289

FACTORS AFFECTING GROWTH and SCLEROTIAL FORMATION

OF SCLEROTINIA MINOR IN VITRO

раг К.В. KHARE!, G. BOMPEIX? and K.C. BASUCHAUDARY?

ABSTRACT. — Growth and sclerotial formation of three isolates of Sclerotinia minor

were excellent on PDA, Carrot-agar, Glucose-NH4NO3-agar with Iron-minor element and

Glucose-peptone-agar. Of the synthetic and semi-synthetic media tested, Glucose-peptone

was optimal for growth and sclerotial formation. S. minor grew and produced sclerotia

over a wide range of pH (2.5-8.0). An optimum pH of 4.0 was obtained for growth and

sclerotial formation both in buffered and unbuffered media. The temperature range for

good vegetative growth and sclerotial formation was from 15 to 26°C with an optimum at

the latter temperature. At the maximum temperature of 30%C only vegetative growth

occured. At 15°C sclerotia tend to unite and to become irregular and flattened, smaller

than those produced at 25°C.

RESUME. — La croissance mycélienne et la formation des sclérotes de trois isolats de

Sclerotinia minor sont excellentes sur PDA, Carotte-agar, Glucose-NH4NO3-agar avec le fer

comme microélément, et Glucose-peptone-agar. Ce dernier était le meilleur milieu parmi

tous ceux qui ont été testés qu'ils soient synthétiques ou semi-synthétiques. S. minor

croit et produit des sclérotes dans une large gamme de pH (2,5-8). Un optimum de pH 4,0

est obtenu pour la croissance et la formation des sclérotes en milieux tamponnés ou non.

Les températures favorables à la croissance mycélienne et à la formation des sclérotes se

situent entre 15 et 26°C avec un optimum à cette dernière température. À la température

maximale de 30 C on observe seulement une faible croissance végétative. À 15° les sclérotes

tendent à s'aggréger et prennent une forme plate à bords irréguliers. Leurs dimensions

sont inférieures à celles des sclérotes obtenus à 25°C.

1. Department of Crop Science, University of Nairobi, Nairobi, Kenya.

2. Laboratoire de Pathologie Végétale, Université Pierre et Marie Curie, T 53, Paris, France.

3. Department of Mycology and Plant Pathology, Banaras Hindu University, Varanasi, India.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.), TOME 2 (1981).

Source : MNHN, Paris

290 K.B. KHARE, G. BOMPEIX & K.C. BASUCHAUDARY

INTRODUCTION

The occurrence of this small sclerotial fungus was first observed on lettuce

in Massachusets by SMITH (1900) who considered it as a degenerate form of

Sclerotinia libertiana Fuckel (= S. sclerotiorum (Lib.) De Bary). JAGGER

(1920) studied various isolates of this fungus on the same host and described

them as a new species, Sclerotinia minor. The pathogen has since been reported

to occur on a number of plants (VIENNOT-BOURGIN, 1949; WALKER, 1952;

SACKSTON, 1956; SALERNO, 1959; RAINBOW, 1970, еіс...). 5. minor

Jagger has been considered to be a synonym of S. sclerotiorum (Lib.) De Bary

by some authors (PURDY, 1955; WALKER, 1969; MORRALL et al., 1972).

However, recent studies based on patterns of mycelial growth, sclerotial onto-

geny, their soluble proteins and isoenzymes showed S. minor and S. sclerotiorum

to be distinct from each other (cf. WILLETTS and WONG, 1971; WILLETTS,

1972; WONG and WILLETTS, 1973). In France, the pathogen has been found

severely attacking lettuce crops, particularly in the regions of the eastern Pyré-

nées where losses up to 80 % have been recorded (WAFFELAERT, 1969).

Since the physiology of S. minor has not been previously investigated, with

the exception of CHIVERS (1929), on the effect of temperature on the size

of sclerotia, MARRAS (1961), the effect of temperature and pH on growth

on carrot-agar and LOUVET and BULIT (1964), on the influence of different

concentration of CO; on growth, the present work was undertaken to study

nutritional requirements and various factors affecting growth and sclerotial

formation of the pathogen. However, only results of the effect of different

media, pH and temperature are reported in this paper.

MATERIALS AND METHODS

The three isolates of S. minor used in this investigation were originally isolated

from diseased sunflower (Iran), lettuce (France) and lucerne (U.S.A.), and have

been referred to as Sm-S, Sm-LT and Sm-LC, respectively. The first two isolates

were obtained through the courtesy of Prof. G. VIENNOT-BOURGIN and the

third one was kindly arranged for us by Prof. L.H. PURDY. Stock cultures

used were maintained on PDA at 4°C and were transferred regularly at intervals

of two months,

Isolates were grown on ten natural and synthetic solid media (20 ml/plate)

prepared according to the formulae given by HAWKER (1950) except Glucose-

NH4NO3-Iron-minor element (abbreviated as GAIME) and COON's medium

which had the following compositions per litre of distilled water, GAIME :

Glucose, 20.0g — NH4NOs, 1.0g — KH;POs, 1.0g — MgSO4 7 H20, 0.5g —

FeSO 7 Н,О, 2 mg — ZnSO4 7 H0, 2mg — CaSO4 2 H;0, 2 mg — CuSO4

5 H20, Img — Mn$O4 H50, 0.2mg — Na? MoO4 2 H;O, 0.2mg; COON's me-

dium : Maltose 3.5g — KH3PO4, 1.25g — MgSO4 7 H20, 0.5g — Asparagine

Source : MNHN, Paris

SCLEROTINIA MINOR 291

0.25g. Colony growth (average of two) and visual observation on sclerotial

formation of each isolate were recorded on the third, fifth and tenth day after

inoculation and incubated at 24 + 2°C in continuous artificial light. The growth

in terms of dry weight and sclerotial formation were compared on seven synthe-

tic liquid media also. Isolates were grown on these media under similar condi-

tions for 21 days.

The effect of pH on growth was studied both in unbuffered and buffered

glucose-peptone medium (citrate-phosphate buffer : 0.01 M citric acid and 0.02

M disodium hydrogen phosphate, pH 2-8, with 0.5 of intervals). Isolates were

grown on different pH at 25 C for 17 days in a stationary condition.

The effect of ternperature on growth and sclerotial formation was investi-

gated on PDA (20 ml/plate), incubated at various temperatures ranging from

0-35°C in dark. Visual observations on the degree of sclerotial formation, as

in all the experiments, were empirically rated as nil, scanty, moderate or abun-

dant (see table 1). Isolates were also grown in glucose-peptone medium at 5-

30°C and incubated for 17 days under the same condition.

250 ml Pyrex Erlenmeyer flasks, each containing 50 ml of liquid medium

were sterilized for 15 minutes at 115°C and inoculated with a 4 mm mycelial

disc cut from the advancing margin of a 4 days old culture grown on PDA

at 20°C. Experiments were run in triplicates. Unless otherwise mentioned,

the pH of the media were adjusted to 6.0 with NaOH or HCl prior to autoclaving

(recorded as initial pH) and at the end of incubation period.

Mycelial mats and sclerotia were harvested by filtration with suction through

«Millipore» filter discs which had been previously dried to constant weight

at 80°C. Filtrates from the replicates were mixed and the pH values were deter-

mined. Mycelium and sclerotia were thoroughly washed with distilled water,

dried at 80°C for 24 hrs and weighed.

RESULTS

Effect of natural and synthetic / or semi-synthetic media

PDA, carrot-agar, malt-agar, glucose-peptone-agar and GAIME all provided

very good growth and sclerotial formation of the three isolates (Table 1). The

growth and the sclerotial formation was moderate in CZAPEK-DOX and RI-

CHARDS'S agar, and poor growth with a few mature sclerotia occurred in

ASTHANA and HAWKER's, BROWN's and COON's agar. However, sunflower

isolate could not produce even a single sclerotium in ASTHANA and HAWKER's

agar up to 10 days and lucerne isolate produced only few immature slcerotia

in BROWN’s agar. These isolates, however, produced moderate to abundant

sclerotia on other media.

Isolates when grown in different synthetic and semi-synthetic media, produ-

ced maximum growth in glucose-peptone (Table 2). Good growth with abun-

Source : MNHN, Paris

292 K.B. KHARE, G. BOMPEIX & K.C. BASUCHAUDARY

Sm-LC Sm-LT 5п-5

Media Initial|Sclerotia

РЕ за 54 04) 34 54 104) 4а Sd 104

Asthana & 5,7 | immature | 0t c9). 0 9 [955 + 0| 055, 0

Hauker's mature | 0 0 «|o 0 +| 0 0

Broun's 6,0 | immature | 0055, 0 + | 09) + 2| 9) 0 0

mature | 0 0 ojo 0 +| o

a - , mmature E OT Or FE ++

Carrot 5,8 | immature | 0,63) Te ОЕ 0

agar mature |0 о +++ 0 0 +++] 0 o ++

Coon's 5,9 | immature] 0/55) + 0 | 06) + + | 077) 0 0

mature |0 + |o 0 +I 9 +

Czapek - 5,8 | immature | 0(,5, 0 9 | озу + ++] сца) © 0

Dox mature | 0 0 +| o 0 «|o 0 ++

Glucose 5,7 | inmature | 0,40) + OD} Os) ++ 0| 95,5 0 0

NH NO mature | 0 0 +++] 0 0 40 ++

5252;

Glucose - 5,6 | immature | 0,63) + o f Oa ++ о озуу + *

peptone mature | 0 0 o +++] 0 ++

Malt = 5,9 | immature | Ogzyere +++| Digg) ++ Of Oraz) + 0

agar mature | 0 0 ++ 0 0-40 0 ++

PDA 5,7 V immature| 0(55) ** — 0 | O59) ++ оозун 0

mature | 0 0 [о 0 ро 00.

Richards 5,8 | immature | 0,5g) 0 9 | Oo) + 9| 9555, 0 0

mature [0 0 ++] 0 0 +j o 0 ++

Table 1. — Sclerotial formation of the three isolates of S. minor (+ scanty; ++ moderate;

+++ abundant) with immature slcerotia (initials and discolored sclerotia) and mature

sclerotia (black) and radial growth (in mm*) on different solid media at 24 + 2°C in

continuous artificial light (Average of three replicates).

After 5 to 10 days the fungus spreads on the entire surface of the Petri dishes with the

exception of the ASTHANA and HAWKER's, and BROWN's media.

dant to moderate sclerotia occurred in GAIME followed by RICHARDS's

and CZAPEK-DOX, and poor growth with a few slcerotia in ASTHANA and

HAWKER's, BROWN's and COON's media. Of the three, lucerne isolate produ-

ced maximum growth in all the media. At the end of incubation period, pH

of all the media moved downwards.

Source : MNHN, Paris

SCLEROTINIA MINOR 293

Table 2. — Average dry weight in mg of mycelium and sclerotia ; obtained by three isolates

of Sclerotinia minor in different liquid media after 21 days of incubation at 24 +2 Сіп

continuous artificial light.

Sn-LC Sm-LT Sm=S

Media initial | pH of dry всі | рн ог агу вец рн оѓ ату sel

рн filtr. weight filtr. weight filtr. weight

Asthana &

Hawker's 5.7 4, ае sl | ыз 22 ot

Broun's 6.1 3202 | > 3.5: ПЕ Әди 265 эш

Coon's 5.8 Жл К.Л; 5, 1: 0052 25 5

Czapek-

Dox 5.9 al o 2122 УЫ Қ 54

Glucose-

NHNO, 5.7 27 26 +++| 2.8 222 эз 2.8 188 +++

Glucose-

peptone 5.8 2% 24 |е ов ц Св 1Ш +++

Richards 5.8 за м8 | 320, X607 2 о +

4, Sclerotial formation : 0 nil, +scanty; ++ moderate; +++ abundant.

Effect of hydrogen-ion concentration

Table 3. — Effect of different pH on the growth’ and sclerotial formation of three isolates

of S. minor in buffered? and unbuffered liquid glucose-peptone medium after 17 days

of incubation at 25 C in dark and stationary condition.

192 2,8 ++ 283.6

175 2 + 10462

DOS аа

шал + 1279

e ass 12729 + 128

іе + вз

35 Чу a

шаа в

+ 108

smic жеті Sas

unbuffered buffered unbuffered buffered unbuffered buffered

mediun medium medium sedium medium mediom

ary pH sci dry pH ecl dry pM асі агу рн асі] dry pH sel агу рн sel

vU file wel fates | wer Alte. vt fite. ME finte, wel не.

AS ET Te EC IN RE: 0

2.5 | 120 24 + 15024 „| 022 + 1002.5 | 025. ва +

3,0 | 266 2.8 ++ 2763.0 sea | 2263.0 sse 242 3.0 ++ 1682.9 se 202 E

xs | 218 x0 өз 332 5.4 eee | 245 3,1 sse 26735 +4 119541 ++ 250 ++

4.0 | 287 3.1 өз 3603.8 e| 276 3.0. 00. 2883.7 +. 191322 +t 266 ur

4.5 | 272 3.0 sse 35838 +260 3.0 + 2783.1 see] 185 3.0 ++ 275 ‚+

5.0 | 268 3.0 ss 3014.0 «190 2.9 өз 2643.4 see | 1623.0 + zan €

5.5 x0 + 623.6 [172.9 sse 2050 -| моза 224 2

вло | ага 2.6 see 245 3.8 — e| 139 2.7. зе 22732 | 4020 + 16 +

es 2.8 3.5

7.0 2.6 “а

7.5 за ns

в. 3.4 8.0

1. Average dry weight of mycelium and sclerotia in mg.

2. Citrate-phosphate buffer (0.01 M solution of citric acid, 0.02 M solution of dibasic

sodium phosphate).

3. Sclerotial formation (see table 2).

Source : MNHN. Paris

294 K.B. KHARE, G. BOMPEIX & K.C. BASUCHAUDARY

Results of this experiment indicate that all the three isolates of S. minor

grew and produced sclerotia within a wide range of pH (2.5-8.0) in an unbuffe-

red medium (Table 3). The isolates grew well and produced many sclerotia

between pH 3.0-6.0. Maximum growth in all the three isolates occurred at

pH 4.0. On both sides of this optimum pH the growth decreased although

the decrease was more abrupt towards the alkaline side than on the acidic side.

On buffered medium too, pH 4.0 was observed optimum for growth of all

the isolates, except sunflower isolate which produced maximum growth at pH

4.5. However, there was no significant difference in growth produced at pH

4.0 and 4.5 by all the three isolates. The buffering maintained the pH during

growth only from 2.0 to 3.5 and at 7.5 and 8.0. The formation of sclerotia

at pH 7.5 and 8.0 was poor in all the isolates, none being in the buffered me-

dium. No growth and sclerotial formation was observed at pH 2.0 regardless

of the medium.

Effect of temperature

Isolates grew well and produced abundant slcerotia between 15-26°C

(Table 4). Less growth with fewer or no sclerotia occurred at 5 and 28°С

in all the isolates, except lucerne isolate which produced sclerotia mode-

rately at the latter temperature. The optimum and maximum temperatures

for growth of all the isolates were found to be 26°C and 30°C. At 30°C no

sclerotium formed in all the three isolates.

In the case of solid medium the colony growth in all the isolates was inhibited

after seven and four days at 0 and 30°C respectively, and no sclerotial formation

Table 4. — Effect of different temperatures on growth’ and sclerotial formation of three

isolates of S. minor in glucose-peptone medium after 17 days of incubation in dark

and stationary condition (initial pH, 5.9).

| Sm-LE Snot 5п-5

Temperature j

pH of dry sell pH of dry scl |pnor dry sel

filtrate weight filtrate veight filtrate veight

5 3.1 57 o [3.0 ва "mum 29 0

15 2.6 178 — s [2.9 144 — ww [5.0 102 ++

20 2.8 182: 2.7 192 ++ [2.6 184 +++

22 2.7 226 +++ |2.6 232 +++ [2.7 188 +++

26 2.8 260 +++ 1 2.E 271 +++ [2.5 225 +++

28 3.3 94 + [2.2 28 b et 21 0

30 5.6 2 о [5.7 3 a [5.8 o o

1. Average of dry weight of mycelium and sclerotial of three replicates in mg.

2. Sclerotial formation (see table 2).

Source : MNHN. Paris

SCLEROTINIA MINOR 295

was observed at these temperatures even after 30 days. At 35°C all the three

isolates failed to grow. At 5 and 15°C sclerotial initial formed in ten and eight

days respectively towards the periphery but the maturation of sclerotia was

much delayed. At lower temperatures (5-15°C) sclerotia tended to unite, beco-

ming somewhat irregular and flattened. Their size, however, was smaller than

those produced at 25°C.

DISCUSSION

The results show that growth and sclerotial formation of S. minor was compa-

ratively better in natural media than in other media tested. Of the liquid media,

glucose-peptone supported maximum growth with abundant sclerotial forma-

tion, During the growth of isolates, the pH of the medium decreased and this

decrease may be perhaps due to production of organic acids in the culture

by the fungus as reported in case of 5. sclerotiorum (Lib.) De Bary by VEGA

et al. (1970).

The suitable pH range, 3.0-6.0 and the optimum pH 4.0 for growth and scle-

rotial formation of S. minor are contrary to MARRAS (1961) who obtained

good growth of the fungus between pH 4.0 and 10.0 with the optimum around

7.0 on carrot-agar. In this study the fungus grew very little at pH 8.0. Incidentally

the low pH of 3.5-4.5 which favours maximum growth and abundant sclerotial

formation of S. minor, is also the best for the production of proteolytic enzymes

(KHARE and BOMPEIX, 1976).

The minimum, optimum and maximum temperatures for growth of S. minor

were observed to be 0, 26 and 30°C respectively whereas MARRAS (1961)

reported them to be 5, 20-25 and 30°C on carrot-agar. However, in the present

study, at 5 and 30°C only vegetative growth was observed, which was inhibited

after seven and four days of inoculation at these temperatures. The size of

sclerotium at low temperature (5°C) was found to be smaller than those produced

at 25°C. This is in agreement with CHIVERS (1929) who also observed smaller

sized sclerotia at low temperature.

Since S. minor is considered either synonymous to S. sclerotiorum by some

authors or distinct by others it is necessary to compare our results of the effect

of temperature and pH on growth and sclerotial formation of S. minor with

that available for S. sclerotiorum in literature. However, comparisons between

results of S. minor in this study and that of S. sclerotiorum (TANRIKUT and

VAUGHAN, 1951) are difficult because of different media, incubation period

and temperature. Nevertheless differences are evident, S. minor could not

produce sclerotia at 0 and 30°C, at pH 2.0, and suitable pH range being 3.0-

6.0 whereas TANRIKUT and VAUGHAN (1951) and LETOURNEAU (1979)

reported that S. slcerotiorum produced slcerotia at these temperatures and pH,

and grew well over a pH range of 2.4-9.6. However, the optimum temperature

for this fungus as reported here and that of MARRAS (1961), and for 5. sclero-

Source - MNHN. Paris

296 K.B. KHARE, G. BOMPEIX & K.C. BASUCHAUDARY

tiorum observed by TANRIKUT and VAUGHAN (1951) is more or less the

same.

ACKNOWLEDGEMENTS

We are grateful to Professor G. VIENNOT-BOURGIN, ex-Director of the Plant Patho-

logy and Botany Laboratory, National Institute of Agronomy, Paris, for facilities, guidance

and encouragement. The senior author acknowledges the awards of French Government

Scholarship which enabled his to carry out this research in France

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Source : MNHN. Paris

299

Étude ultrastructurale comparative du développement des ascospores

chez la lignée sauvage et chez des mutants á ascospores

«ceinturées» ou «albinos»

de L'ASCOBOLUS IMMERSUS PERS. ex FR.

par A. BELLEMERE*, L. MELENDEZ-HOWELL**,

A. NICOLAS*** et J.-L. ROSSIGNOL***

SUMMARY. — The chronology of ascospore development in Ascobolus immersus is speci-

fied for the wild-type and details are given about the associated ultrastructural modification

of the epiplasm, sporoplasm and more particularly of the ascospore wall. A comparative

study is performed on two strains with distinct mutations in the same gene (b2). One

mutant strain gives «belted» ascospores (with a pigmented equatorial ring) and the other

strain gives «albino» ascospores. It is confirmed that the pigmentation is late and very

marked, and that it results from a modification in a preexisting layer of the wall, being

simply a phenomenon allied with maturation. It is accompanied by the ultrastructural

modification of a thin layer and, to a lesser degree, of the perispore of the ascosporal wall. It

is linked with the nature of the lipidic globules of the sporoplasm and with the form and

content of the perisporic vacuoles of the epiplasm. There are, besides, important ultra-

structural transformations of the sporoplasm to be observed during the maturation process

in the three strains studied : the apparition of a characteristic zoning in the sporoplasm,

changes in the form of the mitochondrial ridges, in their number and in their reaction to the

Patag test (Thiéry’s technique).

