SOMMAIRE

J.C. LEGER. — Hymenochaete nanospora nov. sp. (Basidiomycétes,

o A INS IE aaar E A NE CIR TREE eet 235

W. GAMS & B.E. SÓDERSTRÓM. — Oidiodendron scytaloides n. sp. ... 239

A.A. SY, K. NORNG, L. ALBERTINI & G. BARRAULT. — Recherches

sur la lutte biologique contre Pyricularia oryzae Cav. III. - Influence de

la température sur l’aptitude de germes antagonistes à inhiber in vitro la

croissance mycélienne du parasite ......................... 245

J.M. BARRASA 8: G. MORENO. — Adiciones al género Pyxidiophora

(Pyrenomycetes) ` .

F. GOURBIERE. — Utilisation de sucres et de polyols par la mycoflore

d'Abies alba Mill. 3. Champignons du sol (fin) ................. 261

C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT. — Developmental morphology of

Ascomycetes. IX. Calonectria rigidiuscula 269

M. LOCQUIN-LINARD. — Trois nouvelles espéces coprophiles de Lasio-

bolidium Malloch et Cain (Ascomycètes, Eoterfeziaceae) .......... 283

R.P. SINGH, L. SINGH & V.S. VERMA. — Interrelationships in culture

among fungi isolated from Soybean ........................ 291

J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN. — Étude de la pola-

rité sexuelle des Armillaires du groupe mellea .................. 301

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIE

MYCOLOGIE

TOME 4 Fascicule 3 1983

Ancienne Revue de Mycologie. Dirigée par Roger HEIM

DIRECTEUR DE LA PUBLICATION: Madame J. NIC

ADMINISTRATION : Mme LC JIN-LINARD M. et M. ZAMBETTAKIS Ch

SECRÉTAIRE DE RÉDACTION : Mme M.F. ROQUEBERT. ÉDITEUR : A.D.A.C

Bibliothèque Centrale Muséum

3 3001 0022

L- MNHN. Paris

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CRYPTOGAMIE MYCOLOGIE

CONTENTS

(Tome 4, Fascicule 3, 1983)

J.C. LEGER. — Hymenochaete nanospora nov. sp. (Basidiomycetes,

phy llophorales) o 1599050 50925500930 eue 235

W. GAMS & B.E. SÖDERSTRÖM. — Oidiodendron scytaloides n. sp. ... 239

A.A. SY, K. NORNG, L. ALBERTINI & G. BARRAULT. — Research

on biological struggle against Pyricularia oryzae Cav. III. Temperature

influence on in vitro mycelial growth inhibition by some antagonists .. 245

J-M. BARRASA & G. MORENO. — Two new sections in A i

genus ER EP REN 251

F. GOURBIERE. — Utilization of sugars and er by Abies alba

mycoflora. 3 : Soil fungi ............................... 261

C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT. — Developmental morphology of

Ascomycetes. IX. Calonectria rigidiuscula . . 269

M. LOCQUIN-LINARD. — Three new coprophilous species of Lasio-

bolidium Malloch et Cain (Ascomycetes, Eoterfeziaceae) .......... 283

RP. SINGH, L. SINGH & V.S. VERMA. — Interrelationships in culture

among fansi colated from Soybean 9 10 01 1001 1 NDS 291

J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN. — Sexual polarity

DAS dE OR or M 301

Source : MNHN, Paris

HYMENOCHAETE NANOSPORA NOV. SP.

(BASIDIOMYCETES APHYLLOPHORALES)

par J.C. LEGER*

RÉSUMÉ. — Description d’une nouvelle espèce d'Hymenochaete, H. nanospora, récoltée

en Afrique équatoriale. La caractéristique majeure de cette espèce est l'extrême petitesse

de ses spores.

SUMMARY. — Hymenochaete nanospora nov. sp. is a light brown resupinate species collec-

ted in the Republic of Central Africa and Gabon, The uniform distribution of the setae

throughout the trama (i. e. setigerous layer seated directly on the substratum) places H.

nanospora in the section Gymnochaete Escobar. It can be easily separated from all other

species of the section by having extremely small spores.

L'étude des récoltes de J. BOIDIN en Afrique nous conduit á décrire une

nouvelle espéce qui vient s'ajouter à celles précédemment étudiées (LÉGER

1980, 1981 et 1982). Le type est décrit à partir d'un spécimen recueilli en

République Centrafricaine mais ce champignon a été retrouvé au Gabon par

G. GILLES quelques années plus tard.

DESCRIPTION DU TYPE ise tel

Hymenocbaete nanospora nov. sp. NA

Resupinata, jacens, adhaerens, tenuis, pallide brunnea, in margine magis

brunnea; imo cortice 10-15 um ex hyphis intermixtis collapsis, e rufis obscure

brunneis, haud septatis, pariete crassa constante; trama duplici : inferne, hyphis

intermixtis, haud septatis, pariete maxime incrassata, superne erectis, septatis,

loculis brevibus, granula ferentibus; spinulis brunneis, brevibus, (17)-22-30-(35)

x 3,5-5 um; basidiis tetrasporis, 9-10 x 3-3,5 um. Loculi omnium elementorum

* Laboratoire de Mycologie associé au C.N.R. Université Claude Bernard - Lyon 1, 43 Bd

du 11 novembre 1918, F-69622 Villeurbanne Cedex.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog.,

fycol.) TOME 4 (1983)

Source : MNHN. Paris

J.C. LEGER

236

A : spores observées sur

ne-potasse à 5%. B :baside et basidiole à paroi irrégu-

verte de granulations. C : coupe transversale dans le basidiome.

spora nov. sp. (LY 5914, Type).

Source : MNHN, Paris

HYMENOCHAETE NANOSPORA, N. SP. 237

hymenii et hypharum superorum tramae pariete irregulariter incrassata, granula

ferenti. Sporae allantoideae, minimae, 2,5-3 x 0,8-14 1,1) um, saepissime duabus

quitulis ad polos, tunica tenui, haud amyloideae, uninucleateae, in massa albae.

Holotypus : Lyon (LY), leg. J. BOIDIN n9 LY 5914, Bokoma, 14.09.1967,

République Centrafricaine.

Basidiome résupiné, étalé, adhérent, mince (100-150 um), brun clair, 7.5 YR

6/4 du Code Munsell (wood brown de Ridgway). Marge 0,5 mm, s'amincissant

progressivement, trés appliquée, brune, 7,5 YR 4/4 du Code Munsell (Brussels

brown de Ridgway).

Cortex («cuticle» sensu REEVES et WELDEN, 1967) de 10-15 um, formé

d'hyphes brun rouge foncé cimentées entre elles, à paroi trés épaisse, non cloi-

sonnées et de 2,5-3 um de diamètre. Il est bien visible dans les parties jeunes

du basidiome (vers la marge).

Trame double : à la base, hyphes brun rouge, à paroi trés épaisse, fortement

enchevétrées et cimentées entre elles, non cloisonnées, de 2,5-3 um de diamètre;

dans les parties jeunes du basidiome ces hyphes sont simplement jaunâtres,

beaucoup moins enchevétrées, non cimentées. Au-dessus, hyphes jaunátres,

dressées verticalement, à articles assez courts, de 2 à 2,5 um de diamètre, à paroi

épaissie.

Spinules brunes, petites, (17)-22-30-(35) x 3,5-5 um, progressivement amin-

cies vers le bas, nombreuses dans toute la hauteur de la trame, peu émergentes

(10-12 um).

Hyménium formé de basides et de basidioles plus petites, recouvertes de

nombreuses granulations non cristallines. Basides 9-10 x 3-3,5 um, à 4 stérig-

mates, très légèrement émergentes, à paroi mince mais ponctuellement épaissie.

Spores allantoides trés petites, 2,5-3 x 0,8-1-(1,1) um, avec trés souvent deux

microguttules subpolaires, à paroi mince, non amyloides, uninucléées (Giemsa),

exceptionnellement binucléées, blanches en masse.

Holotype : LY 5914, Bokoma, République Centrafricaine, 14-09-1967,

leg. J. BOIDIN.

Autre récolte : LY 9147, Libreville, Gabon, 3-03-1979, leg. G. GILLES.

DISCUSSION

L'étude microscopique de cette espéce — par ailleurs trés banale quant à

son aspect extérieur — révèle des particularités intéressantes qui la caractérisent

nettement. C'est en premier lieu la petitesse et surtout l'étroitesse des spores

dont la largeur dépasse trés rarement le micron. Ce sont les plus petites spores

décrites à ce jour chez une espèce du genre Hymenochaete (rappelons que H.

microspora Welden a des spores de 2,5-3 x 1,5-2 um).

Deux autres particularités sont à souligner :

Source : MNHN. Paris

238 J.C. LÉGER

Concernant la base du champignon, on doit insister sur le fait que le cortex,

bien visible dans les parties jeunes et minces du basidiome, est par contre trés

peu distinct lorsque le champignon s'épaissit : les hyphes inférieures de la trame

épaississent leur paroi et se soudent entre elles, à la manière de celles du cortex.

Concernant la partie supérieure du basidiome : les hyphes verticales de la

trame ainsi que les éléments hyméniens présentent des épaississements ponctuels

de leur paroi qui est, en outre, recouverte de nombreuses granulations. Celles-ci,

de nature non cristalline, se colorent intensément en bleu dans une solution

de Bleu Coton lactique. Il s’agit vraisemblablement de substances excrétées à

la surface des hyphes sous forme de microgouttelettes se solidifiant à l'air.

Ces particularités structurales, jointes à la petitesse des spores font de Hyme-

nochaete nanospora nov. sp. une espéce bien caractérisée. Elle trouve sa place,

aux côtés de H. minuscula Cunningham, H. tenuis Peck et H. multisetae Burt

notamment, dans la section Gymnochaete Escobar (définie par la répartition

des spinules dans toute la hauteur du basidiome); c’est certainement le groupe

le plus difficile du genre ainsi qu'en témoigne l'expression de G.A. ESCOBAR

(1978) «in this confusio rerum of section Gymnochaete».

BIBLIOGRAPHIE

ESCOBAR G.A., 1978 — Contributions towards a monograph of the neotropical species

of Hymenochaete. Ph. D. dissertation. University of Washington. 227 p.

LÉGER J.C., 1980 — Hymenochaete spathulata nov. sp. (Basidiomycètes Aphyllophorales).

Bull. Soc. Myc. Fr. 96, n° 4 : 407-411.

LEGER J.C., 1981 — Un curieux groupe d'Hymenochaete à spinules denticulés (Basidio-

mycétes Aphyllophorales). Bull. Soc. Myc. Fr. 97, n9 1 :5-14.

LÉGER J.C. 1981 — Les Hymenochaete à éléments hyméniens pinnatifides. Mycotaxon

XIII, n9 1 :241-256.

LÉGER J.C., 1982 — Hymenochaete gillesii nov. sp. (Basidiomycètes Aphyllophorales).

Bull. Soc. Myc. Fr., 98, n? 1 : 125-128.

REEVES F. (Jr) and WELDEN A.L., 1967 — West Indian species of Hymenochaete. Myco-

logia 59 : 1034-1049.

Source : MNHN. Paris

239

OIDIODENDRON SCYTALOIDES N. SP.

by W.GAMS* and B.E. SÓDERSTRÓM**

RÉSUMÉ. — Description d'une nouvelle espèce d'Oidiodendron : O. scytaloides, à chlamy-

dospores pigmentées. Ce champignon a été isolé en Suède et en Hollande, sous les conifères

et les peupliers, spécialement dans les couches minérales du sol. Il diffère de O. chlamy-

dosporicum Morrall, par des conidies beaucoup plus courtes et des chlamydospores plus

petites.

SUMMARY. — A new species of Oidiodendron : O. scytaloides, with pigmented chlamy-

dospores is described. O. scytaloides is one of the commonest Oidiodendron species in soils

of coniferous and oak forests in Sweden and the Netherlands, but especially in the mineral soils

layers. It differs from O. chlamydosporicum Morrall by smaller chlamydospores and much

shorter conidia.

The genus Oidiodendron Robak now contains 15 described anamorph-species

(BARRON, 1962; LITVINOV, 1967; MORRALL, 1968; TOKUMASU, 1973;

DOMSCH et al., 1980), some of which are not very sharply delimited. The

teleomorph connections were reviewed by SIGLER and CARMICHAEL (1976).

Rather frequently we encountered isolates which are difficult to classify and

might represent new taxa. While hesitating to erect some further poorly defined

species, we feel compelled to describe one of the commonest which can easily

be recognized by its chlamydospores. This species was already included with

its present name in the key by DOMSCH et al. (1980).

OIDIODENDRON SCYTALOIDES W. Gams & Sóderstróm n. sp.

(Fig. 1,2)

(= Oidiodendron sp. Tokumasu, Trans. mycol. Soc. Japan 14 : 253. 1973)

Coloniae lente crescentes, viridi-griseae, deinde obscure griseo-olivaceae,

conidiis pulverulentae, modice elevatae, nonnumquam rugosae in medio; rever-

* Centraalbureau voor Schimmelcultures, Baarn, Netherlands.

** Department of Microbial Ecology, University of Lund, Lund, Sweden.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

240 W.GAMS & B.E. SÓDERSTRÓM

sum obscurius griseum ad atrum. Conidiophora plerumque ex hyphis submersis

oriunda; stipites bene evoluti 50-85 um longi, brunnei, breviores saepe hyalini,

leves, in summo catenas conidiorum ramosas, numero variabiles, rectas vel

modice undulatas proferentes; arthroconidia vulgo segmentis sterilibus alternata,

cylindrica - guttuliformia - ellipsoidea, uno vel ambobus apicibus truncata,

hyalina ad subhyalina, levia, plerumque 2.0-3.0(4.0)X 1.0-2.0 um. Chlamydo-

sporae frequentes, terminales vel laterales, singulae vel breviter catenatae, saepe

etiam intercalares et catenatae, ellipsoideae, brunneae, plerumque 3.0-4.0(-5.0)

X 2.5-3.0 um.

Typus CBS 922.73 vivus et exsiccatus, isolatus e terra piceeti in Suecia.

Colonies on cherry decoction or acidic malt extract agar reaching 0.4-0.8cm

diam. in 14 days at about 20°C, greenish olivaceous to greenish grey, later dark

grey-olivaceous, powdery due to conidial masses, slightly raised, sometimes

also slightly wrinkled in the centre; reverse darker grey to black. Conidiophores

arising mostly from submerged hyphae (after some transfers also often from

erect tufts of aerial hyphae); stipes, when well developed, 50-85 um long,

brown, (shorter ones often hyaline), smooth-walled, bearing irregular numbers

SO Y

9 060

000

Lo 906 X à 10 um

Fig. 1. — Oidiodendron scytaloides, Conidiophores, conidia and chlamydospores drawn

from various isolates.

Source - MNHN. Paris

OIDIODENDRON SCYTALOIDES N. SP. 241

of branching conidial chains which are straight or somewhat undulate; arthro-

conidia often separated by sterile segments («alternate arthroconidia» of SI-

GLER & CARMICHAEL, 1976); conidia cylindrical - guttuliform - ellipsoidal,

with one or both ends truncate, hyaline to subhyaline, smooth-walled, mostly

2,0-3.0(-4.0) X 1.0-2.0 um. Chlamydospores commonly terminal or lateral,

formed singly or in short compact chains, rather often also intercalary and in

irregular chains, ellipsoidal, brown, mostly 3.0-4.0(5.0) X 2.5-3.0 um.

Occurrence : O. scytaloides is one of the commonest Oidiodendron species

in soils of coniferous and oak forests in Sweden and the Netherlands, but espe-

cially in the mineral soil layers.

Material examined :

Netherlands : CBS132.72, Meerdink Forest, humus layer, B.E. Söderström,

1970.

Sweden : All from 60-year-old Picea abies forest planted on a former beech

forest, Kongalund, South Sweden : CBS 626.73 and 922.73 = ATCC 38210

(type isolate) from humus (Ao2) horizon, CBS 923.73 from eluvial (Az), CBS

924.73 and 925.73 from illuvial (B) layers, B.E. Sóderstróm and E. Baath, 1973.

Germany : CBS 443.81 and 584.81, from roots of dying Abies alba, G.

Schüler, 1981.

DISCUSSION

The specific epithet was chosen to express the similarity with the genus

Scytalidium Pesante (production of arthroconidia and pigmented chlamydo-

spores). The only other known Oidiodendron species with chlamydospores is

O. chlamydosporicum Morrall (1968), type strain CBS 403.69. The chlamydo-

spores of this strain are mostly solitary or in pairs and initially mainly terminal,

4,07.5(-9.0) x 2.54.5(-6) um, and the conidia are narrowly cylindrical to

clavate, 4.0.6.0 x 1.0-2.0(2.5) um. In the description of O. chlamydosporicum,

the chlamydospores are given as measuring 4-9 um diam. and the conidia as

2.060 x 1.22.0 um. O. scytaloides has smaller chlamydospores and much

shorter conidia; but it is possible that MORRALL had based his diagnosis on

both taxa, as he reports repeated isolations. O. chlamydosporicum in the strict

sense has apparently not yet been found in Europe.

It is very likely that O. scytaloides is identical with Oidiodendron sp. descri-

bed by TOKUMASU (1973) from soil in white birch forest, Sugadaira, Japan,

which remained unnamed as that author hesitated about its delimitation from

0. chlamydosporicum.

SÓDERSTRÓM and BAATH (1978) reported it (as Oidiodendron sp. 1) to

be most frequent in the mineral soil horizons.

Like other species of Oidiodendron, O. scytaloides grows best on cherry

decoction (pH c. 4.5) or acidic malt extract agar (pH c. 6.0). In spite of these

Source : MNHN, Paris

242 W. GAMS & B.E. SODERSTROM

Fig. 2. — Oidiodendron scytaloides.

cover-slip culture (Riddell), x 8

a, b : Light micrographs of conidiophores grown in

and x 1500. c, d : Scanning electron micrographs of

conidiophores and conidial chains, c. CBS 626.73, x 2280, d. CBS 925.73, x 3650

Source : MNHN, Paris

OIDIODENDRON SCYTALOIDES N. SP. 243

acidic media, colonies tend to degenerate and to loose their initially rich sporu-

lating capacity. Such subcultures then are dark grey to black, somewhat moist,

often producing tufts of erect hyphae but with very moderate sporulation,

often devoid of pigmented conidiephore stipes. Submerged repent hyphae may

then disarticulate into subhyaline fragments, intermediate between chlamydo-

spores and conidia.

REFERENCES

BARRON G.L., 1962 New species and new records of Oidiodendron. Can. J. Bot. 40 :

589-607.

DOMSCH K.H., GAMS W. & ANDERSON T-H., 1980 — Compendium of soil fungi. Aca-

demic Press, London. 864 + 405 pp.

LITVINOV M.A., 1967 — Opredelitel’ mikroskopicheskikh pochvennykh gribov. Izdatel’st-

vo Nauka, Leningrad, 304 pp.

MORRALL R.A.A., 1968 — Two new species of Oidiodendron. Can. J. Bot. 46 : 203-

206.

SIGLER L. & CARMICHAEL J.W., 1976 — Taxonomy of Malbranchea and some other

Hyphomycetes with arthroconidia. Mycotaxon 4 : 349-488.

SÖDERSTRÖM B. & BAATH E., 1978 — Soil microfungi in three Swedish coniferous

forests. Holarctic Ecology 1 : 62-72.

TOKUMASU S., 1973 — Notes on Japanese Oidiodendron. Trans. Mycol. Soc. Jap. 14 :

246-255.

Source : MNHN, Paris

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A A 7o

245

RECHERCHES SUR LA LUTTE BIOLOGIQUE

CONTRE PYRICULARIA ORYZAE CAV.

