SOMMAIRE

BOISSELIER-DUBAYLE M.C. — Polymorphisme enzymatique chez Pleu-

rotus ferulae et Pleurotus nebrodensis ........,...,........., 321

HINZELIN F. & LECTARD P. — Microflore de la phyllosphére de quel-

е бнк Ер і ОО | 333

VEGH I. & VELASTEGUI J. — Étude су: de trois p de

Marssonina salicicoles 345

JANEX-FAVRE M.C. & PARGUEY-LEDUC A. — Étude ultrastructurale

des asques et des ascospores du genre Tuber. II. Les ascospores ...... 353

LANQUETIN P. & BOIDIN J. — Obtention de mycéliums et de fructi-

fications hybrides entre Dichostereum durum et D. sordulentum

(Bundiomycetes os qe ИИИ 375

Dnslysespiblioeraptigue eee te D TT DURO 403

Tables du Tome 4 405

Source : MNHN. Paris

СКУРТОСАМІЕ

MYCOLOGIE

TOME 4 Fascicule 4 1983 (1984)

Ancienne Revue de Mycologie. Dirigée par Roger HEIM

DIRECTEUR DE LA PUBLICATION: Madame J. NICOT

\DMINISTRATION : Mme LOCQUIN-LINARD M. et M h

SECRÉTAIRE DE RÉDACTION : Mme M.F. ROQUEBERT A.C

ЕА Bibliothèque Centrale Muséum

pas) A

/ 3 3001 00227782 9

sZ Source : MNHN, Paris

CRYPTOGAMIE MYCOLOGIE

CONTENTS

(Tome 4, Fascicule 4, 1983)

BOISSELIER-DUBAYLE M.C. — Enzymatic polymorphism in Pleurotus

ferulae and Pleurotus nebrodensis ........................, 321

HINZELIN F. & LECTARD P. — Phyllosphere microflora of some halo-

philic plants LT озо

VEGH I. & VELASTEGUI J. — Comparative study of three Marssonina

СОСЕ ЕТ 345

JANEX-FAVRE M.C. & PARGUEY-LEDUC A. — Ultrastructural study

of asci and ascospores in Truffles (g. Tuber). II. The ascospores ..... « 353

LANQUETIN P. & BOIDIN J. — Production of hybrid mycelia and

fructification between Dichostereum durum and D. sordulentum

Dd d у л з м 375

Bibliography 403

(nde on Volume a OS3\e mania ena Aue cn T TEE NUES 405

Source : MNHN, Paris

321

POLYMORPHISME ENZYMATIQUE

IROTUS FERULAE ET PLEUROTUS NEBRODENSIS

par M.C. BOISSELIER-DUBAYLE*

RÉSUMÉ, — La technique d'électrophorèse de zone en gel de polyacrylamide et la révéla

tion de différentes activités enzymatiques (estérases, aminopeptidases, phosphatases) sur les

homocaryons et dicaryons «reconstitués» issus de différents isolats révèle de grandes varia-

bilités et s'avère un moyen efficace de préciser le déterminisme génétique apparent de

certaines isoenzymes. Pour les types ferulae et nebrodensis analysés ici, on remarquera la

faible variabilité interne observée au sein de chaque individu P. nebrodensis.

SUMMARY. — Zone electrophoresis on polyacrylamide gel, followed by a detection of

esterase, aminopeptidase and phosphatase activities, have been performed on homokaryons

and «restored» dikaryons originating from different isolates. The zymograms exhibited

variable patterns, indicating that this electrophoretical technique is a good tool for genetic

determination of some isoenzymes. When P. ferulae and P. nebrodensis are analysed, a

weak internal variability was observed for each P. nebrodensis isolate.

Les divers représentants des Pleurotes des Ombelliféres (Basidiomycetes)

sont habituellement répartis en deux ou trois groupes de niveaux taxonomiques

incertains. Leurs basidiocarpes se développent sur les racines mortes de diffé-

rentes Ombelliféres aprés une croissance parasitaire (CAILLEUX & al., 1983).

Les groupes sont définis par la spécificité vis-à-vis des plantes-hótes, leur

répartition géographique, et par les particularités morphologiques suivantes :

Pleurotus eryngii Fr. ex D.C. Quélet est généralement inféodé au Panicaut

(Eryngium campestre) et sa répartition recouvre sensiblement celle de ses hôtes

(CAILLEUX & al., 1980). Morphologiquement, il est caractérisé par sa petite

taille et la couleur souvent foncée de son basidiocarpe.

M.N.H.N., Laboratoire de Cryptogamie, 12 rue Buffon, 75005 Paris. — L.A. 257 et

Laboratoire de Physiologie Cellulaire, Tour 53-43, Place Jussieu, 75230 Paris Cédex 05.

ERA 323.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

322 M.C. BOISSELIER-DUBAYLE

Pleurotus ferulae Lanzi se développe sur les racines des grandes Ombelliféres

du bassin méditerranéen (principalement Ferula). On le rencontre sur les côtes

méditerranéennes et il a été signalé jusqu'en Israël (BINY AMINI, 1980). IL

est souvent considéré comme simple forme du précédent mais s’en distingue

morphologiquement par sa plus grande taille et la couleur toujours foncée de

son basidiocarpe.

Pleurotus nebrodensis Inzenga est plutôt montagnard et propre aux grandes

Ombelliféres des zones subalpines de l'Europe (Laserpirium). Il a également

été signalé sur Diplotaenia dans les montagnes du Sud de l'Iran (HEIM, 1960),

sur Ferulae au Cachemire (WATLING & GREGORY, 1980) et a été récolté

sur Cachrys en Sicile. Il est caractérisé par la grande taille, la couleur claire,

presque blanche, de son basidiocarpe, et contrairement aux deux autres types

précédents, il présente des lames anastomosées en réseau sur le stipe et une

insertion souvent excentrée du piléus sur le stipe.

Notre étude s'insère dans les travaux de systématique réalisés sur les Pleurotes

des Ombelliféres : relations d'interfertilité et d'intercompatibilité (CAILLEUX

& al., 1981), relations avec les plantes-hétes (CAILLEUX & al., 1983), caryo-

logie : méioses et stocks chromosomiques (SLEZEC, 1981 a, b), et estimation de

la variabilité génétique de populations appartenant aux trois types de Pleurotes

et d'origines géographiques différentes (BOISSELIER-DUBAY LE, 1981, 1983 a,

b). Cette variabilité est abordée par l'étude du polymorphisme enzymatique, en

utilisant la technique d'électrophorése de zone en gel de polyacrylamide sur des

extraits de protéines mycéliennes, suivie de la révélation de différentes activités

enzymatiques (estérases, aminopeptidases, phosphatases).

L'analyse des protéines et des activités enzymatiques semble fournir des

données intéressantes dans ce domaine. BAVENDAMM (1928) fut le premier

à étudier des enzymes à des fins taxonomiques. Toutefois, la détermination

d'enzymes dans des extraits bruts semble insuffisante pour donner des carac-

tères fiables, et la technique d’électrophorèse est à présent très utilisée. Depuis

les premiers travaux réalisés par CHANG & al. (1962) sur Neurospora et par

CLARE (1963) sur Pythium, de nombreux travaux de systématique expéri-

mentale ont été menés chez les champignons : parmi les plus récents, citons ceux

de LÉGER (1976) sur Peniophora, GILL & ZENTMYER (1978), KAOSIRI &

ZENTMYER (1980) sur Phytophthora, GEIGER & al. (1980) sur Colletotri-

chum et ceux de STIPES & al. (1982) sur Endothia. Les Basidiomycétes ont

trés rarement été soumis à ces techniques bien qu'ils offrent un matériel de

choix par la possibilité de travailler sur des dicaryons «sauvages» («sauvages» —

mycéliums i^sus de matériel récolté dans la nature), sur des homocaryons (mycé-

liums haploides issus de la germination de basidiospores), et sur des dicaryons

«reconstitués» (mycéliums dicaryotiques issus de croisements entre homoca-

ryons compatibles).

En vue d'établir des distances génétiques relatives basées sur le déterminisme

génétique apparent de certaines isoenzymes, et après l'étude du type eryngii

(BOISSELIER-DUBAYLE, 1983 a), nous rendons compte ici des résultats

obtenus pour P. ferulae et P. nebrodensis.

Source . MNHN. Paris

POLYMORPHISME ENZYMATIQUE CHEZ DEUX PLEUROTES 323

MATÉRIEL ET MÉTHODES

MATÉRIEL

Nous avons analysé les isolats dont nous disposions au laboratoire. Pour P.

ferulae, des basidiocarpes récoltés sur deux Férules différentes (Ferula commu-

nis) à Toulon (Sud de la France) en Octobre 1974 ont fourni l'isolat 291 issu

d'un bouturage de fragment de chair et l'isolat 339 provenant d'un semis pluri-

spores. Pour P. nebrodensis, les isolats 191 et 193 proviennent de deux basidio-

carpes récoltés sur Laserpitium latifolium près d’Abriès (Queyras) en Septembre

1973. Ils sont issus de bouturages de fragments de chair et n’ayant pas plus de

précision sur leur origine (même plante-hôte ou non), tous deux ont été analysés.

L'isolat 491, issu de bouturage de fragment de chair, a été récolté près de Saint

Bon (Savoie) sur Laserpitium latifolium en Septembre 1961. Une racine de

Cachrys ferulacea infectée, récoltée dans les Monte Madonie (Sicile) en Mai

1979, a fourni l'isolat 585 issu du mycélium extrait de la racine de l'Ombelli-

fére. Les isolats sont entretenus au laboratoire sur milieu Cristo-malt 2 %.

Après avoir obtenu la fructification, sur milieu synthétique (CAILLEUX &

DIOP, 1976, 1978), de chacun de ces dicaryons «sauvages» de départ, l'isole

ment de basidiospores germées donne des homocaryons. Une dizaine d'homo-

caryons sont généralement analysés et les tableaux de confrontation (10 x 10)

permettent de distinguer les groupes d'homocaryons compatibles qui conduisent

à la formation des dicaryons «reconstitués». Les confrontations intra- et inter-

types indiquent que tous ces isolats présentent des alléles d'incompatibilité

différents. Sur milieu Cristo-malt, les confrontations inter-types présentent

parfois des anses d'anastomoses plus rares que dans les confrontations intra-

individu ou intratype, et des confrontations négatives laissent présager d’une

mauvaise dicaryotisation. Au sein de P. nebrodensis, elles mettent en évidence

deux comportements distincts : les homocaryons de Sicile donnent un taux

de confrontations à boucles abondantes moins important que celui observé lors

des confrontations avec les homocaryons des Alpes. Cependant, les confronta-

tions à boucles rares peuvent devenir pleinement positives sur le milieu à base de

grains de céréales employé pour ensemencer le milieu pailleux de mise en fruc-

tification.

MÉTHODES

Culture, extraction et électrophorése (BOISSELIER-DUBAYLE, 1983 aj

les mycéliums maintenus au laboratoire sur milieu Cristo-malt 2 % sont repiqués

deux fois, à quinze jours d'intervalle, sur milieu gélosé Oddoux (DDDOUX.

1955), puis ensemencés sur milieu minéral liquide en boîtes de Roux. Après

quatre semaines de croissance, les extraits de protéines solubles sont obtenus

par broyage, centrifugation et dialyse. Pour les électrophorèses en tubes, sur

gel de polyacrylamide (gel de prémigration 2,5%; gel de migration 7%). des

quantités proches de protéines sont mises à migrer (150 ug de protéines détec-

Source MNHN. Paris

324 M.C. BOISSELIER-DUBAYLE

tées par la méthode décrite par BRADFORD (1976). Les électrophoréses sont

immédiatement suivies des révélations enzymatiques estérases, aminopeptidases

et phosphatases.

Les zymogrammes estérases présentent généralement un nombre élevé de

bandes dont la lecture est facilitée par l’utilisation simultanée des isomères @ et

B du naphtyl acétate qui mettent en évidence des formes enzymatiques ayant des

affinités différentielles pour ces deux isoméres. L'isomère & donne une colora-

tion brune et l'isomére f une coloration rose des bandes. Afin de simplifier les

résultats et de faciliter les interprétations, les profils sont divisés en trois zones

caractéristiques : de faible migration, la zone A posséde des bandes brunes; de

migration intermédiaire, la zone B est caractérisée par des bandes roses; de forte

migration, la zone C présente des bandes brunes. Les zymogrammes aminopepti-

dases présentent généralement peu de bandes : une bande de forte migration, très

épaisse, et une ou deux bandes fines de plus faibles migrations. Les zymogram-

mes phosphatases extériorisent un polymorphisme intermédiaire, les bandes sont

souvent épaisses et floues et la lecture des profils est parfois délicate.

Interprétation des résultats : les profils électrophorétiques observés sont

transcrits en calculant les mobilités relatives des bandes par rapport a une bande

de référence. L'étude des homocaryons permet une analyse génétique pour

laquelle nous testons les différentes hypothèses de répartition homocaryotique

(1/24/2) ou (1/4-1/4-1/431/4) en calculant la probabilité P d'observer une

distribution au moins aussi dissymétrique. Les probabilités p(A) des différentes

distributions possibles sont données par :

x! N! m

А) = — ao

eee ea ei Pre

où N est le nombre d'homocaryons analysés; x le nombre de types homocaryo-

tiques observés; Ку... К, le nombre d'homocaryons appartenant à chacun de

ces types (ky +k ...k, =N);et x; ...x,, les nombres de fois ot les nombres

d'homocaryons de chacun des types sont identiques.

La probabilité P d'observer une distribution au moins aussi dissymétrique est

la somme des probabilités d'apparition p(A) des répartitions plus dissymétriques

ou au moins aussi dissymétrique que celle observée. La dissymétrie est appréciće

par la distribution bi- ou polynomiale.

RÉSULTATS

Les profils des différents dicaryons «sauvages» de départ sont distincts mais,

par analogie de mobilité, certaines bandes semblent communes à deux ou

plusieurs isolats (BOISSELIER-DUBAYLE, 1983 b). L'analyse des homocaryons

révéle des variabilités internes et les différents types de profils homocaryotiques

observés sont regroupés dans le Tableau 1. Afin de tester si les bandes d'activité

enzymatique révélées correspondent à l'expression d'un géne ou de deux génes à

Source - MNHN. Paris

POLYMORPHISME ENZYMATIQUE CHEZ DEUX PLEUROTES 325

P. ferulae P. nebrodensis

Activités Types Alpes Sicile

enzymatiques | homoc.| 291 | 339 | 191-193) 491 | 585

- 7 8

ESTERASES a0 12 2

Zone A Al 9 8

al 5

A2 4 a y

P(1/2) 1,000] 0,004 0,503 | 0,180 | 0,008

ESTERASES 8 8

Zone B b!

Isomère 8 - 20 9

Р(1/2) 0,004] 0,509} 0,000% | 0,004%| 0,008

5 9 6 20 9 8

Е 3

ESTERASES 0,0041 0,509 | 0,000" | 0,004 | 0,008

Zone B = Ө 9

I somére a N 8

М 20 9

P(1/2) 0,000" | 0,004*| 0,008"

T н!

ESTERASES HI 4 7

Zone C 1 2

J 8

- 20 9

P(1/4 ou 1/2) 0,271| 0,180 | 0,000%] 0,004*) 0,008"

pl 6

p2 3 20 3

AMINO- p3 6

-PEPTIDASES p4

р'4

p2p'4

L PO/2) 0,509

a 9

PHOSPHATASES B

P(1/2) 0,004 1,000 | 0,000*

i19 ВИ ES |

Tab. 1. — Répartition des homocaryons suivant les différentes mobilités de bandes (types

homocaryotiques : — a0, A1 . . .), pour trois activités enzymatiques (estérases : zones A,

B, C; aminopeptidase; phosphatases); P (1/2 ou 1/4) = probabilité d'une répartition aléa-

toire sous l'hypothèse de l'action d'un gène à deux allèles ou de deux gènes, * = diffé.

rence significative au seuil 5 Ф, — — pas d activité enzymatique révélée.

Source : MNHN. Paris

326 M.C. BOISSELIER-DUBAYLE

$ 29

Li 18! sf 491 Lx p 291 339 \ у

Е XT Croisemt 2 À 33

5 Croisemt

-xal

А2хА1

2 mm v" b'xB

| HIxHI

—

291 291 291 1 339 Į 585 pe

6 9 6x9 lCroisemt 5 16 9458516" Croisemt

p4xp'4

Source : MNHN. Paris

POLYMORPHISME ENZYMATIQUE CHEZ DEUX PLEUROTES 327

un où plusieurs allèles, nous avons effectué les tests de répartition homocaryo-

tique et analysé des dicaryons «reconstitués» intra-individu, intra- et inter-types.

ESTÉRASES - ZONE A

P. ferulae : au niveau des dicaryons «sauvages» et sur l'étude des bandes

de forte intensité, nous avons identifié deux types de profils électrophorétiques

distincts (291:A2; 339: A1). Tous les homocaryons et dicaryons «reconstitués»

issus de 339 sont de type A1 tandis que les homocaryons issus de 291 sont de

deux types : profil A2 ou al (bande de faible intensité et de mobilité compa-

rable à A1).

P. nebrodensis : les dicaryons «sauvages» 191 et 193 présentent une bande

intense de mobilité A1 tandis que 491 et 585 ne révèlent aucune bande intense

pour cette zone. Les homocaryons issus de 191 ou 193 sont de deux types :

profil A1 ou a0 (bande de plus faible intensité et de migration quasiment nulle).

Les homocaryons issus de 491 peuvent également étre de deux types : profil

a0 ou aucune activité (Figure 1, respectivement 491-7 et 491-1). Aucun homo-

caryon analysé pour 585 ne présente d'activité pour cette zone.

ESTÉRASES - ZONE B - ISOMERE B

Р. ferulae : deux types de profils dicaryotiques «sauvages» ont été mis en

évidence. Par analogie de mobilité, le profil 291 peut étre assimilé au type b

décrit chez P. eryngii (BOISSELIER-DUBAYLE, 1983 a), alors que celui de

339 est original (il présente au moins quatre bandes). Tous les homocaryons

et dicaryons «reconstitués» issus de 291 présentent le profil dicaryotique «sau-

vage» tandis que les homocaryons issus de 339 sont de deux types : ils semblent

correspondre aux profils B et b observés chez P. eryngii. Cependant, si les ana-

lyses des différents croisements intra- et inter-types confirment la similitude

du type B chez P. eryngii et P. ferulae, elles mettent en évidence la dissemblance

Fig. 1 à 6 : électrophorèses en tubes de dicaryons «reconstitués» et de leurs homocaryons

constitutifs, représentation de certains alléles identifiés (* — bande de référence servant

au calcul des mobilités relatives).

Fig. 1. — Révélation estérases, croisement intra-individu (P. nebrodensis-Alpes). Zone A :

le dicaryon issu d'un croisement «pas d'activité» (491-1) x a0 (491-7) présente un

profil a0. Zone B, isomére Qt : les homocaryons et le dicaryon possèdent la bande N',

Fig. 2. — Révélation estérases, croisement intra-type (P. ferulae). Zone A : le dicaryon

issu d'un croisement A2 (291-2) x A1 (339-5) présente les deux bandes correspon

dantes. Zone B, isomére f : le dicaryon issu d'un croisement b' (291-2) x B (339-5)

présente au moins quatre bandes. Zone C : les homocaryons et le dicaryon présentent

le profil HI.

Fig. 3. — Révélation aminopeptidases, croisement intra-individu (P. ferulae). Le dicaryon

issu d’un croisement p2(291-6) x p3 (291-9) présente les deux bandes correspondantes.

Fig.4. — Révélation aminopeptidases, croisement inter-types (P. ferulae x Р. nebroden

sis). Le dicaryon issu d'un croisement p4 (339-5) x p'4 (585-16) présente deux bandes.

Source - MNHN. Paris

328 M.C. BOISSELIER-DUBAYLE

des types b (b et b’). Les croisements B x b’ donnent un profil similaire à celui

du dicaryon «sauvage» 339 (Figure 2, 291-2 = b’, 339-5 = B).

P. nebrodensis : le dicaryon «sauvage» venant de la Sicile (585) montre

un profil semblable au type B, tandis que les individus originaires des Alpes ne

présentent qu’une bande rose (la bande de référence) (Figure 1). Aucune varia-

bilité homocaryotique n'a été mise en évidence.

ESTÉRASES - ZONE B - ISOMERE a

P. ferulae : les différents mycéliums analysés présentent généralement une

bande brune de mobilité à peine supérieure à la bande de référence et d'intensité

moyenne. En plus de cette bande, le dicaryon «sauvage» 339 en révèle une

seconde de mobilité plus forte, et l'analyse des homocaryons permet d'émettre

Vhypothése d’un systéme monomérique de type Fast Slow.