RESUME. — La chronologie du développement des ascospores est précisée chez la lignée

sauvage et des détails sont apportés sur les modifications ultrastructurales concomitantes

de l'épiplasme, du sporoplasme, et plus particulièrement de la paroi ascosporale. Deux

souches mutantes du même gène b2 l'une «ceinturée» (ascospore à anneau équatorial

pigmenté) et l’autre «albinos» ont été étudiées pour comparaison. Il est confirmé que la

pigmentation est tardive, brutale, qu'elle résulte de la modification d'une couche préexis-

* Laboratoire de Mycologie, École Normale Supérieure de Saint-Cloud, Grille d'Honneur,

Parc de St-Cloud, F 92211 Saint-Cloud Cedex, France.

** LA 257, CNRS, Laboratoire de Cryptogamie du Muséum d'Histoire Naturelle, 12, rue

de Buffon, 75005 Paris, France.

*** Laboratoire de Génétique, BCG, Bât. 400, LA 86, Université Paris-Sud, F 91405 Orsay-

Cedex, France.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.), TOME 2 (1981).

Source : MNHN. Paris

300 A. BELLEMERE ET AL.

tante de la paroi et n’est qu’un phénomène annexe de la maturation. Elle s'accompagne

de la modification ultrastructurale d'une mince couche et, dans une moindre mesure, de

la périspore de la paroi ascosporale. Elle est en liaison avec les caractères des globules lipi-

diques du sporoplasme et avec la forme et le contenu des vacuoles épiplasmiques périspo-

riques. Par ailleurs, d'importantes transformations ultrastructurales du sporoplasme sont

mises en évidence au cours de la maturation chez les trois lignées étudiées : apparition

d'une zonation caractéristique du sporoplasme, modification de la forme des crêtes mito-

chondriales, de leur nombre et de leur réactivité au test Patag (technique de Thiéry).

INTRODUCTION

Chez le champignon Ascomycéte hétérothallique Ascobolus immersus les

mutations affectant les caractéres morphologiques de l'ascospore ont été large-

ment utilisées comme marqueurs génétiques dans les deux domaines suivants :

le mécanisme de la recombinaison génétique au cours de la méiose (LISSOUBA

et al., 1962; ROSSIGNOL et al., 1979), l'instabilité génétique (DECARIS et

al, 1981). Pourtant, les modifications ultrastructurales liées à de telles muta-

tions n'ont été étudiées que par DELAY (1966) chez un seul mutant albinos.

Désormais les conditions d'une étude exhaustive du développement des

ascospores et de leur pigmentation se trouvent réunies dans le stock 28 d'Asco-

bolus. En effet, plus de 300 mutants affectés dans la morphologie des ascospores

correspondant à 33 génes ont été isolés (NICOLAS et al., 1981). Ces mutants

sont affectés soit dans la forme ou dans la taille de l’ascospore (9 gènes) soit

dans la pigmentation (24 gènes). Parmi ces derniers gènes, 19 contrôlent la

couleur de l'ascospore et 5 la distribution de la pigmentation. Pourtant, dans

certains génes, des alléles mutants différents peuvent modifier les uns la couleur

et les autres la distribution du pigment (NICOLAS et al., 1981). Au cours de

cette premiére étude, la chronologie détaillée du développement des ascospores

est précisée chez la lignée sauvage de référence qui présente des ascospores

dont le pigment brun-rouge est uniformément réparti. Pour comparaison deux

alléles mutants du géne b2 ont été étudiés; l'un dont les ascospores sont non

pigmentées (albinos); l'autre présentant des ascospores à anneau équatorial

pigmenté (ceinturé).

I.— MATÉRIEL ET MÉTHODES

A.- CARACTERES GÉNÉTIQUES DES SOUCHES ETUDIEES

ET MILIEUX DE CULTURE

Les souches utilisées appartiennent au stock 28 d'Ascobolus immersus (RI-

ZET et al., 1969) (PL. 1).

Le mutant «albinos» b2 A4 (mutation A4 dans le gene b2) et le mutant

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 301

«ceinturé» b2 ElE2 ont été isolés par LEBLON (1972). Le développement

des spores sauvages, albinos et ceinturées a été étudié dans des croisements

respectivement «sauvage» par «sauvage», «albinos» par «albinos» et «ceinturé»

par «ceinturé». Le cycle de ce champignon a été décrit par ZICKLER (1973).

Les milieux de culture utilisés sont ceux décrits par RIZET et al. (1960). Les

croisements sont effectués à 22°C sur du crottin de cheval stérilisé.

B. - TECHNIQUES CYTOLOGIQUES

Durant la période de maturation des asques plusieurs fructifications ascospo-

rées sont prélevées chaque jour à divers emplacements dans des boîtes de cul-

tures provenant d'un méme ensemencement. Ces fructifications sont fixées

et incluses selon les techniques classiques en microscopie électronique par

transmission : fixation par le glutaraldéhyde, post-fixation par le tétroxyde

d'osmium, déshydratation par l'éthanol, inclusion dans une résine synthétique

selon SPURR 1969 (cf. BELLEMERE et MELENDEZ-HOWELL, 1976).

Les coupes réalisées au moyen d'un ultramicrotome Reichert OMU; sont

ensuite préférentiellement soumises au test de THIERY (ou réaction Patag) qui

révèle certains polysaccharides (THIERY, 1967). La technique de REYNOLDS

à l'acétate d’uranyle-citrate de plomb a également été utilisée (REYNOLDS,

1963). Les grilles sont examinées par transmission à l'aide d'un microscope

électronique JEOL JEM7 sous tension de 80 kV.

Un nombre relativement élevé de fructifications a dû être observé car les

apothécies de l'Ascobolus immersus ne contiennent en effet qu'un petit nombre

d'asques en maturation (4 ou 5) dont l'âge diffère et dont les ascospores ne sont

pas toutes exactement au même stade de développement. Par suite une coupe

dans une fructification d'âge convenable peut ne pas renfermer d'ascospores

parvenues à un stade de développement déterminé ou n'en contenir qu'un

nombre trés réduit. De nombreuses sections d'apothécies ont donc été néces-

saires pour reconstituer la chronologie fine du développement des ascospores.

De plus les asques de l'Ascobolus immersus sont disposés en bouquet et

leurs ascospores ne sont pas unisériées. Pour obtenir des coupes d'ascospores

et d'asques aussi exactement longitudinales que possible en vue d'une étude

précise des parois, il est donc nécessaire, au cours de la réalisation des sections,

que l'orientation des apothécies qui a été soigneusement faite au moment

de l'inclusion soit légèrement corrigée et cela de façon permanente.

Par ailleurs la paroi des ascospores âgées tend à se cliver longitudinalement

au cours des sections ultrafines. Sa partie extérieure ne subit pas de dommages

mais sa partie intérieure se plisse et se détériore gravement, ainsi que le sporo-

plasme, dont elle reste solidaire, bien que la fixation de ce dernier paraisse

convenable. Il a donc été difficile d'obtenir des coupes satisfaisantes d'ascospores

ágées. L'augmentation de concentration du fixateur et l'allongement du temps

de fixation n'ont pas apporté d'amélioration notable.

Source : MNHN, Paris

302 A. BELLEMERE ET AL.

Le repérage des stades de développement précis des ascospores n'est pas

immédiat et demande quelques manipulations. On ne peut, pour un repérage

grossier, utiliser l'importance de la paroi externe de la spore (périspore) car

elle varie considérablement selon que les spores sont isolées, qu'elles sont en

contact étroit, ou qu'elles sont proches ou non de la paroi ascale. L'usage d'un

fort grandissement du microscope est donc nécessaire, Comme les spores sont

volumineuses, la recherche d'un stade de développement précis demande en

général des déplacements relativement importants des préparations.

Il, — RÉSULTATS

La comparaison du développement des ascospores chez les trois lignées

étudiées ici repose fondamentalement sur l'établissement d'une chronologie

de ce développement. D'aprés le schéma désormais classique chez les Ascomy-

cétes supérieurs (DELAY, 1966; SCHRANTZ, 1966, 1970; CARROLL, 1967;

REEVES, 1967; OSO, 1969; WELLS, 1972; MERKUS, 1973-1976) le dévelop-

pement d'une ascospore aprés son individualisation à partir de la vésicule ascale

peut être subdivisé dans ses grandes lignes en cinq étapes, définies simplement

d'après la structure de la paroi ascosporale :

1) le stade primordial, où la paroi de l'ascospore, extrémement mince, en

apparence homogéne, a une surface onduleuse,

2) le stade primaire, oà cette paroi, toujours homogéne, s'épaissit et cesse

d'étre onduleuse,

3) le stade secondaire, à partir duquel la paroi, encore plus épaisse, comporte

deux couches distinctes,

4) le stade tertiaire, oà l'on observe dans la paroi au moins trois couches

nettement distinctes,

5) le stade de maturation, moins facile à définir par le seul critére de la struc-

ture pariétale, durant lequel la paroi se modifie notablement, avec souvent,

mais pas nécessairement, une forte différenciation d'une partie de la couche

externe de la paroi.

Ces cinq étapes s'observent à la fois chez la lignée sauvage et chez les mutants

ceinturé ou albinos.

Des détails plus fins de l'ultrastructure de la paroi ascosporale et aussi du

sporoplasme et de l'épiplasme doivent être pris en considération pour établir

des subdivisions à l'intérieur des stades définis ci-dessus.

Cependant l'établissement d'une chronologie fine au développement des

ascospores est rendue très délicate par l'absence de synchronisme strict dans

les modifications ultrastructurales des diverses parties de l'ascospore au cours

de son développement. De multiples observations n'ont pas toujours permis

de lever les ambiguités présentées à cet égard par certaines figures.

Afin de permettre dans l'avenir la comparaison éventuelle avec d'autres

mutants la lignée sauvage a été prise comme référence en vue de l'établissement

Source - MNHN. Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 303

de la chronologie de base du développement des ascospores. Le développement

des ascospores chez les mutants ceinturé et albinos sera étudié dans la suite.

Seuls les éléments spécifiques de ce développement feront l'objet d'un com-

mentaire détaillé.

Le schéma de la Fig. 1 explicite la terminologie utilisée dans l'étude de la

paroi ascosporale.

rne de i'ascoepore

Fig. 1. — Positions relatives des éléments structuraux constitutifs de la paroi de l'ascospore

de l'Ascobolus immersus, Schéma repére, théorique.

Source : MNHN. Paris

304 A. BELLEMERE ET AL.

A.- CHRONOLOGIE DU DÉVELOPPEMENT DES ASCOSPORES

DE LA LIGNÉE SAUVAGE

1) Stade primaire (Pl. II).

Les ascospores qui viennent de s'individualiser à partir de la vésicule ascale

(stade primordial) ont une paroi trés mince, homogéne, transparente aux élec-

trons, limitée du cóté interne par le plasmalemme ascosporal et du cóté externe

par une autre membrane trilaminaire qui, par commodité, sera appelée ici

«limitante externe» de l'ascospore.

Au cours du stade primaire du développement la paroi ascosporale s'épaissit

notablement mais reste homogène et transparente aux électrons (Pl. П-А).

La limitante externe etle plasmalemme sporal, trés sinueux, sont soulignés par

la réactivité de leur partie moyenne au test Patag (Pl. II-B).

Le sporoplasme (Pl. II-C) renferme des mitochondries à crétes peu nom-

breuses, un peu verruqueuses; le reticulum endoplasmique, un peu plus abon-

dant prés du plasmalemme, montre des sections courtes, d'aspect souvent

contourné; des microvésicules sont présentes; les granules de glycogéne sont

dispersés; les globules lipidiques sont très rares ainsi que les vacuoles qui sont

toujours trés petites et correspondent probablement à des mitochondries

en régression. Le noyau sporal central, subglobuleux, posséde une membrane

abondamment fenestree (Pl. П-С).

Les caractéres cytologiques de l'épiplasme (Pl. II-A, C) sont encore proches

de ceux du sporoplasme. Les mitochondries sont analogues; quelques-unes

présentent un aspect en haltere (Pl. II-D). Le reticulum endoplasmique est

abondant, souvent d'aspect vésiculeux; certains de ses éléments, assez épais,

sont fréquemment disposés parallélement à la limitante externe, au voisinage

de celle-ci (Pl. II-B). Les globules lipidiques sont totalement absents. Les va-

cuoles sont par contre relativement nombreuses mais encore de faible taille.

A un stade avancé le glycogéne devient abondant et commence à former des

amas (Pl. II-B).

Le plasmalemme ascal, Patag +, montre çà et là, des corps paramuraux. La

paroi de l'asque comporte une partie externe (exoascus), mince,Patag + et une

partie interne (endoascus) beaucoup plus épaisse, à peine réactive au test Patag,

dans laquelle on distingue avec difficulté trois couches à peine différenciées

(PL. ILA).

2) Stade secondaire (PI. III).

Au cours de ce stade, la paroi ascosporale, qui continue a s’épaissir, perd

son homogénéité (Pl. III-A). On y distingue une partie interne, Patag — et une

partie externe, faiblement Patag +, diversement dénommées par les auteurs

(cf. BELLEMERE et MELENDEZ-HOWELL, 1976). On qualifiera ici la partie

externe de «périspore» (terme habituellement utilisé par les auteurs) et, pour

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 305

éviter des confusions, on réservera le nom de «paroi propre» à la partie interne

(appelée tantôt exospore et tantôt endospore par les auteurs).

Cette paroi propre (PL. III-A) constitue l'essentiel de la paroi ascosporale;

d'épaisseur régulière et d’aspect relativement homogène, elle est Patag —. La

périspore relativement mince est faiblement Patag + et d'épaisseur trés inégale,

Elle forme çà et là, des hernies qui pénètrent l’épiplasme et confèrent à la jeune

ascospore une surface onduleuse, Assez rapidement la périspore cesse d'être

homogène. Seule une mince frange ou périspore externe, au contact de la limi-

tante externe, conserve la texture initiale très finement granuleuse (PI. III-B).

La partie profonde de la périspore, qui est la plus importante, s'enrichit de

granules polysaccharidiques et devient plus nettement Patag ; on l'appellera

ici périspore moyenne (Pl. III). La périspore interne s'individualisera ultérieure-

ment.

Tandis que la périspore se différencie, une «paroi intermédiaire» s'ébauche

entre la périspore moyenne et la paroi propre de l'ascospore (Pl. Ш-А, В). Те

terme de paroi intermédiaire a été préféré ici aux diverses dénominations utili-

sées par les auteurs (épispore, endospore, etc...) car il évite des confusions

tout en indiquant de facon simple la localisation de cet élément de la paroi,

A l'origine la paroi intermédiaire n'est qu'une étroite bande Patag — occupée

par de fines stries transversales, faiblement Patag +, mal délimitées, plus réactives

dans leur partie basilaire, Bientôt une striation longitudinale, également impré-

cise et faiblement Patag +, se superpose, çà et là, à la striation transversale. Elle

confère à la jeune paroi intermédiaire l'aspect d’un réseau, assez flou, plus ou

moins incomplet, dont les mailles sont allongées parallèlement à la paroi de

l'ascospore (Pl. HI-B).

A ce stade les caractéres cytologiques du sporoplasme se sont peu modifiés

(PI. IILD). Les mitochondries, un peu plus abondantes, ont des crêtes assez

épaisses et irrégulières. Le reticulum endoplasmique est un peu plus développé

mais son aspect reste inchangé. Les granules de glycogène, plus nombreux,

forment maintenant de petits amas. Les globules lipidiques restent rares. Le

noyau sporal est souvent lobé. Le plasmalemme est trés sinueux.

Dans l'épiplasme (Pl. III-C) le reticulum endoplasmique est peu modifié;

le glycogène est devenu dans l'ensemble plus abondant que dans le sporoplasme

et forme des amas assez importants. Les vacuoles, également plus nombreuses,

sont aussi généralement plus grandes; certaines d'entre elles, situées surtout

dans la région apicale de l'asque sont étroitement appliquées contre la limitante

externe de l'ascospore (PI. III-B) et peuvent se fusionner latéralement. Par suite,

à ce stade, la spore supérieure de l'asque peut parfois être déjà coiffée d'une

large vacuole (Pl. XXI-A). Çà et là certaines petites vacuoles peuvent contenir

un granule réactif (Pl. III-A).

La paroi ascale s'est épaissie; l'endoascus reste peu différencié (Pl. IC).

Le plasmalemme ascal ne présente plus, semble-til, de corps paramuraux. A

la fin de ce stade l'appareil apical de l'asque est nettement différencié (Pl.

XXI-A).

Source : MNHN. Paris

306 A. BELLEMERE ET AL.

3) Stade tertiaire (Pl. IV, V, VI)

Le stade tertiaire peut étre défini par les caractéres de la paroi intermédiaire

de l'ascospore. Au début du stade tertiaire celle-ci ne montre pas encore de

couche finement et régulièrement stratifiée mais, vers la fin du stade tertiaire,

ication distincte dans une partie de la paroi intermédiaire.

on observe une strat:

a- Début du stade tertiaire (Pl. IV, V).

On envisagera successivement les modifications de la paroi ascosporale, du

sporoplasme et de l'épiplasme; celles de la paroi ascale sont faibles et n’ont pas

été étudiées en détail.

а) La paroi ascosporale (Pl. IV; V, A à D).

L'épaisseur de la périspore s'accroit de fagon trés inégale selon l'importance

de l'espace épiplasmique disponible autour de l'ascospore et ne peut donc pas

étre utilisée comme repére chronologique. Alors que la périspore externe,

Patag —, reste mince et d'épaisseur uniforme (Pl. V.C), l'épaississement est

important au niveau de la périspore moyenne dont la structure se modifie.

Des sphérules de petite taille, dépourvues de granules polysaccharidiques (PI.

V-A) mais trés réactives à la coloration par l'acétate d'uranyle-citrate de plomb

(Pl. V-D) y apparaissent fréquemment. On les qualifiera dans la suite de «sphé-

rules grises» (en raison de leur aspect relativement clair aprés la réaction Patag).

Ces sphérules grises peuvent éventuellement étre absentes au début du stade

tertiaire (Pl. IV-B). Parfois elles existent dés la fin du stade secondaire mais

elles sont alors assez rares et de petites dimensions.

Une périspore interne se constitue entre la périspore moyenne et la paroi

intermédiaire. Assez mince, d'épaisseur constante, de texture fine et réguliére,

elle se distingue aisément par son caractère Patag — (PI. IV-A; V-A) et sa forte

réactivité à la réaction à lacétate d'uranyle-citrate de plomb (Pl. IV-B; V-B).

Elle ne semble pas provenir de la paroi intermédiaire. Il n'a pas été possible

de préciser si elle apparaissait entre celle-ci et la périspore moyenne ou si elle

se différenciait à partir de la partie basilaire de cette derniére.

Sous la périspore interne la paroi intermédiaire est plus épaisse, Des structures

Patag + s’y sont différenciées. On peut maintenant y distinguer trois parties

superposées

I- La partie externe, d'épaisseur régulière, sera appelée ici «couche blanche».

Mince, et Patag —, elle est traversée par de très fins et très nombreux éléments

fibrillaires radiaux, régulièrement espacés, à peine réactifs au test Patag. Ces

éléments sont constitués par la partie la plus externe des fibrilles observées

dans la couche intermédiaire au cours du stade secondaire (Pl. V-A). Une mince

lamelle médiane ou «lamelle noire» est nettement mise en évidence dans la

couche blanche aprés la réaction Patag en raison de sa forte réactivité mais elle

n'apparaît pas après la technique à l'acétate d'uranyle-citrate de plomb (Pl.