Ill. — Influence de la température

sur l’aptitude de germes antagonistes

à inhiber in vitro la croissance mycélienne du parasite

par A.A.SY*, K. NORNG*, L. ALBERTINI* et G. BARRAULT*

RÉSUMÉ. — L'aptitude de vingt deux germes antagonistes à inhiber la croissance mycé-

lienne de Pyricularia oryzae Cav. a été examinée à trois températures repères (supra-mini-

mum : 15°C; optimum : 28°C; infra-maximum : 35°C) : quatre espéces du genre Trichoder-

ma extériorisent une bonne pression de sélection aux trois températures expérimentées;

cinq germes contrôlent assez bien le pathogène à 15°C tandis que neuf microorganismes

induisent un taux d'inhibition très satisfaisant à des températures élevées (28°C et 35°C).

SUMMARY. — The ability of twenty two antagonists to inhibit the mycelial growth of

Pyricularia oryzae Cav. was investigated at three «critical» temperatures (1 5°C,28 C, 35°C) :

among the 22 microorganisms tested, 4 species of Trichoderma displayed a high inhibition

rate at 15% °

Cas well as at 28°C and 35°C; some antagonists were more efficient at 15°C

whereas others proved to be effective only at 28°C and 35°C.

I. — INTRODUCTION

L'inhibition in vitro de la croissance mycélienne de champignons phytopatho-

gènes par des microorganismes antagonistes apparaît nettement dépendante

de la température de confrontation.

Cest ainsi que, à pH 4,4, la croissance mycélienne radiale d'Helminthospo-

rium turcicum est inhibée a 66%, 91% et 63% par Trichoderma harzianum

respectivement à 14°C, 25°C et 30°C (MICKALA-DOUKAGA, ALBERTINI

et PETITPREZ, 1978).

* Laboratoire de Cytologie et de Pathologie Végétales, Ecole Nationale Supérieure Agrono-

mique - 145 avenue de Muret, 31076 Toulouse Cedex, France.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

246 A.A. SY, K.NORNG, L. ALBERTINI 8: G. BARRAULT

Toujours concernant le facteur température, les recherches récentes de

NORNG et col. (1981, données non publiées) ont abouti aux observations

suivantes, sur substrat tamponné à pH 7,5 :

— Le taux d'inhibition de la croissance mycélienne en surface de Botrytis

cinerea (souche R) par Epicoccum purpurascens est évalué à 58 % à 22°C contre

— 27 % (stimulation) à 27°C.

Trichoderma harzianum CPO/80 inhibe à 98% et 72% la croissance

mycélienne de Eutypa armeniacae aux températures respectives de 22°C et 12°C.

— Les nombreuses expériences de confrontation de divers antagonistes avec

des agents pathogènes tels que Stereum hirsutum, Verticillium sp., Sclerotinia

sp: et Phomopsis viticola tendent à corroborer l'idée que le résultat des intérac-

tions in vitro parasite x antagoniste est étroitement lié, entre autres, au facteur

température

Dans la présente publication, nous exposons les résultats d'un screening in

vitro en fonction du facteur température, dans le cas précis de Pyricularia

oryzae Cav. (le plus redoutable pathogène du riz) interagissant avec des germes

antagonistes (champignons, bactéries). Les trois températures retenues (15°C,

28°C, 35°C) pour expérimentation ont été choisies en fonction de résultats

antérieurs de l'un de nous (SY, 1976) montrant qu'elles sont respectivement

supra-minimale, optimale et infra-maximale pour la croissance mycélienne du

pathogène; les analyses de confrontations pathogène-antagonistes proches du

minimum et du maximum thermique du pathogène ne sont pas, en effet, sans

intérêt car, en lutte biologique, il faut pouvoir, de facon idéale, inhiber la crois-

sance du pathogène dans tout l'intervalle thermique autorisant, entre autres,

cette croissance (BAKER et COOK, 1974; MICKALA-DOUKAGA, ALBERTINI

et PETITPREZ, 1978).

II. — MATÉRIEL ET MÉTHODES

A) Matériel biologique

— Le parasite est représenté par la souche Se3 de Pyricularia oryzae.

— Les antagonistes, au nombre de vingt deux, sont codifiés dans le tableau I

qui récapitule les résultats numériques.

B) Méthodes

La technique de confrontation directe sur milieu solide en boites de Petri,

ainsi que la méthode d'évaluation du taux d'inhibition de la croissance mycé-

lienne en surface de P. oryzae par les antagonistes ont été exposées dans une

publication antérieure (SY, ALBERTINI et HAMANT, 1978).

III. — RÉSULTATS ET REMARQUES

L'examen analytique des résultats présentés au Tableau I permet, en fonction

de leur capacité à inhiber la croissance mycélienne de P. oryzae Se3, de séparer

Source - MNHN. Paris

LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE PYRICULARIA ORYZAE. IIL 247

TABLEAU I

Expression numérique des résultats :

mise en évidence des potentialités antagonistes

de différentes souches fongiques et bactériennes par évaluation du taux d’inhibition relative

%) de la croissance mycélienne en surface de Pyricularia ory.

zae Cav. (souche Se 3);

confrontations directes sur PCA et pour trois températures repéres.

Températures (C) etdurées 15°C 28°C 35°C

d'incubation enjours (j) (13 j) (53) (6j)

Germes antagonistes

ichoderma pseudokoningii Rifai (N 69) 87,8 95;T 97,4

"richoderma harzianum Rifai (N 68) 786 901 95,9

Trichoderma koningii Oud. (N 70) 775 881 90,6

Trichoderma sp. Pers. (IKP/6) 76,8 80,2 952

ichoderma harzianum Rifai (N 72) 78,6 52,0 10,2

Trichoderma viride Pers. ex S.F. Gray (N 76/5) 70,3 34. 157

Chaetomium globosum Kunze ex Fr. (N 76/1) 63,2 146 23,2

Trichoderma sp. Pers. (GX2) 589 431 25,6

Fusarium sp. Link ex Fr. (C 80) 56,4 50,6 40,4

Bactérie (CS/Ad) 849 915

Bactérie (CS/PO) 25,7 86,1 86,1

Bactérie (CS/C11) 253 68,5 781

Bactérie (CS/Tp) 200 863 826

Bactérie (CS/DO) 1359 80,5 88,2

Bactérie (CS/C12) 75 916 912

Bactérie PTZ GANTS 2 060,8.

Aspergillus niger van Tieghem 19,3 709 47,7

Curvularia eragrostidis (P. Henn.) J.A. Meyer 19,3 607 66,2

Trichoderma polysporum (Link. ex Pers.) Rifai S61 25,5 54,1

(N 69)

Streptomyces antibioticus (Waks. et Wood) 55,7 303 62,7

Waks et Hen

Drechslera oryzae (Breda de Haan) Subram et Jain 48,6 542 51,7

(N 80)

Curvularia geniculata (Tracy et Earle) Boedijn 50,0 27,2 40,7

- Chaque taux d'inhibition est calculé á partir de mesures d'aires de colonies effectuées

sur 12 boites de Petri.

— Croissance en surface du témoin P. or

11,11 cm? & 28°C en 5 jours et 13,26 em? a 35°C en6 jours.

les antagonistes étudiés en quatre groupes :

ig Cav. (Se 3) : 5,60 em? à 15°C en 13 jours,

1) Trichoderma pseudokoningii (N 69), T. harzianum (N 68), T. koningii

(N 70) et Trichoderma sp. (IKP/6) manifestent une trés nette supériori-

té sur tous les autres antagonistes testés en inhibant á un haut degré le

Source - MNHN. Paris

248 A.A. SY, K. NORNG, L. ALBERTINI & G. BARRAULT

pathogène aux trois températures expérimentées (niveau minimal : 76,8 %

d'inhibition de P. oryzae (Se 3) par Trichoderma sp. (IKP/6) à 15°C; niveau

maximal : 97,4 % par T. pseudokoningii (N 69) à 35°C).

2) Trichoderma harzianum (N 72), T. viride (N 76/5), Chaetomium globosum

(N 76/1), Trichoderma (GX2), Fusarium sp. (C80) contrôlent mieux la crois-

sance mycélienne de P. oryzae à basse température (15°C) qu’aux températures

de 28°C et 35°C, seuls les deux premiers antagonistes nommés provoquant à

15°C un taux d'inhibition supérieur à 70 75.

3) En revanche, les six bactéries CS, la bactérie PTZ, Aspergillus niger,

Curvularia eragrostidis extériorisent une activité nettement meilleure à 28"C

ou à 35°C qu'à 15°C (aux deux premières températures indiquées, les inhibi-

tions notées sont comprises entre 60,7 % et 91,6 %).

4) Enfin, T. polysporum (N 69), Streptomyces antibioticus, Drechslera

oryzae (N 80) et C. geniculata montrent une activité comparable, mais insuffi-

sante, aux trois températures expérimentées.

L'intérét de cette démarche méthodologique réside dans le fait qu’elle permet

de visualiser rapidement les limites thermiques d'utilisation de chaque germe

antagoniste. Une telle investigation doit cependant étre complétée par une

analyse de l'influence du facteur pH sur le niveau d'activité antagoniste des

microorganismes testés aprés avoir, comme pour la température, retenu des

valeurs repères de pH fournies par la courbe de croissance mycélienne du patho-

gène en fonction de ce dernier facteur (tel est l’objet de la note qui suivra

chronologiquement, dans cette même Revue, l'exposé du présent travail). C'est

par ce biais que nous parviendrons le mieux à circonscrire le spectre d’action

des germes antagonistes dont nous devrons, en outre, tester l'aptitude à inhiber

in vitro d'autres formes d'expression de l'agent pathogène parmi lesquelles la

germination des conidies (émission et élongation des tubes germinatifs) appa-

rait très importante.

Au terme de ces premières étapes de screening in vitro, il sera nécessaire

de juger — sans préjuger de la nature des corrélations antagonistes-pathogène-

hôte qui en découleront — de l'aptitude des germes antagonistes sélectionnés

à inhiber in vivo l'expression du pathogène sur l'hôte.

BIBLIOGRAPHIE

BAKER K.F. et COOK R.J., 1974 — Biological control of plant pathogens, FREEMAN

WH. and Co, San Francisco.

MICKALA-DOUKAGA E., ALBERTINI L., PETITPREZ M., 1978 — Action in vitro

d'antagonistes fongiques sur la croissance mycélienne de l'Helminthosporium turcicum

Pass. parasite du maïs. Note préliminaire. Bull. Soc. Myc. Fr. 94 : 33-47.

Source - MNHN. Paris

LUTTE BIOLOGIQUE CONTRE PYRICULARIA ORYZAE. 111 249

NORNG K., ALBERTINI L., SY A.A., 1981 — Données non publiées.

SY A.A., 1976 — Contribution à l'étude de P. oryzae Cav. morphologie, biologie et physio-

logie. Recherches im vitro d'antagonistes dans une perspective de lutte biologique.

Thèse Docteur-Ingénieur, n° 534, Université Paul Sabatier, Toulouse, France.

SY AA, ALBERTINI L. et HAMANT Cl, 1978 — Recherches sur la lutte biologique

contre le Pyricularia oryzae Cav.;1 - Action in vitro d’antagonistes fongiques sur la

croissance mycélienne du parasite. Rev. gén. Bot. 85 : 63-81.

Source : MNHN, Paris

251

ADICIONES AL GÉNERO PYXIDIOPHORA

(PYRENOMYCETES)!

por J.M. BARRASA y G. MORENO*

RÉSUMÉ. — Nous proposons deux nouvelles sections dans la taxonomie du genre Pyxidio-

phora Bref. & Tav. emend. Lundq. : section Pyxidiophora sect. nov. et section Badiocollis

sect. nov. Leur différence s'appuie sur la présence ou l'absence de pigmentation des cellules

du col du périthéce. Nous proposons une clé de détermination et une étude comparative.

des espéces coprophiles de la section Badiocollis : P. badiorostris Lundq., D. fimbriata

Barrasa & Moreno et une nouvelle espéce : P. crenata.

SUMMARY. — Two new sections in the taxonomy of the genus Pyxidiophora Bref. & Tav.

emend. Lundq. are given : section Pyxidiophora sect. nov. and section Badiocollis sect. nov.

both sections are easily distinguished by the absence or presence of pigmented cells in the

perithecial neck, An essay of key and a comparative study of coprophilous species from

the Badiocollis section in which we enclose P. badiorostris Lundq. and D. fimbriata Barrasa

& Moreno, were done. P. crenata Barrasa & Moreno belongs also to Badiocollis section and

it is a new species to science.

RESUMEN. — Dos nuevas secciones en la taxonomia del genero Pyxidiophora Bref. & Tav.

emend. Lundq. : sección Pyxidiophora sect. nov. y sección Badiocollis sect. nov., diferen-

ciandose ambas por la ausencia o presencia de pigmentación en las células del cuello del

peritecio.

Se realiza un ensayo de clave y un estudio comparativo de las especies hasta ahora

copréfilas de la sección Badiocollis en la que incluimos P. badiorostris Lundq., D. fimbriata

Barrasa y Moreno y se propone como nueva dentro de ésta sección P. crenata Barrasa y

Moreno sp. nov.

1. Comunicación presentada en la 1 Reunión Conjunta de Micología (la reunión del Grupo

Especializado de Micologia de la SEM y V Jornadas de la AEEM, Octubre 1982).

* Dpto. Botánica, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Alcalá de Henares,

Madrid, España.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

1. — Pyxidiophora crenata Barrasa & Moreno. A : Peritecio; B, C, D : Detalles del

cuello

Source : MNHN, Paris

PYXIDIOPHORA 253

INTRODUCCION

Continuando con los estudios sobre hongos coprófilos comenzados hace

algunos años, MORENO & BARRASA (1977), BARRASA Y MORENO (1980,

1982), en el presente trabajo queremos proponer una nueva especie del genero

Pyxidiophora obtenida en cultivo en camara humeda de un estiercol de vaca

procedente de la Sierra de Leyre (Navarra). Los especímenes encontrados

mostraban una serie de características que no aparecían citados en los trabajos

especializados sobre este género : BRETON & FAUREL (1968), HAWKS-

WORTH & WEBSTER (1977), LUNDQVIST (1980) y BARRASA & MORENO

(1982).

Por otro lado la fructificación en los cultivos de diverses especies del género

con el cuello del peritecio fuertemente. pigmentado de pardo oscuro nos ha

servido de base para proponer tambien dos nuevas secciones en la taxonomía de

este género.

MATERIAL Y METODO

El material estudiado procede de estiercol de vaca recogido en la Sierra de

Leyre (Navarra), desecado y llevado al laboratorio donde se mantuvo en cámara

húmeda y segun las tecnicas indicadas anteriormente (BARRASA & MORENO,

1980). El material se ha observado al microscopio montandose preparaciones

en agua, Las preparaciones de ésta especie se conservan en medio Hoyer's

segun las proporciones indicadas anteriormente (BARRASA Y MORENO,

1980). Las fotografías se han realizado en un microscopio Nikon modelo Opti-

phot con sistema incorporado de fotografía automático.

El material se encuentra depositado en el herbario particular de los autores

H. JB-GM, actualmente archivado en el Departamento de Botánica de la Facul-

tad de Ciencias de la Universidad de Alcalá de Henares, habiendose repartido

isotipos a los centros mencionados en la descripción de la especie. Indicamos

la numeración de nuestro herbario para cualquier consulta o posterior revisión.

PYXIDIOPHORA CRENATA Barrasa & Moreno sp. nov.

Fig. 1, A-D; Fig. 2, E-G; Fig. 3, a-f.

Species dispicitur crenato ore colli eius perithecii.

Perithecia semiinmersa, soluta, obscura, 425-460 x 80-115 um.

Collum eius forma incipiens conica in cylindraceam finitur, castaneo colore

obscurato, 320-365 um longum, 45-47 latum in basi, 25-29 um in parte suprema;

apex fimbriatus 42-55 um longus colli ora specialiter crenata, oblongis consti-

tuta hyphis, intertextis sinuosisque, cuius ope ora rugosa esse videtur.

Venter globosus, 84-115 um latus, constitutus cellulis partim angulosis,

partim pseudoparenchymatosis, quarum est diametrum 9-14 um longum; earum

cellularum superiores pigmentum habent castaneum obscuratum, inferiores

Source - MNHN. Paris

Fig. 2. — Pyxidiophora crenata Barrasa & Moreno. E : Vientre del peritecio; F, G : Pelos

coloreados del vientre del peritecio; H : Esporas

autem partim hyalinum, partim ochraceum. Ventri insunt pili, castaneo obscu-

rato colore, 15-20 x 3,8-5 pm, breves, lata basi, haud septati.

Paraphyses absunt. Asci unitunicati, deliquescentes, claviformes, 45-50 x

11-13 um, octas sporas continentes. Sporae hyalinae sunt, partim naviculiformes,

partim suballantoidae, obtusis extremis, 19-26 x 4,5-7 um, quarum protoplastus

septum praebet excentricum versus basim, nullis corporibus pigmentatis.

Habitat — Species coprophila : nascitur in stercore vacuno (Bovis tauri),

collecto in ‘Sierra de Leyre! (Navarra), leg. Barrasa & Moreno (16-V-82). H.JB-

GM 2600 (holotypus)

Peritecios semiinmersos, aislados, oscuros, midiendo 425-460 x 80-115 um.

Cuello de cónico a subcilindrico, de color pardo oscuro, midiendo 320-

365 um de longitud y 4547 um de ancho en su parte inferior y 25-29 um en

Source : MNHN. Paris

PYXIDIOPHORA 255

Fig. 3. — Pyxidiophora crenata Bartasa & Moreno. a : Peritecio; b : Borde del cuello; c

Células del vientre del peritecio; d : Pelos del vientre del peritecio; e : Asca; f: Espora.

su parte superior, ápice fimbriado midiendo de 42-55 um; borde del cuello

tipicamente crenado, formado por hifas alargadas, entrelazadas y sinuosas que

confieren aspecto rugoso al borde.

SAMA

not Source : MNHN, Paris

z +

SAN ^ 10gm

top | T zh EG y AS

Fig. 4. — Especies de la sección Badiorostris. Pyxidiophora badiorostris. 1 : Peritecio:

L, O : Cuello; R: Espora. Pyxidiophora fimbriata. J: Peritecio; M, P. : Cuello; S : Espora.

Pyxidiophora crenata. K : Peritecio; N,Q : Cuello; T : Esporas.

BIL

E um]

Source : MNHN, Paris

PYXIDIOPHORA 257

Vientre globoso 84-115 m de ancho formado por células de angulosas a

pseudoparenquimatosas, de 9-14 jm de diámetro, células superiores del vientre

pigmentadas de pardo oscuro, las inferiores hialinas a amarillentas, vientre con

pelos coloreados, pardo oscuros, 15-20 x 3,8-5 um, cortos y ensanchados en la

base, no septados.

Parafisos ausentes. Ascas unitunicadas, delicuescentes, claviformes, midiendo

45-50 x 11-13 um con ocho esporas en su interior. Esporas hialinas, naviculares

a subalantoides, con extremos obtusos, midiendo 19-26 x 4,5-7 um, protoplasto

con un septo excentrico hacia la base, sin cuerpos pigmentados.

Habitat. — Especie coprófila, desarrollandose sobre estiercol de vaca (Bos

taurus) recogido en Sierra de Leyre (Navarra). Los especímenes fueron obtenidos

en cultivo en cámara humeda en el laboratorio al cabo de 71 dias de incubación,

leg. Barrasa & Moreno (16-V-82). H. JB-GM. 2600 (Holotypus). Isotypus en el

Institute of Systematic Botany, Uppsala University (UPS) y en el Real Jardin

Botánico de Madrid (MA).

Observaciones. — Esta especie se caracteriza por presentar las células del

cuello del peritecio de color pardo oscuro igual que P. badiorostris y que P.

fimbriata.

Es facilmente distinguible de P. badiorostris por presentar el ápice del cuello

fimbriado, por las células del cuello del peritecio entrelazadas entre sí y por su

espora más pequeña, navicular y sin cuerpo pigmentado.

