)

It thus seems that Japanese populations of wild S. cerevisiae yeasts are unique for the

Far East Asia.

Tt should be noted that North American and Far East Asian strains of S. kluy-

veri are more homogenous in terms of karyotypes (Fig. 1B) than strains of South Afri-

ca (Coetzee et al., 1987).

In this and previous investigations (Naumov & Nikonenko, 1988b) we ob-

tained preliminary data on the distribution of Saccharomyces cerevisiae and S. para-

doxus yeasts in Far East Asia. More studies of Saccharomyces yeasts of Sakhalin and

Kuril Islands, the enlarged screenings of strains of the continental Far East region and

Japan, have to be done before definite conclusions can be drawn regarding the species

composition of wild populations of Saccharomyces in Far East Asia.

ACKNOWLEDGEMENTS

This research was supported by Far Eats Department of Russian Academy of Sciences,

Research Laboratories of the Finnish State Alcohol Company (ALKO Ltd.), by grants of Institut

National de la Recherche Agronomique and of Ministère de la Recherche et de la Technologie

(France).

Source : MNHN. Paris

SACCHAROMYCES PARADOXUS IN FAR EAST ASIA 91

Table 3 - Genetic analysis of interspecies hybrids S. paradoxus x S. cerevisiae.

Tableau 3 - Analyse d'hybrides interspécifiques entre S. paradoxus et S. cerevisiae.

Origin of No. of No. of No. of Proportion of

hybrids spore zygotes tetrads viable asco-

pairs obtained isolated spores of

crossed hybrids (%)

42 x 502 29 2 26 ot

43 x 502 26 2 27 0

44 х 502 29 3 35 o

45 x 502 27 4 37 o

46 x 502 31 2 41 o

47 x 502 36 4 26 o

48 x 502 23 4 39 o

49 x 502 23 2 41 o

50 х 502 30 4 31 0

5829 х 51 75 6 44 0

liybrids of strains NN 42, 44, 45, 46, 47 and 49 with the

S. cerevisiae tester formed 1-2 microcolonies.

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EPIDEMIOLOGIE DE FUSARIUM CULMORUM

(W.G. SMITH) SACC. SUR BLÉ DANS LE SUD OUEST

DE LA FRANCE.

Mécanismes et agents de dissémination des conidies

JUGNET M.P.(**), BARRAULT G. (*), CARON D. (**), et ALBERTINI L.(*)

(*)E.N.S.A. TOULOUSE, 145 Av de Muret.

31076 TOULOUSE CEDEX, FRANCE.

(**)LT.C.F., 6 Chemin de la Cóte Vieille. 31450 BAZIEGE, FRANCE.

RÉSUMÉ - Une étude de Fusarium culmorum sur blé a été réalisée en plein champ, dans le Sud

ouest de la France (Baziège - Haute Garonne) durant deux années consécutives (1989, 1990).

Son but a été de démontrer que les conidies remontent de la base vers l'épi et que les résidus de

culture peuvent intervenir dans la contamination des épis. De plus, en 1989, la période où les

épis ont été les plus sensibles aux attaques de fusariose (à l'anthèses) a été caractérisée par l'ab-

sence de pluie. Ainsi l'action du vent seul, a pu être appréciée. Au cours de l'année 1990, la

pluie ayant prédominé durant l'anthèse, nous avons pu étudier son rôle dans la dissémination,

d'une part directemment par rejaillissement, et d'autre part, indirectemment par augmentation de

la sporulation et par libération des spores

ABSTRACT - Fusarium culmorum epidemiology was investigated in the field in the South West

of France (Baziége - Haute Garonne) during two successive years (1989, 1990). The aim was to

demonstrate that the conidia can move upwards, from the soil up to the ear, and that crop resi-

dues can be involved in the contamination of the ears. In 1989, at the time when the ears were

most suceptible to blight (i.e., at anthesis), as no rainfall occured, the effect of the wind could be

assessed separately. In 1990, as rainfalls prevailed at the time of anthesis, the specific effects of

rain, either directly, throughwater splash, or indirectly through increased sporulation and conidia

release, could then be investigated.

Mots-clés: Fusarium culmorum (W. G. Smith) Sacc., épidémiologie, conidies (dissémination), blé

dur, blé tendre.

INTRODUCTION

Fusarium culmorum (W. G. Smith) Sacc. et Fusarium graminearum Schwabe,

champignons pathogènes du blé, provoquent plusieurs types de dégâts: des manques à

la levée (fonte de semis), des nécroses le long des racines ou à leur extrémité, des at-

taques sur la base des tiges ou des différents noeuds, des nécroses au niveau de la gai-

ne et de la dernière feuille et enfin des attaques sur épis. C'est cette dernière manifes-

tation de la maladie qui est la plus spectaculaire et qui crée le plus de dégâts jusqu'à

50 % de perte de rendement (Rapilly et al., 1973).

Source : MNHN, Paris:

96 M.P. JUGNET et al

Or, si les conditions de température et d'humidité pour une contamination de

Vépi de blé sont bien connues dans le cas de F. graminearum (Andersen, 1948) et

moins bien dans le cas de F. culmorum, le processus de pollution des épis par les

spores est encore quasiment ignoré (Sutton, 1982).

Des hypothèses concernant le rôle joué par le vent et/ou la pluie dans le pro-

cessus de dissémination (vertical ou non) des conidies et/ou du mycélium ont été

émises par Cook (1981) mais n'ont jamais été expérimentalement démontrées. Dans

ce but, un programme de recherche a été mis en place en 1989 et 1990 dans le Sud-

Ouest à la station de l'I.T.C.F. (Institut Technique des Céréales et des Fourrages) de

Baziège (31). Il se propose d'étudier une possible contamination des épis de blé par

des spores de F. culmorum provenant de la base de la tige ou du sol en rapport avec

ces facteurs climatiques. La dissémination mycélienne proprement dite n'a pas été l'ob-

jet d'investigation car, aléatoire, elle est en outre difficile à imputer à l'une ou l'autre

espèce de Fusarium, leurs mycéliums étant morphologiquement semblables.

MATÉRIEL ET MÉTHODE

1) Dispositif expérimental

L'expérimentation est conduite en plein champ, sur des variétés de blé sensi-

bles à la fusariose mais résistantes aux autres maladies. Les variétés retenues en 1989

sont CAPDUR (blé dur), et GOELENT (blé tendre) et en 1990 CAPDUR seul.

L'expérience est réalisée au stade le plus favorable pour une contamination de

fusariose des épis de blé, c'est à dire à la floraison (anthèse), en mai (Andersen, 1948).

Afin d'étudier la dissémination sur une période climatique plus longue,

l'expérimentation en 1989 est réalisée sur les deux variétés retenues (CAPDUR et

GOELENT) fleurissant à des dates différentes.

Le dispositif mis en place comprend 3 blocs, Chaque bloc est pourvu de 4

parcelles élémentaires et de témoins adjacents. Une parcelle mesure (1x5) m.

2) L'inoculum

L'inoculum est apporté sous forme de bottillons de chaumes de blé contaminés

pour simuler des résidus de culture colonisés. Cette paille a subi 2 stérilisations

(autoclavages à 120°C) espacées de 24 heures afin d'éliminer toutes les contaminations

secondaires. Elle est ensuite ensemencée à l'aide d'une suspension de spores de F.

culmorum (concentration de l'ordre de 10* spores/ml) et placée sous U.V. en alternance

jour-nuit (12H/12H) à 20°C durant 3 semaines pour favoriser la sporulation. La souche

de F. culmorum utilisée est une souche isolée à partir d'un grain de blé contaminé

(souche LT.C.F. - SG3).

Afin de vérifier la remontée des conidies de F. culmorum dans chaque parcel-

le, les bottillons sont placés selon trois modalités: au niveau de l'épi, à 30 cm en des-

sous de l'épi, et à même le sol (tableau 1). La parcelle témoin a pour seules contami-

nations celles existant naturellement.

L'inoculum est placé dans les champs au début de la sortie des anthéres, le

12/05/89 sur blé tendre (GOELENT) et le 18/05/89 et le 14/05/90 sur blé dur

(CAPDUR).

Source : MNHN, Paris

FUSARIUM CULMORUM SUR BLÉ 97

N° Caractéristique des Hauteur des rubans adhésifs sur chaque

parcelle parcelles: capteur de spores

hauteur de inoculum

en 1989 en 1990

Pas d'inoculum - à 30cm en-dessous de l'épi - au niveau du sol

(témoin) - au niveau de l'épi - à 30cm en-dessous de l'épi

- au niveau de l'épi

Inoculum à 30cm | - à 30cm en-dessous de l'épi - au niveau du sol

au-dessous de l'épi | - au niveau de l'épi - à 30cm en-dessous de l'épi

-au niveau de l'épi

Inoculum à 30cm ~ à 30cm en-dessous de l'épi -à 30cm en-dessous de l'épi

au-dessous de l'épi __| - au niveau de l'épi -au niveau de l'épi

Inoculum au niveau de

Tableau 1: Disposition du matériel expérimental.

3) Le marqueur végétal: les grains fusariés

Le dégât causé par la fusariose sur épi doit être analysé. En effet, il corres-

pond d'une part à la contamination naturelle (apport exogène) et d'autre part à la

contamination artificielle (bottillons de paille colonisés).

Nous avons employé la méthode de l'Association Nationale pour la Protection

des Plantes (A.N.P.P., 1988, 1992) qui consiste à prélever 50 épis dans chaque parcel-

le élémentaire, à battre ces épis à la batteuse WALTER et WINTERSTEIGER, et à

trier, sur 25g de grains prélevés au hasard dans l'échantillon, les grains sains des grains

fusariés présentant une couleur blanche ou rosée.

Les résultats concernant l'attaque des grains à la suite des contaminations

d'épis sont présentés dans les tableaux 2 à 4, sous la forme de pourcentages de grains

fusariés; l'analyse statistique de ces résultats a été effectuée au moyen du test de

Newman et Keuls (au risque 0:=0,05).

4) Les capteurs de spores

Dans le cadre d'études épidémiologiques, le système de piégeage de spores

couramment utilisé fonctionne par aspiration d'air (Hirst, 1952). Ce piégeage qui cor-

respond à une étude quantitative globale sur une large aire, ne peut distinguer des sur-

faces parcellaires limitées et différemment traitées. Dans le cas d'une étude plus

précise, des lames enduites de lanoline sont fréquemment utilisées (Gregory &

Stedman, 1953); dans ce cas l'échantillonnage des conidies n'est alors pas réalisé dans

toutes les directions; de plus, la lecture au microscope n'est pas aisée, la surface en-

duite n'étant pas uniformément plane.

Source : MNHN Paris

98 M.P. JUGNET et al

Pour éviter ces problèmes et recueillir une meilleure information, nous avons

mis au point et expérimenté un système inspiré de Roelfs et al. (1968) consistant à

planter des tubes de verre verticalement dans le sol et à les entourer de rubans adhésifs

double-face à différentes hauteurs (tableau 1). Ces rubans adhésifs permettent le

piégeage des conidies; sur chacun d'eux est placé une marque qui situe le Sud et qui

permet donc de repérer le niveau de capture des conidies en fonction de la direction

du vent.

Après exposition, chaque ruban adhésif est placé sur une lame de verre, coloré

au bleu Coton au lactophénol, et observé au microscope. Les spores sont d'abord

identifiées grâce à leur forme en croissant et à leur taille (Messiaen et Cassini, 1968;

Booth, 1971, 1977; Nelson et al., 1983) puis comptées. La surface analysée est de di-

mension constante (130 mm?) puisque correspondant en hauteur à la largeur du ruban

adhésif et en largeur à la circonférence du tube de verre. Les tubes de verre n'ont

qu'un diamètre de 4 mm, Gregory (1951) ayant montré dans un type d'expérience simi-

laire, que le rendement du piégeage de spores par bâton de verre collant est dans cer-

taines limites en relation inverse avec son diamètre.

L'installation des capteurs est effectuée après celle de l'inoculum pour éviter

des contacts inopportuns entre les deux. Dans les parcelles 2 et 3, les capteurs sont

placés à proximité (0,5 cm) des bottillons pour vérifier la sporulation des pailles d'une

part et étudier la dissémination verticale d'autre part. Par contre, dans la parcelle 4, le

dispositif de piégeage de spores est conçu pour étudier la dispersion horizontale des

conidies, d'épi en épi; dans le présent article, il n'est pas fait état de cette dispersion

horizontale et seule est étudiée la contamination des épis.

Les relevés sont réalisés tous les 3 ou 4 jours la première année (mise au point

des capteurs), sur blé dur du 18/05 au 30/05 et sur blé tendre du 12/05 au 15/06. En

1990, les relevés sont journaliers du 15/05 au 01/06 sur blé dur.

Les variables analysées sont les suivantes:

- Nombre moyen de spores captées (moyenne réalisée sur les 3 répétitions) en

1989 et 1990

- Pourcentage de spores disséminées en 1990 (rapport entre le nombre moyen

de spores à une hauteur fixée et le nombre moyen de spores captées au niveau

supérieur, selon les caractéristiques expérimentales du tableau 1).

Les résultats essentiels concernant l'inoculum de F. culmorum et sa dispersion

sont présentés, en 1989, sous la forme de représentations rectangulaires (nombre de

spores de F. culmorum captées à différents niveaux (épi ou 30 cm sous l'épi) à partir

d'inoculums sporulants, eux aussi différemment situés (sol ou 30 cm au dessus du ni-

veau du sol); blé dur CAPDUR et blé tendre GOELENT; Fig. 1-4), et, en 1990, sous

la forme de courbes marquant quantitativement l'évolution de la sporulation ou de la

dissémination à différentes hauteurs des conidies du pathogène en fonction du posi-

tionnement de l'inoculum (CAPDUR, Fig. 5-8) et de droites de régression corrélant la

sporulation et la dissémination avec certains facteurs climatiques (Fig. 9-11).

RÉSULTATS et DISCUSSION

1) Le pourcentage de grains fusariés

Les résultats obtenus en 1989 sur le blé tendre GOELENT et en 1989 et 1990

sur le blé dur CAPDUR sont concordants: les grains sont d'autant plus fusariés que

Source : MNHN, Paris

FUSARIUM CULMORUM SUR BLÉ 99

= Blé tendre (GOELENT)

Daves

Blé dur (CAPDUR)

Daten ` aes

Ke DE зия Ka NECI E

Fig. 4

Fig. 3

Fig. 1 à 4: Résultats de la dispersion verticale des conidies de F. culmorum en 1989. Fig. 1 et 3:

l'inoculum se trouve au sol (sous forme de botillon contaminé). Fig. 2 et 4: l'inoculum

se trouve à 30cm sous l'épi (sous forme de botillon contaminé). Le nombre moyen de

spores captées sur la surface adhésive de 130mm?,

linoculum est rapproché de l'épi (tableaux 2-4). L'analyse statistique des essais

conduits à des écarts type faibles (6=0,01 sur GOELENT , o=0,11 sur CAPDUR en

1989 et o=0,15 sur CAPDUR en 1990) ce qui signifie que ces essais sont satisfaisants

au plan expérimental avec des résultats parcellaires répétitifs et fiables et que les

différences significatives déterminées entre "traitements" (en l'occurrence, l'incidence

de la position de l'inoculum) au moyen du test de Newmans et Keuls ont une réalité

patente.

Source

MNHN, Paris

100

M.P. JUGNET et al

N° Parcelle

CARAC

ERISTIQUE

POURCENTAGE DE GRAINS FUSARIES

stoe? | stoci | mocs | моем

Témol

1 de o o o 0,00 (a)

( pas d'inoculum )

2 Inoculum au sol 0,23 0,21 0,23 0,22 (b)

3 [Inoculum & 30 ст en dessous | _ 0,22 0,21 0,22 0,21 (b)

de l'épi

4 Inoculum au niveau de l'épi 0,44 0,44 0,43 0,44 (с)

Tableau 2 : Pourcentage de grains fusarlés obtenus dans l'essal blé tendre (GOELENT) en1989

N° Parcelle CARACTERISTIQUE POURCENTAGE DE GRAINS FUSARIES

төсі | Loci | мос» | MOYENNE

Témoin

1 0 0,15 0 0,05 (a)

(pas dinoculum )

2 Inoculum au sol 0,44 0,51 0,26 0,40 (b)

3 Inoculum à 30 ст en dessous | 0,45 0,38 0,29 037 @ |

de l'épi

4 Inoculum au niveau de l'épi 0,94 13 0,78 101 (c)

Tableau 3 : Pourcentage de gralns fusarlés obtenus dans l'essal blé dur (CA!

PDUR) en 1989.

N'Parelle | CARACTERISTIQUE POURCENTAGE DE GRAINS FUSARIES

төсі | тос? | виосз | MOYENNE

1 Jan o o o 0,00 (a)

( pas d'inoculum )

2 Inoculum au sol 03 03 03 0,3 (b)

3 [Inoculum à 30 cm en dessous| 0,5 0,68 | оз 0,54 (b)

«етері

4 | Inoculumaunlveaudel'épi | 2,04 | 1,82 | 1,55 180 (c)

Tableau 4 : Pourcentage de gralns fusarlés obtenus dans l'essal blé dur (CAPDUR) en 1990.

a, b, e, : groupes homogénes d'après Newman-Keuls (au risque œ = 5%)

Source : MNHN, Paris

FUSARIUM CULMORUM SUR BLÉ

100

a perm

18/05 mue ` Sie 17

Figure 5 : Evolution de lo sporuiotlon des bottillona de polla

comtominás ou cours du lemps et en fonction de leur posl

ou vol où ô 30 em ou dessous de 1'épi). Les coplewra wont

locks ou même niveau que l'inoculum.

Pourcentage de

ашы.

D = Copiar ou erg ғы

о Dates

16/03 mue ` 25/05 30/03

Flgure 7 : Disséminotion des conidies ou mcis de тої

Flan tion das conidl ia da

Uum ae trouva Ò 30 cm 0 desns du wol

(sous forme óe boltlllon Ge poille Contominde).

101

Pourcentoge aa

perc

Copter 8 30 com sae rapt

= Copia as rive de l'agi

vates

16/03

20058 25/05 29/05

Figure 6 : Dissémination des conidien au moja de mol

1990, du sol jusquis JO em sova Tapi ol Au tot vera

De, Via te trouve ov 20! (sous forme de

boitilion 38 polle contominse).

Мете тер de ocre

жалма DS om a.

Fat

Etes Dre de

16/09

Figure B : Nombre me

mum 23/03 31/03

г ore moyen de sporea conien o 30

нш Qu aol el cy niveau Ge pl dora lo porcelle témoin

{sons inoculum artificio) ou mota de mol 1990.

Fig. 5 à 8: Résultats de la dispersion verticale des conidies de F. culmorum en 1990, sur blé dur

(CAPDUR). Le nombre moyen de spores captées correspond A la moyenne sur 3

répétitions du nombre de spores captées sur la surface adhésive de 130mm?.

L'analyse de variance met en évidence 3 groupes:

- a) le témoin où la contamination est presque nulle,

- b) la parcelle où l'inoculum est au sol et celle où l'inoculum est à 30 ст

sous l'épi,

Source : MNHN, Paris

102 M.P. JUGNET et al.

- c) la parcelle oü l'inoculum est au niveau de l'épi, et oü la contamination est

maximale. Les bottillons de paille fusariée interviennent dans la contamination des

épis et leur position influe sur le niveau des dégâts observés sur grain. On peut donc

en conclure que:

- la présence de résidus contaminés au sol est une source potentielle

d'inoculum pour la contamination des épis.