V-A, B).

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 307

II- La partie moyenne de la paroi intermédiaire est la plus développée.

Elle sera appelée dans la suite «couche Castor» (en liaison avec l'existence d'une

«couche Pollux» qui sera définie ci-après), D'épaisseur constante elle est Patag —

et présente, comme la couche blanche, une striation transversale ténue, Patag +,

toujours un peu floue (Pl. IV-A; V-A). Ultérieurement cette striation s'entre-

croise avec plusieurs fines strates d'éléments longitudinaux courts et étroits,

à peine réactifs au test Patag, et elle prend alors un aspect discrètement qua-

drillé, plus distinct vers sa base. La technique à l'acétate d'uranyle-itrate de

plomb y révèle la présence d'une bande longitudinale sub-axiale, plus sombre

(Pl. V-B).

III - La partie interne de la paroi intermédiaire comporte essentiellement

la couche Pollux, mince couche sousjacente à la couche Castor, légèrement

plus réactive que celle-ci au test Patag mais d'aspect opaque par la technique

à l'acétate d’uranyle-citrate de plomb. Une trés mince bande d'aspect clair

après le test Patag mais réactive à la technique à l'acétate d'uranyle-citrate de

plomb sépare les couches Castor et Pollux. Elle n'est distincte que sur les coupes

bien orthogonales à la paroi (Pl. V-A, B). Le test Patag révéle une texture trés

fine dans la couche Pollux, marquée d'une fine striation transversale qui suggère

que cette couche s'est établie au niveau de la partie interne des stries radiales

observées dans la paroi intermédiaire au stade précédent. La limite interne de la

couche Pollux, vers la paroi propre de l'ascospore, apparait floue après le test

Patag.

La paroi propre de l'ascospore qui s'est épaissie depuis le stade précédent

ne présente pas de modifications structurales importantes (РІ. ГУ-А, В).

B) Le sporoplasme (Pl. IV-A, B; V-E, F).

Dans le sporoplasme les mitochondries sont abondantes; parfois elles con-

servent leur aspect du stade précédent mais il arrive que leurs crêtes s'allongent

longitudinalement, soient plus nombreuses, plus fines, et se disposent de facon

plus régulière, presque parallèlement les unes aux autres, On observe une nette

régression du glycogène qui n'est plus représenté que par des granules dispersés.

Le reticulum endoplasmique est plutót moins abondant. Des microvésicules

relativement volumineuses, à contenu trés transparent aux électrons (Pl. V-E,

F) semblent plus nombreuses que précédemment et forment parfois de courtes

chaines. Les vacuoles, assez fréquentes sont toujours petites, Elles résultent

encore, semble-t-il, de la résorption de mitochondries. Elles renferment souvent

un granule réactif à la technique à l'acétate d'uranyle-citrate de plomb (Pl. V-G).

Le nombre des globules lipidiques s'accroit. Certaines images évoquent leur

mode de formation (Pl. V-E). La coloration à l'acétate d'uranylecitrate de

plomb met en évidence de nombreux ribosomes (Pl. 1V-B). Le plasmalemme

ascosporal devient plus régulièrement et plus finement onduleux, On remarque

l'absence de mitochondries au voisinage même du plasmalemme (PI. IV-A, B).

y) L'épiplasme (Pl. IV-A, B; V-G).

Dans l'épiplasme les granules de glycogéne sont beaucoup plus abondants

qu'au stade précédent et forment des amas denses, assez étendus; sur certaines

Source : MNHN, Paris

308 A. BELLEMERE ET AL.

images ceux-ci peuvent déjà commencer à entrer en régression. Le glycogène

est absent dans une étroite région cytoplasmique contiguë au plasmalemme

ascal formant un liséré clair sur les coupes traitées par le test Patag (Pl. V-G).

Les mitochondries, petites sont plus nombreuses qu'au stade précédent; elles

ont un contenu dense aprés la réaction à l'acétate d’uranyle-citrate de plomb

et un aspect clair au test Patag; la plupart d'entre elles se trouvent incluses

dans les amas de glycogène (PI. IV-A; V-G); quelques-unes sont au voisinage

même de la limitante externe des ascospores. Le reticulum endoplasmique est

plus abondant; ses éléments sont généralement épais et très contournés, sauf

au voisinage des ascospores où ils sont plus minces; ils sont alors généralement

allongés contre la paroi ascosporale (Pl. V-D). Les vacuoles sont assez petites.

Les plus internes sont étroitement appliquées contre la limitante externe de

Vascospore. Certaines de ces vacuoles se fusionnent latéralement (Pl. V-C).

Le plasmalemme épiplasmique n'est pas modifié.

La paroi ascale s'épaissit mais ne se différencie pas spécialement.

b - Fin du stade tertiaire (Pl. VI).

Les modifications de structure de la paroi intermédiaire de l'ascospore sont

caractéristiques de la fin du stade tertiaire. La couche Castor est maintenant

constituée d'une alternance très régulière de plusieurs strates très minces, alter-

nativement Patag + et Patag — (Pl. VI-E). Cette fine stratification est moins

nette vers sa base où les strates Patag —, peut-être plus minces, sont estompées

par les strates Patag +, qui sont d'autant plus denses et réactives qu'elles sont

proches de la base de la couche Castor. L'action de l'acétate d'uranyle et du

citrate de plomb donne une sorte d'image en négatif de la couche Castor car

les strates Patag — sont alors réactives alors que les strates Patag + ne le sont

pas (Pl. VI-D).

Aprés le test Patag la couche blanche qui surplombe la couche Castor reste

ceinturée par la lamelle noire, Celle-ci semble devenue un peu plus réactive

quoiqu'elle puisse apparaître artificiellement épaissie sur les coupes qui ne sont

pas rigoureusement orthogonales à la paroi (Pl. VI-B).

La couche Pollux, sous la couche Castor, est trés sombre aprés la réaction

A Pacétate d'uranyle-citrate de plomb (Pl. VI-D); elle est devenue un peu plus

réactive au test Patag aprés lequel sa limite inférieure reste assez imprécise.

Une mince couche Patag —, signalée précédemment, la sépare encore de la

couche Castor.

Dans la périspore, sous la limitante externe de l’ascospore, la mince рёгізроге

externe, à peine réactive au test Patag est toujours distincte. Dans la périspore

moyenne la taille et le nombre des sphérules grises sont très variables. Celles-ci

sont parfois abondantes et assez grosses dans certaines parties d'une ascospore

mais sont trés discrétes ailleurs (Pl. VI-A).

Une couche d'épaisseur réguliére ou «couche support» s'individualise à la

base de la périspore interne par sa réactivité trés légérement plus forte au test

Patag (Pl. VIE). C'est à son niveau qu'apparaítra ultérieurement la pigmenta-

tion.

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 309

A ce stade la paroi propre de la spore, dont la structure est inchangée, pré-

sente son épaisseur maximale.

Dans le sporoplasme les mitochondries sont plus nombreuses. Elles ont

d'ordinaire davantage de crétes; celles-ci sont fines, plus ou moins longitudinales

et disposées parallèlement (Pl. VI.C). Le glycogéne est absent, ou peu s'en faut.

Le reticulum endoplasmique reste rare mais les microvésicules deviennent

plus nombreuses; leur association avec certains éléments réticulaires rappelle

parfois des figures frustes d'appareil de Golgi (Pl. VI-C). Les globules lipidiques,

tin peu plus nombreux ne sont jamais abondants, On observe encore de petites

vacuoles de régression et des ribosomes. Dans le noyau sporal, dont la paroi

est nettement fenétrée, des plages de chromatine peuvent étre observées.

Le plasmalemme sporal présente parfois de nombreuses sinuosités trés étroi-

tes, assez profondes, et sensiblement de méme taille, formant de petites saillies

réguliéres dans le sporoplasme. L'aspect trés particulier qu'il présente alors

sur les coupes sera qualifié ici d'aspect «en chevrons» (Pl. VI-B).

Dans l'épiplasme la quantité de glycogéne commence à rég.esser. Des mito-

chondries et des éléments réticulaires sont toujours présents. Les vacuoles sont

nombreuses, encore petites; la limitante externe de l'ascospore fait souvent

saillie vers l'extérieur entre les vacuoles épiplasmiques les plus internes appli-

quées contre les ascospores, comme si chacune de ces vacuoles exerçait une

pression physique contre Pascospore. La fusion latérale de vacuoles autour

des ascospores n'est guère plus avancée qu'au début du stade tertiaire.

On ne note pas de modification sensible au niveau du plasmalemme et de la

paroi de l'asque.

4) Stade de maturation (Pl. VITà XI).

Par commodité on considérera que la pigmentation marque le début de la

maturation et on distinguera trois temps dans la maturation :le début de matu-

ration, le cours de maturation, la maturation avancée.

а- Début de maturation (Pl. VII).

La pigmentation s'établit brutalement. L'étude de nombreuses ascospores

ne nous a pas permis de trouver des stades de transition entre des stades tertiaires

terminaux, sans trace de pigmentation, et des stades où la couche de pigmenta-

tion est déjà importante.

La pigmentation s'établit au niveau de la couche support de la périspore

interne qui devient la «couche de pigmentation» (Pl. VILA, B). Sa matrice,

transparente aux électrons après le test Patag, et non structurée, reste analogue

à ce qu'elle était au stade précédent. Elle est envahie de «granules» grossière-

ment subsphériques, de taille relativement importante (0,05um), faiblement

réactifs au test Patag. Ces granules peuvent rester séparés ou être fusionnés

en petites masses laissant entre elles quelques interstices Patag —, de formes

et de dimensions variées. De trés petits «grains» (0,005um), très fortement

Patag +, sont irrégulièrement répartis dans toute la couche de pigmentation.

Source : MNHN, Paris

310 A, BELLEMERE ET AL

On les rencontre essentiellement dans les granules précédents, ou á leur contact,

mais on peut en observer aussi à l'extérieur de ces granules. L'ensemble des

granules et des grains rend la couche de pigmentation très fortement opaque

aux électrons après le test Patag.

Après la technique à l'acétate d'uranyle-citrate de plomb on observe dans

la matrice claire de trés nombreux granules sombres, de moins de 0,1um de

diamètre, à contenu dense et hétérogène d'analyse difficile, Ces granules sont

probablement les mêmes que ceux que révèle le test Patag.

L'opacité aux électrons est renforcée dans certaines zones de la couche

de pigmentation où les granules denses, localement plus abondants, sont associés

avec plus de cohésion. Ces zones ne sont pas disposées de façon absolument

quelconque: elles dessinent un aspect en «flammes», orientées plus où moins

obliquement par rapport à la surface de la spore, et semblent témoigner de

l'existence de dispositions hélicoidales dans la paroi ascosporale.

La partie externe de la couche de pigmentation est, elle aussi, plus opaque

aux électrons, Elle présente l'aspect d'une «croûte», plus ou moins craquelée

gà et là, dont la surface externe forme des sortes de bombements surbaissés,

de taille et de forme irrégulières. Cette croûte est séparée du reste de la couche

de pigmentation par une mince zone de matrice, Patag —, plus ou moins dis-

continue et d'épaisseur irrégulière, dépourvue des granules et des grains de

pigmentation,

La partie supérieure de la croúte de la couche de pigmentation est séparée

de la périspore interne qui la surplombe par une mince «frange», Patag —, non

structurée, dans laquelle on peut observer cependant, cà et là, quelques amas

assez dispersés de granules faiblement Patag +, Ces granules sont du méme type

que ceux de la couche de pigmentation mais leur dimension est plus réduite.

Ils renferment, eux aussi, quelques grains très fins, fortement Patag + (Pl. VII-

B). La croûte de la couche de pigmentation et la couche claire sous-jacente

sont également distinctes aprés la technique à l'acétate d'uranyle-citrate de

plomb (Pl. XI-D).

Au-dessus de la frange qui surplombe la croüte de la couche de pigmentation,

la périspore interne est à peine réactive aussi bien au test Patag (PI. VII-A, B)

qu'à la technique à l'acétate d'uranyle-citrate de plomb (Pl. XI-B, D). De texture

fine et homogène, analogue à celle qu'elle avait précédemment, elle ne renferme

aucun granule ou grain Patag + (Pl. VII-B). Elle est séparée de la périspore

moyenne sous-jacente par une mince couche, ou «couche de transition», dont

la matrice non structurée, est très claire soit après le test Patag (Pl. VII-B)

soit après la réaction à l’acétate d’uranyle-citrate de plomb (PL. XI-B, С, D).

Cette matrice contient des granules plus ou moins subsphériques, assez faible-

ment Patag +, analogues à ceux de la couche de pigmentation mais de taille

plus faible et de forme plus irréguliére; ces granules renferment eux aussi des

grains trés fins, Patag +, moins réactifs que ceux des grains de la couche de

pigmentation (Pl. VII-B). Aprés la technique à l'acétate d'uranyle-itrate de

plomb on observe aussi des granules dans la couche de transition; ils sont plus

petits et moins réactifs que ceux de la couche de pigmentation, de minces

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 31

prolongements s'en échappent et leur contour est assez diffus (Pl. XI-D).

La périspore moyenne, à l'extérieur de la périspore interne, renferme, comme

avant la pigmentation, de nombreux grains fins, Patag +, répartis de fagon

assez régulière. Ils sont souvent disposés autour de très petites masses, plus

faiblement réactives au test Patag, dont la section est plus ou moins elliptique.

Ces petites masses, d'aspect homogène, sont dépourvues de fins grains Patag +

(Pl. VII-B).

Dans certaines «aires» subglobuleuses ou ovales, de dimensions variées et

d'aspect très clair (PL. VII-A), la matrice de la périspore interne contient des

granules d'aspect et de taille analogues à ceux de la couche de transition. Ils

renferment eux-aussi de fins grains Patag +. ll semble que ces aires, plus ou

moins subglobuleuses, soient différentes des sphérules grises décrites dans la

périspore moyenne au cours du stade tertiaire. Toutefois la disparition effective

de ces dernières, avant la pigmentation, n’a pu être constatée et reste à confir-

mer, Les aires claires subglobuleuses de la périspore moyenne semblent être

des régions où s’ébauche localement un processus de pigmentation dont le terme

reste moins avancé que dans la couche support.

La périspore externe s'amincit; elle conserve son aspect clair aprés le test

Patag. La limitante externe de l'ascospore, Patag +, reste bien individualisée

(PL, VILA).

Sous la couche de pigmentation, la couche blanche (partie supérieure de la

paroi intermédiaire de Pascospore) reste Patag — Elle est d'autant plus distincte

qu'elle fait maintenant contraste avec la couche de pigmentation et que la réac-

tivité de sa striation transversale sinueuse, formée de fins granules alignés, s'est

renforcée (Pl. VIIB). Cette striation se prolonge de façon irrégulière et dis-

crète dans la partie inférieure de la couche de pigmentation qui la surplombe;

la surface de base de celle-ci est donc assez imprécise et irrégulière. La lamelle

noire médiane de la couche blanche, qui était très réactive au test Patag, a main-

tenant complètement disparu. Elle s’est probablement effacée sur place, mais

on pourrait envisager qu’elle se soit intégrée à la couche de pigmentation ou à

la couche Castor sous-jacente.

La couche Castor s'est modifiée; elle est devenue plus dense et plus réactive

(PL VII-A, B; XI-A, D); sa fine stratification longitudinale est masquée par

de nombreux granules très fins, Patag +. Ces granules sont apparemment ana-

logues à ceux qui ont été mentionnés ci-dessus dans la couche de pigmentation.

La fine couche, d'aspect clair aprés le test Patag, qui sépare la couche Castor

de la couche Pollux parait plus nette par contraste avec la réactivité de la couche

Castor (Pl. VII-A, B). La réactivité de la couche Pollux s'atténue; les limites

de celle-ci, surtout celles de la base, deviennent imprécises (Pl. VILA, B; РІ. ХІ-

A, D).

Certaines caractéristiques de la paroi propre de la spore ont dá se modifier

car les coupes sont fréquemment déchirées á son niveau. Pourtant son aspect

est inchangé. Parfois, cependant, on y observe une fine pulvérulence de granules

Patag + (Pl. VII-B). Parfois sa partie basilaire est un peu plus réactive au test

de Thiéry.

Source : MNHN, Paris

312 A. BELLEMERE ET AL.

Bien qu'il apparaisse très brusquement le processus de pigmentation est

relativement complexe puisque, dans la couche support, il met en œuvre à la

fois des granules assez gros et des grains plus fins et que la périspore et la paroi

intermédiaire en sont affectées. Le produit final reste cependant localisé à une

couche précise, la couche support, apparemment préformée.

Au niveau du sporoplasme les études cytologiques sont assez délicates car

on sait que chez les spores müres il se sépare du reste de la coupe, se replie

ou s'arrache. On peut cependant constater que les mitochondries, encore plus

abondantes, ont toujours de nombreuses crétes longitudinales fines et sub-

parallèles (PL. VIIL-D). Vers la périphérie du sporoplasme le reticulum endoplas-

mique, moins abondant se dispose parallèlement au plasmalemme sporal. Des

microvésicules et des globules lipidiques sont encore présents. Le glycogène

est très rare. Le plus souvent le plasmalemme sporal présente l'aspect en che-

vrons décrit précédemment; mais il arrive qu'il ait encore un aspect sinueux

(Pl. VIILD). A la périphérie du sporoplasme les organites sont plus rares.

Dans l'épiplasme les ilots de glycogéne sont en nette régression; leurs granules

constitutifs sont maintenant plus ou moins dispersés dans des structures de type

vacuolaire (Pl. VII-A). Les mitochondries restent bien individualisées. Le reticu-

lum endoplasmique est assez abondant. Les vacuoles périsporiques augmentent

un peu de taille; elles continuent à se fusionner latéralement, de façon progres-

sive (Pl. VII-A). Les sections du plasmalemme ascal sont plus irrégulières; la sur-

face de l'asque devient un peu onduleuse.

b- Cours de maturation (Pl. VIII).

Aprés l'établissement de la pigmentation la maturation de l'ascospore s'accé-

lère et des modifications ultrastructurales notables apparaissent.

Le changement d'aspect du sporoplasme est particulièrement manifeste

avec le test Patag. Les mitochondries devenues trés nombreuses et presque

contigués ne montrent plus de crétes; dans les coupes elles apparaissent comme

des sections elliptiques, Patag —, limitées par des granules Patag + dont l'aspect

est un peu différent des grains de glycogène (Pl. VII-A). Simultanément le

reticulum endoplasmique s'est effacé et les globules lipidiques perdent en partie

leur réactivité. De plus l'ensemble du sporoplasme semble láchement poudré de

trés fins granules, plus petits et moins nettement Patag + que ceux qui entourent

les mitochondries; ces granules possèdent une auréole claire et ressemblent

en cela à de minuscules globules lipidiques (Pl. VIII-C).

Au niveau de la paroi ascosporale les modifications sont moindres. La paroi

propre paraît inchangée. Dans la paroi intermédiaire c’est la couche Castor

qui est la plus affectée. Après la réaction Patag la stratification n'y est plus

apparente; elle est masquée, ou effacée, par le développement de très nombreux

granules polysaccharidiques qui lui donnent un aspect beaucoup plus dense

(РІ. VIII-B). La couche Pollux est devenue moins réactive au test Patag. La

couche blanche reste dépourvue de lamelle noire.

Dans la couche de pigmentation les granules fondamentaux, faiblement

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 313

Patag +, toujours accompagnés de fins grains polysaccharidiques, sont nettement

plus coalescents qu'au stade précédent et l'aspect en flammes est plus clairement

marqué (Pl. VIII-B). La croüte de la partie supérieure de la couche de pigmenta-

tion est mieux individualisée ainsi que la couche blanche irrégulière qui lui

est sous-jacente (Pl. УШ-В).

La périspore moyenne perd un peu de sa réactivité et sa texture devient

un peu plus lâche (PI, VIII-A, B). Les zones subglobuleuses qui y ont été men-

tionnées au stade précédent y sont devenues, elles aussi, moins réactives (Pl.

VII-A).

La périspore interne n'est plus toujours visible sur toute la surface de l'asco-

spore. A certains endroits la couche de pigmentation vient donc au contact

direct de la couche de transition qui renferme encore de nombreux granules

(РІ. УШ-В).