Se distingue de P. fimbriata por presentar el borde del cuello fuertemente

crenado, células del cuello entrelazadas entre sí y espora navicular y de menor

tamaño.

ENSAYO TAXONOMICO DEL GENERO

Hasta 1980 todas las especies de Pyxidiophora conocidas aunque bajo otros

nombres genéricos (Mycorhynchus $ Copranophilus) se caracterizaban por

presentar las células del cuello del peritecio no coloreadas.

LUNDQVIST (1980) propuso como especie nueva P. badiorostris indicando

que ésta especie es facilmente diferenciable de las otras Pyxidiophora por pre-

sentar el cuello del peritecio pardo y rugoso.

BARRASA & MORENO (1982) proponen como especie nueva P. fimbriata

la cual presentaba tambien el cuello del peritecio fuertemente coloreado de

pardo-oscuro, pero sin embargo tenía evidentes diferencias con P. badiorostris.

En el presente trabajo proponemos P. crenata como especie nueva presentan-

do tambien el cuello del peritecio coloreado de pardo oscuro y cuyas diferencias

con P. badiorostris y P. fimbriata ya hemos comentado en las observaciones.

La aparente abundancia de especies del genero Pyxidiophora con cuello

coloreado de pardo-oscuro nos ha llevado a proponer dos nuevas secciones

dentro de la taxonomía del género, basadas en la presencia ó ausencia de pig-

mentación pardo-oscura en las células del cuello del peritecio.

Source : MNHN. Paris

258 J.M. BARRASA 8: G. MORENO

Asi, la sección Pyxidiophora agrupa a todas aquellas especies con cuellos

hialinos que fueron propuestas antes de 1980. La sección Badiocollis agrupa

a todas las especies con cuello pardo-oscuro, en ésta sección se incluyen las

especies propuestas desde 1980 en adelante, es decir hasta el momento sólo

trés especies, las tres presentes en la micoflora española : P. badiorostris Lundq.

(1980), P. fimbriata Barrasa & Moreno (1982) y P. crenata Barrasa & Moreno

sp. nov.

En la figura 4 se pueden apreciar las diferencias entre las tres especies.

sección Pyxidiopbora sect. nov.

Amplectitur eas species quarum cum matura facta sunt. perithecia, collum

praebent hyalinis cellulis. praeditum. Typus sp. : Pyxidiophora asterophora

(Tul.) Lindau.

Agrupa a las especies que presentan en la madurez del peritecio las células

del cuello hialinas. Especie tipo : Pyxidiophora asterophora (Tul.) Lindau.

sección Badiocollis sect. nov.

Eas species amplectitur quarum cum mature facta sunt perithecia, collum

praebent cellulis praeditum pigmento castaneo obscurato. Typus sp. : Pyxidio-

phora badiorostris Lundq.

Agrupa a las especies que presentan en la madurez del peritecio células del

cuello pigmentadas de pardo-oscuro. Especie tipo : Pyxidiophora badiorostris

Lundq.

CLAVE PARA LAS ESPECIES

DE LA SECCION BADIOCOLLIS BARRASA & MORENO

A. Apice del cuello rostrado, borde del cuello formado por células rugosas,

espora con cuerpo pigmentado ............... P. badiorostris Lundq.

(Fig. 4, -L-O-R)

A. Apice del cuello fimbriado, borde del cuello formado por células no rugosas,

¡esporas sin Cuerpo pigmentado hioa HU T a a 1

1. Borde del cuello liso, formado por células paralelas, esporas claviformes a

fusiformes, 34-43 x 3,54 um ......... P. fimbriata Barrasa & Moreno

(Fig. 4, J-M-P-S)

1. Borde del cuello crenado formado por células entrelazadas, esporas navi-

culares 19:26304/5 T mi ee a aa r P. crenata Barrasa & Moreno

(Fig. 4, K-N-Q-T)

Source : MNHN. Paris

PY XIDIOPHORA 259

AGRADECIMIENTOS

Nuestro más sincero agradecimiento al Profesor LUNDQVIST por la revisión de la

especie nueva y confirmarnos que P. crenata no se encontraba descrita con anterioridad.

Al Profesor PEREZ-LOSANTOS por el envío de diferentes estiercoles para su cultivo

en cámara humeda en el laboratorio.

Al Profesor MARINEZ-BIGORRA por la realización de las descripciones latinas.

BIBLIOGRAFIA

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sobre materias fecales (2a Aportación). Acta Bot. a Malacitana 6 : 111-148.

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BRETON A. & FAUREL L., 1968 — Etudes des affinités du genre Mycorhynchus Sacc.

et descriptions de plusieurs espèces nouvelles. Rev. Mycol. 32 : 229-258.

HAWKSWORTH D.L. & WEBSTER J., 1977 — Studies on Mycorhynchus in Britain. Trans.

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LUNDQVIST N., 1980 — On the genus Pyxidiophora sensu lato (Pyrenomycetes). Bot.

Notiser 133 : 121-144.

MORENO G. & BARRASA J.M., 1977 — Contribución al estudio de hongos que viven

sobre materias fecales (la Aportación). Acta Botanica Malacitana 3: 5-33.

Source : MNHN. Paris

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261

UTILISATION DE SUCRES ET DE POLYOLS

PAR LA MYCOFLORE D'ABIES ALBA MILL.

3. CHAMPIGNONS DU SOL (fin)'

par F. GOURBIERE*

RÉSUMÉ. — Utilisation de 25 sucres et polyols par 11 champignons isolés de la litière

d'Abies alba Mill. et appartenant aux genres Trichoderma, Calcarisporium, Paecilomyces,

Verticillium, Chaunopycnis, Acremonium et Beauveria. Les problèmes biochimiques, géné-

tiques, taxonomiques et écologiques liés à l'utilisation du saccharose, du mélibiose et du

raffinose sont discutés en détail.

SUMMARY. — Utilization of 25 sugars and polyols by 11 fungi isolated from Abies alba

Mill. litter and belonging to the genera Trichoderma, Calcarisporium, Paecilomyces, Verti-

cillium, Chaunopycnis, Acremonium and Beauveria. The biochemical, genetical, taxono

mical and ecological conditions of utilization of sucrose, melibiose and raffinose are dis-

cussed.

Nous poursuivons l'étude de Putilisation des sucres et polyols par les champi-

gnons présents sur les aiguilles de Sapin (GOURBIERE 1981 a, 1982 a). Dans

cette troisième partie nous achevons l'examen du groupe des champignons

du sol, caractéristique de la litière ancienne (groupe successionnel V, GOUR-

BIERE 1982 b). Leur distribution est donnée dans le tableau 1. Ce sont tous

des hótes fréquents des litiéres et des sols forestiers en climat tempéré et leur

intérêt dépasse donc le cas particulier de la litière étudiée.

1. Ce travail a été réalisé dans le cadre de l'ERA CNRS n° 848 «Ecologie microbienne ».

+ Laboratoire d'Écologie Végétale, Université Lyon I, 43 Bd du 11 Novembre 1918, F.

69622 Villeurbanne Cedex France.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN, Paris

262 F. GOURBIERE

I. — MATERIEL ET METHODE

A. -MATÉRIEL

Les souches testées proviennent donc de la litière d'aiguilles de Sapin et ont

été isolées sur PDA à pH 5,7 pour les deux Trichoderma (GOURBIERE 1979)

et à pH 8,3 pour les autres espèces (GOURBIERE 1981 b). Toutes les identifi-

cations ont été effectućes ou vérifićes par le CentraalBureau voor Schimmel-

cultures (Baarn). Les numéros de souches sont ceux de notre mycothèque.

Tab. 1. — Pourcentages d’aiguilles colonisées par chaque espéce en fonction du stade de décom-

position (V: aiguilles vivantes, Lo: sénescentes, L, F1, F2: stades successifs de la litière au sol).

Stades de décomposition v Lo È Fi F2

Trichoderma viride 0 0 1,1 140 18,8

Trichoderma polysporum 0 0 8,1 153 14,2

Calearisporium arbuscula 0 0 1,5 AS

Paecilomyces farinosus 1,5 10,0 270 50,0 33,0

Verticillium bulbillosum 0 1,0 2,0 8, 250

Verticillium sp. A111 0 0 0 0 2,0

Chaunopyenis alba 0,5 40 180 28,0 43,0

Acremonium butyri 0,5 1,5 2,0 c e

Acremonium sp. A 104 0 0 9,0 Ti MOS

Beauveria brongniartii 0 0,5 5,5 45 9,5

Beauveria bassiana 0 0 6,5 65 45

Trichoderma viride Pers. ex S. F. Gray (A3)

Trichoderma polysporum (Link ex Fr.) Rifai (A4)

Calcarisporium arbuscula Preuss (A83)

Paecilomyces farinosus (Holm ex S.F. Gray) Brown & Smith (A89)

Verticillium bulbillosum W. Gams & Malla (A90)

Verticillium sp. (A111)

Chaunopycnis alba W. Gams (A91)

Acremonium butyri (van Beyma) W. Gams (A97)

Acremonium sp. (A104)

Beauveria brongniartii (Sacc.) Petch (A93)

Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. (A 105).

B. - METHODE (cf. GOURBIERE 1981 a)

Les poids secs indiqués dans les tableaux 2 et 3 représentent la croissance

à partir de 200 mg de substrat (sucre ou polyol) et de 10 mg de yeast-extract

dans 20 ml de milieu minéral à pH 5,1. La quantité de substrat est ajustée

pour chaque composé de façon à apporter 4 g de carbone par litre. Chaque

valeur est la moyenne de trois répétitions. La précision des mesures (2 écarts-

types) est de l'ordre de 5 mg.

Source : MNHN. Paris

MYCOFLORE D'ABIES ALBA. 3 263

C.- INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

1. Croissance sur glucose (Tab. 2).

Tab. 2. — Croissance sur glucose. Poids sec en mg pour 210mg de substrat. a: rapport

poids sec à 14 jours / poids sec maximum; b : rapport poids sec maximum / poids de

substrat apporté.

Jours de culture 7 4 2n 28 35 a b

Trichoderma viride 37 43 30 19 18 1,00 0,20

Trichoderma polysporum 32 46 55 49 45 — 0,84 026

Calcarisporium arbuscula 54 58 32 28 26 100 0,28

Paecilomyces farinosus 30 63 75 72 76 0,84 0,36

Verticillium bulbillosum 43 62 51 31 31 100 0,30

Verticillium sp. A111 75 91 89 85 82 1,00 0,43

Chaunopycnis alba 50 70 76 72 74 092 0,36

Acremonium butyri 49 82 80 79 78 1,00 0,39

Acremonium sp. A104 35 55 59 63 64 0,86 0,30

Beauveria brongniartii 32 — 48 52 47 43 0,2 025

Beauveria bassiana 36 56 55 49 43 1,00 0,27

Le rapport : poids sec maximum / poids de matière organique fournie (210mg)

est compris entre 0,20 et 0,43, du même ordre de grandeur que pour les champi-

gnons étudiés précédemment.

Signalons que quatre espèces (mineures) du même groupe, isolées à pH 8,3,

ne se sont pas développées sur le milieu utilisé. Ce sont :

Acremonium implicatum (Gilman & Abbott) W. Gams

Acremonium cf. persicinum (Nicot) W. Gams

Verticillium tenerum (Nees ex Pers.) Link

Acremonium strictum W. Gams

2. Temps de culture

Nous avons choisi une incubation de 14 jours. Le rapport : poids sec à 14

jours / poids sec maximal est toujours supérieur à 0,80.

3. Signification des résultats.

Nous avons retenu les critéres suivants :

0 -9 mg : substrat non utilisé (19 cas).

0-19 mg : valeurs litigieuses (25 cas) qui nécessiteraient de nouveaux essais.

On peut cependant considérer que

10 -12 mg : substrat probablement non utilisé

13 - 19 mg : substrat probablement utilisé

20 mget plus : substrat utilisé (231 cas).

Source : MNHN. Paris

264 F. GOURBIERE

Il. — RESULTATS (Tab. 3)

Tab. 3. — Croissance sur différents sucres et polyols á 14 jours pour 210 mg de substrat

apporté. (glucitol =sorbitol; ribitol = adonitol; galactitol = dulcitol).

a 5

4 als à i

SEE sod m

SMS SEE ME NEN NC A

AE 3 3 nr oi

Pec etos ae es iS

a a e

témoin 4 5 cS 3 4 5 4 4 4 3 3

MONOSACCHARIDES:

glucose 64 39 51 64 79 97 76 82 56 48 59

fructose 74 48 57 50 75 97 80 84 58 38 49

mannose 68 56 53 57 72 97 88 80 62 46 62

galactose 80 47 57 64 67 124 81 79 59 42 57

L-sorbose 14 20 18 44 55: 50 19 69 5 4 5

L-rhamnose 15 17 40 13 68 52 7 10 9 4

xylose 65 49 43 57 63 94 4 79 37 28 62

L-arabinose 70 28 55 51 79 95 21 78 52 18 41

D-arabinose 12 15 34 8 48 37 17 1 1l B 10

ribose 73 47 4 54 73 84 79 76 61 39 54

DISACCHARIDES

maltose 1 15 40 53 73 95 64 82 31 45 58

tréhalose 83 42 59 61 43 82 69 87 56 45 41

lactose 62 18 29 28 57 26 26 31 10 13 27

cellobiose 88 43 37 48 78 97 64 80 36 28 25

saccharose 78 S 54 69 79 92 63 82 7 49 62

mélibiose 47 33 31 54 79 85 6 79 4 2 19

TRISACCHARIDES

raffinose 61 22 45 62 89 78 27 87 6 21 27

mélezitose 10 7 69 75 83 102 29 76 4 43 17

POLYOLS

glycérol 88 48 61 64 88 102 66 83 49 57 72

érythritol 63 41 59 40 88 78 23 47: 19 45 66

ribitol 6 29 47 66 88 79 63 82 49 46 65

glucitol 61 31 59 54 87 76 69 83 44 31 46

mannitol 66 48 59 70 51 90 45 86 42 82 65

galactitol 60 38 59 53 93 71 10 85 21 35 54

inositol 38 34 36 36 73 36 42 26 24 17 49

Source : MNHN. Paris

MYCOFLORE D'ABIES ALBA. 3 265

Les deux Verticillium et Calcarisporium utilisent tous les substrats testés.

Les autres espèces présentent de une (Paecilomyces) à huit (Acremonium sp.

104) déficiences.

Certains substrats sont utilisés par toutes les espèces :

— hexoses : fructose, glucose, mannose, galactose.

— pentoses : L-arabinose, ribose.

— disaccharides : tréhalose, cellobiose.

— polyols : glycérol, erythritol, glucitol, mannitol, inositol.

Deux groupes de substrats présentent la majorité des déficiences :

— L-sorbose (3), L-thamnose (5), D-arabinose (6)

— saccharose (2), raffinose (1), mélibiose (3), mélezitose (3).

Les autres déficiences sont dispersées sur cing substrats (xylose, maltose,

lactose, ribitol et galactitol) chacun étant utilisé par 10 espèces sur 11,

Les résultats obtenus pour Trichoderma viride et T. polysporum sont en bon

accord avec ceux publiés pour ces espèces par DANIELSON et DAVEY (1973),

sauf en ce qui concerne l'inositol qui est utilisé par nos deux souches alors

qu'aucun des Trichoderma testé par ces auteurs m'utilisait ce polyol.

III. — DISCUSSION

Au terme de ces trois publications nous connaissons les capacités d'utilisation

de 25 sucres et polyols par 33 espéces appartenant au méme groupe écologique

spatio-temporel, soit 825 données élémentaires,

Le but était à l'origine de reconnaitre si ce groupe était homogéne ou non

vis-à-vis de l'utilisation de ces composés. De toute évidence il ne l'est pas.

Il convient d'analyser ces résultats à différents niveaux, en particulier biochi-

mique, génétique, taxonomique et écologique.

Nous n'envisagerons ici, à titre d'exemple, que les données relatives à l'utili-

sation du saccharose, du mélibiose et du raffinose.

A.- NIVEAU BIOCHIMIQUE

Nous suivons la méthode d’analyse proposée par BARNETT (1968, 1976)

pour les levures,

Le raffinose est un trisaccharide qui peut être hydrolysé de deux manières :

- raffinose = saccharose + galactose (agalactosidase)

- raffinose = mélibiose + fructose (Bfructosidase).

Les disaccharides obtenus peuvent à leur tour étre hydrolysés par les mêmes

enzymes, le saccharose pouvant en outre étre attaqué par une aglucosidase

non active sur le raffinose.

- saccharose = fructose + glucose (Bfructosidase ou à glucosidase)

- mélibiose = glucose + galactose (agalactosidase).

Source : MNHN, Paris

266 F. GOURBIERE

L'utilisation du raffinose nécessite donc deux enzymes, si l'un d'eux est

absent un tiers seulement du substrat est utilisé.

Le tableau 4 montre les différentes combinaisons possibles et la répartition

des 33 espéces testées.

Tab.4. — Relations entre l'utilisation du saccharose, du mélibiose et du raffinose. Nombre

d'espéces par cas possible. Les cases vides correspondent aux combinaisons biochimi-

quement impossibles.

saccharose

mélibiose

raffinose 1/3

La majorité des champignons appartient aux deux cas extrémes :

: saccharose +, mélibiose +, raffinose + (18 espèces)

: saccharose —, mélibiose —, raffinose — (11 espèces)

aucune n'appartient aux cas «interdits» :

: saccharose +, mélibiose +, raffinose — ou 1/3

: saccharose —, mélibiose —, raffinose + ou 1/3.

Les cas d'utilisation partielle du raffinose sont peu nombreux :

: saccharose +, mélibiose —, raffinose 1/3 (3 espéces)

saccharose —, mélibiose +, raffinose 1/3 (1 espéce)

Le cas : saccharose +, mélibiose —, raffinose —, correspondant à l'hydrolyse

du saccharose par une glucosidase, n’est pas représenté.

L'utilisation du saccharose et (ou) du mélibiose entraîne donc l’utilisation

totale (ou partielle) du raffinose pour les raisons biochimiques et enzymolo-

giques exposées.

- NIVEAU GÉNÉTIQUE

On constate que, bien qu'à priori indépendantes, l'agalactosidase et la f

fructosidase apparaissent en fait liées, les espéces ne possédant que l'une d'entre

elles étant minoritaires.

Pour expliquer cet état de fait on peut envisager :

soit que les deux enzymes sont liées génétiquement. BARNETT (1976)

explique ainsi certaines associations d'enzymes n'ayant aucune base biochi-

mique.

— soit que leurs substrats étant réguliérement associés dans la nature, la

sélection a porté simultanément sur les deux enzymes.

Source : MNHN. Paris

MYCOFLORE D'ABIES ALBA. 3 267

C.- NIVEAU TAXONOMIQUE

Les deux enzymes ne sont pas distribués de façon homogène au plan taxono-

mique. Deux cas sont particulièrement significatifs.

— sur 10 Penicillium testés, 9 sont saccharose +, mélibiose +, raffinose +.

La seule exception (P. cf. raistrickii), saccharose +, mélibiose —, raffinose 1/3,

P ve r

peut étre considérée comme une déficience secondaire.

— sur 12 Mucorales testées, 10 sont saccharose —, mélibiose —, raffinose

Seules les deux variétés de Mortierella (sub. gen. Micromucor) sont saccharose +,

mélibiose +, raffinose +.

De ces trois niveaux d'analyse nous pouvons conclure :

— que l'utilisation du raffinose dépend de celle d'un au moins de ses consti-

tuants diosidiques,

qu'en général une espéce utilise soit lesdeux, soit aucun de ces constituants,

— qu'au moins dans certains cas, ce caractére est d'ordre supra- spécifique.

D.- NIVEAU ÉCOLOGIQUE

Il ne peut étre abordé qu'à partir d'une hypothése sur les ressources nutri-

tionnelles utilisées in natura par ces champignons.

