SOMMAIRE

J. МЕКСЕ — Hyphomycètes aquatiques. Étude des variations saisonnières

а etu EN Tae 1

C. ASCASO and S. RAPSCH — Influence of prefixation in the study of

the structure of symbionts of Lobaria spp. ................... 13

V.A. ADISA and J.B. OLA — Effects of two fungicides and three environ-

mental factors on the uredospore germination of Puccinia arachidis

E AA e A a и 23

P. MODENESI and L. LAJOLO — Histochemistry of cytoplasmic reserves

in excipular hyphae of Catillaria bouteillei (Desm.) Zahlbr.........

D. LE PICARD, Y. TIRILLY et B. TRIQUE — Antagonistes et hyperpara-

sites du Fulvia fulva (Cooke) Ciferri. Interactions mycéliennes avec les

champignons colonisant les taches de cladosporiose de la tomate . . . .. 43

I.M.K. ISMAIL, A.-A.M. SALAMA, M.I.A. ALI and S.A.-E. OUF — Effect

of some phenolic compounds on spore germination and germ-tube

length of Aspergillus fumigatus and Fusarium oxysporum f. sp. lyco-

PER ma RA Te Re ETES à отв MALOS 51

A. ROLDAN, E. DESCALS y M. HONRUBIA — Notas sobre hifomicetos

acuaticos saprofitos en restos vegetales ...................... 61

Analyses bibliographiques ................................ 67

ООО ОВ АО Ва PR PEN PARU 77

CONTENTS

J. MERCE — Aquatic hyphomycetes. Seasonal variation of fungi flora

(In French)

C. ASCASO and S. RAPSCH — Influence of prefixation in the study of

the structure of symbionts of Lobaria spp. ...........,,...... 13

V.A. ADISA and J.B. OLA — Effects of two fungicides and three environ-

mental factors on the uredospore germination of Puccinia arachidis

A O del ¡ANOTA сИ 23

P. MODENESI and L. LAJOLO — Histochemistry of cytoplasmic reserves

in excipular hyphae of Catillaria bouteillei (Desm.) Zahlbr......... 33

D. LE PICARD, Y. TIRILLY et B. TRIQUE — Antagonists and hyper-

parasites of Fulvia fulva (Cooke) Ciferri. Hyphal interactions with the

fungi which colonize the leaf-mould of tomato (In French) ........ 43

I.M.K. ISMAIL, A.-A.M. SALAMA, M.LA. ALI and S.A.-E. OUF — Effect

of some phenolic compounds on spore germination and germ-tube

length of Aspergillus fumigatus and Fusarium oxysporum f. sp. lyco-

persici. .

A. ROLDAN, E. DESCALS y M. HONRUBIA — Notes about aquatic

hyphomycetes in decaying leaves (In Spanish) ................. 61

Bibliography .........,. 67

Instructions to the authors . . 77

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIIE

MYCOLOGIE

TOME 8 Fascicule 1 1987

Ancienne Revue de Mycologie. Dirigée par Roger HEIM

DIRECTEUR DE LA PUBLICATION : Madame J. NICOT

SECRÉTAIRE DE RÉDACTION : Mme M.C. BOISSELIER ÉDITEUR : A.D.A.C.

Publié avec le concours du Muséum National d'Histoire Naturelle

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE est indexé par : Biological Abstracts, Current Contents,

Publications bibliographiques du CDST (Pascal)

Source : MNHN, Paris

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Cryptogamie, Mycol, 1987, 8 (1) : 1-11 d

HYPHOMYCÈTES AQUATIQUES

ÉTUDE DES VARIATIONS SAISONNIÈRES

D'UNE POPULATION

par Jacques MERCÉ*

RÉSUMÉ — Étude des variations saisonnières de la flore fongique (Hyphomycètes aqua-

tiques) d'un ruisseau de la région toulousaine, en relation avec l’activité sporogénique. Ce

travail met en évidence l'importance de facteurs tels que la température de l'eau et l'apport

de matiére organique lié à la chute des feuilles.

SUMMARY — This is a study on the seasonal variation of fungi flora (Aquatic hyphomy-

cetes) in a small river located near Toulouse, in relation with the sporogenic activity.

This work underlines the importance of such environmental factors as water temperature

and organic matter in put related to the litter production.

MOTS CLES : Mycologie, Hyphomycètes aquatiques, écologie.

Dans sa dernière publication, en 1977, Monsieur LORILLARD! indiquait :

«Dans le but d'étudier les variations saisonnières de la quantité de spores d'hy-

phomycétes aquatiques, j'ai effectué des prélèvements d'écume hebdomadaires

d'octobre 1975 à juin 1976, au ruisseau du Pont d'Auzil».

Il s'agit d’un ruisseler coupant la route D4, à 10 km au sud - sud-ouest de

Toulouse, et à 2 km au nord de l'agglomération de Lacroix-Falgarde. D'une

largeur moyenne de 50 cm, il draîne les eaux d’un vallon creusé dans les molasses

toulousaines. Suivant les zones, le substrat rocheux constitué d'argiles, de mar-

nes, de calcaires et de sables est plus ou moins riche en chacun de ces éléments.

(1) LORILLARD M. — 1977 — Hyphomycétes aquatiques, trois nouvelles espéces pour la

France. Bull. Soc. Hist. Nat. Toulouse 113 (1-2) : 80-82

Je tiens ici à remercier Monsieur Michel LORILLARD qui, aprés avoir quitté l'Universi-

té, m'a fait don de tous ses documents. La présente note a été rédigée d'après les résultats

de ses prélèvements : les échantillons avaient été examinés au fur et à mesure de leur col

lecte, mais les résultats n'en avaient pas été publiés

Laboratoire Botanique et Forestier, Université Paul Sabatier, 39, allées Jules Guesde

31062 Toulouse Cedex, France.

3 3001 002277738

Bibliothèque Centrale Muséum

хи Source : MNHN. Paris

J. MERCÉ

La présence de calcaire semble étre à l'origine des faibles variations du pH.

Ce dernier oscille aux environs de 7, entre 6,7 et 7.2. Les valeurs extrêmes se

situent à 6,5 et 7.5

Le régime des eaux, fortement tributaire des pluies, est très variable. Ce

ruisseau est en général à sec de juillet à septembre, sauf après de très gros orages.

En 1975, l'eau a commencé à couler d'une manière régulière vers la fin sep-

tembre. En hiver, le débit peut être très faible, mais ne semble jamais nul.

La partie supérieure du vallon est occupée par des cultures, Au niveau de la

partie moyenne ce ruisseau traverse un bois de feuillus d'où provient l'essentiel

de la matière végétale. Les essences les plus abondantes dont on trouve le plus

souvent les feuilles dans l'eau sont, par ordre d'importance :

— sur les berges : Alnus glutinosa, Salix alba

dans le bois : Quercus pedunculata, Quercus pubescens, Acer campestris

Sambucus nigra, Corylus avellana, Crataegus monogyna

Si des débris végétaux tombent dans l'eau toute l'année, l'essentiel de l'apport

en matière organique a lieu à l'automne au moment de la chute des feuilles.

Celle-ci a lieu d'octobre à décembre, l'essentiel de la défoliation se produisant

en novembre

Techniques utilisées

D'octobre 1975 à la fin juin 1976, il a été procédé à un prélèvement d'écume

hebdomadaire, ainsi qu'à une mesure du pH et de la température de l'eau.

La détermination des espèces a été réalisée par observation microscopique

dans une cellule de THOMAS, ce qui a permis l'examen de volumes connus

d'échantillon. Les comptages et les identifications de spores ont été effectués sur

1 mm? d'eau provenant de la condensation de l'écume dans le bocal où on l'avait

recueillie. L'écume récoltée étant plus ou moins dense, plus ou moins stable, le

nombre de spores piégées est variable suivant les endroits, et les chiffres obtenus

seraient difficilement comparables d'un relevé à l'autre. Pour palier cet incon-

vénient, les prélévements ont été effectués, chaque fois, en récoltant en diffé-

rents points du ruisseau, sur une centaine de mètres. Ces échantillons, qui oc-

cupent un volume important à l’état d'écume, sont mélangés une fois redevenus

liquides. Les échantillons réalisés suivant cette méthode semblent assez repré-

sentatifs.

Dans la mesure où il a été effectué un prélèvement par semaine et où les

différents résultats ont été regroupés par mois, les valeurs mensuelles obtenues

sont un reflet assez exact de la réalité.

L'ensemble de ce travail a permis de mieux connaître deux aspects de la

flore mycologique de ce ruisseau :

— d'une part, l'ensemble de ces relevés a permis de dresser un inventaire

mensuel et annuel des espéces.

— d'autre. part, l'étude de la quantité de spores émises donne une idée de

l'importance et de la variation de l'activité de ces différents champignons au

cours de l'année.

Source : MNHN, Paris

HYPHOMYCÈTES AQUATIQUES : VARIATIONS SAISONNIÈRES +

PREMIÈRE PARTIE

LA FLORE FONGIQUE

VARIATIONS DE LA COMPOSITION

1- Importance des variations et recherche des causes :

L'examen du tableau 1 montre que les 19 espèces inventoriées dans ce ruis-

seau ne sont pas présentes dans celui-ci tout au long de l'année. La figure 1

montre les variations du nombre d'espèces identifiées chaque mois, nombre

variant de 5 à 12. Deux facteurs importants sont à l'origine de ces variations :

— L'apport de matiére végétale.

Ce dernier, dà essentiellement aux feuilles mortes, a lieu en novembre, ce qui

explique l'augmentation du nombre des espéces en décembre, 20 à 30 jours

après. Ce décalage de 3 à 4 semaines apparaît nettement dans l'examen des

relevés hebdomadaires. Cette matière végétale reste présente dans le ruisseau

jusqu'au printemps.

La température de l'eau.

Plusieurs auteurs ont déjà signalé l'importance de la température de l'eau

16°

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Oct Nov Déc Jan Fév Mars Avril Mai Juin

Figure 1 — Relation entre la température de l'eau et le nombre d'espéces observées chaque

mois.

Figure 1 — Relationship between water temperature and species number observed every

month.

Source : MNHN. Paris

4 J. MERCE

Oct Nov Déc Jan Fév Mar Avr Mai Juin

Matospora acuminata ә 2 94 57 17 526 48 83 30

Anguillospora crassa a

Anguillospora gigantea т а

Anguillospora longissima 2 211 5

Anguillospora pseudolongissima 2 AS

Articulospora moni li forma

Bacillospora aquatica + +

Clavatospora longibrachiata +

Clavatospora stellata 2 E

Clavatospora tentacula 3 2

Heliscus lugdunensis 2 а 416 224400

Lemonniera aquatica +

Lemonniera terrestris 2 3

Lunulospora curvula +

Tetracladium marchalianum 15757 1057 925: aL

Tetracladium maxilliformis

Tetracladium setigerum Suma

Tricladium angulatum о) 177 50% 15:22 |26. o6, 240: 35.

Tricladium splendens р з A

Nombre d'espèces 19 PRG RC GR ЕЮ ET)

Nombre total de spores par 24 16 229 105 35 127 163 190 123

mm3 d'échantillon

Tableau 1 — Nombre de conidies observées chaque mois par mm? d'échantillon

Table 1 — Conidium number observed every month per mm? sample.

sur l'activité fongique et sur la production des spores (HYNES, 1972; FISHER &

LIKENS, 1973; IQBAL & WEBSTER, 1973; IVERSEN, 1973; SUBERKROPP

& KLUG, 1976; GONCZOL, 1976; BARLOCHER & KENDRICK, 1974, 1976)

et, sur ce méme ruisseau, LORILLARD (1974a, b).

Sur la figure 1, j'ai indiqué, en plus du nombre d'espéces identifiées chaque

mois, la température moyenne de l'eau.

Source : MNHN, Paris

HYPHOMYCÈTES AQUATIQUES : VARIATIONS SAISONNIÈRES 5

L'abaissement des températures en décembre se traduit dès janvier par une

diminution du nombre des espèces encore en activité. Le phénomène se poursuit

en février. On observe, sur le graphique, le décalage d'un mois qui existe entre

les deux courbes, décalage qui se poursuit à la fin de l'hiver et au printemps.

Le nombre des espèces atteint son maximum en avril, dês que l'eau se ré-

chauffe et dépasse les 9°C, ce qui fut le cas cette année là dès le mois de mars.

On assiste ensuite à une légère diminution du nombre des espèces présentes, ainsi

qu'à un ralentissement de leur sporogénèse, phénomène que nous étudierons

dans la deuxième partie. La température de l'eau n'est plus seule en cause, le

stock de matière végétale disponible diminue rapidement, ceci pour plusieurs

raisons :

-la décomposition de la matière est déjà trés avancée,

la microfaune aquatique en a utilisé une grande partie,

-les crues de printemps entraînent beaucoup de débris végétaux et diminuent

ainsi considérablement la quantité de substrat utilisable par les hyphomycétes,

ce qui limite leur développement.

L- Période d'activité des différentes espèces

Certaines espèces, présentes toute l'année, s'observent dans la plupart des

relevés. C'est le cas de : Alatospora acuminata Ingold, Heliscus lugdunensis Sacc.

et Therry, Tetracladium marchalianum de Wild., et Tricladium angulatum

Ingold.

D'autres sont éliminées par des températures trop basses. Ainsi des tempé-

ratures supérieures à 8-9°C semblent nécessaires à : Anguillospora longissima

(de Wild.) Ingold, Anguillospora pseudolongissima Ranz, Clavatospora stellata

(Ingold et Cox) Nilson ex Marvanova et Nilson, et Tricladium splendens Ingold.

Certaines espèces semblent étre nettement plus thermophiles. C'est le cas

de Clavatospora tentacula (Umphlett) Nilsson qui n'apparaît que lorsque la

température de l'eau est supérieure à 12°C.

— A l'opposé une espèce comme Anguillospora gigantea Ranzoni disparaît des

relevés dès que la température de l'eau est supérieure à 10°C. Il se peut que des tem-

pératures supérieures ne soient pas défavorables au développement du champignon,

mais qu'elles deviennent un facteur limitant pour la sporulation. À moins que

l'arrét de la sporulation soit di a la disparition de certains éléments nutritifs

indispensables à ce champignon.

Deux espèces: Lemonniera terrestris Tubaki et Tetracladium setigerum

(Grove) Ingold, n'apparaissent qu'à la fin du printemps, quand la température de

l'eau est supérieure à 10-11°C, Cependant, il n’est pas certain que les basses tem-

pératures soient seules en cause comme facteur limitant. Si c'était le cas, ces

champignons se développeraient aussi à l'automne, quand les eaux ne sont pas

encore froides, à moins que leur développement soit trop lent pour qu'ils aient le

temps de sporuler. Il est possible aussi qu'ils ne puissent s'installer sur le matériel

végétal frais, et qu'ils recherchent des débris déjà partiellement dégradés.

Source : MNHN, Paris

6 J. MERCÉ

— Plusieurs champignons n'apparaissent que çà et là dans les relevés, trop

rarement pour que l'on puisse en tirer des conclusions. Ces espèces peuvent

étre qualifiées de sporadiques. C'est le cas de : Anguillospora crassa Ingold,

Articulospora moniliforma Ranz, Bacillospora aquatica Nilsson, Clavatospora

longibrachiata (Ingold) Nilsson ex Marvanova et Nilsson, Lemonniera aquatica

de Wild., Lunulospora curvula Ingold, et Tetracladium maxilliformis (Rost.)

Ingold.

DEUXIEME PARTIE

L'ACTIVITÉ SPOROGÉNIQUE

ET SES VARIATIONS MENSUELLES

1 - Étude globale.

Relations avec l'apport de matière organique et la température de l'eau.

L'examen de la figure 2 montre que la quantité de spores observée dans

1 mm? d'écume varie beaucoup selon les mois. Faible en octobre et novembre, le

nombre de spores augmente brutalement en décembre, diminue jusqu'en février,

16°F - 250Ғ т

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Oct Nov — Déc Jan Fév Mars Avril Mai Juin

Figure 2 — Relation entre la température de l'eau et le nombre de spores observées par

mm? d'échantillon.

Figure 2 — Relationship between water temperature and spore number observed every

month per mm? sample.

Source : MNHN. Paris

HYPHOMYCETES AQUATIQUES ; VARIATIONS SAISONNIERES 7

puis réaugmente de mars à mai pour diminuer en juin. Ces variations sont étroi-

tement liées aux deux facteurs déjà cités dans la première partie, à savoir la

chute des feuilles et les variations de la température de l'eau.

La chute des feuilles représente l'apport essentiel de matiére végétale. Un

mois aprés, le nombre de spores augmente dans des proportions trés importan-

tes : de 16 à 229, soit 14 fois plus. Dans le méme temps, on passe de 6 à 10

espéces soit environ 2 fois plus. Le phénoméne marquant n'est pas tellement

l'augmentation du nombre des espèces que l'accroissement de l'activité sporo-

gêne des champignons. L'examen du tableau 1 montre que ce sont les hypho-

mycètes déjà présents en octobre et novembre qui voient leur sporulation aug-

menter brutalement. Ceux qui apparaissent à ce moment là ne sont que très

faiblement représentés.

— Les variations de la température de l'eau influencent fortement la produc-

tion des spores. En octobre, cette température est relativement élevée (13,5"C),

mais le nombre de spores reste réduit. En novembre, au moment de la chute des

feuilles, l'abaissement de la température à 9°C n'empéche pas l'activité des

champignons de devenir importante à la faveur de l'apport de matière végétale.

Cela se traduit, 20 à 30 jours aprés, par une forte production de spores.

Les températures assez basses des eaux en décembre et janvier entrainent

une réduction de l'activité fongique, qui reprend dès que la température s'élève.

Il faut noter, ici aussi, le décalage d'environ un mois qui existe entre un phéno-

mène stimulant (apport de matière végétale) où inhibant (abaissement de la

température) et la production des spores. Ainsi les basses températures de l'eau

de décembre et janvier se traduisent par une diminution d'activité en janvier

et février.

L'augmentation régulière des températures au cours des mois suivants se tra-

y B!

duit par une reprise de l'activité des champignons, ce que nous observons jus-

P a Pg T ack

qu'en mai. La baisse enregistrée en juin peut être attribuée comme je l'ai indiqué

dans la première partie, à une diminution des stocks de matière organique

dns lang P 8

disponible en raison de la dégradation réalisée par les champignons et par la

faune aquatique et du nettoyage opéré par les crues.

II- Examen de quelques cas particuliers.

BÄRLOCHER & KENDRICK (1981), ainsi que d'autres auteurs, distinguent

deux parties dans la masse végétale qui tombe dans leau et qui constitue la

source de nourriture pour les hyphomycétes :

— une partie dure, difficile à dégrader, composée de débris de bois, des pé-

tioles et des nervures des feuilles.

— une partie tendre, facile à utiliser, constituée essentiellement par les limbes

des feuilles. Cette fraction, plus nutritive, contient moins de cellulose, de lignine,

de tannins, etc... et plus de protéines. C'est elle qui est également la première

utilisée par toute la microfaune aquatique.