La périspore externe cesse pratiquement d'être distincte (Pl. VIII-A).

L'aspect de l'épiplasme est généralement peu différent de celui qu'il présen-

tait précédemment. Le glycogéne est moins abondant. Il n'est pas rare que le

long des ascospores les vacuoles périsporiques restent çà et là. peu développées

(РІ. УШ-А).

c- Fin de maturation (Pl. IX - X - XI).

Quand la maturation de l'ascospore est trés avancée l'aspect du sporoplasme

ainsi que celui de la périspore et de l'épiplasme deviennent caractéristiques.

Dans le sporoplasme les mitochondries sont toujours très nombreuses; leur

paroi et leurs structures internes restent indistinctes au test Patag. Elles limitent

un réseau de granules nettement Patag +, relativement láche, tandis que leurs

sections paraissent toujours poudrées de trés nombreux grains trés fins (Pl. X-

B, C). Au milieu des mitochondries les globules lipidiques sont devenus trés

abondants : certains sont peu réactifs au test de Thiéry et leur partie centrale,

plus pále est trés homogene; d'autres beaucoup plus nettement réactifs ren-

ferment des grains fortement Patag +. Ceci incline à penser qu’une synthèse

de nouveaux globules lipidiques accompagne la maturation; les globules les

plus clairs seraient alors les plus anciens. L'aspect en chevrons du plasmalemme

sporal apparait d'autant mieux que la partie périphérique du sporoplasme est

dépourvue de mitochondries et de lipides. Tout à la fin de la maturation la partie

centrale du sporoplasme est occupée par un amas dense de granules Patag + en

continuité avec le réseau qui entoure les mitochondries. Le sporoplasme présente

alors une zonation concentrique tout à fait remarquable. Un large amas de

granules, central est entouré d'une couche médiane épaisse contenant des

mitochondries et des globules lipidiques; celle-ci est elle-méme circonscrite

par une région périphérique sans organites bordée par le plasmalemme en che-

vrons (Pl. X-B, C).

La structure de la paroi propre de l'ascospore reste inchangée. Dans la paroi

intermédiaire la couche Pollux perd de son individualité et, aprés le test Patag,

elle n'apparaît plus que sous la forme d’une mince frange assez claire, Celle-ci

Source : MNHN, Paris

314 A. BELLEMERE ET AL.

souligne la couche Castor qui est encore plus dense. La couche de pigmentation

devient, elle aussi, trés opaque aux électrons; les granules qui la composent,

maintenant coalescents, sont. indistincts et l'aspect en flammes est particulière-

ment net (Pl. IX-C). Une couche unique Patag — sépare désormais la couche

de pigmentation de la périspore moyenne; il est probable que la périspore

interne se réduit à des zones lenticulaires plaquées sur la couche de pigmenta-

tion; puis les granules de la couche de transition s'effacent peu à peu. Alors

Fig. 2. — Schéma récapitulatif du développement de la paroi des ascospores de la lignée

sauvage de l'Ascobolus immersus. I, Stades primaires; Il, Stades secondaires; III, Stades

tertiaires; IV, Stades de maturation. (Pour les légendes se reporter à la légende générale

des planches, p. 333).

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 315

cette couche et les restes de la périspore interne se fondent en une couche

unique, claire, oà l'on observe parfois quelques granules (Pl. IX-C).

Tandis que progresse la maturation, la périspore présente une texture de plus

en plus lâche. Après le test Patag on y observe quelques globules subsphériques

d'aspect assez proche de celui de globules lipidiques (Pl. X-A). Mais au contraire

de ces derniers ces globules subspheriques sont réactifs à l'acétate d'uranyle-

citrate de plomb (PI. XI-A, E). Ils correspondent probablement aux aires claires

subglobuleuses de la périspore interne signalées en début de maturation: celles-

ci se sont modifiées par l'effacement progressif des granules Patag + qu’elles

contenaient et par la densification de leur partie centrale. Dans la périspore

des ascospores trés âgées le test Patag révèle des précipités irréguliers, très denses,

de tailles et de formes trés diverses. Leur nature et leur origine n'ont pu étre

précisées. La limitante externe de l'ascospore reste toujours trés nette (Pl. X-A).

L'épiplasme persiste très longtemps sous la paroi ascale. Le glycogène y reste

abondant. Jusqu'à des stades avancés on y rencontre de petites mitochondries

parfois entourées de granules de glycogene (Pl. IX-B). L'épiplasme se réduit

ensuite à une mince frange appliquée contre la paroi ascale. Puis des figures

myéliniques s'établissent sur son emplacement (Pl. IX-D). Dans le complexe

vacuolaire qui sépare l'épiplasme des ascospores on observe alors fréquemment

diverses concrétions et précipités irréguliers, fortement Patag +, rappelant

l'aspect de ceux que l'on rencontre dans la périspore moyenne (Pl. IX-D).

Les Fig. 2 et 3 résument les principales caractéristiques du développement

des éléments constitutifs des ascospores de la lignée sauvage.

B.- LE DÉVELOPPEMENT DES ASCOSPORES

CHEZ LE MUTANT CEINTURÉ

1) Stades précédant la pigmentation (Pl. XII, ХШ).

Le schéma d'ensemble du développement des ascospores de type ceinturé

est analogue à celui des ascospores de la souche sauvage; Les différences cytolo-

giques sont minimes; la plupart, plus ou moins fluctuantes, ne sont généralement

pas significatives. On observe cependant que les globules lipidiques du sporo-

plasme de la très jeune spore sont d'une façon générale, moins rares que chez

la souche sauvage (Pl. XII-B). De plus leur structure est légèrement différente,

au moins au stade tertiaire. Les fins granules opaques aux électrons qu'y révèle

le test Patag y sont en effet plus grossiers que ceux du type sauvage. Tls sont

aussi souvent plus abondants vers la périphérie des globules lipidiques et donnent

à ceux-ci un aspect hérissé, en «oursin» (Pl. XIII-D). On rencontre aussi d'autres

globules lipidiques moins réactifs, à centre clair, qui sont sans doute plus agés

(Pl. XIII-D). Dans l'épiplasme du mutant ceinturé les vacuoles qui entourent

les jeunes ascospores sont plus isodiamétriques que celles de la lignée sauvage

qui, on l'a vu, restent longtemps minces et allongées contre la paroi sporale.

En outre les vacuoles du mutant ceinturé peuvent contenir assez fréquemment

Source : MNHN, Paris

316 A. BELLEMERE ET AL.

plusieurs petits granules de précipité appliqués contre le tonoplaste (Pl. XILC,

G).

Enfin chez le mutant ceinturé la maturation du sporoplasme parait un peu

accélérée relativement à la lignée sauvage. En particulier la structure en chevrons

du plasmalemme ascosporal semble s’établir plus précocement (Pl. XIII-D).

2) Pigmentation des ascospores du mutant ceinturé (Pl. XIV, XV, XVI).

On sait que chez le mutant ceinturé les ascospores ont une pigmentation

qui, dans l'ensemble, est un peu plus faible que celle de la souche sauvage mais

qui est renforcée au niveau de la région équatoriale de la spore of elle forme une

sorte de ceinture plus sombre.

En microscopie électronique à transmission, aussi bien aprés le test Patag

qu'après la technique à l'acétate d'uranyle-citrate de plomb, on constate que

la jeune couche de pigmentation parait subdivisée en trois sous-couches au

niveau de la région équatoriale de la spore (Pl. XIV-A, B). La sous-couche

basilaire, épaisse, est trés opaque; la fine sous-couche submédiane a une appa-

rence claire; la mince sous-couche tectale est formée d'une strate unique plus ou

moins discontinue formée de gros granules à contour flou, opaques aux élec-

trons, qui peuvent être contigus par leurs faces latérales. La sous-couche basilaire

est revétue d'une croüte, plus dense, relativement mince, analogue à celle qui

recouvre la couche de pigmentation en dehors de la ceinture équatoriale de la

spore. Cette sous-couche correspond donc, à elle seule, à la couche de pigmen-

tation. Celle-ci est donc amincie au niveau de la ceinture et la sous-couche

tectale est une formation pigmentaire surnuméraire propre au mutant ceinturé.

La couche de pigmentation du mutant ceinturé a une texture un peu diffé-

rente de celle de la lignée sauvage (Pl. XIV-D). Elle n'est formée que de petits

grains (0,014m environ), Patag +, qui diffèrent de ceux de la lignée sauvage.

Ils sont un peu plus gros, ne sont pas sphériques mais présentent un contour

assez irrégulier; ils ne sont pas contenus dans des granules. Ces grains se fu-

sionnent, cà et là, sans cependant perdre tout à fait leur autonomie. Ils consti-

tuent ainsi des amas plus denses qui dessinent des flammes analogues à celles

qui ont été décrites chez la lignée sauvage. Ils forment aussi, par association

latérale, la croûte superficielle de la couche de pigmentation. Les granules de

la sous-couche tectale sont formés uniquement de grains contigus, associés,

çà et là, en petits amas plus denses qui forment une sorte d'ossature à ces

granules.

Contrairement á ce qui a été observé chez la lignée sauvage la couche de

pigmentation vient directement au contact de la périspore moyenne sans que

persiste la périspore interne. La couche de pigmentation paraít donc ici s'étendre

rapidement à l'ensemble de la périspore interne. La sous-couche submédiane

de la couche de pigmentation a un aspect plus dense que la périspore moyenne

dont la texture en fin réseau est assez láche.

Pendant la pigmentation on observe également la presence de nombreux

éléments globuleux fortement Patag -- dans toute la périspore moyenne des

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 317

ascospores du mutant ceinturé. Ces éléments sont formés de nombreux grains

dont l'aspect est identique aux grains de la sous-couche tectale de la ceinture

(Pl. XIV-D). Ils différent des globules subsphériques observés à ce stade dans

la périspore moyenne des ascospores de type sauvage qui ont une réactivité

beaucoup plus faible; leur structure est aussi un peu différente puisqu'ils se

composent de quelques granules contenant des grains Patag +.

IL est remarquable que chez le mutant ceinturé, comme chez la lignée sauvage,

la lamelle noire de la couche claire de la paroi intermédiaire disparaisse au début

de la pigmentation (PI. XIV-B, D).

3) Maturation des ascospores chez le mutant ceinturé

a- Modification de la ceinture (P1. XV).

Au cours de la maturation de l'ascospore les granules de la sous-couche tectale

de la ceinture pigmentée se fusionnent latéralement, Un revêtement continu, trés

dense mais relativement mince, se constitue ainsi à l'extérieur de la sous-couche

submédiane claire qui s'épaissit notablement, La sous-couche basilaire ne s'accroît

pas mais sa texture devient plus dense (Pl. XV-A, B). Ultérieurement l'épaisseur de

la sous-couche tectale devient irrégulière. Des granules petits et nombreux se for-

ment dans la partie claire, submédiane de la ceinture (Pl. XV-C). A maturité, ces

granules sont plus volumineux, d'aspect irrégulier et sont plus rares (Pl. XV-D).

La texture de la matrice qui les renferme devient trés fine.

b- Modification des autres éléments structuraux de la spore au cours

de la maturation (Pl. XVI).

Dans leur ensemble les modifications ultrastructurales des ascospores du

mutant ceinturé'sont analogues à celle de la lignée sauvage.

Dans le sporoplasme, on note les mémes phénoménes de perte de réactivité

des mitochondries au test Patag (Pl. XVI-C, D, E). On observe aussi l'augmenta-

tion du nombre des globules lipidiques et leur répartition en deux types dis-

tincts, les uns peu réactifs au test Patag et à centre clair, les autres réactifs et

contenant des granules plus gros que chez la lignée sauvage avec parfois aussi

un aspect en oursin (Pl. XVI-E). Un réseau de granules denses et réactifs se

constitue, ici aussi, autour des mitochondries. Des granules dispersés forment

un voile de fond sur l'ensemble du sporoplasme. Le plasmalemme ascosporal

est typiquement en chevrons. Enfin, une zonation concentrique des constituants

du sporoplasme s'établit à maturité : une bordure externe dépourvue d’organites

et de granules recouvre une couche à mitochondries et globules lipidiques,

qui entoure une région plus interne formée de granules réactifs. Cette zonation

paraît cependant s'établir plus précocement que chez la souche sauvage. Avec

la maturation, la texture de la périspore devient, ici aussi, de plus en plus lâche.

Dans l'épiplasme la régression des amas de glycogéne se fait comme chez

la lignée sauvage. Il est remarquable qu’à un stade assez avancé de maturation

la frange d'épiplasme qui persiste contre la paroi ascale (avec encore des grains

de glycogene et des mitochondries) forme souvent des hernies saillantes dans

Source : MNHN, Paris

318 A. BELLEMERE ET AL.

la grande vacuole périsporique de la maturité (Pl. XVI-B). Ces hernies assez

larges, subglobuleuses, paraissent pouvoir se séparer de l'épiplasme. Sans être

absolument absentes chez la lignée sauvage, elles y sont exceptionnelles,

On peut noter enfin, accessoirement, que la surface de l'asque mir est éga-

lement moins irréguliérement onduleuse chez le mutant ceinturé que chez

la lignée sauvage (Pl. XVI-B; IX-A).

C.- LE DÉVELOPPEMENT DES ASCOSPORES

CHEZ LE MUTANT ALBINOS

Pigmentation mise à part, le développement général des ascospores du mutant

albinos est analogue dans ses grandes lignes à celui des ascospores de la lignée

sauvage et du mutant ceinturé.

Chez le mutant albinos il est difficile de définir les critéres de début de matu-

ration de l'ascospore car on ne peut se référer qu'aux caractéres non pigmen-

taires de la lignée sauvage et du mutant ceinturé. Or on a vu que les modifica-

tions ultrastructurales des ascospores et de l'asque contemporaines de la pigmen-

tation, sont peu nombreuses, peu caractéristiques et que leur synchronisme

avec la pigmentation n'est pas absolu. Le début de maturation du mutant albinos

peut cependant étre caractérisé avec une précision satisfaisante par la présence

simultanée d'une couche support dans la périspore interne, d'une stratification

de la couche Castor et d'un ou plusieurs des caractères suivants : sporoplasme

avec mitochondries à fines crétes longitudinales et couche périphérique sans

organites, plasmalemme ascosporal en chevrons, glycogéne de l'épiplasme prati-

quement au maximum de son abondance.

1) Stades précédant la maturation des ascospores chez le mutant

albinos (Pl. XVII, XVIII).

Au cours de ces stades les grandes analogies entre le mutant albinos et les

lignées pigmentées sont attestées par les PL XVII et XVIII comparativement

aux Pl. I à VI et XII-XIII. Sans reprendre en détail ces analogies on notera en

particulier que chez le mutant albinos la paroi intermédiaire se subdivise égale-

ment en une couche blanche (pourvue d'une lamelle noire médiane)(Pl. XVIII-

A, B, C), une couche Castor (avec le même type de différenciation) et une

couche Pollux (Pl. XVII-B, C, D; XVIII-A, B, C). La périspore est également

subdivisée en trois couches. Les sphérules grises sont fréquentes dans la périspore

moyenne (Pl XVIIL-C). Au stade tertiaire les mitochondries ont également de

nombreuses crêtes fines subparallèles (PI.XVIII-E).

Quelques différences cytologiques existent cependant à ces stades entre

les ascospores albinos et les ascospores pigmentées. Une première différence

porte sur les vacuoles épiplasmiques qui entourent les jeunes ascospores. Chez

le mutant albinos, ces jeunes vacuoles restent généralement assez étroites et

plus hautes que larges (Pl. XVII-A), alors qu'elles sont plutôt subsphériques

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 319

chez le mutant ceinturé et plus larges que hautes chez la lignée sauvage. De

plus chez l'albinos ces vacuoles ne confluent pas toujours par la totalité de leurs

faces latérales mais seulement par leur partie distale par rapport à l'ascospore.

De ce fait, en début de maturation celle-ci présente une surface hérissée (Pl.

XVIII-A; XIX-C). De plus les jeunes vacuoles épiplasmiques périsporiques du

mutant albinos renferment un ou méme plusieurs précipités subsphériques,

relativement volumineux, opaques aux électrons (Pl. XVIILA). Des précipités

d'un type analogue peuvent se rencontrer éventuellement chez le mutant cein-

turé (PI. XII-G) et plus rarement chez la lignée sauvage (PI. III-A; IV-A) mais

ils sont toujours de taille plus réduite et leur presence est plus aléatoire. Aprés

fusion des vacuoles épiplasmiques périsporiques en une vacuole unique ces

précipités adhèrent à la surface externe de la spore albinos sous forme de gros

granules spécialement réactifs après le test à l’acétate d'uranyle-citrate de plomb

(Pl. XIX-A).

Une seconde différence entre les ascospores albinos et pigmentées se mani-

feste au niveau des lipides du sporoplasme. Au stade primaire ceux-ci appa-

raissent un peu plus précocement chez le mutant albinos que chez la lignée

ceinturée, qui est elle-méme un peu plus précoce à cet égard que la lignée sau-

vage (Pl. XVILA; XILB, Cs ILC). Aux stades secondaire et tertiaire du dévelop-

pement le mutant albinos est un peu plus riche en globules lipidiques que le

mutant ceinturé et, a fortiori, la lignée sauvage. Ces globules lipidiques, dont la

partie centrale est dense, different de ceux des ascospores pigmentées qui sont

un peu moins sombres au centre (Pl. XVII-B; XII-B; HI-D).

2) Maturation du mutant albinos (Pl. XIX, XX).

Au cours de leur maturation les ascospores du mutant albinos présentent

un certain nombre de particularités. Tout d'abord en ce qui concerne la paroi

intermédiaire, on constate que la lamelle noire de la couche blanche persiste

en cours de maturation (Pl. XIX-A; XX-C, F) alors qu'elle s'efface dès la pigmen-

tation chez les ascospores pigmentées. On observe également que là couche

Castor de la paroi intermédiaire conserve plus longtemps son aspect finement

stratifié (Pl. XX-C, D); cette couche ne devient dense qu’en fin de maturation

(Pl. XX-F) et cette densité est plus faible que chez les lignées pigmentées.

Au niveau de la périspore interne, la couche support, qui s'est développée

en début de maturation (Pl. XIX-A, B), ne se pigmente pas puis cesse bientót

d'être distincte de la périspore interne (PI. XX-C, F). Cette dernière conserve

son individualité et, en fin de maturation,reste beaucoup plus dense que la pé-

rispore moyenne (Pl, XX-C).

Chez les ascospores du mutant albinos, comme chez les ascospores pigmen-

tées, la périspore moyenne contient des granules Patag + (Pl. XIX-A, D). Mais

chez le mutant albinos ces granules sont plus petits que ceux qui ont été ren-

contrés chez les lignées pigmentées. Ils different aussi de ces derniers par leur

structure, Les grains qu'ils contiennent sont minuscules (0,005um) et ne diffe-

rent guère par leur taille et leur réactivité des grains qui forment la trame de la

Source : MNHN, Paris.

320 A. BELLEMERE ET AL.

périspore moyenne. Si les granules qui les renferment sont Patag +, c'est essen-

tiellement en raison de la réactivité de leur trame et non par la présence de ces

grains. Aprés la technique à l'acétate d'uranyle - citrate de plomb, ces granules

apparaissent plus sombres que le fond de la périspore moyenne mais leur infra-

structure n'est pas trés différente de cette derniere.

Chez le mutant albinos les globules lipidiques du sporoplasme múr sont de

deux types comme ceux des ascospores pigmentées mais leur aspect est différent.

Le premier type de globules, plus réactif au test Patag, renferme de fines granu-

lations transparentes aux électrons; celles-ci confèrent à ces globules un aspect

«en passoire» (PL. XX-B, E) qu’on n'observe pas chez les ascospores pigmentées

(РІ. X-B, C; ХШ-Р). І/ашіте type de globules a sa partie centrale plus dense

que celle des globules lipidiques de la lignée sauvage et du mutant ceinturé

(Pl. XX-A, B, E; X-C; XIII-D). De plus ces globules lipidiques du sporoplasme

ne sont pas disposés de façon aléatoire comme chez les ascospores pigmentées;

ils sont plus ou moins rassemblés en petits amas irréguliers, sans être cependant

contigus.

