CRYPTOGAMIE

Mycologie

ANCIENNE REVUE DE MYCOLOGIE

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S'il n'appartient pas au Comité de Lecture. Bien qu'étant une revue de langue française,

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commandations aux auteurs sont publiées dans le fascicule 1 de chaque tome. Les auteurs

recevront 25 tirés-à-part gratuits, les exemplaires supplémentaires seront à leur charge.

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CRYPTOGAMIE comprend trois sections: Algologie, Bryologie-Lichénologie, Mycologie.

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CRYPTOGAMIE, Mycologie est indexé par Biological Abstracts, Current Contents,

Publications bibliographiques du CNRS (Pascal).

tsm e. oo. Source : MNHN, Paris

CRYPTOGAMIE

MYCOLOGIE

TOME 13 FASCICULE 3 1992

RÉSEAU DE MYCOLOGIE

27-28 janvier 1992

Institut Pasteur, Paris

G. DURRIEU et S. HAS;

- The fungi as biological control agents

against weeds (in French) . 149

J. DUPUY, J. LE BARS et P. LE BARS. - Mycotoxinogene

Fusarium strains: necessary study before their use in biolo,

gontrol (French) inaani 159

BUSCOT - Ecological and biological strategies of morels (in French). 171

C. GROSCLAUDE - Decay caused by wood destroying fungi on

London plane (in French) sss... 181

J. LE BARS et P. LE BARS - Fungal contamination of cured dried

sausagestorigin, developmental conditions, prevention (in French) — 193

- CHAUVET - Aquatic E Ee and RE in river

ecology (in French) ....... 7 203

A. BELLEMÈRE, M.C. JANEX-FAVRE, L.M. MELENDEZ-

HOWELL et A. PARGUEY-LEDUC - Ultrastructural diversi

of ascospore wall in some Eupyrenomycetes (in French) .. 215

J. PERREAU, J. LAMBOURDIERE et M.C. BOISSELIER - Mycena

rosea and the Mycena pura complex (in French) Sage AYE

Bibliography ......... 253

Bibliothèque Centrale Muséum

3 3001 00226849 7

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (3): 149-157 149

LES CHAMPIGNONS AGENTS DE LUTTE BIOLOGIQUE

CONTRE LES MAUVAISES HERBES

Guy DURRIEU* et Siraj HASAN**

* Laboratoire Botanique et forestier, Université Paul Sabatier -

Toulouse

** Biological Control Unit CSIRO - Montpellier

RÉSUMÉ - Les potentialités présentées par les champignons pathogènes comme agents de

lute contre les mauvaises herbes sont déjà largement prouvées. Le mode d'action des

espéces utilisées se situe essentiellement à deux niveaux: - afTaiblissement démographique

de la population, - baisse de la compétitivité individuelle vis-à-vis des plantes à protéger.

Cette lutte se développe actuellement sous deux formes stratégiques différentes, correspon-

dant en fait à des situations bien distinctes. - Ou bien on se trouve en présence d'une

plante introduite qui en raison de son origine exotique ne possède pas d'ennemis naturels

locaux et envahit des habitats très diversifiés. L'importation d'organismes pathogènes

choisis dans son aire d'origine, et se répandant naturellement, ramène le pouvoir concur-

renciel de la plante à un niveau acceptable. L'exemple type en est fourni par Puccinia

chondrillina contre Chondrilla juncea en Australie, Les expérimentations sur quelques au-

tres espèces sont d'autre part très avancées. - Ou bien il s'agit d'une plante souvent

autochtone, particuliérement favorisée par les méthodes culturales: l'application localisée

et massive d'un inoculum local permet sa destruction la oli elle est indésirable. Cela a

conduit au développement récent d'un certain nombre de "mycoherbicides” tel celui

constitué par des spores de Collerorrichum gloeosporoides fa. sp. aeschynomenes. L'avenir

devrait voir le développement de méthodes intégrées combinant l'intervention synergisante

de plusieurs agents biologiques, ou d'un agent biologique combiné avec un herbicide.

Quant à la production d'organismes modifiés par enginerie génétique (destruction des

phytoalexines, masquage des éliciteurs...) leur emploi reléve encore de la prospective à

long terme

ABSTRACT - Potentialities of plant parasitic fungi as biological control agents against

weeds are actually successfully proved. The efficacy of the involved species acts through

two main ways: weakening of the population demography, lowering of individual competi-

tivity against the cultivated plant. At present, biological control with fungi proceeds along

two different strategies according to two well distinct situations: - Either the weed to fight

is an introduced species that, according to its exotic origin, has no native ennemies and in-

vades a lot of different habitats. Introducing a pathogenic fungus, selected in its area of.

origin and able to widespread by itself, lowers the weed competitivity to a tolerable level.

A typical example is Puccinia chondrillina introduced in Australia to control Chondrilla

juncea. Tests on some other species are also very advanced. - Either the control concerns

a native weed which is expanding owing to tilling methods or to herbicide-resistance. A

massive inoculation with a host specific indigenous fungal pathogen allows to kill the weed

Where its presence is undesirable. This inundative method is achieving with formulation of

"mycoherbicides” such as the one based on spores of Colletotrichum gloeosporioides fa.

aeschynomenes. In the future integrated control methods combinating the synergic action

of several biological agents or of a biological agent with a chemical compound would be

improved. About the production of modified organisms by genetic engineering (changes

in host specificity by inhibition of phytoalexins or masking of elicitors) it is a matter of

longer prospect.

Source : MNHN, Paris

150 G. DURRIEU et S. HASAN

MOTS CLÉS : Lutte biologique, malherbologie, mycoherbicides.

INTRODUCTION

Les nuisances provoquées par la prösence de plantes adventices provien-

nent essentiellement des effets de compétition exercés au détriment des cultures

ou de la végétation jugée utile. Il s'agit donc de supprimer ou de renverser ce

pouvoir de compétition à l'avantage de la plante à protéger. Pendant trés long-

lemps les agriculteurs se sont trouves relativement désarmés devant les mauvai-

ses herbes. Les moyens mis en ocuvre etaient le tri des semences et, pendant la

période de végétation, l'arrachage et le sarclage.

Ce n'est qu'au début des années 1950 que la lutte chimique par les

herbicides a fait son apparition. Depuis, son développement a été tel qu'aujour-

d'hui les produits de desherbage représentent la plus grosse part de la produc-

tion phytosanitaire et le premier chapitre budgétaire des agriculteurs pour la

défense de leurs cultures. A l'élévation des coüts de production viennent s’ajou-

ter d'autres inconvénients:

- D'abord la phytotoxicité: si les produits mis au point ont fait de très

larges progrès du point de vue sécurité d'emploi, leur utilisation reste toujours

relativement délicate, on peut vite atteindre les doses toxiques pour la culture.

La modification de la flore représente aussi un problème important, certaines

adventices ont été tres facilement détruites par les herbicides, au point même

qu'il est des espèces que l'on peut presque considérer comme éradiquées: le

Bleuet (Centaurea cyanus) en est un des exemples les plus “visibles”.

En revanche d'autres plantes plus résistantes ont pris les places laissées

vacantes et la flore des adventices des grandes cultures n'est plus du tout la

méme qu'il y a moins d'un demi-siècle, Il est donc nécessaire d'ajuster l'arsenal

chimique disponible contre ces nouveaux envahisseurs.

Plus grave, on constate l'apparition de génotypes résistants chez des

espèces de plus en plus nombreuses, ils peuvent supporter des concentrations 5

ou 6 fois plus élevées que les types sauvages. La premiére observation semble

concerner Senecio vulgaris (Ryan, 1970), mais le nombre d'espèces concernées

doit aujourd'hui largement dépasser la cinquantaine (Holt & Le Baron, 1989;

lioh & Matsunaka, 1990; De Prado et al, 1989). L'une des méthodes

envisagées pour combattre cette adaptation paraît inquiétante. Il s'agit de

sélectionner des cultivars hautement résistants à l'herbicide (Shah, 1986), des

tolérances à des doses 1000 fois supérieures aux concentrations habituelles ont

ete obtenues. Ainsi l'utilisation massive du produit éviterait toute adaptation.

Outre le fait que la chose n'est pas du tout certaine en raison des décroissances

de doses possibles sur les bordures, on peut poser la question du devenir des

résidus dans l'environnement. Vient évidemment s'ajouter l'aspect économique

de la maitrise des productions de semences par un petit nombre d'entreprises

phytosanitaires et l'augmentation du coût de production intolérable pour les

pays les moins développés.

3 Il parait donc indispensable de rechercher de nouvelles solutions, la lutte

biologique est une des possibilités. Même si l’action des antagonistes naturels ne

détruit pas complétement la mauvaise herbe, elle peut ramener les effets de

celle-ci à un niveau économiquement tolérable.

L'action parasitaire d'un champignon peut bien souvent par son action

depressive réaliser cette opération. Par exemple, du blé cultivé pendant 2 mois

Source : MNHN, Paris

LUTTE CONTRE

LES MAUVAISES HERBES 151

(48)

Fig. 1: Biomasse produite (en %) par deux plantes cultivées en compétition, blé ( Triticum

aestivum) et Oxalis sp. A gauche, l'Oxalis est sain, à droite (pointille) il est

parasite par Puccinia oxalidis.

Fig. 1: Biomass production by two plants grown in competition, wheat (Triticum

eastivum) and Oxalis sp. Left: Oxalis healthy, right: Oxalis parasited by Puccinia

oxalidis

en concurrence avec un Oxalis produit une biomasse supérieure de près de 50%

si ce dernier est attaqué par sa rouille Puccinia oxalidis (fig. 1).

Les problèmes posés proviennent d'un déséquilibre dans le fonction-

nement des communautés végétales qui peuvent correspondre à deux types de

situations, qui d'ailleurs ne s'excluent pas:

* Soit on est en présence d'une plante indigéne (ou que l'on peut

considérer comme telle à la suite d'une naturalisation ancienne). Elle peut se

révéler très gênante dans certaines cultures, car les pratiques agricoles

appliquées lui sont particulièrement favorables, autant, sinon plus qu'à la plante

cultivée. L'action normale de ses ennemis naturels est insuffisante pour limiter

son extension et sa multiplication.

Ce sont le plus souvent des espèces annuelles dont le cycle végétatif se

calque sur celui de la plante cultivée comme:

- Stelleria media, Sherardia arvensis, Anagallis arvensis ou Senecio

vulgaris en horticulture,

- Matricaria inodora, Papaver rhaeas, Lolium perenne, Avena fatua dans

les céréales,

- Setaria glauca, Panicum miliaceum, Echinochloa crus-galli dans le

mais...

Plus rarement ce sont des plantes pérennes à rhizome profond comme

Cirsium arvense, Convolvulus arvensis ou Equisetum telmateia.

+ Soit il s’agit d'une plante exotique, introduite dans une région dont le

climat lui convient, sans parasites ou prédateurs locaux. Elle prend une exten-

sion considérable dans les peuplements naturels et aussi trés souvent dans les

cultures.

Source : MNHN. Paris

152 G. DURRIEU et S. HASAN

Si nous n'avons pas de cas dramatiques chez nous (Erigeron canadensis

ou plus récent, Senecio harveyanus ne sont pas trés génants), on a pu assister en

revanche dans d'autres régions du globe à des invasions massives. Lantana

camara ou Eichornia crassipes dans certaines zones tropicales, Hypericum

perforatum ou Chondrilla juncea en Australie et dans l'Ouest américain, posent

de sérieux problémes. A tel point que ce sont ces plantes là qui ont les

premieres fait l'objet de programmes de lutte biologique.

MÉTHODES INTRODUCTIVES

Les précurseurs en la matière sont les Néo-Zélandais qui, dès 1916,

lentérent de combattre le chardon Cirsium arvense avec la rouille Puccinia

punctiformis. Elle provoque des infections systémiques ayant pour effet de

stériliser et dessécher les pousses et d’epuiser les rhizomes. Son action paraît

donc particulièrement intéressante puisqu'elle agit à la fois sur l'appareil

végétatif, et réduit donc son pouvoir de compétition, et sur la multiplication:

suppression de la production de graine, élimination progressive des rhizomes.

Malheureusement ce tableau idéal est gaché du fait du faible taux d'in-

fections systémiques naturelles: l'installation du champignon doit se faire pour

cela au stade plantules d'où son efficacité limitée.

En revanche le modèle d'un programme réussi est celui de l'introduction

en Australie de Puccinia chondrillina pour lutter contre Chondrilla juncea. Cet-

te composée originaire de la région méditerranéenne, où elle est parfaitement

inoffensive grâce à la présence de divers ennemis naturels (Wapshere et al.,

1974, 1976), a envahi le Sud-Est australien avec un remarquable succès puisque

dans certains cas sa densité pouvait atteindre plusieurs centaines d'individus au

metre carre.

Des observations dans la région “méditerranéenne et des

expérimentations réalisées dans le Sud de la France (Hassan & Wapshere, 1973;

Wapshere et al., 1974, 1976) ont montré que la rouille Puccinia chondrillina

avait un effet dépressif trés marqué sur la population de la plante sous des

conditions climatiques tout à fait comparables à celle de l'Australie.

Après contrôle de sa stricte spécificité (Hasan, 1972), son introduction

en 1971 s'est révélée remarquablement réussie. En moins d'un an, à partir d'un

unique point d'introduction, le champignon s'était répandu sur toute l'aire

australienne de la plante (Hasan, 1974; Cullen et al., 1973). Réduisant de façon

drastique les populations de l'adventice, c'était des millions de dollars

d'économie pour les fermiers australiens (Cullen, 1985).

Cependant le probléme n'était pas entièrement résolu. Chondrilla juncea

est en effet une plante apomictique. Elle est présente en Australie sous trois for-

mes (clones) différentes: l'une à feuilles étroites était très largement dominante,

les deux autres à feuilles larges et feuilles intermédiaires plus rares. C'est la

premiére qui fut testée pour sa sensibilité au parasite, la souche de Puccinia in-

troduite se révéla non virulente pour les deux autres, d'où une évolution très ra-

pide dans la composition des populations de Chondrilla (tableau 1).

Il fut rapidement remédié au probléme par la sélection et l'importation

de deux autres souches du champignon (Hasan, 1984). L'invasion du

Chondrilla n'est plus qu'un mauvais souvenir (tableau 2).

Il semble qu'il en soit de même dans le Nord-Ouest américain (Adams

& Line, 1984; Supkoff et al., 1988) où l'installation du parasite a pu se réaliser

Source : MNHN, Paris

LUTTE CONTRE LES MAUVAISES HERBES 153

d'une façon différente. En effet dans ces régions en raison d'hivers relativement

rigoureux (moyenne de janvier au Washington - 5°C), ce sont les téliospores de

la rouille qui réalisent la phase de conservation, et c'est leur germination avec

production de basidiospores haploides qui assure le nouveau départ des infec-

tions. Ainsi les possibilités de recombinaisons génétiques ont permis au champi-

gnon de s'adapter aux divers clones de Chondrilla. Cela n'a pas été le cas en

Australie, ou en raison de la douceur des hivers, les urédospores ássurent le

maintien, uniquement par multiplication végétative. Tandis que les téliospores

sans période froide pour lever leur dormance, ne peuvent jouer qu'un role

négligeable si ce n’est nul. Les possibilités d'adaptation génétique de la rouille

sont donc inexistantes.

Tableau 1: Evolution dans la composition des populations australiennes de Chondrilla

juncea aprös la premišre introduction de Puccinia chondrillina. (E: type à feuilles

étroites, M: à feuilles intermédiaires, L: à feuilles larges)

Table 1: Changes in Australian populations of Chondrilla juncea after the first introduc-

tion of Puccinia chondrilla (E: narrow leaved biotype, M: intermediate, L: broad

leaved).

1968 1980

Types E M L M L

Stations

1 98% 0 2% 5 90 5

2 67% 30 3% 3 78 19

3 62% 24 14% à 80 i

4 51% 10 39% 8 10 82

Tableau 2: Déclin des densités de Chondrilla juncea dans 4 régions d'infestation massive

dans le S.E. de l'Australie (Hassan & Ayres, 1990)

Table 2: Decline in density of Chondrilla juncea in the 4 major infested regions of S.E.

Australia.

Canberra Wagga Mallee Tamworth

1971 233 pieds/m? 173 225 40

1975 59 51 87 0

1979 23 6 12 1

1983 6 3 27

1986 2 1 16 0

Un autre exemple de succès dans l'utilisation d'une rouille est celui de

l'introduction au Chili de Phragmidium violaceum pour combattre les ronces de

provenance européenne (Ochrens & Gonzales, 1977). Cette espèce vient d'être

aussi amenée en Australie.

Ainsi existe til actuellement toute une série de travaux, à des stades di-

vers d'avancement sur l'utilisation d'autres parasites, suivant des méthodes iden-

tiques:

- Puccinia barbeyi contre Asphodelus fistulosus (Australie)

- Uromyees heliotropii et Cercospora heliotropii-bocconi contte Helio-

tropium europeum (Australie)

- Cercosporella ageratina contre Eupatorium riparium (Hawai)

Source : MNHN, Paris

154 G. DURRIEU et S. HASAN

- Puccinia jaceae contre Centaurea diffusa (Amérique du Nord)

- Puccinia carduorum contre Carduus pyenocephalus et Carduus

tenuiflorus (Amérique du Nord et Australie)

METHODES INONDATIVES

Mais comme nous l'avons déjà indiqué, on peut se trouver confronté à

des problèmes radicalement différents: ceux posés par des plantes indigènes qui

deviennent envahissantes pour certaines cultures.

On peut imaginer d'essayer d'avoir recours à des parasites exotiques vi-

vants sur des espéces voisines, et pour lesquels ces nouveaux hótes ne

présenteraient pas de résistance.

Cette voie, à ma connaissance, n/a pas été explorée. Les recherches et

les applications se sont orientées vers une autre direction, par l'utilisation de

méthodes inondatives et ont débouché sur la mise au point de “mycoherbicides”.

La première tentative dans le domaine a été réalisée semble-t-il, par des

forestiers américains. Ils ont inoculé un parasite indigène: Ceratocystis

fagacearum pour éliminer des chênes de faible intérêt forestier qui concurrencent

le développement des peuplements de Pinus bankisiana dans le centre du

Minnesota (French & Schroeder, 1969). Cet agent biologique de

débroussaillement s'est révélé d'une efficacité supérieure aux agents chimiques

avec un coût d'application inférieur.

Mais les utilisations les plus spectaculaires, concernent la lutte contre les

adventices de culture. Il s’agit de répandre en grande quantité des suspensions

de spores d'un parasite hautement virulent et spécifique sur les cultures envahies

par la plante indésirable. Les infestations massives obtenues ont un effet for-

tement dépressif sur l'adventice. La première application mise au point a été ob-

tenue avec la Melanconiale Co/letotrichum gloeosporioides f. sp. aeschynomenes,

pour combattre Aeschynomene virginica. C'est une légumineuse envahissante

dans les champs de riz et de soja dans le bassin du Mississipi. Ce sont deux si-

tuations où l'emploi d'herbicides chimiques est délicate. Champs immergés

d'une part, proche parenté entre la culture et l'adventice de l'autre. la

pulvérisation de suspensions de spores sur les plantes à éliminer se révèle

particuliérement efficace: le taux de mortalité peut atteindre 98%, et se main-

tient a une moyenne de 85% (Daniel et al., 1973; Smith & Shaw, 1966).

Le champignon est commercialisé sous l'appellation ^Collego". Il s'agit

là d'une stratégie de lutte profondément différente de la première décrite, que

l'on pourrait qualifier de classique. Elle nécessite à priori des recherches

préliminaires sur le choix de l'agent moins complexes que dans le cas d'intro-

ductions. En revanche d'autres problémes se posent: culture du champignon

pour la production en masse des propagules, conservation de ces propagules,

spécification des agents dispersan', mouillant, support de la préparation com-

merciale. Ces derniers, par un choix judicieux peuvent augmenter trés no-

tablement l'efficacité du champignon. Amsellem et al. (1990), ont montré avec

Alternaria cassiae qu'il fallait atteindre un seuil d'au moins 20 conidies par

gouttelette d'eau pure pulvérisée pour obtenir des infections sur Cassia

obtusifolia. Si la suspension de spores est réalisée dans une émulsion huiles-

lecithine l'efficacité est maximale dès lors qu'il y a une spore par gouttelette.

Depuis le “Collego” un certain nombre d'autres champignons ont été mis

en oeuvre de la méme facon. On peut citer pour l'Amérique du Nord:

Source : MNHN, Paris.

LUTTE CONTRE LES MAUVAISES HERBES 155

- le “Devine”, souche de Phytophthora palmivora spécifique du Morrenia

odorata, Asclepiadacée lianescente qui envahit les vergers d'agrumes en Floride.

- le "Casst”, Alternaria cassiae dirigé contre Cassia sp., principalement

dans les cultures de coton.

-le “Luboa’, Colletotrichum gloeosporioides f. sp. cuscutae.

- le "Velgo”, Colletotrichum coccodes contre Abutilon theophrasti dans

les mais et soja (mais ne peut étre utilisé dans les champs de coton, celui-ci étant

un hote potentiel).

- Il faut également citer l'utilisation en Hollande du Basidiomycète

Chondrostereum purpureum pour enrayer la multiplication du Prunus serotina

90% des souches sont détruites aprés avoir été infectées par des éléments

mycéliens. Il ne parait pas y avoir de danger de diffusion du parasite vers les

vergers (Scheepens & Hoogerbruge, 1989).

PERSPECTIVES

Si de nombreuses recherches sont en cours pour tester les potentialités

de divers champignons, il faut aussi se rendre compte que tous les problémes ne

pourront être réglés par l'utilisation d'un seul antagoniste. Et la notion de lutte

intégrée, combinant l'action de plusieurs facteurs peut souvent étre d'une grande

efficacité. La combinaison peut d'ailleurs concerner d'autres champignons, des

insectes ou bactéries, ou des herbicides.

L'idée d'associer plusieurs champignons vient d'un certain nombre d'ob-

servations montrant que l'attaque d'un parasite, comme une rouille, peut ouvrir.

la voie à un nécrotrophe, comme Botrytis cinerea. Alors que les dégâts

occasionnés par le premier seront faibles, l'action du second peut conduire à la

destruction de la plante (voir Hasan & Ayres, 1990 pour divers cas).

L'utilisation simultanee d'un parasite et d'un herbicide chimique peut

donner aussi des résultats tout à fait intéressants. Par exemple pour Cassia

obtusifolia, Quimby & Boyette (1986) ont montré que Alternaria cassiae inoculé

au premier stade foliaire elimine 38% des plantes, tandis que l'Imazaquine dimi-

nue leur poids sec de 32% sans les tuer. Mais les deux agents combines

réduisent la population de 96%.

Enfin peut-on envisager de modifier les organismes utilisés pour

améliorer leur efficacité ? Les méthodes d'enginerie génétique permettent de pen-

ser à diverses voies possibles:

- augmenter le pouvoir pathogène des agents utilisés en leur permettant

de produire des enzymes détruisant les parois cellulaires ou neutralisant les

phytoalexines ou bien encore en leur conférant des propriétés toxinogenes.

- obtenir des souches d'organismes nécrotrophes rendues spécifiques

pour une plante donnée: Miller et al. (1987) ont produit ainsi des Sc/erotinia

sclerotiorum spécifiques.

Mais tout cela est encore essentiellement du domaine de la prospective

et fort loin du domaine d'application.

Source : MNHN. Paris

156 G. DURRIEU et S. HASAN

CONCLUSION

ll est certain que longtemps encore les agriculteurs auront besoin des

herbicides. La lutte biologique à elle seule n'est pas capable de résoudre tous les

problèmes de la malherbologie.

Mais il est tout aussi certain qu'elle mériterait plus de soutiens qu'elle

n'en reçoit actuellement. Les avantages retirés seraient multiples:

- solution de certains problèmes de résistance sans avoir à augmenter les

doses et donc moindres coûts pour l'agriculteur,

- respect accrü de l'environnement naturel et humain,

- diminution des doses de résidus dans l'alimentation.

Enfin il est certain aussi que dans le cas des espèces envahissantes, en

particulier dans les régions tropicales, la lutte biologique représente le seul

moyen efficace de venir à bout du probléme.

BIBLIOGRAPHIE

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parasitism of rush skeletonweed by Puccinia chondrillina. Phytopathology 74:

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MYCOTOXINOGENESE DE SOUCHES DE FUSARIUM:

CONTRAINTE EN VUE DE LEUR UTILISATION DANS LA

LUTTE BIOLOGIQUE

DUPUY Jacques, LE BARS Joseph et LE BARS Pierrette

Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie INRA, 180 Chemin de

Tournefeuille 31300 Toulouse.

RÉSUMÉ - Les souches de Fusarium dispersées dans l'environnement en vue de la lutte

biologique peuvent contaminer secondairement des denrées alimentaires. Or, différentes

mycotoxines peuvent être élaborées par de nombreuses espèces de ce genre. La

toxinogénèse de 73 souches, isolées de différentes denrées alimentaires (céréales, fruits et

lõgumes, ...) a êté éprouvée in vitro. La fusarochromanone ne fut détectée dans aucune

souche: la Zéaralénone et le déoxynivalénol furent produits respectivement par 59 et 12,3

% des isolats; malgré une fréquence significative (14 %), le risque potentiel de contami-

nation par les trichothécenes dermonecrosants apparait faible. Dans les cultures de 2 sou-

ches sélectionnées pour la lutte biologique, aucune des mycotoxines recherchées ne fut

détectée. Une telle vérification de la non-toxigenicité des souches fait intégralement partie

de la domestication des Micromycètes.

ABSTRACT - The spreading of Fusarium in the environment, for the biological control,

can lead to a secondary contamination of the foodstuffs. Furthermore, many species of

the genus Fusarium can elaborate different mycotoxins. The toxinogenesis of 73 strains,

isolated from various foodstuffs (cereals, fruits and vegetables, ...) has been tested in vitro

Fusarochromanone wasn't detected in any strains; zearalenone and deoxynivalenol were

produced respectively by 59 and 12,3 % of the isolates; despite a significative frequency

(14 %), the potentiel hazard of contamination with the skin necrotizing trichothecenes ap-

pears low. In the cultures of 2 strains selected for the biological control, none of those

mycotoxins were detected. This checking study concerning the non-toxigenicity of strains

is a required step to allow the domestication of Micromycetes.

MOTS CLÉS : Fusarium, mycotoxines, lutte biologique.

INTRODUCTION

Parmi les différentes utilisations des Micromycètes se développant ac-

tuellement, des expérimentations basées sur l'emploi de souches de Fusarium

non pathogènes permettent d'envisager ce procédé comme moyen de lutte biolo-

que contre les fusarioses des cultures maraichéres et florales (Alabouvette et

-, 1987)

Avant de disperser de telles souches dans l'environnement, il convient de

s'assurer non seulement qu'elles ne sont pas pathogènes pour l'homme ou les

animaux mais aussi qu'elles soient atoxinogènes sur les denrées alimentaires, no-

tamment les céréales (Le Bars, 1982), qu'elles peuvent contaminer dans un se-

cond temps. En effet, les espèces du genre Fusarium, largement réparties sur

Source : MNHN, Paris

160 J. DUPUY, J. LE BARS et P. LE BARS

tout le globe, sont connues pour leur capacité à infecter les produits agricoles en

particulier les grains (Nelson etal., 1981; Booth, 1984). La plupart des espèces

de Fusarium ont été rapportées comme productrices de mycotoxines (Marasas

et al., 1984; Chelkowsky, 1989), principalement la zearalénone (Mirocha et al.,

1971; Di Menna et al., 1987), les trichothécénes non macrocycliques (Pathre &

Mirocha, 1979; Ueno, 1983; Snyder, 1986; Grove, 1988) et plus récemment la

fusarochromanone (Pathre et al., 1986). Plusieurs autres toxines ont ete

caractérisées dans le genre Fusarium (Vesonder & Golinski, 1989).

Afin de limiter de tels risques dans la perspective du développement de

l'emploi de souches de Fusarium pour la lutte biologique, il a été recommande

par la Commission Nationale de Toxicologie que la non toxinogénicité de ces

souches soit examinée.

Pour effectuer le choix des toxines à rechercher, nous avons tenu comp-

ie tout d'abord des principales voies de biosynthése des mycotoxines (Steyn,

1980) reconnues comme contaminants naturels dans différentes régions du mon-

de, notamment en Europe (Gareis et al., 1989); d'autre part, il convenait de

prendre en compte la mycotoxinogenése effective des souches de Fusarium

isolées de grains de nos principales céréales.

En conséquence, après avoir mis au point un protocole expérimental

prenant en compte la diversité des conditions optimales de toxinogénése in vitro

et des méthodes d'analyse, nous avons examiné l'aptitude de l'ensemble de ces

souches, "domestiquées” et “sauvages”, à produire les mycotoxines retenues:

Zéaralénone, fusarochromanone, déoxynivalénol = et trichothécènes

dermonécrosants.