Ces auteurs ont observé que certaines espèces se développent préférentielle-

ment sur l'un ou l'autre des substrats. Ainsi Tricladium angulatum prolifère très

Source : MNHN, Paris

8 J. MERCÉ

rapidement sur les limbes et légèrement sur les nervures. Au bout de 2 à 3

semaines, ce champignon s'avère très abondant alors qu'Heliscus lugdunensis, qui

semble se limiter aux parties dures n'a qu'un développement réduit. Au bout de

3 mois, les parties tendres (limbe) ont disparues, dégradées par Tricladium

et consommées par la microfaune. Ce champignon devient de plus en plus rare

alors qu'Heliscus lugdunensis, cantonné sur les parties dures, devient, lui, de

plus en plus abondant.

Les observations sur le ruisseau de Ramade confirment celles réalisées par

BARLOCHER & KENDRICK (1975, 1976, 1981) dans des rivières aux eaux

plus froides (Suisse, Canada).

— Heliscus lugdunensis.

L'examen du tableau 1 et de la figure 3 montre que ce champignon, présent

toute l'année, est assez peu stimulé par l'apport de matière organique. L'hiver,

son activité semble ralentie par l'abaissement de la température de l'eau. La

production de spores devient importante en mars et avril, puis diminue rapide-

ment. L'étude des quantités de spores émises montre que ce champignon a be-

soin de plusieurs mois pour dégrader la matière végétale et pour fructifier.

La diminution du nombre de spores en mai et juin est liée en grande partie

à la diminution du stock de matière organique.

—— Hleliscus lugdunensis

—— Tricladium angulatum

Nombre de spores par mm3

4— Chute des feuilles

Oct Nov Déc Jan év Mars Avr Mai Juin

Figure 3 — Nombre de spores d'Heliscus lugdunensis et de Tricladium angulatum observées

chaque mois

Figure 3 — Heliscus lugdunensis and Tricladium angulatum spore number observed every

month.

— Tricladium angulatum.

L'examen du tableau 1 et de la figure 3 montre que ce champignon, présent

toute l'année, se développe trés rapidement aprés l'apport de matiére organique.

Source : MNHN. Paris

HYPHOMYCÈTES AQUATIQUES : VARIATIONS SAISONNIÈRES 9

La production de spores devient trés importante en décembre (l'examen des

relevés hebdomadaires montre qu'elle augmente dés la fin novembre et culmine

début décembre), diminue fortement durant la période froide (janvier et février)

et redevient importante au printemps dés que la température de l'eau dépasse

8à9'"C.

Le maximum de décembre est dü au fait que ce champignon se développe

surtout sur les limbes des feuilles (BÂRLOCHER & KENDRICH, 1981). L'at-

taque de ces parties tendres est facile, ce qui permet au champignon d'atteindre

très vite un développement important.

Le maximum du printemps est plus difficile à expliquer : les feuilles sont

déjà fortement dégradées et les limbes ont en grande partie disparus. Je pense

que ce champignon doit s'attaquer alors à d'autres fragments végétaux.

— Tetracladium marcbalianum.

L'examen du tableau 1 et de la figure 4 montre une courbe semblable à celle

de Tricladium angulatum. Comme Tricladium, Tetracladium doit se développer

rapidement à l'automne sur les limbes des feuilles, et utiliser au printemps les

débris végétaux restant.

— Mlatospora acuminata

= ‘etracladium marchal ianum

‘Nombre de spores par mm3

4— Chute des feuilles

Oct Nov Déc Jan Fév Mars Avril Mai Juin

Figure 4 — Nombre de spores d'Alatospora acuminata et de Tetracladium marchalianum

observées chaque mois.

Figure 4 — Alatospora acuminata and Tetracladium marchalianum spore number observed

every month.

Source : MNHN, Paris

10 J. MERCÉ

Ces deux champignons semblent avoir des exigences écologiques et des ryth-

mes d'activité semblables.

— Alatospora acuminata.

L'examen du tableau 1 et de la figure 4 montre que cette espéce est présente

dans tous les relevés. Peu abondant au début de l'automne, ce champignon voit

son activité augmenter trés fortement aprés la chute des feuilles. Les basses

températures ralentissent la production des spores, qui reste cependant soute-

nue. Le nombre de spores observées en mai est presque aussi important que celui

de décembre. La baisse observée en juin est en relation avec la diminution du

stock de matière organique. Comme Tricladium angulatum et Tetracladium

marchalianum, cet hyphomycéte doit se développer préférentiellement sur les

limbes, puis attaquer ensuite la matière végétale restante.

— J'ai signalé, dans la première partie qu'un certain nombre d'espèces étaient

éliminées par des températures inférieures à 8-9°C. C'est le cas de : Anguillo-

spora longissima, Anguillospora pseudolongissima, Clavatospora stellata, et

Tricladium splendens.

L'examen du tableau 1 montre que le nombre de spores observées reste tou-

jours très faible, surtout si on le compare aux valeurs trouvées pour les espèces

précédentes.

CONCLUSIONS

Les résultats de cette étude basée sur 40 relevés réalisés pendant neuf mois

sont les suivants :

1 - Le nombre important des relevés a permis de dresser une liste assez complète

des espèces vivant dans ce ruisseau (actuellement, 19 espèces recensées).

2- La fréquence des relevés a permis d'étudier le rythme d'activité des diffé-

rentes espéces en faisant ressortir le róle prépondérant de quatre d'entre elles :

Alatospora acuminata, Heliscus lugdunensis, Tetracladium marchalianum et

Tricladium angulatum.

3 - Nous avons mis en évidence l'importance de la période de chute des feuilles.

En fournissant une masse de matiére organique, la défoliation des arbres per-

met le développement d'un grand nombre d'espéces.

4 - Nous avons également précisé le róle joué par la température de l'eau, ainsi

que le décalage (de l'ordre du mois) qui existe entre les variations de la tem-

pérature et l'apparition ou la disparition de certains hyphomycètes.

BIBLIOGRAPHIE

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during processing in a woodland stream. Ecology 57 : 707-719.

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1987, 8 (1) : 13:21 13

INFLUENCE OF PREFIXATION IN THE STUDY

OF THE STRUCTURE OF SYMBIONTS OF LOBARIA SPP.

by C. ASCASO and S. RAPSCH*

SUMMARY. — In plants in general, the type of buffer used in fixation is apparently more

important for changes in ultrastructural preservation than the type of fixing solution. In

lichen thalli, it has been observed that glutaraldehyde used with phosphate buffer produces

artefacts in the Myrmecia algal cells. The aim, therefore, was to determine whether these

changes occur with different buffer concentrations, and to find another fixation method

that does not produce these artefacts. In the present study, different concentrations of

phosphate buffer are tried while the occurring ultrastructural changes are observed. The

most important are cellular plasmolysis, presence of dense bodies that sometimes have a

myelinic shape in the cytoplasm, and presence of dense half-moon structures near the plas-

malemma. These changes occur from the lowest to the highest buffer concentration. Faced

with the necessity to discard the buffer as a fixing vehicle in certain lichen thalli with

Myrmecia phycobiont, the use of glutaraldehyde in bidistilled water is tested in two diffe-

rent conditions. This fixing procedure is fairly optimal when the algal symbiont is studied,

whereas fixation in glutaraldehyde-buffer is more appropriate for the fungal component.

RESUME. — Dans les plantes en général, pour la préservation des changements ultrastructu-

raux, le type de tampon utilisé pour la fixation est apparemment plus important que le type

de solution de fixation. Pour les thalles lichéniques, il a été observé que la glutaraldéhyde

utilisée avec du tampon phosphate, produit des artéfacts dans les cellules algales de Myrme-

cia. Il faut donc déterminer si ces changements apparaissent avec des concentrations diffé-

rentes de tampon et trouver une autre méthode de fixation ne produisant pas d'artéfacts

Dans cette étude, différentes concentrations de tampon phosphate ont été essayées et nous

avons observé les changements structuraux en résultant. Les changements les plus impor-

tants sont des plasmolyses cellulaires , la présence de corps denses présentant parfois une

forme myélinique dans le cytoplasme, et la présence de structures denses en demi-lune près

du plasmalemme. Leur apparition est corrélée avec l'augmentation de 1а concentration

du tampon. Face à la nécessité d'éliminer le tampon pour la fixation de certains thalles

lichéniques ayant le Myrmecia comme phycobionte, nous avons testé la glutaraldéhyde dans

l'eau bidistillée sous deux conditions différentes. Cette méthode de fixation est optimale

lorsque le symbionte algal est étudié, tandis que la fixation par la glutaraldéhyde dans le

tampon est plus appropriée pour le composant fongique.

KEY WORDS : ultrastructure, glutaraldehyde, lichenized fungi, Lobaria, Myrmecia, myco-

biont, phycobiont.

* Instituto de Edafoligía y Biología Vegetal, c/ Serrano n9 115 bis. 28006 Madrid (Spain).

Source : MNHN, Paris

Plate I — Phycobiont (Myrmecia) in Lobaria amplissima. 1 : Samples fixed in glutaraldehyde

in Sorensen buffer 0.2 pH 7.2. Note : halfmoon structures beneath plasmalemma (ar-

rows). 2 : Samples fixed in glutaraldehyde in Sorensen buffer 0.1M pH 7.2. 3 : Samples

fixed in glutaraldehyde in Sorensen buffer 0.05M pH 7.2. Note the presence of the sto-

rage droplets at the bottom

Symbols — db : dark body, N : nucleus, rm : remainder membrane, sd : storage droplet,

Source : MNHN, Paris.

ULTRASTRUCTURE OF LOBARIA SYMBIONTS 15

INTRODUCTION

Few researchers have directed their attention to the development of appro-

priate methods to process plant material for transmission electron microscopy

(COETZEE & VAN DER MERWE, 1984). During fixation, the differential

permeability of the cell membranes decreases (IQBAL & WEAKLEY, 1974)

and the presence of the pressure potential in plant cells may cause the loss of

cell substance through this fixed membrane if enough pressure gradients exist.

With plants in general, it seems that the type of buffer used for fixation is appa-

rently more important in ultrastructural preservation than the type of fixing

solution used (GOODCHILD & CRAIG, 1982).

In the preparation of lichen thalli for TEM, HOLOPAINEN (1982) observed

that the effect of phosphate buffer concentration on ultrastructure varies with

the time of the year. ASCASO & al. (1985) found that glutaraldehyde at 3.25%

in phosphate buffer 0.05M produced changes in the ultrastructure of Myrmecia

in Lobaria amplissima, which did not appear when the thallus was fixed in gluta-

raldehyde of the same concentration in water. These changes include varying

size and density of the plasmalemma particles.

Before definitively discarding phosphate buffer as a vehicle for the glutaral-

dehyde fixing solution, the aim of the present study is to determine the influ-

ence of the buffer at different concentrations on the Myrmecia phycobiont in

two lichen thalli. After observing (ASCASO & al., 1985) that the fixation in

glutaraldehyde-water seems to be the most adequate, two different types of

fixation were tried to decide upon the most appropriate.

MATERIAL AND METHOD.

Thalli of Lobaria amplissima (Scop.) Forss. and L. pulmonaria (L.) Hoffm.

were collected in April in Montejo de la Sierra near Madrid (Spain). The lichen

samples were transported to the laboratory in polythene bags and immediately

prefixed. The % water content by weight was 40 % and 35 % respectively, im-

mediately prior to fixation.

Small sections of thalli, from 2-3 mm behind the lobe tips, were cut into

small pieces and placed in 3.25 % glutaraldehyde in either 0.05 M, 0.1 M, 0.2 M

phosphate buffer SORENSEN pH 7.2 or in distilled water. The fixation in glu-

taraldehyde with distilled water was made at the resulting pH 3.9 or after in-

creasing the pH of the solution to 7.2.

Planche I — Phycobionte (Myrmecia) du Lobaria amplissima. 1 : Échantillons fixés par la

glutaraldéhyde dans le tampon Sorensen 0,2M pH 7,2. Noter les structures en demi-

lunes au-dessus du plasmalemme (flèches). 2 : Échantillons fixés par la glutaraldéhyde

dans le tampon Sorensen 0,1M pH 7,2. 3 : Échantillons fixés par la glutaraldéhyde dans

le tampon Sorensen 0,05M pH 7,2. Noter la présence de gouttelettes de réserve en bas.

Symboles — db : corps noir, N: noyau, rm: membrane résiduelle, sd: gouttelette de réserve.

Source : MNHN, Paris

16 C. ASCASO and S. RAPSCH

Plate П — 1 : Mycobiont in Lobaria amplissima. Samples fixed in glutaraldehyde in Sorensen

buffer 0.1M. 2 : Phycobiont (Myrmecia) in Lobaria amplissima. Samples fixed in gluta-

raldehyde in distilled water. 3 : The same sample as in fig. 2, but fixed in glutaraldehyde-

water at pH 7.2. Symbols — cc: concentric body, Ch: chloroplast, m : mitochondria,

М: noyau, sb : storage body, sd : storage droplet, v : vacuole.

Source : MNHN, Paris

ULTRASTRUCTURE OF LOBARIA SYMBIONTS 17

This prefixation was carried out at 4°C for 3 hours. The samples were then

washed overnight in the corresponding buffer or water and postfixed in 1%

osmium tetroxide, dehydrated in 30%, 50 %, 70 % and 100 % ethanol, embed-

ded in SPURR resin (1969), sectioned and stained with REYNOLDS lead citrate

(1963). Ultrathin sections were examined with the Philips EM 300 electron

microscope. For image analysis, a MOP-Videoplan (Kontron) semiautomatic

image analyser was used.

RESULTS AND DISCUSSION

The samples fixed in glutaraldehyde with 0.2 M buffer, show remarkable

changes in the cytoplasm of the algal symbiont Myrmecia (pl. I, 1), both in the

Lobaria amplissima and the L. pulmonaria thalli. In the cytoplasm area between

the chloroplastic membrane and the nucleus, many dense bodies appear, some

of which, when observed closely, look like myelinic shapes. Next to the plasma-

lemma, there are electron-dense structures that take the form of halfmoons.

A high degree of cell plasmolysis is also observed, and in some areas, there are

membraneous remains in the empty space between the plasmalemma and the

wall, which is a consequence of the plasmolysis. There also seems to be a certain

degree of weakening (or perhaps disorganization) of the thylakoid laminas inside

the chloroplast.

When glutaraldehyde diluted in 0.1 M buffer is used, the results obtained

for the phycobiont (pl. 1, 2) are similar, though of greater intensity since the

different algal cells are affected in different ways.

The ultrastructural preservation is not adequate even when the buffer is

used at a concentration of 0.05 M. In this case, there are fewer half-moon

structures near the plasmalemma, while sizable storage droplets with high elec-

tronic density (pl. I, 3) are found. In the cytoplast spaces near the chloroplast

still appear structures similar to myelinic shapes.

These changes seem to be due to movements of cell lipids in the phycobiont

caused by the prefixation with buffer as a vehicle for glutaraldehyde. The lipids

are stirred up during prefixation and are later fixed in the course of post-fixation

with osmium tetroxide. As they are placed in certain areas of the cytoplasm,

they give rise to the type of artefacts observed.

This is as far as the cell lipids are concerned. The effect that may exist on

sugars, aminoacids and proteins is not known. According to COETZEE & VAN

Planche II — 1 :Mycobionte du Lobaria amplissima. Echantillons fixés par la glutaraldéhyde

dans le tampon Sorensen 0,1M. 2 : Phycobionte (Myrmecía) du Lobaria amplissima.

Échantillons fixés par la glutaraldéhyde dans l'eau distillée. 3 : Même échantillon que la

fig. 2, mais fixé par la glutaraldéhyde dans l'eau, à pH 7,2. Symboles — cc : corps con-

centrique, Ch: chloroplaste, m: mitochondrie, N: noyau, sb: corps de réserve, sd:

gouttelette de réserve, v : vacuole.

Source : MNHN, Paris

18 C. ASCASO and S. RAPSCH

Plate III — 1 : Mycobiont in Lobaria amplissima fixed in glutaraldehyde in distilled water.

2 : Detail of the sample. 3 : Mycobiont in Lobaria pulmonaria. Note the dots or little

globules in the cytoplasm (arrows). Fixed as in fig. 1, Symbols — A: Algae, cc: concen-

tric body, H: hyphae, m: mitochondria, N : nucleus, sb : storage body, v : vacuole.

Source : MNHN, Paris

ULTRASTRUCTURE OF LOBARIA SYMBIONTS 19

DER MERWE (1984), the Na-Na phosphate buffer, even if it produces the

lowest extraction per cent, induces a certain degree of extraction in these sub-

stances.

The half moon structures appear more frequently with increase of the buffer

concentration; they seem to be very similar in electronic density and form to

the dark polyphosphate bodies observed by HOLOPAINEN (1981) in Trebouxia

of Alectoria capillaris. It is probable that the similarity between both structures

is due not only to morphological but to chemical composition as well since if

the dark polyphosphate bodies have a high phosphorus content, it may also be

high in the half-moon structures in Myrmecia fixed with phosphate buffer.

In opposition to what was observed in algal cells, the general resolution of

the organelles in the fungal cells is good in the ultrastructural study carried

out with glutaraldehyde in phosphate buffer (pl. II, 1). No changes in the nu

cleus, mitochondria, vacuoles or cytoplasmic storage bodies seem to exist.

The concentric bodies also have a normal appearance.

In samples prefixed in glutaraldehyde in bidistilled water, the phycobiont

appears as shown in plate Il, 2. No movement of lipids during prefixation is

perceptible that may produce myelinic structures, nor are there half-moon

structures near the plasmalemma. The thylakoid laminas look normal, as well

as the reserve bodies found near the plasmalemma. In the area near the nucleus,

there are vacuoles and mitochondria. These have an empty space inside which

is surrounded by mitochondrial crests.

These results are similar to the ones obtained for the same species of Myrme-

cia phycobiont in other studies, in which a similar prefixation procedure was

tested (ASCASO & al., 1985; ASCASO & al., 1986). As it can be observed in

all microphotographs, there is no important cell plasmolysis.

When the same fixation is carried out on the samples, but raising the pH of

the glutaraldehyde-water mixture to 7.2, the ultrastructural preservation is the

one shown in plate II, 3. Through simple observation by TEM, this preservation

(pl. 11, 3) does not appear to be as good as the previous one (pl. Il, 2), among

other reasons, because of the electron-dense appearance of the storage droplets

near the plasmalemma. Image analysis techniques were used to quantify these

results (Tab. 1).

Raising the pH to 7.2 in the glutaraldehyde-water mixture causes greater

plasmolysis (2.8 um? of space between plasmalemma and wall) as was found

in the glutaraldehyde - distilled water mixture. In the first case, the size of the

protoplast also increases. There are some dense bodies in the cytoplasm (2.77 %)

as well as half-moon structures under the plasmalemma (5.65 %).

Planche HII — 1 : Mycobionte du Lobaria amplissima fixé par la glutaraldéhyde dans l'eau

distillée, 2 : Détail du méme échantillon. 3 : Mycobionte du Lobaria pulmonaria. Noter

les taches ou les petits globules dans le cytoplasme (fléches). Méme fixation que pour

la fig. 1. Symboles — A: Algue, cc : corps concentrique, H: hyphe, m: mitochondrie,

N : noyau, sb : corps de réserve, v : vacuole.

