CRYPTOGAMIE

Mycologie

ANCIENNE REVUE DE MYCOLOGIE

Fondée par R. Heim en 1936

Directeur scientifique: Mme J. Nicot

Secrétaire de Rédaction: Mme M.C. Boisselier

Editeur: A.D.A.C. - 12 rue Buffon F-75005 Paris.

BUREAU DE RÉDACTION

Ecologie et Phytopathologie: G. Durrieu (Laboratoire Botanique et Forestier, 39

Allées Jules Guesde, F-31062 Toulouse Cedex) - Systématique: P. Joly (Laboratoire de

Cryptogamie, Muséum National d'Histoire Naturelle, 12 rue Buffon, F-75005 Paris) -

Physiologie: G. Manachére (Laboratoire de Mycologie, Université de Lyon I, 43 bd du 11

Novembre 1918, F-69622 Villeurbanne Cedex) - Cytologie: D. Zickler (Laboratoire de

Génétique, Université Paris Sud, Centre d'Orsay, Bat. 400, F-91405 Orsay) - Autres

spécialités: M.F. Roquebert (Laboratoire de Cryptogamie, Muséum National d'Histoire

Naturelle, 12 rue Buffon, F-75005 Paris).

COMITÉ DE LECTURE

J. Boidin (Lyon), J. Chevaugeon (Orsay), J. Fayret (Toulouse), W. Gams

(Baarn), G.L. Hennebert (Louvain-la-Neuve), Ch. Montant (Toulouse), Cl. Moreau

(Brest), D.N. Pegler (Kew), B. Sutton (Kew), G. Turian (Genève)

MANUSCRITS

Les manuscrits doivent être adressés directement à un membre du Bureau de

Rédaction, choisi pour sa spécialité. Le Bureau peut demander l'avis d'un lecteur, même

s'il n'appartient pas au Comité de Lecture. Bien qu'étant une revue de langue française,

les articles rédigés en anglais, allemand, italien et espagnol sont acceptés. Les disquettes de

micro-ordinateur (IBM, IBM compatible, et MacIntosh) sont vivement souhaitées. Les re-

commandations aux auteurs sont publiées dans le fascicule 1 de chaque tome. Les auteurs

recevront 25 tirés-à-part gratuits: les exemplaires supplémentaires seront à leur charge.

TARIFS DES ABONNEMENTS Tome 13, 1992

CRYPTOGAMIE comprend trois sections: Algologie, Bryologie-Lichénologie, Mycologie.

Pour une section: — France: (326 F ht) 332,85 F tte - Étranger: 357,00 F

Pour les 3 sections: France: (918 F ht) 937,28 F tte - Étranger: 1000,00 F

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A.D.A.C. - CRYPTOGAMIE (CCP La Source 34 764 05 S),

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CRYPTOGAMIE, Mycologie est indexé par Biological Abstracts, Current Contents,

Current Awareness in Biological Sciences,

Publications bibliographiques du CNRS (Pascal).

Source

MNHN Paris

CRYPTOGAMIE

MYCOLOGIE

TOME 13 FASCICULE 2 1992

CONTENTS

D. JOB and M. ARAGNO - Nutritional growth requirements for

submerged cultures of the ectomycorrhizal fungi Cenococcum

geophilum Fr. .. n

J. MERCÉ - Altitude distribution of pathogen fungi in southern Spain

(Oredinalen E our Quantitative aspects

(In French) . + ,

. CONTU - Cortinarius bisporiger spec. nov., a new pedes « of the

subgen. Phlegmacium from southern Sardinia (In Italian) ...........

C. ANDARY, L. COSSON, M.J. BOURRIER, R. WYLE R. and A.

HEITZ - Chemotaxonomy of boletes in Luridi section (In French)

C.V. SUBRAMANIAN - Three interesting new Hyphomycetes from

south east Asia ...

M. MOSTAFA, G. BARRAULT and L. ALBERTINI - Se

control of Drechslera teres; in vitro action of antagonistic

microorganisms on mycelial prow and conidial germination (In

French) .

A.K. SHUKLA and R.R. MISHRA - Influence of soil maeman

systems on the microfungal communities of potato field

Bibliography ....

7E)

103

115

125

135

145

Bibliothèque Centrale Muséum

3 3001 00226848 9

Source : MNHN, Paris

Source - MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (2): 79-85 79

NUTRITIONAL GROWTH REQUIREMENTS FOR

SUBMERGED CULTURES OF THE ECTOMYCORRHIZAL

FUNGI CENOCOCCUM GEOPHILUM Fr.

Daniel JOB and Michel ARAGNO

Institut de Botanique, Université de Neuchâtel, Chantemerle 22,

CH-2007 Neuchätel, Suisse

ABSTRACT - The capacity of Cenococcum eeophilum to produce considerable biomass of

submerged mycelial condensations in ten different culture media was tested. The best pro-

duction was obtained with glucose ammonium tartrate (mycelium dry weight 4.52 mg ml),

glucose ammonium chloride (4.05 mg ml) and Macaya-Lizano medium (3.72 mg ml). Af-

ter testing different sources of hydrocarbons and of inorganic (NO3-, NH4+) and organic

N (amino acids and undefined substances), a new optimized medium was developped re-

sulting in a significant increase of biomass production (5.96 mg ml).

RESUME - Dix types de milieux de culture ont été testés afin d'améliorer, en culture

submergée, la production de mycélium de Cenococcum geophilum. Le meilleur rendement a

été obtenu avec les milieux suivants: glucose ' tartrate d'ammonium (poids sec du

mycélium: 4,52 mg ml), glucose | chlorure d'ammonium (4,05 mg ml) et Macaya-Lizano

(3,72 mg ml). Aprés avoir testé différentes sources de carbone, d'azote inorganique (NO3-,

NH4—) et d'azote organique (acides aminés et substrats complexes) un nouveau milieu a

été développé: il permet un accoissement significatif de la production de biomasse.

INTRODUCTION

The role of ectomycorrhizal fungi in the growth of woody plant species

is of significant agricultural and ecological importance, and it is well established

that many trees need an ectomycorrhizal association (Mauperin et al., 1987).

Water and nutrient uptake from the surrounding ecosystem are considerably

improved through the soil mycelium of the mycorrhizal fungi, due to increase in

surface and absorption efficiency. Soil or seedlings inoculation with

ectomycorrhizal fungi can render the introduction of tree species possible in

areas which otherwise would not support their growth (Harvey, 1991). The first

step in an artificial inoculation program requires the knowledge of the

nutritional requirements of the fungus and the in vitro growth-optimization to

produce suitable, low cost inocula.

Cenococcum geophilum has been frequently described in ectomycorrhizal

association with economically important tree families: Myrtaceae, Salicaceae

and Pinaceae (Trappe, 1962; Chilvers, 1968; Heslin & Douglas, 1986;

Danielson & Pruden, 1989)

In spite of its ecological importance, very little information is available

regarding the nutritional factors affecting its growth and biomass production in

submerged culture.

Source : MNHN, Paris

80 D. JOB and M. ARAGNO

In the present study we tested the capacity of Cenococcum geophilum to

producing considerable biomass of submerged mycelial condensations in a

whole range of different culture media, We can thus propose an optimized

medium with the final objective of producing sufficient quantity of inocula for

large-scale forest application.

MATERIALS AND METHODS

1. Strain

Experiments were done with strain X01-29 (collected in Birmensdorf,

Zurich) supplied by Vitroculture SA., Porrentruy, Switzerland.

2. Preparation of mycelial inoculum

Shaken cultures of Cenococcum geophilum were grown in glucose

ammonium chloride medium (pll.4.7) at 25 °C and 250 rpm. After an

incubation period of 28 days, the mycelial condensations were aseptically

homogenized and used as inoculum for all the experiments

3. Biomass growth in different culture media

Cenoc

following media:

1- Molasses (molasses 30g),

2- Malt extract (malt extract 15g),

3- Modified Lutz (malt extract 10 g. NH,NO Lg, (NHL),PO, 1g, MgSO,.7H,0

0.025e),

4- Glucose alanine (glucose 10g, DL-alanine 1g, KH;PO, 2g, MgSO,.7H,O

0.2g),

5- Glucose peptone yeast (glucose 10g, peptone 10g, yeast extract 10g),

6- Melin-Norkrans’ modified medium (KI1,PO, 0,3g, CaCl, 0.05g, NaCI 0.025g,

(NH)2HPO, 0.25g, MgSO,.7H, O 0.15g, 1% solution of FeCl; 1.2ml, malt

extract 3g. sucrose 20g),

7- Yeast malt extract (yeast extract 3g, malt extract 3g, peptone 5g, glucose

10g).

8- Macaya-Lizano (KH,PO;, Lg, ZnSO,7H,O 02g, (NH,jSO, lg,

MgSO,.711,0 0.2g, CaCl, 0.4g, L-asparagine 1.12g, DL-serine 2g),

9- Glucose ammonium chloride (KH,PO, 0.5g, MgSO,.7H;O 0.58, NICI 0.5g,

glucose 10g, malt extract Sg, 1% solution of ferric citrate 0.5ml, glucose

10g),

10- Glucose ammonium tartrate (KH3PO; lg, MgSO,.7H,O 0.5g, ammonium

tartrate 1g, ZnCO, (1:500 aqueous solution) 0.5ml, glucose 30g, 1% solution

of ferric citrate 0.5ml).

The compounds were dissolved in 1000 ml distilled H,0. The pH of the

media was adjusted to 5.0 with either HCl or NaOH before autoclaving, and

after autoclaving 1.0 mg of biotin and 2.0 mg of thiamine were added to each

medium tested.

um geophilum was grown in submerged cultures in the

For each medium tested, three 500 ml flasks containing 330 ml of sterile

medium were inoculated with 10 g of freshly homogenized mycelia (0.3g dried

weight). The flasks were incubated at 25°C for 21 days and flushed with 3 1h

sterile air. At the end of the incubation period the mycelial condensations were

Source : MNHN, Paris

BIOMASS PRODUCTION OF CENOCCOCUM GEOPHILUM 81

washed and dried. The biomass was expressed as mg dry weight ml culture

medium.

4. Optimization of the medium

Cenococcum geophilum was grown in glucose ammonium tartrate stan-

dard medium modified as follows:

- carbohydrates: 8 different carbohydrates (2% wv) were tested in a

glucose-free medium (Table I)

- inorganic nitrogen: ammonium tartrate was substituted with 6 different

sources of inorganic nitrogen with the same N-content (84 mg 1, Table I)

- organic nitrogen: 5 amino acids (10 mM) or 1 g1 complex substrates

(casein hydrolysate (Fluka) or soybean meal peptone (Fluka)) were also tested

(Table 1).

For each modification, three tests were made in the same conditions as

above and the biomass was measured.

The carbohydrate, inorganic and organic nitrogen source supporting

maximum mycelial growth were chosen for further nutritional study. Different

concentrations of these components were tested to determine the optimum level

required for growth. Finally the effect of 1-2.5 ml 1 of commercial safflower oil

and soybean oil in the optimized medium was measured as before.

All the solutions used were autoclaved 20 minutes at 121°C, except

vitamins that were sterilized by Millipore filtration (0.24M membrane) and

added to the cooled medium.

Molasses

Malt extract

Modified Lutz

Glucose ne

Glucose peptone yeast

Welin-Norkrans' sodified medium

Yeast nalt-extract peptone

YecayarLizano

Glucose ammonium chlor:

Glucose ammonium tartrate

Table 1. - Dry weight of mycelia of Cenococcum geophilum (mean of 3 replicates) in the

different culture media.

Tableau I. - Poids sec du mycélium de Cenococcum geophilum (moyenne de 3 expériences)

sur les différents milieux.

Source : MNHN, Paris

82 D. JOB and M. ARAGNO

RESULTS

1. Biomass production in different culture media

Table I shows the yields obtained in the 10 media tested. Glucose

ammonium tartrate medium was chosen for further optimization.

2. Optimization of the culture medium

Of the 8 carbon sources tested, glucose and fructose gave maximum

mycelial growth. No growth occurred with arabinose and cellulose, ribose,

starch and cellobiose were unsuitable (Table II).

Among the inorganic sources of nitrogen, maximum growth was

observed with di-ammonium tartrate, and good growth was also observed with

ammonium chloride, ammonium nitrate and ammonium tartrate. No growth

occurred with ammonium acetate or sodium nitrite. The yield was increased by

addition of casein hydrolysate or peptone in the glucose ammonium tartrate

medium (Table II).

Different concentrations of glucose, casein and di-ammonium tartrate

were tested (fig. 1). From these results, the following optimized medium was

designed: glucose 20 g, di-ammonium tartrate 0.25g, casein hydrolysate 1

biotin Img, thiamine 2mg, KH,PO, lg, MgSO,711,0 0.5g, ZnCO, (1:5

aqueous solution) 0.5 ml and 1% solution of ferric citrate 0.5ml, giving a yield

of 5.96 + 0.33 mg dry weight ml.

No significant yield increase was obtained with the addition of commer-

cial safflower oil (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5ml) or commercial soybean oil (0.5, 1.0,

1.5, 2.0, 2.5 ml) to the optimized medium. Figure 2 compares the growth curves

of Cenococcum geophilum (28 days, 25°C) in two standard media for

ectomycorrhizal fungi: Melin-Norkrans' modified medium (MMN) and glucose

ammonium tartrate medium (GAT) with our optimized medium (Gd-ATC:

glucose di-ammonium tartrate casein medium).

DISCUSSION

The carbon requirements of Cenoccocum geophilum are similar to those

of other mycorrhizal fungi (Palmer & Hacskaylo, 1970; Straatsma & Van

Griensven, 1986). Glucose was the best carbon source for mycelial growth and

this agrees with the general concept that, among all the hexoses, glucose is

biologically the most effective energy source.

The failure of Cenococcum geophilum to grow with sodium nitrite

resembles a common situation in fungi (Song et al., 1987), calcium nitrate

produces low yields, probably due to precipitation with phosphates and N in the

ammonium form is generally suitable for the fungi development. Melin &

Mikola (1948) compared ammonium, casein hydrolysate and the individual

amino acids leucine, proline, valine, histidine and arginine as N source for

Cenoccocum geophilum. They showed that of all the amino acids tested, only

arginine induced yields comparable with those obtained with ammonium,

whereas casein hydrolysate sustained the best yield. Laiho (1970) using a series

of strains of Paxillus involutus also compared growth performance on

ammonium with those of several amino acids, and reported that only glutamic

acid and arginine gave yields as high as those on ammonium. Our results also

show (Table II) a good yield of the fungus on L-arginine and L-asparagine,

Source : MNHN, Paris

BIOMASS PRODUCTION OF CENOCCOCUM GEOPHILUM 83

carbohydrates 2t 2 Inorganic nitrogen mal n m/n

(ary veigh (84.59 (dry weight) {10 a2) (dry weight)

i [+) arabinose mo growth | ammonium acetate mo grovth | t-Proline 445 £ 0.26

cellulose sodiun nitrite mo growth | L-Glutanic acid 450 ¢ 0.05

D (-) Ribose calcius nitrate 1.912 0.28 | teAlanine 456 + 0.7

amoris nitrate 4,502 0.31 | icasparegine 4,1 0.28

D (+) Cellobiose amoniua chioride 465.2 0,92 | irarginine 5.05 4 0.32

D (+) Sucrose di-amoniun tartrate | 4.92 20.29 | peptone ig 5.124 0.28

casein hydrolysate 19 |_5.43+0.27

E {-) Fructose

Table Il - Mycelial growth (mg dry weight ml) of Cenococcum geophilum in glucose di-

ammonium tartrate medium with different sources of carbon and nitrogen.

Tableau II. - Croissance du mycélium de Cenococcum geophilum (mg poids sec'ml) dans le

milieu de glucose di-ammonium tartrate avec differentes sources de carbone et

d'azote.

Biomass

mg/ml

i Le O

30 05 10 1.5 20 0.12 0.25 0.50 0.75 1.00

GLUCOSE CASEIN DI-AMMONIUM TARTRATE

casein 1g/L glucose 20g/L glucose 20g/L

di-ammonium tartrate 0.5g/L casein 1.5g/L

COMPOSITION OF MEDIUM

Fig.l: Biomass of mycelia (mg dry weight ml) obtained after 21 days, in media with

different concentrations of glucose, casein hydrolysate or di-ammonium tartrate.

Fig.l: Biomasse du mycélium (mg poids seciml) produite aprés 21 jours de croissance

dans un milieu avec différentes concentrations de glucose, d'hydrolysat de caséine

ou de di-ammonium tartrate.

Source : MNHN, Paris

84 D. JOB and M. ARAGNO

Biomass

mg/mi

medium

Gd-ATC

GAT

MMN

Fig. 2: Growth curves of Cenococcum geophilum in two standard media for

ectomycorrhizal fungi (MMN and GAT) and in the Gd-ATC optimized medium.

+ 2; Courbes de croissance de Cenoccocum geophilum dans deux milieux standard pour

champignons ectomycorrhiziques (MMN et GAT) et dans le milieu Gd-ATC.

however the optimal growth of submerged mycelia, was supported by the addi-

tions of complex substrates (ie. casein hydrolysate).

Although several reports indicate the stimulating effect of materials

containing fatty acid on growth of ectomycorrhizal fungi, no significant yield

increase was observed when commercial safflower oil or commercial soybean oil

were added to the optimized medium. This failure may be related to the absence

of lipases (triacylglycerol acylhydrolases, E.C. 3.1.1.3) which release free fatty

acids from several sources that has been observed in Cenoccocum geophilum

(Caldwell et al., 1991) .

Of the medium tested, Melin-Norkrans, Glucose ammonium chloride

and Glucose ammonium tartrate were originally developped for the culture of

ectomycorrhizal fungi, and often used in studies of growth requirements

(Hacskaylo et al., 1965; Straatsma & Griensven, 1986; Torres & Honrubia,

1991). We showed (Table II) that sucrose supported only a poor yield of

Cenoccocum geophilum; this explains the low biomass produced in the Melin-

Norkrans’ medium. However, a suitable yield of Cenoccocum geophilum was

obtained with both other media.

The optimization reported here allowed yield increase in mycelial

biomass of 30 % due to the addition of an organic N source and to the

establishment of optimal concentrations for the main C and N sources. Contrary

to the general idea that ectomycorrhizal fungi grow very slowly in liquid culture

(Chapman et al., 1990) our results show that a correct optimization of the cultu-

re medium allows fast growth of considerable biomass in submerged cultures.

Source : MNHN, Paris

BIOMASS PRODUCTION OF CENOCCOCUM GEOPHILUM 85

ACKNOWLEDGEMENTS

The authors wish to thank Vitroculture S.A. and CERS (project n°1404) for their

financial support.

LITERATURE

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DANIELSON R.M. and PRUDEN M., 1989 - The ectomycorrhizal status of urbans

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growth and respiration of ectotrophic mycorrhizal fungi. Mycologia 57: 748-756.

HARVEY L.M., 1991 - Cultivation techniques for the production of ectomycorrhizal

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LAIHO O., 1970 - Paxillus involutus as a mycorrhizal symbiont of forest trees. Acta

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MAUPERIN C., MORTIER F., GARBAYE J., LE TACON F. and CARR G., 1987 -

Viability of an ectomycorrhizal inoculum produced in a liquid medium and

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MELIN E. and MIKOLA P., 1948 - Effects of some amino acids on the growth of

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Growth on single carbon sources. Physiol. Pl. 23: 1187-1197.

SONG C.H., CHO K.Y. and NAIR N.G., 1987 - A synthetic medium for the production

of submerged cultures of Lentinus edodes. Mycologia 79: 866-876.

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TRAPPE J.M., 1962 - Fungus associates of ectotrophic mycorrhizae. Bot. Rev. 28:

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TORRES P. y HONRUBIA M., 1991 - Dinamica de crecimiento y caracterizacion de

algunos hongos ectomicorricios en cultivo. Cryprogamie, Mycol. 12: 183-192

Source : MNHN, Paris

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (2): 87-98 87

VARIATIONS ALTITUDINALES DE LA FLORE

FONGIQUE PARASITE DANS LE SUD DE L’ESPAGNE

(UREDINALES, ERYSIPHACEAE, USTILAGINALES)

ASPECTS QUANTITATIFS

par Jacques MERCE

Laboratoire Botanique et Forestier, Université Paul Sabatier,

39, Allée Jules Guesde, 31062 Toulouse Cedex

RÉSUMÉ - L'auteur étudie l'importance relative de trois groupes de champignons parasi-

tes (Uredinales, Erysiphaceae, Ustilaginales) de la végétation naturelle du sud de l'Espagne.

La mise au point d'un Indice de Presence lui permet de comparer les populations de para-

sites dans les différents étages. Il montre la rareté des Ustilaginales, l'importance des

Uredinales, en particulier dans l'étage Méditerranéen montagnard, et surtout l'abondance

des Erysiphaceae. Dans cette famille, il met en évidence l'importance du genre Leveillula

dans les étages d'altitude moyenne, Les résultats sont interprétés tant sur le plan biologi-

que qu'écologique.

ABSTRACT - The author describes the extension and relative importance of the three

groups of fungi (Uredinales, Erysiphaceae, Ustilaginales) pathogenic to natural plants in

Southern Spain. A presence Index is defined in order to compare parasite populations in

the various vegetation levels. Ustilaginales are scarce, Uredinales are important, particular-

ly in the mediterranean montane belt, and, above all, Erysiphaceae are abundant, In this

family, the genus Leveillula predominate at mid-altitude. Results are discussed from the bi-

ological and ecological points of view.