MATERIEL ET METHODES

A. Aspects mycologiques

Les souches de Fusarium (n = 73) provenaient de blé (38), mais (13),

tubercules (6), fruits et legumes (5), sol (2)... La plupart nous furent données par

l'Institut Technique des Céréales et Fourrages (Baziège, Hte Garonne) et l'Unité

de Phytopathologie de l'Université Catholique de Louvain; les autres furent

isolées de mais au laboratoire.

Les deux souches destinées à la lutte biologique étaient issues de travaux

effectués à l'Institut National de Recherche Agronomique (Alabouvette et al.,

1987) et développées par une entreprise.

B. Epreuve de toxinogénèse

D'après l'ensemble des données bibliographiques (Eugenio et al., 1970;

Greenhalgh et al., 1983; Xie et al., 1989) ainsi que des essais préalablement

cffectués dans notre laboratoire sur la zéaralénone (Z), la fusarochromanone

(F), le déoxynivalénol (D) et les trichothécénes dermonécrosants (TD), les condi-

lions optimales retenues pour l'épreuve de toxinogénése furent les suivantes:

- milieu solide granulaire: 30 g de riz (Uncle Ben's) autoclavé (120*C, 10

mn), teneur en eau 50%, en erlenmeyers de 100 ml;

. : 4 semaines d'incubation: 2 semaines à 28°C suivies d’l semaine a 20°C

& enfin | semaine à 12"C. Cette séquence de température favorisant respec-

tivement la production de (D), (F) et (Z) enfin des (TD). Deux séries

Source : MNHN, Paris

MYCOTOXINOGENESE DE SOUCHES DE FUSARIUM 161

d'erlenmeyers furent ensemencées pour tenir compte des 2 techniques d'extrac-

tion.

C. Techniques analytiques

Extraction: macération à 20°C pendant 48 heures avec 50 ml de l'un des

mélanges:

- méthanol - eau - ammoniaque (MeOH - H,0 - NH,OH) (90:

El;

- acétonitrile - eau (C4H5N - H,0) (90: 10) — E2.

Purification:

1. Partition liquide - liquide:

q q

+ pour la (F): (a) 14 ml F, additionné de 11 ml HO ( MeOH 5094),

(b) délipidation par l'isooctane (2 x 13 ml),

partition contre le chloroforme (CHCI,): 25 puis 10 ml,

Whatman),

(d) concentration à l'aide d'un évaporateur rotatif, reprise

quantitative par CHCl, évaporation a sec sous azote (N,),

(e) reprise finale par 10044 CHCI, - C,H3N (80: 20).

+ pour les (TDXa) 25 ml

(b) addition de 10 ml H;O à 5% KCI avant délipidation,

(d) comme pour (F),

2. Chromatographie d'absorption sur minicolonnes (Trucksess et al, 1984

modifiee par Eppley et al., 1986):

+ pour le (D}: (a) 20 ml E»,

{b) colonne conditionnée par 10 ml C;H;N - H,O (90: 10),

débit — 2 ml/mn, puis élution par 10 mi C,H;N - H,O

(90: 10),

sur filtre séparateur de phase,

(d) comme pour (F),

* pour la (Z): colonne précédente amenée à sec puis,

(b) élution par 40 ml CHCI, - C,H.OH (95: 5),

(d) déshydratation par passage sur filtre séparateur de phase,

(d) comme pour (F),

La séparation et la quantification furent réalisées par Chromatographie

Planaire Instrumentalisée sauf pour les (TD), révélés par leur activité

dermonécrosante sur l'animal.

Les dépôts (Sul) furent effectués sur des plaques de gel de silice 60 (20 x

20 Merck, n° 5553) à l'aide de micropipettes à usage unique (Microcaps,

Drummond). Du fait de la diversité des toxines recherchées et des métabolites

Source : MNHN, Paris:

162 J, DUPUY, J. LE BARS et P. LE BARS

fongiques pouvant interférer lors du dosage, nous avons cu recours à des techni-

ques de Chromatographie Planaire Multiséquentielle pour la séparation.

1. Migration Double Unidimensionnelle:

Phase éluante 1: toluene - acétate d’éthyle - acide formique (TEF) (60:

30: 10) pour la (F) et la (Z), à front perdu, puis séchage et développement dans

le même sens dans la phase éluante 2.

Phase éluante 2: butanol - acide acétique -eau (80: 20: 20) pour la (F)

ou chloroforme - éthanol (95: 5) pour la (Z

2. Migration Double Antidirectionnelle: pour le (D)

Les dépóts sont effectués à mi-hauteur de la plaque, puis soumis à un

développement dans la phase éluante 1 à front perdu. Après séchage et coupure

à 2cm au-dessus du Rf de la toxine, la plaque est retournée (180°) et placée

dans le mélange suivant: CHCl, - MeOH (90: 10) pour la séparation finale.

La quantification fut effectuée par spectrofluorodensitométrie (Shimadzu

CS 930) aprés avoir déterminé la longueur d'onde maximale (4 max) d'exci-

tation en fluorescence sans dérivation postchromatographique pour la (F) ou

après dérivation pour le (D) par pulvérisation de chlorure d'aluminium (AICI) à

20^, suivi d'un chauffage à 1107 pendant 10 mn (Kamimura et al., 1981). Pour

la (Z), la À max d'absorption aprés application de benzidine (Malaiyandi et al.,

1976) par pulvérisation fut déterminée.

Seuls les (TD) furent détectés par la voie biologique: Sul d'extrait purifié

et concentré (E; - TD - e) furent déposés sur la peau d'une jeune ratte (100 -

130g) Les éventuelles lésions basees sur l'action irritante et necrosante des

trichothécènes sont observées au 3ème et Sème jour (Le Bars & Le Bars, 1991).

RÉSULTATS

1. Méthode analytique

L'ensemble des techniques retenues (mélange de solvants, séquences de

développement, ..) ont permis la séparation des différentes mycotoxines

recherchées: cette dernière fut validée, pour chaque plaque, par la méthode des

ajouts. Les performances quantitatives de ces techniques sont résumées dans le

tableau 1.

2. Distribution du potentiel toxinogéne

La fusarochromanone ne fut détectée dans aucune des cultures. En ce

qui concerne les autres mycotoxines, la fréquence des souches productrices est

rapportée dans le tableau 2.

Aucune des mycotoxines eavisagées dans cette étude n'a pu être mise en

évidence dans les 2 souches sélectionnées pour la lutte biologique.

En ce qui concerne les autres souches, isolées de différentes denrées, la

zearalenone, le déoxynivalénol et les autres trichothecenes (TD) ont été détectés.

Certaines souches peuvent élaborer simultanément plusieurs toxines. Pour une

toxine donnée, l'intensité de la production est très variable en fonction des sou-

ches. La distribution du potentiel toxinogéne, pour la zéaralénone et le

déoxynivalénol, est représentée dans les figures 1 et 2 après constitution de clas-

ses selon une échelle logarithmique (Le Bars & Le Bars, 1991). Les productions

Source : MNHN, Paris

MYCOTOXINOGENESE DE SOUCHES DE FUSARIUM 163

fusarochromanone | déoxynivalénol | zéaralénone

longueur d'onde maximale

. d'excitation pour la fluorescence 385 nm 330 nm aprés

pluvérisaton

(A max, fluorescence) en

d'absorption Eo

(A max. absorption) Ste on

de benzidine

seuil de détection 0.1 ng 10 ng 25 ng

(detection limit)

zone de linéarité de la réponse

(relation quantité-aire) 0.1a6ng

(response linearity)

10à190ng | 25 à 500 ng

taux de recouvrement après

contamination volontaire 90 à 95% 83 à 91% 76 à 112%

(recovery rate)

limite de quantification (mg/kg = ppm) 0.005 0,25 0,075

(quantification limit)

Tableau 1 : Performances des techniques analytiques utilisées pour le dosage des

mycotoxines en Chromatographie Planaire Instrumentalisée

Table 1: Performances of the analytical methods used for the mycotoxins quantification

by Instrumental Thin Layer Chromatography.

maximales furent respectivement 14500 et 100ug'g pour la zéaralénone et le

déoxynivalénol.

Les extraits de 10 souches présentérent une irritation significative sur la

peau des animaux, mais sans provoquer une nécrose nette et durable; c'est à

dire que les concentrations estimées en unités dermonécrosantes (Le Bars & Le

Bars, 1991) correspondaient à des concentrations inférieures à 0,2 ppm en

équivalent dermonécrosant de la toxine T2.

DISCUSSION

La fusarochromanone provoque des malformations osseuses, la

dyschondroplasie tibiale (Lee et al., 1985), et est fortement suspectée de pouvoir

tératogène. Le test de toxinogénèse mis en oeuvre a été validé grâce à la culture

d'une souche productricell}, La technique de dosage mise au point présente un

(1) Aimablement fournie par MIROCHA C.J., Université de St Paul, Minnesota,

Source : MNHN, Paris.

164 J. DUPUY, J. LE BARS et P. LE BARS

Z+D Z«D«TD

Z D

Espèces

(26/31) (4/31) (3/31) (2/31) (2/31)

F.graminearum |84 13 9,7

6,5

(14/22) (4/22) (6/22) (1/22) (2/22)

F. culmorum 63,6 18 27

Autres (3/20) (1/20) (1/20) (0/20) (0/20)

F. roseum 15 5 5 ND

(43/73) (4/73)

Ensemble 59 5,5

Tableau 2 : Fréquence de souches de F'usarium élaborant une ou plusieurs mycotoxines (Z

— zéaralénone; D. — déoxynivalenol; TD. — trichothécènes dermonécrosants)

() : nombre de souches productrices sur le nombre de souches examinées,

Table 2: Frequency of Fusarium strains producing one or several mycotoxins ( Z =

zearalenone; D. — deoxynivalenol; TD — skin-necrotizing trichothecenes). ()

number of the toxinogenic strains on the number of studied strains.

laux de recouvrement supérieur et un seuil de détection équivalent à ceux

rapportés par Krogh et al. en 1989; quant à la limite de quantification, elle est

comparable à celle obtenue par Yu & Chu en 1991 lors du dosage par

immunochromatographie. Sous réserve de la représentativite des souches

examinées, il s'avère que cette toxine ne devrait pas constituer un problème aigu

en France. Ces observations corroborent les travaux de Wu et al. (1990); en ef-

fet, sur 62 souches de Fusarium représentant 9 espèces de différentes régions du

monde, seulement 3 isolats de F. eguiseti se sont avérés producteurs de

fusarochromanone.

La zéaralénone provoque chez les animaux et principalement le porc,

une perturbation de la fonction de reproduction. La technique analytique mise

en oeuvre permet d'atteindre une limite de quantification équivalente à celle

recommandée l'AFNOR et l'ISO (International Standard Organization) (Ano-

nyme, 1986), tout en s'affranchissant de l'emploi de la Chromatographie

Bidimensionnelle et permettant ainsi la séparation et le dosage de plusieurs ex-

traits sur la méme plaque. La fréquence des souches toxinogenes pour la

zearalénone dans les espèces F. graminearum et F. culmorum, les plus

fréquemment isolées à partir de céréales est importante (59%), elle est

équivalente à celle résultant d'un: étude similaire (60%) effectuée en 1978 (Le

Bars, 1982). On peut considérer que le tiers des souches, ayant produit plus de

250 ug g dans ces conditions expérimentales, peut conduire à une contamination

naturelle de céréales si les conditions de conservation permettent leur

développement.

Le déoxynivalénol, prénommé antérieurement ‘facteur de refus” ou

“vomitoxine” perturbe principalement la fonction digestive. Les modifications

apportées (traitement de l'extrait aprés élution) à la technique de dosage du

déoxynivalénol (Eppley et al., 1986; Romer, 1986) ont permis une plus grande

Source : MNHN. Paris

MYCOTOXINOGENESE DE SOUCHES DE FUSARIUM 165

Fréquence de souches productrices

42,1

154]

104

0,075 10 50 250 1250 6250 ug/g

Figure 1 : Répartition du potentiel toxinogène des souches de Fusarium pour la

zéaralénone.

Figure 1: Toxinogenic strength distribution of Fusariu strains for zearalenone

Fréquence de souches productrices

88,3

80]

AA 13 -

os 1 10 100 1000 ug/g

Figure 2 : Répartition du potentiel toxinogéne des souches de Fusarium pour le

déoxynivalénol

Figure 1: Toxigenic strength distribution of Fusarium strains for deoxynivalenol.

souplesse d'utilisation tout en conservant un taux de recouvrement et une limite

de quantification équivalents. Le dosage du déoxynivalénol et de la zéaralénone

à partir d'un méme extrait s'inscrit dans une démarche de multidétection, d'au-

tant plus que ces 2 mycotoxines sont souvent associées en tant que contaminant

naturel (Jemmali et al., 1978; Mirocha et al., 1976; Tanaka et al., 1988). Parmi

Source : MNHN. Paris

166 J. DUPLY, J. LE BARS et P. LE BARS

les souches productrices, seulement 6,5% peuvent être considérées comme

présentant un risque réel. Cette fréquence est analogue à celle rapportée par

Ramakrishna et al. (1989) dans leur étude sur 322 souches isolées de blé en

Inde.

La détection et la quantification des trichothécènes par des méthodes

physico-chimiques demeurant laborieuses (Gilbert, 1984; Scott, 1982; Scott &

Kanhere, 1986), une estimation semi-guantitative par le test. de lirritation

cutanée est validée par la relation dose-réponse entre la quantité de

trichothécènes et l'intensité des lésions sur la peau de l'animal (Chung et al.,

1974; Fairhurst et al., 1987; Hayes & Schiefer, 1979). En conséquence, cette

technique biologique permet de répondre à l'objectif fixé. Malgré une fréquence

non négligeable (14%) de souches productrices d'une ou plusieurs molécules de

cette famille, le risque de contamination des denrées à l'état naturel doit être très

limité compte tenu des faibles concentrations obtenues dans des conditions opti-

males de toxinogénése.

Les principales toxines recherchées peuvent étre élaborées par des sou-

ches appartenant à différentes espèces, ce qui est en accord avec les travaux

rapportés par Thrane (1989), il en résulte que la relation espèce-toxine est, com-

me dans le genre Penicillium, moins étroite que celle entre VAspergillus flavus et

les aflatoxines par exemple. En conséquence, la vérification de la non-

toxinogénicite d'une souche de Fusarium doit prendre en compte les principales

fusariotoxines, indépendamment de l'espèce.

ll apparaît logique que, pour des raisons de qualité et de sécurité ali-

mentaires, des souches fongiques mycotoxinogénes ne soient pas dispersées vo-

lontairement dans l'environnement. Mais cette disposition n'est pas prévue dans

le classement des microorganismes proposé par l'European Federation of

Biotechnology (Anonyme, 1985); cette liste provisoire et évolutive présente seu-

lement ‘les espèces microbienne communément reconnues comme pathogènes

pour l'Homme’ (AFNOR, 1990).

D'autre part, ce type d'utilisation (lutte biologique) de microorganismes

ne rentre pas non plus dans la classification de l'US - FDA concernant les

biotechnologies et les substances "généralement reconnues comme saines”

(GRAS: “generally recognized as safe”) (Mc Namara, 1987; Gibbs & Kahan,

1986).

En conséquence, il devient urgent que les experts toxicologues s'accor-

dent sur une stratégie, une méthodologie et des dispositions raisonnables,

spécifiques à l'utilisation de souches fongiques pour la lutte biologique. En effet,

autant est-il logique de ne pas disperser dans l'environnement des souches for-

tement productrices de mycotoxines connues, autant une trop grande prudence

condamnerait-elle toute innovation constituant une alternative à l'utilisation de

pesticides de synthèse, fortement combattue par ailleurs.

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STRATEGIES ECOLOGIOUES ET BIOLOGIOUES

DES MORILLES

François BUSCOT

Institut für Bodenbiologie, Bundesforschungsanstalt für

Landwirtschaft, Bundesallee 50, D 3300 Braunschweig (RFA)

RÉSUMÉ - Les morilles possédent deux stratégies écologiques. Elles s'implantent comme

organismes pionniers éphémères et saprophytes sur des sols récemment bouleversés. Dans

des écosystèmes stables elles s'établissent plus durablement et, grâce à une double asso-

ciation saprophytique et ectomycorrhizienne avec des plantes supérieures, fructifient du-

rant plusieurs années de suite à'la méme place. Les spores produites lors de cette phase

pérenne permettent la colonisation éphémère des sites perturbés. Les donnes biologiques

disponibles suggérent qu'au cours de sa phase pérenne le champignon augmenterait son

potentiel génétique en formant un mycélium hétérocaryotique.

ABSTRACT - Morels have two ecological strategies. They can establish ephemerally as

pioneers and saprophytes on recently disturbed soils. In stable ecosystems, they establish

and fructificate durably, as they contract a double, saprophytical and ectomycorrhizal as-

sociation with plants. The spores produced every year within this latter strategy allow the

ephemeral colonization of disturbed sites by the fungus. Actual biological informations

suggest that morels reinforce their genetical potential during the perenous phase by form-

ing a heterokaryotic mycelium

MOTS CLÉS : Morchella, adaptations écologiques, mycorhizes, saprophytisme, cycle bio-

logique.

La fructification des morilles est observée dans les conditions les plus di-

verses (Fourré, 1985). Celles-ci peuvent cependant être regroupées en deux

catégories, qui relévent de deux stratégies écologiques distinctes du champignon.

En faisant la synthése des faits connus cet article montre l'interdépendance qui

existe entre ces deux stratégies en zone tempérée, et dans quelle mesure les

caractéristiques. biologiques du champignon permettent cette remarquable

plasticité écologique.

Stratégie écologique “pionnière”

Cette première stratégie aboutit à des poussées parfois abondantes mais

toujours éphémères sur des sols récemment bouleversés par exemple à la suite

de feux de forêts (Kaul, 1975; Turnau, 1984), d'éruptions volcaniques

(Carpenter et al, 1987) ou de l'emploi de pesticides (Turnau, 1987) Les

poussées consécutives à l'apport d'un substrat exogène plus ou moins artificiel,

papier, colle, chiffon, marc de pomme ete., s'inscrivent également dans cette

Stratégie (Fourré, 1985).

Source : MNHN. Paris

BUSCOT

Le developpement de fructifications dans de telles conditions n'a pas été

étudié in situ. Il semble cependant qu'il résulte d'un mode de nutrition exclu-

sivement saprophytique. Cette hypothèse, corroborée par la capacité bien

connue du mycélium à une croissance saprophytique (Fron, 1905; Brock, 195

William et al., 1956; Gilbert, 1960; Litchfield, 1967; Impens, 1972; Kaul, 1977;

Sekharam et al., 1978; Kone, 1979), a été confirmée expérimentalement par

l'obtention de fructifications dans des conditions saprophytiques et par ailleurs

semblables à celles qui, dans la nature, permettent des fructifications

“pionniéres” (Molliard, 1905; Costantin, 1936; Ower, 1982; Ower et al., 1986).

Ces derniers travaux ont en outre révélé que les ascocarpes se développent alors

aux dépens de sclérotes, qui, chez les morilles, s'edifient secondairement, lors-

qu'un mycélium primaire a épuisé les ressources du milieu en azote (Mayr,

1982). Sur des bases morphologiques, cet auteur a distingué deux types de

clérotes correspondant respectivement à des ascocarpes abortifs et à une forme

d'accumulation de réserves. Cette distinction a été confirmée par Buscot (1987.

19922), qui, en raison de leurs conditions respectives de formation, a nommé

ces deux types de selerotes "Early, Encrusting Sclerotia” (EES) et "Late,

Isolated, Sclerotia” (LIS). Les propriétés écophysiologiques respectives de ces

sclerotes confirment egalement que les EES sont assimilables a des primordium

d'ascocarpes, les LIS etant une forme d accumulation de réserve et de résistance

au froid (Buscot, 1992a).

Stratégie écologique pérenne

La seconde stratégie écologique des morilles aboutit à leur fructification

dans des écosystèmes stables. La production d’ascocarpes est alors peu abon-

dante, mais une placette donnée produit pendant plusieurs années (Buscot,

1987). Des travaux anciens ont révélé que le champignon est alors associé à des

rhizomes ou des racines de plantes supérieures (Robert, 1865; Roze, 1883). Des

observations récentes ont confirmé qu'en milieu forestier les ascocarpes sont

reliés par des cordons mycéliens à des agrégats mycéliens souterrains, formés

autour de racines conductrices (Buscot & Roux, 1987). L'étude écophysio-

logique in situ de ces systèmes à montré que l'association rhizofongigue est

contractée avant la fructification vernale, les ascocarpes se développant en utili-

sant les réserves accumulées dans les agregats mycéliens souterrains (Buscot,

1989). Parallèlement à leur contribution au développement de la fructification,

ces agrégats produisent également au printemps un front mycélien qui s'associe

à de jeunes racines déjà mycorhizées par d'autres espèces fongiques, et avec les-

quelles il forme lui-même des ectomycorhizes secondaires (Buscot & Kottke,

1990; Buscot, 1991).

Comme pour le cas de la stratégie “pionnière”, l'interprétation exhaustive

de cette seconde stratégie écologique repose partiellement sur des résultats

expérimentaux. Des analyses comparatives de mycosporines, molécules du

métabolisme secondaire utilisables comme marqueurs de différenciations pré-

reproductrices et reproductrices, ont montré que les agrégats mycéliens souter-

rains formés autour des racines conductrices sont la forme naturelle des LIS

(Buscot & Bernillon, 1991). Ces agrégats sont édifiés en été et constituent la seu-

le forme du champignon capable de survivre à l'hiver (Buscot, 1989, 1992a). Ils

générent au printemps à la fois les ascocarpes et l'association mycorhizienne qui

constitue le point de départ d'un nouveau cycle végétatif. Des expérimentations

en culture ont confirmé que le mycélium de morille est capable de contracter

deux types d'associations avec des racines d'épicea, de pin ou de chêne (Buscot,

1992). D'une part et à condition d'être associé à une bactérie du genre Bacillus

qui peut étre isolée à partir des ascospores, le mycélium de morille peut former

Source : MNHN, Paris

STRATEGIES ECOLOGIQUES ET BIOLOGIQUES DES MORILLES 173

des ectomycorhizes. D'autre part, le champignon peut former des LIS autour

de la partie ágée et conductrice des racines. Cette seconde association est

favorisée lorsque le mycélium a été précultivé sur un milieu pauvre et lorsque la

plante a été préalablement mycorhizée par un champignon tiers

ture saprotrophique.. Le champignon ne pénétre en cflet que les assises cellulai-

res secondaires et mortes des racines agées. Par ailleurs les LIS de morille pro-

duisent un lait (Buscot, 1992a) qui contient des exoenzymes lignolytiques

(Buscot non publié), et ils pourraient ainsi posséder la capacité de mobiliser le

carbone à partir de molécules complexes. Une telle aptitude a récemment ete

caractérisée chez des champignons ectomycorhiziens facultatifs (Haselwander et

al., 1990).

Rapport entre les deux stratégies

La morille possède donc deux stratégies écologiques distinctes. L'une,

dite pionniére, dans laquelle le champignon se comporte en organisme

saprophyte éphémère, capable de s'implanter transitoirement sur un milieu

récemment modifié, l'autre, dite pérenne, dans laquelle le champignon, contrac-

tant une double association avec les parties âgées et jeunes du système racinaire

d'arbres, peut se maintenir durablement dans des écosystèmes stables, tout en

produisant réguliérement quelques ascocarpes selon un cycle biologique

bisannuel (Fig. 1). Plusieurs faits indiquent que sous les climats tempérés, ces

deux stratégies ne sont pas indépendantes.

Les morilles ne possédent pas les caractéristiques biologiques propres

aux organismes typiquement pionniers. En particulier, elles ne possedent pas de

propagules capables de latence dans le sol entre deux poussées pionnières. Non

seulement les ascospores de morille germent dés qu'elles entrent en contact avec

un substrat humide (Buscot, 1987), mais elles sont incapables de germer dans le

sol lorsqu'on les y inocule artificiellement en dehors de la période printanière de

leur dispersion naturelle (Schmidt, 1983). En outre, le mycélium de morille n'est

pas capable de résister au gel (Buscot, 1992a). La colonisation parfois mas

de sols récemment bouleversés devrait donc faire suite à un apport exogéne de

spores postérieur au bouleversement, ces spores germant au printemps à la

premiére pluie qui suit leur production. Cette hypothése est corroborée par le

qu'une étude attentive des rapports mentionnant des fructifications

pionniéres montre que celles-ci n'interviennent qu'après qu'au moins une saison

de végétation ait fait suite au bouleversement du sol (Furnau, 1984; Carpenter et

1987). Par ailleurs la sporulation des ascocarpes de morille est suffisamment

abondante (Falck, 1920) pour que les ascocarpes développés selon la stratégie

pérenne soient aptes à assurer cet apport exogéne.

D'une manière similaire, et encore qu'aucun auteur n'ait entrepris d'in-

vestigations dans ce sens, il apparait probable qu'au cours d'un épisode pion-

nier, un mycélium venant à s'associer à un appareil racinaire puisse poursuivre

son développement selon la stratégie pérenne. La figure 1 resume les deux

stratégies écologiques et leur imbr'cation.

Ce schéma global suppose que, dans la stratégie pionnière, le cycle bio-

logique du champignon soit également bisannuel. Dans les régions tempérées,

l'initiation et le développement des LIS sont de fait favorisés par des

lempératures élevées, qui correspondent à celles mesurées dans le sol en été

(Buscot, 1987, 1992a). La maturation des ascocarpes est elle-même corrélée au

réchauffement printanier (Delmas & Bunel, 1975; Buscot, 1989). Néanmoins,

des expérimentations ont montré que la fructification peut également. étre

déclenchée par des facteurs autres que thermiques, tel qu'un lessivage (Ower,

Source : MNHN, Paris

BUSCOT

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Source : MNHN, Paris

STRATÉGIES ÉCOLOGIQUES ET BIOLOGIQUES DES MORILLES 175

1982; Ower et al., 1986). Cette possibilité explique l'extension du genre en de-

hors des zones marquées par un hiver froid et un réchauffement vernal (Heim,

1966), ou également les rares cas de fructifications automnales (Berthet, 1983).

Le schéma proposé ne rend pas compte de ces derniers cas de figures. Ceux-ci

ont été très peu étudiés, néanmoins, les observations effectuées en milieu tropical

indiquent que les morilles y sont associées à des végétaux supérieurs (Heim,

1966; Lakhanpal et al., 1991).

Stratégies biologiques.

Dans un article de revue récent, Agerer (1991) fait observer que par

coenocytie, dicaryotie voire polyploidie de nombreux champignons mycorhiziens

renforcent leur potentiel génétique lors de leur phase symbiotique. Chez le

basidiomycète ectomycorhizien Laccaria fraterna l'adaptation à une écologie

pionniére est marquée par l'existence de mitoses post-méiotiques surnumeraires

et par la formation des dicaryons au sein méme des basides (Tommerup et al.,

1991). Ce renforcement précoce du potentiel génétique n'est pas observé chez

les autres espéces du genre, qui ne montrent pas la méme plasticité écologique.

Les travaux de Berthet (1964) ont montré que l'évolution des discomycetes a ete

marquée par l'apparition puis l'amplification de la coenocytie, qui a atteint son.

développement maximal chez les morchellacces. Chez Morchella, les spores

sont en effet plurinucléces avant méme l'individualisation de leur paroi dans

lasque, et les articles mycéliens comprennent une quarantaine de noyaux

(Buscot, 1987). Ce renforcement du potentiel génétique ne compense toutefois

que partiellement le fait que, comme celui des autres ascomycètes, le mycélium

de morille soit classiquement considéré comme haplonte durant la presque

totalité du cycle biologique (Chadefaud, 1960). Des résultats récents permettent

cependant de diseuter le bien-fondé de cette considération classique dans le cas

des morilles. En effet, le mycélium de morille possède la capacité de former des

tomoses végétatives permettant des échanges de noyaux y compris entre

souches differentes (Bresinsky et al., 1972). Hervey et al. (1978), réalisant des

confrontations binaires entre souches monosporales, ont observé la formation de

barrages de mycélium aérien lorsque les souches confrontées ne sont pas issues

d'une même ascospore. Volk & Leonard (1989) ont baptisé ces barrages

^mycelial meld", et, à l'aide de souches mutantes, ont formellement démontré la

nature hétérocaryotique de leur mycélium. dont le potentiel de croissance est par

ailleurs limité sur le milieu utilisé par les auteurs. Ceux-ci ont de surcroit

interprété l'appariement d'un grand nombre de noyaux au sein des hyphes ter-

minales des “mycelial melds” comme la marque de leur etat dicaryotique (Volk

& Leonard, 1990) Cependant, des figures rigoureusement identiques sont

observées dans les hyphes terminales de souches haploides en croissance (fig. 2),

et la variabilité de la distance entre noyaux apparies suggére que les figures si-

milaires observées par Volk & Leonard soient en fait des figures post-

meïotiques, nécessairement nombreuses dans les articles apicaux d'un mycelium

coenocytique en croissance. D'ailleurs, chez la morille, la formation effective

des dicaryons est connue de longue date pour ne s'opérer que dans

l'hypothécium à la fin de l'éelongation de l'ascocarpe, ces dicaryons s‘isolant

immédiatement par septation et ne subissant que quelques mitoses conjugees

avant leur fusion dans les cellules proascales (Greiss, 1940). Si la capacité du

champignon à former un mycélium hétérocaryotique en culture est hors de dou-

te, l'interprétation de la formation précoce de dicaryons dans un tel mycélium

€st done probablement erronee.