Source : MNHN. Paris

20 C. ASCASO and S. RAPSCH

Glut+H,0 Glut+H,0

pH. 3.9 pH7.2 р<

Average area of protoplast

(pm2) . 21.8*6.4 26.4*8.6 0.0

Area between plasmalemma

and wall (pm?) 1.1*0.4 2.8*1.4 0.0

Storage body area as per

cent of protoplast area 5.07 4.38

Dark body (1) area as per

cent of protoplast area 2.77

Half-moon shaped bodies

under plasmalemma 5.65

Table 1 — Measures of the different parameters in Myrmecia of Lobaria amplissima, prefixed

in glutaraldehyde in water at resulting pH, or at pH raised to 7.2. (1) Myelinic shapes.

Tableau 1 — Mesures des différents paramètres pour le Myrmecia du Lobaria amplissima,

préfixé par la glutaraldéhyde dans l'eau, au pH résultant, où à pH 7.2. (1) Formes

myéliniques.

This indicates that prefixation in glutaraldehyde-water is worse when the pH

of the mixture is raised to 7.2. There seems to be a relationship between the

presence of storage droplets and of half-moon structures. When the fixation is

not very good, as in the case of glutaraldehyde-water pH 7.2, or is bad, as in

the case of glutaraldehyde-buffer, the amount of structures counted as storage

droplets becomes lower, while half-moon structures appear under the plasma-

lemma. This seems to indicate that the reserve bodies collapse. are transformed

and become denser when fixation is bad.

Thus, the most appropriate fixation for the Myrmecia phycobiont in these

thalli is glutaraldehyde-distilled water.

The effect of this type of fixation on the lichen mycobiont has been studied.

In the mycobiont of L. amplissima, a vesiculation is observed all along the hypha

(pl. HIT, 1). This vesiculation is not perceptible in the hyphae fixed in gluta

raldehyde in phosphate buffer (pl. II, 1). Pl. TII, 2, shows the ultrastructural

changes that occur apart from high vacuolization. In the vacuoles. dense bodies

are seen whose origin and structure are unknown. There is a possibility thar in

the mycobiont these may also correspond to lipid deposits. They do not have

myelinic shapes like in the phycobiont. possibly due to the fact that in the

phycobiont they may largely come from the fine thylakoid laminas. while this

cannot be the case in the mycobiont which does not have such membranes

Apart from the vacuoles and the dense deposits inside. a change in the cyto-

plasmic cytogel is observed, as well as in the nucleus, and even in the reserve

bodies that are typical for these lichenized hyphae.

Source : MNHN, Paris

ULTRASTRUCTURE OF LOBARIA SYMBIONTS 21

In the mycobiont of L. pulmonaria (pl. III, 3), there are also ultrastructural

changes due to the effect of this fixation. They are of a very different nature

and basically consist of the presence of dense points which sometimes reach

the size of small globules in the cytoplasm.

From these observations on the mycobiont of L. amplissima and L. pulmo-

naria it can be concluded that although the glutaraldehyde fixation in water may

be adequate for the Myrmecia phycobiont, it is not appropriate for the myco-

biont of both thalli. The mycobionts of the two species react differently to the

fixing solution.

ACKNOWLEDGEMENTS. — We wish to thank Teresa CARNOTA & Fernando PINTO

for their technical assistance. The study was financed by the «Comisión Asesora de Investi-

gación Científica y Técnica de la Presidencia del Gobierno» (the Government Advisory

Commission for Scientific and Technical Research) as Project n° 169/85.

REFERENCES

ASCASO C., BROWN D.H. and RAPSCH S., 1985 — Ultrastructural Studies of Desiccated

Lichens, In : DH. BROWN, Lichen Physiology and Cell Biology. New York and London:

Plenum Press. Pp. 259-274.

ASCASO C., BROWN D.H. and RAPSCH S., 1986 — The Ultrastructure of the phycobiont

of desiccated and hydrated lichens. Lichenologist 18 : 37-46

COETZEE J. and VAN DER MERWE C.F., 1984 — Extraction of substances during gluta-

raldehy de fixation of plant cells. J. Microscopy 135 : 147-158.

GOODCHILD D.J. and CRAIG S., 1982 — Structural aspects of protein accumulation in

developing pea cotyledons. IV. Effects of preparative procedures on ultrastructural inte-

grity. Austral. J. Pl. Physiol, 9 : 689-704.

HOLOPAINEN TH, 1981 — Alterations in the Ultrastructure of epiphytic lichens Hypo

gymnia physodes and Alectoria capillaris caused by air pollution. Silva Fennica 15 :

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HOLOPAINEN T.H., 1982 — Summer versus winter condition of the ultrastructure of the

epiphytic lichens Bryoria capillaris and Hypogymnia physodes in central Finland. Ann.

Bot. Fenn. 19 : 39-52.

IQBAL S.J. and WEAKLEY B.S., 1974 — The effects of different preparative procedures on

the ultrastructure of the hamster ovary. I. Effects of various fixative solutions on ovarian

oocytes and their granulosa cells. Histochemistry 38 : 95-122.

REYNOLDS E.S., 1963 — The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain

in electron microscopy. J. Cell Biol. 17 : 208-212.

SPURR A.R., 1969 — A low epoxy resin embedding medium for electron microscopy

J. Ultrastruct. Res. 26 : 3143.

Source : MNHN, Paris

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1987, 8 (1) : 23-32 23

EFFECTS OF TWO FUNGICIDES

AND THREE ENVIRONMENTAL FACTORS

ON THE UREDOSPORE GERMINATION

OF PUCCINIA ARACHIDIS SPEG.

by V.A. ADISA and J.B. OLA*

ABSTRACT. — The process of germination of uredospores of Puccinia arachidis causing

the rust of groundnut, Arachis hypogaea, was studied on glass slide, malt extract agar and

host epidermal strip. The effects of spore concentration, light, temperature and relative

humidity on spore germination of the fungus were also investigated. The emergence of germ

tube occurred after 9 hrs, 12 hrs and 21 hrs on malt agar, host epidermis and glass slide

respectively, while maximum germination was recorded after 18 hrs, 25 hrs and 35 hrs on

the three substrates in the same order. Germination was highest on malt agar and least on

glass slide. Optimum spore germination occurred on malt agar at 25°C, 89 % relative humi

dity, 600 Lux and spore concentration of 1.10% spores/ml. Benlate gave a better inhibitory

effect than brestan when tried against the spore germination.

RÉSUMÉ. — Étude du processus de germination des urédospores de Puccinia arachidis,

provoquant la rouille des arachides : Arachidis hypogaea, sur lame de verre, sur milieu

malt-agar et sur épiderme de l'hôte. Les effets de la concentration des spores, de la lumière,

de la température et de l'humidité relative sur la germination des spores ont également été

étudiés. Le tube germinatif apparaît après 9 h sur milieu malt-agar, 12 h sur épiderme de

l'hôte et 21 h sur lame de verre; la germination maximale est enregistrée après 18 В, 25 h et

35 h respectivement sur les trois substrats pris dans le même ordre. La germination des

spores est optimale sur milieu malt-agar à 25°C, 89 % d'humidité relative, 600 Lux et avec

une concentration de 1.104 spores/ml. L'effet inhibiteur du Benlate contre la germination

des spores est supérieur à celui du brestan.

KEY WORDS : Uredospore germination, Puccinia arachidis, fungicides

INTRODUCTION

Puccinia arachidis Speg. is the causal organism of the rust of groundnut,

Arachis hypogaea L. A review of literature shows that uredospores of rust

fungi germinate less rapidly and less completely if they are removed from the

* Department of Botany and Microbiology , University of Ibadan, Ibadan, Nigeria.

Source : MNHN, Paris

24 V.A. ADISA and J.B. OLA

sorus of uredium before being separated from their parent cells. COCHRANE

(1960) pointed out that the overall rapidity of germination is a species charac-

teristic; Melampsora lini (Pers.) Lev. begins germination in less than one hour

but Phoma apiicola Klebahn spore requires 24-48 hours.

The effect of temperature on the germination of uredospores of Puccinia

spp. indicates a wide range : P. sorghi Schw., 2-35°C (SHAW, 1964); P. cyno-

dontis, 1.5-35°C (VARGAS & al., 1967). SUSSMAN & DONTHIT (1973)

however, reported that low temperature depressed the germination of uredo-

spores of P. graminis Pers. and those in cold dormancy germinated at 40°C when

activated, the major effect of temperature is assumed to beon enzymatic process.

Day length and light intensity had little effect on the germination of P.

helianthi Schw. but higher light intensity had an adverse effect on the germi

nation of spores stored for two months at — 16°C (SOOD & SACKSTON,

1971, 1972). According to MADDISON & MANNERS (1973), nucleic acids

and proteins of spores are affected by high light intensity

The uredospore is the spreading phase of Puccinia arachidis which it actively

produces on Arachis hypogaea throughout the growing season. Certain environ-

mental factors therefore favour the existence of this stage of its life cycle, The

control of this plant pathogen at this stage by protectant fungicides is in the

problem of inhibiting the uredospore germination. The effects of two fungicides

and some environmental factors on the process of uredospore germination of

P. arachidis is being reported.

MATERIAL AND METHODS

The infected leaflets of Arachis hypogaea were collected from the Botanical

nursery, Department of Botany and Microbiology, University of Ibadan, Nigeria.

The preparation of the spore suspension was done by scraping uredospores from

pustules on infected leaflets into 5 ml sterile distilled water. The suspension

was then filtered through muslin cloth and the desired concentration was esti-

mated using a Hawksley Cristallite B.S. 748 haemocytometer as described by

PURVIS & al. (1966). A preliminary investigation on the effect of spore load

on germination showed that 1.10% spores/ml was the concentration of spores

that gave the most satisfactory results. Therefore except otherwise stated, this

inoculum load was used throughout the study.

The experiments on spore germination on glass slide, 2 % malt extract agar

and host epidermal strip were carried out. A drop of the spore load was placed

on glass slide to form a film while another spore load was placed on each of four

zones of Petri dish when two lines meeting at right angles were drawn at the

bottom of plate. A teased epidermal strip from healthy host leaf was obtained,

placed on a glass slide and a drop of spore load was inoculated on the strip.

Each preparation was placed in a desiccator with about 90 % relative humidity

at 28.5°C,

Source : MNHN, Paris

PUCCINIA ARACHIDIS 25

Variations in temperature were obtained in incubators set between 5-40°C, at

5°C interval, while the levels of relative humidity were obtained by using the

method of WINSTON & BATES (1960). Solid phosphorus pentoxide and sterile

distilled water gave 0 % and 100 % respectively. Four variations of light regimes

were obtained : continuous darkness; continuous light; alternating light / dark-

ness and alternating darkness / light. For the alternating periods of light and

darkness. inoculated cultures were maintained 9 hours in continuous light and

9 hours in continuous darkness. For continuous darkness, Petri dishes containing

the spores were wrapped with aluminium foil and kept in dark boxes. Light

intensity was obtained by variations in degree of illumination with fluorescent

bulbs and intensity produced was measured with a LICOR photometer and

expressed in Lux.

Water suspensions or solutions of brestan (fentin acetate ог triphenyltin

acetate, C2oH1802S) and benlate (methyl-1-butyl carbamoyl-2 benzimidazole-

carbamate) at 10, 50, 100,250, 500 and 1000 ppm of active ingredients (DHAN-

VANTARI, 1968) were prepared. One millilitre of the fungicide suspension/

solution of sterile water (as control) was sprayed with a syringe on solidified

surface of malt agar in Petri dishes, spread and allowed to stand for 4 hrs. One

drop of spore suspension was then added to each of the four zones on medium,

incubated at 28.5°C for 18 hrs. The spore germination was stopped at the requi-

red time with formalin acetic alcohol (5 : 5 : 90 v/v)

RESULTS

‘The uredospore measured between 15.7 - 22.9 hm at zero hour and between

20.0 - 30.0 um prior before the emergence of germ tube. The process of uredo-

spore germination showed the following : on the glass slide, emergence of

germ tube occurred after 21 hrs of incubation and formation of hyphae occurred

after 27 hrs; on malt agar, germ tube emergence was observed after 9 hrs while

formation of hyphae occurred after 15 hrs; on host epidermal strip, after 12 hrs

and 25 hrs of incubation, germ tube and hyphae were produced respectively.

Maximum percentage germination of uredospores of 26 % at 35 hrs, 48 % at

18 hrs and 32.6 % at 25 hrs was recorded on glass slide, malt agar and epidermis

respectively (Fig. 1).

The results obtained on the effect of spore concentration on germination

showed that no germination was observed either at 100.107 spores/ml or

1000.10* spores/ml. The results further showed that poor appreciable germi-

nation were recorded at 10.10* spores/ml and at 1.10^ spores/ml respec-

tively (Table 1).

The results of the effect of temperature on germination revealed that good

germination was recorded between 20-30"C, optimum at 25^C (Fig. 2) while

germination was poor at 5°C and 35°C with no germination at 40°C.

Source : MNHN. Paris

26 V.A. ADISA and J.B. OLA

Table 1 — Effect of spore concentration on the germination of uredospores of Puccinia

arachidis on 2 % malt agar after 18 hrs of incubation at 28.5°C.

Tableau 1 — Effet de la concentration des spores sur la germination des urédospores de Puc-

cinia arachidis sur malt-agar 2 % après 18 hrs d'incubation à 28.5?C.

spore concentration total number of maca germination

(spores/ml) spores estimated

479.0 43.8 +1.8*

6 480.0 5.00.1

100.102 478.0 0

1000.10* 481.0 0

* standard error

ination

5 5

Эр сетті

0 20 x

incubation period (hr)

Fig4

Figure 1 — Percentage germination of uredospores of Puccinia arachidis on three substrata

glass slide AA; host epidermal strip @-e; malt agar ©—C; incubated for varying periods

of time (hours) at 28.5°C under about 90 % relative humidity. Results are means of

three replicates,

Figure 1 — Pourcentage de germination des urédospores de Puccinia arachidis sur les trois

substrats : lame бе уеге А-А; épiderme d'hóte €—; malt-agar O—O; selon le temps

d'incubation (heures) à 28.5°C et 90 % d'humidité relative environ. Les résultats sont

les moyennes de trois expérimentations.

Source : MNHN, Paris

PUCCINIA ARACHIDIS 27

germination

Fig2 temp : (oc)

Figure 2 — Effect of temperature on the germination of uredospores of Puccini arachidis

on malt agar during 18 hrs of incubation. Results are means of three replicates.

Figure 2 — Effet de la température sur la germination des urédospores de Puccinia arachidis

sur malt-agar pendant 18 heures d’incubation. Les résultats sont les moyennes de trois

expérimentations.

The results of the effect of relative humidity levels on germination showed

that no germination was recorded at 0 % while poor germination occurred

at 32.5% (Fig. 3). More uredospores germinated on malt agar than on glass

slide, though each having optimum germination at 89 % level.

Table 2 — Effect of 4 light regimes on the germination of uredospores of Puccinia arachidis

during 18 hrs of incubation at 28.5°C.

Tableau 2 — Effet de 4 régimes de lumière sur Ja germination des urédospores de Puccinia

arachidis pendant 18 hrs d'incubation a 28.5%

total number of

light regimes Spores estimated mean germination

continuous light 684.0

continuous darkness 664.0

darkness/light (9 hrs each) 680.0

light/darkness (9 hrs each) 660.0

standard error.

Source : MNHN, Paris

28 V.A. ADISA and J.B. OLA

ermination

ES % ger

o ©

n= O

Canoa

8 8

% germination

База relative humidity(%)

Figure 3 — Effect of relative humidity on

the germination of uredospores of Pucci

nia arachidis on malt agar in 18 hrs (a)

and on glass slide in 3 hrs (b) at 28.5°C.

Results are means of three replicates.

Figure 3 — Effet de l'humidité relative

sur la germination des urédospores de

Puccinia arachidis sur malt-agar en 18 hrs

(a) et sur lame de verre en 3 heures (b) à

28.5°C. Les résultats sont les moyennes

de trois expérimentations.

Table 3 — Effect of brestan and benlate on the germination of uredospores of Puccinia

arachidis after 18 hrs of incubation at 28.5°C.

Tableau 3 — Effet du brestan et du benlate sur la germination des urédospores de Puccinia

arachidis après 18 heures d’incubation à 28.5°C.

fungicide conc.

(ppm)

100

250

500

% mean germination recorded

for each fungicide

brestan benlate

29.2+1.8* 25.8 40.5

20.8 1.6 9.5 +0.2

16.3 +11 5.0 +041

15.0 +1.0 25-01

12.5+0.7 0

5.7+02 0

1.0 +0.02 0

standard error.

Source : MNHN, Paris

PUCCINIA ARACHIDIS 29

The results of the experiments on the effect of light regimes showed that

poor germination was recorded when uredospores were exposed to alternating

light and darkness and vice versa while good germination occurred when spores

were under continuous exposure to either light or darkness (Table 2). As for

the effect of light intensity on spore germination, no germination occurred

at 2000 Lux while poor germination was recorded at 80 Lux and 1800 Lux.

However, good germination was recorded at 140 Lux and 1500 Lux with the

optimum at 600 Lux (Fig. 4).

50]

% germination

OO FORO QD SON ON

PRONONCE RTE

Fig (Lux)

Figure 4 — Effect of light intensity on the germination of uredospores of Puccinia arachidis

on malt agar in 18 hrs of incubation

Figure 4 — Effet de l'intensité de la lumière sur la germination des urédospores de Puccinia

arachidis sur malt-agar en 18 heures d'incubation.

The effect of the two fungicides on spore germination recorded 12.5%,

5.7 % and 1.0% at 250 ppm, 500 ppm and 1000 ppm respectively of brestan.

With benlate, no germination was recorded at any of these three concentrations

(Table 3).

Source : MNHN, Paris

30 V.A. ADISA and J.B. OLA

DISCUSSION

Spores of lower moisture content absorb water to about 70 % before germi-

nation occurs (COCHRANE, 1958) and the frequent swelling of spores in water

may be due to this dryness. The observations made on the swelling of uredo-

spore prior to the emergence of germ tube indicated that the uredospores had

absorbed water to certain considerable level and this may mean that uredospores

of P. arachidis contained lower moisture.

The commencement of germination was fast on malt agar and epidermal

strip (after 9 hrs and 12 hrs respectively) while it was delayed on glass slide

(at 21 hrs). The findings of SHAW (1964), COCHRANE (1958) and SUSSMAN

& DONTHIT (1973) showed that germination of spores takes longer period on

non-absorptive medium like glass and that period of time is reduced by using

solid substrate like agar which itself absorbs water from the atmosphere. The

presence of nutrients in the medium and exudates on epidermal strip might

possibly have stimulated the germination of the spores on these substrates.

Such stimulating substances are absent on glass slide. However, the maximum

germination (less than 50 75) recorded on each substrate was low. According to

COCHRANE (1960), such an observation may be due to the immaturity of some

of the uredospores.

There was no germination recorded at spore load of 100.10* and 1000.10*

spores/ml. This may be due to self inhibition as a result of production of inhibi-

tory substances (BROWN & HARVEY, 1927; GOTLIEB, 1950; ALLEN, 1955).

On the other hand, that there was no germination at the two highest spore

loads could also be due to competition for nutrients by these spores from

their micro-environment. Germinating uredospores of P. graminis released

volatile substances which inhibited germ tube elongation (ALLEN, 1955) while

FORSYTH (1955) reported that uredospores of P. graminis tritici Erikss &

Henn. produced a trimethylene compound (2 - methyl - butene - 2) which

inhibited spore germination.