On peut remarquer enfin que chez le mutant albinos la paroi de l'asque már

ne parait pas onduleuse à maturité, au contraire de ce qu'on observe chez ces

lignées pigmentées.

III. — DISCUSSION

Des études ultrastructurales comparatives de spores d'une lignée sauvage

et d'un mutant albinos n'ont concerné jusqu'à présent que des champignons

imparfaits. Chez l'Helminthosporium oryzae (MASAGO, 1961) et chez l'Alter-

naria brassicicola (CAMPBELL et al., 1968; CAMPBELL, 1970) les différences

constatées résultent seulement de l'absence de pigment (mélanines). Chez

lAspergillus nidulans (BULL et FAULKNER, 1965; BULL, 1970) la paroi

du mutant albinos est plus riche en glucides et en résidus d'acides uroniques.

Chez le Dreschlera sorokiniana (AL RIKABI, 1976; OLAH et al., 1977; AL

RIKABI et BONALY, 1977; AL RIKABI et al., 1979) il n'a pas été constaté

de modifications structurales de la paroi; celle-ci présente cependant une réac-

tion plus forte au test Patag; elle est donc plus riche en polysaccharides (en

particulier en hexoses); mais le xylose (pentose) fait défaut et un déficit en

galactose et mannose est observé. La sensibilité de la paroi aux agents chimiques

et enzymatiques est modifiée.

En ce qui regarde les ascospores, l'intérêt de la comparaison d’une lignée

sauvage et d'un mutant albinos a été évoqué seulement par HACKETT et CHEN

(1976) à propos de Sordaria brevicollis. Une étude ultrastructurale comparée

d'une souche sauvage et de mutants vient d'étre faite par ZICKLER et SIMO-

NET (1980) sur le Podospora anserina mais porte sur un mutant à sporulation

déficiente.

Pour ce qui est des trois lignées de l'Ascobolus immersus étudiées ici, on

Source : MNHN. Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 321

discutera d'abord des caractères ultrastructuraux qui leur sont communs puis

de ceux qui les différencient.

A.- ÉLÉMENTS DU DÉVELOPPEMENT COMMUNS AUX TROIS LIGNÉES

(Fig. 3)

Le développement des trois lignées étudiées ici se déroule selon un même

schéma d’ensemble. Quelques-unes des caractéristiques ultrastructurales com-

munes sont commentées ici.

1) Stades antérieurs à la maturation.

a - Sporoplasme.

D'importantes modifications de structure des mitochondries ont été observées

au début du développement des ascospores, Au cours des stades primaire et

secondaire les mitochondries, relativement peu nombreuses, n'ont que quelques

crêtes épaisses et irrégulières, de disposition aléatoire. Au stade tertiaire le

nombre des mitochondries s'accroit; les crétes mitochondriales deviennent

plus nombreuses, ont une texture plus fine, et se disposent longitudinalement.

Ces faits, à notre connaissance, n'ont pas encore été signalé chez des Discomy-

cetes.

Le glycogene n’est jamais abondant dans le sporoplasme avant la maturation;

son développement maximal se produit au stade secondaire; ensuite il s’efface.

Les vacuoles sont presque totalement absentes; les très petites vacuoles

observées dans les stades précédant la maturation paraissent résulter de l'auto-

phagie de mitochondries.

Les globules lipidiques, de taille analogue chez les trois souches, sont rares

au début; leur nombre commence à s’accroître peu avant la maturation.

b- Paroi ascosporale.

Elle peut être subdivisée en trois parties : paroi propre, paroi intermédiaire

et périspore.

La paroi propre, épaisse, non réactive aux techniques utilisées, s'accroît

en épaisseur mais son aspect ne varie guère au cours du développement.

La paroi intermédiaire a une structure complexe. Elle comporte en parti-

culier une couche blanche avec lamelle noire médiane, une couche Castor, dont

la striation transversale fait place à une stratification longitudinale finalement

empátée de granules, et une couche Pollux, sousjacente, plus mince, moins

bien individualisée, moins réactive et plus constante dans sa structure que la

couche Castor. Certains des éléments structuraux de la paroi intermédiaire

décrits ici ont déjà été reconnus chez des Discomycètes Operculés en particulier

la stratification fine de la couche Castor (DELAY, 1966; OSO, 1969; WELLS,

1972; MERKUS, 1973-1976; BELLEMERE et MELENDEZ-HOWELL, 1976)

Source : MNHN, Paris

322 A. BELLEMERE ET AL.

mais la chronologie de leurs modifications au cours du développement n'était

pas établie à ce jour.

La différenciation de la périspore en plusieurs parties (périspore externe,

moyenne et interne) a été précisée. La périspore moyenne, dont l'épaisseur

peut varier considérablement selon les spores, est dense au début et très réactive

au test Patag; des sphérules grises y apparaissent au cours du développement;

À maturité sa texture devient très lâche. La périspore externe est toujours mince.

A la base de la périspore interne, la couche support se différencie aussi bien

chez les ascospores pigmentées (où elle deviendra la couche de pigmentation)

que chez les ascospores albinos.

La limitante externe de l'ascospore reste bien individualisée tout au long

du développement.

с- Épiplasme.

Il se caractérise par l'absence totale de globules lipidiques. La quantité de

glycogéne s’accroit au début et passe par un maximum au cours du stade ter-

tiaire. Des vacuoles se forment autour des jeunes spores, apparemment à partir

de saccules de reticulum endoplasmique de l'épiplasme. Elles viennent s'appli-

quer contre les spores, grossissent et confluent latéralement pour ne plus former

qu'une sorte d'unique vacuole dans laquelle baignent les ascospores mires,

d - Paroi des asques.

Elle comporte un endoascus épais et un exoascus mince. Son développement

parait étre maximal au début de la maturation.

L'appareil apical de l'asque semble du même type chez les trois lignées

considérées (PI. XXI).

Jusqu'à leur maturation les ascospores des trois lignées sont donc le siége

de plusieurs modifications ultrastructurales simultanées (fig. 3). Ainsi, dans

Pépiplasme le taux de glycogène augmente et les vacuoles périsporiques con-

fluent latéralement tandis que dans le sporoplasme on observe une modification

des mitochondries, un accroissement du nombre des globules lipidiques, la

formation de microvésicules. En méme temps des différenciations apparaissent

dans la paroi ascosporale : sphérules grises de la périspore moyenne, couche

support de la périspore interne, netteté de la lamelle noire, striation longitudi-

nale de la couche Castor. On a vu que les corrélations qui existent nécessaire-

ment entre ces transformations, affectant différentes parties de l'ascospore, ne

sont pas absolument strictes. D'autre part cet ensemble de transformations

préludant à la maturation de l'ascospore est sans relation directe avec la pig-

mentation puisqu'il est commun à la lignée sauvage, au mutant albinos et au

mutant ceinturé.

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 323

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Fig. 3. — Schéma récapitulatif du développement des ascospores de la lignée sauvage.

Source : MNHN, Paris

324 A, BELLEMERE ET AL.

2) Stades de maturation.

а - Sporoplasme (fig. 4).

Les processus généraux de maturation sont caractérisés par plusieurs trans-

formations : acquisition d'une structure en chevrons du plasmalemme sporal,

modification des parois et des structures internes des mitochondries (conduisant

á leur effacement aprés le test Patag), synthése de nouveaux globules lipidiques,

disposition concentrique des constituants du sporoplasme múr (avec région

périphérique dépourvue d'organites, région moyenne à mitochondries et globules

lipidiques, région centrale à granules de réserves). De telles particularités struc-

turales ne semblent pas avoir été signalées jusqu'à présent chez des ascospores

mûres. Elles sont peut-étre particuliéres à l'Ascobolus immersus mais il se peut

aussi qu'elles soient passées plus ou moins inapercues chez d'autres espéces

en raison de la difficulté d'obtention de bonnes coupes d'ascospores mûres et

du petit nombre d'études consacrées à la maturation des ascospores.

2 p "a A 2

BEE GME

Fig. 4. — Schéma résumant quelques transformations du sporoplasme au cours de la matu-

ration des ascospores chez la lignée sauvage et les mutants ceinturé et albinos. (Les

différences de vitesse de maturation du sporoplasme entre les trois lignées n'ont pas

été indiquées sur le schéma).

(b, bordure du sporoplasme dépourvue d'organites; ga, granules en amas; gd, granules

dispersés; lip, globules lipidiques; mch, mitochondries; pl., plasmalemme; z, zonation

du sporoplasme; I, IT, III, IV, stades de développement).

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 325

Des modifications cytologiques analogues à celles dont il vient d'étre question

ont été signalées chez divers végétaux. Ainsi, par exemple, l'effacement des

structures internes des mitochondries a été constaté lors d'actions de déshydrata-

tion de racines de mais (NIR et al., 1970), ou de pieds de mousses (NOAILLES

1974), ou de feuilles de cotonnier (PHAM THI et VIEIRA DA SILVA, 1980).

Dans ce dernier cas, en particulier, les analogies structurales avec les mitochon-

dries des ascospores d'Ascobolus immersus sont très grandes, Chez des champi-

gnons l'action prolongée de la chaleur (MICHEA-HAMZEHPOUR et al., 1980,

Neurospora crassa), ou l'anaérobiose sur certains milieux de culture (VALLACE

et al., 1968, Saccharomyces cerevisiae), provoque aussi un effacement des crêtes

mitochondriales,

La présence de multiples invaginations du plasmalemme a été signalée chez

des spores de champignons en état de dormance, aussi bien des conidies (Walle-

mia sebi, HAWKER et MADELIN, 1976), que des basidiospores (Psilocybe sp.,

STOCKS et HESS, 1970), ou des ascospores (Daldinia concentrica, BECKETT,

1976).

D'aprés ces données les modifications de structure du sporoplasme des asco-

spores en maturation de l'Ascobolus immersus pourraient témoigner d'une

réorganisation structurale en relation avec une déshydratation et une entrée

en dormance,

Les chevrons du plasmalemme représentent en quelque sorte une réserve

de plasmalemme susceptible de devenir immédiatement fonctionnel par déplisse-

ment lors de la germination. Cette particularité structurale semble donc corres-

pondre à une adaptation en vue d'une rapide germination.

b - Paroi ascosporale.

Au cours de la maturation on constate, chez les trois lignées étudiées, qu'une

structure plus láche s'établit dans la périspore moyenne oi se forme des concré-

tions denses aux électrons, et que la périspore externe s'efface progressivement.

Les éléments constitutifs de la paroi intermédiaire (couche blanche, couche

Castor, couche Pollux) restent bien individualisés jusqu'à maturité; la couche

Castor devient alors plus dense.

Les caractéristiques générales de la paroi propre sont analogues chez les

trois lignées.

с - Épiplasme.

Le glycogéne régresse de facon analogue au cours de la maturation des asco-

spores des trois types avec formation corrélative de petites vacuoles sur l'empla-

cement des amas de granules, Les vacuoles épiplasmiques qui, A la maturité

de l'asque, vont confluer en une vacuole unique entourant les ascospores ont

donc au moins trois origines différentes : les plus nombreuses proviennent de

Phypertrophie de saccules du reticulum endoplasmique (c’est le cas, en parti

culier des vacuoles périsporiques); d'autres naissent plus tardivement de la ré-

sorbtion des amas de glycogène, d’autres enfin, de la même façon que de petites

vacuoles du sporoplasme, proviennent de la régression des mitochondries.

Source : MNHN, Pàris

326 A. BELLEMERE ET AL.

Des mitochondries apparemment fonctionnelles situées à l'intérieur de plages

de glycogène ont été observées dans l'épiplasme âgé lorsqu'il est réduit à une

mince frange bordant la périspore de l'asque. L'existence d'une telle activité méta-

bolique tardive dans l’épiplasme ne semble pas avoir été jusqu'alors mentionnée.

Au cours de la maturation des ascospores la structure générale du sporo-

plasme, de la paroi ascosporale et de l'épiplasme n'est donc pas affectée par

la présence ou l'absence de pigmentation.

B.- DIFFÉRENCES ULTRASTRUCTURALES OBSERVÉES CHEZ

LES TROIS LIGNÉES AU COURS DU DÉVELOPPEMENT DES ASCOSPORES

(Fig. 5).

Ces différences portent d'une part sur la pigmentation et d'autre part sur

d'autres éléments ultrastructuraux de l'asque.

1) Caractéristiques de la pigmentation.

Malgré l'absence de pigment la maturation des ascospores albinos n'est

pas interrompue. La structure d'ensemble de la paroi est conservée; seuls quel-

ques éléments des couches constitutives sont modifiés. La pigmentation est

donc un phénoméne annexe de la maturation de l'ascospore et non une condi-

tion de celle-ci.

L’apparition de la couche de pigmentation se faisant brutalement, ainsi

que l'a déjà indiqué DELAY (1966), on pourrait penser que le processus de

transformation de la couche support est relativement simple. Mais l'étude

précise de la couche de pigmentation et des modalités de son édification laissent

supposer qu'il n'en est sans doute pas ainsi. On a vu en effet que la couche de

pigmentation présente une certaine complexité chez la lignée sauvage comme

chez le mutant ceinturé, avec une croüte différenciée et des structures en

flammes. On a vu également que, chez le mutant ceinturé, cette couche montre

une sorte de dédoublement au niveau de la ceinture équatoriale.

De plus l'édification de la couche de pigmentation diffère chez les deux

lignées pigmentées. Chez la lignée sauvage, on observe la formation de granules

faiblement Patag + contenant de petits grains très réactifs, alors que chez le

mutant ceinturé seuls sont présents de petits grains dont la morphologie diffère

légèrement de ceux de la couche sauvage.

L'individualisation de la couche de pigmentation est donc en soi un processus

relativement complexe.

2) Relations entre la pigmentation et les éléments ultrastructuraux

de Pasque.

a - Différences ultrastructurales antérieures au début de la maturation.

Des processus qui pourraient être en liaison avec la pigmentation sont initiés

antérieurement à celles-ci, de façon plus ou moins précoce, puisque certaines

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS

227

différences ultrastructurales sont observées avant la fin du stade tertiaire du

développement des ascospores des trois lignées. Ces différences sont sensibles

au niveau du sporoplasme et de l'épiplasme. Dans le sporoplasme elles affectent

les globules lipidiques dès le stade primaire (apparition plus précoce et plus

abondante de ces globules chez le mutant albinos). Elles affectent aussi la diffé-

renciation du sporoplasme; celle-ci est accélérée chez le mutant albinos par

rapport à la lignée sauvage et plus encore par rapport au mutant ceinturé compa-

rativement au développement de la périspore, de la paroi intermédiaire et de

l'épiplasme.

Г. SAUVAGE CEINTURÉ ALBINOS

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Fig. 5 — Tableau schématique résumant les différences observées au cours du développe-

ment des ascospores «sauvage», «b2 ceinturé», et «b2 albinos» de l'Ascobolus immersus.

Source : MNHN, Paris

328 A. BELLEMERE ET AL.

Dans l'épiplasme c'est la forme et le contenu des vacuoles périsporiques

qui different (vacuoles étroites et à précipités notables chez la souche albinos).

Ceci suppose que les processus qui conduisent à la pigmentation de l'asco-

spore sont en relation d'une part avec les caractéristiques des globules lipidiques

du sporoplasme et d'autre part avec la perméabilité de la limitante externe

de la spore qui conditionne pour une part la forme et la nature du contenu

des vacuoles épiplasmiques périsporiques.

b - Différences ultrastructurales contemporaines de la pigmentation.

La transformation de la couche support en couche de pigmentation ne parait

pas en relation directe avec la présence dans la périspore moyenne de granules

réactifs aussi bien au test Patag qu'à la réaction a l’acétate d’uranyle-citrate

de plomb. Ces granules en effet sont présents chez les trois lignées. Mais il est

assez probable que leur intervention indirecte est en cause puisque leur forme

et leur réactivité est différente dans chacun des cas. Ce sont les grains que

renferment ces granules qui paraissent le plus directement impliqués dans la

pigmentation puisqu'ils sont seuls présents chez toutes les ascospores pigmen-

tées, où d’ailleurs ils diffèrent légèrement de structure.

L'existence d’une couche de transition et d'une frange au contact de la

couche de pigmentation ainsi que les caractéristiques ultrastructurales de celle-ci

conduisent à admettre qu'un transport des grains par des granules depuis la

périspore moyenne vers la couche support est nécessaire à la pigmentation.

Dans la couche support les granules peuvent ensuite conserver leur autonomie

(cas de la lignée sauvage) ou la perdre (cas du mutant ceinturé). On comprend

mal cependant comment, chez la lignée sauvage, s'effectue le franchissement de

la périspore interne car le test Patag n'y révèle ni granules ni grains. Quoi qu'il

en soit l'intervention de la périspore moyenne dans l'individualisation de la

couche de pigmentation paraît acquise.

Au dela de la limite sporale l'épiplasme est aussi impliqué lors de la pigmen-

tation. En effet chez le mutant albinos (et dans une moindre mesure chez le

mutant ceinturé) les vacuoles épiplasmiques périsporiques ont une forme diffé-

rente de celles du sauvage et des précipités s'y accumulent comme s'ils n'étaient

pas en mesure de franchir la limitante externe de l'ascospore pour pénétrer

dans celle-ci.

Du cóté interne de la couche support, des différences associées à la pigmen-

tation affectent la paroi intermédiaire. Chez les lignées pigmentées, on observe

en effet que la lamelle noire médiane de la couche blanche s'efface lorsque

débute la pigmentation alors qu’elle persiste, au moins un certain temps, chez

les ascospores du mutant albinos.

c.- Différences ultrastructurales postérieures à la pigmentation.

Certaines modifications ultrastructurales qui apparaissent au cours de la

maturation chez le mutant albinos peuvent être considérées comme étant liées

à l'absence de pigment. Ainsi chez le mutant albinos la maturation de la couche

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 329

Castor est différée, la surface de l'asque prend un aspect nettement moins

onduleux, la périspore interne persiste longuement pendant la maturation,

alors qu'elle est lentement envahie par la couche de pigmentation chez la lignée

sauvage et plus rapidement chez le mutant ceinturé.

Des différences ultrastructurales qui existaient déjà dans l'asque entre les

lignées pigmentées et albinos avant le stade correspondant à la pigmentation,

peuvent persister en s'altérant au cours de la maturation, Ainsi, chez la souche

albinos, l'épiplasme présente au stade tertiaire des particularités au niveau

des vacuoles périsporiques qui paraissent s'atténuer au cours de la maturation

(surface sporale moins irrégulière, précipités moins nombreux contre la paroi).

On ne peut savoir si ces modifications nouvelles résultent uniquement de l'ab-

sence de pigmentation, ou si elles ne sont qu'un aboutissement des différences

antérieures indépendant de cette absence, ou si enfin elles résultent des deux

à la fois.

Pour ce qui est du sporoplasme les différences de morphologie des granules

lipidiques signalées avant la maturation (aspect en passoire chez l’albinos, en

oursin chez le ceinturé) persistent jusqu'à la fin de celle-ci.

L'un des buts de cette étude était de rechercher une corrélation entre les

différences de pigmentation des lignées étudiées et les différences ultrastructu-

rales qu'elles pourraient présenter pendant le développement et la différencia-

tion des ascospores. L'absence ou l'anomalie de pigmentation des mutants du

géne b2 peut en effet découler d'une anomalie structurale dans la formation

de l'ascospore résultant elle-même d’une déficience de la fonction contrôlée

par le gène b2. Si cette anomalie provoque secondairement le défaut de pigmen-

tation, on peut espérer l'observer dès avant que la pigmentation soit établie.

Il faut pourtant garder à l'esprit qu'entre ces lignées, des différences génétiques

non contrôlées, sans rapport avec la pigmentation des spores, pourraient être

responsables de certaines variations observées dans les modalités de différencia-

tion des ascospores. A priori, si des différences sont observées, on peut s'attendre

à ce que celles qui résultent directement des mutations du gène b 2 soient les

plus marquées dans la lignée mutante albinos.