Buscot (1987, 1992a) a montré que, cultivées sur un milieu riche en azo-

te, des souches polysporales de morille ont tendance à s'isoler les unes des au-

Source : MNHN. Paris

176

. BUSCOT

2 ju

Répartition des noyaux dans les articles apicaux d'un mycélium issu d'une

monospore de Morchella esculenta. Les noyaux sont isolés (I), en cours de divi-

sion (D) ou encore appariés à la suite d'une division (P). Dans ce dernier cas la

distance qui les sépare est variable. Des figures rigoureusement semblables sont

observées dans des hyphes apicales de colonies hétérocaryotiques (coloration,

Giemsa; échelle, 5 um)

Fig. 2: Nuclei in apical cells of mycelium derived from one spore of Morchella esculenta.

tres et à édifier des “mycelial melds” à leur frontiere. En revanche, sur un milieu

pauvre en azote, elles forment un mycélium caractérisé par une parfaite

homogénéité physiologique et de développement, et dont les aptitudes

morphogénes renforcées semblent indiquer la nature hétérocaryotique. Ainsi,

suivant le contexte trophique, diflérentes souches monosporales de morilles se

séparent en ne formant un mycélium hétérocaryotique à potentiel de croissance

réduit qu'au niveau de leurs zones d'interaction, ou fusionnent au contraire en

un mycélium caractérisé par un fort potentiel de développement et de

différenciation, et qui pourrait étre hétérocaryotique.

Ce dernier résultat est susceptible d'éclairer d'un point de vue biologique

le passage entre les deux stratégies écologiques de la morille. Le mycélium de

morille est connu pour mal résister à la compétition avec d'autres champignons

Source : MNHN. Paris

STRATEGIES ÉCOLOGIQUES ET BIOLOGIQUES DES MORILLES 177

ou bactéries (Buscot, 1987). Ceci explique en partie son développement abon-

dant sur des sols bouleversés, dans lesquels outre un pH favorable il dispose de

réserves facilement mobilisables (Kaul, 1975) dans des conditions de concurren-

ce réduite (Petersen, 1985). Les résultats de culture suggèrent que dans un tel

contexte, le champignon n'aurait que marginalement recours à la formation de

mycéliums hétérocaryotiques, les phénomènes de rejet génétique aprés fusion

limitée étant connus chez d'autres espèces pour être exacerbés dans un contexte

trophique riche (Rayner, 1991). Par contre, dans les conditions de son

développement pérenne dans des écosystèmes plus fermés et caractérisés par

une pression de concurrence accrue, le champignon accède plus difficilement

aux éléments nutritifs. Les résultats de culture suggèrent qu'il produirait alors un

mycélium hétérocaryotique vigoureux, le potentiel génétique renforcé de ce

mycélium permettant au. champignon de contracter des relations équilibrées

avec les organismes, racines secondaires, bactéries et mycorhizes primaires aux-

quels il s'associe avant de former lui-même des mycorhizes.

La confirmation de ces dernié

interactions mycéliennes au niveau mo

en cours.

hypothéses nécessite un examen des

ulaire. Des travaux dans ce sens sont

Remerciements: Nous dédions respectueusement cet article à Messieurs les profes-

seurs N. Arpin, A. Bellemere, J. Dexheimer, G. Manachere, F. Oberwinkler et J. Roux,

qui nous ont encouragé et aidé tout au long de nos investigations sur la morille. Nous te-

nons également à remercier la Fondation de France et la Fondation Alexander von

Humboldt pour leur soutien financier.

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LES DÉGÂTS DE CHAMPIGNONS LIGNIVORES

SUR PLATANE

C. GROSCLAUDE

LN.R.A., Station de Pathologie Végétale,

F- 84143 Montfavet cedex

RÉSUMÉ - Des champignons basidiomycétes lignivores sont associés à l'altération du

bois nommée "carie", altération qui a pour conséquence une diminution importante de la

résistance mecanique des arbres. ll en est de méme pour des dépérissements progressils

des branches auxquels sont associées les mêmes espèces. Ces altérations sont, le plus sou-

vent, liées à l'existence de plaies de grande taille résultant de l'ablation de branches. Dix-

huit espèces de basidiomycètes ont êté répertoriées. Parmi celles-ci, on a pu démontrer

expérimentalement sur Platane ir vivo, le pouvoir lignivore de Trameres versicolor, Fomes

Jomentarius et Bjerkandera adusta. Les carpophores de plusieurs espèces ont été observés

14 à 30 mois aprés l'inoculation. Le rôle des champignons lignivores en général, leur mode

d'installation et de développement ainsi que les possibilités de lutte à leur encontre sont

discutés.

ABSTRACT - Lignicolous basidiomycotina are associated with wood decay which result

in a significant decrease of mechanical resistance of the trees. These fungi are also associ-

ated with mortality of branches. These symptoms are often associated with the presence

of large wounds requiring that the branches be pruned. Eigteen species of basidiomycoti-

na are listed. Among them, Trameres versicolor, Fomes fomentarius and Bjerkandera

adusta, which occur on plane trees, have lignivorous capacities. Fruiting bodies of several

species have been noticed 14 to 30 months after inoculation. The mode of penetration,

spread, development and possibilities of control of these fungi are discussed.

MOTS CLÉS : champignons lignivores, basidiomycètes, Platane, Platanus acerifolia,

carie

Symptômes

Les dégâts d'organismes lignivores se traduisent, d'une facon générale,

par une altération de la texture du bois qui devient friable, prenant le plus sou-

vent un aspect fibreux et une teinte claire. Ce symptôme est appelé ‘carie’, du

latin caries qui signifie pourriture.

Globalement, la carie résulte de la dégradation des principaux consti-

tuants du bois, lignine et cellulose, sous l'action d'enzymes fongiques. Dans le

cas d'une pourriture fibreuse, dite encore “pourriture blanche”, la lignine est to-

talement dégradée, tandis que la cellulose n'est que partiellement attaquée. Mais

l'inverse peut aussi se rencontrer, au moins chez d'autres essences que le

Platane: la cellulose est dégradée préférentiellement alors que la lignine subsiste,

ce qui aboutit alors à une pourriture cubique brune.

Source : MNHN, Paris

182 C. GROSC

AUDE

Bien entendu, avant d'atteindre le stade de la carie, la présence d'orga-

nismes fongiques se traduit dans le bois par d'autres symptómes moins

spécifiques et notamment des colorations brunes plus ou moins intenses. En ou-

tre, une fois la carie installée, le bois ainsi altére finit par disparaitre totalement

sous l'action de facteurs physiques ou biotiques, des espéces animales diverses

participant également à ce phénomène qui aboutit à la formation de cavernes

plus ou moins importantes

Les altérations du bois décrites ci-dessus s'observent d'une façon

générale dans la partie centrale du bois des plus gros organes: troncs ou bran-

ches charpentiéres. A. un stade plus avancé de la dégradation du bois, l'arbre

devient creux, seul persistant le bois périphérique le plus jeune (aubier) qui est

aussi le bois fonctionnel assurant la conduction de la sève brute.

L'observation de la localisation des altérations permet très souvent

d'établir un lien entre ces dernières et de grosses plaies résultant de l'ablation de

branches importantes, surtout lorsque par suite de "l'ouverture" du tronc, la

carie du bois est visible extérieurement. L'évolution des alterations du bois est

lente, ce qui peut expliquer en partie le fait que ces alterations se remarquent

presque exclusivement sur des sujets agés, mais au bout de plusieurs années, on

peut noter le dépérissement de grosses branches. En revanche, il est rare de voir

dépérir un arbre dans son ensemble sous la seule action des organismes

lignivores; toutefois, il ne s'agit peut-être là que d'une apparence, car les arbres

creux ayant perdu toute résistance mécanique et représentant de ce fait un dan-

ger pour l'environnement sont aussitót abattus par leurs propriétaires (à moins

que les intempéries ne se soient déjà chargées du travail), ce qui ne permet pas

d'observer un éventuel dépérissement spontané de l'arbre dans sa totalité.

Les champignons responsables

Plutôt que de champignons “responsables”, il convient dans un premier

temps de parler de champignons associés aux dègäts constatés. En effet, sur les

arbres atteints, plusieurs espèces lignicoles peuvent se manifester par la présence

de carpophores et, si parmi les espéces observées par nous-mémes sur Platane

(Platanus acerifolia) (Tab. 1, Fig. 1 à 6), (Grosclaude & Attia, 1989), plusieurs

sont connues pour posséder in vitro un pouvoir lignivore important, peut-on

pour autant affirmer que ces espèces ou certaines d'entre elles, sont responsables

des dégats observes in vivo sur les platanes ? En effet, le pouvoir lignivore in

vitro est en général évalué sur des fragments de bois sterilisés et incapables de ce

fait de toute réaction (Anonyme, 1963; Eslyn & Highley, 1976).

Il faut, au préalable, rappeler que les champignons lignivores (qui ap-

partiennent essentiellement au groupe des Basidiomycètes homobasidiés,

Aphyllophorales - Théléphoracées et Polyporacées - et Agaricales), quel que soit

l'hôte concerné, sont souvent considérés comme des parasites secondaires, des

saprophytes ou encore des parasites de faiblesse ou de blessure. Qu'en est-il

exactement ?

Parasites secondaires ? Les champignons lignivores peuvent être

considérés comme tels si l'on admet suivant une opinion de plus en plus

répandue, qu'ils interviennent dans leur hôte en seconde position, dans une

succession parasitaire, après d'autres microorganismes ayant déjà colonisé en

pionniers les blessures fraîches (Shigo, 1972). L'activité de ces pionniers, par

eux-mémes en général non pathogénes (mais il y a des exceptions notables), au-

rait alors pour conséquence de modifier le substrat dans un sens favorable au

Source : MNHN, Paris

CHAMPIGNONS LIGNIVORES SUR PLATANE 183

développement des basidiomycètes lignivores. Cependant, le qualificatif de "se-

condaire" est ambigu car il peut laisser supposer que les champignons lignivores

ne peuvent causer que des dégâts d'importance secondaire, ce qui est loin de

correspondre à la vérité.

Tableau 1 - Champignons basidiomycétes lignicoles

observés sur Platane dans la région d'Avignon

Table I - Lignicolous basidiomycotina observed on London plane

in Avignon region.

Agrocybe aegerita (Brig.) Fayod (Pholiote du Peuplier)

Auricularia auricula-judae (Bull. ex St-Amans) Wettst. (Oreille de Judas).

Auricularia mesenterica Dicks.: Fr. (Fausse Trémelle).

Bjerkandera adusta (Fr.) Karst. = Leptoporus adustus (Fr. ex Willd.) Quél.

Cerrena unicolor (Fr.) Murr.

Chondrostereum purpureum (Fr.) Pouz. — Stereum purpureum (Fr.) Fr.

Fomes fomentarius (L.: Fr.) Fr. = Ungulina fomentaria (L. ex Fr.) Pat. (Amadouvier).

alia gallica (Fr.) Bond et Sing. — Coriolopsis gallica (Fr.) Ryv.

Ganoderma applanatum (Pers. ex Wallr.) Pat.

Hericium erinaceus (Bull.) Pers, (Hydne hérisson).

Inonotus hispidus (Fr.) Karst, = Xanthochrous hispidus Pat,

Laetiporus sulphureus (Fr.) Murr. (Polypore soufre).

Lentinus tigrinus Fr.

Oxyporus late-marginatus (Dur. & Mont. ex Mont.) Donk = Poria ambigua Bres.

Rigidoporus ulmarius (Fr.) Imaz.

Schizophyllum commune Fr.

Spongipellis pachyodon (Pers.) Kotl. et Pouz.

Trametes versicolor (Fr.) Pil. = Coriolus versicolor (Fr. ex L.) Quél.

omenclature selon J. Breitenbach & F. Kranzlin, Champignons de Suisse, Tome 2, 1986

Par ailleurs, si l’on considère d'autres espèces que les Platanes, il semble

bien qu'il existe aussi des champignons basidiomycètes se comportant en pion-

niers et capables de dégrader le bois d'un arbre à la suite de l'inoculation artifi-

cielle de l'aubier sain. Tel serait le cas du Trametes versicolor sur Pommier

(Kile & Wade, 1974). De même, le Chondrostereum purpureum est un agent

pathogène bien connu qui ataque en pionnier le tissu ligneux des espèces

fruitières. Mais on peut objecter à cela que bien souvent, l'inoculation artificielle

est réalisée avec des doses massives d'inoculum, ce qui est assez éloigné de ce

qui se passe spontanément dans la nature.

Saprophytes ? Un saprophyte vit aux dépens de cellules mortes: si tel est

bien le cas des champignons lignivores qui s'attaquent au bois de coeur

constitué essentiellement de cellules mortes, qu'en estil lorsque l'attaque concer-

ne l'aubier qui lui contient des cellules vivantes ? Certes, les pionniers qui se

développent avant les champignons lignivores modifient les tissus, mais

détruisentils toutes les cellules vivantes, si l'on excepte le cas particulier des

pionniers pathogenes ? Par ailleurs, on a coutume de considérer à tort que les

saprophytes ne sont pas dangereux et que seuls les parasites sont à redouter. Or,

des champignons lignivores se comportant en saprophytes peuvent détruire le

bois de coeur d'un arbre et s'avérer ainsi dans la pratique, tout aussi domma-

geables que de vrais pathogènes.

Parasites de faiblesse ? La manifestation tardive des dégâts attribués aux

champignons lignivores, ainsi que l'apparition de leurs carpophores sur des ar-

bres morts ou moribonds explique sans doute que ces microorganismes soient

Source : MNHN. Paris

C. GROSCLAUDE

184

Source : MNHN. Paris

CHAMPIGNONS LIGNIVORES SUR PLATANE 185

souvent appelés “parasites de faiblesse" ce qui sous-entend qu'ils ne s‘atta-

queraient pas aux arbres jeunes et en bonne santé. Mais comment définir la

bonne santé d'un arbre et ne confond-on pas la cause et l'effet si l'affaibl

sement est provoqué par les champignons lignivores ?

in outre, l'apparition des carpophores des basidiomycétes lignivores sur

des arbres morts ou moribonds ne signifie pas forcément un envahissement tar-

dif d'arbres déjà affaiblis mais résulte plus vraisemblablement du long délai

necessaire à l'extériorisation des organes de fructification.

C'est ainsi qu'ayant inoculé des Basidiomycètes lignicoles sur des

platanes atteints par le Chancre coloré (Ceratocystis fimbriata f. sp. platani),

nous n'avons pu observer les carpophores de certaines espèces (Lentinus

tigrinus, Fomes fomentarius, Schizophyllum commune , Trametes versicolor et

Bjerkandera adusta) qu'après des délais variant de 14 å 30 mois (Tabl. 2). En

revanche, aucun carpophore n'apparaissait dans des délais de cet ordre à la

suite de l'inoculation par Laetiporus sulphureus, Inonotus hispidus et Ganoderma

applanatum.

Tableau 2.

Champignons inoculés | Délaid'apparition des | Nombre d'arbres

carpophores porteurs de

carpophores

Lentinus tigrinus 14 à 17 mois(1) 3 (sur 14)

Fomes fomentarius 25 mois 1 (sur 28)

Schizophyllum commune 13 mois 4 (sur 5)

Trametes versicolor 14 à 25 mois 23 (sur 27)

Bjerkandera adusta 26 à 30 mois 3 (sur 14)

(1) Carpophores fugaces visibles pendant 2 à 3 mois au plus.

Parasiles de blessures ? Il est exact que dans la majorité des cas, les

blessures provoquées par l'homme ou encore les blessures accidentelles dues

aux intempéries, mettant a nu le bois, sont a l'origine de contaminations par les

champignons lignivores, mais il faut aussi considérer les portes d’entrée résultant

de la chute de rameaux dans le processus d'élagage naturel (cladoptose ou

décurtation). Dans ce cas également, une succession parasitaire peut être mise

en évidence, qui peut aboutir, chez le Peuplier par exemple, au développement

de champignons lignivores (Anselmi, 1990).

Seule l'inoculation artificielle des champignons basidiomycètes observés

(ou isolés) sur Platane pourra done permettre de leur attribuer la responsabilité

d'effets pathogènes: dégradation du bois, puis éventuellement deperissement.

Mais, les inoculations artificielles doivent pour cela se rapprocher le plus possi-

ble des conditions naturelles, ce qui n'est pas aisément réalisable puisque les

champignons lignivores ne sont probablement pas les premiers à intervenir. Il

faut alors avoir recours à des artifices, parmi lesquels nous citerons l'inoculation

de blessures anciennes et donc déjà colonisées par des espêces pionniéres. C'est

ainsi que nous avons pu montrer in vivo chez le Platane, le fort pouvoir

lignivore des 3 espeees Trametes versicolor, Fomes fomentarius et Bjerkandera

adusta.

Source : MNHN, Paris

186 C. GROSCLAUDE

Source : MNHN, Paris

CHAMPIGNONS LIGNIVORES SUR PLATANE 187

Ces trois espèces avaient été inoculées à des platanes vigoureux, âgés de

$ ans, sur des blessures anciennes réalisées 9 mois auparavant par décapitation

de la tige principale. Onze mois après l'inoculation, les prélèvements effectués

permettaient d'observer la carie du bois sous-jacent aux blessures, sur une pro-

fondeur de 8 à 12 cm, carie à partir de laquelle les champignons inoculés étaient

réisoles.

Dans un second essai, réalisé sur de jeunes platanes attcints par le

Ceratocystis fimbriata, Vinoculation de Trametes versicolor et de Fomes

fomentarius, permettait d'observer, 14 mois plus tard, après une période de

vents forts, la cassure des troncs au voisinage des inoculations chez 7 et 14 ar-

bres respectivement sur 23 et 20 sujets inoculés. Au niveau de la cassure, on

apercevait un tissu de coloration jaune pâle et de texture fibreuse caractéristique

des premiers stades de la carie (Grosclaude et al., 1992).

La pénétration des champignons lignivores

La pénétration des champignons lignivores s'effectue, avons-nous dit, à

la faveur des blessures mettant à nu le bois. Or, une blessure fraiche est le siège

d'un retrait de la sève dû au fait que cette sève se trouve pendant une grande

partie de l'année sous tension. Ce retrait de la sève provoque à son tour une as-

piration de l'air ambiant, de l'eau des précipitations et de toutes les particules

contenues par ces élements. Parmi ces particules qui vont être aspirées dans les

vaisseaux ligneux (ou simplement déposées à la surface de la blessure lorsque

cesse l'aspiration) se trouvent les germes des microorganismes les plus divers,

champignons ou bactéries entre autres. Mais l'expérience montre que, para-

doxalement, lorsqu'il s'agit d'aubier, des isolements pratiqués dans le bois sous-

jacent aux blessures ne permettent pas de retrouver de champignons

basidiomycetes lignivores et cela pendant plusieurs mois (Monk, 1976). Or com-

me il est evident que les spores de ces espéces ont été aspirées par la blessure au

moment de sa réalisation (ou bien déposées sur celle-ci) au méme titre que n'im-

porte quelle autre espéce de microorganisme, on doit donc supposer que les

spores des champignons basidiomyeetes lignivores se trouvent dans un etat de

latence et d'inhibition qui ne permet pas leur mise en évidence par les techni-

ques classiques.

Cette latence pourrait s'expliquer de différentes manière

Soit parce que le bois frais est un milieu convenant mal au développement des

champignons lignivores car, entre autres, trop riche en eau et trop pauvre en

oxygéne (Boddy & Rayner, 1983).

- soit parce que les champignons lignivores s'avérent trop sensibles aux réactions

de defense de l'hôte, réactions que peuvent au contraire surmonter les

microorganismes pionniers

Fig. 4 - Carpophores de Trametes vresicolor sur platane. (Photo C. Grosclaude). Fig. 5 -

Carpophores de Fomes fomentarius (Amadouvier) développé au niveau d'une par-

tie morte du trone. (Photo C. Grosclaude). Fig. 6 - Fructification de Bjerkandera

adusta sur Platane. (Photo C. Grosclaude).

Fig. 4 - Sporophores of Trametes versicolor on London plane. Fig. 5 - Sporophores of

Fomes tomentarius on a dead part of a trunk. Fig. 6 - Sporophores of

Bjerkandera adusta on London plane.

Source : MNHN, Paris

188 C. GROSCLAUDE

- soit encore parce qu'il existerait une dormance physiologique des spores

(Merrill, 1970).

Au bout d'un temps variable (de l'ordre de 9 à 12 mois environ), les iso-

lements pratiqués dans le bois sous-jacent à une blessure permettent enfin de

mettre en évidence des champignons basidiomycétes lignivores. Si l'on ne peut

exclure la possibilité d'une contamination sur des blessures âgées, il est plus

vraisemblable d'expliquer cette mise en évidence tardive des basidiomycétes

lignivores dans le bois par les modifications apportées au substrat du fait du

developpement des microorganismes pionniers. Par la suite, ces pionniers qui

sont généralement de mauvais compétiteurs seront éliminés par les

basidiomycétes qui les suivent.

Si la séquence blessure fraiche, pénétration de microorganismes divers,

développement des pionniers, développement des basidiomycètes lignivores déjà

présents, semble correspondre à la généralité des cas, des variantes sont possi-

bles dans certains cas particuliers:

a) section d'une grosse branche mettant à nu du bois trés ancien déjà

duraminisé (bois de cocur) On peut penser que dans ce cas, il n'est pas

nécessaire de faire intervenir des microorganismes pionniers, le bois de coeur

étant susceptible d'être envahi d'emblée par certains basidiomycètes lignivores.

b) dépôt des spores de basidiomycétes lignivores sur une plaie ancienne

où les pionniers se sont déjà développés. Il peut en être ainsi sur des plaies

protégées au moment de leur réalisation par un enduit fongicide qui disparait

progressivement par la suite,

c) pénétration par les plaies résultant de l'élagage naturel. Dans ce cas

également, les pionniers sont déjà présents sur les rameaux concernés par

l'elagage - tout au moins dans le cas du Platane où s'observe en particulier le

Massaría platani (Grosclaude & Romiti, 1991) - et la colonisation par des

basidiomycetes lignivores peut theoriquement avoir lieu.

Développement des champignons lignivores dans le bois

Une fois implantés dans le bois, les champignons lignivores vont s'y

développer, mais ce développement se fera préférentiellement dans le bois cen-

tral moins riche en eau et moins réactif que l'aubier périphérique. Même lors-

qul s'agit du bois de coeur, souvent enrichi en tanins fongistatiques, on a

constaté chez le Mélèze que le développement des champignons lignivores étai

plus important au centre (vers la moëlle) qu'à la périphérie (au conta

l'aubier) (Cartwright, 1942); d'ou l'aspect du bois altéré en cône renversé sous la

blessure qui a servi de porte d'entrée aux microorganismes (le développement

plus rapide des champignons dans le bois central peut expliquer en partie la

plus grande vulnérabilité des blessures provoquées par l'ablation de grosses

branches comparativement aux branches de petites dimensions). La colonisation

du tissu ligneux par les champignons lignivores va alors se poursuivre:

dans le sens longitudinal, relativement vite, car cette progression suit les

vaisseaux qui offrent peu d'obstacles à la progression fongique, mais toujours

plus vite au centre qu'à la périphérie pour les raisons qui viennent d'être

évoquées plus haut.

dans le sens transversal, la progression est au contraire bien plus lente,

car il faut franchir les parois cellulaires des differents éléments constitutifs du

bois: parenchymes des rayons ligneux, mais aussi vaisseaux. D'autre part, com-

Source : MNHN. Paris

CHAMPIGNONS LIGNIVORES SUR PLATANE 189

me il vient d'etre dit, les tissus sont de plus en plus riches en eau et de plus en

Dua réactifs lorsque l'on avance du centre vers la périphérie, ce qui limite enco-

re la progression des champignons. Cette progression latérale se poursuit cepen-

dant inexorablement, Vaubier le plus ancien perdant petit a petit ses qualités par

une duraminisation progressive, tandis que le cambium élabore de nouvelles as-

sises de bois jeune.

Autrement dit, tout se passe comme s'il s'établissait entre l'arbre et les

champignons lignivores présents une sorte de course de vitesse, les champignons

colonisant le bois central au fur et à mesure de son vieillissement et l'arbre

reformant tout au long de la saison de nouvelles couches de bois.

Cons

La pourriture du bois central sur une plus ou moins grande longueur

(branches principales et tronc) est la premiére conséquence prévisible résultant

du développement des champignons lignivores. Puis la succession se poursui-

vant, dans le bois carié les champignons lignivores laisseront la place à d'autres

microorganismes. Enfin, cette carie elle-même finit alors par disparaître sous

l'action d’autres organismes végétaux ou animaux, remplacée par des cavités

centrales limitées par la périphérie saine (aubier et écorce) des organes

concernés. Dans ce cas, la pourriture centrale du tronc demeure invisible depuis

l'extérieur et elle ne peut être décelée que par des sondages ou par d'autres tech-

niques plus sophistiquées (par exemple, la thermographie infrarouge) (Catena et

al., 1990).

guences du developpement des champignons lignivores

Mais on peut imaginer que sur un secteur plus ou moins important de la

circonférence, la formation de bois nouveau sain soit plus lente que la progres-

sion du champignon, ce qui pourrait être le cas d'arbres très âgés ou encore “af

faiblis” pour des causes diverses. La zone de tissus altérés occuperait alors une

place de plus en plus importante par rapport au bois sain: lorsqu'elle atteint

l'écorce, celle-ci meurt. L'organe touché, trone ou grosse branche, peut alors

deperir si la circonférence enliére est ainsi atteinte. Si au contraire, l'altération

ne concerne qu'un secteur limite de la circonférence, la branche ou le tronc en-

core vivants paraissent ouverts et laissent apparaitre la carie ou les cavités qui

en résultent (mais l'ouverture du tronc peut aussi découler d'un processus inver-

se: destruction d'un secteur d'écorce pour des causes diverses, biotiques ou non,

d'où la mise à nu du bois qui peut alors être envahi par des espèces lignivores.

Ce cas est fréquent à la base des troncs dont l'écorce a été brülée à la suite de

feux d'herbes ou de feuilles mortes). Mais, même vivants, les arbres creux

constituent un danger pour l'environnement, surtout en zone urbaine ou le long

des voies de communication et ils doivent être abattus sans tarder.

Peut-on lutter contre les champignons lignivores ?

Peut-on prévenir l'invasion du bois par les champignons lignivores ?

Ceux-ci pénétrant par les blessures mettant le bois à nu, le meilleur moyen ser

d'éviter toutes les blessures aux arbres, ce qui est rarement possible, ne serait-ce

que parce que certaines blessures sont accidentelles et non voulues par l'homme.

ll convient alors de protéger ces blessures, immédiatement avec un enduit

fongicide de bonne qualité; mais nous savons que la persistance de ces enduits

est limitée et que leur efficacité concerne en premier lieu les organismes pion-

niers (parmi lesquels existent, il est vrai, de redoutables pathogènes comme le

Ceratocystis fimbriata agent du. Chancre coloré). Par ailleurs, sur de grosses

Source : MNHN, Paris

190 €. GROSCLAUDE

plaies on ne peut raisonnablement envisager de renouveler périodiquement l'ap-

port d'enduit fongicide jusqu'au recouvrement complet de celles-ci (cicatri-

sation).