MOTS CLÉS : Espagne, Andalousie, Ecologie, Uredinales, Erysiphaceae, Ustilaginales.

INTRODUCTION

Dans le cadre d'une étude des champignons parasites de la végétation

naturelle du sud de l'Espagne, il a été effectué 2034 récoltes d'Uredinales, 236

d'Ustilaginales et 1533 d' Erysiphaceae. L'abondance de ce matériel a permis

d'envisager l'étude de la répartition et de l'importance prise par chaque groupe

fongique dans les différents étages de végétation.

MATÉRIEL UTILISE

Le matériel provient des relevés effectués en Andalousie (sud de

l'Espagne) au cours de 27 mois de terrain. Les prospections ont été étalées

d'avril à novembre, entre 1968 et 1982. Les premiers résultats ont déjà été

publiés (Mercë 1970, 1973, 1974a-b, 1975a-b-c-d, 1986a-b ; Durrieu & Mercé,

1972).

Source : MNHN, Paris

88 J. MERCE

Dans chaque station, les plantes parasitées ont été repérées et récoltées,

sur une surface d'environ 2500 m? (S0m x 50m). Ainsi, pour chaque relevé, on

dispose de la liste des parasites et de leurs hôtes. Il s'agit de relevés de type

présence-absence (Tab. 1).

Exemple de relevé:

- 11 juillet 1971 - 35 Km au nord de Granada - Altitude: 950m

Sous-étage Mésoméditerranéen.

Uredinales.

Gymnosporangium gracile sur Crataegus monogyna

Pileolaria terebinthi sur Pistacia terebinthus

Puccinia notobasidis sur Notobasis syriaca

Uromyces anthyllidis s.s.p. physanthyllidis sur Anthyllis tetraphylla

Erysiphaceae:

Erysiphe cichoracearum sur Centaurea pullata

Erysiphe heraclei sur Daucus carotta

Ustilaginale

Ustilago bromivora sur Bromus madritensis

Soit, pour ce relevé: 4 Uredinales

2 Erysiphaceae

1 Ustilaginale

En totalisant les récoltes effectuées dans les 241 relevés réalisés dans le

sous-étage Mesomediterranéen!!), on obtient:

Uredinales 526

Erysiphaceae 532

Ustilaginales 72

L'ensemble des résultats est reporté dans le tableau 1.

RESULTATS ET DISCUSSION

1 - Importance relative des différents groupes dans les divers étages

- problémes d'interprétation

Pour chaque étage, le pourcentage des récoltes d'Uredinales,

d'Erysiphaceae, et d'Ustilaginales a été établi. L'examen des graphiques (Fig. 1)

fait apparaître trois ensembles d'étages:

- un premier ensemble, formé par les étages inférieurs (Littoral,

Meéditerranén inférieur semi-aride et Méditerranéen inférieur sec). Il se

caractérise par une prédominance très nette des Uredinales sur les autres grou-

pes

- un deuxiéme ensemble, formé par les étages moyens (Euméditerranéen,

Mésoméditerranéen et Méditerranéen supérieur). Il est caractérisé par un faible

rôle des Ustilaginales et surtout par l'importance des Erpsiphaceae. Celles-ci

jouent un rôle aussi important, voire plus grand que celui des Uredinales.

(1) cf. note en fin de texte.

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE PARASITE 89

BER: Urédinoles

E : Erysiphecées

HU Ustileginales

so 48 s EI 69 73 100

28 E 48 s7 30 25

13 s 6 4 1 2

Littoral M.aride Msec Eum. Meso. M, sup. Mont. Oro inf. Oro sup.

Figure 1. - Importance relative, dans les étages, des differents groupes de parasites.

- Relative frequencies of the various parasite groups in different vegetation

levels.

Figure

- un troisième ensemble, formé par les étages supérieurs (Méditerranéen

montagnard et Oroméditerranéen inférieur et supérieur) où les Uredinales rede-

viennent largement prépondérantes.

Les Erysiphaceae occupent encore une faible place dans le

Méditerranéen montagnard et l'Oroméditerranéen inférieur tandis que les

Ustilaginales ne jouent qu'un róle insignifiant.

L'étude réalisée en Andalousie amène à des conclusions assez différentes

de celles de Durrieu (1966), qui indique pour les Pyrénées, que ‘l'homogénéité

des trois graphiques concernant les étages Méditerranéen, Collinéen et

Montagnard, est remarquable. Tous les groupes y sont représentés dans des

proportions presque constantes: nette prédominance des Uredinales, égalité ap-

proximative entre Ustilaginales et Erysiphaceae...". De méme, il signale la dispa-

rition des Erysiphaceae dans l'étage Littoral. Dans les étages de haute monta-

gne, parallèlement à la diminution, puis à la disparition des Erysiphaceae, il

observe une augmentation de l'importance des Ustilaginales.

En Andalousie, les répartitions s'avèrent assez différentes: les

Erysiphaceae sont peu abondantes, mais présentes dans le Littoral. Les

Ustilaginales, rares ou absentes en altitude, sont surtout fréquentes dans les

étages inférieurs. Mais le fait essentiel paraît être l'importance prise par les

Erysiphaceae, dans les étages moyens (Mésoméditerranéen et Méditerranéen

supérieur). Cependant les résultats obtenus par cette méthode ne sont pas

entièrement satisfaisants, certaines données étant dissimulées par le calcul en -

pourcentage. Que représentent, par exemple, les 100% d'Uredinales dans

l'Oroméditerranéen supérieur? La seule conclusion que l'on puisse tirer concer-

ne l'absence des autres groupes. Or, les relevés de terrain montrent que les

Source : MNHN, Paris

90 J. MERCE

Rouilles, seuls parasites présents, sont assez rares. Ce sont ces considérations

qui m'ont conduit à la mise au point d'un Indice de Présence.

2 - Mise au point d’un indice de présence

- Défin

n, Calcul

L'examen du tableau 1 montre que le nombre de relevés effectués par

étage est variable (de 53 à 241). Il n'est donc pas possible de comparer direc-

tement le nombre de récoltes obtenues dans les differents étages. C'est pourquoi,

pour chacun d'eux, les résultats ont été recalculés sur une base de 50 relevés.

L'indice de Présence d'un parasite fongique (espéce, genre, famille

pour un milieu donné (formation, étage...) s'obtient en effectuant 50 relevés

répartis dans l'espace (ensemble de la surface étudiéc) et dans le temps (période

considérée: année, période végétative, saison, mois,...).

La valeur de l'Indice de Présence correspond au nombre de relevés oü

le parasite est présent.

Dans le cadre de l'étude d’une espèce, l'Indice de Présence correspondra

au nombre de stations où le parasite aura été observé. Il sera donc inférieur ou,

au maximum, égal à 50.

Lorsque l'on étudie un genre, une famille, bref un ensemble de parasites,

le problème est un peu différent. On peut:

- soit considérer la présence ou l'absence de ce groupe dans chaque station.

Dans ce cas l'Indice de Présence sera inférieur ou, au maximum, égal à 50.

- soit, pour mieux évaluer son importance, totaliser les Indices de Présence des

espèces qui le composent. Le total peut alors être supérieur à 50. On peut aussi

le calculer directement, à partir du nombre de relevés et du nombre de récoltes

déjà totalise.

Etages Nombre de [Nombre de récoltes] Indice de Présence global

relevés

Oroméditerranéen 53

supérieur

Oroméditerrenéen 66

inférieur

Méditerranéen

montagnard

Méditerranéen

supérieur

Hésoméditerrenéen

Euméditerrenéen

Méditerranéen

inférieur sec

Méditerranéen

inférieur semi-eride

Littoral

E Erysiphacese

U: Ustilaginal

Tableau 1

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE PARASITE 91

- Exemple: pour les 241 relevés dans le sous-étage Mèsoméditerranéen (Tab. 1),

le nombre total de récoltes d'Uredinales est de 526. Une simple régle de trois

permet de calculer le nombre d'Uredinales que l'on aurait, en moyenne, récolté

dans 50 relevés, à savoir 109. Ce nombre correspond à l'Indice de Présence de

l'ensemble des Uredinales dans le Mésoméditerranéen, ceci pour la période

considérée.

Dans ce travail, c'est ce dernier mode de calcul qui a été retenu pour les

trois groupes de parasites étudiés.

Lorsque la période envisagée correspond à l'année ou à la quasi totalité

de la période végétative, ce qui est le cas dans ce travail, la dénomination Indice

de Présence Global sera utilisée.

Cet indice a pour avantage de permettre la comparaison de l'importance

des trois groupes de parasites entre eux, ceci dans les divers élages, en éliminant

les problémes liés aux nombres différents de relevés effectues dans chacun des

étages.

Les valeurs obtenues et inscrites dans le tableau 1 ont été visualisées

dans la figure 2.

- Interprétation des résultats

L'examen des valeurs de l'Indice de Présence Global, visualisées dans la

figure 2, fait apparaitre les trois ensembles d'étages déjà signalés au paragraphe

- Premier ensemble (Littoral, Méditerranéen inférieur semi-aride et Médi-

terranéen inférieur sec). Nette prédominance des Uredinales sur les autres grou-

pes de parasites.

- Deuxième ensemble (Euméditerranéen, Mésoméditerranéen et Méditerranéen

supérieur). Les Erysiphaceae sont aussi nombreuses, si ce n'est plus, que les

Uredinales. Les Ustilaginales ne jouent qu'un rôle secondaire.

- Troisième ensemble (Montagnard, Oroméditerranéen inférieur et supérieur).

Les Uredinales sont à nouveau le groupe essentiel.

Le développement étonnant que prend la famille des Erysiphaceae dans

les étages moyens a conduit à étudier en dui cette famille et à réaliser l'impor-

tance et l'originalité du genre Leveillula). C'est pourquoi ce genre a été separe

du reste des Erysiphaceae. Dans la suite de cette etude, les quatre groupes de

parasites suivants sont envisagės:

/redinales

ysiphaceae: ensemble des genres autres que Leveil/ula

: Erysiphaceae: genre Leveillula

U: Ustilaginales

3 - Etude des différents groupes de parasites (R.O.L U.)

Cette étude sera réalisée à partir des valeurs de l'Indice de Présence

Global portées dans le tableau 2 et visualisées dans la figure 3.

(2) Ce problème sera abordé dans un article concernant le genre Leveillula (à paraître).

Source : MNHN, Paris

92 J. MERCE

LEGENDE

R : Urédinales

E : Erysiphecées

Ustilaginales

Indices R 69 sa 104 106 145

e PE 24 50 152 6s

présence U % " e Ae È È

Littoral M.eride Msec ^ Eum Mėso M sup Mont. Oro. inf. Oro. sup.

Figure 2. - Importance des trois groupes de parasites dans les étages gráce à l'Indice de

Présence Global

ure 2. - Global Presence Index of three parasite groups in different vegetation levels.

UREDINALES

- Analyse des valeurs de l'Indice

Celles-ci gardent une même importance dans le Littoral et le

Méditerranéen inférieur semi-aride. Elles sont plus abondantes du

Méditerranéen inférieur sec au Méditerranéen supérieur, étages où elles sem-

blent avoir à peu prés la méme importance. Il est par contre intéressant de noter

que le Méditērranċen montagnard leur semble particulièrement favorable, puis-

que c'est là qu'elles atteignent leur développement maximum. Elles diminuent

ensuite rapidement d'importance avec l'augmentation d'altitude, mais restent

présentes jusqu'aux parties les plus élevées de l'Oroméditerranéen supérieur.

- Interprétation biologique et écologique

D'un point de vue biologique, on constate que les Uredinales présentent

une activité semblable dans le Littoral et le Méditerranéen inférieur semi-aride,

activité plus faible que dans les autres étages. La faible valeur de l'Indice de

Présence Global peut partiellement s'expliquer dans l'étage Littoral par la

présence du chlorure de sodium. Par contre, l'indice calculé dans le

Méditerranéen inférieur semi-aride (région d'Almeria), nettement inférieur à ce-

Source : MNHN, Paris!

FLORE FONGIQUE PARASITE 93

Nombre Nombre de récoltes | Indice de présence global | Indice totai

Etages de de

relevés] R__O L Urt ove U [parasitismo

Oromegiterranéen 53 [38 0 [ o [o | 36] 0 | o 0 36

supérieur

Oroméditerranéen | 66 | 79 | 21 | 7 | 2 | 60 | 16 | 5 2 83

intérieur

Méditerranéen 193 [386 | 114 | 58 | 4 | 145 | 43 | 20 | 2 210

montagnard

Méditerranéen 86 [183 |133 |129| 17 |106| 77 | 75 |10 268

supérieur

Mésoméditerranéen 526 | 336 | 216 | 72 | 109 | 70 | 45 | 15 239

Euméditerranéen 373 | 252 | 98 | 49 | 107 | 72 | 28 | 14 221

Méditerranéen 229 | 85 | 24 | 51 | 104] 39 |] 11 | 23 177

inférieur sec

Méditerranéen Danlizan] 7a] 28 19

Inférieur_semi-aride

Littoral SEX ACTE NS 15

R: Urédinales O: Erysiphacées (sauf genre Leveillula) L: genre Leveillula —U: Ustilaginales

Tableau 2

lui des étages suivants, ne peut être expliqué que si l'on tient compte de deux

facteurs

Premier facteur: l'absence de relevés en hiver, dans une zone où la

végétation reste active en cette saison. Un certain nombre de parasites ont donc

échappé aux investigations.

Deuxième facteur: les conditions climatiques défavorables qui ont régné

en Andalousie au cours de la période où ont été réalisées une partie des pros-

pections. Les pluies, déficitaires et très irrégulières, ne permettaient pas aux

phanérogames de fructifier, d'où une diminution du stock de graines et un ap-

pauvrissement de la vegetation. Parallélement, ces phénoménes empéchaient la

multiplication des micromycétes. Le cycle végétatif suivant montrait une

raréfaction des annuelles et des parasites. De plus, ces périodes sèches ont été

aggravées, dans cette région, par la persistance des vents d'ouest secs, qui empê-

chaient les condensations nocturnes. La diminution des périodes humides a

limité les possibilités d'installation des Uredinales, ce phénomène s'ajoutant à la

rarefaction des hôtes.

Les étages suivants: Méditerranéen inférieur sec, Euméditerranéen,

Mésoméditerranéen et Méditerranéen supérieur fournissent aux Uredinales des

conditions de vie comparables. Les Indices de Présence sont très voisins (104 à

109). Les analyses statistiques réalisées tant sur les valeurs de I'I.P.G. que sur

les relevés bruts ont confirmé que ces valeurs ne sont pas significativement

différentes entre elles.

La forte valeur de l'Indice de Présence, enregistrée dans le

Méditerranéen montagnard, peut s'expliquer lorsque l’on étudie en détail le cli-

mat de cet étage. Le fait qu'il soit froid et souvent enneigé en hiver, n'influence

en rien les parasites ct leurs hôtes, tous au repos. Le printemps y est plus humi-

de que dans les étages inférieurs. Ce fait va déjà favoriser les Rouilles en facili-

tant la germination des spores. Le climat de l'été parait particulièrement

intéressant pour la biologie des Uredinales. Lorsque le beau temps s'installe, le

Source : MNHN, Paris

94 J. MERCÉ

climat qui régne dans cette zone est loin de ressembler à celui qui baigne la

hétraie-sapiniére du versant nord des Pyrénées. Sa sécheresse et son enso-

leillement sont nettement méditerranéens. Mais, ici, intervient un autre

phénomene climatique, à savoir les orages. Ceux-ci se forment sur les reliefs

élevés (Sierra Nevada, Serrania de Ronda). S'ils donnent parfois des ondées

aussi brèves que violentes, le plus souvent, ils n'éclatent pas, mais les nuages

provoquent durant quelques heures la formation de rosées. Dans les deux cas,

les spores d'Uredinales profitent des gouttes d'eau déposées sur les feuilles pour

germer. La période de végétation possible pour les Rouilles débute encore plus

lard que dans les étages inférieurs, mais elle n'est pas interrompue par la

sécheresse estivale et se prolonge tout l'été. Elle est donc, au total, beaucoup

plus longue que dans les zones inférieures, ce qui doit favoriser la multiplication

des parasites et expliquer la valeur élevée de l'Indice de Présence Global.

Au-dessus, l'augmentation de l'altitude, avec ses conséquences (raccour-

cissement de la période favorable, abaissement de la température moyenne,

raréfaction des hótes), entraine d'une manière normale une diminution de

l'abondance des Uredinales.

ERYSIPHACEAE (autres que le genre LEVEILLULA)

- Examen et analyse des valeurs de l'Indice

L'examen de ces valeurs montre qu'elles augmentent jusqu'à

l'Eumediterranéen. Cet étage, le Mésoméditerranéen et le Méditerranéen

supérieur, présentent des Indices voisins. Au-delà, on assiste à une chute rapide

due à l'augmentation d'altitude (mêmes raisons que pour les Uredinales).

- Interprétation biologique et écologique

Sur le Littoral, le chlorure de sodium semble avoir une action néfaste

très nette sur le mycélium externe de ces champignons. Toutes les Erysiphaceae

observées dans cet étage se trouvaient à la limite de ce milieu, donc dans les zo-

nes les moins soumises à l'action du sel. Les faibles valeurs de l'Indice,

observées dans tout le Méditerranéen inférieur, peuvent partiellement s'expliquer

par l'abondance des années sèches lors des prospections et par l'absence de

relevés en hiver (cf. paragraphe précédent - Uredinales). Des prospections

réalisées au cours de cette période permettraient de couvrir toute la période

d'activité des hôtes et des parasites. Cela provoquerait peut-être une élévation

de la valeur des Indices pour cet étage tant pour la partie semi-aride que pour

la sèche, et donnerait une idée plus exacte de la réalité.

Dans l'Euméditerranéen, le Mésoméditerranéen et le Méditerranéen

supérieur, les conditions de développement que rencontrent les parasites doivent

être semblables. En effet, malgré les bioclimats différents, les Indices de Présence

ont des Valeurs semblables. Au-delà, l'augmentation d'altitude entraîne une di-

minution de l'Indice qui s'avère plus rapide que pour les Uredinales: Les

Erysiphaceae ne semblent pas être adaptées aux conditions d'altitude, ce qui ex-

pliquerait leur absence dans l'Oroméditerranéen supérieur.

GENRE LEVEILLULA

- Examen et analyse des valeurs de l'Indice

On observe, dans le Littoral et le Méditerranéen inférieur semi-aride, un

Indice de Présence Global trés faible. Au-delà, il augmente rapidement pour

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE PARASITE 95

culminer dans le Méditerranéen supérieur, puis subir une chute brutale. D'un

étage à l'autre, les écarts sont importants.

- Interprétation biologique et écologique

La courbe que dessine l'indice de Présence, avec son pic dans le

Méditerranéen supérieur, indique clairement que c'est à ce niveau que ce parasi-

te trouve les conditions de développement optimales. Ce genre, longtemps

considéré comme typiquement méditerranéen, semble en fait trouver son terrain

d'élection dans les moyennes montagnes de cette zone, entre 800m et 1500m

d'altitude.

STILAGINALES

- Examen et analyse des valeurs de l'Indice

L'examen de la figure 3 fait apparaitre la faible importance de ce grou-

pe, ainsi que son cantonnement dans les zones basses et moyennes, du

Méditerranéen inférieur semi-aride au Mésoméditerranéen.

R: Uredinales

B O : Erysiphaceae (sauf genre Leveillulo)

L : genre Leveillula

[E] VU Ustilagineles

104 107

Littoral M aride M. sec Eum. Meso. M. sup. Mont Oro, inf. Oro. s

Figure 3. - Importance des quatre groupes de parasites dans les étages, grâce à l'Indice de

Présence Global, et répartition du genre Leveillula.

Figure 3. - Global Presence Index of four parasite groups in different vegetation levels

with emphasis on the genus Leveillula.

Source : MNHN, Paris

96 J. MERCE

- Interprétation biologique et écologique

La localisation de l’activité de ce groupe de parasites dans les zones bas-

ses est inverse de celle qu'observe Durrieu (1966). Ce dernier signale un

développement important des Ustilaginales dans les parties les plus élevées des

Pyrénées, et se pose la question de savoir si "ces parasites seraient mieux armés

que les autres pour résister aux conditions particuliérement dures du milieu al-

pin’. Les raisons qu'il invoque peuvent également permettre à ces champignons

de subsister et de se multiplier dans les zones les plus séches du sud de

l'Espagne.

CONCLUSION

La mise au point et l'utilisation d'un Indice de Présence a permis de

mettre en évidence certaines caractéristiques de la flore fongique parasite de la

végétation naturelle du sud de l'Espagne. Les points essentiels sont les suivants:

- le rôle prépondérant des Uredinales et des Erysiphaceae.

- la faible importance des Ustilaginales.

- l'importance prise par les Uredinales dans l'étage Méditerranéen montagnard.

- l'abondance des Erysiphaceae en basse et moyenne altitude.

- le rôle important joué par le genre Leveillula, en particulier aux altitudes

moyennes

- le découpage de la dition en quatre zones constituées par:

1 - l'étage Littoral, caractérisé par la présence de chlorure de sodium. Sa

flore fongique parasite, assez réduite, est dominée par les Uredinales.

2 - l'étage Méditerranéen inférieur (sous-étages Méditerranéen inférieur

semi-aride et Méditerranéen inférieur sec). La flore fongique, un peu plus abon-

dante que dans l'étage Littoral, y est également dominée par les Uredinales.