Les aiguilles F 2, où ces champignons atteignent leur développement maxi-

mum, ne se décomposent pratiquement plus (GOURBIERE 1981 c) et sont

très pauvres en sucres solubles. Par ailleurs ce groupe de champignons semble

limité à la surface des aiguilles (GOURBIERE, à paraître).

Parmi les modes de vie possibles pour cette microflore, l'un d'eux fait direc-

tement intervenir les sucres étudiés. Dans cette hypothése l'aiguille n'est qu'un

support inerte oà les champignons se développent aux dépens des pluviolessivats.

Ceux-ci, comme les aiguilles vivantes dont ils proviennent, contiennent un

mélange de glucose, fructose, saccharose et raffinose.

Si l'on ne considére, pour simplifier, que les espéces les plus importantes

(colonisant plus de 10 75 des aiguilles) et si l'on admet leur coexistence spatio-

temporelle, toutes utilisent le fructose, le glucose et le galactose, et sont donc en

compétition pour les monosaccharides constitutifs.

Saccharose et raffinose autorisent par contre une différenciation du groupe :

— Un premier groupe d'espéces (Penicillium cf. frequentans, P. sp. 17,

Mortierella ramanniana, Paecilomyces farinosus, Verticillium bulbillosum,

Trichoderma viride), utilisent ces deux sucres et sont donc en compétition.

— Un deuxième groupe, constitué par le sub. gen. Mortierella (M. parvispora,

M. pulchella, M. hyalina), ne les utilisant pas, serait éliminé en cas de compé-

tition. Elles peuvent cependant précéder le premier groupe (en utilisant fructose

et glucose) sans gêner son développement ultérieur (à partir du saccharose et

du raffinose), dans le cadre de successions à court terme.

— Notons que les deux espéces n'utilisant qu'un seul des diosides, Chauno-

Source : MNHN, Paris

268 F. GOURBIERE

pyenis alba (saccharose +, mélibiose —) et Trichoderma polysporum (saccha-

rose —, mélibiose +) sont les seules à pouvoir coexister par partage des ressources

nutritionnelles au sens strict, dans les limites du cas envisagé évidemment.

IV. — CONCLUSION

Le modèle écologique présenté est très hypothétique. Il a essentiellement

l'avantage de montrer comment des différences nutritionnelles pourraient

participer à la structuration d'une microflore. Il montre aussi que la description

spatio-temporelle doit étre affinée si l'on veut y intégrer les dimensions «nutri-

tionnelles» des niches écologiques.

Nous remercions Mme Colette MOULIN pour sa collaboration technique.

BIBLIOGRAPHIE

BARNETT J.A., 1968 — Biochemical differentiation of taxa with special reference to

yeasts. In «The Fungi. An advanced treatise», G.C. AINSWORTH and A.S. SUSSMAN

eds, Academic Press, New-York, Vol. III, pp. 557-595.

BARNETT J.A., 1976 — The utilization of sugars by yeasts. Advan. Carbohydrate Chem.

Biochem. 32 :125-234.

DANIELSON R.M. and DAVEY C.B., 1973 — Carbon and nitrogen nutrition of Tricho-

derma. Soil Biol. Biochem. 5 : 505-515.

GOURBIERE F., 1979 — Les champignons microscopiques liés aux aiguilles de Sapin

(Abies alba Mill.). 4. Microflore de la litiére. Bull. Soc. mycol. Fr. 95 :23-33.

GOURBIERE F., 1981 a — Utilisation de sucres et de polyols par la mycoflore d’Abies

alba Mill. 1. Mucorales. Cryptog. mycol. 2 :3-11.

GOURBIERE F., 1981 b — Champignons des aiguilles de Sapin (Abies alba Mill). 7.

Microflores basophiles. Bull. Soc. mycol. Fr. 97 :81-89.

GOURBIERE F., 1981 c — Vie, sénescence et décomposition des aiguilles de Sapin (Abies

alba Mill). Méthodologie et premiers résultats. Acta Oecologica, Oecol. Plant. 2 : 223-

232.

GOURBIERE F., 1982 a — Utilisation de sucres et de polyols par la mycoflore d'Abies

alba Mill. 2. Penicillium. Cryptog. mycol. 3 :33-

GOURBIERE F., 1982b — Champignons des aiguilles de Sapin (Abies alba Mill.). 8.

Observation directe des microflores. Bull. Soc. mycol. Fr. 98 : 129-138.

Source - MNHN. Paris

269

DEVELOPMENTAL MORPHOLOGY OF ASCOMYCETES

IX. CALONECTRIA RIGIDIUSCULA

by C.V. SUBRAMANIAN and D.J. BHAT*

SUMMARY. — Study of the developmental morphology of an homothallic strain of Calo-

nectria rigidiuscula (Berb. & Br.) Sacc. and its anamorph Fusarium decemcellulare.

RESUME, — Etude de Vorganogenése d’une souche homothallique de Calonectria rigidius

cula (Berk. & Br.) Sacc. et son anamorphe Fusarium decemcellulare

This paper is the ninth in a series on the developmental morphology of Asco-

mycetes and deals with Calonectria rigidiuscula (Berk. & Br.) Sacc. The observa-

tions presented here are based on a study of a homothallic strain of C. rigidius-

cula, isolated from dead twigs of cocoa, collected at Jodupala, Coorg District,

Karnataka State, India.

Calonectria rigidiuscula was originally described as Nectria rigidiuscula by

BERKELEY and BROOME in 1873 based on their collection of a fungus from

Ceylon («Fungi of Ceylon, NO 1024»). BERKELEY and BROOME gave the

following diagnosis :

«Caespitosa; perithiciis ovatis pallide coccineis vix collabentibus; sporidiis

submetulaeformibus quadrinucleatis, demum 3-septatis (No 173C). On bark».

Since the ascospores were 3-septate (and not 1-septate), SACCARDO (1878)

transferred Nectria rigidiuscula to Calonectria de Notaris as C. rigidiuscula (Berk.

& Br) Sacc. De NOTARIS (1867) erected the genus Calonectria from nectria-

ceous fungi possessing fusoid, large, 2-multiseptate, hyaline ascospores, with

C. daldiniana de Not. as the type; he wrote : «Si distingue questo tipo dalle

Nectria, per gli sporidii fusoidi, allungati, pluriloculari» (de NOTARIS, 1867,

p. 477). While transferring Nectria rigidiuscula to Calonectria, SACCARDO

Memoir from the Centre for Advanced Study in Botany, University of Madras.

* Centre for Advanced Study in Botany, University of Madras, Madras 600005, India.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

270 C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT

(1878) noted the incompleteness of BERKELEY and BROOME's description

of the fungus, but as his list was only a compilation, he merely reproduced

the original diagnosis which did not give information on asci. In his revision

of Ceylon Hypocreales, PETCH (1916) stated that BERKELEY and BROOME's

description of the fungus was incomplete and incorrect as to colour of the

perithecia. BOOTH (1960) redescribed the fungus from a study of the type

specimen of Nectria rigidiuscula.

The conidial state of Calonectria rigidiuscula is Fusarium decemcellulare

Brick. WOLLENWEBER (1926) established the connection between Calo-

nectria rigidiuscula and Fusarium decemcellulare.

REICHLE & SNYDER (1964) recognized both homothallic and heterothallic

strains in Calonectria rigidiuscula. Homothallic strains invariably formed 4-spored

asci, whereas heterothallic strains produced 2-8 spored asci. The fungus is mainly

tropical in distribution (BOOTH, 1971). It occurs widely as a saprophyte and is

also known to cause dieback of twigs of many plant species, including cocoa.

BRUNT & WARTON (1962) reported that the fungus causes galls in cocoa. Accor-

ding to FORD et al. (1967) only isolates of heterothallic strains induced gall in

cocoa seedlings. In India, this fungus was first reported by SUBBA RAO (1938).

METHODS

To obtain perithecia, single

ascospore isolates were ino-

culated on sterilized twigs of

cocoa in Roux tubes. Peri-

thecia developed and matured

in about eight weeks. The

Roux-tube (Fig. I) method is

as follows :

Catton plug

Roux-tubes (Borosil Glass

Works Ltd) of Corning brand

(30 cm long and 3 cm diam.)

were used as containers. Each

Inoculated twigs tube was filled with tap

water up to the constriction

and a filter paper cup was

kept above the latter. A cot-

Fiter paper cP ton-wick inserted through the

cone end of the filter paper

connected the water to the

filter paper and thus kept the

space above the filter paper

Cotton wick moist. Dead twigs of cocoa,

the one on which the fungus

was originally isolated, were

cut into pieces each about

ROUX-TUBE_METHOD

Source : MNHN. Paris

CALONECTRIA RIGIDIUSCULA. IX 271

12 cm long. The twigs were pruned to remove the side branches. Surface debris

was washed off with a brush in running water. The twigs were placed above

the filter paper in the Roux-tubes and sterilized twice under 20 lb/cm? pressure

for 20 min. with an interval of 48 hr. The stem pieces were then inoculated

with the fungus and incubated under continuous daylight of 200 + 25 ft.

candles at a temperature of 22-25°C.

For studying the various stages in the development of the anamorph and

teleomorph, methods described earlier (SUBRAMANIAN & BHAT, 1978)

were followed.

DESCRIPTION OF THE FUNGUS

Mycelium on the twig not visible on the surface, subcortical, forming pseudo-

parenchymatous stromata in the cortical region. Stromata 1-3 mm diam., occa-

sionally extending up to the surface, composed of angular, thin-walled, hyaline

cells 9.0-12.0 um, in diam. Perithecia (Fig. 53; Plate I, 1) superficial, solitary

or crowded in groups of 2-8, globose to subglobose, cream to whitish yellow

in colour, fleshy, warty, not undergoing lateral collapse when dry, globose

perithecia 240-360 (310) um in diam.; subglobose perithecia 220-300 (270) x

240-380 (320) um. Perithecial wall (Fig. 52; Plate 11, g) pseudoparenchymatous,

warted in the upper half, translucent, 45-75 um wide, with 2 distinct regions :

an outer and an inner, Outer region with 4-5 tiers of cells, 20-35 um thick,

cells spherical to angular, slightly thick-walled, hyaline, 15-20 um in diam.

Inner region with 3-4 tiers of cells, 15-20 um thick; cells flattened, narrow,

elongated, compactly arranged, 11-14 x 2.5-3.5 pm. Warts (Plate I, f) pseudo-

parenchymatous, 20-50 um high, with cells similar to those of the outer region

of the perithecial wall. Perithecial papilla subacute, composed of parallely

arranged, cylindrical, septate, unbranched hyphae with rounded ends, protru-

ding through the outer region of the perithecial wall. Ostiolar canal periphysate;

periphyses subcylindrical, slender, 15-18 x 1.8 um with rounded and subacute

tips (Fig. 54).

Asci clavate, short-stalked, smoothly rounded at the apex, without apical

apparatus, unitunicate, thin-walled, generally 4-spored, 70-110 (85) x 10-14

(13.8) um (Fig. 68; Plate II, h); 8-spored asci present in heterothallic strains,

larger than 4-spored asci, clavate, distinctly pedicellate, broadly rounded at

the apex, without apical apparatus, 95-130 (105) x 12.5-16.0 (14.5) um (Fig.

71; Plate 11, j). Ascospores (Fig. 69; Plate 11, i) similar in 4-spored and 8-spored

asci, ellipsoidal to reniform, thick-walled, 3-septate, with uninucleate cells

(Fig. 63), hyaline, slightly constricted at the septa, 20-30 (24.5) x 7.0-10.5 ym;

ascospores uniseriate with overlapping ends in 4-spored asci and biseriate above

and uniseriate below in 8-spored asci.

CULTURAL CHARACTERS

Ascospores germinating within 14 hrs on potato dextrose agar, corn husk

agar and in distilled water, producing one germ tube from each cell (Fig. 70)

Source - MNHN, Paris

272 C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT

Fig. 1-23 : Calonectria rigidiuscula. — 1 : portion of a vegetative hypha; 2-12 : stages in the

development of phialide and first microconidium; 13-16 : development of second and

later conidia; 17, 18, 22, 23 :arrangement of phialides on conidiophores; 19 :a phialide.

Note the cupulate collarette; 20 : a pseudochain of microconidia; 21 : germination of

microconidia.

Colonies on potato dextrose agar attaining a diam. of 3.2-3.8 cm in 10 days,

floccose, with surface initially white to pinkish and later becoming rose-colou-

red, with reverse initially rose-coloured and later becoming brick-red; on corn

Source : MNHN. Paris

CALONECTRIA RIGIDIUSCULA. IX 273

— 253340841

TE 12436-39428

p 43

34835

Top

Fig. 24-43 : Calonectria rigidiuscula — 24 : portion of a vegetative hypha; 25-33 : stages in

the development of phialide and macroconidium; 34-35 : portion of phialides. Note in

35, the cupulate collarette; 36-38 : macroconidia. Note in 36 and 37, the uninucleate

cells; 39 : germinating macroconidia; 40-42 : germ tubes functioning as phialides. Note

in 41, microconidia produced from phialides and in 42, macroconidia produced on

phialides; 43 : arrangement of phialides on conidiophores.

Source : MNHN. Paris

274 C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT

husk agar attaining a diameter of 2.5-3.0 cm in 10 days, adpressed, slimy, with

surface rose-coloured, with reverse brick red. Mycelium fast-growing, composed

f septate, branched, hyaline hyphae 2.5-4.0 um wide, producing conidiophores

itially in the centre of the colony and later all over the surface. Conidiophores

developing laterally on the hyphae, straight or bent, up to 200 um long, bran-

ched or unbranched, with uninucleate cells and terminating in phialides (Fig. 22,

23, 43).

Phialides cylindrical to subulate, slightly wide at the base, narrow towards

the tip, with a collarette, uninucleate, 30-42 (35.5) x 4.5 um (Fig. 17-19, 35;

Plate I, d). Conidia of two types : microconidia and macroconidia. Microconidia

(Fig. 16, 20; Plate 1, c, e, h) formed singly and in basipetal succession, solitary,

remaining in pseudochains, 1-celled, oval to cylindrical, rounded at the apex,

narrowed at the base, hyaline, uninucleate, 10.0-14.5 (12.5) x 3.0-4.5 um.

Macroconidia (Fig. 36-38; Plate I, b, i) broadly falcate, distinctly dorsi-ventral,

7-10-septate, with a distinct foot-cell at the base, apically beaked, thick-walled,

hyaline, 55-130 (110) x 6,0-10.5 um; cells uninucleate and with dense cytoplasm.

In aged cultures phialides aggregating and forming sporodochia (Plate 1, a),

producing conidia in cream coloured slimy mass. Each cell of the macroconidia

capable of producing germ tubes, usually germ tubes arising from terminal

cells (Fig. 39; Plate I, j).

DEVELOPMENT OF THE ANAMORPH

Conidia develop in 4-5 days in slide culture. Conidiophores arise laterally

or terminally on the vegetative hyphae (Fig. 18). Phialides are borne on conidio-

phores or directly on the vegetative hyphae (Fig. 2-4 Plate I, c, d). Immediately

below the basal septum of the phialide, one or two lateral protuberances may

grow out, with each one becoming a phialide. Phialides are widest at the base,

tapering towards the neck and with a cupulate collarette at the tip.

The development of the microconidium is as follows. The conidium initial

arises as a small bud at the tip of a phialide (Fig. 5). With further development,

the bud increases in size. In the meantime, the uniformly stained spherical

nucleus of the phialide elongates parallel to the long axis of the phialide (Fig. 6)

and divides into two daughter nuclei (Fig. 7, 8; Plate I, e, f). One of the two

daughter nuclei migrates into the conidium initial above (Fig. 9, 10; Plate 1, g).

By the time the nucleus enters conidium initial, the conidium almost attains

its full size. With the formation of a septum, the slender cytoplasmic connection

between the phialide and the conidium is disrupted (Fig. 11). The wall of the

conidium initial breaks during the final stages of development presumably at

a weak point located just above the narrow neck of the phialide (Fig. 12). Often

an irregular fracture of the wall takes place leaving behind a cupulate collarette

(Fig. 19; Plate I, d). As the first conidium is cut off, a second conidium initial

appears in the open end of the phialide and the first conidium is pushed up

(Fig. 13, 14). The process is repeated and a succession of conidia are produced.

The conidia produced from each phialide remain in a linear series (pseudochains)

Source : MNHN, Paris

CALONECTRIA RIGIDIUSCULA. IX 275

Fig. 44-50 : Calonectria rigidiuscula (Contd.) — 44-47 : sections of stroma showing stages in

the development of the ascogonium. Note in 44 and 47, the uninucleate condition of the

ascogonial cells and in 45 and 46, uni- or binucleate condition, Note also in 46 and 47,

ascogonial cells surrounded by one to two layers of deeply staining thin-walled cells;

48-50 : sections through young perithecial centra showing stages in the formation of

centrum cavity, development of apical paraphyses and differentiation of perithecial wall.

Note the ascogonial cells lying at the base of the cavity.

due to slime (Fig. 15, 16, 20; Plate I, c,h). Occasionally, the conidia slime down

into a gloeoid mass. Conidia germinate producing one to two germ tubes (Fig, 21).

Source : MNHN, Paris

276 C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT

Fig. 51-61 : Calonectria rigidiuscula (Contd.) — 51 : section through a young perithecium;

52 : section through a mature perithecium; 53 : a mature perithecium (whole mount).

Note the warty outer surface; 54 : periphyses; 55-61 : stages in the development of

ascus and ascospores.

The development of the macroconidium is as follows. The phialide is uni-

nucleate (Fig. 25). During the formation of a macroconidium, a small protube-

rance arises at the tip of the phialide (Fig. 26). The protuberance elongates

and increases in size. The nucleus of the phialide elongates and divides (Fig. 27-

29) and one daughter nucleus migrates into the developing conidium (Fig, 30,

Source : MNHN, Paris

CALONECTRIA RIGIDIUSCULA. IX 277

31). The appearance of a minute collarette even in the early stages of develop-

ment of the macroconidium suggests that the rupture of the outer wall of the

phialide takes place presumably at the extreme tip of the phialide. The edge of

the collarette in most cases is uneven (Fig. 35, 43). The nucleus within the

conidium initial now divides repeatedly and finally a multiseptate conidium

with uninucleate cells results (Fig. 32, 33, 36; Plate I, i). When placed in distilled

water on a slide, conidia germinate after 12 hr. The germ tubes sometimes func-

tion as phialides and produce microconidia or macroconidia (Fig. 40-42; Plate

x):

DEVELOPMENT OF THE TELEOMORPH

Perithecial development is initiated within a stroma which, as already men-

tioned, develops within the cortex of the substrate. The first indication of the

development of the perithecium is the formation of an ascogonium embedded

in a pseudoparenchymatous stroma (Fig. 44; Plate Il, a). The mature ascogonium

is a coiled, septate structure and is composed of about 7-8 uni- or binucleate

cells with dense cytoplasm (Fig. 46), the ascogonial cells being uninucleate when

young (Fig. 45). No hyphal fusions or anastomoses are noticed and the binu-

cleate condition of the ascogonial cells is presumably a product of mitotic

division of nuclei. The ascogonial cells divide further and form a mass of com-

pactly arranged cells. The ascogonium is soon surrounded by 1-2 layers of

polygonal cells which stain deeply compared to the cells of the stroma forming,

as it were, an envelope (Fig. 47). The envelope increases in size and soon be-

comes several cells thick and this becomes the wall of the perithecial initial, In

the meantime, the young perithecium starts projecting out of the stromal surface

(Fig. 48; Plate II, b).

In further development, a cavity develops around the ascogonial elements

presumably due to disintegration of cells (Fig. 48, 49). The cells of the peri-

thecial wall in the periphery become thick-walled, pseudoparenchymatous

and aggregate into conical warts in the upper half (Fig. 50). As the differentia-

tion of the wall takes place, at the morphological apex of the young perithe-

cium, the cells of the inner region of the perithecial wall become «meristematic»

and give rise to intensively staining, small, angular cells. This «meristem» pro-

duces a mass of downward growing slender filaments, the apical paraphyses

which contain thin-walled, narrow, uninucleate cells (Fig. 48-50; Plate II, c).