- la colonisation verticale des tiges en végétation par F. culmorum parait favo-

riser très vraisemblablement la contamination des épis, autrement dit, plus les noeuds

supérieurs sont atteints, plus le risque d'obtenir un pourcentage de grains fusariés

apparait élevé.

A l'issue de cette expérimentation, on peut se demander, d'une part, s'il y a

réellement un lien entre la contamination de la tige et celle de l'épi et d'autre part, si

une souche apte à coloniser la tige peut réellement provoquer des dégâts sur épis. Les

réponses à ces deux questions semblent positives à la considération d'observations

complémentaires récentes (non publiées). Cependant, dans les conditions normales de

cultures de blé au champ et lors d'attaques des épis au stade de leur sensibilité maxi-

male (à la floraison), le pathogène est-il alors présent sur tige? Une telle question, ac-

tuellement sans réponse, fera l'objet de recherches ultérieures,

Les conidies produites sur les bottillons de pailles sont-elles essentielles dans

la contamination des épis? L'analyse des capteurs va nous permettre d'apprécier la

dissémination des conidies à partir de ces bottillons sporulants placés au sol ou à 30

cm au dessus du sol et, par conséquent, d'apprécier leur rôle dans l'attaque des épis.

2) le piégeage de spores

La période du 12/05 au 15/06 est surtout caractérisée en 1989 par une

pluviométrie faible: des pluies ne dépassant pas 5 mm apparaissent le 30/05 après une

longue période de sécheresse (19 jours) et ne durent que 4 jours alors qu'en 1990 les

pluies sont abondantes et régulières (Fig. 12 en annexe climatique). Par conséquence,

les humidités minimales et maximales sont supérieures en 1990 à celles de 1989 (Fig.

13). D'autre part, les températures et la vitesse du vent dans l'ensemble, sont plus

élevées pendant l'expérimentation menée en 1989 (Fig. 14 et 15).

a/ En 1989

En raison de relevés espacés de 3 à 4 jours, nous avons adopté la figuration

rectangulaire (Fig. 1-4). La base du rectangle correspond à la durée du relevé et sa

hauteur au nombre moyen de spores captées (moyenne effectuée sur 3 répétitions). Sur

les capteurs des parcelles témoins, aucune spore n'est piégée durant le mois de mai

1989 et au delà; l'inoculum naturel de F. culmorum est pratiquement absent dans les

parcelles expérimentales. Dans les parcelles inoculées artificiellement, une remontée

des conidies de F. culmorum est observée (Fig. 1 à 4): cette dissémination verticale

n'avait jusqu'à ce jour jamais été démontrée. Une autre constatation s'impose aussi: la

diffusion latérale de l'inoculum est dans cette expérimentation au champ en 1989, pra-

tiquement nulle puisque les parcelles témoins demeurent indemnes de spores malgré la

présence de vent quasiment journalière.

En 1989, nous avons commencé à cerner l'incidence des différentes données

climatiques (températures maximale et minimale, humidités relatives maximale et mi-

nimale, pluviométrie) sur le piégeage des spores de F. culmorum étalé sur 3 à 4 jours.

La considération des résultats permet de mettre en relief les faits suivants:

Source : MNHN, Paris

FUSARIUM CULMORUM SUR BLÉ 103

(perse

"сонар entre le niveau de sporulation de (8 10.7 Corrélatlon entre le niveau de sporulation de

np athe nu sgl el le tambre mayen de pores _ __ linoculum alud au, al el le nombre mayen de spores

=OS dl aol. File â Du rien : captae gu mlveau de l'épi. Elle «pour equation Rat

SE SES 4 База

portation de

Ri et le nombre

- Bien que l'essai blé dur (CAPDUR) ait été conduit en absence totale de pluie

(les premières précipitations ayant eu lieu le 30 mai dans l'après midi, alors que l'essai

se terminait le 30 mai au matin - Fig. 12 en annexe climatique), la dissémination verti-

cale, dirigée vers le haut, a cependant eu lieu, dans les parcelles pourvues de bottillons

colonisés par F. culmorum. La pluie ne semble donc pas être la condition nécessaire à

la dissémination verticale.

- Le contrôle de la sporulation des pailles (et de la disponibilité de l'inoculum)

au moyen du piégeage effectué par le ruban adhésif situé au niveau de l'inoculum

(bottillon de paille situé à 30 cm au dessous de l'épi) a permis de noter, chez la variété

GOELENT (Fig. 2), un accroissement (du 12 au 19/05), suivi d'une diminution (du 20

au 29/05) puis d'un nouvel accroissement (du 30/05 au 8/06) de la sporulation; ces va-

riations sont en relation directe avec celles de l'humidité relative minimale et de la

pluviométrie: ainsi, l'accroissement de la sporulation situé du 30/05 au 08/06 dans l'es-

sai GOELENT est en rapport direct avec le développement d'une période de pluie

(Fig. 2). Dans les phases de sécheresse, la conidiogénèse et la disponibilité de

linoculum s'estompe progressivement, comme l'a montré l'expérimentation sur

CAPDUR qui s'achevait le 30/05 (Fig. 4).

- Le résultat du repérage des spores sur les rubans adhésifs montre que 90 %

des conidies sont situées dans la zone adhésive correspondant à la direction des vents

dominants du mois de mai (essentiellement vent du Sud Est, appelé vent d'Autan): le

vent semble donc être un vecteur important de dissémination verticale des conidies de

F. culmorum.

Source : MNHN. Paris

104 M.P. JUGNET et al.

ANNEXE CLIMATIQUE

(1989-1990)

ae i

> C

A у ЕТТІ

" anem / Ao mv

M Humidité

` ^ GC

A A. ak “a uu eM

теу поа ue

Tu. 12: FLUVIOMETRIE du 12/08 au 16/08 en 1900 et 1990. Td MSIE inim ot mesi du

18/05 au 18/08 en 1909 el 1890.

mue uei

“W

DON

MM 2

Meeres paren at oro errores BATES

EA OA] D^

5) de 12/08 өш 19: TEMPERATURES maximales el minimales di

IE cu du 18/08 Tos s oon en ela t Ia

b/ En 1990

L'étude de l'évolution de la sporulation et de la dissémination des conidies en

fonction des mémes facteurs climatiques a été reprise avec plus de précision en 1990

pour vérification et, si possible, approfondissement. Les résultats expérimentaux ont

donné lieu à une étude descriptive et à une analyse statistique.

œ) L'étude descriptive

Les courbes (Fig. 5 à 8) présentant les différents résultats expérimentaux per-

mettent la mise en évidence des faits suivants:

- La présence d'un très faible inoculum conidien de F. culmorum dans les par-

celles témoins (Fig. 8) au cours du mois de mai 1990; l'inoculum conidien (naturel) ne

sera donc pas pris en compte dans l'interprétation statistique des résultats.

- L'influence de la position en hauteur des bottillons de paille sur leur niveau

de sporulation (Fig. 5): le nombre moyen de spores captées est plus élevé au sol qua

Source : MNHN, Paris

FUSARIUM CULMORUM SUR BLÉ 105

30 cm au dessus du sol, quel que soit le jour du relevé. Il apparait donc que les condi-

tions de température et d'humidité existant au niveau du sol sont plus favorables que

celles situées à de 30 cm A la conidiogénese de F. culmorum sur paille.

- Une évolution assez parallèle de la dissémination vers le haut quelles que

soient la position en hauteur de l'inoculum et la distance parcourue par les conidies

(maxima et minima de dissémination aux mêmes dates sur les 3 courbes, dans les fi-

gures 6 et 7): faisons notamment remarquer la grande similitude des courbes (avec

pourcentages de même ordre) de la dissémination vers le haut (à 30 cm de distance)

des inoculums issus du sol (courbe supérieure Fig. 6), ou d'une position à 30 cm au

dessus du sol (Fig. 7).

B) L'analyse statistique

Une analyse statistique mettant en corrélation le climat et le nombre ou le

pourcentage de spores captées permet de préciser les conditions favorables et les

agents responsables de ce mécanisme. Puisqu'il s'agit de prédire une variable (nombre

ou pourcentage de spores captées) en fonction d'un certain nombre de paramètres

(principalement des paramètres climatiques), nous réaliserons une régression linéaire

simple ou multiple. Les résultats essentiels de cette analyse résumés au tableau 5 sont

les suivants:

+ Pour la sporulation dans les bottillons de pailles (quelle que soit leur po-

sition), la meilleur régression a été obtenue par deux variables explicatives la

température maximale et l'humidité minimale présentant un effet linéaire significatif au

seuil &=5 %. En effet, le coefficient de corrélation R? entre, d'une part, le nombre

moyen de spores captées à la même hauteur que l'inoculum et la température maxi-

male et l'humidité minimale journalières de la période concernée (12/05 - 15/06/90)

d'autre part, est significativement élevé (R2=0,90). Ainsi, peut-on remarquer l'arrêt de

la sporulation vers le 27-28/05/90 en correspondance avec un arrêt de la dissémination

(Fig. 5, 6 et 7) lorsque l'humidité relative minimale s'effondre au-dessous de 45 à

50%, ail encore peut-on noter un regain de sporulation (23-24/05) et de

dissémination (25/05/90) lorsque l'humidité relative minimale est supérieure à 80%

(Fig. 5, 6, 7). Ceci suggére notamment que le niveau de sporulation des pailles au sol

ou à proximité est étroitement lié à ces deux facteurs climatiques. Ces résultats confir-

ment les observations réalisées en 1989.

- D'autre part, Il n'existe pas de corrélation entre la sporulation et l'humidité

moyenne ou maximale (les R? sont voisins de zéro). Ceci montre toute l'importance

des variations de l'humidité relative minimale sur la sporulation de F. culmorum sur

paille; d'autre part cela suggère qu'il existe un seuil d'humidité relative en dessous du-

quel la sporulation ne peut se réaliser.

Rapilly et al. (1973) ont observé une production sporale accrue sur toutes les

parties de la plante parasitée dés que la température dépasse 10°C et l'humidité relative

voisine de 80%. D'autres auteurs (Sprague, 1948; Cook, 1968, 1981; Sung et Cook,

1981) ont noté que le développement de F. culmorum pouvait être favorisé par un

Stress hydrique. Nos observations, effectuées dans des conditions expérimentales assez

différentes, ne sont pas fondamentalement contradictoires avec celles de ces auteurs: la

sporulation peut être observée à des humidités relatives assez basses (seuil de 45 à

50%) mais elle apparait favorisée par des humidités relatives élevées (supérieures à

80%).

- À notre connaissance, l'action de la température sur la conidiogénèse de Е.

culmorum n'a jamais été précisément étudiée. En général, les travaux reposant sur la

production de spores de ce pathogène prennent pour référence l'étude réalisée par

Source : MNHN, Paris

106 M.P. JUGNET et al.

Caractéristiques dela vais à pe Régresseurs E

Aster de оосу |. ns

Tam

E t Huimin

nommé | 830 cra au бана Taw

de Finocalam à 30 cm

na dessan du sol. dee С humidité min

a 130 cm a dan | Niveau de sporulation a

Е А dee de occum sono

e ‘Niveau de porton T

€ БИ Ze naan ом

a Mince Nivess de spor tarian a

`... m3 rives de épi | de Tireculum 1 30cm ом"

мі Ze

Se = +

Venu 020

Pourcentage de spores шм DEET E:

[tisémintes du so à 0 em

AES ER m Paie 0%

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Pourcentage de spores mx sinis de Fg

Aisin dal vere Phie e"

Ven ss

Poucenage de spore +v niveau етан

teint de 0 m wu

S т

esas duo ver Гей шәм 0.02

Tableau 5: Récapitulatifs des différentes régressions réalisées sur les résultats du piégeage de

spores de F. culmorum en 1990 en fonction des paramètres climatiques.

* Valeur significative au seuil œ = 0,005

Andersen (1948). Cet auteur met en évidence in vitro une production de conidies im-

portante entre 28°C et 32°C, peu de conidies produites en dessous de 16°C et aucune

au dessus de 36°C; en serre, sur blé contaminé, il observe une sporulation entre 15°C

et 30°C, avec un maximum à 25°C. Cependant ces recherches concernent F.

graminearum et il est peu vraisemblable que ces conditions de conidiogénèse corres-

pondent exactement à celles de F. culmorum, méme si les deux parasites ont des com-

portement voisins. Cette étude mériterait d'être réalisée,

+ Le nombre moyen de spores captées (ou disséminées) au niveau de l'épi et

à 30 cm en dessous est étroitement lié au niveau de sporulation et ceci quelle que soit

la position de l'inoculum (tableau 5 - Fig. 9 à 11). La dissémination des conidies de F.

culmorum est donc fonction du potentiel d'inoculum et est corrélée aux conditions cli-

matiques favorisant la sporulation.

+ Nous avons cherché à identifier la variable climatique la plus étroitement

corrélée au pourcentage moyen de spores disséminées. Les coefficients de

corrélation entre les variables prises deux à deux ont été obtenus (tableau 5). Le vent

est le seul facteur climatique présentant un r faible mais significatif (0=5 %) lorsque

l'inoculum est à 30 cm au dessus du sol. Même le rôle de la pluie souvent citée dans

la bibliographie (Rapilly et al, 1973: Cook, 1981) comme participant a la

dissémination (par rejaillissement) en raison de la nature hydrophile des conidies, n'est

pas prouvé dans cette étude. La pluie ne semblerait donc pas intervenir directement

dans le transport des conidies

Source : MNHN, Paris

FUSARIUM CULMORUM SUR BLÉ 107

L'expérience étant réalisée en plein champ et donc en présence de nombreux

facteurs non contrôlés, pouvant inter-agir entre eux, seules parfois certaines tendances

peuvent être dégagées. C'est l'exemple de l'action du vent dans notre expérimentation.

Les résultats du repérage des conidies sur les rubans adhésifs sont identiques à ceux

obtenus en 1989. Ceci souligne encore son rôle dans le transport des conidies. C'est

pourquoi nous pensons que le vent est l'agent susceptible de disséminer les spores de

F. culmorum.

CONCLUSION

Nos recherches nous ont permis de démontrer l'existence d'une dissémination

verticale (du sol vers le haut) des conidies et son rôle dans la contamination des épis

de blé.

Ainsi alors que Warren & Kommedahl en 1973 et Wearing & Burgess en

1977 mettaient déja en évidence l'importance des résidus de culture dans la contami-

nation de la tige, l'ensemble de nos résultats ont montré qu'ils sont aussi une source

d'inoculum pour la contamination des épis. C'est cette dernière manifestation qui pro-

voque le plus de dégâts (50% de perte de rendement) et il n'existe pas de fongicide

réellement efficace (seul le tébuconazole a une efficacité de 60% appliqué à l'épiaison

et de 80% en pleine floraison). Des pratiques culturales seront donc principalement

envisagées afin de lutter contre ce pathogène: le labour profond, l'enfouissement des

pailles ou les rotations avec des cultures autres que le maïs (Teich & Hamilton, 1985;

Sturz & Bernier, 1989).

La dissémination des spores de F. culmorum ne semble possible qu'à partir

d'un certain niveau d'inoculum qui est lui même fonction de caractères climatiques

particuliers (prise en compte de la température maximale journalière et d'un seuil

d'humidité relative minimale de l'ordre de 60%). Une étude de l'action de ces facteurs

sur la conidiogénèse de ce pathogène sur paille apporterait des renseignements

complémentaires sur cette phase épidémiologique.

La pluie n'aurait qu'une action secondaire dans la dissémination du sol vers

l'épi et elle interviendrait plutôt par le biais de l'élévation de l'humidité minimale favo-

rable à la sporulation et peut-être aussi, par un certain effet de rejaillissement lorsqu'

le a un caractére orageux (cela reste à vérifier par des expériences de pluies arti

cielles). En revanche, le vent semblerait être l'agent actif de la dissémination. Cet

aspect demande à être confirmé par une étude similaire mais comportant des relevés

moins espacés ou par une expérience conduite en serre ou en phytotron et utilisant un

appareillage simulant un vent artificiel et ses à-coups.

Les auteurs remercient J. P, LACOMBE (Laboratoire d'Ingénierie Agronomique,

E.N.S.A. Toulouse) pour son aide concernant l'analyse statistique des résultats obtenus en 1990.

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NUSIA GEN. NOV. FOR TWO INTERESTING

HYPHOMYCETES FROM SOUTHEAST ASIA

C.V. SUBRAMANIAN

Central Institute of Medicinal and Aromatic Plants Post Bag No. 1,

R.S.M. Nagar P.O., Lucknow-22016, India.

ABSTRACT - Two interesting dematiaceous hyphomycetes collected on palms from Singapore

are described and their taxonomy discussed. Both share several features: the simple mononema-

tous conidiophores with integrated apical monotretic conidiogenous cells and solitary, euseptate

phragmoconidia. They are accomodated in a new genus, Nusia as two new species: N. scheeleae

(type species) on Scheelea insignis Karst., and N. collariata on Oncosperma horrida Scheff. The

former is unique in having a Virgariella synanamorph., the latter in the frequent presence of a

collar-like structure subtending the mature conidium on the conidiophore.

RÉSUMÉ - Deux hyphomycètes dématiés sont décrits et leur taxonomie discutée dans cet article.

Les 2 champignons ont des caractères communs: des conidiophores simples, mononémés avec

cellule conidiogène apicale, monotrétique, intégrée et des phragmoconidies solitaires, euseptées

Ils sont regroupés dans un nouveau genre: Nusia, en 2 espèces nouvelles: N. scheeleae (esp. type)

sur Scheela insignis Karst., et N. colloriata sut Oncosperma horrida Scheff. Le premier est

caractérisé par la présence d'une synanamorphe du type Virgariella le second par la présence

d'une structure ressemblant & une colerette entre la conidie mûre et le conidiophore.

KEY WORDS : Nusia, hyphomycetes, taxonomy.

As a part of the programme of work on microfungi of the tropics, the author

is currently engaged in a study of his collections from southeast Asia made during his

stay at the National University of Singapore in 1986-87. Two interesting collections

are described here both of which are assigned to a new genus, Nusia as two new spe-

cies.

DESCRIPTIONS OF THE FUNGI

1. Nusia scheeleae Subramanian anamorph gen. et sp. noy.

This interesting hyphomycete was collected on Scheelea insignis (Palmae) and

is described below.

‘The fungus forms brownish to reddish brown, discrete colonies on the substra-

tum. The mycelium is composed of subhyaline to reddish brown, smooth, branched

hyphae, 3-5 um wide, sparsely septate when young (Fig. 1). The colonies show two

synanamorphs arising from the same hypha or mycelium or stroma (Fig. 6). One of

Source : MNHN, Paris

110 C.V. SUBRAMANIAN

Fig. 1-5, Nusia scheeleae ex Type (S 34). Fig. 1, vegetative hypha showing the development of

conidiophores. Note hypha is sparsely septate. Fig. 2, Development of conidiophores.

Figs. 2-4, Conidiogenesis (tretic). Fig. 5, mature conidia

Figs. 1-5, Nusia scheeleae ex Type (S 34). Fig. 1, hyphe végétative montrant le développement

des conidiophores. On note que l'hyphe est peu cloisonnée. Fig. 2, développement des

conidiophores. Fig. 2-4, conidiogenèse trétique. Fig. 5, conidie mûre.

them produces tretic phragmoconidia (Fig. 2-5), and the other blastic ameroconidia;

the latter is a Virgariella (Figs. 6-9).