P. nebrodensis : tous les dicaryons «sauvages», les homocaryons et les dica-

ryons (reconstitués» analysés présentent une bande brune intermédiaire aux

bandes roses. Celleci а une mobilité distincte chez les individus des Alpes

(N-Figure 1) et l'individu originaire de la Sicile (N).

ESTERASE - ZONEC

P. ferulae : les deux profils dicaryotiques «sauvages» révélent des bandes

communes et une bande surnuméraire apparait chez 291. L'analyse des homo-

caryons a permis de déceler trois types de profils chez 291, deux chez 339. Le

type HI, commun a 291 et 339 (Figure 2, 291-2 et 339-5), présente générale-

ment deux bandes intenses (qui peuvent être parfois plus ou moins confondues).

Les types IH' et H' ont été rencontrés chez 291, et le type I est observé parmi

les homocaryons issus de 339.

P. nebrodensis : les isolats récoltés dans les Alpes ne présentent aucune

activité pour cette zone, tant au niveau dicaryotique qu'au niveau homocaryo-

tique (Figure 1). L'isolat 585 (Sicile) révéle à tous les niveaux le méme profil (J).

AMINOPEPTIDASES

P. ferulae : les homocaryons et dicaryons «reconstitués) issus de 339 ont

tous le méme profil : une bande épaisse et généralement intense (bande de

référence) et une bande fine de mobilité p4 : profil similaire à celui décrit chez

P. eryngii pour la population de Tournus. Une bande de trés faible intensité

et de plus faible mobilité peut être décelée à l'état dicaryotique, elle ne se

retrouve pas ou est très faiblement marquée au niveau homocaryotique et ne

semble pas correspondre à un quelconque déterminisme génétique. Cependant,

le dicaryon 291 présente deux bandes fines de mobilités p2 et p3, et les homo-

caryons n’en possèdent qu'une : p2 ou p3 (Figure 3, respectivement 291.6 et

291-9).

P. nebrodensis : lors des premières analyses sur les dicaryons «sauvages»,

les profils des isolats originaires des Alpes ont été jugés similaires : deux bandes

Source : MNHN. Paris

POLYMORPHISME ENZYMATIQUE CHEZ DEUX PLEUROTES 329

fines de mobilités p1 et p2. Cependant, tous les homocaryons et dicaryons

«reconstitués» analysés pour 191 et 193 présentent une bande p2 alors que la

bande p1, tout comme pour 339, ne semble pas correspondre à un quelconque

déterminisme génétique. Par contre, les homocaryons de 491 sont de deux

types : p1 ou p2.

Le dicaryon «sauvage» 585 aux bandes de mobilités comparables à p 2 (mais

plus épaisse) et p4, contrairement aux résultats obtenus précédemment, peut

donner des homocaryons présentant les deux bandes dicaryotiques «sauvages»,

ou des homocaryons ne révélant qu’une bande de mobilité p4. Les croisements

intra- et inter-types confirment la similitude du type p2 bien qu'elle soit plus

épaisse, mais mettent en évidence la dissemblance des types p4 : p4 et p'4

(Figure 4, respectivement 339-5 et 585-16).

PHOSPHATASES

P. ferulae : les profils dicaryotiques «sauvages» 291 et 339 semblent diffé-

rents et l'analyse des homocaryons confirme cette dissemblance. Tandis que

—" — :

339 | 339 | 339 й _ 291 | 491 [7 и

3 | 12 13x12! Croisemt й 3 # 1 $491.1 BCroisemt

== —— =æ =

—

= ео 157 0

"2 ~

5 6

Fig. 5. — Révélation phosphatases, croisement intra-individu (Р. ferulae). Le dicaryon issu

d'un croisement @ (339-3) x B (339-12) présente le cumul des bandes de fortes migra-

tions.

Fig. 6. — Révélation phosphatases, croisement inter-types (P. ferulae x P. nebrodensis). Le

dicaryon issu d'un croisement @ (291-3) x @ (491-1) présente un cumul de bandes au

niveau de la bande de référence.

Source : MNHN. Paris

330 M.C. BOISSELIER-DUBAYLE

les homocaryons et dicaryons «reconstitués» issus de 291 présentent tous le

méme profil æ, on discerne les deux types de profils a et $ décrits chez P. eryngii

pour la population de Tournus (BOISSELIER-DUBAYLE, 1983) parmi les

homocaryons issus de 339 (Figure 5, respectivement 339-3 et 339-12).

P. nebrodensis : tous les profils dicaryotiques «sauvages» ont été jugés

similaires dans un premier temps (BOISSELIER-DUBAYLE, 1983 b), et carac-

térisés par une bande de référence de mobilité plus faible (type a’). Cependant,

l'analyse des homocaryons et des dicaryons «reconstitués» intra- et inter-types

révèle que si tous les homocaryons issus de 585 sont bien de type a’, ceux de

491 peuvent être soit de type a, soit de type a’ (les dicaryons reconstitués a x a^

présentent alors le cumul des bandes de référence - Figure 6), et que ceux issus

de 191 et 193 sont tous de type a.

Le tableau 1, qui résume les répartitions homocaryotiques observées, permet,

par le biais des tests de répartition 1/2 ou 1/4, de confirmer les hypothèses

émises. L'analyse de dicaryons intra- et inter-types souligne l'homologie ou la

dissemblance des bandes révélées, et l'ensemble de ce travail permet de définir

les génotypes apparents des différents individus analysés (Tableau 2).

AMINO- PHOSPHA~

Types І -PEPTIDASES | -TASE

b a

-/- а/а

M аа"

Tab. 2. — Génotypes des dicaryons «sauvages» de départ, tels qu'on peut les définir par

l'analyse électrophorétique d'homocaryons et de dicaryons «reconstitués», pour trois

activités enzy matiques.

DISCUSSION

Trois observations se dégagent de ce travail :

— Chez les champignons, les travaux de systématique expérimentale abordés

par le biais de l'électrophorése, au niveau spécifique ou subspécifique, portent

sur des souches non contrólées génétiquement (exemple : cultures polyspermes

étudiées pour les basidiomycétes du genre Peniophora - LÉGER, 1976). L'inter-

prétation parfois erronée que peut induire une étude sur les seuls profils dica-

ryotiques «sauvages» (pour les phosphatases, par exemple) souligne l'intérêt

d'utiliser du matériel homocaryotique et dicaryotique «reconstitué».

L'analyse des homocaryons et des dicaryons reconstitués» révèle de

grandes variabilités et s'avère un moyen efficace de préciser le déterminisme

Source : MNHN. Paris

POLY MORPHISME ENZYMATIQUE CHEZ DEUX PLEUROTES 331

génétique apparent de certaines isoenzymes. Les tests de répartition homoca-

ryotique et l'analyse des dicaryons «reconstitués» intra-individu, intra- et inter.

types indiquent que la plupart des bandes d'activité enzymatique semblent

correspondre à l'expression d'un gène à plusieurs allèles. Cependant, les résultats

obtenus pour la zone C des estérases au niveau de Р. ferulae, et plus particulière-

ment au niveau de l'individu 291, laissent supposer l'action de deux génes. Il

en est de méme pour les aminopeptidases révélées chez l'individu P. nebrodensis

de Sicile (585) où un gène commun à tous nos isolats pourrait être responsable

de l'expression (ou non) de la bande de mobilité p2, et où un second gène

propre à cet individu serait responsable de la bande d'activité р.

Une faible variabilité est observée au sein е Р. nebrodensis, elle ne se

manifeste qu'au niveau de la zone A des estérases pour 191 et 193, et au niveau

des aminopeptidases pour 585. Les premières conclusions tirées de l'étude

électrophorétique des dicaryons «sauvages» de départ par l'estimation d'indices

de similitude indiquent que, d'une manière générale, P. nebrodensis semble

plus éloigné de P. eryngit et P. ferulae, assez proches entre eux, et mettent en

évidence deux groupes parmi P. nebrodensis, l'un correspond aux Alpes (Laser-

pitium) et l'autre à la Sicile (Caclirys). Ces conclusions sont confirmées par les

génotypes particuliers identifiós (pas d'activité pour la zone B - isomére B. et

la zone C des estérases, au sein de P. nebrodensis des Alpes, alléle p'4 des amino-

peptidases, propre à l'individu P. nebrodensis de Sicile), et par leurs facultés

à former des anses d’anastomoses lors des confrontations intra- et inter-types.

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Source : MNHN. Paris

933

MICROFLORE DE LA PHYLLOSPHERE

DE QUELQUES VÉGÉTAUX HALOPHILES

par F. HINZELIN et P. LECTARD*

RÉSUMÉ. — Les auteurs étudient les levures de la phyllosphére de quelques plantes halo-

philes. La nature et l'état de la cuticule influent considérablement sur la population levuri-

forme. Le genre Sporobolomyces, le genre Rhodotorula et le genre Cryptococcus sont

particulièrement représentés. La population pigmentée domine nettement la population

dite «blanche». La flore levuriforme des plantes halophiles diffère peu de celle des autres

végétaux, elle semble plus spécifique.

ABSTRACT. — The authors learn the yeasts of the phyllosphere of some halophilic plants.

The nature and the condition of the cuticle have a great influence on the yeast population.

The Sporobolomyces genus, the Rhodotorula genus and the Cryptococcus genus are parti

cularly represented. The pigmented population plainly dominates the population called

«white». The yeast flora of the halophilic plants is a little different from the one of the

other plants, it seems to be more specific.

MOTS CLES : Levures - Phyllosphère - Halophytes.

INTRODUCTION

Les études précédemment réalisées sur les levures en milieu aquatique (HIN-

ZELIN 1973-1977), nous ont amenés à rechercher l'origine de ces microorga-

nismes en dehors des zones de pollution où l'apport de levures est en relation

avec les activités humaines. Le couvert végétal doit être un réservoir important

à partir duquel les levures peuvent être entraînées dans les eaux.

Nous avons choisi d'étudier les plantes se développant sur les sols halo-

morphes, biotope naturel, en choisissant des stations à l'écart des contamina-

tions dues à l'homme ou aux animaux d'élevage.

* Laboratoire de Cryptogamie - Faculté des Sciences Pharmaceutiques et Biologiques,

5, rue Albert Lebrun - 54000 Nancy.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN, Paris

334 F.HINZELIN & P. LECTARD

Iére PARTIE

I. — LES STATIONS HALOPHILES EN LORRAINE

Les principales stations halophiles lorraines se trouvent dans le bassin délimité

par les 3 villes : Vic-sur-Seille, Cháteau-Salins et Dieuze.

Cette région (Nord-Est de la France, Département de la Moselle) correspond

à un quadrilatère de 20 km de long sur 12 km de large, arrosé par 3 rivières.

Les stations salées sont signalées par des étendues presque stérilisées par l'eau

salée, ou occupées par la Salicorne lorsque la teneur du sol en chlorurres n'est

pas trop élevée.

Nous avons retenu pour cette étude, deux stations situées dans la vallée

de la Seille :

- Marsal : La station se trouve dans les anciens fossés de la citadelle. Elle

correspond à un suintement d'eau très salée (de 0,83 à 1,09 mole par litre)

au centre d’une zone dénudée. En bordure se développent des groupements

à Salicornia ramosissima Woods, très dispersés.

Un verger de mirabelliers (Prunus x syriaca Borkh) domine cette source

salée et le fossé de drainage.

— Lagrange-Fouquet : Cette station se situe à proximité de Vic-sur-Seille,

derrière une ferme. C'est un vaste pré clôturé parcouru par de nombreux canaux

de drainage, séparés par des buttes sur lesquelles se développe abondamment

Althaea officinalis L.

Autour d'une étendue plus ou moins importante stérilisée par l'eau salée

ou occupée par Salicornia ramosissima Woods, on observe des zones envahies

par des plantes de plus en plus tolérantes.

П. — LA FLORE HALOPHILE

Choix des espéces

Nous avons sélectionné 6 espéces :

Les halophytes stricts sont des plantes qui se développent uniquement sur des

terrains salés. Les espèces choisies sont : 1- Salicomia ramosissima Woods,

2 - Atriplex hastata L., 3- Aster tripolium L., 4- Juncus gerardii Lo’

les espèces halophiles préférentes, nous avons choisi : 5 - Althaea occifinalis L.

En outre, nous avons retenu une plante qui n’a aucun lien avec les sols halo-

morphes, mais qui pousse à proximité de la station de Marsal : 6- Prunus x

syriaca Borkh.

. Parmi

Description et écologie

* Salicornia ramosissima Woods (Chénopodiacées)

C'est la plante la plus caractéristique des milieux salés. Elle colonise les

dépressions humides où le sol présente une forte salure, mais elle ne tolére pas

Source : MNHN. Paris

MICROFLORE DE LA PHYLLOSPHERE DE VÉGÉTAUX HALOPHILES 335

de longues périodes de submersion, notamment lors de la période de reproduc-

tion. En mars, lorsque le terrain est fortement humide, mais non inondé, les

premières germinations apparaissent. A la fin de l'été, elle fructifie, elle prend

une teinte rouge vin. En hiver, il ne subsiste que des résidus desséchés.

* Atriplex hastata L. var. oppositifolia (Chénopodiacées)

Cette plante est capable de tolérer de fortes concentrations en sel, mais n'est

représentée que par quelques plantules qui se situent en bordure de la dépression

occupée par la Salicorne.

* Aster tripolium L. (Astéracées)

Elle occupe les parties basses et humides des stations halophiles et cerne la

zone occupée par la Salicorne.

* Althaea officinalis L. (Malvacées)

Elle possède un appareil sécréteur constitué par des cellules et des poches

à mucilage. Elle se développe sur les buttes.

* Juncus gerardii Lois (Joncacées)

La jonchaie borde les cuvettes a Salicorne sur des surfaces plus ou moins

étendues. Le jonc se développe dès que le sol est un peu surélevé. La végétation

démarre dès le mois de mars. Cette plante vivace présente des feuilles glabres,

longues. La floraison est peu visible. En automne, les parties aériennes jaunissent

et sèchent.

* Prunus x syriaca Borkh. (Rosacées)

C'est un arbre, les feuilles sont entières et dentées. Il fleurit début mai, ses

fruits sont à maturité courant août. La cuticule de ceux-ci serait colonisée par

les levures.

Ш. — LA PHYLLOSPHERE

La surface des feuilles constitue un biotope spécial dans lequel l'activité

des micro-organismes fluctue avec les conditions extérieures et avec le cycle

de vie de la feuille support.

C'est LAST (1955) et RUINEN (1956) qui emploient les premiers le mot

«phyllosphère». Elle constitue un des biotopes les plus étroitement liés aux

caractéristiques du milieu environnant.

Composition chimique de la cuticule

Les cellules épidermiques sécrétent à la surface de la feuille une cuticule

contenant des dérivés lipidiques trés hydrophobes, des cires en particulier.

La production de cire est fonction de l'intensité lumineuse.

La cuticule des plantes supérieures ne présente pas une composition chimique

homogène. Les constituants chimiques de la cuticule ont été recensés par O.C.

MACNAMARA, Ch. DICKINSON (1981). Les principaux composants sont des

lipides, des cires, de la cutine, de la cellulose et de la pectine.

Source : MNHN, Paris

336 F. HINZELIN & P. LECTARD

Adaptations particulières des plantes halophiles

Les plantes halophiles ont des feuilles épaisses. Leurs stomates sont fréquem-

ment incrustés dans l'épiderme. Leur nombre est en général faible. Quelques

espèces halophiles comme Salicomia possèdent des cellules scléreuses au niveau

des nervures et de l'épiderme. Les cellules scléreuses peuvent atteindre de gran-

des tailles chez les plantes poussant sous de fortes concentrations salines.

Rapports Phyllosphère-Levures

La feuille est le siège d'échanges importants avec l'extérieur, par des phéno-

mènes d’excrétion et d’absorption.

La vie dans la phyllosphére est trés instable, elle varie en l'espace de quelques

jours, suivant les conditions météorologiques, suivant la présence ou l'absence

d'aliments exogénes. L'association de ces facteurs peut exercer une action syner-

gique sur l'évolution de la microflore phyllosphérique. RUINEN (1956) pense

que la phyllosphére est un biotope pour les levures.

Bien que représentant une grande uniformité morphologique, les levures

ne constituent pas une unité taxinomique naturelle. Généralement unicellulaires,

elles se reproduisent végétativement par bourgeonnement ou par scissiparité.

Certains genres de levures présentent une reproduction sexuée.

Trois grandes sous-divisions apparaissent :

les Ascomycotina - les Basidiomycotina - les Deuteromycotina

Cette dernière est particulièrement représentée au niveau de la phyllosphère

avec deux familles importantes :

- celle des Sporobolomycétacées, - celle des Cryptococcacées.

IIéme PARTIE

I. — TECHNIQUES D'ÉTUDE

De nombreuses techniques d’isolement ont été décrites :

— LAST et PRICE (1969) décrivent une méthode préconisant l'impression

de la feuille à tester.

— BEECH et DAVENPORT (1971) étudient la flore levuriforme des feuilles

de pommier et de vigne, en vue d'examen quantitatif.

— DICKINSON (1971) utilise des méthodes de lavage et d'impression.

D'autres méthodes comme la macération des feuilles, la méthode des «spores-

fall» sont aussi pratiquées.

— PUCH et BUCKLEY (1971) décrivent des méthodes d'études et d'isole-

ment des espéces de levures colonisant la surface des feuilles. Ils se servent

surtout de matériel végétal ayant été agité dans de l'eau, puis déposé à la surface

d'un milieu nutritif. L'eau de lavage est elle-méme ensemencée sur un milieu

adéquat.

Source : MNHN, Paris

MICROFLORE DE LA PHYLLOSPHERE DE VÉGÉTAUX HALOPHILES 337

L'association de plusieurs de ces méthodes permet d'étudier la population

de levures à la surface d'une feuille.

1) Récolte des plantes

Nous avons récolté, dans des récipients stériles, les feuilles appartenant aux

différentes espèces botaniques citées plus haut.

Nous évitons les échantillons souillés de terre. Nous prélevons des feuilles

de maturité différente; les époques de récolte tiennent compte de l’évolution

de la végétation : avril, juin, octobre.

2) Méthodes d'isolement

à partir d'un fragment de feuilles

Nous avons déposé sur le milieu d'isolement préalablement coulé en boîte

de Pétri, les fragments végétaux. Ces derniers restent 3 jours dans la boîte.

Le milieu d'isolement est composé de : - glucose (20 g); - peptone (10 g);

-extrait de levure (5 р); -agar (20 g); - chloramphénicol (0,5 g); - eau q.s.p.

11 (pH 5).

après lavage du morceau foliaire

On utilise le même principe d'isolement, à partir du fragment lavé. L'eau

de lavage est filtrée sur Millipore 0,45 um de porosité HAWP 02500. Le filtre

balaie la surface du milieu d'isolement et y reste.

la méthode par impression

La feuille est appliquée fortement sur le milieu et est aussitôt retirée. Elle

laisse son empreinte. Les contours et les nervures du fragment végétal sont

reproduits par les colonies de levures.

3) Lecture - Identification

L'incubation est faite à la température du laboratoire . Les colonies sont

repiquées sur un milieu de Sabouraud additionné de chloramphénicol.

L'identification des différentes espèces a été effectuée selon les méthodes

préconisées par LODDER (1970).

II. — RÉSULTATS

Par ces méthodes, nous avons isolé et identifié 12 espéces de levures.

Répartition botanique des espèces isolées

Classification établie suivant AINSWORTH-SPARROW-SUSSMAN (1973).

1. BASIDIOMYCOTINA : Aessosporon sp.

2. DEUTEROMYCOTINA

* Blastomycètes

a) les Sporobolomycétacées

Sporobolomyces holsaticus Windisch

Source : MNHN, Paris

338 F.HINZELIN & P. LECTARD

Sporobolomyces odorus Derx

Sporobolomyces roseus Kluyver et van Niel

Sporobolomyces salmonicolor (Fischer et Brebeck) Kluyver et van Niel

b) les Cryptococcacées

1 - genre Cryptococcus

Cryptococcus albidus (Saito) Skinner

Cryptococcus laurentii (Kuff.) Skinner var. lauren tii

Cryptococcus laurentii (Kuff.) Skinner var. magnus

2 - genre Rhodotorula

Rhodotorula glutinis (Fres.) Harrison

Rhodotorula glutinis (Fres.) Harrison var. glutinis

Rhodotorula graminis Di Menna

3 - genre Torulopsis

Torulopsis candida (Saito) Lodder

Nos études précédentes (HINZELIN, 1973-1977) ont montré l'intérêt de

regrouper les genres en deux sections : les levures à pigments caroténoïdes

Sporobolomyces - Rhodotorula) d'une part, les levures dites «blanches» d'autre

р гу. Р

part.

Les levures pigmentées en rouge

Le tableau n9 1 récapitule les genres isolés en fonction du végétal-support

et de l'époque.

