SOMMAIRE

Marcelle LE GAL (1895-1979), par P.JOLY .................... 93

G. KILBERTUS, F. MANGENOT et D. RATKE. — L'altération des bois

d'œuvre de hêtre (Fagus silvatica L.) par Fusarium solani (Mart.) Sacc.

et Verticicladiella procera Kendrick...................... Ar Oe

H.J. BOESEWINKEL. — A note on the classification of Microsphaera

mnougeotii Lév..i eh ae e e ah . 105

B. PAPIEROK et J. COREMANS-PELSENEER. Contribution à l'étude

de Conidiobolus osmodes Dreschler (Zygomycètes Entomophthora-

ceae) agent occasionnel d’Épizooties chez les Pucerons me

SE EE SEL

R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC et P. JOLY. — чайын de la

fructification du Pleurotus eryngii en culture. ................. 119

L. GERRETTSON-CORNELL. — Notes on the morphology of some

isolates of Phytophthora from Australia, ..................... 139

A. PARGUEY-LEDUC & M.C. JANEX-FAVRE. — L'appareil apical de

deux Diatrypales : étude ultrastructurale. ...,,.......,....... 155

M.J. CHARPENTIÉ & St. MARAKIS. — La mycoflore des Caroubes,

Geräten td ee A ciue dern Mg utr QUERI EAS 165

C.V. SUBRAMANIAN & C. RAJENDRAN. — Developmental morpho-

logy of Ascomycetes. VI. Thermoascus aurantiacus. ............. 175

Les manuscrits doivent étre adressés à Madame M. F. ROQUEBERT, Laboratoire de

Cryptogamie, 12 rue de Buffon, 75005 Paris:

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIE

MYCOLOGIE

TOME 1 Fascicule 2. 1980

Ancienne Revue de Mycologie. Dirigée par Roger HEIM

COMITÉ DE LECTURE

MM. BOIDIN J. (Lyon), CAILLEUX В. (Paris), Mme CHARPENTIÉ M.J. (Paris),

MM. GAMS W. (Baarn, Hollande), JOLY P. (Paris), MANGENOT F. (Nancy),

MOUCHACCA |. (Paris), Mme NICOT 4, (Paris), M. PEGLER D.N. (Kew, G.B.), Mme

PERREAU J. (Paris), Mme ROQUEBERT M.F. (Paris), M. SUTTON B.C. (Kew, G.B.)

DIRECTEUR DE LA PUBLICATION: Madame J. NICOT

ADMINISTRATION : Mme LOCQUIN-LINARD M. et M. ZAMBETTAKIS Ch

SECRÉTAIRE DE RÉDACTION: Mme M.F. ROQUEBERT. ÉDITEUR: A.D.A.C

Bibliothéque Centrale Muséum

DEAL

3 3001 00227790 2

Source : MNHN, Paris

BISLDU

jSEUM,

o i

PARIS

CRYPTOGAMIE

MYCOLOGIE

CONTENTS

(Tome I, Fasc. 2, 1980)

Marcelle LE GAL (1895-1979), by P.JOLY. «csse Кае 93

G. KILBERTUS, F. MANGENOT et D. RADTKE. — Alteration of

beech wood (Fagus silvatica) by Fusarium solani and Verticicladiella

a cb 97

H.J. BOESEWINKEL.

PA EE ee

B. PAPIEROK et J. COREMANS-PELSENEER. — Study on Conidiobolus

osmodes (Zygomycetes, о epizootic agent on

Macrosiphoniella oblonga c dese NU EU TS 1n

R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC and P. JOLY. — Fructification

variability of cultivated Pleurotus eryngii ls

L. GERRETTSON-CORNELL. — Notes on the el of some

isolates of Phytophthora from Australia. 5... nnn 139

A. PARGUEY-LEDUC & M.C. JANEX-FAVRE. — Apical apparatus of

two Diatrypales. An ultrastructural study. ...............:.::. 155

M.J. CHARPENTIÉ and St. MARAKIS. — Carob-beans mycoflora. . .... 165

C.V. SUBRAMANIAN & C. RAJENDRAN. — Developmental morpho-

logy of Ascomycetes. VI. Thermoascus aurantiacus. u... nn en. 175

Source : MNHN. Paris

Marcelle LE GAL

(1895 -1979)

Marcelle CHOQUART naquit à Amiens, le 14 février 1895. Ses études secon-

daires achevées en 1912, elle vint à Paris préparer une licence ès-Lettres qu'elle

achàve en 1915. Songeant d'abord à s'orienter vers une carriére d'enseignement,

elle part pour quelques années à New-York oà elle exerce dans une institution

privée et, en même temps, fréquente l'Université Columbia; elle y obtient le

titre de Master of Arts en 1920.

Elle revient alors en France mais ne souhaitant plus poursuivre dans cette

voie, accède sur concours à un poste de souschef de bureau au Ministère du

Commerce. Parmi ses nouveaux collègues se trouve Étienne LE GAL qu'elle

épousera en 1922.

Marcelle LE GAL abandonne peu après ses fonctions au Ministère. Elle colla-

bore aux travaux de linguistique auxquels s'adonne Étienne LE GAL et écrit

même, par amusement, quelques romans qu'elle ne prendra jamais au sérieux.

C'est seulement vers 1932 qu’elle s'oriente résolument vers la mycologie.

Très jeune, et à l'école de son père, Fernand CHOQUART qui était un bon

ste en même temps qu'un excellent dessinateur, elle s'intéresse vivement

natural

CRYPTOGAMIE MYCOLOGIE (Cryptog. mycol,) TOME 1 (1980).

Source : MNHN. Paris

94 Marcelle LE GAL

aux plantes, aux insectes et aux oiseaux, et ce goüt pour les choses de la nature

ne l'avait en réalité jamais complétement quittée lorsqu'un fait survient qui va

déterminer toute sa carrière : gourmet averti, Étienne LE GAL est pris par le

démon de la mycophagie et lentraîne cueillir des champignons dans les forêts

des alentours de Paris, Méfiante et redoutant de s'empoisonner, Marcelle LE

GAL s'adresse au Laboratoire de Cryptogamie du Muséum, d'abord pour faire

vérifier ses récoltes, puis pour apprendre à reconnaitre elle-méme les cham-

pignons.

Alors trés vite, son instinct de naturaliste ressurgit avec une vigueur nouvelle:

dès juin 1933, elle s'inscrit à la Société Mycologique de France, participe régu-

liérément à ses activités et, peu aprés, est invitée par Pierre ALLORGE à travail-

ler comme chercheur libre au Laboratoire de Cryptogamie du Muséum. Recrutée

par le Centre National de la Recherche Scientifique en 1944 comme chargée

de recherche, promue maitre de recherche en 1957, elle a réalisée toute son

ceuvre scientifique dans ce laboratoire du Muséum.

Avec l'acharnement patient et obstiné qui la caractérisait, et dont la minutie

avec laquelle elle réalisait ses dessins est le parfait reflet, Marcelle LE GAL va,

tout au long de sa carrière, centrer son activité de recherche sur le groupe des

Discomycétes.

Ne pouvant ici développer dans ses détails toute son oeuvre scientifique (1),

nous signalerons seulement, à titre d'exemple de son souci permanent d'une

observation fine et soignée, le travail sur les ornementations sporales des Discales

Operculées qui lui a permis de soutenir en 1944 sa thèse de Doctorat, travail

publié en 1947 et pour lequel l'Académie des Sciences lui attribua le Prix Mon-

tagne. La classification des Discales Operculées qu'elle propose alors, syntheti-

sant ses propres travaux avec ceux d'Émile BOUDIER et d'autres auteurs, sera

reprise sans changements notables par R.W.G. DENNIS en 1960 et en 1968 et,

si M. CHADEFAUD, en 1961, s'en écarte quelque peu, les propositions de

classification du groupe des Pezizales, faites par R. P. KORF en 1972 utiliseront

encore largement ses travaux.

Spécialiste des Discomycètes, ayant atteint une des plus hautes notoriétés

et appelée à siéger à la Commission Internationale de Nomenclature, Marcelle

LE GAL fut élue en 1954 présidente de la Société Mycologique de France,

étant la premiére femme et, jusqu'à ce jour, la seule à avoir occupé ces. fonc-

tions; de son cóté, la British Mycological Society l'a choisie comme vice-prési-

dente en 1962. Toutefois, si elle fut honorée de toute la communauté myco-

logique internationale, Marcelle LE GAL n'avait jamais été hantée par le désir

d'une carriére brillante : seul, le travail accompli avait de la valeur. C'est pour-

quoi elle s'y adonnait avec autant de rigueur, de patience et de minutie, n'hési-

tant pas, parfois, à venir chercher l'un d'entre nous et lui faire examiner une

préparation microscopique pour obtenir une confirmation de son interprétation.

(1) La liste des travaux de Marcelle LE GAL est publiée dans le Bulletin de la Société

Mycologique de France, t. 96, fase. 2 (1980).

Source - MNHN. Paris

Marcelle LE GAL. 95

Autant elle admettait volontiers l'erreur au cours des herborisations ou des

déterminations rapides, autant la crainte de l'erreur, au laboratoire, constituait

pour elle un spectre perpétuellement menagant et pouvait d'ailleurs, à l'occasion,

déclencher quelques réactions trés vives.

Il est regrettable, bien sûr, qu'elle n'ait pas formé d'élèves; elle ne l'a jamais

souhaité, préférant travailler seule. Non pas qu’elle se fut repliée sur elle-même

comme ses réactions, aisément bourrues, auraient pu le faire croire. Au contraire,

elle aimait la compagnie, accueillait toujours aimablement nos questions et se

liait facilement pour de longues conversations par ailleurs intéressantes et ins-

tructives car C'était une érudite, En réalité, je pense que la mycologie la passion-

nait et qu'il lui importait peu de passer du temps à former des élèves plutôt

qu'à l'utiliser pour son travai

Si son oeuvre fut essentiellement d'ordre morphologique, anatomique et

systématique, Marcelle LE GAL participa également à des travaux collectifs

de floristique comme en témoignent, par exemple, ses monographies régionales

sur les Discomycétes de Madagascar et de l'actuel Zaire, empreintes du méme

souci d'une étude aussi détaillée que possible de chaque matériel examiné.

Ce fut elle encore qui assura pendant longtemps le service de détermination

des champignons au Laboratoire de Cryptogamie du Muséum. Malgré ses plaintes

fréquentes sur la servitude que cela représentait, elle aimait un peu, au fond

Welle méme, ce contact avec les amateurs de champignons qui, certains lundis

matins, faisaient littéralement la queue derrière sa porte. S'ils parlaient un peu

fort, elle sortait vivement et menagait de les renvoyer, mais celui qui avait fran-

chi sa porte était accueilli très gentiment et patiemment : avec son soin habituel,

elle examinait successivement chaque échantillon en indiquant inlassablement

les principales caractéristiques à observer pour en déterminer l'espèce, s'attardait

sur un commentaire et s'assurait que son visiteur avait bien compris ses explica-

tions. Seuls, quelques-uns étaient moins bien reçus ; ceux quelle appelait les

«casseroleurs», simples mycophages qui, refusant l'effort, revenaient trop

souvent avec les mémes espéces sans les avoir reconnues.

L'expérience. qu'elle avait acquise, gräce A cette longue pratique, sur les

diverses erreurs et hésitations de ceux qui commencent à aborder la mycologie,

transparait d'ailleurs dans son ouvrage riche et original, les «Promenades myco-

logiques», publié en 1957 puis, sous une version révisée, en 1967.

Marcelle LE GAL avait entrepris une révision monographique du genre

Scutellinia qu'elle n'a malheureusement pas terminée, Lorsqu'elle prit sa retraite,

en 1960, consciente de l'énorme travail qu'il lui restait à accomplir, elle voulut

instamment étre déchargée de toutes autres tüches, en particulier du service

des déterminations, et s'y consacra entiérement. Elle y travailla encore une

douzaine d'années, accumula une somme considérable d'observations qu'elle

avait commencé à synthétiser lorsqu'en 1972, Étienne LE GAL disparut. N'ayant

pas d'enfants, ce dont elle avait toujours souffert, désorientée et sa vue commen-

kant à s'affaiblir, elle ne résista pas à cette épreuve : tout, pour elle, est soudain

devenu vain, hormis l'attente du jour où elle pourrait rejoindre dans la mort

Source -MNHN Paris.

96 Marcelle LE GAL

son compagnon d’un demi-siècle. Malgré les exhortations amicales et les tenta-

tives de réconfort, elle devait bientót se retirer définitivement à Amiens, n'em-

portant méme pas ses notes sur les Scutellinia ni la premiere rédaction partielle

de sa monographie, abandonnées dans son appartement de Paris où elle ne

revint plus. Elle décèdera à Amiens le 23 juin 1979, des suites d’une opération

de la cataracte.

Bien qu'elle ne nous ait pas livré la totalité de son oeuvre, Marcelle LE GAL

figure parmi ceux qui ont marqué d'une empreinte profonde la mycologie

du XXe siècle. Toutefois, sa personnalité était plus riche encore, Nous avons eu

l'occasion d'évoquer son érudition, fruit de ses études initiales d’une part, au

cours desquelles elle s'était particuliérement intéressée à l'histoire et à la géo-

graphie, puis de son étroite collaboration aux travaux d'Étienne LE GAL.

Mais en plus, malgré des apparences parfois un peu rudes, elle a toujours entre.

tenu au fond d'elle-même ce qui lui paraissait étre l'essentiel: sa profonde

affectivité féminine, En Marcelle LE GAL, ce n'est pas seulement la mycologue,

mais aussi l'érudite et, plus simplement, la femme dont nous déplorons la dispa.

rition.

Patrick Joly

Source : MNHN. Paris

L'ALTÉRATION DES BOIS D'OEUVRE DE HETRE

(FAGUS SILVATICA L.)

par Fusarium solani (Mart) Sacc. et Verticicladiella procera Kendrick

par G. KILBERTUS, F. MANGENOT, D. RADTKE*

RESUME, L'altération du bois de hétre par Fusarium solani et Verticicladiella procera

à été étudiée en microscopie électronique durant 4 semaines. Les mécanismes et les possi

bilités de biodégradation des hyphes sont déjà évidents après cette période. L'action de

V. procera se traduit essentiellement par une érosion de la surface interne des parois végé

tales, les passages de cellule à cellule se faisant par les ponctuations. F. solani est capable

en plus de perforer les parois et d'utiliser rapidement la couche Sp de ces dernières:

SUMMARY. Alteration of beech wood by Fusarium solani and Verticicladiella procera

was studied with electron microscopy for 4 weeks. Mechanisms for, and potentials of bio

degradation were evident even after this short incubation time, И. procera mainly eroded

the internal surface of cell walls; the hyphae passed from cell to cell by pits. F. solani was

able to perforate walls and to use the Sp layer.

INTRODUCTION

L'envahissement parfois rapide des bois d'eeuvre, par les microorganismes,

est en partie lié au manque de concurrents normalement présents dans

les conditions naturelles. La dégradation, en l'absence de chaines trophiques

et d'action conjuguée des germes, se traduit alors par des altérations plus ou

moins caractéristiques en fonction du champignon lignivore considéré et de la

nature du substrat envahi.

+ Université de Nancy 1. Centre de 2e Cycle, Laboratoire de Botanique et de Microbiologie,

Case Officielle n° 140, 54037 Nancy Cedex.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog. Mycol.) TOME 1 (1980).

Source : MNHN. Paris

98 KILBERTUS, F. MANGENOT, D. RADTKE

Ces modifications provoquées par l'action hyphale ne se traduisent pas seule-

ment par la métabolisation du tissu ligneux, mais également par une diminution

de la valeur marchande du produit, par suite de l'altération de la teinte par

exemple. C'est pourquoi il est trés important de connaftre les modalités d'at-

taque du bois par les microorganismes, en particulier au cours des tous premiers

stades, de facon à pouvoir les contróler ou les éviter par la suite.

Dans la présente étude, nous allons étudier en microscopie électronique

l’altération du bois d'œuvre de hêtre, sous l'influence de deux ascomycétes :

Fusarium solani et Verticicladiella procera.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

1) Préparation des buchettes (voir schéma a)

Les buchettes de 5cm de long sur 0,8cm de large et 0,5 cm de haut, ont

été fabriquées à partir d'une planche de hêtre (Fagus silvatica L.) provenant

de la forét d'Amance (54 France).

&.Echantillon expérimental :

T O5cm Buchette

E =

5 cm

b,Methode d'incubation : 1. Buchette

2. Milieu de culture

3. Fiole de Roux

4. Coton

Source : MNHN. Paris

L'ALTÉRATION DES BOIS D'OEUVRE DE HETRE 99

2) Incubation (voir schéma b)

Deux champignons, Fusarium solani (Mart.) Sac. et Verticicladiella procera

Kendrick, sont cultivés en fioles de Roux, sur milieu malt-gélosé (15g de malt,

15g de gélose pour un litre d'eau). Lorsque le champignon a envahi uniformé-

ment la surface du milieu, on introduit aseptiquement 5 buchettes stériles par

fiole. Les durées d'incubation, à 20"C, sont respectivement de 2 et 4 semaines.

3) Études en microscopie électronique

a) Microscopie électronique à balayage

Des cubes de 0,5 cm de côté, sont préparés à partir des buchettes attaquées.

La face transversale est affinée au microtome à congélation. Les échantillons

sont ensuite fixés au glutaraldéhyde à 2% et au permanganate de potassium

à 2%. Ils sont ensuite déshydratés à l'acétone, desséchés au point critique

puis métallisés à l'or palladium,

b) Microscopie électronique à transmission

Des écailles de buchettes, prélevées dans les parties en contact avec le mycé-

lium, sont fixées sous vide à l'OsO4 à 275 durant deux heures. Aprés inclusion

dans l'épon, les coupes fines obtenues sont contrastées au citrate de plomb

(REYNOLDS, 1963).

RÉSULTATS

Les cubes témoins montrent une face transversale A, présentant de nombreux

vaisseaux et des coupes longitudinales B avec des rayons multisériés C et uni-

series D (fig. 1). Les ponctuations lenticulaires sont également trés fréquentes

(fig. 2). Ces nombreux orifices constituent autant de points de pénétration

potentiels des mycéliums dans la mesure où les conditions climatiques ambiantes

sont favorables. Le faible diamètre de ces cavités permet en outre la persistance

de tensions élevées en eau, particulièrement propices au développement des

champignons.

1) Fusarium solani

Aprés deux semaines de contact, ce champignon a colonisé les lumiéres

cellulaires des éléments ligneux (fig. 4 et 5). Durant cette méme période, il

perfore les parois en émettant des expansions latérales au niveau de la couche

So (fig. 3). Cette image semble témoigner d'une action mécanique, avec écarte-

ment des différentes couches, Déjà en 1955, MEIER avait signalé que cette

partie $5 de la paroi des tissus ligneux des feuillus était attaquée en priorité,

la dégradation se propageant vers la lamelle moyenne.

La traversée des parois peut également se réaliser selon un processus compa-

rable à celui observable sur la figure 6. L'activité enzymatique se situe à la partie

antérieure de l'hyphe, comme le prouvent les modifications ultrastructurales

constatées à ce niveau. D'autre part le diamétre de l'hyphe, initialement compris

entre 4 et 5um, passe à lum dans la zone perforée. Des modifications sem-

Source : MNHN. Paris

100 G. KILBERTUS, F. MANGENOT, D. RADTKE

blables ont été notées par BAYLISS (1908), NUTMANN (1929) et MEIER

(1955). UNLIGIL et CHAFE (1974) (étude réalisée au cours de la dégradation

du bois de Picea glauca par une pourriture molle) et MAC DONALD et MAC

NABB (1971) (traversée des parois de Ulmus carpinifolia par Ceratocystis

ulmi) ont présenté des images comparables en microscopie électronique,

Après 4 semaines d'incubation, on peut voir des altérations particulières

(fig. 7). La surface interne de la paroi devient irrégulière et se charge plus ou

moins d'éléments sphériques denses aux électrons. Dans le cas de la fig. 7, on

peut en outre observer des cloisons typiques d'ascomycétes, le pore central

étant obturé par un corps de Woronine, Enfin, la surface de l’hyphe est fréquem-

ment recouverte par des expansions fibrillaires (fig. 8 et 9).

2) Verticicladiella procera

Comme dans le cas précédent, aprés deux semaines d'incubation, le plan

ligneux est parcouru par le mycélium, mais l'invasion est plus importante (fig. 10).

Aprés quatre semaines, on rencontre fréquemment des hyphes au contact

des ponctuations (fig. 13), principales voies de passage des hyphes d'une cellule

à l'autre. Les effets de l'attaque se traduisent par une érosion de la surface

interne de la paroi végétale (fig. 11), la partie superficielle de cette dernière

devenant souvent dense aux électrons (RADTKE, 1979). À ce stade, le cyto-

plasme du champignon est dense et les différents organites intracellulaires sont

reconnaissables. L'émission de petits granules de mélanine est également consta-

tée en surface de l'hyphe (fig. 11 et 13).

Aprés cette période d'incubation, le cytoplasme a tendance à s'éclaircir.

CONCLUSIONS

Incubées dans les mémes conditions, les deux espéces fongiques utilisées

présentent un comportement différent :

- Fusarium solani, après pénétration dans le substrat, érode activement les

surfaces internes des parois végétales, au cours du cheminement des hyphes

dans les cellules, Mais cette espèce est également capable de perforer les parois

et d'utiliser rapidement la couche S2.

- Verticicladiella procera semble se déplacer préférentiellement dans la

lumiére des cellules, les passages entre ces derniéres s'effectuant par l'intermé-

diaire des ponctuations. Son activité lytique se traduit également par une érosion

de la surface interne des parois végétales.