Initially, the filamentous nature of the apical paraphyses is very evident. As

they grow downwards, the cells of the apical paraphyses are swelled laterally

forming, as it were, a compact mass of pseudoparenchymatous tissue (Plate II,

d). The cells at the base of the perithecial cavity also undergo division and form

a mass of globose cells (Fig. 51).

When the perithecium becomes mature, the apical paraphyses regain their

filamentous nature (Fig. 51; Plate Il, e, f). The asci grow up interspersed with

the apical paraphyses forming a kind of hymenium along the bottom and in

Source : MNHN, Paris

C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT

278

2,64.

163,698.70

204

Source : MNHN. Paris

CALONECTRIA RIGIDIUSCULA. IX 279

the sides of the perithecial cavity. In mature perithecium, the apical paraphyses

disintegrate (Fig. 52).

While the apical paraphyses continued to grow downwards, the cells of the

inner region of the perithecial wall at the apex of the perithecium grow upwards

and develop an ostiolar neck. The cells constituting ostio!ar neck become thick-

walled and are in the form of unbranched hyphae with rounded tips. By disso-

lution of cells in its core, a narrow canal develops. The ostiolar canal extends

from the centrum cavity to the exterior. The cells lining the ostiolar canal

produce slender, uninucleate cells, the periphyses.

DEVELOPMENT OF ASCI

The ascogonial cells are multinucleate. Each ascogonial cell puts out 2-3

short, thick, ascogenous hyphae which bend over at the tip and form croziers

(Fig. 62). Two nuclei move into an ascogenous hypha and the latter is cut off

from the ascogonial cell by a septum at the base, the two nuclei divide simulta

neously to form four nuclei. Two septa are formed in the crozier separating the

latter into a uninucleate basal cell, a binucleate median cell and a uninucleate

tip cell. The median cell elongates and the fusion nucleus migrates to the middle

of the ascus initial (Fig. 55) and here it undergoes meiosis. In the early stages of

meiotic division, seven bivalents are observed (Fig. 56). The first meiotic division

results in two nuclei (Fig. 57) and the second in four haploid nuclei (Fig. 58).

Cleavage of the cytoplasm takes place in such a way as to produce elliptical

masses around each nucleus (Fig. 59). Cell wall is laid down around each ellipti-

cal mass to produce an incipient ascospore (Fig. 64-66). Each ascospore nucleus

now undergoes a mitotic division, followed by a septum formation across the

middle (Fig. 60). Each nucleus of the two-celled ascospore again undergoes a

mitotic division and is followed by a septum formation. Thus, eventually, a

four-celled ascospore, characteristic of the fungus, is resulted (Fig. 61, 62, 67).

Often the basal cell and the tip cell of a crozier may fuse and give rise to ano-

ther ascus.

DISCUSSION

The anamorph of Calonectria rigidiuscula is a Fusarium, the microconidia

being produced in long pseudochains. The ascogonium is a several-celled, coiled

structure which appears within a preformed stroma and the ascogonial cells

originally uninucleate become multinucleate. The perithecial centrum is of the

typical Nectria-type (LUTTRELL, 1951) with apical paraphyses. The asci have

no apical apparatus. Ascospores are multiseptate. All these features are typical

of the Hypocreales.

The genus Calonectria was established by de NOTARIS (1867) to accomo-

date C. daldiniana de Not., a fungus collected on Magnolia grandiflora at Lo-

Source : MNHN, Paris

280 C.V. SUBRAMANIAN &-D:J. BHAT

carno in Italy. Although the type of this fungus was not available to us for

study, recently, ROSSMAN (1977) could locate the type material deposited

in Rome. According to ROSSMAN, C. daldiniana is a later synonym of C.

pyrochroa (Desm.) Sacc. She has circumscribed the genus to include those

nectrioid species with an ascocarp wall structure like that of C. pyrochroa and

a Cylindrocladium anamorph.

The developmental morphology of the type species has not been studied so

far. Results of our study on the developmental morphology of Calonectria

rigidiuscula presented here, for the first time, is the first among the species of

the genus Calonectria.

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Source : MNHN. Paris

CALONECTRIA RIGIDIUSCULA. IX 281

Plate 1 : Calonectria rigidiuscula. — a, young sporodochium with conidiophores, phialides

and conidia;b, macroconidia c, phialides :one with a long pseudochain of microconidia:

d, phialide showing a cupulate collarette; e, phialide showing a dividing nucleus and a

few uninucleate microconidia; f, g, phialides showing one of the daughter nuclei in each

migrating into developing conidium; h, a pseudochain of microconidia; i, portion of a

macroconidium showing uninucleate cells; j, germ tubes functioning as phialides and

producing macroconidia; k, perithecial initials; l, perithecia on twigs in Roux tubes.

Source : MNHN. Paris

C.V. SUBRAMANIAN & D.J. BHAT

Plate II : Calonectria rigidiuscula. — a, portion of a section of a mature stroma showing

coiled ascogonium; b-f, longitudinal sections of perithecial centrum showing stages

in the development of perithecium. Note in c and d centrum consisting of apical para-

physes; in e and f asci developing interspersed with apical paraphyses; g, section of a

mature perithecium; h, 4-spored asci; i, ascospores; j, 8-spored asci.

Source : MNHN, Paris

283

TROIS NOUVELLES ESPECES COPROPHILES

DE LASIOBOLIDIUM MALLOCH et CAIN

(ASCOMYCETES, EOTERFEZIACEAE)

par M. LOCQUIN-LINARD*

RÉSUMÉ. — Description, illustration et diagnose latine de Lasiobolidium fallax, L. helicoi-

deum et L. recurvatum, trois espéces nouvelles coprophiles d'Afrique et d'Amérique du

Nord (Arizona). Tableau de détermination des espéces du genre.

SUMMARY. — Three new coprophilous species from Africa and North America (Arizona),

Lasiobolidium fallax, L. helicoideum et L. recurvatum are described and illustrated. A

determination table of species of the genus is given.

Le genre Lasiobolidium (Eoterfeziaceae Atkinson 1902), a été créé par

MALLOCH et CAIN en 1971 pour des Ascomycetes a cleistocarpes jaune-brun,

appendiculés, plectascés et à ascospores unicellulaires, elliptiques, hyalines,

lisses, sans pore ni sillon germinatif. En fait, les ascospores des espèces placées

dans ce genre sont soit hyalines, soit légèrement colorées. Il est donc nécessaire

de modifier légèrement les limites du genre dans ce sens.

A Vespéce type Lasiobolidium spirale Malloch and Cain (1971), a été joint

en 1973 L. orbiculoides Malloch and Benny. Aujourd’hui nous décrivons trois

nouvelles espèces, coprophiles elles aussi.

LASIOBOLIDIUM FALLAX LOCQUIN LINARD, sp. nov.

Ascomycetes, Eoterfeziaceae. Cleistocarpi 200-350(500) um, lati. Appendi-

cibus 5,59 um latis, longis, flexuosis, pallide e brunneis griseis, haud ramosis,

levibus septatis, inferne bulbosis. Peridio pseudoparenchymatico, cellulis parum

distinctis. Asci (6)-8 sporis, ellipsoideis vel claviformibus 28-35 x 13-20 um

Ascosporis ellipsoideis (8) 9-10 (12) x (5) 5,5-7 (8) um, hyalinis, interdum

x IX QUE de Cryptogamie, M.N.H.N. - 12 rue de Buffon, 75005 Paris, France. CNRS

- A. 257.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983)

Source : MNHN, Paris

284 M. LOCQUIN-LINARD

L. fallax. — 1. Cleistocarpe orné de poils souples; 2. Péridium, a cellules de la strate pro-

fonde, b couche superficielle; 3. Asques et ascospores; 4. Poils septés, c coude, d bases

bulbeuses, e base donnant naissance à deux poils, f apex.

L. helicoideum. — 5. Cleistocarpe orné de poils hélicoidaux; 6. Poils non septés, a derniéres

spires et apex, b bases bulbeuses; 7. Péridium; 8. Asques et ascospores; 9. Différencia-

tion de l'appareil ascogonial.

violaceis, in massa pallide rufo-brunneis. Holotypus : in fimo Cameli. Tedemait,

Africa, PC.

A. L. orbiculoides praesertim differt forma ac mensuris ascorum, ascospora-

rumque

Source : MNHN, Paris

LASIOBOLIDIUM 285

Cleistocarpes 200-350 (500) um

Asques 28-35 x 13-20 um

Ascospores (8) 9-10 (12) x (5) 5,5-7 (8) um

Poils 5,5-9 um diam.

Sur crottes, les cleistocarpes (fig. 1) isolés, superficiels, globuleux, beige puis

brun par réflexion, sont garnis de longs poils soyeux blanchatres, flexueux,

irrégulièrement contournés, parfois coudés (fig. 4 a), qui peuvent atteindre 2mm

de long. Ces poils (fig. 4), non ramifiés, lisses, septés, à paroi épaisse et à base

bulbeuse qui, éventuellement, peut être commune à deux poils (fig. 4 c), s'ef-

filent progressivement jusqu'à leur extrémité arrondie. Le péridium brun clair

par transparence, pseudoparenchymateux, se compose d'une ou deux couches

peu cohérentes de cellules hyalines, arrondies et d'une couche externe brun clair,

plecto-pseudoparenchymateuse; toutes ces cellules sont à paroi fine, peu con-

trastée, ce qui rend leur observation difficile (fig. 2).

Les asques (fig. 3) (hexa-) octosporés, nombreux, elliptiques ou claviformes,

sans appareil apical, unituniqués, non amyloides, évanescents, à pied générale-

ment court plus ou moins différencié, se forment sans ordre apparent dans le

cleistocarpe, à partir de crochets dangeardiens. Parmi les asques ont été observés

des filaments filiformes fugaces.

Les ascospores unicellulaires, elliptiques, lisses, à paroi épaisse, sans pore

ni sillon germinatif, sans «de Bary bubble» sont généralement hyalines ou

légèrement grisâtres par transparence, brun roux clair en masse. Occasionnelle-

ment, alors qu'elles étaient encore dans l'asque, nous avons pu observer quelques

ascospores rose violacé (lividus Z4f, LOCQUIN 1975), teinte instable qui dispa-

rait dans le lactophénol.

Pour l'instant, ce champignon n'a pas pu étre cultivé et nous n'avons pas

observé de forme conidienne.

L. fallax a été observé sur crottes de Chameaux et d'Ongulés, provenant de

zones arides africaines. Des informations écologiques plus précises seront don-

nées ultérieurement.

L'holotype provient de crottes de Chameau (lot 74) récoltées en Afrique

Hammada entre Dalaa el Barha et Oued In Sokki (Hassi Inifel) Tademait, Sahara

central, le 4.4.1967 par le Professeur J.-P. Barry que nous remercions vivement.

Holotype PC.

Nous appelons ce champignon L. fallax (trompeur) car on peut facilement

le confondre avec Lasiobolidium orbiculoides auquel il est souvent associé, en

raison de ses fulcres qui sont d'aspect identique. Il en diffère cependant par la

forme et les dimensions de ses asques et de ses ascospores.

LASIOBOLIDIUM HELICOIDEUM LOCQUIN LINARD, sp. nov.

Ascomycetes, Eoterfeziaceae. Cleistocarpi 140-200 um lati. Appendicibus

4-5 um latis, longis, helicoideis, pallide e griseis brunneis. Peridio pseudoparen-

chymatico. Ascis octosporis, subglobosis vel ellipsoideis, 18-20 x 14-16 um latis.

Source : MNHN, Paris

286 M. LOCQUIN-LINARD

Ascosporis ellipsoideis, 8-9 x 5-6 (7) um, pallide ochraceis, in massa ochraceis-

(rufis). Holotypus : In fimo Caprarum. Arizona, U.S.A. PC.

AL. spirale differt ascosporis minoribus.

Cleistocarpes 140-200 um

Asques 18-20 x 14-16 um

Ascospores 8-9 x 5-6 (7) um

Poils 4-5 uim diam.

Sur crottes, les cleistocarpes (fig. 5) peu nombreux, superficiels, isolés ou

groupés, subglobuleux, beige à brun terne, sont couverts de longs poils soyeux,

hélicoidaux, beige (Pudorinus Gh5). Ces poils (fig. 6) réguliérement répartis

sur le péridium, non ramifiós, non septés, à paroi fine, à diamètre constant sur

toute la longueur, à base généralement bulbeuse, à extrémité arrondie, décrivent

de longues spires serrées d’un diamétre d'environ 50 jim et perpendiculaires à

la surface du carpe. Le péridium brun clair, pseudoparenchymateux (fig. 7)

est formé de cellules facilement séparables, à contour irrégulier, à paroi fine

peu colorée; les cellules de la couche externe, irrégulièrement saillantes, lui

donnent un aspect granuleux lorsque le champignon est jeune et que les poils

ne sont pas encore développés.

Les asques (fig. 8) trés nombreux, octosporés, unituniqués, non amyloides,

globuleux ou elliptiques avec un pied peu marqué, disposés sans ordre apparent

dans le cleistocarpe, naissent, en bouquets, à partir de crochets dangeardiens.

Les ascospores unicellulaires, elliptiques, à paroi épaisse, lisses, sans pore

ni sillon germinatif, sans «de Bary bubble», ocre clair par transparence (auran-

tiacus X7h) paraissent ocre (-roux) en masse.

En boites de Pétri, sur milieu gélosé à 1,5 % de malt, la colonie est zonée,

brun clair, à revers un peu plus foncé. Sur le mycélium septé et ramifié, naissent

des filaments non septés, enroulés et méme hélicoidaux, identiques aux poils

des carpes. Le primordium est un gros filament multicellulaire qui s'allonge et

s'enroule irréguliérement sur lui-méme (fig. 9). Nous n'avons pas observé de

forme conidienne. Ce champignon n'a pas pu étre maintenu en culture.

L'holotype a été isolé sur crottes de Chévres (lot 303) récoltées en Août

1979, Arizona, Amérique du Nord, par R. Krahenbuhl que nous remercions

vivement. Holotype PC.

Ce champignon a aussi été observé sur crottes de Mouton (lot 344) récoltées

en Aoüt 1978 à Bir el Djir prés d'Oran, Algérie, Afrique du Nord, par le Dr.

Geslin que nous remercions vivement.

L. helicoideum proche de Lasiobolidium spirale, en différe principalement

par ses ascospores légérement ocres, ses asques et ses ascospores qui sont nette-

ment plus petits. Les asques et les ascospores de L. spirale ont respectivement

35-62 x 12-21 um et 12-17 x 9-12 um.

LASIOBASIDIUM RECURVATUM LOCQUIN LINARD, 1982, sp. nov.

Ascomycetes, Eoterfeziaceae. Cleistocarpi subglobosi, 200-450 x 200-400 um

Appendicibus 400-500 x 4-8 um, multis, pallide e griseis brunneis vel e rufis

Source : MNHN, Paris

LASIOBOLIDIUM 287

brunneis, erectis, radialibus, paulum curvis, haud ramosis, haud septatis, levibus,

inferne paulum tortis, utrimque uncinatis ac paulum inflatis. Ascis octosporis,

subglobosis vel claviformibus, 20-36 x 12-20 um. Peridio e cellulis parum cohae-

rentibus, tunica parum distincta. Ascosporis ellipsoideis, 8-10 (11) x (5) 5,5-

7 (7,5) um, in massa e rufulis griseis. Holotypus : in fimo Dorcadum. PC ac

Mycotheca n° 3337.

Ab aliis speciebus Lasiobolidii differt pilis uncinatis.

Cleistocarpes — 200-450 x 200-400 um

Asques 20-36 x 12-20 um

Ascospores 8-10 (11) x (5) 5,5-7 (7,5) um

Poils 400-500 x 4-8 um

L. recurvatum. — 10. Cleistocarpe orné de poils uncinés. 11. Péridium; 12. Poils non septés,

a apex, b bases: 13. Asques et ascospores; 14. Différenciation de l'appareil ascogonial

Source : MNHN, Paris.

288 M. LOCQUIN-LINARD

Sur crottes, les cleistocarpes (fig. 10) isolés ou grégaires, superficiels, beige

puis brun terne, un peu coriaces, subglobuleux, sont couverts de nombreux

poils (fig. 12), beige à brun roux (aurantiacus P5h á rubeus C3g), dressés,

rayonnants, un peu entremélés, légérement courbes, parfois coudés, non rami-

fiés, lisses, à paroi épaisse, non septés, à diamètre un peu rétréci dans la partie

centrale, leur base parfois élargie est irrégulièrement tortillée et leur extrémité

arrondie et souvent enflée est circinée. Le péridium brun clair, pseudoparenchy-

mateux, se compose d'une ou deux couches de cellules peu cohérentes à paroi

peu contrastée, difficile à observer.

Les asques (fig. 13) octosporés, nombreux, unituniqués, non amyloides,

sans appareil apical, subglobuleux ou claviformes avec un pied plus ou moins

marqué, évanescents, disposés sans ordre apparent dans le cleistocarpe, naissent

en bouquets de crochets dangeardiens.

Les ascospores (fig. 13) unicellulaires, elliptiques, lisses, à paroi épaisse,

sans pore ni sillon germinatif, sans «de Bary bubble», légèrement grisâtres par

transparence, paraissent gris roussátre en masse (Phaeotus L3e).

En culture, à la température du laboratoire, sur milieu gélosé à 1,5 % de malt,

entre lame et lamelle, des germes apparaissent en plusieurs points de l'ascospore,

ils donnent un mycélium cloisonné - ramifié. En boîtes de Pétri, sur le méme

milieu et dans les mêmes conditions que précédemment, nous avons obtenu

une colonie blanchâtre et zonée puis beige à revers brunátre. Le mode de forma-

tion des primordiums n'a pas encore pu étre clairement établi. Seule la différen-

ciation de l'appareil ascogonial avec probablement plusieurs filaments ascogo-

niaux comme chez L. orbiculoides (JANEX-FAVRE et al, 1979) a pu étre

observée. Un exsudat jaune trés clair peut étre secrété. Forme conidienne in-

connue.

L. recurvatum s’est développé sur les déjections de nombreux animaux

provenant de zones arides. Des informations écologiques plus précises seront

données ultérieurement.

L'holotype a été isolé de crottes de Gazelle (lot 105) récoltées en Afrique : lit

de l'Oued Aouleggi, entre Hassi Aouleggui et Ain Guettara, Plateau du Tade-

maït, Sahara central, le 12-4-68 par le regretté L. Faurel.

Le nom de L. recurvatum est proposé pour cette espéce en raison de ses poils

recourbés. Ce caractére nous incite à la rapprocher de deux autres champignons :

— Gymnoascus uncinatus Eidam 1883 (— Myxotrichum uncinatum (Eidam)

Schroet, 1893). En 1883 EIDAM (pl. XV fig. 40) et plus récemment BENJAMIN

en 1956 (p. 318), représentent trés bien le réseau du carpe d’où naissent des

appendices identiques à ceux de notre espèce. Il ne fait donc aucun doute que

ce champignon soit une Gymnascale donc une espèce nettement différente.

— Gymnoascus siglerae v. Arx 1981 (= Uncinocarpus reesii Sigler and Orr

1976). Bien que le Dr. Carmichael ait eu l'amabilité de nous communiquer

les souches types 3880-et 3881* et nous l'en remercions vivement, il ne nous

a pas été possible de nous faire une opinion personnelle sur ce champignon

puisque nous n'avons pas obtenu la forme ascosporée. De toute facon, la petite

Source : MNHN, Paris

dimension de ses ascospores :

LASIOBOLIDIUM

289

4-5 x 2,5-3 um et la présence d’une forme coni-

dienne en font une espéce différente de la notre.