Enfin, quelles que soient les précautions prises (suppression de toute

blessure volontaire, protection des blessures accidentelles), il ne sera jamais pos-

sible de supprimer l'élagage naturel qui est à l'origine de blessures par lesquelles

pourront s'introduire des champignons lignivores. Un progrès pourrait toutefois

résulter de l'application sur les blessures d'un champignon tel que le

Trichoderma harzianum, antagoniste connu d'au moins un champignon

basidiomycéte lignicole, le Chondrostereum purpureum (Grosclaude, 1970;

Grosclaude ct al., 1974) et qui a l'avantage de persister un certain temps dans

les tissus qu'il colonise. De même, on pourrait envisager d'adapter au platane le

traitement appliqué sur vigne pour lutter contre la maladie de l'Esca dans la-

quelle interviennent des basidiomycètes lignivores. Celle-ci, on le sait depuis fort

longtemps, est efficacement contrôlée par l'arsénite de sodium. On a tente d'ar-

réter le développement des pourritures provoquées par les champignons

lignivores en éliminant par curetage le bois pourri ou en voie d'altération. Cette

méthode qui ressort de ce qu'il est convenu d'appeler "chirurgie arboricole” (de

Ribier, 1983) est, faut-il le préciser, difficile et longue à mettre en oeuvre. Par

ailleurs, en dépit de l'intérêt esthétique des opérations. il n'est pas possible ac-

tuellement d'affirmer qu'une telle pratique améliore sensiblement l'état sanitaire

des arbres et puisse augmenter leur durée de vie.

Conclusion

Parmi les champignons basidiomycétes dont nous avons observé les

carpophores sur le Platane, se trouvent donc des espèces susceptibles de

dégrader le bois d'arbres jeunes et vigoureux. Par ailleurs, le long délai - attei-

gnant deux ans et plus - qui s'écoule avant d'observer les carpophores sur les

arbres inoculés, conforte l'hypothèse selon laquelle ces espèces ne s'attaquent

pas uniquement aux arbres âgés ou affaiblis, mais sont eux-mêmes responsables

de l'affaiblissement des sujets envahis. Ces espèces peuvent donc être

considérées comme des agents pathogènes sensu lato même si la durée trop

brève de nos essais n'a pas permis d'aboutir au deperissement de tout ou partie

des sujets inoculés. Quant à la lutte à l'encontre de ces champignons,

l'impossibilité d'eviter toute blessure, la protection partielle et temporaire

résultant de l'application sur les blessures d'un enduit fongicide et le succès dou-

teux des tentatives de lutte curative par chirurgie arboricole, laissent en définitive

peu d'espoir d'éviter les dégâts qu'ils peuvent provoquer.

La limitation du nombre et des dimensions des blessures volontaires, la

protection de celles-ci ainsi que de toutes les autres, accidentelles notamment,

par des enduits fongicides sont cependant susceptibles de réduire l'intensité des

dégats et peut-être de retarder la mort des arbres consécutive au dépérissement

des grosses branches puis du tronc. Ces mesures peuvent aussi permettre de

différer sinon d'éviter l'abattage d'arbres devenus creux.

regarder ceux-ci comme des malades, ne faut-il pas les considérer comme autant

aura donc toujours, tôt ou tard, des arbres creux, mais plutôt que de

d'écosystèmes en évolution, hébergeant une foule d'organismes végétaux et ani

maux, des bactéries aux oiseaux et aux petits mammifères en passant par les in

sectes et les champignons ? Et les actions successives de chacun d'entre eux

concourent finalement au recyclage de la matière organique de ce qui fut un ar-

bre et de tout l'écosystème en général. Ainsi, l'arbre creux, aprés avoir servi de

Source : MNHN, Paris

CHAMPIGNONS LIGNIVORES SUR PLATANE 191

refuge aux espèces les plus diverses, redeviendra le substrat sur lequel pourront

se développer de nouveaux arbres.

Remerciements: Nous remercions le Conseil Général de Vaucluse pour l'aide qu'il

nous a accordée dans la réalisation de ce travail. Ce travail a bénéficié également de l'aide

du Ministère de l'Environnement.

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Source : MNHN. Paris

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CONTAMINATION FONGIQUE DE SALAISONS SÈCHES

DE VIANDE: ORIGINE, CONDITIONS D'APPARITION,

PREVENTION

Joseph LE BARS et Pierrette LE BARS

Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie, 180 Chemin de

Tournefeuille, 31931 Toulouse

RÉSUMÉ - Des altérations fongiques tardives de salaisons séches de viande étaient dues

au Penicillium frequentans Westling (= P. glabrum (Wehmer) Westling) sur le corps des

saucissons et à l'Aspergillus repens de Bary (— Eurotium repens de Bary) aux extrémités.

L'analyse des matières premières, de l'air et des surfaces des différentes salles et du

matériel ont mis en évidence l'origine de ces contaminants: - VA. repens provenait du poi-

vre; le P. frequentans présent dans toute l'entreprise, se développait dans les séchoirs.

L'étude écologique de ces deux espêces comparativement au P, nalgiovense Laxa (la "fleur"

ensemencée) explique la localisation et le moment de leur développement. Dés contami-

nations volontaires aux différents stades ont montré que la période sensible se situe en

amont des étuves. Un ensemble de mesures (décontamination du poivre, modifications

dans les séchoirs pour limiter le developpement du P. /reguentans, reduction du croisement

des circuits) ont éliminé plus de 80% des altérations ultérieures. La recherche de souches

de P. nalgiovense et P. chrysogenum Thom plus compétitives compléterait cette prevention.

ABSTRACT - Delayed fungal impairments (“green mold”) appeared in mold ripened sau-

sages: Penicillium frequentans Westling (= P. glabrum (Wehmer) Westling) on the sausage

body and Aspergillus repens de Bary (= Eurotium repens de Bary) on the ends, Mycologi-

cal studies on raw materials, air and surfaces of different rooms led to determine their ori-

gins: - 4. repens came from pepper; - P. frequentans, present everywhere in the factory,

grew in ripening rooms. Ecological study of these species, in comparison with P. nalgiov-

ense Laxa (starter mold), explained their development localisation and period. Exper-

imental contaminations at different steps of the process outlined that the critical moment

took place before incubators. Comprehensive measures to limit development (in ripening

rooms), origin and cross contamination eliminated more than 80% impairments. Investi-

gations on more competitive strains of P. nalgiovense and P. chrysogenum Thom would

Improve such a prevention.

MOTS CLÉS : salaisons, moisissures, Penicillium frequentans, prévention.

INTRODUCTION

La salaison est un mode de préparation et de conservation de la viande

qui fait appel à un ensemble de techniques comprenant le salage, la dessication

et la fermentation. Dans l'industrie, cette dernière est dirigée par l'apport de

microorganismes spécifiques en tant qu'agents de maturation, ayant chacun un

rôle particulier: bactéries, levures et champignons filamenteux. Ces derniers,

dénommés “la Fleur” par les professionnels, ont pour but d'obtenir une couver-

Source : MNHN, Paris

194 J. LE BARS et P. LE BARS

ture uniforme des produits participant ainsi à une meilleure maîtrise des

différents aspects de la qualité: présentation, hygiene, gout. Les souches princi-

palement utilisées appartiennent à l'espèce Penicillium nalgiovense Laxa, depuis

les nombreux travaux effectués en. Allemagne sur ce sujet (voir les mises au

point de Benard & Labie, 1977 et de Moreau, 1978), notamment ceux de

Mintzlaff & Leistner (1972).

Malgré l'emploi d'une telle flore de surface, une grande entreprise de

salaisonnerie subissait un préjudice croissant (disqualification, retour de mar-

chandises) du fait du développement tardif de "moisissure verte” sur des

saucissons et des saucisses sèches.

L'objet de cette communication est de rapporter la stratégie suivie et les

résultats obtenus dans l'analyse d'un tel probléme de contamination dans une

industrie agro-alimentaire relativement complexe du fait de la diversité des

matières premières, des étapes technologiques et des microorganismes utilisés:

- nature des contaminants:

- leurs conditions de développement comparativement à la “fleur” ensemencée,

- leur origine: les matières premieres, l'usine, la conservation,

- les moments critiques de la contamination.

1- MATÉRIEL ET MÉTHODE

1. Nature des contaminants

A partir d'une trentaine d'échantillons (saucissons, saucisses sèches)

macroscopiquement contaminés, les "moisissures vertes” furent isolées sur un

milieu gélosé au malt (2 %) hypersalé (NaCI 3 %, comme les salaisons). Elles

furent identifiées selon les techniques et critères de Raper & Thom (1968) pour

le genre Penicillium et ceux de Raper & Fennell (1965) pour le genre

Aspergillus.

L'objectif majeur de cette premiére étape étant de déterminer si la natu-

re de ces contaminations etait constante ou non dans cette entreprise, ces obser-

vations ont porté sur plusieurs lots de fabrication, aprés conservation des pro-

duits pendant un à deux mois dans les conditions habituelles de distribution:

sous emballage, sous cellophane perforée ou sous atmosphére modifiée (N, +

CO).

2. Etude comparative de la croissance des souches isolées

Pour la comparaison de la croissance des trois espèces isolées en fonc-

tion de la température, les souches furent ensemencées au centre de boîtes de

Pétri (90 mm) sur le milieu précédent à raison de trois répétitions par souche:

au cours de l'incubation à 5, 10, 15, 20, 25, 30 et 35°C, la croissance radiale fut

mesurée quotidiennement pendant 3 semaines. L'influence comparée de la

concentration en NaC (1, 3, 6 et 9 %) fut examinée selon la même technique

au cours de l'incubation à 15°C, temperature des sechoirs.

La compétition entre les deux espèces fongiques contaminantes et la

“fleur” (Penicillium nalgiovense) fut estimée par la dominance éventuelle aprés

croisement des lignes d'ensemencement sur le milieu au malt hypersalé (3 %)

incubé à 15°C.

Source : MNHN. Paris

CONTAMINATION FONGIQUE DE SALAISONS 195

3. Recherche de l'origine des contaminants

Le P. frequentans et lA. repens ont été recherchés dans toutes les

matières premières: mêlée, viande et résidus au poussage, menu de porc,

chaudin, ficelle, poivre, tale et la suspension de la flore d'ensemencement. Des

prélèvements de surface furent effectués à l'aide de coton-tiges stériles humidifiés

sur 10cm? délimités par des pochoirs stériles sur les tapis de transport, les surfa-

ces de travail, le matériel, les chariots avec les barres de suspension des pro-

duits, les climatiseurs...; l'extrémité des coton-tiges est sectionnée et fortement

agitée dans 5 ml de solution aqueuse de Tween 80 (0,5%); les suspensions,

avant et aprés dilution, sont ensemencées sur le milieu au malt hypersalé (3 %).

Des prélèvements d'air (30 à 150 litres) ont été réalisés tout au long des

circuits de la fabrication à l'aide de l'appareil à cribles successifs d'Andersen

(1958), équipé du milieu au malt hypersalé. L'analyse qualitative (structure du

nuage particulaire,..) et quantitative (concentration en particules portant au

moins l'un des contaminants fongiques) fut effectuée selon une méthode décrite

précédemment (Le Bars, 1968).

La localisation de l'apparition macroscopique des contaminants dans les

différents séchoirs fut relevée pendant deux mois. L’humidité relative (H.R.) fut

enregistrée en permanence dans ces différentes zones; l'ILR. moyenne fut

déterminée par la mesure de l'aire sous la courbe de chaque cycle (100 minutes)

de variation de l'H.R. imposée par la technologie (tableau 1).

Etapes Température | Hygrométrie

Fabrication de la mêlée 0-2°C 85 %

Poussage et ensemencement 10-15°C 80 %

Etuves 25 — 15°C | 100 — 80 %

Séchoirs 12-150 | cycles 60 à

80 % (100h)

Tableau 1: Durée et caractéristiques hygro-thermiques des principales étapes de la fabrica-

tion des saucissons.

Table 1: Period and hygro-thermal characteristics of the main steps in cured dried sausage

manufacture.

4. Détermination du moment principal de la contamination

Aprés fabrication des produits et leur ensemencement par la fleur, des

contaminations volontaires ont été effectuées par application sur des saucissons

(18 par lot) de cultures de la méme souche de 2. frequentans à différents stades

(tableau 1): à l'entrée dans une étuve, dans un séchoir et après deux semaines

de séchage. Dans le séchoir, ces lots ont été placés dans des zones qui

savéraient plus favorables à ce contaminant. Le délai et la fréquence d'appari-

tion de la “moisissure verte” furent relevés au cours des 5 semaines aprés la fa-

brication.

Source : MNHN, Paris

196 1. LE BARS et P. LE BARS

Il - RESULTATS

1. Nature des contaminants

Les souches de “moisissures vertes” isolées du corps des saucissons et

des plis de saucisses appartenaient toutes à l'espèce Penicillium frequentans

Westling (= P. glabrum (Wehmer) Westling): celles isolées de l'extrémité

supérieure des saucissons, prés du point d'attache, étaient l'Aspergillus repens de

V.max.(mm/j.)

[e P.frequentans

I—+— A.repens

4] |—*— P.nalgiovense

E 5 20 25 30 35

5 10 1 E

g Température °C

Figure 1 - Vitesse maximale de croissance des deux contaminants de salaisons et de la

"fleur" ( P. nalgiovense) en fonction de la température.

Figure 1: Maximal growth rate (mm/day) of the two fungal contaminants of cured dried

sausages comparatively to the starter (P. nalgiovense) according to temperature.

V.max (mm/.)

1 2 3 4 5 6 7. 8 9

Concentration NaCI (%)

Figure 2 - Vitesse maximale de croissance des deux contaminants de salaisons et de la

“fleur” (P. nalgiovense) en fonction de la concentration en NaCl.

Figure 2 - Maximal growth rate (mm/day) of the two fungal contaminants of cured dried

sausages comparatively to the starter (P. nalgiovense) according to NaCl

content.

Source : MNHN, Paris

CONTAMINATION FONGIQUE DE SALAISONS. 197

Bary (= Eurotium repens de Bary). La flore fongique d’ensemencement était le

P. nalgiovense Laxa.

2. Etude comparative in vitro des trois especes

L'ensemble des mesures de croissance radiale peut se résumer par le

calcul et la représentation de la vitesse maximale de croissance en fonction du

paramètre étudié (figures 1 et 2). La température optimale de croissance fut voi-

sine de 25 °C pour les trois souches. Le P. na/giovense présenta la plus large

gamme de températures favorables (4 5*C - > 35°C); à une température de

10-12°C, sa vitesse d'extension fut le double de celle des contaminants. A 30^C,

la croissance des deux contaminants fut inhibée, tandis qu'à 5°C seul le P.

Jrequentans se développa de façon notable.

L'ensemble de l'étude de la croissance en fonction de la concentration

en NaCl est résumé dans la figure 2. Le P. frequentans apparaît indifférent à la

concentration, tandis gue VA. repens manifeste une nette halophilie. Quant à la

souche de P. nalgiovense, sa vitesse de croissance, peu influencée par la teneur

en sel, fut à la fois maximale et nettement supérieure à celle des contaminants

pour une concentration en sel de 3 %.

L'étude de compétition in vitro entre les trois souches mit en évidence

que le P. frequentans, malgré une vitesse de croissance inférieure, dominait tou-

jours la fleur après une semaine de culture. Par contre, l'A. repens fut nettement

dominé par le P. nalgiovense et le P. frequentans, dans les conditions de concen-

tration en sel (3 %) et de temperature analogues à celles de la fabrication.

3. Origine des contaminants

+ Les matières premières:

De toutes les matières premières, seul le poivre, théoriquement

décontaminé, présentait une mycoflore abondante:

Aspergillus gr. glaucus 4,5.10°/gramme

(dont A. repens)

A. restrietus 6.10%

A. candidus 4.10*

A. versicolor 1,5.10*

A. niger 5.10%

A. wentii 6.103

À. flavus 4.10?

Penicillium spp 6.103

(P. frequentans non détecté)

+ L'entreprise:

Les prélèvements de surface en amont des salles-étuves furent négatifs

Pour le P. frequentans, à V'exception des chariots et des barres pour la suspen-

sion des produits, qui circulent de la salle de poussage aux séchoirs et inver-

sement (120 à 1800 propagules/10 cm?).

La contamination aérienne par cette espéce était générale dans l'entre-

prise (tableau 2), avec un niveau élevé dans les séchoirs, surtout en fin de cycle

(11660 particules/m? véhiculant au moins un propagule de P. frequentans). Par-

mi les autres espéces fongiques, des Cladosporium, contaminants fréquents des

entreprises agro-alimentaires traditionnelles, étaient présents sur toutes les instal-

Source : MNHN, Paris

198 J. LE BARS et P. LE BARS

Pouss-Ens - Séchoirs Tal-

cage

Espèces Déb. | Fin

P. freguentans à 2110| 116602100

Autres Penicillium 9

Asp. gr. glaucus

A. versicolor

Cladosporium sp

Autres dématiées

P. nalgiovense 214300

Tableau 2: Etude qualitative et quantitative (nombre de propagules par m?) de la

mycoflore halotolérante (milieu au malt hypersale, NaCl 3%) de lair de

différentes salles de l'entreprise de salaisonnerie. - A.E.: air extérieur, au niveau de

la production frigorifique. Fab: salle de fabrication (ventilation en marche).

A.C.: air comprimé (détendu sous une báche) Pouss- salle de poussage et

ensemencement de la “fleur”. Passage: passage Vers étuves (proche de la réserve

des barres de bois). Etuves: déb: début (3 h aprés désinfection); fin: fin d'étuvage.

Séchoirs: début (deb.) et fin de cycle. Talcage: brossage + talc.

Table 2: Qualitative and quantitative (propagule number / m?) of halotolerant mycoflora

(malt medium with 3% NaCl) in the air of different rooms along the cured

sausage factory. - A.E.: external air, close to refrigerating unit. Fab.: mixing

room (ventilation on). A.C.: compressed air (expanded under a plastic sheet).

Pouss-ens.: sausage making and fungal starter seeding. Passage: way to

incubators (close to wooden bars for sausage hanging) Etuves: incubators: déb

= start (3h after disinfection), fin = end of incubation. Séchoirs: drying and

ripening step; deb = start; fin = end. Talcage: sausage brushing + talc

powdering

lations (5 à 10 propagules/10 cm?) et dans l'air de toutes les salles, princi-

palement en amont, pres des sources de conditionnement d'air.

La fréquence et l'importance du développement macroscopique du P.

frequentans étaient plus grandes dans les zones des séchoirs où l'humidité rela-

tive, surtout H.R. minimale, était plus élevée (figure 3).

4. Moment critique de la contamination

Les résultats de l'essai de contamination volontaire sont représentés sur

la figure 4. Pratiquement toutes les unités ensemencées avant l'entrée dans les

étuves présentaient un développement macroscopiquement visible du P.

frequentans à la fin du séchage (5 semaines); par contre, les contaminations tar-

dives, aprés un début de séchage ne provoquaient pas d'altération visible.

IH - DISCUSSION

Les produits non stérilisés issus des industries agro-alimentaires sont

parfois le siège de développement de moisissures indésirables. Une prévention

Source : MNHN, Paris

CONTAMINATION FON

3IQUE DE SALAISONS 199

H.R.% (séchoir)

BO zones avec moisissure verte (with green mold)

Ll zone sans moisissure vete (without green mold)

70 +

H.R. maximale H.R.minimale H.R. moyenne

Maximal R.H. Minimal R.H. Mean H.R.

Figure 3 - L'humidité Relative (H.R.) maximale, minimale et moyenne dans les zones des

oirs avec et sans développement de “moisissures vertes”.

sé

Figure 3 - Maximal, minimal and mean Relative Humidity in areas with or without

development of “green molds”.

Pourcentage d'altérations

100:

Entrée atuves Entrée séchoir 2 semaines séchage

Incubator entrance ‘pening room entrance

2 week ripening

semaines

works

Figure 4 - Pourcentage de saucissons présentant de la "moisissure verte” au cours de la

maturation et de la conservation en fonction du moment de la contamination arti-

ficielle par une culture de P. /reguentans.

Figure 4 - Percentages of sausage with the "green mold" development during maturation

and storage according to the moment of experimental contamination with a P.

Jreguentans agar culture.

raisonnée, surtout dans les industries de fermentation, doit être basée sur la

connaissance des agents fongiques, de leur origine, des moments de la contami-

Source : MNHN. Paris

200 1. LE BARS et P. LE BARS

nation et des conditions d'apparition des altérations. Ceci impose généralement

l'analyse des différentes étapes en étroite collaboration avec les responsables de

la production.

De nombreuses espéces fongiques ont été décrites sur les salaisons

séches de viande (voir les mises au point de Benard & Labie, 1977 et de

Moreau, 1978). Dans le cas présent, les défauts d'aspect releves en fin de matu-

ration et dans les circuits de distribution résultaient toujours des développements

des mêmes espéces fongiques. Le contaminant mineur, l'4. repens, provenait

principalement d'une des matières premières, le poivre: la mesure immédiate

consistant à utiliser exclusivement du poivre décontaminé, comme il est

recommandé dans ce type d'industrie (Anonyme, 1986; Moreau, 1972; Moreau

& Moreau, 1978; Le Bars & Le Bars, 1988) a été suivie par une disparition

quasi-totale de ce type d'altération en quelques semaines. Les autres

caractéristiques biologiques de I'A. repens expliquent la localisation exclusive de

son développement à l'extrémité des saucissons, où la diminution de l’activité en

eau et l'accroissement de la concentration en sel limitent l'implantation de la

“fleur”; en effet, cette espèce est plus xérophile et halophile et moins compétitive

que le P. nalgiovense. Enfin, la conservation des produits aprés maturation à

une température inférieure à 10°C devrait, en outre, limiter son développement

comparativement à la ‘fleur’.

La contamination majeure était toujours düe à la même espèce

fongique, le P. frequentans, quels que soient les lots de fabrication. Non détectée

dans les matiéres premières cette espèce était présente à tous les niveaux de

l'entreprise. Compte tenu de ses caractéristiques écologiques, voisines de celles

du P. nalgiovense, elle se développait surtout dans les séchoirs malgré une bon-

ne implantation préalable de la "fleur"; en effet, son pouvoir de compétition lui

permet de s'exprimer à terme malgré un ensemencement et une vitesse de crois-

sance plus faibles que le P. nalgiovense.

La contamination volontaire des saucissons à différents stades a permis

de préciser le moment le plus important de la contamination: avant l'entrée

dans les étuves.

En ce qui concerne la prévention, la pratique d'un vide sanitaire avec

désinfection simultanée de l'ensemble d’une telle entreprise est irršaliste, car il la

condamne à un arrêt de deux mois pour l'obtention et la fourniture de produits

finis.

L'ensemble des observations et des résultats a permis de mettre en place

une prévention visant, d'une part, à réduire la source du P. frequentans, entrete-

nue au sein de l'entreprise, et, d'autre part, à en limiter la dissémination.

+ L'efficacité de la désinfection de chaque séchoir, en fin de cycle de ma-

turation, a été améliorée par l'emploi d'un procédé de thermontbulisation, assu-

rant une meilleure diffusion et stabilité de l'aérosol. L'obtention d'une plus gran-

de homogéncité de l'humidité relative au cours des cycles de variation a permis

de réduire les zones à risques ct, de ce fait, le développement du contaminant.

Ces mesures ont conduit, en moins de deux mois, à une pollution cent fois

moins importante dans les séchoirs en fin de cycle, principale source du P.

frequentans (figure 5).

+ La réduction de la dissémination des spores a été assurée par la mise

en place progressive d'un ensemble de dispositions habituelles: - désinfection du

matériel roulant (chariots) avant leur retour à la salle de fabrication; - limitation

au minimum du croisement des circuits; - mise en surpression de l'air de la salle

Source : MNHN, Paris

CONTAMINATION FONGIQUE DE SALAISONS. 201

N propagules P.frequentans /m3

12000

10000

Avant (before)

2000 Aprés (after) | intervention

6000

4000

2110

2000 777

200 125 7 90

mt CE

A -

Poussage Séchage début Séchage fin

Making step ripening start ripening end

Figure 5 - Pollution de Fair par le P. /reguentans avant et aprös la mise en place de la

prévention.

gure 5 - Aerial contamination levels for P. frequentans before and after application of

prevention measures.

de poussage-ensemencement; - forme

cette opération de prévention.

ion et participation active du personnel à

Au cours de l'année qui a suivi la mise en place de ces dispositions, l'im-

portance des altérations fongiques à été réduite de plus de 80 %.

Dans la littérature (voir les mises au point de Benard £ Labie, 1977 et

de Moreau, 1978), de nombreux contaminants fongiques, parmi lesquels les

deux espèces étudiées sont relativement fréquentes, ont été relevés sur les

salaisons séches de viande il y a plus de 15 ans, principalement à l'étranger,

sans préciser les mécanismes et l'origine de ces contaminations. Il conviendrait

de vérifier, dans le contexte actuel de la technologie, sur l'ensemble de la pro-

duction quelle est la nature, la fréquence et l'importance de ces altérations. En

effet, à l'heure où l’on prône la qualité des denrées, la moindre altération (as-

pect, goût, innocuit ) jette le discrédit sur un type de produit.

Dans ce domaine de production agro-alimentaire, le P. nalgiovense ap-

paraît particulièrement adapté aux fonctions qui lui sont dévolues; en particulier,

il présente, comparativement aux contaminants examinés, une plus grande vites-

se de croissance, une plus large gamme de températures favorables et un opti-

mum de croissance à la concentration en sel utilisée. D'autre part, il empêche le

développement de moisissures indésirables si la contamination est nettement

postérieure à son implantation. Par contre, le pouvoir de compétition de la sou-

che utilisée est mis en défaut pour certaines contaminations précoces (P.

Jreguentans); aussi, un des éléments biologiques complémentaires de la

Prevention devrait étre la recherche de souche de "fleur" (P. nalgiovense, P.

chrysogenum) plus compétitives.

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DE LA BIOLOGIE DES HYPHOMYCÈTES AQUATIQUES

A L'ECOLOGIE DES RIVIERES

Eric CHAUVET

Centre d'Ecologie des Ressources Renouvelables (CNRS)

29, rue Jeanne Marvig, 31055 Toulouse Cedex.

RÉSUMÉ - Les hyphomycétes aquatiques sont distribués à travers le monde entier dans

les eaux continentales, principalement courantes. Ces champignons produisent de nom-

breuses conidies dont la morphologie est typiquement adaptée à la colonisation des sub-

strats submerges dans les rivières. La répartition des espèces et la composition des

communautés sont surtout influencées par la température et la qualité de l'eau, mais pro-

bablement aussi par d'autres facteurs tels que l'altitude et la nature de la végétation

riveraine. Les hyphomycètes aquatiques sont impliqués dans la décomposition des litiéres,

processus majeur du fonctionnement écologique des rivières. Ces champignons possédent

des enzymes de type cellulase, phénol-oxydase, pectinase, lipase, protéase et amylase. Leur

activité provoque le "conditionnement" et la macération du matériel végétal, entraînant à

la fois une assimilation accrue des litiéres par les invertébrés aquatiques et la libération

d'une matière organique particulaire fine.

ABSTRACT - Aquatie hyphomycetes are found throughout the world in continental,

mostly running waters. These fungi produce a great number of conidia whose morphology

is well adapted to the colonization of substrata submerged in streams. The distribution of

aquatic hyphomyeete species and the composition of communities are mainly influenced

by the temperature and the water quality of rivers, but are possibly controlled by other

environmental factors (e.g. the altitude and the nature of the riparian vegetation). Aquat-

ie hyphomycetes are involved in litter decomposition which is a key process in river func-

tioning. The enzymatic equipment of these fungi include cellulase, phenol oxydase, pecti-

nase, lipase, protease and amylase. Their activity cause the conditioning and the

maceration of plant matter resulting both in an enhanced assimilation by stream inverteb-

rates and in the release of fine particulate organic matter.

MOTS CLÉS : hyphomycètes aquatiques, décomposition, écologie, mycologie.

LES HYPHOMYCETES AQUATIQUES

L'étude des hyphomycètes aquatiques à connu un essor singulier après

les premiers travaux d'Ingold (1942) et, surtout dans le domaine écologique, de-

puis le début des années 1970 (Barlocher & Kendrick, 1974; Kaushik & Hynes,

1968, 1971; Suberkropp & Klug, 1976; Triska 1970). Dans le méme temps, des

progrès considérables ont été faits dans la connaissance systématique de ce

groupe de champignon et dans la découverte de nouvelles espèces. Ainsi, seule

une quinzaine d'espèces était connue il y a 50 ans alors que désormais prés de

300 espéces d'hyphomycétes aquatiques sont signalées à travers le monde, la

moitie d'entre-clles ayant été découverte au cours des dix dernières années

(Descals, comm. pers; Webster & Descals, 1981). Si plusieurs auteurs préfèrent

Source : MNHN. Paris

204 E. CHAUVET

parler de champignons Ingoldiens (Bärlocher, 1982; Webster & Descals, 1981)

c'est parce que le groupe de champignons étudié par Ingold correspond à une

certaine entité biologique et écologique, tandis qu'il est hétérogène du point de

vue systématique puisqu'il renferme de nombreux Champignons Imparfaits, des

Ascomycétes et quelques Basidiomycètes. En fait, on découvre régulièrement les

relations existant entre les stades anamorphes et téléomorphes de champignons

Ingoldiens. En 1979, Webster et Descals signalaient déjà douze espèces dont les

stades conidiens et sexuës avaient été mis en évidence. Depuis, de nouvelles

connexions ont été signalées (p. ex., Abdullah et al., 1981; Webster et al., 1991).