Tous les mécanismes et possibilités de biodégradation des hyphes sont déjà

évidents après quatre semaines d'incubation. Les essais que nous avons effectués

après huit semaines (RADTKE, 1979), n’ont fait que confirmer nos premières

observations. Les modifications ultérieures ne concernent plus que l'intensité

de la pénétration du mycélium dans le bois, les modalités d’alteration restant

les mémes.

Source - MNHN. Paris

L'ALTÉRATION DES BOIS D'OEUVRE DE HETRE 101

L’observation en microscopie électronique constitue donc une technique

relativement rapide pour mettre en évidence, non seulement le potentiel enzy-

matique des souches testées, mais également leur comportement vis-a-vis des

substances protectrices, ce qui fera l'objet de nos prochaines expériences.

Nous exprimons nos remerciements à Mr M. MORELET du Laboratoire de Pathologie

forestiére du CNRF de Champenoux, qui nous a fourni les souches fongiques.

BIBLIOGRAPHIE

BAYLISS J.S., 1908 — The biology of Polystictus versicolor Fries . J. Ec. Biol. 3 :1-24.

MAC DONALD W, et MAC NABB J.R., 1970 — Fine structural observations of the growth

of Ceratocystis ulmi in Elm xylem tissue. Bio Science 20 : 19.

MEIER H., 1955 — Uber den Zellwandabbau durch Holzvermarschungspilze und die Sub-

mikroskopischestruktur von Fichtentracheiden und Birkenholzfasern. Holz als Roh

als und Werk, Heft 9.

NUTMAN F.]. 1929 — Studies on wood-destroying Fungi. 1. Polyporus hispidus Fr.

Ann. Appl. Biol. 16 : 40-64.

RADTKE D., 1979 — Décomposition du bois de Pin et de Hétre par des champignons

lignicoles. Standardisation d'une méthode d'étude. DEA Université de Nancy I, 70 p.

REYNOLDS E.S., 1963 — The use of lead citrate at high pH as an electron optique stain

in electron microscopy. J. Cell Biol. 17 :171-191,

UNLIGIL H.H. et CHAFE S.C., 1974 — Perforation hyphae of soft rot fungi in wood of

white spruce (Picea glauca (Moench.) Voss.). Wood Science and Technology, New

York 8 : 27.32.

LÉGENDES DES PLANCHES (Les échelles sont données en Jim)

РІ. 1. — 1: Cube de hêtre montrant la face transversale A, la coupe longitudinale B, les

rayons multisériés C et unisériés D. 2: Ponctuations lenticulaires dans un vaisseau de hêtre.

3: Perforation et écartement mécanique des différentes couches de la paroi cellulaire de

hêtre par les expansions émises par I'hyphe de Fusarium solani, Incubation : 2 semaines. 4:

Mycélium de Fusarium solani dans les vaisseaux de hétre. Incubation: 2 semaines. 5: Mycé-

lium de Fusarium solani cheminant dans la lumière des cellules de hêtre. Incubation: 2 semaines.

PL. IL. — 6: Perforation d’une paroi de cellule de hétre avec amincissement de l'hyphe de

Fusarium solani, Incubation: 2 semaines. 7: Mycélium de Fusarium solani au contact d'une

paroi de cellule de hêtre, La cloison de l'hyphe avec ses corps de Woronine est caractéristi-

que des ascomycétes. Erosion de la paroi, Incubation: 4 semaines. 8: Hyphes se développant

à proximité d'une ponctuation. Apparition de substances denses aux électrons à la surface

interne de la cellule de hêtre et autour de Phyphe de Fusarium solani, Incubation: 4 semaines.

9: Hyphe de Fusarium solani contenue dans une fissure provoquée par l'écartement des

cellules de hêtre. Incubation : 4 semaines.

Pl, III, ~ 10: Hyphes de Verticicladiella procera dans la lumiére des vaisseaux et des

fibres de hétre, Incubation: 2 semaines. 11; Hyphes de Verticicladiella procera à la surface

interne de la paroi cellulaire de hêtre. Erosion de cette surface. Incubation: 2 semaines. 12:

Hyphe de Verticicladiella procera dans la lumière d’une cellule de hétre, Le cytoplasme s'est

éclairci et la paroi, dense aux électrons, libère des granules de mélanine. Incubation: 8 se-

maines. 13: Mycelium de Verticicladiella procera à proximité d’une ponctuation de bois de

hêtre, Le protoplasme est dense. Incubation : 4 semaines.

Source - MNHN. Paris

Source : MNHN, Paris

Planche II

Source - MNHN. Paris

Planche III

Source : MNHN. Paris

105

A NOTE ON THE CLASSIFICATION OF

MICROSPHAERA MOUGEOTII LÉV.

par H.J. BOESEWINKEL*

SUMMARY. — A study of the conidial state of powdery mildew of Lycium chinense in

New Zealand indicates that it cannot be classified in Microsphaera as in common practice

but that it belongs in Erysiphe. A study of the type material in Paris, which includes both

the imperfect and the perfect state, confirms that the New Zealand collection is identical

with Microsphaera mougeotii and confirms DE BARY’s statement that LEVEILLE did not

provide an adequate drawing of the perithecia. The characteristics of the perithecial appen-

dages and two-spored asci do not belong in Microsphaera but fit Erysiphe. There is no need

to create a new genus to accommodate this powdery mildew on Lycium and until further

progress has been made with the classification of Erysiphaceae this species should be called

Е. mougeotii (Lév.) de By.

RÉSUMÉ. — L'étude des stades imparfaits et parfaits du type de Microsphaera mougeotii

Lev. du Muséum National d'Histoire Naturelle, Paris, confirme que la collection néo-zélan

daise sur Lycium chinense représente le stade conidien de M. mougeotii. Cette étude con-

firme aussi l'opinion de DE BARY selon laquelle le dessin des périthèces, par LEVEILLE,

est totalement insuffisant. Les caractéristiques du stade parfait, surtout des fulcres nom-

breux et des asques bispores, font appartenir l'échantillon plutôt au genre Erysiphe qu'au

genre Microsphaera.

L'étude du stade conidien en Nouvelle-Zélande montre que sa classification habituelle

dans le genre Microsphaëra n'est pas appropriée en raison de la production de conidies

en chaînes et de la présence de suçoirs arrondis, non lobés. Cependant, ces caractéristiques

sont conformes au genre Erysiphe. Comme les deux stades, parfaits et imparfaits, appar-

tiennent au genre Erysiphe, la création récente du genre Arfhrocladiella pour l'espéce sur

Lycium est inutile. Confirmant l'opinion de DE BARY, l'auteur conserve pour cette espèce

cosmopolite, le nom de E. mougeotii (Lév.) de Ву.

* Plant Health Diagnostic Station, Mt Albert Research Centre, Private Bag, Auckland,

New Zealand.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog. Mycol.) TOME1 (1980).

Source : MNHN. Paris

106 H.J. BOESEWINKEL

INTRODUCTION

The name Microsphaera mougeotii Lév. is frequently applied to a species of

powdery mildew on Lycium barbarum L., L. europaeum L, (LÉVEILLÉ, 1851),

L. ovatum Poir., L. ruthenicum Murr. (SALMON, 1900), L. chinense Mill.

(YEN and WANG, 1973) and L, rhombifolium (BLUMER, 1933, 1967). Its

classification within Microsphaera is not justified as it is based only on the charac-

teristics of the perithecial appendages which are not at all typical of that genus.

SALMON (1900) remarked that M. mougeotii differed from all other species

of the genus Microsphaera in the densely crowded, widely branched appendages

and the possession of two-spored asci. GOLOVIN (1956) placed the fungus

in Arthrocladia and mentioned that the appendages were branched regularly

with septa at the nodes reminiscent of Penicillium or Cladophora conidiophores.

VASSILKOV (1960) considered that the appendages were articulate and so

different from Microsphaera that he proposed the new genus Arthrocladiella

with the only species A. lycii (Lasch) Vassilk. In 1963 VASSILKOV changed

the name into A. mougeotii (Lév.) Vassilk, VASSILKOV did not describe

or illustrate the conidial state or the appendages which, according to DE BARY

(1870), are more densely crowded than on the illustration by LEVEILLE in

1851. Classification of Erysiphaceae is based on the morphology of the perithe-

cia and those of M. mougeotii, which were frequently found before the time

of DE BARY, have been rare during the last 100 years (DE BARY, 1870;

BLUMER, 1967). However, DE BARY (1870) noted that this species on Ly-

cium, which he referred to as Erysiphe mougeotii, can be recognised by the

well developed mycelium, the typically unlobed appressoria and the short

cylindrical conidia, While many plants are host to several species of powdery

mildew of which the imperfect states have been confused because their charac-

teristics are not well known, it is difficult to mistake E. mougeotii which is

well characterised by the features mentioned by DE BARY.

Although Lycium can be infected also by M. diffusa Cooke & Peck (SAL-

MON, 1900) and Sphaerotheca pannosa (Wallr, ex Schlecht.) Lév. (Anonymous,

1960), their imperfect states are different, M. diffusa has lobed appressoria

and larger, singly produced conidia whereas S. pannosa has longer chains of

ovoid conidia which contain conspicuous fibrosin bodies.

RESULTS AND DISCUSSION

The imperfect conidial state on Lycium chinense in New Zealand (fig. 1)

possesses the characteristics described and illustrated by DE BARY (BOESE-

WINKEL, 1979). The dense, white, amphigenous mycelium produces numerous

unlobed, nipple-shaped, appressoria of 5-7um wide. The conidiophores of

55-125 x 7.5-12um produce conidia of a characteristic shape and size in long

or short chains. The conidia are oblong-cylindric with nearly flattened ends,

less frequently ovoid or barrel-shaped, and measure (20-) 27.5 (-38) x (10-)13.7

Source : MNHN. Paris

MICROSPHAERA MOUGEOTII 107

Fig. 1. — Conidiophore of È. mougeotii on Lycium chinense in New Zealand, x 600.

(-19)um. No conspicuous fibrosin bodies are present but occasionally granular

bodies up to lum diameter can be observed. Germ tubes are produced at the

ends, less frequently at the sides of conidia and terminate in an unlobed appres-

sorium. There have been few illustrations or descriptions of the imperfect

state since DE BARY (1870). FOEX (1925) studied 3-5 celled conidiophores

and conidial germination on L. barbarum in France. HOMMA (1937) remarked

that the numerous collections on L. chinense in Japan produced conidia in

perfect chains, according to which the fungus belonged in Erysiphe rather

than in Microsphaera. JORSTAD (1962) mentioned that on L. europaeum in

the Canarian Islands the conidia are produced in a chain and the same obser-

vation was made on L. chinense in Formosa (YEN and WANG, 1973). To

remove any doubt whether the imperfect state in New Zealand belongs to M.

mougeotii Lév. and to verify DE BARY's statement that LEVEILLE provided

an inadequate illustration, I studied the type material on L. europaeum L.

which LEVEILLE collected in 1848 in Vaugirard, France and which is held

in Paris. Furthermore | examined a range of samples from France and Germany

identified by DE BARY, MAGNUS, TULASNE, HARIOT and others. The

perithecial characteristics of the type were in good condition and not entirely

like the illustration given by LÉVEILLÉ (1851) but in agreement with the

Source : MNHN. Paris

108 H.J. BOESEWINKEL

description by DE BARY (1870) and nearly like the illustration by BLUMER

(1933) (fig. 2). The perithecia are globose with a flattened base, 100-160um

wide and 100-110um high. The outer cells of the perithecial wall are 10-15um

wide. From the upper half of the perithecia 50 or more appendages arise which

1504

Fig. 2. — A: Perithecia drawn from the type; B: after LÉVEILLÉ.

are septate at the base, hyaline, thin-walled and 1-3, rarely 4 times dichotomous-

ly branched at about half way their length. For some unexplained reason,

LEVEILLE drew only 12 appendages. Their width was found to be greater

than suggested by the illustration of BLUMER as they are 5-7.5um wide with

occasional swollen areas of 7-8.7um wide (fig. 3). The perithecia contain about

50).

B A

| 2

Fig. 3. — A: Appendages drawn from the type; B: after LEVEILLE.

Source : MNHN, Paris

MICROSPHAERA MOUGEOTII 109

12-20 asci which produce 2 ascospores. The conidial state of the type was in

good condition and possessed mycelial cells of (25-) 37-50um long with unlobed

nipple-shaped appressoria, conidiophores producing conidia in long or short

chains and characteristic cylindrical conidia of 20-35 x 10-12.5um. These

typically shaped conidiophores of the type are identical to those present in

New Zealand (fig. 1) but cannot be recognised from the illustrations by FOEX

(1925) and YEN and WANG (1973). It is obviously difficult to draw the subtle

morphological features of the imperfect state.

According to the characteristics of the perfect state the species on Lycium

apparently does not belong in the genus Microsphaera where perithecia usually

contain fewer than 12 asci, more than 2 ascospores and where the not very

numerous appendages are branched, and often typically broadened near the tip.

The characteristics of the perfect state of M. mougeotii occur, however, in the

genus Erysiphe.

Although usually only the perfect state is used in classification of powdery

mildews, tlie imperfect states of typical representatives of a genus often have

characteristics in common which may be help in identification. Lobed appres-

soria and singly produced conidia are characteristics commonly found in species

of Microspliaera (BOESEWINKEL, 1976). As the appressoria of M. mougeotii

are never lobed (DE BARY, 1870; YEN & WANG, 1973) and the conidia

often formed in long chains (YEN & WANG, 1973) it also differs in this res-

pect from species of Microsphaera but is similar to several species of Erysiphe.

According to the characteristics of both the imperfect and perfect states, pow-

dery mildew of Lycium should be placed in Erysiphe, the appropriate name

being :

Erysiphe mougeotii (Lév.) de By, Abh. Senckenb. naturf. Ges. 7: 412, 1870.

— Erysiphe lycii Lasch, Klotzsch Herb. myc. 950, 1846 (nomen nudum).

= Microsphaera mougeotii Lév., Ann. Sci. Nat., bot. 3 ser., 15: 158 and 381, 1851.

— Podosphaera mougeotii (Lév.) Quél., Champ. Jur. Vosg. 3: 106, 1875.

= Microsphaera lycii (Lasch) Sace. & Roum., Michelia 2: 310, 1881.

= Arthrocladia lycii (Lasch) Golov., Pl. crypt. 10: 310, 1956.

Arthrocladiella mougeotii (Lév.) Vassilk., Bot. mater. otd. spor. rast. 16:

112, 1963.

ACKNOWLEDGEMENTS

Thanks are due to the curator of the Muséum National d'Histoire Naturelle, Paris, for

providing the type specimen and other collections; and to the curator of the Botanischen

Museum, Berlin Dahlem, for additional samples of E. mougeotii

Source : MNHN. Paris

110 H.J. BOESEWINKEL

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Source : MNHN Paris

111

Contribution à l'étude de CONIDIOBOLUS OSMODES Dreschler

(Zygomycétes ENTOMOPHTHORACEAE) agent occasionnel

d'Epizooties chez les Pucerons (Homoptéres APHIDIDAE)

par B. PAPIEROK* et J. COREMANS-PELSENEER**

RÉSUMÉ. — L'Entomophthorale Conidiobolus osmodes a été trouvée responsable d'une

épizootie dans une population du Puceron Macrosiphoniella oblonga évoluant sur Chry-

santhéme cultivé, sous tunnel de film plastique. Une des souches de ce champignon isolées

du sol quatre mois aprés la disparition des pucerons se révèle particulièrement entomo-

pathogéne au laboratoire.

SUMMARY. — The fungus Conidiobolus osmodes (Zygomycetes Entomophthoraceae)

caused an epizootic in a population of Macrosiphoniella oblonga on chrysanthemums

in a polythene tunnel. One of the strains of this fungus isolated from the soil four months

later is pathogenic for insects in the laboratory.

Isolé à l'origine de plantes en décomposition (1954), le champignon Zygo-

mycète Conidiobolus osmodes Dreschler a été retrouvé dans le sol : échantillon

de terre du littoral de la Somme, France, échantillons de terre provenant de

champs cultivés à Milmort et Villiers-PÉvéque, Belgique (COREMANS-PELSE-

NEER, 1978).

De plus, C. osmodes a été isolé, à plusieurs reprises, d'Homoptéres Aphididae

en France, Les essais d'infection expérimentale réalisés alors sur les Aphides

Sitobion avenae F. et Myzus persicae Sulz. donnèrent une mortalité par mycose

de l'ordre de 1%, confirmant ainsi l'existence d'un pouvoir entomopathogéne

* Unité de Lutte biologique contre les Insectes, Institut Pasteur, 25 rue du Dr. Roux,

F 75724 Paris Cedex 15.

** Laboratoire de Parasitologie, Faculté de Médecine, Université libre de Bruxelles, 115,

boulevard de Waterloo, B 1000 Bruxelles.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog. mycol.) TOME 1 (1980).

Source : MNHN, Paris

112 B.PAPIEROK & J. COREMANS-PELSENEER

chez ce champignon (REMAUDIERE et al., 1976b). Par la suite des taux de

mycose allant jusqu'à 20% étaient obtenus chez les Pucerons Metopolophium

dirhodum Wlk. soumis à l'infection.

La découverte sur Chrysanthème cultivé (Chrysanthemum indicum), en

novembre 1976, d’un grand nombre d'individus de Macrosiphoniella oblonga

Mordv. (Homoptéres Aphididae) tués par C. osmodes nous a amenés à préciser

les caractéristiques de la mycose et à rechercher le champignon dans le sol

une fois l'insecte-hóte disparu.

OBSERVATIONS ET RÉSULTATS EXPÉRIMENTAUX

1. Caractéristiques de l'épizootie à Comidiobolus osmodes

Les observations ont été réalisées en 1976 à Dechy (Nord) dans une parcelle

de chrysanthèmes cultivés de 7,50m de longueur sur 4,60m de largeur. Les

plants avaient été repiqués en pleine terre début mai et, dès la fin septembre,

un film plastique avait été tendu à une hauteur de 1 m au-dessus de la parcelle

afin de protéger les plants du vent et des premières gelées. En cas de beau temps,

le film plastique était óté dans le courant de la matinée et replacé en fin d'aprés-

midi,

Au mois d'octobre, une forte pullulation de Macrosiphoniella oblonga est

constatée sur les chrysanthémes. M. oblonga étant inféodée à Artemisia vulgaris,

sa présence sur C. indicum est tout à fait exceptionnelle, d'autant plus qu'aucun

plant d'armoise n'a été observé aux alentours de la parcelle, On pourrait trouver

sur C. indicum une espéce voisine, Macrosiphoniella persequens Wlk., qui vit

normalement sur Chrysanthemum (Tanacetum) vulgare.

Le ler novembre, on remarque de nombreux cadavres de M. oblonga fixés

par le rostre, le plus souvent à la face inférieure des feuilles. Tous présentent

les caractéristiques. d'une mycose à Entomophthorale. Certains spécimens,

de couleur brun grisâtre, sont desséchés mais la majorité, d'une couleur brun

brillant et ayant conservé leur forme, semblent de mort récente. Aucun rhizoide

n'est observé,

A l'intérieur des pucerons morts, on note la présence de nombreuses spores

de résistance à paroi très épaisse avec l'épispore finement cannelée ondulée

(diamètre moyen: 26um; extrêmes : 19,2-33,6um) (fig. 1). Des corps hyphaux

sont également observés dans certains cadavres, À la surface des pucerons frat-

chement tués, placés sur de la cellulose mouillée, apparaissent au bout de quel.

ques heures des conidiophores donnant naissance à des conidies piriformes

avec une papille basale arrondie (diamètre moyen: 25um: extrêmes, 16,0-

35,2um) (fig. 2). Les souches fongiques isolées suivant la technique décrite

par REMAUDIERE et al. (19762) poussent rapidement, plissent fortement le

milieu et exhalent une odeur caractéristique. L'agent pathogène est identifié

comme étant Conidiobolus osmodes.

A la mi-novembre, la population de M. oblonga a pratiquement disparu;

Source : MNHN, Paris

CONIDIOBOLUS OSMODES 113

Fig. 1. - Spores de résistance de Conidiobolus osmodes Dreschler. = Рів. 2. - Conidies de

C. osmodes. — Fig. 3. - Chenille saine de Galleria mellonella. — Fig. 4. - Aspect de la

chenille de G. mellonella 12h après l'infection par C. osmodes

seuls subsistent les œufs pondus par les femelles ovipares épargnées par le cham

pignon. À ce propos, on peut remarquer qu'à l'intérieur des femelles ovipares

d'Aphides tuées par une Entomophthorale, les œufs ne sont pas envahis par le

mycélium,

2. Isolement de Conidiobolus osmodes à partir du sol

La méthode d'isolement d'Entomophthorales à partir d'échantillons de sol a

déjà été décrite dans le cas de Basidiobolus Eidam (COREMANS PELSENEER,

introduite : la température d’incuba

1974). Une modification a cependant

tion des boîtes de Pétri est de 16°C au lieu de 25°C. Les contróles sont effectués

4. 7,14 et 21 jours aprés l'ensemencement.

La méthode a été appliquée à plusieurs séries d'échantillons de sols prélevés

ce : MNHN. Paris

114 B.PAPIEROK & J. COREMANS-PELSENEER

à différentes reprises après la disparition des pucerons : 19 échantillons prélevés

au total en février 1977 (dont 7 à l'extérieur de la parcelle), 8 en aoüt et dé-

cembre 1977 ainsi qu'en mai 1978 (dont 2 à l'extérieur de la parcelle).

Les résultats d'ensemble sont donnés dans le tableau I. Ils révèlent 4 mois

après l'épizootie la présence de C. osmodes dans 3 emplacements à l'intérieur

de la parcelle. Par la suite cette Entomophthorale n'a plus été retrouvée.

Tableau I

Isolement d'Entomophthorales à partir d'échantillons de sol prélevés à l'intérieur et à

l'extérieur d'une parcelle couverte ayant supporté des chrysanthémes cultivés sur lesquels

une population de Macrosiphoniella oblonga avait été décimée par Conidiobolus osmodes

en novembre 1976. (Dechy, Nord).