Tableau n° 1

Tableau récapitulatif des différentes levures, classées par genre

Salicornia Atriplex Aster Althaea Juncus

Prunus

БОХА ООО ООО о

Sporobolymyces + + ++ ++ ++ ++ ++

Rhodotorula E + £ у ка

Cryptococcus ++ ++ ++ ++ „ер

Torulopsis + + |

Aessosporon +

J: Juin; O : Octobre; À : Avril

Nous constatons que, parmi les différents genres, ceux présentant des pig-

ments caroténoïdes, apparaissent majoritaires.

Le genre Sporobolomyces domine nettement.

Le tableau n° 2 mentionne dans le détail les espèces isolées suivant le végé-

tal considéré.

Nous remarquons alors que Sporobolomyces roseus est abondante, suivie

de Rhodotorula glutinis

Deux remarques négatives :

Source : MNHN. Paris

MICROFLORE DE LA PHYLLOSPHERE DE VÉGÉTAUX HALOPHILES 339

Tableau n° 2

Tableau récapitulatif des différentes levures classées par espèces

Salicornia Atriplex Aster Althaea Juncus Prunus

Sporobolomyces holsaticus E

Sporobolomyces odorus x

Sporobolomyces roseus x

Sporobolomyces salmonicolor b:

Rhodotorula glutinis var. glutinis х x

Rhodotorula glutinis x x

Rhodotorula graminis

Cryptococcus albidus z

Cryptococcus laurentii

var. laurentii х х x x

Cryptococcus laurentii

var. magnus x

Torulopsis candida x x x

Aessosporon sp. х

m P

1) Aucune levure à pigments caroténoides n'a été isolée au mois d'avril.

2) Rhodotorula rubra, levure ubiquiste des zones plus ou moins polluées

(HINZELIN, 1978) est absente de ces stations protégées.

Les levures blanches

Seul le genre Cryptococcus est largement représenté (tableau n9 1). Le

tableau n° 2 montre la fréquence importante de Cryptococcus laurentii. Ce

dernier est aussi absent, en avril. Enfin, en trés faible proportion, nous trouvons

quelques levures «blanches» avec Torulopsis candida.

Nous remarquons l'absence d'espéces potentiellement pathogènes pour

l'homme comme Candida albicans et de ses commensaux Geotrichum sp. et

Trichosporon sp., espèces naturellement inféodées à l'Homme.

III. — DISCUSSION

Les espéces isolées, représentées par les genres : Sporobolomyces, Rhodo-

torula, Cryptococcus et Torulopsis sont fréquentes sur les cuticules des feuilles

des plantes halophiles.

Les feuilles semblent étre un habitat privilégié pour certaines levures. Dés

1930, DERX indique que le genre Sporobolomyces est communément identifié

sur de nombreuses feuilles.

Les espèces régulièrement rencontrées sont des levures pigmentées; les levures

blanches sont, pour la plupart, isolées irrégulièrement. Les levures trouvées

Source : MNHN, Paris

340 F.HINZELIN & P. LECTARD

fréquemment sur les feuilles sont des espèces capables d'assimiler une grande

variété de composés carbonés, tandis que les Saccharomyces et les Pichia, plus

exigeantes, préfèrent des milieux plus riches en sucres (CARMO-SOUSA, 1969).

DI MENNA (1971) explique également l'absence de levures fermentatives,

caractéristiques des milieux riches, par le fait que le milieu nutritif de la surface

foliaire est généralement pauvre.

La présence de Torulopsis candida dans nos résultats est intéressante, car elle

est la forme imparfaite de Debaryomyces hansenii. Or cette levure résiste à des

teneurs en sel de l'ordre de 24 %. COSTELOW et coll. (1954) ont d’ailleurs

isolé cette espèce à partir de salaisons.

Les espèces «blanches» sont surtout représentées par Cryptococcus laurentii.

Nous avons isolé aussi un Cryptococcus albidus sur les feuilles d'Althaea. Cette

derniére espéce fréquente dans le sol est plus rarement isolée au niveau des

feuilles (DI MENNA, 1959). Les levures saprophytes, du genre Cryptococcus

plus particulièrement, sont douées d'une activité cutinolytique considérable

(MACNAMARA-DICKINSON, 1981).

Mais la majorité de la population levuriforme de la phyllosphère est représen-

tée par des espéces à pigments caroténoides avec les genres Sporobolomyces

et Rhodotorula.

RUINEN (1963) pense que des saprophytes à la surface des feuilles peuvent

dégrader la cutine et l'utiliser comme source nutritive. Et en 1966, RUINEN

et HEINEN et DE VRIES (1966) montrent que deux levures ubiquistes de la

phyllosphére : Cryptococcus laurentii et Rhodotorula glutinis sont en effet

capables d'hydrolyser la cutine.

MACNAMARA et DICKINSON (1981) abondent dans ce sens, en étudiant

la dégradation de la cuticule par les champignons saprophytes. Cryptococcus

laurentii et Sporobolomyces roseus utilisent la cutine de l'Ilex, comme source

de nutriments quand elles se développent dans un milieu de base liquide.

Le tableau n° 1 traduit l'abondance du genre Sporobolomyces, plus parti-

culiérement en période estivale. LAST (1955) a observé une corrélation entre

l'augmentation du nombre de colonies de Sporobolomyces et l’âge de la feuille.

Selon cet auteur, ceci serait dû à l'état végétatif de la feuille qui libère, en

vieillissant des aliments nécessaires à la croissance de ces microorganismes.

De nombreux Sporobolomyces se développent considérablement lorsque les

feuilles sont parasitées par des micromycètes appartenant à la famille des Pucci-

niacées, par des nématodes ou par des galles provoquées par des Acariens. Les

réserves nutritives sont constituées par des exsudats provenant des feuilles et

des substances cellulaires qui ont été endommagées par la gelée, les micromy-

cétes parasites des plantes ou des animaux.

D'autre part, le mode de dispersion des levures appartenant au genre Sporo-

bolomyces par ballitospores, peut expliquer sa fréquence. LAST (1955), GRE-

GORY (1952), LAST et PRICE (1969) montrent le róle de l'humidité qui

favorise la quantité de Sporobolomyces. Selon notre étude, Sporobolomyces

roseus est le plus fréquent. L'influence de l'hóte interviendrait au point de vue

Source : MNHN, Paris

MICROFLORE DE LA PHYLLOSPHERE DE VÉGÉTAUX HALOPHILES 341

nutritif, la cuticule de chaque feuille favorisant telle ou telle espèce de levures.

Différents facteurs physiques (humidité, température, ultrawviolets, salinité)

constituent des paramètres importants pour la croissance ou la survie de ces

microorganismes. Au cours de l'année, les espéces levuriformes varient considé-

rablement. D'ailleurs RUINEN (1963) observe que la population de levures

de la phyllosphére varie avec la saison et non avec la localisation.

La proportion de levures rouges par rapport aux levures totales est de 6 75

en hiver et de 92 % à la fin de l'automne d’après DI MENNA (1959). HAYES

(1982) étudiant les feuilles de Rosa cv Picadilly saines et infectées par Di-

plocarpon rosae arrive également à ces conclusions : abondance de la flore

levuriforme à la fin de l'été, et effets bénéfiques de l'infection des feuilles. La

flore levuriforme est composée entre autres par Sporobolomyces roseus, Crypto-

coccus laurentii et Cryptococcus albidus. Les variations saisonniéres en ultra-

violets peuvent expliquer la prédominance en été de levures à pigments caroté-

noïdes protecteurs mais elles n'expliquent pas leur forte diminution en hiver

(DI MENNA, 1970). Pour LAST et DEIGHTON (1965) en plus de leur pouvoir

protecteur, les pigments des levures permettent à ces microorganismes de mieux

utiliser les sources énergétiques disponibles car ils sont aussi des récepteurs

d'énergie.

La capacité de survie du genre Sporobolomyces, à de fortes concentrations

salines, lui permet de coloniser des feuilles submergées par de l’eau saumâtre

(PUGH ét LINDSEY, 1975). De même, Rhodotorula glutinis tolère des concen-

trations salines avoisinant 16 75 (NORKRANS, 1966).

DI MENNA (1959), LAST et PRICE (1969) rapportent que les feuilles

seraient un milieu habité par certaines espéces, les plus fréquentes étant Sporo-

bolomyces roseus, Rhodotorula glutinis et Cryptococcus laurentii. Ces trois

espèces constituent le cortège isolé des feuilles étudiées.

La faible population levuriforme en avril, confirme des observations anté-

rieures portant sur les eaux fluviales du bassin de Lorraine (HINZELIN, 1973-

1977). La chute brutale des espèces en avril est significative. En effet à cette

époque, la phyllosphère est peu abondante et c’est une période de repos pour

la végétation. Peut-on lier cette constatation à la chute de la teneur en matière

organique à la fin de l'hiver, avant le démarrage du nouveau cycle saisonnier ?

CONCLUSION

Nous pouvons conclure avec DI MENNA (1971) en disant que les effets

physiques et chimiques du micro-environnement de l'hôte sont plus importants

dans la détermination des espèces composant une population de levures que les

facteurs biologiques. Il ne faut pas oublier que dans ces associations de micro-

organismes, la présence des uns peut produire pour les autres, soit une stimula-

tion due à la libération de différentes substances probiotiques, soit un antago-

nisme protégeant l'hôte par la production de substances antibiotiques.

Source : MNHN, Paris

342 F.HINZELIN & P. LECTARD

Ce travail confirme nos résultats (HINZELIN, 1977) antérieurs et conforte

notre constatation d’une «population naturelle» composée de Sporobolomyces

(Sporobolomyces roseus, Sporobolomyces salmonicolor, Sporobolomyces

odorus, Sporobolomyces holsaticus), de Rhodotorula (Rhodotorula glutinis,

Rhodotorula graminis) et de Cryptococcus (Cryptococcus laurentii, Cryptococ-

cus albidus).

Cette «population naturelle» composée en majorité de levures à pigments

caroténoïdes, est issue de la phyllosphère. Ces levures sont sous la dépendance

étroite de la végétation. Nous savons que le cycle de développement du genre

Sporobolomyces est lié au cycle végétatif des Phanérogames. Nous n'avons

pas isolé de levures halophiles strictes. Les levures semblent s'adapter aisément

aux concentrations de sel.

BIBLIOGRAPHIE

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Treatise, A Taxonomic Review with Keys IV - A. Academic Press, New York.

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Source : MNHN, Paris

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Source : MNHN, Paris

345

ÉTUDE COMPARÉE DE

TROIS ESPECES DE MARSSONINA SALICICOLES

par I. VEGH* et J. VELASTEGUI**

RESUME. — Une étude comparative de Marssonina salicicola, kriegeriana et dispersa a été

réalisée. Cette dernière espèce se distingue nettement des précédentes. En ce qui concerne

les deux premières espèces, nous avons effectué une étude comparée de la symptomatologie,

de la morphologie des macroconidies, de l'aspect cultural, du mode de germination et de

la vitesse de croissance en fonction de la température. Les résultats obtenus permettent de

distinguer M. salicicola de M. kriegeriana et montrent aussi qu'il s'agit bien de deux espéces

différentes.

SUMMARY. — A comparative study of Marssonina salicicola, kriegeriana and dispersa

was conducted. Marssonina dispersa is markedly different from the other two. Concerning

the first two species, we made a comparative study of the symptomatology, macroconidial

morphology, cultural aspects, germination, and growth rate in relation to temperature.

Our results allow us to distinguish M. salicicola from M. kriegeriana and show that they are

two different species.

Depuis une quinzaine d’années, on observe en France sur le genre Salix

trois espèces de Marssonina : M. salicicola (Bres.) Magn., M. kriegeriana (Bres.)

Magn. et M. dispersa Nannf. Notons toutefois que M. sdlicicola est connu en

France depuis bien plus longtemps. La premiére espéce se manifeste sur Salix

babylonica, fragilis, alba et surtout S. alba ‘Tristis’. La deuxième a été iden-

tifiće chez nous sur S. alba ‘Tristis’ et la troisième sur S. cinerea. Des trois

espèces mentionnées, M. salicicola est la plus fréquente et la plus grave (VEGH,

1972). Elle est devenue un facteur limitant de la culture de S. alba. Tristis"

Le but de cette note est de donner quelques critéres qui permettent de

distinguer ces trois Marssonina.

* Station de Pathologie végétale. I.N.R-A., Route de St-Cyr, 78000 Versailles.

** Adresse actuelle: Universidad Tecnica de Ambato, Casilla 596, Ambato (Ecuador).

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

346 I. VEGH et J. VELASTEGUI

P1. 1. — À : Taches de Marssonina dispersa sur Salix cinerea. B : Symptômes de Mars.

ssonina

salicicola sur Salix alba ‘Tristis 1: lésions sur feuilles, 2 : attaque déformante sur

jeunes feuilles, 3: dégâts caractéristiques sur jeunes rameaux

MARSSONINA SPP. SUR SALIX 347

MARSONINA DISPERSA

Cette espèce diffère assez nettement des précédentes par plusieurs carac-

tères. En effet, elle ne se développe que sur les feuilles sur lesquelles elle pro-

voque l'apparition de petites taches punctiformes (P1.1. A). Ses macroconidies

prélevées sur feuilles (fig. 1), souvent courbées, mesurent 19-24 x 5-10 um.

Elles sont donc plus longues et plus larges que celles de M. salicicola et de M.

kriegeriana (voir plus haut).

De plus, in vitro (sur les milieux usuels gélosés), sa croissance, très réduite,

est environ cinq fois moindre que celle de M. salicicola (Pl. Il. A).

онт

Fig. 1 — Conidies de Marssonina dispersa. A : Macroconidies. B : Microconidies.

MARSSONINA SALICICOLA ET KRIEGERIANA

Si l'on se base uniquement sur les symptómes et la morphologie des macro-

conidies de ces deux espèces, on peut les confondre. C'est la raison pour laquelle

00000606

10 jm

в 0700000000

Oym

Fig. 2 — Conidies de Marssonina salicicola. A : Macroconidies. B : Microconidies.

Source : MNHN. Paris

348

1. VEGH et J. VELASTEGUI

ОАО

торт

sum

бу

Fig. 3 — Conidies de Marssonina kriegeriana. A :Macroconidies. B : Microconidies.

il nous a paru utile de rechercher d’autres caractères qui permettent de les déter-

miner d'une façon sûre. Les résultats de cette étude comparée sont consignés

dans le tableau 1.

Tableau I

Étude comparée de Marssonina salicicola et kriegeriana

Critères à étudier

- Forme parfaite

- Organes végétaux attaqués

- Symptômes sur feuilles

Marssonina salicicola

Drepanopeziza

sphaeroides (Fr.) Nannf.

inflorescences, feuilles,

rameaux (PI. 1.B)

petites taches + arrondies

de couleur brun rouge, dont

le centre devient grisâtre;

réduction et déformation

des feuilles (PI. I.B1-2)

Marssonina kriegeriana

Drepanopeziza

triandrae Rimpau

essentiellement feuilles

(fig. 4)

petites taches + arrondies

À contour régulier ou fibril-

leux; centre clair, bord

brun ou marron à rosátre;

pas de réduction ni de.

déformation des feuilles

(fig. 4)

Source : MNHN, Paris

MARSSONINA SPP. SUR SALIX

Critéres à étudier

- Manifestation des dégáts

dans la Région

Parisienne

Morphologie des

«macroconidies d'été»

- Biométrie des «macroconidies

d'été»

sur feuilles

sur milieu nutritif

gélosé (P.D.A.)

- Aspect cultural sur P.D.A.

- Croissance mycélienne

en fonction de la

température

Germination des macro-

conidies sur eau gélosée par

«conidies secondaires»

- Germination des macro-

conidies en fonction de la

température sur eau gélosée

- Germination des macro-

conidies en présence

d'eau liquide

- Ramification des filaments

germinatifs sur eau gélosée

après 40 h d’incubation

- Résistance des macro- |

conidies à la chaleur (à 35°C

durant 24 h) et après remises

à 22°C

- Sensibilité des macro-

conidies aux U. V.

Marssonina salicicola

dés l'apparition des feuilles

(février-mars) et durant toute

la période de végétation :

principalement fin de prin-

temps et début d'été

piriformes ou subovoides

plus de 50 p. 100 des macro-

conidies faiblement courbées

(fig. 2)

11,0-17 0 x 4,0-5,5 tm.

(m. :14,5 x 5,0 шт)

15,2-35,5 x 5,1-10,1 Xm

(m. :23,6 x 6,5 шт)

colonie de couleur grise ou

noirâtre à face supérieure,

entourée d'une marge blanche

(РІ. П.В)

3-29°C, avec optimum

vers 23°C

fréquentes (fig. 5)

optimum :22°C

trés faible

(1-10 p. cent)

la majorité sont ramifiés

(50-80 p. cent)

% de germination : 0

sensibles

349

Marssonina kriegeriana

dès la fin de printemps

jusqu'à la chute des feuilles

principalement fin d'été

et début d'automne

idem, mais presque toutes

les macroconidies sont

faiblement courbées

(fig. 3)

11,0-17,4 х 3,7-5,4 шт

:13,5 x 4,4 шт)

11,8-22,0 х 3,4-8,5 ит

(m. :16,1 x 5,7 Jim)

aspect plus ou moins

semblable (Pl. IC)

5-29°C, avec optimum vers

22°C: d’une façon générale

la croissance est plus faible

(РІ. п.С)

absentes

optimum : 20°C

assez importante

(50-60 p. cent)

la majorité sont simples

(50-80 p. cent)

% de germination : 70

plus résistantes

Source : MNHN, Paris

Pl. II. — A : Aspect cultural de Marssonina dispersa sur P.D.A. aprés 40 jours d'incubation

а 23°С B : Aspect cultural de Marssonina salicicola sur P.D.À. aprés 40 jours d’incuba-

Чоп а 23°С. С : Aspect cultural de Marssonina kriegeriana sur P.D.A. aprés 40 jours

d’incubation à 22°C.

MARSSONINA SPP. SUR SALIX 351

Taches provoquées par Marssonina kriegeriana sur feuilles de Salix alba * Tristis

Fig. 4.

| P |

| /

нет о

20 ym

Fig. 5. — «Conidies secondaires» de Marssonina salicicola formées sur eau gélosée.

Source : MNHN, Paris

352 I. VEGH et J. VELASTEGUI

Notons encore qu’en Égypte, NATTRASS (1930) signale le M. kriegeriana

sur les inflorescences et les rameaux. Quant à nous, nous n'avons jamais observé

ce parasite sur ces organes. En revanche, lorsque nous avons effectué des inocu-

lations sur pousses de 5. alba "Tristis" avec ces deux champignons, nous avons

obtenu des symptômes similaires. Il est donc possible que le M. kriegeriana

attaque en France aussi les rameaux et que ces dégâts soient attribués à M.

salicicola.

BIBLIOGRAPHIE

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Thèse, Faculté des Sciences de l'Université de Reims.

Source : MNHN, Paris

353

ÉTUDE ULTRASTRUCTURALE DES ASQUES

ET DES ASCOSPORES DE TRUFFES DU GENRE TUBER

IL. — LES ASCOSPORES

par M.C. JANEX-FAVRE et A. PARGUEY-LEDUC*

RÉSUMÉ. — La paroi des ascospores a été comparée chez diverses Truffes du genre Tuber

(T. aestivum, T. bituminatum, T. dryophilum, T. excavatum, T. melanosporum, T. mesen-

tericum, T. rufum, T. uncinatum). Les observations ultrastructurales des ascospores adultes

font apparaitre une grande homogénéité de structure : leur paroi présente alors seulement

deux couches superposées : l'épispore, interne, claire et régulière, et la couche ornementale

externe, sombre, d'origine composite.

Par contre, dans l'évolution de la paroi interviennent les diverses couches classiquement

reconnues dans les parois sporales, à savoir, de l'intérieur vers l'extérieur : l'épispore, l'exo-

spore, la périspore et l'ectospore. Les épines caractéristiques du g. Tuber dérivent soit de

l'exospore, soit de la périspore.

SUMMARY. — Comparison of ascospore walls in several Truffles (Tuber aestivum, T.

bituminatum, T. dryophilum, T. excavatum, T. melanosporum, T. mesentericum, T. rufum,

T. uncinatum). The final structure of ascospore walls is very homogeneous, with the super-

position of only two layers : an inner regular epispore and an outer composite ornamental

layer. The different usual layers are yet differentiated during the spore wall formation,

from the interior to the exterior : the epispore, the exospore, the perispore and the ecro-

spore. The spines characteristic of Tuber species derive either from the exospore or from

the perispore.

Dans une précédente publication (PARGUEY-LEDUC et JANEX-FAVRE,

1981), nous avons décrit l'organisation des asques chez diverses espèces de

Truffes du g. Tuber. Nous présentons maintenant nos observations relatives aux

ascospores de ces mêmes Truffes (T. aestivum, T. bituminatum, T. dryophilum,

T. excavatum, T. melanosporum, T. mesentericum, T. rufum, T. uncinatum),

depuis le stade de la formation du sac pro-sporal qui délimite initialement

chacune des ascospores jusqu'au stade adulte.