Dans ce sens, la classification actuelle des espèces anamorphes, basée sur la

différenciation des espèces et des genres par les caractères de la conidiogénèse et

de la morphologie conidienne, n'est pas satisfaisante et sera assurément

reconsidérée par les taxonomistes dans quelques années.

Caractères biologiques

La biologie de ces champignons est caractérisée par une sporulation ty-

piquement aquatique, bien que plusieurs cas de sporulation en milieu terrestre

aient été signalés (p. ex., Bandoni, 1981; Sridhar & Kaveriappa, 1987). Ainsi,

dans des boisements riverains plus ou moins éloignés de la riviére ces champi-

gnons peuvent être présents et même sporuler spontanément. Néanmoins les

conidies des champignons Ingoldiens présentent une morphologie particulière,

favorable à la colonisation des substrats aquatiques. Cette adaptation au milieu

aquatique est d'ailleurs l'un des elements permettant de définir les champignons

Ingoldiens (Descals & Chauvet, 1992). La morphologie conidienne la plus

caractéristique est le type tétraradié, représenté par le genre Lemonniera (p. ex.

L. centrosphaera Marvanovä, planche 1). Le second type le plus fréquent est la

forme sigmoïde, illustrée par Flagellospora curvula Ingold. Mais les conidies de

certaines espèces peuvent être également globuleuses, de forme ramifice

(Varicosporium giganteum Crane) ou de morphologie plus variée (Gyoerffvella

gemellipara Marvanovà, planche 1). L'illustration des conidies des espèces du

sud-ouest de la France (cf. Chauvet, 1990) suggére que l'identification peut être

facilement basée sur la morphologie conidienne. Mais si la distinction de nom-

breuses espéces est relativement aisée, la détermination de certaines d'entre-elles

requière l'isolement en culture pure et l'observation de la conidiogénèse.

Comparées aux spores de forme sphérique ou ovoide, la plupart des

conidies d'hyphomycétes aquatiques sont adaptées à la colonisation, c'est-à-dire

à une stabilisation et une germination rapides sur les substrats immergés (Read

et al., 1990; Webster, 1959; Webster & Davey, 1984). On a pu montrer en outre

que ces conidies étaient préférentiellement piégées dans l'écume qui flotte

fréquemment à la surface des cours d’eau (Iqbal & Webster, 1973). Ce

phénomene a élé mis en évidence chez des espéces aux conidies tétraradiées

dont les bras sont probablement attirés vers la surface des micro-bulles de

l'écume par des phénomènes de tension superficielle. Cependant l'écume de cer-

taines rivières renferme un faible pourcentage de grandes conidies tétraradiées

en comparaison des sporulations observées sur les litiéres dans le fond de ces

rivières (Chauvet, 1992) et présente à l'inverse une proportion élevée de conidies

vermiformes ou globuleuses (Anguillospora crassa Ingold, Goniopila monticola

(Dyko) Marvanova et Descals). La morphologie des conidies pourrait expliquer

ces différences de piégeage dans l'écume, mais l'origine des spores pourrait

également être en cause (p. ex., le bois flottant ou les litiéres terrestres en bordu-

re de riviére). Ces réserves étant formulées, la récolte d'écume reste une

méthode pratique d'échantillonnage des rivières. Il suffit de récolter l'écume à

laide d'une écumoire, par exemple, et de la fixer avec un mélange d'alcool,

Source : MNHN, Paris

HYPHOMYCETES AQUATIQUES 205

Planche 1 - Conidies d'hyphomycètes aquatiques (microscopie en contraste interférentiel,

échelle = 25um). a: Lemonniera centrosphaera (CERR 79.134). b: Flagellospora

curvula (CERR 30.137). c: Gyoerffvella gemellipara (CERR 30.75). d:

Varicosporium giganteum (CERR 29.81).

Plate 1 - Interference light micrographs of aquatic hyphomycetes conidia (bar = 254m).

a: Lemonniera centrosphaera (CERR 79.134). b: Flagellospora curvula (CERR

30.137). c: Gyoerffyella gemellipara (CERR 30.75). d: Varicosporium giganteum

(CERR 29.81).

d'acide acétique et de formol (Ingold, 1975) ou de la répartir simplement sur

une gélose pour un isolement ultérieur des espèces. Au moyen de cette techni-

que, nous avons pu identifier jusqu'à 59 espèces Ingoldiennes dans l'écume

d'une rivière de montagne (Descals & Chauvet, 1992).

Source : MNHN. Paris

206 E. CHAUVET

Distribution et habitat

L'identification relativement aisée de ces champignons a rendu possible

l'inventaire de nombreuses rivières dans différentes parties du monde et, par là

méme, le développement de certaines notions sur la distribution géographique

des espèces. Ces champignons sont répartis dans le monde entier, de nom-

breuses espéces communes de nos régions étant cosmopolites. D'aprés Wood-

Eggenschwiler & Bärlocher (1985), on peut distinguer trois types d'espèces, se-

lon leur distribution:

1°) des espèces à répartition mondiale, mais plus communes en région

tempérée froide comme Tetracladium marchalianum Ingold ou en région tropi-

cale comme Triscelophorus monosporus Ingold,

2°) des espèces à distribution latitudinale marquée comme Culicidospora

aquatica Petersen en zone tempérée ou Flabellospora verticillata Alasoadura en

zone tropicale.

3°) enfin, quelques espèces limitées à leur localité-type. Dans cette

catégorie se trouvent également les nombreuses espèces dont la distribution est

imparfaitement connue.

L'habitat des hyphomycètes aquatiques sous nos climats correspond ty-

piquement aux rivières forestières, oxygénées, fraîches et oligotrophes. C'est la

raison pour laquelle dans le sud-ouest de la France, par exemple, on les trouve

davantage en zone montagnarde qu'en région de plaine. Toutefois, ces champi-

gnons ont été également signalés dans des milieux aquatiques aussi variés que

les lacs, les étangs et les canaux, ainsi que dans les estuaires dont certaines

espèces semblent supporter la salinité (Sridhar & Kaveriappa, 1988). Si les

hyphomycètes aquatiques affectionnent les rivières oligotrophes, c'est proba-

blement parce qu'une forte augmentation des concentrations en nutriments

(nitrate et phosphate) peut favoriser d'autres microorganismes, comme les al-

gues et les bactéries, dominant la compétition avec les hyphomycètes. Nous

avons d'ailleurs observé qu'une eutrophisation des cours d'eau s'accompagnait

fréquemment d'une diminution du nombre d'espéces d'hyphomycétes.

Sous nos latitudes, la diversité spécifique est maximale pour des

températures de cours d'eau voisines de 10-15°C, alors que ces champignons

présentent des températures optimales de croissance en culture pure supérieures

de 10°C environ. Cette différence est sans doute la conséquence de compétitions

intenses dans le milieu naturel; Webster et al. (1976) citent un phenomene simi-

laire pour deux especes d'hyphomycetes dont la culture mixte présente un opti-

mum abaissé de 15°C par rapport à ceux des cultures pures. Cette capacité des

hyphomycétes de se développer à basse température leur permet d'occuper une

niche écologique particulière et représente une stratégie d'adaptation. Cet effet

de la température est apparu nettement dans une étude sur la distribution des

communautés dans le sud-ouest de la France (Chauvet, 1991). Dans une analy-

se factorielle des correspondances basée sur l'abondance relative des espèces,

celles-ci étaient réparties en deux groupes en fonction d'un gradient de la

température. Le plus petit de ces groupes renfermait des espèces comme

Lunulospora curvula Ingold et Triscelophorus monosporus, caractéristiques des

régions tropicales et apparaissant dans notre région seulement dans les cours

d'eau de plaine et au cours de la période la plus chaude de l'année.

D'une facon générale, la qualité de l'eau peut influencer la composition

des communautés d'hyphomycétes. Plusieurs travaux tendent à montrer qu'un

pH faiblement acide est favorable à une diversité spécifique maximale et que le

Source : MNHN, Paris

HYPHOMYCETES AQUATIQUES 207

nombre d'espèces d'hyphomycètes diminue nettement lorsque le pli des rivières

s'élève au-dessus de 7 (Bärlocher, 1987; Wood-Eggenschwiler £ Bärlocher,

1983). D'autres facteurs, plus ou moins liés au pH, sont probablement impliqués

(alcalinité el teneur en calcium de l'eau, géologie du substrat, nature de la

végétation riveraine) sans qu'il soit toujours possible dans les conditions natu-

relles de déterminer l'influence respective du pli et de chacun de ces facteurs

(Suberkropp, 1992a).

Dans la plupart des rivières et à toutes saisons, un inoculum potentiel

constitué de quelques conidies d'hyphomycètes est véhicule par le courant. Dans

les heures et les jours qui suivent la chute des litières dans le cours d'eau, ces

liüéres vont être rapidement colonisées. Pour plusieurs espèces, 30 minutes suffi-

sent pour que les conidies commencent à germer (Read et al, 1990). Le

mycelium est produit a la surface et à l'intérieur des tissus foliaires et aprés une

à deux semaines environ les premiers conidiophores apparaissent et commen-

cent à libérer les conidies en grand nombre. Pour exemple, une rondelle de

feuille de diamètre 1 em peut porter jusqu'à 100 000 conidies de différentes

espèces après deux à trois semaines d'incubation. C'est évidemment à cette

période, généralement vers la fin de l'automne, que l'on trouvera le plus de

conidies dans la riviere (jusqu'à plusicurs milliers ou dizaines de milliers par li-

tre d'eau). Cette augmentation. d'activité forte et. extremement rapide des

hyphomycétes aquatiques est consécutive à l'apport de feuilles mortes. La chro-

nologie de ce cycle est influencée par la phénologie des forêts riveraines et varie

donc en fonction de la latitude.

IMPLICATIONS DANS L'ECOLOGIE DES RIVIERE

Si les hyphomycétes occupent une place à part parmi les champignons

aquatiques du fait du nombre considérable de travaux qui leur sont consacrés,

c'est parce qu'au cours des vingt dernières années l'importance fondamentale de

ce groupe de champignons dans le fonctionnement des rivières est devenue de

plus en plus évidente.

Dès 1912, Thienemann avait montré l'importance de la matière organi-

que d'origine terrestre dans le fonctionnement des écosystèmes d'eau courante.

Plus tard, les travaux de Hynes (1963) et de Minshall (1967, 1968) allaient.

contribuer à préciser et illustrer ce róle fondamental. En référence à ces études,

de nombreux chercheurs se sont alors engagés à définir la part prise par cette

matière organique allochtone dans le bilan énergétique des rivières. Ces études

Sont généralement limitées aux petits cours d'eau, particuliérement en rai

la difficulté à aborder un système vaste et complexe de grande rivière. On estime

qu'en moyenne 500 g m? de matériel allochtone, dont 70% de feuilles mortes,

arrivent annuellement dans les petits cours d'eau forestiers (Bird & Kaushik,

1981). Naturellement cet apport est très variable selon les rivières: en milieu

désertique ou prairial, il devient faible voire négligeable en comparaison des

Sources de matière organique autochtone. On considère par contre que les ap-

ports de litière représentent 50 à 90% du bilan énergétique des petits cours

d'eau forestiers. Ainsi les rivières de faible dimension apparaissent fondamen-

lalement de nature hétérotrophe, contrairement aux rivières plus importantes

qui sont autotrophes. Dans les premières, la production primaire aquatique

limitée par l'ombrage des rives est négligeable devant l'importance des apports

terrestres; dans les secondes, la largeur du lit augmentant, l'importance de la

végétation riveraine comme source d'énergie diminue devant celle de la matière

organique autochtone représentée par les algues et les plantes aquatiques

Source : MNHN, Paris

208 E. CHAUVE

(Cummins, 1979; Fisher & Likens, 1973; Hynes, 1970, 1975). La théorie du

continuum fluvial (Vannote ct al., 1980) précise que les trés grands fleuves peu-

vent revenir à l'hétérotrophie en raison d'une forte turbidité limitant la produc-

tion primaire; les sources d'énergie correspondent alors essentiellement aux fines

particules de matière organique venant de l'amont. Quelques études prouvent

que le rôle des litières dans le fonctionnement des rivières n'est pas seulement

alimentaire mais que le bois, les branches, les brindilles et les écorces assurent

également la stabilité du lit et des berges et procurent des substrats et des abris

pour les invertébrés et les poissons.

Les travaux de Kaushik & Hynes (1971) et de Petersen & Cummins

(1974) ont montré que la décomposition des feuilles mortes dans les rivières suit

schématiquement trois étapes: (1) une courte période de perte de composés

hydrosolubles par lessivage, (2) une phase de colonisation par les bactéries et les

champignons conduisant au “conditionnement” des litières, (3) une période de

fragmentation et d'assimilation par les invertébrés aquatiques. Les avis divergent

quant à l'incidence réelle de ces invertébrés sur la dégradation de la litière

immergée. En revanche il est certain que cette matière organique terrestre

constitue, sous différentes formes, la base de l'alimentation de la majorité des

peuplements d'invertébrés des rivières. Merritt & Cummins (1984) ont ainsi

classé les taxons d'insectes aquatiques en groupes fonctionnels, en rapport avec

leurs source et mode d'alimentation et l'utilisation des détritus de différentes di-

mensions. Ces relations sont illustrées dans de multiples travaux (cf. Anderson

& Sedell, 1979). La plupart des études soulignent l'importance d'une

“préparation” des litiéres par les microorganismes avant toute colonisation et as-

similation par les invertébrés benthiques.

C'est dans ce contexte que les hyphomycètes aquatiques ont reçu l'atten-

tion des écologistes en raison de leur rôle déterminant dans le processus de

décomposition. En fait, les travaux des vingt dernières années suivent glo-

balement deux grandes orientations correspondant aux deux mécanismes d'in-

tervention de ces champignons: une activité directe transformant les litières en

matière organique particulaire, en composés dissous et en CO, et une activité in-

directe, de “conditionnement” permettant la dégradation des litiéres par les

invertébrés (figure 1). Ceci est évidemment une simplification car les deux pro-

cessus se superposent généralement et interagissent mème très étroitement dans

la nature.

Les hyphomycètes aquatiques, en tant que décomposeurs

C'est seulement récemment que les hyphomycétes aquatiques ont ete

considérés comme des décomposeurs à part entière. En employant les méthodes

adéquates on a pu mettre précisément en évidence leur abondance et leur

activité sur les litiéres, Au moyen d'une technique chromatographique, Gessner

(1991) a estimé la biomasse des hyphomycétes aquatiques sur les litiéres par do-

sage de l'ergostérol, stérol spécifique. des champignons. Des teneurs en

ergostérol variant entre 3 et 10 m2 par g de biomasse fongique ont été relevées à

partir de différentes souches d'hyphomycètes cultivées en laboratoire. La combi-

naison de ces chiffres et des concentrations en ergostérol mesurées sur les litières

indique que la biomasse fongique représente jusqu'à 10% de la masse des

feuilles mortes en décomposition dans une rivière (Gessner & Schwoerbel,

1991). Une telle importance n'avait encore jamais été démontrée dans les

rivières; d'un point de vue strictement pondéral, les hyphomycètes aquatiques

représenteraient ainsi le premier groupe associé aux litiéres, bien avant les

Source : MNHN, Paris

HYPHOMYCE

ES AQUATIQUES 209

hyphomycètes

aquatiques

hyphomycètes

aquatiques invertébrés

benthiques

Figure 1 - Modèle simplifié d'intervention des hyphomycètes aquatiques dans la

décomposition des litiéres

Figure 1 - Simplified model of aquatic hyphomycetes involvement in litter decomposition

invertébrés aquatiques. Cette importance de la biomasse fongique a d'ailleurs été

Souvent mise en évidence dans les sols.

En dehors des études montrant l'importance quantitative des

hyphomycetes, plusieurs travaux ont été directement consacrés à l’activité

enzymatique de ces champignons (cf. Hasija-& Singhal, 1991). Le matériel

vegetal en décomposition dans les milieux aquatiques est caractérisé par

différents constituants en proportions variables et présente en particulier un fort

Pourcentage de deux groupes de polymères réfractaires, la cellulose et la lignine.

La décomposition de la cellulose par les hyphomycétes a éte largement étudice.

Les enzymes de type endoglucanase ont été détectés à plusieurs reprises chez de

nombreuses espè (tableau 1). La dégradation de différents polysaccharides

(anthane, lichenane, xylane, mannane, mannose, carraghénane, cellobiose) a

“te signalée chez certaines souches d'hyphomycètes (Suberkropp et al., 1983;

Zare-Maivan & Shearer, 1988; Zemek et al., 1985). Quelques travaux, par des

méthodes différentes, mettent en évidence une dégradation de la lignine par les

hyphomycétes aquatiques. Fisher et al. (1983) ainsi que Zare-Maivan & Shearer

(1988) ont montré une déphénolisation partielle de lignines synthétiques par cer-

taines espèces tandis que Zemek et al. (1985) décrivent une activité ligninasique

Source : MNHN, Paris

210 E. CHAUVET

chez la plupart des hyphomycètes testés. La dégradation de l'acide tannique est

l'indice d'une activité polyphénol-oxydasique, responsable de la dégradation de

la lignine par ces champignons (Abdullah & Taj-Aldeen, 1989; Zarc-Maivan &

Shearer, 1988). Les parois cellulaires du matériel végétal sont composées en

grande partie de substances pectiques dont la dégradation est responsable de la

macération des litières. Les deux enzymes de la pectinolyse mis en évidence chez

les hyphomycétes aquatiques sont la pectine-lyase et la polygalacturonase. On a

également détecté chez ces champignons une activité dans la dégradation d'au-

tres constituants de la matière végétale: protéines, lipides et amidon (tableau 1).

Celluloses, hémicelluloses et polysaccharides: 1, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15

Lignines et phénols: 1, 7, 14, 15.

Pectines: 2, 3, 4, 6, 10, 12, 13, 14, 15

Lipides: 1, 14.

Proteines: 1, 12, 14.

Amidon: 1, 6, 14, 15.

1: Abdullah & Taj-Aldeen (1989). 2: Butler & Suberkropp (1986). 3: Chamier & Dixon

(1982). 4: Chamier et al. (1984). 5: Chauvet & Merce (1988). 6: Danninger et al. (1979). 7:

Fisher et al. (1983). 8: Jones (1981). 9: Singh (1982). 10: Suberkropp & Klug (1980). 11:

Suberkropp & Klug (1981). 12: Suberkropp et al. (1983). 13: Suberkropp & Arsuffi

(1984). 14: Zare-Maivan & Shearer (1988). 15: Zemek et al. (1985).

Tableau 1 - Constituants végétaux dégradés par les hyphomycètes aquatiques, d'après la

littérature.

Table | - Plant matter constituents degraded by aquatic hyphomycetes, according to the

literature.

Le mécanisme de décomposition des litières sous l'action des

hyphomycètes aquatiques a été particulièrement mis en évidence par

Suberkropp & Klug (1980). Aprés quelques semaines de développement du

mycélium sur des feuilles mortes, l'activité enzymatique est maximale. Le

parenchyme foliaire est alors maceré, ramolli (en particulier sous l'action des

pectine-lyases) ce qui entraine la libération d'une matière organique particulaire

fine constituée de cellules vegetales, de fragments mycéliens et de spores. A ter-

me, ceci aboutit à la "squelettisation^ des feuilles mortes dont les nervures res-

tent peu dégradées. Il semble par ailleurs qu'un pH et une teneur en calcium

élevés dans le milieu soient favorables à celte activité enzymatique et à la

maceration des litieres (Chamier & Dixon, 1982; Suberkropp & Klug, 1980).

Ainsi l'activité de ces champignons serait plus grande dans les rivières aux eaux

alcalines.

Suberkropp (1991) a montré que les taux de sporulation des

hyphomycètes aquatiques (in vitro sur deux espèces et in situ sur les

communautés de deux rivières) étaient maximaux aprés une période

d'incubation de 15 4 19 jours. Ceate augmentation de la sporulation s'accompa-

gnait corrélativement d'un accroissement de la biomasse et des taux de respi-

ration fongique. Ceci dénote une activité particulièrement rapide de ces champi-

gnons dont le cycle sur les litiéres peut être bouclé en deux à trois semaines

seulement.

Les hyphomycétes aquatiques; maillon des réseaux trophiques

En produisant une matière organique en fines particules à partir des

litiéres en. décomposition, l'activité des hyphomycétes aquatiques. permet l'ali-

Source : MNHN, Paris |

HYPHOMYCETES AQUATIQUES 211

mentation des invertébrés collecteurs et collecteurs-filtreurs qui abondent dans le

cours moyen des riviéres. La théorie du continuum fluvial (Vannote et al., 1980)

précise en effet que les communautés d'invertébrés sont organisées et distribuées

le long des cours d'eau de façon optimale du point de vue de l'utilisation de

l'énergie. C'est ainsi que la partie moyenne des cours d’eau, collectant les nom-

breuses particules végétales provenant de la décomposition des litières des pe-

lites riviéres de l'amont, est caractérisée par des peuplements d'invertébrés

adaptés à l'assimilation de ces fragments végétaux transformés et enrichis par

tivité microbienne. Ces invertébrés collectant les particules sur le fond de la

rivière ou les filtrant dans l'eau au moyen de divers dispositifs dépendent indi-

rectement de l'activité des hyphomycétes aquatiques.

Mais c'est davantage à l'effet de conditionnement avant une assimilation

par les invertébrés dilacérateurs que les écologistes font référence en placant les

hyphomycètes aquatiques comme des ‘intermédiaires’ dans les flux d'énergie

dans les riviéres (Barlocher & Kendrick, 1976). Nous savons que l'apport de

litière est maximal dans la partie amont des réseaux hydrographiques. Dans ces

petits cours d'eau, les communautés d'nvertébrés sont dominées par les

dilacérateurs qui ont la capacité de découper, déchiqueter, broyer les litières et

peuvent assimiler de grands fragments végétaux. Au cours des premiers jours et

des toutes premières semaines de la décomposition, quand les litières ne sont

pas encore désintégrées mais que la biomasse fongique est bien développée, les

invertébrés dilacérateurs ont une activité maximale sur les feuilles mortes. De

nombreuses expériences ont montré que ces invertébrés préféraient les feuilles

conditionnées par les champignons à des feuilles non colonisées. On a même

Jécelé une préférence des gammares et des trichoptéres pour certaines espèces

fongiques (Bárlocher & Kendrick, 1973; Butler & Suberkropp, 1986;

Suberkropp et al., 1983). Des expériences montrent que ceux-ci sont capables

de choisir et de se nourrir sélectivement sur les parties de la feuille colonisées

par telle ou telle espèce fongique. En modifiant la qualité alimentaire des litiéres,

les hyphomycétes aquatiques peuvent en outre affecter les taux de croissance des

invertébrés. On constate généralement que le mycélium de ces champignons est

assimilé plus efficacement que la litière non conditionnée et que les taux d'assi-

milation varient selon les espèces d'hyphomycétes. Cependant, si la biomasse

fongique contribue directement à la nutrition des invertébrés dilacérateurs, sa

par! précise dans leur alimentation reste difficilement appréciable (Suberkropp,

1992b). En consommant les litières, les invertébrés peuvent en retour contrôler

le développement des hyphomycétes et les relations existant entre les deux grou-

pes d'organismes s'apparentent alors à des phénomènes de compétition

(Bárlocher, 1980).

Ainsi, la colonisation fongique provoque non seulement la dégradation

des polymères réfractaires et leur transformation en unités plus petites, mieux

assimilables, mais elle permet aussi d'associer aux litières une quantité de

protéines fongiques (et donc d'azote) trés intéressante pour le métabolisme des

invertébrés aquatiques. Les hyphomycètes aquatiques constituent le maillon in-

dispensable entre, d'une part, l'apport de litière qui constitue la source princi-

pale d'énergie pour la riviére et, d'autre part, les invertébrés aquatiques et avec

cux tout le reste de la chaine alimentaire. Ainsi cette fonction d'intermédiaire

des hyphomycétes aquatiques apparait essentielle au recyclage des éléments et

labolisme général de l'écosystéme.

Source : MNHN, Paris

212 E. CHAUVET

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DIVERSITÉ ULTRASTRUCTURALE DE LA PAROI

ASCOSPORALE CHEZ QUELQUES EUPYRENOMYCETES

BELLEMÉREU, MC. JANEX-FAVREO), LM. MELEND

et A. PARGUEY-LEDUCO?

(1) 53 Jardins Boieldieu, 92800 Puteaux.

(2) Laboratoire de Cryptogamie, Université Pierre et Marie Curie

(Paris VI), Boite 33, 7 Quai Saint-Bernard

15252 Paris Cedex 05.

(3) C.N. R5. - Laboratoire de Cryptogamie du Muséum National

d'Histoire Naturelle, 12 rue Buffon - 75005 Paris.

RÉSUMÉ - Le développement de la paroi ascosporale est examiné en microscopie

lectronique chez des Eupyrénomycétes a ascospores lisses, ornementées ou pourvues

dappendices, appartenant å divers ordres: Diaporthales (Melanconidaceae: Hercospora:

Valsaceae: Diaporthe, Gnomonia, Leucostoma; inc, sedis’ Caudospora), Diatrypales

(Diatrypaceae: Diatrype, Diatrypella), Sordariales (Coniochaetaceae: | Coniochaeta:

Lasiosphaeriaceae: piosordaria, Lacunospora, Podospora, Sordariaceae: Gelasinospora,

Neurospora, Sordaria) et une Xylariale (Xylariaceae: Hypoxylon). Bien que se rattachant à

un meme plan structural, la paroi ascosporale présente des Variantes (différences de

développement et de structure de certaines couches) qui peuvent parfois aboutir à des

convergences (forte épaisseur de la paroi, réalisation d'une ornementation). La valeur de la

structure de la paroi ascosporale, en tant que critère systématique, est discutée.

ABSTRACT - Ultrastructural wall development in smooth, ornamented or appendage-

bearing ascospores is studied in some Eupyrenomycetes related to different orders: Dia-

porthales (Melanconidaceae: Hercospora, Valsaceae: Diaporthe, Gnomonia, Leucostoma:

inc. sedis: Caudospora), Diatrypales (Diatrypaceae: Diatrype, Diatrypella); Sordariales (Co-

niochaetacea Coniochaeta; Lasiosphaeriaceae: Apiosordaria, Lacunospora, Podospora;

Sordariaceae: Gelasinospora, Neurospora, Sordaria) and one Xylariale (Xylariaceae: Hy-

poxylon). Diversity in the ascospore wall edification appears as variations of a common

Structural pattern. It depends on differences in development and structural constitution of

several layers. Convergences exist relative to wall thickness and ornamentation, The value

of ascospore wall structure as systematic criterion is discussed.

MOTS CLÉS : Eupyrénomycetes, ascospores, paroi, ultrastructure,

Les Eupyrénomycétes constituent un vaste groupe d'Ascomycètes (envi-

Ton 10 ordres et 20 familles) caractérisés: 1. par des fructifications à asques

ascomas = ascocarpes) comportant des ascothécies (Chadefaud, 1944, 1960;

Parguey-Leduc, 1967a et b) incluses dans un stroma ou dans une mince enve-

loppe stromatique; 2. par des asques toujours unituniqués. Dans ce groupe,

l'étude fine de la structure de la paroi ascosporale a, jusqu'à présent, été

effectuée trés inégalement selon les ordres et le plus souvent sans que des vues

Synthétiques aient été dégagées. Des données nouvelles ou complémentaires sont

apportées ici chez plusicurs genres appartenant à quatre ordres (Diaporthales,

Source : MNHN, Paris

216 A. BELLEMERE et al.

Diatrypales, Sordariales ct Xylariales) et quelques idées d'ensemble concernant

la structure fine de la paroi ascosporale sont dégagées.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Ce travail a été effectué à partir d'échantillons récoltés dans la nature ou

obtenus en culture. Les espèces étudiées sont les suivantes:

Apiosordaria verruculosa (Jensen) Von Arx et Gams, espèce type du genre

(Lasiosphaeriaceae). Souche LCP (mycothéque MNHN Paris) n^ 2403

Caudospora taleola (Fr.) Starbáck, espéce type du genre (Diaporthales inc.

sed.). Sur brindilles de Quercus (Normandie)

Coniochaeta ligniaria (Grev.) Cooke, espéce type du genre (Coniochaetaceae).