Date du

Eege Intérieur de la si Extérieur de la serre

et nombre de ДАН

boites de Pétri

ensemencée w Entomophthorales

par échantillon d'échantillons

5 Conidicbolus spp|

février 1977 12 1 1 Entomophthora?sn]

13 boîtes

6 2

décembre 1977

e 6 2 Conidiobolus

4 boîtes 2 eniafobolus spp,

mars 1978

6 2 Conidioholus s

20 bo: 2 Conidiobolus spp

B. ranarum = Basidiobolus ranarum Eid.

3. Infection experimentale d’Insectes avec les souches de Conidiobolus osmodes

isolées du sol.

L'action pathogéne des 3 souches de C. osmodes isolées du sol (No 1048,

1049 et 1050 de la mycothéque de l'Unité de Lutte biologique contre les In-

sectes de l’Institut Pasteur de Paris*) a été recherchée vis-à-vis du Puceron

Acyrthosiphon pisum Harr. et vis-à-vis des chenilles de Galleria mellonella L.

(Lépidoptères Pyralididae). Les deux souches No 1049 et 1050 produisant très

* Respectivement No 3150, 3156 et 3153 de la mycothéque du Laboratoire de Parasito-

logie de l'Université libre de Bruxelles.

Source : MNHN, Paris

CONIDIOBOLUS OSMODES 115

peu de conidies dans nos conditions expérimentales, les résultats donnés ci-

dessous ne concernent que la souche No 1048.

La méthode d'estimation du pouvoir pathogène vis-à-vis de A. pisum (clone

B) a été décrite récemment (PAPIEROK et WILDING, 1979). Les essais d'in-

fection ont été réalisés simultanément avec une souche de Entomophthora

obscura Hall et Dunn (No 542) sur des adultes ailés, 4 fois 5 lots de 10 pucerons

étant exposés au flux des conidies émises par des cultures durant respectivement

5, 20, 80 et 320 mn. Conidiobolus osmodes se révèle particulièrement virulent

à l'égard de A. pisum; la CL 50 est de 12,8 conidies/mm? (68,2 conidies/mm2

dans le cas de E. obscura; tableau II). La mortalité est effective dès la fin du

‘jour des pucerons en atmosphère saturée, c’est-à-dire 29 h 20 mn après le début

de l'exposition aux conidies. Au moment de la mort, le puceron conserve sa

forme et sa couleur et il n'héberge pas encore de corps hyphaux. Nous n'avons

noté aucune formation de rhizoïde. Le développement du champignon dans

l'hôte a lieu post mortem, il est également limité à la tête et au thorax.

Tableau H

oncentrations létales 50 (CL 50) d'une souche de Conidiobolus osmodes (No 1048)

du sol et d'une souche de Entomophthora obscura (No 542) vis-à-vis de Acyrtho.

siphon pisum

cu s0 1 Le 2 degrés | pente | ue

sini conidies/en? | de confiance = E жоне Care

(aver une. proba Liberté

piaite ae 35

‘an idisbolua cao 12,8 22- 18 лаг 9,17

60,2 23, D 1,96 0,22

au point 34, XË = 20,9 avec 18 degrés de Liberté.

Sur les chenilles de G. mellonella soumises à l'infection par les conidies de

C. osmodes selon la technique de KREJZOVA (1971), on note au bout de

quelques heures l'apparition de taches de mélanisation trés nombreuses et trés

intenses (fig. 3 et 4). Les chenilles infectées meurent en 24 h à 48 h. Au moment

de la mort, comme dans le cas de l'infection de A. pisum, on n'observe prati-

quement pas de développement mycélien à l'intérieur de l'insecte. Les cadavres

noircissent rapidement, se desséchent pour former finalement un «sclérote»

colonisé par le champignon. Jusqu'à présent l'étude du pouvoir pathogène

sur G. mellonella n'a pas été abordée au plan quantitatif.

DISCUSSION ET CONCLUSION

Conidiobolus osmodes, espèce originellement décrite comme saprophyte

mais dont REMAUDIERE et al. (1976 b) ont mis en évidence l’action pathogène

Source : MNHN. Paris

116 B.PAPIEROK & J. COREMANS-PELSENEER

vis-à-vis des Pucerons, est capable d'entraîner des épizooties dans les populations

aphidiennes. Cette espèce peut donc se comporter dans certaines conditions

(forte humidité notamment) comme un agent pathogène primaire. Sa rapidité

d'action vis-à-vis des Insectes suggère l'intervention de substances toxiques

émises au moment de l'infection et entraînant la mort de l'hôte avant même

que le mycélium se développe. Le comportement pathogène de C. osmodes

peut être rapproché de celui de certaines Entomophthorales telles que Ento-

mophthora virulenta Hall et Dunn et Entomophthora apiculata Thaxt., dont

les toxines ont été étudiées par plusieurs auteurs (YENDOL et al., 1968; PRA-

SERTPHON et TANADA, 1969). CLAYDON et GROVE (1978) ont montré

récemment que E. virulenta produit au moins deux substances toxiques pour

les insectes; ils en ont déterminé la nature chimique. Il est intéressant de remar-

quer que, chez la plupart des Fungi Imperfecti pathogènes d'Insectes, les toxines

jouent un rôle essentiel dans le processus infectieux, le champignon se dévelop-

pant en saprophyte aux dépens du cadavre de l'Insecte (FERRON, 1978). En

revanche, la mort des pucerons infectés par Entomophthora obscura, E. aphidis

Hofmann ou E. planchoniana Cornu, intervient seulement après le total envahis-

sement de l'hôte par le champignon : 2 à 4 jours pour la souche No 542 de E.

obscura (PAPIEROK et WILDING, 1980).

Nous avons montré par ailleurs que Conidiobolus osmodes se maintient

dans le sol pendant la mauvaise saison, sous une forme non déterminée (proba-

blement à l'état de zygospores) et qu'il conserve intacte sa potentialité entomo-

pathogène. Le rôle du sol dans la conservation des Entomophthorales pathogénes

d'Aphides a été particulièrement souligné par GUSTAFSSON (1969). LAT-

TEUR (1977) a montré que la terre provenant d’un champ ayant supporté

une culture sur laquelle une population aphidienne avait été décimée par Ento-

mophthora aphidis et E. obscura, constitue une source d’infection pour les

pucerons venant à son contact. Des pourcentages élevés de germination des

azygospores de E. obscura ont été obtenus par LATGE et al. (1978) après

stockage dans le sol pendant l'hiver. Le sol, qui est capable d'assurer la peren-

nité de l'inoculum, joue donc probablement un róle important dans le déclen-

chement et le déroulement de l'entomophthorose.

REMERCIEMENTS

Les auteurs expriment leur reconnaissance à Monsieur et Madame A. TILMANT pour

toutes les facilités qu'ils leur ont accordées dans la conduite des observations et des prélève

ments sur le terrain, à Messieurs J. FARGUES et P.H, ROBERT (INRA, La Minière) pour la

fourniture des chenilles de Galleria mellonella nécessaires aux expériences d'infection et à

Monsieur N. WILDING (Rothamsted Experimental Station, Harpenden, Grande-Bretagne)

pour son aide dans l'analyse statistique des résultats.

Source : MNHN, Paris

CONIDIOBOLUS OSMODES 117

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des Pucerons Acyrthosiphon pisum Harr. et Sitobion avenae F, (Homoptères Aphididae)

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REMAUDIERE G., KELLER S., PAPIEROK B. et LATGE J.P., 1976a — Considérations

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REMAUDIERE G., LATGE J.P., PAPIEROK B. et COREMANS-PELSENEER J., 1976 b —

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Source : MNHN, Paris

119

VARIABILITÉ DE LA FRUCTIFICATION

DU PLEUROTUS ERYNGII EN CULTURE

par R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC et P. JOLY*

RÉSUMÉ. — On observe en culture artificielle une variabilité du taux de fertilité des souches

et de la morphologie de leurs basidiocarpes lorsqu'elles sont pleinement fertiles. Cette

variabilité s'exprime, dans les deux cas, avec des amplitudes plus ou moins grandes selon

les populations naturelles dont sont extraites les souches. En outre, le taux de fertilité

observé chez un ensemble de souches n'est pas indépendant des modalités de leur isolement

à partir de la population sauvage : il est plus faible chez celles issues de semis plurispore

que chez celles provenant de bouturages, à la suite d’un accroissement des taux d’expres

sions d’un ou plusieurs types de blocages de la fructification. On ne peut pas rejeter l'hypo-

thèse d'une intervention, à ce niveau, de recombinaisons méiotiques au cours de la forma-

tion des basidiospores mais, dans ce cas, la manifestation de blocage résulterait de processus

plus complexes qu'une simple expression de phénotype monogénique récessif.

Étroitement inféodé au Panicaut (Eryngium campestre L.) sur les racines

mortes duquel il développe ses fructifications, le Pleurotus eryngii (Fr. ex DC.)

Quél. a, en Europe occidentale du moins, une aire de répartition qui recouvre

sensiblement celle de son hóte, telle qu'elle a été précisée par TURMEL (1948).

Vers le sud, il atteint l'Afrique du nord (Maroc, Algérie, Tunisie) où il accom-

pagne pratiquement le Panicaut à sa limite méridionale extrême. Vers le nord,

il remonte jusqu'aux Pays-Bas, mais sa limite d'extension reste là nettement

en deçà de celle de son hôte qui s'étend au sud de la Grande-Bretagne et au

Jutland,

Sa présence n’est toutefois pas uniforme dans cette aire, mais fragmentée

en stations de dimensions assez restreintes, relativement stables dans l'espace

et dans le temps et souvent isolées les unes des autres. Ce morcellement géogra-

* Laboratoire de Cryptogamie du Muséum National d'Histoire Naturelle, L. A. N° 257

(C. N.R.S.), 12 rue de Buffon, 75005 Paris.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog. mycol.) Tome 1 (1980).

Source - MNHN, Paris

120 R.CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

phique est dû, en partie déjà, aux nombreuses discontinuités de l'aire du Pani-

caut qui découlent de ses exigences écologiques : c’est une plante de dunes

fixées, de pelouses ou de côteaux secs, ne dépassant guère 1500m d'altitude

dans nos régions. Ce morcellement est accru par le fait que, là où existent

d'assez vastes étendues peuplées d'E. campestre, les stations du Pleurote restent

localisées et séparées par des zones dans lesquelles les Panicauts demeurent

indemnes.

Une telle disjonction en petites localités stables s'accompagne naturellement

de différences plus où moins importantes dans le déroulement des processus

de fructification et dans les faciès des basidiocarpes, tant en milieu naturel

qu'au sein de souches extraites des diverses populations et cultivées en condi-

tions uniformisées. Maitrisant bien, maintenant, le cycle complet et la repro-

ductibilité des cultures de ce champignon (CAILLEUX et DIOP, 1976; 1978),

il devenait possible d'étudier cette variabilité des comportements entre popu-

lations distinctes. Pour cela, nous avons disposé d'un ensemble de souches

prélevées au sein de populations d'origines géographiques variées: Manche,

Finistère, Vallée de la Loire (Montrichard et Beaugency), Saône-et-Loire (envi-

rons de Tournus), Vaucluse (Roaix et Malaucène), Bouches-du-Rhône (Château-

renard et Massif de la Sainte-Baume) et Aveyron (environs de Millau).

Originellement, toutes ces souches sont des «souches brutes», obtenues

directement par des isolements de routine selon l'un ou l'autre des quatre

procédés les plus couramment utilisés: semis multispore (mélange de spores

haploides), boutures de fragments d'hyménophore (mélange de spores haploides

ct d'hyphes du dicaryon sauvage parental), de fragments de la chair du basidio-

carpe ou de la racine du Panicaut infectée naturellement (hyphes du dicaryon

sauvage). Par opposition, nous dénommons «souches contrôlées» celles qui

résultent de la fusion de deux haplontes issus chacun d’une basidiospore, sauvage

ou produite par une «souche brute», en culture.

Cette étude de la variabilité de la fertilité des souches et de la morphologie

des basidiocarpes a été réalisée à partir de 206 «souches brutes», qui ont été

conduites jusqu'à la fructification complète ou à l'expression de divers blocages.

Ces souches provenaient de neuf des dix populations citées (celle de Millau

n'étant pas incluse ici), représentées chacune par divers prélèvements réalisés

par des semis multispores et, chaque fois que celà a été possible, compte-tenu

du matériel de départ, un ou plusieurs types de bouturages.

Deux variables ont donc été introduites simultanément dans ce travail ; une

variable de populations (origine géographique) et une variable d’échantillon-

nage au sein de chaque population (modalité d'isolement des souches). Avant

d'entreprendre l'étude du comportement des diverses populations, il importait

done de voir, systématiquement, si les modalités de prélèvement des échantil-

lons, c'est-à-dire d'isolement des souches, exerçait ou non une influence sur

Texpression de la variabilité du développement basidiocarpique.

Enfin, parmi l'ensemble des données expérimentales, certaines constituent

en réalité des répétitions: outre des duplications de «souches brutes» (286

Source - MNHN. Paris

FRUCTIFICATION DU PLEUROTUS ERYNGII EN CULTURE 121

cultures réalisées pour 206 «souches brutes»), il faut tenir compte du fait

qu'à partir des basidiocarpes, ou couple basidiocarpe + racine infectée, il a

souvent, mais pas toujours, été effectué divers isolements par une ou plusieurs

modalités distinctes. On peut alors craindre que le poids qui leur est affecté,

dans les données originelles, puisse déformer quelque peu l'analyse; d'autre part,

les éliminer constituerait une perte d'information. Pour en tenir compte, sans

pour autant leur accorder un poids exces

en utilisant la formule :

if, nous avons effectué des analyses

= заа лв

2 3 n

i étant l'indice affecté à chaque basidiocarpe, ou couple basiciocarpe + racine

infectée, compte-tenu des n isolements répétitifs qu'il a fournis. Chaque fois

que, parmi ces n répétitions, il existe plusieurs modalités d'isolements ou des

extériorisations de comportements distincts le partage est fait proportionnelle-

ment aux nombres des répétitions de chaque sous-groupe.

VARIABILITÉ DES TAUX DE FERTILITÉ

Les résultats des essais culturaux concernant les 286 cultures, en données

originelles et en données pondérées en fonction des répétitions, sont réunis

dans le tableau I dont la simple lecture montre un taux de fertilité beaucoup

plus faible dans le cas des semis multispores que dans celui des trois types

de bouturages. Il est aisé de le confirmer par un test de x”. Pour les données

Données originelles Données pondérées

Modalités ||Yrésence| Pructifi- Présence | Fructifi-

de cation Total de cation Total

d'isolement |ijccage | normale blocage normale

Multispore 55 109 164 34,16 52,83 86,99

Chair 4 45 49

1,78 24,70 26,48

Racine o 21 21

Hyménophore |: 2 50 52 1,26 27,39 28,65

Total 61 225 286 37,20 104,92 142,02

Tab. I. — Comportement fructifère en fonction des modalités d'isolement des «souches

brutes».

Source : MNHN. Paris

122 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

originelles, ce test indique une trés forte hétérogénéité du comportement fructi-

fére en fonction des modalités d'isolement (x^ — 27,53**). Si l'on effectue

alors les comparaisons élémentaires, on constate qu'effectivement les cultures

issues des semis multispores se différencient nettement et à la fois de celles qui

sont issues des fragments d’hyménophore (x* = 17,90**), des fragments de

chair du basidiocarpe (x? = 12,12**) et des fragments de racines infectées

(x? = 10,01**). En ce qui concerne les comparaisons élémentaires entre les

trois types de bouturages, il n'est pas possible, en raison des faibles taux d'ap-

parition de blocages, de discerner des différences de comportements; le test

de x^, d'ailleurs, n'est pas applicable en raison des valeurs trop faibles, dans

ces comparaisons élémentaires, des taux de blocage calculés à partir des totaux

marginaux,

Avec les données pondérées pour les répétitions et en regroupant, pour

simplifier, les souches issues des seuls dicaryons sauvages, c'est-à-dire les bou-

tures de fragments de chair et de racines infectées, on retrouve la très forte

hétérogénéité de comportements (x^ — 19,90**) et les souches provenant des

semis multispores se distinguent encore nettement des souches obtenues par

des boutures d'hyménophore (x^ — 12,34**) ou de chair et racines infectées

(x? — 9,93**). Les semis multispores engendrent donc des cultures dont le

taux de fertilité, par suite d'un fort accroissement de l'apparition de blocages,

est nettement inférieur (0,607 à 0,665 selon que l'on utilise les données origi-

nelles ou les données pondérées) à celui des trois autres modes d'isolements

(0,945 à 0,951).

Si l'on examine maintenant la variabilité entre des populations d'origines

géographiques distinctes, il nous faut traiter séparément celles qui ont été

prélevées par des bouturages et celles issues des semis multispores. Pour les pre-

mières, les blocages de la fructification sont rares: seules les souches issues

de deux stations en ont exprimé; quatre provenaient de Montrichard et deux

de Tournus. Ce sont d'ailleurs les deux stations pour lesquelles nous avons

pu disposer du plus grand nombre de données concernant des «souches brutes»

extraites par des bouturages divers (fragments d'hyménophore,, de chair ou

de racine): 58 isolements pour Montrichard et 29 pour Tournus, alors qu'il

n'a pu en être effectué que 19 pour Malaucène, 14 pour Roaix et deux seule-

ment pour Beaugency; les quatre autres stations (Manche, Finistère, Chateau-

renard et Massif de la Sainte Baume) n'ont pu étre représentées que par des

semis multispores. On peut donc estimer que, sur la base d'échantillons extraits

par des bouturages divers, les taux de fertilité des diverses populations apparais-

sent trés élevés; les «souches brutes» qui ne fructifient pas normalement sont

assez rares, leur mise en évidence nécessitant un échantillonnage suffisamment

important. Enfin, pour les deux stations dont l’échantillonnage a répondu à

cet impératif, les taux de fertilité sont apparus équivalents: 54/58 — 27/29 —

0,931.

Par contre, chez les «souches brutes» issues de semis multispores (Tab. II),

les taux de fertilité sont toujours beaucoup plus faibles, Si l'on met à part les

représentants des stations de Beaugency et du Massif de la Sainte-Baume qui

Source - MNHN Paris

FRUCTIFICATION DU PLEUROTUS ERYNGII EN CULTURE 123

Données ramenées Données

жеши рар Коне | en taux | originelles

Présence |Fructifi- Présence |Fructifi- |] Nombre de

de cation | Total de cation "souches

blocages | normale blocages | normale brutes"

Manche 15,613 7,783 | 23,396 0,667 0,333 (эз)

Montrichard | 5,053 | 3,895 8,948 || 0,565 0,435 (26)

Tournus 3,324 | 8,730 | 12,054 | 0,276 0,724 (25)

Roaix 1,833 5,083 6,916 0,265 0,735 (11)

Finistère 2,463 9,600 | 12,063 0,204 0,796 (25)

Maleucène, 2,833 | 12,603 15,436 0,184 0,816 (29)

Tab. II. — Comportement fructifére en fonction de l'origine géographique de «souches

brutes» issues de semis multispores.

constituent des échantillonnages à effectifs trop faibles (respectivement deux

cultures fertiles sur quatre et aucune sur deux), on constate que les proportions

des souches qui parviennent à la complète maturité sont relativement faibles

chez certaines populations (Manche et Montrichard), nettement plus élevées,

presque le double, chez les autres, mais encore nettement inférieures à celles

que l'on obtient avec des échantillonnages par bouturages. Seuls les représentants

de la station de Châteaurenard ont extériorisé un taux de fertilité de 1,000

mais l'échantillonnage est encore un peu faible (9 cultures) et il est vraisemblable

que la non-manifestation de blocages n'y soit que la conséquence d'une insuffi-

sance d'effectifs.

VARIABILITÉ DE L'ASPECT MORPHOLOGIQUE DES BASIDIOCARPES

Parmi les souches qui achèvent le cycle complet, il existe une assez grande

variabilité de la morphologie des basidiocarpes. Indépendamment de divers

faciès qui apparaissent sporadiquement et irrégulièrement, souvent d'ailleurs

sous l'influence de facteurs externes, et de faciès occasionnels que nous re-

grouperons sous la rubrique «divers» (Pl. II, fig. 6 et Pl. IV, fig. 5 et 6), il est

possible de distinguer cinq principaux types morphologiques de basidiocarpes :

Type I (PL I, fig. 1 et 2)

- Stipe régulier, cylindrique, le plus souvent inséré au centre du piléus, sauf

dans le cas de carpophores en touffe dense, où les piléus de la périphérie sont

excentrés.

Source - MNHN. Paris

124 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

- Piléus régulier, circulaire, d'abord bombé, puis déprimé, finalement à bord

plus où moins fortement retroussé; de couleur claire, ocracé pâle, à vergetures

radiales plus foncées.

- Lames crème pâle, presque blanches, légèrement décurrentes sans former

de filets sur le stipe, très rarement anastomosées.

Type II (PL. II, fig. 1, 3 et 5)

- Stipe régulier, cylindrique à rétréci au sommet, généralement inséré au

centre du piléus.

- Piléus régulier, circulaire, d'abord plan légèrement déprimé au centre,

puis convexe plan creusé au centre, à marge arrondie (descendante) légèrement

cannelée, infundibuliforme très évasée; de couleur claire, ocre pâle roussâtre,

marge à festons plus clairs, plus ou moins évidents.

- Lames crème pâle, moyennement décurrentes, mais sans former de filets

sur le stipe, anastomoses très rares.

Type HII (PL. I, fig. 3 et 4)

- Stipe fusiforme, rarement long, insertion au piléus généralement excen

trique, méme chez les exemplaires isolés.

- Piléus d'abord convexe omboné, puis légérement déprimé, mais toujours

omboné au centre, marge rarement retroussée à la fin; le plus souvent irrégulier,

entier ou elliptique ou découpé en deux à trois larges lobes; surface parfois

localement hérissée de granulations ou de verrues charnues, de couleur foncée,

ocracé-brun; marge ornée de festons plus clairs.