The uredospores germinated over a wide temperature range of 5-35^C with

the optimum at 25°C. This range is similar to that obtained for P. sorghi by

EVERSMERGER & BERLEIGH (1968). These observations may mean that

inactivation of uredospores would occur at very cold and very high tempera-

tures. The optimum percentage germination of the uredospores of P. arachidis

occurred at 89% relative humidity. This shows that this relative humidity

would encourage more infections on the host. The following prevailing weather

conditions : temperature of 26°-30°C; relative humidity of about 85 %; light

intensity 347.2 Lux were recorded in the fields of the wetter South Western

Nigeria where the disease was recorded. Furthermore, the fact that no germi-

nation was recorded at 0 % relative humidity and poor germination at 32.5 %

relative humidity may be interpreted to mean that dry conditions would not

favour the germination of the spores.

It is difficult to explain the poor germination of the uredospores as recorded

in the alternating regimes of light even though alternating light and darkness

Source : MNHN, Paris

PUCCINIA ARACHIDIS 31

is the normal light regime in nature where the spore of the pathogen is exposed

to. However, the ability of the uredospores to germinate on exposure to either

light or darkness supported the earlier findings that light has no significant

effect on germination as on sporulation (COCHRANE, 1960; DARBY & MAN-

DELS, 1955). The results obtained on the effect of light intensity on germina-

tion was similar to that obtained for temperature. This observation could be due

to the method used in obtaining variations in light intensity. Previous reports

on light intensity on germination experiments tend to express the effect of illu-

mination rather than degree of intensity. Variations of temperature occur with

increase in light intensity.

Fungicidal action is a linear function of amount of toxicant taken up by

spores. Brestan is highly toxic and fungicidal to about the same range of fungi

as the copper fungicides but at about one-tenth the dosage (SPENCER, 1973).

The mode of action of brestan is not widely reported however, we do speculate

that it might act on the DNA or disrupt protein synthesis in the spores during

germination. Benlate, a systemic fungicide, also shows from the literature that

not much is known on its mode of action. Little is known about the ways in

which systemic fungicides destroy or inactivate fungi (TARR, 1972). Because of

the high toxicity of brestan and also because of the fact that benlate gave a

better inhibitory effect on the germination of uredospores, benlate is therefore

being recommended for field trials. These results obtained during this study

would therefore facilitate a possible and effective control disease management

technique on this spreading phase, the uredospore, of the pathogen. P. arachidis

actively grows on the groundnut leaflets throughout the growing season.

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Source : MNHN, Paris

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HISTOCHEMISTR Y OF CYTOPLASMIC RESERVES

IN EXCIPULAR HYPHAE OF

CATILLARIA BOUTEILLEI (DESM.) ZAHLBR.

by P. MODENESI and L. LAJOLO*

SUMMARY. — Histochemical aspects of cytoplasmic reserves in excipular hyphae during

the development of apothecia in Catillaria bouteillei were studied by conventional, fluo

rescence and scanning electron microscopy. Positive tests were obtained for polysaccharides,

proteins, polyphosphates, lipids and acid phosphatase activity. Our results show that the ex.

cipular border can be distinguished in two separate parts of differing histochemical reacti

vity. While the lateral and basal portions are an important site for the accumulation of re-

serve substances, active meroholocrine secretion takes place in the upper portion. The ex-

trusion process allows the appearance in the adult apothecia of a thin, intensely acidic

layer of mucilage, above the hymenium.

RESUME. — Les aspects histochimiques des réserves cytoplasmiques des hyphes excipulaires

pendant le développement des apothécies chez Catillaria bouteillei sont étudiés par micro-

scopie photonique traditionnelle, a fluorescence et électronique a balayage. Les tests sont

positifs pour les polysaccharides, les protéines, les polyphosphates, les lipides et l'activité

phosphatase acide. Nos résultats montrent que la marge excipulaire est constituée de deux

parties ayant des réactions histochimiques différentes. Tandis que les parties latérales et

basales constituent un site important d'accumulation de substances de réserve, la partie

supérieure présente une sécrétion de méroholocrine active. Le processus d'extrusion dans

l'apothécie adulte conduit à l'apparition d'une fine couche de mucilage trés acide au-dessus

de l'hyménium

KEY WORDS : Catillaria bouteillei, lichenized fungi, histochemistry

INTRODUCTION

Catillaria bouteillei (Desm.) Zahlbr.. a foliicolous lichen, was the subject of

Our recent study concerning some histochemical aspects of the hypothalline

hyphae (MODENESI & al., 1986). Our results have allowed the correlation of

the presence of mucilage on the lower edge of the thallus with the particular

ecology of the lichen. During this study it was observed that the remarkable

* Istituto Botanico «Hanbury», Corso Dogali 1/C, 16136 Genova - Italia

Source : MNHN, Paris

Figures 1 to 5 — 1 : Section of basal excipular hyphae, of an apothecium in phase 1,

showing extensive deposits of polysaccharides and punctuated unstained areas. PAS

reagents. Scale bar 10 Mm. 2 : Section of basal excipular hyphae of an apothecium in

phase 2 stained with TBO pH 4.4. Polyphosphates granules (p) of varying size are visible

as metachromatic (arrows). Scale bar 10 Um, 3 : Section of apothecium (central part) in

phase 1 stained with Amido black, Round protein-containing structures in the basal

portion of excipulum are common. In the upper portion the staining reaction is most

extensive. Note the lysis of some upper excipular cells (arrow). Scale bar 20 Um. 4 :

are don te ee te lest sowing ce EC AE

apothecia (phase 2) a thin metachromatic layer (arrows) of sulphated polysaccharides

TBO pH 1. Scale bar 100 im. 5 : Transversal section of the lichen thallus carrying an

apothecium in phase 1. The excipulum intensely fluoresces silvery-white with phos

phine. Scale bar 10 Um

Source : MNHN, Paris

HISTOCHEMISTRY OF EXCIPULAR HYPHAE IN CATILLARIA 35

histochemical reactivity of the cytoplasm of the excipular hyphae, the tissue

surrounding the thecium and evident as the proper margin, varied during the

transition from the youthful phase to the adult phase in the apothecia.

To understand better the changes which may occur at a cellular level, a histo-

chemical study of apothecia as they developed must be undertaken. In this

respect such methods have provided a valuable tool in the study of some fungi

(MOTTA, 1969; KOSAHIH & WILLETS, 1975; MOORE-LANDECKER, 1981 )»

On the other hand histochemical observations іп the lichenized-fungi are not

extensive, Our study carried out by conventional, fluorescence and electron

scanning microscopy, concerns histochemical aspects of excipular hyphae

contents during the final development of apothecia in Cutillaria bouteillei.

MATERIAL AND METHODS

Thalli of Carillaria bouteillei growing on leaves of Buxus sempervirens were

collected in eastern Liguria.

Light microscopy : small pieces of leaf-carrying lichen or isolated apothecia

were fixed either in FAA (Formalin-Acetic acid-ethyl Alcohol) (SASS, 1958)

for 24 hours ot in glutaraldehyde 3 % in 0.1 M phosphate buffer at pH 6.8

for 4 hours at 0-4°C. Following dehydration in an ethanol series, samples were

embedded either in JB4 resin (Polyscience Inc.) or in methyl-butyl methacrylate

mixture (FEDER & O'BRIEN, 1968) in embedding polyethylene (Polyscience

Inc.) capsules. For the histochemical demonstration of acid phosphatase, speci-

mens were fixed and embedded in JB4 at cold temperature according to NAM-

BA & al. (1983).

Sections 2.5 um thick were cut with a glass knife on a Reichert OM2 micro-

tome. For histochemical investigations, embedded sections or sections obtained

by a cryostat microtome were processed with the following methods : a) Perio-

dic acid-Schiff reagent (PAS) for polysaccharides (PEARSE, 1985); b) Carmine

Best’s method (PEARSE, 1985) and lodine-Potassium iodide reaction (IKI)

(JENSEN, 1962) for glycogen; c) Toluidine Blue 0 (TBO) at pH 4.4 and pH 1

Figures 1 à 5 — 1 : Coupe d’hyphes excipulaires basales d'une apothécie en phase 1, mon-

trant des dépôts importants de polysaccharides et des zones ponctuelles non colorées.

Réaction PAS. Échelle : 10 Hm. 2 : Coupe d'hyphes excipulaires basales d'une apothécie

en phase 2, colorée avec le TBO pH 4,4. Les granules de polyphosphates (p) de tailles

variables sont métachromatiques (flèches). Échelle : 10 Um. 3 : Coupe d'apothécie

(partie centrale) en phase 1, colorée à l'amido black. Les structures rondes contenant

des protéines sont fréquentes dans la partie basale de l'excipulum. Dans la partie supé-

rieure, la réaction de coloration est plus forte, Noter la lyse de quelques celles excipur

laires supérieures (fléche). Échelle : 20 Um. 4 : Coupe transversale de la feuille portant

le lichen, montrant sur le bord supérieur de l'apothécie sectionnée (phase 2) une couche

fine métachromatique (fléches) de polysaccharides sulfatés. TBO pH 1. Echelle : 100 fim.

5 : Coupe transversale du thalle lichénique portant une apothécie en phase 1. L'excipu

lum montre une intense fluorescence blanc-argenté avec la phosphine. Échelle ; 10 Um.

Source : MNHN, Paris

36 P. MODENESI and L. LAJOLO

Figures 6 to 9 — SEM micrographs. 6 : Upper view of the thallus with apothecia at various

stages of development. In the adult one (arrow) the excipulum is not found on the upper

side; in the youngest ones it occurs as a complete border (head arrow). 7 : Lateral view

of an adult apothecium showing the excipular edge. Here the cells have a spongy aspect

due to the lytic processes. 8 : Transversal view of an adult apothecium. The excipulum

only basally occurs. 9 : Transversal view of the basal excipular cells.

Figures 6 4 9 — Microscopie électronique à balayage. 6 : Vue (aérienne) du thalle avec des

apothécies à différents stades de développement. Sur les apothécies adultes (flèche),

l'excipulum ne se trouve pas sur la partie supérieure; sur les plus jeunes, il forme une

marge complète (tête de flèche). 7 : Vue générale d'une apothécie adulte montrant la

marge excipulaire. Les cellules ont ici un aspect spongieux, dû aux procédés lyriques.

8 : Vue transversale d'une apothécie adulte. L'excipulum apparaît seulement à la base.

9 : Vue transversale des cellules excipulaires basales

Source : MNHN, Paris

HISTOCHEMISTRY OF EXCIPULAR HYPHAE IN CATILLARIA 37

for polyanions (LING LEE & al., 1977); d) Alcian Blue 8GX (AB) at pH 0.5

for acid sulphated polysaccharides (LEV & SPICER, 1964); e) Histochemical

experiments with critical electrolyte concentration (CEC) for blocking alciano-

philia at graded concentrations of MgCl; to show the various charged groups

of carbohydrates (PEARSE, 1985); f) Amino Black 10 B for proteins (FISHER,

1968); g) Sudan Black B and Phosphine 3R for lipids (PEARSE, 1985); h)

BURSTONE's method for acid phosphatase (NAMBA & al., 1983). The fol-

lowing extraction and enzymatic digestion procedures were carried out on sec-

tions : a) Trichloroacetic acid (TCA) prior to staining with TBO at pH 1 to re-

move polyphosphate (ASHFORD & al., 1975); b) Papain, prior to staining with

Amido Black to remove protein (PEARSE, 1985); c) aamylase from Bacillus

subtilis or human saliva (BULLOCK & al., 1980) prior to staining with PAS

reagent to remove glycogen

For all the above histochemical methods, control reactions were carried out

following the suggestions of the respective authors. For fluorescence micro-

scopy, after staining, sections were mounted in an UV-inert medium (Serva Inc.)

and observed with a Leitz microscope fitted with an epi-illuminator, UV exciting

illumination and Fluotar objectives.

Scanning electron microscopy : samples were prepared as described elsewhere

(MODENESI & al., 1986). To obtain transverse section views of apothecia,

isolated apothecia were frozen by immersion in liquid nitrogen and fractured

with a razor blade. Specimens were then air dried, directly coated in the Sput-

tering and observed with a Stereoscan Cambridge 250 MK2

RESULTS

Lecideoids apothecia of Catillaria bouteillei show a whitish paraplectenchy-

matous border called excipulum (5АМТЕ55ОМ, 1952) оҒ 10-30 шп іп thickness.

It is made up of sub-roundish cells in section of 4-8 ит in width (Figs. 1,9).

During the phases of development of the apothecia observed, the excipulum

shows itself in two different configurations : a) it forms a complete border

around the fertile part, covering it on all sides (phase 1 or youthful phase)

(Figs. 3, 5, 6); b) it is absent on the upper side because of the growth of the

underlying fertile portion, and in part because of the lysis of the upper excipular

cells (Fig. 3, 7). In this way the excipulum only remains in the lateral and basal

portions (phase 2 or adult) (Figs. 4, 6, 8).

Our histochemical observations, summarized in Table 1, refer to the content

of excipular hyphae in these two different stages of the development of the

apothecia.

Carbohydrates : the PAS reaction, which indicates the presence of polysac-

charides with 1:2 glycol groups, stained red the cytoplasm of the excipular cells.

This took on a characteristic punctuated aspect, due to the presence of minute

and numerous unstained areas of a non-polysaccharide nature (Fig. 1). The Best

Source : MNHN, Paris

38 P. MODENESI and L. LAJOLO

Stain Substances Observed reaction

Phase 1 Phase 2

A |

PAS Polysaccharides ++ ++ ++ + + +

Best's/IKI Glycogen на 55 2 4 “БЕ с.

TBO pH 4.4 Polyanions наа же Ағ

TCA-TBO pH 1 Polysulphates ӨШ ar amas 58

AB pH 0.5 Sulphated-

polysaccharides о о + о о +»

Amido Black Protein + + tH + =O

Phosphine Lipids HH ott о

Sudan Black Lipids ж. эм о

Burstone Acid phosphatase +++ ++ +4 ++ + 0

Legend: O- no appreciable staining, += light staining, ««- moderate stai-

ning, += heavy staining, -= ambiguous staining. B, L, U= basal, late-

ral and upper part of excipulum. Us= amorphous layer secreted in upper

part of excipulum.

Table 1 — Staining properties of the cytoplasm of the excipular cells in developing apothecia

of Catillaria bouteillei.

Tableau 1 — Propriétés de coloration du cytoplasme des cellules excipulaires dans les deux

phases du développement des apothécies de Catillaria bouteillei.

and IKI reactions gave slighter results, only weakly staining the cytoplasm,

often with ambiguous results. Analogously the a-amylase or human saliva

digestions only managed to remove a small part of the positive PAS matter.

These results indicate the presence of a small quantity of glycogen in the cyto-

plasm which is occupied in greater quantity by other insoluble polysaccharides.

In young apothecia (phase 1) the intensity of the PAS reaction was equally

moderate in all parts of the excipulum; in the adult apothecia (phase 2) the

reactivity was maintained only in the basal part and in a thin amorphous line

above the hymenium.

Polyanions : in phase 1 the cytoplasm showed minute metachromatic gra-

nules (bluish red) with TBO at pH 4.4 (Fig. 2). In these conditions several

different polyanions (polyphosphates, polysulphates and polycarboxilic acids)

carry a negative charge and would give a metachromatic reaction (BULLOCK

& al., 1980).

Metachromasy persisted with TBO at pH 1, when the polysulphates and poly-

Phosphates only still proved to be ionized (LING LEE & al., 1977). Staining

with TBO at pH 1, preceded by digestion with TCA, which removes polyphos-

Source : MNHN, Paris

HISTOCHEMISTRY OF EXCIPULAR HYPHAE IN CATILLARIA 39

phates (ASHFORD & al., 1975), showed that the granules in the cytoplasm of

the hyphae of the lateral and basal portions of the excipulum had been comple-

tely removed, However this removal did not take place in the upper excipular

edge during phase 1. In this latter area the same results was obtained with

AB at pH 0.5 which stain the mucopolysaccharide sulphates (Fig. 4). The

presence of sulphate acid groups is further substantiated by the persistent

alcianophilia with CEC procedure in the presence of 0.5-0.6 M MgCl;.

In phase 2, TBO at pH 4.4 and pH 1, shows the presence of few polyphos-

phate metachromatic granules only in the basal portion of the excipulum. Both

in this case asin the PAS reaction, the upper part of the hymenium shows a thin

anamorphous metachromatic line with TBO at low pH, resistant to TCA and

positive to AB at pH 0.5.

Protein : at phase 1 the excipular cells show a strong affinity with Amido

Black, intensely staining a large number of round structures (Fig. 3). They were

about the same size as the unstained areas in PAS stained sections of excipulum

(Fig. 1). The removal of such structures brought about by protease preparation

confirms that they contained proteins.

The protein storage bodies are clearly delimited in the cytoplasm, only

in the basal and lateral portions of the excipular cells. In contrast, in the up-

per portion they are hardly visible, since also a large part of the cytoplasm

reacts intensely with Amino Black and it is sensitive to the protease (Fig.

3). On reaching maturity (phase 2) the basal portion maintains its activity,

while it decreases in the lateral portions and disappears in the upper part.

This last fact shows that proteins and protein -complexes in histochemically

detectable amounts are absent in the thin amorphous line above the hyme-

nium.

Lipids : all parts of excipulum in young apothecia are intensely silvery white

fluorescent under ultraviolet light with Phosphine (Fig. 5). Sudan Black also

gave a positive reaction confirming a widespread presence of lipidic matter in

the cytoplasm of the excipular hyphae

In phase 2 the tests used show a general and remarkable decrease in affinity

to the cytoplasmic content,

Acid phosphatase : tests to demonstrate this enzymatic activity have indi-

cated that during the maturation process in apothecia, the excipular cells were

particularly active. At phase 1 the cytoplasm is rapidly and intensely marked.

At phase 2 only the basal cells maintain this activity.

DISCUSSION

Our results show that the excipulum in Catillaria bouteillei can be distin-

guished into two separate differentiable parts because of the histochemical

reactivity of the cytoplasm constituent cells.

Source : MNHN, Paris

40 P.MODENESI and L. LAJOLO

The basal and lateral portions are an important site for storage of reserves.

These consist in polysaccharides, among which a small quantity of glycogen.

and also proteins, polyphosphates and lipids. In these portions the total quantity

of carbohydrates greatly decreases when the apothecia reach maturity. This fact

is in keeping with the presence of a considerable acid phosphatase activity.

FIGIER (1972) correlates this activity to phenomena of dephosphorilation

which suggest an important active intercellular movement of glucids.

The other major cytoplasmic storage reserves are proteins in the form of

protein bodies. This is a common feature in fungi where a high protein or pro-

tein body content goes together with the phases of the apothecia's development

in ectal and medullary excipulum in Pyronema omphalodes (MOORE-LANDEC-

KER, 1981) and in the developing sclerotia of Sclerotinia minor (BULLOCK

& al., 1980). As these authors have noted, this occurrence is not surprising in

sclerotia since a large nitrogen requirement would be expected in the initial

stage of germination.

Our staining reactions suggest that phosphates are present in the form of

polyphosphate. Polyphosphate granules have been previously reported from the

fungal component in Collema leucocarpon and Peltigera dolichorrhiza (CHIL-

VERS & al., 1978). According to HAROLD (1966), usually lower organism

store this anion as polyphosphate. This is a thermodynamically high energy

compound and its accumulation could be an energy storage mechanism (BUL-

LOCK & al., 1980).