* Laboratoire de Cryptogamie - Université Pierre et Marie Curie - 9, Quai Saint-Bernard,

75005 Paris.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN, Paris

354 M.C. JANEX-FAVRE et A. PARGUEY-LEDUC

Ces nouvelles observations complétent celles, déjà publiées, sur les ascospores

du Tuber aestivum. (PARGUEY-LEDUC et JANEX-FAVRE, 1977 a), du T.

rufum. (JANEX-FAVRE, 1977) et du T. mesentericum (JANEX-FAVRE et

PARGUEY-LEDUC, 1980).

1.— DELIMITATION DES ASCOSPORES

Rappelons que dans le jeune asque, le noyau diploide, aprés avoir migré

dans la région sommitale, s'y divise pour donner les futurs noyaux sporaux;

ceux-ci se localisent tout prés du plasmalemme. Sur le trajet de ce dernier se

différencient alors de nombreux lomasomes (pl. I, fig. 1).

A partir de certains lomasomes (pl. I, fig. 2) prennent naissance des diverti-

cules dirigés vers l'intérieur de l'asque. Ils sont formés par un feuillet simple

tripartite. Au début de sa formation, ce feuillet est plissoté; ensuite, il se détend

progressivement, en s'allongeant dans la zone péri-nucléaire (pl. I, fig. 3), puis il

entoure l'un des futurs noyaux sporaux.

Il se forme ainsi progressivement, autour de ce noyau, un sac (= sac pro-

sporal) qui tend à se fermer pour délimiter une ascospore; la zone de fermeture

se localise toujours du côté interne, au contact de la région du cytoplasme

contenant des vacuoles à précipités (pl. II, fig. 1 puis 2 et pl. III, fig, 1).

Comme le feuillet dont il est issu, le sac pro-sporal est initialement simple

et il le demeure lorsque, complètement fermé, il devient la paroi «primordiale»

de la jeune ascospore (pl. II, fig. 2).

2. — PAROI PRIMAIRE

Très rapidement la paroi primordiale fait place à une paroi primaire formée

de deux feuillets tripartites, séparés par un espace clair (pl. III, fig. 3). Pour

cela, cet'e paroi primordiale unique se dédouble. Son dédoublement débute

en plusieurs points espacés, où se trouvent ainsi délimitées, en coupe, des sortes

de boutonnières. Celles-ci confluent peu à peu entre elles, de sorte que les deux

feuillets deviennent parfaitement distincts. Le feuillet interne constitue alors

le plasmalemme sporal.

Ensuite les deux feuillets s'écartent progressivement l'un de l'autre, chacun

d'eux est sinueux mais leurs tracés ne sont pas strictement parallèles (pl. IV,

fig. 1 et 2). À ce stade les ascospores quittent la périphérie de l'asque et se

regroupent en son centre.

Par la suite la paroi primaire s'épaissit, son feuillet externe devient très irrégu-

lier, dessinant des pointes et de courts piliers radiaires saillants dans l’épiplasme

(pl. V, fig. 1 et 2). De place en place des éléments du réseau endoplasmique de

l'épiplasme s'appliquent contre ce feuillet, qui apparait ainsi localement double.

3.— FORMATION DE PILIERS RADIAIRES SUR LA JEUNE ASCOSPORE

Les pointes et les courts piliers qui hérissent la paroi primaire s'allongent

et forment des piliers minces, disposés radialement tout autour de la spore.

Source - MNHN, Paris

ÉTUDE DU GENRE TUBER. I. LES ASCOSPORES 355

Chez le T. dryophilum (pl. VI, fig. 1) ces piliers sont espacés, très fins mais

dilatés en ampoules de place en place, sinueux et parfois ramifiés. Entre deux

i Р р p Р

piliers successifs la paroi n'est pas denticulée.

Chez le T. melanosporum (pl. VI, fig. 2) les piliers radiaires sont beaucoup

plus nombreux et larges, parfois confluents. A leur extrémité demeurent visibles

des restes du réseau endoplasmique. La paroi est irrégulièrement ondulée entre

deux piliers successifs.

La structure des piliers radiaires des ascospores du T. aestivum est voisine

(PARGUEY-LEDUC et JANEX-FAVRE, 1977 a) mais leurs dilatations pré-

sentent une grande régularité : localisés à l'extrémité des piliers, d'abord sous

forme d’ampoules, elles s'aplatissent ensuite progressivement et confluent entre

elles.

Chez le T. rufum (JANEX-FAVRE, 1977) et le T. mesentericum (JANEX-

FAVRE et PARGUEY-LEDUC, 1980) les piliers radiaires demeurent courts et

trapus; ils s'épaississent irréguliérement à partir de leur base.

4. — FORMATION ET ÉVOLUTION

DE LA PARTIE SECONDAIRE DE LA PAROI

a) Formation de la périspore

Les bases confluentes des piliers radiaires forment une couche continue qui

devient la périspore (pl. VII. fig. 1 et 2). Celle-ci s'épaissit progressivement.

en intégrant les piliers radíaires (T. rufum, T. mesentericum) ou en les repoussant

dans l'épiplasme (T. aestivum, T. melanosporum)

Lorsqu'elle est parfaitement développée, la périspore a une grande épaisseur :

tantót elle est transparente aux électrons (pl. VIII. fig. 1). tantót elle contient

des trainées de fines granulations ou de courtes fibrilles irréguliéres, opaques

aux électrons (pl. VII et pl. VIII. fig. 2). dont la densité augmente progressive

ment (pl. IX, fig. 1). Vers l'extérieur, la périspore est limitée par l'ectospore

résultant de la fusion d'éléments du réseau endoplasmique avec le feuillet ex-

terne de la paroi primaire. Les éléments du réseau sont toutefois encore visibles

sur les figures de la planche VIII.

b) Formation de l'épispore et de l'exospore

A l'extérieur du plasmalemme se différencie une épispore, régulière et claire

ou faiblement opaque aux électrons (pl. VI, fig. 2 et pl. VIII, fig. 1). A sa surface

s'observent de place en place des masses irrégulières très denses aux électrons

qui, en devenant coalescentes, forment une exospore pelucheuse (pl. VII, fig. 2

et pl. VIII, fig. 2).

c) Formation des épines omementales

Les épines, qui caractérisent les ascospores dans l'ensemble du g. Tuber,

n’ont pas la même origine chez toutes les espèces. Deux cas ont été reconnus :

Source : MNHN, Paris

356 M.C. JANEX-FAVRE et A. PARGUEY-LEDUC

a) les épines sont formées par la périspore.

Dans ce cas, celleci se rétracte brutalement, sauf en certains points où elle

conserve son épaisseur; ces points constituent alors les sommets d'épines dispo-

sées sur toute la surface sporale. Ce cas est celui des T. dryophilum, T. mesen-

tericum, T. rufum et T. uncinatum.

Chez ces espéces, le contenu des épines se présente sous la forme soit de

filaments entremélés (pl. X, fig. 2 et pl. XI), soit de granules denses (pl. XII,

fig. 1), les uns et les autres disposés sans orientation particulière. Les épines

sont recouvertes par l'ectospore.

B) les épines sont des expansions de l'exospore.

Chez le T. aestivum et le T. melanosporum leur formation débute alors que

la périspore est encore fortement dilatée (pl. IX. fig. 1); elles s'ébauchent alors

sous forme de fibres disposées perpendiculairement à l'exospore. Ces fibres

s'allongent, convergent vers l'extérieur, puis se disposent en faisceaux coniques

(pl. IX, fig. 2 et pl. X, fig. 1). L'ectospore vient se mouler contre chaque faisceau

conique qui constitue alors une épine (pl. X, fig. 2).

— STADE FINAL

Au stade final, quelle qu'ait été l'évolution antérieure, la paroi des ascospores

des Truffes présente, en coupe, une structure stratifice, sensiblement identique

chez les diverses espèces; celle-ci comprend :

a) une couche interne, appliquée contre le plasmalemme, d’une épaisseur

remarquablement régulière, transparente ou faiblement opaque aux électrons

(pl. XIII et pl. XIV). Cette couche est constituée par l'épispore, qui s'est nette-

ment épaissie;

b) une couche externe ornementale, constituée par les épines dont les bases

sont réunies entre elles en une nappe continue, d'épaisseur variable selon les

espéces. Cette couche externe est constituée par l'exospore et les épines dont

les composants internes deviennent progressivement indistincts (pl. XII, fig. 2;

pl. XIII et pl. XIV).

A la surface des épines, l'ectospore demeure trés longtemps visible (pl. XII,

fig. 2 et pl. XIV, fig. 1). Dans le cas du T. aestivum certains éléments de l'ecto.

spore ne s'appliquent pas directement contre les épines mais demeurent tendus

entre leurs extrémités, en formant un voile (pl. XIII).

On sait que la détermination des espéces du g. Tuber est basée, de façon

classique, sur le type d’ornementation sporale, qui est échinulé ou alvéolé

(cf. notamment MALENÇON, 1938). Si cette distinction est parfaitement

reconnaissable sur des spores observées «in toto», en microscopie photonique,

elle n'apparaît par contre pas sur les coupes ultrafines.

Source : MNHN, Paris

ÉTUDE DU GENRE TUBER. II. LES ASCOSPORES 357

CONCLUSION

Structure et évolution comparée de la paroi des ascospores

chez diverses Truffes

Rappelons que la délimitation des ascospores se fait individuellement pour

chacune d'elles, à partir d'un sac pro-sporal constitué, autour de chaque noyau

sporal, par un unique feuillet tripartite qui, une fois refermé sur lui-même,

devient la paroi primordiale de la jeune ascospore (JANEX-FAVRE et PAR-

GUEY-LEDUC, 1976; PARGUEY-LEDUC et JANEX-FAVRE, 1977 b et 1981).

Ce mode d’ascosporogénèse rappelle celui décrit chez les Hémi-Ascomycètes,

où chaque ascospore est, comme chez les Truffes, délimitée individuellement

dans l'asque.

Il est par contre bien différent de celui existant chez les Eu-Ascomycétes,

qui fait intervenir une vésicule ascale.

La paroi primordiale des ascospores des Truffes se transforme ensuite en une

paroi primaire formée de deux feuillets tripartites, qui s'écartent progressivement

l'un de l’autre. Le feuillet interne devient le plasmalemme sporal.

L'évolution ultérieure de la paroi ascosporale aboutit à une structure très

semblable chez les différentes espèces, mais elle se réalise selon des modalités

variées, qui sont résumées dans le tableau synthétique ci-après.

espèces 1 2 3 4 6

paroi ascosporale

application du réseau

endoplasmique contre la + + + +

paroi primaire épaissie

formation de piliers radiaires + + + + + +

gonflement de la périspore

accompagné de :

- intégration des piliers = +

- rejet des piliers

dans l'épiplasme * +

épispore régulière + + + + + +

exospore d’abord pelucheuse + + - + +

épines ornementales dérivant :

- de l'exospore + +

- de la périspore * + + +

présence d'un voile fugace

reliant les extrémités des épines.

Il est :- d’origine ectosporale к”?

dérivé du réseau endoplasmique 46

1 : Tuber aestivum; 2 : T. dryophilum; 3 : T. melanosporum; 4 : T. mesentericum;

rufum; 6 : T. uncinatum.

Source > MNHN, Paris

358 M.C. JANEX-FAVRE et A. PARGUEY-LEDUC

L'interprétation de la structure de la paroi ascosporale des Truffes n'a pas été

aisée : nous nous sommes en effet heurtées à des difficultés dans la dénomina-

tion des diverses couches, en particulier de la plus interne. On peut interpréter

cette derniére soit comme une endospore, du fait qu'elle est appliquée contre

le plasmalemme, soit comme une épispore, du fait qu'elle est directement

sous-jacente à l'exospore.

En fait, ces deux couches peuvent avoir une structure semblable, comme nous

l'avons observé chez le Leptosphaeria maculans (Desm.) Ces. et de Not. (A.

PARGUEY-LEDUC et al., 1982); en effet, chez cette espéce, elles sont super-

posées à l'extérieur du plasmalemme et ne peuvent étre réellement distinguées

qu'au niveau des septums oü elles se séparent : l'endospore s'incurve alors et

entoure individuellement chaque cellule. Ainsi, chez cette espéce, les ascospores

étant pluricellulaires, l'identification de l'endospore est facile; par contre, chez

les Truffes à ascospores unicellulaires, elle est plus délicate.

C'est pourquoi il nous a semblé plus opportun, dans nos publications sur les

Truffes, de nommer épispore la couche interne de la paroi et ce, par comparaison

avec ce que PERREAU (1967, 1976) a décrit chez les Basidiomycétes. Selon

cet auteur, en effet, dans les basidiospores, l'épispore est toujours lisse, claire

et réguliére, et de plus elle est associée à une exospore ornementée : ces carac-

téres se trouvent également réunis chez les Truffes.

REMERCIEMENTS

Nous remercions vivement R. Cailleux, G. Chevalier, B. Darchen, H. Frochot, F. Magne,

G. Malencon, C. Montant et L. Riousset de nous avoir procuré et déterminé les Truffes

utilisées pour ce travail, et nous avons plaisir à rappeler la précieuse collaboration technique

de C. Bidoux, C. Fournigault et N. Jampsin.

BIBLIOGRAPHIE

BERTA G.and FUSCONI A., 1983 — Ascosporogenesis in Tuber magnatum. Trans. Br.

mycol. Soc. 80 :201-207*.

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deux Truffes : Tuber rufum Pico et Tuber aestivum Vitt. (Tubéracées). C. R. Acad. Sci.

Paris 283 : 1173-1175.

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Mycol. France 93 : 407-424.

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spores du Tuber mesentericum Vitt. Bull. Soc. Mycol. France 96 :225-237.

MALENÇON G., 1938 — Les Truffes européennes - Historique - Morphogénie - Organo-

graphie - Classification - Culture. Rev. de Mycol. 3 (5).

x з

Nous n'avons malheureusement pu tenir compte de cette publication parue seulement

après la mise sous presse de notre article

Source : MNHN, Paris

ÉTUDE DU GENRE TUBER. II. LES ASCOSPORES 359

PARGUEY-LEDUC A. et JANEX-FAVRE M.C., 1977 a — L’ornementation des ascospores

chez le Tuber aestivum Vitt. Travaux dédiés à G. VIENNOT-BOURGIN, Soc. Fr. Phyto-

pathol. :307-323.

PARGUEY-LEDUC A. et JANEX-FAVRE M.C., 1977b — L'organisation des asques de

deux Truffes : Tuber rufum Pico et Tuber aestivum Vitt. Rev. de Mycol. 41 :1-32.

PARGUEY-LEDUC A. et JANEX-FAVRE M.C., 1981 — Etude ultrastructurale des asques

et des ascospores de Truffes du g. Tuber. I. Les asques. Cryptogamie, Mycologie 2 :

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PARGUEY-LEDUC A., JANEX-FAVRE M.C., ANDRIEU S., LACOSTE L. et TRAORE F.,

1982 — Les périthéces et les asques du Leptosphaeria (7) senegalensis Segretain, Baylet,

Darasse et Camain. Ann. de Parasitologie 57 (2) : 179-195.

PERREAU-BERTRAND J., 1967 — Recherches sur la différenciation et la structure de la

paroi sporale chez les Homobasidiomycétes а spores ornées. Ann. Sci. Nat. Bot. et Biol.

vég., 12ème ser., 8 : 639-745.

PERREAU J., 1976 — Développement, morphologie et structure de la basidiospore (chez

les Homobasidiomycètes). Information scientifique 31 : 55-75.

Pour toute cette étude, nous avons utilisé la double fixation par le glu-

taraldéhyde puis le tétroxyde d'osmium. Les coupes ont été contrastées par

l'acétate d'uranyle et le citrate de plomb, ou traitées par la technique de Thiéry

(Planche 1).

Échelle des planches : 0,5 um, sauf pl. HI, fig. 3 : 0,1 um.

Source : MNHN, Paris

360 M.C. JANEX-FAVRE et A. PARGUEY-LEDUC

Source : MNHN, Paris

Pl. II — Délimitation de l'ascospore chez le T. meseutericum. Fig, 1 : le sac pro-sporal n'est

pas encore fermé (flèches). Fig. 2 : le sac, complétement fermé, devient la paroi primor-

diale simple de l'ascospore.

Source : MNHN, Paris

Pl. III — Paroi primordiale et paroi primaire. Fig. | : paroi primordiale simple chez le

T. aestivum. Fig. 2 : détail de la paroi primordiale simple chez le T. mesentericum.

Fig. 3 : détail de la paroi primaire, à deux feuillets tripartites, chez le T. mesentericum.

Source : MNHN, Paris

PL. - Début d'écartement des deux feuillets de la paroi primaire chez le T. rufum. Fig. 1:

ensemble de l’ascospore. Fig. 2 : détail de la paroi primaire

Source : MNHN, Paris

РІ. У — Paroi primaire épaissie : son feuillet externe forme des pointes, il est localement dou-

blé par des éléments du réseau endoplasmique. Fig. 1: T. rufum. Fig. 2 : T. uncinatum.

Source : MNHN. Paris

Pl. VI — Allongement des pointes en piliers radiaires. Fig. 1 : 7. dryophilum. Fig. 2

melanosporum.

Source : MNHN, Paris

Pl, VII — Formation de la périspore qui repousse dans l'épiplasme les piliers radiaires (fig. 1)

puis de l'épispore et de l'exospore (fig. 2) chez le T. melanosporum.

Source : MNHN, Paris

ÉTUDE DU GENRE TUBER. II. LES ASCOSPORES 367

Pl. VIII — Gonflement de la périspore. Fig. 1 : des éléments du réseau endoplasmique sont

encore visibles à la surface de la périspore: T. uncinatum. Fig. 2 : formation de dépóts

à la surface de l'exospore, T. melanosporum.

Source : MNHN, Paris

PI. IX — Formation des épines à partir des dépôts exosporiques chez le T. melanosporum.

Sur la fig. 1 la périspore est encore dilatée tandis qu'elle régresse sur la fig. 2.

Source : MNHN Paris

Pl. X — Fig. 1: rétraction de la périspore, qui s'applique contre les faisceaux coniques de

fibres provenant de l'exospore: T. melanosporum. Fig. 2 : rétraction de la périspore qui

délimite les épines recouvertes par l'ectospore et contenant des filaments irréguliers;

T. uncinatum.

Source : MNHN, Paris

Pl. XI — Fig. 1 : détail des épines périsporiques chez le T. uncinatum. Fig. 2 : épines d'ori

gine périsporique chez le T. dryophilum.

Source : MNHN, Paris

PL. XII — Fig. 1 : élargissement des épines périsporiques chez le T. dryophilum. Fig. 2

détail d'une épine au stade final : l'ectospore est encore visible; T. excavatum

усе : MNHN, Pai

372 M.C. JANEX-FAVRE et A, PARGUEY-LEDUC

Pl. XIII — Formation d'un voile reliant les extrémités des épines chez le T. aestivum.

Source : MNHN, Paris

Pl. XIV — Épaississement et homogénéisation des couches de la paroi qui comporte, au

stade terminal, une épispore claire épaisse et réguliére et une couche ornementale sombre.

Fig. 1 : T. bituminatum : l'ectospore est encore distincte à la surface des épines. Fig. 2

T. melanosporum.

Source : MNHN, Paris

COLLOQUE `

INTERNATIONAL

гаа CNRS / NASA

THIORÉDOXINES

Structure et fonctions

Dir. : Pierre Gadal

Berkeley — juin 1981

e mise au point des connaissances sur les thiorédoxines, protéines

de faible masse molaire dont l'importance physiologique est

de plus en plus reconnue dans l'ensemble du monde vivant

e propriétés des thiorédoxines et leurs interventions dans le

fonctionnement cellulaire.

e propriétés des thiorédoxines

e leursrôles dans — la synthèse de l'ADN et la réplication

— l'assimilation de l’azote et du soufre

la photosynthèse

(30 communications dont 24 en anglais)

résumés anglais français

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MNHN., Paris

375

OBTENTION DE MYCÉLIUMS

ET DE FRUCTIFICATIONS HYBRIDES

ENTRE DICHOSTEREUM DURUM ET D. SORDULENTUM

(BASIDIOMYCETES)

par P. LANQUETIN et J. BOIDIN*

RÉSUMÉ. — Par isolement de conidies uninucléées et par utilisation du phénoméne de

Buller, nous avons tenté d'identifier les noyaux présents dans les hybrides D. durum x D.

sordulentum. Les descendants de la fructification d'un de ces hybrides ont un comporte-

ment sexuel homothallique différent du comportement tétrapolaire des parents.

MOTS CLÉS : Basidiomycétes, Dichostereum, Hybride interspécifique.