D'aprés les descriptions, nous voyons que ces trois champignons rentrent

bien dans le cadre des Lasiobolidium. Les caractéres distinctifs permettant

d'identifier les espéces du genre sont récapitulés dans le tableau 1.

Espàces de B $

8B E

Lasiobolidium 3 | à 8

SEEMS 2

0 E E E [s

E E

e es E

al e E

SE | als

Caractères

NS IS cra |e

Poils non septés + [+ |e

uncinés +

spiralés + |.

contournés e ne

Asques claviformes A

cylindriques +

Spores longueur > 10 pm + +

< 10 pm + [+ [+

Tableau 1

Le genre Lasiobolidium contient maintenant 5 espéces, toutes coprophiles.

Certaines ont un péridium difficile 4 observer. Un examen trop rapide pourrait

faire douter de leur appartenance a la famille des Eoterfeziaceae en induisant

un rapprochement avec les Gymnoascaceae.

Nous remercions vivement M. ROMAGNESI a qui nous devons le texte latin des dia-

gnoses.

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INTERRELATIONSHIPS IN CULTURE

AMONG FUNGI ISOLATED FROM SOYBEAN

R.P. SINGH*, L. SINGH* and VERMA**

— Sur les 18 espèces isolées des parties aériennes de la plante de Soja ct montrant

une activité antagoniste, Penicillium nigricans, Cladosporium sp., Aspergillus sp. et Fusarium

sp. sont les plus actives. L'antagonisme s'observe entre saprophytes et pathogènes, de même

qu'entre pathogènes et entre saprophytes. Il peut être dû soit au contact entre les hyphes

soit à la compétition nutritive, soit À des métabolites non volatiles. L'âge de la culture, la

concentration des métabolites et les conditions de l'environnement influent sur le degré

d'antagonisme.

SUMMARY. — Of the several microfungi isolated from the aerial parts of Soybean, only

few (18 species) showed antagonistic behaviour and are reported herein. Penicillium nigri-

cans and species of Cladosporium, Aspergillus and Fusarium were found to be most success

ful antagonists. Antagonism was observed between certain saprophytes and pathogens,

weak pathogens and non-pathogens and between saprophytes and saprophytes. Besides,

intrageneric and intraspecific antagonistic microfungal interactions can be attributed to

physical byphal contact, wheteas others are due to nutrients competition or non volatile meta

. Parameters used to measure antagonism were zone of inhibition and percentage

tion of radial growth and/or dry weight of fungi. Age of culture, concentration of

metabolites and environmental conditions influenced the degrees of antagonism.

INTRODUCTION

Aerial parts of plants represent distinct ecological niches and support an array

of interacting saprophytes and parasites, which determine colonization, onward

succession and final equilibrium of microbial populations on these organs

(SINGH, 1980). Some microbes create adverse conditions for the others and

sometimes for themselves, while there are those which facilitate the growth and

multiplication of the neibourouring ones by producing certain stimulating

substances (SHARMA et al., 1979, FOKKEMA, 1981). The complexity of such

* Department of Botany, Meerut College, Meerut-250001, (U.P.), India.

** Division of Mycology and Plant Pathology, I.A.R.I., New Delhi-110012, India.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

292 R.P. SINGH, L. SINGH & V.S. VERMA

interactions on different hosts in vivo and under different environmental condi-

tions both in vivo and in vitro needs to be investigated for their possible use in

the biological control of certain epiphytic diseases, an aspect which is still poorly

understood (LAST & DEIGHTON, 1965; HEUVEL, 1970; SKIDMORE, 1976;

RAI SINGH, 1980; GUPTA & DIXIT, 1982). With a view to assess the nature

of such possible interactions, several microfungi were isolated from aerial organs

of Glycine max L. and were tested in vitro.

MATERIALS AND METHODS

The isolation of micro-fungi were made by dilution plate (SHARMA et al.,

1974) and moist chamber (KEYWORHT, 1951) techniques. Pure cultures of

fungi used in this study, were maintained on Czapek’s Dox Yeast (C.D.Y.)

agar medium. The test fungi were grown in dual cultures on agar plates to exa-

mine the nature of interactions. Another set of experiment was designed in

order to explain the possible mechanism of the interaction observed on agar

plate. For this effect of non-volatile metabolites of test fungi on other fungi

was screened. Incubation was made in dark at 27 + 1°C.

Colony interactions were studied using paired culture method (DENNIS &

WEBSTER, 1971) in petri dishes (9 cm diam.). Each pair of fungi were inocu-

lated 3cm apart and five replicate dishes were set up per combination in a

petri dish containing about 20 ml C.D.Y. agar. Colony development was recor-

ded daily and assessment made of the interactions when the fungi had achieved

equilibrium and there was no alteration in the growth pattern. In general, assess-

ments were made after 7 days. The antagonistic action of a fungus was determi-

ned by its ability to develop a zone of inhibition around itself or by forming

a boundary line beyond which it will not allow the growth of a competing

fungus. Interactions were scored according to the methods and classification of

PORTER (1924) and SKIDMORE & DICKINSON (1976).

Parameters used for the measurements of inhibition in dual cultures were the

width of zone of inhibition and the percentage inhibition of radial growth

100 x (1, — 12) / ri where ry denotes diam. of the fungus on the unopposed

side and rj denotes diam. of fungus on the side opposed by the antagonistic

fungus (FOKKEMA, 1973).

In order to understand the possible mechanism of the interaction observed

on agar plate, effect of 1%, 5% and 10% concentration of non-volatile meta-

bolites of test fungi showing antagonistic action on agar plates, were screened

against other fungi on liquid C.D.Y. medium, Instead of changes in radial growth

percentage changes in dry weight of treatment experiments over check sets

were worked out in Erlenmeyer flasks containing 50 ml liquid C.D.Y. These

flasks were inoculated with equal mycelial bits (5 mm) of antagonist and the

fungi whose growth was suppressed. Mycelial bits were cut from 7 and 15 days

old cultures on. C.D.Y. agar media with a sterilized cork borer. Incubation

was made at 27 + 1°C for 12 days. At the end of which mats were harvested

Source - MNHN. Paris

INTERRELATIONSHIPS AMONG SOYBEAN FUNGI 293

by filtering through whatman filter paper No 42 and were dried at 70°C for

dry weight determination. Flasks without metabolites served as controls. Three

replicates were made for each treatment.

The inhibition (I) in growth (dry weight) was determined by the following

formula: 1 = 100x STE

where Cg represents dry weight in check sets and Tg denotes dry weight in

treatment sets.

Extraction of metabolites was done firstly in the fungi which showed anta-

gonism in dual agar plates grown on C.D.Y. medium. Secondly, to obtain meta-

bolites of 7 and 15 days old cultures 1 gm each test fungus was centrifuged

for 10 minutes at 3000 rpm. After filtration through whatman filter paper

No 42, the filtrates were autoclaved at 15 lbs pressure for 10 minutes and were

assumed 100% conc. of non-volatile fungal exudates (metabolites) and anta-

gonist. Dilution with C.D.Y. liquid medium gave graded concentrations of 1%,

5 % and 10% metabolites of respective fungus.

RESULTS

Of the several micro-fungi (75 species) isolated from the aerial parts of Soy-

bean only few (18 species) showed antagonism and these were grown in 18

dual cultures on agar plates. Antagonists in question could be classified into

five types :

1. Saprophytes antagonistic to weak pathogens; Penicillium nigricans Bainier

was found to be antagonistic to Fusarium culmorum Sacc. and F. monili-

forme Sheldom whereas Cladosporium sphaerospermum Penzig was anta-

gonistic to Alternaria solani Sorauer.

. Weak pathogens antagonistic to non-pathogenic saprophytes : Fusarium

oxysporum Schlech. and Rhizoctonia solani Kochn were observed to be

antagonistic to Aspergillus fumigatus Fres., Curvularia lunata (Wakker)

Boedjin, and white sterile mycelium, respectively.

3. Saprophytes antagonistic to saprophytes : several saprophytes showed anta-

gonistic behaviour to other saprophytes. For example, Penicillium nigricans

Bainier antagonized Aspergillus flavus Link., A. nidulans (Eidam) Winter,

Curvularia lunata (Wakker) Boedjin and white sterile mycelium. Whereas,

Cladosporium herbarum (Pers.) Link was antagonistic to Alternaria alternata

(Fr.) Keissler and Epicoccum nigrum Link. Cladosporium cladosporioides

(Fresen) de Vries antagonized Alternaria alternata (Fr.) Keissler, white

sterile mycelium antagonized Aspergillus nidulans (Eidam) Winter whereas

Memnoniella echinata (Rivolta) Galloway and Stachybrotys atra Corda

were antagonistic to each other.

4. Intrageneric antagonistic antagonists to other species of the same genus : eg.

Aspergillus niger Van Thiegem and Aspergillus flavus Link.

Source : MNHN, Paris

294 R.P. SINGH, L. SINGH & V.S. VERMA

5, Intraspecific antagonist strain antagonistic to other strain of the same species.

For instance, Aspergillus flavus Link.

Plate 1 showing antagonism among fungi. — 1 : Curvularia lunata (Cl) V/s Fusarium oxy

sporum (Fo). 2 : Curvularia lunata (Cl) V/s Penicillium nigricans (Pn). 3 : Fusarium cul

morum (Fc) V/s Penicillium nigricans (Pn). 4 : White sterile mycelium (Wsm) V/s

Penicillium nigricans (Pn).

As it is clear from the Plates 1 & 2, growth was not checked in — Cladospo-

rium herbarum V/s Alternaria alternata and Aspergillus nidulans V/s white sterile

mycelium combinations until mycelia of the pathogen and the antagonists

came together and there was absence of clearly defined zones of inhibition

In all other cases, growth was prevented at a distance with substantial zones

Source : MNHN, Paris

INTERRELATIONSHIPS AMONG SOYBEAN FUNGI 295

Plate 2 showing antagonism among fungi. — 1 : Aspergillus fumigatus (Af) V/s Fusarium

oxysporum (Fo). 2. : Aspergillus nidulans (An) V/s White sterile mycelium (Wsm). 3

Aspergillus flavus (Af) V/s Penicillium nigricans (Pn). 4 : Alternaria alternata (Aa) V/s

Cladosporium herbarum (Ch).

f inhibition. Percentage inhibition of radial growth of Fusarium oxysporum

Fo), Curvularia lunata (Cl), white sterile mycelium (Wsm) and Aspergillus

flavus (Af) due to the antagonist Penicillium nigricans (Pn) was 9.31 %, 26.54%,

17.30% and 10.89%, respectively after 7 days. Antagonistic effects differed

according to species of test fungi whereas percentage inhibitions of the radial

growths of Aspergillus nidulans (An) due to Wsm, of Alternaria alternata (Aa)

due to Cladosporium herbarum (Ch), of Aspergillus fumigatus (Af) due to

Fusarium culmorum (Fc) and of Curvularia lunata (CI) due to Fusarium oxy-

sporum (Fo) were 18.80, 19.30, 15.4 and 20.89%, respectively. Interaction

Source : MNHN, Paris

R.P. SINGH, L. SINGH 8: V.S. VERMA

INHIBITION PERCENTAGE OF TEST FUNGI

ANTAGONIST FUNGAL EXUDATES

Sop

40r

2 35r

DEOR

a 20F

E ISP

ecd

ANE

5 sk

orar TPn

Source : MNHN, Paris.

INTERRELATIONSHIPS AMONG SOYBEAN FUNGI 297

scores of Penicillium nigricans, Fusarium oxysporum and Cladosporium clado-

sporioides (Cc) and C. herbarum were between 4-5 whereas those of other

antagonists were between 1-3. Width of zone inhibition (mm) in the antagonistic

interactions between P. nigricans V/s. C. lunata, F. oxysporum V/s A. fumigatus,

D. nigricans V/s F. culmorum and F. oxysporum V/s C. lunata (Plate 1 & 2)

were 2.5, 1.4, 2.2 and 1,0 mm, respectively.

Data regarding the effect of exudates (non-volatile metabolites) of antago-

nistic fungi on the percentage of dry weight of those fungi whose growth was

suppressed, are presented in Figures 5 and 6. It is clear that, in general, 1) per-

cent reduction in the dry weight of fungi due to antagonist metabolites of 15

days old culture was more substantial than that of 7 days old culture, 2)

reduction in dry weight increased gradually with the increasing concentration

of culture filtrates of antagonists. However, wise ratio exceptions to above

generalization were also observed. Memnoniella echinata (Me) and Cladospo-

rium cladosporioides were interesting in as much that in the former more growth

inhibition was observed in 7 days old culture at 1% conc. whereas in the latter

more growth inhibition was observed at 1% and 10% than at 5% conc. (Fig.

5 and 6).

DISCUSSION

During the course of present investigation 18 fungal species were found to

exhibit antagonistic action. Out of these, Penicillium nigricans and species of

Cladosporium, Aspergillus and Fusarium were most successful antagonists

followed by Epicoccum. Antagonistic actions were observed between certain

saprophytic and pathogenic fungi between weak pathogens and non-pathogens

and within pathogens. Antagonism was also observed between saprophytes

as well as within species and even strains of the same fungus. These observations

are in accordance with those earlier reported by TVEIT & WOOD (1955),

AHMAD (1970), LAST & WARREN (1972), MUKERJI (1974), SHARMA et

al., (1979) and DICKINSON (1981). Additional examples of antagonistic

interactions on aerial plant surfaces are documented in DICKINSON & PREECE

(1976). The antagonistic role of successful antagonists of the present study,

z.. species of Penicillium, Cladosporium, Aspergillus and Epicoccum has been

recognized by several early workers (HEUVEL, 1970; PACE & CAMPBELL,

1970. SHARMA, et al., 1979). BHATT & VAUGHAN (1963) reported antago-

nistic actions of Penicillium and Cladosporium against the pathogens Botrytis

cinerea and Alternaria zinniae in vivo and on agar media. NEWHOOK (1957)

found the same action of Cladosporium against B. cinerea. DIEM (1969) obser-

ved the substantial control of Cochliobolus sativus whereas SKIDMORE &

5 and 6, — Percentage inhibition of the growth of test fungi by antagonists 7 and 15

days old culture exudates, respectively.

Source : MNHN, Paris

298 R.P. SINGH, L. SINGH & V.S. VERMA

DICKINSON (1976) and ZWATZ (1976) reported control of Leptosphaeria

nodorum and Fusarium by the antagonist Cladosporium. Aspergilli were noted

to check the growth of Helminthosporium spiciferum by CHAUHAN & GRO-

VER (1973) whereas Fusarium was reported as antagonist of Puccinia pennei-

setti by KAPOORIA & SINHA (1969). Penicillium as an antagonist has also

been reported earlier by SHARMA et al. (1979) and SHARMA & MUKHERJI

(1976). RAI & SINGH (1980) reported antagonistic action of Epicoccum

and Aspergillus spp. against the pathogens Alternaria brassicae and Drechslera

graminea.

Some microfungal interactions are due to physical hyphal contact and compe-

tition for space and nutrient, whereas others are due to chemical inhibition,

toxins or antibiotics. In the present investigation, antagonism between A.

nidulans and white sterile mycelium, Cl. herbarum and A. alternata, Penicillium

nigricans and white sterile mycelium were basically due to hyphal contact.

Interactions between C. lunata and F. oxysporum, C. lunata and P. nigricans, F.

culmorum and P. nigricans, F. oxysporum and A. fumigatus and P. nigricans

and A. flavus were basically due to non-volatile metabolites and in the latter, well

defined zones of inhibition were demonstrable. Antagonism due to antibiotics,

and inhibitory substances (volatile and non-volatile) has already been reported

by HEUVEL (1971), DENNIS & WEBSTER (1971). RAI & SINGH (1980)

reported that the metabolites of Aspergillus terreus and Cladosporium clado-

sporioides are successful inhibitors of the pathogen Alternaria brassicae whereas

those of Epicoccum purpurascens reduce the activity of Drechslera graminea.

Differences in the antagonistic effects of fungi according to species can be due

to the fact that production of metabolites may vary from species to species and

between strain to strain of the same species as reported by NORSE (1972). Accor

ding to DUBES & KESSLER (1963) one or more specific or non-specific meta-

bolic substance(s) may be responsible for antagonism.

Differences in growth reduction due to antagonist in the two methods may be

due to altered environmental conditions (pH, temperature and nutrients) as it

has been reported by GROVER (1971) and FOKKEMA (1976).

As far as reduction in growth and/or dry weight of fungi due to increasing

concentration and age of antagonist is concerned, KAPOORIA & SINHA (1969)

and MISHRA & TEWARI (1976) have already reported the increase in inhibition

of lesion development of Puccinia penniseti and P. graminis in proportion to

the increasing spore concentrations of the antagonists.

ACKNOWLEDGEMENT

Thanks are due to University Grants commission, New Delhi, for financial assistance to

one of us (RPS).

Source - MNHN. Paris

INTERRELATIONSHIPS AMONG SOYBEAN FUNGI 299

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Source : MNHN, Paris

301

ÉTUDE DE LA POLARITÉ SEXUELLE

DES ARMILLAIRES DU GROUPE 1

LLEA

par J.J. GUILLAUMIN, S, BERTHELAY et V.SAVIN*

RÉSUMÉ. — Nous avons étudié la polarité de dix-huit récoltes d'Armillaires se répartissant

entre les quatre espèces Armillaria obscura (Secrétan) Romagn. (l'eespéce C» sensu Korho-

nen), A. mellea (Vahl) Karst («espèce D»), A. bulbosa (Barla) Romagn. («espèce E») et A.

pseudobulbosa nomen nudum («espèce B»).

Les diplontes des Armillaires étant diploides et non dicaryotiques, le critère utilisé pour

juger de la réussite d'une confrontation est l'apparition d'une morphologie particulière du

thalle mixte (aspect croûteux du thalle) et non la présence de boucles.

Toutes les espèces et toutes les récoltes ont manifesté un comportement hétérothalle et

tétrapolaire. Les deux loci d'incompatibilité jouent des rôles différents : la présence d'allèles

identiques sur l'un des deux loci (appelé locus A) se traduit par l'incompatibilité, quelle

que soit la situation sur l'autre locus, désigné par B. La communauté d’allèles sur le locus B

(les alléles A étant différents) entraine dans de nombreux cas une situation de «semi-com-

patilibité» caractérisée par l'apparition d’un diplonte particulier, instable, à croissance

lente, et s'installant plus difficilement que le diplonte typique aux dépens de l'état haploïde.

Des carpophores ont pu être obtenus in vitro, de façon régulière pour les espèces A.

obscura et A. borealis («espèce A» sensu Korhonen), de façon plus épisodique pour A.

mellea et A. bulbosa. Ces carpophores étaient fertiles, les cultures monospermes qui en ont

été tirées ont reproduit le comportement hétérothalle et tétrapolaire manifesté par les

mycéliums monospermes d'origine naturelle.

Chez A. obscura et A. borealis trés souvent (mais pas dans tous les cas), les carpophores

obtenus in vitro ne montrent pas de retour au stade dicaryotique dans le sous-hymenium,

leur cycle caryologique in vitro diffère donc du cycle observé dans la nature.

Chez l'espèce A. obscura, on a, à plusieurs reprises, obtenu des carpophores à partir

de diplontes synthétiques, ce qui a permis de «boucler» au laboratoire le cycle de cette

espèce.

t SS Station de Pathologie Végétale, 12, avenue du Brézet, 63039 Clermont-Ferrand

lex.

CRYPTOGAMIE, MYCOLOGIE (Cryptog., Mycol.) TOME 4 (1983).

Source : MNHN. Paris

302 J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN

SUMMARY. — The sexual behaviour of single spore cultures of the Armillaria mellea

group was studied. These cultures were isolated from eighteen basidiocarps belonging to

four species : Armillaria pseudobulbosa nomen nudum, A, obscura (Sectétan) Romagn..

å. mellea (Vahl) Karst sensu stricto, A. bulbosa (Barla) Romagn. (also referred to by Ko-

rhonen as species «B, C, D, E» respectively).