- Lames plus foncées que dans les autres types, franchement crème légère-

ment ocracé; décurrentes et formant souvent des filets plus ou moins anasto-

mosés sur le stipe.

Type IV (PI. I, fig. 5 et 6)

- Stipe court, tronconique, inséré au centre du piléus.

- Piléus étroit, d'abord convexe puis plan omboné, finalement légèrement

déprimé omboné; de couleur trés claire, crème pâle, presque blanc.

- Lames presque blanches, décurrentes, souvent anastomosées en réseau

à la base.

Type V (PL I, fig. 2 et 4)

- Anomalies à caractère tératologique fréquentes.

PI. I- P. eryngii. — Typel, (or. env. de Millau). 1: basidiocarpes à pleine maturité; 2:

basidiocarpes proches de la décrépitude. - Type III, (or. env. de Roaix). 3: basidiocarpes

à pleine maturité; 4: détail de la surface d'un piléus. - Type IV, (or. env. de Malaucène).

5: basidiocarpes à pleine maturité; 6: détail de l'hyménophore.

Source - MNHN. Paris

Source : MNHN, Paris

126 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

- Stipe court, souvent irrégulier, aplati, cannelé, fascié, éclaté, ramifié;

insertion au piléus centrale ou légérement excentrique.

- Piléus d'abord plan à marge descendante, puis déprimé à marge plus ou

moins fortement retroussée; forme souvent irréguliére, parfois divisé en larges

lobes; ocre-roussâtre à vergetures radiales plus foncées et très nettes, marge

ornée de festons plus clairs; présence fréquente d'hyménophore surnumeraire.

- Lames presque blanches, décurrentes, souvent en long filet sur le stipe;

anastomoses rares.

Lorsque les «souches brutes» sont normalement fertiles, il ne semble pas y

avoir une influence notable des modalités d'isolement sur la variabilité morpho-

logique. Les résultats de l'étude de 65 de ces souches, provenant de trois popu-

lations différentes (Montrichard, Malaucéne et Roaix) sont présentés dans le

Tableau III (en données pondérées pour les répétitions) : on peut y constater

que la fréquence d'apparition effective de chaque type morphologique pour

chacune des modalités d'isolement (chiffres droits) correspond sensiblement

: Types morphologiques

Modalités nud

d'isolement| Type II | Type III | type IV Type Y Divers

È 6,50 3,50 2,58 2,00 1,75 16,33

Multispore

(6,06) (3,17) (1,81) (2,72) (1,27) (15,03)

Lm 6,00 2,00 1,00 9,00

(6,06) (3,17) (0,90) (10,13

Ae 9,75 0,00 9,73

(8,78) (0,90) (9,68)

Hyménophore | 7:50 4,00 0,00 4,00 1,00 16,50

(7,78) (3,17) (1,81) (2,72) (1,27) | (16,75)

Lr 29,73 9,50 2,58 6,00 3,75 51,56

(28,68) (9,51) (3,62) (5,44) (4,34) || (51,59)

Tab. III. — Répartition des types de fructification en fonction des modalités d'isolement.

Pl. IL. - Р. егупей. — Type II, (or. env. de Montrichard). 1, 3, 5: basidiocarpes à pleine

maturité. - Type V, (or. env. de Malaucène). 2: basidiocarpes proches de la pleine matu-

rité; 4: basidiocarpe avec hyménophore surnuméraire. - Faciès «divers», (or. env. de

Châteaurenard). 6: basidiocarpe à chair molle et lames souvent anastomosées dans la

vallécule.

Source : MNHN, Paris

128 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

à celle que l'on peut déduire (chiffres entre parenthéses) de l'hypothése nulle

supposant, au sein de chaque population et compte tenu de sa propre fréquence

d'apparition des types qui y sont représentés, une indépendance totale de la

variabilité morphologique par rapport aux modalités d'isolement.

En définitive, les modalités d’échantillonnage influent seulement sur le taux

d'apparition des blocages, les semis multispores l'accroissant considérablement

par rapport aux divers types de bouturages; par contre, elles ne modifient

guère l'expression de la variabilité morphologique. Compte-tenu de cette unifor-

mité de réponse des échantillons, quelles que soient les modalités de leurs

isolements, il apparaît que certaines populations extériorisent des comportements

homogènes, comme celle de Roaix dont les basidiocarpes, en culture, sont pra-

tiquement toujours de type III, ou méme celle de Montrichard dont la plupart

des basidiocarpes (0,924) sont de type Il, quelques-uns seulement de type

1 * ж * * * * * *

2 * ` * * ` ° o *

—

3 * * * * * * *

4 * * * H * * * *

5 * * * *

6 * * * *

| SE a o * o

8 * + *

9 D * *

10 . *

п £

12 *

+ a

13 *

Tab. IV. — 0: blocage végétatif. &: blocage au niveau de la caryogamie. 6: blocage en cours de méiose. #: fructifi

cation normale

Source - MNHN. Paris

FRUCTIFICATION DU PLEUROTUS ERYNGII EN CULTURE 129

«Divers». D'autres populations, au contraire, manifestent une plus grande

variabilité, comme celle de Malaucène qui, géographiquement proche de la

station de Roaix, ne produit pas le type 111, mais un mélange des types 11 (0,345),

IV (0,179), V (0,366) et quelques formes diverses.

Ces conclusions ont pu étre confortées par une étude portant sur la popu-

lation de Tournus oà nous avons analysé les comportements de diverses «souches

brutes» issues de treize basidiocarpes ou ensembles «racine infectée + basidio-

carpe développé sur cette racine», à l'aide de series d'échantillonnages aussi

complètes que le permettait l'état du matériel d'origine : boutures de tissu de

la racine infectée, de chair du stipe et du piléus, de fragments d'hyménophore,

ainsi que semis multispores réalisés à partir de quatre dépôts successifs

spores déposées au cours des 14 premières heures de sporulation en laboratoire;

11: spores déposées de la 15e à la 19e heure; III: spores déposées de la 20e à

la 23e heure; IV: spores déposées de la 24e à la 40e heure (Tableau IV). Ces

essais ont bien confirmé l'accroissement du taux d'apparition de blocages chez

les semis multispores (4/25 = 0,160 contre 2/29 = 0,069 chez les bouturages),

mais ils font également ressortir une homogéné

éité de comportement chez les

«souches brutes» issues d'une méme entité, «basidiocarpe» ou «ensemble

racine + basidiocarpe» (Pl. II, fig. 1 à 5): la série n° 7 montre le blocage

en cours de méiose chez la plupart des souches, qu'elles soient obtenues par

bouturages ou semis multispores (Pl. IV, fig. 1 à 4):la série n9 2 a montré

systématiquement, et quel que. soit le mode d'échantillonnage, un. retard à la

fructification associé à une baisse de la fertilité.

LE DÉVELOPPEMENT BASIDIOCARPIQUE

ET SES PRINCIPAUX BLOCAGES EN CULTURE

Le développement des basidiocarpes du P. eryngii se réalise selon des proces-

sus relevant de la carpogenése «diffuse» telle qu'elle a été définie par REIJN-

DERS (1963) : schématiquement, les hyphes s’agrégent plus ou moins paralléle-

ment en un stipe cylindrique, puis divergent pour constituer le piléus à crois-

sance marginale. Toutefois, comme nous l'avons vu, si les processus de la fructi-

fication se déroulent complétement chez la plupart des «souches brutes», qui

produisent alors des basidiocarpes lamellés et fertiles, certaines de ces souches

n'achévent pas leur cycle complet,

En culture de laboratoire, aprés envahissement complet du milieu par le

mycelium dicaryotique végétatif, ouverture des bocaux et mise en place du

gobetage de vermiculite (cf. CAILLEUX et DIOP, 1976), le premier indice

macroscopique de l'induction aux processus fructiféres est la formation super-

ficielle de petits flocons assez nombreux et mal définis: c'est le stade de la

«nouaison». Certaines «souches brutes» restent totalement stériles, n'extério-

risant, même dans les conditions habituellement favorables à la poursuite nor-

male de la fructification, aucun processus de différenciation basidiocarpique ou,

au maximum, évoluent seulement jusqu'à un faciès rappelant la «nouaison»

Source - MNHN. Paris

130 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M, SLEZEC, P. JOLY

(Pl. V, fig. 1); puis, tout développement cesse. Ces blocages du cycle peuvent

résulter de causes diverses, que nous n'avons pas cherché à préciser ici; nous les

avons simplement regroupés sous l'expression de «blocages végétatifs».

Peu aprés le stade de la «nouaison», les primordiums apparaissent à la surface

de la culture, compacts, nombreux, isolés ou en groupes; d'abord globuleux,

ils s'allongent et s'étoffent, Chez les cultures effectuées à 14-18°C avec des

éclairements de 12h par jour, quatre jours avant la formation des premières

basidiospores (stade J-4), l'ébauche du piléus devient nettement visible mais

encore sans traces de lames, où celles-ci commençant à peine à s'ébaucher

(Pl. V, fig. 2). Le jeune primordium contient alors uniquement des filaments

bouclés et binucléés. Chez diverses «souches brutes», l'induction à la fructifi-

cation peut se réaliser de maniére apparemment normale, avec formation de

primordiums comparables à ceux des souches pleinement fertiles, et cela jus-

qu'au stade J-4 oü leur développement cesse brutalement et définitivement.

Chez certaines, au moins, de ces souches, la structure reste banale jusqu'à ce

stade J-4, avec des hyphes bouclées et binucléées, Le lendemain (stade J-3),

le primordium a poursuivi sa croissance, étant toujours constitué de filaments

bouclés et binucléés, mais les apex de certains d'entre eux se renflent, et on peut

alors y observer les premières fusions nucléaires. А се stade apparaissent çà et

là de rares cystides. Chez les primordiums des souches bloquées au stade mor-

phologique J-4, les articles des hyphes ont pris des longueurs variables, restant

binucléés et alors fins, ou devenant plurinucléés et larges. Dans les deux cas,

ils émettent souvent des diverticules latéraux à structure anormale et on n’ob-

serve aucun renflement pré-caryogamique des apex. N'ayant encore observé

aucune figure de caryogamie dans les primordiums affectés par cet arrêt total

de la croissance, nous désignons ce dernier par le terme de «blocage au niveau

de la caryogamie», sans que cela n'implique a priori de relation de cause à

effet.

Au stade J-2, le piléus est encore enroulé, mais avec des lames déjà bien déve-

loppées, sur lesquelles on retrouve un mélange des mêmes éléments que précé-

demment, associés à des figures de méiose 1 allant jusqu'au pachyténe; les

cystides, pour leur part, sont déjà abondantes. A ce stade morphologique,

certaines souches extériorisent un arrêt prématuré des processus de développe-

ment du seul piléus, alors que le stipe poursuit sa croissance (Pl. V, fig. 3 et 4).

Ce sont les «blocages en cours de méiose», qui n'inhibent pas complétement

la carpogenése, mais vont conduire à des basidiocarpes anormaux, à piléus

avorté et, pour la plupart, stériles, à l'extrémité d'un stipe parfois relativement

long.

PI. UL. - P. eryngii. — 1 à 5 : souches originaires des environs de Tournus, faciès homogène

dela série n9. 4, souches issues de: 1) bouturage de racine infectée, 2) bouturage de

la chair du chapeau, 3) bouturage de l'hyménophore, 4) semis multispore I, 5) semis

multispore III. 6: basidiocarpe sauvage «in situ» (or. env. de Montrichard).

Source - MNHN. Paris

Source : MNHN, Paris

132 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

Au stade J-1, le piléus a déjà commencé à se dérouler; les figures de méiose

les plus avancées correspondent aux débuts de la deuxiéme division de méiose,

mais elles restent environnées de toutes les figures précédentes, y compris

les simples renflements de l'apex binucléés, Enfin, a J, le piléus est quasiment

adulte, bien que n'ayant pas encore atteint sa taille maximale, avec des figures

allant jusqu'aux fins de méiose II et à la formation des premières basidiospores,

encore assez rares; l'ensemble est toujours associé à toutes les figures précé-

dentes. Passé ce stade, le basidiocarpe va poursuivre encore sa croissance pendant

plusieurs jours, jusqu'à ce qu'il ait atteint ses dimensions maximales, et cela

avec des apparitions quotidiennes de nouvelles figures de méiose.

Sans nous attarder plus longtemps sur la description des évènements méio-

tiques, que nous développerons par ailleurs et que nous n'évoquons ici qu'à

titre de repères chronologiques permettant de situer les manifestations des prin-

cipaux blocages des processus de la fructification, il est aisé de constater que,

chez le P. eryngii, les évènements méiotiques sont «diffus», comme le sont

les autres processus ontogéniques du basidiocarpe, et non plus ou moins syn-

chrones et regroupés à des stades précis du développement comme on l'observe

chez des champignons à carpogenèse «concentrée» tels que les Coprins (PRÉ-

VOST, 1962; LU, 1967; MANACHERE, 1978; etc.).

Origine des Blocage Blocage au Blocage en Fructification|Total

souches vegetatif |niveau de la|cours de méiose| normale

caryogamie

Manche 0,283. 0,160 0,224 0,333 1,000

Montrichard 0,022 0,321 0,222 0,435 1,000

Tournus 0,031 0,081 0,164 0,724 1,000

Roaix o o 0,265 0,735 1,000

Finistère о 0,052 0,152 0,796 1,000

Malaucène o 0,065 0,119 0,816 1,000

Tab. V. — Taux d'apparition des divers blocages en fonction de l'origine de «souches

brutes» issues de semis multispores (données pondérées ramenées en taux)

PI. IV. - P. eryngii. — 1 à 4: souches originaires des environs de Tournus, série n? 7, mani-

festations de blocage en cours de méiose, souches issues de : 1) bouturage de l'hyméno-

phore, 2) bouturage de la chair du chapeau, 3) bouturage de la chair du pied, 4) semis

multispore. 5 et 6 : Faciès «divers», souches issues de deux semis multispores effectués

à partir de la méme sporée (or. Finistére).

Source : MNHN. Paris!

Source : MNHN. Paris

134 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

PI. V. - P, eryngii. — Stades morphologiques de manifestation des blocages. 1:à la «nouai

son». 2:au niveau de la caryogamie, 3:en cours de méiose, 4; détail de 3.

Examinons maintenant la variabilité de l'apparition des divers types de blo

cages au sein de nos quelques populations. Dans le cas des «souches brutes»

issues de bouturages dive

nous avons vu que six seulement étaient affectées

de blocages. Quatre sont originaires de Montrichard, deux d'entre elles mani-

festent le blocage au niveau de la caryogamie, les deux autres le blocage en cours

de méiose, ce qui représente pour ces deux blocages des taux de 0,035 parmi

les représentants de cette station. Les deux dernières souches non fructifères

sont encore affectées du blocage en cours de méiose et proviennent de Tournus,

Source : MNHN, Paris

FRUCTIFICATION DU PLEUROTUS ERYNGII EN CULTURE 135

station qui extériorise alors un taux d'apparition de ce blocage un peu plus

élevé (0,069) mais dont la différence, par rapport à Montrichard ne peut étre

tenue pour significative compte-tenu des dimensions des échantillonnages.

Chez les souches issues de semis multispores pour lesquels nous avons disposé

d'un échantillonnage suffisant (Tab. V), les taux d'apparition des divers blocages

sont beaucoup plus variables, Un certain nombre d'entre eux, échelonnés de

0,022 à 0,083 ne peuvent pas étre tenus pour effectivement différents de ceux

observés dans le cas des échantillonnages par bouturages divers. Il en est de

même pour les cas où aucun blocage ne s'est manifesté, les dimensions des

échantillons ne permettant pas de conclure à une absence de possibilité d'ex-

pression des blocages concernés. En définitive, si le semis multispore réduit

systématiquement le taux de fertilité, il ne le fait en accroissant les taux de

blocage chez toutes les populations étudiées que dans le cas du blocage en cours

de méiose. L’accroissement des taux du blocage au niveau de la caryogamie

n'apparaît nettement que chez les représentants de deux populations (Manche

et Montrichard) et celui des blocages végétatifs chez une seule (Manche). La

variabilité de l'intervention du semis multispore au niveau de ces deux types

de blocages pourrait d'ailleurs étre la seule cause de l'abaissement des valeurs

des taux de fertilité des souches originaires de ces deux stations par rapport

aux taux extériorisés par les souches extraites des quatre autres (Tournus, Roaix,

Malaucène et Finistère),

Enfin, si le semis multispore amplifie dans certains cas la manifestation des

blocages, il ne les induit certainement pas. Nous avons vu que deux d'entre eux

apparaissent à de faibles taux chez les souches obtenues par des bouturages

divers lorsque l'échantillonnage est suffisamment important. Il est, de plus,

intéressant de constater que quatre des six blocages que nous avons ainsi pu

observer sont des blocages en cours de méiose, c'est-à dire les plus universelle-

ment représentés chez les semis multispores et que les deux autres sont des

blocages au niveau de la caryogamie chez deux «souches brutes» originaires

de Montrichard, station qui a produit, et de beaucoup, le plus grand nombre

de blocages de ce type en semis multispores.

DISCUSSION

Parmi les hypothéses simples capables de rendre compte du comportement

des souches issues de semis multispores par rapport à celui des souches prove-

nant de boutures, on peut penser à une intervention de recombinaisons méio-

tiques lors de la formation des basidiospores, utilisées pour constituer l'échan-

tillonnage, Toutefois, les boutures d'hyménophore, contenant un mélange

d'hyphes parentales et de basidiospores, se comportent pratiquement comme

les boutures d'hyphes parentales seules (fragments de chair du basidiocarpe ou

de racine infectée), et non comme les semis multispores, Si l'accroissement

des taux d'apparition des blocages est le résultat de recombinaisons, cela im-

plique alors une élimination quasi-systématique des noyaux recombinants

Source: MNHN. Paris

136 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

apportés par les basidiospores, chez les boutures d'hyménophores.

Une telle élimination pourrait résulter d'une inhibition de la germination

des basidiospores par le mycélium dicaryotique parental actif, comme cela s'ob-

serve fréquemment chez divers champignons. Toutefois, lors du repiquage,

les hyphes bouturées ne reprennent pas immédiatement leur croissance et, si

des spores sont présentes sur les fragments mycéliens, l'expérience montre

qu'elles peuvent germer durant cette période de latence. Ces inhibitions peuvent

probablement jouer un róle dans une telle élimination, mais elles ne permettent

pas, à elles seules, de rendre compte du comportement des boutures d'hymé-

nium.

Lorsque plusieurs basidiospores sont mises en présence, elles germent et les

filaments auxquels elles donnent naissance établissent entre eux de nombreuses

anastomoses. On se trouve devant un phénomène de Buller complexe dans

lequel s'effectue une élimination de la plupart des noyaux avec sélection finale

d'un seul couple. Selon PREVOST (1962), l'élément déterminant de la sélection

des noyaux, dans le phénoméne de Buller, pourrait étre le degré d'hétérozygotie

globale (sur l'ensemble des génomes ou, au moins, de systèmes polygéniques

impliquant de nombreux gènes majeurs): le couple sélectionné serait celui

pour lequel les deux noyaux possèdent la plus grande hétérozygotie relative.

Dans la descendance post-méiotique d’un dicaryon, les couples de recombi-

nants possibles ne peuvent être hétérozygotes que pour les facteurs qui sont

déjà dans cet état chez le couple de noyaux parentaux : leurs degrés d'hété-

rozygotie réciproques, ou ceux de chacun d'entre eux par rapport à l'un ou

l'autre des types parentaux (le dicaryon parental existant en nombre relative-

ment important chez la bouture d'hyménophore) ne pourront étre qu'inférieurs

ou, au mieux, égaux à celui du couple parental. On peut calculer le nombre

théorique de couple de noyaux qui, chez N spores issues d'un dicaryon hétéro-

zygote pour F facteurs à ségrégation indépendante, posséderont un taux d'hété-

rozygotie égal à celui du dicaryon parental; la probabilité d'obtention de tels

couples est de :

2E NC A NC 2). — N

E N! 2F.(N—1)

L'introduction supplémentaire de tout facteur non indépendant, lié à l'un

quelconque des F facteurs précédents avec un taux de recombinaison k, modi-

fiant cette probabilité de [k2 + (1 — k)2], un système de P = F + L facteurs

réunis en F groupes de liaisons produira des couples de noyaux possédant

le méme degré d'hétérozygotie que le couple parental avec une probabilité de :

N [I 0-k)2] (2 Q1 - k2)?] Ik —kr)2]

2F.(N—1)

ky, kg, ky, étant les taux de recombinaison respectifs de chacundes L facteurs

par rapport à celui des F facteurs indépendants auquel il est lié.

FRUCTIFICATION DU PLEUROTUS ERYNGII EN CULTURE 137

On peut imaginer, à titre d'exemple, un systéme de 14 facteurs répartis

deux à deux en sept groupes de liaisons (le nombre chromosomique du P. eryngii

étant de l'ordre 11) avec des taux de recombinaison respectifs de 0,08, 0,12,

0,21, 0,25, 0,31, 0,35 et 0,40. La probabilité d'obtention de couples d'homo-

caryons à degré d'hétérozygotie égal à celui du cycle parental est alors de 3,5

pour 10000 spores; on voit facilement qu'elle devient trés faible dés que les

facteurs impliqués dans le phénoméne deviennent nombreux, ce qui est préci-

sément le cas du mécanisme proposé par PRÉVOST. En réalité, par rapport

à ce modèle bâti sur des confrontations bisporiques, les fusions multiples suivies

des sélections de noyaux qu'on observe chez le semis multispore tendent à

augmenter la fréquence de constitution de tels couples. Au contraire, chez le

bouturage de fragment d'hyménophore, les basidiospores ne sont pas seules

mais disséminées au sein d'une masse relativement importante d'hyphes du

dicaryon parental. Les chances de fusion d'un homocaryon recombinant avec

un partenaire suffisamment hétérozygote par rapport à lui pour que la conser-

vation de son noyau soit assurée deviennent faibles au regard de celles d'une

fusion avec le type parental. Ce dernier éliminera alors le noyau recombinant

dont le degré d'hétérozygotie par rapport aux deux noyaux parentaux est

moindre que celui existant entre eux, Si lon ajoute avantage sélectif que

constitue le nombre des cellules parentales par rapport à celui de chaque couple

éventuellement compétitif qui aurait pu se former, on conçoit que le bouturage

d'hyménophore puisse tendre à conserver le type parental, Compte-tenu des

dimensions de nos échantillonnages, il extériorise un comportement pratique

+ Formation de boucles après confrontation

— Pas de boucles après confrontation

* Fructification normale

£ Blocage au niveau de la caryogamie

< 620 619 621 623 618

De PE

issues des confronta.