SUMMARY. — By using isolations of uninucleate conidia and by the use of Buller's pheno-

menon, we have tried to identify the nuclei present in the hybrid mycelia D. durum x D.

sordulentum. The progeny of the fructification of one hybrid mycelia has a homothallic

sexual behaviour different from the tetrapolar behaviour of the parents.

Legenre Dichostereum Pilat sensu BOIDIN & LANQUETIN (1977a) est facile à

distinguer du genre Vararia sensu stricto par ses espéces aux spores subsphé-

riques, amyloides et plus ou moins ornées. Il est constitué de champignons

tétrapolaires dont les mycéliums haploïdes ont des articles terminaux faiblement

cénocytiques et dont les mycéliums dicaryotiques bouclés forment des conidio-

phores œdocéphaloïdes porteurs de petites conidies uninucléées; pour la plupart

d'entre eux, des fructifications ont été obtenues sur milieu gélosé.

Les tests d'intercompatibilité, effectués chaque fois que des cultures étaient

disponibles ont permis de montrer l'existence d'au moins 8 espèces de Dichoste-

reum. L'une d'elles, d'origine américaine, aujourd'hui appelée D. sordulentum

(Cooke et Massee) Boidin et Lanquetin, trés proche du D. durum (Bourd. et

Galz.) Pilat européen avait été dénommée provisoirement Vararia aff. dura

* Laboratoire de Mycologie associé au C.N.R.S., Université Claude Bernard - Lyon I, Bat.

405, 43 Boulevard du 11 Novembre 1918, 69622 Villeurbanne - France.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

376 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

(LANQUETIN 1973) parce que nous ne disposions pas de culture du D. durum

dont elle se rapproche étroitement par l'ornementation sporale trés fine et le

type de dichophyses.

Nous avons déjà indiqué (BOIDIN et LANQUETIN 1980) que si toutes

les autres espèces étaient totalement interincompatibles, D. durum avait donné

naissance à l'apparition de boucles dans un trés petit nombre de confrontations

avec D. sordulentum.

Ces mycéliums dicaryotiques «hybrides» obtenus dans les croisements de

deux espèces proches mais différentes, nous offraient pour la 1ère fois la possibi-

lité de tenter une étude d’hybrides interspécifiques chez les Batidiomycètes

saprophytes. Dans ce travail seront successivement détaillées l'étude de la crois-

sance et de la constitution nucléaire des dicaryons hybrides ainsi que l'étude de

la descendance de l'un d'eux.

I. — OBTENTION DE MYCÉLIUMS DICARYOTIQUES HYBRIDES

Comme nous le souhaitions en 1973 (LANQUETIN p. 174) des cultures

monospermes d'une récolte francaise de Dichostereum durum LY 9450 ayant

pu être isolées en juillet 1979, des haplontes appartenant aux 4 pôles ont été,

en septembre 1979, confrontés avec un représentant de chacun des pôles de

D. sordulentum LY 6627 (— V. aff. dura en 1973).

Les confrontations étaient alors toutes négatives à l'exception de trois croi-

sements : deux d'entre eux montraient localement des boucles et des crochets

qui ont disparu après le premier repiquage, mais le troisième : 9450/A, B

n9 6 x 6627/A, B5 n9 9 était totalement bouclé et ce mycélium restait bouclé

après repiquages. Refaite plusieurs fois, cette confrontation a toujours donné

un mycélium dicaryotique à boucles constantes, qui envahit totalement la

boîte en deux mois. Ce mycélium hybride H, étant stable et réobtenu systé-

matiquement, il nous a semblé intéressant de voir si d'autres mycéliums hybrides

pouvaient être obtenus. A cet effet nous avons effectué le maximum de croi-

sements possibles, compte tenu des cultures dont nous disposions en myco-

thèque : 12 monospermes de D. durum LY 9450 appartenant aux 4 pôles, 1 repré-

sentant de chaque pôle de D. sordulentum LY 6627, de Louisiane; 2 mono-

conidiens A et B du D. sordulentum LY 6770 (issus de la culture polysperme

ЕР 70855 de Géorgie) et 1 monosperme A du D. sordulentum LY 6995 (— G

2395/1 d'Argentine).

84 confrontations ont pu étre effectuées, leurs résultats sont réunis dans le

tableau I, déjà publié dans BOIDIN et LANQUETIN 1980 (p. 383). Mais ici

les cultures porteront les seuls numéros de la mycothéque lyonnaise.

Comme on le voit les résultats sont en grande majorité négatifs. Toutefois

dans cinq confrontations notées «c b», les prélèvements sur la ligne de contact

des mycéliums ont montré localement des boucles et des crochets, mais après

repiquages ces prélèvements ont toujours donné un mycélium sans boucles.

Source : MNHN. Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 377

Tableau I

Confrontations de monocaryons du D. durum frangais LY 9450 avec trois D. sordulentum

américains

c : crochets, b : boucles, H : mycélium hybride bouclé (détails dans le texte)

Confrontations between monosporous cultures of the French D. durum LY 9450 and

monosporous cultures of three American D. sordulentum.

c: incomplete clamps; b : clamps; H : hybrid clamped mycelium

DICHOSTEREUM DURUM LY 9450

їла?

5 AB =2|eb - | мы аа

=. їй,

E =

E А,В = 5 еъ е cawi ire Arcu agens "cat

272

2 | 6627 |

5 Аврет еъ -= LR TT NE NE

= МУРЕ нан нар ИЕ |e gee ge

й A e ECCE

2 | 6770

8 5 c Ha a cde a ra LES S

6695 ^ РЕЗО ЕЕЕ EE EE MERS

Enfin, de vrais mycéliums dicaryotiques à boucles constantes, appelés H 1 à

H 6, ont été obtenus dans six confrontations.

Quelques observations sont à faire sur l'obtention de ces mycéliums hybrides:

H 1 — Dans la confrontation 9450 A; B; n9 6 x 6627 A, B5 n? 9, Vhybride

H 1 a été obtenu très aisément dans les quatre essais successifs, c’est-à-dire

que cette confrontation se comporte exactement comme un croisement de

deux monospermes provenant de deux récoltes différentes de la même espèce.

Au bout de 6 à 8 semaines, le mycélium dicaryotique couvre entièrement

la boîte.de la ligne de contact aux extrémités des anciens territoires de chaque

haplonte. De plus, ces essais étalés sur 8 mois semblent montrer que la formation

de l'hybride n’exige pas une extrême jeunesse des cultures monospermes en

présence (dans le dernier essai LY 9450 A1B2 = 6 est âgé de 8 mois et LY

6627 А| В» - 9 est âgé de 8 ans.

H2 — Dans la confrontation 9450 A; B, n9 1 x 6627 A, Ba n99, l'observation

à 6 semaines montre, sur les hyphes de la ligne de contact, de nombreuses

boucles et crochets, mais ces boucles ne sont pas constantes et le mycélium

situé à l'extrême du territoire des monospermes est totalement dépourvu de

boucles. Toutefois un prélèvement effectué sur la ligne de contact donne, après

repiquage, une culture H 2 totalement bouclée.

Source : MNHN. Paris

378 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

H3 — Dans la confrontation 9450 A,B, по 7 х 6627 А, В по 9, А trois

semaines le mycélium prélevé sur la ligne de contact montre localement de

nombreuses boucles, des fausses boucles et des crochets. Les boucles sont

observées le plus souvent dans des zones où les hyphes paraissent dégénérées.

Toutefois une bouture prélevée sur la ligne de contact donne une culture aux

hyphes entièrement bouclées. Observées à 8 semaines, les boîtes contiennent

un mycélium totalement dicaryotisé, tant à la ligne de contact qu'aux bords

extrêmes de la culture.

H4 — La confrontation 9450 A; Bj n9 1 x 6695/A, âgée de trois semaines

est totalement négative. Le monosperme LY 9450/1 forme un mycélium aérien

laineux tandis que LY 6695/A est totalement dépourvu de mycélium aérien.

A quatre semaines, un mycélium aérien duveteux blanc apparaît sur la ligne

de contact, puis il envahit lentement le territoire de LY 6995/A. Ce mycélium

est localement trés riche en boucles et crochets. A huit semaines il couvre

totalement le territoire de LY 6995/A. Les prélèvements effectués sur la ligne

de contact et aux extrémités des territoires de chaque haplonte montrent tous

des boucles constantes. Ce mycélium dicaryotique est appelé H 4. 7 semaines

plus tard, les cultures repiquées sont totalement dépourvues de boucles. H 4

est considéré alors comme un mycélium hybride instable.

H 5 — Dans la confrontation 9450 A; B; n9 6 x 6770/A, ágée de trois se-

maines, des boucles et des crochets sont observés à la ligne de contact sur des

hyphes étroites, non sur les hyphes axiales. La subculture effectuée à ce mo-

ment-là donne un mycélium totalement dépourvu de boucles. Mais à 5 semaines,

un mycélium aérien se forme sur la ligne de contact, il est bouclé et à huit

semaines il a envahi progressivement tout le territoire de 6770/A. Après repi-

quage, il est totalement bouclé, c'est le mycélium hybride H 5.

H6 — Dans la confrontation 9450 A, B; n9 6 x 6995/A, les prélévements

sont totalement négatifs à 5 semaines mais à 8 semaines un mycélium aérien

láche apparaít sur la ligne de contact et envahit peu à peu le territoire du mono-

sperme 6995/A qui était totalement dépourvu de mycélium aérien à 5 semaines.

Ce mycélium aérien bouclé, appelé H 6. est repiqué, alors que les territoires

extrémes des monospermes sont sans boucles. Huit semaines plus tard, le troi-

sième repiquage du mycélium hybride H 6 s'est révélé totalement dépourvu de

boucles. Il s’agit donc d'un mycélium hybride instable. Il est alors en effet,

comme le mycélium haploïde, constitué d’hyphes aux articles en majorité

uninucléés mais aussi bi- et tri-nucléés, avec des articles terminaux à 2, 3 ou 5

noyaux et des chlamydospores qui en contiennent 3 à 8.

Aux observations précédentes ajoutons que chez D. durum et D. sordu-

lentum, les confrontations de monospermes appartenant à des pôles complé-

mentaires sont totalement dicaryotisées en moins d'un mois. Il en est de méme

pour les confrontations entre monospermes de nos différentes souches de D.

sordulentum, tandis que les quelques confrontations positives obtenues entre

D. durum et D. sordulentum ne sont dicaryotisces qu'aprés deux mois. Signalons

également qu'à l’âge de deux mois, aucune des confrontations D. durum x

Source : MNHN, Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 379

D. sordulentum ne montre la moindre ligne brune pourtant présente dans toutes

les confrontations négatives que nous avons pu observer entre souches incompa-

tibles de Dichostereum (cf. LANQUETIN 1973, tab. I, p. 171). C'est seulement

dans les cultures plus âgées, trois à quatre mois, que les confrontations négatives

entre D. durum et D. sordulentum ont révélé au contact des mycéliums soit une

fine ligne brune soit le plus souvent des fragments de ligne brune. Par contre,

les confrontations ayant donné naissance aux mycéliums hybrides H 1 à H 6

n'ont jamais montré de ligne ou fragments de ligne brune.

Croissance des mycéliums hybrides stables

Aprés une étude comparée, sur milieu de Nobles, des mycéliums D. durum

LY 9450, D. sordulentum LY 6627, 6770 et 6995 et des mycéliums hybrides

stables H 1 -H 2 -H 3 - H 5, on constate que pour D. durum et les trois souches

de D. sordulentum les mycéliums remplissent totalement les boîtes à 3 semaines

tandis que les mycéliums hybrides couvrent les boites en cing mais le plus

souvent six semaines, Leur vitesse de croissance est donc nettement inférieure

à celle des deux espèces qui les composent. Leur pigmentation est également

bien inférieure : tandis que le mycélium de D. durum âgé de 6 semaines est beige

foncé à cannelle påle, et celui de D. sordulentum faiblement crème alutacé,

les mycéliums hybrides sont totalement blancs sauf H 2 et H 3 qui se teintent

très légèrement d’isabelle pâle avec le temps.

Toutes les cultures étant placées dans les mêmes conditions de température

et d'éclairement, seuls les mycéliums de D. durum fructifient aisément au bout

de 4 à 5 semaines, ceux de D. sordulentum fructifiérent en 1972 au bout de 8

semaines mais semblent avoir perdu ce pouvoir. Parmi les mycéliums hybrides,

seul H 5 a donné des petites plages fructifiées dans des cultures âgées de trois

mois à trois mois et demi.

Oxydases : comme leurs constituants, tous les hybrides donnent une forte

réaction sur les milieux à l'acide gallique et au gaïacol (sur ce dernier les bou-

tures rougissent instantanément), une réaction nulle vis-à-vis du paracrésol

Mais sur le milieu à la tyrosine, la réaction négative des mycéliums hybrides

est identique à celle de D. durum, car D. sordulentum donne toujours une

réaction positive.

Cytologie : les mycéliums H 1, H 2, H 3 et H 5 sont constitués d'hyphes aux

articles régulièrement binucléés et bouclés; ils forment des conidiophores por-

teurs de conidies uninucléées.

Type de conidies : dans les mycéliums hybrides, nous avons observé les deux

types de conidies, ovoides à paroi mince (type D. sordulentum) et sphériques

à paroi épaisse (type D. durum), avec le plus souvent une prédominance des

conidies ovoides.

L'étude des mycéliums issus de ces conidies haploides nous a semblé un

moyen commode pour identifier les noyaux présents dans les dicaryons hybrides

obtenus.

Source : MNHN, Paris

380 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

II. — CONSTITUTION NUCLÉAIRE

DES MYCÉLIUMS DICARYOTIQUES HYBRIDES

ÉTUDE DE H 1 : D. durum 9450 A, B; n9 6 x D. Sordulentum 6627 A, B по 9

De l’eau stérile est versée délicatement sur de jeunes cultures, elle entraîne

avec elle les conidies qui sont ensuite dispersées sur milieu de Nobles.

Dans une première tentative, 100 germinations très jeunes sont prélevées

après 3 jours : 5 seulement se développent.

Dans un deuxième essai, les prélèvements sont effectués plus tardivement à

8 jours. On observe alors des germinations un peu développées et d’autres très

petites. 100 prélèvements variés sont effectués. Parmi les petites germinations,

40 sont repérées (au moyen de petits carrés dessinés sur la gélose à l’aide de

l'aiguille) mais non prélevées afin de pouvoir les surveiller en place; aucune ne

s'est développée par la suite.

Sur les 100 prélévements, 81 se sont développés; observés au bout de 10

jours, ils sont tous constitués d'hyphes sans boucles, montrant de nombreuses

chlamydospores et des conidiophores produisant des conidies ovoides du type

D. sordulentum. Tout laisse à penser que nous avons isolé le noyau D. sordu-

lentum 6627 A, B; n9 9, ce que nous avons vérifié en étudiant le :

Comportement des monoconidiens H 1

30 monoconidiens H 1 ont été confrontés avec des monocaryons complé-

mentaires des monospermes constituant P'hybride. C'est-à-dire avec 9450 A5 B,

n9 9 et 6627 A3B, n° 7. Tous se révélent compatibles avec 6627 A5B, n9 7

et totalement incompatibles avec 9450 A,B, n° 9.

Le monoconidien n9 11 a été confronté plusieurs fois avec les 4 pôles 6627

et avec les 2 monospermes 9450 AjB, n9 9 et n9 10, seul le monocaryon

6627 A5 B, — 7 est dicaryotisé.

22 monoconidiens ont été également confrontés avec 9450 A, B; — 6 pour

tester la capacité de ces noyaux «sordulentum» à refaire des hybrides avec

D. durum. Sur les 22, 11 monoconidiens H 1 refont un mycélium hybride

dicaryotique en présence de 9450 A,B; — 6. Mais dans les confrontations

effectuées avec le monosperme 9450 n9 11 appartenant également au póle

A, B5. aucun mycélium hybride n'est apparu.

En résumé, les conidies haploïdes isolées contenaient le noyau de D. sordu-

lentum; elles germent en donnant un mycélium dont le comportement est

identique à celui du monosperme LY 6627 A,Bs — 9. Mais, contrairement à

notre espoir, par l'isolement des conidies nous n'avons pas obtenu les deux

noyaux constituant le mycélium hybride. Seule deux germinations ont dévelop-

pé un mycélium porteur de conidies rondes type D. durum, trés vite elles ont

montré quelques boucles, puis un mycélium totalement bouclé, alors que 80

monoconidiens d'une culture de D. durum sont toujours restés dépourvus

de boucles.

Source : MNHN, Paris.

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 381

Pour tenter de mettre en évidence le noyau de durum contenu dans le mycé-

lium H 1 nous avons étudié le comportement du mycélium hybride en phéno-

méne de Buller face à divers monocaryons de D. durum et de D. sordulentum.

Comportement du mycélium hybride H 1 en phénoméne de Buller*

à 2 mois à 3 mois

H1 x 9450 AB; = 7 = а Е

H1 x 9450 A,B, = 8 pe Y

НІ x 9450 A,B, = 9 +++

НІ x 9450 A,B, = 10 — caue n

Н1 х 9450 А,В = 11 -++ —

H1 x 6627 A,Bi =

H1 x 6627 A;B; NS

H1 x 6627 A;B, AA

H1 x 6627 AB; уй

H1 x 6995/A = — à 5 mois

H1 x 6770/B = — à 5 mois

Dans ces confrontations de type di-mon. tout se passe comme si le noyau

D. sordulentum était incapable de dicaryotiser le monocaryon de D. sordulen-

tum complémentaire alors que le noyau de durum «bulleriseraity son complé-

mentaire. A noter cependant que si le noyau D. durum de H 1, A, Bj — 6

dicaryotise trés bien son complémentaire n9 9, il ne dicaryotise qu'une fois

sur 4 et trés tard son autre complémentaire n9 10 alors qu'il aurait en outre

dicaryotisé après un délai plus ou moins long les noyaux de durum A,B, — 7

et Aj B5 — 11, ce dernier appartenant à son propre pôle; dans cette hypothèse,

le noyau de durum serait modific.

Une autre hypothése serait de considérer ces derniers dicaryons comme dus

à une réhybridation par passage du noyau de sordulentum; option difficile à

soutenir puisque ce noyau n'a pas pu «bullériser» son propre pôle complé-

mentaire.

ÉTUDE DE H 2 : D. durum 9450 A; B, n9 1 x D. sordulentum 6627 A, B; n9 9

Aprés dispersion des conidies de la culture H 2, 12 prélévements sont effec-

tués à deux jours et 28 prélévements à six jours. Sur ces 40 isolements, 24 seu-

lement se sont développés en donnant un mycélium dépourvu de boucles et

formant des conidiophores porteurs de conidies ovoïdes de type D. sordulentum.

Tout de suite après la récupération de ses conidies pour les dispersions la

culture H 2 est repiquée. Elle forme alors un mycélium où l'on observe une forte

* Dans l'expression de nos résultats : chaque signe de la 1ère colonne correspond à une

confrontation et chaque signe de la 2ème colonne indique, dans le même ordre, le devenir

de ces mêmes confrontations.

Source : MNHN, Paris

382 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

proportion de conidies rondes type D. durum. Une nouvelle dispersion est

tentée dans l'espoir d'isoler un deuxiéme type de monoconidiens. Mais les 67

monoconidiens obtenus sur 67 prélèvements se révèlent une fois encore formés

d'hyphes sans boucles portant des conidiophores à conidies ovoïdes. Comme

pour H 1 tout se passe comme si les conidies rondes méme abondantes ne ger-

maient pas.

Comportement des monoconidiens de H 2

30 monoconidiens de H 2 ont été confrontés avec :

1) LY 9450 A; Ba, nO 2 et nO 3 : monospermes complémentaires du mono-

caryon D. durum constituant l'hybride H2. Les 60 confrontations restent

négatives.

2) LY 6627 A; B, n9 7 : (seul monosperme de type A2B; conservé en collec-

tion depuis 1972) complémentaire du monosperme de sordulentum constituant

Vhybride H 2. Les 30 confrontations sont positives sur la ligne de contact et

les boucles se maintiennent en subcultures; les mycéliums sont irréguliérement

dicaryotisés, parfois totalement, parfois seulement d'un côté et le plus souvent

celui du monosperme 6627.

3) avec 9450 A, B; nO 1 (pour tester la capacité des monoconidiens à refaire

des hybrides). Ici, 18 confrontations sur 30, forment un mycélium dicaryotique

à la ligne de contact seulement, les extrêmes ne sont jamais dicaryotisés. Le

mycélium dicaryotique obtenu se maintient bouclé dans les subcultures.

Les monoconidiens de H 2 possèdent donc tous le noyau de sordulentum LY

6627 A1Bz = 9, compatible avec 6627 A2B; = 7 et capable, dans un peu plus

de la moitié des confrontations, de reformer avec 9450 A, By = 1, un mycélium

hybride identique à H 2.