3 - les étages Méditerranéen moyen (sous-étages Euméditerranéen et

Mésoméditerranéen) et Méditerranéen supérieur. C'est dans ces étages que le to-

tal des Indices de Présence est le plus élevé. Ces zones semblent plus favorables

que les autres aux micromycètes parasites. Les Uredinales ÿ sont abondantes,

mais ce sont les Erysiphaceae qui forment le groupe le plus important.

4 - les étages supérieurs: Méditerranéen montagnard et

Oroméditerranéen. Les Uredinales restent le groupe le plus important, alors que

les Erysiphaceae et les Ustilaginales disparaissent rapidement avec l'augmen-

tation d'altitude.

Note: Les échelons utilisés, basés sur les bioclimats, peuvent être appelés "étages

de végétation bioclimatiques". Le découpage utilisé dans ce texte figure dans le tableau ci-

dessous, en parallele avec ceux d'autres auteurs.

L'étage Littoral ne peut être comparë aux autres étages: aux caractéristiques

bioclimatiques (celles de l'étage qu'il jouxte, plus l'influence de la mer) s'ajoute la présence

de chlorure de sodium. Cet élément chimique en fait un milieu particulier: c'est pourquoi il

n'apparaît pas dans ce tableau

Source : MNHN, Paris

FLORE FONGIQUE PARASITE 97

Ozenda (1975) | Quezel (1979) | Rivas-Martinez Mercé (1984)

(1980)

Alti

Ate méditerranéen tr [os pioneros

mediterranten | —————| méditerranéen. méditerranéen

Oro-

méditerranéen usum

Oro. Montagnard- Oro Méditerranéen montagnard

méditerranéen | méditerranéen | méditerranéen

Supra- Supra- Supra Méditerranéen supérieur

méditerranéen | méditerranéen | méditerranéen

Méso- Méso- Méso- [Méditerranéen] neame

[méditerranéen

méditerranéen | méditerranéen | méditerranéen | moyen Eumé-

[méditerranéen

Thermo- Thermo- Thermo — |Méditerranéen| see

méditerranéen | méditerranéen | méditerranéen | inférieur | cemiaride

Confert également les articles suivants:

- Bioclimats du sud de l'Espagne (Andalousie). Mercé (1988).

- Végétation du sud de l'Espagne (Andalousie). Mercé (1989)

BIBLIOGRAPHIE

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MERCÉ J., 1973 - Rouilles des Composées de la Cordillère Bétique (Première partie).

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MERCE J., 1974a - Rouilles des Composées de la Cordillère Bétique (Deuxième partie)

Ibid. 110: 55-73.

MERCE J., 1974b - Rouilles des Composées de la Cordillere Bétique - Genre Centaurea

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MERC

Source : MNHN, Paris

98 J. MERCE

MERCE J., 1984 Champignons parasites, végétation et bioclimats du sud de l'Espagne

(Erysiphacees, Ustilaginales, Uredinales). Thèse de Doctorat d'Etat n° 1130.

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MERCE J., 1986a - Les cycles des Uredinales en fonction de leur localisation. Bull. Soc.

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MERCÉ J., 1986b - Relations entre écologie et systématique chez les Rouilles des

Graminées. Cryptogamie, Mycol. 7: 319-325.

MERCE J., 1988 - Bioclimats du sud de l'Espagne (Andalousie). Ecol. Medit. 14: 65-76

(plus une carte en couleur des bioclimats au 1/800000).

MERCÉ J., 1989 - Végétation du sud de l'Espagne (Andalousie). Gaussenia 5: 3-64 (plus

une carte en couleur de la végétation au 1,800000).

OZENDA P., 1975 - Sur les étages de végétation dans les montagne du bassin

Méditerranéen. Doc. Cartogr. Ecol. 16: 1-22.

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fication écologique dans le contexte circum méditerranéen. Forêt Médit. 1: 7-18.

RIVAS MARTINEZ S., 1980 - Les étages bioclimatiques de la végétation de la Péninsule

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Source : MNHN, Paris

Cryptogamie, Mycol, 1992, 13 (2): 99-102 99

CORTINARIUS BISPORIGER SPEC. NOV.,

UNA NUOVA SPECIE DEL SUBGEN. PHLEGMACIUM

DALLA SARDEGNA MERIDIONALE

Marco CONTU

via A. Manzoni, 33.09128, Cagliari. Italia.

ABSTRACT - A new species of Cortinarius subgen. Phlegmacium, C. bisporiger spec. nov.,

is described from southern Sardinia. The new species is very well characterized by small

size, colours, bisporic basidia and small spores. It grows in association with Eucalyprus

camaldulensis.

RÉSUMÉ - Une nouvelle espéce de Cortinarius subgen. Phlegmacium, C. bisporiger spec.

nov., est décrite de la Sardaigne méridionale. La nouvelle espece est bien caractérisée par

sa taille petite, ses colorations, ses basides bisporiques et ses petites spores. ll croit en as-

sociation avec Fucalyprus camaldulensis.

MOTS CLÉS : Basidiomycetidae, Agaricales, Cortinarius, subgen. Phlegmacium, C.

bisporiger, Sardaigne.

INTRODUZIONE

Da molto tempo, ormai, gli impianti artificiali frangivento composti da

Eucalyptus divv. spece. costituiscono uno degli aspetti piu’ significativi non solo

della flora sarda ma anche di quella mediterranea in genere. Essi sono molto

diffusi in tutta la Sardegna, dove costituiscono le principali essenze arboree

utilizzate per i rimboschimenti. Questi impianti ospitano una flora micologica

piuttosto ridotta (a causa dell'estrema secchezza e poverta’ del substrato) ma

altamente significativa e, in molti casi, del tutto peculiare. Prescindendo dal

contingente di specie per c.d. occasionali (ossia non legate esclusivamente allo

Eucalyptus) possiamo citare, fra le entita’ simbionti exclusive, alcune assai

peculiari come Descolea rheophylla (Mal. & Bert.) Mal., Laccaria lateritia

Mal., Amanita gioiosa S. Curreli, fra le Agaricales, e Setchelliogaster tenuipes

(Stech.) Pouzar fra i Gasteromycetes agaricoidi. Esistono, tuttavia, alcune specie

ulteriori, molto rare e poco diffuse, che sembrano legate, come le precedenti, a

tali essenze ma per le quali non esiste ancora una descriziore ufficiale. Una di

queste ultime costituisce l'oggeto della presente comunicazione. Essa appartiene

al genere Cortinarius, sicuramente il piu' difficile fra quelli esistenti e

probabilmente gravemente inflazionato di epiteti, ma mostra une combinazione

di caratteri talmente significativa che il suo futuro riconoscimento sara’

estremamente agevole. Noi la conosciamo da una sola stazione nella quale,

tuttavia, essa compare regolarmente e in truppe numerose da diversi anni

Notizie in merito ci sono state fornite anche dal sig. Salvatore Curreli (S.

Gavino), che in verbis ci ha fatto presente di conoscere bene il fungo da diverse

Source : MNHN, Paris

100 M. CONTU

stagioni ma di non averlo sufficientemente studiato. Poiche’ i caratteri

dell’entita’ in discussione non coincidono con quelli di alcun'altra specie

descritta si rende opportuna la sua descrizione sotto un nuovo nome.

Cortinarius bisporiger Contu, spec. nov.

Pileus 1.5-6cm latus, carnosus, convexus dein explanatus, haud

umbonatus; margine non striato; cutis viscida, hygrophana, brunneo-fulva dein

pallide ochracea vel flava, ad medium saepe obscurior. Velum araneosum, haud

conspicuum, albidum, in juventute visibile ad marginem pilei. Lamellae sat

spissae, modice confertae, uncinato-adnatae, flavo-ochraceae, in senectute

brunneo-ochraceae; acie clariore. Stipes 2-4.5 x 0.8-1.5 cm, solidus, sat curtus,

cylindraceo-bulbosus sed bulbo hawl marginato, interdum napiformi; indumentum

siccum, inferne in bulbo albidum at leve, aliunde flavum, conspicue fibrillosum,

tactu brunnescens. Caro conspicua, fracta albida vel flava, in pileo obscurior,

immutabilis; odor saporque debiles, subnulli. Ope NH,OH ad roseum vergit.

Sporarum pulvis brunnea. Sporae 7.5-9.7 x 4.5-5.7 um, ochraceae, ellipsoideae,

interdum ad apicem attenuatae, verrucosae. Basidia 27-38 x 6.7-7.5 um, mom vel

bispora, clavata. Cystidia nulla. Pilei cutis ex ixocute constituta, hyphis 3-4.5um

latis, cylindraceis, vacuolo pigmentatis; hyphae subcutis pigmento intraparietali

praeditis. Fibulae praesentes sed haud constantes.

Hab. - gregarius vel caespitosus sub Eucalypto camaldulensi, in regione

mediterranea. Serus. - Typus: M. Contu 91120801, Sardinia meridionalis, prov.

Cagliari, Sanluri-Stato, Eucalyptus camaldulensis, 8.X11.1991, leg. M. Contu,

M. Masia et E. Calamida (CAG !).

A sociis statura parva, coloribus, basidiis bisporis habitationeque stricta

sub Eucalyptis manifeste. differt. In subgenere Phlegmacium sectione Scauri

locandus est.

Cappello 1.5-6cm, carnoso, convesso poi spianato e sovente

irregolarmente depresso al centro, non umbonato, margine , assai di rado

leggermente striato, talora frastagliato-lobato; cuticola separabile, notevolmente

viscida ed inglobante particelle di terra e foglie secche, igrofana, da fulva,

bruno-fulva chiara a giallo-ocraceo pallido, centro sovente tendente a

permanere fulvastro, liscia e lucente, radialmente fibrillosa. Velo scarso, visibile

solo negli esemplari molto giovani, araneoso, bianco lasciante resti brunastri

verso la meta’ superiore del gambo nello adulto. Lamelle larghe e spesse,

uncinato-adnate o annesse, a lungo di un bel giallo-zafferano vivo (effetto

Dermocybe!), poi brunastro-ocracee con l'eta’, taglio sempre piu’ pallido.

Gambo 2-4.5 x 0.8-1.5 cm nel bulbo, solido, fibroso, cilindrico a base sovente

bulbosa (bulbo primordiale visible nel giovane !) e talora anche napiforme, mai

marginato; rivestimento biancastro e liscio nel bulbo, altrove longitudinalmente

e fittamente striato, giallo vivo, alla manipolazione brunastro; radichette

miceliari bianche. Carne soda, consistente, al taglio bianca o gialla nel gambo,

piu’ brunastra nel cappello, immutabile; odore e sapore molto deboli,

practicamente assenti. Molto probabilmente non commestible.

Sporata bruno-ocracea.

Spore 7.5-9.7 x 4.5-5.7 um, ocracee, a parete spessa, ellissoidi o

allungate, sovente un poco sfinate nella parte superiore ma mai amigdaliformi,

distintamente ma non pesantemente verrucose, apicolo marcato. Basidi 27-38 x

6.7-7.5um, sempre 1-2 sporici, clavati, a sterigmi non allungati e non robusti.

Subimenio filamentoso. Trama dell'imenoforo regolare, ad ife leggermente

incrostate. Cistidi e cellule marginali assenti o non ben differenziati.

Source : MNHN, Paris

CORTINARIUS BISPORIGER 101

Cortinarius bisporiger spec. nov. 1) carpofori (x 1); 2) basidi (x 1000); 3) spore (x 1000).

Designi di M. Contu.

Rivestimento pileico composto da una spessa ixocutis di ife cilindriche larghe

3-4.5 um, con pigmento vacuolare; subcutis ad ife piu’ larghe e con pigmento

dello stesso tipo; trama ad ife con pigmento intraparietale. Caulocutis senza

peculiarità’ costituita da una cutis secca, banale. Giunti a fibbia presenti

ovunque ma non costandi ai setti. Reazioni chimico-cromatiche: carne del

gambo + NH,OH = rosa carico - Melzer e KOH praticamente negativi.

Habitat: gregario e cespitoso negli impianti artificiali frangivento ad

Eucalyptus camaldulensis della zona mediterranea, nel tardo Autunno. Raro

ma ricorrente nella stazione individuata. Nello stesso habitat Agaricus

pseudocretaceus Bon, Amanita gioisa S. Curreli, A. muscaria (Linn.) Pers. s.L, A.

variabilis S. Curreli, Laccaria lateritia Mal., Lepiota latispora (Kuhn. ex Wass.)

Bon, Lyophyllum decastes (Fr.) Sing., Tricholoma roseoacerbum Riva, etc.

DISCUSSIONE

A causa del rivestimento pileico viscoso, il gambo secco e bulboso ma

non marginato e la reazione della carne al rosa cupo con NILOH, C. bisporiger

deve essere inserito nel sottogenere Ph/egmacium (Fr.:Fr.) J.G. Trog, sezione

Fulvi Moser & Horak ed e’ molto simile ad alcune specie facenti parte del

complesso afferente a C. fu/mineus Fr. (fra le quali C. subfulgens P.D. Orton, C.

eufulmineus R. Henry, eic.). Si riconosce agevolmente, oltre che per l'ecologia

Source : MNHN. Paris

102 M. CONTU

assai peculiare, anche per i basidi sempre mono o bisporici, la assenza di cellule

marginali, le spore medio-piccole e non superanti di regola 10um e, dal punto di

vista macromorfologico per la taglia sempre ridotta ed il gambo a profilo

irregolare nella parte basale, sovente anche leggermente bulboso ma, in ogni

caso, mai nettamente marginato. Il colore intenso delle lamelle evocherebbe

quello posseduto da alcune Dermocybe (es.: croceifolia) ma queste specie

possiedono una morfologia ben differente. Il carattere dei basidi costantemente

bisporici sembra assai originale e prezioso per l'identificazione di C. bisporiger:

esso si e’ rivelato rimarchevolmente costante nelle raccolte esaminate e,

pertanto, e’ una peculiarità’ di questa specie che, in conclusione, a nostro

avviso, va considerata come genotipo bisporico e non come fenotipo di qualche

altra entita’ conosciuta.

Source : MNHN, Paris.

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (2): 103-114 103

CHIMIOTAXINOMIE DES BOLETS DE LA SECTION

LURIDI

C. ANDARY!, L. COSSON!, M.J. BOURRIER?, R. WYLDE? et A. HEITZ?

1- Laboratoire de Botanique, Phytochimie et Mycologie, Faculté

de pharmacie, 34060 Montpellier.

2- Laboratoire Interrégional, Service de la Répression

des Fraudes, 34000 Montpellier

3- Centre CNRS - INSERM, Pharmacologie - Endocrinologie,

Faculté de Pharmacie, 34060 Montpellier.

RÉSUMÉ - L'isolement de deux diastéréoisoméres de l'acide 2-amino-4-hydroxy-

pentanoique dont la structure a été vérifiée par RMN, permet de proposer la création de

deux sous-sections Luridus et Satanas, homogènes, au sein de la section Luridi génératrice

de nombreuses polémiques taxinomiques et toxicologiques.

ABSTRACT - Isolation and structural verification of two diastereomers of 2-amino-4-hy-

droxypentanoic acid allowed to propose the creation of two sub-sections Luridus and Sa-

tanas, in the Luridi section responsable of many nomenclatural and toxicologic discus-

sions.

MOTS CLÉS : Boletus, section Luridi, sous-sections Luridus et Satanas, acide

2-amino-4-hydroxypentanoique, chimiotaxinomie.

Parmi les champignons supérieurs, les bolets occupent une place

privilégiée en ce qui concerne leurs qualités gustatives.

Le "cèpe de Bordeaux” (Boletus edulis Bull.: Fr.) est l'espèce la plus

connue et la plus recherchée. D'autres espèces cependant sont excellentes et

appréciées des connaisseurs tels certains bolets à pores rouges pour la plupart,

souvent bleuissants et classés dans la section Luridi. Nous citerons en particulier

B. erythropus et B. luridus. Il faut toutefois les consommer à l'état cuit et être

sûr de leur détermination. Celle-ci est justement fort délicate car les espèces de

cette section sont très nombreuses et leurs caractères morphologiques voisins.

Leur classification est controversée et leur comestibilité est de ce fait mal

connue. Or dans cette section Luridi se trouvent les seuls bolets responsables

d'intoxication, non mortelle certes, mais à l'origine des troub'es digestifs les plus

sévéres, même cuits (Singer, 1986; Andary, 1987). Parmi ces dernières espèces,

B. satanas est l'espèce la plus incriminée. A l'état cuit, elle ne semble cependant

pas provoquer d'intoxication. Elle est reconnaissable à son chapeau très pâle

presque blanc, pratiquement jamais taché de rose. Cependant, des formes moins

typiques peuvent être à l'origine de confusions et d'intoxications.

Il est donc essentiel de disposer de marqueurs chimiques caractéristiques

en vue d'assurer une identification rapide et sûre et d'établir une classification

précise. Au cours d'une étude préliminaire, nous avions mis au point une

Source : MNHN, Paris

104 C. ANDARY et al.

méthode d'analyse des acides aminés libres par chromatographie sur couche

mince bidimensionnelle (CCM 2D) et leur dosage par chromatographie liquide

à haute performance (CLHP) (Andary et al, 1988). Nous rapportons ici les

résultats de l'analyse d'un certain nombre de taxons appartenant à la section

Luridi ainsi que l'identification d'un acide aminé rare et non protéique présent

dans certaines espèces sous la forme de deux stéréoisomères.

MATÉRIELS ET MÉTHODES

Espèces étudiées et conditions chromatographiques

Tous les échantillons de bolets (correspondant à un échantillon

représentatif du carpophore) ont été déshydratés à 45° et réduits en poudre pour

l'analyse chimique. Les différents spécimens sont conservés dans l'herbier du la-

boratoire de Botanique, Phytochimie et Mycologie. (Tabl. I).

Les analyses des acides aminés libres par CCM et leur dosage par

CLIP ont été réalisés selon la méthode déjà décrite (Andary et al., 1988).

* Les solvants utilisés sont les suivants:

- CCM 2D de cellulose

SI: Butanol-acétone-diéthylamine-eau (1

S2: Isopropanol/acide formique/eau (40.

- CCM de gel de silice:

S3: Chloroforme/méthanol/acide acétique/eau (65:2:

:10:2:5 v/v)

0 v]v)

5 v[v)

- Chromatographie sur colonne de cellulose:

S4: Ethanol/propanol/eau (30:40:30 v/v)

S5: Méthanol/acétone/ammoniaque/eau (10:10:0,5:5 v/v)

S6: Méthanol/eau (90:10 v/v)

S7: Ethanol/propanol/eau (40:40:40 v/v)

- Chromatographie sur colonne de gel de silice:

S8: Chloroforme/méthanol/eau (65:25:4 v/v)

* La révélation aprés migration dans les solvants utilisés se fait par vaporisation

d'un réactif polychromatique à la ninhydrine (Andary et al., 1988).

Obtention et purification des deux isoméres X3 et X4

L’extraction et la purification sont effectuées selon le protocole

précédemment publié à partir de 80 g de poudre de B. pulchrotinctus; ce qui

nous a permis d'obtenir le “pool” des acides aminés libres du champignon. Ce

“pool” concentré à sec et repris dans 5 ml de solvant S4 est chromatographié

sur une première colonne de cellulose avec ce méme solvant. La purification des

composés X3 et X4 se fait par passages successifs sur des colonnes de cellulose

et elution par des solvants appropriés (Fig. 1).

Analyse et structure de X3 et X4

* Les spectres de résonnance magnétique nucléaire (RMN) ont été réalisés à 360

MHz pour le !H et 90,53 MHz pour le C (Appareil Bruker WM 360 WB). Les

déplacements chimiques sont donnés en é (ppm) avec comme étalon interne le

TMS.

Source : MNHN, Paris

CHIMIOTAXINOMIE DES BOLETS 105

B. pulchrotincius

(pool des acides aminés)

| (S4)

F.A F.B

| ($5) (S5)

F.A, F.A; F.A, F.B, F.B2

(S6) (S6)

X, F.B,

(34,2 mg)

(S7)

F.B,

($7)

(0,8 mg)

Figure 1: Schéma d'extraction et de purification des molécules X3 et X4 par

chromatographie sur colonne de cellulose (S4..S7 = phases mobiles utilisées;

F.A, F.B.. = fractions collectées).

Figure 1: Extraction and purification diagram of X3 and X4 compounds by cellulose

columns chromatography. (S4... S7 = mobil phases used; F.A, F.B... = collected

fractions).

+ Dégradation acide de X3

La dégradation acide de X3 se fait directement sur chromatoplaque de

gel de silice en présence d'acide chlorhydrique 2N à 100°C.

Le composé obtenu nommé Y est révélé par vaporisation du réactif à la

ninhydrine aprés migration dans le solvant S7. Ce composé Y est isolé par

chromatographie sur une colonne de gel de silice et élution par S8.

Source : MNHN, Paris

106

C. ANDARY et al.

B. rubrosanguineus

{Walty) ex Cheype

B. satanas.

Lenz

B. torosus

Fr.

RED 14171 P

RAP 8710-13

CHE 8609-14

CHE 8610-18

BON 8110-03

RED 183 P

ESPECES N* D'HERBIER| LIEU DE RECOLTE DATE DE

RECOLTE

B. dupainii ‘AND 8309-1 Bédarieux (34) 13/09/1983

Boudier

RAP 8811-27 Aigoual (30) 01/11/1988

B. erythropus AND 8709-14 La Bastide de Langogne (48) | 13/09/1987

Pers. BOU 8609-12 Valleraugue (30]

B. junquilleus COU 8110-01 Fline les Mortagne (59) 19/10/1981

{Quél.) Boud.