Source : MNHN, Paris

NUSIA GEN, NOV, FROM ASIA 11

The tretic anamorph

The conidiophores arise laterally from discrete hyphae (Fig. 1, 2) or from

compact aggregations of hyphae or stromata (Fig. 6). The conidiophores are macrone-

matous, relatively short, simple, mononematous, erect, straight or bent or flexuous,

mostly of uniform width and cylindrical (Figs. 2, 6) brown to reddish brown, 4-6-sep-

tate, up to 120 um long and 4-6 jim wide. The conidiogenous cell is integrated, apical

and monotretic (Figs. 2-4). The conidia (Fig. 5) are solitary, tretic, acrogenous, dry, el-

ongate-obclavate or obclavate-rostrate, widest (6- 9 um) in the lower one-third, gradu-

ally tapering above, reddish brown, paler above, fairly thick-walled, many times up to

19- (mostly 9-14)- septate, (65)-90-160 (192) jim long, 5-9 m wide, sometimes con-

stricted at some septa, with a distinct basal hilum, the distal part often almost whip-

like, roughened in the basal part. The conidiophores may proliferate percurrently, but

this is rare.

Dematiaceous anamorphs with simple conidiophores, an integrated monotretic

apical conidiogenous cell and phragmoconidia are found in the genus Corynespora

Gussow (Ellis 1971, 1976). The conidia in the type species, C. cassiicola (Berk. &

Curt.) Wei (= C. mazei Gussow) are many times distoseptate, obclavate to cylindrical,

subhyaline to brown, often in simple acropetal chains. The present fungus is quite dis-

tinct from Corynespora in having euseptate, solitary conidia. It has also a Virgariella

synanamorph, not so far known in any Corynespora sp.

As far as I am aware, there is no hyphomycete genus in which the present

fungus may be appropriately accomodated. It is disposed in a new genus, NUSIA as a

new species, N. scheeleae.

NUSIA Subramanian anamorph gen. nov.

Dematiaceous hyphomycete producing tretic conidia. Conidiophores macrone-

matous, mononematous, simple, brown, septate. Conidiogenous cell integrated, apical,

monotretic. Conidia solitary, obclavate, brown, euseptate, dry.

Synanamorph: Virgariella.

Hyphomycete dematiacea conidia tretica producens. Conidiophora macronema-

tosa, mononematosa, simplicia, fusca, septata. Cellula conidiogena integrata, apicalia,

monotretica. Conidia solitaria, obclavata, euseptata, fusca, sicca.

Synanamorphosa: Virgariella. (Etym. commemorating the NUS, for National

University of Singapore, with which the author was associated as Visiting Professor

during the tenure of which numerous collections of microfungi were made from Singa-

pore).

Type species:

Nusia scheeleae Subramanian anamorph sp. nov.

Colonies brownish to reddish brown. Mycelium composed of subhyaline to

reddish brown, smooth, branched hyphae 3-5 jm wide, sparsely septate when young,

often aggregated and compacted to form sclerotia-like masses. Conidiophores arising

laterally from hyphae or from compact aggregations of hyphae or stromata, short, sim-

ple, erect, straight, bent or flexuous, cylindrical, brown to reddish brown, up to 6-sep-

tate, up to 120 um long, 4-6jtm wide. Conidia acrogenous, solitary, tretic, obclavate or

elongate-obclavate or obclavate-rostrate, widest (5- 9 jtm) in the lower one-third, ta-

pering above, reddish brown in colour, paler above, thick-walled, 9-14(-19)-euseptate,

Source : MNHN, Paris

112 C.V. SUBRAMANIAN

(65)-90-160(-192) рт long, sometimes constricted at some septa, with a distinct hi-

lum, the distal part almost whip-like, roughened in the basal part.

Synanamorph: Virgariella.

Virgariella synanamorph:

Conidiophores (Fig. 6) arising from hyphae or compact aggregates of hyphae

(sclerotia-like), erect or ascending, flexuous or straight or bent, pale brown to subhya-

line, paler above, smooth, mostly 7-14-septate, up to 225 um long, 2.5-4 im wide.

Conidiogenous cell (Fig. 8) integrated, apical, polyblastic. Conidia solitary, blastic,

obovoid, pointed at the base, smoothly rounded at the apex, thin-walled, hyaline to

subhyaline, smooth, and 6-9 x 2-5 jim (Figs.8-9).

Type: on rachis of Scheelea insignis Karst. (Palmae), Botanical Garden, Singa-

pore, Coll. CVS, 12.11.1987. No. S 34.

Clusters of Virgariella conidiophores without Nusia conidiophores may occur

(Fig. 7), but yet it is clear that, when both anamorphs are present, they arise from a

common mycelium or common stroma (Fig. 6), which confirms the fact that one is the

synanamorph of the other.

Species typica:

Nusia scheeleae Subramanian anamorph sp. nov.

Coloniae brunneolae vel rubrofuscae. Mycelium ex hyphis subhyalinis vel ru-

brofuscis, ramosis, parce septatis ubi juvenilis, 3-4 um latis compositum. Conidiophora

ex hyphis lateraliter oriunda vel ex stromatibus, brevia, simplicia, erecta, recta vel flex-

uosa, cylindrica, fusca ad rubro-fusca ad rubro-fusca, usque ad 6-septata, usque ad

120 um longa, 4-6 um lata. Conidia acrogena, solitaria, tretica, sicca, obclavata vel

obclavato-rostrata, rubro-fusca, apicem versus pallidiora, 9-14(19)- euseptata,

(65)-90-160(-192) um longa, 5-9 um lata, cum hilo distincta, parte supra flagelliformis,

parte basali verrucosa.

Synanamorph: Virgariella.

Type: ad rachidis Scheeleae insignis Karst. (Palmae), Botanical Garden, Sin-

gapore, Coll. C.V. Subramanian, 12.11.1987, subnumero $ 34.

Virgariella synanamorph:

Conidiophora ex hyphis repentibus lateraliter vel ex stromatibus oriunda, erec-

ta, recta vel flexuosa, pallide brunnea vel subhyalina, sursum pallidiora, laevia, pler-

umque 7-14-septata, usque ad 225 m longa, 2.5-4.0 um lata. Cellula conidiogena in-

tegrata, apicalia, polyblastica. Conidia solitaria, blastica, obovoidea, apiculata ad

basim, rotundata ad apicem, tenuitunicata, hyalina vel subhyalina, laevia, 6-9 um lon-

ga, 2-5 jun lata.

Ad rachidis Scheeleae insignis Karst. (Palmae), leg. C.V. Subramanian,

12.11.1987, һого Botanico, Singapore, No. S 34.

2. Nusia collariata Subramanian anamorph sp. nov.

Another interesting fungus was collected on Oncosperma horrida (Palmae) and

is described below.

Source : MNHN, Paris

NUSIA GEN. NOV. FROM ASIA 113

Figs. 6-9, Nusia scheeleae ex Type. Fig. 6, Nusia conidiophore and Virgariella conidiophores de-

veloping from a common stroma. Figs. 7-9, Virgariella synanamorph. Fig. 7, a cluster

of conidiophores and some conidia; Fig. 8, conidiogenesis in the Virgariella morph; Fig.

9, distal part of conidiogenous cell and conidia

Fig. 6-9, Nusia scheeleae ex Type. Fig. 6, conidiophores de Nusia et de Virgariella se

développant à partir d'un stroma commun, Figs. 7-9, Synanamorphe Virgariella. Fig. 7,

Bouquet de conidiophores et conidies. Fig. 8, conidiogentse dans la forme Virgariella

Fig. 9 partie distale d'une cellule conidiogène et conidie

Source : MNHN, Paris

C.V. SUBRAMANIAN

Source : MNHN, Paris

NUSIA GEN. NOV, FROM ASIA 15

The fungus forms brownish, effuse colonies on the substratum. The mycelium

is superficial, composed of reticulate, branched, septate, subhyaline to reddish brown

hyphae, thin-walled when pale-coloured, thick-walled when brown; subhyaline hyphae

are less than 24m wide; brown hyphae are 3-4 um wide. The conidiophores arise

(Figs. 12, 13, 18) from the repent mycelium or from stromata of variable size formed

by an intertwining of the hyphae which ultimately become clumped together to form a

compact stroma. They may also arise from cells of a single conidium. The coni

phores (Figs. 12, 13) are relatively short, macronematous, mononematous, mostly 3-6-

septate, erect, straight, bent or flexuous, cylindrical, brown, paler above, monotretic

(Figs. 11-14, 19- 20) up to 75 jm long, 3-4 um wide. The conidia are solitary, dry,

acrogenous, reddish brown, obclavate-elongate, rostrate, widest above the base, gradu-

ally tapering distally, paler in the distal part, subhyaline towards the tip, clearly verru-

cose in the lower half, (3)-6-12-septate, 80- 140 jtm long, 6-8 jim in the widest part,

sometimes constricted at one or a few septa in the lower part, the basal cell narrowing

to a clearly thickened, flat sear (Figs. 12, 13, 16, 19, 20).

A curious feature frequently observed is the presence of a conspicuous, tat-

tered or collapsed, collar-like structure subtending the mature conidium (Figs. 12-14)

on the conidiophore. Also the surface of the mature conidium is invariably roughened

(Figs. 16-17, 19-20) or marked by conspicuous presence of accretions thereon. The

genesis of the collar-like is not clear. It is possible that the conidium initial, originally

enclosed within a "vesicle" (Fig. 10), in its further development tears apart the "vesi-

cle" which now persists in tattered form. If this is true, one should be able to find

such a stage in the development of the conidium, but I have not seen this stage.

Though a "tattered collar” is common, there are also conidiophores/conidia that do not

show this (Figs. 19, 20), but the size, morphollogy and tretic ontogeny of conidia are

apparently the same whether a collar is present or not. One cannot exclude the possi-

bility of a conidium initial getting aborted and a conidium then developing percurrent-

ly, the tattered wall of the conidium initial persisting. The conidiophore may prolifer-

ate percurrently (Figs. 17-18).

The fungus is close to Nusia in many features; but the curious collar-like

structure subtending the conidium is a feature not seen in the type species, N. schee-

leae. Further, there is no Virgariella synanamorph associated with the present fungus.

There is no other genus in which this fungus can be suitably accommodated. Accord-

ingly, it is placed in Nusia as a second species, N. collariata sp. nov. The specific epi-

thet refers to the frequent occurrence of a collar subtending the conidium.

Figs. 10-20, Nusia collariata. Fig. 10, Conidiophores; Fig. 11, conidiogenesis. Figs. 12-14, coni-

diophores with mature conidia still attached. Note the collar-like structure subtending the

mature conidium. Fig. 15, development of collar followed by proliferation of conidio-

phore. Fig. 16, two mature conidia; Figs. 17, 18, percurrent conidiophore proliferation.

Figs. 19-20, two mature conidia attached to conidiophore but without subtending collar-

like structures. ex Type (S 61)

Figs. 10-20, Nusia collariata. Fig. 10, conidiophores; Fig. 11, conidiogenèse. Figs 12-14, conidi-

ophore avec conidies mûres encore attachées. On notera la collerette à la base de la con-

idie mûre. Fig. 15, formation d'une collerette et prolifération du conidiophore. Fig. 16,

2 conidies mûres. Figs 17, 18, prolifération percurrente du conidiophore. Fig. 19-20: 2

conidies mûres encore attachées au conidiophore mais sans collerette basale. ex Type (S

61)

Source : MNHN, Paris

116 C.V. SUBRAMANIAN

Nusia collariata Subramanian anamorph sp. nov.

Colonies effuse, brownish. Mycelium superficial, composed of reticulate,

branched, septate, subhyaline to reddish-brown hyphae: thin-walled and less than 2

um wide when subhyaline, thick-walled and 3-4 im wide when brown. Conidiophores

simple, mononematous, relatively short (up to 75 jm long), 3-4 jim wide, erect,

straight, bent or flexuous, cylindrical, brown, paler above. Conidia solitary, dry, ac-

rogenous, reddish-brown, elongate-obclavate, rostrate, (3)-6-12-septate, widest above

the base, gradually tapering above and drawn out into a rostrum, paler in the distal

part, subhyaline towards the tip, clearly verrucose to papillose in the lower part, the

basal cell with a thickened flat scar, 80-140 pm long and 6-8 um in the widest part.

Type: on leaf rachis of Onchosperma horrida Scheff. (Palmae), Botanical Gar-

den, Singapore, Coll. C.V. Subramanian, 19.ii.1987, No. S 61.

Nusia collariata Subramanian anamorph sp. nov.

Coloniae effusae, fuscae. Mycelium superficiale, ex hyphis repentibus, ramosis,

septatis, subhyalinis vel rubrobrunneis compositum. Conidiophora simplicia, monone-

matosa, brevia, usque ad 75 um longa, 3-4 um lata; erecta, recta vel flexuosa, cylindri-

ca, fusca, sursum pallidiora. Conidia solitaria, acrogena, tretica, rubro-brunnea, elon-

gata, elongato-obclavata vel obclavato-rostrata, (3)-6-12-septata, sursum pallidiora,

verrucosa vel papillosa ad partem infera, 80-140 pum longa, 6-8 m lata; hilum trunca-

tum vel incrassatum.

Typus lectus ad rachidis Oncospermae horridae Scheff. (Palmae), Horto Botan-

ico, Singapore, leg. C.V. Subramanian, 19.ii.1987, subnumero S 61.

ACKNOWLEDGEMENT

This work was carried out during the tenure of an INSA Senior Scientist Award to me.

The CSIR supported a Project on Taxonomy and Distribution of Microfungi. I thank the INSA

and the CSIR for the support and the Director, CIMAP, Lucknow for having me work here and

for all facilities given.

REFERENCES

ELLIS MB., 1971 - Dematiaceous Hyphomycetes, 608 pp., Kew, CMI.

ELLIS M.B., 1976 - More Dematiaceous Hyphomycetes, 507 pp.. Kew, CMI.

Source : MNHN, Paris

Cryptogamie, Mycol. 1993, 14 (2): 117-125 117

RESPUESTAS DE CRECIMIENTO DEL ALBARDIN (LYGEUM

SPARTUM L.) A LA INOCULACION CON HONGOS

MICORRICICOS Y A LA FERTILIZACION FOSFORADA

Gisela DIAZ y Mario HONRUBIA

Depto Biología Vegetal (Botánica). Facultad de Biología. Universidad

de Murcia. 30071 Murcia. España.

RESUMEN - Se ha estudiado la respuesta de Lygeum spartum L. a la inoculación con hongos. A

y a la fertilización fosforada. En uno de los experimentos, la micorrización con Glomus

fasciculatum a distintas dosis de fertilización (0, 30, 60 y 90 mg P/kg suelo) produjo incrementos

significativos de biomasa, especialmente con bajos niveles de fertilidad, obteniendose la máxima

cosecha en plantas micorrizadas a la dosis de 60 mg/kg de adición de P.

En el otro experimento, se estudió el efecto de diferentes endófitos en dos suelos. No se

observaron diferencias importantes entre los hongos, sino más bien según el suelo utilizado: To-

dos los hongos ensayados produjeron incrementos en la asimilacion de P en los dos suelos, pero

solo dieron lugar a incrementos de crecimiento en uno de los suelos.

ABSTRACT - The growth response of Lygeum spartum L. to inoculation with mycorrhizal fungi

and P-fertilization was studied. In one of the two experiments, the inoculation with Glomus fasci-

culatum at several fertilization rates (0, 30, 60, 90mg P/kg soil) produced a significant growth

improvement, especially at low fertility levels. The maximum yield was obtained in mycorrhizal

plants growing in soil with 60 mg/kg of added P.

In the other experiment, the effect of several mycorrhizal fungi was studied in two dif-

ferent soils, No differences were observed between fungi, All the fungi tested were effective іп Р

uptake in both soils, but resulting to an increase of plant growth in only one of the soils tested

INTRODUCCION

Extensas áreas de la Península Ibérica se encuentran sometidas a procesos de

erosión y desertificación, con la consecuente pérdida de suelo. En estas zonas, se hace

necesario en acciones de revegetación, la utilización de especies vegetales que por sus

caractérísticas contribuyan a la recuperación de los suelos degradados.

Las gramíneas, debido al gran desarrollo de su sistema radical, influyen de

modo decisivo en la establización del suelo pues ayudan a mantener una mayor y más

prolongada infiltración, reduciendo por tanto, la erosión (FAO, 1978). Lygeum spartum

L. es una gramínea de amplia distribución en áreas mediterráneas, capaz de tolerar

condiciones extremas en cuanto a aridez, elevadas temperaturas, déficit de nutrientes

en el suelo y salinidad.

Las micorrizas arbusculares (MA), presentes en una gran mayoría de las espe-

cies vegetales (Harley 8: Harley, 1987) son decisivas para el establecimiento de las

plantas en suelos degradados (Barea et al., 1990). En suelos deficitarios, el principal

Source : MNHN, Paris

118 G. DIAZ y M. HONRUBIA

efecto de las MA sobre la fisiología de la planta huésped es el incremento en la

asimilación de nutrientes, fundamentalmente P, que revierte en una estimulación del

crecimiento (Smith & Gianinazzi-Pearson, 1988; Gianinazzi-Pearson & Azcon-Aguilar,

1991). La selección de hongos eficientes es especialmente útil en suelos alterados, con

escasa o inadecuada población de hongos A autóctonos.

Hasta ahora, no existen datos previos de la micorrización de L. spartum. Los

objetivos de este trabajo son, por un lado, evaluar el beneficio que obtiene la planta de

la micorrización, es decir, la necesidad que tiene de las micorrizas para conseguir un

crecimiento óptimo a un nivel dado de fertilidad del suelo (Gerdemann, 1975), Por

otro lado, estudiar la susceptibilidad de la planta a la colonización radical con distintas

especies de hongos A, y la efectividad de éstos en la estimulación de crecimiento y

asimilación de nutrientes.

MATERIAL Y METODOS

Los suelos utilizados en los experimentos proceden de la provincia de Murcia

(España): La Unión (suelo 1) y Portman (suelo 2). Ambos se encuentran afectados por

procesos de erosión y degradación química a consecuencia de actuaciones mineras.

Las características físico-químicas de los mismos se muestran en la Tabla 1. El suelo

se pasó a través de un tamiz de 4 mm de luz de malla y se mezcló con arena de cuar-

zo en la proporcion 1/1 (v/v) con el fin de mejorar se textura. Esta mezcla se esterilizó

por tindalización a vapor fluente durante 1 hora en 3 días consecutivos, con el fin de

eliminar los propágulos de los endófitos A nativos. El sustrato estéril se dispuso en

macetas de 600cm'. Рага reintegrar los componentes de la microbiota nativa se

adicionó un filtrado del mismo suelo que se obtuvo agitando una mezcla de suelo y

agua, dejándola sedimentar durante 3 o 4 horas y pasando el sobrenadante por cadena

de filtros que permite el paso de bacterias y hongos de pequeño tamaño pero no los

propágulos de hongos micorrícicos.

Las semillas de L. spartum se recolectaron en los alrededores del Campus

Universitario de Espinardo (Murcia). Antes de su uso se limpiaron y esterilizaron en

superficie, sumergiéndolas en HzO, durante 30 minutos, tras lo cual se sometieron a

sucesivos lavados con agua, manteniéndose finalmente en imbibición durante 12 horas

para favorecer su germinación. La semillas se sembraron directamente en la maceta y

se clarearon a 2 por maceta después de la germinación.