Comportement du mycélium hybride H2 confronté en phénomène de

Buller avec les monospermes complémentaires des monocaryons consti-

tuants H 2 et avec d'autres monospermes de durum et de sordulentum.

à 2 mois à 5 mois

H2 x 6627 A;B, n°7 - =

H2 x 6770/A — =

H2 x 6995/A - E

9450 A,B, n°2 +

9450 A2B, n°3 +

9450 A,B, n°5 +

9450 АВ, п09 TRS, +++-

9450 A;B, n9 10 ie — (+) localement

9450 A,B, n°6 z (+)

MOMOMOM MM

Le résultat de ces confrontations montre la présence dans le dicaryon H 2

du noyau D. durum 9450 A,B, = 1. En outre on constate que le noyau de

Source : MNHN, Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 383

sordulentum présent dans H 2 puisqu'isolé dans les monoconidiens, ne réagit

pas dans les confrontations di-mon. avec d’autres monospermes de D. sordulen-

tum et on s'explique mal l'apparition tardive des mycéliums dicaryotiques

dans les confrontations di-mon. avec les monospermes durum n9 6 - 9 et 10.

Certes on aurait pu penser que le noyau «sordulentum» de H 2 réagissait en face

de certains noyaux «durum» pour former des mycdliums dicaryotiques hybrides

mais, une fois encore, cette hypothése est-elle plausible si le noyau «sordulen-

fum» ne réagit pas en phénoméne de Buller ?

ETUDE DE H 3 : 9450 A, B; n9 7 х 6627 А, В; по9

Sur 50 monoconidiens isolés, 27 seulement se sont développés. Ils sont sans

boucles et semblent ne former que des conidies ovoides.

Comportement des monoconidiens H 3

Ils ont été confrontés avec :

1) 2 monospermes complémentaires du monosperme D. durum ayant formé

l'hybride H 3, 9450 A,B; = 2 et 9450 A:B2 = 3. Les 54 confrontations sont

restées négatives.

2) avec le monosperme 6627 A3B; = 7, monosperme complémentaire du

monosperme 6627 A,B, = 9 ayant formé l'hybride H 3. Ici les 27 confronta-

tions sont positives. Elles sont irréguliérement dicaryotisées, parfois totalement,

parfois d'un cóté seulement et plus fréquemment du cóté du monosperme LY

6627 (culture pourtant bien plus ágée que les monoconidiens).

Les monoconidiens H 3 possèdent donc tous le noyau de sordulentum LY

6627 А.В = 9 compatible avec le pôle complémentaire LY 6627 A3B; = 7.

3) Ils ont été confrontés également avec LY 9450 A,B, — 7 pour tester

leur aptitude à reformer un mycélium dicaryotique hybride identique à H 3.

Dans 20 confrontations sur 27, il apparait sur la ligne de contact un mycélium

dicaryotique qui se maintient en subcultures mais ne dicaryotise jamais les

extrémes.

En résumé, tous les monoconidiens isolés possèdent le noyau de D. sordu-

lentum LY 6627 AB3 n° 9 et plus des deux tiers sont capables de reformer

un mycélium hybride dicaryotique identique à H 3.

Comportement du mycélium H 3 confronté en phénomène de Buller avec

des monospermes complémentaires des haplontes constituants H 3, et avec

d’autres monospermes de sordulentum.

à 2 mois à 5 mois

H3 x 6627 AB; n°7 - =

H3 x 6770/ A = e.

H3 х 6995/ А = =

H3 х 9450 А;В; по5 z

Source : MNHN Paris

384 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

à 2 mois 5 mois

H3 x 9450 A;B; no8 +

H3 x 9450 A;B; n92 +

Les confrontations avec D. durum sont totalement positives au bout de deux

mois.

Des confrontations avec D. sordulentum 6627 AB; n9 7 et les autres mono-

spermes de sordulentum LY 6770/A et LY 6995/A ont été répétées et suivies

pendant 5 mois : les résultats sont toujours restés négatifs.

En phénoméne de Buller, le noyau de durum, (9450 A,B, n° 7) de H3

semble seul pouvoir dicaryotiser des monospermes complémentaires.

D'autres confrontations ont été tentées avec d'autres pôles de D. durum

à 2 mois à 3 mois

НЗ х 9450 А.В, поб - (+ жг

НЗ х 9450 А, В по 11 -+ - +

H3 x 9450 A,B, n°9 Б. =

НЗ х 9450 АВ, по 10 = —

Comme avec les hybrides H 1 et H 2, les confrontations di-mon. si elles sont

observées tardivement permettent d'enregistrer des résultats plus ou moins

positifs avec les póles non complémentaires du noyau de durum constituant

E3,

ETUDE DEH 4: 9450 A,B, n°1 x 6995/A

Aprés 3 repiquages, ce mycélium hybride alors agé de deux mois a totale-

ment perdu ses boucles. 74 cultures monoconidiennes ont cependant été isolées.

Toutes développent un mycélium aux hyphes dépourvues de boucles formant

des conidiophores porteurs de conidies rondes type D. durum.

Comportement des monoconidiens de H 4 débouclé.

Étant donné la présence de conidies rondes on pouvait penser que seul le

noyau D. durum 9450 AB; subsistait dans la culture H 4 débouclée et que

tous les monoconidiens isolés possédaient ce noyau. Pour vérifier cette hypo-

thése, 30 monoconidiens ont été confrontés avec :

1) deux monospermes D. durum complémentaires de 9450 A,Bi, soit

9450 A; B; — 2 et 9450 A; B; — 8.

2) le monosperme 6995/A pour voir s'ils pouvaient réformer des mycéliums

hybrides identiques à H 4.

Les 90 confrontations sont restées totalement négatives. Les monoconidiens

n'ont donc pas le noyau de durum et ils doivent alors posséder le noyau de

sordulentum 6995/A. Comme nous n'avons pas de monosperme complémentaire

de 6995/A, nous avons pallié cette absence en confrontant 10 monoconidiens

Source : MNHN. Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 385

H 4 avec chacun des póles de D. sordulentum LY 6627. Les 40 confrontations

positives permettent d'affirmer que les monoconidiens de H 4 débouclé pos-

sédent le noyau de sordulentum. 6995/A compatible avec les 4 pôles d'une autre

souche géographique de D. sordulentum. Ces monoconidiens, possédant le

noyau «sordulentum) mais produisant des conidies rondes type «durum»,

nous ont conduit à émettre l'hypothèse qui consistait à considérer le mycélium

H 4 débouclé comme un mycélium resté cependant hétérocaryotique oi coexis-

taient les deux types de noyaux devenus incapables de former des boucles.

Pour vérifier l'éventuelle présence du noyau de durum, le mycélium hybride

H 4 débouclé a été confronté avec des monospermes complémentaires du noyau

de durum A; B constituant l'hybride soit :

H4 x 9450 A,B, n°2

H4 x 9450 A;B; n93

x 9450 A;B; n9 5

x 9450 A,B, n°8

Aprés cing mois, ces confrontations étant restées négatives, le mycélium H 4

débouclé a été confronté avec 6770/A et 6770/B d'une autre souche de D.

sordulentum. Dans les deux confrontations des boucles sont apparues mais

l'observateur avait de quoi rester perplexe car il a vu se former sur la bouture

H 4, et non à la ligne de contact, un mycélium aérien blanc qui envahit progres-

sivement le territoire du monosperme B. Seul le mycélium aérien est bouclé,

les prélèvements effectués en profondeur restent négatifs. Dans la confrontation

avec 6770/A, le mycélium aérien blanc, bouclé, reste cantonné sur le territoire

de H 4 et ne dicaryotise pas le mycélium 6770/A.

De telles observations ont conduit à réexaminer les repiquages de H 4 gardés

en mycothèque; tous présentaient alors un mycélium aérien blanc totalement

bouclé et binucléé alors, qu'au début, ces repiquages n'avaient pas de mycélium

aérien. Nous ne savions pas quel facteur avait pu déclencher le «rebouclage»

du mycélium hybride H 4, mais il était désormais possible d'étudier ce mycélium

hybride H 4 rebouclé.

Ses conidies sont rondes en grande majorité mais il y a aussi un petit nombre

de conidies ovoides indiscutables. 4 à 6 jours aprés la dispersion des conidies,

27 prélèvements ont été effectués, 23 se sont bien développés. Observés à 10

jours, 15 sont bouclés et 8 restent dépourvus de boucles. Le comportement de

ces derniers est résumé dans le tableau ci-après.

Comportement des monoconidiens de H 4 après son rebouclage

Nombre de résultats à

monoconidiens — x D.sordulentum 6 semaines

8 x 6627 A,B, ++++++++

8 х 6627 АВ; ++++++++

8 x 6627 AB ++++++

8 x 6627 АВ: ++++++++

8 x 6770 / À ++++++++

Source : MNHN. Paris

386 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

8 x D. durum à 2 mois à 6 mois

8 х 9450 А;Вз по5 ^ ——————— am a E

8 A apie | eee c E "5,

8 2:9450.4) BgmOH. шс с=с ые Ё Белал

8 х9450 А.В п06 | ————-— - ==- F FFE

8 x 9450 A2B, n°9 A EE ея

Précisons qu'avec D. sordulentum, les trés nombreux résultats positifs,

apparus assez rapidement sur la ligne de contact ont toujours été assortis d'une

dicaryotisation lente et incompléte, s'effectuant de préférence du cóté des

monospermes sordulentum, les monoconidiens H 4 n'étant le plus souvent

pas dicaryotisés.

Avec D. durum les résultats positifs exceptionnels (6 sur 40) sont apparus

trés tardivement. Les 3 confrontations (*) ont montré localement des boucles

et les 3 confrontations positives se sont révélées totalement bouclées.

Les monoconidiens de H 4 qui donnent rapidement des boucles avec les

différents monospermes de sordulentum possèdent donc tous le noyau de

sordulentum 6995/A, capable dans quelques cas de former des mycéliums

hybrides avec des noyaux de durum. A noter que ces mycéliums hybrides

apparaissent après plusieurs mois, avec formation d'un mycélium aérien lâche

sur la ligne de contact, qui envahit ensuite progressivement le territoire des

monoconidiens (auparavant dépourvu de mycélium aérien). Ces images rappel-

lent beaucoup les confrontations ayant donné naissance aux mycéliums hybrides

H 4, H 5 et H 6. Enfin ajoutons que tous les monoconidiens de H 4 sont ty-

rosine +++, caractère spécifique de D. sordulentum.

Comme pour les hybrides H 1, H 2 et H 3, l'étude des monoconidiens H 4

permet d'affirmer la présence du noyau de sordulentum dans le dicaryon hybride

H4.

Comportement du mycélium hybride H 4 rebouclé confronté en

phénomène de Buller.

à 2 mois 3 4 mois

H 4 x 9450 A,B, n^ + F + + +t +

i 9450 AB n° 1 t

H 4 x 9450 4,8, n^ 7 e - = - PE

й з | |

на x 9450 A,B,n* 2. | ec +t

H 4 x 9450 A,B, n° 3 +t +e |

4 x 945 25 CINE: + жк.

н 9450 A,B, n° 5 t Fr |

Н 4 x 9450 A,B, n° 8 + + Jee ++

H4x 9450 Bin 9 | +1 же lau nu |

H 4 x 9450 4,8, n°10 tto ке xt |

на 9450 A,B,n* 6 Eje nun +t St |

* Е А T «to pr

i |

4 n

H 4 x 9450 AjB, n*l1

Source : MNHN. Paris.

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 387

à 2 mois 2 5 mois

Н а х 6770/А H + + - {ш

Н 4 х 6770/8 = “їс Peal) Se ge Reh)

Н 4 х 6627 A,B, = we 9] ES =

H 4 x 6627 A,B, - "RF p GER +1

HG x 6627 A,B, TO eee | ee

Н 4 х 6627 A,B, = а= +1

+ : quelques boucles: + 1 : boucles seulement observées dans une zone limitée à l'arrière

de l'implant monosperme; + t : bouclés totalement jusqu'aux bords extrêmes de la

culture monosperme; - Fr : fructification observée avec basides bouclées.

Les résultats enregistrés avec le mycélium hybride H 4 rebouclé sont tout

à fait conformes à ceux que nous avons obtenus avec H 1, H 2, H 3. En confron-

tation di-mon., les noyaux de durum sont bien dicaryotisés.

ETUDE DE H 6 : 9450 A, B; n9 6 x 6995/A

Comme le mycélium hybride H 4, aprés 3 repiquages le mycélium hybride H 6

a totalement perdu ses boucles à l'âge de deux mois. Toutefois 20 monoco-

nidiens ont été isolés à partir de cette culture débouclée, tous sont formés

d'hyphes sans boucles et portent des conidiophores produisant en grande majo-

rité des conidies rondes, mais on peut cependant voir aussi quelques conidies

ovoides.

Comportement des monoconidiens H 6

Supposés posséder le noyau de durum 9450 A, Ba — 6, ils ont été confrontés

avec :

1) les monospermes D. durum 9450 A,B, — 9 et AB; = 10 appartenant

au póle complémentaire.

2) avec 6995/A afin de voir s'ils pouvaient reformer un mycélium hybride

identique à H 6.

Les 40 confrontations avec D. durum et les 20 confrontations avec D. sordu-

lentum 6995/A sont restées négatives.

Les monoconidiens H 6 se comportent comme s'ils n'avaient pas le noyau de

durum, ils doivent donc posséder le noyau de sordulentum 6995/А.

5 monoconidiens H 6 ont été confrontés avec les 4 póles de D. sordulentum

LY 6627 et avec deux monocaryons LY 6770/A et 6770/B. Les 30 confronta-

tions sont positives entre 1 mois et 2 mois, et le mycélium dicaryotique obtenu

se maintient bouclé en subcultures.

Conclusion : les monoconidiens de H 6, se comportent comme ceux de H 4,

ils possédent le noyau de sordulentum LY 6995/A naturellement compatible

Source : MNHN. Paris

388 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

avec les monospermes d'autres souches de cette espéce.

Mais à l'heure actuelle, contrairement au mycélium H 4, H 6 n'a montré

aucune tentative de rebouclage permettant d'affirmer la présence du noyau

D. durum.

Pour les hybrides étudiés précédemment, le noyau de durum ne s'est jamais

manifesté dans les confrontations effectuées avec les cultures monoconidiennes

mais seulement dans celles faisant intervenir le mycélium hybride lui-méme.

Pour cette raison le mycélium H 6 débouclé a été confronté avec différents

monospermes de sordulentum et de durum.

Confrontations du mycélium H 6 débouclé avec D. sordulentum n° LY

6627 A,Bi1, A3B2, A1B5, A2B1 et LY 6770/A, 6770/B.

Toutes les confrontations, effectuées en double, sont positives au bout de

deux mois, mais seuls les monospermes de sordulentum sont dicaryotisés, le

mycélium H 6 reste dépourvu de boucles. Les cultures ont un aspect homo-

gène avec un mycélium aérien pratiquement nul et un milieu de culture bien

bruni.

Confrontations du mycélium H 6 débouclé avec D. durum.

— avec 9450 A,B, n° 1 et n° 7 : les confrontations effectuées en double

sont positives après 2 à 3 mois: un mycélium aérien se forme, qui, du mono-

sperme 9450, envahit progressivement le territoire de H 6.

— avec 9450 A,B; по 2, nO 3, nO 5 et nO 8 : les confrontations restent

négatives à 7 mois. Quelques boucles ont été observées aprés 8 mois dans les

confrontations avec les n° 5 et n° 8.

— avec 9450 AB; n° 9 : 1 confrontation sur deux est positive aprés 5 mois;

avec n9 10: à 4 mois, toutes les confrontations sont négatives, mais après 6 mois, 1

confrontation sur trois se révèle positive et après 8 mois une autre montre des

boucles partout.

— avec 9450 A1B no 11 : sur 3 confrontations, 1 seule a montré quelques

hyphes bouclées après 5 mois; avec n° 6 : 2 confrontations sur 3 se révelent

positives après 2 et 3 mois.

Conclusion : Ces résultats laissent penser que dans le mycélium H 6 débouclé,

le noyau de durum a disparu et que reste seulement le noyau D. sordulentum

compatible avec tous les monocaryons des autres souches D. sordulentum et

susceptible, dans 9 cas sur 23, de refaire des mycéliums dicaryotiques hybrides

avec certains monospermes D. durum, notamment les nO 1 - 7 - 6 qui ont tou-

jours manifesté la plus grande aptitude à s'hybrider.

Néanmoins, il reste à comprendre pourquoi, s'ils ne possédent que le noyau

de sordulentum, les monoconidiens de H 6 forment les deux types de conidies

avec parfois une majorité de conidies rondes.

ÉTUDE DEH 5: 9450 AB; n9 6 x 6770/A

A partir du mycélium H 5, 80 monoconidiens furent isolés, 79 se sont déve-

loppés; les cultures monoconidiennes d'aspect opaque, blanchâtre, pratique-

Source : MNHN. Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 389

ment dépourvues de mycélium aérien, montrent toutes des conidies ovoides

rares et leurs hyphes restent sans boucles,

Comportement des monoconidiens de H 5

25 monoconidiens ont été croisés avec :

— le monosperme 9450 A2B; = 9, complémentaire du monosperme D.

durum entrant dans la formule de H 5

— un monosperme 6995/A appartenant à une autre souche de D. sordulentum.

De plus 15 monoconidiens H 5 ont été confrontés avec :

— un monoconidien 6770/13, fraichement réobtenu a partir du polysperme

D. sordulentum 6770 et complémentaire de 6770/A.

Les 25 confrontations avec D. durum sont restées négatives tandis que les 40

confrontations avec D. sordulentum se sont révélées nettement positives. Notons

seulement que si la dicaryotisation des monoconidiens H 5 est totale, celle des

monocaryons 6995/A et 6770/13 est exceptionnelle.

Ces résultats montrent que c'est encore le noyau D. sordulentum qui est

obtenu par le biais des dispersions de conidies. Nous avions déjà constaté à plu-

sieurs reprises (LANQUETIN 1973 p. 185) le passage préférentiel dans les

conidies d'un seul type de noyau du dicaryon. Ce phénomène reste encore à

expliquer,

Pour tenter d'isoler le second noyau du dicaryon H 5, nous avons eu alors

recours à l'étude des néohaplontes de H 5.

Étude des néohaplontes de H 5

Aprés un séjour sur milieu nutritif gélosé additionné d'extrait sec de bile

(Merck) à la dose de 1,5 %, le mycélium H 5 apparaît totalement dépourvu

de boucles et de mycélium aérien, donc de conidies. Il est broyé en milieu

liquide pendant deux minutes et les fragments de mycélium sont dispersés.

Dans le premier essai, sur 50 jeunes pousses prélevées, une seule s'est développée,

elle était bouclée. Une deuxième tentative a permis 30 prélèvements dont 13

se sont bien développés, un seul montrait des conidies rondes, il s’est bouclé,

les 12 autres à conidies ovoïdes sont restées sans boucles. Ils ont été confrontés

avec le monosperme D. durum 9450 A5B; n9 9 et le monosperme D. sordulen-

tum 6627 A, B; n9 2. Toutes les confrontations avec D. durum ont été négatives

tandis que celles avec D. sordulentum étaient positives.

Ces résultats montrent que les néohaplontes possédent tous le noyau de

sordulentum comme les monoconidiens.

Comportement du mycélium H 5 confronté en phénomène de Buller

1) avec des monospermes de D. sordulentum

Confrontations observées

à 2 mois à 5 mois

H5 x 6627 A,B, n92 E = =

Н 5 х 6627 АВ, по5 ВЕЕТ: Бет

H5 x 6627 A,B, n°7 PR MES эуен:

Source : MNHN, Paris

390 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

Confrontations observées

à 2 mois à 5 mois

H5 x 6627 A,B; n9 9

H5 x 6995/A

Donc une seule confrontation sur 18 se révèle partiellement positive à 2 mois,

et sur 14 confrontations di-mon. réobservées à 5 mois, cette méme et seule

confrontation devient nettement positive jusqu’à l'extrême bord du territoire

de l'haplonte. Il s'agit probablement de la formation d'un mycélium hybride

dicaryotique 9450 A1 Bz по 6 x 6627 Az B; n9 5.

2) avec des monospermes de D. durum

Confrontations observées

à 3 mois à 5 mois

H5 x 9450 AB; n09 +Fr, +Fr. +Fr. + +++ +

H5 x 9450 A;B, n9 10 T ++

H5 x 9450 A;B, n91 Е а

H5 x 9450 A,B, n97 "qq = — — +1егссг

H5 x 9450 AB; n°03 = узя "€

H5 x 9450 A;B, n92 z ++

H5 x 9450 A;B; n95 = go

H5 x 9450 A;B; n98 = — F (avec petite

zone +)

H5 x 9450 AB n°11 а= n’ont pu être conservées

Н5 х 9450 А,В; поб — ORC +++

On comprend les résultats franchement positifs avec le pôle A2B; complé-

mentaire du monosperme D. durum ayant formé H 5, mais les résultats obtenus

avec les autres pôles sont assez surprenants et appellent quelques commentaires.