é complémentaire.

Tab. VI. — Comportement fructifère des neuf «souches contrôlées»

tions de six homocaryons appartenant à deux groupes de compatibi

Source - MNHN. Paris

138 R. CAILLEUX, A. DIOP, A.M. SLEZEC, P. JOLY

ment identique à celui des boutures de chair ou de racines infectées qui, le plus

souvent, ne reproduisent que ce type parental.

Le mécanisme de sélection des noyaux proposé par PRÉVOST permettant

d'expliquer l'élimination presque systématique des noyaux recombinants chez

les boutures d'hyménophore, on ne peut pas rejeter l'hypothése d'une inter-

vention des recombinaisons méiotiques dans le comportement singulier des

semis multispores. Mais, dans ce cas, les modalités de cette intervention ne sont

certainement pas simples. A priori, les fréquences d’apparition des blocages

lorsque le semis multispore semble intervenir (0,283 pour le blocage végétatif,

0,160 et 0,321 pour celui au niveau de la caryogamie, six valeurs échelonnées

entre 0,119 et 0,265 pour celui en cours de méiose) ne sont pas trop éloignées,

dans un échantillonnage comme celui-ci, du taux théorique de manifestation

de phénotypes monogéniques récessifs dans la descendance d'un couple de

noyaux parentaux hétérozygotes pour ce caractére, L'étude de «souches contró-

lées», qui est en cours, ne permet pas de retenir actuellement cette hypothése :

à titre d'exemple, le tableau VI présente les comportements de neuf «souches

contrôlées» issues de la population de Millau: aucun des deux blocages extério-

risés ici n'apparaît avec une répartition compatible avec le schéma d'une simple

nécessité monogénique.

BIBLIOGRAPHIE

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du Pleurotus eryngii (Fr. ex DC.) Quel, Rev. de Mycol, 40 : 365-388.

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LU B.C., 1967 — Meiosis in Coprinus lagopus :a comparative study with light and electron

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MANACHERE G., 1978 — Morphogenése des carpophores de Basidiomycétes supérieurs

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PREVOST G., 1962 — Étude génétique d'un Basidiomycéti

Ann. Sc. Nat., Bot. et Biol. Vég., 12e Sér., 3 : 425-613.

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du Muséum Nat, Hist. Nat., 2e ser., 20 : 395-401.

Nous remercions ici nos collégues R. ASTIC, A. DENIS, J.C. DONADINI, G. FORTOUL,

R. FRANQUET, G. GARNIER, C. et M. MOREAU, J. NICOT, L. RIOUSSET et L. SI-

GNORET qui nous ont aimablement communiqué des sporées ou des échantillons vivants

de Pleurotes.

Source : MNHN, Paris

139

NOTES ON THE MORPHOLOGY OF SOME ISOLATES

OF PHYTOPHTHORA FROM AUSTRALIA

by L. GERRETTSON-CORNELL*

ABSTRACT. — The diagnostic importance of most morphological characteristics of 26

isolates of Phytophthora from various parts of Australia on two agar media has been dis-

cussed in this paper. Of these 13 were P. cinnamomi Rands, 9 were P. cryptogea Pethyb. &

Laff., and 4 were P. cambivora (Petri) Buism. P. cambivora appears to have been found

only 5 times in this country.

A new technique for the production of sporangia was tested and has proved highly

reliable. This study also showed the difficulty of identifying P. cambivora from its morpho-

logy in the absence of oogonia under the experimental conditions. For certain characteris-

tics, D. cambivora appeared to be closer to P. cryptogea than to P. cinnamomi.

RÉSUMÉ. La valeur systématique des caractéres morphologiques de 26 souches austra-

liennes de Phytophthora, cultivées sur deux types de milieux de culture est discutée. 13

souches appartiennent à P. cinnamomi Rands, 9 à P. cryptogea Pethyb. et Laff., et 4 à P.

cambivora (Petri) Buism. Une technique nouvelle, favorable à la production des sporanges

est proposée. Malgré la difficulté d'identifier P. cambivora en l'absence d'oogones, l'espéce

apparaît plus proche de P. cryptogea que de Р. cinnamomi.

INTRODUCTION

The present work describes most of the obvious morphological features

of a number of isolates of Phytophthora cinnamomi Rands, P. cryptogea Pethyb.

and Laff., and P. cambivora (Petri) Buism. from various parts of Australia.

The study is part of a more comprehensive research programme designed to

review the diagnostic importance of each character for Phytophthora species

in view of the existing variability and differences often established with other

descriptions.

* Forestry Commission of New South Wales, Beecroft, N. S. W., 2119, Australie.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., mycol.) TOME 1 (1980).

Source - MNHN. Paris

140 L.GERRETTSON-CORNELL

The genus Phytophthora is widespread in Australia (GERRETTSON-COR-

NELL, 1976). In New South Wales P. cinnamomi and P. cryptogea have been

frequently isolated from forest soils. P. cambivora has been detected only

4-5 times in this continent and this accounts for the low number of isolates

available for this study. A thorough study of the sexuality has not been carried

out but whenever possible the compatibility type of each isolate has been

determined.

MATERIALS AND METHODS

a) Origins of cultures

The origins of the cultures of Phytophthora used in this study are listed

in Table 1. Their identity was assessed or confirmed by the author, prior to the

beginning of this work, by using the keys of WATERHOUSE (1954, 1963),

FREZZI (1950) and various other descriptions (TUCKER, 1931; GRENTE,

1961; CHITZANIDIS and KOUYEAS, 1970). Two of the cultures were origi-

nally identified by the donors as P. drechsleri Tucker but on the basis of their

morphology could not be separated from P. cryptogea. This is in agreement

with other reported findings (BUMBIERIS, 1974; SHEPHERD, 1978 a). They

also failed to grow at 34-36°C, in contrast to the description for P. drechsleri

by WATERHOUSE (1963) and hence have been considered to be synonymous

with P. cryptogea.

b) Mycelial growth and sporangial formation

Two media were used :

1.Corn meal agar (CMA) (Oxoid, 17g/L). This medium is particularly

suitable for the production of coralloid hyphae in some Phytophthora species.

For example, during this study it was noticed that the mycelial structure of

P. cinnamomi can vary considerably between isolates and also with the type

of substrate used but tends in most cases to produce a coralloid type of growth

on CMA. Moreover, because the aerial mycelium of most Phytophthora species

on this medium is usually lacking or very poor, this enables a clear vision of the

colony by direct microscopical examination of the cultures in the plates.

2. 2% V-8 juice agar (Uncentrifuged, pH 4.5). This medium, like CMA,

enables a direct examination of cultures under the microscope and is also very

good for the production of chlamydospores, sporangia and oogonia. Moreover,

none of the present keys for the genus Phytophthora has been based on this

medium.

For each isolate on each medium, three plates were used. They were inocula-

ted centrally with a disc of agar np d nee en

darkness at 25° + 1°C. They were examined every two days during which

time they were exposed to room light.

To induce the formation of sporangia, 3 plates for each Phytophthora isolate

Source - MNHN. Paris

TABLE 1. List of isolates of Phytophthora used

Culture Species Mating Area of origin Donor Host

No. type association

8 P. cinnamomi — Al Ourimbah, N.S.W. Author E. saligna

36 4 A2 Eden, N.S.W. Author E. sieberi

эз ү А2 Sunny Corner, N.S.W.Author P. radiata

102 3 A2 Madden's Plain, Author E. gumi fera

N.S.W.

51 T A2 Wyong, N.S.W. Author E. paniculata

103 x A2 West Pennant Author E. pilularis

Hills, N.S.W.

DAR m A2 Mt. Kuringai, Walker Pimelea rosea

19881 N.S.W.

DAR » A2 Kenthurst, N.S.W. J. Walker Aetiridia

25999 ehinensis

T240 D A2 Waterfall Bay, F. Podger E. obliqua and

Tas. Pultenea

3477 » A2 Kuranda, Qld. B. Bron Rainforest soil

3392 * Al kuranda, Qld. B. Brown Rainforest soil

sc 50 e AL Manjimup, W-A. J. Titze Unknown

sc 90 ` A2 Kirrup, W.A. J. Titze E. marginata

S 111 P. drechsleri A2 Unknown, N.S.W. J. Shepherd Unknown

S 121 P. cryptogea A2 Adelaide, S.A. J. Shepherd Garden soil

31 2 A2 Gerringong, N.S.W. Author P. radiata

91 ш A2 Sunny Corner, N.S.W.Author P. radiata

104 v - West Pennant Hills, Author E. pilularis

ч.з.н.

105 = A2 West Pennant Hills, Author E. piluldris

N.S.W.

»7 A2 Adelaide, S.A. M. Bumbieris Garden soil

DAR P. drechsleri - Glen Innes, N.S.W. J. Walker Carthamus

17095 tinetoris

DAR P. cryptogea - Adelaide, S.A. J. walker Malus

24233 sylvestris

S 104 P. cambivora Al Unknown J. Shepherd Unknown

5 107 ei A2 Perth, W.A. 3. Shepherd Malus

aylvestris

#2 $ Al Wallaroo, N.S.W. Author E. paniculata

WA 1390 * Al Perth, W.A. R.F. Doepel Pyrus communis

=: Did not form oogonia.

Source : MNHN. Paris

142 L.GERRETTSON-CORNELL

of 1 week old colonies on 2% V-8 agar flooded with glass distilled water. Young

cotyledons of Eucalyptus sieberi L. Johnson, surface sterilized with 70% ethanol

for 5 to 10 seconds and then rinsed in sterile distilled water, were used. They

were floated on the water with which cultures had been flooded. These plates

were then covered with their lids and incubated at room temperature (18-30°C),

under a 40 W Grolux lamp. This new method for inducing sporangia formation

is the author’s adaption of the technique of MARKS and KASSABY (1974)

for the isolation of P. cinnamomi from soil. It has proved extremely reliable

provided the following conditions are observed :

- The test ds made at temperatures above 16°C, and preferably between

20° and 25°C, either under a Grolux lamp or in a room with natural lighting

plus 40 W, 3500 K fluorescent lamps. Exposure to light is either constant

or for 8-10 hours a day.

- Not less than 10-15 cotyledons per plate of ca. 9cm in diameter should

be used.

- Young cotyledons, preferably between 2 and 3 weeks of age are used, At

the third to fourth week and particularly at the appearance of the first pair

of leaves, the formation of sporangia may be markedly reduced, or ceases

altogether,

- It may happen, sometimes, that the water in the plates stagnates which

may inhibit the formation of sporangia. It is advisable in that case to change

the water a couple of times after 24-36 hours from the beginning of the expe-

riment.

The formation of sporangia for all isolates of Phytophthora tested was

preceded by colonization of the tissues of the host cotyledons by the mycelium

and a concomitant, gradual change in colour of the underside purple colour

of the leaves to green in 1 to 3 days.

c) Terminology

BLACKWELL's (1949) terminology has been used with some minor addi-

tions, as follows :

-Swollen hypha. It is an hypha or part of it, usually a long segment that

is markedly enlarged. It may either be uniformly or irregularly enlarged (GER-

RETTSON-CORNELL, 1979). In this category, the large branches of swollen

coralloid hyphae (fig. 1 and 2) are also included.

- Coralloid hypha. Coralloid hypha are generally branches of first and second

order and are irregularly shaped. A mycelium is coralloid if it is formed preva-

lently coralloid hyphae, either with or without swollen hyphae. Coralloid

hyphae may be single in which case they may be either alternate or opposite

or be arranged in verticils on the bearing hypha.

Coralloids hyphae may bear one and even more swelling and/or chlamydo-

spores.

- Swelling and chlamydospore. A swelling is a comparatively small portion

Source - MNHN. Paris

PHYTOPHTHORA FROM AUSTRALIA 143

of an hypha which is markedly enlarged to form a globose, subglobose, or irre-

gulaly shaped body. It cam be either sessile, terminal or intercalary, single

or in clusters. P. cinnamomi, particularly on V-8 agar, produces botryose, thin-

walled, greyish to yellow-brownish swellings, either globose, subglobose or

irregularly shaped. It is often difficult to distinguish these from the chlamy-

dospores. Chlamydospores have a septum or septa (if they are intercalary)

which separates them from the bearing hypha but this is not always easy to see.

d) Period of observation

Results of this study were collected over a period of observation of 2 weeks.

RESULTS

Mycelium

On CMA all cultures of Phytophthora exhibited a type of mycelium growth

eminently submerged into the agar with nil or very poor aerial mycelium.

Colonies of P. cinnamomi on this medium were entirely or almost entirely

coralloid. Colonies of P. cambivora were similar to P. cinnamomi although

they formed more swollen hyphae which were clustered at the edge of the

colonies or within 2-3cm round the inoculum. Large branches of markedly

swollen coralloid hyphae were observed in all isolates of P. cambivora (fig. 1,

2), In the past, the author has also observed a few of these formations in some

isolates of P. cinnamomi from Eden, N.S.W. The mycelium of P. cryptogea

was composed entirely or almost entirely of tubular hyphae, However, isolates

5121 and 104 showed the presence of many coralloid hyphae, particularly

round the inoculum,

Terminal and/or sessile swellings were numerous in P. cinnamomi but they

also occured to a lesser extent in P. cambivora and there were a few in two

isolates of P. cryptogea. A few, small clusters of intercalary swellings of the

net-like type of configuration (WATERHOUSE, 1963) were seen in four cultures

of P. cryptogea, Very few chlamydospores were formed by all isolates of P.

cinnamomi and none by P. cryptogea and P. cambivora. Neither sporangia nor

organs of fusion were formed by these Phytophthora species on corn meal

agar.

The results of the microscopical examination of 2-week-old cultures on

V-8 agar (Table 2) showed that all isolates of P. cinnamomi formed abundant

botryose swellings and chlamydospores (fig. 3, 4) whereas these were not obser-

ved în P. cryptogea and P. cambivora. Hence growth on V-8 constitutes an

important test for the identification of Phytophthora.

Table 2 also includes the mean diameter and range of the chlamydospores

of P. cinnamomi based on samples of 50 chlamydospores for each isolate.

By analysis of variance some of these values were found to be significantly

different at the 1% level which may indicate real difference among isolates

Source : MNHN, Paris

144

L. GERRETTSON-CORNELL

TABLE 2 Mycelium characteristics on 2% V8 agar

ar cag r сї cla (m) Sp оғ

P. cinnamomi

85e c ун ++ 2707-53) - -

36 MEO oe ++ 3108-51) = =

DN uc ** — 3300-56) = =

102 E ++ 37(22-59) - =

ы ж # + 35(18-49) - -

103 т ehe ЖЕ + 31(15-48) - =

DAR 19881 ++ + ++ + 44(22-55) = =

DAR 259899 a ++ ++ * — 3305-48) = -

тю ++ + ++ ++ з4(15-55) - -

мт о + + + ++ 41(16-66) - =

asi 4 LUS ++ 41(22-59) - -

SOSO ж + + + 34(15-48) E E

D. MUN E EE = 35(22-48) - -

P. eryptogea

ЕТК зро = z - Е

Ban = - - - -

31 + ES - = = -

iM eaten cm = = = 5

104 NODE 3 = - Е

105 на = - 2 - -

BTE Fa E S + ls

DAR 17095 + o E Е е o

DAR 24233 + re = = - =

P. cambivora

514 + + + - B - -

8107 re = - - *

82 SÉ cel A - Е - -

мА 1390 ++ ++ + - - - -

- : none observed : scarce

++ + abundant SH : swollen hyphae S : swellings

CH : coralloid hyphae : ántercalary

T : terminal and/or sessile Sp : sporangia

Cl : chlamydospores

Cld: chlamydospores dimensions

Of : organs of fusion

Source : MNHN. Paris

PHYTOPHTHORA FROM AUSTRALIA

145

regarding this particular characteristic, This fact shed further doubt on the value

of the character «size» in identification of species. Sporangia and oogonia

were not formed by most isolates of Phytophthora on V-8 agar over the period

of observation, Only one isolate of P. cryptogea (P 7) formed 4 sporangia.

TABLE 3. Morphological characteristics on 24 V-8, under water and sporangia

production by the cotyledon method

Sporangia

formation

Sporophore bxanching — Intercalary

swellings

Chlamydospores

Р. cinnamomi

102

103

DAR 19881

DAR 25999

7240

3477

3392

sc50

sc90

P. eryptogea

sni

5121

104

105

ъ7

DAR 17095

DAR 24223

P. eambivora

s104

5107

WA 1390

m TT

- to +

= to +

A: Sporophore unbranched

C: Proliferation through the empty sporangium.

none observed

scarce

sympodial branching

++: abundant

Source : MNHN, Paris

146 L. GERRETTSON-CORNELL

Sporangia

All isolates of Phytophthora in this study formed abundant sporangia on

eucalypt cotyledons and surrounding agar. P. cryptogea produced them more

rapidly and in the greatest quantity.

In P, cryptogea and P. cambivora, at the edge of cotyledons, large clusters

of intercalary swellings of the net-type of configuration were also formed

(fig. 5, 6,7, 8). The diameter of these swellings reached 31m. These formations

in the two species looked exactly the same. A few (3) swellings in $121 and

$ 107 exhibited dividing septa and have by definition to be regarded as chlamy-

dospores. Isolate WA 1390 differed from the other isolates of this species in

that it formed only one group of intercalary swellings on one plate. The simi-

larity between P. cryptogea and P. cambivora with regard to this characteristic

has already been reported (GERRETTSON-CORNELL, 1979). Under the

conditions of the experiment, P. cinmamomi formed large clusters of botryose

swellings and chlamydospores. On one occasion however a net-like type of

configuration was observed inside one of these large groups. It was clearly

observed to have originated by proliferation from each single swelling or chlamy-

dospore rather than being an enlargement at more or less regular intervals of

the same hypha.

Sympodial branching of the sporophore from below and proliferation through

the empty sporangium were observed in most isolates of Phytophthora. Of

the sympodial branching both close and the lax type occured, the close type

being more frequently observed in P. cryptogea. The close type also occurred

in P. cinnamomi and P. cambivora. In isolate 3477 (P. cinnamomi from Queens-

land) no branching of the sporophore was ever seen. As Table 3 clearly indicates,

branching of the sporophore cannot be regarded as a distinctive character

of identification.

Results of this work do not seem to be consistent with NEWHOOK’s et al.

(1978) new key of the genus Phytophthora on this particular aspect.

One hundred sporangia were selected for measurement from each isolate

of Phytophthora. The dimensions of these sporangia are presented in Table 4.

There were no data for isolate S 107 since this fungus died and could not

be replaced. However, it had previously been observed to be able to form spo-

rangia with the cotyledon method and large clusters of intercalary swellings.

Sporangia of all isolates of Phytophthora of this study were non-papillate

(< 24m) and had a wide pore (> 7um).

The analysis of variance of the sporangial parameters showed the existence

of highly significant (p > 0.01) difference between and within each species

of Phytophthora for these characteristics. Variation in size was also observed

in one isolate of P. cambivora whose sporangia were subsequently found to

measure 38 x 27um and 74 x 50um. This seems to be consistent with the sugges-

tion of BUMBIERIS (Pers. Comm.) that the first sporangia formed are some-

times different in size from those produced later. Further, the conditions of

Source - MNHN. Paris

TABLE 4. Mean value and range of length, breadth, Length/Breadth, and

pore diameter of the Sporangia of Phytophthora.

Species Isolate Length Breadth ув Роге diameter

но. в) (в) mei

(um) Gum) (um)

Р. cinnamomi 8 50 35 1.4 9

(24-82) (21-48) (1.1-2.1) (5-12)

36 52 35 1.5 9

(22-92) (18-53) (1.2-1.9) (5-15)

93 45 31 L5 10

(24-89) (17-56) (1.1-1.8) (7-15)

102 ei 46 T3 10

(40-73) (33-55) (1.1-1.8) (6-15)

51 52 39 1.3 10

(33-62) (26-51) (1.2-1.7) (5-15)

308 57 46 1.3 10

(26-73) (22-55) (1.1-1.7) (5-15)

DARI9881 62 аз 1.4 12

(29-81) (27-55) (1.1-2.1) (5-18)

DAR25999 55 39 1.4 9

(40-77) (27-5) (1.1-2.3) (4-15)

7240 54 38 1.4 10

(37-81) (26-55) (1.2-1.8) (7-15)

ЗАЛ Тот 38 1.4 10

(31-62) (29-62) (1.2-1.6) (5-15)

3392 57 43 1.3 10

(48-70) (33-53) (1.2-1.5) (6-15)

sc50 48 33 1.5 10

(31-71) (26-44) (1.1-2.2) (5-15)

sc90 56 38 ET 10

(37-77) (26-48) (1.2-1.7) (6-15)

P. eryptogea sin 49 36 1.4 9

(27-65) (22-45) (1.1-1.5) (в-12)

5121 48 зі 1.6 ii

(37-66) (22-38) (1.1-2.2) (8-15)

зї 47 32 23 9

(33-73) (26-40) (1.1-2.5) (5-15)

91 49 33 qus. 9

(26-66) (15-44) (1.1-2.0) (ay

104 50 34 255 10

(34-62) (22-44) (1.2-1.8) (8-12)

105 50 38 1.3 10

(26-62) (18-48) (1.1-1.6) (6-15)

»7 51 37 1.4 10

(44-66) — (26-44) (1.1-1.8) (5-13)

DAR17095 47 29 n aa

(29-70) (18-40) (1.1-2.6) (5-18)

DAR24233 52 37 1.4 10

(40-66) (29-4) (1.2-1.7) (5-15)

P. cambivora 5104 47 зї 1.5 10

(22-63) (17-41) Q.2-2.3) (7-14)

82 74 50 1.5 34

(48-95) (33-66) (1.2-2.0) (11-18)

WA1390 55 42 1.4 13

(44-77) (29-55) (1.1-1.7) (9-18)

Source - MNHN. Paris

148 L. GERRETTSON-CORNELL

experiment influence enormously the character size (LEONIAN and GEAR,

1929; TUCKER, 1931; CHITZANIDIS and KOUYEAS, 1970). Sporangia

of all isolates of P. cinnamomi, P. cryptogea and P. cambivora in this study

were non caducous and exhibited mo pedicel or this was irregular and very

difficult to measure, Of these two characters, sporangium caducity would seem

to be more stable a character than pedicel length. On the other hand AL-HEDAI-

THY & TSAO (1979) in a study with isolates of 7 species of Phytophthora

including P. cinnamomi, clearly showed that the degree of caducity alone

has questionable diagnostic value and that it should be determined only if

both the degree of caducity and uniformity in pedicel length are considered.