Los hongos utilizados como inóculo micorrícico fueron: Glomus fasciculatum

(Thaxter ss. Gerd.) Gerd. y Trappe. y G. mosseae (Nicol y Gerd.) Gerd. y Trappe, pro-

cedentes de la coleccion de inóculos de la Estación Experimental de Zaidín, Granada;

G. etunicatum Becker y Gerd., Glomus sp. GPR31, aislados de rizosfera de Medicago

sativa y G. mosseae GPR30 aislado de rizosfera de Dittrichia viscosa, que crecían en

la Bahía de Portman, Murcia. Estos hongos se multiplicaron en maceta con Medicago

sativa como planta huésped, durante al menos 12 meses de crecimiento en invernadero

con ciclo natural de luz y temperatura. 10g de inóculo micorrícico (consistente en sue-

lo con fragmentos de raíces micorrizadas, esporas y micelio) se añadió a cada maceta

a unos 3em por debajo de la superficie del suelo, mezclándose cuidadosamente con

éste.

Source : MNHN, Paris

LYGEUM SPARTUM Y MICORRIZAS 119

La Unión. Murcia Portman. Murcia

UTM XG 8 UTM XG 9062

pH 728 739

С.Е. (45/М) 4,56 6.54

M.O. (%) 131 0.55

N total (ma/1002) 74.00 47.00

P asim. (mg/kg) 1:56 209

K asim. (mg/1002) 30,11

Zn (mg/kg) 8.80 236,70

Pb (mg/kg) 31,00 368,00

Tabla 1: Características físico-químicas de los suelos.

Table 1: Physical and chemical characteristics of the soils.

Diseño experimental:

Experimento 1: Se estudió la respuesta de las plantas a la micorrización en

relación con el nivel de fertilidad del suelo. Se utilizó suelo procedente de La Union

(suelo 1). Se obtuvieron 4 niveles de fertilidad por la adición al suelo de 0, 30, 60 y

90 mg P/kg suelo, aplicado como H,KPO, en disolución y dejando estabilizar el suelo

durante 15 dias. Para cada tratamiento de adicion de P se prepararon dos series, una de

las cuales se inoculo con G. fasciculatum mientras que la otra se mantuvo como con-

trol sin micorrizar.

Experimento 2: Se determinó la capacidad de asociación con diferentes hon-

gos endomicorrícicos de L. spartum, y la efectividad de la simbiosis establecida. En el

suelo 1 se ensayaron G. fasciculatum, G. mosseae y Glomus sp. GPR31 y en el suelo

2 se utilizaron ademas G. mosseae GPR30 y G. etunicatum.

Se establecieron cinco réplicas de cada tratamiento. Las plantas se mantuvier-

on en invernadero con ciclo natural de luz y temperatura y cada 15 días se adicionó

solución nutritiva (Hewitt, 1952) carente de fósforo.

El periodo de crecimiento fue de 16 semanas, trás lo cual se determinó altura,

peso fresco y seco (16h, 80°C) de la parte aerea y radical. El porcentaje de

colonización micorrícica se determinó segun el método de Giovannetti y Mosse (1980)

en porciones teñidas del sistema radical (Philips 8: Hayman, 1970). Tras la digestión

de las muestras con ácido nítrico-perclórico 5:3 se determinó la concentración de P por

colorimetría con verde de malaquita (Fernandez et al., 1985), midiéndo la absorbancia

a 660 nm.

Los resultados obtenidos se sometieron a un análisis de varianza (ANOVA)

comparándose las medias mediante el test de Duncan (Duncan, 1955).

Source - MNHN. Paris

120 G. DIAZ y M. HONRUBIA

RESULTADOS Y DISCUSION

Efecto de la micorrización y la fertilización fosforada

Para los niveles 0, 30 y 60 de aplicación de P, las plantas micorrizadas super-

aron significativamente a las no micorrizadas en cuanto a los parámetros de pesos fres-

cos y seco de la parte aeréa, y algo menos en cuanto a altura. Al nivel más alto de

adición de P (90 mg/kg) el aumento de biomasa de las plantas micorrizadas no fue

significativo (Tabla 2). El incremento del crecimiento inducido por la inoculación

decreció al aumentar la dosis de adición de P al suelo, lo que confirma el hecho de

que la simbiosis micorrícica es más eficaz en suelos deficientes en P o de fertilidad

moderada (Hayman, 1983; Smith & Gianinazzi- Pearson, 1988; Barea, 1990.

El abonado fosforado dió lugar también a un aumento de la producción de bi-

omasa, tanto en las plantas micorrizadas como en los controles no micorrizados. La

cosecha máxima se obtuvo con la conjunción de inoculación y fertilización; esto es, en

el tratamiento de plantas micorrizadas y con adición de 60 mg/kg de P.

Los porcentajes de micorrización fueron bajos en general, no superándose el

40%. Algunos autores han puesto de manifiesto un efecto inhibitorio del P a grandes

concentraciones sobre la colonización micorrícica (Waterer & Coltman, 1988; Hetrick

et al., 1990), que no se ha observado en este estudio. Puede hablarse mas bien de una

tendencia al aumento en el porcentaje de infección con una adición de P de 60 mg/kg,

coincidente con la máxima producción de biomasa, para volver a disminuir con dosis

mayores. Incrementos de la colonozación radical con pequeñas adiciones de P, en sue-

Adiciónde P Altura ^ Peso fresco Pesoseco Micorrización

(mg/kg) (ст) (mg/planta) (mg/planta) (%)

Parte aérea Raiz Pane aérea Raiz

Control 0 14 а 215а 350 а 6la 73a 0

30 21b 347 ab 663b 105 bc 150b 0

60 23b. 356ab — 568b 107 bc 1195 0

90 3lc 465bcd 597b 145bcd 1395 0

Micorrizado 0 27 bc 413bc 68lb 120 bc 128b 27

30 29 bc S82cd 758b 157 cd 157b 25

60 28 bc 622 d 698 b 180 d 131 b 39

90 28 be 550са 751b 155 cd Zb 26

Tabla 2: Efecto de la inoculación y la fertilización fosforada sobre el crecimiento y la

micorrización de plantas de L. spartum. Valores medios de cinco repeticiones. Los da-

tos dentro de una misma columna con una letra en común no difieren significativamente

(P <0,05) según el test de Duncan:

Tabla 2: Effect of inoculation and P-fertilization on growth and mycorrhizal colonization of L.

spartum. Values are mean of five replicates. Data in a column followed by the same

letter are not significantly different (P<0.05) according to Duncan's test.

Source : MNHN, Paris

LYGEUM SPARTUM Y MICORRIZAS 121

los muy deficientes en este nutriente han sido observados con anterioridad (Medina et

al., 1988, 1990).

En la figura 1 se representan los valores relativos a la asimilación de P por la

planta: En las plantas no micorrizadas, la concentración de P aumentó con la del suelo,

mientras que en las micorrizadas se produjo un fuerte aumento con la primera dosis de

adición, manteniéndose los niveles sin cambios importantes a dosis superiores (Figura

1 A). Los valores de P total asimilado indican asimismo una acumulación mayor de

este elemento en las plantas micorrizadas (Figura 1 B).

Efecto de la inoculacion con diferentes hongos A

En el suelo 1 todos los hongos ensayados produjeron un incremento significa-

tivo en la altura y pesos fresco y seco de la parte aérea y radical, siendo los tres hon-

gos igualmente efectivos (Tabla 3). En cambio, en el suelo 2 ninguno de los hongos

8 3000 А

8 200

$ 1000

E - O= No micorrizadas

8 —@— Micorrizadas

a o =

0 зо 60 90

Adición de P (mg/kg)

500 B

= 400

8 30%

Ï 20

ы 100

o 30 60 90

Adición de P (mg/kg)

Figura 1: Efecto de la inoculación y la fertilización fosforada en la concentración foliar de P (A)

y fósforo total asimilado (В) en plantas de 1. spartum.

Figure 1: Effect of inoculation and P-fertilization on shoot P concentration (A) and total P assim-

ilated (B) in L. spartum plants.

Source : MNHN Paris

122 G. DIAZ y M. HONRUBIA

Hongo inoculado Altura Peso fresco Peso seco Micorrizacion

(cm) (mg/planta) (mg/planta)

Parte aérea Raiz Parte aérea Raiz

(%)

Control 18.6 a 174 à 357 a 82a 73a

G. fasciculatum 29.5 b 397b 611b 155b 118b

G. mosseae 29.1b 411b 610b — 130b 110b

Glomus sp. GPR31 31.3 b 340 b 471 ab 137b 155

34 c

23b

19b

Tabla 3: Efecto de la inoculación con diferentes hongos A sobre el crecimiento y la micorrización

de plantas de L. spartum en el suelo 1. Valores medios de cinco repeticiones. Los datos

dentro de una misma columna con una letra en común no difieren significativamente

(P<0,05) según el test de Duncan.

Table 3: Effect of inoculation with several A fungi on growth and mycorrhizal colonization of L.

spartum in soil 1. Values are mean of five replicates. Data in a column followed by the.

same letter are not significantly different (P«0.05) according to Duncan's test.

Hongo inoculado ^ Altura Peso fresco Peso seco Micorrización

(cm) (me/planta) (me/planta) (%)

Parte aérea Raiz Рапс Raiz

Control 1874 50а 1194а 221a 0a

G. fasciculatum 232c 776% 4472c 327b 36е

G. mosseae 194ab 663 abe 2236 abe 235ab 26048 25

G. mosseae GPR30 227%с 765% 2057bc 278ab 302ab 35c

G. etunicatum 18.8a 830c 2045bc 2924 304ab 32bc

Glomussp.GPR31 = 20.3abc 562ab 1513ab 219a 2Slab 16a

Tabla 4: Efecto de la inoculación con diferentes hongos A sobre el crecimiento y la micorrización

de plantas de L. spartum en el suelo 2. Valores medios de cinco repeticiones. Los datos

dentro de una misma columna con una letra en común no difieren significativamente

(P<0,05) según el test de Duncan.

Tabla 4: Effect of inoculation with several A fungi on growth and mycorrhizal colonization of L.

spartum in soil 2. Values are mean of five replicates. Data in a column followed by the

same letter are not significantly different (P«0.05) according to Duncans's test.

dió lugar a diferencias con significación estadística en el peso seco de la parte aérea,

con respecto a los controles no micorrizados (Tabla 4). Se pone así de manifiesto la

influencia que ejerce el sustrato en la efectividad de la simbiosis micorrícica (Díaz et

Source : MNHN. Paris

LYGEUM SPARTUM Y MICORRIZAS 123

al., 1992). Se sabe que ciertas características del suelo (pH, textura, fertilidad, micro-

flora, etc.) pueden influir en el comportamiento de diferentes endófitos. Además L.

spartum es una planta que crece de forma natural en el suelo 2, con escasa población

de hongos A (datos no publicados) y donde constituye una de las especies dominantes.

De hecho, el crecimiento de L. spartwn fue mayor en el suelo 2 que en el suelo 1, in-

dependientemente de su condición micorrícica. Se puede pensar que es una planta

adaptada a estas condiciones y que no necesita del beneficio de la micorrización para

producir un desarrollo óptimo. Sin embargo, en el suelo 1, con otras condiciones

edáficas diferentes, sí obtiene un beneficio significativo de la simbiosis.

Los niveles de colonización radical son en general bajos, no superándose el

35%. En ambos suelos, G. fasciculatum fue el hongo más infectivo, y Glomus sp.

GPR31, el menos.

Con respecto a la nutrición fosforada se observa que la concentración de P en

los tejidos de las plantas micorrizadas es siempre superior a las de las no micorrizadas

(Figura 2). Mientras que en el suelo 1 la mejora de la nutrición fosforada se refleja en

el incremento de biomasa, en el suelo 2 esto no ocurre. Esto podría deberse a que en

este suelo, sometido a importantes condiciones de estrés por contaminación por me-

tales pesados (Tabla 1) el crecimiento de la planta micorrizada se vea limitado por ot-

ros factores, tales como la acumulación en exceso de otros elementos minerales. Es en

el suelo 1 donde se observan mayores diferencias entre los endófitos, mientras que en

el suelo 2 en todos los tratamientos de inoculación se obtienen valores similares de

concentracion de P.

En la simbiosis micorrícica, más que de especificidad en sentido estricto,

podría hablarse de compatibilidad entre planta, hongo y suelo. Segun el hongo consi-

derado puede variar la repuesta a la inoculación (Simpson & Daft, 1990; Barea, 1991),

aunque no se observa este comportamiento en nuestro estudio. Mas bien, las diferenci-

as de crecimiento entre tratamientos parecen estar influenciadas por el tipo de suelo y

la receptividad del mismo a la simbiosis.

600

400

Concentración de P (mg/kg)

Control G1 G2 G3 G4 G5

Figura 2: Concentración foliar de P en plantas de L. spartum inoculadas con distintos hongos A.

G1: G. fasciculatum; G2: G. mosseae; G3: G. mosseae GPR30; G4: G. etunicatum; GS:

Glomus sp. GPR31

Figure 2: P concentration in shoots of L. spartum plants inoculated with several A fungi. Gl: G.

Jasciculatum; G2: G. mosseae; G3: G. mosseae GPR30; G4: G. etunicatum; GS: Glomus

sp. GPR31

Source : MNHN, Paris

124 G. DIAZ y M. HONRUBIA

CONCLUSIONES

Los resultados obtenidos indican que la inoculación con hongos

endomicorrícicos resulta eficaz para estimular el crecimiento y la asimilacion de P en

L. spartum. La micorrización proporciona un beneficio para la planta superior al de la

fertilización fosforada a los niveles ensayados. Siendo el P uno de los factores que

límitan la productividad en suelos deficitarios en este nutriente, se pone de manifiesto

la importancia de una apropiada selección de los hongos formadores de micorrizas con

vistas a su utilización con fines prácticos.

Dada la variabilidad de L. spartum en cuanto a la necesidad de las MA para

obtener un crecimiento óptimo según la combinación suelo-hongo, se sugiere también

la necesidad de realizar ensayos de micorrización para seleccionar hongos eficientes en

cada caso concreto, En los suelos ensayados, donde L. spartum no presenta problemas

de supervivencia, la selección de hongos que estimulen crecimiento y protuctividad es

de gran importancia en la recuperación de zonas degradadas.

AGRADECIMIENTOS

Al Ministerio de Educación y Ciencia, por la beca concedida a Gisela Díaz Espejo.

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Cryptogamie, Mycol, 1993, 14 (2): 127-148 127

ÉTUDE DE LA FLORE FONGIQUE DU CHÉNE

(QUERCUS sp.) CARACTÉRISTIQUE DU SÉCHAGE

NATUREL DES BOIS

DESTINÉS A LA TONNELLERIE

N. VIVASÚ) & Y, GLORIES?

1) tonnellerie DEMPTOS détaché à l'institut d'onologie, Université de

Bordeaux II

(2) Laboratoire de chimie appliqué, Institut d'oenologie, Université de

Bordeaux Il, 351, cours de la libération. 33405 Talence.

RÉSUMÉ - Aprés purification par repiquage successifs de chaque colonie morphologiquement

différente, l'identification n'a concerné que les champignons rencontrés dans tous les échantillons

et donc caractéristique du séchage naturel du bois de chêne. Cinq espèces sont retenues: il s'agit

de Aureobasidium pullulans, de Trichoderma harzianum, de Trichoderma koningii, de Rhyzopus

stolonifer et d'une espèce non identifiée codée ECLR2-91. A. pullulans représente plus de 80% de

la population, Trichoderma sp. 10 à 20% et les autres moins de 10%.

Les champignons isolés des merrains ont un cycle végétatif complet, ce qui suggère

qu'ils trouvent sur le bois l'ensemble des conditions favorables à leur developpement. Les champi-

gnons répartis à la surface, mais aussi dans les premiers millimètres du bois, libèrent dans le mi-

lieu des enzymes. Pour l'essentiel se sont des heterosidases.

ABSTRACT - After purification by sub-culturing of each morphologically different colony, only

the mushroms present in all samples were identified as being characteristic to natural air-drying

of oak-wood. Five species were kept: Aureobasidium pullulans, Trichoderma harzianum, Tricho-

derma koningii, Rhyzopus stolonifer and an unidentified species, coded as ECLR2-91. More than

80% of the total population was A. pullulans, Trichoderma sp. at 10 to 20% and the other species

at less than 1066.

Mushrooms isolated on "merrains" have a complete vegetative cycle, wich suggest that

they find all the favorable conditions on wood for their growth. Mushrooms distributed over the

surface, as well as in the first millimeters of wood, discharge enzymes into environnement. Pri-

marily, these are heterosidases.

INTRODUCTION

Le séchage du bois de chéne se pratique depuis fort longtemps. Cette techni-

que s'impose pour assurer la résistance mécanique du fût grâce à l'équilibre du taux

d'hygrométrie (Hr) relatif du bois avec le milieu ambiant. Dans le climat océanique

15% paraît un niveau satisfaisant; Pontallier et al. (1982) donne une fourchette de 14

à 18%. Dans ce contexte restreint, le séchage peut être accéléré par passage des

merrains à l'étuve pour abaisser en quelques jours l'humidité du bois (Giordano, 1987).

Source : MNHN, Paris

128 N. VIVAS et Y. GLORIES

Mais le bois séché artificiellement ne semble pas convenir A l'élevage des vins et à

leur amélioration gustative (Taransaud, 1976).

Le bois exposé à l'air libre subit, en plus d'une déshydratation progressive, un

lessivage intense, entraïnant une fraction polyphénolique et minérale hydrosolubles. La

diminution de la teneur en polyphénols contribue à abaisser les sensations d'amertume

et d'astringence (Marche & Joseph, 1972), Là encore, des essais de lessivage du bois

suivit d'un séchage à l'étuve ne reflète pas exactement l'effet d'une exposition de plu-

sieurs mois à l'extérieur. Si en proportion l'abaissement de la concentration en

polyphénols rend les impressions amers et astringentes moins agressives, en revanche,

ramenée en masse la fraction polyphénolique résiduelle demeure autant agressive. En-

fin, au cours d'un élevage en füt neuf de 12 à 18 mois les écarts en phénols totaux im-

putables aux ellagitanins restent trés limités en fonction du mode de séchage

(Pontallier, 1981) et demeurent insuffisants pour expliquer les différences révélées lors

de la dégustation.

En plus du lessivage et de la perte d'eau, l'exposition du bois au soleil et aux

amplitudes thermiques journaliéres (Athj = 10°C) et saisonnières (Aths = 15°C) en cli-

mat océanique provoque des oxydations chimiques, conduisant à la dégradation de cer-

tains composés phénoliques (Higuchi & al., 1967) et à l'insolubilisation d'autres (Peng

& aL, 1991; Vivas & Glories, 1992); l'accumulation de spores à la surface du bois

peut également intervenir, pour une part, dans la modification des caractéristiques du

bois. Marche & Joseph (1972) puis Joseph & al. (1975) ont été les premiers à

interpréter certaines modifications structurales, en particulier l'hydrolyse des

hétérosides coumariques, par l'action d'enzymes exocellulaires d'origine microbienne.

Greaves (1970) a mis en évidence la possibilité de développement de bactéries sur du

bois d'Eucalyptus et de Pinus, plus récemment Chen & Chang (1985) ont étudié la

biodégradation de la lignine. Monties (1992) envisage également une participation ac-

tive de la flore microbienne dans le processus de transformation de la lignine et des

ellagitanins.

Ainsi, devant le manque d'informations sur les mécanismes biologiques

attachés au séchage naturel nous avons entrepris une première étude sur la flore

fongique du bois de chêne dans la région bordelaise et en situation de séchage naturel.