Sur crottes (provenances diverses)

Diaporthe oncostoma (Duby) Fuck. (Valsaceae). Sur Robinia (Franche-Comté)

Diatrype. disciformis (Moffm.: Fr.) Fries, espéce type du genre (Diatrypaceae).

Sur Fagus (Alpes)

Diatrypella quercina (Pers

Fr.) Cooke (Diatrypaceae). Sur Quercus (Charentes)

Gelasinospora santiflorii Cailleux (Sordariaceae). Souche LCP n° 2391

Gelasinospora tetrasperma Dowding (Sordariaceae). Souche LCP n” 2319

Gnomonia leptostyla (Fr.) Ces. et de Not. (Valsaceae). Sur Juglans (Charentes),

mis en culture au Laboratoire de Cryptogamie de Toulouse

Hercospora tiliae (Pers: Fr.) Tul., espèce type du genre (Melanconidaceae). Sur

Tilia (Ile-de-France)

Hypoxylon fragiforme (Pers. ex Fr.) Kickx (Xylariaceae). Sur Corylus (Alpes)

Lacunospora stercoraria Cailleux, espèce type du genre (Lasiosphaeriaceae).

Souche LCP n” 2401

Leucostoma nivea (Pers: Fr.) von Höhnel (Valsaceae). Sur Populus nigra

(Alpes)

Neurospora crassa Shear et Dodge (Sordariaceae). Souche LCP n° 251

Podospora anserina (Ces.) Niessl. (Lasiosphaeriaceae). Souche LCP n° 2426 et

sur crottes d'ane (Alpes)

Sordaria fimicola (Rob.) Ces. et de NoL, espéce type du genre (Sordariaceae).

Souche LCP n° 1126

Sordaria prolifica Cailleux (Sordariaceae). Souche LCP n° 2353

Pour les études en microscopie électronique par transmission, des frag-

ments d'hymenium ont été traités par les méthodes classiques: double fixation

par le glutaraldehyde a 6% et le tétroxyde d’osmium a 2, avec tampon de

Sorensen, inclusion dans la résine de Spurr (1969). Les coupes effectuées à l'ai-

de d'un ultra microtome Reichert OMU 3, ont été contrastées par l'acétate

d'uranyle et le citrate de plomb (18 minutes) ou traitées par la technique de

Thiéry (= réaction Patag, 1967). Les observations en microscopie électronique

Les données systématiques suivent Eriksson & Hawksworth (1991)

Source: MNHN Par]

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCI:

217

ont été faites à l'aide d'un microscope Philips 30.15 ou d'un Jeol JM 7, sous

tension de 80 KV.

RESULTATS

On sait que, d'une façon générale, la paroi ascosporale se développe en-

ire les deux feuillets de la vésicule ascale; d'abord très mince (stade primordial),

elle s'épaissit progressivement tout en restant homogène (stade primaire), puis

ultérieurement elle se subdivise (stade secondaire) et sa structure se complique.

En raison de l'hétérogénéité de la terminologie utilisée par les auteurs, l'exposé

des faits devient alors délicat. Ayant employé nous-mémes certains termes

différents dans nos publications antérieures, nous proposons ici un schéma (fig.

1) faisant apparaitre les équivalences de terminologie, en vue de faciliter la

compréhension de l'exposé. Celui-ci concernera d'abord les genres où la structu-

re de la paroi ascosporale est la plus simple, non ornementée à périspore

développée, puis on envisagera ensuite des structures plus complexes: paroi non

"rmementée pourvue d'une endospore, puis paroi ornementée, avec ornemen-

lation d'origine diverse; le cas des ascospores à appendices sera enfin aborde,

I - Paroi ascosporale non ornementée à périspore développée

Ce type de paroi a été observé chez des Diatrypales et des Diaporthales.

Chez les Diatrypales Diatrype disciformis et Diatrypella quercina la

première couche différenciée est la périspore (fig. 2 et 3), résultant de

l'épaississement de la paroi primaire par écartement de son feuillet externe, qui

devient l'ectospore; l'épaisseur de la périspore est irrégulière et sa surface

présente, en coupe, des ondulations d'ampleur variable. Alors que la paroi pri-

maire est transparente aux clectrons, la périspore contient, dés sa formation, un

réseau plus où moins lâche de fibrilles contrastšes et reactives au test de Thiery,

donc de nature polysaccharidique. Au stade adulte (fig. 4 et 5), la périspore s'est

fortement épaissie et l'ectospore limitante n'est plus sinueuse. Une nouvelle cou-

che, l'épispore, s'est différenciée à la base de la périspore: elle est peu épaisse,

Ieulière et opaque aux électrons. Ces trois couches ont le même aspect chez

Quaternaria (= Eutypella) quaternata (Griffiths, 1973).

De légères variantes de la structure simple décrite ci-dessus ont été

lencontrées chez des Diaporthales. Chez la Mélanconidacée Hercospora tiliae

(ig. 6) la périspore est moins volumincuse et l'ectospore trés contournée, tandis

que l'épispore est relativement épaisse. Chez la Valsacée Diaporthe oncostoma

(lig. 7) la. périspore est encore plus réduite, voire même interrompue par en-

droits, et corrélativement l'épispore, relativement claire, devient prépondérante.

Chez Diaporthe eres, il semble, d aprés un cliché de Griffiths (1973) montrant

seulement un fragment d ascospore, qu une couche supplémentaire existe sous la

Périspore, qui est irrégulière et contient un réseau fibrilleux, Chez une autre

Valsacée, Leucostoma nivea (fig. 8), la périspore, contrairement à celle des cas

Précédents, ne contient pas de réseau polysaccharidique et l'épispore, réactive et

Peu épaisse, est particulièrement sinueuse:; lorsque les ascospores sont très pro-

ches les unes des autres dans l'asque leurs périspores confluent entre elles.

Source : MNHN. Paris

218 A. BELLEMÈRE et al

II - Paroi ascosporale non ornementée pourvue d’une endospore

Ce type de paroi ascosporale a été observé chez quelques Sordariales.

Avant de le décrire il est nécessaire de préciser la notion d'endospore.

a) l'endospore n'est pas une différenciation tardive de la partie basilaire

de la paroi propre (= épispore, souvent appelée “primary wall” par les auteurs

anglo-saxons, méme dans des ascospores âgées).

b) le matériel de l'endospore, produit par le plasmalemme, se dépose en-

tre celui-ci et la paroi propre. Il résulte d'une modification brutale du matériel

synthétisé dans la phase précédente ou représente un matériel nouveau, produit

après une interruption dans le fonctionnement du plasmalemme. Par suite, il y a

toujours un net hiatus fonctionnel ou structural, et de ce fait une limite net-

tement tranchée, entre la paroi propre et l'endospore. Initialement homogène et

transparente aux électrons, celle-ci peut subir ensuite une différenciation, sou-

vent brutale, qui entraîne sa subdivision en deux parties superposées, l'une pro-

fonde, reposant sur le plasmalemme, récente et indifférencice ct l'autre externe,

nettement différenciée.

A. Genre Sordaria (Sordariaceae)

Dans ce genre les ascospores unicellulaires, sombres, ont une paroi lisse

et sont pourvues d'un pore germinatif postérieur. Chez S. fimicola et chez une

espèce voisine S. prolifica Ia paroi de la jeune ascospore (fig. 9 et 12) comporte

une paroi propre transparente aux électrons et une périspore plus réactive, dont

la limitante externe est faiblement sinueuse. La périspore est finement granu-

leuse chez S. fimicola et plus hétérogène chez S. prolifica, où sa base forme au

contact de la paroi propre une mince couche plus réactive.

Un peu plus tard (fig. 10) la paroi ascosporale est plus complexe. A sa

surface la périspore comporte une nouvelle couche, externe, réduite à des ilots.

La paroi propre est également subdivisée et l'endospore commence à s'ébaucher

dans l'espace périplasmique. Quand l'ascospore est plus âgée (fig. 11 et 13), la

périspore externe, érodée, n'est plus distincte et l'endospore, plus importante,

comprend deux parties dont l'externe seule est reactive.

Cette endospore n'a pas été observée chez 5. fimicola par Furtado &

Olive (1970) qui n'ont étudié que des ascospores jeunes, mais elle est figurée

avec la denomination de “primary wall’ par Mainwaring (1972); chez 5.

brevicollis les deux couches de l'endospore sont visibles mais ne sont pas

interprétées comme telles par Hackett & Chen (1976).

B. Genre Podospora (Lasiosphaeriaceae)

Dans ce genre les ascospores adultes sont bicellulaires, comportant typi-

quement une volumineuse cellule apicale à paroi lisse et brune, pourvue d'un

pore germinatif et une petite cellule basale lisse et hyaline (= appendice primai-

re). Le P. anserina étudié ici possède des appendices secondaires gélatineux qui

seront examines plus loin.

A un stade proche de la maturation la paroi ascosporale de la cellule

sombre de P. anserina comprend (fig. 14) une périspore, une paroi propre et

une endospore d'importance équivalente. La périspore, assez claire, renferme de

très nombreuses fibrilles courtes, plus ou moins réactives et en majorité

disposées sub-tangentiellement. La paroi propre comporte deux couches: l'exter-

ne claire et finement granuleuse, l'interne plus épaisse et fortement réactive.

L'endospore est aussi formée de deux couches; l'externe est hétérogéne (texture

Source : MNHN, Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCE

219

de fond très fine et plages plus claires contenant des granules réactifs) et l'inter-

ne, moins épaisse et dépourvue de granules, présente à la base une mince cou-

che réactive.

Dans l'ascospore plus âgée (fig. 15) la périspore est en partie érodée tan-

dis que sa couche basilaire s'est développée. A la maturité de l’ascospore (fig.

16) la périspore est encore plus réduite; une délimitation trés nette s'établit entre

les deux couches de l'endospore, dont la plus interne peut prendre un

développement considérable (fig. 17).

L'architecture de la paroi observée ici chez P. anserina cst conforme à

celle figurée par Beckett et al. (1968) mais notre interprétation diffère puisque

ces auteurs considérent l'endospore comme le “primary wall” et la paroi propre

comme le "tertiary wall", la périspore correspondant au "secondary wall".

C. Genre Coniochaeta (Coniochaetaceae)

Dans ce genre les ascospores sont unicellulaires, sombres et pourvues

d'une fente germinative; clles n'ont pas été étudiées jusqu'à présent en

microscopie électronique.

Chez C. ligniaria la paroi ascosporale relativement jeune (fig. 18) com-

porte une épispore mince et répuliére, opaque, une volumineuse périspore,

d'épaisseur très irrégulière et contenant des fibrilles peu contrastées. sans orien

lation privilégiée. L'ectospore, habituellement régulière, devient sinucuse lors-

qu'elle entre en contact avec la paroi de l'asque ou celle d'une autre ascospore.

L'espace périplasmique, clair, est encore bien visible entre le plasmalemme ct

l'épispore. — Lltérieurement du matériel parictal s'y accumule, formant une

endospore. Au stade adulte (fig. 19) celle-ci est importante, régulière, opaque et

probablement trés dure, car elle est difficile à obtenir intacte sur les coupes:

l'épispore, toujours opaque, s'est épaissie tandis que la périspore a régressé.

Le C. ligniaria présente donc une paroi ascosporale d'un type analogue

à celle des Sordaria et Podospora, mais l'endospore y est formée d'une seule

couche.

III - Paroi ascosporale ornementée

L'ornementation de la paroi ascosporale tire son origine soit de la

périspore, soit de l'exospore.

A. Ornementation d’origine périsporale

iales)

L. Genre Hypoxylon (Xylariaceae, Xyl

Les ascospores, uni- ou bicellulaires, claires ou sombres, possèdent une

fente germinative. Leur paroi présente une grande diversité, ce qui a conduit

Rogers (1979) à distinguer les types suivants: - lisse chez H. rubiginosum (bien

que Greenhalgh & Evans, 1968, aient observé chez cette espèce, en microscopie

å balayage, des rides transversales peu saillantes); - ponctuée ou réticulée chez

des Hypoxylon à paroi claire; - stri¢e longitudinalement chez H. weldenii et H.

chestersii; - gélifiée chez H. terricola. L'espèce étudiée ici, H. fragiforme, a des

ascospores unicellulaires sombres et ornementées.

La paroi d'une jeune ascospore (fig. 21) est une paroi primaire épaissie

irréguliérement en une perispore, a contenu peu contraste, limitée par une

ectospore nettement réactive. Quand l'ascospore est un peu plus âgée (fig. 22), la

Source : MNHN, Paris

220 A. BELLEMERE et al.

périspore, plus épaisse, présente des boursouflures; dans son contenu finement

fibrilleux s/accumule un matériel fortement opaque, sous forme de plaques

disposées à une même distance du plasmalemme; par suite la périspore est

subdiviste en deux parties. La partie interne est régulière et la partie externe,

au-delà des plaques, discontinue. L'ectospore, appliquée alternativement sur les

plaques et sur la périspore externe est de ce fait fortement sinueuse.

Ultéricurement (fig. 23), les plaques confluent et leurs marges s'infiltrent dans la

périspore, constituant l'ébauche de l'ornementation qui, sur les coupes, forme

des festons irréguliers.

A un stade plus ágé (fig. 24) les bases des festons tendent å se rejoindre:

l'ornementation de la paroi est alors constituée par une couche épaisse réactive

contenant des masses oculiformes plus claires réparties irréguliérement. Elle es

recouverte par la mince couche externe claire de la périspore, limitée

extérieurement par l'ectospore. Sous la périspore deux nouvelles couches,

Võpispore et endospore, se sont mises en place, contribuant à l'épaississement

de la paroi ascosporale. La première est mince et sombre, à texture finement

granuleuse. La seconde, au-dessous, est beaucoup plus épaisse et subdivisée en

une partie supérieure claire et une partie inférieure sombre, séparées par une

couche de granules très réactifs de taille irrégulière.

Ce mode de formation de l'ornementation de H. fragiforme diffère quel-

que peu de celui observé chez la même espèce par Greenhalgh & Fvans (1968)

dont les clichés montrent la présence, dans la périspore externe, de nodules gra-

nuleux, puis de fibrilles qui englobent ceux-ci et sont orientées plus où moins

perpendiculairement à l'ectospore. Chez une autre espèce, H. gillesii, Vornemen-

lation de la paroi ascosporale est du méme type (Rogers & Candoussau, 1982);

au stade terminal elle devient superficielle par disparition de la périspore et de

l'ectospore, ce qui concorde avec la présence, observée en microscopie à ba-

layage, de bourrelets disposés transversalement et parfois anastomosés en réseau

autour de l'ascospore.

2. Genre Gnomonia (Valsaceae, Diaporthales)

Dans ce genre les ascospores sont hyalines, généralement bicellulaires et

parfois pluricellulaires; elles n'ont pas été étudiées jusqu'à présent en

microscopie électronique.

Chez G. leptostyla la paroi de l'ascospore presque müre, bien que peu

épaisse, comporte plusieurs couches. De l'intérieur vers l'extérieur on observe

(fig. 20): une endospore assez épaisse, formée de méches radiales; une épispore

plus mince et fortement opaque, à laquelle se rattachent les mèches; une

périspore complexe comportant dans sa partie moyenne des plaques sombres

qui tendent à confluer et qui sont comparables à celles observées chez

Hypoxylon fragiforme (fig. 22); enfin, une ectospore relativement épaisse, si-

nueuse du fait des boursouflures de la périspore.

3. Genre Apiosordaria (Lasiosphacriaceae, Sordariales)

Chez A. verruculosa, espèce étudiée ici, les asques ne renferment que

quatre ascospores; celles-ci, bicellulaires, ont une cellule supérieure sombre, à

paroi verruqueuse, pourvue d'un pore germinatif apical, et une cellule inférieure

plus petite, sub-conique, hyaline ou brun clair.

Dans la paroi de la cellule supérieure de l'ascospore assez jeune on re-

connait (fig. 25), sous une mince limitante externe trés sinueuse, une périspore

comprenant deux parties, l'externe transparente et l'interne fortement opaque.

Cette dernière, d'épaisseur très inégale, est tantôt très développée au point

Source : MNHN. Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCÈTES 221

d'interrompre la partie externe de la périspore et tantôt réduite à une mince

couche de granules réactifs.

La paroi propre, mince et transparente, s'individualise au début de la

maturation des ascospores (fig. 26). Au-dessus, la périspore interne sombre

comporte alors une partie basale continue et une partie supérieure festonnée. La

périspore externe, plus claire, montre en partie entre les festons des aspects en

guirlande.

Quand Vascospore est proche de la maturité (fig. 27), la périspore

présente une épaisseur régulière. Dans sa partie interne la base, distendue en

raison de l'accroissement de la surface ascosporale, est réduite à une mince pel-

lieule appliquée sur la paroï propre. Au-dessus, les festons de la périspore inter-

ne forment maintenant des piliers à sommet aplati et développés vers l'extérieur

jusqu'à la limitante externe; entre les piliers demeurent des plages de périspore

externe, à structure vacuolaire,

En conclusion, l'ornementation des ascospores d'A, verruculosa, comme

celles d'Hypoxylon fragiforme et de Gnomonia leptostyla, provient de la persis-

tance d'éléments de la périspore interne.

4. Le genre Lacunospora (Lasiosphaeriaceae, Sordariales)

Le genre Lacunospora (Cailleux, 1968) présente des ascospores

bicellulaires comportant une cellule inférieure courte, hyaline ou d'un brun trés

clair, et une cellule supéricure sombre à pore germinatif sub-apical. ll est

caractérisé par l'ornementation particulière de la paroi sombre qui apparait

ponctuée de dépressions (= lacunes d'ou Lac unospora) bien distinctes au micro-

scope electronique à balayage (Cailleux & Moelendez-Howell, 1970). Ce genre

est considere par Eriksson & Hawksworth (1986) comme synonyme

d'Apiosordaria qui a des ascospores de morphologie similaire; il n'a pas fait

jusqu'à présent l'objet d'études au microscope électronique à transmission.

La paroi de la trés jeune ascospore de L. stercoraria (fig. 28) comporte

une périspore recouverte d'une limitante externe faiblement réactive. Sa partie

externe, d'épaisseur irrégulière, est hyaline et sa partie profonde très réactive, de

lexture granulaire. Au-dessous la paroi propre n'est pas encore différenciée.

Dans l'ascospore en maturation (fig. 29) la paroi est formée d'une cou-

che unique, relativement mince et comportant une alternance de zones trés

réactives faiblement convexes vers l'extérieur et d'étroits sinus clairs. Cette cou-

che provient du développement de la mince péri pore interne, la périspore exter-

ne ayant disparu, Par la suite (fig. 30) les parties claires de la périspore interne,

plus développées mais encore séparées du sporoplasme par une mince couche

réactive, présentent une section triangulaire, à sommet dirigé vers l’épiplasme.

Quand l'ascospore approche de la maturité (fig. 31) une paroi propre

Sest différenciée sous la périspore interne dont les aires claires sont devenues

plus nombreuses et plus volumineuses, faisant parfois saillie dans l'épiplasme.

La structure de la paroi se complique quand l'ascospore atteint sa maturité (fig.

32). D'une part une importante endospore se développe (seule sa partie externe

à pu étre observée, l'interne n'ayant pas été conservée lors des coupes, comme

cela est fréquent en présence de structures cartilagineuses). D'autre part les

Caractéres de la périspore se modifient: sa texture granuleuse devient plus

Erossiére, les aires sombres s'étalent latéralement à leur sommet et confluent se-

condairement au-dessus des aires claires qui paraissent désormais vides. Enfin la

paroi propre est masquée par de gros granules anguleux disposés

irréguliérement et probablement de nature pigmentaire.

Source : MNHN, Paris

222 A. BELLEMÈRE et al.

La paroi ascosporale de L. stercoraria a donc, comme celle

d'Apiosordaria, une ornementation d'origine périsporale, mais elle diffère de cet-

te dernière par la présence d'une endospore, ce qui justifie la distinction des gen-

res Lacunospora et Apiosordaria.

B. Ornementation d'origine non périsporale

1. Genre Neurospora (Sordariaceae, Sordariales)

Dans ce genre les ascospores, unicellulaires, sombres, ont une ornemen-

tation faite de bandes longitudinales saillantes plus ou moins interconnectées.

Au début du stade secondaire la paroi d'une jeune ascospore de N.

crassa (fig. 33) comporte une périspore et une paroi propre. Dans la périspore,

mince, la partie interne plus importante, transparente aux électrons, est recou-

verte d'une partie externe faiblement réactive, développée uniquement au niveau

des sinuosites de la limitante externe. La paroi propre, assez épaisse, est à peine

réactive (granulations extrêmement fines, plus abondantes prés de la périspore et

du plasmalemme sinueux).

Quand l'ascospore est un peu plus ágée (fig. 34), la périspore externe

s'épaissit, l'interne demeure inchangée. Des différenciations apparaissent dans la

paroi propre sous forme d'aires plus réactives de section grossièrement

hémisphérique, à base faisant face au sporoplasme; les aires claires qui les

séparent sont légérement saillantes dans le sporoplasme. Un peu plus tard (fig.

33), la paroi propre s'est épaissie; les aires réactives y deviennent plus distinctes

et à leur base une mince pellicule trés claire relie entre elles les aires claires.

Peu avant la maturation (fig. 36) la partie externe de la périspore est devenue

presque indistincte et sa partie interne, toujours transparente, reste trés peu

épaisse. Dans la paroi propre les aires claires se sont rétrécies, tandis que les ai-

res réactives s'affirment, contenant de petites differenciations conchoidales

dispersées plus nettement réactives; la pellicule claire au contact du

plasmalemme est remplacée par un liseré réactif.

Quand l'ascospore est mûre (fig. 37), la partie externe de la périspore a

disparu et sa partie interne reste hyaline et mince. Dans la paroi propre, de

structure inchangée, la réactivité des aires sombres s'est renforcée, leur texture

devenant grossièrement granuleuse. Une importante endospore se développe: sa

partie externe, seule observée, est réactive, comme celle des exemples

précédents. Lors de la libération de l'ascospore, les aires claires de la paroi pro-

pre se dissolvent, au moins en partie, tandis que les aires réactives persistantes

constituent les bandes ornementales, plus ou moins confluentes, bien distinctes

au microscope électronique à balayage (Cailleux, 1971).

L'architecture de la paroi ascosporale observée chez N. crassa est en ac-

cord avec celle qu'ont figurée Sussman (1966) et Byrne (1975) qui ont, de plus,

vu l'endospore interne. Concernant le mode de formation de l'ornementation,

l'interprétation proposée ici diffère de celle de Byrne (1975) mais concorde avec

celles de Hohl & Streit (1975) et de Lafayette & Austin (1977): l'ornementation

n'est pas d'origine périsporale mais elle se développe dans la paroi propre. Si

l'aspect des coupes de paroi ascosporale de Neurospora rappelle celui, trés

frequent et classique, des ascospores à ornementation périsporale, il s'agit en fait

d'une convergence que prouve l'étude de l'ontogénése de la paroi.

2. Le genre Gelasinospora (Sordariaceae, Sordariales)

Dans ce genre, les ascospores unicellulaires sombres sont pourvues de

deux pores germinatifs opposés et ont une paroi ornementée de dépressions

Source : MNHN, Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCÈTES 223

(fovéoles). Elles ont été étudiées au microscope électronique à balayage

(Melendez-Howell & Cailleux, 1969, 1975; Cailleux, 1971) mais non par trans-

mission.

La paroi de la jeune ascospore de G. retrasperma, espéce identique à

l'espèce type ou certainement trés proche, est analogue à celle de Neurospora

crassa. | Elle comporte (fig. 38) une paroi propre bien développée, d'aspect

hétérogène (alternance d'aires claires et réactives), une mince périspore et une li-

mitante externe faiblement onduleuse et réactive. Dans une ascospore en début

de maturation (fig. 39) la paroi s'est fortement épaissie au niveau des aires clai-

res de la paroi propre et celles-ci sont maintenant fortement saillantes dans le

sporoplasme dont le contour est, par suite, fortement sinueux. Une pellicule

réactive s'est développée à la base de la paroi propre. Entre les aires claires la

paroi propre est trés réactive et la périspore, claire, apparente.

Des stades plus âgés n'ont été observés que chez G. santiflorit, espèce

différente mais proche de G. tetrasperma. Dans les ascospores en cours de ma-

luration (fig. 40) la périspore demeure mince. Au-dessous, dans la paroi propre,

les aires claires sont trés saillantes dans le sporoplasme et les aires sombres, de

faible épaisseur, s'étendent latéralement. Une importante endospore s'est

différenciée: elle comporte une couche interne claire et une couche externe plus

épaisse et sombre. Lorsque l'ascospore, mure, est libérée (fig. 41), l'épaisseur. de

sa paroi est devenue presque uniforme sur toute la surface. La partie externe de

l'endospore, trés importante, cartilagineuse (trés difficile à couper), se charge de

nombreux granules réactifs probablement de nature pigmentaire. La périspore

est complètement exfoliée et les saillies internes de la paroi propre forment alors

paradoxalement des dépressions (— fovéoles) enchássées dans l'endospore, tan-

dis que les aires sombres sont mises en relief.

Dans le genre Gelasinospora l'ornementation de la paroi ascosporale est

donc d'origine non périsporale, comme chez le Veurospora, mais les bandes or-

nementales confluent en un réseau trés dense enchassant les fovéoles,

IV - Les ascospores pourvues d'appendices

Les appendices caractérisant certaines ascospores peuvent étre de deux

lypes: les appendices primaires dérivent de l'une des cellules de l'ascospore,

incomplétement développée et dont le contenu peut dégénérer en partie, tandis

que les appendices secondaires sont formés par une expansion de la paroi.

Seuls des appendices secondaires se développent chez Caudospora

taleola (Diaporthales inc. sedis): deux prolongent chacune des cellules de

l'ascospore et deux ou trois autres se développent latéralement au niveau du

septum médian (fig. 42). Quelle que soit leur position, ces appendices, en forme

de doigt de gant, ont une origine périsporale et sont limités par l'ectospore (fig.

33). Sous la périspore, l'épispore opaque et l'endospore transparente entourent

la totalité de l'ascospore; au cor.raire l'exospore, formée de globules opaques,

de taille variable, est interrompue au niveau de chaque appendice. Cette

exospore d'aspect granuleux est bien visible en microscopie à balayage (Rogers,

984).

n cas plus complexe d'ascospore pourvue d'appendices a été observé

chez la Sordariale Podospora anserina, dont la paroi a été décrite plus haut.

L'extrémité postérieure de l'ascospore porte (fig. 44) un appendice primaire

digitiforme, vestige de la cellule ascosporale postérieure; sur celui-ci se

développent latéralement des appendices secondaires, expansions irrégulières is-

Source : MNHN, Paris

224 A. BELLEMEI

sues de la périspore. Chez cette même espèce Beckett et al. (1968) décrivent

valement un appendice primaire postérieur et des appendices secondaires, tan-

dis que chez P. arizonensis Alloway & Wilson (1972) n'observent que des ap-

pendices secondaires.

La diversité observée ici dans la nature des appendices de paroi

ascosporale a déjà été illustrée en microscopie électronique chez quelques

espèces d'Eupyrénomycètes. Ainsi Rogers & Stiers (1974) ont distingue, dans le

genre Rosellinia (Xylariales, Xylariaceae) le cas de R. mammiformis, à appendi-

ces secondaires d'origine périsporale, et celui de R. aquila où chaque appendice

secondaire forme un capuchon sur un appendice primaire, qui peut étre lu

méme double. Des appendices d'origine uniquement périsporale ont été

observés chez des Eupyrénomycétes marins appartenant à l'ordre des

Halosphaeriales (Lutley & Wilson, 1972a et b; Johnson, 1980; Porter, 1982;

Johnson et al., 1987). Ils présentent une grande diversité morphologique et peu-

vent différer par leur contenu, toujours en rapport avec celui de la périspore

d'origine. Ces appendices semblent done ne pas avoir de valeur systématique si-

gnificative: ils correspondent vraisemblablement à des adaptations particulières

rendues possibles par la plasticité de la périspore.

CONCLUSION

Les observations sur les parois ascosporales de quelques

Eupyrénomycètes rapportées dans ce travail ont permis de préciser leur organi-

sation ultrastructurale et ont montré une grande diversité (fig. 45) puisqu'on a

pu distinguer: des parois non ornementées, pourvues ou non d'une endospore,

et des parois ornementées (ornementation formée à partir de la périspore ou de

la paroi propre); par ailleurs, dans plusieurs genres les ascospores présentent des

appendices, d'origine variable.

1. Cette diversité ultrastructurale n'est pas limitée aux exemples étudies

ici; elle est largement illustrée également par les données déjà acquises par d'au-

tres auteurs. Dans tous les cas le plan structural fondamental schématisé par la

figure 1 peut être retrouvé.