Sporangial germination

Over the period of observation (4-5 days from the moment cotyledons were

floated on the water covering the cultures) only the indirect type of germination

of the sporangium (i. e. by zoospores) was observed for P. cinnamomi and P.

cambivora. In P. cryptogea the indirect type was also frequent but some spo-

rangia (particularly those with a vacuole) exhibited the direct germination, i. e.

by germ tube, No vacuolated sporangia were seen to form zoospores which is

consistent with previous findings (GERRETTSON-CORNELL, 1979). P. crypto-

gea showed four different types of zoospore release, Zoospores were formed

most frequently within the sporangium and spewed out singly, in rapid succes-

sion. Quite often, as already observed in P. cinnamomi from Ourimbah State

Forest (GERRETTSON-CORNELL, 1973), the sporangium expelled the whole

protoplasm as a shapeless mass which broke into single units immediately

after release. Less frequently the protoplasm was held at the mouth of the spo-

rangium for a few seconds; from this, small portions of protoplasm separated

in regular succession from it and gave rise to one or even two zoospores. On

other occasions the sporangium expelled the protoplasm as a whole mass of

individualised cells and this moved around until it broke into groups of elements

stuck together and eventually into single units (GERRETTSON-CORNELL,

1979). On one occasion, three minutes elapsed from the moment this mass

was ejaculated and its breakup into single zoospores. In P. cinnamomi, the first

two types of zoospore formation were most frequently observed but the other

two also occured. The second and third methods seemed to occur more fre-

quently in P. cambivora.

Shape of the sporangium

Some of the final conclusions of a study designed to assess the importance

of this character in the identification of Phytophthora spp. (GERRETTSON-

CORNELL, 1980) are summarized. This work showed that although the pre-

sence of certain sporangial shapes can be more indicative of some species of

Phytophthora than others, the same shapes can be found in the latter although

to a lesser extent, Moreover, there are shapes which are common to the three

species P. cinnamomi, P. cryptogea and P, cambivora. Consequently the spo-

rangial shape cannot be considered a character of primary importance in the

identification of Phytophthora but only as a supplementary test.

Source - MNHN. Paris

PHYTOPHTHORA FROM AUSTRALIA 149

DISCUSSION

This study has shown the existence of some variability among isolates of the

same species of Phytophthora for a few characteristics such as the size of the

sporangia, the presence or absence of swellings. In general however, there was

reasonable uniformity within each species. For example, on CMA all isolates

of P. cinnamomi had a mycelium almost entirely coralloid. Other examples,

under the experimental conditions, were the general lack of chlamydospores

in P. cambivora and P. cryptogea on CMA and V-8 agar and the prevailing

incapacity to form oogonia homothallically, consistently with other people's

work (TUCKER, 1931; FREZZI, 1950; GRENTE, 1961; WATERHOUSE,

1963). This study also confirmed the occurence of homothallism in P. cambi-

vora, in the same isolate A2 already described (GERRETTSON-CORNELL,

1977).

Formation of intercalary swellings in large clusters of a net-type configuration

at the edge of cotyledons under water was confirmed in all isolates of P. cambi-

vora, These swellings were identical to those formed by P. cryptogea.

For the first time, intercalary swellings were also observed within the bo-

tryose clusters of swellings in P. cinnamomi.

Colonies of P. cinnamomi and P, cambivora on CMA appeared very similar.

The scanty aerial mycelium was formed from a few tubular hyphae whereas

the substrate mycelium was coralloid. That of P. cambivora was formed of more

flexuous hyphae and exhibited clusters of «markedly» swollen coralloid hyphae.

However these may also be found in certain isolates of P. cinnamomi. More

definite differences between P. cinnamomi and P. cambivora resulted on 2%

V-8 agar where all isolates of P. cinnamomi produced botryose, yellowish-

brownish thin-walled swellings and/or chlamydospores whilst P. cambivora

could only form, at times, a few, sparse hyaline-greyish swellings.

The mycelium of P. cryptogea on CMA varied from being formed almost

exclusively of tubular hyphae or tubular hyphae with some coralloid hyphae.

On V-8 agar, the hyphae were prevalently tubular. The presence of few, small

clusters of intercalary swellings (in some isolates), the constant absence of

porangia and oogonia, on solid media, the formation at times of few sporangia,

sparsely, non papillate, often with a central vacuole may be indicative of this

species of Phytophthora. All isolates of P. cryptogea under water and in the

presence of cotyledons were characterised by a «rich» production of clusters

of intercalary swellings.

CONCLUSIONS

The morphology of the isolates of Phytophthora has been determined and

despite the limitations imposed by the small number of P. cambivora examined,

the following characteristics under the experimental conditions used are consi-

Source : MNHN, Paris

150 L. GERRETTSON-CORNELL

dered to be of primary importance for the identification of P. cinnamomi,

P. cryptogea and P. cambivora :

1, Prevailing heterothallism, amphigenous antheridium and a prevailing

lack of sporangia on solid media.

. The oogonium wall, either smooth or bullate.

3. Lack of a papilla in the sporangium, i. e. apical hyaline thickening < 3-

3,5um thick.

4. Pore diameter > 7m,

5, Sporangia non deciduous,

6. Ability to form botryose swellings or intercalary swellings directly on

solid media or in the presence of water.

7. Presence or absence of chlamydospores.

The following characteristics are considered to be of lesser importance

and are used as a supplementary test.

1. The texture of the mycelium on CMA.

2, The presence of particular predominant sporangial. shapes and the fre-

quency by which they occur.

Minimal taxonomical importance is attributed to the size of the sporangia

because of their variability. Similarly, the branching of the sporophore and

the method of release of the zoospores are features which appeared to be too

erratic to be of any taxonomical value for the identification of these Phytoph-

thora spp.

Under the conditions of experiment and by combining these observations

on CMA and V-8 media with those of WATERHOUSE (1963), the following

key for the identification of P. cinmamomi, P. cryptogea and P. cambivora

is suggested.

KEY

Sporangia and oogonia usually not formed in single culture, Sporangia formed

in the presence of liquid media, non-papillate (papilla < 3-3,5 um), pore size

> Tym, non-deciduous, Oogonia formed heterothallically, antheridium

always amphigynous.

- Sparse (sessile or terminal) and «botryose» swellings, and chlamydospores

formed. Mycelium chiefly coralloid on CMA..........- P. cinnamomi

Botryose swellings not formed, chlamydospores not formed.

Bullate as well as smooth oogonia formed in paired cultures with P, |

cambivora and P, parasitica, in particular. Mycelium, on CMA, rich |

in swollen, either coralloid or not, hyphae, Net-like clusters of inter-

calaty swellings may be formed under water with or without cotyle- |

dons. Some sessile and/or terminal swellings may be present. Sporan- |

gia may exhibit a «markedly» round apex, they may even be conical

EE ER P. cambivora

Source : MNHN, Paris

PHYTOPHTHORA FROM AUSTRALIA 151

- Mycelium composed of tubular hyphae with or without coralloid hy-

phae. Net-like clusters of intercalary swellings formed with and (but

only at times) without water. Sporangia readily formed under water,

either obpyriform and/or of various other shapes, often vacuolated. .

ER, Reg MOB Res ee cet А re 1 ae a P. cryptogea

Compared with WATERHOUSE (1963), the above key has the advantage of

not using the character «size» of the sporangia as a preliminary and important

discriminatory test. Further it refers to specific conditions of experimentation

and includes some additional characteristics such as the ability of some isolates

of P. cambivora on V-8 to form intercalary swellings under water with cotyle-

dons (and even without in some cases). Larger variation in the branching of the

sporophore was observed than that described by WATERHOUSE (1963) for

the above three species of Phytophthora.

P. cinnamomi form oogonia when paired with the opposite compatibility

type as well as with P. cambivora and P. cryptogea. Bullate oogonia in P. cambi-

vora are formed, besides with its opposite type, by pairing it with P. parasitica

and P. cinnamomi (WATERHOUSE, 1954, 1963; GRENTE, 1961; CHITZANI-

DIS and KOUYEAS, 1970; SHEPHERD, 1978 a, b). P. cryptogea yields oogonia

with its opposite compatibility type and with P. cinmamomi Al and A2. In

particular the work by SHEPHERD (1978a, b) provided detailed information

on the mating behaviour of Australian isolates of Phytophthora.

This study has shown the immense difficulty of identifying P. cambivora

when there is no possibility of mating it, and its identity could only be suspected

from the general description of the mycelium. Furthermore P. cambivora show-

ed to be closer to P. cryptogea than to P. cinnamomi. For example, they both

failed to form chlamydospores and the typical botryose swellings of P. cinna-

momi. At the same time both species were able to produce intercalary swellings

in net-like structures. Other similarities between these two Phytophthora species

with regard to the shape of the sporangium were observed (GERRETSSON-

CORNELL, 1980).

There is chaos to some extent in the genus Phytophthora. WATERHOUSE’s

Key (1963), although of great importance in the past, suffers from some limi-

tations in certain groups such as Nos 5 and 6. FREZZI’s (1950) key, although

more precise, is based only on 12 species of Phytophthora. The absence of

species such as P. cambivora in it limits its application. Furthermore the exis-

tence of isolates with characteristics of one, two and even three species of

Phytophthora recently established by the author in Australia adds new confu-

sion to that already existing. These could be hybrids or even different strains

of the same species or indicate that different sorts of grouping rather that the

present scheme based on species alone could be adopted.

Source : MNHN, Paris

152 L.GERRETTSON-CORNELL

ACKNOWLEDGEMENTS

The author is indebted to Messrs. John WALKER, Biological and Chemical Research

Institute, Rydalmere, N.S.W., D.W. EDWARDS, Group Leader, Biology and Mrs Marcia

LAMBERT, Chemistry Section for helpful comments on this paper.

Mrs. Anne MUSH is also acknowledged for her statistical work. Those who gave isolates

of Phytophthora and whom are listed in Table 1, are also kindly acknowledged.

BIBLIOGRAPHY

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Source : MNHN. Paris |

PHYTOPHTHORA FROM AUSTRALIA 153

Fig. 1, 2: Phytophthora cambivora : clusters of swollen coralloid hyphae, x 275 and

440. Fig. 3 : Р. cinnamomi : botryose swellings and chlamydospores, x 250. Fig. 4:

2 cinnamomi : chlamydospores and «small» botryose swellings, x 125

Source : MNHN, Paris

154 L. GERRETTSON-CORNELL

Fig, 5, 6: P. cryptogea : intercalary swellings, x 440 and x 275. Fig. 7, 8: P. cambi

vora : intercalary swellings, x 440.

Source : MNHN, Paris |

155

L'APPAREIL APICAL DE DEUX DIATRYPALES :

ÉTUDE ULTRASTRUCTURALE

par A. PARGUEY-LEDUC et M.C. JANEX-FAVRE*

RÉSUMÉ. — Chez le Diatrype disciformis et le Diatrypella quercina l'appareil apical des

asques est essentiellement constitué par un dóme apical. Dans son pendentif se différencie,

chez le Diatrype disciformis, un anneau inférieur (— anneau du pendentif). Celui-ci est

absent chez le Diatrypella quercina qui possède, par contre, dans le sommet de son épi-

plasme, un tractus constitué par un faisceau divergent de fibrilles groupées par deux

et rattaché à sa partie supérieure à un corps sous-apical.

ABSTRACT. — In Diatrype disciformis and Diatrypella quercina the apical apparatus

of asci is mainly constituted by a well developed apical dome. A lower ring (= anneau

du pendentif) differentiates in Diatrype disciformis; it lacks in Diatrypella quercina. The

latter species possesses in the upper epiplasm an apical tractus which is composed of diver-

gent paired fibrils and connected to a «corps sous-apical» at the top.

Chez les Pyrénomycétes à asques unituniqués, CHADEFAUD (1960) recon-

naît sept ordres: les Glomérellales, sans anneau différencié, les Diaporthales,

Sordariales et Nectriales, à anneau non amyloide, et les Diatrypales, Xylariales

ct Hyponectriales, à anneau au contraire amyloïde,

D'après les observations effectuées en microscopie photonique (CHADE-

| FAUD, 1942, 1957; PARGUEY-LEDUC, 1970), l'appareil apical des asques

| des Diatrypales est essentiellement composé d'un dôme apical, qui se prolonge

| vers le bas par un pendentif creux où peut se différencier un anneau amyloïde (=

| anneau inférieur). La partie sommitale de ce dôme forme un coussinet apical,

plus ou moins épais et différencié; au-dessous, sa partie axiale constitue un

| manubrium. Vers le bas un corps ombiliqué peut être enchâssé dans ce manu-

* Université Pierre et Marie Curie, Laboratoire de Cryptogamie, 9, Quai Saint-Bernard,

75005 Paris,

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog. mycol) TOME 1 (1980).

Source - MNHN. Paris

156 A.PARGUEY-LEDUC & M.C. JANEX-FAVRE

brium. Au sommet de l'épiplasme peuvent se différencier un corps sous-apical

puis un tractus le reliant aux ascospores.

En microscopie électronique*, à notre connaissance, l'appareil apical d'une

seule espèce, le Quaternaria quaternata, a été jusqu'ici étudié (GRIFFITHS,

1973). Cet auteur décrit, au sommet de l'asque, un épais disque de substance

granuleuse dense aux électrons qui se prolonge vers le bas par un anneau éga-

lement granuleux mais encore beaucoup plus dense; une formation claire et

granulo-fibrilleuse en forme de croissant coiffe une évagination épiplasmique.

D'aprés leur disposition, nous pensons pouvoir interpréter le disque de ce Qua-

ternaria comme un dóme apical et son anneau comme l'anneau inférieur (= ап-

neau du pendentif) de l'appareil apical des Annellascés (PARGUEY-LEDUC et

CHADEFAUD, 1963; PARGUEY-LEDUC, 1977); enfin, la formation en crois-

sant peut correspondre au corps ombiliqué reconnu en microscopie photonique.

1l nous a paru utile de compléter l'étude des asques des Diatrypales en micro-

scopie électronique en examinant ceux de deux espèces : le Diatrype disciformis

(Hoffm. ex Fr.) Fr. et le Diatrypella quercina (Pers.) Nke.

I. L'APPAREIL APICAL DES ASQUES DU DIATRYPE DISCIFORMIS

Cette espéce posséde des asques longuement pédicellés, dont la partie sporale

ne dépasse pas 25-35 x 4-Sum, ce qui rend l'observation de l'appareil apical

particulièrement délicate en microscopie photonique. Cela explique les inter-

synthétique. ai: anneau inférieur (— anneau du pendentif); cl: couronne épiplasmique

latérale; cm: évagination épiplasmique médiane; co: corps ombiliqué; cs: coussinet

apical; da : dôme apical; e: épiplasme; en: endoascus; ex: exoascus; p: pendentif; pl:

plasmalemme; pmb: pseudo-manubrium.

* Nous avons plaisir à remercier N. JAMPSIN et C. FOURNIGAULT pour leur efficace

collaboration technique.

Source : MNHN, Paris

L'APPAREIL APICAL DE DEUX DIATRYPALES 157

prétations différentes qui ont pu en étre données (CHADEFAUD, 1942, 1957;

SCHRANTZ, 1960).

D'après nos propres observations, le Lugol colore légèrement en bleu un très

mince anneau, qui est donc faiblement amyloïde, et l'encre Waterman colore

nettement le manubrium, situé au-dessous, et qui est donc de nature chitinoide.

En microscopie électronique (schéma A et fig. 1) sont reconnaissables :

1) L'anneau apical: de texture granuleuse et très opaque aux électrons

il est nettement distinct, et situé entre l'évagination épiplasmique médiane

(em) et la couronne épiplasmique latérale (el). Il est bordé extérieurement par

Fig. 1. — Coupe longitudinale du sommet d'un asque de Diatrype disciformis. (fixation

glutaraldéhyde post-osmié; coupe contrastée par l'acétate d'uranyle et le citrate de

plomb). Échelle : 0,5 4m

Source : MNHN, Paris

158 A. PARGUEY-LEDUC & M.C. JANEX-FAVRE

le pendentif (p) et représente donc uniquement l'anneau inférieur (ai) (= anneau

du pendentif

2) Les formations du dôme apical: particulièrement volumineuses, elles

comprennent :

a) un coussinet apical (es) fibrillo-granuleux, situé à la partie supérieure, immé-

diatement sous l'exoascus (ex);

b) le dôme apical proprement dit (da) lâchement fibrilleux, au-dessous. Sa partie

inférieure forme le pendentif (p) qui est en continuité avec l'endoascus

(en) et contient l'anneau;

Fig. 2. — Coupe longitudinale d'un asque à sommet invaginé de Diatrype disciformi

(fixation: glutaraldéhyde post-osmié; coupe contrastée par l'acétate d'uranyle et le

citrate de plomb). Échelle : 0,5 Um

Source : MNHN, Paris

L'APPAREIL APICAL DE DEUX DIATRYPALES 159

c) une cloche (apparaissant en forme de croissant en coupe), à texture

leuse relativement dense. Cette cloche est suspendue à la partie inférieure

du dóme apical par des fibrilles divergentes et son bord, aminci, tend à

s'appliquer contre la face interne de l’anneau. Cette formation représente un

pseudo-manubrium, tel que nous l'avons défini en 1979;

4) un corps ombiliqué, clair, logé dans la partie interne du pseudo-manubrium

et coiffant l'évagination épiplasmique médiane.

Dans certains asques, cette évagination est remplie par une substance trés

dense aux électrons englobant une vacuole autophagique; cette formation

correspond peut-être au corps sous-apical, mieux différencié encore chez le

Diatrypella quercina étudié plus loin.

Nous avons pu fréquemment observer des asques à sommet invaginé (fig. 2).

En réalité, il ne s’agit pas d'une véritable invagination: en effet, le volume du

dóme apical demeure inchangé et c'est l'extrémité de la paroi ascale qui se déve-

loppe progressivement vers le haut, en dépassant largement le sommet du dóme

au stade final.

II. L'APPAREIL APICAL DES ASQUES DU DIATRYPELLA QUERCINA

En microscopie photonique, cette espèce a été étudiée de façon précise par

CHADEFAUD (1957, 1960), qui reconnait dans l'appareil apical de ses asques

les formations suivantes :

- un coussinet apical;

-un manubrium bien développé, qui le prolonge vers le bas et enserre dans

sa base un corps ombiliqué;

-un corps sous-apical, logé dans la partie sommitale de l’épiplasme axial

et prolongé vers le bas par un tractus rattaché à la première ascospore. De

plus, les bords du dóme apical forment des replis internes. La coloration

par le Lugol ne révéle pas la présence d'un anneau.

En microscopie électronique sont reconnaissables (schéma B et fig. 3) :

1) Les formations du dôme apical :

a)un coussinet apical (cs) à texture réticulée, irrégulièrement délimité par

un exoascus (ex) très mince;

b) le dóme apical proprement dit (da) qui lui fait suite vers le bas. En forme

de cylindre plein dans sa moitié supérieure, il est évidé en son centre dans

sa moitié inférieure. Celle-ci, logée entre l'évagination épiplasmique médiane

(em) et la couronne épiplasmique latérale (cl) constitue le pendentif (p).

Le dôme apical présente une texture homogène : il est dans sa totalité cons-

titué par des fibrilles disposées en strates horizontales irrégulières.

Il est à remarquer que dans le dôme apical proprement dit et dans son pen-

dentif, aucune substance dense aux électrons ne se dépose sur les fibrilles et

qu’en conséquence il ne se différencie ni anneau supérieur ni anneau inférieur.

Source : MNHN Paris

160 A. PARGUEY-LEDUC & M.C. JANEX-FAVRE

Schéma B. — Coupe longitudinale du sommet d'un asque de Diatrypella quercina : schéma

synthétique, asp: ascospore; c: corps sous-apical; cl: couronne épiplasmique latérale;

cm: évagination épiplasmique médiane; co: corps ombiliqué; cs: coussinet apical; da:

dóme apical; e: épiplasme; en: endoascus; ex: exoascus; pl: plasmalemme; pmb: pseudo-

manubrium; t: tractus.

c) un pseudo-manubrium (pmb) en forme de cloche, à texture réticulée.