MATÉRIELS ET MÉTHODES

1- Isolement des microorganismes

Les moisissures sont isolées:

a) à partir de sciure (60 mesh) représentant les 5 premiers millimétres du bois

de surface (la sciure est conservée à -20°C) d'un ensemble de douelles séchées natu-

rellement de 6 à 18 mois et réparties sur tous le parc à bois. Les populations fongiques

sont obtenues par sonication (2 x 5s) de 1g de sciure de surface des douelles dans 10

ml d'eau stérile.

b) à partir de frottis de la surface des bois en cours de séchage. Un coton

hydrophyle stérile balayant la surface des merrains est agité dans 10 ml d'eau stérile,

Les milieux solides sont ensemencés par Iml des eaux de macération de la

sciure. L'incubation est de 24 ou 72H à 25°C. Les souches morphologiquement

différentes sont isolées par fragmentation de portion de mycelium. Au delà de 5j de

culture la boite est entiérement recouverte par les moisissures et la sélection de sou-

ches pures devient impossible. Seuls les champignons rencontrés dans tout les iso-

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÊNE 129

lements sont conservés pour étre multipliés, cultivés et identifiés; car un bon nombre

de colonies de champignon n'est présent que sur certains échantillons. Le but du tra-

vail étant de définir la flore spécifique du séchage naturel, nous ne conservons que

quelques spécimens retrouvés de façon constante.

Les repiquages successifs, nécessaires pour purifier chaque souche repérée,

sont réalisés sur milieu solide MAG.

2- Culture et constitution de collection

* milieu de culture:

- Milieu CZAPEK-DOX:

(NH,)H,PO, 5,75 g/l

K HPO, 1,0 gil

ксі 0,5 g/l

MgSO, 0,5 g/l

Ее50, 0,005 g/l

Glucose 25 gl

Eau distillée asp 11

pH= 5; stérilisé 15min 120°C

- Milieu non proliférant (NP):

(NHj)H;PO, 5,75 gil

K, HPO, 10 gil

KCl 0,5 g/l

MgSO, 0,5 g/l

FeSO, 0,005 g/l

eau distillée qsp 11

pH= 5; stérilisé 15min 120°C

-milieu MAG:

Extrait de malte gélosé — 45 g/l

Agar 15 g/l

Glucose 25 g/l

Eau distillée qsp 11

stérilisé 15 mn à 115°C,

- Milieu bois:

Extrait de chêne à l'eau 1 g/l

Extrait de malt gélosé 30 g/l

Agar 20 g/l

Eau distillée qsp 11

pHz5; filtration stérile 0,221m.

* collection:

Les moisissures en culture sont conservées soit sur milieu bois sur gélose

inclinée, soit en boite de Pétri après sporulation sur milieu MAG, soit en milieu liqui-

de NP supplémenté par 20% de glycérol et conservé à -20°C.

3- Identification des souches

L'identification s'effectue en collaboration avec A. Labarere (INRA-Université

de Bordeaux II) et E.Gueho (institut Pasteur, Paris).

Source : MNHN Paris

130 N. VIVAS et Y. GLORIES

Les tests APITM sont pratiqués sur milieu liquide. La culture liquide

(CZAPEK-DOX) est ensemencée à partir de culture sur milieux solides MAG. Aprés

15j de culture à 20°C(+ 2°C), sur table d'agitation, la culture de mycélium est

homogénéisée à l'ultraturax (305), 10 ml sont prélevés et centrifugés (20 mn, 4500

tpm), rincés à l'eau stérile et recentrifugés. Le culot est mis en suspension dans un mi-

lieu non prolifèrant. Aprés 48H à 30*c le mélange ou le surnageant clair sont utilisés

pour les tests d'assimilation et de fermentation.

4- Dosage des macromolécules fongiques

Précipitation et dosage des polysaccharides

a) précipitation

Les polysaccharides sont précipités (24H à 4°c) à partir de 0,5 ml de milieu de

culture centrifugé (4500tpm, 20mn) pour 2,5 ml d'éthanol 95% v/v (1/5; viv). Aprés

lavage par de l'éthanol 95% à -20°c et centrifugation (4500tpm , 20mn), le précipité

est dissout dans 10ml d'eau

b) dosage des polysaccharides neutres:

Les polysaccharides neutres sont dosés par la methode au phénol sulfurique.

A 1 ml de solution à doser ont ajoute 1 ml de phénol ( solution aqueuse à

5%), 5 ml d'acide sulfurique RP. Aprés agitation immédiate, les tubes sont déposés au

bain-marie à 100°C pendant Smn, refroidis à 0°C. La densité optique est lue à 490nm

sous 1 ст.

Les valeurs sont issues d'une moyenne de trois dosages, les résultats sont

exprimés en mg/l d'équivalent glucose.

c) dosage des polysaccharides acides:

Les polysaccharides acides sont dosés par la méthode au métaphénylphénol.

A Iml de solution a doser on ajoute 5ml d'acide sulfurique RP, en opérant

dans un bain d'eau glacée. Après agitation, les tubes sont placés dans un bain-marie à

100°C pendant 3mn, refroidis à 0°C et supplémentés par 10041 de métaphénylphénol

(0,15% dans NaOH à 0,5%). Après 15mn la densité optique est mesurée 4 520nm sous

1 cm.

Les valeurs sont issus d'une moyenne de trois dosages, les résultats sont

exprimés en mg/l d'équivalent ac. galacturonique.

Dosage des protéines totale

Les protéines sont dosées par la méthode au bleu de Coomassie.

A 100 juml de milieu de culture centrifugé (4500 tpm, 20mn) on ajoute 1 ml

de bleu de Coomassie G250 [10mg bl. Coom. G250 + Sml d'EtOH 95% (v/v) + 10ml

d'acide phosphorique à 85% (p/v) + eau distillée (qsp 100 ml)]. Apres 5 mn la densité

optique est mesurée à 595 nm sous Lem

Les résultats sont exprimés en mg/l d'équivalent BSA (bovine serum albumen).

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE DU СНЕМЕ 131

RÉSULTATS

I - Isolement et identification des souches. Localisation sur le parc

à bois

Les repiquages successifs ont permis d'isoler 5 champignons dont 3

représentent 99% de la biomasse et 1 plus de 80%. Pour ce dernier nous possédons 4

souches isolées à différents moments du séchage et à différents endroits sur le parc à

bois

Planche 1 - Structure morphologique de Trichoderma harizanum (1: f= fructification; c= conidie),

de Trichoderma koningii (2) et d'Aureobasidium pullulans (3: m= mycélium; f=

fructification; ch= chlamydospores)

Source : MNHN, Paris

N. VIVAS et Y. GLORIES

Tableau I: Identification des souches de champignons isolés du bois de chêne. Tests morpholo-

giques

Table I: Identification of strains of fungi isolated on oak wood. Morphological tests.

organes decrit

Genres et espéces

reproducteur

sporocytospores:

haut (mm)

spores:

forme

diam (ит)

long (ит)

chlamydospores

conidies.

forme

diam(um)

long(um)

2.5

anguleuses

350

10-15

isses elliptique:

7-16

3,5-7

colonies 58-92 pnosa-91] | [ veEs1-91 VCFS1-91

о blanc-gris | noir vert-olive vert foncé

forme non caract. ronde irrégulières ronde

SE filamenteux | glacé poudreux poudreux

croisance

demas шев rapide moyenne rapide rapide

stolons + i

appareil

subglobulaires

2,8-3,2

2,5-2,8

ellip. ou oblongues

3,5

2-2,8

classification

division Amastigomicota | Amastigomicota| Amastigomicota| Amastigomicota

groupes Zygomycétes | Deuteromycétes| Deuteromycétes| Deuteromycétes

ordres Mucorales Hypomycétes | Hypomycétes Hypomycétes

identification

genres Rhizopus Aureobasidium | Trichoderma Trichoderma

espéces stolonifer pullulans harzianum koningii

Source : MNHN Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÉNE 133

Tableau II: Identification de Aureobasidium pullulans et de Trichoderma harzianum par des tests

physiologiques d'assimilation et de fermentation

Table II: Identification of Aureobasidium pullulans and Trichoderma harzianum by tests of assi-

milation and fermentation.

TESTS PHYSIOLOGIQUES FERMENTATION ASSIMILATION

сусв! y 4

erythritol ` `

D-arabinose s S

D-xylose , `

Loose : : d

ee E

“dual ; S E

o: mélhy-D-mannoside S 3 Е

N-acóihyi glucosaminidase ; : à

amygdaline i E i

méleziose À d à

O-rallinose ` i

Әуседеле с : E

хипо! i қ

Drees А i i

Di sa S

D-arabitol e

Learabitel e a 3

2:cêto-gluconate 5 4 `

S-céto-gluconate + :

Source : MNHN. Paris

134 N, VIVAS et Y. GLORIES

Les résultats d'identification sont rassemblés dans les tableaux I et II et la

planche 1. Nous avons identifié:

- Aureobasidium pullulans (de Bary) Arnaud;

- Trichoderma harzianum Rifai

- Trichoderma koningii Oud

- Rhizopus stolonifer (Ehrenb. ex Fr) Lindner

et isolé une souche non déterminée codée "ECLR2-91".

Les sources d'inoculation sont diverses (tableau III) puisqu'à l'exception de

ECLR l'ensemble des espèces se rencontre avec plus ou moins d'importance dans tout

l'environnement. Ainsi, au cours du séchage, les spores et les conidies se déposeront à

la surface du bois et seules les mieux adaptées pourront s'implanter et devenir majori-

taires. Le champignon ECLR peut être considéré comme une contamination car il pro-

vient exclusivement de l'écorce des arbres. R. stolonifer est également une souche dont

la présence est accidentelle dans la mesure où elle a été isolée d'un grand nombre de

substrat moisi (Botton & al., 1985) et n'est pas spécifique de la flore fongique liée au

séchage naturel.

Tableau III: Localisation des différentes sources de contamination sur le parc à bois. Isolement

à partir: d'eaux de ruissellement (a), d'écouvillonnage de la surface du bois (b), de

macération de terre fine (c) de stabulation de gélose à l'aire (d)

Table III: Localisation of the differents contamination sources on the oak-wood stock. Iso-

lements: water (a), wood area (b), soil (c), atmospher (d).

eaux écorce des billes sol atmosphère

de bois

b d |

| isolement

genres/espèces|

R. stolonifer.

A. pullulans

T. harzianum

T. koningii

"ECLR2-92"

O: absent; -: rare (< Isouche/ 10); +: présent (1 / 10); ++: fréquent (2 à 8/10);

+++: espèce dominante (>8/10)

II - Ecologie des moisissures au cours du séchage naturel

1- Succession des moisissures au cours du séchage

Sur tout le parc à bois on prélève des merrains à différents stades de séchage;

des éprouvettes de bois (5x5 cm) sont découpées et réparties en poches stériles avant

analyse. Chaque échantillon (10 éprouvettes) représente un temps de séchage différent

(0, 4, 6, 12, 18, 20 mois). Au laboratoire les éprouvettes sont lavées par 100 ml d'eau

stérile durant 2 h sur table d'agitation; puis soniquées (5x2s). Les eaux de lavage sont

utilisées pour le comptage des spores sur MAG; les éprouvettes rincées sont déposées

en boítes de Pétri et recouvertes de gélose MAG refroidie (40°C), elles serviront à

l'étude de la répartition des mycéliums sur le bois.

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÉNE 135

Après 4j d'incubation (25°C) pour les spores et 6j pour le mycélium on comp-

te:

- le nombres de colonies visibles (SFT = spores formant des thalles). Ce

critère est à employer avec précaution. Il peut donner une indication sur la pression de

l'inoculum à la surface du bois et exprime également la capacité à sporuler ou l'aptitu-

de du mycélium à se fragmenter. Chaque SFT peut englober une ou plusieurs spores.

- le % de mycélium de surface (% mycélium). Cette méthode permet de mieux

exprimer l'importance de la biomasse fongique à la surface du bois.

Tout au long du séchage naturel, le nombre de spores augmente (fig. 1a); au

delà de 12 mois le rythme d'accumulation de linoculum (spores, conidies,

chlamydospores) s'infléchit sensiblement. Dans le même temps (fig.1b) la colonisation

du bois par les moisissures est rapide et maximale en 12 mois.

a) évolution de la quantité d'inoculum et de la vitesse d'implantation des

mycéliums (fig. 1a et b)

Les conidies, les spores et les chlamydospores ne participent pas au processus

de séchage, en revanche elles seront déposées par le vent ou par les eaux de lessivage

sur les merrains verts. Les mycéliums implantés sur le bois (Trichoderma sp.) ou dans

les fibres de surface (A. pullulans) sont issus de cet inoculum indigène qui germe et

forme un thalle. Plus la pression d'inoculation est grande et plus vite le bois est recou-

vert de champignons.

L'augmentation du nombre de spores dans les premiers mois est essen-

tiellement liée à un apport du milieu environnant (vent, eau, poussiere...), mais dès que

les premiers thalles ont atteint leur maturité phénologique, le recouvrement du bois se

réalise de proche en proche. Lorsque la colonisation devient saturante (12 mois: 87%),

l'inoculum sporogène reste constant. Toute la surface est occupée par des thalles se

chevauchant plus ou moins et l'expansion des populations en place est nulle. Les

spores assureront la dispersion des souches sur du bois vert.

b) répartition des espèces en fonction de la durée du séchage (fig. 2)

D'après la classification de Jarwis (1978) A. pullulans est une espèce constante

(fréquence > 80%), Trichoderma sp. est occasionelle (fréquence 10-20%) et les autres

espèces représentant moins de 10% de la population sont accidentelles (R. stolonifer,

ECLR)

La dynamique des populations demeure relativement stable. On peut noter , en

début de séchage la présence de 3 à 4 spores d'espèces différentes, mais dès le 6ème

mois seul A. pullulans est présent. En fin de séchage la part des Trichoderma sp. s'ac-

croit. Les observations sont renouvelées pour les mycéliums implantés, avec toutefois

une présence exclusive plus rapide et plus massive d' A, pullulans. Ceci suggère qu'il

s'agit d'une espèce bien adaptée au développement sur bois et qui posséde une source

d'inoculation dans l'environnement.

L'étude de l'écologie des espèces, implantées sur le bois, révèle qu' A.

pullulans est une moisissure spécifique du séchage naturel du bois de chéne; au moins

dans le Bordelais. Les autres champignons peuvent être considérés comme des

espèces de contamination.

Source : MNHN, Paris

136 N. VIVAS et Y. GLORIES

fig. 1a

augmantation de la pression de l'inoculum

á la surface des merrains au cours du temps

1003 spores/ml

30 temps (mois)

fig. 1b :

colonisation de la surtaca des merrains

au cours du temps

100

% de bois colonnisé

9 7 7

0 10 20 30 temos (mois)

Figure 1 - Evolution du nombre de spores et de la surface des merrains colonisés par les champi-

gnons au cours du séchage naturel.

Figure 1 - Evolution of spores number and the area who colonisated by the fungus during air-

drying,

Source : MNHN, Paris

138 N. VIVAS et Y. GLORIES

2- Les phénomènes hibition

La relative homogénéité de la flore fongique et l'implantation tardive de

Trichoderma sp., sut le bois déja colonisé par A. pullulans en phase stationnaire, lais-

sent supposer qu'un certain nombre de mécanismes d'inhibition puissent agir.

Nous évaluons l'effet inhibiteur éventuel des Trichoderma sp. et de A.

pullulans sur plusieurs microorganismes fréquemment rencontrés dans l'environnement,

Les souches testées sont prélevées sur des milieux solides et déposées par stries suc-

cessives au centre de la boite (milieu solide MAG). Après 96H d'incubation à 25°C on

ajoute au milieu Iml d'une suspension de spore (Trichoderma sp.) ou de

chlamydospores (A. pullulans); aprés 8j d'incubation les résultats sont collectés:

- l'inhibition est positive (+) lorsque la souche préalablement implantée est re-

couverte par l'espèce testée et la boite est pratiquement occupée par un seul type de

microorganisme;

- l'inhibition est négative (-) lorsque l'espèce testée ne s'est pas développée:

- l'inhibition est faible (+/-) lorsque les deux mycéliums ont continué leur

développement chaqu'un dans une partie libre du milieu de culture.

Tableau IV: Inhibition de plusieurs champignons par Trichoderma sp. et Aureobasidium

pullulans. +: inhibition +/-: faible inhibition -: sans effet

Table IV: Inhibition of several fugus by Trichoderma sp. and Aureobasidium pullulans.

Espèces testées Espèces inhibitrices

Trichoderma sp. A. pullulans

Saccharomyces cerevisiae (EG8C) + +

Trichoderma sp. / +-

A. pullulans + /

Botrytis cinerea + +

A. niger + +-

Penicillium sp. + +-

R. stolonifer +l- ò.

ECLR2-91 + +l-

On constate (tableau IV) que les deux espèces (Trichoderma sp; A. pullulans

inhibent tous les microorganismes testés. On comprend donc que lorsque

Aureobasidium, après 18 à 24 mois de développement, laisse un vide écologique sur le

bois, T. harzianum et koningii puissent s'implanter.

De part leur adaptation aux milieux ligneux et leur virulence, ces champignons

ont la possibilités de coloniser la surface du bois et constituent une flore fongique

limitée et spécifique. L'antagonisme de Trichoderma sp. à l'égard de botrytis cinerea a

déja été signalé par Wood (1951). Artigues (1981) met en évidence l'existence d'une

corrélation positive entre le niveau de l'activité B (1-3) glucanase de Trichoderma sp.

et la destruction du champignon.

Source : MNHN. Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÉNE 139

III - croissance des moisissures

Afin de mesurer l'aptitude des champignons à se développer, nous testons plu-

sieurs espèces, isolées du bois, en milieu liquide (1mg de mycélium sec/ 100ml de mi-

lieu). Après 1 ou 2 mois sur table d'agitation à 20*C (+ 2*C) les cultures sont

centrifugées (4500 tpm, 30mn). Le culot est rincé 3 fois par de l'eau stérile et 3 fois

par de l'éthanol 95% v/v; chaque opération est suivie d'une centrifugation (4000 tpm,

20mn). Les mycéliums sont alors déshydratés à l'étuve (60*C), jusqu'à poids constant.

Par différence de pesée entre le tube taré vide et contenant le culot de centrifugation

sec on évalue la quantité de mycélium produit en mg/100ml de milieu ou en mg/g de

substrat carboné.

Tableau V: Croissance de plusieurs champignons du bois de chêne en milieu liquide [culture 2

mois; substrat carboné: glucose 25g/1; inoculum: 1mg/100ml],

Table V: Growth of several fugus in liquid medium.

poid de poid de | sucre résiduel mg

mycellium | тусеШішті gl mycellium

espèces souches | mg/100ml de | mg/g de par g de

milieu substrat substrat

consommé

Trichoderma:

- T. harzianum VFFS2-91

- T. koningii VCFS1-91

Aureobasidium:

- A. pullulans PNDS4-91

- A. pullulans SNDS1-91

Rhizopus:

-R. stolonifer SB-92

inconnus:

- ECLR2-91

La croissance des microorganismes en milieu glucosé est trés différente en

fonction des espèces étudiées (tableau V):

- ECLR2-91 se développe peu; d'ailleurs sur le bois ou sur des extraits de bois

gélosé sa croissance est également trés lente;

- R. stolonifer (SB-92) a une croissance trés limitée alors qu'en milieu solide,

sur du bois ou sur des extraits de bois gélosé sa croissance est très rapide: il semble

donc que le milieu liquide ne conviene pas pour sa culture;

- T. koningii (VCFS1-91) et A. pullulans (SNDS1-91) présentent une faible

capacité à se développer sur un milieu liquide; les milieux gélosés donnent le même

type de résultats;

- T. harzianum (VFFS2-91) et A. pullulans (PNDS4-91) sont les mieux adaptés

au milieu liquide, leur croissance est rapide; l'utilisation du sucre est compléte. En ou-

tre ces caractéristiques s'expriment également sur le bois et dans des milieux gélosés

d'extrait de bois.