Le sporoplasme (caractères des lipides et vitesse de maturation) et l'épiplasme

(caractères des vacuoles périsporiques) manifestent des comportements diffé-

rents avant méme la pigmentation. Dans le cas de l'épiplasme, la modification

des vacuoles est la plus marquée chez le mutant albinos; elle l'est dans une

moindre mesure chez le mutant ceinturé. Dans le cas du sporoplasme, la matu-

ration est la plus rapide chez le mutant albinos et la plus lente chez le sauvage.

Ces différences au niveau du sporoplasme et de l'épiplasme apparaissent comme

les plus susceptibles d’être prises en considération dans la mesure où l'intensité

de leur variation est corrélée à celle de la pigmentation. Ceci conduit à l'hypo-

thèse suivante.

Chez la lignée sauvage, le pigment serait déposé au niveau de la couche

support à partir d'éléments dont au moins une partie proviendrait de l'épi-

plasme. Le passage de ces éléments serait contrôlé par la limitante externe

Source : MNHN, Paris

330 A. BELLEMERE ET AL.

(qui persiste tout au long de la maturation); une synthése des grains intervenant.

dans la pigmentation se ferait alors dans la périspore; puis ces grains seraient

véhiculés par des granules jusqu'à la couche support. L'éventualité de la parti-

cipation d'éléments venus du sporoplasme reste à démontrer. Cette éventualité

est suggérée par la disparition de la lamelle noire. Celle-ci pourrait correspondre

à une barrière s'opposant à la venue des précurseurs de pigments depuis le sporo-

plasme. Pourtant, cette disparition est contemporaine de la pigmentation : on

ne peut donc pas exclure que le sporoplasme ne soit pas impliqué et que cette

disparition ne soit qu'une conséquence secondaire de l'établissement de la pig-

mentation.

Les différences observées dans la structure des granules lipidiques du sporo-

plasme pourraient refléter une différence dans la composition en lipides des

trois lignées, Cette différence, si elle n'est pas spécifique du sporoplasme, pour-

rait altérer la composition des membranes ascosporales; en particulier la limi-

tante externe. Ceci pourrait conduire à des modifications de perméabilité

de cette membrane empêchant le passage des précurseurs nécessaires à la pigmen-

tation chez l'albinos et modifiant ce passage chez le ceinturé. L'accélération

de la maturation du sporoplasme pourrait étre une autre conséquence de la

modification de la composition lipidique sans être pour cela directement liée

à la pigmentation.

Dans une telle hypothése, le gene b2 interviendrait dans la composition

lipidique de l'ascospore. A la suite de la mutation de ce gène, l'absence de pig-

mentation ne serait qu'une manifestation secondaire, bien que spectaculaire,

de la modification de cette composition lipidique.

Davantage d'observations permettront de préciser et de compléter ce travail.

Nous disposons avec Ascobolus d'un matériel dont le cycle est parfaitement

contrólé dans les conditions du laboratoire. Des mutants d'ascospore ont été

isolés dans de nombreux gènes. Chacun de ces gènes doit toucher une fonction

précise intervenant de manière directe ou indirecte dans la différenciation

des ascospores. Ainsi, les meilleures conditions sont réunies pour l'étude de la

différenciation des ascospores chez cet Ascomycète.

REMERCIEMENTS

L'assistance technique de M.C. Malherbe, H. Chacun pour les coupes, M. Letalnet et

E. Vast pour les photographies, T. Casses pour les dessins, ainsi que de M. André et E,

Rodier pour la frappe du manuscrit a été trés appréciée.

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 331

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ABRÉVIATION DES LÉGENDES DES PLANCHES

Sur les planches l'échelle de référence correspond à 1 Um, sauf avis contraire.

a aires claires dans la périspore moyenne

alb spore albinos

cb couche blanche

cc couche Castor

ceint spore ceinturée

cp couche Pollux

er couche résiduelle au-dessus de la couche de pigmentation

crt croúte de la couche de pigmentation

cs couche support

ct couche de transition

е épiplasme

el éléments subglobuleux dans la périspore moyenne

en endoascus

ex exoascus

f frange de la couche de pigmentation

а flammes de la couche de pigmentation

gl globules lipidiques

gm grains dans la périspore moyenne

gs globules sphériques dans la périspore moyenne

ev granules dans les vacuoles

int aroi intermédiaire

lb [amelle blanche

le limitante externe

li limitante interne (= plasmalemme sporal)

ln lamelle noire

m mitochondrie

P paroi de l'asque

pa paroiascosporale

pe périspore externe

per périspore

PE couche de pigmentation

pi périspore interne

i pigment

BI plasmalemme

pm périspore moyenne

pp paroi propre de la spore

pr précipité

ps plasmalemme sporal

pv précipité dans les vacuoles

г reticulum endoplasmique

8 sporoplasme

sauv spore sauvage

sb sous-couche basilaire de la couche de pigmentation

x sphérules grises dans la périspore

sm souscouche submédiane de la couche de pigmentation

st sous-couche tectale de la couche de pigmentation

v vacuole

yp vacuole périsporique

Source : MNHN, Paris.

334 A. BELLEMERE ET AL.

LÉGENDES DES PLANCHES

Pl. I, — A, B : Aspect des ascospores múres chez la lignée sauvage et les mutants ceinturé

et albinos. Le caractére de forme de spores (ovale - rond) dépend d'un géne indépendant

du géne b2 de couleur de spores.

РІ. 11, Lignée sauvage. Stade primaire du développement des ascospores (Patag). - A :

Aspect d'ensemble. - B ; Détail du plasmalemme sporal et de la limitante externe de Газсо-

spore à un stade déjà avancé du développement (épiplasme déja riche en glycogène). Remar-

quer l'aspect particulier du reticulum endoplasmique de l'épiplasme au contact de la paroi

ascosporale. - C : Détail du sporoplasme et de l'épiplasme. - D : Mitochondries en haltére

dans l'épiplasme.

PI. Ш. — Lignée sauvage. Stade secondaire du développement des ascospores (Patag).

- A : Sporoplasme, paroi ascosporale et épiplasme. Une des vacuoles de l'épiplasme renferme

un précipité. - B : Détail d'une partie de la paroi ascosporale. Une vacuole de l'épiplasme

est étroitement appliquée contre la limitante externe de l'ascospore. Périspore externe,

périspore moyenne et paroi intermédiaire bien distinctes. -C : Épiplasme et paroi de l'asque.

Amas de glycogéne dans l'épiplasme. Exoascus trés apparent. - D : Détail du sporoplasme.

Abondance relative du glycogéne et des mitochondries, Rareté des lipides. Reticulum

endoplasmique distinct.

Pl, IV. — Lignée sauvage. Début du stade tertiaire du développement des ascospores.

Sections du sporoplasme à l'épiplasme. - A (Patag) : Sporoplasme riche en globules lipi-

diques et en mitochondries. Glycogéne en grains dispersés. Lamelle noire de la couche

blanche très distincte. Périspore interne bien individualisée. Sphérules grises dans la péri-

spore moyenne. Épiplasme riche en mitochondries et en glycogéne. - B (Acétate d'uranyle

et citrate de plomb) : Stade sans doute un peu plus jeune que le précédent sans sphérules

grises dans la périspore moyenne. Périspore interne, ici discontinue, trés réactive, au-dessus

de 1а couche blanche claire et de l'ensemble des couches Castor et Pollux trés réactif. Préci-

pités dans les vacuoles du sporoplasme. Mitochondries de l'épiplasme trés réactives dans

les plages claires d'aspect vésiculeux du glycogéne. Paroi propre faiblement différenciée

en trois régions.

Pl. V. — Lignée sauvage. Début du stade tertiaire de développement des ascospores.

Détails. - A (Patag) : Paroi intermédiaire et périspore interne. La striation transversale de

la couche Castor est très nette. La couche blanche, ceinturée de la lamelle noire n'apparaît

pas nettement (coupe un peu plus oblique). - B (Acétate d'uranyle - citrate de plomb) :

Les couches Castor et Pollux ainsi que la périspore interne sont trés réactives. La couche

blanche ne montre pas de différenciation médiane. - C (Patag) : Fusion laterale de vacuoles

épiplasmiques étroitement appliquées contre la limitante externe de l'ascospore. Périspore

externe d'aspect clair, bien distincte. - D (Acétate d'uranyle - citrate de plomb) : Saccules

du reticulum endosplasmique de l’épiplasme au contact de la limitante externe de l'asco-

spore. Des sphérules grises, réactives, dans la périspore moyenne. Périspore externe, réactive,

mal délimitée vers sa base. - E (Patag) : Sporoplasme avec divers stades de développement

des globules lipidiques. - F (Patag) : Sporoplasme avec microvésicules assez volumineuses.

- G (Patag) : Épiplasme. Aspect irrégulier du plasmalemme ascal. Mitochondrie très allongée

dans un amas de glycogène; vacuoles avec granule interne.

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 335

Pl VI. — Lignée sauvage. Stade tertiaire avancé du développement des ascospores, - A

(Patag) : Paroi de ascospore et épiplasme. Périspore moyenne bien développée sans sphé-

rules grises distinctes. Épiplasme peu riche en glycogéne. - B (Patag) : Plasmalemme asco-

sporal à aspect en chevrons. - C (Patag) : Sporoplasme avec mitochondries nombreuses à

crétes fines et subparalléles; reticulum endoplasmique à aspect particulier. - D. (Acétate

d'uranyle - citrate de plomb) : Paroi intermédiaire et périspore interne, Couche Pollux trés

dense, Couche Castor finement stratifite. Couche blanche claire. Périspore interne dense

et réactive avec ébauche, à sa base, de la couche support. - E (Patag) : Coupe analogue à

D. Remarquer les différences de réaction des divers constituants de la paroi,

Pl, VII. — Lignée sauvage. Apparition de la couche de pigmentation en début de matu-

ration des ascospores (Patag). - A : Section depuis la paroi propre de l'ascospore jusqu'à

Pépiplasme. La couche de pigmentation est déjà épaisse. Remarquer les granules de la

frange, de la couche de transition et des aires claires de la périspore moyenne, Par contre

la périspore interne a un aspect trés homogene, - B : Détail de A. (A ce niveau la frange

est quasi absente). Remarquer la striation longitudinale encore distincte dans la couche

Castor, la striation transversale dans la couche blanche, où la lamelle noire a disparu, Les

granules de la couche de pigmentation renferment des grains, Une croûte et des flammes

sont distinctes dans la couche de pigmentation. La matrice de la périspore moyenne forme

des masses grisâtres.

PI. VIII. — Lignée sauvage. Stade de pigmentation déjà avancé, au cours de la matura-

tion (Patag). - A : Section depuis le sporoplasme jusqu'à la paroi de l'asque. La couche de.

pigmentation est trés apparente. La périspore moyenne encore relativement dense est

épaisse. Sur cette coupe les vacuoles épiplasmiques périsporiques ne sont pas encore bien

développées. - B : Détail de la couche de pigmentation. A ce niveau la périspore interne

est discontinue; la couche de transition vient au contact de la couche de pigmentation.

Dans celle-ci croûte et flammes s'affirment. La couche Castor a un aspect très dense, - С:

Détail du sporoplasme. L'ultrastructure des mitochondries est devenue indistincte. Les

globules lipidiques sont peu réactifs. De nombreux granules (cf. glycogéne?) entourent

les mitochondries. Sous le plasmalemme en chevrons (peu distinct au niveau de cette coupe)

la bordure du sporoplasme est dépourvue d'organites. - D : Aspect beaucoup moins diffé-

rencié du sporoplasme qui peut étre rencontré alors que la couche de pigmentation est du

type de A et B. Cet aspect est fréquent au début de la pigmentation ou à la fin du stade

tertiaire (plasmalemme onduleux sans chevrons).

PI. IX, — Lignée sauvage. Ascospores en fin de maturation (Patag). - À : Section depuis

le sporoplasme jusqu'à la paroi de l'asque. La périspore devient léche; les vacuoles épiplas-

miques périsporiques ont conflué en une vacuole unique : l'épiplasme se réduit à une frange

à la périphérie de l'asque, - В. Détail de l'épiplasme. Le glycogéne est encore abondant: des

mitochondries sont présentes, parfois allongées, - C : Détail de la couche de pigmentation

et de la périspore. La périspore moyenne est läche; la couche de pigmentation et la couche

Castor sont devenues très denses, - D : À un stade plus âgé l'épiplasme se réduit à des corps

paramuraux; la vacuole périsporique contient des précipités denses de forme irrégulière.

Pl. X. — Lignée sauvage. Ascospores en fin de maturation (Patag) (suite), - A : Region

de contact entre trois ascospores (I’une, à droite, n'est représentée que par sa périspore).

Remarquer les périspores moyennes de texture lâche contenant des globules sphériques

gris et des précipités irréguliers, de forme et de taille variées, très denses aux électrons;

la limitante externe des ascospores est très distincte: la maturation du sporoplasme est

avancée, - B : Détail du sporoplasme mür. Les mitochondries ne présentent plus d'ultra-

Source : MNHN, Paris

336 A. BELLEMERE ET AL.

structure distincte; les globules lipidiques sont de deux types; le plasmalemme sporal est

en chevrons et sa bordure est dépourvue d'organites. - C : Détail du plasmalemme sporal,

de sa bordure et des constituants du sporoplasme; les lipides sont de deux types,

PI. XI, — Lignée sauvage. Divers stades de maturation des ascospores (Acétate d’uranyle

- citrate de plomb).- A : Couche de pigmentation et périspore d’une ascospore vers la fin

de la maturation. La périspore moyenne contient des globules subsphériques à partie cen-

trale homogène, grise, entourée de granules denses. - B : Couche de pigmentation d'une

ascospore en cours de pigmentation. La périspore interne est discontinue; la couche de

transition est épaisse. Les flammes de la couche de pigmentation sont bien visibles. - C :

Détail de B. La coupe intéresse une région où la périspore interne n'est plus distincte. La

croûte de la couche de pigmentation est apparente, - D : Couche de pigmentation devenue

assez dense. A ce niveau la périspore interne est encore présente. À ce grossissement la

couche Pollux est difficilement distincte; la couche Castor est devenue très dense. - E :

Détail des globules lipidiques de la périspore en fin de maturation des ascospores. La texture

de la périspore est tout à fait lâche. Autour de la région centrale des globules, grise, les

granules perdent leur réactivité (cf, A) et probablement s'effacent.

Pl. XII, — Mutant ceinturé. Stades primaire, secondaire et jeune stade tertiaire du déve-

loppement des ascospores (Patag). - A : Section du sporoplasme à l'épiplasme (cf. lignée

sauvage, Pl. I-A), - B , Stade primaire. Détail de la paroi ascosporale (cf. lignée sauvage,

Pl. II-B), La présence, à ce stade, de globules lipidiques aussi gros n'a pas été observée chez

le sauvage. - C : Stade secondaire. Détail de la paroi ascosporale (cf. lignée sauvage, PI. III-A).

Remarquer, dans les vacuoles épiplasmiques périsporiques, de fins précipités non observés

chez la lignée sauvage. La périspore externe et la limitante externe sont distinctes. - D :

Stade secondaire. Détail de la jeune paroi intermédiaire (cf. lignée sauvage, Pl. III-B). La

striation transversale et longitudinale de la paroi intermédiaire est nette. - E : Jeune stade

tertiaire. Paroi propre, paroi intermédiaire et périspore (cf. lignée sauvage, PI, IV-A). Remar-

quer aussi la lamelle noire. - F : Jeune stade tertiaire. Mitochondrie dans le sporoplasme.

Comme chez la lignée sauvage les mitochondries du jeune sporoplasme ont des crêtes peu

nombreuses et assez épaisses (cf. lignée sauvage, Pl. III-D). - G : Jeune stade tertiaire. Épi-

plasme (cf. lignée sauvage, Pl. V-C). Comme chez la lignée sauvage les plages de glycogéne

contiennent des mitochondries; les vacuoles épiplasmiques périsporiques ont méme origine.

РІ, ХШ. — Mutant ceinturé, Stade tertiaire avancé du développement des ascospores

(Patag). - A : Sporoplasme d'un stade tertiaire peu avancé (cf. lignée sauvage, Pl. VI-C). Les

mitochondries ont des crêtes fines, nombreuses, subparalléles. - B : Épiplasme (cf. lignée

sauvage, Pl. VI-A). Remarquer les sphérules claires dans la périspore moyenne. Noter aussi

(comme chez la lignée sauvage) l'apparition de vacuoles sur l'emplacement de plages de

glycogéne. - C : Paroi intermédiaire (cf. lignée sauvage, Pl. VI-E). Noter la stratification de la

couche Castor et la réactivité de la lamelle noire. - D : Sporoplasme d'un stade tertiaire bien

avancé (cf. lignée sauvage, PI. VI-B). L'aspect du plasmalemme en chevrons est déjà bien

differencie. Les globules lipidiques sont abondants, les uns peu réactifs, à centre clair, les

autres en oursin grossier.

Pl. XIV. — Mutant ceinturé. Début de la pigmentation (Patag). - A : Section d'ensemble

de la région de la ceinture. - B : Détail de la ceinture. La sous-couche tectale discontinue

est formée de gros granules parfois contigus. La sous-couche submédiane est claire. La

sous-couche basilaire montre des flammes et une croûte supérieure. - C : Section d'ensemble

entre la paroi propre de l'ascospore et la paroi de l'asque, à un stade déjà avancé. La péri-

spore moyenne renferme de nombreux éléments globuleux (cf. Pl. VILA). - D : Détail de

la couche de pigmentation dans la région de la ceinture. Au contraire de la lignée sauvage

Source : MNHN, Paris.

ASCOBOLUS IMMERSUS 337

les sous-couche tectale et basilaire sont uniquement formées de grains (cf, Pl. VII-B). La

sous-couche tectale est ici au contact direct de la périspore interne (cf. Pl. VIII-A), La

couche blanche n'a pas de lamelle noire médiane. La couche Castor est déjà dense,

Pl. XV. — Mutant ceinturé. Développement de la ceinture au cours de la maturation des

ascospores (Patag). - A : La sous-couche tectale forme un revétement continu, - B : Raccor-

dement latéral de la ceinture à la couche de pigmentation banale. - C : Dépóts fins et nom-

breux dans la sous-couche submédiane de la ceinture. - D: Dépóts peu nombreux, mais volumi-

neux et irréguliers, dans la sous-couche submédiane de la ceinture.

PI. XVI. — Mutant ceinturé. Maturation des ascospores (Patag). - A : Détail des éléments

globuleux dans la périspore moyenne au cours de la maturation (cf. Pl. XIV-C; VILA). -

B : Aspect particulier de l'épiplasme chez les spores presque mûres. Les hernies ne sont

pas observées chez la lignée sauvage (cf. PI. IX-A). -C : Sporoplasme d'une ascospore mûre.

Les mitochondries sont analogues à celles de la lignée sauvage au méme stade (cf. Pl, X-B).

- D : Détail du sporoplasme mûr. L'aspect en chevrons du plasmalemme n'apparaît pas

nettement sur cette section, Remarquer les deux types de globules lipidiques : en oursin

et à centre clair (fragiles) différant de ceux de la lignée sauvage (cf. Pl. X-B, C). - E :autre

détail du sporoplasme. Les grains de fond sont différents des granules entourant les mito-

chondries.

Pl. XVII. — Mutant albinos. Stades primaire et secondaire du développement des asco-

spores.- A Stade primaire (Patag). Les globules lipidiques sont plus fréquents dans le sporo-

plasme que chez la lignée sauvage et le mutant ceinturé (cf. Pl. I-A; XII-B, C). - В : Stade

secondaire (Patag). Ébauche de la paroi intermédiaire. L'aspect sombre de la partie centrale

du granule lipidique est particulier au mutant albinos (cf, Pl. III-D; XII-B). - C : Stade

secondaire (Acétate d'uranyle - citrate de plomb). Ébauche de la paroi intermédiaire avec

stiation transversale. - D : Stade secondaire (Patag). Développement d'une stratification

superposée à la striation initiale dans la paroi intermédiaire.