2) Les formations annexes de l'appareil apical Dans le sommet de l'épi-

plasme on reconnaît, comme chez le Diatrype disciformis, une couronne latérale

(cl) et une évagination médiane (cm). Celle-ci est occupée par un corps sous-

apical (c) semi-globuleux particulièrement dense aux électrons et contenant

une vacuole autophagique. Ce corps est en continuité avec le plasmalemme.

Vers le bas, il se prolonge par un tractus (t) complexe, formé de fibrilles grou-

pées par deux, très denses aux électrons. Ces fibrilles apparićes se divisent

plusieurs fois; leurs rameaux divergent dans l’épiplasme sommital et se terminent

en général au niveau de la première ascospore.

Fig. 3. — Coupe longitudinale du sommet d'un asque de Diatrypella quercina. (fixation :

glutaraldéhyde post-osmié; coupe contrastée par l’acétate d’uranyle et le-citrate de

plomb). Échelle : 0,5Um.

Source : MNHN Paris

L'APPAREIL APICAL DE DEUX DIATRYPALES 161

Source : MNHN, Paris

162 A.PARGUEY-LEDUC & M.C. JANEX-FAVRE

III. DISCUSSION ET CONCLUSIONS

Les asques des trois espéces de Diatrypales observées en microscopie élec-

tronique (Quaternaria quaternata, GRIFFITHS, 1973, Diatrype disciformis

et Diatrypella quercina) présentent des appareils apicaux trés comparables.

Les formations du dóme apical y sont prépondérantes. Le coussinet apical

présente une texture semblable chez les trois espèces. Le dôme apical propre-

ment dit, de forme identique, montre par contre une texture différente : granu-

leuse chez le Quaternaria, fibrillo-granuleuse chez le Diatrype et fibrilleuse,

avec une stratification horizontale irrégulière, chez le Diatrypella.

De plus, l'anneau inférieur, différencié dans le pendentif chez le Quaternaria

et le Diatrype, fait défaut chez le Diatrypella. Chez cette espéce en effet n'est

visible, à l'emplacement potentiel de cet anneau, que la matrice qui devrait

recevoir les dépôts.

Ainsi les observations en microscopie électronique permettent de mieux

comprendre l'organisation de l'appareil apical du Diatrype disciformis et du

Diatrypella quercina. La volumineuse masse sommitale interprétée comme un

manubrium (CHADEFAUD, 1957 et 1960; SCHRANTZ, 1960) est en fait

le dome apical. En effet, sa structure est identique à celle du pendentif, nette-

ment identifiable, qui lui fait suite vers le bas. Le pseudo-manubrium est, au

contraire, réduit à sa partie inférieure et ne perfore pas le dôme de bas en haut,

comme nous l'avions vu précédemment chez le Coniochaeta ligniaria (PARGUEY-

LEDUC et JANEX-FAVRE, 1979). Enfin, les replis des bords du dóme apical,

observés en microscopie photonique, n'ont pas été retrouvés en microscopie

électronique.

Par contre, les trois espèces étudiées présentent, comme cela avait déjà été

vu en microscopie photonique, un corps ombiliqué en forme de cloche coiffant

l'évagination épiplasmique médiane et occupant, du moins chez le Diatrype

disciformis et le Diatrypella quercina, la face interne du pseudo-manubrium.

Les formations annexes de l'appareil apical, logées dans l'épiplasme, n'ont

été observées que chez le Diatrypella, en microscopie électronique comme

en microscopie photonique (CHADEFAUD, 1957). Elles comportent un tractus,

formation déjà observée en microscopie électronique chez la Sordariale Conio-

chaeta ligniaria. Ce tractus se présente toutefois différemment : chez le Conio-

chaeta, en effet, il a la forme d’un sablier et il est constitué par des faisceaux

irréguliers de fibrilles épaisses tandis que chez le Diatrypella ses fibrilles, régu-

lièrement associées par deux, se divisent en branches divergentes à partir d’un

corps sous-apical qui occupe l'évagination épiplasmique médiane. Cette structure

n'avait pas pu être reconnue en microscopie photonique où le tractus apparais-

sait comme une masse unique effilée vers le bas. Un corps sous-apical se ren-

contre parfois également chez le Diatrype disciformis mais il est moins nette-

ment différencié que chez le Diatrypella et il ne se prolonge pas par un tractus.

L'appareil apical des asques présente donc une organisation très homogène

chez les trois espèces de Diatrypales examinées en microscopie électronique.

Source - MNHN. Paris

L'APPAREIL APICAL DE DEUX DIATRYPALES 163

Le dóme apical y est particuliérement développé, il l'est d'ailleurs également

chez les Diaporthales : Diaporthe eres étudié par GRIFFITHS (1973). L'anneau

correspond uniquement, comme chez les Xylariales (GREENHALGH et EVANS,

1967; SCHRANTZ, 1970; BECKETT et CRAWFORD, 1973; GRIFFITHS,

1973; STIERS, 1977) à l'anneau inférieur (— anneau du pendentif), mais chez

les Diatrypales, comme l'avait déjà indiqué CHADEFAUD (1973), il est trés

réduit (Quaternaria quaternata et Diatrype disciformis), et tend méme à dispa-

raître complètement (Diatrypella quercina).

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"rans.

Source - MNHN. Paris

Source : MNHN. Paris

165

LA MYCOFLORE DES CAROUBES

Ceratonia siliqua L.

par M.J. CHARPENTIÉ* et St. MARAKIS**

RÉSUMÉ. — Relevé floristique portant sur 930 isolements de la mycoflore des caroubes

récoltées en Grèce, du sol sous les arbres et du sol des entrepôts. Remarques d'ordre systé-

matique et biologique sur les espèces inventoriées.

INTRODUCTION

Le caroubier est un petit arbre de la famille des Papilionacées qui se déve-

loppe sur le pourtour de la Méditerranée. Il était très cultivé autrefois par les

peuples nord-africains et est-méditerranéens tant pour l'affouragement des ani-

maux que pour l'alimentation humaine. Actuellement la culture du caroubier a

beaucoup régressé; cependant, dans certains pays tels que la Gréce, elle demeure

un appoint non négligeable pour le bétail.

Le fruit du caroubier est une gousse pendante de 12 à 20 cm, épaisse, coriace,

pourvue d’une substance pulpeuse qui sépare les graines, au nombre de 12 à

16. Par fermentation on en extrait une liqueur alcoolique et on exploite égale-

ment, en pharmacologie, les propriétés antidiarrhéiques de ce fruit.

Les premiers recensements de champignons se développant sur les caroubiers,

sont fournis par SACCARDO (1898) qui signale parmi eux Phyllosticta cerato-

niae, Septoria carrubi, Sphaerella ceratoniae. Plus récemment, quelques phyto-

pathologistes se sont intéressés aux maladies du caroubier.

* Laboratoire de Cryptogamie du M.N.H.N., 12 rue de Buffon, 75005 Paris. - L.A. 257

(C.N.R.S.).

** Calosgourou 3, T. T. 903 Patissia, Athénes, Gréce.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog. Mycol.) TOME 1 (1980).

Source : MNHN. Paris

166 M.J. CHARPENTIÉ & St. MARAKIS

Le mildiou, Oidium ceratoniae a fait l'objet d'une étude de GRANITI en

1958 qui observe que les arbres máles paraissent plus sensibles que les arbres

femelles et les hermaphrodites. MARTELLI (1961) donne un bref apergu

des symptómes de l'anthracnose du Caroubier causée par Glomerella cingulata,

et DEMETRIADES et al. (1960), s'intéressent plus particuliérement aux fruits

du Caroubier attaqués par Diplodina ceratoniae. Mais à notre connaissance,

aucun auteur jusqu'alors, n'a fait un inventaire détaillé des champignons micro-

scopiques saprophytes des Caroubes récoltées et stockées.

PANTIDOU (1973), recensant les champignons parasites, saprophytes ou

mycorhiziques des plantes de Gréce, mentionne pour Ceratonia siliqua : Coleo-

phoma oleae, Diplodia ceratoniae, Diplosclerophoma ceratoniae, Oidium cerato-

niae, Phoma ceratoniae et Septoria carrubi.

Les essais qui sont à l'origine de cet inventaire ont pour objet la production

d'une protéine fongique, obtenue par l'action des champignons microscopiques

sur les Caroubes; au cours de cette étude, 930 souches de Micromycétes ont

été isolées. L'ensemble de la mycoflore ainsi répertoriée fait l’objet d’une discus-

sion quant à sa nature et sa fréquence.

MATÉRIEL

En Grèce, la récolte des Caroubes est fixée à une date précise par le préfet

de chaque département, Les caroubes tombées à terre sont récoltées un mois

après et entreposées en vue de leur utilisation ultérieure,

Dans le cadre de ce travail, les récoltes ont été faites dans 2 lieux de Crète:

Héraclion et Réthymnon. Le premier prélèvement fait en mars 1974, est cons-

titué de 50 échantillons provenant de caroubes moisies ramassées à terre sous

les arbres, 60 échantillons à partir des caroubes stockées dans les entrepôts.

Au cours de la même récolte, 50 prélèvement sont effectués dans le sol sous

les caroubiers et 40 dans le sol des entrepôts. En novembre 1974, dans les

mêmes localités, 40 échantillons de caroubes sont prélevés sous les arbres ou

dans l'entrepót et, à partir du sol, 40 prélèvements sont effectués dans les entre-

póts et 20 sous les arbres. Une nouvelle récolte est faite au cours de l'été 1978 :

l'isolement des microorganismes est alors effectué par une méthode différente

(voir paragraphe technique).

Les échantillons de caroubes et les prélévements de sol sont placés dans des

sacs de plastique stériles et expédiés immédiatement au laboratoire pour l'iso-

lement des champignons.

TECHNIQUES

- Les prélèvements à partir du sol sous les caroubiers sont faits à une profon-

deur de 10 cm, ceux effectués dans le sol de l’entrepöt, à 5 cm de la surface.

Source - MNHN. Paris

LA MYCOFLORE DES CAROUBES 167

- Les milieux de culture et les méthodes d'isolement ont été trés diversifiés

en vue de mettre en évidence le plus grand nombre possible de microorganismes :

Czapeck agar, Czapeck enrichi en saccharose (20g), extrait de malt gélosé

à 2%, milieu gélosé à base de foin, milieu osmophile à base de canne à sucre

((NH4)2 SO4, 7,5g; NaH2 PO4, 1,5g; MgSO4 7H30, 0,45g; FeSO4 7 H20,

0,5g; KCl, 0,15g; CaClo, 0,45 g; ZnClo, 0,03 g; extrait de levure, 3g; canne à

sucre, 30g; 1 litre d'eau distillée), milieu cellulosique ((NH4)2 SO4, 0,5g;

KH PO4, 1g; KCl, 0,5g; MgSO4 7H20, 0,2 g; CaClo, 0,1 g; extrait de levure,

10g; cellulose en poudre, 10g; eau distillée, 1 litre). Les 930 souches isolées

sont ensuite entretenues sur un milieu à base d'extrait de caroube obtenu par

autoclavage à 121^ à 1 atm, pendant 45 minutes, supplémenté avec 3% de sucre

non raffiné.

ISOLEMENTS

1. A partir des caroubes moisies

4g d'échantillon de caroubes moisies sont coupés aseptiquement en mor-

ceaux de 4 à 6mm et posés dans des boites de Pétri sur lesquelles on verse

10ml de milieu à 43°C. Les boites sont mises à l'étuve à 20°, 30°, 45°, Les

isolements sont faits de 2 à 10 jours aprés, soit à partir des colonies, soit par

prélèvements directs sous la loupe binoculaire, soit par la méthode des dilutions

successives effectuées de la façon suivante: une quantité déterminée de la

culture est ajoutée à 9 ml de liquide Ringer 1/4 autoclavé, additionné de 0,01%

de Tween 80, dans des boîtes universelles. Après mixage de cette suspension

mère, des dilutions décimales sont effectuées aboutissant à un nombre de 3

à 6 colonies par boîte pour 1 ml de suspension.

2. A partir du sol

a) méthode des dilutions

A 25g de sol sec placés dans une éprouvette graduée, on ajoute un milieu

malt agar à 0,15g jusqu'à un volume de 250ml. Aprés broyage au Waring-

Blendor (50 sec.), 5 ml de cette suspension sont versés dans 45 ml d'eau gélosée

à 0,1575; cette dilution est répétée jusqu'à obtention de 3 à 6 colonies par

boîte repiquées ensuite en culture pure.

b) ensemencement direct

5 à 15mg de l'échantillon de sol additionnés d’une goutte d'eau distillée

sont placés dans une boîte de Pétri avec 10 ml de milieu de culture à 43°C.

Aprés homogénéisation des boites, celles-ci sont placées en étuve aux différentes

températures; une fois développées, les colonies formées isolément sont repi-

quées en culture pure.

c) ensemencement par pipette

25g d'échantillon de sol, placés dans un erlen de 500 ml avec 225 ml d'eau

distillée sont broyés avec un mélangeur magnétique. Pendant la durée de l'opé-

Source : MNHN. Paris

168 M.J. CHARPENTIÉ & St. MARAKIS

ration, plusieurs prélèvements sont faits avec une pipette de 1 ml dont le contenu

est versé dans 10 ml de milieu gelose.

d) isolement des hyphes

L'échantillon de sol (1 à 1/2 g) est placé dans un bécher, puis mouillé jusqu’à

saturation avec de l'eau distillée. Après 4 à 5 minutes, on fait circuler une eau

stérile courante; les parties les plus lourdes de la suspension sont décantées. 1

minute plus tard le surnageant est enlevé; cette manipulation est répétée jusqu’à

ce que la partie surnageante soit limpide. La partie inférieure, ainsi décantée

est distribuée par petites quantités dans de l'eau distillée et examinée à la loupe

pour observer les hyphes qui sont ensuite transférées avec une microaiguille

dans une goutte d’eau stérile en boîte. Les hyphes séparées les unes des autres

sont transportées sur un milieu gélosé à raison de 10 à 20 hyphes par boîte.

c) les Ascomycétes ont été mis en évidence par la méthode de désinfection

partielle (WARCUP, 1963)

Pour limiter le développement bactérien pendant les isolements, le pH des

milieux a été abaissé à 3,5 en ajoutant 5,7ml d'acide citrique à 10% pour

100 ml de milieu. Cette technique efficace présente l'inconvénient d'éliminer

aussi certains Micromycètes sensibles à un pH aussi bas. C’est pourquoi au cours

de la récolte de 1978, le développement bactérien a été contrôlé par addition

aux différents milieux de 0,5% de chloramphénicol. Il est donc probable qu'une

grande partie de la mycoflore a été mise en évidence, Notons également que

les souches ainsi isolées présentent une certaine adaptation au substrat qu’elles

contaminent; en effet, les mêmes espèces isolées de différents substrats et

cultivées sur un milieu à base d'extrait de caroube, se développent moins bien

que les espèces isolées de caroube.

RÉSULTATS

Le Tableau I présente l'inventaire des souches en fonction de l'origine du

prélèvement : caroubes moisies, sol de l'entrepót, sol sous le caroubier et ca-

roubes autoclavées réensemencées spontanément. Il indique la fréquence de

chaque espéce par rapport au nombre total de souches isolées (930) mais ne

précise par cette fréquence pour chaque origine,

Fréquence et nature des microorganismes isolés

Il apparaît très clairement que les espèces les plus fréquemment isolées

(Aspergillus niger, Penicillium frequentans, Aspergillus flavus, Paecilomyces

varioti, Penicillium expansum) sont des moisissures trés banales, ubiquistes,

qui ne présentent aucune spécificité par rapport au substrat que nous étudions

- dans la limite d'une certaine adaptation évoquée au paragraphe «milieux

utilisés» -. Signalons tout de même qu'Aspergillus flavus peut être à l’origine

de très graves accidents dans la mesure où certaines souches de cette espèce

peuvent élaborer de l'aflatoxine.

Source - MNHN, Paris

LA MYCOFLORE DES CAROUBES 169

Les espéces moins fréquentes qui contaminent 4 à 5% des lots méritent

cependant de retenir notre attention.

- Aspergillus terreus, champignon du sol, est également cité sur des graines

et sur des débris organiques en décomposition. Sa présence, à la fois sur les

gousses et dans le sol, confirme bien les données antérieures. Signalons toutefois

que dans tous les isolements observés, cette espèce présente des caractéristiques

morphologiques inhabituelles : têtes bi- ou tricéphales prenant naissance sur un

conidiophore sinueux, Les cultures elles-mêmes ne sont pas toujours typiques :

mycélium stérile abondant, aspect laineux, ocre clair plus ou moins zoné. Mais

les phialides dont certaines sont dédifférenciées en filaments, produisent des

conidies en colonnes serrées typiques du groupe ferreus. Les cas de tétes d'As-

pergillus à aspect «tératologique» sont fréquents et ont été déjà signalés par

plusieurs auteurs, cependant cette anomalie semble relativement stable puis-

qu'elle est observée durant trois mois après plusieurs repiquages successifs.

- Penicillium purpurogenum var. rubrisclerotium dont l'identification a été

confirmée par R.A. SAMSON est un champignon du sol dont la description

originale de THOM (1915), souligne le caractère bien marqué. D'après l'auteur,

il se rattache au point de vue systématique à la série purpurogenum dont il ne

diffère que par la présence de sclérotes rouge foncé ou noir. A. STOLK (1973),

comparant des souches de Penicillium purpurogenum var. rubrisclerotium

qui ont perdu, au fil des ans, la capacité de produire des sclérotes, les rapproche

plutôt de Penicillium funiculosum par l'aspect cultural laineux. Les souches

de cette espèces que nous avons isolées dégagent une odeur si forte et si carac-

téristique de pelure de pomme de terre, que nous avons gardé le nom de variété

pour les distinguer des autres espèces, Penicillium funiculosum et P. purpuro-

genum que nous avons isolées assez fréquemment. Notons enfin que Penicillium

purpurogenum var. rubrisclerotium a été mis en évidence, dans nos essais, à

la fois sur caroubes moisies, dans le sol de l'entrepót et dans le sol sous les ca-

roubiers.

C'est également le cas de Penicillium funiculosum dont la fréquence par rap-

port au nombre total d'isolements est sensiblement identique et dont la réparti-

tion se situe soit dans le sol, soit sur des débris végétaux en voie de décomposi-

tion, ce que confirment nos essais.

Penicillium purpurogenum est révélé seulement à partir du sol sous les carou-

biers; il est en effet un composant fréquent de la mycoflore des sols des régions

tempérées, tropicales et subtropicales et aussi un agent de détérioration de

nombreux substrats organiques.

Verticillium psalliotae par contre se développe généralement sur des supports

bien spécifiques. D'après GAMS (1971), il a été isolé de cultures de champi-

gnons, de rouilles, de Truffes, à partir d'insectes morts, de bouses de vaches

et de tissu enfoui dans le sol, Sa présence ne semble pas avoir été signalée sur

des grains en stockage bien qu'une espèce très proche, Verticillium fungicola

soit mentionnée souvent sur ce substrat sous le nom de Verticillium malthousei.

Dans le travail présent il a été mis en évidence à partir du sol de l’entrepöt

Source : MNHN, Paris

170 M.J. CHARPENTIÉ & St. MARAKIS

et des caroubes moisies; il est probable qu'il s'est développé d'abord sur les

caroubes qui lui offraient un substrat favorable, puis a envahi le sol de l’entrepot.

Aspergillus carbonarius appartenant au groupe niger, probablement moins

fréquent que A. niger mais trés ubiquiste, est signalé par GUPTA (1956) comme

agent de la pourriture des grains de raisin en Inde. Sa présence soit dans le sol,

soit sur des substrats divers, semble liée à des climats chauds sans que cette

condition soit nécessaire. Dans le cas des caroubes, nous l'avons isolé seulement

à partir des gousses mais avec une fréquence relativement élevée (4,2); si nous

tenons compte du fait qu'il est trés proche d’Aspergillus niger au point de vue

systématique et biologique, nous pouvons évaluer la fréquence cumulée de ces

deux espèces à 12% ce qui place les Aspergillus du groupe niger largement en

téte du cortége floristique des caroubes.

Dans le groupe des Mucorales, Mucor mucedo, Rhizopus arrhizus, Absidia

ramosa et Mucor genevensis sont recensés. Seules les deux premiéres espèces

sont relativement. fréquentes, Mucor mucedo dans le sol sous les caroubiers

et Rhizopus arrhizus sur les caroubes. Ces deux espéces trés ubiquistes à la fois

par leur répartition géographique et les substrats qu’elles envahissent, demandent

cependant une humidité relative de l'environnement et une teneur en eau du

substrat assez élevées. Absidia ramosa, hôte fréquent des graines et Mucor

genevensis, essentiellement champignon du sol, sont ici isolés du sol de l'entre-

pót avec une fréquence trés faible.

DISCUSSION

L'origine du prélévement des différentes espéces isolées nous conduit à faire

quelques remarques.

- Les espéces les plus fréquentes sont présentes à la fois sur les caroubes

moisies et dans le sol de l'entrepót (exception faite de A. niger, A. flavus et P.

expansum). Autrement dit, la micropopulation de ce sol refléte celle des carou-

bes. Par contre, la microflore du sol sous les caroubiers est sensiblement diffé-

rente de celle des caroubes bien que celles-ci séjournent un mois sur le sol avant

d'être récoltées. Les prélèvements effectués à 10cm de profondeur révèlent

une micropopulation distincte à l'exception de 3 espèces assez fréquente

Penicillium purpurogenum var. rubrisclerotium, Penicillium funiculosum et

Penicillium cyclopium.