Other cytoplasmic components are lipids which in developing apothecia of

Catillaria bouteillei are quickly mobilized product. Lipids have been reported

as the most common storage product in fungi (HAWKER, 1965; CHET & al.,

1977) and they are also reported in oil hyphae in an endolithic Catillaria sp.

(KUSHNIR & al., 1978).

The upper excipular portion differs histochemically from the preceding ones

because of the characteristic presence of sulphated mucopolysaccharides toge-

ther with the other cytoplasmic reserves (Table 1). This portion is visible as cel-

lularized, only in young apothecia; on reaching maturity they are removed late-

rally. Furthermore some of the cells are destroyed during growth.

Therefore it seems reasonable to assume that the thin amorphous line visible

in adult apothecia is the result of the metabolic activity of the upper excipular

cells. In fact it conserves positive reactivity for AB at pH 0.5 as well as the cyto-

plasmic content of those cells in phase 1 (Table 1). Thus this layer would appear

to be derived both from the secreting merochrine processes (where the cells

remain intact) and from the holochrine processes (which bring about the lysis

of the secreting cells). A high acid phosphatase activity is visible in phase 1. This

according to the various authors who consider it to be characteristic of the

glandular cells secreting hydrophilic substances in higher (SCHNEPF, 1974;

FIGIER, 1972) and lower (HEBANT & BONNOT, 1974) plants.

In mature apothecia of Carillaria bouteillei, this intensely acid, mucilaginous

layer is naturally capable of linking water in amounts directly related to the

Source : MNHN. Paris

HISTOCHEMISTRY OF EXCIPULAR HYPHAE IN CATILLARIA 41

intensity of the available negative charges (MODENESI & VANZO, 1986). This

may therefore have the function of contributing to hymenium hydration, de-

laying drying and preventing excessive water loss in this foliicolous lichen

which lives in strict aerohygrophilic conditions (SANTESSON, 1952; MARGOT,

1977). Another possible function of the mucopolysaccharide layer is a feature

related to the covering of the outer surface with mucilage, acting as a first

line of defence against colonization by pathogens (MODENESI & al., 1986:

MODENESI & VANZO, 1986).

ACKNOWLEDGEMENTS — This study was supported by a grant from the Ministero

della Publica Istruzione. We should like to thank Mr. Antonio Corallo of the Photographic

Laboratory of the «Hanbury» Institute of Botany.

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ANTAGONISTES ET HYPERPARASITES

DU FULVIA FULVA (COOKE) CIFERRI

Interactions mycéliennes avec les champignons colonisant

les taches de cladosporiose de la tomate

par Daniel LE PICARD, Y ves TIRILLY et Bernard TRIQUE*

RÉSUMÉ. — Les observations en microscopie photonique montrent que des Acremonium,

Verticillium et Fusarium vivent en cohabitation ou antagonisme discret avec le Fulvia fulva;

par contre, les hyphes de lHansfordia pulvinata et de deux Acremonium se comportent en

hyperparasites, réalisant des figures d'enroulement et même de pénétration. La microscopie

électronique à balayage révèle que l'H. pulvinata, aprés une phase biotrophe, devient nécro-

trophe, vidant le contenu cytoplasmique du F. fulva. Il est le plus apte à être utilisé en lutte

biologique.

SUMMARY. — The observations in light microscopy show that some Acremonium, Verti-

cillium and Fusarium are living in cohabitation or slight antagonism with Fulvia fulva; on

the other hand, the hyphae of Hansfordia pulvinata and of two species of Acremonium act

as hyperparasites : they realize coilings and even penetrations. The scanning electronic

microscopy reveals that H. pulvinata, after a biotrophic phase, becomes necrotrophic,

draining the cytoplasmic content of F. fulva. It is the most suitable to be used in biological

control

MOTS CLÉS : Antagonisme mycélien, cladosporiose, Fulvia fulva, Hansfordia pulvinata,

hyperparasitisme, lutte biologique, tomate

INTRODUCTION

La cladosporiose de la tomate, due au Fulvia fulva (Cooke) Ciferri (syn.

Cladosporium fulvum. Cooke) provoque des dégáts de plus en plus importants

dans les cultures en serre.

Dès 1978, nous avions observé, pour la première fois en France, que l'Hans-

fordia pulvinata (Berk. et Curt.) Hughes (syn. : H. grisella (Sacc.) Hughes) était

capable de couvrir d'un discret duvet blanc grisátre les taches sporulées de F.

fulva, inhibant le développement de ce parasite (PERESSE & LE PICARD,

Laboratoire de Microbiologie appliquée, Faculté des Sciences et Techniques. 29287

Brest Cedex.

Source : MNHN. Paris

44 D. LE PICARD, Y. TIRILLY et B. TRIQUE

1979). Nous avons alors préconisé l'utilisation de cette aptitude pour mettre

au point un procédé de lutte biologique (PERESSE & LE PICARD, 1980).

Plusieurs autres champignons appartenant aux genres Acremonium, Fusarium,

Verticillium ont été, par la suite, isolés des taches foliaires de cladosporiose.

Le but de cette étude est de mieux cerner les relations étroites pouvant

s'établir entre le Fulvia fulva et ces divers champignons, notamment l'Hans-

fordia pulvinata. L'examen des interactions mycéliennes permet en effet de pré

ciser l'intérêt respectif des différentes espèces dans le cadre du développement

d'une lutte biologique.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Obtention des isolats

élium recouvrant les

taches de cladosporiose. Les prélévements ont été faits sur plants de tomate

cultivés en serre dans la région brestoise, en 1978, pour l'Hansfordia pulvinata,

entre 1983 et 1986 pour les autres champignons.

Des essais d'isolement ont été réalisés à partir de my

Milieux de culture

Les isolats ont été entretenus sur P.D.A. ou extrait de malt gélosé à 2 p. 100.

Les microcultures en milieu liquide ont été effectuées en utilisant la tech-

nique des «gouttes pendantes» (PERESSE & LE PICARD, 1980).

Infections expérimentales en chambre climatisée

Des cultures de plants de tomate de la variété «Luca» ont été menées en

chambre climatisée selon des conditions précédemment décrites (TIRILLY &

TRIQUE. 1984). Des plants âgés de cinq à sept semaines sont infectés par pul-

vérisation d'une suspension de 5.10? spores/ml de F. fulva à la face inférieure

des feuilles. Trois semaines plus tard, les autres champignons sont apportés par

pulvérisation d'une suspension de 10* spores/ml au niveau des taches sporulées

du F. fulva.

Examen des interactions mycéliennes «in vitro»

Une suspension de spores de F. fulva est étalée sur milieu P.D.A. en boite

de Pétri. Le méme jour, ou 2 jours plus tard, est apporté un fragment mycélien

du champignon à tester. Les zones d’inhibition et les recouvrements mycéliens

sont notés après une semaine d'incubation à 22°C.

L'observation microscopique des interactions est faite sur lame de verre : de

petits blocs de P.D.A. ou d'extrait de malt gélosé distants de 3 mm sont ense-

mencés, l'un par le F. fulva, l'autre par l'autre champignon, puis recouverts

d'une lamelle. Ce dispositif permet une bonne observation.

Préparation des échantillons pour la microscopie électronique à balayage

Après vérification au microscope photonique, les zones présentant des figures

de contact, en boîte de Pétri ou sur feuille de tomate, sont prélevées. Les échan-

Source : MNHN, Paris

ANTAGONISTES ET HYPERPARASITES DU FULVIA FULVA 45

tillons sont fixés par passages successifs dans une solution de glutaraldéhyde (à

4 % dans un tampon phosphate pH 7,2, 1 h 30 mn) et d'osmium (à 2 %, 1 h). Ils

sont ensuite déshydratés dans une série de dilutions d'alcool éthylique, puis

d'acétone, portés au point critique et métallisés à l'or

Les observations ont été effectuées à l'aide d'un microscope Jeol JSM 35 à

15kV.

RÉSULTATS

1. INTERACTIONS OBSERVÉES EN MICROSCOPIE PHOTONIQUE

Lors des essais d'infection en chambre climatisée, tous les champignons

testés ont révélé la méme aptitude que dans la nature à s'implanter sur les taches

sporulées de cladosporiose.

Les observations microscopiques permettent cependant de reconnaitre deux

catégories : les antagonistes et les hyperparasites.

— Les antagonistes : des Acremonium, Verticillium et un Fusarium provo-

quent, du fait du recouvrement, une granulation et une vacuolisation du cyto-

plasme du F. fulva. L'atteinte du parasite est irrégulière et lente; on trouve

tous les termes de passage entre une cohabitation et un antagonisme discret qui

ne s'accompagne pas de mécanismes hyperparasitaires. Aucune des souches

concernées ne montre de figures d'enroulements ou de pénétration du mycélium

et des spores du F. fulva.

— Les hyperparasites : seules trois espéces fongiques ont provoqué des fi-

gures d'hyperparasitisme à l'égard du F. fulva.

Un Acremonium sp. a établi des contacts suivis d'enroulements et de péné-

tration des hyphes et des spores du F. fulva puis d'un développement intra-

mycélien.

Les attaques d'un autre Acremonium, que nous rapportons à l'espèce A.

strictum W. Gams (syn. : Cephalosporium acremonium auct. plur.), en différent

par une fréquence plus grande des figures d'enroulement et par une croissance

intramycélienne plus rare.

Dans tous les cas, le parasitisme de l'Hansfordia pulvinata manifeste ses effets

beaucoup plus rapidement : il est capable de recouvrir les taches de F. fulva et

de provoquer sa mort dans les 3 ou 4 jours qui suivent son apport. Le mycélium

et les spores du F. fulva apparaissent vides et déformés.

Les filaments des hyperparasites sont apparus particulièrement fins (diamètre

moyen :2 à 3 um contre 4 à 5 um pour le F. fulva).

2. OBSERVATIONS EN MICROSCOPIE ÉLECTRONIQUE A BALAYAGE

L'Hansfordia pulvinata offrant le plus d'intérêt dans l'optique d'une lutte

biologique contre la cladosporiose de la tomate, nous avons limité nos obser-

vations en microscopie électronique aux confrontations H. pulvinata - F. fulva

Source : MNHN. Paris

46 D. LE PICARD, Y. TIRILLY et B. TRIQUE

Source : MNHN, Paris

ANTAGONISTES ET HYPERPARASITES DU FUL VIA FULVA 47

tant sur du matériel infecté naturellement que sur des taches résultant d'infec-

tions expérimentales.

Dès l'émergence des hyphes du F. fulva par les stomates de la feuille de to-

mate, lH. pulvinata peut établir des contacts avec son hôte (Fig. 1, A). Dans

une première phase biotrophe, les filaments de l'H. pulvinata émettent en direc-

tion du F. fulva des rameaux télémorphiques qui viennent s’enrouler autour

des hyphes et des spores de ce dernier, constituant des nœuds plus ou moins

complexes (Fig. 1, B). Ces filaments présentent, de part en part, des renflements

se réduisant à de petits boutons fortement appliqués contre les hyphes de l'hôte,

jouant ainsi le rôle d'appressorium (Fig. 2, A-B). Des digitations sont observables

sur la paroi de l'hyperparasite au niveau des zones de contact, mais il n'apparaît

pas d'orifice mettant en relation les deux cytoplasmes (Fig. 2, B).

Le processus se poursuit par une phase nécrotrophe au cours de laquelle le

cytoplasme du champignon parasité se vacuolise et devient granuleux. Cette

étape déjà observable en microscopie photonique précède la mort des articles

mycéliens et des spores atteintes qui, vidées de tout contenu cytoplasmique,

présentent des parois affaissées.

Quelques rares figures de pénétration de lH. pulvinata dans les éléments du

F. fulva ont été observées (Fig. 2, C) sans qu'un développement intramycélien

s'en suive.

DISCUSSION

Parmi les champignons que nous avons isolés des taches de cladosporiose de

la tomate, seules trois espèces révèlent une réelle aptitude parasitaire. Les autres,

qui envahissent surtout les taches âgées, sont des saprophytes foliaires dont le

développement est favorisé localement par la présence de vieux filaments plus

ou moins autolysés de F. fulva et par les nécroses des tissus foliaires sous-jacents.

Le mycoparasitisme de ces trois espèces se développe de façon différente, «In

vivo» et «in vitro», les contacts, nombreux sur feuille de tomate, sont plus rares

sur milieux gélosés, en particulier pour les Acremonium. Par ailleurs, en milieu

liquide, seul l'H. pulvinata peut parasiter le F. fulva. Mais comme le soulignent

KAPOORIA & MENDGEN (1985), lors d'études sur Uromyces fabae (Persoon)

Figure 1 — A. Dès leur sortie par les stomates de la feuille de tomate, les hyphes de Fulvia

fulva (F. f.) sont parasitées par celles d'Hansfordia pulvinata (H. p.). B. Le mycélium

d'Hansfordia pulvinata (H. p.) s'enroule autour des filaments du Fulvia fulva (F. f.) y

constituant de véritables nœuds. C. Au niveau des contacts, l'Hansfordia pulvinata (H.p.)

développe de petits appressoria (flèches).

Figure 1 — A. Immediately after their outburst through the leaf stromata of tomato, the

hyphae of Fulvia fulva (F. f.) are parasitized by hyphae of Hansfordia pulvinata (H. p.).

B. Hansfordia pulvinata (H. p.) mycelium coils around the filament of Fulvia fulva (F. £.)

making real knots. C. At the place of contacts, Hansfordia pulvinata (H. p.) shows small

appressoria (arrows).

Source - MNHN. Paris

48 D.LE PICARD, Y. TIRILLY et B. TRIQUE

Source : MNHN, Paris

ANTAGONISTES ET HYPERPARASITES DU FULVIA FULVA 49

Schroeter, la composition des parois d'un champignon peut varier selon les con-

ditions de culture et interférer avec sa pathogénicité. Ceci peut également ex-

pliquer la perte de capacité mycoparasitaire d'une de nos souches d'Acremonium

après plusieurs repiquages.

Les figures d'hyperparasitisme que nous avons observées sont similaires à

celles décrites par d'autres auteurs : des interactions caractérisées par des enrou-

lements d'hyphes mycéliennes suivis ou non de pénétrations sont connues chez

de nombreuses espéces en présence d'autres champignons, notamment chez le

Rhizoctonia solani Kühn (BUTLER, 1957), le Gliocladium roseum Bain. (BAR-

NETT & LILLY, 1962), les Trichoderma (DENNIS € WEBSTER, 1971), le

Gonatobotrys simplex Cda (HOCH, 1977b). le Calcarisporium parasiticum

Barnett (HOCH, 19772), le Stephanoma phaeospora Butler et Mc Cain (HOCH,

1978), le Nematogonum ferrugineum (Pers.) Hughes (WALKER & al., 1982) ou

l'Acladium tenellum (Berk. et Curt.) Subram. (KUYKENDAL & al., 1983).

On retrouve là les divers types de confrontations décrits par MOREAU C. & M.

(1956).

Les premiers articles du F. fulva meurent 3 à 4 jours aprés l'apport de l'H.

pulvinata. Une granulation et une vacuolisation des hyphes et des spores de

l'hôte sont souvent notées. Ces phénomènes sont tardifs et précèdent de peu

la destruction des articles concernés. Les parasites du Rhizoctonia solani (CHAND

& LOGAN, 1984) montrent les mémes diversités et méthodes d'attaque. Les

hyperparasites du F. fulva sont nécrotrophes au sens défini par BARNETT &

BINDER (1973) comme le sont de nombreuses espéces d'Acremonium décrites

par RUDAKOV (1978).

La croissance de l'Hansfordia parait stimulée par la présence du F. fulva dés

le contact entre l'hóte et son parasite. Comme il y a peu de communications

entre les filaments mycéliens, le mode d'action de l'H. pulvinata serait au moins

partiellement lié à l'élaboration d'un sesquiterpéne, qui a déjà été isolé des

filtrats de culture, la désoxyphoménone (TIRILLY & al., 1983), En outre, une

action au niveau des parois cellulaires et des membranes a été notée : la toxine

favoriserait les activités glucanasiques et chitinasiques de l'hyperparasite (TIRIL-

LY, résultats non publiés).

Parmi les champignons colonisant les taches de cladosporiose de la tomate,

l'Hansfordia pulvinata, par ses caractères de croissance rapide et d'interactions

mycéliennes, paraît le plus apte à être utilisé pour une lutte biologique.

Figure 2 — A. Aprés rupture artificielle des contacts, on observe distinctement l'appresso

rium (a) porté par une hyphe mycélienne d'Hansfordia pulvinata recourbée en crochet.

B. Détail de l'appressorium (a) qui présente une surface de contact (s) digitée. C. Péné-

tration (fleche) d'une hyphe d'Hansfordía pulvinata (H. p. dans une spore de Fulvia

fulva (F. £).

Figure 2 — A. After artificial rupture of contacts, the appressorium (a) appears distinctly

bore by an hypha of Hansfordia pulvinata (H. p.) B. Detail of appressorium (a) presen-

ting a digitated contact surface (s). C. Penetration (arrow) of an hypha of Hansfordia

pulvinata (H. p.) in a spore of Fulvia fulva (F. f.).

Source : MNHN, Paris

50 D. LE PICARD, Y. TIRILLY et B. TRIQUE

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EFFECT OF SOME PHENOLIC COMPOUNDS

ON SPORE GERMINATION AND GERM-TUBE LENGTH

OF ASPERGILLUS FUMIGATUS

AND FUSARIUM OXYSPORUM F. SP. LYCOPERSICI

by Ismail Mohamed Kamel ISMAIL, Abdel-Aziz Mahmoud SALAMA,

Mohamed Ibrahim Ahmed ALI and Salama Abu-Elyazeed OUF*

ABSTRACT. — The effects of 12 different phenolic compounds on the percentage germi-

nation and germ-tube lengths of spores of Aspergillus fumigatus Fresenius and Fusarium

oxysporum . sp. lycopersici (Sacc.) Snyder & Hansen were studied. The results indicate

that the compounds vary in their inhibitory action on the spores of these two fungi depen-

ding on dosage, the organism under test and the chemical structure of the compounds.

Gallic acid, resorcinol, m-digallic acid and hydroquinone insignificantly affected the per-

centage spore germination of both fungi, even at high concentrations. The remaining com-

pounds, on the other hand, revealed different inhibitory levels which could be arranged

from the least inhibitory compound to the most in the order pyrogallol, 2 4-dinitrophenol,

phenol, salicylic acid, p-cresol, m-cresol, o-cresol and o-nitrophenol. The effects of the 12

phenolic compounds on the germ-tube lengths of the two fungi were generally similar to

those of spore germination.

RÉSUMÉ. — Étude de l'effet de 12 composés phénoliques sur la germination et la croissance

des tubes germinatifs d’Aspergillus fumigatus Fresenius et de Fusarium oxysporum f. sp.

lycopersici (Sacc.) Snyder & Hansen. Les résultats indiquent que ces composés ont des

effets inhibiteurs variables sur les spores des deux champignons, qui dépendent des doses

appliquées, de l'organisme testé et de la structure chimique du composé. L’acide gallique

le résorcinol, l'acide tannique et l'hydroquinone, ont un effet insignifiant sur le pourcentage

de germination des spores des deux champignons, méme à des concentrations élevées. Par

contre, les autres composés sont inhibiteurs à différents niveaux, et peuvent étre classés du

moins inhibiteur au plus inhibiteur comme suit : pyrogallol, 2,4-dinitrophenol, phenol,

acide salicylique, p-cresol, m-cresol, o-cresol, et o-nitrophenol. Généralement, l'effet des

12 composés phénoliques sur la croissance des tubes germinatifs est semblable à celui obser-

vé sur la germination des spores.