B. legaliae RED 13411 P Pouvrai (61) 1981

Pilat) ex Pilat et Dermek

RAP 8610-15 Nîmes (30) 02/10/1986

B. lupinus BOU 8810-17 Pic St Loup (34) 24/10/1988

Fr. BER 8510-19 Quissac (30) 29/10/1985

AND 8811-23 Aigoual (30) 13/11/1988

B. luridus BER 8410-10 Bédarieux (34) 20/10/1984

Schaeft. : Fr. BER 8510-18 Aigoual (30) 28/10/1985

MAU 8811-22 Cazevieille (34) 01/11/1988

B. luteocupreus AND 8709-12 Pyrénées Orientales (66) 13/09/1987

Bertea et Estades GUI 8610-83G | Saulaie de Léognan La Brède (33)| 11/10/1986

B. permagnificus POD 6210-31 ? 31/10/1982

Poder

BER 8609-11 Quissac (30) 28/09/1986

B. pulchrotinctus AND 8810-21 Montarnaud (34) 25/10/1988.

Alessio. BER 8809-20 Quissac (30) 28/09/1988

B. queletii BOU 8810-24 Pic St Loup (34) 24/10/1988

Schulz. BER 8510-08 Quissac (30) 29/10/1985

B. rhodopurpureus AND 8707-26 Aigoual (30) 23/07/1987

Smotl RED 14911 P Bellon (16 03/08/1983

B. rhodoxanthus BOU 8610-16 Cornus (12) 13/10/1986

Krombh.) Kallenb. PRI 8810-28 Aigoual (30 24/10/1988

Champagnole (39)

Pic St Loup (34)

Montarnaud (34)

Nîmes (30)

Fine les Mortagne (59)

Chizé (79)

Tableau I: Espéces analysées (genre Boletus, section Luridi)

Table I: Analysed species (Boletus, Luridi section)

RESULTATS ET DISCUSSION

Analyse des acides aminés libres

20/08/1982

26/10/1987

01/09/1986

02/10/1986

18/10/1981

05/08/1987

Par CCM 2D, nous avons pu identifier, à partir de 15 espèces apparte-

nant toutes à la section Luridi 15 acides aminés libres usuels et distinguer 3 aci-

des aminés que nous avons nommés X3, X4 et X5 et qui ne correspondaient à

aucun des 35 acides aminés que nous pouvions identifier (Andary et al., 1988).

X3 et X4 apparaissent chez certaines espéces seulement et X5 permet une dis-

tinction rapide entre B. satanas (ne contenant pas ce composé) et B.

Source : MNHN, Paris

CHIMIOTAXINOMIE DES BOLETS 107

pulchrotinctus, espèce de création récente, controversée par certains mycologues

et contenant cette molécule X5. Toutefois les concentrations observées sont fai-

bles et ce dernier produit n'a pas été identifié. Pour l'extraction et l'étude des

molécules X3 et X4, notre choix s'est porté sur B. pulchrotinctus qui

représentait une matière première abondante à notre disposition.

L'analyse par CLHP aboutit à l'identification et au dosage de 25

composés révélés par la ninhydrine (acides aminés et composés apparentés).

Nous confirmons la présence de concentrations élevées d'alanine, d'acide

glutamique, de glutamine et d'acide y- -aminobutyrique dans toutes les espèces

étudiées. Le composé X3, pour les espèces qui en contiennent, correspond à la

molécule la plus concentrée parmi celles révélées par la ninhydrine. Ainsi on

trouve jusqu'à 6 mg/g environ de X3 pour 8. rhodoxanthus alors que la

glutamine et l'alanine sont respectivement de 3,48 et 2,9 mg/g pour le même

champignon. X3 est toujours plus abondant que X4 ( Tabl. Il). Au cours de

‘Acides aminés libres

etapparentés enmgg| 8. | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 |e

de champignon sec |cupai. [et |iega |upi fiur. |pule. |auel. |roc. |juteo |rox. |rubr. |sata. {toro

Ac asparüque g

‘Threonine 0716

Senne 1.438)

‘Asparagine

Ac. glütamique. 1908

Glutamine 3.480)

x 6.518)

X 1.206]

(Glycocolle 1.684

Alanine i714 2.966]

140 | 0,242 0.020

0,070] 0,022 | 0.076

0,020 | 0,104] 0,080] 0,284] 0.018

5:574 | .008 | 0.108]

Vaine

Mahona

Oshara [0030

sienne

Tue

Trea

Rete

Prónylslanme

Ac E Neuve

fra DX

0208

0,288]

9.210 [ 0,278 [ 0.008 | 0.176 | 0.386;

Omithine. 0.308 0638] 0,060] 0,068 0

Lysine, 0078] - 0.176 | 0,072] 0,180

Histidine 0,022] - | 0.090] S 0,056 0030] 0.212] - | 0102

Arginine, 0,040 0,24 [ 0.122 0.228] 0,070] 0,086 10,182 [0220 0.726] 0,124

Total en mg/g 5,542 so 8,756| 10,420 |18,980] 10,582] 5.272| 5.208 | 3,514 |24,982 | 12,780 | 22,458 | 2.250|

hamp. sec

* avec des traces de proline

dupai. : dupainii ; eryt. : erythropus ; lega. : legaliae ; lupi. : lupinus ; luri. : luridus ; pulc.

: pulchrotinctus ; quel. : queletii ; rhod. : rhodopurpureus ; luteo. : luteocupreus ; rhox. :

rhodoxanthus ; rubr. : rubrosanguineus ; sata. : satanas ; toro. : torosus.

Tableau II: Dosage des acides aminés et apparentés libres (en mg/g de champignon sec)

réalisé par C.L.H.P. chez des bolets de la section Luridi.

Table Il: Concentration of free amino-acids and related compounds (in mg/g dried

mushrooms) by HPLC in Boletes of Luridi section.

Source : MNHN, Paris

108 C. ANDARY et al.

ces analyses, nous avons constaté que la concentration en acides aminés était

plus élevée dans l'hyménophore que dans les autres organes (stipe et piléus).

Isolement et identification de X3 et X4

Nous avons obtenu au total 34,2 mg de X3 et 0,8 mg de X4. L'analyse

des spectres de RMN a permis la détermination de la structure de ces deux

composés (Tabl. IIl et IV). Ce sont deux diastéréoisoméres de l'acide

2-amino-4-hydroxypentanoique appelé également y-hydroxynorvaline de formu-

le brute: CH, NO; et de formule développée:

CE TEC:

CH3-CH-CH2-CH-COOH

dH NH

Le composé X3 correspond à la forme thréo (2S, 4R)-(-)-2-amino-4-

hydroxypentanoique de formule:

OH NH,

COH

X4 correspond a la forme erythro (2S, 45)-(+)-2-amino-4-hydroxypentanoique

de formule:

OH NH,

CO;H

Ces deux isomères avaient été isolés chez B. satanas par Matzinger et al.

(1972) puis synthétisés par Harding et al. (1988). Par dégradation acide réalisée

directement sur plaque de gel de silice nous obtenons, à partir de l'isomére (2S,

4R), un composé Y se colorant en jaune vif en présence du révélateur à base de

ninhydrine. Puis cette couleur évolue au bout de quelques minutes vers le brun

3,85 (dd:4,9:8,8)

2,14 (dd;15,1:3,4:4,9)

1,83 (ddd;15,1:9,3:8,8)

4,11 (add:3,4:6,0:9,3)

1,28 (d:6,0

Tableau III: Spectre de RMN !H (ppm) de X3 et X4 dissous dans le DMSO-dg. Les

déplacements chimiques et les valeurs de J sont données entre parenthéses.

Table III: 'H NMR spectra (pbm) of X3 and X4 dissolved in DMSO-d,. Chemical shifts

and J values are in parentheses.

Source : MNHN, Paris

CHIMIOTAXINOMIE DES BOLETS 109

Tableau IV: Spectres de RMN PC (ppm) de X;

dissous dans le DMSO-dg.

Table IV: PC NMR spectra (pbm) of X; dissolved

in DMSO-dg

violacé. Les deux isoméres (2S, 4R) ct (2S, 4S) se dégradent totalement au bout

de 15 mn de chauffage. Le dérivé Y possède les mêmes caractéristiques

physico-chimiques que la lactone isolée par Matzinger et al. (1972).

Une dégradation des deux diastéréoisoméres en milieu liquide est

également réalisée à 37°C en milieu HCI 0,01N (pH 2) dans le but de reprodui-

re des conditions analogues à celles de l'estomac. Dans ces conditions,

l'hydrolyse débute aprés 13 mn. Au cours de cette dégradation acide, il se pro-

duit une cyclodéhydratation de la molécule donnant un chlorhydrate d'amine

sous la forme de dérivés cis et trans de formules suivantes:

CH; NH,*Cr

pss H

Dérivé cis obtenu par cyclodéhydratation du composé thréo (2S, 4R)(= Y)

H NH;'CI

e H

CH;

Dérivé trans obtenu par cyclodéhydratation du composé erythro (25, 4S)

Activité de l'acide 2-amino-4-hydroxypentanoique

a) Róle toxique?

La consommation de deux carpophores et demi de B. pulchrotinctus

(parfaitement déterminés) a nécessité l'hospitalisation pendant une nuit de la

personne concernée. Ces champignons avaient été cuits à l'eau, pendant 15 à

20 mn; cette eau avait été rejette. Trois heures environ après le repas (pris à

20h30), cette personne a présenté des nausées et vomissements importants, des

tremblements et des sueurs froides, suivis de diarrhées le lendemain. Le

rétablissement nécessita environ 48 heures (Andary, 1987).

Nous avons cu la possibilité de tester l'éventuelle toxicité des molécules

isolées vis-a-vis de lymphocytes humains in vitro (travail réalisé au Laboratoire

d'Immunologie cellulaire, Hopital St Eloi, Montpellier). Aucune toxicité n'a été

mise en évidence pour cet acide ou sa lactone par rapport aux contrôles et ceci

pour des dilutions allant de 10? à 107 M. Cependant, une absence de

Source : MNHN, Paris

110 C. ANDARY et al.

cytotoxicité vis-à-vis des lymphocytes humains n'exclut pas un pouvoir toxique

vis-à-vis d'autres cellules. Le rôle de ces acides aminés non protéiques, isolés à

partir de plantes supérieures ou de champignons, est peu connu. Certains sont

des précurseurs dans la synthèse d'acides aminés essentiels (Bell, 1980) , d'autres

ont des propriétés antimétaboliques (Hatanaka et al., 1985).

On connait effectivement des acides aminés non protéiques toxiques chez

certaines amanites tels l'acide L-2-amino-4,5-hexadienoïque et l'acide L-2-

amino-4-pentynoique antimétaboliques et hépatotoxiques. Ces: molécules furent

isolées de carpophores d'4manita solitaria (Fr.) Secr. (combinaison valide: A.

strobiliformis (Vitt.) Bertillon), A. abrupta Peck, A. pseudoporphyria Hongo et

A. neoovoidea Hongo (Chilton & Ott, 1976; Hatanaka & Kawasaki , 1980;

Hatanaka et al. 1985; Yamaura et al., 1986).

La présence d’acides aminés très souvent hydroxylés constitutifs de

polypeptides toxiques tels que les amanitines et les phalloidines est à signaler.

C'est le cas de l'acide (2S, 3R, 4S)-2-amino-3-méthyl-4-hydroxyvalérique consti-

tutif de la y-amanitine ainsi que de l'acide (2S, 4R)-2-amino-3-

méthyl-4,S-dihydroxyvalérique intervenant dans la structure des a et B

amanitines (Gieren et al., 1974). La perte du groupement hydroxylé de

l'hydroxyleucine chez les amanitines et de celui de l'hydroxyproline chez la

phalloine diminue fortement la toxicité de ces molécules (Wieland & Faulstich,

1978).

On trouve également un acide aminé insaturé: la vinylglycine chez

Entoloma nidorosum (Fr.) Quél. considéré comme suspect (Dardenne et al.,

1974), ainsi que chez FE. lividum (Bull) Quél. fortement toxique. La

responsabilité de cet acide aminé dans la toxicité n'a pas été prouvée.

Le róle de l'acide L-2-amino-4-méthyl-hex-5-enoique isolé à partir d'un

bolet de Nouvelle-Guinée (Gellert et al., 1973), présumé responsable de troubles

hallucinogenes, n'a pas été non plus étudié.

b) Valeur chimiotaxinomique

Nous avons recherché, d'une façon systématique et selon les échantillons

disponibles, la presence de ces isomeres de l'acide 2-amino-4-

hydroxypentanoique chez le maximum d'espèces. Nous avons utilisé les pre-

miers travaux réalisés (Andary et al., 1988) en les complétant par l'étude de

nouvelles espéces (Cosson, 1989). Sur les 26 taxons analysés, appartenant à

différents genres chez les Bolétales, nous retrouvons les isoméres thréo et érythro

uniquement dans un groupe d'espèces homogènes et appartenant toutes à la sec-

tion Luridi (Tabl. V).

Cette constatation est très intéressante car les espèces citées contenant

ces composes correspondent exactement aux espèces toxiques ou suspectes par-

mi les bolets. Nous pouvons supposer que ces deux acides aminés jouent un

rôle dans les désordres gastro-intestinaux parfois assez graves entraînés par

Vingestion de ces champignons. Or, les espèces de cette section, longtemps mal

connues parce que irréguliérement réparties en Europe, semblent être mieux

comprises actuellement. L'analyse des acides aminés de ces champignons par

CCM 2D et par CLIIP nous permet d'être plus précis dans l'étude taxinomique

de ces espèces.

Ainsi, B. rubrosanguineus (Walty) ex Cheype a été synonymisé à B.

rhodopurpureus Smotlacha par Charbonnel (1980) et Engel (1983). Par la suite,

en 1991, Alessio rehabilite B. rubrosanguineus comme espéce à part entière.

Nous pouvons confirmer cette distinction car les exemplaires de 8.

Source : MNHN, Paris

CHIMIOTAXINOMIE DES BOLETS 1n

GENRE SECTION ESPECE x3 x4

Appendiculati appendiculatus E E

Boletus edulis y 5

Calopodes calopus = 2

albidus = =

dupainii - 3

erythropus

jonquilleus = 5

legaliae

+ +

Boletus lupinus + +

luridus z -

luteocupreus E $

Luridi permagnificus = =

pulchrotinctus

queletii E E

rhodopurpureus S =

rhodoxantus + +

rubrosanguineus + +

satanas + +

torosus = p

Boletinus cavipes = È

Krombholziella |Scabrae duriusculus E E

Suilli collinitus = 3

Suillus luteus = =

Fungosi variegatus E E

bovinus E E

[Xerocomus chrysenteron E s

Tableau V: Recherche des acides aminés X; et X, chez différentes espèces de bolets.

Table V: Amino-acids X; and X, research in varied species of Boletes

rhodopurpureus analysés ne contiennent pas X3 et X4 alors que ces deux

isoméres sont présents chez B. rubrosanguineus. Ce fait est en accord avec l'avis

de Cheype (1982) et Redeuilh (1988).

Pour ce dernier, B. rubrosanguineus correspond en fait à un taxon

nommé B, issu de B. splendidus Martin, espèce des montagnes. L'autre taxon

A, espèce de la plaine sous feuillus, correspond toujours pour Redeuilh (1988) à

B. legaliae (Pilát) ex Pilat et Dermek . Ceci est en accord avec l'analyse chimi-

que car nous avons retrouvé X3 et X4 dans 8. legaliae également.

Charbonnel (1981) rassemble trois espéces dans le grcupe rhodoxanthus:

^B. purpureus Fr. sens. Romagnesi; B. rhodoxanthus Kall. et B. rhodopurpureus

Smou.”. Il synonymise "B. purpureus Fr. sens. Romagnesi à B. lupinus Fr.

sens. Bresadola, B. legaliae Pilàt ct Dermek et B. satanoides Smotl.". Ce re-

groupement et ces synonymies sont en désaccord avec nos résultats car 8.

rhodoxanthus est très distinctement séparé par la présence de X3 et X4, absents

chez 8. rhodopurpureus et B. luteocupreus (= B. purpureus pro parte) (Bertea &

Estades, 1990).

Source : MNHN, Paris

112 C. ANDARY et al.

Il est admis actuellement ( P. Bertea communication personnelle) que le

nom de purpureus a été cité dans des sens trés différents par de nombreux au-

teurs et, en l'absence d'un contexte descriptif suffisamment discriminant, il ne

devrait plus étre utilisé.

B. rhodoxanthus, qui possède X3 et X4, est peu controversé. Seul Bon

(1988) en fait une variété de B. rhodopurpureus Smotl., ce qui nous semble peu

probable puisque ce dernier ne contient pas les marqueurs X3 et X4.

Alessio (1985) distingue deux grands groupes dans la section Luridi: le

groupe a à réseau marqué et le groupe b n'ayant pas de réseau net.

Le groupe a est divisé en un sous-groupe al comprenant des espéces à

chapeau de coloration marquée: de jaune vif à brun rouge. Le sous-groupe a2

regroupe des espèces à chapeau beaucoup plus clair, ne s/assombrissant

qu'après le stade de maturité.

On retrouve dans ce sous-groupe a2: "8. rhodoxanthus (Krombh.) Kall.,

B. splendidus Martin, B. pulchrotinctus Alessio et B. satanas Lenz” qui corres-

pondent aux espèces contenant X3 et X4. Alessio ne reconnait pas B. legaliae

car il l'inclut dans la synonymie de 8. splendidus (mais nous avons vu que l'ana-

lyse chimique confirme les conclusions récentes de Redeuilh (1988) à ce sujet). Il

ne manque dans ce sous-groupe a2 que 8. /upinus classé par Alessio dans le

groupe b.

La solution proposée par Bon (1988) est intéressante à ce sujet. Ce der-

nier constitue deux sections:

section Luridi comprenant: "B. luridus Schaeff.: Fr., B. erythropus Pers. :

Fr., B. dupainii Boud., B. queletii Schulz;

section Purpurei regroupant: "8. rhodopurpureus Smot., B. legaliae Pil.,

B. rhodoxanthus (Krb. ) ex Kallenb., B. lupinus Fr., et B. satanas Lenz’.

B. lupinus se retrouve donc dans la même section que B. satanas et B.

legaliae, ce qui est en accord avéc nos résultats biochimiques.

Enfin le découpage préconisé par Cheÿpe (1982) est également à retenir.

Il distingue d'une part:

"B. torosus (Fr.), B. xanthocyaneus (Ramain) Romagn. et B. rhodo-

purpureus Smot. (= B. purpureus (Fr.) sens. Peltereau)';

d'autre part:

^B. satanoides Smotl. (7 B. legaliae (Pilàt) — B. lupinus sens. Bres.),

B. rhodoxanthus (Krombh.) et B. rubrosanguineus (Walty). Nous avons pu

vérifier que seul le deuxiéme groupe contient X3 et X4.

Ainsi, la synthése de toutes ces constatations, de ces classements et notre

analyse chimique dans la section Luridi nous a amené à proposer dans cette

section deux sous-sections, que nous avons appelees Luridus et Satanas (Tabl.

VI). Cette derniére comprend les espéces caractérisées chimiquement par la

présence de X3 et X4 et correspondent aux espèces toxiques. Il est intéressant

de noter que ces conclusions rejoignent totalement les conceptions taxinomiques

actuelles de la plupart des spécialistes des bolets.

Source : MNHN. Paris

CHIMIOTAXINOMIE DES BOLETS 113

SOUS-SECTION LURIDUS SOUS-SECTION SATANAS

B. legaliae (Pilat) ex Pilat et Dermek

B. lupinus Fr.

B. pulchrotinctus Alessio

B. rhodoxanthus (Krombh.) Kallenb.

B. rubrosanguineus (Walty) ex Cheype

B. satanas Lenz

B. dupainii Boudier

B. erythropus Pers.

B. junquilleus (Quél.) Boud.

B. luridus Schaeff.: Fr.

B. luteocupreus Bertea et Estades

B. permagnificus Pöder

B. queletii Schulz.

B. rhodopurpureus Smotl.

B. torosus Fr.

Tableau VI: Nouvelles sous-sections de la section Luridi.

Table VI: New sub-sections of Luridi section.

REMERCIEMENTS

Nous tenons à remercier Mme M. Andary pour les tests de toxicité

lymphocytaire, ainsi que MM M. Bon, G. Chevassut, LL. Cheype, R. Courtecuisse, J.

Guinberteau, R. Póder et G. Redeuilh qui ont eu l'amabilité de nous fournir des exsiccata.

Nous remercions tout particulièrement P. Bertea pour ses conseils pertinents et la relectu-

re du mémoire.

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Source : MNHN, Paris

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (2): 115-123 115

THREE INTERESTING NEW HYPHOMYCETES FROM

SOUTH EAST ASIA

C.V. SUBRAMANIAN

Central Institute of Medicinal and Aromatic Plants, Post Bag

No.1, P.O. RSM Nagar, Lucknow-226016, India.

ABSTRACT - This paper deals with the description and taxonomy of three interesting

new dematiaceous hyphomycetes from southeast Asia, and is part of the author's continu-

ing work on tropical microfungi. Of these, Dwibeeja sundara gen. et sp. nov., occurring on

a variety of substrates and collected in Singapore, is unique in producing robust, dark-o-

paque synnemata with many simple conidiogenous cells and acrogenous chains of twin

one-celled, brown conidia, the first one in the chain gangliar and the second one blastic.