Trois espéces seulement se sont développées sur les résidus de caroube exempts

de sucres solubles. Ces résidus obtenus par 8 autoclavages successifs, sont laissés

à l'air libre pour étre ensemencés spontanément. Parmi les nombreuses spores

susceptibles de contaminer ces résidus, seules se sont développées «in situ»,

Penicillium variabile, Penicillium chrysogenum, mutant blanc instable et Tricho-

derma harzianum. Cette dernière espèce notoirement cellulolytique a trouvé

probablement un substrat convenant ä ses aptitudes enzymatiques; Penicillium

chrysogenum quant à lui, a sans doute modifié son métabolisme momentané-

ment ce qui a entraîné une perte provisoire de sa pigmentation. Enfin Penicil-

Source - MNHN. Paris

LA MYCOFLORE DES CAROUBES 171

lium variabile dont RAPER et al. (1968) mentionnent la présence sur des papiers

humides en stockage et sur amidon, est donc apte à hydrolyser des molécules

de polysaccharides.

Des espéces cellulolytiques sont isolées également à partir des caroubes et

du sol: Aspergillus oryzae, A. terreus, Fusarium moniliforme et F. solani.

Elles prennent certainement une part active à la décomposition de la cellulose

contenue dans les gousses.

Certains micromycétes ont été mis en évidence seulement au cours des

derniers isolements effectués avec du chloramphénicol comme bactéricide :

Fusarium oxysporum var. redolens, Fusarium solani, Phoma herbarum, Mucor

mucedo, Cladosporium cladosporioides et Penicillium tardum. Puisque les iso-

lement antérieurs avaient été effectués en abaissant le pH à 3,5 à 4 en vue d'éli-

miner les bactéries, nous sommes en droit de nous demander si ces espèces sont

sensibles à des pH de cette valeur et si leur développement a pu être inhibé

en milieu franchement acide. D'après SMITH et BERRY (1975), le pH optimum

de croissance pour les micromycétes se situe entre 5 et 7, avec une tolérance

pour des pH assez bas sauf en ce qui concerne les Mucorales dont le développe-

ment est particulièrement ralenti par une diminution du pH. PANASENKO

(1967) situant entre 2 et 10 les limites de pH dans lesquelles la croissance

des micromycètes est possible, mentionne cependant que leur sporulation

et leur activité enzymatique se situent dans une fourchette beaucoup plus

étroite. Les espèces qui nous concernent, mises en évidence seulement par un

milieu faiblement acide ou proche de la neutralité, ne sont pas citées dans les

documents que nous avons consultés; il est donc difficile, en l'absence de don-

nées précises, de conclure de façon décisive. Cependant, étant donné le grand

nombre d'isolements effectués, il est probable que ces espèces se seraient mani-

festées en milieu acide au cours des isolements antérieurs, si elles n'étaient

pas sensibles à un pH bas.

- Bien que les gousses de caroube sur lesquelles ont porté nos essais consti-

tuent un support différent de celui des graines proprement dites, notamment

par la teneur en cellulose et en lignine, nous pouvons rechercher des similitudes

avec le comportement des graines stockées dégradées par les moisissures sapro-

phytes. Ces dernières ont depuis longtemps été répertoriées sur toutes sortes

de substrats, blé, maïs, avoine, haricot, lin, sorgho, pois, etc... Leur inventaire

n'est pas exhaustif, cependant certaines espèces sont particulièrement inféodées

aux graines : Alternaria, Stemphylium, Helminthosporium, Fusarium, Botrytis,

Acremoniella, pour ne citer que les genres les plus fréquents de la flore du

champ, Penicillium spp. et Aspergillus spp. pour la flore de stockage. Dans le

cadre de nos essais et bien que les gousses de caroube séjournent un mois sur

le sol et soient ensuite entreposées, nous n'avons pas cherché à étudier l'évolu-

tion de la flore en conditions de stockage. Aucune estimation quantitative

n'a d’ailleurs été faite. Il est difficile par conséquent de préciser à quel moment

de cette évolution ont été faits les prélèvements. Cependant nous remarquons

que sont encore présentes des espèces de la flore du champ : Paecilomyces

varioti, Alternaria tenuissima, Fusarium spp., ainsi que des Mucorales et égale-

Source : MNHN. Paris

172 M.J. CHARPENTIÉ & St. MARAKIS

Microflore des caroubes

Espèces C.M. SE. S.C. C.A. Fréquence

Aspergillus niger * ES 9,28

Penicillium frequentans + + 7,53

Aspergillus flavus + 6,98

Paecilomyces varioti + + 5,21

Penicillium expansum + 5,15

Aspergillus terreus + a 49

Pen. purpurogenum var.rubrisclerotium + + + 483

Verticillium psalliotae + + 4,5

Penicillium funiculosum F + + 442

Mucor mucedo + 4,31

Penicillium purpurogenum + 423

Aspergillus carbonarius sli 4,2

Fusarium moniliforme E + 4

Rhizopus arrhizus + 3,4

Penicillium cyclopium H + 3,2

Aspergillus fumigatus + 27

Alternaria tenuissima * E 26

ium variabile + E 215

Penicillium steckii E: 16

spergillus oryzae 45 1,6

ium chrysogenum + 1:95

Aspergillus repens th, 13

Fusarium solani T 1,29

ium spinulosum + 22

Penicillium cyaneofulvum + 1,1

Aspergillus candidus a 1,1

Cladosporium cladosporioides + 1,1

Fusarium oxysporum var. redolens ar 1,08

Acremonium strictum + 0,96

Cladosporium sphaerospermum + 0,86

Absidia ramosa 7 0,65

Phoma herbarum + 0,54

Mucor genevensis К 0,53

Penicillium tardum + 0,22

Trichoderma harz + х

C.M.: caroubes moisies; S.E.: sol de l'entrepót; S.C.: sol sous les caroubiers; C.A.: ca-

roubes autoclavées, réensemencées spontanément.

Source : MNHN. Paris

LA MYCOFLORE DES CAROUBES 173

ment toutes les espèces de la flore de stockage dont l'essor dépendra des condi

tions hydriques régnant dans lentrepôt. Quant au Verticillium psalliotae qui

selon nous n'a jamais été signalé sur des graines, il est probable qu'il se compor-

tera comme une espéce du champ et que ses exigences en eau et son manque

de compétitivité au plan de la sporulation, causeront sa disparition progressive

au sein des lots entreposés. Mais sa fréquence relativement importante (4,5)

sur les caroubes et dans le sol de l'entrepót, prouve qu'il est un élément non

négligeable de la mycoflore de ce fruit. Notons enfin que parmi les espèces

xérophiles seul Aspergillus repens se manifeste.

CONCLUSION

La mycoflore des gousses de caroubes révèle des similitudes trés réelles avec

celle d'autres graines déjà étudiées. Les fruits des caroubes en décomposition

offrent donc un support biochimique et biologique comparable à celui des

graines. Notons cependant qu'une espèce, Verticillium psalliotae fait exception.

La fréquence avec laquelle elle se manifeste exclut toute coincidence. Il faut

donc penser que le substrat que constituent les caroubes est favorable à ce

micromycéte, plus favorable en tout cas que celui des autres graines testées

jusqu'à ce jour.

BIBLIOGRAPHIE

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vées observées en Gréce au cours de l'année 1958. Ann. Inst. phytopath. Benaki N.S.

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Source : MNHN. Paris.

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Source : MNHN. Paris

175

DEVELOPMENTAL MORPHOLOGY OF ASCOMYCETES

VI. THERMOASCUS AURANTIACUS

par C. V. SUBRAMANIAN and C. RAJENDRAN*

This paper is the sixth in a series on the developmental morphology of the

Ascomycetes and deals with Thermoascus aurantiacus Miehe. The culture

used in the present study is not the type, and it was isolated from saw dust

from Parana pine; it was received from the Commonwealth Mycological Insti-

tute, Kew, England, under the No IMI 67936. This was one of the cultures

studied by APINIS (1967) along with culture No. IMI 91787 which was desi-

gnated by him as the neotype.

The fungus was grown on YpSs agar medium and the various stages of the

development of the fruit bodies were studied by making tease mounts stained

with 0.1% lactofuchsin as recommended by CARMICHAEL (1955) and sec-

tioning the materials by the paraffin method as described by JOHANSEN

(1940) and PURVIS, COLLIER and WALLS (1964). Tease mounts were also

used in the study of the anamorph. For the study of the germination of asco-

spores methods described earlier (SUBRAMANIAN and RAJENDRAN, in

press) were followed.

DESCRIPTION OF THE FUNGUS

Colonies on YpSs agar medium growing rapidly at a temperature of 38-

40°C, attaining a diameter of 7-8.cm in two or three days, white at first, later

becoming light grey-buff. Surface growth mucoraceous, becoming granular

and pale yellow, then to orange buff, bright brick-red; and finally almost brown

in age (within the next two or three days). Exudate present on the surface

of the culture as shining droplets.

Memoir No. 257 from the Centre for Advanced Study in Botany, University of Madras.

* Centre for Advanced Study in Botany, University of Madras, Madras-600 005, India.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog. Mycol.) TOME 1 (1980).

Source : MNHN. Paris.

176 C.V. SUBRAMANIAN & C. RAJENDRAN

Hyphae hyaline, closely to remotely septate, up to 154m wide (fig. 5, j, k, m,

n, q). Hyphal fusions often observed (fig. 5, 1, p). Raquette hyphae present

(fig. 5, 0). «Ascocarp» is an ascostroma. Ascostroma prosenchymatous, formed

by the aggregation of masses of narrow hyphae. Ascogonia curled, numerous

scattered within the stroma. Mature ascocarps (— ascostroma) variously shaped

mostly spherical to elongate (fig. 4, a; Pl. I, fig. 3), single or clustered or con-

fluent, light brown in colour, variable in size, up to 1.3mm x 250um, with an

outer covering composed of pseudoparenchymatous tissue of irregularly arran-

ged cells. Asci formed from croziers in groups, irregularly disposed, subglobose

to ovate, 8-spored, 8-13.5 x 7-9.5um (fig. 3, c-e). Ascospores hyaline, elliptical,

slightly rough, 4.5-6.5 x 3.5-5um (fig. 4, e, f). Gangliar conidia present, pro-

icd ue

тт

жя

EE Y

РІ. 1. — Thermoascus aurantiacus - (Échelle: 104m). Fig. 1: ascogonial curls (teased out).

Fig. 2 & 3: Stages in the development of ascostroma, Note cavity in each ascostroma

within which asci develop. Note clear pseudoparenchymatous nature of the tissue sur-

rounding the cavity in fig. 3. Fig. 4: a mature gangliar conidium.

Source - MNHN. Paris

VI. THERMOASCUS AURANTIACUS 177

duced terminally on long or short hyphal branches, single or in clusters of 2or 3,

clavate or almost subglobose, smooth, thick-walled, up to 20 x 8um.

DEVELOPMENT OF THE TELIOMORPH

The teliomorph appears 2 or 3 days after the fungus is inoculated on YpSs

agar medium and, being thermophilic, the culture needs to be incubated at a

temperature of 38-40°C. Initially, small cushion like hyphal masses (prosenchy-

matous stroma) are formed by the aggregation of groups of profusely branched

interwoven narrow hyphae produced by the ordinary vegetative mycelium

(fig. 1, a). During the process, a marked change in the appearance of the culture

is abserved - the white to light grey-buff mucoraceous mycelial colony becoming

granular and almost pale yellow.

A few deeply staining, smooth hyphal extensions now arise from some of

the hyphal branches within each of these hyphal masses and become curled

and septate; these are the ascogonia (fig. 1, bi; PI. I, fig. 1), and the hyphal

mass with the ascogonia forms the rudiment of an ascostroma (fig. 1, a). The

member of the turns in each of these ascogonial curls may vary from 13, and

these curls are arranged. somewhat. loosely, Septation of these ascogonial curls

may occur at an early stage in the development. No antheridium was seen.

Alo, no evidence of fusion between any of the ascogonial curls and the neigh-

bouring hyphae was obtained. However, in certain cases, the ascogonial curls

were found to be twisted around hyphal branches in the stroma.

With further development, the hyphae in the peripheral part of the prosen-

chymatous stroma become densely branched and knotted, tightly arranged

and finally pseudoparenchymatous, forming an outer covering (fig. 2, a; Pl. I,

fig. 2).

The next stage in development is marked by the formation of croziers and

asci. As the ascogonia develop further, protuberances arise from some of the

cells of the ascogonial curls; these protuberances elongate and become bent

to form hooklike structures, the croziers (fig. 2, b-e). Formation of two septa

divides each crozier into three cells; the basal, the penultimate and the tip

cells (fig. 2, f). In some cases, before septation occurs, each hook produces

one or two short extensions which may in turn develop into croziers (fig. 2, 8,

h). These croziers also become three-celled by septation, Invariably, the penul-

timate cell of each of these croziers proliferates to produce secondary croziers

and a repetition of this process may lead to the formation of tertiary and qua-

ternary croziers, etc. (fig. 2, i). After some time further croziers are not formed

and the penultimate cells of the croziers already formed enlarge and become

asci (fig. 2,0).

Sometimes, the protuberances produced on the ascogonial curls may not

produce croziers as described above. Instead, loop-like structures may be formed

(fig. 2, j, k) presumably by fusion of protuberances formed from adjacent cells

or one protuberance from one cell of the ascogonial coil becoming bent and

Source : MNHN, Paris.

178 C.V. SUBRAMANIAN & C. RAJENDRAN

20р

Fig. 1. - Thermoascus aurantiacus — a, showing a stroma containing several ascogonial curls

(section); b-g, development of ascogonial curls - note in fig. a and f, vegetative hypha en-

tangled within the curl; h, a septate ascogonial curl; i, initiation of croziers from cells

of an ascogonial curl.

Source : MNHN, Paris

Молл,

Fes

g. 2. - Thermoascus aurantiacus — a, stroma at a later stage of development - note that

the basipetal region of stroma is more compact than before (compare fig. 1,a) - note also

loosely woven stromal hyphae and ascogonial curls and croziers (section); b-f, develop

ment of croziers; gi, production of secondary, tertiary and quaternary croziers; j-m,

another pattern of crozier formation; n-w, development of asci and ascospores.

Source : MNHN, Paris.

180 C.V. SUBRAMANIAN & C. RAJENDRAN

establishing connection with the adjacent cell. A septum now cuts the loop

into two halves; each half develops a crozier in the usual way (fig. 2, k-m).

The penultimate cell of each crozier enlarges and becomes an ascus. The tip

cell of each crozier now becomes bent down and fuses either with the basal

cell of the crozier (fig. 2, n) or the neighbouring ascogonial cell (fig. 2, p) and

the process may be repeated so that several groups of croziers and asci are seen

to develop from each ascogonial curl (fig. 2, q-w).

Finally eight ascospores become differentiated within each ascus. The asci

lie scattered irregularly throughout the central tissue of the stroma (fig. 3,

a, b).

The central system of narrow hyphae from which the ascogonial curls origi-

nally developed are seen to remain in the central part of the stroma even after

the asci develop and mature (fig. 3, a, b), though they slowly get disintegrated

in the final stage of maturation of the ascocarp.

The asci deliquesce and free the ascospores so that the ascospores from the

numerous asci now fill the central cavity of the stroma (fig. 4, a; Pl. I, fig. 3). At

this stage in the development of the stroma, the fungus colony becomes almost

brown in colour. No «ostiole» was observed.

Sometimes, as development proceeds, the individual stromata enlarge and

get pressed against each other. Their wall layers get compressed and, by the

dissolution of intervening wall layers, they merge into each other so that an

apparently large stroma may be formed by the coalescence of more than one

stroma, Such large stromata are frequently observed in somewhat aged cultures.

A section of mature stroma shows a large central cavity with ascospores

lying free within and surrounded by an irregular tissue of polyhedral cells

of somewhat two distinct zones - an inner deeply staining zone of comparatively

smaller cells, and an outer somewhat hyaline not so deeply staining zone of

larger cells; remnants of loose narrow hyphal branches are seen to project

from the outer layer of this pseudoparenchymatous tissue.

GERMINATION OF ASCOSPORES (Fig. 4, g-0)

The ascospores germinate very rapidly. Germination takes place within 6

hours of incubation on dialysis tubings placed on YpSs agar medium at a tempe-

rature of 38-40°C. During germination, a small pore is formed on one side

of the ascospore, mostly on the ventral side. Through this pore a protrusion

emerges from within and assumes a vesicular appearance; this vesicular aspect

is retained in further development. One or more extensions (germ tubes) develop

from the vesicular part and grow. These branches become septate and produce

the vegetative mycelium.

In certain cases, especially when ascospore germination was studied directly

on media (i. e., not on dialysis tubing), the ascospore swells considerably,

and one or more germ tubes emerge directly from within the ascospore. In

Source - MNHN. Paris

root

181

VI. THERMOASCUS AURANTIACUS

Fig. 3. - Thermoascus aurantiacus — a, b, section of ascostroma with central cavity and

well developed pseudoparenchymatous tissue all round - note the presence of vegetative

narrow hyphae and asci in the cavity; c, a group of asci; d, asci (? young); e, mature

asci with ascospores.

Source : MNHN, Paris.

182 C.V. SUBRAMANIAN & C. RAJENDRAN

re a

Fig. 4. - Thermoascus aurantiacus — a, mature ascostroma with ascospores within the

stromal cavity (section); b, stromatic hyphae, young stage; c, stromatic hyphae, older

stage; d, surface view of a part of ascostroma; e, mature ascospores; f, ascospores

(? young); g-0, germination of ascospores

Source : MNHN, Paris

VI. THERMOASCUS AURANTIACUS 183

20р

Fig. 5. - Thermoascus aurantiacus — a, development of gangliar conidia; j-q, variation

in the size of hyphae - note hyphal fusion in fig. | and p and raquette hypha in fig. o.

Source : MNHN, Paris.

184 C.V. SUBRAMANIAN & C. RAJENDRAN

such case, the vesicular structure is not visible outside the ascospore during

germination.

DEVELOPMENT OF THE ANAMORPH

The present. fungus was not found to produce any phialidic state. However,

the production of gangliar conidia was frequently observed in cultures grown

on YpSs agar medium.

During the formation of gangliar conidia, the terminal portion of an ordinary

vegetative hypha swells (fig, 5, a, b). The swelling increases in size as it develops

further and is then cut off by a septum separating the swelling from the sub-

tending hyphae (fig. 5, c-g). Due to further development the wall of the swelling

becomes thick, and finally this terminal swollen part becomes transformed

into a gangliar conidium (PI. 1, fig. 4). Later, from any point on the conidio-

phore one or two lateral branches arise; the terminal portion of each of these

lateral branches may also swell and become gangliar conidia (fig. 5, h, i).

TAXONOMY

The genus Thermoascus Miehe (MIEHE, 1907) is based on T. aurantiacus

Miehe. Unfortunately, no type material seems to exist and the present study

is based on IMI 67936.

The unique features of this fungus are as follows. The ascocarp is an asco-

stroma. To begin with, the ascostroma is prosenchymatous and of variable

extent (fig. 1, a). Several ascogonia develop within an ascostroma. A mature

ascocarp has a distinct and conspicuous envelope of pseudoparenchymatous

cells of variable thickness, usually 8-12 cells thick (fig. 4, a). This is what has

been usually referred to in descriptions as the peridium. However, from the

present developmental study we are inclined to believe that this pseudoparen-

chymatous tissue represents the finale in development of the ascostroma so

that we now have in place of prosenchymatous tissue a pseudoparenchymatous

one. If this interpretation is correct, then the ascocarp in this fungus lacks

a peridium sensu stricto.

No phialide state developed in culture such as has been claimed by COONEY

and EMERSON (1964). However, conidia of gangliar type were found, It is

noteworthy that MIEHE also found no phialide state associated with this fungus.

Thermoascus seems to be a good genus and must be retained. It is quite

distinct from the other genera studied by the authors. As interpreted here,

it is an ascostromatic form in which the ascocarp is without a peridium and

develops in a cavity in an ascostroma.

We are grateful to the Director, C.M.I., for the culture of Thermoascus

aurantiacus on which the present study is based.

Source : MNHN, Paris

VI. THERMOASCUS AURANTIACUS 185

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Source : MNHN, Paris -

ERRATUM :

Dans Cryptogamie - Mycologie, Tome 1, fasc. 1, page 7 (article de H. DECHARME et

M.ISSALY), la figure 1 doit être complétée de la façon suivante :

Fig. 1. — Schéma d'une colonie du champignon symbiote d'Acromyrmex octospinosus,

d'un mois sur milieu gélosé (F).

Mycélium du front de culture: zone A: colonisation du milieu, zone B: croissance du

mycélium aérien, Zone C : couche superficielle de différenciation des gongylidia. Zone D:

couche médiane d'empilement et d'entassement des structures. Zone E : couche pseudo-

stromatique.

Commission paritaire 15-8-1980 n° 58611

Dépôt légal n° 10620 - Imprimerie de Montligeon

Sorti des presses le 15 août 1980

Source : MNHN, Paris

ABONNEMENTS A CRYPTOGAMIE - MYCOLOGIE

Tome I 1980 - Tome 2 1981

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Pastac. 88 pages : 15 F.

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par R. Ulrich. 44 pages : 15 F

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Corticiés par J. Boidin. 390 pages, pl. et fig. : 70 F.

NO 7 (1959). Les champignons et nous (Chroniques) (I), par G.

Becker. 94 pages : 25 F.

NO 8 (1966). Catalogue de la Mycothèque de la Chaire de Crypto-

gamie du Muséum National d'Histoire Naturelle. (1) Micro-

mycètes, Macromycètes (première partie). 68 pages : 25 F.

NO 9 (1967). Table des Matiéres (1936-1965) 85 p. 20 F. - (1966-

1975) 40p. 10 F.

NO 10 (1969). Le genre Panacolus. Essai taxinomique et physiolo-

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publiée sous la direction de M. Roger HEIM.

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Tome Il. Les Rhodophylles, par H. Romagnesi (1941), 164 pages,

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Tome III. Les Mycènes, par Georges Métrod (1949). 144 pages,

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Tome IV. Les Discomycètes de Madagascar, par Marcelle Le Gal

(1953). 465 pages, 172 fig. : 90 F.

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(1965). 180 pages, 97 fig., 4 pl. hors-texte : 60 F.

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Source - MNHN. Paris

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