KEY WORDS : Phenolic compounds, spore germination, germ-tube length, Aspergillus

fumigatus, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, gallic acid, resorcinol, m-digallic acid,

hydroquinone, pyrogallol, phenol, 2,4-dinitrophenol, salicylic acid, o-nitrophenol, o-cresol,

m-cresol, p-cresol

* Department of Botany, Faculty of Science, University of Cairo, Egypt.

Source : MNHN, Paris

52 I.M.K. ISMAIL et al.

INTRODUCTION

Phenolic compounds are known to be toxic to a great number of micro-

organisms. Biocides containing phenolic group(s) in their structure have been

used in pest control such as dinitrocresol (VERONA, 1950) and fluometuron

(cotoran or [3-3-trifluoromethyl phenyl)-1,1 dimethyl urea]) (TWEEDY &

LEOPPKY, 1968: NAGUIB. 1969). SHORTLE & al. (1971) indicated that

ortho-dihydroxyphenolic compounds. such as catechol, are much more inhibi-

tory to Phialophora melinii than are meta- or para-dihydroxyphenols, such as

resorcinol and hydroquinone, respectively. Poor growth of Fomes connatus

(Oxyporus populinus) on gallic acid medium has been reported as characteristic

of the fungus (NOBLES, 1948).

Spore germination of Diplodia gossypina was reduced greatly by catechol,

catechin, coumarin, as well as tannic, chlorogenic, D(-) quinic, gallic, or caffeic

acids and to a lesser extent by resorcinol and pyrogallol (WANG & PINCKARD,

1973).

PATIL & al. (1964) indicated that the quinone form of chlorogenic acid,

even at low concentrations, was toxic to spore germination of Verticillium

albo-atrum and that polymerized products had little toxicity. ISMAIL & MI-

CHALIKOVA (1977) studied the effect of some phenolic compounds on spore

germination of Helminthosporium sativum and showed that 2,4-dinitrophenol.

8-hydroxyquinoline and pyrocatechin were significantly stimulatory to spore

germination at low concentrations, while they were significantly inhibitory at

higher concentrations. They also found that salicylic acid, gallic acid and tannin

activated spore germination of H. sativum with highly significant differences,

ORELLANA & THOMAS (1965) reported that gallic acid may promote germi-

nation, growth and sporulation of Botryotinia ricini. VIDHYASEKARAN

(1974) showed that oxidized phenolics markedly inhibited spore germination,

mycelial growth and the activity of pectic and cellulolytic enzymes of Helmin-

thosporium sp.

In the literature, there exist a number of studies dealing with phenolic com-

pounds as enzyme inactivators or inhibitors (PATIL & DIMOND, 1967; RAVISE

& KIRKIACHARIAN, 1976).

Phenolic compounds are widely distributed in higher plants and fungi. Most-

ly, they represent polymerized terminal products of secondary metabolism. The

variety of structure they offer provides a basis for a degree of specificity as

antimicrobial agents (BILGRAMI & DUBE, 1976). Therefore, phenols or tannins

have been implicated as possible cause of disease resistance in plants (WALKER

& STAHMANN, 1955). Phenolic compounds accumulate rapidly during host-

parasite interactions (CRUICKSHANK, 1980) and can mediate disease suppres-

sion through inactivation of fungal enzymes or strengthening of plant structu-

ral components (LEATHAM & al., 1980). LINK (1933) reported that coloured

onion varieties resistant to Colletotrichum circinans (causal organism of smudge

disease) contained more catechol and protocatechuic acid in their bulb scales

than did less resistant varieties. Later, WALKER & LINK (1935) found that

Source : MNHN, Paris

EFFECT OF PHENOLIC COMPOUNDS 53

these two compounds were toxic to the organism in vitro and revealed, when

testing other phenolic compounds on C. circinans and 3 other fungi, that toxi-

city of such compounds was dependent on the molecular structure of the

phenol.

In this paper we report the effects of twelve phenolic compounds on Asper-

gillus fumigatus Fresenius and Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Sacc.)

Snyder & Hansen. This is a preliminary study to determine the significance of

use of plant residues rich in phenolic contents instead of chemical phenolic

compounds as a method for controlling plant diseases through soil amendment

with these plant residues. This is our future goal.

MATERIALS AND METHODS

Organisms

Two fungi were selected for the study : Aspergillus fumigatus Fresenius and

Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Sacc.) Snyder & Hansen. The former

organism was isolated from Egyptian soil and chosen due to the high percen-

tage germination of its conidia, its sensitivity to fungicides and saprophytic

nature. These characters were valuable in using this organism for comparison

with the pathogenic fungi. The latter organism, an important plant pathogen

causing tomato wilt in Egypt, was isolated from infected tomato plants in

Egypt.

Phenolic compounds

Twelve phenolic compounds were used, each in seven concentrations namely

0, 10, 50, 100, 250, 500, 1000 ppm.

For each treatment of each phenolic compound, 7 erlenmeyer flasks (250 ml)

each containing 90 ml of previously prepared Czapek’s agar medium (THOM &

RAPER, 1945) were melted and cooled to about 50°C. Each of 6 flasks recei-

ved 10 ml of previously prepared stock solutions of the phenolic compounds.

The flasks were then shaken to assure uniform distribution yielding the above

mentioned concentrations for each phenolic compound. To the 7th flask 10 ml

of sterile distilled water were added to serve as a control. Sufficient amount

of the mixture in each of the 7 flasks was then poured into each of 4 sterile

Petri plates (90 mm diameter) to form upon solidification a thin layer at the

bottom.

Two plates were surface inoculated with 1 ml spore suspension of Fusarium

oxysporum f. sp. lycopersici and the remaining duplicate were inoculated

with Aspergillus fumigatus. All plates were then incubated at 27°C,

The following phenolic compounds were chosen for the present study :

Source - MNHN. Paris

54 I.M.K. ISMAIL et al.

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1 phenol OH H H H H Ri

2 resorcinol OH H OH H H

3 hydroquinone OH H H OH H

4 pyrogallol OH OH OH H H Rs к

5 o-cresol OH CH3 H H H

6 m-cresol OH H CH3 H H

7 p-cresol OH H H CH3 H

8 o-nitrophenol OH NO» H H H R

9 2,4-dinitrophenol ОН NO; H NO H

10 salicylic acid OH COOH H H H

11 gallic acid OH OH H соон он ВА

12 m-digallic acid OH OH H CsHsOç OH

Preparation of spore suspension

Both Fusarium and Aspergillus spp. were separately inoculated into fresh

plates of Czapek’s agar medium (THOM & RAPER, 1945) and the plates were

incubated at 25°C for 7 days. The spores were harvested from margins of the

colonies using a sterile needle and transferred into test tubes containing 5 ml of

sterile distilled water. The tubes were manually shaken for 5 min. to allow for

even dispersal of spores.

Estimation of percentage germination

Several preliminary trials were made to estimate the time interval (in hours)

needed for the control of each species to give about 50 % germination. This

estimated time interval was carried out in separate control plates and was taken

as a limit at which the variously treated plates were examined. This estimated

time interval for controls was found to be 13.5 hrs for Aspergillus fumigatus and

4.5 hrs for Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici.

By the end of the needed incubation period 2 agar blocks from each plate

were removed on labelled slides and transferred to a desiccator with a vapour of

formalin to fix and kill the spores. Four microscopic fields (magnification power

x 100) per block were then examined at random for their content of percentage

germinated spores and lengths of germ-tubes in microns (i. e. 16 readings for

each treatment).

RESULTS

Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici

Table 1 shows the average values of percentage spore germination at different

concentrations of each of the studied phenolic compounds. The increase in

Source : MNHN, Paris

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Source : MNHN. Paris

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Source : MNHN, Paris

EFFECT OF PHENOLIC COMPOUNDS 57

concentration of certain compounds resulted in a decrease percentage of spore

germination, while that of other compounds was of little or no influence.

Therefore, the phenolic compounds included in this study were grouped into

two categories based on their effect on percentage spore germination. These

were (a) gallic acid, resorcinol, tannic acid (m-digallic acid) and hydroquinone

which revealed no significant effects as compared to their respective control

values; (b) pyrogallol, 2,4-dinitrophenol, phenol, salicylic acid, p-cresol, m-

cresol, ocresol, o-nitrophenol. The lethal dosages of such compounds were 1000

ppm for the first 4 compounds except for that of pyrogallol which was more

than 1000 ppm, 500 ppm for p-cresol and 250 ppm for the last 3 compounds,

It appears that although most of the studied compounds were lethal to ma-

croconidia of F. oxysporum f. sp. lycopersici at relatively high concentrations

(> 50 ppm), none of them, except o-nitrophenol, revealed any significant

toxicity at lower concentrations (10 & 50 ppm).

The effects of different concentrations of some phenolic compounds studied

on the lengths of germ tubes were generally similar to their effects on the per-

centage spore germination.

At the highest concentration (1000 ppm) almost all compounds in groups

(b) were lethal to the macroconidia of this fungus.

Aspergillus fumigatus

All compounds except gallic acid, m-digallic acid and hydroquinone variably

affected spore germination especially at high concentration (Table 2). Although

some of these compounds were lethal even at relatively low concentrations.

others were inhibitory only at higher dosages. Resorcinol, gallic acid and hydro-

quinone were only slightly toxic at the highest concentration (1000 ppm); the

latter two compounds revealed statistically significant activation in Spore germi-

nation of A. fumigatus when present at the lowest concentration used (10 ppm).

The remaining phenolic compounds possessing more inhibitory effect on spore

germination can be arranged according to their effect from the least inhibitory

compound to the most in the order pyrogallol, 2,4-dinitrophenol, salicylic acid,

p-cresol, m-cresol, o-cresol, o-nitrophenol. Complete inhibition of spore germi-

nation was achieved at 100 ppm of o-nitrophenol, at 250 ppm of cresols and

phenol, and at 500 ppm of salicylic acid and 2,4-dinitrophenol. Pyrogallol,

however, did not completely inhibit but greatly retarded spore germination

at 500 ppm concentration.

The results of the effects of the various phenolic compounds on germ tube

lengths of A. fumigatus revealed that m-digallic acid and gallic acid displayed nc

significant effects at any of the concentrations used. Resorcinol and hydroqui

none slightly retarded germ tube elongations at the highest concentrations (500

& 1000 ppm). The lengths of germ tubes were greatly reduced by o-nitrophenol

and to a lesser extent by the cresols and phenol. Pyregallol showed much les:

effects on germ tube length than cresols or phenol,

Source - MNAN, Paris

58 T.M.K. ISMAIL et al:

DISCUSSION

Our results indicate clear toxicity variabilities between tested phenolic com-

pounds depending on the dosage, organism under test, period of incubation or

contact as well as the chemical structure of the compound. In case of Aspergillus

fumigatus and Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, gallic acid, resorcinol, m-

digallic acid and hydroquinone insignificantly affected the percentage spore

germination of both fungi even at high concentrations. The remaining com-

pounds, on the other hand, revealed different inhibitory levels which could be

arranged according to their effect from the least inhibitory to the most in the

order : pyrogallol, 2,4-dinitrophenol, phenol, salicylic acid, p-cresol, m-cresol,

o-cresol, o-nitrophenol.

The effects of the 12 tested phenolic compounds on the germ tube lengths of

the same two fungi were generally harmonious with those of spore germination.

The toxic effect of phenolic compounds on spore germination in vitro was

studied by many authors. BILGRAMI & VERMA (1978) reported that a variety

of plant products, including phenols, mustard oils, etc. have inhibitory effects

on spore germination, SILVIA & SINCLAIR (1983 a-b) stated that a diffusible

substance produced by Laccaria laccata inhibited mycelial growth and delayed

spore germination of Fusarium oxysporum. On the other hand, CHEO (1982)

stated that while rhizomorph development as well as mycelial growth of the

fungus Armillaria mellea were strongly stimulated by addition of tannic acid

(0.3 to 1 75) to the basal medium, growth of many other fungi was inhibited.

Considering spore germination as the first step or phase of growth, the

present work can thus be correlated with published reports dealing with the

effects of phenolic compounds on growth of fungi. WALKER & LINK (1935)

showed that in the phenol and phenolic acid series, toxicity increased with the

molecular weight of the compounds in which the hydroxyl groups are arranged

in ortho-position to one another on the benzene nucleus. The reverse being true

in those in which the hydroxyl groups stand in meta-position to one another.

Hence, phenol, catechol and salicylic acid retarded the growth of all fungi tested.

These findings are in agreement with our results where phenol and salicylic acid

displayed great inhibitory effects while resorcinol (-OH in m-position) resulted

in less or no effect. Likewise, SHORTLE & al. (1971) indicated that ortho-

dihydroxyphenolic compounds such as catechol, were much more inhibitory

to Phialophora melinit than were meta- ot para-hydroxy phenols, such as resor-

cinol and hydroquinone respectively. Moreover, LE TOURNEAU & al. (1957)

reported that the meta isomer of phenol (resorcinol) had no effect on V. albo-

atrum, while the para isomer (hydroquinone) reduced growth considerably

though not as effective as catechol. On the contrary, we have found that for

both fungi hydroquinone (-OH in p-position) and resorcinol (-OH in m-position)

caused negligible effects.

Concerning pyrogallol (1,2,3-trihydroxybenzene), LE TOURNEAU & al.

(1957) found that it was the most inhibitory compound to V. albo-atrum at

Source : MNHN, Paris

EFFECT OF PHENOLIC COMPOUNDS 59

1 x 10^ M. The toxicity of this compound to other fungi had also been reported

by others (WALKER & LINK, 1935; GREATHOUSE & RIGLER, 1940). In the

present investigation, however, pyrogallol was moderate toxicity to the two

fungi studied.

The present study also showed that o-cresol was more inhibitory to A. fumi-

gatus and F. oxysporum f. sp. lycopersici than m-cresol and p-cresol, and the

three cresols were more toxic than phenol. These data lead to the suggestion

that an introduction of a methyl group (-CH3) in ortho-position to the phenol

molecule produces a more inhibitory compound than otherwise.

The results also provide an evidence that a nitro group in ortho-position

of the phenol molecule (o-nitrophenol) produces a more toxic compound than

phenol itself. However, the introduction of another nitro group but in the para-

position (2,4-dinitrophenol) does not lead to more toxicity than o-nitrophenol.

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NOTAS SOBRE HIFOMICETOS ACUATICOS SAPROFITOS

EN RESTOS VEGETALES

por A. ROLDÁN*, E. DESCALS* y M.HONRUBIA*

RESUMEN. — Catorce sustratos diferentes (hojas inmersas en cursos de agua) se incubaron

en agua aireada. Veinte siete taxones anamorfos se detectaron como saprófitos. Se discuten

los resultados obtenidos, especialmente aquellos sustratos que se dan como nuevos.

RÉSUMÉ. — En vue d'une étude sur les relations des hyphomycètes aquatiques avec leur

substrat, des feuilles d'arbres récoltées dans des ruisseaux du S.E. de l'Espagne ont été

incubées au laboratoire dans de l'eau aérée. Quatorze espèces d'Angiospermes ont fourni

27 anamorphes différentes. Les résultats obtenus sont discutés, en particulier ceux concer-

nant les substrats considérés comme nouveaux.

SUMMARY. — In a study on substrate relationships of waterborne hyphomycetes and

related fungi, naturally colonized allochthonous decomposing leaves from streams in South-

east Spain, were incubated in aerated water in the laboratory. Fourteen species of angio-

sperms yielded 27 anamorphs. Results, especially those referring to new substrate records

worldwide, are discussed.

MOTS CLÉS : Hyphomycétes aquatiques, saprophytes, sporulation.

INTRODUCCION

Los primeros “hifomicetos acuáticos” fueron descritos en suelo y sobre algas.

INGOLD (1942) describe gran número de especies saprófitos en hojas de Alnus

Con posterioridad, los estudios llevados a cabo sobre este grupo de organismos

se centran en el aislamiento y cultivo puro de conidios procedentes de muestras

de espuma. Por este motivo, en muchos de estos hongos el sustrato es descono-

cido y, consecuentemente, su papel ecológico en ecosistemas léticos.

La esporulación de hifomicetos acuáticos en cultivo es un proceso poco

estudiado, generalmente se induce por inmersión en agua estancada, pero hay

suficientes indicios de que agua corriente (en flujo) es necesaria para una esporu-

lación abundante y típica, al menos en algunas especies (DESCALS & al., 1976).

* Departamento de Botánica. Facultad de Biología. Univ. de Murcia. España.

** Cases Noves, Esporles. Mallorca. Baleares.

Source : MNHN. Paris

A. ROLDAN, E. DESCALS y M. HONRUBIA

WEBSTER & TOWFIK (1972) y WEBSTER (1975) demuestran que la esporu-

lación se ve favorecida cuando se sumerge el sustrato en agua y se le aplica una

corriente de aire esterilizado comprimido. Parece que este efecto es similar a las

condiciones de turbulencia de los arroyos en que estos hongos se desenvuelven.

Otra explicación posible sería que el aumento de la esporulación fuera resultante

del incremento de la cantidad de oxigeno disuelta; pero WEBSTER €: TOWFIK

(1972) sustituye el aire por nitrógeno molecular con idénticos resultados. En

el mismo trabajo deduce que el aumento de la esporulación no se puede atribuir

al desplazamiento de un inhibidor de naturaleza gaseosa.

Aunque los experimentos de WEBSTER se realizaron con cultivos en medio

artificial, el efecto es extrapolable al hongo sobre sustrato natural.

El objectivo del presente artículo ha sido estudiar una amplia gama de restos

vegetales, escogidos entre los más característicos del S.E. español; para ello se

ha utilizado la metodología que a continuación se detalla.

MATERIAL Y METODOS

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Los restos vegetales se recolectaron en bolsas de plástico, mantenidas a 4-5 С

para su mejor conservación. Identificados dichos restos, se lavaron cuidadosa-

mente para eliminar conidios contaminantes. Seguidamente, se dispuso el mate-

rial en recipientes de cristal y se cubrieron de agua destilada. Se les aplicó una

corriente continua de aire, mediante un circuito de tubos alimentados por un

compresor.

Después de 48 horas se ha producido abundante esporulación. En las paredes

del recipiente suele acumularse espuma, donde quedan atrapados los conidios

desprendidos. Si, por el contrario, no se ha producido espuma, se puede inducir

su formación aplicando unas gotas de detergente diluido momentos antes de la

recolección de las muestras, Estas se disponen sobre portaobjetos, se dejan secar

al aire y se ti&en con lactofucsina.

Las distintas experiencias se numeran en la Tabla I, para cada una se indica :

tipo de sustrato, localidad de procedencia, naturaleza caliza o silícea del sustrato

geológico por el que discurre el curso de agua y fecha de recolección.

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TABLA I: Sustratos y localidades

TABLEAU I: Substrats et localités

- Salix fragilis L. Río Hornos (Jaén). WH 24. Calizo. 19-IV-85.

- Populus nigra L. Río Hornos (Jaén). WH 24. Calizo. 19-IV-85.

- Salix sp. Arroyo Endrinales (Albacete). WH 5667. Calizo. 1-V-85.