The two other hyphomycetes were both collected on Smilax sp. from Malaysia and are

unique in producing solitary, gangliar, euseptate conidia, each with a characteristic cap,

acrogenously on simple conidiophores and their successive, percurrent lageniform prolifer

ations. Both conidiogenesis and morphology of the conidium appear to be unique in these

fungi. These two fungi are clearly congeneric and are accomodated in a new genus, Javo-

narxia, as two new species, J. triseprara (Type species) and J. quadriseptata: the conidia

of the former are 3-septate, of the latter 4-septate.

RÉSUMÉ - Description et taxonomie de 3 nouveaux Hyphomycètes dématiés récoltés

dans le Sud Est asiatique.

Le premier, Dwibeeja sundara gen. sp. nov., rencontré sur plusieurs substrats et

récolté à Singapour, produit des synnemas sombres avec de nombreuses cellules

conidiogènes et des chaines acrogénes de conidies unicellulaires jumelles, brunes, la

premiére étant une gangliospore et la seconde une blastospore.

Les deux autres ont été récoltées sur Smilax en Malaisie et sont originaux par la

production de gangliospores solitaires cloisonnées avec une coiffe caractéristique, acrogène

Sur des conidiophores simples à proliférations percurrentes successives, lagéniformes. La

conidiogenèse et la morphologie des conidies sont particulières et autorisent à regrouper

ces champignons dans un genre nouveau: Javonarxia avec deux espèces: J. triseprata

espèce type) à conidies triseptées et J. quadriseptata à conidies quadriseptées.

KEY WORDS : Hyphomycetes, Dwibeeja, Javonarxia, southeast Asia.

During the period of the author's stay in Singapore a» Visiting Professor

in the National University of Singapore during 1986-87, the author made nu-

merous collections of microfungi from Singapore, and some collections from

Malaysia and Indonesia. These southeast Asian collections include several inter-

esting or new taxa and the study of these forms part of the author's continuing

work on tropical microfungi. In this paper three interesting new hyphomycetes

are described and their taxonomy is discussed.

Source : MNHN, Paris

116 C.V. SUBRAMANIAN

3 5

Fig. 1-5: Dwibeeja sundara. 1, 2: synnemata (? stroma) with projecting conidiogenous

cells and chains of twin conidia. 3: a conidiogenous cell with the first formed

ngliar conidium and second conidium developing blastically from the tip of the

st conidium. 4-5: conidiogenous cells and chains of twin conidia in various

stages of development. Note guttules within conidia in fig. 5. Fig. 1-4: ex Type

specimen, $57; Fig. 5: ex S 24. Bar connotes 104m.

e : MNI

NEW HYPHOMYCE]

ES FROM ASIA 117

1. DWIBEEJA SUNDARA gen et sp. nov.

This interesting hyphomycete was collected on dead bark of Calophyl-

lum inophyllum and other substrates from Singapore and is described below.

The fungus is easily recognizable by the numerous, or often not so nu-

merous, or even sparse, synnemata that are mostly scattered or sometimes gre-

garious on the substrate. The synnemata are stout, thick, dark-opaque, fertile

along the length (all around) and at the apex, up to 250 um tall, and 28-40

(64)um wide (Fig. 1-2). The conidiogenous cells which project from the body of

the synnema all along, and around the tip, are simple, short, brown, up to 20um

long, 2-Sum wide at the tip and 3-7um wide at the base (Fig. 3). The conidia

are borne typically in simple acropetal chains of two conidia on each conidioge-

nous cell acrogenously, one-celled, coffee-brown in colour, thick-walled, smooth

and dry (Fig. 4-5). The first (ie. primary) conidium is gangliar, acrogenous,

broadly fusiform, narrowed to a somewhat mamillate part at each end, and 14-

21 x 6-11 um. The second (i.e. secondary) conidium is produced blastically

from the tip of the first (gangliar) conidium and is ovoid, invariably shorter than

the first conidium, slightly narrowed to a mamillate tip, narrowed at the base

Where it is attached to the first conidium, and 10-15 X 7-9um. The conidia are

often detached with part of the conidiogenous cell, and may remain in pairs. or

fall apart. Young conidia are paler in colour than the older ones and often show

a guttule or two within.

The occurrence of chains of twin conidia with the primary conidium

gangliar in origin, and the second blastic, recalls the situation in the genus Pa-

dixonia Subram. as typified by P. bispora Subram. (Subramanian, 1972). Dix-

on (1985) has shown that the primary conidium is holoblastic, but the second

one in the chain is enteroblastic. The tandem pair of conidia secedes as a unit.

However, the present fungus is quite distinct in forming conspicuous synnemata.

Also, the conidiogenous cells are simple, short and tubular, unlike those of Pa-

dixonia. Chains of twin conidia are also found typically in Beejadwaya bispora

(Matsushima) Subram. (Subramanian, 1977), but here both conidia are blastic

and there are, of course, no synnemata. Since there is apparently no suitable

genus in which the present fungus can be accommodated, a new genus, Dwibee-

ja is proposed here for it. The generic name is from Sanskrit: divi = two, beeja

= seed, spore, from the pairs of conidia that are typical. The specific epithet is

also from Sanskrit: sundara = beautiful.

DWIBEEJA Subramanian anamorph gen. noy.

Dematiaceous hyphomycete. Synnemata simple, fertile all over the sur-

face. Conidiogenous cells simple, short, cylindrical to subeylindrical, brown. Co-

nidia acrogenous, in acropetal chains of two each, brown, one-celled, dry. First

conidium gangliar, second conidium blastic.

Fig. 1-5: Dwibeeja sundara. 1, 2: synnema avec cellules conidiogènes orientées vers

l'extérieur et chaines de conidies jumelles. 3: cellule conidiogène avec une

première ganglioconidie et une seconde qui se développe de façon blastique au

sommet de la première. 4-5: cellules conidiogénes et chaines de conidies jumelles

à divers stades de développement. En 5 on notera les guttules à l'intérieur de la

conidie. Fig. 1-4: espéce type S57: Fig. 5 ex $24. Echelle = 104m.

Source : MNHN, Paris!

118

C.V. SUBRAMANIAN

14 17

Fig. 6-18: Javonarxia triseptata ex Type S 118. 6: hyphae and conidiohore. Note the fun

gus overgrows hyphopodiate mycelium. 7-8: cluster of simple conidiophores

with solitary acrogenous phragmoconidia in various stages of development . 9: a

conidiophore showing several lageniform proliferations and an acrogenous soli-

tary phragmoconidium with apical cap. 10-11: stages in development of first coni.

dium; 12-17: various stages in the development of secondary conidia subtended

by characteristic lageniform cell. Note the continuity of the outer wall (layer) of

conidium and subtending cell and its origin external to the dark-coloured prolifer-

ation below in figs. 12, and 14-17. Note also apical cap of mature conidium at-

tached to conidiophore in fig. 17. Fig. 18: mature phragmoconidia. Note apical

cap. Bar connotes 104m.

Source : MNHN, Paris

NEW HYPHOMYCETES FROM ASIA 119

Hyphomycete dematiaceae. Synnemata simplicia, undique fertilis. Cellu-

lae conidiogenae simplicia, brevia, cylindrica vel subcylindrica, brunnea. Conidia

acrogena, binatim catenata acropeta, unicellula, brunnea, sicca. Conidium prima

ganglica, secunda blastica.

Species typica: Dwibeeja sundara Subramanian.

DWIBEEJA SUNDARA Subramanian sp. nov.

Synnemata robust, dark-opaque, simple, fertile all over, up to 250um

tall, 28-40 (-64)um wide. Conidiogenous cells short, cylindrical, brown, up to

20um long, 2-Sum wide at the tip, 3-7um wide at the base. Conidia acrogenous,

typically in simple acropetal chains of two conidia on each conidiogenous cell,

one-celled, coffee-brown in colour, thick-walled, smooth, dry. First conidium

gangliar, fusiform, mamillate at base and at the apex, 14-21 x 6-11um. Second

conidium blastic, ovoid, mamillate at the apex, 10-15 x 7-9um.

Type: on dead bark of Calophyllum inophyllum Linn. (Guttiferae), Bo-

tanical Garden, Singapore, Coll. C.V. Subramanian. 19.ii.1987 (No. S 57).

Synnemata robusta, atro-opaca, simplicia, undique fertilis, usque ad

250um alta, 28-40 (-64)um crassa. Cellulae conidiogenae brevia, cylindrica,

brunnea, usque ad 20um longa, 2-Sum lata ad apicem, 3-7um lata ad basim. Co-

nidia acrogena, binatim catenata acropeta, unicellula, brunnea, sicca. Conidium

prima ganglica, fusiformia, mamillata ad basim vel apicem, 14-21 x 6-11um. Co-

nidia secunda blastica, ovoidea, mamillata ad apicem, 10-15 x 7-9um.

Typus lectus in corticis emortuis Calophylli inophylli, hortus botanicus,

Singapore, leg. C.V. Subramanian, 19.11.1987, sub numero S 5

Other collections:

1. on dead bark of Palaquium obovatum (Griff.) Engl. (Sapotaceae) Botanical

Garden, Singapore, Coll. C.V. Subramanian (S 24), 12.41.1987.

2. on dead bark of Prunus polystachyus (Hook. f.) Kalkm. (Rosaceae), McRit-

chie Forest, Singapore, Coll. C.V. Subramanian (S. 83), 21.iii. 1987.

3. on dead bark of Prunus polystachyus, McRitchie Forest, Singapore, Coll.

CV. Subramanian (S 179), 18.iii. 1987.

4. on dead bark of Alstonia angustifolia Wall. (Apocynaceae), Me Ritchie For-

est, Singapore, Coll. C.V. Subramanian (S 164), 18.iii.1987.

Fig. 6-18: Javonarxia triseptata ex type S118. 6: Hyphes et conidiophores. On notera que

le champignon pousse à partir d'un mycélium à hyphopodies. 7-8: bouquet de

conidiophores simples avec des phragmoconidies acrogènes solitaires à divers

stades de développement. 9: conidiophores montrant plusieurs proliferations

lagéniformes et une phragmoconidie solitaire, acrogène, avec une coiffe apicale.

10-11: stades de développement de la première conidie. 12-17: divers stades de

développement de conidies secondaires supportées par une cellule lagéniforme

caractéristique. On notera la continuité de la couche externe de la paroi de la con-

idie et de la cellule sous-jacente et sa position externe par rapport à la

prolifération sombre située en dessous sur les figures 12 et 14-17. On notera aussi

la coiffe apicale d'une conidie müre encore attachée au conodiophore sur la fig.

17; Fig. 18: phragmoconidie mùre avec coiffe apicale. Echelle — 10m.

Source : MNHN, Paris:

Fig,

Fig.

20 26

19-26: Javonarxia quadriseptata ex type S 120d. 19-20: general view of mycelium,

conidiophores and conidia. Note in fig. 20 conidiophore on the right with the first

conidium still attached and the conidiophore on the left with 3 proliferations and

a conidium with a subtending lageniform cell developing apically. 21: part of coni-

diophore with 3 proliferations and a mature phragmoconidium still attached. 22:

early stage in development of first conidium. 23: mature first conidium with cap,

still attached to conidiophore. 24, 25: stages in development of conidia on conidio-

phore with 2 and 1 proliferations, respectively. 26: two conidia showing emei

gence of germ tubes ex the apical cap of the conidium. Bar connotes 104m.

19-26: Javonarxia quadriseptata ex type $120d. 19-20: vue générale des mycélium,

conidiophores et conidies. On notera sur la figure 20, à droite, un conidiophore

avec la première conidie encore attachée, à gauche un conidiophore avec trois

proliférations et une conidie avec cellule sous-jacente lagéniforme. 21: partie du

conidiophore avec trois proliférations, une phragmoconidie müre encore attachée

22: stade précoce de développement d'une première conidie. 23: première conidie

mûre avec coiffe, encore attachée au conidiophore. 24-25: développement de coni-

dies sur conidiophores avec respectivement 2 et 1 proliferations. 26: conidies mon-

trant la sortie d'un tube germinatif à partir de la coiffe apicale. Echelle: 10 4m:

Source : MNHN, Paris

NEW HYPHOMYCETES FROM ASIA 121

2. JAVONARXIA TRISEPTATA gen. et sp. nov. and 3. J. QUADRISEPTATA

sp. nov.

Two interesting hyphomycetes, distinct, but clearly congeneric, were col-

lected from Malaysia, both peculiarly on twigs of Smilax sp. and are described

below.

The first of these is based on a collection on twigs of Smilax sp., from

Cameroon Highlands (S 118). The fungus is apparently hyper-parasitic or over-

grows epiphytic hyphopodiate mycelium of other fungi on the substrate (Fig. 6).

The fungus is easily recognized by its conspicuous conidiophores: these are

erect, mostly straight, simple, cylindrical, thick-walled, dark brown, septate, each

sometimes arising from a flattened radially lobed basal cell or foot 15-18um

across and 7.0-12.0um in height, single in clusters of a few, or conspicuously

caespitose, up to 200um tall, and 4.5-6.0um wide at the base (Fig. 7 to 9). The

conidia are acrogenous, gangliar, solitary, dry, brown, somewhat obclavate, nar-

rowing at the base to a flattened scar 2-3um wide, widest midway in the lower

half, typically 3-euseptate, often with the two median cells larger and longer than

the end cells, smooth-walled, each with a smoothly rounded hyaline to subhya-

line apical cap about 4.5-7.5um long. The conidia are 28-36 x 6-9um (Fig. 10-

11).

Conidium ontogeny in this fungus seems to be unique (Fig. 12 to 17).

After the first conidium which develops terminally on the apical cell is shed, the

conidiogenous cell proliferates (percurrently) to produce a conidium subtended

by a characteristically lageniform basal cell, a process that is repeated almost in-

definitely so that a conidiophore may have several such lageniform conidium-

subtending cells in a linear series, depending on the number of successive coni-

dia so produced at higher and higher levels. When mature, the proliferations

become dark-coloured and thick walled. Early stages in development of these

apparent percurrent proliferations show clearly the hyaline or subhyaline wall of

the conidium and subtending lageniform cell to be continuous with and external

to the subtending lageniform proliferation - clearly not enteroblastic (Fig. 12, 14

and 17). Each conidium initial apparently has a layered wall: the outer hyaline

or subhyaline layer gets broken early and the upper part of the broken wall pre-

sumably remains as a cap (Fig. 17). Ultrastructural study would help a better

understanding of the finer details of conidiogenesis and genesis of the character-

istic conidial cap.

The second fungus was also collected on Smilax sp. from Cameroon

Highlands (S 120d) and is basically similar to the first one, but yet distinct. The

conidiophores arise from repent hyphae and are small, robust, erect, straight or

bent, subcylindrical, brown, thick-walled, septate, 80-180um tall, 7.5-10.Sum

Wide, slightly narrowed at the tip, (percurrently) proliferating on secession of the

successively produced solitary conidia (Fig. 19-20). The conidia are gangliar, ac-

rogenous, solitary, brown, obclavate-fusiform to fusiform, widest midway in the

lower half, truncate at the base, smooth-walled, smoothly rounded at the tip, 4-

septate, the second cell from the base usually the longest, fcllowed by the cell

immediately above, the apical cell the shortest and usually the smaliest, each

with an apical cap, 45-51 x 7-1lum, 4.5-6.0um wide at the truncate base. Fol-

lowing secession of the first conidium which develops at the apex of the conidio-

phore, the conidiophore proliferates terminally to give rise to a characteristically

lageniform proliferation and a conidium initial at the tip of the proliferation

(Fig. 21-25). The second conidium, when mature, is disloged at the junction be-

tween the tip of the lageniform cell and the conidium itself. The process is re-

peated. Conidiogenesis is closely similar to what has been seen in S 118. The

Source : MNHN. Paris!

122 C.V. SUBRAMANIAN

lageniform proliferations become thick-walled and dark-coloured when mature

and are 15-32 x 7-9um. One or two what appear to be rare cases of germ tube

emergence (? germination) from the apical cap of conidia have been seen (Fig.

26).

This fungus has more robust conidiophores, longer lageniform prolifer-

ations and larger conidia that are 4-septate instead of being 3-septate compared

to the first one. The two fungi are obviously congeneric.

The simple, dark, erect conidiophores with lageniform percurrent prolif-

erations and the brown, gangliar phragmoconidia are reminiscent of Sporidesmi-

wn nodipes (Penz. & Sacc.) Hughes and a few other species of Sporidesmium

that have similar conidiophores. These have been redisposed by Subramanian

(1991) in a separate genus, Penzigomyces. Nevertheless, the ever-present conidi-

al cap in the two fungi described here is unique and has not been observed by

the author in the type and other specimens of Sporidesmium nodipes which he

has examined; they are not seen even in the author's fresh collections of this tax-

on from S.E. Asia. Apparently, there is no genus known in which the two fungi

from Cameroon Highlands can be accomodated satisfactorily. A new genus Ja-

vonarxia is proposed here to take them. The generic name is in honour of my

good and long-time friend, the late Dr. J.A. von Arx, former Director, CBS,

Baarn, the Netherlands, and commemorates both his contributions to science

and his humanity.

JAVONARXIA Subramanian anamorph gen. nov.

Dematiaceous hyphomycete producing gangliar conidia. Conidiophores

simple, erect, brown, septate, with a succession of lageniform ‘percurrent’ prolif-

erations. Conidia acrogenous on conidiophore and successive proliferations, sol-

itary, obclavate, fusiform, or fusiform-obclavate, euseptate, truncate at base,

rounded at apex, with an apical cap.

Hyphomycete dematiacea conidia ganglica producentes. Conidiophora

non ramosa, erecta, fusca, septata, cum proliferationes successivae terminales la-

geniformes percurrens. Conidia acrogena ad apicem conidiophororum et prolifer-

ationem successivum, solitaria, obclavata, fusiformia, vel fusiformia-obclavata,

euseptata, truncata ad basim, rotundata ad apicem, cum pileatus apicali.

Species typica: Javonarxia triseptata Subramanian sp. nov.

JAVONARXIA TRISEPTATA Subramanian sp. nov.

Mycelium superficial, hyperparasitic or overgrowing epiphytic hyphopo-

diate mycelium. Conidiophores erect, simple, cylindrical, thick-walled, dark

brown, septate, single, gregarious or caespitose, up to 20um tall, 4.5-6.0um

wide. Conidia acrogenous, gangliar, solitary, brown, dry, obclavate, widest mid-

way in the lower half, narrowing towards the base to a flattened scar 2-3um

wide, typically 3-euseptate, often with the two median cells larger and longer

than the end cells, smooth, smoothly rounded at the apex, 23-36 x 6-9um, and

with a hyaline to subhyaline apical cap about 4.5-7.5um long.

Type: on twigs of Smilax sp. (Liliaceae), Cameroon Highlands

17.v.1987, Coll. C.V. Subramanian (S 118).

Mycelium superficiali, hyperparasitici, vel superorti mycelium epiphytis

hyphopodiatis, Conidiophora erecta, simplicia, cylindrica, crassitunicata, atro-fus-

ca, septata, solitaria vel gregaria vel caespitosa, usque ad 20um alta, 4.5-6.0um

lata. Conidia acrogena, ganglica, solitaria, fusca, sicca, obclavata, latissima ad

Source : MNHN, Paris

NEW HYPHOMYCETES FROM ASIA 123

media dimidio inferiore, angustata et truncata et 2-3um lata ad basim, 3-eusepta-

ta, levia, rotundata ad apicem, 28-36 x 6-9um, et cum pileatus apicali vel

4.5-7.5um longi.

Typus lectus caulibus Smilacis sp. (Liliaceae), Cameroon Highlands,

Malaysia, 7.v.1987. leg. C.V. Subramanian, sub numero S 118.

JAVONARXIA QUADRISEPTATA Subramanian sp. nov.

Mycelium superficial, composed of subhyaline to brown, septate hyphae.

Conidiophores simple, robust, erect, straight or bent, subeylindrical, brown,

thick-walled, septate, 80-180um tall, 7.5-10.5um wide, proliferating successively

on secession of the successively produced solitary conidia. Conidia acrogenous,

solitary, gangliar, brown, obclavate-fusiform to fusiform, widest midway in the

lower half, truncate at the base, smooth-walled, smoothly rounded at the tip, 4-

septate, the second cell from the base usually the longest, followed by the cell

immediately above, the apical cell the shortest and usually the smallest, each

with an apical cap, 45-51 x 7-11 um, 4.5-6.0um wide at the truncate base. Lage-

niform proliferations thick-walled, dark coloured when mature, 15-32 x 7-9um.

Type: on twigs of Smilax sp. (Liliaceae) Cameroon Highlands, Malay-

sia, 7.v.1987, Coll. C.V. Subramanian, No. S 1204.

Mycelium superficiale ex hyphis subhyalinis vel fuscis, septatis composi-

tum. Conidiophora simplicia, robusta, erecta, recta vel flexa, subcylindrica, fus-

ca, crassitunicata, septata, 80-180um alta, 7.5-10.3um lata, proliferata subinde

post secernens conidiae succesivae productae. Conidia acrogena, solitaria, gangli-

ca, fusca, obclavato-fusiformia, vel fusiformia, latissima ad median in dimidio in-

feriore, truncata ad basim, levia, rotundata ad apicem, 4-septata, 43-51 x

7-11um, 4.5-6.0um lata ad basim, cum pileatus apicalis. Proliferationes lageni-

formis crassitunicatis, atris, 15-32 X 7-9um.