— Avec les monospermes A; B; n9 1 et 7 : à trois mois sur 6 confrontations,

H 5 a formé une fois seulement, et localement, des boucles et des crochets qui,

aprés 5 mois n'ont toujours pas envahi la culture

— Avec les monospermes A; B5, n0 2 - 3 - 5 et 8 : à trois mois, les 10 con-

frontations sont négatives mais aprés 5 mois, si les 4 confrontations avec le n9 3

restent négatives, les deux croisements avec le n9 2 sont devenus nettement

positifs, tandis qu'avec le nO 5, les deux confrontations montrent seulement

une petite zone bouclée d'un aspect différent du reste de la culture; enfin une

confrontation sur deux avec le n9 8 montre également une zone bouclée limitée.

— Avec les monospermes A; B; de même pôle que le noyau D. durum de

H 5 : si toutes les confrontations avec le n9 11 restent négatives, il n'en est

pas de méme avec le n9 6 (monosperme entrant dans la formule de H 5) une

confrontation partiellement positive à 3 mois n'a pu étre conservée, 1 autre

négative à 3 mois devient nettement positive à 5 mois, enfin deux autres con-

frontations se sont révélées totalement positives à 3 mois.

Source - MNHN. Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 391

— Même avec les monospermes AB complémentaires du noyau D. durum

ayant formé H 5, on observe des irrégularités : le n° 10 n'a été dicaryotisé que

2 fois sur 4 et seulement à 5 mois, le n° 9 par contre donne, à 3 mois, 4 con-

frontations positives sur 4, 3 portent des fructifications et pour l'une d'elles,

les pieds des basides ont pu étre vérifiés bouclés. Cette vérification est extréme-

ment difficile mais nécessaire car le monosperme 9450 n° 9, (comme aussi

les n° 11 et n° 8) peut fructifier parthénogénétiquement; il donne des fructi-

fications portant des basides non bouclées à 2 ou le plus souvent 4 stérigmates

qui produisent des spores binucléées.

A partir de la fructification bouclée apparue dans le Buller : H 5 x 9450

A3B; n° 9, 30 monospermes isolés ont été vérifiés sans boucles et ensuite

confrontés avec les 4 pôles de D. durum 9450. L'examen de ces confrontations

effectué entre 5 et 7 semaines permet de répartir les monospermes entre les

4 pôles parents,

A1B1:1-5-6-7-11-24-26

A,B, : 2-3-4-9-13-14-25-27-28-30

A2B2: 8-12-15-16-19-22-23-29

AB; : 18-21.

Font exception les nO 10 - 17 - 20. En effet, le no 10, positif avec АВ»,

donne des fausses boucles à la fois avec Ai Bi et A3 Bj. Les n9 17 et 20 donnent

des résultats nettement positifs avec A; Bj et A; B5, mais pour ces deux derniers

il pourrait s'agir de «monocaryons impurs» constitués par 2 spores incompa-

tibles ?

Ces premiéres observations conduisaient à penser que si le noyau D. durum de

H 5 : 9450 A,B; n9 6 était capable de faire avec 9450 A5 B, n? 9, une fruc-

tification dont les descendants se comportaient normalement comme les póles

de D. durum, ce noyau D. durum n'avait donc pas été modifié par son associa-

tion avec un noyau de sordulentum.

Mais les confrontations précédentes, réobservées après 5 mois, ont donné

les résultats regroupés dans le Tableau II.

On constate qu'aprés ce long délai, 17 monospermes sur 30 (ceux qui

portent l'astérisque) ont un comportement différent de celui des monocaryons

normaux de D, durum. Ces résultats permettent d'affirmer que le noyau «du-

тит» Че Н 5 a un comportement anormal, Celui-ci pourrait expliquer les

croisements positifs inattendus dans les confrontations di-mon. de H 5 avec

les 4 pôles de D. durum (y compris le pôle du noyau «durum» de H 51) et

viendrait éclairer les résultats obtenus dans l'étude des fructifications du my-

célium H 5 lui-même.

FRUCTIFICATIONS DU MYCÉLIUM HYBRIDE H 5

Avec ce seul mycélium hybride, des fructifications ont été obtenues sur

milieu de Nobles dans certaines cultures âgées de 3 mois, et sur bois de hêtre,

Source : MNHN. Paris

392 P.LANQUETIN et J. BOIDIN

Tableau II

Comportement des monospermes, issus de la fructification d'une confrontation en Buller :

H5 x 9450 A3B, nO 9, face aux quatre póles de D. durum.

Behaviour of monosporous cultures obtained from the fructification of a Buller's confron-

tation : H 5 x 9450 A,B, n°9, with the four mating types of D. durum.

1 ДЕ: 155 6 7 a | s 10*

A i z З V й s + =

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Source : MNHN. Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 393

par le Dr R. SIEPMANN de Hann - Münden (RFA)*. Ces dernières ayant l'avan-

tage de pouvoir étre conservées en herbier.

Toutes ces fructifications sont semblables et apparaissent sous la forme de

petites plages isabelle (7,5 YR 7/4 à 7,6)** ou cannelle pále (7,5 YR 6,5/4);

elles sont trés visibles sur les cultures H 5 dont le mycélium aérien est blanc pur.

Trés riches en spores de 5-5,5-(6) um de diamétre, montrant dans le Melzer, à

cóté de quelques grosses verrues amyloides, un grand nombre de petits orne-

ments d'une grande finesse, ces fructifications H 5 sporulent pendant un temps

relativement court par rapport à celui des fructifications de D. durum et D.

sordulentum. Leurs basides bouclées, à 4 stérigmates, sont trés allongées (40)-50-

65(70) x 5-5,5 um, leur base est extrêmement grêle ce qui rend très difficile

l'observation de la boucle basale. Agées, elles se vident laissant 3 ou 4 cloisons de

retrait. Les sulfocystides, (40)-55-65 x 5 um, montrent parfois une schizopapille

au sommet; leur contenu peut apparaître comme une grosse masse réfringente,

leur base bouclée est facile à observer. Les dichophyses ont une hauteur totale

de (30)-40-70-(90) um et une envergure de (30)-40-55-(80)um; ces tailles sont

intermédiaires entre celles de D. durum et de D. sordulentum (cf. BOIDIN et

LANQUETIN 1980). Les spores sont en très grande majorité binucléées avec

quelques spores à un noyau. Les hyphes génératrices, hyalines, sont bouclées et

binucléées.

Étude des monospermes de H 5

A partir de la sporée produite par la 1ère fructification de H 5 (septembre

1980), 80 monospermes ont été obtenus. A l'âge de 15 jours à 3 semaines, ils

sont tous formés d'hyphes sans boucles et produisent des conidies rondes, type

* R. SIEPMANN bien connu pour sa compétence en matière de fructification sur bois,

a bien voulu faire des essais avec tous nos mycéliums hybrides, mais comme dans les cult

tures, seul le mycélium H 5 a fructifié,

** Code de la Munsell Color Company, Baltimore, U.S.A. «Munsell soil color charts»,

1954.

Légende du Tableau 11

+ : boucles constantes; F : boucles nombreuses localement: er: crochets: FB : fausses boucles.

Quand figurent 3 signes pour une confrontation : les signes du milieu, du haut et du bas

correspondent à l'observation de prélèvements effectués respectivement sur la ligne de

contact, sur le territoire du monosperme de la colonne verticale et sur le territoire du

monosperme de la colonne horizontale.

+: constant clamp connections; F : numerous clamps locally; cr : incomplete clamps; FB :

false clamps.

When three results are indicated for a confrontation the one in the middle is that ob

tained for the contact zone, the one in the upper right hand corner is that for the mono

sporous culture indicated in the vertical column and the one in the lower left hand corner

is that for the other monosporous culture of the confrontation which is listed to the left

of the table.

Source : MNHN, Paris

394 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

D. durum, de diamétre 3-(3,54) um. L'étude cytologique de 5 d'entre eux

révèle que leurs hyphes sont constitués en majorité d'articles uninucléés avec

quelques terminaux montrant 2-35) noyaux. Des conidiophores plurinucléés

portent des conidies uninucléées qui germent en donnant des hyphes sans

boucles aux articles uninucléés ou très faiblement cénocytiques.

Dix monospermes ont été appariés deux a deux pour établir leur polarité,

un mois plus tard toutes les confrontations étaient positives.

Les 80 cultures monospermes réobservées, alors âgées de deux mois, pré-

sentent pour la plupart des boucles, au moins localement mais une vingtaine se

montrent totalement dépourvues de boucles ou de crochets. Des observations

ultérieures, sur lames gélosées, ont permis de voir qu'elles aussi bouclaient

lentement. En outre, les 5 monospermes dont les noyaux avaient été colorés,

sont maintenant totalement binucléés-bouclés.

30 monospermes isolés à partir de la 2ème fructification H 5, 30 mono-

spermes de la 3ème fructification H 5 et 10 monospermes obtenus à partir

de la fructification sur bois (laquelle a très peu sporulé après son transport

à Lyon) ont conduit aux mêmes résultats. Les cultures monospermes âgées de

1 mois sont totalement dépourvues de boucles ou de crochets qui apparaissent

après un délai plus ou moins long, le plus souvent de deux mois.

Les descendants de l'hybride H 5 ont donc un comportement homothalle

qui différe totalement de l'hétérothallie tétrapolaire des deux espéces ayant

formé l'hybride.

L'observation répétée des 150 monospermes de H 5, dont 50 ont été étudiés

sur lame gélosée, permet de dire qu'en trés grande majorité ils produisent des

conidies rondes, 5 seulement, dont le n9 2, ont montré les deux types de coni:

dies.

Étude des monoconidiens du monosperme H 5 n° 2

Ce monosperme bouclé (comme les autres) semble bien posséder les deux

types de conidies avec une nette dominante de conidies rondes. Après dispersion

de ces conidies, 60 prélèvements sont effectués sur 6 jours. L'examen des mono-

conidiens montre déjà la présence de crochets dans certaines cultures âgées de

15 jours. Ensuite 18 cultures seront bouclées à un mois, 30 à 1 mois et demi,

et les autres boucleront plus tardivement, souvent incomplètement et après

plusieurs repiquages.

Bien qu'uninucléées, les conidies des monospermes donnent des cultures

dont le comportement répète celui des monospermes, c'est-à-dire que le noyau

unique peut donner naissance à un dicaryon.

11 faut rappeler que la culture de D. rhodosporum (Wakef.) Cunn. reçue de

Warcup (n9 T 433 originaire du sol en Australie) avait ce méme comportement.

Les cultures monoconidiennes ne permettaient pas d'isoler des cultures mono-

caryotiques nécessaires aux intercompatibilités (LANQUETIN 1973), car elles

se bouclaient lentement. Toutefois la fructification en milieu stérile de T 433

permit d'obtenir des monospermes monocaryotiques et d'établir la tétrapolarité

Source : MNHN. Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 395

de ce Dichostereum. On pouvait se demander s'il en serait de méme ici .

Étude de la croissance des monospermes issus de H 5

9 monospermes mis sur milieu de Nobles à 24°C, remplissent les boites en

5 ou 6 semaines comme H 5.

Aspect : le mycélium aérien est blanc pur, finement pelucheux avec quelques

zones subfeutrées de mycélium plus dense, ou grumeleuses légèrement teintées

de créme pále. Le mycélium ne cache pas totalement le milieu.

Microscopie : le mycélium aérien est formé d'hyphes régulières, étroites, de

1,2-2 um, à paroi mince, bouclées. Les conidiophores sont en majorité à conidies

sphériques mais il y a parfois des conidies ovoides. Les plages qui présentent

du mycélium aérien montrent quelquefois de grands secteurs où les hyphes

sont dépourvues de boucles et ne possèdent pas de dichophyses. Par contre.

les plages lisses, pratiquement dépourvues de mycélium aérien, ont des hyphes

de 1,5-2 um, régulières, à boucles constantes, quelques chlamydospores, des

sulfocystides et quelques fibres congophiles, dichophytiques, gréles, souples,

* lum. Les gloeocystides, 43-65 x 1,5-2 um, possèdent généralement 3 à 5

papilles. Le mycélium submergé est formé d'hyphes de 1,54 um, bouclées;

cependant bien des boucles semblent mal fermées.

Oxydases : les monospermes testés ont tous une forte réaction positive

sur milieu a l'acide gallique (+++++, O) comme sur gaiacol (+++++, tr) et

une réaction négative sur paracrésol et tyrosine

Etude des fructifications des descendants issus de H 5

Plusieurs cultures monospermes issues de H 5 ont a leur tour fructifié a lage

de 3 mois. Elles ont donné :

— une fructification sans boucles :

descendant nO 3 : sa fructification ne donne pas de sporée visible dans le

couvercle, mais contient de nombreuses spores faiblement ornées, de grosses

gloeocystides, 80 x 9-10(11) um, avec masse subsolidifiée, des dichophyses

hautes de 100 um. Quelques basides à 4 stérigmates, et dont le pied a pu étre

dégagé, sont dépourvues de boucles.

— des fructifications montrant quelques boucles sur certaines dichophyses

descendant n9 6 : la fructification ne donne pas de sporée dans le couvercle

et montre peu de basides et peu de spores. Il a été impossible de voir le pied

d'une baside avec certitude (méme aprés traitement ammoniacal à 60°C).

Beaucoup de dichophyses semblent dépourvues de boucles à la base mais dans

quelques cas une boucle a été observée avec certitude.

descendant nO 8 : il a fructifié dans deux boîtes de Pétri sur milieu de Nobles.

Les fructifications donnent dans le couvercle une faible sporée qui montre des

spores ornées, de 4,5-5 gm de diamétre. En coupe, sont observées : 1) de très

nombreuses, longues et gréles basides tétrasporiques, 60-85 х 4,5-5 ит au som-

met, à base très étroite, de 1,75 um, sans boucles. 2) des glococystides longue-

Source : MNHN. Paris

396 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

ment fusiformes avec papille sommitale mesurant 90 x 8-9 um au renflement

et d’autres obtuses, dépourvues de papille, 60-80 x 8-9 um, ayant un contenu

solidifié et une paroi un peu ferme. 3) des dichophyses à base généralement

non bouclée, toutefois dans de rares cas, une boucle a été observée avec certitude.

Les hyphes mycéliennes sous-jacentes, reconnaissables à leurs gloeocystides

multipapillées sont bouclées.

— une fructification bouclée :

descendant n° 7 : bien que montrant de grandes plages aux hyphes régulières

sans boucles au cours de l'étude de la vitesse de croissance, il a donné une

petite fructification qui a produit une légère sporée recueillie sur une lamelle

stérile. Observée à un stade jeune, cette fructification a pu être bien dilacérée,

les basidioles nombreuses, sont bouclées, les basides tétrasporiques, 55-80 x

4,5-5 um, ont une base indiscutablement bouclée, les gloeocystides ont leur

cloison basale bouclée et possédent une papille au sommet; les dichophyses

ont également une boucle à leur base. Les hyphes mycéliennes sont à boucles

constantes.

Étude des descendants des fructifications des monospermes 7 et 8 de H 5

Les sporées obtenues ont permis d'isoler les monospermes des fructifications

de deux types : à boucles limitées à quelques dichophyses (n9 8) et à boucles

constantes (n9 7).

Descendants de la fructification du monosperme n9 8 de H 5

68 germinations sont prélevées deux jours aprés la dispersion des spores,

3 semaines plus tard toutes se sont bien développées et 30 d'entre elles présen-

tent des boucles ou des crochets. Les 38 autres sont repiquées et bouclent

progressivement.

Descendants de la fructification bouclée du monosperme n9 7 issu de H 5

50 germinations ont été isolées 3 jours aprés la dispersion des spores. Toutes

se sont bouclées plus ou moins rapidement et aprés plusieurs repiquages.

Dans les deux cas les cultures monospermes bouclent peu à peu. L'homo-

thallie apparue lors de la lère fructification de l’hybride H 5 se maintient après

les fructifications de la génération suivante.

DISCUSSIONS

Des mycéliums hybrides interspécifiques stables et instables ont été plusieurs

fois obtenus, par exemple par NOBLES et FREW (1962) avec des Pycnoporus,

EDWARDS et KENNEDY (1973) avec des Coriolus, DAVID et coll. (1974)

avec des Auriporia, BRUEHL et coll. (1975) avec des Typhula, BOIDIN et

LANQUETIN (1977 b) avec des Peniophora, et KORHONEN (1978) avec deux

espèces jumelles S et T de Heterobasidion supra-species annosum.

Source : MNHN, Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 397

Nous avons voulu dans ce travail poursuivre l'étude de ces mycéliums hy-

brides car Dichostereum durum et D. sordulentum présentent avantage de

former des conidies uninucléées sur leurs dicaryontes et de plus, la fructification

de ces deux espèces ayant été obtenue au laboratoire, nous pouvions espérer

celle des mycéliums hybrides. Pour les six mycéliums hybrides H 1 à H 6,

nous avons ci-dessus présenté successivement les résultats détaillés obtenus :

1 : parisolement de monoconidiens monocaryotiques et leurs croisements,

Il : par confrontation di-mon. entre le mycélium hybride et les monocaryons

des espèces parentes.

I- ISOLEMENT DE MONOCONIDIENS MONOCARYOTIQUES

LANQUETIN (1973) a tenté 5 fois d'obtenir des monoconidiens de póles

complémentaires à partir de dicaryons de plusieurs Dichostereum. Deux fois

elle n'a obtenu qu'un seul póle (avec 40 monoconidiens de D. granulosum et

45 de D. ramulosum) mais pour les trois autres cas, deux póles ont été obte-

nus dans des proportions trés variables (1 et 20 avec D. rhodosporum, 13 et 87

avec D. ramulosum, 16 et 24 avec D. granulosum).

Les monoconidiens de H 1, H 2, H 3, H 5 ont tous toujours été compatibles

avec D. sordulentum, soit avec le pôle complémentaire de celui présent dans

Vhybride lorsque nous le possédions, soit avec les monocaryons de deux autres

récoltes géographiquement éloignées. Le noyau de sordulentum est donc présent

dans les hybrides et aisément isolé lors de la conidiation.

Les néohaplontes de H 5, obtenus sur milieu à la bile, révèlent ce même

noyau de sordulentum. De méme, la culture hybride H 6 débouclée naturelle-

ment comme les monoconidiens qui en proviennent sont compatibles avec les

monocaryons de D. sordulentum.

La culture hybride H 4, instable et redevenue sans boucles forme des conidies

de type D. durum mais cependant tous les monoconidiens isolés à partir de

cette culture possèdent comme ci-dessus un noyau de sordulentum.

Sil est possible d'espérer obtenir les deux types de mycélium monocaryo-

tiques par dispersion de conidies formées sur un mycélium dicaryotique, le fait

de n'obtenir ici qu'un des deux noyaux supposés présents pourrait être dû :

a) à la mauvaise germination des conidies du type D. durum ou à la morta-

lité des jeunes monoconidiens de ce type. En effet, 40 jeunes germinations de

conidies de H 1 observées en place, n’ont pas poursuivi leur développement.

Par ailleurs, les prélèvements ont permis d'obtenir avec H 1 : 86 cultures sur

200 prélèvements, avec H 2 : 29 sur 40 puis 61 sur 67, avec H 3 : 27 sur 50,

mais avec H 5 : 79 sur 80.

b) à la montée exclusive d'un des noyaux dans les conidies, comme l'a déjà

observé KORHONEN (1978) sur 99 monoconidiens isolés d'un mycélium

dicaryotique hybride (de Heterobasidion supra sp. annosum espèces P et S)

qui possédaient tous le méme noyau.

Source : MNHN, Paris

398 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

II- UTILISATION DU PHÉNOMENE DE BULLER

N'ayant pu prouver par l'isolement de monoconidiens la présence des noyaux

des deux partenaires, on pouvait espérer y parvenir par des confrontations

dimon. entre le mycélium hybride et les monocaryons des espèces parentes.

Le noyau de durum supposé présent dans ’hybride dicaryotiserait les mycéliums

D. durum haploides de póle complémentaire; de méme pour le noyau de sordu-

lentum.