Chez les Sordariales le genre Chaeromium (Chaetomiaceae) présente des

ascospores le plus souvent lisses (C. semen-citrulli, Millner et al, 1977; C.

brasiliense, Rosing, 1982; C. repens, Figueras & Guarro, 1988) mais parfois

verrugueuses (C. thermophile, Millner et al., 1977). Chez les espèces où plu-

sieurs stades de développement ont été observés (Rosing, 1982; Figueras &

Guarro, 1988) il semble que la périspore soit extrémement mince et transitoire

et qu'il n'y ait pas d'endospore.

Dans l'ordre des Xylariales, si la paroi de l'ascospore jeune de Xylaria

polymorpha, étudiée par Rogers (1975), montre une structure à trois couches

(épispore, périspore, ectospore), celle des ascospores adultes présente le maxi-

mum de complexité, avec cinq couches superposées, mais sans réalisation d'une

ornementation: Poronia punctata (Stiers, 1974), Daldinia concentrica (Beckett,

1976a et b) et X. longipes (Beckett, 1979); en dépit de la difficulté

d'interprétation des clichés, la présence d'une endospore parait être de règle.

Chez l'Erysiphale Sphaerotheca mors-uvae (Erysiphaceae) étudiée par

Martin et al. (1976) la paroi ascosporale semble dépourvue d'endospore et por-

teuse d'une ornementation d'origine périsporale; les clichés sont toutefois difTici-

les à interpréter.

Source : MNHN. Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCÈTES 225

Chez les deux espèces d'Onygénales Onygenaceae étudiées en micro-

scopie électronique à transmission, la paroi, dépourvue d'endospore, comporte

une exospore formée à la surface de l'épispore. Réduite à des dépôts aplatis, ne

constituant pas une ornementation, chez Thermoascus aurantiacus (Ellis, 1981)

l'exospore est par contre bien développée chez Myxotrichum deflexum (Rosing,

1985) et forme une ornementation, visible sous forme de bourrelcts longitudi-

naux en microscopie électronique à balayage et présentant en coupe l'aspect

d'une roue crantée.

Chez les Ophiostomatales la paroi ascosporale sc rapproche du type

Jécrit chez les Diatrypales et Diaporthales où la paroi primaire se transforme

directement en une périspore à la base de laquelle se différencie tardivement une

cpispore; il n’y a ni endospore ni exospore. Malgré sa simplicité fondamentale,

la paroi peut prendre des aspects très variés:

ype lisse (Ceratocystis stenoceras, Garrison et al., 1979, Ceratocystis ulmi,

Jeng & Hubbes, 1980, Ophiostoma minus, Van Wyk & Wingfield, 1990 et

199 1a);

type faiblement ornementé avec ondulations irrégulières de la périspore

(Ophiostoma distortum, Van Wyk & Wingfield, 1991a);

type à appendices donnant à lascospore une forme en chapeau

caractéristique; ces appendices proviennent de la périspore, soit dans sa totalité

(Ophiostoma davidsonii, Van Wyk & Wingfield, 1991b, et O. cucullatum, Van

Wyk & Wingfield, 1991c) soit de sa seule couche externe (Ceratocystis fimbriata,

Stiers, 1976 et C. moniliformis, Van Wyk & Wingficld, 1990, Van Wyk et al.,

1991).

2. La diversité ultrastructurale de la paroi ascosporale des

Fupyrénomyceétes tient à plusicurs causes:

a) les couches constitutives de la paroi ascosporale sont diversement

développées ou différenciées (fig. 45). Ceci est particuliérement net pour la

périspore qui peut être réduite (Neurospora) ou importante (Diatrypella,

Contochaeta), homogène (Diatrypella, Coniochaeta) où hétérogène, sa partie

profonde donnant alors des ornementations d'aspect divers (Gnomonia,

'ypoxplon, Lacunospora, Apiosordaria). C'est également le cas pour la paroi

propre (= épispore), mince (Diatrypella, Gnomonia, Hypoxylon) ou épaisse

Coniochaeta) et présentant une hétérogénéité ( Lacunospora) qui peut conduire

à l'édification d'une ornementation (Neurospora, Gelasinospora, exospore du

Caudospora). Au niveau de l'endospore la diversité est plus réduite. Cette cou-

Che peut être absente ou quasi nulle, se confondant avec l'espace périplasmique.

Quand elle est développée, sa partie externe, plus ancienne, peut se différencier

de facon contripéte; l'endospore apparait alors subdivisée en deux parties, l'une

esterne, cartilagineuse, et l'autre interne. Cette dernière est importante seulement

lorsque la vitesse de différenciation est lente.

b) des aspects similaires de la paroi peuvent résulter de la différenciation

ct du développement de couches structurales différentes. Ainsi (fig. 45)

l'épaisseur de la paroi peut résulter essentiellement du développement de la pa-

rol propre (Neurospora) ou de celui de l'endospore (Sordaría, Podospora);

l'ornementation ascosporale peut avoir une origine périsporale (Apiosordaria,

Gnomonia, Hypoxylon, Lacunospora) ou provenir de la paroi propre

(Neurospora, Gelasinospora) ou de l'exospore (Caudospora). Ces conver-

gences ne peuvent étre décelées en microscopie photonique; les études au micro-

Scope électronique à balayage sont elles-mêmes insuffisantes: elle ne révèlent

Pas, par exemple, la différence d'origine de l'ornementation des Neurospora et

des Hypoxylon. Seule la microscopie électronique à transmission permet de sui-

Source : MNHN, Paris

226 A. BELLEMÈRE et al.

vre l'ontogénie de la paroi ascosporale et d'interpréter correctement la nature

des structures observées.

c) alors qu'habituellement le stade secondaire de la paroi s'établit par

différenciation d'une périspore à l'extérieur de la paroi propre, on constate chez

plusieurs des genres étudiés ici que la paroi primaire, fondamentalement

homogène, se transforme d'emblée en une périspore différenciée, antérieurement

à l'établissement du stade secondaire ( Diatrype, Apiosordaria, Lacunospora).

On peut admettre dans ce cas que la paroi ascosporale acquiert trés

précocement, dès le stade primaire, des potentialités de périspore et, par

conséquent, des potentialitės à l'ornementation. Or celle-ci favorise vraisembla-

blement la dissémination des ascospores et constitue ainsi un caractère adaptatif,

indiquant que ces Eupyrénomycétes sont d'un type évolué.

3. L'étude de l'ultrastructure de la paroi ascosporale des

Eupyrénomycètes suggère quelques remarques d'ordre systématique.

Tout d'abord au niveau du genre on observe souvent chez les espéces

d'un même genre (Neurospora, Sordaria, Gelasinospora) une architecture ana-

logue de la paroi ascosporale. Ce critère a ete parfois utilisé dans la délimitation

des genres; chez les Halosphacriales le genre Koklmeyeriella a été ainsi séparé

de Cucullospora (Jones et al., 1983). Mais il n'en est pas tenu compte dans le

genre Hypoxylon où pourtant les ascospores montrent une grande diversité

(Rogers, 1979).

Au niveau de la famille on dispose en général de données sur trop peu

de genres pour dégager des conclusions. Alors que chez les Xylariaceae par

exemple les structures des parois ascosporales sont voisines chez les genres

Xylaria, Daldinia et Poronia, chez les Sordariaceae par contre elles difTérent en-

tre le genre Sordaria d'une part, et les genres Neurospora et Gelasinospora d'au-

tre part.

Pour ce qui est des ordres il faut remarquer d'abord que certains types

de structure de la paroi ascosporale ne sont présents que dans certains groupes:

ainsi l'endospore est absente chez les Diatrypales et les Diaporthales mais elle

est présente chez les Sordariales. Mais il faut noter également que la structure

de la paroi ascosporale peut étre analogue dans des genres appartenant à des

ordres différents. Ainsi (fig. 45), l'ornementation de la paroi a une méme origi-

ne chez le Gnomonia (Diaporthales), l Hypoxylon (Xylariales) et le Lacunospora

(Sordariales).

Sans vouloir autrement généraliser, il est aussi remarquable qu'une orne-

mentation de la paroi d'origine périsporale conduise à des structures pariétales

très similaires chez des Discomycètes, parfois lichénisants, des Eupyrénomycètes

et des Ascomycétes plectasce

Chez les Eupyrénomycétes il apparait donc qu'il n'y a pas de corrélation

claire entre la structure de la paroi ascosporale et la systématique. Ceci est pro-

bablement dù, en partie du moins, à ce que la structure de la paroi ascosporale,

dont les caractéristiques semblent régies par un petit nombre de genes, peut etre

assez facilement influencée par l'action stressante des facteurs du milieu et de ce

fait révéler des adaptations relativement récentes à de nouvelles conditions am-

biantes (Bellemére et al., 1981; Melendez-Howell et al., 1987). Ainsi la présence

d'une ornementation, favorable à la dispersion, et le développement d'une

endospore, assurant un meilleur tampon du sporoplasme contre les

températures extrémes ou la sécheresse, pourraient affecter simultanément des

lignées évolutives différentes caractérisées au moins en partie par la structure de

Source : MNHN, Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCÈTES 227

leurs asques, plus conservatrice. En d’autres termes la structure de la paroi

ascosporale serait davantage un indicateur écologique qu'un indicateur

systématique.

REMERCIEMENTS

Nous remercions J. Bidoux, H. Chacun, C. Fournigault, N. Jampsin et M.C.

Malherbe pour leur précieuse et amicale collaboration technique, R. Cailleux (MNHN de

Paris) pour la fourniture de diverses souches, et la Direction de l'E.N.S. Fontenay-Saint-

Cloud pour diverses facilités accordées en vue de ce travail

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Source : MNHN, Paris

MÈRE et al.

230 A. BE

LÉGENDES DES FIGURES

Abréviations

ec: ectospore = limitante externe; en: endospore (ene: endospore cx-

terne; eni: endospore interne); ep: épispore (=paroi propre pp); ex: exospore;

ip: paroi intermédiaire (7); p: périspore (pe: périspore externe, pi, périspore

interne); s: sporoplasme.

Abbreviations:

ec: ectospore = investing membrane; en: endospore (ene: external

endospore; eni: internal endospore); ep: epispore (—proper wall pp); ex:

exospore; ip: intermediate wall (2); p: perispore (pe: external perispore; pi

internal perispore); s: sporoplasm.

Fig. 1: schéma synthétique de la paroi ascosporale faisant apparaitre les

équivalences de terminologie.

Fig. 1: Diagram of ascospore wall with equivalent terminologies.

Fig. 2-5: paroi ascosporale non ornementée à périspore développée.

Contraste uranyle-plomb: fig. 2 et 4; technique de Thiéry: fig. 3 et 5. Fig. 2 et 3:

trés jeunes ascospores avec paroi primaire réduite à la périspore chez

Diatrypella guercina (fig. 2) et Diatrype disciformis (fig. 3). Fig. 4 et 5:

ascospores adultes avec paroi comportant de l'intérieur vers l'extérieur:

lépispore, la périspore à texture fibrillaire et l'ectospore, chez Diatrype

disciformis (fig. 4) et Diatrypella quercina (fig. 3). Echelle 0,5 um (fig. 2 et 5) ou

0,2 um (fig. 3 et 4).

Fig. 2-5: smooth ascospore wall with developed perispore. Uranyl-lead

staining: fig. 2 and 4; Thiery's test: fig. 3 and 5. Fig. 2 and 3: very young

ascospores; primary wall reduced to perispore. Diatrypella quercina (fig. 2) and

Diatrype disciformis (fig. 3). Fig. 4 and 3: mature ascospores; wall comprising

from inside to outside: epispore, fibrillar perispore and ectospore. Diatrype

disciformis (fig. 4) and Diatrypella quercina (fig. 5). Scale: 0,Sum (fig. 2 and 5)

or 0,2um (fig. 3 and 4).

Fig. 6-8: paroi ascosporale non ornementée à périspore développée.

Contraste uranyle-plomb: fig. 6; technique de Thiéry: fig. 7 et 8. Fig. 6:

Hercospora tiliae et fig. 7: Diaporthe oncostoma; paroi réduite à une épispore et

à une périspore peu développée limitée par l'ectospore. Fig. 8: Leucostoma

pispore sinucuse et confluence des périspores de deux ascospores voisi-

. Echelle: 0,2 um (fig. 6 et 7) ou 1 um (fig. 8).

Fig. 6-8: smooth ascospore wall with developed perispore. Uranyl-lead

staining: fig. 6; Thiéry's test: fig. 7 and 8. Fig. 6: Hercospora tiliae and fig. 7:

Diaporthe oncostoma; wall reduced to epispore and scarce perispore with

investing ectospore. Fig. 8: Leucostoma nivea: sinuous epispore and confluent

perispores of two neighbouring ascospores. Scales: 0,2um (fig. 6 and 7) or

lum (fig. 8).

Source : MNHN. Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRENOMYCETES 231

Fig, 9-13: paroi ascosporale non ornementée pourvue d’une endospore

chez deux Sordaria: S. fimicola (fig. 9, 10 et 11) et S. prolifica (fig. 12 et 13).

Technique de Thiéry. Fig. 9: paroi d'une jeune ascosporc avec paroi propre

périspore à mince couche basale réactive et limitante externe faiblement si-

nueuse. Fig. 10 ct 12: parois d'ascospores en maturation: paroi propre et

périspore subdivisées, ébauche d'endospore. Fig. 11 et 13: parois d'ascosporcs

müres: endospore à deux couches. Echelle: 0,5 um.

Fig. 9-13: smooth ascospore wall with endospore in two Sordaria: S.

fimicola (fig. 9, 10 and 11) and S. prolifica (fig. 12 and 13). Thiéry’s test. Fig. 9:

young ascospore wall; proper wall, perispore bounded by a reactive thin basal

layer and sinuous investing membrane. Fig. 10 and 12: walls of developing

ascospores; splitted proper wall and perispore, incipient endospore. Fig. 11 and

13: mature ascospore walls: bilayered endospore. Scale: 0,5 um.

Fig. 14-17: paroi ascosporale non ornementée pourvue d’une endospore

chez Podospora anserina. Technique de Thiéry. Fig. 14: paroi d'ascospore en

maturation avec périspore épaisse, paroi propre et ndospore, toutes deux à 2

couches. Fig. 15: paroi d'ascospore un peu plus âgée avec érosion de la

périspore externe. Fig. 16: paroi d'ascospore âgée: périspore interne seule

conservée, paroi propre et endospore a deux couches. Remarquer la disposition

régulière (hélicoïdale ?) dans l'endospore interne. Fig. 17: cas oü l'endospore

interne est exceptionnellement très dév eloppi Echelle: 0,5 um.

Fig, 14-17: smooth ascospore wall with endospore in Podospora

anserina. Vhiéry's test. Fig. 14: wall of developing ascospore; thick perispore

and bilayered proper wall and endospore. Fig. 15: wall of an older ascospore,

external perispore eroded. Fig. 16: mature ascospore wall: internal perispore

preserved, bilayered proper wall and endospore. Notice the regular (helicoid 2)

disposition in internal endospore. Fig. 17: exceptional expansion of internal

endospore. Scale: 0,5 um.

paroi ascosporale non ornementée pourvue d'une endospore.

plomb. Fig. 18: jeune ascospore de Coniochaeta ligniaria ä

paroi épaisse comportant épispore, périspore et ectospore. Fig. 19: détail de la

paroi d'une ascospore adulte de Coniochaeta ligniaria, avec endospore épaisse

différenciée sous les autres couches. Fig. 20: detail de la paroi d’une ascospore

adulte de Gnomonia leptostyla avec endospore, épispore et périspore contenant

des plaques ornementales plus ou moins confluentes. Echelle: 0,5 um (fig. 18)

ou 0,25 um (fig. 19 et 20).

Fig. 18-20: smooth ascospore wall with endospore. ^ Uranyl-lead

staining. Fig. 18: young ascospore in Coniochaeta ligniaria; thick wall

comprising epispore, perispore and ectospore. Fig. 19: detail of mature

ascospore wall in Coniochaeta ligniaria; thick endospore formed beneath the

other layers. Fig. 20: detail of mature ascospore wall in Gnomonia leptostyla;

endospore, epispore and perispore containing more or less confluent ornamental

sheets. Scale: 0,5jam (fig. 18) or 0,25um (fig. 19 and 20).

Fig. 21-24: paroi ascosporale ornementée chez Hypoxylon fragiforme.

Contraste uranyle-plomb: fig. 22; technique de Thiery: fig. 21, 23 et 24. Fig. 21:

jeune ascospore avec périspore dérivée de la paroi primaire. Fig. 22: apparition

de plaques ornementales dans la périspore. Fig, 23: détail de la paroi d'une

ascospore plus ägee; ornementation en festons dérivant des plaques. Fig. 24:

Source : MNHN, Paris

232 A. BELLEMERE et al.

détail de la paroi d'une ascospore adulte avec endospore, épispore et périspore

dont la couche interne contient des masses oculiformes claires au sein de l'orne-

mentation. Echelle: 0.5m (fig. 21 ct 22) ou 0,2Sum (fig. 23 et 24).

Fig. 21-24: ornamented ascospore wall in Hypoxylon fragiforme.

Uranyl-lead staining: fig. 22; Thiery’s test: fig. 21, 23 and 24. Fig. 21: young

ascospore: perispore arising from primary wall. Fig. 22: ornamental perisporal

shects formation. Fig. 23: detail of an older ascospore wall; scallops arisen from

ornamental sheets. Fig. 24: detail of mature ascospore wall; endospore, epispore

and ornamented internal perispore. Scale: 0,5 um (fig. 21 and 22) or 0,25 um

(fig. 23 and 24).

Fig. 25-27: paroi ascosporale à ornementation d'origine périsporale chez

Apiosordaria verruculosa (cellule supérieure). Technique de Thiéry. Fig. 25: pa-

roi d'une jeune ascospore réduite à la périspore (contenant des différenciations

internes réactives) bordée par la limitante externe. Fig. 26: paroi d'une

ascospore en début de maturation avec mince paroi propre sous la périspore:

périspore interne à festons réactifs et périspore externe en guirlande claire. Fig.

27: paroi d'une ascospore proche de la maturité; ornementation constituée par

les piliers réactifs de l'épaisse périspore: limitante externe distincte. Echelle: 0,5

um.

Fig. 25-27: perisporal ornamentation of ascospore wall in Apiosordaria

verruculosa (upper cell). Thiery's test. Fig. 23: young ascospore wall reduced to

perispore (reactive differenciation within) and investing membrane. Fig. 26: wall

of developing ascospore; thin proper wall beneath perispore (internal part forms

reactive scallops and external a clear garland). Fig. 27: wall of an almost

mature ascospore; ornamentation constituted by reactive perisporal pillars

beneath the investing membrane. Scale: 0,5um.

Fig. 28-32: paroi ascosporale à ornementation d'origine périsporale chez

Lacunospora stercoraria. Technique de Thiéry. Fig. 28: paroi d'une trés jeune

ascospore formée d'une périspore claire à base trés réactive; espace

périplasmique développé. Fig. 29: paroi d'ascospore en début de maturation;

paroi sinueuse formée de la seule périspore trés réactive entrecoupée de sinus

clairs. Fig. 30: paroi d'ascospore un peu plus àgéc; aires claires triangulaires

remplagant les sinus. Fig. 31: paroi d'ascospore proche de la maturation; mince

paroi propre et périspore réactive contenant des aires triangulaires claires plus

nombreuses et plus développées. Fip. 32: paroi d'ascospore en fin de matura-

tion avec une endospore développée, une paroi propre très mince et une orne-

mentation BeSt plus ou moins confluente. Echelle: 0,2 um.

Fig. 28- amentation of ascospore wall in Lacunospora

stercoraria. Thee test. Fig. 28: very young ascospore wall; clear perispore

with highly reactive basal layer over the periplasmic space. . 29: wall of.

developing ascospore; highly reactive sinuous perispore with clear spots. Fig. 30:

wall of an older ascospore; triangular clear areas replace spots. Fig. 3 Il of.

an almost mature ascospore; triangular clear areas are more numerous and

developed in reactive perispore; thin proper wall. Fig. 32: mature ascospore

wall; endospore, thin proper wall and confluence of perisporal ornamentation.

Scale: 0,2 um.

Fig. 33-37: paroi ascosporale à ornementation formée dans la paroi pro-

pre chez Neurospora crassa. Technique de Thiéry. Fig. 33: paroi d'une jeune

Source : MNHN. Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRENOMYCETES 233

ascospore au début du stade secondaire avec une paroi propre assez

développée, mal délimitée de la périspore mince à deux couches: limitante exter-

ne reactive. Fig. 34: paroi d'une ascospore en début de maturation; paroi propre

ipaisse avec aires plus réactves; périspore inchangée. Fip. 35: paroi d'une

ascospore en cours de maturation; paroi propre importante en légère saillie

dans le sporoplasme en dehors des aires sombres (futures ornementations);

perispore inchangée. Fig. 36: paroi d'une ascospore proche de la maturité; paroi

propre à base réactive et contenant des aires sombres plus développée

périspore inchangée. Fig. 37: paroi d'une ascospore peu avant sa liberation: im.

portant développement des ornementations dans la paroi propre: la mince

périspore n'est plus bistratifiée. Echelle: 0,24m (fig. 33 et 36) ou 0,5 um (fig.

34, 35 et 37).

Fig. 33-37: ornamentation in proper wall of ascospore in Neurospora

Thiéry's test. Fig. 33: young ascospore wall (early secondary stage);

y developed proper wall not clearly separated from thin bilayered perispore:

reactive investing membrane. Fig, 34: wall of developing ascospore; thick proper

wall with reactive areas; unchanged perispore. Fig. 35: wall of an older

ascospore; large proper wall weakly projects into sporoplasm outside dark areas

(future ornamentation); unchanged perispore. Fig. 36: wall of an almost mature

ascospore; enlarged dark areas and reactive basal layer in proper wall. Fig, 37:

ascospore wall just before emission; large ornamentation in proper wall: thin

unlayered perispore. Scale: 0,2 um (fig. 33 and 36) or 0,5 um (fig. 34, 35 and

37).

Fig. 38-41: paroi ascosporale à ornementation formée dans la paroi pro-

pre chez Gelasinospora tetrasperma (fig. 38 et 39) et G. santifforii (ig. 40 et 41).

Technique de Thiéry, Fig. 38: paroi d'une jeune ascospore au stade secondaire;

mince périspore peu distincte de la paroi propre bien développée. Fig. 39: paroi

d'ascospore en début de maturation; paroi propre bien développée, réactive à sa

base et formant d'importantes saillies claires dans le sporoplasme, alternant avec

des plages faiblement réactives: périspore mince et claire. Fig. 40: paroi

d'ascospore vers la fin de sa maturation; présence d'une importante endospore à

deux couches, plus développée entre les saillies de la paroi propre dans le

sporoplasme; mince périspore. Fig. 41: paroi d'ascospore müre; endospore ex-

lerne trés importante entre les saillies de la paroi propre vers le sporoplasme (fu-

tures fovéoles de la paroi). La périspore a disparu. Echelle: 0,5um.

Fig. 38-41: ornamentation in proper wall of ascospore in Ge/asinospora

ferrasperma (fig. 38 et 39) and G. santiflorii (fig. 40 and 41). Thiéry's test. Fig.

38: young ascospore wall (secondary stage); thin perispore fairly distinct from

large proper wall. Fig. 39: wall of developing ascospore; large proper wall with

reactive basal layer and alternating prominent clear projections into sporoplasm

and reactive areas; thin clear perispore. Fig. 40: wall of an older ascospore;

bilayered endospore best developed between projections of proper wall into

sporoplasm: thin perispore. Fig. ^l: mature ascospore wall; very large external

endospore between projections of proper wall into sporoplasm (future fovcoli).

Perispore disappeared. Scale: 0,5um.

Fig. 42-44: ascospores à appendices. Contraste uranyle-plomb. Fig. 42:

appendices secondaires chez Caudospora taleola. Fig.43: délail d'un des appen-

dices terminaux d'origine périsporale et limité par l'ectospore. Noter les couches

de la paroi ascosporale: endospore, épispore, exospore formée de globules opa-

que, périspore et ectospore. Fig. 44: appendice primaire portant des appendices

Source : MNHN, Paris

234

secondaires à l'extrémité d'une ascospore de Podospora fimicola. Echelle: lum

(fig. 42 et 44) ou 0,Sum (fig. 43).

Fig. 42-44: appendaged ascospores. Uranyl-lead staining. Fig. 4

secondary appendages in Caudospora taleola. Fig. 43: detail of a terminal

appendage; from perisporal origin it’s bounded by ectospore. Notice the

ascospore wall layers: endospore, epispore, exospore (dark globules), perispore

and ectospore. Fig. 44: primary appendage bearing secondary appendages at

the tip of Podospora fimicola ascospore. Scale: Lum (fig. 42 and 44) or 0,5 (fig.

43).

Fig. 45: schéma comparatif des divers types de paroi ascosporale chez

quelques Éupyrénomycètes. Les figurés utilisés sont les mêmes que ceux de la fi-

gure 1. A: Diatrypella guercina; B: Coniochaeta ligniaria; C: Apiosordaria

verruculosa; D: Gnomonia leptostyla; E: Hypoxylon coccineum; F: Lacunospora

stercoraria; G: Caudospora taleola; M: Gelasinospora santiflorii.

Fig. 45: comparative diagrams of different types of ascospore walls in

various Eupyrenomycetes. Symbols used are the same as in figure 1. A:

Diatrypella quercin Coniochaeta ligniaria; C: Apiosordaria verruculosa; D:

Gnomonia leptostyla; E: Iypoxylon coccineum; Lacunospora stercoraria; G:

Caudospora taleola; H: Gelasinospora santiflorii.

WIN

2 1

Source : MNHN, Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCÈTES

235

Source : MNHN, Paris

236 A. BELLEMERE et al

Source : MNHN, Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCÈTES 237

Source : MNHN, Paris

238 A. BELLEMÈRE et al

Source : MNHN, Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOM YCÈTES 239

Source : MNHN. Paris

240 A. BELLEMÈRE et al.

Source : MNHN, Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉ NOMYCÈTES

241

Source : MNHN, Paris

242 A. BELLEMÈRE et al

Source : MNHN. Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRÉNOMYCÈTES

243

Source : MNHN, Paris

244 A. BELLEMÈRE et al

Source : MNHN. Paris

PAROI ASCOSPORALE EUPYRENOMYCETES 245

Source : MNHN. Paris

246 A. BELLEMERE et al

45 PAS D'ENDOSPORE UNE ENDOSPORE

PAS

z tta E

ELE

IE 1 下

| =

83 |

z |

ER |

al hn Mbt

Source : MNHN. Paris

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (3): 247-251 247

MYCENA ROSEA ET LE COMPLEXE MYCENA PURA

J. PERREAU, J. LAMBOURDIERE et M.C. BOISSELIER

C.N.R S. - Laboratoire de Cryptogamie - M.N.H.N. -

12, rue de Buffon - F. 75005 PARIS

RÉSUMÉ - La distinction pressentie entre deux Mycénes ayant des caractéres morpholo-

giques trés voisins - Mycena rosea et Mycena pura - est confirmée par l'analyse

Slectrophorétique de neuf protéines à fonction enzymatique. Les résultats obtenus font

également apparaître la variabilité biochimique existant parmi les basidiocarpes lilacins de

M. pura, espèce où se manifeste une grande diversité pigmentaire

ABSTRACT - Electrophoretic analysis used to test nine isoenzyme activities corroborates

the already foreseen discrimination between the morphologically similar Mycena rosea and

Mycena pura. Likewise biochemical variability is noted among lilaceous basidiocarps of

Mycena pura, species with diversely pigmented basidiocarps.

MOTS CLÉS : Mycena, Tricholomatales, Holobasidiomycotina, analyse électrophorétique,

variabilité enzymatique.

Sous la dénomination d'Agaricus purus Persoon, puis de Mycena pura

(Persoon: Fries) Kummer, ont été décrits des champignons (Holobasidio-

mycotina - Tricholomatales) dont les basidiocarpes présentent des caractères

morphologiques presque semblables, avec toutefois des teintes variées, allant

non seulement du rose ou du lilacin, mais aussi du blanchátre ou du citrin jus-

qu'au violacé foncé et au pourpre. Les formes roses ont plus particulièrement

fait l'objet d'interprétations diverses au point de vue laxinomique puisqu'on les a

tour à tour considérées comme variété de M. pura ou comme espèce à part.