Typus lectus in caulibus Smilacis sp. (Liliaceae), Cameroon Highlands,

Malaysia, 7.v.1987. leg. C.V. Subramanian sub numero S 120d.

REFERENCES

DIXON P.A., 1985 - Conidiogenesis in Padixonia bispora Subram. (Hyphomycetes). Bot.

J. Linn. Soc. 91: 203-217

SUBRAMANIAN C.V., 1972 - Padixonia, a new genus of Hyphomycetes. Curr. Sci. 41:

282-283

SUBRAMANIAN C.V., 1977 - Revisions of Hyphomycetes-l. Kavaka 5: 93-98.

SUBRAMANIAN C.V., 1991 - The genus Sporidesmium Link - A re-appraisal (in prepa-

ration).

Source : MNHN. Paris!

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (2): 125-133 125

LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE DRECHSLERA TERES:

ACTION IN VITRO DE MICROORGANISMES

ANTAGONISTES SUR LA CROISSANCE MYCELIENNE

ET LA GERMINATION

M. MOSTAFA, G. BARRAULT et L. ALBERTINI

Laboratoire d'Ingénierie Agronomique, Ecole Nationale

Supérieure Agronomique, 145 avenue de Muret,

31075 Toulouse Cedex, France.

RÉSUMÉ - Cette étude a trait à l'activité antagonist de microorganismes fongiques et

bactériens sur les deux séquences biologiques majeures de Drechslera reres (croissance et

sporulation). Les antagonistes les plus efficients sur la croissance mycélienne du pathogène

appartiennent au genre Trichoderma. L'inhibition de la morphogenése mycélienne est

fonction de la température et du pH. Les actinomycétes ainsi que Myrothecium verrucaria

exercent une activité antagoniste remarquable sur la germination conidienne liée à

l'émission de substances antibiotiques télétoxiques.

ABSTRACT - These investigations showed the antagonistic action of fungal and bacterial

microorganisms on the two major biological sequences of Drechslera teres. The antag-

onists that were the most efficient on mycelial growth belong to the genus Trichoderma.

The inhibition of mycelial morphogenesis was temperature and pH dependent. The out-

standing efficiency of antagonistic actinomycetes as well as of Myrothecium verrucaria on

conidial germination was related to the release of teletoxic antibiotic substances.

MOTS CLÉS : Lutte biologique, antagonisme, Drechslera teres, Hordeum vulgare.

INTRODUCTION

Les changements profonds dans les modes de production agricole peu-

vent être à l'origine, du moins en partie, de nombreux problèmes qui se posent

actuellement dans les agro-écosystèmes céréaliers tant en ce qui concerne la

structure et la fertilité des sols, que l'état sanitaire des cultures.

Ainsi, depuis une dizaine d'années environ, une maladie fongique causée

par Drechslera teres (Sacc.) Shoem. (= Helminthosporium teres Sacc.)

anamorphe de Pyrenophora teres Drechs. a pris soudainement un caractère

épidémique en France, en particulier dans les régions où l'orge est largement

représentée. Ce pathogène se présente sous deux formes, teres et maculata, qui

différent par la morphologie des symptômes qu'ils induisent sur l'hôte (Barrault,

1989).

Un certain nombre de matières actives appliquées en végétation,

possèdent un bon niveau d'efficacité à l'égard de la maladie à l'instar du

propiconazole et du prochloraze (Metcalfe & Jones, 1985; Maufras &

Chabanel, 1989). Cependant, la lutte chimique ne constitue pas une panacée

Source : MNHN, Paris!

126 M. MOSTAFA, G. BARRAULT et L. ALBERTINI

compte tenu des problèmes inhérents à l'environnement et à la possibilité d'ap-

parition de pathotypes résistants aux fongicides. En Nouvelle-Zélande, Sheridan

& Grbavac (1985) démontrent d'ailleurs la présence de souches de D. teres f.

teres résistantes au triadiménol.

Dans un tel contexte, la lutte contre ce pathogéne peut s'orienter vers le

développement de microorganismes antagonistes capables d'inhiber ses

différentes séquences biologiques (croissance, sporulation, conservation).

Les premiers travaux relatifs à cette thématique de recherche ont été

menés dans notre laboratoire (Al-Ali et al., 1979). Ils s'inscrivent dans le cadre

de la mise au point d'une méthode de lutte biologique fondée sur les antagonis-

mes fongiques et/ou bactériens, nécessitant l'application d'une démarche

méthodologique dont les étapes ont été définies par Sy et al. (1978). La première

de ces étapes consiste à rechercher, isoler, et expérimenter in vitro des germes

qui inhibent non seulement la croissance mycélienne du pathogène mais aussi la

germination conidienne. Le travail de AI-Ali et al. (1979) ne constitue qu'une

contribution a la première étape, il met cependant en exergue l'activité anta-

goniste de Trichoderma harzianum et d'un Actinomycete sur la croissance

mycélienne de D. teres f. maculata. i

Après un criblage permettant de dégager les antagonistes les plus perfor-

mants, l'objet de ce travail est de compléter cette première phase de recherche

en étudiant l'action des germes sélectionnés sur les deux séquences biologiques

prédominantes du pathogéne (croissance mycélienne et germination conidienne).

MATERIEL ET METHODES

MATERIEL BIOLOGIQUE

Le pathogéne

Les souches monoconidiennes issues de la forme teres (Rj, Ry) et de la

forme maculata (Ss, S;) sont conservées sur des fragments de paille sous la for-

me de sclérotes, selon la méthode décrite par Barrault (1989).

Les antagonistes

A l'issue d'un screening préliminaire (souches isolées à partir de pailles

d'orge et de terre humifiée), quatre champignons saprophytes (Trichoderma

sp/BBL124, Trichoderma viride[NRG-1; Trichoderma | pseudokoningii[ N69;

Myrothecium verrucaria[N 16-1) et deux actinomycétes (N51 et N105) ont retenu

notre attention en raison de leur activité antagoniste élevée.

MÉTHODOLOGIE

Confrontation directe pathogene-antagoniste.

Croissance mycélienne

Les inoculums du pathogéne et de l'antagoniste constitués par des dis-

ques (diamètre = 4 mm) sont placés à 20 mm de distance l'un de l'autre,

symétriquement par rapport au centre de la boîte de Petri contenant 30 ml de

milieu PCA (Pomme de terre 20g, carotte 20g, gélose l5g, eau distillée 1000

ml).

L'inhibition de la croissance mycélienne du pathogène (exprimée en sur-

face) par les antagonistes est évaluée en pourcentage selon la méthode décrite

Source : MNHN, Paris

LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE D. TERES 127

par Sy (1976). En ce qui concerne l'étude de l'influence de la température et du

pH sur la confrontation pathogéne-antagoniste, quatre températures (10, 18, 23

et 30°C) et cing valeurs de pli (3,7; 5,1; 6,1; 7,3; et 8,3) ont été testées.

Germination conidienne

- Préparation de la suspension conidienne du pathogène

Les conidies du pathogéne (Rj) sont issues d'une culture mise à incuber

4 23°C (à l'obscurité, pendant 4 j sur un milieu PCA) puis transférées pendant

8 j à la lumière (héméropériode de 12 h/jour). La suspension condienne (dans

de l'eau distillée stérile) est ajustée à une concentration égale à 105 conidies par

ml.

- Préparation de la suspension des antagonistes

Chaque suspension conidienne issue d'un antagoniste fongique (10%

conidies par ml) est réalisée à partir d'une culture âgée de 12 j.

Pour les actinomycétes, la suspension (composée d'environ 105 frag-

ments mycéliens par ml) est obtenue à partir d'une culture agée de 8 j sur un

milieu liquide (V, à 5%, pH = 6), aprés broyage du mycélium dans de l'eau

distillée stérile.

La confrontation directe est réalisée par l'adjonction à 0,1 ml de suspen-

sion d'antagoniste, de 0,l ml de suspension sporale du pathogene dans la cupule

d'une lame à concavité. Aprés 20 h d'incubation, en chambre humide, à 23^C,

nous avons déterminé: le taux d'inhibition de la germination (IG. %), l'indice

théorique de colonisation (LT.C.) et le taux de réduction de l'LT.C. du

pathogéne, selon la méthode de Sy (1987).

- Confrontation indirecte pathogène-antagoniste

Les antagonistes sont cultivés en milieu liquide statique (V à 5%) et les

filtrats bruts recueillis après 7, 14, 21 et 30 jours sont stérilisés à froid sur une

membrane “Millipore” (0,21).

Chaque filtrat est ensuite incorporé stérilement (après ajustement du pH

à 6) dans le milieu de culture en surfusion du pathogène (P.C.A.), à raison de

25?». Le filtrat qui détermine, pour un antagoniste donné, l'inhibition maximale

du parasite est considéré comme solution mére. Les dilutions successives de la

solution mére de chaque antagoniste permettent d'établir une gamme de concen-

trations allant de 5 x 10? à 80 x 10? dans le milieu (V, à 5%, pH = 6) et de

comparer l'efficacité des antagonistes (détermination de la concentration qui in-

hibe à 50% la croissance mycélienne et/ou la germination conidienne (C.I. 50).

Dans tous les cas, les analyses statistiques sont effectuées après transfor-

mation en Arc sin y/%.

RÉSULTATS

Confrontation directe

- Croissance du pathogène

L'examen du Tableau I montre que Trichoderma sp/BRL124,

Trichoderma viride[ONRG-l et Trichoderma pseudokoningii[ N69 présentent l'ac-

tion antagoniste la plus nette à l'encontre des différentes souches de D. teres (in-

hibition comprise entre 74 et 92%) tandis que les actinomycètes et Myrothecium

verrucaria| N 16-1 sont les moins efficients (inhibition comprise entre 15 et 38%).

Source : MNHN, Paris:

128 M. MOSTAFA, G. BARRAULT et L. ALBERTINI

Tableau 1 - Action des antagonistes fongiques et bactériens sur Drechslera teres f. teres

(Ry, Ry) et D. teres f. maculata (Ss, Sg).Is (6) — taux d'inhibition de la croissan-

ce mycélienne (exprimée en surface). Milieu P.C.A., pH = 6,1, 0 = 23°C,

obscurité, incubation = 6j. X, Y, correspondent aux pourcentages transformes

Arc Sin y%

Table 1 - Action of fungal and bacterial antagonists on D. teres f. teres (Ry and R3) and

D. teres f. maculata (Ss and Sg): rate of inhibition (Is %) of the surface growth of

the parasite colonies. (PCA medium, pH = 6.1, 23°C, incubation in the dark for

6 days). X, Y, percentage transformed using angular arcsine.

Is (%) Moyenne

Antagonistes RI R3 $5 S8 [^ M

Trichoderma 81 86 84 92 85,8 68,135

sp./BRL124

Trichoderma 79 76 80 80 78,8 62,58" |

viride| NRG-1

Trichoderma 74 75 75 83 76,8 61,19

pseudokoningii| N69

Myrothecium 23 36 35 34 32 34,36€

verrucaria| N 16-1

Actinomycéte/N51 22 38 32 31 30,8 33,09€

Actinomycéte/N105 15 33 26 24 24,5 31,39€

Moyenne (%) 49 573 553 573 547

x 45,39 49,673 48,583 50,198

Les antagonistes les plus performants agissent essentiellement par

contact avec enveloppement du parasite. En effet, dans cette situation, l'inhibi-

tion de la croissance du pathogène est d'autant plus élevée que la vitesse de

croissance des antagonistes est grande. Les germes retenus semblent posséder un

spectre d'action suffisamment large pour exercer leur pouvoir antagoniste à l'en-

contre des formes teres et maculata du pathogéne.

L'examen de la Fig. 1A fait ressortir qu'à pH acide (3,7) Trichoderma

pseudokoningü[N69 et Trichoderma sp/BRL124 inhibent à 100% la croissance

du parasite. En revanche, cette valeur de pH, si elle permet à Trichoderma

viride[NRG-1 d'inhiber à 60% la croissance du pathogène, est défavorable à

l'expression antagoniste de Myrothecium verrucaria et des deux actinomycetes.

L'efficacité maximale des actinomycétes est obtenue pour la valeur de pH égale

à 7,3. Trichoderma viride[NRG-1 est le plus actif à pH 6,1 et Myrothecium

verrucaria a 5,1.

La Fig. IB montre que le pourcentage d’inhibition de la croissance

mycélienne du pathogéne par un antagoniste varie en foncüon de la

température. L'efficience maximale des germes se manifeste à la température de

30°C, excepté pour Trichoderma pseudokoningii[N69 et Trichoderma

sp/BRL124 pour lesquels les températures de 25°C et de 30°C déterminent un

pourcentage d'inhibition non significativement différent. À température basse

(10°C), si dans l’ensemble les antagonistes sont peu efficaces, on remarque ce-

pendant que Trichoderma viride/NRG-1 determine une réduction de la croissan-

ce mycélienne de l’ordre de 60%.

Source : MNHN, Paris

LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE D. TE! 129

IS%

100 4

EMprottecium verrucaria N6-1. |

À 7

M cünomyecte N51

{O Actinomyrete NIOS

so 4

E Trichoderma sp. /BRL 124

REI EI Trchoderma viride/NRO- I

39, i Trichoderma preudokoningii 69. |

20 —————

pH 37 pH SI pH Gl = pH 73 — pH B3

IS%

100 +

80 n

m B Myrothecium verrucaria /NTó-1

zm WM Actinonycete N51

B | 1 Acünomycete NI05

E Trichoderma sp. /BRL 124

ci 1 Trichoderma viride/NRG-1

30 S Trichoderma pseudokoningii /69

20 4

1e c 18 € ac xc

Fig. 1 - Pourcentage d'inhibition de la croissance (exprimée en surface) de Drechslera teres.

(R3) par les antagonistes en fonction: A, du pH, B, de la température (Milieu

P.C.A; pH — 6,1; incubation — 5 j; obscurité).

Fig. | - Percentage of inhibition (Is) of the surface growth of D. teres (strain Ry) by

Various antagonists in relation to: A: pH; B: temperature (P.C.A. medium,

incubation in the dark for 5 days).

Germination conidienne ( Tabl. 2)

Les deux actinomycétes (N51 et N105) et. Myrothecium verrucaria ont

une remarquable action antagoniste sur cette séquence biologique puisque la

germination des conidies est réduite à néant et que le taux de réduction de l'in-

dice théorique de colonisation est done de 100%.

Les autres germes, Trichoderma sp./BRL124, _ Trichoderma

pseudokoningii[N69 et Trichoderma viride/NRG-1 entrainent une inhibition par-

Source : MNHN, Paris

130 M. MOSTAFA, G. BARRAULT et L. ALBERTINI

tielle de la germination du parasite (respectivement de 88, 74 et 65%) avec

également une inhibition corrélative (r = 0,98) de l'longation du tube

germinatif (46, 30 et 20%) et un taux de réduction de l'indice théorique de colo-

nisation de 93,8, 81,9 et 72,3%.

Tableau 2 - Action de différents antagonistes sur la germination conidienne de D. teres

(Rj) (incubation = 20 h, t° = 23°C). (1) 1.G.% = taux d'inhibition de la

germination conidienne. (2) I.T.% = taux d‘inhibition de la croissance du tube

germinatif. (3) L'indice théorique de colonisation (I.T.C.) exprimé par rapport au

temoin est le produit du taux de germination et de la longueur moyenne du tube

germinatif de D. feres en présence de l'antagoniste considéré. (4) T.R.L.C.T. —

taux de réduction de l'indice théorique de colonisation.

Table 2 - Action of various antagonists on the conidial germination of D. teres (R3)

(incubation at 23°C for 20 h). (1) I.G.% = conidial germination inhibition rate.

(2) LT.% = germinative tube growth inhibition rate. (3) Theoretical colonization

index (LT.C.) expressed with respect of the control, it is the product of the

average germination rate and of the average length of the germinative tube of D.

teres in the presence of the antagonist. (4) T.R.I.C.T. = The rate of decrease in

the theoretical colonization index.

16.(%) | LT.(%) | imc. |TRICT

wame — Dempegrue Tes

Témoin - - 3800 >

Actinomycéte/N51 100 100 0 100

Actinomycéte/N 105 100 100 0 100

Trichoderma viride] NRG-1 65 20 1050 72,3

Myrothecium verrucaria] N76-1 100 100 0 100

Trichoderma pseudokoningii] N69 74 30 696,6 81,9

Trichoderma sp. BRL124 88 48 237,12 938

Confrontation indirecte ( Tabl. 3)

Les activites antifongiques des filtrats de culture de Myrothecium

verrucaria et de l'actinomycète NS1 sur la croissance de D. teres se révèlent être

les meilleures (C.I. 50 respectivement égale à 12 x 10? et 14 x 107). Les filtrats

de Trichoderma BseudOR ORI QI ES et de Trichoderma sp./BRL124 ont une

efficacité moyenne (52 x 10? et 4,6 x 10°); enfin ceux issus de Trichoderma

viride| N RG-l sont les moins efficients.

DISCUSSION

Cette étude in vitro montre l'efficacité d'un certain nombre d'antagonis-

tes fongiques et bactériens sur deux séquences biologiques essentielles du

pathogéne, a savoir, la croissance mycélienne et la germination conidienne.

Sur la croissance mycélienne, dans les conditions optimales de

développement du parasite, les antagonistes les plus periormants sont des

microorganismes dont l'action est essentiellement d'ordre physique, par contact,

avec enveloppement du pathogène. L'inhibition de la croissance du parasite est

corrélée positivement avec la vitesse de croissance des germes antagonistes ap-

partenant au genre Trichoderma. Parmi ceux-ci, on trouve Trichoderma viride

INRG-1 qui a déjà montré sa capacité à inhiber la croissance mycélienne de

Botrytis cinerea (Norng, 1979). En réalité, il semble que ces antagonistes agis-

sent également par émission de substances antifongiques si l'on en juge par les

résultats de la confrontation indirecte montrant que le filtrat de culture est sus-

Source : MNHN, Paris

LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE D. TERES 131

Tableau 3 - Taux d'inhibition de la croissance de D. teres (Ry) en fonction de plusieurs

concentrations de filtrats d'antagonistes fongiques et bactériens. Détermination de

la C.1.50. (Milicu Vg @ 5%, gélose, 1” = 23°C, obscurité, durée d'incubation 6

jours, pH = 6).

Table 3 - Percentage of inhibition of the growth surface of D. teres by various filtrates

concentrations of fungal and bacterial antagonists of D. teres. Determination of

days).

Antagonistes Concentration | % d'inhibition C.I. 50

des filtrats de la croissance

5 x 102 21

10 x 102 49

M. verrucaria| N76-1 30 x 102 83 12 x 107

50 x 10? 100

5x10? 17

10 x 102 45

Actinomycéte /N51 30 x 102 75 14 x 102

50 x 1022 95

10 x 102 10

30 x 102 18

Trichoderma sp.jBRL124 50 x 102 47 46 x 102

80 x 10? 75

10 x 102 14

30 x 102 35

T. pseudokoningü] N69. 50 x 102 52 52x10?

80 x 10? 82

10 x 102 14

30 x 10? 12

Trichoderma viride] NRG-1 50 x 10? 32 70 x 102

80 x 10? 65

ceptible d'inhiber de manice tangible la croissance du pathogène. Cependant,

cette activité antifongique est loin d'étre comparable à celle extériorisée par

Myrothecium verrucaria et les actinomycètes N51 et NIOS. L'efficience des

microorganismes sus-nommés est liée exclusivement a la biosynthése de substan-

ces télétoxiques qui perturbent la croissance du pathogène. Cette inhibition du

développement se matérialise par la présence de morphoses mycéliennes (fila-

ments hypertrophiés généralement hyperseptés et hyperramifiés). Ce phénomène

est décrit par AI-Ali et al. (1979) lors de la confrontation entre D. teres f.

maculata et un actinomycète (N19) et par Norng (1979) dans le binòme Botrytis

cinerea-Myrothecium verrucaria.

Le pouvoir antagoniste des germes sélectionnés (qu'ils agissent à distan-

ce ou par contact) semble suffisamment polyvalent pour s'exercer sur les deux

formes du pathogène. Ce résultat, s'il se confirme sur un grand nombre de sou-

ches issues de la f. reres ct de la f. maculata est loin d'être négligeable compte-

tenu que l'étude de l'action de certains fongicides sur la croissance et la

germination de D. teres montre unce sensibilité amoindrie de la f. maculata (non

publié).

antagonistes

nhibition de la croissance mycélienne d'un pathogène in vitro par des

apparait nettement dépendante non seulement de la température

Source : MNHN, Paris.

132 M. MOSTAFA, G. BARRAULT et L. ALBERTINI

mais également du pH (Norng, 1979; Van Den Boogert & Jager, 1984; Sy,

1987). En ce qui concerne la température, l'efficience maximale des antagonistes

s'exerce ici aux températures optimales et supra-optimales de D. teres (25° et

30°C).

Cette efficacité est liée au thermopréférendum de ces antagonistes

(Mostafa, 1982). Cependant Trichoderma viride[NRG-1 à une température de

10°C supraminimale pour le pathogène (Barrault, 1989), a un pouvoir anta-

goniste non négligeable. Dans la mesure où cette température est fréquente (en

hiver au cours de la journée ou même au printemps et en automne durant la

nuit) il est parfaitement convenable de considérer que cet antagoniste implanté à

la surface des pailles puisse juguler la croissance du parasite et donc diminuer

l'importance de l'inoculum primaire.