Source : MNHN, Paris

140 N. VIVAS et Y. GLORIES

Le métabolisme glucidique (avec du glucose directement assimilable) est

déficient pour la plupart des espèces testées, mis à part T. koningii (VCFS1-91) et A.

pullulans (SNDS1-91).

Tableau VI: Incidence du substrat carboné sur la croissance de Trichoderma harzianum et

Aureobasidium pullulans (culture: Imois; inoculum: Img/100ml]

Table VI: Incidence of the substrat on growth of Trichoderma harzianum and Aureobasidium

pullulans

| mg de mycélium/100ml

substrat dose g/l | T. harz. A. pull.

glucose 25 24 34

polysaccharides 25 10 8

de bois

tanins de chêne 25 33 46 132 18,4

à l'eau

cellulose

14 9 28 18

Afin de tester l'influence de la source énergétique sur la croissance de Т.

harzianum et de A. pullulans, nous avons réalisé des cultures dans les mêmes condi-

tions en utilisant une gamme de substrats que l'on peut retrouver dans le bois de ché-

ne;

- glucose: D(+)-glucose;

- polysaccharides: extraits à partir de sciure de chêne (60 mesh) dans HCI à

0,1% (Ikg de sciure pour 5 I, agité durant 72H à température ambiante). Le liquide de

couleur bleutée est ensuite additionné d'EtOH 95% à raison de 1vol pour 9 vol

d'EtOH. Après 3 jours à -4°C le précipité formé est centrifugé (5000 tpm, 30mm),

rincé par 3 fois avec de l'EtOH 95% à -15*C et centrifugé (5000tpm, 30mn). Le culot

est repris par le minimum d'eau et lyophilisé. La poudre obtenue renferme 20% de

polysaccharides neutres. La plus grande part des polysaccharides du bois étant sous

forme combinée, nous avons dû abandonner leur purification sur pvpp car elle s'avère

peu rentable;

- cellulose: cellulose DIFCOTM;

- tanins de chêne: extraits par épuisement à l'eau de lkg de sciure (1/5, p/v)

durant 96H à température ambiante, sur table d'agitation. Les solutions brutes sont

collectées, le volume réduit au 1/2 par évaporation et l'extrait aqueux concentré est

alors purifié par demixion selon la technique de Glories (1978).

Les deux espèces étudiées (tableau VI) peuvent se développer sur tous les sub-

strats employés, on peut supposer qu'elles possèdent des activités enzymatiques

spécifiques au métabolisme des différentes sources d'osides (hétérosides, holosides). Le

rendement d'utilisation de ces composés peut être présenté par ordre décroissant du

poids de mycélium produit par g de substrat:

- A. pullulans: tanins > cellulose> glucose>> polysaccharides

- T. harzianum: cellulose>> tanin> glucose> polysaccharides

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÉNE 141

Ce classement souligne une plus grande affinité à l'égard de la cellulose pour

T. harzianum (champignon cellulolytique) et une affinité cellulose/tanins de chêne pour

A. pullulans (champignon saprophyte, lignicole). La culture de ces champignons sur

milieu de Eggins & Pugh (in Botton & al., 1985) confirme le classement établi, ainsi

que le caractère cellulolytique des Trichoderma sp. en général (Botton et al., 1988).

Ce milieu est constitué de (NH,),SO,: 0,52; L-asparagine: 0,5g; KH, PO,: 1,0g; KCl:

0,5g; MgSO 4: 0,2g; CaCl,: 0,1g; DIFCO Yeast Extract: 0,5g; Agar: 20g; cellulose:

10g; eau qsp 1000ml.

Ces champignons ne semblent pas adaptés à l'hydrolyse et à l'assimilation des

polysaccharides du bois, en revanche la croissance est améliorée si on utilise des

polysaccharides levuriens ou méme du glucane de Botrytis cinerea. Ceci est à relier à

l'existence de glucanase adaptée à la libération des oses constitutifs (Dubourdieu,

1982; Llauberes, 1988) de ces macromolécules glucidiques.

IV - Libération de macromolécules

1- autolyse de Trichoderma harzianum et de Aureobasidium pullulans

Après une phase stationnaire plus ou moins longue, les champignons entrent

en phase de déclin. Une autolyse endocellulaire progressive débute alors sous l'action

de différentes activités enzymatiques étudiées chez Saccharomyces sp. (protéase: Silva

& 21,1987; Feuillat, 1985; estérase: Chen & al., 1980; glucanase: Llauberes, 1987);

chez Pediococcus (Llauberes, 1987) et chez Botrytis cinerea (Dubourdieu, 1982).

L'étude porte sur la turbidité des cultures au cours du développement des moi-

sissures (Turbidimétre SIGRIST PHOTOMETER KTL65) en milieu liquide

CZAPEK-DOX (Img de mycélium sec/100ml) sur table d'agitation; ainsi que sur les

phénoménes de lyse dans le méme milieu suivis par mesure de la DO 210nm selon le

protocole de Garbay & Lonvaud (1991).

Tableau ҮШ: Evolution de la turbidité des milieux de cultures au cours du développement de

Trichoderma harzianum, Aureobasidium pullulans et ECLR2. [culture: milieu liquide sur

table d'agitation, inoculum: 1mg/100ml] unité: NTU

Table VII: Evolution of the culture's turbidity during the developpement of Trichoderma

harzianum and Aureobasidium pullulans.

espèces Trichoderma harzianum Aureobasidium pullulans Inconnue

souches VFFS2-91 SNDSI-91 PNDS4-91 ECLR2-91

temps en semaines:

La turbidité du milieu augmente très rapidement pour A. pullulans; en revan-

che, T. harzianum et ECLR2 opacifient peu le milieu. La turbidité est proportionnelle

au poids de mycélium produit et au-delà de 10 semaines toutes les cultures perdent un

Source : MNHN. Paris

142 N. VIVAS et Y. GLORIES

Aureobasidium pullulans

100 + DO210nm x 100

80 ECLR2-91

Trichoderma harzianum

204

04 T SH т T 1

o 20 40 60 80 100 temps (j)

Figure 3 - Autolyse des souches de moisissures isolées du bois de chêne en fonction du temps de

culture [l'autolyse est suivit par la mesure de la DO210nm]

Figure 3 - Influence of culture's time on the autolys of oak-wood fugus.

peu de trouble. Cette observation indique la fin de la croissance des champignons et le

début de leur autolyse (Garbay & Lonvaud, 1991)

La mesure de la DO 210nm montre (fig.3) que l'autolyse débute dés les pre-

miers jours de culture. Le relarguage de macromolécules absorbant dans l'UV est

limité durant les 4 premières semaines (DO210< 10) et prend une allure exponentielle

au delà de 10 semaines de culture. Il semble que la lyse de la souche codée ECLR2

soit plus précoce; ce qui est à relier avec sa faible capacité de croissance en milieu li-

quide.

Au cours du développement des moisissures, il existe un équilibre entre les

enzymes lytiques et les enzymes de construction:

- en phase de croissance: la masse cellulaire augmente et les enzymes lytiques

ont un rôle mineur;

- en phase de déclin: la masse cellulaire est constante et la lyse des tissus de-

vient prépondérante. Les champignons utilisent alors les macromolécules pariétales

comme source energétique (Dubourdieu, 1982). La lyse est déclenchée soit par la dis-

parition du substrat carboné, soit par l'absence de substrat adéquat, soit par la

toxification du milieu.

2 - Production de polysaccharides et de protéines exocellulaires au cours de la

croissance et de la lyse

Les milieux et les conditions de culture sont identiques à ceux employés pour

les expériences précédentes. Les cultures sont menées jusqu'à 3 mois et les analyses

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÊNE 143

400

300

200

100

polysaccharides neutre (mg/l èq. glucose)

glucose cellulose ellagitanins

milieux

Figure 4 - Influence du substrat carboné sur la production de polysaccharides exocellulaire par A.

pullulans après 1mois de culture. [culture: milieu liquide CZAPEK-DOX, sur table

d'agitation; inoculum: 1mg/100ml; résultats ramenés pour 25g de substrat/l]

Figure 4 - Incidence of the substrat on polysaccharid's production by Aureobasidium pullulans

after 1 month.

suivantes sont effectuées sur les surnageants obtenus après centrifugation (4500 tpm;

30mn):

- polysaccharides acides au métaphenyl-phénol (Dubourdieu, 1982);

- polysaccharides neutres au phénol sulfurique (Dubourdieu, 1982);

- les protéines totales au bleu de coomassie (Bradford, 1976).

En fin de croissance active, A. pullulans a libéré dans le milieu entre 150 et

350mg/l de polysaccharides neutres (fig. 4). Sur un milieu non agité on peut supposer

que la production de polysaccharides est plus limitée (Llauberes, 1988).

La nature de la source d'énergie influence fortement la production de

polysaccharides. On observe que plus le glucose est difficile à investir dans le

métabolisme (cellulose, ellagitanins), et plus le champignon forme de polysaccharides

exogènes. En outre, plus le substrat est pauvre en ose (ellagitanins), plus le relargage

est intense. Ainsi la production des polysaccharides semble être reliée aux difficultés

de croissance dans le milieu.

Le tableau VIII montre, d'une part, l'absence de polysaccharides acides chez

les souches étudiées, d'autre part, la faible proportion de proteïnes, sauf pour À.

pullulans (SNDS1-91), enfin, la forte production de polysaccharides neutres par

Aureobasidium sp. (lg/l) et R. stolonifer (lg/l). Les propriétés polysaccharidogénes

ФА. pullulans sont établies depuis longtemps (Bouveng & al., 1963); et sont suscepti-

bles de permettre l'inactivation de la fraction astringente des tanins du bois.

Source : MNHN, Paris

144 N. VIVAS et Y. GLORIES

Tableau VIII: Libération de protéines et de polysaccharides exocellulaires par différents champi-

gnons isolés du bois de chêne au cours de leur lyse [culture: 4mois en milieu liquide,

sur table d'agitation; inoculum: 1mg/100ml]

Table VIII: The prodution of proteines and polysaccharides by different fugus during the autolys

Polysaccharides polysaccharides Proteines totales

acides neutres mg/l eq. BSA

mg/l eq. ac. mg/l eq. glucose

galacturonique

Trichoderma koningii

(VCFS1-91) 0 198 1,5

Trichoderma harzianum

(VFFS1-91) 0 495 tr

Aureobasidium pullulans

(PNDS4-91) 0 806 tr

(SNDSI-91) 0 1375 12

Rhizopus stolonifer

(SB1-92) 0 1053 tr

Souche non identifiée

(ECLR2-91) 0 341 0,25

tr: trace; BSA: bovine serum albumine

V - Caractérisation des activités enzymatiques

L'aptitude de certaines espèces de champignons à se développer sur des mi-

lieux particuliers (cellulose, polysaccharides, tanins de chêne) suggère l'existance de

matériel enzymatique adaptatif assurant l'utilisation de la fraction osidique des

différents substrats.

Les études portent essentiellement sur A. pullulans, car il s'agit d'une souche

fréquemment rencontrée tout au long du séchage naturel

Un test préalable sur galerie API LRA, OSIDASE™ révéle un grand nombre

d'activités exocellulaires osidiques dans les 10 premières heures de culture, en milieu

non proliférant ou sur extrait de bois de chêne. En revanche, le milieu supplémenté en

glucose présente un profil enzymatique (OSIDASES) d'intensité trop faible pour être

lue. Les principales activités d' A. pullulans sont évaluées grace à des substrats pNP

(p-nitrophényl) selon la technique de Darriet & al. (1988) et s'exprime en DO

400nm/ml/12H d'incubation à 25°C. L'activité œ- amylase se mesure avec le kit

AMYLASE 3™ (SIGMA) sur 201 de prise d'essai (protocole adapté de la mesure de

l'activité c amylase dans les urines) et s'exprime en 10? unité/ml/mn.

1- mise en évidence de quelques activités osidiques chez Aureobasidium pullulans:

A. pullulans possède essentiellement une activité B-glucosidase (fig. 5), qui

peut étre inhibée par le glucose (Darriet & al., 1988). Trichoderma sp. présente un

profil enzymatique comparables. Le culot de centrifugation en condition non

proliférante ou le surnageant de culture possède également de fortes activités

B-glucosisase. Cette activitée est thermodégradable (1h à 65°C), fortement réprimée

par les tanins condensés du raisin (100mg/). A contrario, les ellagitanins n'ont pas

d'effet sur l'activité enzymatique même à des concentrations plus élevées (1g/l), Enfin

l'activité ne semble pas être inhibée par des teneurs en NaCI de l'ordre de 0,5 à 1

M.L.

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÉNE 145

activité osidase (ADO 400nm/ml/12H à 25*C)

o = гә о B a

t D-galactosidase

B D-galactosidase

œ D-glucosidase

B D-glucosidase

x D-manosidase

x L-rhamnosidase

x L-arabinosidase

Figure 5 - Estimation des activités galactosidases, glucosidases, manosidase, rhamnosidase et

arabinosidase de A. pullulans. [ activités mesurées sur les p-NP-osides corespondants]

Figure 5 - Differents osidases activities of Aureobasidium pullulans

2 - profil enzymatique total. Monographie des activités estérases et osidases

Les tests sont pratiqués sur galeries API. ZYM. LRA™, en suivant le protoco-

le établi par le fabricant. Les résultats sont regroupés dans le tableau IX

Les profils enzymatiques moyens (n — 5) présentés permettront une identifica-

tion plus aisée de ces deux champignons. Il est intéressant de remarquer que A

pullulans possède un spectre d'activité osidique et estérasique plus large que celui de

T. harzianum. On peut souligner l'activité maltose et lactose (fait peu fréquent) et

l'activité butyrate et valérate estérase d'A. pullulans.

CONCLUSION

Le séchage du bois de chéne destiné à la tonnellerie ne constitue pas seu-

lement une étape de déshydratation. La perte de l'eau excédentaire peut facilement étre

Source : MNHN, Paris

N. VIVAS et Y. GLORIES

146

asepisojÁx-9-q

3 asepisojx-q-e

Е - esepiscuew-G-q

+ + asepisouew-q-e

ae ++ esepiscioe|-Q-3

t+ +++ asepisoanj-7-q

+++ +++ азеріѕоопу- 2-4

+++ +++ asepisoanj-1-e

tee +++ asepiuiwesooni6-q-q-\A1a0e-N

+++ +++ esepruiwesoon¡6-g-e-lÁteoe-N

+ + эс219199-810 + + әзерізоеш-0-4

++ ++ aseieise-919 + - asepisorew-Q-e

+ - өѕе19159-710 + - esepisouoinoniB-Q-q

+++ +++ eselgiso-210 + - eseuoinse|26-q-q

++ + asesglse-9L0 ++. +++ aseoisconi-q-q

+++ - aseigise-69 + + T asepisoon|6-q-e

ee ++ әс19159-80 EE +++ asepisouiqeig-1-e

+ - aseigise-90 +++ +++ asepisouweys-7-e

++ - әѕ19159-50 +++ +++ asepisoejeB-q-q

+++ Е әѕе19159-0 +++ +++ esepisopeje6-q-e

suena unuEizieu. sueinjind. LINUEIZIEY

unrpisegoo;ny | euzapouau]. souanoy unipiseqoeuny | euzepouzu, sananoy

SOSEIPISO SINANIY

SOSEPISO SPUANIV

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Source : MNHN Paris

FLORE FONGIQUE DU CHÊNE 147

obtenue en étuve. Mais la qualité du bois n'est pas comparable à celle induite par un

séchage lent en conditions naturelles.

L'observation attentive de la surface du bois révèle l'existence d'une flore

fongique caractérisée par un faible nombre de genres et d'espèces. Aureobasidium

pullulans représente tout au long du séchage 80% des populations implantées sur le

bois; Trichoderma harzianum et koningii sont les principales espèces secondaires. Il est

possible de rencontrer d'autres genres beaucoup plus rares, qui ne constituent pas, pour

les parcs à bois Bordelais, une flore caractéristique.

Les moisissures se développent à la surface des merrains à la faveur d'une

pluie, et grâce à l'hygrométrie relative souvent élevée en climat océanique. Au cours

de la colonisation, les mycéliums libèrent dans le milieu des enzymes, essentiellement

des hétérosidases et des macromolécules cellulaires (polysaccharides et protéines).

L'ensemble de ces substances exocellulaire modifie profondément le profil phénolique

du bois. On note en particulier une diminution très significative des impressions

d'amertume et d'astringence.

Une question reste cependant en suspens. Il s'agit de savoir si les activités

enzymatiques extracellulaires ont pour déterminisme la détoxification du milieu ou la

recherche d'une source d'énergie. A la suite de nos travaux, il semblerait que les deux

phénomènes puissent être à l'origine de l'activité phénol-hétérosidase.

Parmi les thèmes de recherche qu'il convient de suivre, on peut signaler

particulièrement:

- L'étude de la microflore du chêne dans différentes régions d'approvision-

nement, ainsi que l'isolement des moisissures des parcs à bois situés dans plusieurs

régions Françaises et Etrangères. Ceci permettra de vérifier si nos résultats sont le re-

flet d'une flore fongique spécifique du bois de chêne ou au contraire si chaque terroir

induit une diversité de genre et d'espèce de champignons.

- L'impact de la microflore sur les composés aromatiques du bois de chêne, en

particulier les isomères de la B-methyl-y-octalactone et de l'eugénol.

- Le rôle des mécanismes oxydatifs associés aux actions fongiques, sur

l'insolubilisation de certains ellagitanins.

- L'nfluence du séchage naturel sur l'ultrastructure et la porosité du bois de

chêne. Ce dernier sujet est en cours d'étude dans nos laboratoires.

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PROTECTION DES NOMS D'USAGE COURANT:

UN AVANTAGE OU UNE MENACE POUR LE TAXONOMISTE

D.L. HAWKSWORTH

International Mycological Institute, Bakeham Lane, Egham, Surrey.

TW20 9TY, UK.

RÉSUMÉ - Des propositions conduisant à accorder, aux Noms d'Usage Courant, un statut

nomenclatural protégé, seront présentées au XVème Congrés International de Botanique, en 1993.

Cette procédure particulière permettrait la stabilité des noms par une réduction des changements

introduits pour des raisons nomenclaturales, Elle n'interdirait pas, pour autant, des changements

issus de nouvelles recherches en systématique. Conjointement à une proposition d'enregistrement

ü venir des noms nouveaux, débattue par ce même Congrès, ces actions doivent être perçues

comme bénéfiques pour les taxonomistes. Les aspects positifs seront (1) l'amélioration de la per-

ception de la taxonomie (2) l'élimination des incertitudes nomenclaturales et historiques existant

sous le présent Code et (3) l'accroissement du temps que les taxonomistes pourront consacrer à la

recherche scientifique.

ABSTRACT - Proposals to enable names in current use to be granted nomenclaturally protected

status are to be presented to the Fifteenth International Botanical Congress in 1993. Such a proce-

dure has the potential to promote stability by reducing changes due to nomenclatural reasons,

while not inhibiting changes which reflect the results of new systematic research, Taken in con-

junction with a proposal to register newly proposed names, to be considered by the same Con-

gress, these moves are to be perceived as a benefit not a threat to working taxonomists, Benefits

will result from: (1) improving the perception of the subject; (2) eliminating nomenclatural and

historical uncertainties which exist under the present Code; and (3) increasing the time taxonom-

ists have for scientific research.