Ayant retracé (1985) l'historique des conceptions relatives aux Mycènes qui,

dans le groupe M. pura, ont reçu l'épithète rosea, Maas Geesteranus distingue

(1989) Mycena rosea (Bulliard) Gramberg de M. pura plus par l'aspect

maeroscopigue (...Mycena rosea, once shown, is casily distinguishable from M.

pura already in the field...) que par les caractères microscopiques. Cependant,

cet Auteur écrit: 7... In view of the great variability of Mycena pura, it does not

seem illogical to assume that Mycena rosea may be just another form or

variety..."; il ajoute toutefois que la présence de substances toxiques différentes -

muscarine chez l'un, composés psychotropes chez l'autre - paraît constituer un

argument de poids en faveur de la séparation des deux taxons. L'étude par

électrophorèse de protéines à fonction enzymatique, obtenues à partir des

basidiocarpes, permet d'envisager une telle distinction à la lumiére d'autres

critères biochimiques.

Saprophytes, poussant en troupe, à terre, dans la litière de feuilles mor-

tes, ces champignons appartiennent à la sous-section Purae, section Calodontes

du genre Mycena (Marasmiaceae) ct on y retrouve les principales

caractéristiques. de ces subdivisions. Leurs basidiocarpes, à développement

Source : MNHN, Paris

248 J. PERREAU, J. LAMBOURDIERE et M.C. BOISSELIER

gymnocarpique, a silhouette collybioide assez grêle, de taille moyenne (50-60 à

100 mm de hauteur), putrescibles, ont une odeur raphanoide. Le stipe fistuleux,

couvert à la base de fibrilles blanchátres, porte un piléus campanulé ou conique

arrondi, puis convexe plus ou moins étalé, finement strié à la marge, peu

charnu, à revêtement humide, hygrophane. L ‘hyménophore est constitué de

lamelles horizontales, sinuées-adnées, souvent veinées, anastomosées-gaufrées

dans le sinus interlamellaire, de tcinte pâle, à arête concolore ou plus claire. Les

spores sont ellipsoides, à paroi lisse, mince et amyloide.

Comparé aux différentes formes de M. pura, M. rosea se reconnaitrait à

son pilèus d'un diamètre en général plus grand (supérieur à 50 mm), à sommet

non déprimé, d'un rose vif, rose mauve ou rose violacé, jaunissant au centre.

Au lieu de blanchâtre å rose påle, la teinte des lamelles irait du rose påle au

rose lilacé, avec une aréte blanche et non concolore, tandis que le stipe resterait

peu coloré, blanc ou lavé de rose pâle, jaunâtre en bas. Alors que les dimen-

sions sporales sont proches [7,4 - 8,1 - (9,2) x 3,4 - 4,9 - (5,6) um dans le groupe

M. pura, 6,7 - 9.0 x 4,5 - 5,6 um pour M. rosea], la largeur ct la forme [jusqu'à

36 um - nettement plus sphéropédoneulée, pour AM. rosea] des cheilocystides, ap-

paraitraient plus determinantes.

Quinze échantillons ont été cucillis - bien développés mais en bon état de

fraicheur -, en automne 1991, dans la forét de Fontainebleau (F. 77), sur terrain

siliceux, parmi les feuilles mortes de hêtre (Fagus silvatica L.) principalement.

Numérotés de 187 à 201, provenant chacun de stations différentes réparties

dans trois domaines (Rocher Long, Franchard, Gros Fouteau) du massif fores-

tier, les six premiers à piléus rose (a peu prés K.” 3D/28D brillant - vers S. 135

- proche de M." 11 A 5), lamelles rosées et stipe blanc jaunissant - teinté de rose

chez le n° 188 - correspondent à M. rosea. Les neuf autres spécimens peuvent

être rapportés å M. pura; ils présentent une PIRES lilas rosé où mauve

päle (K. 578 > 10; 25; 45 15 A 2; 14 B 3/4 envi-

ron), accentuée jusqu'au violacé brunátre (vers K. E S. 104 ou 43 - M.

11 C 5 environ) sur le piléus et le stipe. Les basidiocarpes 194 et 197 se mon-

trent plus rose violacé tandis que le n°193, à cheilocystides clavées, larges de 12

- 16 um, présente une coloration générale vieux rose (K. 17/22 - vers S. 84 -

vers M. 10 B 4 ) (rosée sur les lamelles) susceptible de le faire considérer sur le

terrain comme appartenant à M. rosea. Il faut noter aussi que, avec l'âge ou

l'humidité, toutes ces teintes roses, lilacées ou violet purpurin passent nor-

malement au beige rosatre ou au brunatre violacé.

Bien que le mycélium de ces champignons puisse être cultivé à partir de

la germination des spores ou par bouturage de l'hÿménophore (Oddoux, 1955),

les essais réalisés sur milieu de Hagem amélioré ne s'averent pas suffisamment

performants lorsqu'il s'agit de la réalisation d'électrophorèses. Pour chaque

exemplaire conservé après la récolte une quinzaine d'heures à 4°C, un secteur

de 200 - 250 mg découpé dans le peus est done broyé en tampon uis-glycine

(4, 95 M, pH 8,3) - mercaptoëthanol (U, 34 %) en vue de la préparation de l'ex-

trait protéique. Des quantités valentes de protéines sont ensuite soumises à

une migration électrophorétique verticale en gel de polyacrylamide

K: KLINCKSIECK P. & VALETTE T., 1908 - Code des couleurs. Paris, P.

Klincksicck, 86 p.

S.: SEGUY E., 1936 - Code universel des couleurs. Encyclopédie Pratique du Naruraliste.

Paris, Lechevalier, 48 pl

M: KORNERUP A. & WANSCHER J.H., 1967 - Methuen Handbook of colour.

London, Methuen & C°, 2nd ed., 244 p.

Source : MNHN, Paris

MYCENA ROSEA ET LE COMPLEXE MYCENA PURA 249

(prémigration 2,5%; migration 7%). Neuf révélations enzymatiques ont été

test estérases, isocitrate-déshydrogénase, malate-déshydrogénase, glutamate-

oxaloacétate-transaminase, peroxydases, phosphatases acides, glutamate-

déshydrogénase, malico-enzyme et alcool-déshydrogénase (Boisselier-Dubayle,

1988; Hofman, 1988).

Tous les zymogrammes obtenus indiquent une nette différence dans les

résultats entre les six premiers spécimens et les neuf autres (les n^193 et 200 se

singularisant toujours par rapport aux sept autres échantillons du méme grou-

pe). Les profils observés en ce qui concerne les estérases, l'isocitrate-

déshydrogénase et la malate-déshydrogénase se montrent les plus significatifs

(fig. 1). On remarque non seulement une certaine homogénéité parmi les sou-

ches nommées M. rosea, mais également une variabilité évidente chez celles

rattachées à M. pura. Pour ces dernières, trois profils se distinguent nettement

par la révélation de Visocitrate-deshydrogénase. Ils permettent de regrouper:

1) les souches 196 (basidiocarpe lilacin grisätre), 194 et 197 (rose

violacé), 195 et 201 (violacé);

2) les souches 198 et 199 (basidiocarpe violacé assez soutenu);

3) les souches 193 (basidiocarpe vieux rose) et 200 (violacé brunatre).

Ces trois groupes se retrouvent à la lecture des profils malate-

déshydrogénase et estérases (les plus polymorphes). Enfin, les profils de la

malate-déshydrogénase soulignent l'existence de deux types électrophorètiques

parmi les exemplaires de M. rosea étudiés: 187, 190 et 191 d'une part, 188, 189

et 192 d'autre part.

Nos premiéres observations relatives à la variabilite enzymatique chez

les Mycénes à lamelles pâles de la sous-section Purae permettent bien d'appuyer

l'individualité, par rapport à un complexe Mycena pura diversement pigmente,

d'un ensemble que, selon Maas Geesteranus, on peut appeler Mycena rosea

(Bulliard) Gramberg. Ces différences d'ordre enzymatique viennent corroborer

celles déjà découvertes à propos des substances vénéneuses et signalées par

Kricglsteiner & Schwôbel (1982). En effet, Heim (1963) relate l'intoxication ”

assez caractéristique du type psychotropique..." subie par V.H. Etienne en 1959

à la suite de l'ingestion de 40 échantillons frais de M. pura. Un peu plus tard,

la présence de muscarine chez M. rosea est mise en evidence par Kubitka &

Veselk$ (1978) [la mention Mycena rosea (Bull.) ex Saccardo & Dalla Costa

étant toutefois inexacte puisque les deux Auteurs italiens se référent à Mycena

rosella - cf. Maas Geesteranus, 1985].

Dès avant la fin du XVIIIème siècle, la Mycène rose a été parfaitement

représentée par Bulliard, sous le nom évocateur d'Agaric couleur de rose, sur la

planche 162 (1783 - 84) de l'Herbier de la France (reprise dans l'Histoire des

champignons de la France) choisie comme lectotype du taxon par Maas

Geesteranus (1985). Pourtant, la légende de cette planche, de même que celle de

la planche 507, insistant sur la ‘ariété des formes et des couleurs, s'applique

plutôt à M. pura. D'autres analyses biochimiques permettront sans doute de

mieux comprendre l'organisation du complexe M. pura et éventuellement les re-

lations entre ses représentants dans les pays tempérés et ceux, très nombreux,

qui Viennent en régions tropicales (Corner, 1986).

Source : MNHN, Paris

250 J. PERREAU, J. LAMBOURDIERE et M.C. BOISSELIER

M. rosea M. pura

187 188 189 190 191 192| 193 194 195 196 197 198 199 200 201

x GENES: KEIT EEG id

187 | 193 198 200

187 | 193 197 200

Fig. 1 - Zymogrammes des estérases (EST), de l'isocitrate-déshydrogénase (IDH) et de la

malate-déshydrogénase (MDH) mettant en évidence la distinction entre Mycena

rosea et Mycena pura.

Fig. 1 - Electrophoretic patterns for esterases (FST), isocitrate-dehydrogenase (IDH) and

malate-dehydrogenase (MDH) showing the differences between Mycena rosea and

Mycena pura.

Source : MNHN. Paris

MYCENA ROSEA ET LE COMPLEXE MYCENA PURA 251

BIBLIOGRAPHIE

BOISSELIER-DUBAYLE MC. 1988 - Etude du polymorphisme enzymatique chez

Plagiochasma rupestre (Forst) Steph. et Mannia androgyna (L) Evans

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Transactions, 150th Anniv. suppl., 61-67.

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Paris, J.B. Baillière, 828 p.

HEIM R., 1963 - Les Champignons toxigues et hallucinogenes. Paris, Boubše & Cie, 328

P-

HOFMAN A., 1988 - Starch gel electrophoresis: a tool for studying the phylogenetic

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Bryology. Japan, Hatt. Bot. Lab.: 353-358.

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Akad. Werensch. C. 88, 47-62.

MAAS GEESTERANUS R.A., 1989 - Conspectus of the Mycenas of the Northern

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ODDOUX L., 1955 - Recherches sur les mycéliums secondaires des Homobasidiés en cultu-

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ces, Lyon, 338 p.

Source : MNHN, Paris

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (3): 253-257 253

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

COLE Garry T. and HOCH Harvey C., 1991 - The fungal spore and disease

initiation in plants and animals. N.Y. and London, Plenum Press. 355p.

ISBN 0-306-434 5

L'ensemble des articles contenus dans cet ouvrage porte sur l'étude des

phases préliminaires de la pathogenése des champignons chez les plantes et les

animaux. L'objectif des éditeurs est de démontrer la communauté d'approche

dans cette recherche sur les interactions champignons-plantes et champignons-

animaux.

Les chapitres sont groupés en quatre thémes correspondant aux

différentes étapes de l'invasion: I: Fixation de la spore et début de l'invasion, Il:

Activité de la spore et pathogenése, III: Réponse de l'hôte, IV: Aspect

moléculaire de l'initiation de la maladie.

Le point crucial dans l'initiation d'une maladie fongique est la fixation

de la spore sur le tissu de l'hôte. Quel que soit le domaine dans lequel ils tra-

vaillent, les spécialistes sont d'accord sur le fait qu'il ne s'agit pas d'un simple

accolement mais que sont produites au niveau des spores, un certain nombre de

substances chimiques (enzymes, glycoprotéines, polysaccharides...) ou de struc-

lures adhésives puis penétrantes. Les huit premiers chapitres montrent bien le

parallélisme des approches et la similitude des méthodes expérimentales utilisces

dans les deux types de pathologies (rouilles, dermatophytes et Candida).

Les principales barrières à l'invasion par les champignons sont la

cuticule pour les plantes et l'épithelium pour les vertébrès. La production

d'enzymes hydrolysants est mise en évidence chez certains pathogènes, associés

à la pénétration des cuticules et épithélium (cutinases extracellulaires chez

Fusarium solani f. sp. pisi, Alternaria alternata, Colletotrichum graminicola,

enzymes protéolytiques, estérases, chitinase et lipase chez Metarrhizium

anisopliae).

Seuls les dermatophytes peuvent attaquer un épiderme kératinisé intact.

La dégradation de la kératine et des protéines associées a été mise en évidence

in vitro mais cette activité est encore peu démontrée in vivo. Les autres

pathogènes traversent les épithéliums à la faveur d'un appauvrissement acciden-

tel en Kératine. La nécessité de l'isolement et de la caractérisation de ces

enzymes - clefs (facteurs de virulence) et des inhibiteurs de ces enzymes in vivo

est encore commune aux deux domaines. Elle fait apparaître que les recherches

à venir doivent porter sur les bases moléculaires de la synthèse et de l'émission

des produits en cause dans le systeme hóte-parasite.

Bien qu'il y ait des différences claires dans la nature de la réponse ani-

male ou végétale aux phases précoces de l'invasion par le champignon, notre

connaissance sur la façon dont le champignon vaine où évite ces défenses est en-

core rudimentaire. On connait par ailleurs bien certaines structures de

pénétration hautement spécialisées comme la formation d'haustorium chez

rysiphe graminis et les céréales hôtes et les réactions cellulaires de celles-ci.

Source : MNHN, Paris

254 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

Ainsi un certain nombre de points, d'ordre fondamental, restent encore

à préciser dans les mécanismes d'actions et réactions d'agression et de défense

hõte-parasite.

Le développement des techniques de biologie moléculaire (DNA

recombinant) est un nouveau volet de la recherche dans les domaines de la

pathologie médicale et végétale. La possibilité d'obtenir des sondes pour évaluer

les distances entre pathogénes et non pathogènes, pour étudier l'épidémiologie,

est bien développée et prometteuse sur un plan pratique et fondamental. Pour

les auteurs, l'avenir de la recherche passe par au moins trois approches: la

régulation des gènes, le transfert de gènes de pathogénicité et l'étude de mutants.

L'étude des gènes de pathogénicité relève d'une technologie empruntée à

celle des levures et en cours d'adaptation aux champignons filamenteux, surtout

chez Neurospora crassa ct Aspergillus nidulans comme modèles mais aussi chez

quelques pathogėnes (Cochliobolus sp., Bremia lactucae). L'avant dernier cha-

pitre constitue une intéressante revue générale des techniques utilisées dans ce

domaine. Ici encore on peut noter que l'étude de la pathologie fongique animale

et végétale suivent les mêmes voies de recherche.

Cet ouvrage, qui pourrait être hétérogène par la diversité de

spécialisation des auteurs, réussit à présenter une approche homogène de l'ini

tiation des maladies fongiques. Elle permettra au lecteur d'appréhender la ques

tion de façon globale et de bénéficier des résultats obtenus dans des spécialités

mycologiques souvent sans communication.

M.F. Roquebert

SNEH B., BURPEE L. and OGOSHI A., 1991 - Identification of Rhizoctonia

species. St Paul, Minnesota, USA. APS Press, 133 p. ISBN

0-89054-123-X.

Les Rhizoctonia représentent un groupe de champignons trés important

en pathologie végétale. principalement, mais aussi comme saprophytes ou

mycorrhizes des orchidées ou autres plantes. Cette vaste répartition d'organis-

mes d'intérêt économique non négligeable, a conduit à un grand nombre de pu-

blications à travers le monde. Cependant la cl; ation et l'identification des

Rhizoctonia est complexe. La monographie qui est présentée ici veut étre, mo-

destement, une introduction à la taxonomie, à l'identification, aux groupes

d'anastomoses et aux techniques utilisées dans l'étude des RAizoctonia.

La description originale du genre par de Candolle (1815) était si globale

"sclérotes de texture uniforme portant des hyphes ramifiées, associées aux raci-

nes de différentes plantes” que bien d'autres champignons sans relation avec les

Rhizoctonia ont été inclus dans le genre. Plusieurs auteurs ont effectué des mises

au point, principalement sur la définition de A. solani (Parmeter & Witney,

1970). En 1987, Moore utilisant le critére de la structure des septa et des pores

dans les hyphes des téléomorphes a mis en évidence leur appartenance à plu-

Sieurs — groupes systématiques: — Ascomycétes, Ustomycetes, Holo- et

Hétérobasidiomycètes. Il s’en suivit une révision nomenclaturale qui conduit, lo-

giguement, Moore à placer, par exemple, les anamorphes de Thanatephorus

(groupe R. so/ani) dans le genre Moniliopsis Ruhland. Tout en reconnaissant le

bien fondé de cette nouvelle conception, les auteurs gardent le nom Rhizoctonia

en raison de son implantation tres ancienne dans le domaine de la

phytopathologie et de sa large utilisation. L'hétérogénéité du genre n'est cepen-

dant pas discutable.

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 255

Après cette introduction taxonomique, les auteurs proposent un chapitre

détaillé sur les méthodes d'isolement, d'identification (coloration des noyaux, fu-

sion des hyphes, induction des téléomorphes) et de conservation des souches de

Rhizoctonia, Un autre chapitre porte sur la morphologie descriptive de ces or-

ganismes avant que ne soient proposées les clefs cytomorphologiques des ana- et

téléomorphes et les descriptions des groupes d’anastomose d'espèces bi- et

multinucléées. Pour les espèces analysées (R. solani, zeae, oryzae, repens) il sem-

ble qu'il y ait corrélation entre les possibilités d'anastomoses et les séquences de

bases de l'ADN.

Une importante bibliographie (14 pages) accompagne cet ouvrage qui se

termine par un index des taxons: espèces reconnues, synonymes, espèces dou-

teuses et téléomorphes.

Malgré l'hétérogénéité des Rhizoctonia et la relative difficulté de mise en

oeuvre des fusions hyphales avec des souches types, qui n'est pas à la portée de

tous les phytopathologistes, cet ouvrage a le mérite de faire une synthèse claire

des méthodes d'identification ct de proposer une classification pratique de ce

groupe de champignons.

. Roquebert

HERRERA J.R., 1992 - Fungal cell wall: Structure, synthesis and assembly.

Boca Raton, Florida, USA, CRC Press Inc., 248p. ISBN 0-8493-6672-0.

L'auteur est un mycologue spécialiste de la paroi fongique, de sa for-

mation et de sa structure ainsi que de la régulation, du développement et de la

différenciation des champignons.

Profitant de son expérience en la matière, il propose ici un ouvrage de

synthèse couvrant en 10 chapitres les aspects structuraux, biochimiques et fonc-

üonnels de la paroi doht l'importance dans la protection de la cellule, et sa

différenciation morphologique n'est plus à démontrer.

Le premier chapitre expose la composition chimique générale des parois:

méthodes d'isolement et d'analyse, revue des principaux composants:

polysaccharides, lipides, protéines... Suivent deux chapitres sur l'évolution de la

composition chimique au cours du développement et l'organisation, au niveau.

ultrastructural, des différents composants. Dans une suite assez peu logique,

l'auteur revient sur l'étude détaillée des glucanes, chitine et chitosane,

glycoprotéines, abondamment développée en 3 chapitres bien documentés où

sont abordés la structure, la biosynthèse, le rôle spécifique de chacun d'eux.

Les chapitres suivants sont plus originaux. lls exposent les résultats ac-

tuels des recherches sur la synthèse intracellulaire des composants puis de leur

acheminement et assemblage. On est frappé par le fait que, dans le schéma

général des différentes étapes de cet assemblage, bon nombre restent suivies

d'un point d'interrogation. Par exemple on ne sait encore exactement à quel ni-

veau cellulaire commence et se te’ mine la synthèse de la chitine, où est initiée la

synthèse des glucanes etc. Les expériences, les résultats et les hypothèses ac-

luelles sur ces points sont cependant exposés en detail. La synthèse et le trans-

fert des protéines paraissent mieux connus. La plupart sont transférées à travers

la cellule, aussitôt que produites par les ribosomes liés au réticulum

endoplasmique rugueux. Aprés debut de glycosylation a la face interne de ce

dernier, elles sont véhiculées par les systèmes membranaires (appareil de Golgi)

€t les vésicules sécrétoires vers l'extérieur du cytoplasme où elles sont associées à

la paroi.

Source : MNHN, Paris

256 ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES

Les mécanismes de croissance et d'extension de la paroi cellulaire sont

abordés au dixiéme et dernier chapitre. L'utilisation de la fixation par le froid,

en microscopie électronique, a permis de lever des doutes sur l'organisation

structurale du cytoplasme aux points de synthèse pariétale et de mettre en

évidence des structures propres aux fonctions d'accompagnement et de direction

telles que des microfilaments en région apicale et des microvésicules disposées

de façon linéaire vers la membrane plasmique, Une corrélation est établie entre

la distribution de l'actine et la polarisation de la croissance pariétale. Enfin les

courants électriques, ioniques et de pll trouves dans les zones de croissance

(gradient de Ca. et elTet énergétique de l'ATP conjugués) expliquent en partie

la progression axiale des hyphes.

Cet ouvrage, assez personnalisé, est une excellente synthése sur le sujet.

Chaque chapitre est l'objet de réflexions, d'analyse de résultats expérimentaux,

de conclusions, d'hypothéses et de questions. La présentation est peut-être un

peu dense, avec peu d'illustrations ou de tableaux recapitulatifs, mais une biblio-

graphie tres riche (environ 1000 références) enrichit chaque chapitre. Il sera trés.

utile aux enscignants et aux chercheurs entreprenant une recherche dans ce do-

maine.

. Roquebert

WIIIPPS JM. and LUMSDEN R.D., 1989 - Biotechnology of Fungi for

Improving Plant Growth. Symposium of the British Mycological Society

held at the Univ. of Sussex, Sept. 88. Cambridge University Press, 303p.

ISBN 0-521-38236-X.

Le corps de cet ouvrage comprend les treize articles présentés lors d'un

colloque organisé par le Comite des Biotechnologics de la British Mycological

Society, à l'Université de Sussex. Les vingt-huit auteurs de ces documents

synthétiques intégrant les observations les plus récentes pour chacun des sujets

abordés, travaillent dans des institutions de recherches de pointe en France, au

Royaume-Uni et en Amérique du Nord

Les textes reproduits passent en revue les multiples utilisations des

champignons dans le domaine de l'amélioration de la croissance des plantes

vasculaires. Ils analysent également les paramètres commerciaux susceptibles

d'accroitre assez rapidement la commercialisation des préparations d'origine

fongique. L'utilisation des champignons pour le contrôle des mauvaises herbes

en culture agricole intensive est devenue, de nos jours, une pratique courante

avec des dimensions commerciales. De méme, des produits prometteurs,

également d'origine fongique, commencent à apparaître sur le marché; ces der-

niers serviront à lutter contre les nématodes parasites des plantes, les champi-

gnons et les insectes phytopathogénes.

Le rôle des champignons dans la stimulation du développement des

plantes vasculaires, soit directement par production de métabolites secondaires,

soit par le biais d'hormones de croissance, est également analysé en profondeur,

Enfin, une attention particulière est accordée aux progrès technologiques accom-

plis dans les domaines de la sélection, la culture et les modes de formulation

commerciales des produits d'origine fongique,, en rapport avec la pluralité des

missions affectées à ces microorganismes.

Les informations contenues dans cet excellent ouvrage seront, sans

conteste, fortement utiles aux enseignants et chercheurs s'intéressant à la

mycologie, la phytopathologie, la botanique, la foresterie et l'entomologie. Les

sujets abordés concernent un domaine où des progrès marquants sont attendus

Source : MNHN, Paris

ANALYSES BIBLIOGRAPHIQUES 257

et cela en raison des efforts intensifs déployés par les scientifiques et les utili-

sateurs dans leur poursuite de l'examen de nouvelles technologies et possibilités

ayant pour objectif l'amélioration de la croissance des plantes vertes.

J. Mouchacca

TRESCOL F., 1992 - Cortinaires: diagnoses. Clés. 4 volumes. Alés, France,

Edition Mycologique Alésienne, C. Epinat, 7 quai Jean Jaurès, Alès,

S08p. ISBN 2-9506800.

Diagnoses - Fascicule 1: Cortinaires visqueux et index général. Fascicule

2: Cortinaires non visqueux.

Clé

visqueux.

- Fascicule 3: Cortinaires visqueux. Fascicule 4: Cortinaires non

INTERNATIONAL MYCOLOG

collection, 10th edition 199

L INSTITUTE - Catalogue of the culture

Kew, U.K., CAB International.

Filamentous fungi, yeasts and plant pathogenic bacteria.

Le 3éme Congrés de la Société Française de Phytopathologie se tiendra

à Dijon les 7, 8 et 9 Décembre 1993 (M. C. Alabouvette - INRA. Laboratoire

de recherche sur la flore pathogène du sol, 17 rue Sully, BP 1540, 21034 Dijon -

France).

The third Congress of the "Société Française de Phytopathologie" will be

held at Dijon from December 7 10 9, 1993 (Mr C. Alabouvette - INRA, Labora-

toire de recherches sur la flore pathogène du sol, 17 rue Sully, BP 1540, 21034

Dijon - France).

A A

BIBL.DU

MUSEUM

PARIS

Source : MNHN. Paris

Commission paritaire 16-1-1986 - N° 58611 - Dépôt légal 3* trimestre 1992 - Imprimerie F. Paillart

Sortie des presses le 30 septembre 1992- Imprimé en France

Editeur : A.D.A.C. (Association des Amis des Cryptogames)

Président : R. Baudoin ; Secrétaire : D. Lamy

Trésorier : J. Dupont; Directeur de la publication : H. Causse

Source : MNHN, Paris;

CRYPTOGAMIE

Diffusion de CRYPTOGAMIE

LE PÉRIODIQUE FRANCAIS

CONSACRÉ A LA CRYPTOGAMIE

CRYPTOGAMIE est un périodique édité

par l'A.D.A.C. (Association des Amis des

Cryptogames), dont le siège est au Labo-

ratoire de Cryptogamie du Muséum Na-

tional d'Histoire Naturelle. Les cher-

cheurs de tous pays y publient leurs

travaux en français, allemand, anglais, es-

pagnol et italien, après accord des

Comités de Lecture constitués de

spécialistes de réputation internationale.

CRYPTOGAMIE propose trois sections:

Cryptogamie, Algologie

Cryptogamie, Mycologie

Cryptogamie, Bryologie-Lichénologie

Chaque section publie 4 numéros par an

(tirage: 450 exemplaires).

THE FRENCH JOURNAL

DEVOTED TO CRYPTOGAMY

CRYPTOGAMIE is a periodical

published by A.D.A.C. (Association des

Amis des Cryptogames), settled at Labo-

ratoire de Cryptogamie, Muséum National

d'Histoire Naturelle. Research workers

from the whole world publish their papers

in French, German; English, Spanish and

Italian, after acceptation by a selection

commettee that comprises experts of inter-

national renown.

CRYPTOGAMIE offers to its subscribers

three sections:

Cryptogamie, Algologie

Cryptogamie, Mycologie

Cryptogamie, Bryologie-Lichénologie

Each section publishes 4 numbers a year

(printing: 450 ex.).

E) Europe Afrique [] Australie

Amérique fi Asie

Origine des 453 articles publiés de 1986 à 1991

E Europe 国 Arrique

Amérique J Aste

Répartition des articles publiés de 1986 à 1991 selon la langue

Source : MNHN, Paris

SOMMAIRE

G. DURRIEU et S. HASAN - I es champignons agents de lutte biologi-

que contre les rnauvaises herbes .. n

J. DUPUY, J. LE BARS et P. LE BARS. - Mycotoxonogenése de sou-

ches de Fusarium: contrainte en vue de leur utilisation dans la

lutte biologique . e

F. BUSCOT - Stratégies écologiques et biologiques des morilles ...

€. GROSCLAUDE - Les dégàts de champignons lignivores sur platane .

J. LE BARS et P. LE BARS - Contamination fongique de salaisons

sèches de viande: origine, conditions d'apparition, prévention .....

E. CHAUVET - De la biologie des Hyphomycétes aquatiques à

l'écologie des rivières …

A. BELLEMÈRE, MC. JANEX-FAVRE, L.M. MELENDEZ-

HOWELL et A. PARGUEY-LEDUC - Diversité ultrastructurale

de la paroi ascosporale chez quelques Eupyÿrénomycètes … me

J. PERREAU, J. LAMBOURDIERE et M.C. BOISSELIER - Md

rosea et le complexe Mycena pura

Analyses bibliographiques

Cryptogamie, Mycol. 1992, 13 (3): 149-257

149

159

171

181

193

203

215

247

253