» Populus nigra L. Arroyo Endrinales (Albacete). WH 5667. Calizo. 1-V-85.

- Populus nigra L. Arroyo Barbezoso (Albacete). WH 27. Siliceo. 30-IV-85.

- Crataegus monogyna Jacq. Arroyo del Membrillo (Jaén). WH 1210. Calizo. 19-VII-85.

. Populus nigra L. Río Mundo (Albacete). XH 0458. Calizo. 18-VII-85.

- Salix eleagnos Scop. Rio Mundo (Albacete). WH 6660. Calizo. 18-VII-85.

. Juglans regia L. Rio Taibilla (Albacete), WH 5738. Calizo. 28-VIII-85.

Source : MNHN, Paris

HIFOMICETOS ACUATICOS 63

10, Populus alba L. Río Vinalopó (Alicante). YH 0287. Calizo. 9-X1-85.

11. Populus nigra L. Río de Agres (Alicante). YH 2396. Calizo, 9-X1-85

12. Populus euphratica Olivier Río Vinalopó (Alicante). YH 0140, Calizo. 9-XI-85.

13. Acer monspessulanum L. Los Chorros (Albacete). WH 45. Calizo. 16-XI-85.

14. Fraxinus angustifolia Vahl. Los Chorros (Albacete). WH 45. Calizo. 16-X1-85.

15. Crataegus monogyna Jacq. Los Chorros (Albacete). WH 45. Calizo. 16-X1-85.

16. Salix fragilis L. Los Chorros (Albacete). WH 45. Calizo. 16-X1-85.

17. Populus nigra L. Arroyo Berruga (Almeria). WG 3619. Silíceo. 5-X-85.

18. Populus nigra L. Río Chico (Granada). VF6284. Silíceo. 1-1-86.

19. Robinia pseudoacacia L. Rio Chico (Granada). VF 6284. Silíceo. 1-1-36.

20. Salix atrocinerea Brot, Rio Chico (Granada). VF 6284. Siliceo.

21. Quercus pyrenaica Willd. Río Poqueira (Granada). VF 6788. Silíceo. 1-1-86,

22. Juncus sp. Barranco Hornillo (Almeria). VG 9705. Silíceo. 1-186.

DISCUSION

Los resultados se resumen en la Tabla II, donde se relacionan las distintas

especies de hifomicetos acuáticos con sus correspondientes sustratos vegetales

y geológicos.

WEBSTER & DESCALS (1981) relacionan los hifomicetos acuáticos descritos

hasta la fecha respecto de los sustratos donde habían sido detectados.

En el presente artículo se amplían los datos sobre la ecología de algunas

especies. Así, Alatospora pulchella, que sólo se conocía sobre helechos, se cita

por primera vez sobre hojas de P. nigra y tallos de Juncus sp.

Lemonniera pseudofloscula ha sido encontrada sobre hojas de P. nigra y L

terrestris sobre hojas de S. atrocinerea, R. pseudoacacia, Q. pyrenaica y tallos de

Juncus sp., lo que supone nuevos sustratos para estos hongos. Cabe resaltar

igualmente la versatilidad ecológica de Mycocentrospora acerina, que puede

constituirse en un peligroso parásito humano (DEIGHTON & MULDER, 1977)

y que ha sido hallado sobre hojas de Q. pyrenaica.

Volucrispora ornithomorpha no es recopilada por WEBSTER & DESCALS

(1981) ya que puede tener un hábito de vida terrestre; en el estudio aquí reali-

zado, se ha observado colonizando hojas sumergidas de R. pseudoacacia.

Tetracladium apiense, descrito por SINCLAIR & EICKER (1981), sobre

hojas no identificadas, se cita por primera vez sobre R. pseudoacacia y S. atroci-

nerea. Leptocladia neglecta es una especie de reciente descripción (MARVA-

NOVA & DESCALS, 1985), conocida hasta ahora sólo por la presencia de sus

conidios en espumas de arroyos. En la Tabla II se indican tres sustratos para

este hongo.

Los resultados obtenidos no pueden ser interpretados de manera definitiva;

las diferentes experiencias se realizaron a temperatura de laboratorio (16-24*C).

Quizás, con un mayor control de las condiciones ambientales, la lista de especies

detectadas se habría visto aumentada, especialmente en los experimentos reali-

zados durante el verano, cuando la temperatura de laboratorio y la propia del

Source : MNHN, Paris

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Source : MNHN, Paris

HIFOMICETOS ACUATICOS 65

agua fluvial pueden diferir en más de 10°C. De alguna manera, se podría inter-

pretar que las especies manifestadas presentan unas características esporuladoras

de amplio espectro térmico, poco sensibles a cambios de temperatura.

Respecto de las exigencias de sustrato, Tetracladium marchalianum (10 sus-

tratos diferentes), Heliscus lugdunensis (8), Alatospora acuminata (8) y Tricla-

dium angulatum (6) han resultado ser los de mayor capacidad de colonización.

Estos datos eran previsibles, por cuanto tales especies son las más ampliamente

citadas en la bibliografía. Ahora bien, las referencias bibliográficas aluden casi

exclusivamente a su presencia en aguas silíceas, mientras que la mayoría de las

muestras aquí examinadas proceden de arroyos calizos.

Por otra parte, también se har manifestado especies en forma esporádica :

Alatospora flagellata, Chaetospermum chaetosporium, Mycocentrospora acerina

y Volucrispora ornithomorpha, lo cual coincide con las escasas referencias habi-

das de ellas. En otros casos, como Tricladium giganteum, su limitada presencia es

imputable a su demostrada especificidad sobre un sustrato determinado, en este

caso restos de Juncus sp.; o, como en Tricladium splendens y Tetrachaetum

elegans, por su exclusiva presencia en zonas silíceas, Hay sustratos sobre los que

no se ha encontrado ninguna especie, como en S. eleagnos, probablemente por-

que el material no tuvo tiempo de ser colonizado en el cauce. El caso de P.

euphratica es especial; sobre él han aparecido Alternaria alternata y Fusarium

aquaeductuum, dos hifomicetos no considerados dentro del grupo. La ausencia

de ‘hifomicetos acuáticos', puede deberse a la elevada concentración en sales de

las aguas; si bien esta especie de chopo sólo se desarrolla bajo tales condiciones,

por lo que es posible que en el papel de descomponedores de sus hojas, se han

visto relegados los ‘hifomicetos acuáticos’ por otras especies, normalmente

ligados al medio terrestre. Otros sustratos, en cambio, aparecen como más

favorables para el desarrollo de una micoflora diversa, P. nigra, con hasta 12

colonizadores, aparece como el sustrato que mayor número de especies soporta.

Esto es explicable, en cierto modo, por tratarse del más extendido y estudiado,

dadas las vastas repoblaciones existentes a lo largo de los cursos de agua de la

zona. Algo similar ocurre con S. fragilis, con 7 hifomicetos detectados.

S. atrocinerea y Q. pyrenaica aparecen citados en la bibliografía (WEBSTER

8: DESCALS, 1981) como muy buenos sustratos; lo que coincide con lo expre-

sado en la tabla II, cuyos datos han sido obtenidos a partir de una sola recolecta

y, en el caso de О. pyrenaica, de una sola hoja.

A pesar del importante námero de anamorfos detectados (27 en total), en

espumas naturales de la zona se han reconocido más de 60 (ROLDAN & al.,

a - b, en prensa). Esto parece demostrar la falta de conocimiento existente sobre

el hábito de vida de estos hongos, incluyendo sus sustratos naturales, Estudios

detallados sobre el tema se plantean, pues, como necesarios.

REFERENCIAS

DEIGHTON F.C. and MULDER J.L., 1977 — Mycocentrospora acerina as a human patho-

gen. Trans. Brit. Mycol. Soc. 69 : 326-327.

Source : MNHN, Paris

66 A. ROLDAN, E. DESCALS y M. HONRUBIA

DESCALS E., NAWAWI A. and WEBSTER J., 1976 — Developmental studies on Actino-

spora and three similar aquatic hyphomycetes. Trans. Brit. Mycol. Soc. 67 : 207-222.

, 1942 — Aquatic hyphomycetes of decaying older leaves. Trans. Brit. Mycol.

39-417.

MARVANOVA L. and DESCALS E., 1985 — New and critical taxa of aquatic hyphomy-

cetes. Bot. J. Linn. Soc. 91 : 1-23.

ROLDAN A., DESCALS E. y HONRUBIA M., a — Hifomicetos acudticos en las cuencas

altas de los ríos Segura y Guadalquivir. Anales Biol. Univ. Murcia (en prensa).

ROLDAN A., DESCALS E. y HONRUBIA M., b — Hifomicetos acuáticos en Sierra Nevada.

Acta Bot. Malacitana (en prensa).

SINCLAIR R.C. and EICKER A., 1981 — Tetracladium apiense, a new aquatic species

from South Africa. Trans. Brit. Mycol. Soc. 76 : 515-517.

WEBSTER J. and TOWFIK F.H., 1972 — Sporulation of aquatic hyphomycetes in relation

to aeration. Trans. Brit. Mycol. Soc. 59 : 353-364.

WEBSTER J., 1975 — Further studies of sporulation of aquatic hyphomycetes in relation to

aeration, Trans. Brit. Mycol. Soc. 64 : 119-127.

WEBSTER J. and DESCALS E., 1981 — Morphology, distribution and ecology of conidial

fungi in freshwater habitats. In : COLE G.T. and KENDRICK B., The Biology of Coni-

dial Fungi. New York, Academic Press : 295-355.

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

HOWARD D.H., 1983, 1985 — Fungi pathogenic for human and animals (in

three parts). Part B. Pathogenicity and detection I and IL. New York & Basel,

M. Dekker Inc. 543 p., 381 p.

Ces deux tomes font partie d'une série mycologique qui sera constituée de

six volumes. En fait, seul le «volume» 3, qui comprend trois tomes notés respec-

tivement d'une façon qui n’est pas idéale : Part A, Part B-I et Part B-II, est con-

sacré à la mycologie médicale. Ces deux tomes regroupent en fait des questions

occupant soit une place centrale prédominante en mycologie médicale soit

une position marginale comme le montre bien la liste des thémes traités. La

partie B. Pathogénicité et détection - I (sous entendu des champignons dans

l'organisme-hóte) comprend les chapitres suivants : 1) les mécanismes du pou-

voir pathogéne, 2) les cellules intervenant dans les mécanismes de défense, 3)

les réponses humorales, 4) le sérodiagnostic, 5) l’utilisation des antigènes dans

l'évaluation de la réaction immunitaire, 6) la détection des antigénes circulants,

7) le mode d'action des antifongiques, 8) la mesure de l'activité des antifon-

giques, 9) les champignons toxiques, 10) les mycotoxines et les mycotoxicoses.

La partie B. Pathogénicité et détection - I1 comprend : 1) la nutrition, la physio-

logie et le métabolisme des champignons pathogènes, 2) la composition des

parois, 3) les particules cellulaires (par exemple : les virus), 4) l'importance de

la phagocytose dans les réponses de l'hóte, 5) la conservation, les collections et

la distribution des souches, 6) l'épidémiologie des mycoses, 7) la détection des

champignons dans les tissus, 8) les techniques habituelles de cultures et de détec-

tion des champignons pathogènes pour l’homme, 9) les vaccins fongiques, 10)

la taxonomie du genre Exophiala.

En fait, les sujets exposés peuvent être répartis en deux ensembles : le premier

comprend des thèmes d'actualité, le deuxième des thèmes classiques dont

l'intérêt réside surtout dans leur présentation.

Le premier ensemble est essentiellement constitué des chapitres consacrés

à l'immunologie, comme les mécanismes du pouvoir pathogène, les réponses

humorales, la phagocytose, la détection des antigénes circulants. Ces différents

problémes font l'objet de travaux dans différents laboratoires et nos connais-

sances encore bien incomplètes devraient se développer rapidement au cours des

années à venir. Il apparaît déjà très nettement qu'il existe plusieurs variantes

dans les mécanismes de défenses et que ceux-ci sont impliqués différemment

selon le type d'infection. Les altérations de l'une d’entre elles favorisent donc

une mycose ou un groupe de mycoses en particulier. La détection des antigènes

circulants selon différentes techniques biochimiques constitue un sujet impor-

tant aussi bien en parasitologie qu'en mycologie. Les caractérisation des anti-

gènes ou de métabolites spécifiques d'une espèce devrait constituer une méthode

de choix dans le diagnostic des mycoses profondes.

Source : MNHN, Paris

68 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

Le deuxième ensemble comprend divers chapitres comme l’épidémiologie

des mycoses ou la détection des champignons dans les tissus. Dans ce dernier

cas, à côté de quelques techniques originales, on trouve des colorations de rou-

tine exposées depuis de nombreuses années dans les manuels de mycologie.

Quelque soit l'originalité des sujets traités, l'existence de plans placés en tête

de chaque chapitre, la division en paragraphes bien individualisés permet une

lecture facile et montre d'emblée les éléments primordiaux. Chaque chapitre

par ailleurs est accompagné d’une bibliographie généralement importante.

En conclusion, ces ouvrages ne sont pas à considérer comme l'équivalent de

traités de mycologie médicale — on devra rechercher dans ceux-ci les éléments de

base — mais ils fourniront aux chercheurs et aux enseignants de très nombreuses

informations sous une forme facile à consulter.

C. de Bièvre

CASSELTON L.A., WOOD D.A. and FRANKLAND J.C., 1985 — Developmental

biology of higher fungi (British Mycological Society Symposium 10, Man-

chester Avril 1984). Cambridge, Cambridge University Press, 615 p.

Dans le courant des deux dernières décennies, plusieurs ouvrages collectifs

ont traité de divers aspects de la physiologie du développement des champignons

considérés dans leur ensemble. Dans la plupart d'entre eux, un chapitre est

consacré aux macromycétes, ceux-ci pouvant également faire l'objet d'analyses

comparatives (ex : physiologie comparée de la croissance ou de la reproduction

de micromycétes et de macromycétes du point de vue de divers facteurs : fac-

teurs nutritionnels, température, lumière. ..). En dépit de l'intérêt indéniable

de ces ouvrages, ilest apparu utile, au cours des dernières années, d'établir des mises

au point plus spécialisées, consacrées aux seuls macromycètes. Cette nouvelle

approche est complémentaire des précédentes : il serait imprudent de considérer

comme indépendantes les recherches consacrées au développement des macro-

mycétes et celles portant sur le développement des micromycétes... et des

autres organismes — végétaux. . . sinon animaux.

Les ouvrages évoqués viennent d'étre complétés utilement par la publication

de «Developmental biology of higher fungi» où chaque chapitre a été rédigé

par un ou plusieurs spécialistes. Comme à l'accoutumé pour ce type d'ouvrage,

le lecteur ne devra pas s'attendre à trouver cohésion et harmonie parfaites entre

les chapitres du livre, rédigés en toute indépendance par des auteurs soucieux

de développer un théme propre. Dans ces conditions, un hommage peut leur

étre rendu, ainsi qu'aux «éditeurs» : il n'y a pratiquement pas de redites impor-

tantes apparaissant à la lecture de chapitres successifs,

Les 6 premiers chapitres relèvent de l'écophysiologie des champignons supé-

rieurs (un chapitre est consacré aux agaricales tropicales). de la phytopathologie

(un chapitre est consacré aux Armillaria) et des interactions champignons-

végétaux supérieurs (un chapitre sur la dynamique de la mycorhization en liaison

avec le développement forestier),

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 69

Les 5 chapitres suivants correspondent plus directement à l'intitulé de l'ou-

угаре. Ils traitent d'aspects cytologiques et histologiques. On notera en parti-

culier un chapitre sur «la formation du dicaryon» et un autre sur «les caracté-

ristiques du développement des agaricales». Ces deux mises au point pourront

étre consultées utilement par les chercheurs ayant éventuellement quelques

«trous de mémoire» en matiére de sexualité des basidiomycètes ou en matière

de développement d'agaricales.

Les 8 chapitres qui suivent traitent de la physiologie des carpophores depuis

la différenciation des primordiums jusqu'à la formation des basidiospores, en

passant par l'étude de l'élongation des stipes et la formation des différentes

parties constitutives des chapeaux. Deux chapitres sont consacrés à une ap-

proche fondamentale de la physiologie de champignons comestibles : l’un

traite de la biochimie de la fructification du champignon de couche, l'autre de

la fructification sur milieu défini du Shiitake (Lentinus edodes). L'utilité de ces

chapitres spécialisés pourrait échapper. Il paraît donc opportun de souligner ісі

que. pour des raisons techniques diverses, les champignons comestibles en géné-

ral ont été jusqu'à présent relativement peu étudiés, dans la mesure où leur fruc-

tification in vitro reste problématique et l'étude de leur physiologie in situ

aléatoire. D'où l'intérêt général certain des 2 chapitres évoqués.

Ensuite, 4 chapitres ouvrent diverses perspectives d'avenir prometteuses sur

l'approche du développement des champignons supérieurs via les techniques

modernes de la biologie cellulaire et de la biologie moléculaire. On notera les

résultats obtenus dans le cas de Schizophyllum commune où les relations établies

entre gènes, ARNm et des polypeptides majeurs, et diveres étapes de la morpho-

genèse des carpophores, laissent bien augurer de progrès rapides en la matière.

Des travaux similaires devraient se développer concernant les coprins. Dans le

cas de ces derniers, on notera une meilleure approche des problèmes de recom-

binaison génétique par le biais de recherches approfondies sur la méiose. Un

chapitre aborde utiliment le problème de la définition d'une stratégie en vue

de la sélection d'espèces comestibles. Les chercheurs fondamentalistes pourront

y juger des problèmes concrets posés aux généticiens qui se préoccupent effec-

tivement de déboucher sur l'application.

En suite logique, 2 chapitres concernant directement l'application sont

consacrés aux problèmes spécifiques posés par la biologie et la technologie du

champignon de couche (compostages...). Enfin, un avant-dernier chapitre

énumére divers métabolites secondaires produits par des agaricales. Leurs rôles

et intérêts pratiques éventuels sont discutés.

Le 27ème et dernier chapitre esquisse, avec une prudence légitime, une

«synthèse» sur l'état actuel des connaissances relatives à la biologie du dévelop-

pement des agaricales. Ce chapitre présente l'originalité d'avoir été co-rédigé

par A.F.M. REIJNDERS — qui compte parmi les rares spécialistes de la cyto-

histologie du développement des carpophores d'agaricales — et D. MOORE

spécialiste de la physiologie du développement des coprins. Leur texte a le mé

rite de souligner que les champignons supérieurs constituent, de longue date,

un excellent modèle d'étude de la biologie générale du développement. En effet,

Source : MNHN, Paris

70 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

l'étude de leurs carpophores laisse quelques espoirs de parvenir à «démonter»

certains mécanismes intervenant au cours de diverses étapes de leur différencia-

tion (ex : induction de la phase végétative, différenciation des hyméniums au

sein des primordiums, évolution des hyméniums : méiose, sporogenése.

La formation des carpophores offre certainement 4... un système accessible

pour l'étude de la génétique et des bases moléculaires d’un développement multi-

cellulaire...» (J.G.H. WESSELS in Molecular genetics of filamentous fungi,

p. 193. Alan R. LISS Inc.). Encore conviendrait-il que dans le futur, les ap-

proches génétiques, physiologiques. cytologiques et histologiques soient con-

duites non plus séparément mais de maniéres plus coordonnées et intégrées.