INTRODUCTION

Les principes qui régissent les noms scientifiques des organismes vivants, cou-

verts par le Code International de Nomenclature Botanique, ont fait l'objet d'impor-

tantes modifications depuis leur premier établissement par De Candolle, en 1867. Les

motifs de ces changements visaient à établir un document susceptible de fournir des

réponses claires et précises à toutes les situations envisageables. Hélas, plus d'un siècle

plus tard, les botanistes n'ont pas encore réussi à produire un ensemble stable de

règles. L'insatisfaction des taxonomistes est prouvée par les 349 demandes de modifi-

cations du Code, déposées lors du Congrés de Botanique de 1987 (Greuter & McNeill,

1987) et les propositions successives de nouveaux Codes ou Systèmes (e.g. Heppell,

1990; Parkinson, 1990; de Smet, 1991).

L'alternative à laquelle sont confrontés actuellement les taxonomistes est, soit

de laisser la situation présente dériver et les difficultés s'accumuler, soit de s'attaquer

au problème et de proposer des solutions fondamentales. Dans cette perspective, un

Source: MNHN. Paris

150 D.L. HAWKSWORTH

symposium international a été organisé à Kew, en février 1991, sur le thème

“Amélioration de la Stabilité des Noms : Besoins et Options", afin de traiter des

problèmes de base de la nomenclature et de constituer un Comité Spécial pour l'étude

des propositions de modifications du Code (Hawksworth, 1991).

Des modifications fondamentales dans les habitudes d'une profession en vi-

gueur depuis plus d'un siècle, doivent être abordées avec précaution et minutieusement

examinées avec un esprit critique, avant d'envisager leur adoption. Dans cet exposé, je

voudrais indiquer pourquoi les taxonomistes devraient interpréter les propositions ac-

tuelles de la préparation des listes de Noms d'Usage Courant (et de leur accorder un

statut particulier de protection) comme un avantage plutôt qu'une menace. Les aspects

positifs de cette proposition sont les suivants : (1) amélioration de la reconnaissance de

la taxonomie; (2) élimination des incertitudes d'origine historique ou nomenclaturale

fréquentes sous le présent Code; et (3) possibilité pour les chercheurs de consacrer da-

vantage de temps à la systématique pure.

AMÉLIORATION DE LA PERCEPTION DE LA TAXONOMIE

Si l'on considère les progrès de la systématique et ses problèmes, un des prin-

cipaux challenges est sa perception par les autres scientifiques (Hawksworth & Bisby,

1988). En général, les taxonomistes sont perçus comme étant des chercheurs travaillant

sur des spécimens inanimés, conservés depuis fort longtemps, et des lecteurs d'ou-

vrages et de périodiques ne présentant d'intérét que pour les bouquinistes. C'est une

image inadaptée à la fois au monde vivant qui les concerne et aux palpitantes

découvertes scientifiques contemporaines. De plus, la profession est perçue comme

n'ayant pas réussi à produire une méthode assez stable d'appellation des organismes vi-

vants. Des titres tels que "L'instabilité taxonomique continue à irriter" (Crisp & Fogg,

1988), "Arréter les Taxonomistes" (Barnett, 1988), et "Une Rose par tout autre Nom"

(Rossmore, 1988), illustrent ce problème. En effet, les utilisateurs font rarement la

différence entre nomenclature et taxonomie, de sorte qu'un système inadéquat de no-

menclature porte inévitablement ombrage à l'ensemble de la taxonomie en tant que

science.

Le résultat de cette fausse image aboutit au fait que les taxonomistes se trou-

vent de plus en plus ignorés. Pour preuve de cette situation, la lenteur avec laquelle les

changements introduits pour certains noms sont pris en considération par les cher-

cheurs. Cette desaffection est manifeste dans la prise en compte des changements de

noms pour des champignons d'importance génétique, industrielle ou médicale, dans la

banque de données BIOSIS (Hawksworth, 1991) : après vingt ans, seules 14% des 159

citations de Cephalosporium acremonium ont une nomenclature correcte: Acremoniuni

strictum, pour Podospora anserina, seules 2 des 265 références citent le nom correct et

dans le cas d'Aspergillus nidulans, aucune mention du nom introduit (Aspergillus

nidulellus) n'apparaît dans les 546 articles analysés. Si l'on considère les changements

de noms survenus au cours des cinquante dernières années dans des genres importants

tels que Penicillium, cette situation n'a rien de surprenant: 53 % des noms récemment

acceptés dans ce genre ne sont pas répercutés dans les récentes monographies des

Penicillium (Hawksworth, 1990).

Une tendance particulièrement inquiétante est l'actuelle production de listes de

références de noms par des non-taxonomistes, en particulier par des spécialistes de

l'information. Citons comme exemple, l'édition par Derwent Publications en 1990, d'un

thesaurus de près de 17 000 noms scientifiques d'organismes vivants importants en

agriculture, avec des renvois pour presque 80 000 synonymes ou noms communs.

Source : MNHN, Paris

NOMS D'USAGE COURANT 151

Afin de corriger la marginalisation croissante de leur discipline, les chercheurs

se doivent de montrer qu'ils sont à l'écoute des exigences des utilisateurs des noms

scientifiques; ils doivent être également capables de fournir, à partir d'informations

scientifiques générées par la profession, des produits utilisables de nos jours (Bisby,

1984). Même si les changements de noms introduits pour des raisons taxonomiques

continuent d'irriter les utilisateurs, il existe un espoir de remédier à cette situation. Il

consiste à adopter une attitude conduisant le monde scientifique à réaliser petit à petit

que ces changements résultent non point d'études bibliographiques obscures, mais

d'une progression des recherches taxonomiques et que les progrès ainsi réalisés en no-

menclature visent à consolider la position taxonomique des organismes. Etre perçu à

l'échelle internationale comme entreprenant une action positive concertée pour

remédier à l'instabilité des noms, demeure une étape-clé dans l'amélioration de la per-

ception de la profession par les autres disciplines.

ÉLIMINATION DES INCERTITUDES NOMENCLATURALES ET

HISTORIQUES

Un problème majeur pour le taxonomiste contemporain réside dans les incerti-

tudes nomenclaturales et historiques qui existent dans l'application du code actuel.

Ces incertitudes sont liées aux questions de priorités, de publications reconnues et vali-

des, d'illégitimités, de typifications, d'organismes appartenant à deux règnes et du pro-

cessus de prise de décision.

Priorité: Le principe de la priorité de publication dans la sélection d'un nom

correct est une lourde charge pour le taxonomiste. Dans le système actuel, on n'est ja-

mais sûr que tous les noms en rapport avec un organisme quelconque aient été repérés.

Ride (1991a) a comparé la recherche des noms antérieurs à celle des "water-babies";

l'ouvrage classique de Kingsley de 1863 stipule que personne n'a le droit d'affirmer

que les "water-babies" existent, jusqu'à ce que leur réalité ne soit prouvée.... une si-

tuation que personne n'a encore jamais réalisée et qui ne se réalisera jamais peut-être.

Malgré les efforts considérables déjà entrepris par les divers centres d'in-

dexation pour repertorier les noms antérieurement proposés, quelques travaux datant

parfois du 18ème siècle, sont encore "découverts". Par ailleurs, un grand nombre de

noms répartis dans des familles ou des genres inappropriés sont "perdus" pour les

taxonomistes. Parfois aussi certaines descriptions sont trompeuses. Comme l'a souligné

Cain en 1959, le système actuel dirige continuellement vers la source bibliographique

la plus ancienne, souvent la moins explicite. Tout en étant d'accord avec Korf (1991)

pour ne pas négliger l'acquis du passé, il s'avère que dans d'autres sciences, la

résurgence de "découvertes" antérieures ne conduit pas nécessairement à un chan-

gement de noms actuels. Ainsi, en Chimie, le système IUPAC a remplacé les noms

antérieurs des substances chimiques (Anon., 1958). Dans l'attribution des noms les bio-

logistes devraient s'efforcer de privilégier le vivant, plutôt que l'inerte (Ride, 1991b),

évitant ainsi de condamner leurs successeurs à une contrainte paralysante.

Publications reconnues et valides: Les codes de Botanique et de Zoologie

doivent aussi considérer les problèmes suscités par la généralisation de systèmes infor-

matiques. La facilité et les coüts réduits de la publication de taxons nouveaux par ces

systèmes, doit être associée à une diffusion optimale de l'information. Les centres d'in-

dexation ne peuvent généralement pas être assurés d'une bonne conformité des études

qui leur parviennent. De plus, l'acroissement continu du nombre de publications com-

portant des taxons nouveaux, rend très difficile la localisation de ces derniers. Il s'en

suit des retards de plusieurs années avant que ces nouveaux noms soient indexés et

Source : MNHN. Paris

152 D.L. HAWKSWORTH

diffusés auprès de la communauté des taxonomistes. Même quand un texte a été

localisé, des incertitudes pour la validation des noms peuvent rester, telles que la date

effective de publication, la conformité de la diagnose, ou la qualité des références

citées. Il en résulte que la responsabilité des compilateurs tels que ceux de l'Index

Kewensis et de l'Index of Fungi est considérable (Kirk & Cannon, 1991).

Ce problème de publications reconnues est à l'étude par le Comité Spécial

d'Enregistrement, créé en 1987. Les propositions actuellement formulées (Hawksworth,

1991) introduisent une exigence supplémentaire pour que la publication d'un binome

soit valide, en l'occurence un "acte d'enregistrement". Les éditeurs et (ou) les auteurs

seraient chargés d'adresser une copie des publications, en soulignant le binome à enre-

gistrer, à des centres régionaux ou nationaux, à définir par l'Association Internationale

de la Taxonomie des Plantes. La date de publication serait alors la date de réception

des copies par ces centres, qui s'engageraient à les transmettre ensuite aux compi-

lateurs des index. Ce mécanisme ne comporte aucun élément de censure ni ne requiert

de journal particulier, tel que la Revue Internationale de Systématique Bactériologique,

une exigence de validité de publication, inscrite dans le code de Bactériologie.

Tllégitimité: Le concept d'illigitimité et, en particulier, de celui des noms su-

perflus, demeure problématique dans le Code de Botanique. Les premiers botanistes

n'avaient guère prévu l'existence d'un Code. En conséquence, ils ne se sentaient pas

obligés de prendre en considération les noms antérieurement proposés qu'ils citaient

simplement comme des synonymes ou omettaient de les répertorier. Fouiller dans la

littérature nomenclaturale ancienne révèle fréquemment des cas d'illégitimité, surtout

chez les Cryptogames. Néanmoins, ces cas sont sujets à caution, l'intention de l'auteur

n'étant pas toujours explicite. Par exemple, un nom n'a-t-il pas été utilisé en raison

d'un doute sur une similitude avec l'espèce étudiée? Des situations incertaines peuvent

donc en résulter, comme le souligne le cas du Lichen vulgatum Ach. (Hawksworth,

1992).

Typification: La nécessité de typifier un nom n'a été complètement admise

dans le Code de Botanique qu'après 1924 (Perry, 1991); elle n'est devenue une exi-

gence pour une publication valide qu'à partir de 1958. La désignation de néotypes exi-

ge une connaissance approfondie de la taxonomie du groupe mais aussi des techniques

de travail, de collection, de publication et des manuscrits afférents à chaque auteur.

Des interrogations entourent le sens accordé dans le passé, aux mots "types" ou

"examplar", les raisons du choix des types et si le type choisi était le plus conforme à

la diagnose. En l'absence d'holotype, la détermination d'un néotype est sujette à contro-

verse et à réinterprétations.

La découverte que le type ne représente pas l'espèce pour laquelle le binome

est appliqué demeure la raison principale des changements de noms. Depuis 1981 un

système a été érigé pour remédier à cette situation, pour des taxons économiquement

importants. Néanmoins, le procédé par lequel certains noms ont été rejetés en applica-

tion de ce système (versions antérieures de l'article 69 et de l'article 70, supprimé en

1975), sont encore en attente d'une décision légale définitive. Jusqu'en 1987, il y eut

un long débat sur la typification des noms de genres fondés sur une espèce-type, telle

qu'on la conçoit actuellement, par oppostion aux caractéristiques du matériel original

de l'espèce-type en question. Alors que cette dernière interprétation est actuellement

admise, il reste des cas antérieurs nécessitant des changements de noms ou, au contrai-

re, leur conservation. Une menace insidieuse pour la stabilité des noms, mais hélas

conforme au code actuel, est la résurgence par la néotypification, de noms antérieurs

non typifiés et longtemps inutilisés.

Source : MNHN, Paris

NOMS D'USAGE COURANT 153

Organismes classés dans deux règnes: L'évolution des concepts de règnes

peut avoir des conséquences nomenclaturales pour un organisme mal classé. D'autre

part, les exigences de publication valide, variables selon les règnes, sont source d'in-

certitude nomenclaturale. Ceci peut également survenir à l'intérieur d'un même Code et

quelquefois aussi entre les différents Codes. Ces problèmes, rarement considérés, pour-

raient concerner environ 120 000 espèces (Patterson & Larsen, 1991).

Procédures de prise de décision: La complexité de la procédure de chan-

gement d'un nom dans le Code Botanique et l'application des dispositions de conser-

vation ou de rejet est un processus ingrat décourageant les taxonomistes; en particulier,

une décision définitive sur la conservation ou le rejet nécessite un temps souvent long.

Certains cas peuvent demeurer à l'étude pendant 12 ans et la probalilité qu'une

décision soit prise sur la période de quatre ans, entre deux congrès, est faible. Les

taxonomistes achevant des recherches doivent donc, soit retarder la publication afin d'y

insérer le résultat des propositions, soit devancer le vote du Comité. La réalité est que

des changements sont effectués de manière irresponsable, sans exploiter les voies de la

conservation des noms. Dans des cas ou des noms bien connus sont en cause, des

taxonomistes font parfois des propositions officielles et même si leur démarche est

couronnée de succès 3 à 6 ans plus tard; l'instabilité et la confusion règnent entre

temps. En général, les taxonomistes sont plus enclins à changer qu'à sauvegarder les

noms.

Listes de noms protégés: Les propositions qui seront soumises au prochain

Congrès International de Botanique (Hawksworth, 1991; Greuter, 1991), permettraient

de résoudre, sans équivoque, la plupart des incertitudes précédemment citées. Ces pro-

positions sont fondées sur des expériences acquises à partir des deux listes de noms

ayant un statut nomenclatural protégé, déjà inscrit dans le Code: (1) la liste des noms

conservés des familles de bryophytes et de spermatophytes, protégés en raison du fait

qu'ils étaient déjà couramment employés quand la liste a été établie et (2) la liste des

noms sanctionnés de champignons, acceptés dans les ouvrages fixant les précédentes

dates de départ de la nomenclature; ces noms ont priorité sur leurs homonymes et sy-

nonymes; près de 400 épithètes sont ainsi sanctionnées (Gams, 1984). Contrairement

au statut des noms "conservés", les noms "sanctionnés" sont protégés contre tout autre

nom concurrent éventuel.

La décision de produire des liste de Noms d'Usage Courant, puis de tenter de

les protéger contre des changements nomenclaturaux (mais non taxonomiques)

ultérieurs, a été prise lors d'une réunion tenue en avril 1988, à l'International

Mycological Institute (Hawksworth, 1988; Hawksworth & Greuter, 1989), Le Comité

Général de Nomenclature Botanique a, par la suite, désigné un Comité Spécial pour

poursuivre ce projet. Un large débat des possibilités inhérentes à cette proposition a

été tenu lors d'un symposium international à Kew en février 1991 (Hawksworth,

1991). Les propositions de modification du Code, afin d'intéger ces listes, y ont été

préparées (Hawksworth, 1991; Greuter, 1991). Des listes préparatoires de près de

360500 Noms Génériques d'Usage Courant ont été établies par des centres d'expertise.

Ces listes sont actuellement disponibles sans frais, pour analyse, auprès de l'Asso-

ciation Internationale de la Taxonomie des Plantes. Les listes revisées seront ensuite

publiées avant la tenue du Congrés de Botanique de 1993.

Les propositions concernant ces listes traitent des incertitudes actuellement

causes de situations confuses en taxonomie. Un nom protégé (nomen protectum) serait:

(a) traité comme étant conservé de préférence à des homonymes antérieurs et à des sy-

nonymes compétitifs non repertoriés (b) accepté comme étant validement publié dans

le document et à la date cités (c) dans le cas oü le type serait mentionné, il serait traité

Source : MNHN Paris

154 D.L. HAWKSWORTH

comme étant conservé (d) dans le cas où le genre grammatical et l'orthographe seraient

adoptés, le nom serait égalemement conservé. Il y a lieu de souligner que des noms

absents de ces listes peuvent encore être utilisés, à condition qu'ils n'entrent pas en

compétition avec un nom déjà repertorié; de plus, les règles usuelles de priorité, de

sanction et de conservation seraient applicables à des noms compétitifs repertoriés; en-

fin, les listes contiendraient aussi des noms pour des révisions taxonomiques. Ces do-

cuments ne visent donc pas à limiter les progrès de la taxonomie et ne doivent pas être

confondus avec les Listes Standard, préparées pour des objectifs particuliers, par diver-

ses institutions (Hawksworth, 1992). D'ailleurs, les critères d'inclusion ou d'exclusion

d'un nom seront consignés dans les rapports des comités concernés (Hawksworth,

1991).

Si ces propositions sont acceptées, les taxonomistes ne seront plus condamnés

a continuellement chercher les"water- babies" et auront moins de difficulté à surmonter

les problémes de taxonomie. L'objectif principal de cette approche est la protection des

noms actuellement utilisés contre d'autres, non répertoriés, de statut incertain, mis en

synonymie depuis longtemps, ou encore inconnus; ceci revient à éliminer du système

en cours une bonne partie du "bruit de fond". Soulignons enfin que Linné élimina de

manière autocratique plusieurs problèmes présents dans la quantité des noms

accumulés à la moitié du dix-huitième siècle. Plus de 200 ans plus tard, l'époque est

peut-être mûre pour un autre "nettoyage de printemps", mais, dans ce cas, par un

procédé ouvert et démocratique.

On peut supposer que ces propositions seront adoptées en 1993 et qu'un

Comité Spécial sera chargé de formuler les moyens permettant un élargissement de ces

listes par introduction: (1) des noms plus anciens non répertoriés répondant aux

critères définis et (2) des noms ultérieurement proposés et qui pourront jouir du même

Statut après une période d'attente. Cet élargissement pourra se réaliser par le biais des

publications émanant des centres d'indexation, par simple enregistrement de noms à

réintroduire; quant aux nouveaux noms proposés, ils seront automatiqument inclus.

Augmentation du temps pour des recherches en systématique: De nos

jours, les taxonomistes sont soumis à d'énormes pressions. À une époque où se

développent d'importantes initiatives d'inventaire de la biodiversité mondiale, la pyra-

mide des âges de ces professionnels correspond à celle d'une espèce en voie d'extinc-

tion (Claridge & Ingrouille, 1992). De plus, les taxonomistes contemporains doivent

assimiler des données provenant d'un grand nombre de domaines - en particulier la

biochimie et la biologie moléculaire - et soumettre ces données à des analyses

phylogénétiques. Le facteur temps devient donc un élément primordial et doit être

utilisé avec un maximum d'efficacité.