Pl XVII. — Mutant albinos. Stade tertiaire du développement des ascospores. - A

(Patag) Section d'ensemble d'un jeune stade tertiaire depuis la paroi propre de lascospore

jusqu'à la paroi de l'asque. Remarquer la lamelle noire de la couche intermédiaire et les

précipités assez volumineux dans les jeunes vacuoles épiplasmiques périsporiques (cf. sau-

vage, Pl. IV-A; ceinturé, Pl. XIII-B). - B (Patag) : Détail paroi intermédiaire (avec couche

Pollux, couche Castor, couche blanche et lamelle noire), périspore interne, avec ébauche de

couche support (cf. sauvage Pl. V-A; ceinturé Pl. XIII-C). - C (Patag) : Paroi intermédiaire et

périspore d'un stade plus avancé. La périspore plus abondante contient des sphérules grises

(cf. sauvage, Pl. IV-A; ceinturé, PI, XIII-B). - D : (Acétate d'uranyle - citrate de plomb)

Périspore moyenne avec sphérule grise, périspore externe peu distincte et limitante externe

(cf. sauvage, Pl. V-D). - E (Patag) : Sporoplasme avec mitochondries à nombreuses crétes

fines (cf. sauvage, Pl. VI-C; ceinturé, РІ. XIII-A).

Pl. XIX. — Mutant albinos. Début de maturation (correspondant au début de pigmen-

tation des souches pigmentées). - A (Patag) : Section d'ensemble de la paroi ascosporale.

La périspore moyenne renferme de nombreux granules Patag +. Des précipités abondants

adhérent à la limitante externe de l'ascospore. Le plasmalemme ascosporal a un aspect

en chevrons (cf. sauvage, Pl. VI-D, VILA; ceinturé, Pl. XIV.C). - B (Patag) : Détail de la paroi

intermédiaire et de la périspore interne. Dans cette derniére la couche support est distincte.

Dans la couche blanche la lamelle noire persiste (elle est peu typique en raison de l'obliquité

de la coupe) (cf. sauvage, Pl. VII-B; ceinturé, РІ. XIV-B). - C (Acétate d'uranyle - citrate

Source : MNHN, Paris

338 A. BELLEMERE ET AL.

de plomb) : Contact entre une ascospore et l'épiplasme. La surface de l'ascospore est héris-

sée d'apophyses étroites et couverte de précipités denses déposés initialement dans les

vacuoles périsporiques devenues coalescentes. Stade un peu plus jeune que À. - D (Acétate

d'uranyle - citrate de plomb) : Détail des granules de la périspore moyenne.

Pl. XX. — Mutant albinos. Maturation des ascospores. - A (Patag) : Début de maturation.

Détail du sporoplasme (cf. Pl. XIX-A). Plasmalemme ascal en chevrons. - B (Patag) : Début

de maturation. Détail du sporoplasme (cf. A.). Globules lipidiques en passoire (cf. sauvage,

PI. X-A, B; ceinturé, Pl. XIII-D). - C (Patag) : Maturation avancée. Détail de la paroi. La

périspore interne, homogène reste dense. La périspore moyenne est lâche. La stratification

de la couche Castor est encore distincte. La lamelle noire persiste dans la couche blanche

(cf. sauvage, Pl. IX-C; ceinturé, Pl. XIV-B). - D (Acétate d'uranyle - citrate de plomb) :

Maturation avancée. Détail de la paroi (cf. sauvage, PI. XI- À à D). Par cette coloration

la lamelle noire de la couche blanche n'est pas réactive. - E (Patag) : Maturation avancée.

Détail du sporoplasme. Les mitochondries ont perdu leur réactivité. Les globules lipidiques

sont de deux types (en passoire ou à centre dense) (cf. A, B; cf. sauvage, Pl. X-B, C; cein-

turé, Pl. XVI-B, E). - F (Patag) : Maturation avancée. Détail de la paroi ascosporale. La

périspore interne est dense. La couche Pollux reste distincte. La couche Castor est peu

différenciée. Dans la couche blanche la ligne noire persiste mais elle est indistincte dans

la partie gauche de la coupe, sectionnée obliquement.

PI. XXI. — Appareil apical de l'asque (Patag). - A : Lignée sauvage. Fin du stade secon-

daire de développement des ascospores. Remarquer l'importance de la vacuole épiplasmique

apicale. - B : Mutant ceinturé. Stade primaire ou secondaire de développement des asco-

spores. L'exoascus est différencié au niveau de l'encoche de l'appareil apical. - C : Lignée

sauvage. Début du stade tertiaire du développement des ascospores. Noter, au niveau de

l'encoche de l'appareil apical, l'abondance de reticulum endoplasmique dans l'épiplasme.

et la différenciation de l'exoascus.

Source : MNHN, Paris

ASCOBOLUS IMMERSUS 339

—ceint

PLI

Source : MNHN, Paris

Р.П

Source : MNHN. Paris

Source : MNHN, Paris

PLV

Source : MNHN, Paris

Pl VI

Source : MNHN, Paris

РІ. МШ

Source : MNHN, Paris

PL IX

Source : MNHN, Paris

фры

Source : MNHN. Paris

Pl. XIII

Source : MNHN, Paris

РІ. ХІУ

Source : MNHN, Paris

РІ. ХУП

Source : MNHN, Paris

РІ. ХУШ

Source : MNHN, Paris

Source : MNHN. Paris

361

ÉTUDE D'URÉDINÉES

par G. VIENNOT-BOURGIN*

RÉSUMÉ. — Deux Urédinées nouvelles sont décrites. La premiére est un AEcidium parasite

du Colchicum autumnale. La seconde est Puccinia ptychotidis sur Ptychotis heterophylla

qui appartient au groupe morphologique représenté par P. oreoselini (Strauss) Fck. sur

de nombreuses Ombelliféres.

ABSTRACT. — Two new species of Pucciniaceae discovered in south France are described :

AEcidium colchici-autumnalis living on Colchicum autumnale and Puccinia ptychotidis on

Ptychotis heterophylla.

Nous décrivons deux Urédinées, dont l'une doit étre considérée comme

inédite, qui font partie des nombreuses espéces de micromycétes parasites

récoltées par Michel PONCHET dans les Alpes-maritimes au cours de ces der-

niéres années.

1. — AEcidium sp., sur les limbes foliaires de Colchicum autumnale L., en zone

humide prés du village de Caussols, 15 mai 1978 (Fig. 1).

La plante phanérogame, de détermination douteuse à l'époque du préléve-

ment, a été identifiée par la suite lors de la floraison automnale de spécimens

encore porteurs de conceptacles desséchés.

Le parasite comporte deux stades évolutifs. Ce sont d'abord des pycnides

caractérisées sous la forme de petits bombements hémisphériques, rougeátres

ou ocre, épiphylles ou amphigénes. Apparaissent ensuite des conceptacles

cupuliformes, devenant progressivement naviculaires, disposés en séries linéaires

paralléles aux nervures, hypophylles, ou parfois distribués sur les deux faces

du limbe sur des macules tissulaires orangées.

* Institut National Agronomique, Laboratoire de Pathologie Végétale, 16 rue Cl. Bernard,

75005 Paris.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 2 (1981).

Source : MNHN, Paris

362 G. VIENNOT-BOURGIN

Fig. 1. — 1: Sections transversales dans une pycnide de Y AEcidium colchiciautumnalis.

2 : cellules pseudopéridiales. 3 : écidiospores. 4 : écidiospores immatures. 5 : assise

génératrice des écidiospores et chainette de spores.

Des coupes transversales de limbe foliaire, réalisées au microtome à congé-

lation, permettent d'observer :

Source : MNHN, Paris

ÉTUDE D'URÉDINÉES 363

a - les pycnides. Elles occupent une position subépidermique. Globuleuses

ou piriformes, amincies au niveau ostiolaire, elles mesurent 80 à 100um dans

leur plus grande largeur et 80 à 125um en hauteur. L'ostiole est pourvu de

périphyses réunies en un pinceau plus ou moins épanoui. Les pycniospores,

sphériques ou faiblement ovoïdes, mesurent 3 4 54m.

b- les conceptacles écidioïdes cupuliformes, profondément inclus dans les

tissus de l'hôte, puis finalement déhiscents, largement ovalaires en section

transversale, présentent une base large délimitée par un pseudoparenchyme

dense. Chaque conceptacle atteint 800 à 900um à sa base, sa profondeur variant

de 250 à 400um. On y distingue :

1) une assise génératrice des spores constituée de cellules prismatiques ou

polyédriques.

2) une enveloppe pseudopéridiale différenciée à partir des cellules périphé-

riques de l’assise génératrice, Elle figure une corbeille très régulière délimitant

le sore. À sa base on observe des cellules tabulaires étroites, très régulièrement

et fermement juxtaposées, à paroi uniformément mince (environ 24m). Dans

le tiers supérieur de l'enveloppe pseudopéridiale la conformation des cellules

se modifie profondément mais de façon progressive. Ces cellules deviennent

presque cubique-arrondies ce qui en facilite la désarticulation. Le caractère

le plus apparent de ces cellules est la différenciation d'une paroi externe épaisse,

atteignant 10um, striée-canaliculée, tandis que la paroi interne est mince (2 à

Aum), lisse ou ornée de quelques verrues éparses.

Les cellules ultimes de la couche pseudopéridiale mesurent 20-37 x 15-23um.

3) Les spores constituent d'abord des chaines qui se dissocient précocement

si bien que cette disposition devient difficilement perceptible dans un concep-

tacle parvenu à son complet développement.

Ce sont des cellules d'abord cubiques ou polyédriques à paroi lisse, puis

devenant globuleuses ou ovoides et ornementées. La paroi en est alors fauve

clair, épaisse de 2 à 2,5um, uniformément couverte de verrues fines, Le contour

de la spore apparaît anguleux par suite de la présence de 2 à 4 papilles convexes,

crénelées, à base atteignant 6 à 7,5um. En outre, une macération prolongée

dans le lacto-phénol permet d'observer 3 à 4 pores germinatifs épars.

Ces spores mesurent 15-28 х 15-21шт (quelquefois jusqu'à 32um en lon-

gueur).

c- le mycélium intercellulaire, trés dense au niveau des conceptacles, est

présent dans toute l'épaisseur du limbe et constitue ainsi une liaison trés appa-

rente entre les conceptacles cupuliformes et les pycnides. Ce sont des filaments

fins, enchevétrés ou disposés en faisceaux.

Afin de définir la nature des conceptacles formés dans les feuilles du Col-

chicum autumnale, nous rappellerons tout d'abord qu'il existe des Urédinées

à cycle complet admettant 5 types de spores et des espèces à cycle incomplet

pour lesquelles un ou plusieurs appareils sporiféres font défaut.

Les Urédinées à cycle complet, ou eu-cycliques, selon la classification de

SCHROETER (1879) amendée par ARTHUR (1929) puis par LAUNDON

Source : MNHN, Paris

364 G. VIENNOT-BOURGIN

(1965), homothalliques ou hétérothalliques, se développent tantót sur une

seule plante (espéce autoxéne), tantót sur deux plantes-hótes différentes (espéce

hétéroxène) en produisant la multiplicité des formes évolutives décrites chez

les Urédinées, Ces formes diffèrent entre elles par leur morphologie, leur cyto-

logie, leur fonction cyclique et aussi leur capacité de sporulation. Il est géné-

ralement admis qu'à partir d'une spore contaminatrice, qui est la basidiospore

issue de la germination du kyste basidiogéne ou téleutospore, apparaissent

successivement des pycnides sur le thalle haploïde, puis après la réalisation

du dicaryon, des écidiospores et des urédospores. Toutes ces spores ont essen-

tiellement une fonction disséminatrice, la production des téleutospores achevant

le cycle,

Les pycniospores et les écidiospores sont encore présentes chez les Urédinées

à cycle incomplet, telles que les opsis-cycliques, où le stade urédospore fait

défaut. Par contre pour les brachy-cycliques, si des pycnides se constituent

fréquemment, ce sont les écidiospores qui ne se forment pas tandis que des

urédospores sont produites avant que n'apparaissent les téleutospores. En

considérant ces deux groupes on admet qu'à partir du mycélium (et par suite

d'une fusion entre hyphes haploides), il peut se former soit des écidiospores,

soit des urédospores.

Cette contraction cyclique devient très apparente si l'on considère les espèces

micro-cycliques et lepto-cycliques où le stade téleutospore est seulement pré-

cédé de la formation de pycnides alors que des écidiospores et des urédospores

ne se constituent pas.

Par ailleurs l'absence de production de téleutospores marque le terme final

de la dégradation cyclique de certaines Urédinées. C'est le cas des espèces relé-

guées dans les genres AEcidium (sensu lato) ou Uredo. De ce fait la définition

de la pycniospore en tant qu'organe fécondateur peut étre remise en question.

L'existence de deux noyaux dans les pycniospores, reconnue pour 26 espéces

d'Urédinées autoxénes eu-cycliques, opsis-cycliques ou brachy-cycliques prove-

nant d'Europe ou des régions intertropicales, selon les observations rapportées

en particulier par Mc GINNIS (1960), P. HEIM (1964) et plus récemment par

SLEIMAN (1972), peut être interprétée de deux façons :

a- la formation pycnidienne, chez certaines Urédinées, correspondait à

une concentration mycélienne dicaryotique, ce qui exclut le rôle sexuel attribué

de façon courante a la pycniospore; celle-ci n'ayant alors, chez les espèces micro

et lepto-cycliques, qu'un róle de dispersion ou tout au moins d'agent de conta-

mination de proche en proche.

b- on peut aussi envisager que la nature binucléée des sporophores et des

pycniospores correspond à une mitose supplémentaire. ll faudrait alors ad-

mettre, pour attribuer à ces spores un rôle sexuel, qu'un noyau dégénère avant

la formation du dicaryon. Cette hypothèse n’a cependant jamais encore été

démontrée.

Ainsi, l'apparition du dicaryon, chez certaines Urédinées incomplètes cycli-

quement, précéderait la formation des pycnides, celle-ci pouvant étre fortuite.

Source : MNHN, Paris

ÉTUDE D'URÉDINÉES 365

Cette conception se trouve fortifiée par la coexistence souvent trés intime

entre ces conceptacles et les écidies, les urédospores et même les sores à téleu-

tospores.

Enfin, il convient d’infléchir l'affirmation selon laquelle l'écidiospore est

inapte à reproduire l'écidie, mais par contre, initie l’urédospore ou la téleu-

tospore. En effet, nous avons obtenu (VIENNOT-BOURGIN, 1964, 1966)

le renouvellement de l'AEcidium tubiflorae P. Henn., espèce africaine, qui s’est

multiplié pendant deux années consécutives sur l'Elytraria squamosa Lind.

cultivé en serre. De même nous avons démontré que les écidiospores du Puccinia

lagenophorae Cke., qui est une espèce dépourvue de pycnides hébergée par

des Senecio, sont capables de réinfecter cette plante et de reproduire des écidies.

Ce fait confirme les résultats expérimentaux de WALSHAM et WILSON (1964)

sur Calendula officinalis L., Bellis perennis L. et Senecio cruentus DC.

En tenant compte de ces résultats, on doit admettre que la nature, la position

et la conformation des conceptacles observés sur le Colchicum aufumnale

correspondent à celles d'un stade écidien. En effet :

1) de nombreuses pycnides et des conceptacles cupuliformes se constituent

aux mémes emplacements sur les limbes foliaires. La coexistence et la dépen-

dance de ces deux types d'appareils sporiféres est confirmée par leur rattache-

ment à un mycélium dense, développé dans toute l'épaisseur du limbe foliaire.

2) les conceptacles cupuliformes sont du type AEcidium, le sore étant

limité par une assise pseudo-péridiale bien caractérisée se développant et se

différenciant continúment; les spores (écidiospores) naissant 4 partir de sporo-

phores prismatiques juxtaposés en une assise uniforme.

Sur le Colchicum autumnale, GUYOT et MASSENOT (1958) ont décrit

un Uredo colchici sp. nov. récolté à la lisière marécageuse de la forêt de la

Sainte-Baume (Var), c’est-à-dire dans une localité comparable et proche du

plateau de Caussols. Selon le dernier auteur que nous avons consulté, le spécimen

type aurait été déposé dans les herbiers mycologiques du Museum National

d'Histoire Naturelle. Malheureusement il n’y figure pas.

Cependant la plupart des caractéristiques produites dans la diagnose per-

mettent de considérer qu'il s'agit dans les deux cas de la méme espéce. Le

faible développement du parasite sur le spécimen étudié par GUYOT et MAS-

SENOT n'a cependant pas permis à ces auteurs de préciser la structure et l'im-

portance du pseudopéridium et les caractéristiques des cellules de cette enve-

loppe et de la sporée.

En conclusion, nous proposons de rapporter cette Urédinée au genre AEci-

dium en le désignant AE. colchici-autumnalis (Guyot et Massenot) Viennot-

Bourgin sp. nov. avec la diagnose suivante :

Pycnidiis epiphyllis vel amphigenis, sparsis vel aggregatis, melleis, globosis

vel piriformis, 80-100um latis, 80-125um altis, in maculis pallide ochraceis

usque ad 3-8 mm diam. Pycniosporis ovoideis, 3-5um diam.

Aecidiis hypophyllis, sparsis vel concentrice aggregatis, cupulatis, 800-1 000um

Source : MNHN, Paris

366 G. VIENNOT-BOURGIN

diam. Cellulis peridii cuboideis, hyalinis, firme conjunctis, 30-37 x 15-23um,

in series regularis dispositis; pariete interiore leve vel sparsis verruculosis, 24m;

pariete interiore usque 10um crassa; striataque vel reticulate. AEcidiosporis

Phboideis vel subglobosis, 15-28 x 13-21um; episporio flavido vel brunneolo,

2.2 5шт crasso, subtiliter denseque verruculoso; 2-4 papillae praeditis, 34

poris germinativis distincte pertuso

Hab. in foliis Colchici autumnalis, Caussols (Alpes-maritimes), Gallia meridio-

nalis, mai 1978.

IL — Puccinia ptychotidis Vienn.-Bourg. et Ponchet sp. nov. sur les feuilles

et les tiges de Ptychotis heterophylla Koch, (Ombelliféres) environs de Saint-

Etienne de Tinée (Alpes-maritimes), гой: 1980".

Cette espèce appartient au groupe morphologique : P. oreoselini (Strauss)

Fck. qui, sur les Ombelliféres, réunit des espèces autoxènes caractérisées par

des sores à téleutospores punctiformes, pulvérulents, renfermant des spores à

Fig. 2. Urédospores et téleutospores du Puccinia psychotidis.

1. La [шене a été obligeamment déterminée par P. JOVET, Directeur du Centre

national de floristique au Muséum national d'Histoire naturelle. Nous le remercions trés

vivement.

Source : MNHN, Paris

ÉTUDE D'URÉDINÉES 367

paroi réticulée, portées par un pédicelle fragile, Dans ce groupe, GAUMAN

(1959) considére des espéces à développement macrocyclique, ou brachy-

cyclique.

L'examen du matériel récolté par PONCHET ne permet d'observer que des

urédospores et des téleutospores. L'espéce décrite ici est donc, provisoirement

tout au moins, placée parmi les brachy-cycliques.

Les caractéristiques morphologiques sont les suivantes :

- sores urédosporiféres punctiformes, largement dispersés ou groupés en amas

sur les divisions foliaires, brun-roux vif, pulvérulents.

- urédospores globuleuses ou ellipsoïdes, 22-28 x 20-25um (moyennes :

26,5 x 23,6), à paroi fauve clair, régulièrement épaisse de 2,5um, finement

couverte d'aiguillons hyalins. 2 pores germinatifs équatoriaux proéminents.

- sores téleutosporiféres de méme disposition, chátain foncé.

- téleutospores largement ellipsoides, à apex arrondi, atténuées au niveau

de la cloison médiane, base arrondie un peu rétrécie, 32-48 x 20-23um (moyen-

nes : 38 x 22), à paroi fauve régulièrement épaisse de 2,5um, couverte de verrues

hémisphériques, de 1,5 à 24m à leur base, éparses, ou, le plus souvent disposées

en séries linéaires discontinues. Pore germinatif supérieur étroit, sans papille,

en position apicale; pore germinatif inférieur prés de l'insertion du pédicelle.

Pédicelle hyalin, le plus souvent tronqué.

Ce Puccinia présente certains caractéres communs avec le P. rugulosa

Tranzsch. connu en Europe et en Asie sur différents Peucedanum, en particulier

en ce qui concerne la nature de la verrucosité de la paroi des téleutospores.