Les auteurs des 27 chapitres évoqués .… et leurs collaborateurs actuels et futurs

sauront-ils — ou pourront-ils — évoluer dans ce sens ?

G. Manachére

GIANINAZZI-PEARSON V. and GIANINAZZI S., 1986 — Physiological and

genetical aspects of mycorthizae. Aspects physiologiques et génétiques des

mycorhizes. (Actes du ler Symposium Européen sur les Mycorhizes, Dijon

1-5 juillet 1985). Paris, INRA, 832 p.

Les progrès des recherches en matière de mycorhizes sont impressionnants,

et la France joue un rôle de choix.

A la faveur du Symposium de Dijon ont été surtout évoqués les travaux en

relation avec les thèmes suivants : Infection et intercations cellulaires; Physiolo-

gie de la nutrition; Taxonomie et Génétique.

En sus, une formule très élégante, sous la forme de 113 «communications

aux ateliers» (brèves notes recouvrant une multitude d'approches) a préparé

une table ronde finale animée par le très réputé Prof. HARLEY.

Il n'est guère d'espèce prairiale, forestière, légumière ou horticole, qui ne fasse

l'objet de recherches poussées en matière de mycorhizes. Ce qui ressort du vo-

lume remarquable (à la présentation impeccable) c'est que, gráce à la microsco-

pie électronique, à l'approche biochimique, aux progrés de la microbiologie

appliquée, et surtout à la sagacité sans limite des chercheurs, les complexes

mycorhiziens sont sans cesse mieux «démontés» et, tour à tour : la reconnais-

sance réciproque des partenaires, la constitution des unions (avec approche ultra-

structurale), leur fonctionnement intime (flux de carbone, de phosphore, d'a-

zote...), le choix des meilleurs associés fongiques (en vue d'applications), les

stress subis sous l'influence de polluants atmosphériques ou des sols sinon de

pesticides ou d'adversités climatiques, l'inhibition des pathogénes potentiels

par le partenaire fongique, tout cela fait l'objet de communications de trés

grande valeur.

Aux informations regroupées dans ce gros volume on peut à coup sûr juxta-

poser des applications dans tous les domaines : agriculture, sylviculture, horti-

culture, qui savaient pourtant déjà tirer parti des «associations mycorhiziennes».

Voici un ouvrage qui «fait le point», que tout passionné de mycorhizes aussi

bien que tout praticien éclairé, devra se procurer... en attendant le prochain

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 71

volume rendant compte du futur Symposium de Prague... en 1988 !

B. Boullard

COOKE W.B., 1985 — The fungi of our mouldy earth. (A compilation). Beihefte

zur Nova Hedwigia - Heft 85. J. Cramer ed. 467 p.

W.B. COOKE propose ici un inventaire actualisé des champignons filamen-

teux et des levures rencontrés dans les eaux résiduaires, les eaux polluées, les

champs d'épandages ou autres systèmes de traitement des eaux résiduaires.

Il rapporte les résultats des analyses effectuées par son équipe et les données

trouvées dans la littérature.

Dans la première partie, il expose les techniques de récolte, les principaux

milieux de culture pour l'isolement et l'identification ainsi que la description

(sommaire) de la cinquantaine d'habitats oà ont eu lieu les prélèvements.

Vient ensuite la classification des champignons rencontrés par ordre systé-

matique de classes, ordres, familles, genres et espéces avec clés d'identification

(90 pages). Chaque espéce est ensuite reprise, toujours dans l'ordre systématique,

accompagnée du nom du récolteur, des lieux de récolte, de la fréquence d'iso-

lement et d'un qualificatif (lymabionte, lymaphile, lymaxéne et lymaphobe)

indiquant la faculté du champignon de se développer exclusivement, facultati-

vement,temporairement ou jamais dans les milieux étudiés.

Cet exposé constitue la partie la plus importante de l'ouvrage.

On trouve ensuite un glossaire, une liste bibliographique de 193 références

ainsi que 114 figures au trait, originales ou reprises dans des publications anté-

rieures.

Deux tableaux récapitulatifs complétent enfin cet ouvrage : l'un reprend

les habitats et le nombre d'espèces rencontrées dans chacun d'eux et l'autre

les espèces et leur fréquence d'isolement par habitat.

L'ensemble constitue un ouvrage de compilation d'un volume et d'un intérét

considérable méme si Pon regrette un peu le faible nombre de données d'ordre

biologique et l'absence de tentative de synthèse des résultats.

М.Е. Roquebert

SINGER R., 1986 — The Agaricales in modern Taxonomy, 4e édition, Kæ-

nigstein (R.F.A.), Koeltz Scientific Books, 981 pages, 88 planches dont 2

en couleurs.

La quatrième édition de ce volumineux ouvrage, véritable Somme bien

connue de tous les mycologues, et l’un des plus importants ouvrages mycolo-

giques parus en ce siècle, présente les mêmes qualités et le même intérêt que les

précédentes, en ce sens que ce Traité est le seul à s'appliquer non seulement à

la flore européenne et nord-américaine, mais à celle de toute la planéte; de plus

il assigne une place précise à la presque totalité des espèces ou groupes d'espèces

actuellement connues. Ce résultat n’a pu être obtenu que par la connaissance

approfondie qu'a l'auteur de toute la littérature parue sur le sujet avant l'avéne-

Source : MNHN, Paris

72 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

ment du microscope électronique et de la chimiotaxinomie, ainsi que par les

séjours qu'il a faits dans de nombreuses régions des deux Amériques, et même

jusque dans les montagnes de l'Asie soviétique, Caucase, mont Altai. On trouve

donc, dans ce livre, une mine inépuisable de renseignements de tous ordres.

Le livre s'ouvre par des compléments sur les Généralités qui figuraient dans les

anciennes éditions, car l'Auteur ne pouvait pas ne pas mentionner les décou-

vertes récentes ayant une incidence sur la taxinomie. On trouve donc successi-

vement les rubriques suivantes : couleur des sporées, mycéliums (notamment

sur leur obtention en culture pure; rhizomorphes, sclérotes, mycorhizes),

lichénisation des carpophores, formations plus ou moins tératologiques. gasté-

romycétation, cyphelisation, tuberisation, arthrosporocarpes et carpophores syn-

nematoides, embryologie, voiles (par Reijnders) structures des carpophores, hymé-

nium, tissus stériles, revétements, spores, structures fines de leur paroi (cette

partie, très brève, par H. Clémençon), macroréactifs et analyse chimique, carac-

téres physiques, chorologie et écologie, théories phylogénétiques, définition

des taxa. En tour, 148 pages qui constituent la partie la plus nouvelle et la plus

intéressante de cette édition, car la classification adoptée n'a que peu varié

par rapport à la troisième.

Plusieurs taxa supragénériques ont été créés : dans les Tricholomacées, la tribu

des Termitomycètes pour Termitomyces et Podabrella, et la tribu des Tricholo-

matées qui a été divisée en 4 sous-tribus : Laccariinées, Clitocybinées, Tricholo-

matinées et Omphalinées.

Les Inocybe ont été isolés dans la tribu des Inocybées Fayod, ce qui est

conforme à notre opinion. Dans les Boletacées, les Gyroporus constituent la

sous-famille des Gyroporoidées et les Strobilomyces, sont isolés dans la sous-

famille des Strobilomycetoidées. Les familles de Bondarzewiacées et des Russu-

lacées sont réunies dans le sous-ordre des Russulinées.

Plusieurs genres ont été admis ou débaptisés : Físsolimbus (Omphalinées),

Pegleromyces, Mycoalvimia (Mycénées), Callistodermatium (Pseudohiatulées),

Sericeomyces, Janauaria (Lépiotées), Horakia a la place de Verrucospora (Cysto-

dermatées). Certains, dont la position taxinomique était en 1975 considérée

comme incertaine ont été insérés dans la classification : Boletochaete a été

placé dans les Boletoidées, ainsi que Fistulinella et Austroboletus; Merismodes

en a été exclu, comme de position incertaine.

D'autres ont changé de position : Hypsizygus a été versé dans les Lyophyl-

lées, vraisemblablement avec raison, Pseudoconocybe a été intégré aux Conocy-

be, Cuphocybe a trouvé sa vraie place dans les Cortinariées, cette même famille

accueillant aussi les Lampteromyces, et Velomycena est tombé en synonymie de

Galerina; enfin, Phyllobolites a été placé dans les Paxillacées.

Ces modifications, comme on le voit peu nombreuses, semblent pour la plu-

part heureuses; c'est également le cas de l'exclusion de Lentinellus des Leuco-

paxillées.

Cependant, on regrette que l’auteur ne soit pas allé beaucoup plus loin. La

critique majeure que l’on pouvait faire à sa classification de 1975 était de

n'avoir pas tenu compte des données nouvelles apportées à la mycologie systé-

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES EE

matique par la microscopie électronique à transmission, qui a permis de mieux

connaitre l'ultra-structure des parois sporiques, et par la chimiotaxinomie, en

particulier l'analyse des pigments, qui ont révélé des affinités inattendues entre

les taxa antérieurement admis. De plus, les critiques, dont beaucoup sont pour-

tant trés pertinentes, que son systéme a suscitées, et qu'on pouvait s'attendre à

voir discuter, ne serait-ce que pour les réfuter, ont été passées sous silence ou

trop brièvement mentionnées. Ces critiques, dont beaucoup émanent de l'école

française, étaient pourtant développées ou reprises dans l'œuvre monumentale

de R. Kühner «Les Hyménomycétes agaricoides» parue à Lyon en 1980, et qui,

tout autant que celle de Singer, marquera une date dans l'histoire de la Systé-

matique du XXéme siécle. Or, six ans aprés, cet ouvrage capital n'est méme pas

cité dans la Bibliographie générale (on y trouve seulement les références des

articles préliminaires publiés dans le Bulletin mensuel de la Société linnéenne de

de Lyon avant cette date); la mention n'en est faite qu'incidemment, sous la

plume de H. Clémengon, dans les quelques pages rédigées par celui-ci sur les

ultrastructures de la paroi sporale. Nous ne nous expliquons pas cette énorme

lacune. L'auteur aurait-il renoncé à en tenir compte à cause des bouleversements

que cela eût apportés à son Système ?

1l est en effet resté sur ses positions à propos de la plupart des points impor-

tants, même les plus judicieusement contestés : il persiste par exemple à regarder

les Agarics comme dérivés des Gastéromycétes, bien que la complexité de la

structure des parois sporales et l'absence de boucles de la plupart d'entre eux

dénoncent un degré d'évolution trés poussé, dans le sens régressif pour le carpo-

рһоге. Les Cystodermées sont maintenus dans les Agaricacées (— Lepiotacées) et

il place la Lepiota echinata à côté des Psalliotes, alors que diverses raisons,

trés solides (spores, sous-hyménium filamenteux) rattachent clairement les

premières aux Tricholomacées, et que les pigments sporaux de la deuxième

n'ont rien de commun avec ceux des Psalliotes. Les Panaeolus sont maintenus

dans les Coprinacées, alors que des chrysocystides très typiques se rencontrent

chez plusieurs espèces, ce qui dénonce de toute évidence une étroite parenté

avec les Strophaires et que 1a aussi le pigment sporal est chimiquement différent

par sa résistance à l'acide sulfurique. Les Pluteacées sont rapprochés des Ата-

nitacées, malgré la structure trés différente de la paroi des spores, qui la rap-

proche des Entolomacées, exactement comme pour le Macrocystidia, qui n’a rien

à voir avec les Tricholomacées. Kühner à démontré que la conception de Singer

des Crepidotacées ne pouvait être acceptée dans l'extension qu'il lui accorde,

ses Simocybe (gr. centunculus) étant en réalité très voisins des Agrocybe, et ses

Phaeomarasmius (sauf le type) qu'il range dans les Cortinariacées, ne pouvant

étre éloignés des Tubaria, autre composant de ses Crepidotacées. De méme, les

Ripartites ne sauraient être, comme il le pense, des Paxillacées á cause de leurs

verrues sporales cyanophiles et de leurs hyphes binucléées, caractères qui con-

duisent à les rapporter aux Lepista, solution que Singer lui-même avait adoptée

(avec raison) dans l'édition de 1962.

Un autre point, sur lequel la discussion reste ouverte et toutes les opinions

sont permises, mérite d'être abordé : celui des relations entre les champignons

charnus à lamelles et certaines Aphyllophorales.

Source : MNHN, Paris

74 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

Plusieurs espèces, classiquement considérées comme des «Agarics» sont

évidemment proches de ces dernières. C'est évident pour le Lentinus degener,

qui est un Polypore à lames par sa consistance et la composition de la trame; on

le trouve même attaqué par certains Coléoptères propres aux Polyporacées.

Sans doute existe-t-il d'autres espéces dans ce cas. Mais doit-on, comme le fait

Singer, transférer la totalité des Polypores plus ou moins charnus dans les Aga-

rics ? Nous croyons au contraire qu'il y a quelque inconvénient à laisser L. dege-

rer et autres au sein des Agaricinées; mais on peut très bien être d'un avis contraire.

Le genre Polyporus tel que le concoivent la plupart des spécialistes modernes,

aussi bien que Singer, réunit en raison de la constitution de leur trame, les an-

ciens Melanopus du groupe squamosus, dont la consistance charnue et tendre

en fait des espèces comestibles, les Melanopus du groupe varius et les anciens Leu-

coporus (= Polyporellus), tous trop coriaces pour être consommables. Cette co-

habitation nous semble contestable. Quoi qu'il en soit, mettre les Leucoporus

dans la méme famille que Pleurotus ostreatus et cornucopiae nous paraît cho-

quant, et nous préférons avec Kühner rejeter ces Polypores des Agaricinées pour

les laisser dans les Aphyllophorales, mais en méme temps placer au sein de ces

dernières certains Lentinus comme degener.

Quant aux Bondarzewiacées, leur ornementation sporale tout à fait analogue

à celle des Lactario-russulés et la présence de sulfocystides, ainsi que la saveur

ácre, nous conduisent à abandonner notre ancienne opinion et à admettre une

parenté de ce Polypore avec ces derniers: parenté certainement lointaine, et à un

point tel que nous croyons préférable de laisser aussi cette famille dans les Aphyl-

lophorales : en effet ses caractères macroscopiques, sa biologie et l'absence de

tissu hétéromère l'éloignent beaucoup des Russulacées, sans que cela n'implique

l'absence de tout lien de parenté entre ces taxa.

Les Lentinellus posent un problème analogue. Nous en profiterons pour

rappeler à notre confrère américain que ce n’est pas Maas Gesteranus qui, le pre-

mier, a révélé les caractères microscopiques communs entre ceux-ci et les Auris-

calpiacées (spores subglobuleuses, amyloides; laticiféres et pseudocystides Sulfo

+); cet auteur à seulement apporté un argument de plus à notre manière de voir +

la structure de la marge piléique. C'est nous méme qui l'avons démontré en 1953

(Bull. Soc. Nat. Oyonnax, 7 : 111). Et c'est aussi nous qui avons souligné les

analogies de tous ordres existant entre les Lentinellus et les Lactarius, d'abord

dans un article paru en 1961 dans la Revue frangaise «Science et Nature» (47,

nO de sept-oct.) ensuite dans notre Monographie des Russules (1967) où cette

opinion a été longuement expliquée.

Cette rectification faite, la même raison que ci-dessus nous fait préférer le

maintien des Auriscalpiacées dans les Aphyllophorales — et, à notre avis, dans un

méme taxon que les Hericiacées : bien que le système laticifère de ceux-ci ne

noircisse pas en milieu sulfoaldéhydique, il présente le méme comportement que

l'Auriscalpium vis-à-vis des colorants des lipides, et l'on sait qu'il existe des

Lactario-russulés qui sont dans le méme cas que les Hericium.

Sur un plan pratique, concernant l'utilisation de ce livre, on regrettera que la

Table de noms d'espèces ne comporte que ceux figurant dans la partie générale,

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 75

et qu'on soit ainsi obligé de se référer, pour les autres, à la troisième édition

aujourd’hui épuisée.

Ces critiques n'empéchent naturellement pas l'ouvrage du Dr Singer de cons-

tituer une étape essentielle dans l'histoire de la mycologie et de demeurer à ja-

mais un de ses classiques. Nous regrettons seulement qu'il soit déjà en plusieurs

points quelque peu dépassé. Pouvons-nous espérer une cinquième édition ?

H. Romagnesi

Source : MNHN, Paris

Source - MNHN. Paris

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tanico Periodicum Huntianum» 1968, Pittsburg, U.S.A.

Les références seront complètes, et suivront les modèles suivants :

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PATOUILLARD N., 1881 — Sur l'appareil conidial de Pleurotus ostreatus.

Bull. Soc. Bot. France 27 :125.

— dans le cas d'une citation extraite d'un ouvrage :

HEIM R., 1957 — Les Champignons d'Europe. Paris, Boubée et Cie, 2 : 220-227.

— dans le cas d’un article tiré d’un ouvrage ou d’une collection signée ou pa-

tronnée par le même auteur :

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MANDELS G.R., 1965 — Kinetics of fungal growth. In : AINSWORTH &

SUSSMAN, The Fungi, N.Y. & London, Academic press, I : 599-612.

— dans le cas d'une thèse :

MALARD J., 1981 — Contribution à l'étude de la production d'a amylase par

Aspergillus oryzae (Alhb.) Cohn. Thése 3éme cycle, Lille.

— dans le cas d’un article tiré d’un compte-rendu de congrés :

MICHON E., 1982 — Virus, pollens et pollinies. In : Anomalies polliniques

liées à des facteurs parasitaires ou génétiques. Rev. Cytol. Biol. Vég., Bot.,

1982, 5 : 5-19 (21ème Colloque Société Française de Phytopathologie).

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Imprimé en France m ALA

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de CRYPTOGAMIE - MYCOLOGIE sont toujours disponibles.

MÉMOIRES HORS SÉRIE

Pastac. 88 pages 15 Е,

NO 3 (1943). Les constituants de la membrane chez les champi-

gnons, par R, Ulrich. 44 pages; 15 F.

Corticiés, par J. Boidin. 390 pages, pl. et fig. : 120 F.

NO 7 (1959). Les champignons et nous (Chroniques) (II), par G.

Becker. 94 pages : 25 F.

NO 8 (1966), Catalogue de la Mycothèque de la Chaire de Cryptoga-

mie du Muséum National d'Histoire Naturelle. (1) Micromy-

cètes. Macromycètes (première ne 68 pages : 25 F.

NO 9 (1967). Table des Matiéres (1936-1965). 85 pages : 20 F, —

(1966-1975).30 pages : 10 F:

SLORE MYCOLOGIQUE DE MADAGASCAR ЕТ DÉPENDANCES

publiée sous la direction de M. Roger HEIM

Tome 1. Les Lactario-Russulés, par Roger Heim (1938) (épuisé).

Tome il. Les Rhodophylles, par Henri Romagnesi (1941). 164 pages,

46 fig. : 90 F.

Tome Ill. Les Mycénes, par Georges Métrod (1949). 144 pages,

88 fig. 90 F.

Tome IV. Les Discomycètes de Madagascar , par Marcelle Le Gal

(1953). 465 pages, 172 fig. : 150 Е,

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(1965). 180 pages, 97 fig., 4 pl. hors-texte : 90 F.

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