En fait, les mycéliums hybrides stables H 1 - H 2 - H 3 - H 5 et le mycélium

H 4 stabilisé, ne dicaryotisent pas ou très rarement et alors très mal et très tard,

les monocaryons de D. sordulentum. Par contre, ils dicaryotisent rapidement

les monocaryons de D. durum complémentaires du noyau de durum qu'ils pos-

sèdent. Ce qui laisserait entendre que le noyau D. durum cohabite bien avec

le noyau de sordulentum dont l'existence a été prouvée par le biais des mono-

conidiens mais qui ne se manifeste pas ici. En outre, les mycéliums hybrides

dicaryotisent plus ou moins bien d'autres pôles de durum y compris parfois le

pôle de durum qu'ils contiennent :

Par exemple : H 2 (durum 9450 A,B, x sordulentum 6627 А,В) dicaryo-

tise rapidement 9450 A;B; et plus tardivement parfois seulement localement

9450 A;B; et A; Ba. H 5 (durum 9450 A, B nO 6 x sordulentum 6770/A)

dicaryotise rapidement le monosperme 9450 A;B, n9 9 et trés lentement

certains monospermes 9450 A;B;, A;jB;. En outre deux fois sur quatre il

dicary otise assez rapidement A, B; no 6 !

Deux hypothèses peuvent être formulées :

1) les mycéliums hybrides donnent bien à l'haplonte D. durum un noyau

de durum mais un noyau modifié dont les facteurs de polarité ont perdu partiel-

lement leur róle.

2) des mycéliums hybrides se reconstituent en appariements di-mon. gráce

au transfert du noyau de sordulentum dans divers haplontes D. durum. On peut

alors s'étonner :

a) que la formation d'hybrides soit beaucoup plus facile et fréquente en

appariements dimon. qu’entre monocaryons. Par exemple dans les apparic-

ments di-mon. avec rl 5, le noyau de sordulentum 6770/A donnerait des hy-

brides avec 9450 A; B, n? 2, n9 5 et n9 8 qui n'ont jamais formé d'hybrides

dans les croisements entre monocaryons. De méme dans les appariements di-

mon. avec Н 3, le noyau de sordulentum 6627 A, B; n9 9 formerait un hybride

avec 9450 A; B; n? 11, ce qui n'a jamais été obtenu par le croisement de ces

deux monocary ons.

b) que le noyau D. sordulentum de l'hybride qui dicaryotiserait ici aisément

D. durum, ne dicaryotise pratiquement pas les monocaryons D. sordulentum

complémentáires.

Il est difficile de choisir actuellement entre ces deux hypothèses, le seul fait

que H 5 dicaryotise A; B; n9 6 qu'il contient, mais pas son homologue A, B;

n? 11, laisserait supposer que le noyau D. sordulentum de H 5 refait un mycé-

Source : MNHN, Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 399

lium hybride avec le même partenaire (hypothèse 2). Toutefois la première

hypothèse peut être appuyée par le fait que l'hybride H 5 qui contient 9450

A1B3 a donné un mycélium fructifère avec 9450 A,B, n° 9 son complémen-

taire; que la descendance s'est révélée normale (tétrapolaire) après 5 à 7 semaines

mais a donné ensuite à 5 mois, pour plus de 50% des monocaryons utilisés,

des résultats positifs avec plusieurs póles (cf. tableau II) ce qui pourrait étre dà

à la modification des gènes de polarité supposée dans cette hypothèse 1. Seule

l'utilisation de mutants auxotrophes permettrait d'approfondir encore cette

étude.

Ces résultats confirment cependant que D. durum et D. sordulentum sont

des espèces distinctes pratiquement isolées génétiquement même dans les condi-

tions «forcées» du laboratoire.

Le mycélium hybride H 5, qui se comporte comme les autres mycéliums

hybrides stables, a en outre fructifié plusieurs fois. Des boucles ont été vues

au pied des basides et nous avons là un des tout premiers cas, sí ce n'est le

premier, de fructification d'un hybride interspécifique chez les Basidiomycétes

saprophytes. Le basidiome montre des dichophyses de taille intermédiaire

entre celles des deux parents et des basides à 4 spores binucléées. Les 150

isolements monospores montrent des conidies de type D. durum et sont d'abord

sans boucles, mais aprés 7 à 8 semaines, les boucles sont présentes dans toutes

ces cultures. Le comportement ici homothalle lent n'est ni celui de D. durum,

ni celui de D. sordulentum.

Les monoconidiens issus des cultures monospermes sont comme eux bouclés

aprés quelques semaines. Les fructifications de quelques cultures monospermes

qui sont soit à basides bouclées, soit à basides sans boucles, donnent à leur tour

des monospermes qui se bouclent lentement.

On constate que le déréglement provoqué par l'hybridation ne se corrige

pas à la deuxième génération.

The genus Dichostereum Pilat sensu BOIDIN et LANQUETIN (1977) con-

tains heterothallic tetrapolar species which are easily cultivated and produce

uninucleate conidia on the secondary mycelium. These conidia facilitate easy

isolation of one of the nuclei of the dikaryon (i. e. monokaryotic monoconidial

mycelia) but as previously shown (LANQUETIN 1973) two types of compa

tible monokaryons can be obtained in very unequal proportions.

The eight species, cultivated up to now, have revealed on the whole a com-

plete interincompatibility. These results have clarified the discussed systematics

of this genus.

We reported (BOIDIN et LANQUETIN 1980) that the American Dichoste-

reum sordulentum (= Vararia aff. dura in LANQUETIN 1973) gave few clamped

hybrid mycelia when paired with the French Dichostereum durum. The study

of hybrid myceliaD. sordulentum x D. durum is presented in detail in this paper.

Source : MNHN, Paris

400 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

D. durum produces spherical conidia and is tyrosinase negative, while D.

sordulentum produces ovoid conidia and is tyrosinase positive. Both species

fructify quite easily in the laboratory on a nutrient medium (Malt and Difco

Agar) but they may loose this property after some years.

Hybrid mycelia grow twice as slowly than their parents and are tyrosinase

negative, they produce the two types of conidia (on the same mycelium) even

though the one type very often clearly dominates.

H 1, H 2, H 3 and H 5 are stable hybrid mycelia; H 4 and H 6 loose their

clamps. For the six hybrid mycelia, we have given detailed results obtained by :

I: isolation of monoconidial monokaryotic mycelia and their matings.

I: di-mon. confrontations between the hybrid mycelium and monokaryotic

mycelia of the two parent species.

I - ISOLATION OF MONOCONIDIAL MONOKARIOTIC MYCELIA

Moroconidial mycelia of H 1, H 2, H 3 and H 5 are always intercompatible

with D. sordulentum either with the compatible pole of the one present in the

hybrid mycelium when available or with monokaryotic mycelia of two other

collections geographically distant. The nucleus of sordulentum is therefore

present in hybrid mycelia and easily isolated at the time of conidiation.

Neohaploid mycelia of H 5, obtained on oxgall medium possess the same

nucleus that of sordulentum. In the same way, the hybrid culture H 6 having

naturally lost its clamps-connections, and the monoconidial mycelia originating

from this unclamped mycelium H 6, are compatible with the monokaryotic

mycelia of D. sordulentum. The instable hybrid culture H 4, became clampless,

produced conidia of the same type as those of D. durum but nevertheless all

monoconidial mycelia isolated possessed one nucleus of sordulentum.

It is hoped to obtain the two types of monokaryotic monoconidial mycelia

by dispersion of conidia borne by the secondary mycelium. The fact that we

only obtained one of the two nuclei, supposedly present, could be due to :

a) poor germination of the durum type of conidia or the high death rate

of young monoconidial mycelia of this type.

b) the exclusive migration of one single nucleus into the conidia, as already

observed by KORHONEN (1978) with 99 monoconidial cultures (isolated

from the dikaryotic hybrid mycelium of Heterobasidion supra species annosum

species S and T) which all possessed the same nucleus.

Il - USE OF BULLER’S PHENOMENON

As the presence of the nuclei of the two partners in the hybrid mycelium

has not been proved by studying monoconidial isolates we have tried to de-

monstrate it by means of dimon, confrontations between the dikaryotic hybrid

mycelium and monokaryotic mycelia of the parent species. In this case the

«durum» nucleus of the hybrid would dikaryotize the haploid mycelia of D.

Source : MNHN Paris

DICHOSTEREUM DURUM x D. SORDULENTUM 401

durum having a compatible pole, and the «sordulentum» nucleus would do the

same thing.

In fact the stable hybrid mycelia H 1, H 2, H 3, H 5 and the stabilized hybrid

H 4, do not dikaryotize the monokaryotic mycelia of D. sordulentum or else

very rarely and then, imperfectly and very late. On the other hand, they dika-

ryotize quite quickly the monokaryotic mycelia D. durum compatible with the

nucleus that they contain.

These results suggest that the nucleus of durum effectively cohabits with

the nucleus of sordulentum the presence of which has been proved by means

of monoconidial cultures but which is not revealed here by di-mon. confron-

tations. In addition the hybrid mycelia dikaryotize more or less, some other

poles of D. durum including sometimes the same one that they contain them-

selves.

For example, H 2 (D. durum 9450 A, B, n9 1 x D. sordulentum 6627 A1 Ba)

dikaryotizes quickly 9450 A?B; and later, sometimes only localy, 9450 A; B,

and A,B4; H 5 (D. durum 9450 A, Bs n9 6 x D. sordulentum 6770/A) dika-

ryotizes 9450 A,B; n9 9 very quickly and some monosporous cultures 9450

A,B, and A; B; very slowly. But it also dikaryotizes A, B; n9 6 two times out

of four rather quickly.

Two hypotheses can be formulated :

1) the hybrid mycelia give to the monokaryotic mycelia of «durum» a

«durum» nucleus but a «modified» nucleus whose factors of polarity have

partially lost their fonction.

2) the hybrid mycelia are formed again in dimon. confrontations due to

à transfer of a nucleus of sordulentum to various haploid mycelia of D. durum.

Considering to the second hypothesis it is surprising that :

a) formation of hybrid mycelia occurs more easily and more frequently

in di-mon. matings than between monokaryotic mycelia. For instance : in di-

mon. matings with H 5 the nucleus of sordulentum 6770/A would give hybrid

mycelia with 9450 A; Bj n9 2, n9 5 and n9 8, that never formed hybrid mycelia

in matings between monokaryotic mycelia.

) the «sordulentum» nucleus of one hybrid mycelium which here would

easily dikaryotize a nucleus of D. durum hardly ever produces dikaryons with

the compatible monokaryotic mycelia of D. sordulentum.

At the moment, it is difficult to choose between these two hypotheses.

However the first one can be supported by the fact that the hybrid mycelium

H 5 containing 9450 A, B> formed a fructification in culture with its compatible

pole 9450 A; B, n° 9 and that the progeny showed, after 5 or 7 weeks, normal

tetrapolar behaviour, but after 5 months, more than 50% of the monokaryotic

mycelia used were giving positive results with different poles (cf. Table Il).

This could be due to the modification of polarity genes as suggested in hypo-

thesis n° 1.

All these results confirms that D. durum and D. sordulentum are two distinct

species which are almost completely genetically distinct even under the «forced»

conditions of the laboratory.

Source : MNHN, Paris.

402 P. LANQUETIN et J. BOIDIN

The hybrid mycelium H 5 which behaves as other stable hybrid mycelia,

has produced fructifications several times. Clamps have been observed at the

base of the basidia and here we can see one of the first cases, if not the first,

of fructification of an interspecific hybrid in the saprophytic Basidiomycetes.

The fruit-bodies H 5 show dichophyses of a size intermediate between those

of two parents and basidia bearing four binucleate spores.

The 150 monosporous cultures observed produce conidia of «durum» type

and were at first without clamp-connections but after 7 or 8 weeks, clamps

were present in all these cultures. This slow homothallic behaviour corresponds

neither to that of D. durum nor that D. sordulentum.

Monoconidial cultures originating from monosporous cultures were, EE

clamped after some weeks. Fruitbodies of some monosporous cultures have

either clamped basidia or unclamped basidia, but they also produce mono-

sporous cultures where clamp-connections always appear slowly. Finally we

can say that this irregular sexual behaviour caused by hybridation is not correc-

ted at the time of the second generation.

REMERCIEMENTS

Pour l'envoi de spécimens ou de cultures sans lesquels ce travail n'aurait pu étre effectué,

nos remerciements s'adressent à A, DAVID, M. DUVERGER et F. LOMBARD. Nous

exprimons notre sincère gratitude au Dr R, SIEPMANN de Hann-Miinden, RFA qui a bien

voulu, à notre demande, essayer d'obtenir sur bois la fructification de nos mycéliums

hybrides.

BIBLIOGRAPHIE

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Source : MNHN. Paris

403

ANALYSE BIBLIOGRAPHIQUE

STOLK A.C. et SAMSON R.A., 1983 — The ascomycete genus Eupenicillium

and related Penicillium anamorphs. St. in Mycol. n° 23, C.B.S. Baarn, 149 р.

45 hfl.

La monographie du genre Eupenicillivm ici présentée s'inscrit dans une

série de travaux consacrés aux formes ascosporées associées à certains Penicil-

lium, poursuivis depuis de nombreuses années au C.B.S. sous l'impulsion de A.

STOLK. Elle fait suite aux publications de STOLK et de SCOTT (1967, 1968)

dont elle présente une version révisée, affinée en fonction d'observations soute-

nues, confrontées aux propositions d’autres chercheurs (PITT, 1980; RAMIREZ,

1982).

Le genre Eupenicillium, qui recouvre une partie seulement des «Penicillium

ascosporés», est défini essentiellement par la nature sclérotioide des fructifi-

cations ascosporées, à maturation progressive. Dans un chapitre préliminaire

sont précisées d'abord la typification et la délimitation du genre. Les caracté-

ristiques morphologiques et morphogénétiques des deux types de structures

sporogènes sont décrites avec soin : la téléomorphe (structure et forme du corps

fructifére, mode de développement de l'asque, caractéres de l'ascospore) et

l'anamorphe, extrémement diversifiée; ses différents aspects se répartissent

dans plusieurs groupes du genre Penicillium, qui se distinguent à la fois par le

degré de complexité de l'appareil conidien et par la forme de la phialide.

STOLK et SAMSON retiennent 23 espèces et variétés d'Ascomycètes répon-

dant à ces critéres. Ils ajoutent à leur étude 10 espèces de Penicillium à sclérotes,

mon ascosporés, mais sans doute apparentés aux formes homologues sexuées:

cette extension est justifiée par le fait que, au cours d'examens récents, la téléo-

morphe Eupenicillium a été mise en évidence chez des espèces sclérotioides

de Penicillium réputées imparfaites.

Dans ce genre où les caractères morphologiques du cleistothèce et des asco-

spores sont relativement homogènes, la délimitation des espèces est fondée, par

une démarche classique, sur la conformation des appareils conidiens. Les auteurs

reconnaissent que la structure des hyphes ascogènes est un caractère plus signi-

ficatif; mais son observation est difficile et, pour des raisons de commodité,

elle n’est pas prise en compte dans le découpage du genre en sections.

Les auteurs groupent autour d'E. javanicum les quelques espèces et variétés

(section Javanica) dont les ascospores sont dépourvues de crêtes équatoriales: la

forme particulière des phialides invite à en rapprocher le Penicillium ochrochlo-

ron asexué.

Toutes les autres espèces présentent des ascospores lenticulaires à crêtes bien

marquées; elles sont réparties en trois sections : Pinetorum, Lapidosa, Eupenicil-

lium, selon la forme, la pigmentation, et l'ornementation des conidies, la forme

des phialides et la morphologie des conidiophores, simples ou ramifiés. Ainsi la

section Eupenicillium, représentative du genre, comporte sept espèces à conidio-

phores complexes, une ou deux fois ramifiés sous les métules, à conidies claires

Source : MNHN, Paris

404 ANALYSE BIBLIOGRAPHIQUE

et lisses produites par des phialides cylindriques pourvues d'un col court; cette

configuration (Divaricata de RAPER et THOM) se retrouve chez cinq espèces de

Penicillium a sclérotes qui sont traitées dans la méme section.

Cette nouvelle présentation des Penicillium ascosporés n'est pas de nature à

déconcerter les familiers du bon vieux Manual of the Penicillia de RAPER et

THOM (1949) : mêmes milieux de culture, mêmes critères d'identification, même

mode de description. La relation privilégiée entre cleistothéces massifs ou sclé-

rotes et tels types d'appareil conidien n'est pas nouvelle: les espèces décrites

s'inscriraient normalement parmi les «espèces ascosporées» et «espéces à sclé-

rotes» des sections Monoverticillata et Divaricata du Manuel. Les progrés accom-

plis depuis plus de trente ans se traduisent par des descriptions plus fines, une

terminologie plus précise, une illustration séduisante (conidies et ascospores en

MEB); mais aussi par l'augmentation notable du nombre des espéces ascosporées,

assortie d'ailleurs de nombreuses mises en synonymie parmi les anamorphes.

Les difficultés - et sans doute les critiques - sont de l'ordre de la nomenclature,

qui s'écarte en bien des points, non seulement des propositions récentes d'autres

chercheurs, mais aussi de ce qu'ont publié antérieurement les auteurs; le tableau

comparatif des dénominations spécifiques selon PITT et selon le présent ouvrage

illustre cette constatation. 11 faut d'ailleurs reconnaître que les listes de synony-

mes sont exhaustives et les discussions taxonomiques suffisamment précises pour

que chacun puisse aisément établir la Synopse des différentes monographies

qui lui sont proposées.

Il reste qu'on accepte avec réticence l'assimilation des anamorphes de certains

Eupenicillium avec des espèces de Penicillium connues sous leur seule forme co-

nidienne : ainsi P. velutinum serait l'anamorphe d'E. stolkiae, P. simplissimum

celle d'E. javanicum, etc.; les termes de «similar», «agrees well», «identical», qui

appuient ces propositions ne sont pas absolument satisfaisants, alors qu’il s’agit

d'exprimer les étapes du cycle d'un ascomycéte par ailleurs bien défini. Sans

méconnaitre les tendances actuelles de la systématique en vue de retrouver, sous

la diversité des expressions morphologiques, l'identité d'organismes à cycle com-

plexe (l'holomorphe déguisée sous la téléomorphe ou les anamorphes), il. de-

meure, très probablement, que dans la pratique du laboratoire, un Penicillium

est un Penicillium, et un Eupenicillium reste un Penicillium ascosporé.

C'est pourquoi on souhaiterait vivement que soient réunis en un seul ouvrage

les travaux des équipes du C.B.S. sur les Eupenicillium, les Talaromyces, et les

Penicillium «imparfaitsy dont plusieurs groupes ont déja été révisés par leurs

soins. Nul doute qu'il soit accueilli avec satisfaction, comme «la» monographie

moderne, dans la ligne d'une longue et fructueuse tradition, propre à satisfaire à

la fois l'esprit des chercheurs et la pratique du laboratoire.

Jacqueline Nicot

Source : MNHN., Paris

405

TABLES DU TOME 4 — 1983

ALBERTINI L. — voir SY A.A,

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В1СЕГ.ОЎ/ Н.Е. — $оте с!атр1езз 5ресїеёз оЁСЇйосуЬе. ................. 95

BOIDIN J., LANQUETIN P. & GILLES G,

Columnocystis africana sp. nov. (Basi-

diomycetes, Aphyllophorales) 129

BOIDIN J. — voir LANQUETIN P.

BOISSELIER-DURAYLE М.С. — ое саатах chez Pleurotus

ferulae et Pleurotus nebrodensis > pad seu oon

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{Ван арш doke) Eckl Ne NERO EEE RE 165

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le Sud de la France et le Pays Basque espagnol «eiie nnn 173

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Source : MNHN. Paris

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Dépôt légal n° 11973 -Amprhneie de Montligeon

Sorti de presses le 1. т 1984

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MÉMOIRES HORS-SÉRIE DISPONIBLES

NO 2 (1942). Les matières colorantes des champignons, par 1.

Pastac. 88 pages : 15 F.

N° 3 (1943). Les constituants de la membrane chez les champignons

par R. Ulrich. 44 pages : 15 F.

No 7 (1959). Les champignons et nous (Chroniques) (II), par G.

Becker. 94 pages : 25 F.

мо 8 (1966). Catalogue de la Mycothéque de la Chaire de Crypto-

gamie du Muséum National d'Histoire Naturelle. (I) Micro-

mycétes, Macromycétes (première partie). 68 pages : 25 Е.

N9 9 (1967). Table des Matières (1936-1965) 85 p. 20 F. - (1966-

' 1975) 40p. 10 F.

FLORE MYCOLOGIQUE DE MADAGASCAR ET DÉPENDANCES,

publiée sous la direction de M. Roger HEIM.

Tome |. Les Lactario-Russulés, par Roger HEIM (1938) (épuisé).

Tome Il. Les Rhodophylles, par H. Romagnesi (1941), 164 pages,

46 fig. :60 F.

Tome |l. Les Mycénes, par Georges Métrod (1949). 144 pages,

88 fig. : 60 F.

Tome IV. Les Discomycètes de Madagascar, par Marcelle Le Gal

(1953). 465 pages, 172 fig. : 90 F.

Tome V. Les Urédinées, par Gilbert Bouriquet et J.P. Bassino

(1965). 180 pages, 97 fig., 4 pl. hors-texte : 60 F.

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