En vue d'apprécier le temps que les taxonomistes consacrent aux problèmes de

nomenclature, un questionnaire a été adressé à 80 botanistes spécialisés travaillant au

Royaume-Uni (Hawksworth, 1992). Les valeurs fournies dans les soixante réponses

reçues oscillent entre 1 et 75 %, avec une moyenne voisine de 20%. Plus significatif,

32 de ces 60 botanistes consacrent moins de 10% du total de leur temps de travail à

des problèmes de nomenclature et 28 y passent au moins une demi-journée par semai-

ne. Si cette situation est extrapolée à l'ensemble des botanistes taxonomistes britanni-

ques, ceci équivaut à 52 emplois à plein temps, actuellement en situation précaires

pour des raisons économiques. Même si cette estimation est surévaluée à 50%, en rai-

son des charges ne relevant pas strictement de la recherche, la situation reste grave, en

l'état actuel du manque de taxonomistes, en particulier si on l'extrapole au niveau mon-

dial.

Source : MNHN, Paris

NOMS D'USAGE COURANT 155

Une évaluation supplémentaire de l'effort nomenclatural fourni par les

taxonomistes, apparaît dans le nombre de noms vérifiés lors de révisions génériques.

Une analyse des monographies de 15 genres de champignons, publiées durant c

vingt dernières années, a révélé que pour les 711 épithètes spécifiques acceptés, il a

fallu verifier les références bibliographiques et la nomenclature de 4657 binomes et

également, examiner les types respectifs quand ils pouvaient être localisés

(Hawksworth, 1992). TI en résulte que 85 % de cette activité a été consacrée à des

noms rejetés. Un autre point particulièrement inquiétant est le fait que les futurs

réalisateurs de monographies se sentiront obligés de revérifier une bonne partie de ce

"marais"; inévitablement, ils trouveront des raisons valables pour changer certaines

décisions de leurs prédécesseurs.

Comme l'a souligné Ride (1991b), nous avons besoin d'un système

nomenclatural faisant justice au vivant plutôt qu'à l'inerte. Quand le système

nomenclatural bactériologique était en révision, Cowan (1970:145) a noté que" beau-

coup d'attention a été accordée à la nomenclature et trop peu aux bactéries elles-

mêmes". L'expérience récente des bactériologistes qui possédaient déjà des "Listes

Approuvées" en vigueur depuis 1980, suggère que les spécialistes des autres groupes

d'organismes peuvent espérer à l'avenir accorder plus d'énergie à la recherche en

systématique.

Accéder à une plus grande liberté d'action pour relever les défis scientifiques

de la profession, plutôt que de consacrer du temps à des exercices nomenclaturaux im-

productifs, est une des perspectives les plus excitantes du changement découlant de la

procédure nomenclaturale proposée. De plus, les chercheurs auront plus de temps

pour satisfaire la demande des utilisateurs de taxonomie (Hawksworth & Bisby, 1988),

en particulier la rédaction de manuels demandés pour l'inventaire et le contrôle de la

biodiversité. Avec la perspective de la disparition de 1,2 million d'espèces, soit le

quart de la diversité biologique sur la terre, dans les vingt-cinq prochaines années

(Raven, 1988), la nécessité de concentrer les efforts pour achever cet inventaire de-

vient aiguë et limitée dans le temps.

UN AVANTAGE OU UNE MENACE ?

Dans cette contribution, je me suis efforcé d'expliquer pourquoi la proposition

actuelle d'instituer des Listes de Noms d'Usage Courant avec un statut de protection

nomenclaturale, devrait être accueillie avec enthousiasme par les taxonomistes. Nous

ne devons pas ignorer l'amélioration de la perception de cette discipline, l'élimination

des incertitudes nomenclaturales et historiques existant sous le Code actuel et l'accrois-

sement du temps disponible pour des recherches scientifiques. Les personnes

interéssées par les aspects bibliographiques et historiques de la taxonomie devraient

aussi bien accueillir ces propositions. La littérature ancienne ne sera pas rejetée. Les

bibliophiles et les historiens auront la possibilité de poursuivre avec rigueur leurs in-

vestigations, sans la crainte de bouleverser la nomenclature courante. Ces études au-

ront la possibilité de devenir de plus en plus reconnues par leurs pairs, comme du sa-

voir, plutôt qu'une activité nuisible visant à déstabiliser des noms familiers.

Le XXIème siècle a été prévu comme étant l'Age de la Biologie” (Naisbitt &

Aburdene, 1990). Il serait malheureux que les systématiciens ne soient pas préts à

adapter leurs pratiques de travail et à saisir une opportunité qui apparemment ne se re-

produira pas (Heywood, 1980). Une action concertée est nécessaire; pour cette raison

les institutions et les individus abilités à voter au Congrés Botanique International de

Source : MNHN, Paris

156 D.L. HAWKSWORTH

Tokyo en 1993, doivent s'assurer que leurs votes seront utilisés pour faire avancer leur

discipline, plutôt que de la laisser glisser sur sa pente actuelle de marginalisation.

REMERCIEMENTS

Je remercie M. J. MOUCHACCA de m'avoir donné l'occasion de présenter cette

conférence devant la Société Française de Systématique au Muséum National d'Histoire Naturelle,

à Paris, le 22 avril 1992 et également pour la traduction de ce texte.

BIBLIOGRAPHIE

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NOMS D'USAGE COURANT 157

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Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1993, 14 (2): 159-162 159

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

MOSER M. & JÚLICH W., unter Mitarbeit von FURRER-ZIOGAS С., 1992 -

Farbatlas des Basidiomyceten. Colour Atlas of Basidiomycetes, 10. Stuttgart,

Gustav Fischer Verlag, 16 diagnoses, 56 pl. phot. col. ISBN 3-437-30720-7.

ISSN 0177-9508.

La dixième livraison de l'Atlas en couleurs des Basidiomycètes qui est publié

depuis 1985, est désormais disponible. Toujours avec la même présentation et en qua-

tre langues, elle donne les fiches descriptives des genres Lentinus, Phyllotopsis,

Pleurotus, Gyrodon, Omphalotus, Paxillus, Chrysomphalina, Clitocybe, Conocybe,

Dermoloma, Hemimycena, Lepista, Marasmiellus, Melanoleuca, Micromphale et

Mycenella. Dans la partie iconographique, les basidiocarpes de diverses espèces ap-

partenant à ces genres sont photographiés. Malheureusement, la reproduction n'en est

pas vraiment excellente et les fonds bleus ou violacés apparaissent souvent trop

foncés.

J. Perreau

SINGLETON L.L., MIHAIL J.D. and C.M. RUSH, 1992 - Methods for research on

soilborne phytopathogenic fungi. American Phytopathological Society. St Paul,

Minnesota, USA. 261 pages

Cet ouvrage est une compilation expérimentale et bibliographique des

méthodes contemporaines les plus performantes pour l'étude des champignons

pathogènes du sol. Il est subdivisé en trois parties de un ou plusieurs chapitres rédigés

par les auteurs spécialisés en la matière.

En premier lieu sont traitées les méthodes biochimiques, génétiques et

moléculaires pour l'identification et la détection des pathogènes telluriques (tests de

comptabilité, profils de protéines, isoenzymes, sérologie et kits de détection, RFLP,

sondes nucléiques, etc.) brièvement synthétisées et renvoyant à une intéressante bi-

bliographie (plus de 150 références),

La deuxième section constitue le corps de l'ouvrage. Les principaux champi-

gnons pathogènes telluriques y sont exposés par genres regroupés par classes. Pour

chacun d'eux on trouve, sous le titre "identification" la nomenclature et la synonymie

générique et intragénérique, les méthodes de sporulation et les principales références

taxonomiques. Viennent ensuite la répartition géographique et les hôtes, les techni-

ques d'isolement, de culture et de conservation, et de production d'inoculum, les tests

de pathogénicité et la bibliographie afférente à ces divers aspects. Une trentaine de

genres sont ainsi traités parmi lesquels Pythium, Phytophtora, Fusarium sont natu-

rellement très développés à côté de Ceratocystis, Cylindrocarpon, Phoma, Rhizoctonia,

etc.

La dernière partie porte sur les méthodes d'étude des pathogènes en relation

avec l'environnement tellurique et les hôtes. Y sont abordées successivement les

Propriétés physiques des sols, l'évaluation de leurs température et potentiel hydrique,

les interactions nutrition-pathologie, l'atmosphère du sol et enfin l'évaluation quantita-

live du développement des racines des plantes susceptibles d'être attaquées.

Source : MNHN. Paris

160 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

Un appendice de 16 pages regroupe une série de milieux de culture généraux

et spécifiques des genres et espèces traitées. Il ne s'agit pas d'un ouvrage de

détermination, les organismes étant supposés identifiés, mais on regrette l'absence

complète d'iconographie qui aurait efficacement complété cette somme d'informations

sur les champignons pathogènes telluriques.

A cette réserve près, le livre sera certainement un ouvrage de référence, très

Utile et apprécié dans les laboratoires de phytopathologie comme de recherche

appliquée ou fondamentale.

M.F. Roquebert

WAINWRIGHT M., 1992 - An introduction to Fungal Biotechnology. Wiley

Biotechnology Series, 202 pages, John Wiley and sons Ed. Chischester. Ce

livre d'un volume modeste (200 pages) est une revue générale des activités des

champignons, filamenteux et levures, exploitées en biotechnologie.

On peut considérer comme une gageure d'avoir, en dix chapitres d'une quinzai-

ne de pages, réussi un exposé synthétique sous une forme claire et bien illustrée. L'ou-

vrage est essentiellement destiné aux étudiants désireux d'avoir une vue générale sur la

question.

Si certaines activités (production d'antibiotiques, d'acides organiques, fermen-

tation) ont déjà été rapportées dans de nombreux ouvrages, on trouvera ici des

évocations plus originales telles que la décontamination des sols pollués, la transfor

mation des hydrocarbures, très brèves, mais donnant un intéressant aperçu de la ques-

tion. La "biotechnologie de l'environnement" aborde le traitement des effluents indus-

triels, la détoxification des pesticides, la dégradation des déchets lignocellulosiques. I!

est honnétement fait allusion aux difficultés d'extrapolation des performances obtenue:

en conditions contrólées de laboratoire, à l'exploitation in situ.

Pour clore cette énumération des activités des champignons dans la vie cou

rante, l'auteur termine par une postface où il expose les recherches actuelles sur le su

jet qui pourraient bien, dans le futur, avoir une incidence sur notre vie: nouveau

métabolites tel que la fumigaline, la mevinoline à activité antitumorale, productior

d'électricité par des levures, nouvelles détoxification.

Ce livre de synthèse donnera envie d'aller plus loin pour en savoir plus sur le

sujet. Une bibliographie succincte, à la fin de chaque chapitre, pourra sans doute aider

dans cette démarche

M.F. Roqueberi

HELMS JORGENSEN J. (Ed.), 1991 - Integrated Control of Cereal Mildews

Virulence Patterns and their Change. Proceedings of the Second European

Workshop on Integrated Control of Cereal Mildews, Riso National Laboratory

Roskilde, Denmark, 23-25 January 1990, 308 p.

En novembre 1986, un groupe de chercheurs européens, spécialistes des

Oidium, s'est réuni pour la première fois lors du Colloque "Integrated Control to

Reduce the Damage Caused by Cereal Mildews"; cette réunion scientifique a eu lieu à

Weihenstephan, Allemagne, grâce à un financement provenant de la CEE. Ce groupe

rassemblait des chercheurs européens, chargés de développer des actions collectives vi-

sant à acquérir et à échanger des informations fondamentales, indispensables pour la

mise au point de stratégies efficaces, aptes à enrayer les épidémies grandissantes

d'Oidium.

Source : MNHN. Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 161

A l'origine de cette réunion, le fait que les Oïdium des céréales demeurent une

affection phytopathogène majeure, souvent responsable de pertes considérables dans

les cultures céréalières. Cette baisse de productivité découle, en partie, des aptitudes

des champignons parasites à rapidement surmonter l'action protectrice des traitements à

base de fongicides, ou des capacités de résistance des variétés sélectionnées. Quelques

réalisations se sont concrétisées à l'issue de ce premier Colloque; en particulier, la pu-

blication d'un compendium des 600 variétés européennes d'orges avec indication des

particularités respectives de résistance. Les avancées positives générées par cette

réunion, conduisirent les interéssés à organiser un second "Colloque Européen sur le

Contrôle Intégré des Oïdium des Céréales".

| L'Oïdium est une affection céréalière importante dans une grande partie de

l'Europe. Elle est responsable d'une perte considérable en productivité des sols,

associée à une baisse sensible de la qualité des produits dérivés des cultures

céréalières. Il existe plusieurs méthodes pour contrôler cette affection. Le procédé le

plus couramment appliqué consiste à cultiver des variétés céréalières génétiquement

résistantes. C'est une mesure peu couteuse de protection des. plantes et sans danger

pour l'environnement. Son efficacité peut être extrapolée par l'application de stratégies

| raisonnables d'emploi de la résistance génétique, par exemple cultiver un mélange de

variétés résistantes ou diversifier, au hasard, ces mêmes variétés dans les champs. Ces

| mesures atténuent le caractère épidémique de la maladie; elles sont, d'autre part, à

l'origine de rendements plus ou moins stabilisés dans le temps. Cette maladie peut

alement être contrôlée par le traitement fongicide des semences, associé quelquefois

à une pulvérisation d'autres fongicides dans les champs. Dans les pratiques agricoles

usuelles, un contrôle intégré est généralement mis en oeuvre, c'est-à-dire la culture de

plusieurs variétés plus ou moins résistantes, quelquefois en mélange et, si nécessaire,

| associée à un traitement fongique.

Les champignons responsables des Oïdium se caractérisent cependant par une

nde plasticité et leurs spores sont disséminées par millions, par le vent, sur de gran-

distances, Ces micromycttes se singularisent par leurs aptitudes à développer de

nouvelles races capables d'attaquer des variétés autrefois résistantes ou d'assurer une

= croissance végétative sur des cultures traitées par des fongicides. Ces nouvelles races

j fongiques peuvent s'étendre rapidement à travers l'Europe et, de ce fait, rendent sus-

ceptibles des variétés sélectionnées pour leurs résitances et inefficaces des fongicides

réputés. En raison du fait que les mêmes gènes individuels de résistances et de trai-

‘ements chimiques sont employés sur le continent européen, le souci de remédier aux

pertes céréalières induites appelle donc à une coopération entre les scientifiques et les

producteurs européens de semences. Cette action conjointe exige un suivi de la popu-

lation fongique pour y détecter rapidement l'apparition de nouvelles races, de prévoir

les aptitudes réélles des gènes de résistance et des fongicides; elle requiert également

une communication soutenue des informations aux producteurs de semences et aux

distributeurs de produits céréaliers. Par voie de conséquence, des programmes natio-

naux de contrôle ont été initiés dans un nombre croissant de pays européens.

Lors de ce second Colloque, les diverses facettes de cette affection

phytopathogène des cultures céréalières ont été analysées en profondeur, à travers les

32 contributions présentées; celles-ci sont groupées en quatre thèmes principaux. Quin-

ze travaux concernent les populations naturelles pathogènes en Europe; ils comportent

une étude portant sur l'évolution des populations de l'Oïdium du blé en France, de

1986 à 1989, et une note sur cette même maladie aux Etats-Unis, confirmant ainsi

l'impact planétaire de cette maladie. Six articles ultérieurs analysent l'agressivité et la

sensibilité des fongicides employés, cinq autres constituent le chapitre "les marqueurs

Source : MNHN. Paris

162 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

génétiques: mélange de variétés" et, enfin, les six derniers détaillent la résistance des

hôtes.

Les informations contenues dans cet ouvrage apportent donc un éclairage

susbstantiel sur une série de sujets interconnectés, tels que la définition des gènes de

résistance des variétés céréalières et des précisions sur la répartition des taux de

résitance aux parasites et aux fongicides; on y trouve également des indications sur les

méthodes de détection de nouveaux gènes de virulence fongique et de mesure des

sensibilités aux fongicides. Certaines contributions portent sur l'amélioration des tech-

niques de contrôle et les méthodes d'étude du systèmes gène-marqueur dans les popu-

lations fongiques. Les travaux présentés aboutissent à un élargissement de nos connais:

sances sur les structures et la dynamique des populations pathogènes. Ceci devrait se

concrétiser par une meilleure coordination des systèmes nationaux de contrôle et une

progession sensible du volume des informations échangées entre eux.

Il ne fait pas de doute qu'un tel ouvrage permettra de seconder l'agriculture

européenne dans ses tentatives de production de cultures céréalières de haute qualité

au meilleur coût, avec l'emploi d'un minimum de substances agro-chimiques nuisibles

pour l'environnement.

J. Mouchacca

Commission paritaire 15-9-1981 - N° 58611 - Dépôt légal 2- trimestre 1993 - Imprimerie F. Paillart

. Sortie des presses le 30 avril 1993 - Imprimé en France

Éditeur : A.D.A.C. (Association des Amis des Cryptogames)

. Président : D. Lamy; Secrétaire : B. De Reviers

Trésorier : E. Bury: Directeur de la publication : H. Causse

\ BiBL.

MUSEUM

PARIS

Source - MNHN. Paris

- CRYPTOGAMIE

Diffusion de CRYPTOGAMIE

LE PÉRIODIQUE FRANCAIS

CONSACRÉ A LA CRYPTOGAMIE

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"par l'A.D.A.C. (Association des Amis des

Cryptogames), dont le siège est au Labo-

"raloire de Cryptogamie du Muséum Na-

tional d'Histoire Naturelle. Les cher-

cheurs de tous pays y publient leurs

travaux en français, allemand, anglais, es-

“pagnol et italien, aprés accord des

“Comités de Lecture constitués de

"spécialistes de réputation internationale.

CRYPTOGAMIE propose trois sections:

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= Cryptogamie, Mycologie

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rage: 450 exemplaires).

THE FRENCH JOURNAL

| DEVOTED TO CRYPTOGAMY

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ratoire de Cryptogamie, Muséum National

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in French, German, English, Spanish and

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Commettee that comprises experts of inter-

national renown.

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Cryptogamie, Mycologie

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Each section publishes 4 numbers a year

(printing: 450 ex.).

Europe LETT

Amérique fl Asie

Répartition des articles publiés de 1986 à 1991 selon la langue

ФА

СГ

El Francais — EB Espagnol _ IN italien

Anglais [] Allemand

Source MNHN. Paris

SOMMAIRE

LE. WRIGHT, G. MORENO and A. ALTES - e O

(Gasteromycetes, Basidiomycotina) new for Europe ....

G.I. NAUMOV, E.S. NAUMOVA, Z.M. AZBUKINA, M. KORHOLA е

GAILLARDIN - Genetic and karyotypic identification of Saccha-

romyces yeasts from far east Asia .. Së

M.P. JUGNET, G, BARRAULT, D. CARON et L. ALBERTINI -

Epidémiologie de Fusarium culmorum (W.G. Smith) Sacc. sur blé dans

le sud-ouest de la France. PR ene ees en a

conidies. ........

C.V. SUBRAMANIAN - Nusia gen. nov. £r two Ira men

from southeast Asi;

G. DIAZ y M. HONRUBIA - Respuestas de crecimiento del albardin Re

fosforada

N VIVAS 6 Y. GLORIES - nde dela Пет (іре du chêne (Quercus

зр). Caractéristiques du séchage naturel des bois destinés à la

tonnellerie ...

D.L. HAWKSWORTH - Protection des noms d'usage courant: Е

une menace pour le taxonomiste

Analyses bibliographiques

Cryptogamie, Mycol. 1993, 14 (2): 77.162.

109

117

127

149

159

MNHN. Paris