The polysporous cultures of Armillaria are not dikaryotic but diploid. Clamp connec-

tions are not found in the vegetative mycelium. Thus the only criterion available to detect

the successful mating of two monosporous cultures is the crustaceous aspect of the resultant

diploid thallus.

All the fungal specimens concerned in this study were heterothallic and tetrapolar. The

two incompatibility loci play different roles : the matings are incompatible if the same

genes are present on one of the loci (called «locus A» by the authors), whatever the condi-

tion on the other locus «B». If the same genes are present on B (and different genes on A),

hemicompatibility can be obtained. Hemicompatibility results in the formation of a special

diploid mycelium which is unstable and slow grow!

Fruitbodies could be obtained in pure culture, mostly with species A. obscura and A

borealis (species «A» according to Korhonen). These fertile fruitbodies gave rise to single

spore cultures which have followed in subsequent matings, an heterothallic and tetrapolar

pattern (as do the natural haploid strains).

The life cycle of A. obscura and A. borealis in vitro was sometimes found to be different

to that observed in nature. Dikaryons and clamp connections could not be observed in the

subhymenium of many of the basidiocarps obtained in pure culture.

Fruitbodies were obtained from «synthetic» diplonts of A. obscura (diplonts obtained

from compatible matings carried out in the laboratory). Thus it is possible to reproduce

in vitro a complete cycle of an Armillaria species.

INTRODUCTION

La classe des Basidiomycétes se caractérise par un cycle caryologique trés

particulier dont l'un des traits réside dans l'absence de fusion entre les noyaux

haploides complémentaires aprés anastomose entre mycéliums compatibles :

les deux noyaux restent associés dans le mycélium, constituant un «dicaryon»

dont les deux éléments se divisent de façon conjuguée. Cette division conjuguée

se traduit assez souvent par l'apparition sur le thalle d'anses d'anastomoses

ou «boucles», critère le plus souvent utilisé par les auteurs pour juger de la

réussite d’une confrontation entre deux cultures monospermes.

Une autre caractéristique des Basidiomycétes est la fréquence, à l'intérieur

du groupe, d'un comportement dit «hétérothallique tétrapolaire», qui traduit

l'existence d'un système d'incompatibilité homogénique porté par deux loci

indépendants et susceptibles d'être occupés par des allèles multiples.

Ce schéma, très général, peut subir des variations de détail dont l'exposé

à fait l'objet de nombreuses synthèses, la plus récente étant due à BOIDIN

(1980).

Source : MNHN, Paris

POLARITÉ SEXUELLE DES ARMILLAIRES 303

Toutefois, parmi les Basidiomycétes, le groupe des Armillaires pose un pro-

bléme particulier; leur cycle présente, en effet, un ensemble de traits que ne

peut expliquer le schéma valable pour l'ensemble du groupe :

1) les mycéliums vé;

tatifs indifférenciés, quelle que soit leur origine, sont

constitués d'articles régulièrement uninucléés (KUHNER, 1946). Quant aux

organes agrégés, les articles qui les composent sont fréquemment plurinucléés,

mais ces noyaux multiples n’apparaissent pas associés en dicaryons (CHAHSA-

VAN, 1974);

2) les produits de la méiose présentent cependant une grande variabilité

génétique (RAABE, 1966);

3) la présence de boucles n’a jamais été mise en évidence dans le mycélium

végétatif, par contre on a pu en observer au pied des basides et sur les cloisons

du sous-hyménium, mais sur certains carpophores seulement; c’est un des critéres

qu'a utilisés ROMAGNESI (1973) pour procéder au découpage de l'espèce

irmillaria mellea

Pour expliquer l'ensemble de ces caractères RAPER (1966) suggérait un

cycle asexué et CHAHSAVAN (1974) faisait appel à l'hétérocaryose. Ces ex-

plications n'étaient pas convaincantes.

En 1973, HINTIKKA, renongant à la recherche des boucles, s'attacha exclu-

sivement à l'étude de la morphologie macroscopique des thalles résultant de la

confrontation entre souches monobasidiosporiques. Il put montrer que ces

confrontations donnaient naissance, dans un quart des cas, à des thalles recou-

verts d'une croúte mélanisée, ce qui suggérait un comportement hétérothallique

et tétrapolaire. Pour expliquer l'absence de boucles et de dicaryons dans les

thalles issus de confrontations compatibles, HINTIKKA émit l'hypothèse de la

nature diploide des noyaux des diplontes. Cette hypothése a été, depuis, con-

firmée par les travaux de KORHONEN et HINTIKKA (1974), TOMMERUP

et BROADBENT (1975), ULLRICH et ANDERSON (1978).

Dans une publication datée de 1978, KORHONEN mettait en évidence :

1) l'existence de séries d'alléles multiples sur les deux loci d'incompatibilité;

2) l'existence de confrontations semi-compatibles («hemicompatible ma-

tings») dans certains cas, où un seulement des deux loci d'incompatibilité

(le locus A selon KORHONEN) était occupé par un même facteur;

3) l'existence, à l'intérieur de l'ancienne espéce 4. mellea, de groupe inter-

incompatibles, au nombre de cinq pour le continent européen. Ce démantéle-

ment de l'espéce recoupe en partie celui effectué par ROMAGNESI en 1973

sur la seule base de la morphologie des carpophores. KORHONEN (1978, publ.

citée) suggérait l'existence, entre ces espéces, de différences d'ordre écologique

et phytopathologique, suggestion confirmée par les travaux effectués récemment

en France (GUILLAUMIN et BERTHELAY, 1981) et en Grande-Bretagne

RISHBETH, 1982).

Source : MNHN, Paris

304 J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN

Le travail que nous présentons ici poursuivait trois objectifs :

1) étudier le comportement sexuel de différentes souches, récoltées princi-

palement en France, et dont nous avons montré (1981) qu'elles appartiennent

à quatre des espéces définies par KORHONEN : B, C, D et E;

2) étudier l'existence du phénoméne de semi-compatibilité à l'intérieur de

ces quatre espèces;

3) tenter d'obtenir des carpophores in vitro, tant à partir de diplontes

naturels qu’à partir de ceux résultant de confrontations effectuées au laboratoire

entre haplontes complémentaires, et étudier également le comportement sexuel

des monospermes haploides issues de ces carpophores.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

I. — MATÉRIEL FONGIQUE ÉTUDIÉ

Tableau n9 1 — Carpophores d'origine naturelle

Désignation Magis `

ae m Origine géographique

MB 79-16 Col de la Moréno (Puy-de-Dôme)

Espèce B MB 80-16 id.

sensu KORHONEN MB 80-38 id.

MB 81-23 — Forét de Trongais (Allier)

MC672 Aixla-Fayette (Livradois-Puy-de-Dóme)

Espèce C MC744 Fournols (Livradois-Puy-de-Dôme)

= Armillaria obscura MC 80-39 Carinthie (Autriche)

MC 81-11 — Beskides (Pologne)

MC 81-12 Raon-la-Plaine (Vosges)

MD 71-3 Le Touquet (Pas-de-Calais)

Espéce D MD781 Caumont (Vaucluse)

= Armillaria mellea MD79-13 Montesquieu (Pyrénées-Orientales)

sensu stricto MD 81-1 département de l'Isère

MD 81-29 — Boisséde (Haute-Garonne)

ME 70-1 Les Ancizes (Puy-de-Dôme)

ME 79-17 St Victor-Montvianneix (Puy-de-Dôme)

Espèce E ME 80-15 — St Genés-Champanelle (Puy-de-Dôme)

= Armillaria bulbosa ME81-24 La Mazière (Corrèze)

ME 81-26 Felletin (Creuse)

ME 81-27 Courmangoux (Ain)

Les récoltes MC 80-39, MD 81-29, ME 81-26 et ME 81-27 ont été faites par le Pr

LAMOURE, de l'Université de Lyon, et les mycéliums d'origine monosperme obtenus et

fournis par elle.

Source : MNHN, Paris

axoydod1eo op 114) 340 STISSAS ouguo (P10N) quewy-3uTes AP 13204 2-12 ad a

291094 quesstagdap gtnouopad ougup (39T11V) steóuoaL 41-18 da F

srog 32ou o[neg auTeTIA-3a-aTTI 92-08 qd

sog quessiiodgp 104934 sele3uerig-soguaiéd) so1dsy-[op-sinKueg 22-08 da 1

exoqdodieo op iieu juesstiodop 104033 (sateauaTi0-saauaxAd) nafnbsaduoR E1-6L ad a

291099 13 sTog quesstiedop 1040N (suSopaoq) seusrtes 1-69 dd a

201023 quesstagdap ey1ts ep egord: (sugg-sp-Ánd) exoroq-ans-uoqueuy ZI-18 Dd "

aioqdodaeo op 11840 suririeu uq (sapueT) sozey 7-08 Dd

921022 39 sTog quesstagdep euririeu uta (9puox19) sexso) $-6L 2d V

stog 310% ata Tae ura aunar (sopue1) biog ua uafTnT 3S 1-64 0d 2

921099 32 Stor 3uessigdgp [no[l1l (9uoq-ep-£ng) xreuuera3Uojg-10321A Ig 12-12 dd a

» i u à 12-08 va

291099 19 Stog xnoursgi ap euonog SpueTuza 07-08 va Y

unjpga&u np aoueuoAo1q aaeH onbryde13098 oui8140 E sadadsg

sep uoreuñrsoq

sIrenaeu ouiSi20,p sapyoldrp sunji[goA - 7 LU NESIQEL

Source : MNHN, Paris

306 J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN

Les différentes souches! que nous avons utilisées ont été déterminées par

la méthode de KORHONEN (confrontation avec des testeurs haploides appar-

tenant aux 5 espéces européennes d'Armillaires), comme décrit dans une publi-

cation précédente (GUILLAUMIN et BERTHELAY, 1981).

L'origine de ces souches est indiquée dans les tableaux nO 1, 2 et 3.

Tableau n° 3 — Mycéliums diploides obtenus au laboratoire

par croisement entre deux haplontes compatibles et utilisés pour l'obtention

de carpophores en culture pure

Espèce Désignation des haplontes Observations

Haplontes compatibles

£ MUS d'un méme carpophore

a compatib

e Moose Eu compet les

un méme carpophore

Ç MC 74-4-19xKC2 A Morse

géographique éloignée

Haplontes compatibles

D MD 79-13-2x10 d'un même carpophore

A1B2 x A2B1

Même carpophore

D MD 79-13-7x8 que le précédent

(A1B1 x A2B2)

Haplontes d'origine

a eS géographique éloignée

Note sur la nomencla: ure des haplontes

— ha lettre M indique qu'il s'agit d'une souche d'origine monobasidiosporique

— la seconde lettre indique l'espéce

— les trois chiffres indiquent successivement l'année d'isolement, le numéro d'isolement

dans l'année et le numéro de l'haplonte dans la série

—KC2 et KDI sont des haplontes d'origine finlandaise (KORHONEN) utilisés comme

testeurs dans les déterminations spécifiques.

II. — MÉTHODES

A) Obtention des mycéliums d'origine monosperme

Nous utilisons une méthode par semis de microgouttes déjà décrite dans

d'autres publications (GUILLAUMIN et BERTHELAY, publ. citée).

1. Dans cet article, nous emploierons le terme de «souche» dans le sens qui lui est donné

par les spécialistes des champignons supérieurs (1 souche = 1 carpophore ayant donné

naissance à une série d'haplontes, par isolement monosperme). Cette acception du mot

«souche» est différente de celle des phytopathologistes.

Source : MNHN. Paris

POLARITÉ SEXUELLE DES ARMILLAIRES 307

B) Confrontations

Les deux haplontes confrontés sont cultivés en boite de Petri de 9 cm de

diamétre, sur un milieu contenant 2 p. 100 de malt et solidifié par 1,5 p. 100

d'agar. Les implants des deux souches sont constitués par des cubes de milieu

gélosé prélevés sur la marge de précultures effectuées sur le méme milieu. Ces

implants sont placés cóte à cóte au centre de la boite.

C) Obtention de carpophores

1) Milieux de culture

Deux milieux de culture ont été utilisés :

a) cultures sur demi-oranges. Cette technique a été empruntée à JACQUES-

FELIX (1968); un grand tube de verre (40 x 8 cm), en position verticale, con-

tient une demi-orange placée au milieu du tube, surmontant une colonne d'eau

de 20 cm de hauteur et surmontée par une colonne d'air. Le systéme est stérilisé.

La demi-orange est ensemencée sur sa tranche, le champignon colonise d'abord

l'orange, puis initie des rhizomorphes qui croissent dans la colonne d'eau.

b) cultures sur baguettes de noisetier. Ce milieu, utilisé habituellement pour

les inoculations par l'Armillaire (GUILLAUMIN, 1977), consiste en des frag-

ments de rejets de noisetier, de dimensions standardisées (50 x 12-15 mm) em-

pilés dans des flacons d'un litre et subissant deux stérilisations successives, la

premiére en présence d'eau, la seconde aprés adjonction de 250 ml de milieu

a base de malt et de tomate.

2) Conditions de culture

Aprés ensemencement, les cultures sont maintenues a l’obscurité et A 22°C,

jusqu’a ce que la colonisation des milieux soit suffisamment avancée (rhizo-

morphes atteignant le fond de la colonne d’eau pour les cultures sur orange,

colonisation complete de l'écorce et du cambium pour les cultures sur baguettes).

Les récipients de culture sont alors transférés à 14^C et sous un éclairage d'envi-

ron 500 lux appliqué selon un rythme de 10h de jour pour 14h d’obscurité.

Dans ces conditions, les carpophores apparaissent au bout de délais variant

selon les espèces et les isolats, entre 15 jours et 2 mois après transfert en condi-

tions fraîches.

RÉSULTATS

I. — DÉTERMINATION DES POLARITÉS DES DIFFÉRENTES RÉCOLTES

À) Morphologie des confrontations

1) Confrontations compatibles

Les critères de la compatibilité ont déjà été décrits dans notre article de

1981. La morphologie des thalles mixtes relève de l'un des trois types suivants :

Source : MNHN, Paris.

308 J.J. GUILLAUMIN, S$. BERTHELAY & V. SAVIN

a) le type décrit par HINTIKKA (1973) qui est le plus fréquent et se carac-

térise par l'apparition précoce d'une croúte mélanisée s'étendant sur tout le

thalle, ainsi que par la stimulation de la production de rhizomorphes.

b) un second type correspond à l'apparition de mycélium indifférencié ras

et hyalin à la périphérie du thalle. Ce mycélium pousse de façon irrégulière et

se recouvre tardivement et incomplêtement d’une croûte mélanisée,

c) un troisième type, assez rare, se traduit par la croissance d'un mycélium

cotonneux, beaucoup plus lente que celle des témoins. Dans ce cas, la rhizo-

morphogenése est faible et la croúte mélanisée apparait très tard (au-delà de

20 jours).

2) Confrontations incompatibles

Deux cas sont à considérer :

a) les thalles poussent cóte à cóte sans modification de leur morphologie,

aucun autre phénomène n'est observé.

b) à la frontière entre les deux thalles, il apparaît dans le milieu de culture,

une ligne pigmentée visible surtout sur la face inférieure de la boîte de Pétri.

Ce phénomène, qui est général dans les confrontations incompatibles entre

espèces d'Armillaires différentes (KORHONEN 1978), se manifeste dans 20 %

des cas environ dans les confrontations incompatibles entre haplontes de la

même espèce (porteurs d’allèles d'incompatibilité identiques).

3) Confrontations semi-compatibles

Sur les confrontations jeunes (entre 8 et 15 jours), la «semi-compatibilité»

se manifeste par la présence d’une «tranchée» séparant les deux thalles et corres-

pondant à une zone où le mycélium présente une faible densité.

Avec l'âge, l'évolution peut être trés variable. On a pu distinguer trois types

d'évolution :

a) disparition totale de la tranchée : la confrontation semble de type incom-

patible; dans ce cas, la semi-compatibilité peut passer inapergue si l'on n'a pas

procédé à des observations précoces.

b) apparition du mycélium ras, puis de la croûte mélanisée qui caractérisent

l'état diploide, mais seulement sur certaines parties du thalle mixte (par exemple,

selon deux secteurs opposés).

c) enfin, la croûte peut recouvrir presque tout le thalle mixte, c'est alors

avec une confrontation compatible qu'il peut y avoir confusion.

Les cas a) et c) restent des situations moins fréquentes que le cas b).

Les réactions compatibles, incompatibles ou semi-compatibles se traduisent

différemment selon les souches, une réaction de compatibilité peu marquée

dans une souche peut ressembler à une réaction de semi-compatibilité dans une

autre souche. On ne peut juger d'une confrontation de façon définitive qu'après

avoir observé l'ensemble des croisements et effectué certains recoupements.

Source - MNHN. Paris

POLARITÉ SEXUELLE DES ARMILLAIRES

B) Comportement des différentes espéces

309

Les tableaux 4 à 21 illustrent les résultats des confrontations et indiquent,

pour chaque série, l'interprétation de ces confrontations en termes de formules

alléliques.

| diplome?

Tableau n^ 4

miei lis

Tableau n* 7

Polarite de MB RI-23

Tableau n° 10

Polarité de MC 80-39

AB) a

Pee

AB, 29

A,B, 1

Tableau n* 13

Polarité de Mn 78-1

À AB ou AB, 14

A,B, ov A,B,

Tableau n° 5

Polarité de MB 80-16

Tableau n° 8

Polarité de NC 74-4

Tableau n° 11

Polarité de MC 81-11

Tableau n° 14

Polarité de MD 79-13

AB,

Tableau n° 6

Polarité de MB 80-38

Tableau n° 9

Polarité de Mc 79-15

12 17 47 579 24 25 14

Tableau n° 12

Polarité de MD 71-3

Tableau n° 15

Polarité de MD Bl-1

Source : MNHN. Paris

310 J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN

2 9 19 19 18 18 12 20

AiB 9

A, Ba} 15

A,B, 12

AB, 20

Tableau n* 16 Tale 7, Tableau 9" 18

Poda ite de MD #1-79 Polarite de ME 79-17

Polarite de Me 80-15

Tableau n° 19 Tableau n° 20 Tableau n° 21

Polarité de ME 1-24 Polarité de ME 81-26 Polarite de ME 81-27

La compatibilité a été notée +, la semi-compatibilité S. Les différentes

morphologies des confrontations compatibles et semi-compatibles n'ont pas

été indiquées, afin de ne pas compliquer la lecture.

mentée entre les deux thalles, O dans le cas contraire.

Les symboles (+) et (s) correspondent à des cas de compatibilité et de semi-

compatibilité que la lecture directe des confrontations n’avait pas mis en évi-

dence et qui n'ont été décelés que par recoupements.

Dans les schémas interprétatifs, à l'intérieur de chaque série, les alléles d’in-

compatibilité ont été, provisoirement, désignés par A1, Aa, B1 et Ba. Les rósul-

tats des croisements inter-séries, exposés dans le paragraphe IV, nous ont ensuite

permis d’attribuer des formules définitives.

Nous avons considéré la semi-compatibilité comme correspondant à une

situation où le facteur B était commun, nous nous en expliquons dans la conclu-

sion de cet article.

1) Espèce B

Cette espéce était représentée par 4 récoltes (tableaux 4 à 7). Dans tous les

cas, la tétrapolarité a été mise en évidence et des représentants des quatre póles

ont été trouvés. La semi-compatibilité se manifestait réguliérement

Les confrontations compatibles et semi-compatibles étaient, la plupart du

temps, facilement décelées. Dans les confrontations incompatibles, les cas

d'apparition de lignes pigmentées étaient rares (7 sur 51 au total, et absence

complete dans 2 séries sur 4).