Outre la température dont nous venons de souligner le róle dans l'ex-

pression finale de l'antagonisme, le facteur pH exerce également une influence

non négligeable au cours des interactions antagonistes x parasites, in vitro. L'ef-

ficience remarquable de Trichoderma pseudokoningü[N69 et de Trichoderma

sp./BRL124, à pH 3,7 s'explique par l'interaction de deux facteurs:

+ une croissance optimale de ces antagonistes à pH trés acide (Mostafa,

1982),

+ un faible développement de D. reres à ce pH, l'optimum étant de 5 à 6

(Barrault, 1989). Nous retrouvons dans cette confrontation avec D. teres le

Caractère de l'activité des antagonistes fongiques efficaces à l'égard de

Pyricularia oryzae (Sy, 1987) ou de Helminthosporium turcicum (Mickala-

Doukaga et al., 1978) à savoir que les antagonistes s'expriment d'autant mieux

qu'ils trouvent des conditions de pH favorables à leur croissance.

L'activité des autres antagonistes fongiques, à l'instar de Trichoderma

viride[NRG-1 et de Mprothecium verrucaria est maximale également pour des

pH acides (cependant plus élevés que précédemment). Cependant la corrélation

existant entre la vitesse de croissance de l'antagoniste et l'activité antagoniste

n'est pas toujours vérifiee dans la mesure oü l'inhibition du pathogéne est liée à

l'existence de métabolites dont la production n'est pas nécessairement corrélée

positivement avec la croissance (ex: Myrothecium verrucaria).

Les deux actinomycètes antagonistes qui s'expriment par l'émission de

composés antibiotiques sont les plus efficients à un pH basique (ou voisin de la

neutralité). Ce sont des conditions généralement favorables à la croissance et à

la biosynthèse des métabolites chez les bactéries.

Le blocage du développement du parasite peut être occasionné par une

inhibition affectant soir l'émission et/ou l'élongation du tube germinatif, soit la

differenciation de l'appressorium. Nos résultats montrent la remarquable

efficacité des actinomycetes et de Myrothecium verrucaria sur cette séquence bio-

logique, puisqu'ils réduisent à néant l'émission du tube germinatif. D'ores et

déjà on peut entrevoir leur utilisation dans le cadre d’une lutte préventive dans

la mesure où leur innocuité à l'égard de l'hôte aura été prouvée.

Le présent travail ne constitue qu'une première étape dans la mise au

point d'une méthode de lutte biologique. Nous serons amenés à poursuivre no-

tre experimentation in vitro en étudiant l'action des antagonistes sur d'autres

séquences biologiques du pathogène à l'instar de la conservation qui est

polymorphe (“resting mycelium”, chlamydospores, périthéces, sclérotes).

Source : MNHN, Paris

LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE D. TERES 133

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Source : MNHN, Paris.

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INFLUENCE OF SOIL MANAGEMENT SYSTEMS ON THE

MICROFUNGAL COMMUNITIES OF POTATO FIELD

A.K. SHUKLA and R.R. MISHRA

Department of Botany, School of Life Sciences, North-Eastern

Hill University, Shillong - 793 014, India.

ABSTRACT - Soil microflora of three systems was estimated for two crop cycles. Maxi-

mum fungal propagules were recorded in valley land soil followed by terrace land and

slope land soils. Number of fungal propagules were higher in surface soil which decreased

with increasing soil depth, A total number of 26, 21 and 27 species of fungi were isolated

from valley land, terrace land and slope land respectively. Mucor spp., Fusarium spp., Pen-

icillium spp. and Trichoderma spp. were dominant fungi in all the three systems. Similarity

index of fungal species indicated that valley land was more similar to terrace land and dif-

fered markedly from slope land.

RESUME - Estimation de la microflore du sol de 3 systémes agricoles différents sur 2 cy-

cles de récolte, Le maximum de propagules fongiques est enregistré dans le sol de vallée, il

est suivi par les sols de culture en terrasse puis de versant. Le nombre de propagules est

plus élevé en surface et décroit avec la profonduer du sol prelevé. 26, 21 et 27 espèces de

champignons ont êté isolés respectivement des systèmes vallée, culture en terrasse et ver-

sant, Les Mucor, Fusarium, Penicillium et Trichoderma sont dominants dans les 3

systèmes. Des indices de similarité indiquent que le système vallée est plus proche de la

culture en terrasse et diffère fortement du système versant.

KEY WORDS : microfungal communities, succession.

INTRODUCTION

Soil is impregnated with a variety of heterotrophic microorganisms. In

soil, fungi and bacteria are responsible for breakdown of organic matter and re-

lease of nutrients. They are also known to be responsible for nutrient transfor-

mation, particularly in the case of nitrogenous and phosphatic minerals. Fungi

are most important primary consumers of decomposable materials of soil. Soil

not only provides a very conductive habitat for fungi, but a major part of soil

microbial biomass is comprised of fungi. Clark & Paul (1970) reported about

twice as much fungal biomass as bacterial biomass. Soil microflora thus exerts

considerable influence on the soil fertility and plant growth. In agricultural soils,

ploughing, tillage, application of fertilizers and biocides and type of cultivation

affect the microorganisms. The plant species growing on the soil also exert very

important influence on the population and species composition of the soil fungi

(Mishra & Sharma, 1977).

A number of studies on soil microorganisms have been carried out on

forest and grassland soils (Mishra, 1966; Christensen, 1969; Lewis et al., 1971;

Widden, 1979). Microbiological studies of agricultural soil have received less at-

Source : MNHN, Paris

136 A.K. SHUKLA and R.R. MISHRA

tention (Domsch & Gams, 1972; Soderstrom et al., 1983). Present study deals

with the effect of different agricultural systems on the succession of fungal com-

munities in potato field soil for two crop cycles.

MATERIALS AND METHODS

The study was carried out at Upper Shillong (altitude 1706-1730m, lati-

tude 25°34” and longitude 91°56”E) in east Khasi Hills District of Meghalaya,

India. The climate of the area is subtropical and can be divided into four

marked seasons - (i) a summer season of heavy rainfall (May-September), (ii) a

transitional period of mild temperature and low rainfall (October-November),

(iii) a winter season (December-February), (iv) windy spring (March-April). An-

nual precipitation during the study period was 1570mm and the most rainfall

occurred between April and September. The average minimum and maximum

temperature of the study site was 1.0°C and 23°C respectively. The top soil is

Table 1. Moisture content (MC), pH, Organic carbon (C), total nitrogen (N), available

phosphorus (P) and exchangeable potassium (K) of soils of different agriculture

systems (Data are mean of three depths 10, 20 and 30cm for two years

1985-1986)

Tableau 1: Teneur en humidité (MC), pH, carbone (C), azote (N), phosphore (P) et potas-

sium (K) des sols des différents systèmes agricoles (moyenne des 3 profondeurs

pour les 2 années 1985-1986).

Sampling UPLAND TERRACE LAND |

date

Me | pH | c p [x [uc] pu] cl] n |e [xk

10 Sep. 31.23 4.58 | 1.55 | 0.15 | 0.01 | 0.02 | 38.44 4.78 | 2.90 | 0.17 | 0.03 | 0.03

20Sep. |3204 467 | 1.39 | 0.16 | 0.01 | 0.02 | 37.44 4.27 | 2.87 | 0:18 | 0.04 | 0.04

30 Sep. | 28.49 4.71 | 1:39 | 0.16 | 0.02 | 0.03 | 35.24 4.52 | 2:88 | 0.18 | 0.04 | 0.05

10 Oct. 30.5] 4.71 | 0.92 | 0.16 | 0.02 | 0.04 | 34.21) 4.70 | 2.68 | 0.19 | 0.05 | 0.05

20 Oct. 29.14 4.55 | 1.09 | 0.16 | 0.02 | 0.03 | 35.09 4.46 | 2.50 | 0.18 | 0.04 | 0.05

30 Oct. | 25.54 4.80 | 1.29 | 0:16 | 0.01 | 0.03 | 30.84 4.72 | 3.02 | 0.18 | 0.04 | 0.05

10 Nov. | 28.64 4.49 | 1.37 | 0.15 | 0.01 | 0.02 | 30.44 4:60 | 2.58 | 0.17 | 0.03 | 0.07 |

20 Nov. 24.41 4.45 | 1.56 | 0.14 | 0.01 | 0.02 | 30.74 4.68 | 2.44 | 0.17 | 0.03 | 0.04

L.S.D. 04.51] 0.46 | 0.94 | 0.05 | 0.007 0.004 03.84 0.51 | 1.94 | 0.06 | 0.004 0.00

(P: 0.05)

Sampling

date

me] pH | ¢ [in | [xk]

10 Sep. | 42.74 4.50 | 3.00 | 0.21 | 0.04 | 0.01

20 Sep. | 41.24 4.30 | 3.42 | 0.22 | 0.04 | 0.01

30 Sep. | 40.64 4.40 | 2.96 | 0:22 | 0.04 | 0.02

10 Oct. | 41.19 4.55 | 3.10 | 0.23 | 0.06 | 0.02

20 Oct. | 42.68 4.35 | 3.28 | 0.22 | 0.05 | 0.02

30 Oct. | 37.14 4.57 | 3.54 | 0.21 | 0.04 | 0.02 I

10 Nov. | 38.45 4.26 | 3.59 | 0.20 | 0.04 | 0.02

20 Nov. | 38.24 4.24 | 3.74 | 0.20 | 0.03 | 0.01

LS.D. |0521 0.47 | 2.89 | 0.05 | 0.004 0.00:

(P: 0.05)

Source - MNHN. Paris}

MICROFUNGAL COMMUNITIES 137

sandy loam (sand 72%, silt 10% and clay 18%). Physico-chemical character-

istics of different agricultural systems are given in table 1.

The soil samples were collected from potato fields under three different

management systems. In one type farmers adapt slash and burn type of shifting

cultivation mostly on the hillocks (slope land). The second type is done on

bench terraces built on hill slopes. Between the hillocks some plain lands are

found and on such lands permanent type of cultivation is done which is known

as valley land. Sampling was done at ten days interval for two crop cycles from

10th September, 1985 to 20th November, 1985 and 10th September, 1986 to

20th November, 1986. Soil samples were collected from three depths (0-10, 10-

20, and 20-30cm). The data correspond to mean of three replicate analysis of a

mixed sample collected from five random sites in each field.

Soil plate method was used to assess fungal populations. Martin's rose

bengal agar medium was used for the isolation of fungi (Johnson & Curl, 1972).

The inoculated agar plates were incubated at 25°C and colonies were counted

after five days. Similarity index was calculated by following Sorenson's (1948)

model.

DON

ENS x100

Similarity index (%) =

where A means total number of species in one system, B means total number of

species in second system and C means total number of species common in both

the systems.

Organic carbon, total nitrogen, available phosphorus and exchangeable

potassium were determined by the Walkley & Black’s method (1934), semi-mi-

cro Kjeldahl method (Allen, 1974), sulphomolybdic acid method and flame pho-

tometer method (Jackson, 1973) respectively. pH was measured in soil and in

water mixture (1:5) using an electrical pH meter. Moisture content was assessed

by oven dry method at 105°C. Statistical analysis of data was done by perform-

ing Lattice Square Design (LSD), which determines the significance of apparent

difference in number of fungal propagules among soils from the different sys-

tems, with soil depth, and the significant changes in soil physico-chemical prop-

erties.

RESULTS AND DISCUSSION

Temporal and depthwise variation in fungal population of soils of three

systems is given in Figure 1. The numbers of fungal propagules per gram dry

soil were maximum in valley land soil and minimum in slope land soil. In depth

wise studies fungal population was always highest in surface soil and decreased

along with soil depth. In all the three systems highest fungal population was

found in October, which was followed by a sharp decline (Fig. 1).

Decrease in fungal population along soil depth confirms the findings of

Soderstrom (1975), Bisset & Parkinson (1979), Deka & Mishra (1984). Surface

soil is usually provided with high organic matter content which in presence of

adequate moisture supply is acted upon by microorganisms to decompose the

complex organic residues into simpler forms, hence the microorganisms are

higher on surface layer of the soil (Mishra & Kanaujia, 1972; Acea & Carbal-

las, 1985). Generally, fungi found in deeper layer are slow growing due to una-

vailability of mineral nutrients and compaction of soil along depth (Saxena &

Sarbhoy, 1963; Mishra, 1966; Dkhar, 1983). In the month of October at the

Source : MNHN, Paris

138 A.K. SHUKLA and R.R. MISHRA

SLOPE LAND

400 L5D:6.01 Tiso: 3.00 o—o 0—10cm

P:0.05 P:0.05 à—à 10—20cm

e—+20—-30cm

20 L

o 1 L L 1 L E 1 4 L L 1 Er

TERRACE LAND

<0P LsD:3.52 FLS0:3.70

P:0.05 P:0.05

VALLEY LAND

FUNGAL PROPAGULES 3'DRY SOILX 10°

^0r Lsp:3.61 F LSD:

:3. LSD:3.81

P:0,05 Sen

e i ie LÉ RETE VICE VR]

107 20; z

% #9 306 %o 2% 3% 7% 2%) 1% 2% 306 %o 2% 03% DA, 2%

1985 1986

SAMPLING DATES

Fig. 1. - Number of fungi (fungal propagules) in different agricultural systems of potato

field soil.

Fig. 1. - Nombre de champignons (propagules) dans différents systèmes agricoles de sol de

culture de pomme de terre.

middle age of plants, high fungal population in deeper layer may be due to pos-

sible increase in root exudation (Rovira, 1956; Hassink et al., 1991). The maxi-

mum number of fungal propagules in valley land soil might be due to high con-

centration of organic carbon, nitrogen, phosphorus and potassium as compared

to terrace and slope lands (Shukla et al., 1989).

A total number of 26 species were isolated from valley land soil. Absidia

glauca, Rhizopus oryzae and Emmonsiella capsulata were isolated only from the

surface layer (0-10cm) of soil, while Alternaria alternata anì Phoma sp. were

isolated only from the middle layer (10-20cm). Monilia sp., Penicillium funiculo-

sum and Trichoderma harzianum were isolated only from 20-30cm depth soil.

Fusarium sp., Mucor hiemalis, M. racemosus, P. brevicompactum, P. chrysoge-

num and T. viride were common at all the three depths of valley land soil (Table

2).

Twenty one species were isolated from terrace land soil. A. alternata,

Humicola fuscoatra and P. fellutanum were restricted only to surface (0-10cm)

soil. Penicillium canescens and Pythium sp. were isolated only from 20-30cm

Source : MNHN, ol

MICROFUNGAL COMMUNITIES 139

depth soil. Aspergillus flavus, Fusarium poae, M. hiemalis, M. plumbeus, M. ra-

cemosus, P. chrysogenum, P. brevicompactum and T. viride were common fungi

in all the three depths of terrace land soil (Table 3).

Table 2. - Fungal species per gram dry soil x 102 (mean of collection in respective months)

at different depths for two crop cycles (1985-1986) in valley land soil.

Tableau 2. - Espèces fongiques par gramme de sol sec (x 102) aux différentes profondeurs

et pour 2 cycles de récolte (1985-1986) en sol de vallée.

[ | (030sep) | (0300) | (10-20 Nov)

[ Fungi 10cm | 20cm | 30cm | 10cm | 20cm | 30cm | 10cm | 20cm | 30cm

Absidia glauca Hagem ra | e wer ior ie oed tg

Alternaria alternata (Fr.) Keissler ES} EE zi da s

Aspergillus clutaceus Berk. & Curt. pales ide a

Aspergillus flavus Link: Fries aa ea os

Aspergillus niger V. Tiegh. dea a

Emmonsiella copsulata Kwon-Chung is IAN eee le | oll

Fusarium oxysporum Schlecht em. Sny. &

Hans. exi ene | E 30

Fusarium solani (Mart.) Sacc- - - 12 . ss 2.0 cd

Monilia sp su cw err SI a ere E

Mortierella minutissima V. Tiegh. Anale

Mucor circinelloides V. Tiegh e quA eer Ps pea c ee ren

Mucor hiemalis Wehmer 33 | 36 | 21 | aa | ao] 33 |: | 50 | 52

Mucor plumbeus Bonord. 22 | as | 40 | 39 | 71 | 29 | se | 21 | 24

Mucor racemosus Fres. 76 | 49 | 53 | i69 | s7 | 34 | 40 | s7 | 24

Penicillium brevicompactum Dierckx 33 e ee peste ala aae

Penicillium chrysogenum Thom 927 | as | ao |22|64| 63] | 4a | an

Penicillium fellutanum Biourge gta E : es pe

Penicillium funiculosum Thom i 19 s :

Phoma sp. ii m

Rhizopus oryzae Went & Prinsen 3 + i cs T

Trichoderma harzionum Rifai E 2535 : Ja

Trichoderma viride (Pers.) Gray 43 | sz | 32 | an RG RS

Sterile white 23 | 62 | 22 | 36 | ss | 76 | sa | aa | 30

Sterile yellow 32 | 32 | 25 | as | 22 | 2 | 40 | 23 | 2a

Twenty seven species were isolated from slope land soil. Arthrobotrys ar-

throbotryoides, Oidiodendron echinulatum, P. canescens, P. citrinum and Phoma

sp. were isolated only from middle layer (10-20cm) of soil, while Rhizopus ory-

zae, T. koningii and Verticillium chlamydosporum were isolated only from

20-30cm depth soil. Aspergillus flavus, M. hiemalis, M. plumbeus, M. racemo-

sus, F. oxysporum, P. chrysogenum, P. brevicompactum and T. viride were com-

mon in all the three depths (Table 4).

The effect of temperature and moisture could not be separated for Absi-

dia corymbifera, H. fuscoatra and Pythium sp. in terrace land where combined

temperature and moisture were high. Absidia glauca, Aspergillus alutaceus and

Emmonsiella capsulata appeared to be adapted to high moisture content (Ba-

ruah, 1983) and were found in the valley land. Trichoderma koningii appeared

in the last phase of the study when both temperature and moisture were low.

Dowding & Widden (1974) concluded that pH, temperature and moisture were

the most important factors affecting the composition of mycoflora over 21 arctic

and alpine tundra sites. The genus Aspergillus is extremely common in subtrop-

ical soils (Saxena & Sarbhoy, 1963). Verticillium chlamydosporum and Verticil-

lium sp. had a very restricted distribution and were isolated twice only in slope

and terrace land, showed an extremely aggregated pattern of distribution. Spe-

cies with high colonization densities usually had comparatively high communi-

ties. F. oxysporum, M. plumbeus, M. racemosus, P. brevicompactum, P. chry-

sogenum and T. viride were the common fungi in all the fields. Species of

Source : MNHN, Paris

140 A.K. SHUKLA and R.R. MISHRA

Mucor, Penicillium and Trichoderma seem to be tolerant to a wider range of en-

vironmental conditions. Mishra & Kanaujia (1973) isolated more diverse micro-

flora from cultivated soil as compared to grassland and forest soils and they

found that M. hiemalis, A. flavus, A. niger, P. chrysogenum and Cladosporium

herbarum were the most dominant fungi. Species of Penicillium, Fusarium, Mu-

cor and Trichoderma were also dominant fungi in maize (Dkhar, 1983) and rice

fields (Baruah, 1983) due to cold climate and acidic nature of soils of the region.

For a given community, it is generally observed that one or a few species are

numerically predominant and may strongly affect environmental conditions for

other species (Durall & Parkinson, 1991; Wardle & Parkinson, 1991). In the

present study, few species were regularly isolated at relatively high frequencies.

These species also had the most wide-spread and least aggregated distributions.

The low levels of aggregation observed for these species may reflect a relatively

broad or diverse niche space that may be the result of successful adaptation to

many dimensions in the system.

Table 3. - Fungal species per gram dry soil x 10? (mean of collection in respective months)

at different depths for two crop cycles (1985-1986) in terrace land soil.

Tableau 3. - Espèces fongiques par gramme de sol sec (x 10?) aux différentes profondeurs

et pour 2 cycles de récolte (1985-1986) en sol de culture en terrasse.

(10-30 Sep.) | (10-30 Oct) | (10-20 Nov.)