La distinction essentielle entre ces deux Puccinia, indépendamment des données

biométriques, réside dans le fait que les urédospores du P. rugulosa présentent

un épaississement marqué à l'apex (jusqu'à 6,5pm) et 3 ou 4 pores équatoriaux.

Le P. Terrieri Gáumann, qui est hébergé par Tommasinia altissima Thell., est

du méme groupe morphologique, il présente également des urédospores à paroi

épaissie apicalement.

La diagnose latine est la suivante :

Puccinia ptychotidis Vienn.-Bourg, et Ponchet sp. nov.

- Soris uredosporiferis hypophyllis vel caulicolis, sparsis, minutis, mox nudis,

pulverulentibus, cinnamomeis.

- Uredosporis globosis, vel ellipsoideis, 22-28 x 20-25um, med. 26,5 x 23,6,

membrana dilute brunnea, 2,5um crassa, dense echinulate, poris germinatibus

binis equatorialibus dispositis.

- Soris teleutosporiferis conformibus, atro-brunneis vel nigris.

- Teleutosporis late ellipsoideis, castaneo-brunneo, apice rotundatis vel leniter

attenuatis, 30-48 x 20-23um, med. 38-22; membrana 2,5um, dispersus verrucu-

loso, vel linearibus dispositis; poro germinativo cellulae superioris apicali, cellulae

inferioris proxime pedicello plerumque sito; pedicello hyalino.

Hab. in foliis caulibusque Ptychotis heterophylla, prope Saint-Etienne de

Tinée, Alpinus meridionalis.

Source : MNHN, Paris.

368 G. VIENNOT-BOURGIN

Les spécimenstype de l'AEcidium colchic-autumnalis et du Puccinia ptychotidis sont

déposés dans les herbiers de Cryptogamie du Museum national d'Histoire naturelle.

BIBLIOGRAPHIE

ARTHUR J.C. 1929 — The plant rusts (Uredinales). Edit. John Willey and Sons, New

York, 446 p.

GAUMANN E., 1959 — Die Rostpilze Mitteleuropas. Edit. Büchler et Cie, 1407 p.

GUYOT A.L. et MASSENOT M., 1958 — Contribution à l'étude des Urédinées du Sud-Est

de la France. Uredineana V : 461-505.

HEIM P., 1964 — Le noyau chez les Urédinées. Rev. de Mycol. 29 : 9-65.

LAUNDON G.F., 1965 — The generic names of Uredinales. Mycol. Pap. 99, 24 p.

Mc GINNIS R.C., 1960 — Note on the occurrence of binucleate pycniospores in species of

Puccinia. Canad. J. Pl. Sci. 40, 202.

SCHROETER, J., 1879 — Entwicklungsgeschichte einiger Rostpilze, II, III. Cohns Beiträge

zur Biologie der Pflanzen. Bd, III, heft I, 51-93.

SLEIMAN F.T., 1972 — Biologie et Cytologie de quelques espéces de Puccinia parasites des

Composées. Thése. Paris VI.

VIENNOT-BOURGIN G., 1964 — La rouille australienne du Sénegon. Rev. de Mycol.

29 : 241-258.

VIENNOT-BOURGIN G., 1966 — Le renouvellement du stade écidien des Urédinales.

Rev. roum. Biol. Botanique, II : 257-261.

WALSHAM D.F. et WILSON Irene M., 1964 — New groundsel rust in Europe. Internat.

Botan. Congress, Edinburgh.

WILSON Iréne et WALSHAM D.F., 1963 — A new disease of groundsel, Nature, 494,

383.

Source : MNHN, Paris

369

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

JULICH W. et STALPERS J.A., 1980 — The resupinate non-poroid Aphyllo-

phorales of the temperate northern hemisphere. North-Holland Publish.

Comp. Amsterdam, 335 p., 6 pl., 1 sch.

Les mycologues désireux d'identifier leurs récoltes d'Aphyllophorales ont

pendant longtemps déploré de n'avoir à leur disposition pour de telles investi-

gations que bien peu d'ouvrages descriptifs d'importance générale. Il en est

tout autrement à présent car, depuis quelques années, un certain nombre de

flores relatives à cet ensemble de champignons si vaste et si diversifié, a vu le

jour. Parmi les plus récemment publiés, celle que nous devons à W. JULICH et

J.A. STALPERS se rapporte uniquement, comme l'explicite parfaitement le

titre, aux Aphyllophorales dont le chapeau est plus ou moins entiérement

adhérent au support, avec une surface hyméniale lisse, tuberculeuse ou dentée;

d'autre part, seules sont traitées les espéces rencontrées dans la zone tempérée

de l'hémisphère nord.

Ainsi nettement délimité dans son objet, cet ouvrage où s'affirme de la part

des auteurs une indéniable volonté de concision, se révèle méthodiquement

construit. À la brève introduction qui apporte les explications nécessaires à la

bonne utilisation de la partie descriptive, succède un glossaire détaillé accompa-

gné de dessins au trait. Les définitions des termes s'appliquant à la structure

macro- ou microscopique des Aphyllophorales sont indiquées et très souvent

illustrées, avec référence à un genre ou une espèce, ce qui ajoute évidemment à

la précision dans l'énumération des caractéristiques de ces taxons. Deux clés

de détermination des genres sont suivies par la description des espéces présentées

selon l'ordre alphabétique des genres. Les diagnoses donnent toutes les informa-

tions indispensables habituelles, mentionnent également les synonymies, l'habi-

tat, la répartition géographique et renvoient aux notes bibliographiques parti-

culiérement abondantes qui, avec les index des noms génériques et spécifiques,

terminent le volume.

Si le classement alphabétique facilite grandement la consultation de la flore,

il ne rend pas compte des affinités présumées entre genres ou groupes de

genres. C'est pourquoi les auteurs ont réalisé un schéma esquissant les liens de

parenté concernant les champignons étudiés, mais dont ils demandent qu’on

n’y voit pas un arbre phylogénétique et qu'ils regrettent d’avoir dû présenter

selon deux dimensions. En effet, une disposition en plan ne permet guère de

souligner clairement les alliances dans différentes directions qu’offrent certains

Source : MNHN, Paris

370 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

genres ni de montrer combien sont parfois mal définies les séparations entre

familles voisines. De tels inconvénients obligés n'enlévent cependant rien à

l'intérêt de cet essai systématique qui situe par rapport à l'ensemble des Aphyllo-

phorales des genres réunis peut-être un peu artificiellement d'après leur morpho-

logie, pour cette étude.

Autant par l'apport descriptif qu'il représente que par la valeur des nom-

breuses indications apportées au sujet des Aphyllophorales résupinés et non

porés d'Amérique du Nord d'Europe et d'U.R.S.S., cet ouvrage apparaît comme

un bon instrument de travail pour la reconnaissance des espèces, mais aussi

pour l'établissement d'utiles comparaisons avec la flore d'Aphyllophorales

d'autres régions du globe, notamment tropicales.

J. Perreau

PESSON P., 1980 — Actualités d'écologie forestiére, sol, flore, faune. Forma-

tion permanente en écologie et en biologie. Gauthiers-Villars, Paris, 517 p.

Cet ouvrage collectif (le huitième de la collection), présente quelques uns des

aspects majeurs des écosystèmes forestiers. Leur complexité apparaît à la lecture

d'une succession d'articles rédigés par des botanistes, des microbiologistes, des

zoologistes, des pédologues, tous écologistes appartenant aux plus importantes

institutions françaises d'Enseignement et de Recherche.

Ce livre, abondamment illustré de cartes, graphiques, photographies, schémas

remarquablement exécutés, et d'une planche en couleurs, se divise essentielle-

ment en trois parties. Dans la première, qui est fondamentale, sont groupés

des articles traitant des litières forestières provenant d'une matière organique

fraîche et périodiquement renouvelée qui se trouve décomposée, en des temps

variables, sous l'effet de cycles biogéochimiques complexes, pour aboutir à la

construction de l'humus. Une telle transformation subit des fluctuations mul-

tiples, souvent désordonnées, parmi lesquelles on considère celles liées à la na-

ture de la litière, au climat, au sol, à la station, á la microflore et la microfaune,

dont les actions se succèdent et interfèrent.

La seconde partie traite de questions d'écologie végétale et de sylviculture,

telles que la biogéographie des Conifères méditerranéens, leurs exigences géo-

morphologiques, édaphiques ou bioclimatiques. Il en est de même pour le

hêtre. Sont ensuite exposées des données importantes concernant les méthodes

d'évaluation de l'évapotranspiration. Ces considérations conduisent à sensibiliser

le lecteur sur les difficiles problémes que doit résoudre le sylviculteur pour

aboutir au choix judicieux d'une essence adaptée et économiquement rentable.

Dans la troisigme partie sont évoqués les róles de prédateurs que jouent

les habitants de la forét : oiseaux, mammiféres, reptiles ainsi que la multitude

des invertébrés. On peut, dans cette partie de l'ouvrage, regretter l'absence

d'un rappel des déprédations causées aux forêts par les champignons lignicoles :

pourridiés, espéces lignivores, etc..., dont les effets destructeurs sont souvent

économiquement trés importants.

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 371

Ce livre participe pleinement à rétablir la vraie définition de l'écologie. En

méme temps il en montre l'importance et les objectifs.

G. Viennot-Bourgin

RAIMBAUD M., 1981 — Fermentation en milieu solide. Croissance de

champignons filamenteux sur substrat amylacé. Travaux et documents de

l'O.R.S.T.O.M. n? 127, O.R.S.T.O.M. Paris, 291 Р.

L'objectif de ce travail est la mise au point d'un procédé de culture aérobie

de champignons filamenteux sur des milieux naturels concentrés, permettant

de transformer des substrats agricoles pauvres en protéines en aliments fermentés

propres 4 la consommation animale. Le modéle retenu pour l'expérimentation

est un substrat amylacé, le manioc, et sa transformation par une souche d'As-

pergillus niger (f. hennebergii) remarquable par ses performances amylolytiques.

Après avoir précisé l'influence des facteurs de l'environnement et déterminé

ainsi les conditions optimales de culture, l'auteur analyse méthodiquement

le mode de colonisation du substrat par le mycélium et les caractéristiques

biochimiques de la fermentation. L'étude cinétique des paramétres de la fermen-

tation solide : biosynthése du matériel cellulaire, métabolisme respiratoire,

métabolisme de l'eau, production de chaleur, conduit à l'élaboration d'un mo-

dèle cinétique de la croissance fongique en milieu solide, qui trouve son appli-

cation dans la mise au point d’une unité pilote de fermentation. Les résultats

exposés (obtention, à partir du manioc, d’un produit fermenté contenant

18 75 de protéines) montre tout l'intérét qu'il y a à poursuivre les recherches

fondamentales dans le domaine des croissances fongiques sur des substrats

solides naturels.

J. Nicot

COLEY-SMITH J.R., VERHOEFF K. and JARVIS W.R., 1981 — The biology

of Botrytis. Academic Press, London. 318 p.

Les Botrytis sont des champignons des régions tempérées connus depuis

longtemps pour leur pouvoir pathogène et ses incidences économiques. Leur

importance se reflète dans le nombre considérable de travaux publiés, tant au

plan fondamental qu'appliqué. Un groupe européen de chercheurs sur les Botry-

tis s'est méme créé et se réunit réguliérement depuis 1964. La diversité des

domaines de recherche et la profusion des données bibliographiques nécessitaient

une mise au point sur l'état actuel des connaissances en matière de biologie

des Botrytis. L'ouvrage qui nous est proposé ici constitue cette synthése. C'est

avant tout un livre de biologie, l'aspect phytosanitaire étant réservé au chapitre

final intitulé «Disease control».

Les 5 premiers chapitres portent sur la taxonomie, la morphologie, la struc-

ture et le comportement en culture et dans la nature des conidies, des sclerotes

et du téléomorphe (Botryotinia). Ils constituent ce que nous appellerons une

Source : MNHN, Paris.

372 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

première partie tandis que les processus d'infection, les relations hôtes-parasites,

les mécanismes de résistance et l'épidémiologie peuvent étre regroupés en une

seconde partie. Enfin, le róle particulier et complexe de Botrytis cinerea dans

le domaine de l'cenologie est traité dans un chapitre à part.

Contrairement aux autres ouvrages de ce type, rédigés par plusieurs spécia-

listes, et qui manquent parfois de cohésion, «The Biology of Botrytis», par

l'unité du matériel fongique qui y est traité, constitue un ensemble dont la

lecture et l'utilisation sont aisées. Cette spécificité ne limite absolument pas

la portée de l'ouvrage qui présente un intérét incontestable au plan général de

la biologie des champignons. A ce titre il constitue, pour un large public de

chercheurs non limité aux phytopathologistes, une source précieuse d'informa-

tions.

M.F. Roquebert

BALDWIN R.S. 1981 — The fungus fighters. Two women scientists and their

discovery. Cornell University Press, Ithaca and London, 212 p.

A travers la biographie de deux chercheurs dont les travaux conjugués ont

conduit à la découverte de la nystatine l'auteur, journaliste, révéle les activités

multiples d'une équipe de recherche médicale aux États-Unis. Une démarche

exemplaire conduit des travaux désintéressés d'une microbiologiste et d'une

chimiste à la mise au point expérimentale du premier antibiotique antifongique

appliquable aux mycoses humaines, puis à sa commercialisation et enfin à

Pautofinancement de la recherche fondamentale et au mécénat. Au fil de ce

fascinant reportage, le lecteur glane une foule d'informations sur les mycoses,

sur les usages médicaux et paramédicaux de la nystatine, et sur la stratégie de

la recherche médicale aux U.S.A.

J.Nicot

SIVANESAN A., 1981 — Balladinopsis, Balladynocallia and Alina. Mycological

Papers n° 146, C.M.I. Ed., Kew. 38 pages, 8 planches, 19 figures.

12 espèces de Balladinopsis sont décrites et illustrées de figures au trait ou

de planches photo. 3 espèces nouvelles:B. ebbelsii, B. johnstonii et urtiagae

sont décrites, toutes trois ayant une anamorphe appartenant au genre Tetra-

spora. La systématique du genre Balladynocallia (3 espèces) est revue et discutée.

M.F. Roquebert

Source : MNHN, Paris

373

TABLES DU TOME 2 - 1981

S.L.I. ABDEL HAFEZ,— voir 1.A. EL-KHADY.

C: ANDARY, J.L. ROUSSEL, M.E. MOTTE, J.P. RASCOLE et G. PRIVAT. — Activité

antifongique comparée de divers esters de l'acide dihydroxy-3,4, cinnamique. . . . . 119

K.C. BASUCHAUDARY. — voir K.B. KHARE et al.

A. BELLEMERE, L. MELENDEZ-HOWELL, A. NICOLAS et J.L. ROSSIGNOL. —

Étude ultrastructurale comparative du développement des ascospores chez la lignée

sauvage et chez des mutants à ascospores «ceinturées» ou «albinos» de l'Ascobolus

immersus Pers. ex Fr.

Е ds O ues ER ELE T IET ria CARET 299

B. BOHER, J.F. DANIEL et F. KOHLER. — Les maladies cryptogamiques du manioc

en République Populaire ём Сопго. ..........................-. 257

G. BOMPEIX. voir K. KHARE et al.

D. CODRON. — Étude ultrastructurale des spermogonies et de la spermatogenése chez

quelques еса аа RU d ee sr ES r A: 163

J.F. DANIEL. — voir B. BOHER et al.

J. DONOSO. — Hohenbuehelia S. Schulz. : definition et affinités taxinomiques. . . . . 153

1.А. EL-KHADY et S.I.I. ABDEL HAFEZ. — Production of sterigmatocystin by some

species and varieties of Aspergillus nidulans group. RM T

LA. EL-KHADY et M. J. FARGHALY. — Inactivation of aflatoxins in И

шел ОИ ONE ТОЕ E RR 131

M.J. FARGHALY. — voir 1.A. EL-KHADY.

F. GOURBIERE.

O oe аў

M.C. JANEX-FAVRE. — voir A. PARGUEY-LEDUC.

K.B. KHARE, G. BOMPEIX et K.C. BASUCHAUDARY. — Factors affecting growth

and sclerotial formation of Sclerotinia minor in vitro... ................ 289

F. KOHLER. — voir B. BOHER et al.

J. LACHARME. — voir F. SEIGLE-MURANDI et al.

P. LAMY-KRAFFT et M.F. ROQUEBERT. — Analyse des interactions entre deux

champignons antagonistes : Trichoderma viride Pers. et Botrytis cinerea Pers. ex

Utilisation de sucres et de polyols par la mycoflore d'Abies alba

Fr. Études préliminaires. . ............... 137

L.M. MELENDEZ-HOWELL. — voir A. BELLEMERE et al.

М.Е. MOTTE. — voir C. ANDARY et al.

A. NICOLAS. — voir A, BELLEMERE et al.

J. NICOT. — voir F. SEIGLE-MURANDI et al.

A. PARGUEY-LEDUC et M.C. JANEX-FAVRE. — Étude ultrastructurale des asques

et des ascospores de Truffes du genre T'uber. 1. Les asques. . .........-.... 37

J. PELHATE. — Mycoflore séminicole des maïs. Il. Conservation en épis. 61

A. POULARD et L. SIMON. — La microflore levurienne du vignoble nantai 13

G. PRIVAT. — voir C. ANDARY et al.

C. RAJENDRAN. — voir C.V. SUBRAMANIAN.

J.P. RASCOLE. — voir C. ANDARY et al.

Source : MNHN, Paris

374 TABLES DU TOME 2

1. RIMOCZI. — voir J. VETTER.

M.F. ROQUEBERT. Conidiogenése et conidiophores chez Cladosporium herbarum

(Pers.) Link ex S.F. Gray et Cladosporium cladosporioides (Fresen.) de Vries... .. 269

M.F. ROQUEBERT. — voir P. LAMY-KRAFFT.

J.L. ROSSIGNOL. — voir A. BELLEMERE et al.

J.L. ROUSSEL. — voir C. ANDARY.

Р. SEIGLE-MURANDI, J. NICOT, L. SORIN et J. LACHARME. — Mycoflore des

а ы 222222222000 0 217

L. SIMON. - voir A. POULARD.

AM. SLEZEC. — A propos de deux types d'anomalies obtenues chez Pleurotus

уни (D.C. ex Fr.) Quélet en cultures 6. <2 2 ee 245

L.SORIN. — voir F. SEIGLE-MURANDI et al.

CY. SUBRAMANIAN et C. RAJENDRAN. — Developmental morphology of Asco-

mycetes. VII. Fennellia flavipes. .. tt: 1;

C.V. SUBRAMANIAN et C.J. RAJENDRAN. — Developmental morphology of

Ascomycetes. VIII. Petromyces alliaceus. . . .

. VETTER et I. RIMOCZI. — Changes in the protein fractions and crude fiber con-

Vt of Pleurotus ostreatus and Stropharia rugosoannulata during the development. 107

189

G. VIENNOT-BOURGIN. — Un nouveau Puccinia à spores «diorchidioides». . . . . « -

G. VIENNOT-BOURGIN. — Études d'Urédinées.

NOTE :

Il est rappelé aux abonnés qu'ils doivent régler leurs abonnements

avant la fin du premier semestre de l'année en cours.

Dépôt légal n° 11207 - Imprimerie de Montligeon

Sorti des presses le 28 février 1982

Source : MNHN. Paris

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Tome 3, 1982

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Corticiés par J. Boidin. 390 pages, pl. et fig. : 70 F.

NO 7 (1959). Les champignons et nous (Chroniques) (11), par G.

Becker. 94 pages : 25 F.

NO 8 (1966). Catalogue de la Mycothéque de la Chaire de Crypto-

gamie du Muséum National d'Histoire Naturelle. (1) Micro-

mycètes, Macromycêtes (première partie). 68 pages : 25 F.

NO 9 (1967). Table des Matières (1936-1965) 85 p. 20 F. - (1966-

1975) 40 p. 10 F.

М9 10 (1969). Le genre Panacolus. Essai taxinomique et physiolo-

gique, par G.-M. Ola'h. 273 pages, pl. et fig. : 75 F.

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Tome lll. Les Mycénes, par Georges Métrod (1949). 144 pages,

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(1953). 465 pages, 172 fig. : 90 Е.

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