Source : MNHN. Paris

POLARITÉ SEXUELLE DES ARMILLAIRES 311

A. obscura (Pers. ex Secretan) Romagn.)

Espèce représentée par quatre récoltes (tableaux 8 à 11). La situation est

un peu plus complexe. L'espéce apparait tétrapolaire, mais les confrontations

entre 8 haplontes n'ont livré des représentants des 4 póles que dans 2 cas. Pour

les récoltes 80-39 et 81-11, on n'a décelé que 3 póles.

Pour la 80-39, nous avons cherché à trouver des représentants du 4e póle en

confrontant 10 haplontes restants avec des haplontes représentant les 3 póles

mis en évidence. Cet essai fut vain, les 10 haplontes supplémentaires s'étant

répartis entre les 3 póles déjà décelés. Par ailleurs, ces confrontations ont montré

que, dans de nombreux cas, le phénoméne de semi-compatibilité nc se mani-

festait pas.

Cette situation apparait encore plus nettement pour la récolte MC 74-4.

Dans ce cas, les 4 póles ont été trouvés, mais aucune réaction de semi-compati-

bilité ne s’est manifestée. Les formules A; B5 et A; Bj ont donc été, provisoi-

rement, attribuées de façon arbitraire.

Dans le but de voir si l'absence de semi-compatibilité s'étendait à tous les

haplontes de ce carpophore, nous avons confronté 10 autres haplontes de MC

74-4 aux représentants des 4 póles décelés. Les 10 haplontes se sont répartis

entre les 4 pôles, mais aucune réaction semi-compatible n'a été mise en évidence

dans ces croisements. L'absence de semi-compatibilité semble donc bien carac-

tériser la récolte MC 74-4.

3) Espèce D (= Armillaria mellea sensu stricto)

Cette espèce était représentée par 5 récoltes (tableaux n9 12 à 16). La tétra-

polarité est apparue clairement, des représentants des 4 pôles ont été trouvés

dans chaque cas, le phénomène de semi-compatibilité s'est toujours manifesté,

et en général assez nettement.

Dans les confrontations incompatibles, on a observé des barriéres pigmentées

dans 8 cas sur 11 pour la série MD 78-1. Par contre, ces lignes pigmentées ne sont

apparues dans aucune des confrontations incompatibles des 4 autres séries.

Pour MD 79-13, on a pu procéder à la détermination de 18 autres haplontes

en les confrontant avec des représentants des 4 póles. Ces 18 haplontes se sont

répartis entre les 4 póles avec des réactions de compatibilité et de semi-compa-

tibilité bien nettes.

4) Espèce E (= Armillaria bulbosa (Barla) Romagn.)

Les haplontes de 5 récoltes ont été étudiés (tableaux n° 17 à 21). L'espèce

est tétrapolaire, la semi-compatibilité existe dans toutes les séries.

Pour 4 récoltes, la confrontation de 8 haplontes a suffi à la mise en évidence

des 4 pôles. Pour le n° 79-17 où on n'avait trouvé que des représentants de 3

pôles, le test de 6 haplontes restant a fait apparaitre 3 représentants du

4e pôle

Source : MNHN, Paris

312 J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN

Il. — OBTENTION DE CARPOPHORES IN VITRO

Des carpophores ont été obtenus sur 12 diplontes appartenant 4 4 des 5

espèces d'Armillaires :

Espèce A : dans 2 cas sur 2 Espèce D : dans 2 cas sur 8

Espèce C : dans 7 cas sur 7 Espèce E : dans 1 cas sur 1

L'unique diplonte représentant l'espèce B n'a pas fructifié.

Pour l'espèce C, on a notamment obtenu des carpophores à partir des 3

diplontes «synthétiques» (c'est-à-dire issus de croisements effectués au labora-

toire entre haplontes compatibles).

Le tableau 22 indique les caractéristiques de l'hyménium des carpophores

obtenus pour les différentes souches.

Tableau 22 — Caractéristiques des carpophores obtenus in vitro

Nom Présence de Nombre de Présence de

du Espèce boucles vraies stérigmates basidiospores

diplonte À la base des basides par baside mares

PA 80-20 A + ou — selon les cas 4 二

PA 80-21 A ? ? 2

PC 79-1 C +ou— selon les cas 4 E

PC 79-4 C — -ou- selon les cas 4 E

PC 80-4 e ? 4 十

PC 81-12 E + 4 +

MC 74-4-17x19 € E 4 -

MC 80-39-1x12 e W ? -

MC74419xKC2 C + 4 +

PD 80-22 D = 4 +

PD 81-17 D - 4 *

PE 712 E + " M

Des isolements monobasidiosporés ont été effectués sur les carpophores

issus des diplontes PC 79-4 (carpophore numéro «VC 81-3»), PC 81-12 («VC

81-5»), PC 79-1 (2 carpophores, «VC 80-41» et VC 814» ont été obtenus à

1 an d'intervalle, en 1980 et 1981), PD 80-22 (n° «VD 80-40») et enfin MC

74-4-19 x KC; (n9 «VC 8122»).

IIl. — DÉTERMINATION DES POLARITÉS DES SOUCHES

MONOBASIDIOSPORÉES ISSUES DE CARPOPHORES OBTENUS /N VITRO

A) Carpophores VC 81-3 et VC 81-5 (espèce C). Les résultats sont donnés

par les tableaux n9 23 et 24. La tétrapolarité se manifeste, la semi-compatibilité

existe. Le croisement des 8 premiers haplontes a permis de trouver les 4 poles

chez VC 81-3. Pour VC 81-5, il a été nécessaire de confronter d'autres haplontes

Source : MNHN, Paris

POLARITÉ SEXUELLE DES ARMILLAIRES 313

du même carpophore avec des représentants des 3 pôles mis en évidence.

B) Carpophores VC 80-41 et VC 8144 (issus du méme diplonte-espéce C).

On a d'abord procédé à des confrontations internes à chacune des 2 séries.

(tableaux n9 25 et 26). Les 4 pôles ont été trouvés avec 8 haplontes pour le

29 VC 814. Pour VC 80-41, il a été nécessaire de faire appel à d'autres ha-

plontes.

Les 2 séries ont ensuite été croisées entre elles : 4 haplontes représentant cha-

cun 4 póles ont été confrontés avec 4 représentant les póles de l'autre série.

Ces confrontations ont montré que les 2 carpophores (issus du même diplonte)

portaient les mêmes facteurs d'incompatibilité; par exemple VC 80-41(7, 10 et

25) ont les mêmes allèles que VC 81-4-(2 et 3).

C) Carpophore VC 81-2 (espèce C)

Ce carpophore est issu d’un diplonte «artificiel provenant du croisement

des haplontes KC; et MC 74-4-19.

Les haplontes de cette série ont tout d'abord été croisés entre eux. Le tableau

n0 27 montre que 7 des 8 haplontes se répartissent en 3 pôles. Le monosperme

n9 4, compatible avec tous les autres, est vraisemblablement un diplonte, poten-

tiellement porteur de A, Ba et Az By aussi bien que de A,B, et ArBo, donc

capable de «bullériser» les 4 póles.

Ces haplontes ont également été croisés avec les 2 parents KC; et MC 74-4-19;

ainsi qu'avec 3 représentants des 3 autres pôles de la série MC 74-4.

Tableau n* 23

Polorite de VC 81-2

Tableau n° 24 Tableau n° 25

Pelarité de VC 81-5 Polarité de VC 80-41

nS mE

Tableau n° 26 Tableau n° 27

Polarite de VE 81-4 Polarité de VC B1-2

Tableau n° 28

Polarsté de VO 80-40

Source : MNHN. Paris

314 J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN

Si l'on attribue les formules A; B1, A2B2, ArB2 et Ay By aux 4 pôles de la

souche MC 74-4 et la formule A3B3 à KC», le tableau n9 29 permet de déter-

miner les formules des haplontes issus de VC 81-2 :

Tableau n9 29 — VC 81-2 (KC; xMC 744-19)

A AS EE

KC (A3B3) 一一 ib d s

MC 744-19. X E TES

(A1B1)

e RN rc PL EET

(A2B2)

MEA Ws o L4e orbe SNC A aun

(A1 B2 ou A2B1)

MC 74-418

HO + + + + = +

(Ap By ou A1B>)

— le mycélium n9 4 se comporte effectivement comme un diplonte

— les monospermes 1, 2, 3 et 5 sont compatibles avec les 4 póles de MC 74-4:

elles ont donc la méme formule que KC» (A5 B5)

— le monosperme 7 est A; Ba (méme alléle B que KC2, donc B3. et même

alléle A que 744-19, donc A1)

— les monospermes 6 et 8 sont A3B, (méme alléle A que KCz. même allèle

B que 744-19).

Cet essai permet, du méme coup, d'attribuer sans ambiguité les formules

A5B; à MC 744-14 (semi-compatible avec A3B; ) et donc A; B; à MC 74-4-18,

ce que l'absence de semi-compatibilité dans la série 744 n'avait pas permis

de faire.

D) Carpophore VD 80-40 (espéce D)

On n'a trouvé que 3 póles. Le croisement de représentants de ces 3 póles par

10 haplontes restants du méme carpophore n'a pas permis de trouver le 4e póle.

La répartition finale des 18 haplontes testés, est assez surprenante (A, Bj — 10

haplontes, A; Bj — 8, Ai Bz = 1, A3 Bi — 0).

IV. — CROISEMENTS ENTRE SOUCHES APPARTENANT

A LA MEME ESPECE ET GÉOGRAPHIQUEMENT PROCHES

Notre objectif était la mise en évidence d'alléles d'incompatibilité communs

à plusieurs souches. Il a été jugé inutile d'effectuer des confrontations entre

des souches géographiquement très éloignées. Nous avons confronté seulement :

pour l'espèce D, les souches MD 79-13 et VD 80-40, issues de 2 stations

Source : MNHN. Paris

POLARITÉ SEXUELLE DES ARMILLAIRES 315

situées à 2 km environ l'une de l'autre

— pour l'espéce C, les souches MC 74-4 et VC 81-5 (4 km de distance)

— pour l'espéce B, les 3 souches MB 79-16, MB 80-16 et MB 80-38; il y avait

environ 1 km entre les carpophores 80-16 et 80-38 d'une part, 79-16 et 80-38

d'autre part, mais seulement 60 à 80 métres entre les carpophores 79-16 et

80-16.

Toutes les confrontations entre les 4 póles de :

— MD 79-13 et VD 8040 — MB 79-16 et MB 80-38

— MC74-4 et VC 81-5 — MB 80-16 et MB 80-38 ...

. se sont avérées compatibles. Ces séries ne possèdent donc pas d'allèles

d'incompatibilité communs.

Les résultats des confrontations entre MB 79-16 et MB 80-16 sont données

par le tableau n° 30 :

Tableau n° 30

Ces deux séries ont donc en commun un alléle B et un seul. L'autre alléle

B et les deux alléles A sont différents.

L'ensemble de ces résultats nous permet donc de proposer, pour les diffé-

ventes souches étudiées, les formules regroupées dans le tableau 31.

CONCLUSIONS ET DISCUSSION

1) Le comportement hétérothallique tétrapolaire est confirmé pour les 4

espèces d’armillaires françaises B, C, D et E.

2) Le phénomène de semi-compatibilité existe chez les 4 espèces, il se mani-

feste quand il y a communauté de facteurs sur l'un des deux loci (mais non

sur l'autre).

Chez les Basidiomycétes oi le diplonte est dicaryotique, on considére que la

communauté du facteur A limite (ou empéche) l'appariement des noyaux alors

que la communauté du facteur B limite leur migration. Chez de nombreuses

espéces, il peut se produire des «copulations illégitimes» dans la zone de contact

entre deux haplontes ayant un facteur B commun, ces croisements aménent

à l'apparition d'un diplonte «B commun» qui peut méme quelquefois s'avérer

fertile (QUINTANILHA, 1935). Le phénoméne de semi-compatibilité chez les

Source : MNHN, Paris

316 J.J. GUILLAUMIN, S. BERTHELAY & V. SAVIN

Tableau n° 31 - Formules allèliques de l'ensemble

des souches étudiées

Espèce B MB 79-16

P Ap. Ay By» Ba

MB 80-16 : A4, Aj, Bj, B4

MB 80-38 : Aj, Ag, By, Bs

MB 81-23 : AJ, Ags Bes

MC 74-4 2 Aly Ay» By > By

Kes 1 A43

VE 81-2 i A5 8,9 By Ba

MG 79-15 i A, a As B »

MC 80-39 tA, 4 A» Be » BY

MC BI=11 3 Ag s Aga Bg By

p g

yc sics + Aiz Ay ha 才

ve 80-41

et AW VAs Ba oes:

Vu 1r Ais? Ata? 15

Espèce D M0 79-13 : Àj > 47, B,> 3,

FAST CL ES

MD 78=1 Aly Ag B. s Be

MD 81-1 + Aj, Ag + B7 > Ba

MD 81-29 : Ag + Aygs Bg » Bio

VD 80-40 : Apis Apo Bis Bhp

Espèce E ME 79-17 : A À, S Bp B

ae Fe ME 80-15: Àj , A, » B.» Bi

ME 81-24 2 A; s Ag > Bg > By

ME 81-26: A, 4 Ag » By » Bg

ME 81-27 : À, 4 Ajgs Bo Bjo

armillaires nous apparaît, mutatis mutandis, tout à fait comparable aux «copu-

lations illégitimes» étudiées par QUINTANILHA. En désaccord avec KORHO-

NEN, nous proposons donc d'appeler B le locus pour lequel la communauté

allélique entraîne la semi-compatibilité, l'autre locus étant donc désigné par la

lettre A.

Les situations «A et B communs» sont indiscernables morphologiquement. Elles

conduisent l'une et l'autre à une incompatibilité absolue. En particulier, l'appa-

rition d’une ligne pigmentée entre les deux thalles se produit avec une égale

fréquence dans les deux types de situation.

3) Toutes les souches des espèces B, D et E ont montré le phénomène de

semi-compatibilité. Par contre, chez l'espèce C, ce phénomène n'apparaît pas

pour le MC 7444 : les situations «A commun», «B commun», «A et B commun»

Source : MNHN, Paris

POLARITÉ SEXUELLE DES ARMILLAIRES 317

y sont ici indiscernables. Dans la méme espéce C, la souche MC 80-39 a présenté

plusieurs cas oà la communauté des facteurs B se traduisait également par

l'incompatibilité.

Nous avons montré que les situations semi-compatibles pouvaient évoluer

de façon très variable, jusqu'à évoquer, sur des confrontations âgées, des mor-

phologies de type soit compatibles, soit incompatibles, tous les intermédiaires

pouvant étre rencontrés. La communauté des allèles B se traduit donc par

une restriction à la compatibilité dont la force est variable, l'absence de la réac-

tion semi-compatible correspondant à un cas limite où cette «force» est parti-

culièrement élevée.

Remarquons que cette «force» ne dépend pas de la nature des alléles B

eux-mêmes : en effet, l'analyse de la série VC 81-2 nous a montré qu'un méme

facteur By entraînait l'incompatibilité dans les croisements A; B; x A2B: et

la semicompatibilité dans les croisements A1B; x A3R1. C'est l’ensemble

du contexte génétique qui semble déterminer l'expression d'une confrontation

«B commun».

4) Les croisements entre souches géographiquement proches ont confirmé

la trés faible extension spatiale des alléles d'incompatibilité des armillaires,

phénoméne qui avait déjà été mis en évidence par KORHONEN (1978) et

ULLRICH et ANDERSON (1978) : il a fallu descendre à des distances infé-

rieures à 100 métres pour trouver deux carpophores possédant un alléle d'in-

compatibilité commun.

5) Nous avons pu obtenir des carpophores in vitro pour quatre espéces, et,

en ce qui concerne l'espéce C, pour toutes les souches utilisées.

Ces carpophores étaient, dans huit cas sur douze, suffisamment développés

pour produire des basidiospores viables. Le caractére tétrasporique des basides

et la grande variabilité morphologique des haplontes issus d'un méme carpophore

indiquent un cycle normal, comportant la méiose.

Dans la nature, l'espéce C montre des boucles à la base des basides, mais

non l'espéce D. In vitro, des carpophores de D obtenus à partir de l'isolat PD

80-22 étaient effectivement dépourvus de boucles.

En ce qui concerne l'espèce C, les carpophores obtenus en culture pure ont

montré, dans certains cas, un cycle semblable au cycle naturel, c'est-à-dire

que de vraies boucles étaient présentes à la base des basides et dans le sou-

hyménium. Mais sur d'autres fructifications, on n'observait pas de boucles à la

base des basides, mais seulement des crochets non anastomosés avec l'article

inférieur («fausses boucles»), Dans ce second cas, l'espèce C avait donc parcouru,

in vitro, un cycle raccourci ne comportant pas le retour au stade dicaryotique

dans le sous-hyménium, comportement qui est celui de l'espèce D dans la nature.

Ce phénomène avait déjà été signalé par KORHONEN (1980). Mais, alors

que cet auteur observait le raccourcissement du cycle de l'espèce C in vitro

dans toutes ses cultures, nous avons, quant à nous, obtenu dans certains cas un

cycle normal, caractérisé par l'existence de vraies boucles dans le sous-hymé-

nium. L’obtention de l'un ou l'autre type de carpophores est, dans l'état actuel

Source : MNHN, Paris

COLLOQUE \

INTERNATIONAL

J CNRS / NASA

THIORÉDOXINES

Structure et fonctions

Dir. : Pierre Gadal

Berkeley — juin 1981

mise au point des connaissances sur les thiorédoxines, protéines

de faible masse molaire dont l’importance physiologique est

de plus en plus reconnue dans l’ensemble du monde vivant

e propriétés des thiorédoxines et leurs interventions dans le

fonctionnement cellulaire.

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ISBN 2-222-03182-6 |

Editions du CNRS

15 quai Anatole France. 75700 Paris

librairie, ventes, publicité 295, rue saint jacques, 75005 paris tel. 326 56.11

Source : MNHN, Paris

Dépôt légal n* 11925 - Imprimerie de Montligeon

Sorti de presses le 15 décembre 1983

Source : MNHN. Paris

CRYPTOGAMIE — MYCOLOGIE $

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12, rue de Buffon, 75005 Paris (France).

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ROQUEBERT M.F. Secrétaire de Rédaction, s'occupera des autres

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Bien qu'étant avant tout une revue de langue française, les articles rédigés en

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chaque tome.

Source : MNHN, Paris

4 OCT, 1985

ABONNEMENTS A CRYPTOGAMIE - MYCOLOGIE

Tome 5, 1984

REVUE DE MYCOLOGIE

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CRYPTOGAMIE -MYCOUOGTE

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MÉMOIRES HORS-SÉRIE DISPONIBLES

NO 2 (1942). Les matiéres colorantes des champignons, par l:

Pastac, 88 pages : 15,F,

par R, Ulrich. 44 pages : 15 F.

No 7 (1959). Les champignansiet ‘nous (Chroniques) (Ii par Gi

Becker. 04 pages :25 F.

NO 8 (19663, Catalogue de la Mycothéque de la Chaire de Crypto:

gamie du Muséum National d'Histoire Naturelle. (I) Micto-

mycètes. Macromycètes (première partie): 68 pages : 25 F.

NO 9 (1967). Table des Matiéres (1936-1965) 85 p.20 F. — (1966-

1975) 40 p. 10 Fy

FLORE MYCOLOGIQUE DE MADAGASCA RTET: DEPENDANGESI

publice saus la direction dc M« Roger HEIM E

Tome 1. Les Lactario-Russilés, par Roger HEIM (1938) CN

Tome Il. Les Rhodophylles, par H, Romagnesi (1941), 164) pages,

46 fig. 260 F.

Tome Hl. Les Mycénes, par Georges Metrod (1949). 148, pages!

88 fig. «60 F:

Tome IV. Les Discomycetes de Madagascar: ¡par Marcelle Le Galo

X^. (1953). 465 pages, 172 fig. : 90 F:

Tome V. Les Urédinées, par Gilbért Bouriquet et J.P. Bassino

(1955). 180 pages, 97.fig., 4. pl: hors-texte : 60 F.

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