Che 10cm | 20cm | 306m | 10cm | 20cm | soem | 10cm | 20cm | 30cm

Alternaria alternata (Fr.) Keissier Ro dee cs pes

Aspergillus flavus Link: Fres HAE Wadon pania ilo

Aspergillus niger V. Tiegh. aS Ea ssa erm esu a

Fusarium oxysporum Schlecht em. Sny. &

Hans. s2 | 2s | 33 | 38 27

Fusarium poce (Peck) Wollenw. sia ae

Fusarium solani (Mart.) Sace. - - 31 - - 23 p

Humicola fuscoatra Traaen UR E] od et oc esse

Monile sp. > |21 | io | ae | 29 | 29 | 38 | 28 | 29

Mortierella minutissima V. Tiegh- DEAT E A E Da T

Mucor circenelloides V. Tiegh. SE esa (eves aaa

Mucor hiemalis Wehmer 31] = | 20 | ae | 10 | 22 B

Mucor mucedo Linnaeus: Fries 21 sr lac |

‘Mucor plumbeus Bonord 39 11 | 7% | a6 | 28 | 29 | 30 | 46

Mucor racemosus Fres. Da sex Ped ose ee en e ps

Penicillium brevicompactum Dierckx 32 22 | s9 | 79 | 29 | 29 | as | a7

Penicillium canescens Sopp È = ca sala e

Penicillium chrysogenum Thom £7 ss | s2 | a0 as | zo | zs

Penicilium fellutanum Biourge 21 - [si 47 | | zo

Phoma sp. 3E i rs;

Pythium sp. sala cmt he

Trichoderma harzianum Rifai MESS fie ine ica a de

Trichoderma viride (Pers.) Gray r |i |a fajfoj: |a| |a

Verticillium sp. Es Lese scalp eee Een cnm

Stene 22 | 13 | - | 29 | 27 | 29 z1 |19

The majority of the taxa showed change in quantity with soil depth. In

agriculture system, widely changes in community structure take place at the sur-

face layer. At greater depth, differences of distribution level or patterns are usu-

ally reversed according to the prevailing conditions (water, potential oxygen and

substrate availability) at various intervals after the respective operations

(Domsch, 1986). It is clear from the results that systems differed from one an-

other as far as soil nutrients are concerned. It has been demonstrated that the

occurrence of fungal species depend upon soil type, soil moisture, mineral nutri-

tion and temperature (VanVuurda & Schippers, 1980). The major elements es-

sential for germination of fungal propagules in soil are nitrogen, carbon and

iron (Benson & Baker, 1970; Kloepper et al., 1980). An estimation of the influ-

Source : MNHN, Paris

MICROFUNGAL COMMUNITIES 141

ence (positive or negative) of man's activities ranks the impact on some natural

soil properties in the following order, structure = aeration = pH = nutrient

status = toxic substances > depth of arable layer = water status organic

matter content = soil organisms > sorption capacity = humus quality (Sauer-

beck, 1985).

Table 4, - Fungal species per gram dry soil x 10? (mean of collection in respective months)

at different depths for two crop cycles (1985-1986) in slope land soil

Tableau 4. - Espèces fongiques par gramme de sol sec (x 10?) aux différentes profondeurs

et pour 2 cycles de récolte (1985-1986) en sol de versant.

[10-30 sep) | (10.30.00) - | a020 Nov)

Fungi | 10cm | 20cm | 30cm | 10cm | 20cm | 30cm [ 10cm | 20cm | 30cm.

Absidia corymbifera (Cohn) Sace. & Trower | 31 | 24 | 2s | 21 | sa | - | - | aa [as

AArthrobotryr arthrobotryoides (Ber) Lin

dau Ti ea e

Aspergillus flavus Link: Fries cce.) ees egt e

Mee alus nar Voip. > [os | = E 7|

Fusarium oxysporum Schlecht em. Sny. &

Haus, aa | us | sz | 87 | 24 | 3s È

Fusorium poce (Peck) Wollenw. dhai ip braaa ks x

Fusarium solari (Mart) Sace, 38 | ca | | B

Monila sp- fus [ar [Te lis la lie

Mortierella minutissima V. Tiegh. RTO LEE | ote

Mucor hiemalis Wehmer < J i fis |z |as | is |s |72 |a

Malar platha Baner. 53 | tos | ss | so | ior | 62 | 32 | 17 | 23

Mucor racemosus Fres. sa | 52 | 52 | as | «s | 29 | es | sz | 72

Oidiodendron echinulotum. Barron BP Freel Ps : :

Penicillium breeiconpactum Dierckx 2 | 26 | is | a o 19 | 32

Penicillum coneseens Sopp OUR 2 =

Petciliom chryronena Thom, sa et | ve | 25 | s2 as | as | zo

Penicillium citrinum Thom 32 2 | 5 È

Penicillium Jelluranum Biourge Silke ES = |a

Phoma sp RIE LEE AE

Rhizopus oryzae Went & Prinsen s : ca ES

Trichoderma hamatum (Bon.) Bain. Aa à sai

Ticino harsianar Rita ae] 7a | is | se | 2s] so | : [es | -

Trichoderma koningii Oudem. Aa ie aa ee |e

Trichoderma virda (Pers. Gray so Ts | so | ss |82 |22 |22 | is

Vertcilium sp. RAE AANE EA

Verticillium chiamydosporum Goddard aaa e

Sterile 34 i92 esas son [e| sess

Similarity index of fungal communities of different systems at different

depths was calculated (Table 5). In valley land, fungal species composition of 0-

10cm depth was similar to 10-20cm depth (68%) and 10-20cm was similar to

20-30cm depth (78%), while 0-10cm was less similar to 20-30cm depth (64%).

In terrace land there was no marked difference in fungal species composition of

the three depths or soils. In slope land soil 0-10cm depth was more similar to

20-30cm depth as compared to 10-20cm depth. When the fungal communities of

0-10cm depths of the three management systems were compared, it was found

that similarity index among three systems varied between 66 and 70%, while at

10-20cm depths it varied between 50 and 70% and in 20-30cm depths the vari-

ation was between 61 and 75%. Among all the three systems it was noted that

the species composition of the valley land was more similar to terrace land and

it differed markedly from slope land soils. Taking similarity index of the fungal

community as an index of homogeneity of habitat (Clarke & Christenson, 1981),

it may be suggested that soil up to a depth of 30cm was almost homogeneous.

However, same does not hold true when we look at the population of fungi (Fig.

1). It appears that during digging or ploughing the soil is mixed, thus the fungal

species are distributed almost uniformly upto the depth studied. Also it may be

inferred that most species were capable of colonizing the soil up to 30cm depth.

of soil.

Source : MNHN. Paris!

142 A.K. SHUKLA and R.R. MISHRA

Table 5. - Comparison of soil fungi using model of Sorenson (1948) for similarity index

(%) at different depths and in different systems.

Tableau 5. - Comparaison des champignons de sol en utilisant le modéle de Sorenson

(1948) pour les indices de similarité (%) aux différentes profondeurs et pour les

différents systèmes agricoles.

10cm 20cm oen

VL x TL = 68 VL x TL = 55 Va x TL = 75 VL x TL = 95

TL x SL = 70 TL x SL = 70 TL x SL = 72 TE Ce sani

VL x SL = 66 VL x SL = 55 VL x SL = 61 VL x SL = 67

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HAWKSWORTH D.L., 1991 - Frontiers in Mycology - Honorary and general

lectures from the Fourth International Mycological Congress,

Regensburg, Germany, 1990. Oxon, CAB International, X, 290p. ISBN

0-85198-698-6. £ 40.00

Les conférences générales prononcées lors du 4° congrès International

de Mycologie (Regensburg 1990) mettent en évidence les domaines trés divers

utilisés par la mycologie, ou dans lesquels la mycologie est impliquée. Elles sont

réparties, dans cet ouvrage, en 4 parties.

Biologie moléculaire et développement - K. ESSER (Molecular aspects of

ageing: facts and perspectives, pp. 3-25) propose, en s'appuyant sur les aspects

moléculaires du vieillissement (ici celui de Podospora anserina), un modéle pour

expliquer la formation du plasmide mitochondrial et son interdépendance avec

le génome nucléaire; ces études ont une implication dans les recherches sur le

cancer et en génie génétique. J.G.H. WESSELS (Fungal growth and

development: molecular perspective, pp. 27-48) souligne que l'étude moléculaire

de la croissance et du développement fongique pourrait entrainer de nouvelles

idées sur la facon dont les hyphes colonisent leur substrat par extension apicale,

et comment elles sont impliquées dans la formation de structure aériennes com-

me les carpophores. Enfin, G. WINKELMANN (Importance of siderophores in

fungal growth, sporulation and spore germination, pp. 49-65), analyse le róle

des sidérophores dans la croissance des champignons (mécanismes d'absorption

du Fe), dans la formation des conidies (expériences avec des mutants sans

sidérophores), dans la germination des spores pour laquelle la présence de cer-

tains sidérophores cellulaires paraît essentielle.

Evolution et phylogénie - H. KREISEL (Neoteny in the phylogeny of

Eumycota, pp. 69-83) illustre par des exemples parmi les Eumycota (rouilles ...),

le róle de l'écourtement du cycle de vie des champignons dans la phylogénie. Ce

rôle est interprété comme un cas de néoténie. J. POELT (Homologies and ana-

logies in the evolution of lichens, pp. 85-97) attire l'attention sur les caractéres

analogues et homologues nécessaires au développement des taxonomies, et

interpréte les thalles de lichens foliacés comme des structures excipulaires

formées précocement dans lesquelles le devéloppement de l'hyménium a été

retardé.

Importance dans les écosystèmes et pour l'homme - D.J. READ

(Mycorrhizas in ecosystems - Nature's response to the “Law of the Minimum’,

pp. 101-130) conclut que la dynamique des nutriments des écosystèmes terres-

tres peut être comprise en termes d'activité de leurs champignons

mycorhiziques, et que dans chaque système ceux-ci ont été sélectionnés pour

pourvoir à leur plantes hôtes l'accès aux éléments clés, qui, comme le prédisait

Liebig, limiterait à d'autres égards le développement des plantes. O. MALE

(The significance of mycology in Medicine, pp. 131-156) fait une synthèse sur la

fréquence, l'étiologie, les habitats naturels, la pathogenése, la nomenclature, les

aspects cliniques des champignons en médecine; il clarifie la distinction entre les

différentes mycoses. J. LACEY (Aerobiology and health: the role of airborne

fungal spores in respiratory disease, pp. 157-185) résume la détermination et le

Source : MNHN, Paris:

146 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

contrôle de la nature des troubles respiratoires, dépendant du type de spores

(pycotoxines produites), de la nature de l'exposition et de la réaction

immunologique du sujet. D.H.S. RICHARDSON (Lichens and man, pp.

187-210) aborde non seulement l'utilisation des lichens par l'homme mais aussi

l'effet anthropique sur les communautés lichéniques, l'effet détériorant des

lichens (oeuvres d'art, monuments ...) ou encore les relations lichens-pollution.

La conférence de H. FAULSTICH (Modified amatoxins and phallatoxins for

biochemical, biological and medical research, pp. 211-224) est amplifiée par cel-

le de J.D. MILLER (Mycology, mycologists and biotechnology, pp. 225-240)

qui incite les mycologues traditionnels à jouer un rôle plus grand dans les

intérêts industriels et biotechnologiques.

Conservation et éducation - Les deux dernières conférences, celle de E.

ARNOLDS (Mycologists and nature conservation, pp. 243-264) et celle de J.

WEBSTER (The teaching of mycology, pp. 265-278) sont étroitement liées. En

effet, c'est dans la mesure où la mycologie sera plus et mieux enseignée, que

l'intérêt du monde mycologique dans l'aménagement de la nature sera plus

évident, la constitution de listes rouges et leur intérét seront mieux perques.

Ainsi, nous pouvons mieux nous rendre compte que les frontières de la

mycologie sont loin d'étre fixes et imperméables, sans pour autant aller jusqu'à

dire que les champignons sont partout.

D. Lamy

CORLETT M., 199] - An annotated list of the published names in

Mycosphaerella and Sphaerella. Mycologia Memoir n° 18, 328 pages.

Berlin, Stuttgart, Cramer. 128 DM. ISBN 3-443-76008-2.

Mycosphaerella Johanson (1884) est un genre de Dothideaceae compre-

nant un grand nombre d'espèces. Il est caractérisé par des ascomes sans

paraphyses, le plus souvent uniloculaires, des asques ventrus, ovoides ou

oblongs allongés, quelque peu clavés. Les spores sont hyalines, fusiformes à

ovoides ou allongées.

Un résumé de la fluctuante histoire du nom Mycosphaerella Johanson et

de son ancétre Sphaerella (Fries) Rabenhorst (1856) a été publié par L. Holm

(1975) puis Corlett (1988).

Le nom de Sphaerella, bien qu'il ait été utilisé depuis longtemps par les

mycologues, doit être rejeté car il avait été attribué antérieurement à un groupe

d'algues (Sphaerella Sommerfelt, 1824). Pour compliquer encore les choses, un

autre Sphaerella a été proposé par Cesati et de Notaris en 1863. Il est mainte-

nant considéré comme synonyme de Mycosphaerella Johanson.

Cette confusion des genres explique qu'il existe actuellement plus de

1800 espéces de Mycosphaerella et Sphaerella dans la littérature.

L'ouvrage de Corlett qui nous est proposé ici, est une compilation des

noms d'espèces et de sous-espèces décrits à ce jour. L'auteur a disposé en ordre

alphabétique les noms des taxa suivis des noms d'auteur, du titre de la publica-

tion, de l’année puis des dimensions des ascomes (a), des asques (b) et

ascospores (c) en um, de l'hôte sur lequel le champignon a été isolé et du pays

d'origine, enfin du nom de l'anamorphe avec la référence afférente. Le

basionyme est donné pour les combinaisons ainsi que les synonymes. 29 de ces

derniers, désignés comme “current names”, correspondent aux noms couram-

ment acceptés.

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 147

Cette longue liste, qui occupe 226 pages, est suivie d'un index

alphabétique des hôtes puis des anamorphes. Elle a le mérite de mettre de l'or-

dre et de clarifier la position de taxa inclus dans des genres différents et dont la

nomenclature était particuliérement compliquée. Cet effort de clarification et de

précision sera particuliérement apprécié des taxonomistes.

M.F. Roquebert

VITTADINI C., 1991 - Monographia Tuberaceum. AUGUADRI A

LUCCHINI G., RIVA A., TESTA E., Tratufi del Cantone Ticino.

Funghi Ipogei, Societa Micologica “Carlo Benzoni”, Chiasso,

L'essentiel de l'ouvrage est consacré à la réimpression de Monographia

Tuberaceum de Carlo Vittadini, dans son texte latin, accompagnée d’une traduc-

tion intégrale, en italien, de Giacomo Lazzari. L'iconographie, fidèlement re-

produite est présentée dans sa version originelle, c'est-à-dire coloriée.

La seconde partie, Tartufi del Cantone Ticino, est plus particulièrement

réservée aux Hypogés du Tessin. On y trouve les travaux de O. Mattirolo, avec

le "Catalogo ragionato dei funghi ipogei” (in Contributi per lo studio della Flora

crittogama svizzera, Zurich 1935), et de C. Benzoni, ainsi que les observations

des A. sur les récoltes d'Hypogés du Tessin depuis la publication de C. Benzoni,

sous une forme détaillée, abondamment et très bien illustrée.

Très soigné, bien présenté, cet ouvrage devrait intéresser les spécialistes

en mettant à leur portée des travaux de base devenus difficilement consultables.

Il leur apportera, par ailleurs, une bonne mise au point sur la flore actuelle des

Hypogés du Tessin.

R. Cailleux

TULLOSS R.E., OVREBO C.L. & HALLING R.E., 1992 - Studies on

Amanita (Amanitaceae) from Andean Colombia. Mem. N.Y. Bot.

Gard., vol. 66: 1-46, 36 fig. (dessins au trait et phot. noir et blanc).

Sous une forme trés classique, cet opuscule présente des clés de

détermination et la description des treize espéces du genre Amanita récoltées jus-

qu'ici dans les Andes colombiennes, Venant pour la plupart dans les forêts à

Quercus humboldtii, Amanita arocheae et A. aureomonile poussant toutefois sous

Colombobalanus excelsa, ces amanites appartiennent aux sections Amanita et

Vaginatae du sous-genre Amanita ainsi qu'aux sections Lepidella, Phalloideae et

Validae du sous-genre Lepidella. Les Auteurs qui s‘appuyent sur de nombreux

travaux concernant le genre dans le monde entier, proposent comme nouvelles

neuf espèces et deux variétés d'A. flavoconia. Pour chaque taxon, l'analyse des

caractères macro- et microscopiques, détaillés et illustrés, sert de point de départ

à une discussion comparative avec des amanites voisines taxinomiquement mais

de répartition géographique différente. Cette étude trés sérieusement documentée

apporte une notable contribution à la connaissance des Basidiomycétes du

continent sud-américain.

J. Perreau

Societat Catalana de Micologia, Barcelona:

Butlleti, n° 13, juin 1990, 72 p., 1 pl. phot. col;

Bolets de Catalunya, IX Col.lecció, 1990, 50 pl. col. (N* 401-450), sous encart;

Fichas tecnicas, VIIa serie, juin 1990, n° 190 à 216, ill. au trait.

Source : MNHN, Paris:

148 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

Ces diverses publications témoignent du dynamisme que manifeste la Société

Mycologique de Catalogne et sont appréciées par tous ceux qui s'attachent à augmenter

sans cesse leur documentation, iconographique en particulier, sur les champignons.

Le Bulletin rend compte de la vie de l'association et porte à la connaissance des

adhérents de nombreuses informations utiles telles que parutions nouvelles en matière

d'ouvrages ou annonce de conférences, expositions, sorties et journées mycologiques.

Accompagnés de dessins au trait, parfois de photographies - en noir et blanc ou en cou-

leurs - et éventuellement de cartes, les articles présentes dans ce périodique semblent plus

volontiers consacrés aux Macromycétes, méme si les Myxomycètes, par exemple, font

l'objet d'une assez longue note dans le fascicule n* 13. Les thémes généralement retenus

vont de l'inventaire régional avec listes de récoltes commentées à des études descriptives de

genres et espéces: Lactocollybia, Lepiota, Tulostoma fimbriatum sont ainsi examinés dans le

numéro cité plus haut.

Sous le titre "Champignons de Catalogne" est édité un atlas constitué, sur des

feuillets indépendants, par des photographies en couleurs, de format 13 x 19, 5cm et d'une

qualité excellente. Chaque planche qui porte au dos la description de l'espéce figurée, en

représente carpophores ou sporocarpes à maturité, mais souvent aussi des spécimens jeu-

nes, des coupes, l'aspect de l'hyménophore pour les Basidiomycétes. Outre ces derniers

sont également concernés des Ascomycétes et des Myxomycétes.

Les fiches techniques, séparables, correspondent pour beaucoup à des planches

déjà publiées des "Bolets de Catalunya”. Elles comportent au recto les indications

taxinomiques, d'habitat et de récolte ainsi que l'énumération des caractéres macro- et mi-

croscopiques. Au verso sont dessinés la silhouette générale, les profils sporaux ou ceux

d'autres éléments morphologiques importants. Dans la série proposée en juin 1990, ces fi-

ches concernent des espèces appartenant aux genres Agrocybe, Amanita, ... Lactarius,

jusqu'à Xerocomus, en passant par Ceratiomyxa, Myrothecium ou Stilbella.

J, Perreau

Le 6ème Congrès International de Phytopathologie se tiendra au Palais

des Congrès de Montréal (Canada) du 28 juillet au 6 août 1993. (Doris Ruest,

Conference coordinator: 6th International Congress of Plant Pathology, Natio-

nal Research Council Canada, Ontario, KIA OR6 Canada).

The 6th International Congress of Plant Pathology will be held in

Montréal (Canada) from July 28 to August 6, 1993 (Doris Ruest, Conference

coordinator: 6th International Congress of Plant Pathology, National Research

Council Canada, Ontario, KIA OR6 Canada).

Commission paritaire 16-1-1986 - N° 58611 - Dépôt légal 2° trimestre 1992 - Imprimerie F. Paillart

_ Sortie des presses le 30 juin 1992-Imprimé en France

Éditeur : A.D.A.C. (Association des Amis des Cryptogames)

Président : R. Baudoin ; Secrétaire : D. Lamy

Trésorier : J. Dupont; Directeur de la publication : H. Causse

Source - MNHN. Paris

CRYPTOGAMIE

Diffusion de CRYPTOGAMIE

LE PERIODIQUE FRANGAIS

CONSACRE A LA CRYPTOGAMIE

CRYPTOGAMIE est un périodique édité

par l'A.D.A.C. (Association des Amis des

Cryptogames), dont le siége est au Labo-

ratoire de Cryptogamie du Muséum Na-

tional d'Histoire Naturelle. Les cher-

cheurs de tous pays y publient leurs

travaux en francais, allemand, anglais, es-

pagnol et italien, aprés accord des

Comites de Lecture constitués de

spécialistes de réputation internationale.

CRYPTOGAMIE propose trois sections:

Cryptogamie, Algologie

Cryptogamie, Mycologie

Cryptogamie, Bryologie-Lichénologie

Chaque section publie 4 numéros par an

(ürage: 450 exemplaires).

THE FRENCH JOURNAL

DEVOTED TO CRYPTOGAMY

CRYPTOGAMIE is a periodical

published by A.D.A.C. (Association des

Amis des Cryptogames), settled at Labo-

ratoire de Cryptogamie, Muséum National

d'Histoire Naturelle. Research workers

from the whole world publish their papers

in French, German, English, Spanish and

Italian, after acceptation by a selection

commettee that comprises experts of inter-

national renown.

CRYPTOGAMIE offers to its subscribers

three sections:

Cryptogamie, Algologie

Cryptogamie, Mycologie

Cryptogamie, Bryologie-Lichénologie

Each section publishes 4 numbers a year

(printing: 450 ex.).

E Europe Afrique — [Australie

Amérique E Asie

Ongine des 453 articles publiés de 1986 à 1991

E Europe HE Afrique

Amérique Asie

Répartition des articles publiés de 1986 à 1991 selon la langue

allen

Source : MNHN, Paris

SOMMAIRE

D. JOB and M. ARAGNO - Nutritional growth requirements. for

submerged cultures of the ee Tn Cenococcum

geophilum Fr. .. 79

J. MERCE - Variations altitudinales de la flore ios parasite dans i

sud de l'Espagne f Uredinales, PANNES Ustilaginales). As-

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Soutce : MNHN,